DK161219B - Proeveudstyr og fremgangsmaade til bestemmelse af streptococcus a - Google Patents

Proeveudstyr og fremgangsmaade til bestemmelse af streptococcus a Download PDF

Info

Publication number
DK161219B
DK161219B DK072085A DK72085A DK161219B DK 161219 B DK161219 B DK 161219B DK 072085 A DK072085 A DK 072085A DK 72085 A DK72085 A DK 72085A DK 161219 B DK161219 B DK 161219B
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
antigen
streptococcus
tampon
antibody
extraction reagent
Prior art date
Application number
DK072085A
Other languages
English (en)
Other versions
DK72085D0 (da
DK161219C (da
DK72085A (da
Inventor
Robert Rosenstein
Kim P Aspden
Peter Stopa
Original Assignee
Becton Dickinson Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Becton Dickinson Co filed Critical Becton Dickinson Co
Publication of DK72085D0 publication Critical patent/DK72085D0/da
Publication of DK72085A publication Critical patent/DK72085A/da
Publication of DK161219B publication Critical patent/DK161219B/da
Application granted granted Critical
Publication of DK161219C publication Critical patent/DK161219C/da

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56911Bacteria
    • G01N33/56944Streptococcus
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C12Q1/14Streptococcus; Staphylococcus
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/24Methods of sampling, or inoculating or spreading a sample; Methods of physically isolating an intact microorganisms
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/195Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
    • G01N2333/315Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/961Chemistry: molecular biology and microbiology including a step of forming, releasing, or exposing the antigen or forming the hapten-immunogenic carrier complex or the antigen per se
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/975Kit

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Air Bags (AREA)

Description

DK 161219 B
•1
Den foreliggende opfindelse angår påvisning af infektionsmidler gennem en antistof-antigenreaktion og nærmere betegnet påvisning af streptococcus A gennem tilstedeværelsen i en biologisk prøve af streptococcus A antigen og et prøveudstyr til 5 brug ved denne påvisning.
Blandt de mange grupper streptokokker er gruppe A streptococcus (S. pyogenes) primært ansvarlig for at forårsage patologiske tilstande hos mennesker, såsom B-hemolytisk lungebetændelse, 10 skarlagensfeber,reumatisk feber, hjertefølgesygdomme, glomerulonephritis, septisk halsonde og puerperal sepsis. Andre grupper af streptokokker er helt uskadelige og eksisterer normalt, f.eks. i halsen. På grund af den alvorlige karakter af infektioner, der potentielt forårsages af streptococcus A, er 15 det vigtigt at diagnosticere dens tilstedeværelse på et tidligt infektionsstadium, således at der kan vælges en passende behandling. Streptokokker kan dyrkes på sædvanlig måde i egnede medier. Identificering af streptokokker efter type er imidlertid ikke nogen simpel sag. Streptococ A-selektive kulturmedier 20 er ikke fuldkomne, idet de ikke er helt selektive, dvs. de eliminerer ikke alle andre typer streptokokker, samtidig med at de lader streptococcus A vokse. Det er vigtigt at dyrkningsteknik til at identificere streptococci A i almindelighed kræver en inkubationstid på 18 timer og hyppigt så meget som 48 25 timer for at fastslå tilstedeværelsen af streptococcus A. Så langvarige prøver forhaler en fuldt oplyst bedømmelse af, hvorledes sygdommen bedste behandles. Ønskeligheden af en pålidelig enkel og hurtig prøve for streptococcus A er klart indiceret.
30
Det er opfindelsens formål at angive et prøveudstyr til påvisning af streptococcus A på en hurtig og pålidelig måde.
Dette opnås med prøveudstyret ifølge opfindelsen, som er ejendommeligt ved, at det omfatter en applicator til opsamling af 35 biologisk prøve, der potentielt indeholder streptococcus A, hvilken applicator indbefatter en applicatorpind og en tampon 2
DK 161219B
i den ene ende dannet af en fiber, som opsamler streptococcus A antigen, et ekstraktionsreagens indeholdende enzymer til frigørelse af streptococcus A antigen fra tamponen, og indikatorreagens indeholdende antistof, der er reaktionsdygtigt med 5 streptococcus A antigen, idet når en biologisk prøve opsamles med applicatorens fibertampon, denne tampon anbringes i ekstraktionsreagenset i tilstrækkelig tid til at frigøre streptococcus A antigen i ekstraktionsreagenset, og en aliquot portion af ekstraktionsreagenset blandes med indikatorreagenset, og tilstedeværelse af streptococcus A i den biologiske prøve indikeres ved forekomsten eller den manglende forekomst af en anti stof-antigenreakt ion.
Dette opnås ved en applikator, indbefattende en pind og en 15 streptococcus A antigensamlende fibertampon i den ene ende, anvendes til at pensle et inficeret område. Efter at en prøve er taget med tamponen, dyppes tamponen i et ekstraktionsreagens, som frigør antigenet fra tamponfibrene i reagenset. En aliquot portion af ekstraktionsreagenset indføres i en indica-20 toropløsning, som indeholder et antistof, der er reaktionsdygtigt med antigenet. Forekomsten eller den manglende forekomst af en antistof-antigenreaktion viser tilstedeværelse eller fravær af streptococcus A i den biologiske prøve.
25 Flere ejendommeligheder ved opfindelsen har vist sig at fremme pålidelige resultater. Regenereret cellulosefiber, almindeligvis kaldet rayon, er mest effektiv til at opsamle og frigøre ( i nærværelse af enzymer) streptococcus A antigen, hvorimod naturlige cellulosefibre, f.eks. bomuld ikke virker så godt.
30 Det foretrækkes at pinden er dannet af et ikke-porøst materiale, fortrinsvis et syntetisk ikke-porøst materiale, såsom en ikke-porøs plast, snarere end af et naturligt materiale, såsom træ. Det foretrukne ekstraktionsreagens indeholder en enzymblanding frembragt af bakterien streptomyces albus. Det fore-35 trukne indikatorreagens er et agglutineringsreagens, hvori antistof, der er reaktionsdygtigt med streptococcus A antigenet, er bundet til latexpartikler, således at partiklerne agglutinerer som følge af en.antigen-antistofreaktion.
3
DK 161219 B
Den foreliggende opfindelse angiver en diagnostisk prøve for gruppe A streptococcus, der kan udføres på meget kort tid, dvs. mindre end ca. 70 minutter og uden anvendelse af kompliceret udstyr. Dette gør det muligt, at prøven kan udføres i en læges 5 kontor, og gør det muligt for lægen at bestemme forløbet af behandlingen baseret på resultaterne af prøven samme dag. Prøven påviser tilstedeværelse af streptococcus A antigen i en biologisk prøve, såsom en penslingsprøve fra halsen, i stedet for vækst af streptococcus A organismen selv, således som det gø-10 res ved kulturprøver. Den lange inkubationsperiode, der kræves til selektive kulturprøver, bliver derfor i det væsentlige elimineret. Fordelene ved opfindelsen opnås imidlertid ikke på bekostning af hverken følsomhed eller nøjagtighed, idet undersøgelser har vist, at både følsomhed og nøjagtighed af prøven i-15 følge opfindelsen nærmer sig 100%.
Ifølge opfindelsen tilvejebringer et prøveudstyr de materialer og reagenser, hvormed tilstedeværelsen af streptococcus A antigen i en biologisk prøve påvises nøjagtigt. En prøve opsam-20 les ved hjælp af en applikator, der omfatter en applikatorpind og en fibertampon på den ene ende af pinden. Infektionsområdet pensles med fibertamponen, hvorved streptococcus A antigen opsamles af fibrene. Derefter dyppes tamponen i et vandigt ekstraktionsreagens, indeholdende en blanding af enzymer, frem-25 bragt af bakterien streptomyces albus, og som bevirker frigørelse af streptococcus A antigen fra tamponen. Der tilvejebringes et indikatorreagens, som indeholder antistof, der er specifikt reaktionsdygtigt med streptococcus A antigenet. Når ekstraktionsreagenset indeholdende streptococcus A antigen (hvis 30 streptococcus A antigen findes i den biologiske prøve) sættes til indikatorreagenset, sker der en påviselig antistof-antigen-reaktion.
Et vigtigt træk ved opfindelsen er brugen af ekstraktionsreagen-35 Set indeholdende enzymer, der bevirker frigørelse af streptococcus A antigen fra en tampon. Det har vist sig, at blot pensling 4
DK 161219 B
af et inficeret område med en tampon og anbringelse af tamponen i en ikke-enzymholdig opløsning ikke giver pålidelige resultater. Det menes, at streptococcus A antigenet er tilbøjelig til at hænge fast ved fibrene i tamponen i stedet for frit at opløses i et 5 vandigt medium, der ikke indeholder enzymer. Det viser sig imidlertid, at i nærværelse af en ‘enzymblanding fremkommet af strep-tomyces albus, frigøres streptococcus A antigen i et.vandigt medium. Mekanismen i antigenfrigørelse er ukendt, men det antages, at enzymerne frigør den del af streptococcus A antigenmolekylet, 10 der indeholder det eller de antistofreaktionsdygtige determinanter fra den del af molekylet, som er tilbøjelig til at hænge fast ved tamponfibrene.
Ekstraktionsreagens indeholdende streptomyces albus-enzymer frem-15 stilles som følger:
Streptomyces albus (NCTC nr. 7807) dyrkes ved 25°C i Mycophil (varemærke) agar, der kan fås fra BBL Microbiology Division of Becton, Dickinson and Company, Cockeysville, Maryland. Orga-20 nismerne overføres så til 40 ml flydende medium og får lov at vokse i 5 dage ved 25°C under rystning. Det flydende medium består af gærekstrakt, polypepton, dextrose, polysorbat 80 (Tween) og enbasisk kaliumphosphat.
25 Efter 5 dage overføres de 40 ml flydende medium til 400 ml af samme medium og inkuberes ved 25°C under rystning. Mellem dag 5 og 14 udtages aliguote portioner af kulturvæsken og bedømmes for deres evne til at lyse streptococcus pyogenes (ATCC nr.
8135) celler.
30
Kulturvæsken høstes ved centrifugering ved 10.000-13.000 x g i 30 minutter. Den overliggende væske filtreres så gennem osteklæde og dialyseres over for 0,05 M Tris pH 8,0'. Aliquote portioner lyofiliseres så og holdes ved 4°C.
Endvidere har det vist sig,at det rigtige valg af en applicator er en vigtig faktor, der påvirker prøvens pålidelighed. Mange 35 5
DK 161219 B
almindelige typer applikatorer, der anvendes til at indsamle prøver, virker ikke godt i prøven ifølge den foreliggende opfindelse. Især har tamponer dannet af naturligt cellulosemateriale vist sig at virke dårligt. I overensstemmelse med en vigtig 5 side af opfindelsen er det meget at foretrække, at kulturtamponen dannes af regenerede cellulosefibre (rayon). Rayon foretrækkes ikke blot frem for bomuld, men frem for andre syntetiske fibre, der ellers er nyttige til dannelse af kulturtamponer.
10 En anden vigtig opdagelse med hensyn til den foreliggende opfindelse er, at applikatorp-inde fremstillet af naturligt materiale, såsom træ, ikke er egnede til at opnå gode resultater. Ifølge en anden vigtig side af opfindelsen foretrækkes det, at applika-torpindene dannes af syntetisk materiale, især materiale, der ik-15 keerporøst, herunder ikke-porøse plastarter, såsom polystyren, polycarbonat, polypropylen, polyethylen, polytetrafluorethylen, polyamider og polyacrylforbindelser.
Det er overraskende, at regenerede cellulosefibre er mest effek-20 tive til at opsamle streptococcus A antigen, hvorimod naturlige cellulosematerialer, såsom bomuld og træ er uegnede. Denne konstatering viser, at systemet er meget følsomt for tilstedeværelsen af stoffer, der forefindes sammen med cellulose i naturlige materialer. Mekanismen eller mekanismerne, der forårsager denne 25 følsomhed,er ikke blevet bestemt, men flere faktorer kan spille en rolle. Det kan være, at naturlige cellulosematerialer indeholder stoffer, som hæmmer de enzymer, der anvendes til at frigøre streptococcus A antigenet fra fibrene. En anden mulighed er, at naturlige cellulosefibre indeholder stoffer, der reagerer med 30 de antigent aktive steder i streptococcus A antigenet og gør antigenet uigenkendeligt af antistoffet. Porøst materiale, såsom træ, kan endvidere genere klare resultater ved at absorbere antigenet, enzymerne eller andre reagenser. De mulige mekanismer, hvorved naturlige cellulosematerialer generer påvisningen af 35 streptococcus A antigen, er anført som mulige forklaringer på 6
DK 161219 B
de overraskende bedre resultater, der opnås ved at anvende syntetiske materialer, men da de mulige forklaringer ikke er blevet nøjere undersøgt, er opfindelsen ikke bundet til nogen sådan mulig forklaring på resultaterne.
5
Ifølge en foretrukken udførelsesform ifølge opfindelsen påvises tilstedeværelse af streptococcus A antigen i ekstraktionsreagenset mediet agglutinationsindikatorreagens, som indeholder suspenderede latexpartikler, hvortil det over for antigen reaktions-10 dygtige antistof er bundet. Binding af antigenmolekyler med antistoffer bundet til forskellige latexpartikler , resulterer i tværbinding af latexpartiklerne og bringer dem til at aggluti-nere og fælde ud af suspensionen. Agglutination kan påvises med det blotte øje,men iagttages fortrinsvis ved undersøgels med et 15 mikroskop.
Egnede latexpartikler kan købes af Polysciences, Inc., Warrington, Pennsylvania i carboxyleret form. Partiklerne ligger i størrelse fra ca. 0,2 til ca. 1,0 micron, og har typisk mel- 10 12 2 20 lem ca. 1 x 10 og ca. 1 x 10 antistofmolekyler pr. cm partikeloverfladeareal. Indikatorreagenset har fra mellem ca.
-3 -3 1 x 10 og ca. 10 x 10 g antistofbundne latexpartikler pr. ml. Antistoffet til fremstilling af partiklerne fås fortrinsvis ved at immunisere kaniner med stamme T-23 gruppe A beta-25 hæmolytiske streptokokker. Aktivt antistof udvindes af disse kaniners serum ved en kombination af udfældning i nærværelse af 50% mættet (NH^^SO^ og ionbytningskromatografi under anvendelse af DEAE-cellulose (DE-52, Whatman) bragt i ligevægt med Tris stødpude, 0,01M pH 8,0. Den aktive antistoffraktion 30 elueres af DEAE cellulosesøjlen ved anvendelse af en NaCl gradient. De aktive antistroffraktioner elueres af søjlen mellem 0,04 og 0,09 M NaCl.
Latex-antistofreagenset fremstilles ved at koble kanin anti-35 gruppe A streptococcus antistof til carboxyleret latex under anvendelse af l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimid (EDC) som kondensationsmiddel.
7
DK 161219 B
Et prøveudstyr ifølge opfindelsen tilvejebringer egnede appli-katorer med plastpinde og rayontamponer. Enzymholdigt ekstraktionsreagens haves typisk i lyofiliseret form til rekonstitution på stedet. Efter rekonstitution kan ekstraktionsreagenset lagres 5 afkølet (ca. 2°C til ca. 8°C) i ca. 10 dage. Indikatorreagenset haves som en stabil suspension og kan lagres kølet i ca. 12 måneder. Suspensionen rystes før brugen. Et prøveudstyr leverer også fortrinsvis yderligere forsyninger til udførelse af prøven for at sikre, at de mest egnede.forsyninger anven-10 des og for at forhindre brugen af materialer, der kunne genere prøven. Sådanne forsyninger kan indbefatte reagensglas af passende størrelse, hvori antigen ekstraheres fra tamponerne, prøveplader med mange fordybninger til udførelse af aggluti-nationsreaktionen, pinde til omrøring, pipettespidser til 15 overføring osv. Et prøveudstyr skal også levere positive (streptococcus A antigenholdig) og negative kontrolprøver. Det foretrækkes også som en yderligere kontrol, at prøveudstyret indbefatter en latexsuspension, som ikke indeholder nogen antistoffer til direkte sammenligning (idet det erindres at selv 20 en ikke-agglutineret suspension ser lidt uklar ud).
Rekonstitueret ekstraktionsreagens pipetteres i rene reagensglas (typisk ca. 0,5 ml pr. glas). Applikatorerne anvendes til at pensle inficerede områder, f.eks. halse, og derefter bliver 25 tamponenden af hver pind anbragt i et af glassene. Glassene inkuberes i mindst 30 minutter og fortrinsvis 1 time ved ca. legemstemperatur (37°C) for at lade enzymet frigøre streptococcus A fra fiberen. Under inkubation foretrækkes det, at toppen af reagensglasset er dækket på passende måde for at forhindre 30 fordampning. Efter inkubationsperioden bliver applikatortampo-nen presset mod siderne af glasset for at frigøre dens væske, når applikatoren udtages. Applikatoren kasseres så. En aliquot portion, f.eks. 50 ul af hver prøve, anbringes i hver af to fordybninger på en prøveplade ,og det saitite gøres med aliquote portio-35 ner af positive og negative kontroller for at have tre sæt fordybninger i par. Til en af de parvise fordybninger sættes 8
DK 161219 B
antistofholdig latexsuspension og til den anden af de to fordybninger sættes antistoffri latexsuspension. Under anvendelse-af individuelle plastomrøringspinde blandes reagenserne godt i hver fordybning. Prøvepladen overdækkes og anbringes på meka-5 nisk rotationsapparat i ca. 4 minutter. Resultaterne kan straks aflæses. Selv om en stærk agglutinationsreaktion er synlig for det blotte øje, foretrækkes det, at blandingerne i fordybningerne iagttages under mikroskop. Enhver forskel iagttaget i den anti-stofholdige latexsuspensions fordybning fra den antistoffrie 10 latexsuspensions fordybning viser tilstedeværelse af streptococcus A i det penslede område. Hvis der ikke er nogen forskel i de to fordybninger, kan det konkluderes , at streptococcus A ikke til stede.
15 Eksempel 1 4,0 ml carboxyleret latex med 2,5 vægt% faste stoffer fra Po-lysciences, Inc., Warrington, PA, vaskes 3 gange med destilleret vand. Efter den sidste vask gensuspenderes partiklerne i 20 4,0 ml destilleret vand. 1 ml 0,05 M KH2PO^, pH 4,5 tilsættes.
Suspensionen af latex anbringes i en magnetisk omirører om holdes ved 22°C. 5,0 ml af en opløsning af 2 vægt%' EDC (fra Sigma Chemical Company, St. Louis, MO)tilsættes og får lov at reagere i 3,5 time. Carbodiimidlatexen vaskes en gang i saltvand (0,9% 25 NaCl) og gensuspenderes i 5,0 ml saltvand (0,9% NaCl).
1,2 mg kaninantistof opløses i 5,0 ml 0,2M borat, pH 8,5 og derefter tilsættes de 5,0 ml aktiveret latexsuspension i saltvand. Latexen og kaninantistoffet får lov at reagere i 20 timer ved 30 22°C. For at neutralisere overfladecarboxylgrupper, der ikke er bundet til antistoffet, tilsættes en opløsning af 5mM ethanol-amin efterfulgt af en opløsning af okseserumalbumin i en koncentration på 2 vægt%. Antistof-latexen vaskes og optages i 0,1 M glycin, pH 8,2, indeholdende 0,9% NaCl, 0,2% NaN^j 0,2% 35 BSA og 0,05% Tween-20 og lagres ved 4°C.
9
DK 161219 B
Eksempel 2
Virkemåden af den ovenfor beskrevne gruppe A streptococcus la-texagglutinationsprøve blev bestemt ved en en multi-center kli-® nisk bedømmelse. Resultaterne af latexagglutinationsprøven blev sammenlignet med kulturresultater.
Udpenslinger fra svælget blev opsamlet fra 1440 voksne og børn, der udviste symptomer på pharyngitis. Prøver blev op-10 samlet på en rayontampon cg transporteret til laboratoriet i modificeret Stuarts medium (Marion Culturette). Før udførelsen af prøven ifølge opfindelsen blev hver tampon anvendt til at pode en fåreblodagarplade til kultur. Efter 18-24 timers inkubations blev beta-hæmolytiske kolonier grupperet ved capil- 1 s lar precipitinprøven. Latexagglutinationsprøven ifølge opfindelsen var i overensstemmelse med kulturresultaterne i 95% (1366/1440) af de udpenslede prøver. Resultaterne er opsummeret i tabel 1.
20 Tabel 1
Overensstemmelse mellem aggluti-nationsprøven og kulturresultater.
2 S
Kulturresultater Agglutination Agglutination positiv_ negativ_
Positiv for gruppe - 309 281 28 A streptococcus 30
Negativ for gruppe - 1131 46 1085 A streptococcus
Eksempel 3 35 Følsomheden af gruppe A streptococcus latexagglutinationsprøven blev bestemt af 309 svælgudpenslingsprøver, som blev be-

Claims (14)

1. Prøveudstyr til påvisning af streptococcus A, k endete g n e t ved, at det omfatter 25 en applicator til opsamling af en biologisk prøve, der potentielt indeholder streptococcus A, hvilken applicator indbefatter en applicatorpind og en tampon i den ene ende dannet af en fiber, som opsamler streptococcus A antigen, et ekstraktionsreagens indeholdende enzymer til frigørelse 3q af streptococcus A antigen fra tamponen , og indikatorreagens indeholdende antistof, der er reaktionsdygtigt med streptococcus A antigen, idet når en biologisk prøve opsamles med applicatorens fibertampon/ denne tampon anbringes i ekstraktionsreagenset i tilstræk-35 kelig tid til at frigøre streptococcus A antigen i ekstraktions- DK 161219 B reagenset, og en aliquot portion af ekstraktionsreagenset blandes med indikatorreagenset/ og tilstedeværelse af streptococcus A i den biologiske prøve indikeres ved forekomsten eller den manglende forekomst af en antistof-antigenreaktion. 5
2. Prøveudstyr ifølge krav, kendetegnet ved, at tamponen er dannet af regenereret cellulosefiber.
3. Prøveudstyr ifølge krav 1, kendetegnet ved, at 1° pinden er dannet af syntetisk materiale.
4. Prøveudstyr ifølge krav 1, kendetegnet ved, at pinden er dannet af ikke-porøst materiale.
5. Prøveudstyr ifølge krav 1, kendetegn et ved, at tamponen er dannet af regeneret cellulosefiber og pinden er dannet af plast.
6. Prøveudstyr ifølge krav 1 /kendetegnet ved, at 20 ekstraktionsreagenset indeholder enzymer produceret af bakterien streptomyces albus.
7. Prøveudstyr ifølge krav 1, kendetegnet ved, at indikatorreagenset indeholder antistof bundet til suspende-rede latexpartikler, som agglutinerer når antistoffet binder til antigenet, idet forekomst eller ikke-forekomst af en antistof-antigenreaktion iagttages ved agglutinering eller ikke-agglutinering af de suspenderede partikler. 30
8. Fremgangsmåde til påvisning af streptococcus A under anvendelse af et prøveudstyr ifølge krav 1, kendetegnet ved, at der tilvejebringes en applicator, omfattende en applicatorpind og en fibrøs tampon og en biologisk prøve ud- 35 pensles med tamponen, DK 161219 B og at der tilvejebringes et ekstraktionsreagens indeholdende enzymer til at bevirke frigørelse af streptococcus A antigen fra tamponen, og tamponen dyppes i ekstraktionsreagenset og tamponen inkuberes i ekstraktionsreagenset i en tid, der er 5 tilstrækkelig til at frigøre antigen fra den fibrøse tampon, og at der tilvejebringes indikatorreagens indeholdende antistof, som er reaktionsdygtigt med antigenet, og der tilsættes en aliquot portion af ekstraktionsreagenset dertil, og man iagttager forekomsten eller den manglende forekomst af en 10 antistof-antigenreaktion, der viser tilstedeværelse eller fravær af streptococcus A i den biologiske prøve.
9. Fremgangsmåde ifølge krav 8,. kendetegnet ved, at tamponen er dannet af regenereret cellulosefiber. 15
10. Fremgangsmåde ifølge krav 8,kendetegn et ved, at pinden er dannet af et syntetisk materiale.
11. Fremgangsmåde ifølge krav 8,kendetegnet ved, at 20 pinden er dannet af ikke-porøst materiale.
12. Fremgangsmåde ifølge krav 8, kendetegnet ved, at tamponen er dannet af regenereret cellulosefiber og pinden er dannet af plast. 25
13. Fremgangsmåde ifølge krav 8,kendetegnet ved, at ekstraktionsreagenset indeholder enzymer produceret af bakterien streptomyces albus.
14. Fremgangsmåde ifølge krav 8,kendetegnet ved, at indikatorreagenset indeholder antistof bundet til suspenderede latexpartikler, som agglutinerer når antistoffet binder til antigenet, idet forekomst eller ikke-forekomst af en antistof-antigenreaktion: iagttages ved agglutinereing eller ikke-agglu-tinering af de suspenderede partikler. 3 9
DK072085A 1984-02-27 1985-02-15 Proeveudstyr og fremgangsmaade til bestemmelse af streptococcus a DK161219C (da)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US58417584 1984-02-27
US06/584,175 US4618576A (en) 1984-02-27 1984-02-27 Diagnostic test for Streptococcus A

Publications (4)

Publication Number Publication Date
DK72085D0 DK72085D0 (da) 1985-02-15
DK72085A DK72085A (da) 1985-08-28
DK161219B true DK161219B (da) 1991-06-10
DK161219C DK161219C (da) 1991-11-25

Family

ID=24336209

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK072085A DK161219C (da) 1984-02-27 1985-02-15 Proeveudstyr og fremgangsmaade til bestemmelse af streptococcus a

Country Status (9)

Country Link
US (1) US4618576A (da)
EP (1) EP0153477B1 (da)
JP (1) JPS60188847A (da)
AU (1) AU580971B2 (da)
CA (1) CA1227131A (da)
DE (1) DE3465110D1 (da)
DK (1) DK161219C (da)
FI (1) FI79614C (da)
MY (1) MY101456A (da)

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8414273D0 (en) * 1984-06-05 1984-07-11 Oxoid Ltd Identifying streptococcal grouping
US4673639A (en) * 1985-09-09 1987-06-16 Allegheny-Singer Research Institute Dry form micronitrous acid streptococci extraction-agglutination test
US4794076A (en) * 1985-09-23 1988-12-27 Vxr, Inc. Simultaneous extraction of a ligand from a sample and capture by anti-ligands therefor in ligand/anti-ligand assays
US4851337A (en) * 1986-01-08 1989-07-25 Hygeia Sciences, Inc. Extraction of test substances
CA1291032C (en) * 1986-02-05 1991-10-22 Hamish Mckenzie Method of detecting urinary tract infection or inflammation
GB8618443D0 (en) * 1986-07-29 1986-09-03 Univ London Monoclonal antibodies
AU8108587A (en) * 1986-10-08 1988-05-06 David Bernstein Method for exposing group a streptococcal antigens and an improved diagnostic test for the identification of group a streptococci
US4812414A (en) * 1987-09-18 1989-03-14 Eastman Kodak Company Immunoreactive reagent particles having tracer, receptor molecules and protein of pI less than 6
US4997772A (en) * 1987-09-18 1991-03-05 Eastman Kodak Company Water-insoluble particle and immunoreactive reagent, analytical elements and methods of use
US4847199A (en) * 1987-02-27 1989-07-11 Eastman Kodak Company Agglutination immunoassay and kit for determination of a multivalent immune species using a buffered salt wash solution
USRE33850E (en) * 1987-09-18 1992-03-17 Eastman Kodak Company Test kit and method for the determination of Streptococcus A antigen
US4746614A (en) * 1987-09-18 1988-05-24 Eastman Kodak Company Extraction device
US5084005A (en) * 1988-07-13 1992-01-28 Becton, Dickinson And Company Swab for collection of biological samples
JPH02170053A (ja) * 1988-12-23 1990-06-29 Meiji Seika Kaisha Ltd 微生物の検出方法及び装置
GB2255561B (en) * 1991-04-20 1995-06-21 Agricultural & Food Res Lysins from bacteriophages
IES930129A2 (en) * 1993-02-23 1993-11-03 Trinity Res Ltd Device for the processing of saliva for use in an¹immunoassay
AU6042994A (en) * 1993-02-23 1994-09-14 Trinity Research Limited Apparatus for the collection and recovery of saliva for use in diagnostic assays
FI101809B1 (fi) * 1996-06-11 1998-08-31 Valtion Teknillinen Menetelmä näytteen analysoimiseksi hiilihydraattimatriisista
US6790661B1 (en) * 1999-07-16 2004-09-14 Verax Biomedical, Inc. System for detecting bacteria in blood, blood products, and fluids of tissues
JP4667874B2 (ja) * 2002-12-26 2011-04-13 メソ スケール テクノロジーズ エルエルシー バイオマーカーを抽出するための方法、組成物およびキット
GB0417601D0 (en) * 2004-08-06 2004-09-08 Inverness Medical Switzerland Assay device & method
ATE524738T1 (de) * 2005-07-25 2011-09-15 Arkray Inc Immunoassay-verfahren und dabei zu verwendender kit
CN103069002A (zh) * 2010-07-20 2013-04-24 贝克顿·迪金森公司 用于将及时现场护理快速诊断测试结果与基于实验室的方法相连的方法
CA2869717C (en) 2012-04-13 2022-09-06 Becton, Dickinson And Company Reflex testing of samples using residual materials from a prior test
CN104644693B (zh) * 2015-02-16 2018-08-14 国药集团鲁亚(山东)制药有限公司 注射用a群链球菌药物的制备方法

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3368549A (en) * 1964-10-19 1968-02-13 S E Massengill Company Diagnostic swabs
US3790447A (en) * 1972-07-05 1974-02-05 Abbott Lab Streptococci diagnostic method
US4203724A (en) * 1976-08-16 1980-05-20 Mitsubishi Chemical Industries Limited Method and apparatus for the measurement of antigens and antibodies
JPS5742634A (en) * 1980-08-27 1982-03-10 Seikagaku Kogyo Co Ltd Latex sensitized with group polysaccharide antibody in streptococcus hemolyticus
US4497900A (en) * 1982-04-12 1985-02-05 Abbott Laboratories Immunoassay for Neisseria gonorrhoeae antigens
EP0109012A3 (en) * 1982-11-12 1984-08-08 Abbott Laboratories Determination of streptococci
US4525452A (en) * 1983-01-24 1985-06-25 Btc Diagnostics Limited Partnership Enzyme immunoassay with step of immersing sample in deionized water
AU2346684A (en) * 1983-04-18 1984-11-07 Quidel Removal of self-binding and staph a cross-reactivity of anti-strep antibody
US4582810A (en) * 1983-09-30 1986-04-15 Becton, Dickinson And Company Immuno-agglutination particle suspensions

Also Published As

Publication number Publication date
DK72085D0 (da) 1985-02-15
FI844676L (fi) 1985-08-28
DK161219C (da) 1991-11-25
FI79614C (fi) 1990-01-10
EP0153477A1 (en) 1985-09-04
CA1227131A (en) 1987-09-22
AU580971B2 (en) 1989-02-09
MY101456A (en) 1991-11-18
JPH0315147B2 (da) 1991-02-28
DE3465110D1 (en) 1987-09-03
EP0153477B1 (en) 1987-07-29
US4618576A (en) 1986-10-21
FI79614B (fi) 1989-09-29
JPS60188847A (ja) 1985-09-26
AU3474184A (en) 1985-09-05
FI844676A0 (fi) 1984-11-28
DK72085A (da) 1985-08-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK161219B (da) Proeveudstyr og fremgangsmaade til bestemmelse af streptococcus a
US5604109A (en) Method for exposing Group A streptococcal antigens and an improved diagnostic test for the identification of Group A streptococci
Middlebrook et al. Specific serum agglutination of erythrocytes sensitized with extracts of tubercle bacilli
Stoenner et al. Antigenic variation of Borrelia hermsii.
Krause Studies on bacteriophages of hemolytic streptococci: i. Factors influencing the interaction of phage and susceptible host cell
CA1086224A (en) Neisseria meningitides antigens sorbent compositions for neisseria gonorrhoeae test
Reaveley et al. Some enzymic activities and chemical properties of the mesosomes and cytoplasmic membranes of Bacillus licheniformis 6346
CA1121723A (en) Neisseria gonorrhoeae heat stable l-antigen purified of proteins and carbohydrates
US4351761A (en) Purified antigen to test for Neisseria gonorrhoeae antibodies
DK161860B (da) Fremgangsmaade til paavisning af det vigtigste ydre membranprotein af chlamydia trachomatis
Lennette et al. Studies on epidemic influenza virus: The nature and properties of the complement-fixing antigen
EP0150567B1 (en) Process for detecting beta-hemolytic streptococcus antigens
Kishinevsky et al. Evaluation of enzyme‐linked immunosorbent assay (ELISA) for serological identification of different Rhizobium strains
Wong et al. Typing of heat-stable and heat-labile antigens of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli by coagglutination
Margherita et al. Variation in rumen Butyrivibrio strains
Apicella et al. Meningococcal group C subgroup determinant detected by immunofluorescence
Rytel Counterimmunoelectrophoresis: a diagnostic adjunct in clinical microbiology
Drulak et al. Comparison of Visuwell enzyme immunoassay to culture for detection of group A Streptococcus in throat swab specimens
Scheel et al. Detection of Chlamydia trachomatis in the urine of young Norwegian males by enzyme immunoassay
Grillner et al. Comparison between a commercial ELISA, Rubazyme, and hemolysis-in-gel test for determination of rubella antibodies
Roberts Jr et al. Fluorescent antibody staining of group A streptococci: demonstration and elimination of blocking antibody
Clausen Detection of bacterial pathogens in purulent clinical specimens by immunofluorescence techniques
Sethi et al. Laboratory Diasnosis of Small Pox
Chun et al. A study of the tannic acid hemagglutination test with antigenic substances of Shigella flexneri
WO2009035357A2 (en) Immunological tests for the presence of bacteria which make use of antibodies obtained using a specific method

Legal Events

Date Code Title Description
PBP Patent lapsed