NO332186B1

NO332186B1 - Metansulfonsyresalt av pyrazolpyrimidinforbindelse, krystall derav, fremgangsmate for fremstilling av det samme, farmasoytisk preparat samt anvendelse derav

Info

Publication number: NO332186B1
Application number: NO20056093A
Authority: NO
Inventors: Tetsuji Saitoh; Tomoyuki Hasegawa; Toshiaki Matsui; Hiroshi Araki; Tetsuo Obitsu; Masaki Okamoto; Yuichi Gemba; Yutaka Mikami
Original assignee: Ono Pharmaceutical Co
Priority date: 2003-06-25
Filing date: 2005-12-21
Publication date: 2012-07-23
Also published as: NZ544301A; TWI356058B; KR20060026060A; KR101082227B1; RU2006101986A; ATE478873T1; NO20056093L; CA2529561A1; MXPA05013917A; ES2349393T3; IL172697A; CN1842530A; WO2004113344A1; US7947697B1; CN100422186C; EP1637531A1; JPWO2004113344A1; ZA200510450B; CA2529561C; AU2004249629B2

Abstract

8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidinmetansulfonat, som er ny, og en fremgangsmåte for fremstilling av et mellomprodukt for forbindelsen. 8-(3-pentylamino)-2metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidinmetansulfonat er en forbindelse som har en svært utmerket termisk stabilitet. Den nye fremstillingsprosessen gjør det mulig å effektivt produsere en forbindelse representert ved den generelle formel (I): hvori Ar representerer en eventuelt substituert benzenring, osv.; og R1 representerer C1-8-alkyl, C2-8-alkenyl, C2-8-alkynyl osv., som er et mellomprodukt, i et høyt utbytte.

Description

Den foreliggende oppfinnelse vedrører 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidinmetansulfonat, en krystall derav, og en fremgangsmåte for fremstilling derav.

Oppfinnelsen vedrører også et farmasøytisk preparat, en medisin, en CRF antagonist, en injeksjon samt anvendelse av forbindelsen ifølge oppfinnelsen.

Kortikotropin-frigivende faktor ("Corticotropin Releasing Factor" CRF) er et peptid som omfatter 41 aminosyrerester og er isolert fra ovin hypotalamus i 1981. Det ble foreslått at CRF ble frigitt fra hypotalamus og kontrollerte en sekresjon av

adrenokortikotropisk hormon (ACTH) fra hypofysen [ Science, 218 377-379(1982)].

ACTH, som frigis ved en stimulering av CRF, stimulerer en sekresjon av kortisol fra adrenal korteks, og vedrører en systemisk virkning for reproduksjon, vekst, gastrointestinal funksjon, inflammasjon, immunsystem, nervesystem osv. Følgelig mener man at CRF spiller en rolle som en regulator av disse funksjoner. På bakgrunn av dette, har en sammenheng mellom CRF og en sentralnervesystemsykdom eller en nevropsykiatrisk lidelse fått mye oppmerksomhet.

I WO 02/053565, er en forbindelse med formel (A)

hvori XA og Y<A>hver uavhengig av hverandre er karbon eller nitrogen og hvor begge ikke samtidig er nitrogener; WA er karbon eller nitrogen; U<A>og ZA er hver, uavhengig av hverandre, CR2^ NR<13A>, nitrogen, oksygen, svovel, C=0 eller C=S; R<2A>er (i) hydrogen, (ii) C1-8-alkyl, (iii) C2-8-alkenyl, (iv) C2-8-alkynyl, (v) halogenatom, (vi) CF3, (vii) cyano, (viii) nitro, (ix) NR9AR1<0A>, (x) OR<11A>, (xi) SH, (xii) S(0)nAR<12A>, (xiii) COR<11A>, (xiv) COOR1<1A>, (xv) CONR9AR<10A>, (xvi) C3-10 mono-eller bikarbocyklisk ring, (xvii) 3- til 10-leddet mono- eller bi-heterocyklisk ring

inneholdende 1-4 nitrogener, 1-2 oksygener og/eller 1-2 svovelatomer eller (xviii) substituert C1-4-alkyl; er en enkeltbinding eller en dobbeltbinding;

er C4-6 karbocyklisk ring eller 4-6 leddet

heterocyklisk ring inneholdende minst ett nitrogen, oksygen og svovel og hvor disse ringer er usubstituert eller substituert med 1-3 substituenter valgt fra C1-4-alkyl, C1-4 alkoksy, halogenatom og CF3;

R<1A>er (i) usubstituert eller substituert C1-8-alkyl, (ii) usubstituert eller substituert C2-8-alkenyl, (iii) usubstituert eller substituert C2-8-alkynyl, (iv) NR4AR5<A>, (v) OR<6A>, (vi) SH, (vii) S(0)nR<7A>, (viii) COR6A, (ix) COOR6A, (x) CONR<4A>R<5A>, (xi)NR8<A>COR6a<A>, (xii) NR<8A>COOR<6A>, (xiii) NR<8A>CONR<4A>R<5A>, (xiv) usubstituert eller substituert C3-15 mono- eller bi-karbocyklisk ring, (xv) usubstituert eller substituert 3-15 leddet mono- eller bi-heterocyklisk ring inneholdende 1-4 nitrogener, 1-2 oksygener og/eller 1-2 svovelatomer;

beskrevet som CRF reseptorantagonist.

Dessuten, i den ovennevnte beskrivelse, ble 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidinhydroklorid beskrevet.

På en annen side, som et mellomprodukt av en forbindelse med formel (A), ble en forbindelse med formel (B)

hvori R<2>^<3>er (i) hydrogen, (ii) C1-8-alkyl, (iii) C2-8-alkenyl, (iv) C2-8-alkynyl, (v) halogenatom, (vi) trifluormetyl, (vii) cyano, (viii) nitro, (ix) NR9AR10<A>, (x) OR<11A>, (xi) SH, (xii) S(0)nR<12A>, (xiii) COR<11A>, (xiv) COOR<11A>, (xv) CONR<9A>R<10A>, (xvi) C3-10 mono- eller bi-karbocyklisk ring, (xvii) 3- til 10-leddet mono- eller bi-heterocyklisk ring inneholdende 1-4 nitrogener, 1-2 oksygener og/eller 1-2 svovelatomer eller

(xviii) substituert C1-4-alkyl, med den betingelse at R2^3 ikke er OH, cyano, =N-OR<11A>eller en gruppe inneholdende OH, cyano eller =N-OR<11A>,

R3A a er (i) substituert C5-10 mono- eller bi-karbocyklisk ring, eller (ii) substituert 5-10 leddet mono- eller bi-heterocyklisk ring inneholdende 1-4 nitrogener, 1-2 oksygener og/eller 1-2 svovelatomer, med den betingelse at disse ovennevnte grupper ikke er en gruppe OH, cyano, =N-OR<11A>eller en gruppe inneholdende OH, cyano eller =N-OR<11A>;

beskrevet.

I forbindelse med formel (B), ble 1-cyano-2-(2-metyl-4-metoksyfenyl)propan-2-on (en forbindelse B-1), og 1-cyano-1-(2-klor-4-metoksyfenyl)propan-2-on (en forbindelse B-2) beskrevet som Referanseeksempel, og det ble vist at disse forbindelser kan fremstilles ved hjelp av en fremgangsmåte som beskrevet i reaksjonsskjema A og B.

[Prosess a] gjennomføres ved en reaksjon av 1,2-dimetyl-4-metoksybenzen med N-bromsuccinimid og 2, 2-azobisisobutylonitril, og gjennomføres deretter ved en reaksjon mellom en oppnådd forbindelse og natriumcyanid.

[Prosess b] gjennomføres ved en reaksjon av en forbindelse fremstilt i [prosess a] og metallisk natrium, i etylacetat.

[Prosess c] gjennomføres ved en reaksjon av 3-klor-4-bromanisol og triisopropyl-borat, i tetrahydrofuran, i nærvær av n-butyllitium.

[Prosess d] gjennomføres ved en reaksjon av en forbindelse fremstilt i [prosess c] og 4-jod-5-metylisoksazol, i blanding av dimetoksyetan/vann, i nærvær av natriumkarbonat og tetrakis(trifenylfosfin)palladium.

[Prosess e] gjennomføres ved en reaksjon av en forbindelse fremstilt i [prosess d] og natriummetoksyd, i metanol.

I beskrivelsen i WO 02/053565 er, som en konkret forbindelse, 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-ajpyrimidinhydroklorid beskrevet. En termisk stabilitet for denne forbindelse var dårlig, og når det gjelder denne forbindelsen separerte den og førte i større grad til unngåelsen av saltsyren over en viss temperatur. Dessuten var krystalliniteten til denne forbindelsen dårlig, og utbyttet av krystallen var svært lavt.

Som beskrevet over var det vanskelig å tilveiebringe stabilitet for hydrokloridforbindelsen som har en karakter av dårlig termisk stabilitet og et lavt utbytte av krystall. Dessuten kan det oppstå et problem dersom en varmeprosess er nød- vendig ved en framstillingsprosess av legemiddelproduktene, slik at hydrokloridforbindelsen var uønsket som en farmasøytisk legemiddelsubstans.

På den annen side, i en fremgangsmåte for fremstilling av mellomproduktet med formel (B) som beskrevet i den ovennevnte søknad, var det til reaksjonen [prosess b] hvor det anvendes metallisk natrium i reaksjonsskjema A nødvendig med spesi-alisert utstyr for å gjennomføre denne under en sterk alkalisk betingelse, og den var således ikke passende for en industriell produksjon. I tillegg var det totale utbyttet av forbindelsen B-1 i de to prosesser ved [prosess a] og [prosess b] lavt, spesielt 59%.

I reaksjonen i reaksjonsskjema B var 4-jod-5-metylisoksazol anvendt i [prosess d] ikke passende for en industriell produksjon. Dette fordi en tilveiebringelse av metylisoksazol som er et material av 4-jod-5-metylisoksazol var vanskelig. Dessuten behøvde man tre prosesser for å fremstille forbindelsen B-2, og et totalt utbytte var lavt, særlig 27%.

Som beskrevet over utviste fremgangsmåten for fremstilling som er beskrevet i det ovennevnte dokument, enkelte problemer som f.eks. en rekke prosesser, et lavt utbytte av en tilsiktet forbindelse og dårlig industriell produktivitet.

De foreliggende oppfinnere har utført omfattende studier for å løse de ovennevnte problemer og har som et resultat funnet at formålet med oppfinnelsen oppnås ved en ny forbindelse som 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidinmetansulfonat og en ny krystall derav.

I tillegg har de funnet en fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse ifølge oppfinnelsen.

Fremgangsmåten omfatter ett trinn og er effektiv, og det er mulig å oppnå den tilsiktede forbindelsen i et høyt utbytte.

Kort beskrivelse av tegningene

Figur 1 viser et diagram for differensiell scanning kalorimetri av 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-ajpyrimidinmetansulfonat. Figur 2 viser et diagram for differensiell scanning kalorimetri av 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidinhydroklorid. Figur 3 viser et diagram for et røntgen-pulverdiffraksjonsspekter av en krystall av 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta-[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidinmetansulfonat. Figur 4 viser et diagram over et infrarød resonans (IR) spektrum av en krystall av 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]-pyrazolo[1,5-a]pyrimidinmetansulfonat. Figur 5 viser røntgenstrukturanalysedata for en enkelt krystall av forbindelsen 1. Figur 6 viser røntgenstrukturanalysedata for en enkelt krystall av forbindelsen 1.

Oppsummering av oppfinnelsen

Den foreliggende oppfinnelse vedrører

1. 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidinmetansulfonat, 2. en krystall av 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidinmetansulfonat, 3. en krystall i henhold til ovennevnte 2, som har et røntgen-pulver-diffraksjonsspekter som vist i figur 3, 4. en krystall i henhold til ovennevnte 2, som har diffraksjonsvinkel 29 ved 8,96, 12,70, 13,69, 14,98, 15,74, 16,38, 17,63, 18,98, 19,71, 20,49, 21,37, 22,26, 22,88, 23,76, 24,70, 25,79 og 26,57 på røntgen-pulverdiffraksjons-spektrum, 5. en krystall i henhold til ovennevnte 2, som har et infrarødt resonans-spektrum som vist i figur 4, 6. en krystall i henhold til ovennevnte 2, som har absorpsjon for infrarødt resonans spektrum ved 1652,1595, 1549, 1220,1168, 1141, 1115,1034, 790, 766, 548, 533 og 522 cm<1>, 7. en fremgangsmåte for fremstilling av 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidinmetan-sulfonat som omfatter å reagere 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidin med

metansulfonsyre,

8. et farmasøytisk preparat som omfatter forbindelsen beskrevet i det ovennevnte 1 som en aktiv bestanddel, 9. et farmasøytisk preparat som omfatter 1% eller mere av en krystall, som en aktiv bestanddel som beskrevet i hvilket som helst av ovennevnte 2-6, 10. et farmasøytisk preparat som angitt i ovennevnte 8, som er en CRF antagonist, 11. et farmasøytisk preparat som angitt i ovennevnte 8, som er et middel for å forebygge og/eller behandle en CRF mediert sykdom, 12. et farmasøytisk preparat som angitt i ovennevnte 11, hvori den CRF medierte sykdommen er en nevropsykiatrisk lidelse eller en lidelse i

fordøyelsessystemet,

13. et farmasøytisk preparat som angitt i ovennevnte 12, hvori den nevropsykiatriske lidelsen er en sinnsstemningslidelse, en angstlidelse, en stressrelatert lidelse, en spiseforstyrrelse, et symptom på bruk av psykotomimetikum og avhengighet, en organisk mental lidelse, schizofreni

eller en hyperaktivitetslidelse med oppmerksomhetsmangel,

14. et farmasøytisk preparat i henhold til ovennevnte 12, hvori fordøyelses-systemsykdommen er irritabel tarm eller en stressindusert gastrointestinal

forstyrrelse,

15. et farmasøytisk preparat i henhold til ovennevnte 13, hvori sinnsstemningslidelsen er depresjon, enkeltepisodedepresjon, tilbakevendende depresjon, post-partum depresjon, barnemishandlingsindusert depresjon, bipolar

affektiv lidelse eller premenstruell dysfonisk lidelse,

16. en medisin som omfatter 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksy-fenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidinmetansulfonat og ett eller flere medikamenter valgt fra tricykliske antidepresjonsmidler, tetracykliske antidepresjonsmidler, monoaminoksidaseinhibitorer, serotonin-noradrenalin-reopptakinhibitorer, selektive serotonin-reopptakinhibitorer, serotonin-reopptakinhibitorer, psykoanaleptika, antiangstmidler, antipsykotiske midler, mitokondrien benzodiazepin-reseptorligander, NK1 antagonister, gastrointestinale pro-motilitetmidler, 5-HT3antagonister, 5-HT4agonister, anticholinerge midler, antidiarémidler,

modulatorer av "lapactic" og autonom nerve,

17. en CRF antagonist omfattende 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidin-metansulfonat som en aktiv bestanddel, 18. en injeksjon omfattende 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksy-fenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidinmetansulfonat, 19. injeksjonen i henhold til ovennevnte 18 som omfatter et solubiliserende middel og/eller et pH regulerende middel, 20. anvendelse av 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidinmetansulfonat for fremstilling av et farmasøytisk preparat for forebygging og/eller behandling av sykdommer forbundet med kortikotropin-frigivende faktor (CRF).

8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7- dihydro-5H-cyklopenta[d]-pyrazolo[1,5-a]pyrimidinmetan-sulfonat (heretter betegnet forbindelse (1)) ifølge oppfinnelsen er en ny forbindelse.

Enda mere overraskende var forbindelsen (1) en overlegen forbindelse med hensyn til termisk stabilitet som sett ut fra DSC-diagrammet som vist i Fig. 1 har en absorpsjonstopp ved 196,1°C.

På den annen side er DSC-diagrammet av 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H- cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidin-hydroklorid som beskrevet i WO 02/053565, vist i Fig. 2. En stabil DSC-kurve som

Fig. 1 fremkom ikke i Fig. 2, og kurven forandret seg signifikant en gang nær 40°C, og forandret seg deretter gradvis etter over 50°C.

Ut fra disse resultater ble det bestemt at hydrokloridforbindelsen var en ustabil forbindelse overfor varme, og at metansulfonatforbindelsen ifølge oppfinnelsen var en overlegen forbindelse med hensyn til termisk stabilitet. Det var svært over raskende at forskjellen i salt innvirket i så stor grad på varmestabiliteten, og dette kunne ikke lett forutses.

I tillegg var den foreliggende forbindelse svært overlegen med hensyn til solubilitet og arrangement. Et krystallutbytte av den foreliggende oppfinnelse var også svært høyt og det ble oppnådd et utbytte så høyt som 98% i eksempelet i den etter-følgende beskrivelse og den foreliggende forbindelse var passende for industriell produksjon som en farmasøytisk legemiddelsubstans.

Den foreliggende forbindelse (1) har en overlegen egenskap med hensyn til stabilitet, den er passende for industriell produksjon og er overlegen hva angår dannelse av legemiddelprodukt.

Toksisitet

Toksisiteten til forbindelsene (1) er svært lav og forbindelsene kan derfor betraktes som sikre for farmasøytisk bruk.

Industriell anvendbarhet

Anvendelse for farmasøytika

Forbindelsen (1) er anvendbar for å binde en CRF-reseptor og viser en CRF-reseptor antagonistisk aktivitet, for forebygging og/eller behandling av sykdommer som er assosiert med CRF, f.eks. nevropsykiatriske lidelser, sykdommer i fordøyel-sessystemet, respiratoriske sykdommer, endokrine sykdommer, metabolske sykdommer, sykdommer i sirkulasjonssystemet, hudsykdommer, urogenitale sykdommer, øyesykdommer, sykdommer i muskel- og skjelettsystemet.

Konkret er det som nevropsykiatriske lidelser f.eks. angitt sinnsstemningslidelser, slik som depresjon, enkeltepisodedepresjon, tilbakevendende depresjon, post-partum depresjon, depresjon indusert ved barnemishandling, bipolare lidelser, premenstruell dysfonisk lidelse, angstlidelser slik som angstrelaterte lidelser, panikklidelser, obsessiv-kompulsiv lidelse, fobilidelser, f.eks. akrofobier, klaustrofobier, agorafobier, sosiale fobier; stressrelaterte lidelser, som "post-traumatic stress disorder" (PTSD), stressindusert immundepresjon, stressindusert hodepine, stressindusert feber, stressindusert smerte, operasjonsindusert stress, operasjons-indusert gastrointestinal lidelse, irritabel tarm; spiseforstyrrelser som anoreksia nervosa, ukontrollert spising, nervøs emese, symptomer ved bruk og avhengighet av psykomimetisk legemiddel slik som abstinenssymptom, alkoholisme, legemiddelintoksikasjon, legemiddelavhengighet; organiske mentale lidelser slik som demens av Alzheimer type, multippel infarkt demens; schizofreni, hyperaktivitetslidelse med oppmerksomhetsmangel, nevrodegenerativ sykdom, f.eks. Alzheimers sykdom, Parkinsons sykdom, Huntingtons sykdom, amyotrofisk lateralsklerose; smerte, konvulsive lidelser slik som konvulsjoner, muskelspasme; anfallslidelser slik som epilepsi, attakk, migrene; eller søvnlidelser, slik som ikke-organisk søvnlidelse, fibromyalgiindusert søvnlidelse.

Som fordøyelsessystemsykdommer er f.eks. peptisk ulcus, inflammatorisk tarmsykdom, f.eks. ulcerøs kolitt, Crohns sykdom, irritabel tarm, stressindusert gastrointestinal forstyrrelse, diaré og konstipasjon angitt.

Som respiratoriske sykdommer, er f.eks. astma, bronkieinfeksjon, kronisk obstruktiv pulmonal sykdom og allergisk rhinitt angitt.

Som endokrine sykdommer som f.eks. thyroidal dysfunksjons syndrom, Cushings sykdom og syndrom med upassende antidiuretisk hormonsekresjon angitt.

Som metabolske sykdommer er f.eks. obesitas og hypoglykemi angitt.

Som sirkulasjonssystemsykdommer er f.eks. hypertensjon, iskemisk hjertesykdom, takykardi, kongestiv hjertesvikt og cerebrovaskulær sykdom angitt.

Som hudsykdommer er f.eks. atopisk dermatitt, allergisk kontaktdermatitt og psoriasis angitt.

Som urogenitalsykdommer er f.eks. urinveisforstyrrelse, pollakiuri og inkontinens angitt.

Som øyesykdommer er f.eks. uveitt angitt.

Som muskel-skjelett-systemsykdommer er f.eks. kronisk revmatoid artritt, osteoartritt og osteoporose angitt.

Et kombinasjonsmiddel oppnådd ved å kombinere forbindelsen (1) med andre medikamenter kan administreres for å oppnå de følgende formål: 1) for å supplere og/eller øke den forebyggende og/eller terapeutiske effekten av den foreliggende forbindelse; 2) for å forbedre kinetikken og/eller absorpsjonen og redusere dosen av den foreliggende forbindelse; og/eller

3) for å eliminere bivirkningene av den foreliggende forbindelse.

En kombinasjon av forbindelsen (1) og andre medikamenter kan administreres i form av formuleringene som har disse komponentene innlemmet i ett preparat, eller kan administreres i separate preparater. I det tilfellet hvor disse medikamenter administreres i separate preparater, kan de administreres samtidig eller på forskjellige tidspunkter. I det sistnevnte tilfellet kan forbindelsen (1) administreres før de andre medikamentene. Alternativt kan de andre medikamentene administreres før forbindelsen (1). Fremgangsmåten for administreringen av disse medikamentene er like eller forskjellige.

Sykdommene som den forebyggende og/eller terapeutiske effekten av de ovennevnte kombinasjonspreparater virker på er ikke spesielt begrenset men kan være dem for hvilke den forebyggende og/eller terapeutiske effekten av forbindelse (1) suppleres og/eller økes.

Eksempler på andre medikamenter for å supplere og/eller øke den forebyggende og/eller terapeutiske effekten av forbindelsen (1) på sinnstemningslidelser inkluderer antidepresiva, slik som tricykliske antidepressiva, tetracykliske antidepressiva, monoaminoksidase (MAO) inhibitor, serotonin-noradrenalin-reopptak-inhibitor (SSRI), serotonin-reopptak-inhibitor, psykoanaleptika, antiangstmidler, antipsykotisk middel, mitokondrien benzodiazepinreseptor (MBR) ligand, NK1 antagonist og lignende.

Eksempler på andre medikamenter for å supplere og/eller øke den forebyggende og/eller terapeutiske effekten av forbindelsen (1) på angstlidelser inkluderer antiangstmiddel som benzodiazepin anksiolytikum, tienodiazepin anksiolytikum, ikke-benzodiazepin anksiolytikum, MBR ligand og lignende.

Eksempler på andre medikamenter for å supplere og/eller øke den forebyggende og/eller terapeutiske effekten av forbindelsen (1) på irritabel tarm inkluderer gastrointestinal pro-mobilitetsregulator, 5-HT3antagonist, 5-HT4agonist, anti-cholinergisk middel, antidiarélegemiddel, "lapactic", autonom nervemodulator, antidepresjonsmiddel, antiangstmiddel og lignende.

Som antidepresjonsmiddel er f.eks. tricyklisk antidepresjonsmiddel slik som amitriptylinhydroklorid, imipraminhydroklorid, klomipraminhydroklorid, dosulepin-hydroklorid, nortriptylinhydroklorid, lofepraminhydroklorid, trimipraminmaleat, amoksapin; tetracyklisk antidepresjonsmiddel som maprotilinhydroklorid, mianserinhydroklorid, setiptilinmaleat; MAO inhibitor, slik som safrazinhydroklorid; SNRI slik som milnacipranhydroklorid, venlafaxinhydroklorid; SSRI slik som fluvoksaminmaleat, paroksetinhydroklorid, fluoksetinhydroklorid, citalopram-hydroklorid; serotonin-reopptak-inhibitor slik som trazodonhydroklorid, angitt.

Som antiangstmiddel er f.eks. benzodiazepinanksiolytikum slik alprazolam, oksazepam, oksazolam, kloksazolam, klorazepatdikalium, klordiazepoksid, diazepam, tofisopam, triazolam, prazepam, fludiazepam, flutazolam, flutoprazepam, bromazepam, meksazolam, medazepam, etylloflazepat, lorazepam; tienodiazepinanksiolytikum, slik som etizolam, klotiazepam; ikke-benzodiazepinanaksiolytikum, slik som tandospironcitrat og hydroksylzin-hydroklorid, angitt.

Som psykoanaleptikum er f.eks. metylfenidathydroklorid og pemolin angitt.

Som antipsykotisk middel er f.eks. sulpirid, trazodonhydroklorid, serotonin-dopamin antagonist slik som risperidon, perospironhydrokloridhydrat, quetiapinfumarat og olanzapin angitt.

Som gastrointestinal regulator er f.eks. trimebutinmaleat og polykarbofil-kalsium, angitt.

Som 5-HT3antagonist er f.eks. alsetron angitt.

Som 5-HT4agonist er f.eks. tegaserod, cisaprid og mosapridcitrat, angitt.

Vektforholdet mellom forbindelsen (1) og de andre medikamenter er ikke spesifikt begrenset.

En hvilken som helst kombinasjon av to eller flere andre medikamenter kan administreres.

Som en preparatform er f.eks. faste preparater for intern bruk og flytende preparater for intern bruk for oral administrering, injeksjoner, eksterne preparater og stikkpiller for parenteral administrering angitt.

Eksempler på de faste preparatene for intern bruk for oral administrering inkluderer

tabletter, piller, kapsler, pulvere, granuler og lignende. Kapslene inkluderer harde kapsler og myke kapsler.

Et slikt fast preparat for intern bruk fremstilles ved en formuleringsmetode som vanlig benyttes ved å anvende en aktiv substans uten modifikasjon, eller en blanding av en aktiv substans med en eksipiens (laktose, mannitol, glukose, mikro-krystallinsk cellulose, stivelse osv.) et bindemiddel (hydroksypropylcellulose, polyvinylpyrrolidon, magnesiummetasilikataluminiat osv.), et desintegrerende middel (kalsiumcelluloseglykolat osv.), et smøremiddel (magnesiumstearat osv.) en stabilisator (f.eks. antioksidasjonsmiddel som sulfittsalt, natriumpyrosulfitt, askorbinsyre), et solubiliserende middel (glutaminsyre, asparaginsyre, polysorbatserier som Polysorbate 20, Polysorbate 60, Polysorbate 65, Polysorbate 80; makrogolserier som Macrogol 200, Macrogol 400, Macrogol 1000, Macrogol 1500, Macrogol 4000, Macrogol 6000, Macrogol 20000; etanol, glyserin, karboksymetylcellulose osv.). Om nødvendig kan det være belagt med et belegningmiddel (sukrose, gelatin, hydroksypropylcellulose, hydroksypropylmetylcelluloseftalat osv.). Det kan være belagt med to eller flere lag. Dessuten er kapsler dannet av et absorberbart material slik som gelatin innlemmet i rammen derav.

De flytende preparater for intern bruk for oral administrering inkluderer farma-søytisk aksepterbare vandige oppløsninger, suspensjoner, emulsjoner, siruper, eliksirer og lignende. Et slikt flytende preparat fremstilles ved å oppløse, suspendere eller emulgere en aktiv substans i et vanlig anvendt fortynningsmiddel (renset vann, etanol eller en blanding derav osv.). Slike flytende former kan videre også omfatte enkelte tilsetningsstoffer som fuktemidler, suspensjonsmidler, emulgeringsmidler, søtningsstoffer, smaksstoffer, aroma, konserveringsmidler, buffere og lignende.

Injeksjonene for parenteral administrering inkluderer oppløsninger, suspensjoner, emulsjoner og faste injeksjoner som skal oppløses eller suspenderes før bruk. En slik injeksjon anvendes ved å oppløse, suspendere eller emulgere en aktiv substans i et løsningsmiddel. Løsningsmiddelet inkluderer f.eks. destillert vann for injeksjon, fysiologisk saltvann, vegetabilske oljer, alkoholer slik som propylen-glykol, polyetylenglykol og etanol, og blandinger derav. Injeksjonen kan videre inneholde en stabilisator (f.eks antioksidasjonsmiddel slik som sulfittsalt, natriumpyrosulfitt, askorbinsyre), et solubiliserende middel (f.eks. glutaminsyre, asparaginsyre, polysorbatserier som Polysorbate 20, Polysorbate 60, Polysorbate 65, Polysorbate 80; makrogolserier som Macrogol 200, Macrogol 400, Macrogol 1000, Macrogol 1500, Macrogol 4000, Macrogol 6000, Macrogol 20000, etanol, glyserin, karboksymetylcellulose osv.), pH modulator (f.eks. saltsyre, sitronsyre, natrium-citrat, eddiksyre, vinsyre, ravsyre, arginin, monoetanolamin, dietanolamin, trietanolamin, meglumin, natriumhydroksyd, kaliumhydroksyd, natriumbikarbonat, natriumkarbonat), suspensjonsmidler, emulgeringsmidler, beroligende middel (f.eks. klorbutanol, kreatinin, inositol), buffermiddel (f.eks. fosforsyre, trinatrium-fosfat, natriumhydrogenfosfat, dikaliumfosfat, kaliumdihydrogenfosfat, natrium-dihydrogenfosfat), konserveringsmiddel (f.eks. metylparahydroksybenzoat, etylparahydroksybenzoat, propylparahydroksybenzoat, butylparahydroksybenzoat) og lignende. En slik injeksjon kan fremstilles ved sterilisering i det siste trinnet eller ved å anvende en aseptisk prosess. Det er alternativt også mulig at et aseptisk fast produkt slik som et frysetørket produkt fremstilles og steriliseres eller oppløses i aseptisk destillert vann for injeksjon eller et annet løsningsmiddel, slik som fysiologisk saltvann, 5% glukoseoppløsning før bruk.

De eksterne preparater for parenteral administrering inkluderer salver, geler, kremer, grøtomslag, plastere, linimenter, forstøvede midler, inhalasjoner, sprayer, øyedråper og nesedråper og lignende. Et slikt preparat inneholder en aktiv substans og fremstilles ved en vel kjent metode eller en vanlig anvendt formulering.

Andre sammensetninger for parenteral administrering inkluderer stikkpiller og pessarier for vaginal administrering som inneholder en eller flere aktive substanser, og som fremstilles i overensstemmelse med vanlige formuleringer.

Forbindelsen (1) ifølge oppfinnelsen er en ny krystall som er kjennetegnet ved de etterfølgende data.

Med andre ord er krystallen kjennetegnet ved røntgen-pulverdiffraksjonsspektrum, som ble oppnådd ved bestråling av Cu-Ka, som vist i Fig. 3; og dataene for en diffraksjonsvinkel 2 9 og en relativ intensitet som vist i den etterfølgende Tabell 1. Dessuten er krystallen kjennetegnet ved IR absorpsjonsspektrum ved 1652, 1595, 1549, 1220, 1168, 1141, 1115, 1034, 790, 766, 548, 533, 522 cm-<1>, og IR spektrum målt ved ATR metoden er vist i Fig. 4.

Videre er krystallen også kjennetegnet ved en absorpsjonstopp ved 196,1°C, og DSC diagrammet er vist i Fig. 1.

Krystallen av forbindelsen (1) er kjennetegnet ved fysisk-kjemiske egenskaper som er beskrevet i den foreliggende beskrivelse, men hvert analysedata bør ikke forstås eksakt, fordi det forandrer seg noe ut fra karakteren.

Ved gjenkjennelsen av identiteten til krystallen ut fra karakteren på røntgen-pulverdiffraksjonsspekteret, er f.eks. diffraksjonsvinkelen (26) og de totale mønstere viktig, og den relative intensiteten kan forandre seg noe avhengig av krystallens vekstretning, partikkelstørrelse og målebetingelser. I IR spektrum, er også de totale mønstere viktig for å gjenkjenne krystallens identitet, og de kan forandre seg noe avhengig av målebetingelsen. Ved data for DSC, er det totale mønsteret viktig for å gjenkjenne krystallidentitet og det kan forandre seg noe avhengig av målebetingelsen.

De krystaller som har analoge dataer og mønstere i røntgendiffraksjonsspektret, IR spektret og DSC for krystallen av forbindelsen (1) er derfor inkludert i krystallen av forbindelsen (1) ifølge oppfinnelsen.

Som krystallen av forbindelsen (1) ifølge oppfinnelsen, er krystalltypen med røntgen-pulverdiffraksjonsspektrum som vist i Fig. 3 og/eller IR spektrum som vist i

Fig. 4 foretrukket, men den kan være en blandingsforbindelse med ikke-krystallinsk material av forbindelse (1).

Krystallen av forbindelsen (1) ifølge oppfinnelsen er stabil overfor fuktighet og lys, foruten varme.

Overlegne salter for termisk stabilitet av 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidin kan, foruten metansulfonat, være tosylat, benzensulfonat og kamfersulfonat (D, L eller DL).

Fremstilling av forbindelsen ifølge oppfinnelsen:

Den foreliggende forbindelse (1) fremstilles ifølge oppfinnelsen ved å reagere 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]-pyrazolo[1,5-a]pyrimidin og metansulfonsyre.

For detaljer oppløses 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidin i et organisk løsningsmiddel (f.eks. etylacetat, metanol, tetrahydrofuran, 1,2-dimetoksyetan, isopropylalkohol, acetonitril), og deretter ble metansulfonsyren tilsatt ved 20-60°C til blandingen. Den presipiterte krystallen ble samlet ved filtrering og tørket til å gi den tilsiktede forbindelsen.

På den annen side kan 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidin som et material fremstilles ved en metode som beskrevet i Reaksjonsskjema 2.

Prosess [2] gjennomføres i et organisk løsningsmiddel, (f.eks. toluen, metanol, isopropylalkohol, etylacetat, isopropylacetat, tetrahydrofuran, acetonitril, dimetyl formamid, dimetylsulfoksyd), i nærvær av en syre (f.eks. eddiksyre, propionsyre, p-toluensulfonsyre, metansulfonsyre) ved anvendelse av hydrazin, hydrazinmono-hydrat, eller 60 til 80 vekt% vandig oppløsning av hydrazin eller hydrazinmono-hydrat ved 10 til 60°C eller under oppvarming med tilbakeløp.

Prosess [3] gjennomføres ved å anvende en syre (f.eks. eddiksyre, svovelsyre, metansulfonsyre) i et løsningsmiddel ved 50-100°C eller under oppvarming med tilbakeløp, eller i et organisk løsningsmiddel (f.eks. metanol, etanol, toluen, dimetylformamid, 1-propanol, 2-propanol, acetonitril) i nærvær av en syre (f.eks. eddiksyre, svovelsyre, metansulfonsyre, tosylsyre) ved 50-100°C eller under oppvarming med tilbakeløp.

I den ovennevnte reaksjon ved å anvende et organisk løsningsmiddel var den anvendte mengden av en syre mindre enn den mengden som anvendes av en syre som et løsningsmiddel. Det er derfor lett å fjerne den og det er mulig å gjennomføre reaksjonen sikkert.

Prosess [4] gjennomføres i et organisk løsningsmiddel (f.eks. toluen, 1,2-dimetoksyetan, acetonitril, tetrahydrofuran), i nærvær av en base (f.eks. pyridin, trietylamin, dimetylanilin, dimetylaminopyridin, diisopropyletylamin, 2,6-lutidin, 2-pikolin, N-metylmorfolin, N-etylmorfolin, tri-n-propylamin, tri-n-butylamin) ved å anvende fosforylklorid ved 70 til 120°C.

Prosess [5] gjennomføres i et organisk løsningsmiddel (f.eks. toluen, xylen, 1,2-dimetoksyetan, dimetylformamid, dimetylamin, dimetylsulfoksyd, 2-propanol, acetonitril) eller uten et løsningsmiddel, i nærvær eller fravær av en base (f.eks. trietylamin, trimetylamin, diisopropyletylamin, N- metylmorfolin, N-etylmorfolin, tri-n-propylamin, tri-n-butylamin) ved 80 til 150°C.

I tilfellet av anvendelse av metansulfonsyre ifølge oppfinnelsen, kan den anvendes eller den kan være oppløst i et organisk løsningsmiddel (f.eks. etylacetat, metanol, tetrahydrofuran, 1,2-dimetoksyetan, isopropylalkohol, acetonitril, n-heptan)og dryppes, for å sørge for sikkerheten. Metansulfonsyre er svært etsende og krever oppmerksomhet ved bruk.

Mengden som forbrukes av metansulfonsyre er fra 0,5 til 2,2 ekvivalenter, foretrukket fra 0,95 til 1,2 ekvivalenter, i forhold til 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidin.

Dessuten, etter tilsetning av metansulfonsyre, kan videre det organiske løsningsmiddel (f.eks. etylacetat, n-heptan) tilsettes og omrøres for å oppnå den ovennevnte krystall.

Forbindelsen (1) ifølge oppfinnelsen kan renses ved rekrystallisering ved å anvende minst ett av de lavere alkoholløsningsmidler som kan inneholde vann og esterserie-løsningsmidler, eller et blandet løsningsmiddel av ett eller flere av de ovennevnte løsningsmidler og minst ett rettkjedet alkanserie-løsningsmiddel som kan inneholde vann, esterserie-løsningsmidler, kjedet eterserie-løsningsmidler og ketonserie-løsningsmidler.

I den foreliggende beskrivelse betyr lavere alkoholløsningsmidler C1-4 alkan-løsningsmidler med hydroksyl i strukturen. Nøyaktig, er metanol, etanol og 2-propanol angitt.

I den foreliggende beskrivelse vil esterserie-løsningsmidler bety løsningsmidler med en esterbinding i strukturen. Konkret er etylacetat angitt.

I den foreliggende beskrivelse vil rettkjedet alkanserie-løsningsmidler bety løsningsmidler som har en rettkjedet alkan i strukturen. Konkret er n-pentan, n-heksan og n-heptan angitt.

I den foreliggende beskrivelse vil kjedet eterserie-løsningsmidler bety løsnings-midler med en eterbinding i strukturen og strukturen er en kjede. Karbonsubstitutt av en eterbinding kan være kjede eller sirkularitet. Konkret er 1,2-dimetoksyetan, cyklopentylmetyleter, dietyleter, isopropyleter og metyl-t-butyleter angitt.

Ketonserie-løsningsmidler vil bety løsningsmidler med ketongruppe i strukturen. Aceton osv. er konkret angitt.

Den foretrukne mengden som forbrukes av løsningsmidler ved rekrystallisering er fra omtrent 1 til 100 ml, mere foretrukket omtrent 2 til 50 ml, særlig foretrukket fra 5 til 20 ml, for 1 g av forbindelsen (1).

Løsningsmidler som anvendes for rekrystalliseringen kan inneholde vann. Vanninnholdet avhenger av hvert løsningsmiddel, og er f.eks. fra null til en mettet mengde av hvert løsningsmiddel. I tilfellet av etylacetat er vanninnholdet konkret fra 0 til 3,3%.

Krystallen kan tørkes ved normal temperatur, eller med oppvarming, i henhold til behov, under redusert trykk eller normalt trykk.

I hvert trinn kan reaksjonen med oppvarming gjennomføres ved å anvende et vannbad, et oljebad, et sandbad eller en mikrobølgeovn som en fagkyndig på området vil forstå.

I hver reaksjon kan reaksjonsproduktene renses ved en konvensjonell rense-metode, f.eks. ved destillasjon ved et normalt eller redusert trykk, ved høyytel-sesvæskekromatografi ved å anvende silikagel eller magnesiumsilikat, ved tynnsjiktkromatografi, ione-bytterharpiks, scavengerharpiks, kolonnekromatografi, vasking eller rekrystallisering. Rensingen kan gjennomføres etter hver reaksjon eller etter flere reaksjoner.

Særlig utførelse av oppfinnelsen

De etterfølgende eksempler illustrerer oppfinnelsen.

Eksempel 1

1 -cyano-1 -(2-klor-4-metoksyfenyl)propan-2-on:

Under en atmosfære av argongass ble det til en suspensjon av 1 -brom-2-klor-4-metoksybenzen (54 g), natriumcyanoaceton (28,2 g) og natrium-t-butoksyd (51,5

g) i 1,2-dimetoksyetan (243 ml), tilsatt tetrakis(trifenylfosfin)palladium (7,04 g). Blandingen ble oppvarmet med tilbakeløp i 10,5 timer. Reaksjonsblandingen ble

avkjølt til 25°C og toluen (21,6 ml) ble tilsatt. Blandingen ble omrørt i 1 time med en indre temperatur på 20 til 30°C. Reaksjonsblandingen ble filtrert og det oppnådde faststoffet ble vasket med toluen. Det oppnådde faststoffet ble oppløst i 2 mol/l blandet løsningsmiddel av hydroklorid/toluen, blandingen ble separert. Tittelforbindelsen i det organiske laget (300,7 g) ble bestemt kvantitativt ved å anvende en intern referansemetode for HPLC.

Kvantitativ verdi: 71 %;

Utbytte: 38,7 g;

TLC: RF 0,29 (n-heksan : etylacetat = 3:1);

NMR (300 MHz, CDC13) : 6 7,38 (d, J 8,4 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,90 (dd, J = 8,4, 2,7 Hz, 1H), 5,1.2 (s, 1H), 3,83 (s, 3H), 2,29 (s, 3H).

Eksempel 2

1 -cyano-1 -(2-klor-4-metoksyfenyl)propan-2-on:

Under en atmosfære av argongass ble det til en oppløsning av 1-brom-2-klor-4-metoksybenzen (120 g) i en blandet løsning av diglym (230 ml) 1,2-dimetoksyetan (90 ml) tilsatt natriumcyanoaceton (62,6 g) og natrium-t-butoksyd (114,6 g) natriumjodid (81,2 g) med omrøring ved romtemperatur for å oppnå en suspensjon. Ved en annen prosess ble, under en argonatmosfære, en blanding av diglym (40 ml), palladiumacetat (426 mg) og trifenylfosfin (1,99 g) omrørt omtrent 30 minutter ved 110°C for oppløsning. Denne oppløsningen ble dryppet inn i den ovennevnte suspensjon. Blandingen ble oppvarmet til en indre temperatur på 110 til 115°C og omrørt i 7 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt, fortynnet med etylacetat (480 ml) og vasket med en vandig oppløsning av svovelsyre (konsentrert svovelsyre 101 g/vann 660 ml). Det organiske laget ble vasket med 10% mettet vandig oppløsning av natriumklorid (360 ml) to ganger. Aktivert trekull (3,6 g) ble tilsatt til det organiske laget. Blandingen ble omrørt i 1 time og filtrert. Filtratet ble vasket med etylacetat (240 ml) for å oppnå en oppløsning av 1 -cyano-1-(2-klor-4-metoksyfenyl)propan-2-on (971,7 g).

Utbyttet av tittelforbindelsen som ble bestemt ved å anvende en intern referansemetode for HPLC som beskrevet i Eksempel 1, er 101,7 g.

Eksempel 3

5-amino-3-metyl-4-(2-klor-4-metoksyfenyl)pyrazol:

Under en argonatmosfære ble det til en oppløsning av forbindelsen fremstilt i Eksempel 1 (38,7 g) i toluen påfølgende tilsatt eddiksyre (14,5 ml) og 60% vandig oppløsning av hydrazinhydrat (17,7 ml) ved en innvendig temperatur på 10 til 30°C. Blandingen ble omrørt i 7 timer ved en innvendig temperatur på 45 til 55°C. Til reaksjonsblandingen som var avkjølt til en innvendig temperatur på 10 til 30°C ble 2 mol/1 saltsyre tilsatt og blandingen ble deretter separert. Det vandige laget ble innstilt til pH 6,5 til 7,5 ved å tilsette 25 vekt% natriumhydroksyd. Isopropylacetat (216 ml) ble tilsatt for å justere det vandige laget. Det separerte organiske laget ble konsentrert under redusert trykk. Resten ble oppvarmet og n-heptan ble tilsatt. Oppløsningen ble avkjølt til en innvendig temperatur på 10 til 30°C. Etter at krystallen var presipitert ble oppløsningen omrørt i 30 minutter. Videre ble n-heptan tilsatt til oppløsningen og blandingen ble omrørt i 1 time. Den presipiterte krystallen ble samlet ved filtrering, tørket under redusert trykk i 14 timer eller mere ved omtrent 50°C til å gi tittelforbindelsen med de etterfølgende fysiske data (35,5 g (94,8 areal%); kvantitativ verdi: 61% (2 prosess)).

TLC : Rf 0,34 (kloroform : metanol = 10:1);

NMR (300 MHz, CDC13): 5 7,19 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,04 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,86 (dd,

J = 8,1, 2,7 Hz, 1H), 3,83 (s, 3H), 2,14 (s, 3H).

Eksempel 4

8-hydroksy-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6J-dihydro-5H-cyklopenta[d]-pyrazolo[1,5-a]pyrimidin: Under en atmosfære av argongass ble det til en oppløsning av forbindelsen fremstilt i Eksempel 3 (26,0 g) i etanol (109 ml) tilsatt 2-oksocyklopentankarboksyl-syreetylester (17,3 ml) ved en innvendig temperatur på 10 til 30°C, og eddiksyre (18,7 ml) ble tilsatt. Blandingen ble oppvarmet med tilbakeløp i 7 timer ved en innvendig temperatur på 80 til 90°C. Etter at reaksjonsblandingen var avkjølt til en innvendig temperatur på 55 til 65°C ble toluen (109 ml) tilsatt. Den fortynnede oppløsningen ble omrørt ved 30 minutter eller mere ved en innvendig temperatur på 40 til 65°C og deretter ble oppløsningen avkjølt til 10 til 30°C. Den presipiterte krystallen ble samlet ved filtrering, tørket under redusert trykk i 14 timer eller mere ved omtrent 50°C til å gi tittelforbindelsen med de etterfølgende fysiske data (33,3 g (98,6 areal%): Kvantitativ verdi: 92,8%).

TLC : Rf 0,59 (kloroform : metanol: eddiksyre : vann = 50 : 10 : 1 : 1);

NMR (300 MHz, DMSO-d6) : 5 12,04 (s, 1H), 7,31 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,18 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7,00 (dd, J = 8,4, 2,4 Hz, 1H), 3,81 (s, 3H), 2,82 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 2,66 (t, J = 6,9 Hz, 2H), 2,11 (s, 3H), 2,03 (m, 2H).

Eksempel 5

8-klor-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-ajpyrimidin: Under en atmosfære av argongass ble det til en suspensjon av forbindelsen fremstilt i Eksempel 4 (300 g) i toluen (910 ml) tilsatt N,N-diisopropyletylamin (141

g) og deretter ble fosforylklorid (419 g) dryppet deri. Blandingen ble omrørt i 9 timer ved en innvendig temperatur på 80 til 95°C. Reaksjonsoppløsningen som

var avkjølt til en innvendig temperatur på 20 til 30°C ble helt inn i et blandet løsningsmiddel av etylacetat og vann og blandingen ble omrørt i 15 minutter. Det organiske laget vaskes med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid, deretter ble aktivert trekull (30 g)

tilsatt, etterfulgt av omrøring i 1 time og blandingen ble filtrert. N,N-dimetyl-acetamid (600 ml) ble tilsatt til filtratet. Blandingen ble konsentrert under redusert trykk. Oppløsningen av tittelforbindelsen (316,9 g, 100% omdannelse) med de etterfølgende fysiske data i N,N-dimetylacetamid ble anvendt i det neste trinn uten rensing.

TLC : Rf 0,42 (n-heksan : etylacetat = 2:1);

NMR (300 MHz, CDC13) : 5 7,28 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,07 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,90 (dd, J = 8,7, 2,4 Hz, 1H), 3,84 (s, 3H), 3,06 (m, 4H), 2,43 (s, 3H), 2,23 (m, 2H).

Eksempel 6

8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta-[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidin: Under en atmosfære av argongass ble en blanding av en oppløsning av forbindelsen fremstilt i Eksempel 5 (177,6 g) i N,N-dimetylacetamid (355 ml) og en oppløsning av trietylamin (103,2 g) og 3-aminopentan (88,9 g) i isopropylalkohol (178 ml) omrørt i 4 timer ved en innvendig temperatur på 95 til 105°C. Vann ble helt inn i reaksjonsoppløsningen som ble avkjølt til en innvendig temperatur på 70 til 80°C. Den fortynnede oppløsningen ble avkjølt til en innvendig temperatur på 50 til 60°C og deretter ble krystallen presipitert og oppløsningen ble omrørt i 30 minutter. Videre ble vann helt inn i oppløsningen og den fortynnede oppløsningen ble omrørt i 1 time ved en innvendig temperatur på 20 til 30°C. Den presipiterte krystallen ble samlet ved filtrering og den oppnådde krystallen ble tørket under redusert trykk i 14 timer ved høyere enn omtrent 50°C til å gi råkrystallen av tittelforbindelsen (174 g, (97,4 areal%), kvantitativ verdi: 85% (prosess to)).

En oppløsning av den oppnådde råkrystall (1,0 g) i etanol/ vann (3/1, 2 mol) ble oppvarmet med tilbakeløp i et oljebad. Videre ble etanol/vann (3/1, 5 ml) tilsatt. Oljebadet ble fjernet og oppløsningen fikk stå over natten. Den presipiterte krystallen ble samlet ved filtrering, og vasket med etanol/vann (3/1) og tørket under redusert trykk i 14 timer eller mere ved omtrent 50°C til å gi tittelforbindelsen (920 mg) med de etterfølgende fysiske data.

TLC : Rf 0,45 (n-heksan : etylacetat = 2:1);

NMR (300 MHz, CDC13) : 5 7,31 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,05 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,88 (dd, J = 8,4, 2,7 Hz, 1H), 6,22 (brd, J = 10,5 Hz, 1H), 3,82 (s, 3H), 3,80 (m, 1H), 3,08 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,90 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 2,34 (s, 3H), 2,14 (m, 2H), 1,52-1,82 (m, 4H), 1,01 (t, J = 7,5Hz,3H).

Eksempel 7

8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihy^

[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidinmetansulfonat:

Råkrystallen fremstilt i Eksempel 6 (71,6 g) ble oppløst i etylacetat (250 ml) med oppvarming. Etter at oppløsningen avkjølt til en innvendig temperatur på 50°C ble 99,3% metansulfonsyre (17,3 g) inndryppet i oppløsningen. Til den blandede oppløsningen som var avkjølt til en innvendig temperatur på 30°C ble n-heptan tilsatt og blandingen ble omrørt i 30 minutter ved 25°C. Den oppnådde krystallen ble samlet ved filtrering og tørket under redusert trykk i 14 timer eller mere ved omtrent 50°C for å gi tittelforbindelsen (87,1 g (97,4 areal%), kvantitativ verdi: 98%) som en pulverformet krystall.

TLC : Rf 0,17 (n-heksan : etylacetat = 2:1);

Smeltepunkt: 196-197°C (ikke-korreksjon, oppvarmet metallblokk);

NMR (300 MHz, CDCI3) : 5 7,36 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 7,08 (cLJ = 2,4 Hz, 1H), 6,97 (dd, J = 8,4, 2,4 Hz, 1H), 4,03-3,90 (m, 1H), 3,85 (s, 3H), 3,63-3,35 (m, 2H), 3,13 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,42 (s, 3H), 2,35-2,25 (m) og 2,34 (s) total 5H, 1,90-1,50 (m, 4H), 1,06 (t, J = 7,5 Hz) og 1,05 (t, J= 7,5 Hz) total 6H.

Data for krystallens fysiske egenskaper

Røntgen-pulverdiffraksjonsspektrum, IR spektrum og DSC diagram for forbindelsen fremstilt i Eksempel 7 som målt ved de forhold og betingelser som angitt under er vist i Fig. 3, Fig. 4. og Fig. 1.

(1) Røntgen-pulverdiffraksjonsspektrum

Apparat: BRUKER DISCOVER med GADD(C2) produsert av

BRUKER

Target: Cu,

Filter: ingen,

Spenning: 40 kV,

Elektrisk strøm: 40 mA,

Eksponeringstid: 5 min.

(2) Infrarød resonans (IR) spektrum

Apparat FTIR-660Plus produsert av JASCO

Corporation(DURASCOPE produsert av SENSIR, Målmetode: krystall ble målt ved ATR metode, Oppløsnings-yteevne: 4 cm"<1>,

Antall scanning: 16 ganger.

(3) "Differential scanning calorimeter" (DSC)

Apparat: SEIKO INSTRUMENT DSC6200,

Prøvemengde: 6,35 mg,

Prøvecelle: aluminium åpen celle,

Nitrogengass-strøm: 20 ml/min,

Oppvarmingshastighet: 5°C/min.

Eksempel 7 (1)

Forbindelsen fremstilt i Eksempel 7 (500 mg) ble innført i et rør med (18 mm bredde, 40 mm høyde), og deretter ble metanol (0,5 ml) og etylacetat (05 ml) tilsatt. Etter lukking av lokket, ble skrurøret oppvarmet i et oljebad. Etter at faststoffet var oppløst ble blandingen avkjølt med beskyttelse mot lys og ved romtemperatur, og enkelt-krystall av 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksy- fenyl)-6J-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidinmetansulfon ble oppnådd.

Røntgenstrukturanalysedata for enkelt-krystallen av forbindelsen (1) er vist i Fig. 5 og Fig. 6.

Målebetingelser

Apparat R-AXIS RAPID type for enkelt-krystall

røntgenstrukturanalyse produsert av Rigaku Co., Analyse software: Crystal Structure produsert av Rigaku Co., Måltemperatur: romtemperatur,

Target: CuKa (A = 1,54187A),

R = 0,059.

Krystallografidataer er vist som følger.

Gitterkonstant: a = 8,165(2)Å, b = 38,140(2)Å, c = 7,947(2)Å,

B = 94,32(2)°,

Rom-gruppe: P2i/C

Eksempel 8

8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]-pyrazolo[1,5-a]pyrimidintosylat: Råkrystallen fremstilt i Eksempel 6 (100 mg) ble oppløst i tetrahydrofuran (0,5 ml) med oppvarming. Blandingen ble avkjølt til 60°C og tosylsyre (47,7 mg) ble tilsatt til blandingen. Blandingen ble avkjølt til 25°C og metyl-t-butyleter (2,5 ml) ble tilsatt. Den presipiterte krystallen ble samlet ved filtrering. Den oppnådde krystallen ble tørket i 14 timer eller mere under redusert trykk ved 50°C til å gi tittelforbindelsen (105 mg, (97,6 areal%), kvantitativ verdi: 71,1%) med de etterfølgende fysiske data som pulverformet krystall.

TLC: Rf 0,38 (n-heksan : etylacetat = 2:1);

NMR (200 MHz, CDC13) : 5 7,51 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,31 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7;30-7,20 (m, 1H), 7,09 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,93 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 6,69 (dd, J = 8,6, 2,6 Hz,

1H), 4,10-3,90 (m, 1H), 3,80-3,35 (m) og 3,72 (s) total 5H, 3,14 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,40-2,20 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,33 (s, 3H), 1,90-1,60 (m, 4H), 1,06 (t, J = 7,5 Hz) og 1,05 (t,J = 7,5 Hz) total 6H.

Farmakologiske aktiviteter

Det ble bekreftet at forbindelse (1) utviser CRF reseptorantagonistisk aktivitet ved hjelp av de etterfølgende forsøk.

Forsøk 1

Bindingsanalyse:

Cellemembranfremstilling

Etter at en cellelinje som uttrykker en human CRF1 reseptor (uttrykt cellelinje: CHO-K1 celler) var dyrket for å oppnå konfluens, ble cellene høstet med en skrape. Høstede celler ble vasket to ganger med PBS før de ble suspendert i en

bindingsanalysebuffer (Tris-HCI (50 mM, pH 7,0), EDTA (2 mM, pH 8,0) og MgCI2(10 mM) avkjølt med is. Suspenderte celler ble homogenisert med en Downs-type homogenisator og underkastet sentrifugering ved 10 000 g for å samle membranfraksjonen. Den høstede cellemembranfraksjonen ble resuspendert med en liten mengde av bindingsanalysebufferen, og ble videre fortynnet med bufferen til 1 mg/ml. Den således oppnådde membranfraksjonen ble anvendt for bindingsanalyse.

Bindingsanalyse

Femti ul [<125>l] h/r CRF fremstilt til 0,5 nM med bindingsanalysebuffer ble tilsatt til silikoniserte 1,5 ml rør. Hver av 1 ul av forbindelser fortynnet i passende mang-fold, DMSO (for total binding) og h/r CRF oppløsning (100 uM, for ikke-spesifikk binding) ble tilsatt til rørene. Prøver på 50 ul hver av membranfraksjonspreparatet ble tilsatt til rørene for å initiere reaksjonen (sluttkonsentrasjon av [<125>l] h/r CRF: 0,25 nM), deretter ble blandingen inkubert i 2 timer ved romtemperatur. Etter terminering av reaksjonen ble rørene underkastet sentrifugering ved 20 000 g for samle membranfraksjonen. Supernatanten ble fjernet og pelleten ble vasket to ganger med avkjølt PBS (-) inneholdende 0,01% Triton X-100. Radioaktivitets-verdier for de respektive rørene ble målt med en y-teller.

Den spesifikke bindingen ble utledet ved å subtrahere den ikke-spesifikke bindingsverdien fra hver bindingsverdi.

Resultatene indikert at forbindelsen (1) utviste potent affinitet på CRF1 reseptor (IC50: < 1 uM).

Forsøk 2

Reseptorantagonistisk aktivitet (cyklisk AMP analyse):

En cellelinje som uttrykker en human CRF1 reseptor ble dyrket ved å anvende 10% bovint embryoserum og 1% F-12 næringsblanding inneholdende antibiotika og antisoppmidler ved 37°C, 5% karbonisk anhydrid, 95% luft. På dagen før målingen av cyklisk AMP ble cellene utsådd på en 96-brønns plate for å oppnå 1 X 10<4>celle/brønn. På dagen for måling ble cellene vasket to ganger med F-12 næringsblanding, og F-12 næringsblanding/1 mM 3-isobutyl-1-metylxantin (analysemedium) (178 ul) ble tilsatt til hver brønn. Etter inkubering i 10 minutter ved 37°C ble hver av forskjellige konsentrerte oppløsninger av testforbindelsen (2 ul) tilsatt, eller DMSO (2 ul) ble tilsatt til CRF gruppen og blindprøvegruppen. Etter inkubering i 15 minutter ved 37°C, ble 10 nM analysemedium inneholdende human/rotte CRF (20 ul) tilsatt til testforbindelsesgruppen og CRF gruppen. Til blindprøvegruppen ble analysemedium inneholdende 0,00001% eddiksyre (20 ul) tilsatt. Videre ble de inkubert i 15 minutter ved 27°C. En supernatant ble fjernet og reaksjonen ble stanset ved avkjøling på is. All reaksjon ble også gjennomført i 3 brønner. Den kumulative dosering av intracellulær cyklisk AMP ble målt ved Biotrak enzym immunoassaysystem (Amersham Biosciences). Den kumulative dosering av cyklisk AMP ble utledet ved å subtrahere gjennomsnittsverdien for 3 brønner for blindprøvegruppen fra gjennomsnittsverdien for 3 brønner. IC50verdiene ble beregnet ved ikke-lineær regresjonsanalyse med logaritmekonsentrat for forbindelsen som den autonome variable og cyklisk AMP kumulativ dosering som en indusert variabel.

Resultatene indikerte at forbindelse (1) utviste potent antagonistaktivitet på CRF reseptor (IC50:<<>1 uM).

Formuleringseksempel 1

De etterfølgende komponenter ble blandet ved en konvensjonell metode og utstanset for å oppnå en million tabletter som hver inneholdt 10 mg av den aktive bestanddel.

Formuleringseksempel 2

De etterfølgende komponenter ble blandet ved en konvensjonell metode. Oppløsningen ble sterilisert på vanlig måte, 5 ml porsjoner ble plassert i ampuller og de ble frysetørket for å oppnå en million ampuller som hver inneholdt 20 mg av den aktive bestanddel.

Claims

1. Forbindelse, karakterisert vedat den er 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidinmetansulfonat.

2. Krystall, karakterisert vedat den er en krystall av 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidin-metansulfonat.

3. Krystall som angitt i krav 2, som har et røntgen-pulverdiffraksjonsspektrum som vist i Fig. 3.

4. Krystall som angitt i krav 2, som har en diffraksjonsvinkel 29 ved 8,96,12,70, 13.69, 14,98, 15,74, 16,38, 17,63, 18,98, 19,71, 20,49, 21,37, 22,26, 22,88, 23,76, 24.70, 25,79 og 26,57 i røntgen-pulverdiffraksjonsspektrum.

5. Krystall som angitt i krav 2, som har et IR spektrum som vist i Fig. 4.

6. Krystall som angitt i krav 2, som har absorpsjon i IR spektrum ved 1652, 1595, 1549, 1220, 1168, 1141, 1115, 1034, 790, 766, 548, 533 og 522 cm-<1>.

7. Fremgangsmåte for fremstilling av 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidinmetansulfonat,karakterisert vedat den omfatter å reagere 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidin med metansulfonsyre.

8. Farmasøytisk preparat, karakterisert vedat den omfatter forbindelsen som beskrevet i krav 1 som en aktiv bestanddel.

9. Farmasøytisk preparat, karakterisert vedat den omfatter 1 % eller mer av en krystall som beskrevet i ett eller flere av kravene 2 til 6 som en aktiv bestanddel.

10. Farmasøytisk preparat som angitt i krav 8, som er en CRF antagonist.

11. Farmasøytisk preparat som angitt i krav 8, som er et forebyggende og/eller behandlende middel for en CRF mediert sykdom.

12. Farmasøytisk preparat som angitt i krav 11, hvori den CRF medierte sykdommen er en nevropsykiatrisk lidelse eller en fordøyelsessystemsykdom.

13. Farmasøytisk preparat som angitt i krav 12, hvori den nevropsykiatriske lidelsen er en sinnsstemningslidelse, en angstlidelse, en stressrelatert lidelse, en spiseforstyrrelse, en symptom på psykotomimetisk legemiddelbruk og avhengighet, en organisk mental lidelse, schizofreni eller en oppmerksomhets-deficit hyperaktivitetslidelse.

14. Farmasøytisk preparat som angitt i krav 12, hvori fordøyelsessystem-sykdommen er irritabel tarm eller en stressindusert gastrointestinal forstyrrelse.

15. Farmasøytisk preparat som angitt i krav 13, hvori sinnsstemningslidelsen er depresjon, enkeltepisodedepresjon, tilbakevendende depresjon, post-partum depresjon, depresjonindusert ved barnemishandling, bipolar affektiv lidelse eller premenstruell dysfonisk lidelse.

16. Medisin, karakterisert vedat den omfatter 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidinmetansulfonat og ett eller flere medikamenter valgt fra tricykliske antidepresjonsmidler, tetracykliske antidepresjonsmidler, monoaminoksidaseinhibitorer, serotonin-noradrenalin-reopptakinhibitorer, selektiv serotonin-reopptakinhibitorerer, serotonin-reopptakinhibitorer, psykoanaleptika, antiangstmidler, antipsykotiske midler, mitokondrien benzoazepin-reseptorligander, NK1 antagonister, gastrointestinale pro-motilitetsmidler, 5-HT3antagonister, 5-HT4agonister, anticholinerge midler, antidiarélegemidler, "lapactic" og autonom nerve-modulatorer.

17. CRF antagonist, karakterisert vedat den omfatter 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidinmetansulfonat som en aktiv bestanddel.

18. Injeksjon, karakterisert vedat den omfatter 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidinmetansulfonat.

19. Injeksjon som angitt i krav 18, som omfatter et solubiliserende middel og/eller et pH justerende middel.

20. Anvendelse av 8-(3-pentylamino)-2-metyl-3-(2-klor-4-metoksyfenyl)-6,7-dihydro-5H-cyklopenta[d]pyrazolo[1,5-a]pyrimidinmetansulfonat for fremstilling av et farmasøytisk preparat for forebygging og/eller behandling av sykdommer forbundet med kortikotropin-frigivende faktor (CRF).