NO743770L - - Google Patents
Info
- Publication number
- NO743770L NO743770L NO743770A NO743770A NO743770L NO 743770 L NO743770 L NO 743770L NO 743770 A NO743770 A NO 743770A NO 743770 A NO743770 A NO 743770A NO 743770 L NO743770 L NO 743770L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- penicillin acylase
- amino
- bound
- acid
- water
- Prior art date
Links
- 108010073038 Penicillin Amidase Proteins 0.000 claims description 49
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 36
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 24
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 19
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 15
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 10
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims description 9
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- -1 phenoxy, 2-thienyl Chemical group 0.000 claims description 9
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 7
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 6
- LTHJXDSHSVNJKG-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-[2-(2-methylprop-2-enoyloxy)ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethyl 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCOCCOCCOCCOC(=O)C(C)=C LTHJXDSHSVNJKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 5
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 claims description 4
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 4
- 125000002941 2-furyl group Chemical group O1C([*])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 2
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 claims description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 2
- 125000000951 phenoxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(O*)C([H])=C1[H] 0.000 claims 2
- FZEVMBJWXHDLDB-ZCFIWIBFSA-N (6r)-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-en-8-one Chemical class S1CC=CN2C(=O)C[C@H]21 FZEVMBJWXHDLDB-ZCFIWIBFSA-N 0.000 claims 1
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 33
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 33
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 27
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 27
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 20
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 18
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 14
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 13
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 11
- NVIAYEIXYQCDAN-CLZZGJSISA-N 7beta-aminodeacetoxycephalosporanic acid Chemical compound S1CC(C)=C(C(O)=O)N2C(=O)[C@@H](N)[C@@H]12 NVIAYEIXYQCDAN-CLZZGJSISA-N 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 8
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 6
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 description 6
- XRVPSMBZQKYMGA-WDOBJEIGSA-N (6r,7r)-3-(acetyloxymethyl)-7-[(2-acetyloxy-2-phenylacetyl)amino]-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid Chemical compound N([C@H]1[C@@H]2N(C1=O)C(=C(CS2)COC(=O)C)C(O)=O)C(=O)C(OC(C)=O)C1=CC=CC=C1 XRVPSMBZQKYMGA-WDOBJEIGSA-N 0.000 description 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 5
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002585 base Substances 0.000 description 5
- 229940023064 escherichia coli Drugs 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 4
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 4
- 150000002009 diols Chemical class 0.000 description 4
- 150000002960 penicillins Chemical class 0.000 description 4
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N Butyl acetate Natural products CCCCOC(C)=O DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930186147 Cephalosporin Natural products 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Chemical compound CC(C)CC(C)=O NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Natural products CCC(C)C(C)=O UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 3
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 3
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940124587 cephalosporin Drugs 0.000 description 3
- 150000001780 cephalosporins Chemical class 0.000 description 3
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 3
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 3
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 3
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 3
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 3
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 3
- HSHGZXNAXBPPDL-HZGVNTEJSA-N 7beta-aminocephalosporanic acid Chemical compound S1CC(COC(=O)C)=C(C([O-])=O)N2C(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H]12 HSHGZXNAXBPPDL-HZGVNTEJSA-N 0.000 description 2
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N Acrylic acid Chemical compound OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical compound C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N Piperazine Chemical compound C1CNCCN1 GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKKRPWIIYQTPQF-UHFFFAOYSA-N Trimethylolpropane trimethacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCC(CC)(COC(=O)C(C)=C)COC(=O)C(C)=C OKKRPWIIYQTPQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 2
- 125000004397 aminosulfonyl group Chemical group NS(=O)(=O)* 0.000 description 2
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 2
- 150000004982 aromatic amines Chemical class 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- HOKIDJSKDBPKTQ-GLXFQSAKSA-N cephalosporin C Chemical compound S1CC(COC(=O)C)=C(C(O)=O)N2C(=O)[C@@H](NC(=O)CCC[C@@H](N)C(O)=O)[C@@H]12 HOKIDJSKDBPKTQ-GLXFQSAKSA-N 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 125000004386 diacrylate group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001991 dicarboxylic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 2
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 2
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000004816 paper chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920000193 polymethacrylate Polymers 0.000 description 2
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 2
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 2
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 235000011118 potassium hydroxide Nutrition 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000012673 precipitation polymerization Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000015424 sodium Nutrition 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000010557 suspension polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- UWHCKJMYHZGTIT-UHFFFAOYSA-N tetraethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCOCCO UWHCKJMYHZGTIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N triethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCO ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 125000001376 1,2,4-triazolyl group Chemical group N1N=C(N=C1)* 0.000 description 1
- 125000004506 1,2,5-oxadiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- PVOAHINGSUIXLS-UHFFFAOYSA-N 1-Methylpiperazine Chemical compound CN1CCNCC1 PVOAHINGSUIXLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQNHWIYLCRZRLR-UHFFFAOYSA-N 2-(3-hydroxy-2,5-dioxooxolan-3-yl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1(O)CC(=O)OC1=O WQNHWIYLCRZRLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical compound CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WLJVXDMOQOGPHL-PPJXEINESA-N 2-phenylacetic acid Chemical compound O[14C](=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-PPJXEINESA-N 0.000 description 1
- 125000000175 2-thienyl group Chemical group S1C([*])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- AYKYXWQEBUNJCN-UHFFFAOYSA-N 3-methylfuran-2,5-dione Chemical compound CC1=CC(=O)OC1=O AYKYXWQEBUNJCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFNISBHGPNMTMS-UHFFFAOYSA-N 3-methylideneoxolane-2,5-dione Chemical compound C=C1CC(=O)OC1=O OFNISBHGPNMTMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BGNGWHSBYQYVRX-UHFFFAOYSA-N 4-(dimethylamino)benzaldehyde Chemical compound CN(C)C1=CC=C(C=O)C=C1 BGNGWHSBYQYVRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NGHVIOIJCVXTGV-ALEPSDHESA-N 6-aminopenicillanic acid Chemical compound [O-]C(=O)[C@H]1C(C)(C)S[C@@H]2[C@H]([NH3+])C(=O)N21 NGHVIOIJCVXTGV-ALEPSDHESA-N 0.000 description 1
- NGHVIOIJCVXTGV-UHFFFAOYSA-N 6beta-amino-penicillanic acid Natural products OC(=O)C1C(C)(C)SC2C(N)C(=O)N21 NGHVIOIJCVXTGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150034533 ATIC gene Proteins 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004925 Acrylic resin Substances 0.000 description 1
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 241000194107 Bacillus megaterium Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000588698 Erwinia Species 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 1
- 241000187708 Micromonospora Species 0.000 description 1
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003926 acrylamides Chemical class 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002156 adsorbate Substances 0.000 description 1
- 125000003158 alcohol group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910001854 alkali hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000008044 alkali metal hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001447 alkali salts Chemical class 0.000 description 1
- 125000004849 alkoxymethyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003973 alkyl amines Chemical group 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010640 amide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002785 azepinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N biuret Chemical compound NC(=O)NC(N)=O OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical class OC(O)=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000010531 catalytic reduction reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- YGBFLZPYDUKSPT-MRVPVSSYSA-N cephalosporanic acid Chemical compound S1CC(COC(=O)C)=C(C(O)=O)N2C(=O)C[C@H]21 YGBFLZPYDUKSPT-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- NNQIJOYQWYKBOW-UHFFFAOYSA-N desacetoxycephalosphorin G Natural products S1CC(C)=C(C(O)=O)N2C(=O)C(NC(=O)CCCC(N)C(O)=O)C12 NNQIJOYQWYKBOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- LIWAQLJGPBVORC-UHFFFAOYSA-N ethylmethylamine Chemical compound CCNC LIWAQLJGPBVORC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 125000002541 furyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 125000001786 isothiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000842 isoxazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010297 mechanical methods and process Methods 0.000 description 1
- FQPSGWSUVKBHSU-UHFFFAOYSA-N methacrylamide Chemical compound CC(=C)C(N)=O FQPSGWSUVKBHSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N n,n'-methylenebisacrylamide Chemical compound C=CC(=O)NCNC(=O)C=C ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- APVPOHHVBBYQAV-UHFFFAOYSA-N n-(4-aminophenyl)sulfonyloctadecanamide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)NS(=O)(=O)C1=CC=C(N)C=C1 APVPOHHVBBYQAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 125000002971 oxazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000028 potassium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011736 potassium bicarbonate Substances 0.000 description 1
- 235000015497 potassium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011181 potassium carbonates Nutrition 0.000 description 1
- TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M potassium hydrogencarbonate Chemical compound [K+].OC([O-])=O TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940086066 potassium hydrogencarbonate Drugs 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- 125000003373 pyrazinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003226 pyrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002098 pyridazinyl group Chemical group 0.000 description 1
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-O pyridinium Chemical compound C1=CC=[NH+]C=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 125000004076 pyridyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000714 pyrimidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000168 pyrrolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M sodium bicarbonate Substances [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L sodium carbonate Substances [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 125000000020 sulfo group Chemical group O=S(=O)([*])O[H] 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 1
- LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N teixobactin Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H]1C(N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2NC(=N)NC2)C(=O)N[C@H](C(=O)O[C@H]1C)[C@@H](C)CC)=O)NC)C1=CC=CC=C1 LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N 0.000 description 1
- 150000003510 tertiary aliphatic amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000000335 thiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001544 thienyl group Chemical group 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/10—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a carbohydrate
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
- C12N11/082—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
- C12N11/082—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
- C12N11/087—Acrylic polymers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P35/00—Preparation of compounds having a 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring system, e.g. cephalosporin
- C12P35/02—Preparation of compounds having a 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring system, e.g. cephalosporin by desacylation of the substituent in the 7 position
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/848—Escherichia
- Y10S435/849—Escherichia coli
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Cephalosporin Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
- Polyamides (AREA)
Description
Fremgangsmåte til fremstilling av
7-amino-A^-cefem-derivater.
Oppfinnelsen vedrører en ny fremgangsmåte til fremstilling av 7-amino-A^-cefem-derivater, som kan anvendes som mellom-produkter for syntese av antimikrobielle virksomme stoffer.
Det er allerede kjent at man får 7-amino-cefalosporan-syrer, f.eks. ved spaltning av cefalosporin C med kulturer av forskjellige mikroorganismer (se f.eks. US-patent nr. 3-239.39<*>0 eller ved kjemisk spaltning etter forskjellige metoder (f.eks. DAS 1.176.147. DOS 1.145-615 eller US-patent nr. 3.272.809). Desacétoksy-cefalosporin C kan etter katalytisk reduksjon (se US-patent nr. 3.124.576 omdannes analogt i 7-amino-desacetoksy-cefalosporansyre. Fra DOS 2.212.276, er det også kjent en fremgangsmåte til enzymatisk spaltning av 7-fenoksyacetamido-desacetoksy-cefalosporansyre til 7-amino-des acetoksy-cefalosporansyre ved hjelp av et adsorbtivt bundet enzym av Bacillus megaterium B 400. Det er likeledes kjent flere fremgangsmåter til spaltning av penicilliner ved hjelp av kovalent til vann-uoppløselig bærer' bundet penicillinacylase (DOS 1.907.365, 1.917.057 og 2.215.687) .
Oppfinnelsen vedrører en fremgangsmåte til fremstilling av 7-amino-A^-cefem-derivater med formel
.hvori,R betyr hydrogen, hydroksyl, amino, cyano,^0-C0-NH2;
hvori n betyr et helt tall fra 4 til 6; -O-CO-R<1>, -NH-CO-R<1>, -S-CS-O-R<1>, hvori R1 betyr alkyl med 1 til 4 karbonatomer, eller hvori R' betyr -S-Het eller Het, idet Het betyr en 5- eller 6-leddet heteroaromatisk.ring, som eventuelt kan ha en positiv ladning og X betyr hydrogen eller symbolet av en negativ ladning, hvis resten R inneholder en positiv ladning, idet fremgangsmåten erkarakterisert vedat forbindelser med formel
hvori
R og X har overnevnte betydning og
R betyr en eventuelt 1 ringen med ammo, hydroksy eller alkyl med 1 til 3 karbonatomer substituert fenyl-, fenoksy-, 2-tienyl- eller 2-furylring og
R •5 betyr hydrogen, amm.o, hydroksy eller alkyl med
1 til 3 karbonatomer,
eller deres salter med uorganiske eller organiske baser, bringes i berøring med penicillinacylase, som er bundet,kovalent til en i.
vann ikke oppløselig bærer og isolerer det dannede 7-amino-Å^-cefem-derivat med formel'I..
På overraskende måte spalter den kovalent til bæreren bundne penicillinacylase forbindelsene med formel II praktisk talt med samme hastighet som tilsvarende penicilliner.■
Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen har en rekke fordeler i forhold til de kjente fremgangsmåter til fremstilling av forbindelser med formel I. Mens f.eks. enzymer fra cellekulturer bare kan anvendes en gang, er det mulig å. anvende den bærerbundne penicillinacylase flere ganger.. Videre fåes forbindelsene med. formel I
ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen med megen god renhet og i høye utbytter på en meget enkel måte. I forhold til anvendelse av et bare adsorptivt bundet enzym i henhold til DOS 2.212.2-76 har an-vendelsen ifølge oppfinnelsen av den kovalent bundne penicillinacylase den fordel at enzymet også ved anvendelse av høye konsentrasjon-er av cefalosporinsubstrater med formel II forblir fast bundet, hvorved det fremkommer en betraktelig øket økonomi ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen.
Anvender man f.eks. 7-fenyl-acetamido-desacetoksy-cefalosporansyre som utgangsstoff, så kan reaksjonsforløpet gjengis ved følgende formelskjerna:
De som utgangsstoffer anvendte forbindelser'er generelt definert ved den overnevnte formel II.
Alkyl R<1>betyr rettlinjet eller forgrenet alkyl med
1 til 4, fortrinnsvis 1 eller 2 karbonatomer. Eksempelvis skal det nevnes metyl, etyl, n- og i-propyl.
n .betyr fortrinnsvis 4 eller 5.
Den 5- eller 6-leddede heteroaromatiske ring Het inneholder fortrinnsvis 1 til 3, spesielt 1 eller 2 like eller forskjellige heteroatomer. Som heteroatomer står oksygen, svovel eller nitrogen. Som eksempler skal nevnes furyl, tienyl, pyrazolyl, imida-zolyl, 1,2,3- og 1,2,4-triazolyl, oksazolyl, isoksazolyl, tiazolyl, isotiazolyl, 1,2,3-, I,3j4-, 1,2,4- og 1,2,5-oksadiazolyl, azepinyl, pyrrolyl, isopyrrolyl, pyridyl, pyridinium, pyridazinyl, pyrimidinyl og pyrazinyl.
Den heteroaromatiske ring Het kan være substituert med
1 til-3, fortrinnsvis 1 eller 2 alkylgrupper med fortrinnsvis 1 til
3 karbonatomer, idet det eksempelvis skal nevnes metyl og etyl.
Alkyl i definisjonene R2betyr rettlinjet eller forgrenet alkyl med 1 til 4, spesielt 1 eller 2 karbonatomer, som metyl, etyl og n- og i-propyl.
Som salter av.forbindelser med formel II med uorganiske eller organiske baser, som kan anvendes for fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen, skal det nevnes alkalisaltene, som natrium- og kalium-salter, jordalkalisalter, som kalsiumsalter, ammoniumsalter samt saltene som dannes med alifatiske, ara-lif atiske eller aromatiske aminer. Eksempelvis skal det anføres de primære, sekundære og tertiære alkylaminer, som inneholder 1 til 4 karbonatomer pr. alkyl-gruppe og hvori alkylgruppen kan være substituert med hydroksygrupper, f.eks. etylamin, trietylamin, hydroksyetylamin, cykliske aminer, f.eks. pyridin, piperidin, morfolin, piperazin og N-metylpiperazin.
De ifølge oppfinnelsen anvendbare forbindelsermed formel II er allerede kjent og kan. fåes etter kjente fremgangsmåter (sammenlign f.eks. B. E. H. Flynn, Cephalosporins and Penicillins, Chemistry and Biology, Academic Press, New York, 1972).
Som (for fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen spesielt foretrukkede) eksempler på forbindelser med formel. II skal nevnes:
r
Av disse forbindelser er foranvendelsen ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen forbindelsene d) til g) spesielt fore-trukket .
For- fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen kan det anvendes kovalent til bæreren bunden penicillinacylase av forskjelligste opp-rinnelse..
Penicillinacylase (Enzyme Comission 3-5.1.11) kan utvinnes av tallrike mikroorganismer .etter generelt kjente metoder (DOS I.907.365 og 2.217.7^5), f.eks. frå bakterier, spesielt Escherichia coli, Erwinia eller actinomyceter som Streptomyces, Micro-monospora, Norcardia eller sopp, som Fusarium og gjær. Spesielt foretrekkes penicillinacylase fra Escherichia coli, f.eks. fra en Escherchia coli-stamme, som er deponert under nr. ATCC 11 105. Isoleringen av penicillinacylase fra Escherichia coli foregår f.eks. ifølge DOS 2.217.745 ved, at man innstiller et råekstrakt av Esche-
■richia-coli-celler, som ved siden av penicillinacylase dessuten inneholder celleåpninger av Escherichia-coli-cellér til en pH-verdi på 3,5 til 5-, 5, fortrinnsvis 5,0 og sentrifugerer ekstraktet, deretter behandler den overstående dannede klare oppløsning av penicillinacylase med aluminiumsilikater, fortrinnsvis bentonit, adskiller adsorbatet på kjent måte og eluerer f.eks. med 0,1 - 1,0 molar • oppløsning av natrium- eller kaliumacetat ved ca. pH 8,5-Den derved dannede anrikede klare oppløsning av penicillinacylase kan eventuelt vidererenses kromatografisk- på 'makroporøse ioneutvekslere , f.eks. sulf oetyl-cellulose .• Por fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen kan det anvendes praktisk talt alle enzymharpikser, hvori penicillinacylase er bundet kovalent til et i vann ikke oppløselig bærepolymerisat. De ifølge oppfinnelsen anvendbare enzymharpikser, hvori enzymet er bundet kovalent til harpiksen er allerede kjent resp. oppnåelig etter kjente metoder (sammenlign f.eks. DOS 1.907-365, 1.917.057, 2.157-972, 2.215.539, 2.215.687 og 2.008.996; E. Katchalski, Biochemistry, 3.(1964), sidene 1905 - 1919 , samt H. D. Orth og W. Briimmer, Angewandte Chemie 84 (1972), side 319 - 368). Som egnede enzymharpikser kommer det eksempelvis slike på tale, hvori penicillinacylasen bindes kovalent ved hjelp av bromcyan til-polysaccarider som dekstran eller nettdannet agarose (DOS 1.907.365)- Videre kan det anvendes enzymharpikser til hvis fremstilling penicillinacylase omsettes med bromacetylcellulose og til hvis fremstilling penicillinacylase omsettes med en ioneutvekslersubstans på basis av med karboksylgrupper
substituerte■tredimensjonalt nettdannet dekstran i nærvær av en til .amiddannelse egnet forbindelse, f.eks. et karbodiimid, idet det også kan anvendes aktiverte ioneutvekslerharpikser som syrekloridet av en akrylsyreharpiks samt med hydrazin nettdannede harpikser av etylen og maleinsyreanhydrid (sammenlign DOS 1.917-057). Meget godt egnet er også en, enzymharpiks, hvor ifølge DOS 2.157.972 penicillinacylasen er kovalent bundet til et blandingspolymerisat av akrylamid, N,N'-metylenbisakrylamid og maleinsyre, idet enzymharpiksen kan "fåes på følgende måte: Fremstillingen av det ifølge oppfinnelsen anvendte blandingspolymerisat foregår ved i og for seg kjente metoder. Etter blandingspolymerisasjonen trykkes den gellignende harpiks gjennom en sikt med 0,5 mm maskevidde, vaskes godt og tørkes i vakuum. Den innpolymeriserte dikarboksylsyre overføres ved 2 timers oppvarmning
ved l80°C i dikarboksylsyreanhydridet. Pr.'g enzym anvendes fortrinnsvis minst 10 g blandingspolymer. Herav tilsetter man ca..
3 - 4 g til oppløsningen av enzymet i 250 ml 0,05 molart, .fosfatpuffer pH 5,5, omrører intenst og tilsetter etter 2 timer det rest-erende blandingspolymerisat i små porsjoner. pH-verdien.holdes konstant- under den samlede reaksjonstid ved tilsetning av fortynnet"natronlut. Når det vandige overstående etter 5 timer ennu ikke inneholder omsatt enzym tilsettes ytterligere blandingspolymerisat. Et forhold på 1 del enzym til 15 - 20 deler blandingspolymerisat
er vanligvis tilstrekkelig for en fullstendig omsetning. Etter koplingen frafiltreres den bærerbundne penicillinacylase og vaskes, godt med vann og 1 molar koksaltoppløsning.
Spesielt foretrukne som ifølge oppfinnelsen, anvendbare enzymharpikser er slike som omtales i DOS 2.215.539 og hvor penicillinacylasen er bundet til nettdannede kopolymerisater, som består av kopolymere enheter av følgende sammensetning: A) 0,1.til 50, fortrinnsvis 2-20 vekt% a,B-monoolefinisk 'umettede dikarboksylsyreanhydrider med 4 til'9»fortrinnsvis 4
eller 5 karbonatomer, f.eks. maleinsyre-, itakohsyre- og/eller citrakonsyreanhydrid, spesielt maleinsyreanhydrid og B) .99,9 til 50, fortrinnsvis 80_til 98 vekt# di- og/eller
■poly-(met) akrylater av di- og/eller polyoler, fortrinnsvis diakrylater resp. dimetakrylater av dioler med 2 til 4 karbonatomer og/ eller omsetningsprodukter av ett mol av disse dioler med 1 til 20 mol alkylenoksyd med 2 til 4 karbonatomer resp. tirimetylolpropan-trimetakrylat, spesielt dimetakrylatet av etylenglykpl, dietylen-glykol, . triety lenglykol, tetraetylenglykol eller av høyere poly-alkylenglykoler med molvekter inntil 1000 eller deres blandinger.
Polymerisasjonen foregår etter metoden med utfellings-polymerisasjon eller'perlepolymerisasjon i oppløsningsmidler eller oppløsningsmiddelblandingen, som' er inerte overfor anhydridgruppen, f.eks. benzen, ved temperaturer på 20 - 200°C, f.eks. ved 60 - 70°C i nærvær av radikaldannende forbindelser, f.eks. azoisosmørsyre-dinitril. De på denne måte dannede kopolymerisater innføres for fremstilling av enzymharpiksen under overholdelse av. pH 5,7 til 6,8, f.eks.ved 4 til ca. 30°C i en vandig oppløsning av.penicillinacylase (f.eks. 1 vektdel penicillinacylase på 4 - 10 vektdeler polymer bærer). Etter ca. 2 timer frasuges eller sentrifugeres og residuet vaskes med saltoppløsnihger av høy ionestyrke, f.eks.
en 1 molar vandig natriumkloridoppløsning.
Likeledes spesielt foretrukne ifølge oppfinnelsen anvendbare enzymer er slike som er omtalt i DOS 2.215.687 og hvor penicillinacylasen er bundet til kopolymerisater, som består av nettdannede kopolymerisater av følgende kopolymeriserte enheter: A) 0,1 til 30, fortrinnsvis 2 til 20 vekti a,B-monoole-finisk umettede dikarboksylsyreanhydrider med 4 til 9, fortrinnsvis 4 eller 5 karbonatomer, som maleinsyre-, itakonsyre-'og/eller sitronsyreanhydrid, fortrinnsvis maleinsyreanhydrid. B) 35 til 90, fortrinnsvis 50 til 85 vekt% di- og/eller poly-(met)akrylater av di- og/eller polyoler, som diakrylater resp. dimetylakrylater av dioler med 2 til .4 karbonatomer og/eller omsetningsprodukter av ett mol av disse dioler med 1 til 10 mol alkylenoksyd med 2 til 4 karbonatomer resp. trimetylolpropan-trimetakrylat, f.eks. dimety lakrylater av étylenglykol, dietylenglyko.l, trietylen-glykol, tetraetylenglykol eller av høyere polyalkylglykoler med molvekter inntil 500 eller deres blandinger.
C) 5 til 60, fortrinnsvis 10 til 50 vekt/» av minst en
ikke under B) nevnt hydrofil monomer, fortrinnsvis slike enkelt umettede hydrofile monomere, som minst inneholder en karboksyl-, aminokarbony1-, sulfo- eller sulfamoylgruppe, idet aminogruppen av aminokarbony1- eller sulfamoylresten eventuelt kan være substituert med alkylgrupper med 1 til 4 karbonatomer eller med alkoksymetyl med 1 til 4 karbonatomer i alkyldelen. Eksempelvis skal det nevnes akrylsyre, metakrylsyre, maleihsyrehalvester med 1 til 8 karbonatomer i alkoholresten, N-vinyllaktamer som N-vinylpyrrolidon, metakryl-amid, N-substituerte (met)akrylamider, som N-metyl- og N-metoksy-metyl-(met)-akrylamid og N-akroloyl-dimety1-taurin.
Summen av bestanddelen A) til C) utgjør herved 100 vekt%. De nettdannede kopolymerisater har rystevolum på 2 •- 20 ml/g og spesifikke overflater på 1 til 400 m 2/g og inneholder etter forsåp-ningen av anhydridgruppene 0,02 til 11 milliekvivalente syrer pr. gram.
Polymerisasjonen utføres etter metoden med fellings-polymerisasjon eller perlepolymerisasjon i oppløsningsmidler eller oppløsningsmiddelblandinger,.som1 er inerte overfor anhydridgrupper, f.eks. benzen, ved temperaturer mellom 20 og 200°, fortrinnsvis 50 og 100°C, f.eks. ved 60 til 70°C i nærvær av radikaldannende forbindelser som azoisosmørsyredinitril. Polymerisatene føres for fremstilling av enzymharpiksen i en vandig oppløsning- av penicillinacylasen, (fortrinnsvis I vektdel penicillinacylase på 4 til 10/ vektdeler harpiks) ved temperaturer fra 0 til 30°C, f.eks. fra 4 til 20°C, idet pH-verdien i basetilsetning, f.eks. med natronlut holdes ved pH 5,7 til pH 6,8. Etter avslutning av reaksjonen frasuges og vaskes med pufferoppløsning eller en saltoppløsning,, f.eks. en 1 molar natriumkloridoppløsning.
Helt spesielt foretrekkes en enzymharpiks, hvor.penicillinacylasen er bundet kovalent til en- kopolymer av tetraetylenglykol-dimetakrylat, maleinsyreanhydrid og eventuelt metakrylsyre.
Som fortynningsmiddel kommer det ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen til spaltning av forbindelsene med formel II
på tale vann eller en blanding av vann og inntil ca. 10% av et organisk oppløsningsmiddel, fortrinnsvis metanol, etanol, aceton eller dimetylformamid.
Omsetningen (spaltning av forbindelser med formel II til forbindelser med formel I).foretas ved ca. 20 til ca. 45, fortrinnsvis ved 35 til 40°C.
Ved gjennomføring .av fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen oppløses forbindelsene med.formel II som skal spaltes i .overnevnte oppløsningsmiddel (fortrinnsvis vann), idet oppløsningen fortrinnsvis inneholder ca. 2 til ca. 20, spesielt 4 til 6 vektdeler av forbindelser med formel II. Oppløsningen bringes i egnet form i berøring med enzymharpiksen. Eksempelvis kan enzymharpiksen suspenderes i oppløsningen. For nøytralisering av den ved reaksjonen.avspaltede acylrest er det hensiktsmessig til en stadig overvåkning og inn-stilling av pH-verdien. pH-verdien bør under reaksjonen holdes på
en verdi på fortrinnsvis pH 6 til 9, spesielt pH 7,5 til 8,5- ' Dette kan, hvis nødvendig, foregå ved tilsetning av en egnet base til reaksjonsblandingen. Som baser kan det her anvendes uorganiske og organiske baser, som tert.-natriumfos fat, alkalihydroksyder, alkali-karbonater og hydrogenkarbonåter, ammoniakk, primære, sekundære og tertiære alifatiske og aromatiske aminer samt heterocykliske baser. Eksempelvis skal det nevnes natrium- og kaliumhydroksyd, natrium- og kåliumkarbonat, natrium- og kaliumhydrogenkarbonat, etylamin, mety 1-etyl.amin, trietylamin, mono-, di- og trihydroksy-. etylamin, anilin, pyridin og piperidin. Av baseforbruket sees reaksjonshastigheten samt reaksjonsavslutningen.
Reaksjonshastigheten avhenger fremfor alt av forholdet av mengden av disponerbart bærebunden penicillinacylase til mengden av anvendt.forbindelse med formel II og av den spesifikke aktivitet av den anvendte, bærerbundne penicillinacylase. Den spesifikke aktivitet av den bærerbundne penicillinacylase angis i enheter/g fuktighetsvekt. 1 enhet er definert som den penicillinacylase-aktivitet, som i ett minutt hydrolyserer et mikromol penicillin G ved 37°C og pH 7,8 til 6-aminopenicillansyre og fenyleddiksyre,
Til spaltning av 1 kg 7-fenylacetamido-desacetoksy-cefalosporansyre i løpet av 2 timer krever ca. 70.000 enheter bærerbunden penicillinacylase tilsvarende ca. 1 kg fuktig enzymharpiks. Ved en konsentrasjon på 6% utgjør reaksjonsvolumet 16,6 liter. Ved lengere spaltningstider kreves tilsvarende mindre bærerbundet penicillinacylase .
Etter avsluttet spaltningsreaksjon adskilles den bærer-bundne penicillinacylase, f.eks. ved filtrering eller sentrifugering og kan med en gang anvendes for en ytterligere spaltningsblanding.
Fra den klare oppløsning isoleres den dannede forbindelse med formel I etter generelt vanlige fremgangsmåter. Vanlige fremgangsmåter er f.eks. utfelling med uorganiske mineralsyrer som saltsyre, svovelsyre, fosforsyre eller organiske karboksylsyrer som eddiksyre ved det isoelektriske punkt eller kromatografiske fremgangsmåter. Det utfelte resp. ved kromatografi dannede 'produkt vaskes for fullstendig fjerning av avspaltet rest med et egnet oppløsningsmiddel, f..eks. butylacetat eller aceton og tørkes i vakuum. Det er umiddelbart den rene forbindelse med formel I.
De ifølge oppfinnelsen oppnåelige forbindelser med formel I kan etter generelt kjente metoder, f.eks. ved acylering ved 7-aminogruppen omdannes i verdifulle antimikrobielle, virksomme stoffer (sammenlign f.eks. B.E.H. Flynn, Cephalosporins and Penicillins, Chemistry and Biology, Academic Press, New York, 1972).
Oppfinnelsen skal forklares nærmere ved hjelp av
noen eksempler. Eksempel 1.
Spaltning av forbindelser med formel II:
2 m mol av forbindelser som skal spaltes med formel II oppløses i 20 ml vann (eventuelt ved tilsetning av natronlut) ved pH 7,5- Til den i ett til 37°C termostatstyrt kar omrørt oppløsning har man ca. 5 g (fuktig vekt) av enzymharpiksen (sammenlign med 'eksempel A). Under reaksjonen holdes pH-verdien konstant ved tilsetning av m/10 NaOH ved hjelp av en pH-stat på pH 7,5;Avslut-ningen av NaOH-tilsetningen viser reaksjonens avslutning. Etter-avsluttet reaksjon frasuger man den bærerbundne penicillinacylase over en glassfritte og ettervasker med vann. Filtrat og vaskevann inndampes i vakuum ved 30°C til 5 ml. Den konsentrerte oppløsning blandes med 5 ml butylacetat og cefalosporansyren utfelles ved tilsetning av 5 N HC1 til det isoelektriske.punkt på 3j7- Etter 2-3 timers henstand av prøven i kjøleskap frafiltreres det krystallinske produkt, vaskes med hver gang 10 ml vann og aceton og tørkes i vakuum.
Innholdsbestemmelsen av produktet foregikk ved foto--metrisk bestemmelse av frigjort 7-aminogruppe etter reaksjonen med p-dimetylaminobenzaldehyd i en modifikasjon av metoden av Svotek (Tsjekkisk patent nr. 116.959 (1965)).
Ekstinksjonen ved 415 nm ble sammenlignet med standard-kurven for ren 7-aminocefalosporansyre og 7_amino-desacetoksy-cefalosporansyre.
Dessuten påvises produktets identitet ved infrarød
og "'"H-kjerneresonans-spektret og ved papirkromatografi. i systemet butanol: iseddik: vann (12:3:5)'.
På denne måte ble følgende omsetninger gjennomført:
Eksempel 1 a).
Utgangsforbindelse:
908 mg 7-(2-tienyl)-acetamido-cefalosporansyre (natriumsalt). Reaksjonsvarighet: 42 minutter.
Sluttprodukt: 7-aminocefalosporansyre.
Utbytte: 520 mg ( 88% av det teoretiske), renhet: 98%.
Rf: 0,27 (ingen desacetyl-7-aminocefalosporansyre med Rf 0,10).
0
Eksempel lb).
Utgangsforbindelse:
866 mg 7~(2-tienyl)-acetamido-3-pyridiniummetyl-A^-cefem-4-karboksylat.
Sluttprodukt: 7-amino-3-pyridiniummetyl-A^-cefem-4-karboksylat. Reaksjonstid: 35 minutter.
Rf: 0,05-
På grunn av pyridinringen i molekylet kan produktet av denne reaksjon ikke isoleres ved utfelling ved det isoélektriske punkt. Fullstendigheten av omsetningen og identiteten av produktet ble påvist papirkromatografisk. Rf: 0,05.
Eksempel 1 c).
.Utgangsforbindelse:
687 mg 7_fenylacetamido-desacetoksycefalosporansyre. Reaksjonsvarighet: 27 minutter.
Sluttprodukt: 7-amino-desacetoksy-cefalosporansyre.
Utbytte: 350 mg (84% av det teoretiske), renhet: 99%.
Smeltepunkt 238 - 240°C (spaltning).
Eksempel 1 d)..
Utgangsforbindelse:
696 mg 7-fenoksyacetamido-desacetoksy-cefalosporansyre. Sluttprodukt: 7-amino-desacetoksycefalosporansyre.
Utbytte: 350. mg (82% av det teoretiske), renhet: 96%. Smeltepunkt 238 - 240°C (spaltning).
Eksempel 1 e).
Utgangs forbindelse:
696 mg 7-(a-amino-fenylacetyl)-desacetoksycefalosporansyre. Sluttprodukt: 7-amino-desacetoksycefalosporansyre.
Utbytte: 364 mg (85% av det teoretiske), renhet: 98%. Eksempel 2. 1 kg 7-fenylacetamido-desacetoksycefalosporansyre opp-løses i 12,5 liter vann og spaltes fullstendig ved 38°C ved tilsetning av 1 kg bærerbunden penicillinacylase (ifølge eksempel A) i løpet av 2 timer. pH-verdien holdes konstant ved løpende tilsetning av trietylamin ved 7,5. Etter avsluttet reaksjon frafiltreres det bærerbundne enzym og vaskes med 2. liter vann. Filtrat og vaskevann inndampes i vakuum ved 30 til 40°C i 3 liter- Det tilsettes 2 liter butylacetat og 7-amino-desacetoksycefalosporansyre utfelles med 5 N saltsyre ved pH 3,7 ± 0,1. Etter 2 timer frasuges krystallene og vaskes hver gang med 1 liter vann og aceton og tørkes i vakuum ved 4.0°C.
Utbytte: 574 g ( 89% av det teoretiske), renhet: 98%.
På samme måte ble samme bærerbundne penicillinacylase anvendt 25 ganger etter hverandre.
Utbyttene av de 25 spaltninger utgjorde gjennomsnittlig 90,3% av det teoretiske.
Eksempel 3.. 2 g 7~fenylacetamido-desacetoksycefalosporansyre (6 m mol) suspenderes i 190 ml vann og oppløses ved tilsetning av 1 N kalilut til pH-verdi på 7j8. Man oppvarmer til 37°C og tilsetter 3,2 g av den ifølge eksempel A fremstilte enzymharpiks. Ved tilsetning av trietylamin holdes pH-verdien under spaltningen ved 7}8 0,3- Etter \\ time er reaksjonen avsluttet. Man frafiltrerer enzymharpiksen, vasker med vann og- inndamper filtratet ved 50°C i vakuum inntil en fjerdedel av volumet. Etter tilsetning av l60 ml metyl-isobutylketon innstilles med fortynnet saltsyre til pH .4,3 og den ut-krystalliserte 7-amino-desacetoksycefalosporansyre frasuges etter 1 times henstand og vaskes med litt vann/metylisobutylketon. Utbytte: 1,01 g (78,8% av det teoretiske).
Smeltepunkt: .238 - 240°C under, spaltning.
Eksempel 4.
500 g 7-fenylacetamido-desacetoksycefalosporansyre opp-løses i 8,3 liter vann og spaltes fullstendig ved 38°C ved tilsetning av 220 g bærerbunden penicillinacylase (ifølge eksempel C) i løpet av 4 timer analogt eksempel 2 og den dannede 7-amino-desacetoksycefalosporansyre utfelles og tørkes.
Utbytte: 294 g (91% av det teoretiske), renhet: 97%. På samme måte ble det gjennomført 25 spaltninger med samme bærerbunden penicillinacylase. Det gjennomsnittlige utbyttet av 25 spaltninger utgjorde 90,5%.
Eksempel 5 •
500 g 7-fenoksyacetamido-desacetoksycefalosporansyre oppløses i 8,3 liter vann og bringes ved 38°C til reaksjon med 1,1 kg bærerbunden penicillinacylase (ifølge eksempel C) inntil fullstendig spaltning. Etter avslutning, av trietylaminopptaket opparbeides som angitt i eksempel 2.
Utbytte: 265 g 7-amino-desacetoksycefalosporansyre (86% av. det teoretiske), renhet: 98%.
Eksempel A.
Fremstilling av en ifølge oppfinnelsen anvendbar enzymharpiks: 80 g tetraetylenglykoldimetakrylat, 20 g maleinsyreanhydrid og 1 g azoisosmørsyrenitril oppløses i 1 liter benzen og oppvarmes under omrøring 4 timer ved 60°C. Deretter tilsetter man 1 g azoisosmørsyrenitril og 200 ml petroleter (kokepunkt 100 - l40°C) og polymeriserer videre i 5 timer ved 70°C. Det pulverformede produkt frasuges, oppslemmes en gang i benzen og tre ganger i petroleter (kokepunkt 30 - 50°C) og tørkes i vakuum.
Utbytte: 94 g.
Rystevolum: 3,5 ml/g.
Svellevolum i vann: 4,7 ml/g.
Spesifikk overflate: 5 m /g.
Syreinnhold etter forsåpning av anhydridgruppene: 3,5 milliekviva-lenter/g.
100 g av den således fremstilte bærerharpiks suspenderes i 3,5 liter av en vandig oppløsning av 4-8.000 enheter penicillinacylase (spesifikk aktivit.et, 12 enheter/mg protein (Biuretprøve) ) . Ved tilsetning av 1 N natronlut holdes pH-verdien konstant på 6,3, mens suspensjonen omrøres 20 timer ved 25°C.- Deretter frasuger man over en stor glassfritte og vasker harpiksen med hve V gang 5 liter 0,05 molart fosfatpuffer pH 7,5 som inneholder 1 molar natriumklorid og deretter med. samme puffer uten natriumklorid.
Resultat: ' 500 g fuktig enzymharpiks med en spesifikk aktivitet på 58 enheter/g, dvs. 29.000 enheter bærerbunden penicillinacylase rundt 60% av det teoretiske.
Eksempel B.
Fremstilling av den til fremstilling av enzymharpiksen nødvendige penicillinacylase: a) Et råekstrakt, som inneholder penicillinacylase utvinnes idet man dyrker Escherichia coli etter den i tysk patent nr. 1.111.778 ;omtalte fremgangsmåte, konsentrerer kulturen ved sentrifugering•til et slam og oppslutter cellene etter kjente mekaniske fremgangsmåter, eventuelt.under tilsetning av 3% metylisobutylkéton. b) 610 liter av et således dannet råekstrakt, inneholdende 5,2 . 10^ enheter fortynnes med avionisert vann til 2100 liter,
innstilles med svovelsyre på pH 5,0 og sentrifugeres. I det klare
c
overstående finner man 5,7 . 10 enheter med en spesifikk aktivitet på 1,7 enheter/mg. Under etterstilling av pH til 5,0 innrøres 13,8 kg bentonit (type B II, fra Erbsloh) og etter 30 minutter adskilles i en gjennomløpssentrifuge. Den adskilte bentonit elueres med 90 liter 0,5 molar natriumacetatoppløsning pH 8,0 og frafiltreres. Det fåes 92,5 liter, inneholdende 4,5 . 10^ enheter (86% av det teoretiske) me'd en spesifikk aktivitet av penicillinacylase på 6,5 enheter/mg. Eksempel C.
Fremstilling av en ytterligere ifølge, oppfinnelsen anvendbar enzymharpiks: 60 g tetraetylenglykoldimetakrylat, 30 g metakrylsyre, 10 g maleinsyreanhydrid og 1 g azoisosmørsyrenitril oppløses i 300 ml acetonitril. Denne oppløsning suspenderes il liter bensin (kokepunkt 100 - 140°C), som inneholder 5 g av en blanding av glycerol-mono- og dioleåt og polymeriseres 22 timer ved 6 0°C.
Polymerperlene frafiltreres, suspenderes tre ganger i benzen og to ganger i petroleter (kokepunkt 30 - 50°C) og tørkes i vakuum.
Utbytte:.94 g..
Rystevolum: 44 ml/g.
Svellevolum i vann: 5,5 ml/g.
Spesifikk overflate: 6,6 m /g.
Syreinnhold etter forsåpning av anhydridgruppene: 4,3 milliekviva-lenter/g.
100 g av den således fremstilte polymer.bringes som i eksempel A til reaksjon med 51-000 enheter penicillinacylase (spesifikk aktivitet 4,5 enheter/mg protein).
Resultat: 480 g fuktig enzymharpiks med en spesifikk aktivitet på 69 enheter/g, dvs. 33-000 enheter bærerbunden penicillinacylase ca. 65$'av det teoretiske.
Claims (7)
1. Fremgangsmåte til fremstilling av 7-amino-A^-cefem-derivater med formel
hvori
R betyr hydrogen; hydroksyl; amino; cyano;-0-C0-NH2 ;
hvori n betyr et helt tall fra
4 til 6;
-0-CO-R <1> , -NH-CO-R <1> , -S-CS-O-R <1> , hvori.R <1> betyr alkyl med 1 til 4 karbonatomereller hvori R betyr -S-Het eller Het, idet Het betyr en 5- eller 6-léddet hetero-aromatisk ring, som eventuelt kan ha en positiv ladning og
X betyr hydrogen eller symbolet av en negativ ladning, hvis resten R inneholder en positiv ladning,
karakterisert ved at forbindelser med formel
hvori
R og X har overnevnte betydning og
R betyr en eventuelt i ringen med ammo, hydroksy eller alkyl med 1 til 3 karbonatomer substituert fenyl-, fenoksy-, 2-tienyl- eller 2-furyl-ring og
R^ betyr hydrogen, amino, hydroksy eller alkyl med 1 til 3 karbonatomer,
eller' deres salter med uorganiske eller organiske baser, bringes i berøring med penicillinacylase, som er bundet kovalent til en i vann ikke oppløselig bærer og det dannede 7-amino-A 3 -cefem-deri•vat isoleres.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert
3 2
ved at R, R og X betyr hydrogen og R betyr fenyl.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at R, RJ og X betyr hydrogen og R betyr fenoksy.
4. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at R betyr -0-COCH^, R 2 betyr fenoksy og R^ 3 og X betyr hydrogen.
5.. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert
2 3
ved at R betyr -O-CO-CH^ , R betyr fenyl og R og X betyr hydrogen.
6. Fremgangsmåte ifølge krav 1 til 5, karakterisert ved at det som i vann uoppløselig bærer, hvortil penicillinacylasen er bundet kovalent anvendes et kopolymer av tetraetylenglykol-di-metakrylat eller maleinsyreanhydrid.
7. Fremgangsmåte ifølge krav 1 til 5, karakterisert ved , at det som i vann uoppløselig bærer, hvortil penicillinacylasen er bundet kovalent, anvendes et kopolymer av tetraetylenglykol-di-metakrylat, maleinsyreanhydrid og metakrylsyre..
,8. Fremgangsmåte ifØ:lge krav 1 til 7, karakterisert ved at penicillinacylasen, som er bundet kovalent til den i vann uoppløselige bærer stammer fra Escherichia coli.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19732355078 DE2355078A1 (de) | 1973-11-03 | 1973-11-03 | Verfahren zur herstellung von 7-amino-delta hoch 3-cephem-derivaten |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO743770L true NO743770L (no) | 1975-06-02 |
Family
ID=5897177
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO743770A NO743770L (no) | 1973-11-03 | 1974-10-18 |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US3930949A (no) |
| JP (1) | JPS5721994B2 (no) |
| AT (1) | AT337355B (no) |
| BE (1) | BE821760A (no) |
| CA (1) | CA1034525A (no) |
| CH (1) | CH607772A5 (no) |
| CS (1) | CS182274B2 (no) |
| DD (1) | DD115124A5 (no) |
| DE (1) | DE2355078A1 (no) |
| DK (1) | DK571674A (no) |
| EG (1) | EG11318A (no) |
| ES (1) | ES431588A1 (no) |
| FI (1) | FI320574A (no) |
| FR (1) | FR2249889B1 (no) |
| GB (1) | GB1448419A (no) |
| HK (1) | HK64479A (no) |
| HU (1) | HU169827B (no) |
| IE (1) | IE40248B1 (no) |
| IL (1) | IL45973A (no) |
| IN (1) | IN138712B (no) |
| LU (1) | LU71224A1 (no) |
| NL (1) | NL7414302A (no) |
| NO (1) | NO743770L (no) |
| SE (1) | SE413598B (no) |
| SU (1) | SU622408A3 (no) |
| ZA (1) | ZA747033B (no) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5619999B2 (no) * | 1974-02-07 | 1981-05-11 | ||
| JPS50123885A (no) * | 1974-03-15 | 1975-09-29 | ||
| US4282322A (en) * | 1975-11-24 | 1981-08-04 | Merck & Co., Inc. | Process for enzymatic deacylation of antibiotics |
| JPS52143289A (en) * | 1976-05-24 | 1977-11-29 | Meiji Seika Kaisha Ltd | Production of 7-amino-cephem derivatives by filamentous fungi |
| DE3432060A1 (de) * | 1984-08-31 | 1986-03-06 | Bayer Ag, 5090 Leverkusen | Immobilisierte zellen von bacillus subtilis, immobilisierungsverfahren und verwendung des praeparats zur abspaltung der 3-acetoxygruppe aus 7-ss-acylamido-cephalosporansaeuren |
| US4981789A (en) * | 1987-03-18 | 1991-01-01 | Merck & Co., Inc. | One-step enzymatic conversion of cephalosporin C and derivatives to 7-aminocephalosporanic acid and derivatives |
| US5104800A (en) * | 1989-06-27 | 1992-04-14 | Merck & Co., Inc. | One-step cephalosporin c amidase enzyme |
| US5229274A (en) * | 1989-06-27 | 1993-07-20 | Merck & Co., Inc. | Gene encoding one step cephalosporin C amidase and expression thereof in recombinant bacillus |
| DE4030040A1 (de) * | 1990-09-22 | 1992-03-26 | Bayer Ag | Enzymatische de-acylierung von acyl-aminosorbosen und dessen verwendung bei der herstellung von 1-desoxynojirimicin |
| GB9216759D0 (en) * | 1992-08-07 | 1992-09-23 | Finpael Spa | Process for the production of 7-amino thiazolyl cephalosporins |
| JP2002316991A (ja) * | 2001-04-18 | 2002-10-31 | Otsuka Chem Co Ltd | ペニシリン及びセファロスポリン化合物 |
| WO2007127065A2 (en) * | 2006-04-21 | 2007-11-08 | Living Proof, Inc. | In situ polymerization for hair treatment |
| CN103060417B (zh) * | 2011-10-19 | 2014-08-27 | 广州白云山制药股份有限公司广州白云山化学制药厂 | 7-氨基-3-乙烯基-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环［4.2.0］辛-2-烯-2-羧酸的制备方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3239394A (en) * | 1964-06-15 | 1966-03-08 | Merck & Co Inc | Process for producing 7-amino-cephalosporanic acid |
| US3507861A (en) * | 1966-09-14 | 1970-04-21 | Lilly Co Eli | Certain 3-methyl-cephalosporin compounds |
| US3736230A (en) * | 1969-02-17 | 1973-05-29 | P Delin | Process for producing 6-amino-penicillanic acid |
| GB1473100A (no) * | 1973-05-10 | 1977-05-11 |
-
1973
- 1973-11-03 DE DE19732355078 patent/DE2355078A1/de not_active Withdrawn
-
1974
- 1974-09-25 IN IN2136/CAL/74A patent/IN138712B/en unknown
- 1974-10-18 NO NO743770A patent/NO743770L/no unknown
- 1974-10-22 US US05/517,002 patent/US3930949A/en not_active Expired - Lifetime
- 1974-10-25 CA CA212,324A patent/CA1034525A/en not_active Expired
- 1974-10-28 SU SU742070786A patent/SU622408A3/ru active
- 1974-10-30 DD DD182048A patent/DD115124A5/xx unknown
- 1974-10-31 BE BE150128A patent/BE821760A/xx unknown
- 1974-10-31 AT AT877974A patent/AT337355B/de not_active IP Right Cessation
- 1974-10-31 CH CH1461274A patent/CH607772A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1974-10-31 SE SE7413734A patent/SE413598B/xx unknown
- 1974-10-31 LU LU71224A patent/LU71224A1/xx unknown
- 1974-10-31 FR FR7436439A patent/FR2249889B1/fr not_active Expired
- 1974-11-01 GB GB4736274A patent/GB1448419A/en not_active Expired
- 1974-11-01 JP JP12559574A patent/JPS5721994B2/ja not_active Expired
- 1974-11-01 CS CS7400007488A patent/CS182274B2/cs unknown
- 1974-11-01 IE IE2251/74A patent/IE40248B1/xx unknown
- 1974-11-01 NL NL7414302A patent/NL7414302A/xx not_active Application Discontinuation
- 1974-11-01 FI FI3205/74A patent/FI320574A/fi unknown
- 1974-11-01 HU HUBA3163A patent/HU169827B/hu unknown
- 1974-11-01 IL IL45973A patent/IL45973A/en unknown
- 1974-11-01 DK DK571674A patent/DK571674A/da unknown
- 1974-11-02 EG EG487/74A patent/EG11318A/xx active
- 1974-11-02 ES ES431588A patent/ES431588A1/es not_active Expired
- 1974-11-11 ZA ZA00747033A patent/ZA747033B/xx unknown
-
1979
- 1979-09-06 HK HK644/79A patent/HK64479A/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| BE821760A (fr) | 1975-04-30 |
| FI320574A (no) | 1975-05-04 |
| CH607772A5 (no) | 1978-10-31 |
| IE40248L (en) | 1975-05-03 |
| JPS5721994B2 (no) | 1982-05-11 |
| GB1448419A (en) | 1976-09-08 |
| IN138712B (no) | 1976-03-20 |
| DK571674A (no) | 1975-06-23 |
| EG11318A (en) | 1977-08-15 |
| ZA747033B (en) | 1975-11-26 |
| IL45973A (en) | 1977-05-31 |
| AT337355B (de) | 1977-06-27 |
| HK64479A (en) | 1979-09-14 |
| FR2249889B1 (no) | 1979-02-23 |
| US3930949A (en) | 1976-01-06 |
| ES431588A1 (es) | 1977-02-16 |
| NL7414302A (nl) | 1975-05-07 |
| JPS5071895A (no) | 1975-06-14 |
| CA1034525A (en) | 1978-07-11 |
| DE2355078A1 (de) | 1975-05-07 |
| SU622408A3 (ru) | 1978-08-30 |
| IE40248B1 (en) | 1979-04-11 |
| CS182274B2 (en) | 1978-04-28 |
| IL45973A0 (en) | 1975-02-10 |
| SE7413734L (no) | 1975-05-05 |
| FR2249889A1 (no) | 1975-05-30 |
| LU71224A1 (no) | 1975-06-24 |
| SE413598B (sv) | 1980-06-09 |
| DD115124A5 (no) | 1975-09-12 |
| HU169827B (no) | 1977-02-28 |
| ATA877974A (de) | 1976-10-15 |
| AU7491974A (en) | 1976-05-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO743770L (no) | ||
| US4337313A (en) | Immobilization of biocatalysts | |
| NO165774B (no) | Anordning ved seismikk-kabel (streamer) og lignende. | |
| JPS6023837B2 (ja) | 非可動化微生物細胞組成物及び微生物細胞の非可動化法 | |
| US4389489A (en) | Optically pure heterocyclic aminoacid compounds, a process for their use for the synthesis of medicaments | |
| US3695999A (en) | Isolation of enzymes from aqueous media by means of polyanions | |
| DE2334900C3 (de) | Verfahren zur Herstellung eines immobilisierten Enzyms | |
| US3528965A (en) | Penicillin ester process and products | |
| US3880713A (en) | Cephalosporin compounds | |
| US3794563A (en) | Preparation of immobilized enzymes | |
| US3962036A (en) | Process for the manufacture of 7-amino-cephalosporanic acid-type compounds | |
| US4340672A (en) | Enzymatic synthesis of β-lactam antibacterials | |
| US3830699A (en) | Insolubilized enzymes | |
| US4113941A (en) | Process for purifying products obtained from enzymatic cleavage of beta-lactam antibiotics | |
| CA1048950A (en) | Preparation of 7-amino-.delta.3-cephem derivatives | |
| KR790001527B1 (ko) | 7-아미노-δ3-세펨 유도체의 제조방법 | |
| Tomar et al. | Immobilization of cane invertase on bentonite | |
| KR830002207B1 (ko) | 7α-메톡시세팔로스포린 유도체의 제조방법 | |
| JP3078597B2 (ja) | Ｌ−スレオ−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）セリン誘導体の製造法 | |
| SU532619A1 (ru) | Способ получени производных 7-амино-3-цефем-4-карбоновой кислоты | |
| KR830002697B1 (ko) | 고정화 효소의 제조방법 | |
| US3616223A (en) | Penicillin intermediate | |
| JPH01242590A (ja) | ３−メトキシメチルセファロスポラン酸誘導体とその製造方法および７−アミノ−３−アルコキシメチルセファロスポラン酸の製造法 | |
| JPS6022920B2 (ja) | 固定化酵素法による６―アミノペニシラン酸の製法 | |
| JPS6192587A (ja) | Ｌ−フエニルアラニンの製造法 |