NO760768L - - Google Patents
Info
- Publication number
- NO760768L NO760768L NO760768A NO760768A NO760768L NO 760768 L NO760768 L NO 760768L NO 760768 A NO760768 A NO 760768A NO 760768 A NO760768 A NO 760768A NO 760768 L NO760768 L NO 760768L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- approx
- staphylococcus aureus
- suspension
- cells
- stained
- Prior art date
Links
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 94
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 claims description 75
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 62
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 62
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 claims description 51
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 claims description 51
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 claims description 51
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 44
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 40
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 claims description 29
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 claims description 29
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 29
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 claims description 29
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 24
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 21
- PKDBCJSWQUOKDO-UHFFFAOYSA-M 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC=CC=C1C(N=[N+]1C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 PKDBCJSWQUOKDO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 19
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 17
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 14
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 12
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 claims description 11
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 9
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 claims description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 7
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 claims description 7
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 6
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 4
- -1 polybutylene Polymers 0.000 claims description 4
- 229920001748 polybutylene Polymers 0.000 claims description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 4
- GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N Propylene oxide Chemical class CC1CO1 GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 3
- BEIHVSJTPTXQGB-QIXACUJNSA-N n'-anilino-n-phenyliminobenzenecarboximidamide Chemical compound C=1C=CC=CC=1N\N=C(C=1C=CC=CC=1)\N=NC1=CC=CC=C1 BEIHVSJTPTXQGB-QIXACUJNSA-N 0.000 claims description 3
- 150000004072 triols Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims 2
- BRDIFBARJKLSSY-UHFFFAOYSA-N 2,3,4-triphenyl-2h-tetrazol-2-ium;chloride Chemical compound [Cl-].C1=[NH+]N(C=2C=CC=CC=2)N(C=2C=CC=CC=2)N1C1=CC=CC=C1 BRDIFBARJKLSSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 claims 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims 1
- 229920001281 polyalkylene Polymers 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 74
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 15
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 11
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 6
- 108010065152 Coagulase Proteins 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 5
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 229920000151 polyglycol Polymers 0.000 description 2
- 239000010695 polyglycol Substances 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- JEOLGCWRLRXABW-UHFFFAOYSA-N 2,5-diphenyl-2h-tetrazol-2-ium;chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC=CC=C1C1=[NH+]N(C=2C=CC=CC=2)N=N1 JEOLGCWRLRXABW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 125000002529 biphenylenyl group Chemical group C1(=CC=CC=2C3=CC=CC=C3C12)* 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 238000011095 buffer preparation Methods 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 125000000664 diazo group Chemical group [N-]=[N+]=[*] 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 239000004088 foaming agent Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000007373 indentation Methods 0.000 description 1
- JORABGDXCIBAFL-UHFFFAOYSA-M iodonitrotetrazolium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1N1[N+](C=2C=CC(I)=CC=2)=NC(C=2C=CC=CC=2)=N1 JORABGDXCIBAFL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000010907 mechanical stirring Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000002969 morbid Effects 0.000 description 1
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 239000006150 trypticase soy agar Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
- G01N2333/305—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Micrococcaceae (F)
- G01N2333/31—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Micrococcaceae (F) from Staphylococcus (G)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/745—Assays involving non-enzymic blood coagulation factors
- G01N2333/75—Fibrin; Fibrinogen
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/882—Staphylococcus
- Y10S435/883—Staphylococcus aureus
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
"Preparat for påvisning av fibrinogen, fibrinogen-spaltningsprodukter og fibrin-spaltningsprodukter".
Denne oppfinnelse angår et forbedret preparat og en fremgangsmåte for påvisning av fibrinogen, fibrinogen-spaltningsprodukter og/eller fibrin-spaltningsprodukter i blod ved anvendelse av en suspensjon av drepte, farvede Staphylococcus aureus celler.
Bestemmelse av fibrinogen, fibrin-spaltningsprodukter og fibrinogen-spaltningsprodukter i blod ved anvendelse av Staphylococcus aureus celler er kjent.
Det er vist at stafylokokk-celler inneholder to typer koagulase: en fri koagulase-form og en bundet.koagulase-form.
Den frie koagulase forårsaker koagulering av fibrinogen når den frigjøres i et kulturmedium. Den bundne koagulase eller klump-faktoren frigjøres imidlertid ikke fra bakteriecellen og kan der-for ikke forårsake koagulering, men vil derimot forårsake et "klumpningsfenomen" i nærvær av fibrinogen. Dette klumpningsfenomen er ikke fullstendig klarlagt, men synes å være forårsaket av en felningsreaksjon eller lokal koagulering av fibrin på Staphylococcus aureus celleveggen, som resulterer i "klumpning".
(Duthrie, E. S., J. Gen. Microbiol. 10: 427-436 (1954) og Duthrie, E.S., J. Gen. Microbiol. 13: 383-393 (1955).
Hawiger, J., et al., J. Lab. Clin. Med. 75: 93-108 (1970), • angir at av de to typer spaltningsprodukter som dannes under fibro-nogenolyse, forårsaker bare de første spaltningsprodukter klumpning med Staphylococcus aureus celler. De første spaltningsprodukter omfatter fibrin-monomerer, fibrinogen-spaltningsprodukter og fibrin-spaltningsprodukter som dannes som de første hydrolyse-produkter som skyldes virkningen av plasmin på fibrinogen eller fibrin. De første spaltningsprodukter er forholdsvis store peptider, mens de senere spaltningsprodukter, som dannes ved fortsatt hydrolyse av de første spaltningsprodukter, er mindre peptider. Senere fibrin-spaltningsprodukter og senere fibrinogen-spaltnings produkter forårsaker ikke klumpning med Staphylococcus aureus celler. En glideprøve (slide test) såvel som en prøverørmetode for bestemmelse av stafylokokk-klumpningsegenskapene for forskjel-lige spaltningsprodukter som dannes under fibrinogenolyse, er beskrevet av Hawiger et al.
Leavell, D.E., et al., Am. J. Clin. Path. 55: 452-457 (April, 1971) har foreslått en modifikasjon av fremgangsmåten ifølge Hawiger et al.: mikrotiter-plater anvendes for å seriefof-tynne serumprøvene (såvel som fibrinogen-standardene) for bestemmelse av fibrinogen, fibrin-monpmerer og fibrinogen-spaltningsprodukter i blod ved hjelp av stafylokokk-klumpningsegenskaper.
Ifølge oppfinnelsen tilveiebringes et forbedret preparat og en fremgangsmåte for påvisning av fibrinogen, fibrinogen-spaltningsprodukter og/eller fibrin-spaltningsprodukter i blod ved anvendelse av drepte, farvede Staphylococcus aureus celler fremstilt ved en av to metoder: den første metode omfatter inkubering av Staphylococcus aureus organismer i et -næringsmedium inneholdende en polyalkylenglykol med en molekylvekt fra 1000 til 5000, og tilsetning av en tilstrekkelig mengde trifenyltetrazoliumklorid som kan reduseres av de voksende organismer for å danne farvet trifenylformazan med Staphylococcus aureus cellene; de farvede Staphylococcus aureus celler.drepes, og tilnærmet alt uinnsluttet farvestoff fjernes; i henhold til en annen metode settes en suspensjon av "Fast Black Salt K" til en suspensjon av drepte Staphylococcus aureus celler, og de resulterende, farvede celler vaskes gjentatte ganger for å fjerne tilnærmet alt ubundet farvestoff. De drepte, farvede Staphylococcus aureus celler som oppnåes ved begge disse metoder, suspenderes i en imidazol-buffer for å opprettholde en pH på ca. 7,4 og underkastes eventuelt lyofilisering. Anvendelse av drepte, farvede Staphylococcus aureus celler for påvisning av fibrinogen, fibrinogen-spaltningsprodukter og/eller fibrin-spaltningsprodukter fører til et lettere synlig sluttpunkt for iakttagelse av klumpningsfenomenet i seriefortynninger av serumprøven.
Det er nu funnet at når drepte, farvede Staphylococcus aureus celler anvendes for bestemmelse av fibrinogen-spaltningsprodukter og/eller fibrin-spaltningsprodukter i blod, er sluttpun-ktet, som er det punkt hvor man sist kan iaktta klumpning av celler, letter å observere.
En type farvede Staphylococcus aureus celler kan fremstilles ved inkubering av Staphylococcus aureus organismer i et næringsmedium inneholdende et egnet skumdempende middel. Ethvert vandig næringsmedium som vil underholde veksten av Staphylococcus aureus celler, er egnet, og fortrinnsvis anvendes Hjerne- Hjerte-Infusjons-væske. Skumdempende middel er nødvendig for å hindre for kraftig skumning i fermenteringsvæsken under luftinnsprøytningen som er nødvendig for å fremme veksten av bakteriene. Det er viktig å velge et skumdempende middel som ikke vil ha noen skadelig innvirkning på klumpriingsegenskapene for Staphylococcus aureus cellene. Eftersom de voksende bakterier skal farves i et påfølgende behand-lingstrinn, er det dessuten nødvendig at det valgte skumdannende middel også er forlikelig med farvestoffet og med den fremstilte
klumpningsfaktor. Det er nu funnet at en polyalkylenglykol med
en molekylvekt fra ca. 1000 til ca: 5000, som bare er svakt oppløs-elig i vann (mindre enn 0,1 g i 100 g vann), oppfyller begge de ovennevnte krav. Typisk kan polyalkylenglykolene med en molekylvekt fra 1000 til 5000 velges fra en gruppe bestående av polypropylenglykol, polybutylenglykol og trioler avledet fra proprylen-oksyder. Fortrinnsvis velges den lite oppløselige polyalkylenglykol fra gruppen bestående av polypropylenglykol og polybutylenglykol med en molekylvekt fra 1500 til 4000, og fortrinnsvis anvendes en lite vannoppløselig polypropylenglykol med en gjennomsnittlig molekylvekt på ca. 2000. Et egnet kommersielt tilgjengelig materiale som er effektivt i fermenteringsvæsken ifølge oppfinnelsen,
er "Dow Polyglycol P-2000" som markedsføres av Dow Chemical Comp-any, Midland, Michigan.
I en typisk fermenteringsvæske anvendes fra ca. 0,003 til ca. 0,3 ml polyalkylenglykol pr. liter næringsmedium inneholdende fra ca. 0,1 til ca.. 10 ml av en subkultur av Staphylococcus aureus. Inkubering av den ovennevnte fermenteringsvæske foretaes fra ca. 30°C til ca. 37°C i fra ca. 4 til ca. 24 timer, med luftinnsprøyt-ning. Ved den foretrukne utførelsesform ifølge oppfinnelsen podes 1 liter av et Bacto Hjerne-Hjérte-Infusjonsnær.ingsmedium inneholdende 0,03 ml av en polypropylenglykol med en gjennomsnittlig molekylvekt på ca. 2000, med 0,03 ml av en subkultur av Staphylococcus aureus; inkubering foretaes ved fra ca. 35 til 37°C i ca. 21 timer, med luftinnsprøytning, men uten mekanisk røring.
Efter at en tilstrekkelig mengde av Staphylococcus aureus bakterier er vokst ut,' er cellene klare for farvning. Det er vesent- lig at det valgte farvestoff blir omhyggelig innesluttet i eller bundet til cellene slik at det ikke kan fjernes ved vasking eller ved henstand i suspensjon. Videre må det bundne eller inneslutt-ede farvestoff ikke ha noen skadelig innvirkning på klumpningsegenskapene for de drepte Staphylococcus aureus celler. Det er funnet at trifenyltetrazoliumklorid-farvestoff (2,3,5-trifenyltetrazoliumklorid, 2(p-jodfenyl)-3-(p-nitrofeny1)-5-fenyltetrazolium-klorid og 3,3'-(3,3'-dimetoksy-4,4-,bifenylen)bis[2,5-difenyl-2H-tetrazoliumklorid] er egnet for farvning av Staphylococcus aureus bakteriecellene som anvendes i henhold til oppfinnelsen. Av disse foretrekkes 2,3,5-trifenyltetrazoliumklorid. De voksende Staphylococcus aureus bakterier metaboliserer og reduserer det oppløselige, farveløse trifenyltetrazoliumklorid til det tilsvarende uoppløse-lige, farvede trifénylfromazan, og farver således Staphylococcus aureus cellene. Typisk settes en saltoppløsning av fra ca. 0,01 g til ca. 1 g av et trifenyltetrazoliumklorid-farvestoff til 1 1 av et fermenteringsmedium inneholdende polyalkylenglykolen og Staphylococcus aureus bakterier som beskrevet ovenfor, og fortrinnsvis settes ca. 5 ml av en saltsuspensjon inneholdende ca. 0,3 g trifenyltetrazoliumklorid til fermenteringsvæsken. Inkubering av den farvestoffholdige fermenteringsvæske fortsettes i fra ca. 0,5 til ca. 5 timer ved en temperatur fra ca. 30 til ca. 37°C; og fortrinnsvis er fortsettelse av inkuberingen i ca. 2 timer ved fra ca. 35 til ca. 37°C tilstrekkelig til å tillate reduksjon av det vann-uoppløselige farvestoff og farvning av Staphylococcus aureus cellene.
Fermenteringsvæsken inneholdende de farvede Staphylococcus aureus celler oppvarmes derefter til minst 70°C i minst 3 timer for å drepe tilnærmet alle de farvede Staphylococcus aureus celler. Denne oppvarmingsreaksjon kan utføres ved høyere temperatur i lengere tid hvis dette er ønsket, for å være sikker på at alle de farvede Staphylococcus aureus celler er drept. En liten mengde av de farvede, varmedrepte celler kan forsøkes dyrket på en tryptikase soya agar plate for å være sikker på at tilnærmet alle de farvede celler er drept.
De varmedrepte, farvede Staphylococcus aureus celler som beskrevet ovenfor, separeres fra næringsmediet ved sentrifugering, vaskes med destillert vann inntil tilnærmet alt uinnleiret farvestoff er fjernet. De rensede, farvede celler suspenderes derefter på ny i en 0,017M vandig imidazol-bufferoppløsning for anvendelse, ved prøvemetoden ifølge oppfinnelsen.
Ved den alternative metode for fremstilling av farvede
celler som er egnet til bruk ved den forbedrede klumpningsprø-
ven, farves Staphylococcus aureus celler med "Fast Black Salt K". "Fast Black Salt K", som er et diazo salt av 2,5-dimetoksy-4-[(4-p-nitrofenyl)azo]benzenamin, er funnet å ha en høy bindingsgrad til de drepte celler og vaskes ikke lett ut hverken under'rensn-ingen eller senere under henstand i suspensjon før bruk ved klump-ningsprøven. Enda viktigere er det at det bundne farvestoff ikke ødelegger klumpningsegenskapene for Staphylococcus aureus cellene. Således er drepte celler farvet med,"Fast Black Salt K" funnet å holde seg følsomme overfor fibrinogen, fibrinogen-spaltningsprodukter og/eller fibrin-spaltningsprodukter efter farvning. For å oppnå maksimal farvestoff-bindi.ng, bringes en vandig imidazol-buffer-suspensjon av drepte Staphylococcus aureus celler, inneholdende fra ca. 3 til ca. 4 mg celler pr. ml suspensjon, i kontakt med en vandig imidazol-buffer-oppløsning av "Fast Black Salt K", inneholdende fra ca. 3 til ca. 4 mg "Fast Black Salt K" pr. ml oppløsning. De drepte, farvede celler som oppnåes, vaskes med destillert vann én gang og vaskes derefter med en 4% okseserum-albumin-oppløsning for å fjerne tilnærmet alt ubundet farvestoff. Efter endelig sentrifugering suspenderes de rensede, farvede celler på ny
i en 0,017M vandig imidazol-buffer-oppløsning for anvendelse ved den forbedrede prøvemetode ifølge oppfinnelsen.
På grunn av stabilitet og markeds føringsegenskapér foretrekr kes en lyofilisert form for det nye farvede celle/buffer-preparat ifølge oppfinnelsen fremfor den ovenfor beskrevne suspensjon. Lyofilisering er imidlertid ikke vellykket med cellene suspender i 0,017M imidazol-buffer, eftersom vekten av det faste materiale som er tilstede i 0,017M celle/buffer-suspensjonen ikke er tilstrekkelig til å gjennomgå lyofilisering. Det er funnet at ved å øke konsentrasjonen av celler og buffer i suspensjonen før lyofilisering, kan det fremstilles en lyofilisert kake som kan rekonstitueres med en ytterligere mengde destillert vann for å gi den nødvendige konsentrasjon av materiale som er nødvendig for anvendelse ved klumpnings-prøven. F.eks. er det funent at minst tredobbelt konsentrasjon av celle/buffer-suspensjon som er nødvendig for Staphylococcus aureus klumpningsprøven, lett kan lyofiliseres og rekonstitueres med destillert vann i en mengde lik det tredobbelte av suspensjonens opprinne lige.volum. Høyere konsentrasjoner av celle/buffer-suspensjon kan også lyofiliseres, men ville efter rekonstituering represen-tere et for stort volum av prøvereagens til å kunne anvendes på
en gang under laboratorieundersøkelserbetingelser. Lagring av den flytende, harvede celle/buffer-suspensjon anbefales ikke.
I praksis fremstilles konsentrerte, farvede celle/buffer-suspensjoner og lyofiliseres i store mengder eller i ampuller inneholdende prøvemengder. Alternativt kan den fremsti1te,konsentrerte suspensjon fortynnes med destillert vann for å gi de ønskede mengder av farvede celler og buffer for direkte bruk ved den forbedrede klumpningsprøve ifølge oppfinnelsen.
De rensede, drepte, farvede Staphylococcus aureus celler
som er fremstilt ved én av de ovenfor beskrevne fremgangsmåter, suspenderes typisk i en 0,051M vandig imidazol-buffer (pH ca. 7,4)
i et forhold fra ca. 7,5 mg til ca. 12 mg farvede celler pr. ml buffer. Fortrinnsvis anvendes 9 mg pr. ml i 0,051M buffer, pH ca..7,4. Den ovenfor beskrevne konsentrerte suspensjon kan fortynnes med destillert vann for å gi fra ca. 1,5 til ca. 6 mg pr.
ml, fortrinnsvis ca. 3 mg pr. ml av farvede Staphylococcus aureus celler i 0,017M imidazol-buffer (pH ca. 7,4) som ér mest fore-trukket ved utførelse av den forbedrede klumpningsprøve direkte. Hvis 0,051M buffer-suspensjonen av farvede Staphylococcus aureus celler fryses og lyofiliseres, rekonstitueres den med en mengde destillert vann svarende til 3, ganger det opprinnelige volum av den farvede cellesuspensjon før lyofiliseringen.
Den forbedrede Staphylococcus aureus klumpningsprøve ifølge oppfinnelsen vil påvise tilstedeværelse av fibrinogen, fibrinogen-spaltningsprodukter og/eller fibrin-spaltningsprodukter i blodplasma. I en klinisk situasjon anvendes prøven imidlertid for å bestemme mengder av fibrinogen-spaltningsprodukter og/eller fibrin-spaltningsprodukter i blodserum. (Serumfremstilling omfatter fjernelse av fibrinogen ved koagulering av plasma. Tilstedeværelsen av unormale mengder fibrinogen-spaltningsprodukter og/eller fibring-spaltningsprodukter i blodserum er tegn intravaskulær koagulering og beslektede
sykelige tilstander.
For bestemmelse av fibrinogen-spaltningsprodukter eller fibrin-spaltningsprodukter i blodserum anvendes en 0,017M imidazol-buf fer, pH 7,4, for å seriefortynne blodserumprøven. Denne buffer fremstilles ved å oppløse ca. 0,69 g imidazol i ca. 580 ml destillert vann; pH reguleres til 7,4-0,05 med 0,1M HC1, og oppløsningen bringes til et volum på 600 ml med destillert vann; pH reguleres, igjen til 7,4 for å gi en 0,017M buffer. Et antibakerielt middel så som "Thimerosal", kan settes til bufferoppløsningen for å hindre vekst av mikroorganismer. For å foreta undersøkelsen settes en nærmere spesifisert mengde, fortrinnsvis 50 yl, av 0,017M imidazol-buf feroppløsning til hver fordypning på en mikrotiterplate inneholdende syv eller flere fordypninger. Seriefortynninger av blodserumprøver tilberedes i hver fordypning under anvendelse av en mikrotiter-fortynner, fortrinnsvis en 50 yl mikrotiter-fortynner. En mengde av farvet Staphylococcus aureus cellesuspensjon (inneholdende enten innesluttet redusert tetrazoliumklorid eller bundet "Fast Black Salt K" farvestoff i en 0,017M imidazolbuffer) ekvivalent med den opprinnelige mengde imidazol-buffer (fortrinnsvis 50 VI) settes til hver fordypning på mikrotiterplaten, og platen anbringes på en risteplate eller ristes leilighetsvis med.hånden. Efter ca. 10 minutter iakttaes mikrotiterplaten for å se efter tilstedeværelse av klumpdannelse. Endepunktet avleses som den fordypning som inneholder den siste klumpning som er synlig med det blotte øye. Konsentrasjonen av f ibrin-spaltningsprodukter. og fibrinogen-spaltningsprodukter i blodserumprøven beregnes ved sammenligning av prøveresultatene med en standardoppløsning inneholdende en kjent mengde fibrinogen, fibrin-spaltningsprodukter eller fibrinogen-spaltningsprodukter. I praksis anvendes vanligvis fibrinogen-standarden, og mengden av spaltningsprodukter pr. milliliter blodserum uttrykkes som fibrinogen-ekvivalenter (yg fibrinogen pr. ml).
Staphylococcus aureus celler farvet med et tetrazolium-korid-farvestoff muliggjør en undersøkelse som er like følsom som den kjenteufarvede stafylokokk-klumpningsprøve (0,62<y>g pr. ml
av spaltningsprodukter kan påvises i blodserum). Staphylococcus aureus celler farvet med "Fast Black Salt K" kan påvise 1,25<y>g spaltningsprodukter pr. ml blodserum. Tetrazoliumklorid-farvede Staphylococcus aureus celler foretrekkes (særlig de som er farvet med 2,3,5-trifenyltetrazoliumklorid) eftersom man da får en mer følsom undersøkelse. Eftersom imidlertid det normale området for spaltningsprodukter i blodserum er 0 til 10 yg pr. milliliter, er undersøkelser foretatt med "Fast Black Salt K" farvede celler mer enn tilstrekkelig følsomme til å påvise unormale mengder av spaltningsprodukter i blodserum.
Den forbedrede, farvede Staphylococcus aureus klumpnings-prøve ifølge oppfinnelsen er reproduserbar, følsom og lett å foreta. Endepunkter kan avleses nøyaktig, og flere prøver kan analy-seres samtidig på ca. 30 minutter.
De følgende eksempler skal tjene til å illustrere oppfinnelsen ytterligere.
EKSEMPEL 1
Fremstilling av farvet Staphylococcus aureus
Til en 3 liters fermenteringsblanding av Bacto hjerne-hjerte-infusjonsvæske og Staphylococcus aureus settes 0,1 ml "Dow Polyglycol P-2000", og inkubering foretaes ved 35 til 37°C 1 21 timer med luftinnsprøytning. En oppløsning av 0,9 g 2,3,5-trifenyltetrazoliumklorid i 5 ml natriumklorid (U.S.P.) settes til fermenteringsvæsken, og inkuberingen fortsettes i ytterligere 2 timer under kraftig omrøring. Fermenteringsvæsken oppvarmes derefter til en temperatur på 70°C - 1°C, og holdes ved denne temperatur med konstant omrøring i 3 timer for å drepe tilnærmet alle de farvede Staphylococcus aureus celler. De varme-drepte, farvede celler sentrifugeres, og væsken på toppen kastes. Sedi-mentet suspenderes på ny i 1,5 1 natriumkloridoppløsning (U.S.P.), og den oppnådde bakteriesuspensjon sentrifugeres. Væsken på toppen kastes igjen, og de oppnådde farvede celler suspenderes på ny i 1,5 1 destillert vann. Sentrifugering og suspendering på ny som ovenfor gjentaes ialt 4ganger for å fjerne tilnærmet alt uoppfanet farvestoff.
EKSEMPEL 2
Fremstilling av buffer
0,69 g imidazol oppløses i ca. 580 ml destillert vann.
pH reguleres til 7,4 0,05 med 0,1M HC1. Oppløsningen bringes til et volum på 600 ml med destillert vann, og pH reguleres igjen til 7,g, hvis nødvendig, med 0,1M HC1, for å gi en 0,017M buffer.
EKSEMPEL 3
Fremstilling av lyofiliserte, farvede Staphylococcus aureus celler
1.8 g av det vaskede celle-sediment fra eksempel 1 suspenderes på ny i 200 ml 0,051M imidazol-buffer, pH 7,4. Por-sjoner på 1 ml av denne suspensjon anbringes i 3 ml ampuller. Ampullene fryses i lyofiliseringsanordningen og lyofiliseres derefter inntil de er tørre. De lyofiliserte, farvede Staphylococcus aureus celler lagres ved 4°C.
EKSEMPEL 4
Bestemmelse av fibrin- spaltningsprodukter og/ eller fibrinogen-spaltningsprodukter i blodserum
En ampulle" fra eksempel 3 inneholdende de lyofiliserte, farvede Staphylococcus aureus celler i imidazol-buffer rekonstitueres med 3 ml destillert vann for å gi celler suspendert i 0,017M imidazol-buffer. 50 yl imidazol-buffer fra eksempel 2 settes til hver fordypning i en mikrotiter-plate inneholdende syv fordypninger. Syv seriefortynninger av blodserumprøven foretaes derefter under anvendelse av en 50 yl mikrotiter fortynner. 50 yl av det rekonstituerte, farvede Staphylococcus aureus celler settes til seriefortynningene i hver fordypning på mikrotiter-platen, og platen ristes med hånden med mellomrom. Efter 10 minutter ser man efter om det er noen klumpdannelse på mikrotiter-platen. Endepunktet avleses som den fordypning som inneholder den minst synlige klumpning av celler som kan sees med det blotte øye. Konsentrasjonen av fibrinogen-spaltningsprodukter og/ eller fibrin-spaltningsproduktér i blodserumprøven beregnes ved sammenligning av prøveresultatene med en standardoppløsning inneholdende en kjent mengde fibrinogen, fibrinogen-spaltningsprodukter og fibrin-spaltningsprodukter. Prøveserumet oppviste et endepunkt i den sjette fordypning, svarende til en titer på 1:64. Fibrinogen-standarden inneholdende 10 yg/ml hadde et. endepunkt i fjerde fordypning. Konsentrasjonen av spaltningsprodukter kan beregnes som følger:
EKSEMPEL 5
F remstilling av farvet Staphylococcus aureus
18 mg "Fast Black Salt K" settes til 18 ml av en 0,017M imidazol-buffer, og den endelige pH reguleres til 7,4. Denne farvestoff/buffer-oppløsning settes til 6 ml av en 0,017M imidazol-buf f er-suspens jon inneholdende 18 mg drepte Staphylococcus aureus celler. De oppnådde farvede celler sentrifugeres, vaskes med destillert vann én gang og vaskes tre ganger med en 4% okse-
serumalbumin-oppløsning. Efter endelig sentrifugering suspenderes de resulterende 18 mg av farvede celler i 2 ml 0,051M imidazol-buf fer, og pH reguleres til 7,4. En ml av denne suspensjon anbringes i 3 ml ampuller. Ampullene fryses i en lyofiliserings-anordning og lyofiliseres inntil de er tørre. De lyofiliserte, farvede Staphylococcus aureus celler lagres ved 4°C.
EKSEMPEL 6
Bestemmelse av fibrinogen, fibrin og fibrinogen- spaltningsprodukter i blodserum
En ampulle fra eksempel 5 inneholdende lyofiliserte Staphylococcus aureus celler farvet med "Fast Black Salt K" i imidazol-buffer rekonstitueres med 3 ml destillert vann for å gi. celler suspendert i 0,017M imidazol-buffer. 50 yl av imidazol-bufferen fra eksempel 2 settes til hver fordypning i en mikrotiter-plate inneholdende syv fordypninger. Seriefortynninger av blodserum-prøve tilberedes under anvendelse av en 50 yl mikrotiter-fortynner. 50 yl av de rekonstituerte, farvede Staphylococcus aureus celler settes til hver av seriefortynningene i hver fordypning på mikrotiter-platen, og platen ristes med hånden med mellomrom. Efter 10 minutter ser man efter om det forekommer noen klumpdannelse på mikrotiter-platen. Prøveserumet oppviste et endepunkt i sjette fordypning, svarende til en titer på 1:64. Fibrinogen-standarden inneholdende 10 yg/ml hadde et endepunkt i tredje fordypning. Konsentrasjonen av spaltningsprodukter kan beregnes som følger:
Claims (28)
1. Preparat egnet for bestemmelse av fibrinogen, fibrin-spaltningsprodukter og fibrinogen-spaltningsprodukter i blod,, karakterisert ved at det omfatter en buffer-suspensjon av farvede Staphylococcus aureus celler fremstilt ved:
A. Podning av et egnet næringsmedium inneholdende en polyalkylenglykol med en molekylvekt fra ca. 1000 til ca. 5000, med en subkultur av Staphylococcus aureus celler;
B. Inkubering av (A) ved fra ca. 30 til ca. 37°C i fra ca. 4 til ca. 24 timer', med luftinnsprøytning;
C. Tilsetning av en saltsuspensjon av trifenyltetrazoliumklorid-farvestoff til (B) og fortsettelse av inkuberingen i fra ca. 0,5 til ca. 5 timer inntil en tilstrekkelig mengde av trifenyltetrazoliumkloridet er redusert til trifenylformazan' for å farve Staphylococcus aureus cellene;
D. Oppvarmning av (C) til minst 70°C i minst 3 timer,
for å drepe tilnærmet alle dé farvede Staphylococcus aureus celler;
E. Separering av de varme-drepte, farvede celler fra (D) fra næringsmediet og vasking for å fjerne tilnærmet alt uoppfanget farvestoff; og
F. Suspendering av de drepte, farvede celler i en buffer-oppløsning som holder en pH på ca. 7,4.
2. Preparat som angitt i krav 1,
karakterisert ved at inkuberingen i trinn C ut-føres i ca. 2 timer.
3. Preparat som angitt i krav 2,
karakterisert ved at polyalkylenglykolen er
• svakt oppløselig i vann og er valgt fra gruppen bestående av polypropylenglykol, polybutylenglykol og trioler avledet fra propylenoksyder, med en molekylvekt fra 1500 til 4000.
4. Preparat som angitt i krav 3,
karakterisert ved at polyalkylenglykolen er en polypropylenglykol med en gjennomsnittlig molekylvekt på ca. 2000.
5. Preparat som angitt i krav 4, karakterisert ved at bufferoppløsningen er en 0,017M imidazol-buffer.
6. Preparat som angitt i krav 1, karakterisert ved at det er lyofilisert.
7. Preparat som angitt i krav 4, karakterisert ved at det er lyofilisert.
8. Preparat som angitt i krav 5, karakterisert ved at det er lyofilisert.
9. Preparat for bestemmelse av fibrinogen, fibrin-spaltningsprodukter og fibrinogen-spaltningsprodukter i blod, karakterisert ved at den omfatter en vandig
suspensjon av farvede Staphylococcus aureus celler fremstilt ved:
A. Podning av ca. 1 liter av et hjerne-hjerte-infusjons-næringsmedium inneholdende ca. 0,0 3 ml av en polypropylenglykol med en gjennomsnittlig molekylvekt på ca. 2000, med ca. 0,03 ml av en subkultur av Staphylococcus aureus;
B. Inkubering av (A) ved ca. 35°C til ca. 37°C i ca. 21 timer, med luftinnsprøytning; '
C. Tilsetning av 5 ml saltsuspensjon inneholdende 0,3 g 2,3,5-trifenyltetrazoliumklorid til (B), og fortsettelse av inkuberingen i ca. 2 timer for å redusere 2,3,5-trifenyltetrazoliumklorid til 1,3,5-trifenylfromazan for å farve Staphylococcus aureus cellene;
D. Oppvarmning av (C) ved ca. 70°C i ca. 3 timer for å drepe tilnærmet alle de farvede Staphylococcus aureus celler;
E. Separering av de varme-drepte, farvede celler fra (D) fra næringsmediet, og vasking for å fjerne tilnærmet alt uoppfanget farvestoff; og
F. Suspendering av ca. 9 mg av vaskede, .drepte, farvede celler fra (E) i ca. 1 ml 0,051M imidazol-buffer for å holde suspensjonen ved en pH på ca. 7,4.
10. Preparat som angitt i krav 9,
karakterisert ved at det er lyofilisert.
11. Preparat egnet for bestemmelse av.fibrinogen, fibrin-spaltningsprodukter og fibrinogen-spaltningsprodukter i blod, karakterisert ved at det omfatter en imidazol-buf f er-suspens jon av drepte, farvede Staphylococcus aureus celler, hvor farvestoffet er valgt fra gruppen bestående av et trifenyl-tetrazoli-umklorid og "Fast Black Salt K" .
12. Preparat som angitt i krav 11,
karakterisert ved at de farvede Staphylococcus aureus celler inneholder et farvestoff valgt fra gruppen bestående av 2,3,4-trifenyltetrazoliumklorid og "Fast Black Salt K" .
13. Preparat som angitt i krav 12,
karakterisert ved at farvestoffet- er 2,3,5-trifenyltetrazoliumklorid.
14. Preparat som angitt i krav 13,
karakterisert ved at. det inneholder en 0,017M imidazol-buffer inneholdende fra ca. 1,5 mg til ca. 6 mg av farvede Staphylococcus aureus celler pr. ml suspensjon.
15. Preparat som angitt i krav 13,
karakterisert ved at det inneholder en 0,017M imidazol-buffer-suspensjon inneholdende 3 mg farvede Staphylococcus aureus celler pr. ml suspensjon.
16. Lyofilisert preparat ifølge krav 13, karakterisert ved at det inneholder en 0,Q51M imidazol-buffer inneholdende fra ca. 7,5 til ca. 12 mg farvede Staphylococcus aureus celler pr. ml suspensjon.
17. Lyofilisert preparat som angitt i krav 13, karakterisert ved at det inneholder en 0,051M imidazol-buffer inneholdende ca. 9 mg farvede Staphylococcus aureus celler pr. ml suspensjon.
.
18..Fremgangsmåte for fremstilling av farvede Staphylococcus aureus celler egnet til bruk ved bestemmelse av tilstedeværelse av fibrinogen, fibrin-spaltningsprodukter■og fibrinogen-spaltningsprodukter i blod,
karatkterisert ved:
A. Podning av et egnet næringsmedium inneholdende en polyalkylenglykol med en molekylvekt fra ca. 1000 til ca. 5000, med en subkultur av Staphylococcus aureus celler;
B. Inkubering av (A) ved fra ca. 30°C til ca. 37°C i fra ca. 4 til ca. 24 timer, med luftinnsprøytning;
C. Tilsetning av en saltsuspensjon av et trifenyltetrazoliumklorid-farvestoff til (B) og fortsettelse av inkuberingen i fra ca. 0,5 til ca. 5 timer inntil en tilstrekkelig mengde av trifenyltetrazoliumkloridet er redusert til trifenylformazan for å farve Staphylococcus aureus cellene;
D. Oppvarmning av (C) til minst 70°C i minst 3 timer,
for å drepe tilnærmet alle de farvede Staphylococcus aureus celler;
E. Separering av de varme-drepte, farvede celler fra (D) fra næringsmediet og vasking for å fjerne tilnærmet alt uoppfanget farvestoff; og
F. Suspendering av de drepte, farvede celler i en buffer-oppløsning som holder en pH på ca. 7,4.
19. Fremgangsmåte som angitt i krav 18, karakterisert ved at inkuberingen i trinn (C) utføres i ca. 2 timer.
20. Fremgangsmåte som angitt i krav 19, karakterisert ved at det anvendes en polyalkylenglykol som er svakt oppløselig i vann og er valgt fra gruppen bestående av polypropylenglykol, polybutylenglykol og trioler avledet fra propylenoksyder, med en molekylvekt på 1500 til 4000.
21 . Fremgangsmåte som angitt i krav -20 ,
karakterisert ved at det anvendes en polyalkylen
glykol som er en polypropylenglykol med en gjennomsnittlig molekylvekt på ca. 2000.
22. Fremgangsmåte som angitt i krav 21, karakterisert ved at det som buffer-oppløsning anvendes en 0,051M imidazol-buffer.
23. Fremgangsmåte som angitt i krav 18, karakterisert ved at suspensjonen av drepte, farvede celler lyofiliseres .
24. Fremgangsmåte som angitt i krav 21, karakterisert ved at suspensjonen av drepte, farvede celler lyofiliseres.
25.. Fremgangsmåte som angitt i krav. 22, karakterisert ved at suspensjonen av drepte, farvede celler lyofiliseres.
26. Fremgangsmåte for bestemmelse av fibring-spaltningsprodukter og fibrinogen-spaltningsprodukter i blodserum, karakterisert ved :
A.. Tilsetning av en spesifisert mengde av en imidazol-buf f er til hver fordypning på en mikrotiter-plate;
B. Tilsetning av en mengde ekvivalent til mengden av (A) av blodserumprøve til den første fordypning på mikrotiter-platen ifølge (A), og seriefortynning under anvendelse av en mikrotiter-fortynner;
C. Tilsetning av en mengde ekvivalent til mengden av (A) av en farvet Staphylococcus aureus celle-suspensjon i bufferen ifølge (A) til hver, fordypning på mikrotiter-platen ifølge (B); og
D. Iakttagelse av fordypningene angitt i (C) for synlig klumpning av Staphylococcus aureus cellene som et positivt tegn på tilstedeværelse av fibrin-spaltningsprodukter og fibrinogen-spaltningsprodukter i blodserumprøven.
27. Fremgangsmåte som angitt i krav 26, karakterisert ved at det i trinn A og C anvendes en 0,017M imidazol-buffer.
28. Fremgangsmåte som angitt i krav 26, karakterisert ved at det i trinn B foretaes syv seriefortynninger.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US05/556,504 US3990947A (en) | 1975-03-07 | 1975-03-07 | Composition for detecting fibrinogen, fibrinogen split products and fibrin split products |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO760768L true NO760768L (no) | 1976-09-08 |
Family
ID=24221614
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO760768A NO760768L (no) | 1975-03-07 | 1976-03-05 |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US3990947A (no) |
| JP (1) | JPS51117095A (no) |
| AU (1) | AU507738B2 (no) |
| BE (1) | BE839145A (no) |
| CA (1) | CA1061229A (no) |
| DE (1) | DE2608733A1 (no) |
| DK (1) | DK95676A (no) |
| FR (1) | FR2303291A1 (no) |
| GB (1) | GB1490466A (no) |
| IE (1) | IE42640B1 (no) |
| IT (1) | IT1057927B (no) |
| LU (1) | LU74498A1 (no) |
| NL (1) | NL7602094A (no) |
| NO (1) | NO760768L (no) |
| SE (1) | SE7602866L (no) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2525804B2 (de) * | 1975-06-10 | 1980-04-03 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Stabiler Clumping-Faktor, Verwendung desselben zum Nachweis von Fibrinogen- und Fibrinspaltprodukten und Herstellung desselben |
| DE2644622C3 (de) * | 1976-10-02 | 1979-11-29 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Extraktion von Mikroorganismen und diese enthaltende diagnostische Mittel |
| US4461830A (en) * | 1983-01-20 | 1984-07-24 | Buren Philpot V Jun | Serum fibrinogen viscosity in clinical medicine |
| US4567137A (en) * | 1983-01-20 | 1986-01-28 | Philpot Van B | Serum thrombin time in clinical medicine |
| US4873090A (en) * | 1985-03-27 | 1989-10-10 | Broncostat Pty. Limited | Non-adjuvenated vaccine |
| DD261844A1 (de) * | 1986-07-09 | 1988-11-09 | Adw Ddr | Verfahren zur praezipitation von fibrinmonomeren |
| IL80313A0 (en) * | 1986-09-19 | 1987-01-30 | Yissum Res Dev Co | Immunoassay reagents,kits and methods |
| US5424193A (en) * | 1993-02-25 | 1995-06-13 | Quidel Corporation | Assays employing dyed microorganism labels |
| CN110257475B (zh) * | 2019-06-28 | 2023-05-02 | 深圳市国赛生物技术有限公司 | 纤维蛋白原检测试剂及其制备方法及检测试剂制品 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3881993A (en) * | 1971-03-16 | 1975-05-06 | Miles Lab | Testing device for microorganisms |
| US3834991A (en) * | 1972-05-23 | 1974-09-10 | Warner Lambert Co | Colorimetric assay for lysozyme |
| US3790447A (en) * | 1972-07-05 | 1974-02-05 | Abbott Lab | Streptococci diagnostic method |
-
1975
- 1975-03-07 US US05/556,504 patent/US3990947A/en not_active Expired - Lifetime
-
1976
- 1976-02-17 GB GB6135/76A patent/GB1490466A/en not_active Expired
- 1976-02-19 IE IE323/76A patent/IE42640B1/en unknown
- 1976-02-27 SE SE7602866A patent/SE7602866L/xx not_active Application Discontinuation
- 1976-03-01 NL NL7602094A patent/NL7602094A/xx not_active Application Discontinuation
- 1976-03-02 FR FR7605819A patent/FR2303291A1/fr active Granted
- 1976-03-03 BE BE164818A patent/BE839145A/xx unknown
- 1976-03-03 DE DE19762608733 patent/DE2608733A1/de not_active Withdrawn
- 1976-03-03 IT IT48400/76A patent/IT1057927B/it active
- 1976-03-05 AU AU11727/76A patent/AU507738B2/en not_active Expired
- 1976-03-05 DK DK95676*#A patent/DK95676A/da unknown
- 1976-03-05 JP JP51024038A patent/JPS51117095A/ja active Granted
- 1976-03-05 LU LU74498A patent/LU74498A1/xx unknown
- 1976-03-05 CA CA247,241A patent/CA1061229A/en not_active Expired
- 1976-03-05 NO NO760768A patent/NO760768L/no unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU507738B2 (en) | 1980-02-28 |
| NL7602094A (nl) | 1976-09-09 |
| LU74498A1 (no) | 1976-09-01 |
| IE42640L (en) | 1976-09-07 |
| JPS5523080B2 (no) | 1980-06-20 |
| DK95676A (da) | 1976-09-08 |
| CA1061229A (en) | 1979-08-28 |
| GB1490466A (en) | 1977-11-02 |
| DE2608733A1 (de) | 1976-09-16 |
| FR2303291B1 (no) | 1980-08-01 |
| IE42640B1 (en) | 1980-09-24 |
| SE7602866L (sv) | 1976-09-08 |
| BE839145A (fr) | 1976-07-01 |
| AU1172776A (en) | 1977-09-08 |
| FR2303291A1 (fr) | 1976-10-01 |
| IT1057927B (it) | 1982-03-30 |
| US3990947A (en) | 1976-11-09 |
| JPS51117095A (en) | 1976-10-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Stoenner et al. | Antigenic variation of Borrelia hermsii. | |
| US4029756A (en) | Serological procedure for determining presence of neisseria gonorrhoeae antibodies | |
| Thomas et al. | Quantitative endotoxin determination in blood with a chromogenic substrate | |
| US4038143A (en) | Test kit for the genetic detection of microorganisms | |
| Perombelon et al. | Methods for the detection and quantification of Erwinia carotovora subsp. atroseptica (Pectobacterium carotovorum subsp. atrosepticum) on potatoes: a laboratory manual | |
| Van Vuurde et al. | Comparison of immunofluorescence colony-staining in media, selective isolation on pectate medium, ELISA and immunofluorescence cell staining for detection of Erwinia carotovora subsp. atroseptica and E. chrysanthemi in cattle manure slurry | |
| DK161219B (da) | Proeveudstyr og fremgangsmaade til bestemmelse af streptococcus a | |
| Hugo et al. | A quantitative and qualitative study of the lipolytic activity of single strains of seven bacterial species | |
| NO760768L (no) | ||
| EP0005512B1 (en) | A serological method for determining the presence of neisseria gonorrhoeae antibodies in human serum, a species-specific heat stable antigen to be used in this method and a method for the preparation of that antigen | |
| Chapman et al. | The coagulation of plasma by staphylococci | |
| JPS58126784A (ja) | リン病の診断テスト法、リン菌のテスト用株およびテストキツト | |
| US11085065B2 (en) | Phenotypic engineering of spores | |
| US20070238145A1 (en) | Phenotypic engineering of spores | |
| US4351761A (en) | Purified antigen to test for Neisseria gonorrhoeae antibodies | |
| Sperber | The identification of staphylococci in clinical and food microbiology laboratories | |
| Baron et al. | New maintenance medium for cell culture | |
| EP0363105B1 (en) | Stabilized extraction composition containing a sulfhydryl-containing reducing agent and its use in chlamydial and gonococcal determination | |
| US8969520B2 (en) | Reagent for assaying anti-treponema pallidum antibody | |
| Yoshikawa et al. | Pleiotropic alteration of activities of several toxins and enzymes in mutants of Staphylococcus aureus | |
| US12360023B2 (en) | Method of pretreating blood sample | |
| Ferrieri et al. | Localization and characterization of the hippuricase activity of group B streptococci | |
| Moody et al. | Detection of brucellae and their antibodies by fluorescent antibody and agglutination tests | |
| US20200347432A1 (en) | Rapid methods for determining microorganism growth in samples of human origin | |
| RU2012331C1 (ru) | Раствор для консервирования энзимированных эритроцитов, используемых в изосерологических реакциях |