NO335436B1 - Metode for fremstilling av et dyrefôr og metode for fremstilling av et TDE-dekontaminert dyremateriale. - Google Patents
Metode for fremstilling av et dyrefôr og metode for fremstilling av et TDE-dekontaminert dyremateriale. Download PDFInfo
- Publication number
- NO335436B1 NO335436B1 NO20032159A NO20032159A NO335436B1 NO 335436 B1 NO335436 B1 NO 335436B1 NO 20032159 A NO20032159 A NO 20032159A NO 20032159 A NO20032159 A NO 20032159A NO 335436 B1 NO335436 B1 NO 335436B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- animal
- samples
- tde
- animal feed
- protein
- Prior art date
Links
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims abstract description 66
- 239000000463 material Substances 0.000 title claims abstract description 53
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 36
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims description 23
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 16
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 12
- 230000007065 protein hydrolysis Effects 0.000 claims description 7
- 238000005904 alkaline hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 5
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 abstract description 3
- 208000032274 Encephalopathy Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 abstract description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 25
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 25
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L calcium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 22
- 239000000920 calcium hydroxide Substances 0.000 description 21
- 235000011116 calcium hydroxide Nutrition 0.000 description 21
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 21
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 20
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 20
- 102100025818 Major prion protein Human genes 0.000 description 19
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 19
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 17
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 14
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 13
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 12
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 11
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 11
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 11
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 11
- 208000008864 scrapie Diseases 0.000 description 10
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 description 8
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 8
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 8
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 8
- 239000002585 base Substances 0.000 description 7
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 7
- 208000020406 Creutzfeldt Jacob disease Diseases 0.000 description 6
- 208000010859 Creutzfeldt-Jakob disease Diseases 0.000 description 6
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 6
- 239000010828 animal waste Substances 0.000 description 6
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 6
- 208000003407 Creutzfeldt-Jakob Syndrome Diseases 0.000 description 5
- 102000029797 Prion Human genes 0.000 description 5
- 108091000054 Prion Proteins 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 5
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 5
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 5
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 3
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 3
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 3
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000018756 Variant Creutzfeldt-Jakob disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 235000012216 bentonite Nutrition 0.000 description 2
- 208000005881 bovine spongiform encephalopathy Diseases 0.000 description 2
- BRPQOXSCLDDYGP-UHFFFAOYSA-N calcium oxide Chemical compound [O-2].[Ca+2] BRPQOXSCLDDYGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000292 calcium oxide Substances 0.000 description 2
- ODINCKMPIJJUCX-UHFFFAOYSA-N calcium oxide Inorganic materials [Ca]=O ODINCKMPIJJUCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 2
- 235000020993 ground meat Nutrition 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 2
- 241000238565 lobster Species 0.000 description 2
- 238000000464 low-speed centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 2
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 210000004767 rumen Anatomy 0.000 description 2
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000012134 supernatant fraction Substances 0.000 description 2
- 239000003760 tallow Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 239000010457 zeolite Substances 0.000 description 2
- 241000238017 Astacoidea Species 0.000 description 1
- 239000004184 Avoparcin Substances 0.000 description 1
- 239000005996 Blood meal Substances 0.000 description 1
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 235000016936 Dendrocalamus strictus Nutrition 0.000 description 1
- 239000004097 EU approved flavor enhancer Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 108010073032 Grain Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000019738 Limestone Nutrition 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021536 Zeolite Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010000059 abdominal discomfort Diseases 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 108010053278 avoparcin Proteins 0.000 description 1
- JWFVWARSGMYXRN-HTQQBIQNSA-N avoparcin Chemical compound O([C@H]1[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@H]2C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C4=CC(O)=CC(O)=C4C=4C(O)=CC=C3C=4)C(O)=O)=O)CC3=C(O[C@@H]4O[C@@H](C)[C@H](O)[C@H](N)C4)C=C(C(=C3)Cl)OC=3C=C2C=C(C=3O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O[C@@H]2O[C@@H](C)[C@H](O)[C@H](N)C2)OC2=CC=C1C=C2)C=1C=CC(O)=CC=1)=O)NC(=O)[C@@H](NC)C=1C=CC(O[C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O2)O)=CC=1)[C@@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O JWFVWARSGMYXRN-HTQQBIQNSA-N 0.000 description 1
- 229950001335 avoparcin Drugs 0.000 description 1
- 235000019377 avoparcin Nutrition 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 1
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 1
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000002374 bone meal Substances 0.000 description 1
- 229940036811 bone meal Drugs 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 238000001246 colloidal dispersion Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 235000019621 digestibility Nutrition 0.000 description 1
- HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010459 dolomite Substances 0.000 description 1
- 229910000514 dolomite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 244000144992 flock Species 0.000 description 1
- 235000019264 food flavour enhancer Nutrition 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000010440 gypsum Substances 0.000 description 1
- 229910052602 gypsum Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000144980 herd Species 0.000 description 1
- 150000004679 hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000013101 initial test Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- RUTXIHLAWFEWGM-UHFFFAOYSA-H iron(3+) sulfate Chemical compound [Fe+3].[Fe+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O RUTXIHLAWFEWGM-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000360 iron(III) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010023497 kuru Diseases 0.000 description 1
- 239000006028 limestone Substances 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- VTHJTEIRLNZDEV-UHFFFAOYSA-L magnesium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Mg+2] VTHJTEIRLNZDEV-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000347 magnesium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 229910001862 magnesium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000395 magnesium oxide Substances 0.000 description 1
- CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N magnesium oxide Inorganic materials [Mg]=O CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- AXZKOIWUVFPNLO-UHFFFAOYSA-N magnesium;oxygen(2-) Chemical compound [O-2].[Mg+2] AXZKOIWUVFPNLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 235000019645 odor Nutrition 0.000 description 1
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 1
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 1
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- MSFGZHUJTJBYFA-UHFFFAOYSA-M sodium dichloroisocyanurate Chemical compound [Na+].ClN1C(=O)[N-]C(=O)N(Cl)C1=O MSFGZHUJTJBYFA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical class [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/20—Animal feeding-stuffs from material of animal origin
- A23K10/26—Animal feeding-stuffs from material of animal origin from waste material, e.g. feathers, bones or skin
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physiology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Det er tilveiebrakt en metode for fremstilling av et dyrefor som er fritt for overførbare degenerative encefalopatier. Sentralt for metoden er basebehandling av dyremateriale ved en pH på minst 8,5 under temperaturbetingelser under 100°C ved atmosfærisk trykk. Denne metoden tilveiebringer et dekontaminert dyrefor som er fremstilt under relativt lave temperatur- og trykkbetingelser som er oppnåelig i vanlige destruksjonsanlegg for dyreskrotter.
Description
Oppfinnelsens område
Foreliggende oppfinnelse angår en metode for å fremstille et dyrefor. Mer spesielt angår denne oppfinnelsen en metode for å fremstille et dyrefor fra animalske biprodukter, hvor behandling med base og varme eliminerer eller reduserer overførbare, degenerative encefalopatier som bovin spongiform encefalopati, Creutzfeldt-Jacob sykdom og skrapesyke. Oppfinnelsen vedrører videre en metode for fremstilling av et TDE-dekontaminert dyremateriale.
Oppfinnelsens bakgrunn
Overførbare degenerative encefalopatier (TDE) omfatter bovin spongiform encefalopati (BSE eller "kugalskap"), skrapesyke hos sau, Creutzfeldt-Jacobs sykdom (CJD), Gerstman-Straussler Schemker (GSS) og Kuru hos mennesker. Disse sykdommene har de siste årene blitt allment kjent, til en viss grad på grunn av erkjennelsen av at myndighetene ikke maktet å kontrollere innblanding av BSE-kontaminert storfekjøtt i menneske- og dyremat, noe som medførte utbrudd av CJD, hovedsakelig i Storbritannia og Nord Irland (se Editorial i Nature, 1997, 389423).
Det er nå anerkjent at den faktor som er ansvarlig for TDE-overføring er et protein, vanligvis kalt et "prion"-protein som ligger til grunn for både BSE og CJD (Hill et al., Nature 1997, 289448).
Det er generelt konkludert med at for å nedbryte TDE i kjøtt er det nødvendig med varmebehandling ved 132°C i 20 minutter under et trykk på 3 bar. Alternativt kan temperatur og trykk reduseres til henholdsvis 21°C og 2 bar i nærvær av base.
Alkali er kjent for sin hydrolytiske effekt på biomolekyler som proteiner, og i forsøk på å sterilisere dyrevev som er kontaminert med TDE har det blitt benyttet basebehandling, varme og trykk som hjelpemidler for å ødelegge prion-patogenitet.
US 50874747 A beskriver en fremgangsmåte for å oppnå dannelse av findelte fettpartikler før tørking for å fremstille et dehydrert fettholdig dyrefor. Ved denne fremgangsmåten er proteinhydrolyse ikke påkrevet, og alkali tilsettes utelukkende for å reagere med fettkomponentene i slammet.
US 5780288 A beskriver dannelsen av en proteingel ved tilsetning av alkali og opprettholdelse av temperaturen ved mellom 50 °C og 55 °C. Det tilsettes et lipidmateriale for å oppnå et egnet protein/lipidforhold og deretter senkes pH til et surt sluttpunkt. Proteingelen som fremstilles er en fast kolloidal dispersjon av proteinpartikler inne i et løsningsmiddel.
US 44225620 A er rettet mot fremstilling av et partikkelformig, alkalibehandlet, proteinholdig dyrefor som forhindrer magebesvær hos drøvtyggere. Reduksjon av patogen kontaminering er ikke et tema for dette patentet. Fremstillingen omfatter alkalibehandling og oppvarming, men dette utføres utelukkende for å danne en proteinholdig gel.
FR 2586163 A vedrører anvendelse av animalsk avfall for å fremstille et gjødningsmateriale.
Taguchi et al, 1991, Arch. Virol. 119 297 benyttet seg for eksempel av en 1 times behandling med IN NaOH, etterfulgt av autoklavering ved 121°C i 30 minutter, for å inaktivere CJD-infiserte hjernehomogenater. Ernst & Race, 1993, J. Virol. Methods 41 193 benyttet seg av autoklavering, sammen med NaOH og LpH-behandling for å inaktivere skrapesykeinfiserte hjernehomogenater.
En mer omfattende rekke av forsøk ble utført av Taylor et al., 1994, Arch. Virol., 139 131 for å dekontaminere prøver med BSE-infisert svinehjerne eller skrapesykeinfisert gnagerhjerne. Behandlingene omfattet IM eller 2M NaOH inntil 1 time, autoklavering ved temperaturer mellom 134°C og 138°C i opptil 1 time, eller behandling med natriumhypokloritt eller natriumdiklorisocyanurat i opp til 2 timer. Disse forfatterne konkluderte med at ingen av de testede prosedyrer ga fullstendig TDE-inaktivering.
Problemet med fremstilling av dyrefor fra potensielt TDE-infisert dyrevev er at høye temperatur- og
trykkbetingelser ikke er lett å få gjennomført ved hjelp av vanlig produksjonsutstyr for gjenvinning av resirkuleringsavfall eller dyreavfall. Behandling med høy temperatur under fremstilling av dyrefor har dessuten en tendens til å gi et dårligere for som inneholder uønskede biprodukter som karsinogener, di-aminosyrer og flyktige lukter.
Oppfinnelsens formål
Det er derfor et formål med oppfinnelsen å tilveiebringe en metode for å fremstille dyrefor, hvor muligheten for TDE-kontaminering i det minste er redusert, om ikke eliminert.
Sammendrag av oppfinnelsen
Et aspekt ved foreliggende oppfinnelse angår en metode for å fremstille et dyrefor, som omfatter følgende trinn:
(i) tilsetning av alkali til dyremateriale for å opprettholde en pH på minst 8,5; (ii) oppvarming av materialet i trinn (i) til en temperatur i området 60°C til 99°C for å oppnå alkalisk hydrolyse av protein til stede i det animalske materialet; og
(iii) dehydrering av materiale som ble fremstilt i trinn (ii)
hvor varigheten av trinn (i) og (ii) er 1-4 timer.
Et annet aspekt ved foreliggende oppfinnelse angår en metode for å fremstille et TDE-dekontaminert dyremateriale som omfatter følgende trinn: (i) tilsetning av alkali til dyremateriale for å opprettholde en pH på minst 8,5; (ii) oppvarming av materiale i trinn (i) til en temperatur i området 60°C til 99°C for å oppnå alkalihydrolyse av protein til stede i dyrematerialet; og
(iii) dehydrering av materialet som ble fremstilt i trinn (ii)
hvorved varigheten av trinn (i) og (ii) er 1-4 timer.
Det er fordelaktig at metoden ifølge oppfinnelsen utføres ved omtrent atmosfærisk trykk.
Fortrinnsvis tilsettes tilstrekkelig base til å opprettholde en pH på minst 9,5.
Det er mer foretrukket å tilsette tilstrekkelig base til å opprettholde en pH i området 10,5 til 13,0.
Det er enda mer foretrukket å tilsette tilstrekkelig base til å opprettholde en pH i området 11,0 til 11,5.
Det anvendte alkali er fortrinnsvis kalsiumhydroksid, for eksempel i form av hydrert kalk.
Materialet i trinn (ii) varmes fortrinnsvis opp til en temperatur i området 60°C til 90°C.
I en spesiell utførelsesform er temperaturen ca. 60°C.
I en annen spesiell utførelsesform er temperaturen 80°C til 85°C.
Varigheten av trinn (i) og (ii), betegnet den "hydrolytiske fasen" er fortrinnsvis 1-2 timer.
Etter denne hydrolytiske fasen kan det behandlede dyrematerialet lagres inntil dehydrering eller kan dehydreres umiddelbart.
Når det gjelder dehydrering, er det foretrukket at fuktighetsinnholdet i dyreforet ikke er høyere enn 10-15 vekt%. Det er vanlig at fuktighetsnivået med tiden kan synke til ca. 7-8 vekt%, noe som er optimalt for dyreforet ifølge oppfinnelsen.
Dyreforet beskrevet ovenfor kan også anvendes som gjødsel.
Om ikke annet er angitt, brukes "omfatte" og "omfatter" i denne beskrivelsen inklusivt og ikke eksklusivt, slik at et oppgitt heltall eller en gruppe heltall kan omfatte ett eller flere andre heltall eller grupper av heltall som ikke er oppgitt.
Kort beskrivelse av figurene og tabellene
Tabell 1: Endelig pH i forskjellige behandlede kjøttprøver.
Tabell 2: Sammendrag av clearance-hastigheter for prion-protein i TDE-infiserte kjøttprøver, etter
alkali- og varmebehandling.
Figur 1: Eksempel på apparatur for fremstilling av dyrefor.
Figur 2: Titrering av 263K råmateriale SPO172200.
Spor 1: Proteinase K-fordøyd 263K Hs råmateriale, 10" 0 ' 1.
Spor 2: Ufordøyd 263K Hs-råmateriale, IO"<2>'<1>.
Spor 3: Lavmolekylære regnbuemarkører.
Spor 4-10: 5 x seriefortynninger av proteinase K-fordøyd 263K råmateriale i fortynninger på henholdsvis 10"1,4 til IO"5'6.
Figur 3: Analyse av prosessprøver etter proteinase K-fordøying.
Spor 1: Proteinase K-fordøyd 263K Hs råmateriale, IO"<2>'<1>.
Spor 2: Regnbuemarkører med lave molekylære forhold.
Spor 3: Proteinase K-fordøyd 287. IA.
Spor 4: Proteinase K-fordøyd 287.1-1.
Spor 5: Kokende blanding 1 x.
Spor 6: Kokende blanding lx.
Spor 7: Proteinase K-fordøyd 287.1-2.
Spor 8: Proteinase K-fordøyd 287.1-3.
Spor 9: Proteinase K-fordøyd 387.1-4.
Spor 10: Kokende blanding lx.
Figur 4: Analyse av ufordøyde prosessprøver.
Spor 1: Ufordøyd 263K Hs råmateriale, IO"<2>'<1>.
Spor 2: Proteinase K-fordøyd 263K Hs-råmateriale, 10"'.
Spor 3: Ufordøyd 287.IA.
Spor 4: Ufordøyd 287.1-1.
Spor 5: Regnbuemarkører med lave molekylære forhold.
Spor 6: Kokende blanding lx.
Spor 7: Ufordøyd 287,1-2.
Spor 8: Ufordøyd 287,1-3.
Spor 9: Ufordøyd 287,1-4.
Spor 10: Kokende blanding lx.
Figur 5: Titrering av 263K råmateriale SPO172200.
Spor 1: Proteinase K-fordøyd 263K Hs-råmateriale, IO"<2>'<1>.
Spor 2: Ufordøyd 263K Hs-råmateriale, IO"<2>'<1>
Spor 3: Regnbuemarkører med lave molekylære forhold.
Spor 4-10: 5 ganger seriefortynning av proteinase K-fordøyd 263K råmateriale fra IO"<1>'<4>til henholdsvis IO"<5>'<6>fortynning.
Figur 6: Western blot-analyse av proteinase K-fordøyde prøver.
Spor 1: Positiv kontroll i en fortynning på 10"<2>'<8>.
Spor 2: Molekylvektmarkører.
Spor 3: Prøve 301.IA.
Spor 4: Blindprøve.
Spor 5-10: Henholdsvis prøvene 309.1-1.3,309.1.1.6,309.1-2.3,309.1-3.3,309.1-4.3 og 309.1-4.3.
Figur 7: Western blot-analyse av proteinase K-ufordøyde prøver.
Spor 1: positiv kontroll i en fortynning på IO"<2>'<8>.
Spor 2: Molekylvektmarkører.
Spor 3: Prøve 309.1A.
Spor 4: Blindprøve.
Spor 5-10: Henholdsvis prøvene 309.1-1.3, 309.1-1.6,309.1-2.3, 309.1-3.3, 309.1-4.3 og 309.1-4.3.
Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen
Foreliggende oppfinnelse har oppstått fra oppfinnerens uventede oppdagelse av at svak varmebehandling ved atmosfærisk trykk av alkalibehandlet dyremateriale effektivt vil ødelegge TDE. Minimal varmebehandling er også relevant med hensyn til det faktum at dyreforet må være meget fordøyelig, spesielt med hensyn til proteininnhold, så vel som TDE-fritt. Videre vil for mye varme danne uønskede produkter, slik som kryssbundne aminosyrer, racemisering av L-aminosyrer til D-isomerene og dannelse av mutagener, som 2-amino-3,8-dietylimidazol[4,5fJkinolin. Det er også viktig at det oppstår minimal volatilisering under fremstillingen, slik at dannelsen av skadelige lukter reduseres til et minimum. For å oppnå dette begrenser foreliggende oppfinnelse varmebehandlingen under fremstilling ved atmosfærisk trykk, mens det benyttes alkali- og dehydreringstrinn for effektivt å sterilisere dyreforet med hensyn til TDE. Fremstillingsbetingelsene som tilveiebringes ved foreliggende oppfinnelse vil uten problemer være innenfor kapasiteten til mange standard kommersielle anlegg for dyrefdrfremstilling eller kan benyttes etter bare mindre modifiseringer av slike anlegg.
Dyrematerialene som kan benyttes omfatter for eksempel dyreavfall og innvoller etter slakting: husdyr med liten kommersiell verdi, for eksempel forkastet pga. alder eller tørkepåvirket sau eller storfe, eller reduksjon av saueflokk; avfall eller kasserte viltskrotter eller deler derav; innvoller fra fjærfe eller fjærfe forkastet pga. alder; fiskeavfall eller avfall fra kreps/hummer/languster eller ubrukelige arter fra fangst.
Dyrematerialet blandes fortrinnsvis som bulk sammen med et tørt dehydrerende materiale som er i stand til å absorbere fuktighet (enten kjemisk eller fysisk) fra dyrematerialet, noe som reduserer det prosentvise vanninnhold i materiale til et tørt, stabilt produkt.
Dehydrerende materialer omfatter minst en eller flere av de følgende kombinasjoner:
bentonitter, zeolitter, kaoliner eller andre leiretyper i et forhold som ikke overskrider 35%
(vekt/vekt);
kalsiumoksid, magnesiumoksid eller aluminiumoksid i et forhold som ikke overstiger 35%
(vekt/vekt);
diatomitt eller andre typer diatoméjord i et forhold som ikke overstiger 35% (vekt/vekt);
gips (lettspat), dolomitt, kalkstein, natriumbikarbonat eller salt i et forhold som ikke overstiger 35% (vekt/vekt);
kalsiumfosfater og/eller fosforsyre i et forhold som ikke overstiger 35% (vekt/vekt);
jern (II) sulfat og/eller jern (III) sulfat i et forhold som ikke overstiger 35% (vekt/vekt);
korn, stivelser og gelatin-materialer og biprodukter fra korn (for eksempel klimel, kli, belger og lignende), inkludert ekstruderte former i et forhold som ikke overstiger 80% (vekt/vekt);
proteinkorn og oljefrøkorn og biprodukter derav, inkludert prosesserte og ekstruderte former for proteinmel i et forhold som ikke overskrider 80% (vekt/vekt);
vegetabilske produkter og biprodukter som kopramel og palmekjernemel, avfall etter bomullsrensing og kuttet høy og halm i et forhold som ikke overstiger 75% (vekt/vekt); og
animalske biprodukter som kjøttmei, benmel og blodmel og gelatinmaterialer i et forhold som ikke overskrider 75% (vekt/vekt).
De foretrukne dehydreringsmaterialer som kan benyttes er forskjellige og vil avhenge av flere faktorer som omfatter:
1. Kostnaden for dehydreringsmateriale og avstanden til dehydreringsanlegget.
2. Den hastighet dehydreringen må utføres i.
3. Den tilsiktede bruk av det resulterende tørkede produkt.
Dehydrering utføres fortrinnsvis i en roterende tørker.
Alkali som benyttes i trinn (i) kan omfatte oksider, hydroksider og salter av de metalliske grunnstoffer. Eksempler omfatter kalsiumoksid, kalsiumhydroksid, natriumhydroksid, natriumkarbonat, natriumsulfitt, kaliumhydroksid, kaliumkarbonat, magnesiumhydroksid, magnesiumkarbonat, magnesiumsulfat eller to eller flere av hvilke som helst av disse i kombinasjon.
Alkali er fortrinnsvis i form av kalsiumhydroksid (hydrert kalk).
Konsentrasjonen av alkali som benyttes i trinn (i) avhenger av den ønskede pH, den aktuelle base som benyttes og bufferkapasiteten av dyret og andre materialer som benyttes under fremstillingen.
Et typisk forhold er for eksempel 25 kg hydrert kalk til 1200 kg fuktig animalsk materiale.
pH-nivået må justeres ved tilsetting av syre, avhengig av hvilket materiale produktet skal blandes med.
Under fremstillingen kan det eventuelt tilsettes tilleggsmaterialer som vil øke den ernæringsmessige eller økonomiske verdien av det ferdige produktet. Slike tilleggsmaterialer kan omfatte for eksempel modifiseringsmidler for vommen hos drøvtyggere, slik som monensen eller avoparcin, enzymer eller bakteriekulturer; ytterligere vitaminer eller mineraler; ikke-proteinformige nitrogenkilder som urea; antioksidanter, stabilisatorer, antibiotika, mugg-inhibitorer, konserveringsmidler (inkludert salt) o.L; modifiseringsmidler som endrer proteiners og lipiders fordøyelighet i vommen hos drøvtyggere; smaksforbedrende midler som molasse og biprodukter fra molasse-fermentering.
Etter tørking hensettes fortrinnsvis dyreforet i 24 timer før det gis direkte til besetningen (både drøvtyggere og en-magede) i form av granuler eller stykker ("blokk") eller form av finmalt pulver.
Dyreforet kan blandes med et fortillegg, sporstoffer, proteinmel, kornprotein og oljefrøkorn, molasse eller biprodukter fra molassefermentering, høy eller lignende, i enhver kombinasjon, for foring av besetning (både drøvtyggere og en-magede); det kan benyttes som kjæledyrfor, enten produktet som sådan eller blandet med andre materialer; og/eller det kan benyttes direkte eller som en ingrediens i mat beregnet for menneskelig konsum. Generelt vil det tørkede materiale innblandes ved maksimalt 10-15% (vekt/vekt) av sluttproduktet.
Noen eksempler på fremstilt dyrefor er:
1. Avfettede fraksjoner av fast slakteavfall (vanligvis mindre enn 10% fett på basis av tørt materiale) pluss limvann blandes med kalsiumhydroksid for å oppnå den ønskede pH på 11 (omtrent 1:30 vekt/vekt på basis av tørt materiale) og hensettes i en mellombunker i 1 time. Deretter tørkes produktet ved 80°C i en roterende tørker i løpet av 1 time, noe som gir et resulterende produkt med mindre enn 10% fri fuktighet, som deretter males til et fint mel. 2. Avfettede fraksjoner av fast slakteavfall (vanligvis mindre enn 10% fett på basis av tørt materiale) blandes med kalsiumhydroksid for å oppnå den ønskede pH på 10 (omtrent 1:50 på basis av tørt materiale) og hensettes i en mellombunker i 10 minutter og tørkes deretter i en roterende tørker med tilførsel av noe solvarme i løpet av 3 timer ved 60°C, hvilket gir et resulterende produkt med mindre enn 10% f3. Rått fiskeavfallsmateriale blandes med alkali som består av 80% kalsiumhydroksid og 20% natriumhydroksid til en pH på 10,5 (omtrent 1:40 på basis av tørt materiale) og tørkes i en roterende tørker ved 70°C i løpet av 4 timer, hvilket gir et resulterende produkt med mindre enn 11% fuktighet, som deretter males til et fint mel.
Selv om det til nå ikke er oppdaget infeksiøs TDE i andre husdyr enn drøvtyggere (for eksempel fisk og fjærkre) er det i enkelte land forbudt å fore med proteinmel med bredt animalsk omfang. I Australia og USA er det for eksempel forbudt å fore drøvtyggere med ethvert proteinmel av animalsk opprinnelse. I mange europeiske land er det totalforbud mot å fore alle dyrearter med ethvert proteinmel av animalsk opprinnelse. Disse forbudene foreligger på grunn av frykten for at infeksiøs TDE eventuelt skal oppdages hos andre dyr enn drøvtyggere.
Det er på det rene at dyreforet ifølge oppfinnelsen kan benyttes som TDE-dekontaminert gjødningsmiddel.
For å lette forståelsen av oppfinnelsen vil nå foretrukne utførelsesformer beskrives med henvisning til den vedlagte tegning (figur 1) som er et skjematisk diagram over apparatet som benyttes ved metoden ifølge foreliggende oppfinnelse.
Når det gjelder metoden ifølge oppfinnelsen, blandes dehydreringsmaterialet med det rå dyrematerialet og oppvarmes og tørkes deretter. Det er vanlig å blande alle materialer ved starten, men det er ikke påkrevet, siden en hvilken som helst ingrediens kan innføres ved et hvilket som helst tidspunkt under prosessen. Materialet tørkes straks det er blandet. Hvilket som helst varmetørkingssystem kan benyttes, men et vanlig oppvarmet luftstrømssystem er vanligvis mest praktisk.
Med hensyn til figur 1 passerer dyreavfallet 10 (for eksempel storfeskrotter) gjennom en kjøttkvern eller kutter 11 før alkali 12 (fortrinnsvis kalsiumhydroksid) tilsettes og blandes i blander 13.
Etter kverning og før tilsetting av alkali 12 kan dyreavfallet 10 oppvarmes for å gjøre talg-bestanddelen flytende. Det oppvarmede dyreavfallet dekanteres deretter eller presses for å danne en fast og en flytende fraksjon. Den flytende fraksjonen surgjøres å separeres i en talgfraksjon, andre væsker (mest vann) og faste rester (kalt "limvann"). Dette lim vannet kan prosesseres separat eller kombineres med den faste fraksjonen for alkali- og varmebehandling.
I dette eksempelet økes pH i blandingen til ca. pH 11,0 til 11,5 ved tilsetting av alkali 12 (fortrinnsvis kalsiumhydroksid). I løpet av denne "hydrolytiske fasen" bør pH opprettholdes ved minst 8,5 eller fortrinnsvis pH 9,5 i 1-4 timer. pH-verdien kan falle under proteinhydrolysen, så det er foretrukket å begynne ved en pH på minst 11,0, slik at pH-verdien aldri faller under pH 8,5, eller fortrinnsvis pH 9,5.
Under den hydrolytiske fasen kan temperaturen opprettholdes ved 60°C i en lengre periode (for eksempel 3 timer) for å redusere energiforbruket eller kan opprettholdes ved 80-85°C i en kortere periode (for eksempel 1 time).
Blandingen kan deretter overføres (for eksempel ved hjelp av en navar) til en trommeltørke 14 som er utstyrt med motstrøms luftstrøm ved hjelp av en luftvifte eller luftblåser 16 som er oppvarmet med varmer 15. Det er fortrinnsvis ved dette punktet at dehydreringsmaterialet (for eksempel bentonitt, zeolitt, kalkstein, malt korn) settes til tørkeren for å lette dehydreringsprosessen.
Dyreforet vil vanligvis forlate tørkeren 14 med et fuktighetsinnhold på ca. 10-11% (vekt/vekt). Det er funnet at fuktighetsinnholdet reduseres til ca. 7-8% (vekt/vekt) i løpet av 24-48 timer etter tørkingen på grunn av fortsatt proteinhydrolyse.
Det tørkede dyreforet overføres til en hammermølle 17 for oppmaling til ønsket granul/pulver-størrelse og det granulerte/finmalte dyreforet overføres til et pakke/transportområde 18.
Når produktet kan anvendes for direkte foring, for eksempel i fiskefor, kan syre 19 settes til blanderen 13 (etter at den innledende blandingen er utført) eller til hammermøllen 17 for å redusere pH i sluttproduktet, for eksempel til pH 6,5-7,5.
Når produktet skal blandes med sure materialer som korn, er det eventuelt ikke nødvendig med tilsetting av syre siden det basiske produktet kan balanseres av syren i kornet.
Det vil være åpenbart for fagmannen at verdifullt for, fortrinnsvis for dyr, men også egnet for menneskelig inntak kan fremstilles fra dyrevev som er hovedsakelig fritt for TDE-kontaminering eller i det minste har redusert sannsynlighet for TDE-kontaminering, og at det resulterende for er egnet for en rekke potensielle bruksområder, inkludert anvendelse som et gjødningsmiddel.
Fagmannen henvises til de følgende eksempler, slik at oppfinnelsen skal være enklere å forstå og utføre i praksis.
Eksempel 1
Kvernet lårtunge ble innkjøpt fra en lokal slakter og prøver på 4 x 10 g ble oppveid. To av prøvene ble plassert i metallbegere, og ble tilsatt 1 ml ubehandlet homogenat av 263 K hamsterhjerne med skrapesyke (cHs) og ble blandet grundig. Begge begere ble tilsatt 20 ml 5% kalsiumhydroksidløsning, ble omrørt og dekket med folie og deretter plassert i et vannbad som holdt 60°C i 12 timer. Løsningen ble omrørt omtrent hvert 30. minutt i løpet av den 12 timers inkuberingen.
Den tredje 10 g prøven med kjøtt ble tilsatt 1 ml cHs, blandet grundig og 20 ml 1% SDS-løsning ble deretter tilsatt. Blandingen ble plassert i en "end over end"-blander i 10 minutter. Blandingen ble deretter kokt i 5 minutter, klaret, oppdelt og nedfrosset ved -80°C. Dette utgjør 287.1A-cHs prøven.
Den siste 10 g prøven ble plassert i et metallbeger, tilsatt 1 ml cHs, blandet grundig og ble deretter plassert i en ovn som holdt 60°C for å lufttørke. Også denne prøven ble omrørt omtrent hvert 30 minutt. Straks den var tørr ble det dehydrerte kjøttet fjernet fra ovnen og oppmalt ved hjelp av morter og pistill. Det oppmalte kjøttet ble blandet med 20 ml med 1 x kokende blanding, plassert i "end over end"-blanderen, blandet i 12 timer ved romtemperatur og deretter klaret og oppdelt. Dette utgjør 287.1-1-cHs-prøven.
Etter 12 timer i vannbad som holdt 60°C ble de to metallbegrene fjernet. Et beger ble plassert i ovnen som holdt 60°C og ble lufttørket under intermitterende røring som ovenfor. Materialet i det andre begeret ble plassert i et sentrifugerør og pH ble justert til pH 7,5. 22 ml med 1 x kokende blanding ble tilsatt, plassert i "end over end"-blanderen og ble hensatt for blanding i 12 timer ved romtemperatur. Dette ble deretter klaret, oppdelt og nedfrosset ved -80°C. Dette utgjør 287.1-2-cHs-prøven.
Etter dehydrering ved 60°C ble det hydrolyserte kjøttet fjernet fra ovnen og malt ved hjelp av morter og pistill. 20 ml 50 mM natriumsalt ble satt til det malte kjøttet og pH ble justert til pH 7,5. 23 ml av 2 x kokende blanding ble tilsatt og røret ble plassert i "end over end"-blanderen i 12 timer ved romtemperatur. Dette ble deretter klaret, oppdelt og nedfrosset ved 80°C. Dette utgjør 287.1-3-cHs-prøven.
Den gjenværende pellet fra 287.1-3-cHs-prøven ble oppslemmet og inkubert med 10 ml 50 mM natriumacetatbuffer (pH 6,0) og ble plassert i "end over end"-blanderen i 60 minutter ved romtemperatur. Dette ble deretter klaret, oppdelt og nedfrosset ved -80°C. Dette utgjør 298.1-4-cHs-prøven.
Det ble deretter utført Western-blot på prøvene. Western-blot-analyse av 263K hamster-skrapesyke omfatter anvendelsen av det spesifikke, monoklonale antistoff 3F4. 3F4 gjenkjenner både den normale celleformen av prionproteinet, PrP<c>, og den sykdomsrelaterte formen, PrP<Sc>. I motsetning til den normale celleformen er PrP<Sc>relativt proteaseresistent, og proteinase K-fordøying av prøver kan anvendes for å skille PrP<Sc>fra PrP<c>. Proteinase K-fordøying av prosessprøver er også nyttig for å fjerne protein som er til stede i prosessprøver og som kan forårsake ikke-spesifikk eller kryss-reaktiv bakgrunnsfarging i Western-blot-forsøket.
Figur 2 viser en titrering av det skrapesykeinfiserte råmaterialet fra 263K hamster som ble benyttet i disse forsøkene (SPO172200). Figuren viser det typiske fargingsmønsteret som ble observert for 263K ved bruk av 3F4. Det modne PrP-protein i sin fulle lengde er antatt å ha et tilsynelatende molekylært forhold (Mr) på tilnærmet 33.000 dalton (33K, øverste bånd, spor 2). Etter proteinase K-fordøying observeres vanligvis et dominerende bredt bånd i området for 28K, et svakere bredt band tilnærmet 23K, til et skarpt, men svakt bånd tilnærmet 19K (se spor 1). Legg merke til at i råmaterialet av 263K Hs kan disse lavere Mr-typene også påvises (spor 2), antageligvis på grunn av endogene proteaser som er til stede i, eller i løpet av prepareringen av råmaterialet.
Spor 4-10 viser fem ganger seriefortynninger av 263K råmateriale fra en fortynning på henholdsvis 1:25 (10"<1>'<4>) til en fortynning på 1:390625 (IO"<5>'<6>). 28K PrP<Sc->typene kan påvises i spor 4-7, for eksempel ned til en fortynning på IO"<3>'<5>. Ved lengre eksponeringer i dette blottet (ikke vist) påvises også 28K-typene ved en fortynning på IO' 4' 1. Sluttpunktet, eller titreringspunktet, for råstoffet er definert som den første fortynning hvor 28 PrP-typene ikke lenger kan påvises. Titreringspunktet for råmaterialet er derfor IO"4'9, eller 7,8 x 10<4>arbitrære enheter/ml.
Western-blot-analyser av proteinase K-fordøyde prosessprøver er vist i figur 3. Proteinase K-fordøyd 263K Hs-råmateriale SP0172200 fungerer som en intern positiv kontroll (spor 1, fortynning på IO"<2>'<1>). 28K PrP-typene kan tydelig ses i prøvene 287.IA og 287.1-1 (henholdsvis spor 3 og 4). En tilnærmet 33K proteintype observeres også, noe som tyder på at proteinase K-fordøyingen av disse prøvene er ufullstendige. Ingen proteinbånd observeres i prøvene 287.1-2, 287.1-3 eller 287.1-4 (henholdsvis spor 7-9), noe som tyder på at den alkaliske hydrolyseprosessen har fjernet PrP<Sc->proteinene. Siden ingen PrP<Sc->typer er observert i disse prøvene kan det forstås som at de har et sluttpunkt, eller titreringspunkt på 10°, eller 1x10° arbitrære enheter/ml. Legg merke til at titreringspunktet ikke kan estimeres for prøvene 287. IA eller 287.1-1.
For å bekrefte at PrP<Sc->proteinene ikke rett og slett var nedbrutt i proteinase K-fordøyelsestrinnet, ble ufordøyde prosessprøver analysert ved hjelp av Western blotting (Fig. 4). Både ufordøyd og proteinase K-fordøyd 263K Hs-råmateriale SPO 172200 fungerte som interne positive kontroller (henholdsvis spor 1 og 2). PrP-proteintyper kan igjen ses i prøvene 287. IA og 287.1-1 (henholdsvis spor 3 og 4). Det er ingen tydelige proteinbånd forprøvene 287.1-2,287.1-3 eller 287.1-4 (henholdsvis spor 7-9), hvilket bekrefter resultatene i Fig. 3.
Eksempel 2
Innledende tester ble utført for å undersøke pH-stabiliteten etter behandling av kjøttmateriale.
En 5% løsning av kalsiumhydroksid ble justert til pH 12,0 ved bruk av saltsyre. 20 ml av denne løsningen ble deretter satt til 10 g kvernet, magert storfekjøtt og prøven ble blandet grundig. pH ble målt og deretter overvåket i ca. 85 minutter og i løpet av denne tiden forble pH 12,0.
På lignende måte ble 5% kalsiumhydroksid justert til pH 10,5 og 20 ml ble grundig blandet med 10 g kvernet, magert storfekjøtt. Start-pH var 5,4 og denne ble justert til pH 10,5 ved ytterligere tilsetting av kalsiumhydroksid. Deretter falt pH i løpet av de neste 25 minutter til pH 10,3.
Eksempel 3
To 10 g prøver av kvernet lårtunge ble plassert i forskjellige metallbegere og hver prøve ble tilsatt 1 ml av ubehandlet homogenat av 263K hamsterhjerne med skrapesyke (cHs). Deretter ble 20 ml kalsiumhydroksid med en pH på 12,0 satt til hvert beger, prøvene ble blandet grundig og pH i begge prøver ble målt til pH 12,0. Begrene ble deretter dekket med folie og inkubert ved 75°C i totalt 3 eller 6 timer (henholdsvis 2 eller 5 timer i vannbad og den siste timen i en ovn).
Fire 10 g prøver av kvernet lårtunge ble plassert i forskjellige metallbegere og hver prøve ble tilsatt 1 ml ubehandlet homogenat av 263K hamsterhjerne med skrapesyke (cHs). 18 ml kalsiumhydroksid med en pH på 10,5 ble deretter satt til hvert beger. Prøvene ble blandet grundig og pH ble justert til pH 10,5 (med kalsiumhydroksid) i alle prøver. Begrene ble deretter dekket med folie og inkubert ved 60°C i totalt 3 timer, ved 75°C i totalt 3 eller 6 timer, eller ved 90°C i 3 timer (først i et vannbad og deretter den siste timen i en ovn).
Alle prøvene ble samlet nøytralisert til en pH 6,5-7,5 og deretter justert til en sluttkonsentrasjon på 1% SDS. Prøvene ble blandet "end over end" i omtrent 10 minutter ved romtemperatur, kokt i 5 minutter og klaret ved hjelp av lavhastighetssentrifugering. Supernatantfraksjonen ble deretter samlet, oppdelt og lagret ved -70°C.
Detaljer for prøven er sammenfattet i Tabell 1.
Prøvene ble analysert ved hjelp av Western-blot.
Som en kontroll ble en 10 g prøve av kvernet lårtunge tilsatt 1 ml 263K cHs, blandet grundig og 20 ml 1% SDS ble tilsatt. Denne prøven ble blandet "end over end" i omtrent 10 minutter ved romtemperatur, kokt i 5 minutter og klaret ved hjelp av lavhastighetssentrifugering. Supernatantfraksjoner ble deretter samlet, oppdelt og lagret ved -70°C.
Figur 5 viser en titrering av det råmaterialet av 263K hamsterpåført skrapesyke som ble brukt i disse forsøkene (SPO 172200). Figuren viser det typiske fargingsmønsteret som ble observert for 263K ved bruk av mAb 3F4. Det modne PrP-proteinet i sin fulle lengde antas å ha et tilsynelatende molekylært forhold (Mr) på tilnærmet 33.000 dalton (33K, øverste band spor 2). Etter proteinase K-fordøying observeres vanligvis et dominerende bredt bånd i området for 28K, et lavere bredt bånd tilnærmet 23K, og et skarpt, men lavt bånd tilnærmet 19K (se spor 1). Legg merke til at også i råmaterialet av 263K Hs kan disse lavmolekylære typene påvises (spor 2), antageligvis på grunn av endogene proteaser som er til stede i råmaterialet, eller i løpet av prepareringen av råmaterialet.
Prosesserte prøver ble bare testet ved ren fortynning, enten uten fordøying eller etter fordøying med proteinase K i en totalkonsentrasjon på 10 (il/ml (basert på tidligere resultater). Resultatene er vist i figur 6 og 7.
Proteinase K-fordøyd 263K cHs-råmateriale SPO 172200 fungerte som en intern positiv kontroll (spor 1 i figur 6): 28K PrP-typene kan tydelig ses i prøv 309.IA (både med og uten proteinase K-fordøying; se spor 3 i figur 6 og 7). En rekke andre proteintyper observeres i den ufordøyde prøven. 33K PrP-typene er fremdeles synlige etter proteinase K-fordøying (spor 3, figur 6), noe som tyder på at proteinase K-fordøyingen var ufullstendig.
Ingen proteinbånd ble observert i noen av de kalsiumhydroksid- og varmebehandlede prøver (spor 5-10), verken med eller uten proteinase K-fordøying, selv ikke med lengre eksponeringer i Western-blots (opp til 30 minutter). Det vil si at alle kalsiumhydroksid- og varmebehandlende regimer som ble testet i dette forsøket fjernet PrP<Sc->proteinet. Siden ingen PrPSc-typer ble observert i disse prøvene kan det forstås som at de har et sluttpunkt, titreringspunkt, på 10<1>eller 1x10° arbitrære enheter pr ml. Legg merke til at det ikke kan estimeres noe titreringspunkt for 309.1 A prøven.
Nivået av PrP-proteiner som var til stede i de prosesserte prøvene ble ikke kvantifisert ved hjelp av titrering i Western-blot forsøket. Selv om ikke noe PrP kunne påvises i noen av de kalsiumhydroksid-og varmebehandlede prøver, kan det imidlertid settes et clearance-estimat i forhold til den estimerte 263K-tilsetning.
Logio, clearance-faktoren er forholdet mellom den totale mengde 263K tilsatt kjøttet som var utgangsmaterialet, til den totale mengde 263K som ble gjenvunnet i den siste behandlede prøven, uttrykt som en logio-verdi:
For alle behandlede prøver ble det oppnådd en clearance-faktor på > 3,4 logaritmer. Disse beregningene er sammenfattet i Tabell 2.
Konklusjon; 263K Hs ble satt til prøver av kvernet storfekjøtt og effekten av kalsiumhydroksid- og varmebehandling i samsvar med den foreliggende oppfinnelse ble målt med hensyn til eliminering av PrP<Sc->protein. De positive resultater som er rapportert heri, tyder på at metoden ifølge oppfinnelsen er en robust prosedyre for å fjerne eller inaktivere TDE i kjøttprøver som benyttes ved fremstilling av dyrefor.
Claims (12)
1.
Metode for fremstilling av et dyrefor omfattende trinnene: (i) tilsetning av alkali til dyremateriale for å opprettholde en pH på minst 8,5; (ii) oppvarming av materialet i trinn (i) til en temperatur i området 60°C til 99°C for å oppnå alkalisk hydrolyse av protein til stede i det animalske materialet; og (iii) dehydrering av materialet som ble fremstilt i trinn (ii);
hvor varigheten av trinn (i) og (ii) er 1-4 timer.
2.
Metode ifølge krav 1, hvor dyrematerialet i trinn (i) er TDE-kontaminert dyremateriale, hvorved dyreforet som oppnås ved nevnte metode er TDE-dekontaminert dyrefor.
3.
Metode for fremstilling av et TDE-dekontaminert dyremateriale som omfatter følgende trinn: (i) tilsetning av alkali til dyremateriale for å opprettholde en pH på minst 8,5; (ii) oppvarming av materialet i trinn (i) til en temperatur i området 60°C til 99°C, for å oppnå
alkalihydrolyse av protein til stede i dyrematerialet,
hvorved varigheten av trinn (i) og (ii) er 1-4 timer.
4.
Metode ifølge et hvilket som helst av krav 1,2 eller 3, hvor pH er minst 9,5.
5.
Metode ifølge et hvilket som helst av krav 1,2 eller 3, hvor pH er fra 10,5 til 13.
6.
Metode ifølge krav 5, hvor pH er fra 11,0 til 11,5.
7.
Metode ifølge et hvilket som helst av de foregående krav, hvor temperaturen er fra 60°C til 90°C.
8.
Metode ifølge krav 7, hvor temperaturen er 60°C.
9.
Metode ifølge krav 7, hvor temperaturen er fra 80°C til 85°C.
10.
Metode ifølge krav 9, hvor varigheten er 1 til 2 timer.
11.
Metode ifølge krav 8, hvor varigheten er 3 timer.
12.
Metode ifølge krav et hvilket som helst av de foregående krav, utført ved atmosfærisk trykk.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
AUPR1527A AUPR152700A0 (en) | 2000-11-15 | 2000-11-15 | Animal feed |
US28634101P | 2001-04-26 | 2001-04-26 | |
PCT/AU2001/001474 WO2002039826A1 (en) | 2000-11-15 | 2001-11-14 | DECONTAMINATION OF ANIMAL FEED CONTAINING PRION (eg. BSE agent). |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO20032159D0 NO20032159D0 (no) | 2003-05-13 |
NO20032159L NO20032159L (no) | 2003-07-02 |
NO335436B1 true NO335436B1 (no) | 2014-12-15 |
Family
ID=25646513
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO20032159A NO335436B1 (no) | 2000-11-15 | 2003-05-13 | Metode for fremstilling av et dyrefôr og metode for fremstilling av et TDE-dekontaminert dyremateriale. |
Country Status (18)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP1343387B1 (no) |
AT (1) | ATE308894T1 (no) |
AU (2) | AU1481902A (no) |
BR (1) | BR0115343A (no) |
CA (1) | CA2427895C (no) |
CY (1) | CY1105296T1 (no) |
CZ (1) | CZ303982B6 (no) |
DE (1) | DE60114876T2 (no) |
DK (1) | DK1343387T3 (no) |
ES (1) | ES2253437T3 (no) |
HU (1) | HUP0302644A3 (no) |
MX (1) | MXPA03004144A (no) |
NO (1) | NO335436B1 (no) |
NZ (1) | NZ526502A (no) |
PL (1) | PL201909B1 (no) |
RU (1) | RU2290828C2 (no) |
SI (1) | SI1343387T1 (no) |
WO (1) | WO2002039826A1 (no) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
HUP0302644A3 (en) * | 2000-11-15 | 2004-06-28 | Austech Sterile Resource Recov | Decontamination of animal feed containing prion (eg. bse agent) |
FR3003728B1 (fr) * | 2013-03-27 | 2016-01-22 | Commissariat Energie Atomique | Procede de decontamination de produits animaux |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4042718A (en) * | 1975-12-22 | 1977-08-16 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organization | Method for manufacturing ruminant feed supplements comprising a protein-aldehyde complex |
NZ182250A (en) * | 1976-03-08 | 1979-04-26 | Blue Wing Corp | Production of a nutrient composition containing gelled albumin |
US4225620A (en) * | 1977-08-26 | 1980-09-30 | Blue Wing Corporation | Method for feeding ruminant animals |
FR2586163B1 (fr) * | 1985-08-13 | 1990-05-11 | Guasco Roger | Retraitement des matieres organiques en vue de leur utilisation dans l'industrie agro-alimentaire et dans l'industrie des engrais amendements |
FI910722A (fi) * | 1991-02-14 | 1992-08-15 | Broilertalo Oy | Foerfarande foer hydrolysering av keratin. |
US5087474A (en) * | 1991-03-06 | 1992-02-11 | Harmony Products, Inc. | Feed supplement fats from abatoir sludge |
US5514388A (en) * | 1994-08-31 | 1996-05-07 | Rohwer; Gary L. | Encapsulated lipid-containing feed |
HUP0302644A3 (en) * | 2000-11-15 | 2004-06-28 | Austech Sterile Resource Recov | Decontamination of animal feed containing prion (eg. bse agent) |
-
2001
- 2001-11-14 HU HU0302644A patent/HUP0302644A3/hu unknown
- 2001-11-14 NZ NZ526502A patent/NZ526502A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-11-14 DK DK01983306T patent/DK1343387T3/da active
- 2001-11-14 AU AU1481902A patent/AU1481902A/xx active Pending
- 2001-11-14 SI SI200130483T patent/SI1343387T1/sl unknown
- 2001-11-14 CZ CZ20031326A patent/CZ303982B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-11-14 PL PL362176A patent/PL201909B1/pl unknown
- 2001-11-14 MX MXPA03004144A patent/MXPA03004144A/es active IP Right Grant
- 2001-11-14 RU RU2003117449/13A patent/RU2290828C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-11-14 BR BR0115343-9A patent/BR0115343A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-11-14 EP EP01983306A patent/EP1343387B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-14 AT AT01983306T patent/ATE308894T1/de active
- 2001-11-14 ES ES01983306T patent/ES2253437T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-14 DE DE60114876T patent/DE60114876T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-14 CA CA002427895A patent/CA2427895C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-11-14 AU AU2002214819A patent/AU2002214819B2/en not_active Ceased
- 2001-11-14 WO PCT/AU2001/001474 patent/WO2002039826A1/en active IP Right Grant
-
2003
- 2003-05-13 NO NO20032159A patent/NO335436B1/no not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-01-30 CY CY20061100118T patent/CY1105296T1/el unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ES2253437T3 (es) | 2006-06-01 |
AU1481902A (en) | 2002-05-27 |
MXPA03004144A (es) | 2004-12-02 |
CA2427895C (en) | 2006-01-31 |
NO20032159L (no) | 2003-07-02 |
SI1343387T1 (sl) | 2006-04-30 |
HUP0302644A2 (hu) | 2003-11-28 |
WO2002039826A1 (en) | 2002-05-23 |
CA2427895A1 (en) | 2002-05-23 |
RU2290828C2 (ru) | 2007-01-10 |
DE60114876T2 (de) | 2006-08-03 |
DK1343387T3 (da) | 2006-02-27 |
EP1343387A4 (en) | 2004-06-16 |
ATE308894T1 (de) | 2005-11-15 |
AU2002214819B2 (en) | 2005-09-01 |
NZ526502A (en) | 2004-07-30 |
BR0115343A (pt) | 2003-08-26 |
PL201909B1 (pl) | 2009-05-29 |
CY1105296T1 (el) | 2010-03-03 |
HUP0302644A3 (en) | 2004-06-28 |
EP1343387B1 (en) | 2005-11-09 |
CZ303982B6 (cs) | 2013-07-31 |
DE60114876D1 (de) | 2005-12-15 |
CZ20031326A3 (cs) | 2003-09-17 |
PL362176A1 (en) | 2004-10-18 |
NO20032159D0 (no) | 2003-05-13 |
EP1343387A1 (en) | 2003-09-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US8075939B2 (en) | Decontamination of animal feed containing prion (eg. BSE agent) | |
Ghazi et al. | The potential for the improvement of the nutritive value of soya-bean meal by different proteases in broiler chicks and broiler cockerels | |
EP1531682B1 (en) | Feed composition and method of feeding animals | |
Mioc et al. | Effect of olive cake on daily gain, carcass characteristics and chemical composition of lamb meat | |
Hicks et al. | Meat industry protein by-products: sources and characteristics | |
CA2107680A1 (en) | Method for the production of collagen; collagen produced through the method and use of collagen | |
DK163908B (da) | Fremgangsmaade til reduktion af fordoejeligheden i vommen af proteinet i et proteinholdigt, affedtet plantefroemateriale | |
KR19990029053A (ko) | 동물사료용 정제된 열응고 감자단백질 | |
Rocha et al. | The industrial process of solvent extraction of castor oil reduces the toxicity of the meal | |
NO335436B1 (no) | Metode for fremstilling av et dyrefôr og metode for fremstilling av et TDE-dekontaminert dyremateriale. | |
Hendriks et al. | Source of the variation in meat and bone meal nutritional quality | |
AU2002214819A1 (en) | Decontamination of animal feed containing prion (eg. BSE agent). | |
RU2368236C2 (ru) | Способ производства мясокостных гранул на корм птице и свиньям | |
El Boushy et al. | Poultry by-products | |
Fanimo et al. | Effects of Ripe Plantain Peel (Musa cv.) on Growth and Carcass Performance of Growing Rabbits | |
Mikasi | The evaluation of the nutritive value of Baobab seed cake and Macadamia oil cake as feed for ruminants | |
RU2125810C1 (ru) | Способ приготовления корма из отходов крупяного производства | |
RU2179398C1 (ru) | Способ производства корма для домашних животных на основе жидкого гидролизата из мясного сырья | |
Melkamu Bezabih Yitbarek et al. | Some selected animal wastes and by-products for poultry feed | |
WO2023233171A1 (en) | Method for removing gossypol from the cottonseed | |
RU2030881C1 (ru) | Состав для получения кормовой муки из сырья животного происхождения для сельскохозяйственных животных | |
Muzaffar et al. | Standardization and Quality Evaluation of Feather cum Skin Meal Prepared by Hydrothermal, Chemical and Biological Methods | |
Ružić-Muslić et al. | The effect of level of non-degradable protein in diet on fattening parameters and digestibility of nutrients in lambs | |
SK278026B6 (en) | Method of production of protein fodder concentrates | |
KR20030071741A (ko) | 음식물 쓰레기를 이용한 사료 및 그 제조 방법 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
FC2A | Withdrawal, rejection or dismissal of laid open patent application | ||
ERR | Erratum |
Free format text: I PATENTTIDENDE NR. 26/14 BLE PATENTSOKNAD NR. 20032159 FEILAKTIG KUNNGJORT HENLAGT. SOKNADEN ER FORTSATT UNDER BEHANDLING. |
|
MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |