NO315542B1 - Enteralt diettpreparat omfattende Streptococcus thermophilus, Bifidobacterium longum og Bifidobacterium infantis, deres anvendelse samt kit - Google Patents

Description

Den foreliggende oppfinnelse vedrører et enteralt diettpreparat. Den foreliggende oppfinnelse vedrører også anvendelse av melkesyrebakterier for å fremstille enterale diettpreparater som er innrettet til å modifisere sammensetningen av den humane tarmflora, for å stimulere immunsystemet eller for å forbedre diaré eller tarmforstyrrelser. Den foreliggende oppfinnelse vedrører videre anvendelse av et melkesyrebakteriepreparat som et supplement til et næringsmiddel. Den foreliggende oppfinnelse vedrører også et kit som omfatter to beholdere, en inneholdende et næringsmiddel og den andre inneholdende et melkesyrebakteriepreparat, som skal tilsettes til det nevnte næringsmiddel på tidspunktet for konsumering av dette.

Den kjente teknikk har vist at terapi omfattende ernærings-supplering som gis til pasienter enten via munnen (enteral) eller gjennom vene (parenteral) er effektiv for å reversere katabolisme og stimulere anabolisme. Denne forbedring i den metabolske tilstand til pasienten menes å være kritisk for helbredelsesprosessen og nødvendig for pasientens over-levelse .

En rekke enterale formuleringer anvendes i pasienter med en nyper-metabolsk tilstand som forårsaket av brannsår, traume, operativ inngrep og i pasienter som lider av underernæring, kronisk sykdom og i pasienter som lider av sykdommer resul-terende fra forlengede perioder med redusert oralt inntak som et resultat av cerebrale vaskulære skader, gastrointestinale sykdommer eller en komatøs tilstand. Generelt kan enterale næringsblandinger administreres oralt eller ved sondemating.

Anvendelsen av enterale preparater (EN) har tilveiebragt goder og fordeler sammenlignet med total parenteral ernæring (TPN). Anbefaling av bruken av enterale preparater er basert på nyere kliniske funn som viser at bruk av elementærdietter resulterer i færre komplikasjoner, redusert opphold for pasienten på intensivavdelingen (ICU) og reduserte omkostninger, sammenlignet med TPN.

Elementærdietter utgjøres av næringsmidler med lav molekyl-vekt som krever minimal nedbrytnings- og absorpsjonsevne. Proteinkilden utgjøres av frie aminosyrer og spesielt essensielle og ikke-essensielle aminosyrer. Karbohydratdelen av slike preparater utgjøres typisk av glukose og hydrolysert maisstivelse (maltodekstrin), mens fettinnholdet vanligvis er lavt og utgjøres primært av essensielle fettsyrer. Disse dietter er kjennetegnet ved minimal rest i tarmene på grunn av den effektive absorpsjon av næringsstoffene som er tilveiebragt i en elementær form.

Elementære formuleringer er av natur hyperosmolare (større enn 30 0 mOsm/kg H20, hvor mOsm = milliosmol, det osmotiske trykk av en oppløsning er det eksterne trykk som må påføres en oppløsning for å forhindre diffusjon av løsningsmiddel fra rent løsningsmiddel inn i oppløsningen), og kan føre til diaré. Derfor initieres næringstilførsel ved anvendelse av lave tilførselsmengder, noe som man ser øker pasientenes toleranse.

Forskjellige enterale formuleringer og orale ernærings-tilbehør eller supplementer er tilgjengelige, dvs. ISOCAL,

OSMOLITE, ENSURE, SUSTACAL, ENSURE PLUS, MAGNACAL, TRAUMACAL, ISOTEIN HN, VIVONEX T.E.N., osv.

Man har imidlertid observert at pasienter som mottok de ovennevnte ernæringskurer ofte utviklet forsvarsmekanismer og unormal tarmflora. Alt dette er ansvarlig for diaré og andre forstyrrelser, f.eks. malabsorpsjon, flatulens, kolikksmerter osv.

I de senere år har man rettet oppmerksomheten mot en identi-fikasjon av biokjemiske stoffer og næringsstoffer som mangler i kommersielt tilgjengelige parenterale og enterale produkter. US-patent nr. 5.231.085 beskriver en formulering utformet til å øke gjenopprettelsen av en defisient eller undertrykket immunfunksjon i mennesker og som er kommersialisert som IMPACT. IMPACT omfatter arginin og kaseinater som proteinkilden, maltodekstriner som karbo-hydratkilden og menhadenolje og strukturerte lipider som lipidkilden. IMPACT er derfor blitt utformet som en formulering som er spesifikt målrettet til å forbedre pasientens ernæringsmessige status og også deres immunkompetanse.

Alle tidligere formuleringer, inkluderende IMPACT, tar imidlertid ikke tilstrekkelig hensyn til det faktum at i mennesker er tarmslimhinnen ikke istand til å ernære seg selv fra blodet og mer enn 80% av det energimessige-næringsmessige behov hos tykktarmen må tilfredsstilles ved luminal ernæring (Roediges, W.E.W., Gut, 21:793, 1980). Løsnet tarmepitel, pankreasenzymer og slim resirkuleres som en næringskilde i kraft av den bakterielle fermentering ved hjelp av bakteriene i kolon. Mengden av epitel som resirkuleres hver dag er blitt estimert til å nærme seg 300 g/dag og mer i enkelte sykdomstilstander. For den ovennevnte prosess oppnås omtrent 80 g protein og 12-13 g lipider hver dag. Det er derfor klart at dersom den bakterielle flora i kolon på grunn av antibiotikabehandling eller av andre årsaker reduseres eller elimineres, vil den foretrukket kunne re-suppleres ved anvendelse av ikke-patogene bakterier. I ICU pasienter og også i pasienter med inflammatoriske tarmsykdommer, i AIDS pasienter og til og med i individer med emosjonelt stress, er mikrofloraen fraværende eller i stor grad redusert. Selv tilsynelatende friske pasienter kan ha mangler i deres tarmflora eller en stor ubalanse i de ulike bakteriestammer som utgjør floraen {Wilmore, D.W., Amer. Thorac. Soc, 55:822, 1993).

Den observasjon at slimhinnen i kolon ikke kan ernære seg selv fra blodet er av ytterste viktighet og forklarer hvorfor pasienter som gjennomgår EN eller TPN utvikler mukosa atrofi i kolon i løpet av noen få dager med behandling (Roediges, W.E.W., Gut 21:793, 1980). Som regel mottar disse pasienter antibiotika, og følgelig vil også floraen tilstede i vertens kolon modifiseres eller reduseres. Dette tillater at potensielle patogene mikroorganismer kan danne kolonier i fordøy-elsessystemet. Atrofi av kolon mukosa og for sterk vekst av eventuelle patogene mikroorganismer er sannsynligvis de to viktigste sykdomsfremkallende faktorer i de ovennevnte pasienter, bortsett fra post-operative og post-traumatiske gastrointestinale forstyrrelser, sepsis og multippel organ-svikt .

IMPACT og andre enterale formuleringer er i sin foreliggende form ikke istand til og har heller aldri blitt formulert for å erstatte eller supplere vertens probiotiske flora i kolon.

På grunn av dette vil diaré og andre tarmlidelser utvikle seg

i pasienter som behandles med disse produkter.

Der er noen få enterale dietter som inneholder lactobacilli.

Et lavt antall lactobacilli pr. gram eller ml preparat er imidlertid tilstede. Antallet lactobacilli reduseres ytterligere når disse organismer passerer gjennom gastrointest-inalkanalen. Disse formuleringer har i realiteten en liten evne til å fremme kolonidannelse i kolon i det individ som behandles.

For å ha en effekt på mikrofloraen i tarmene, har man også forsøkt å velge lactobacillusstammer som er istand til å

danne kolonier og som kan etablere seg på kolon mukosa. I denne forbindelse omhandler WO 93/01823 et havremelbasert oralt næringssupplement fermentert ved hjelp av Lactobacillus pl^ ntarum stamme nr. 299 (i en konsentrasjon på <10<10> CFU pr. gram frysetørket produkt) og en næringsformulering for.

entera1 ernæring som inneholder den samme stamme av Lactobacillus plantarum i en konsentrasjon på l,5xl0<6> CFU pr.

100 ml næringsoppløsning, sammen med proteiner, karbohydrater, lipider, mineral og vitaminer. I virkeligheten er den angitte blanding en enteral formulering med spesifikke kjennetegn med hensyn til kalorier, proteiner, fettstoffer, vitaminer og mineraler og er supplert med en lactobacillus stamme. Med andre ord er den omtalte enterale formulering ikke egnet for behovene til alle individer, som vist ved det faktum at forskjellige enterale formuleringer ordineres i henhold til ulike behov, noe som kan utledes fra den følgende

velkjente klassifisering (McClure, S., Digest. Dis. Sei., 8:1153, 1992):

A) Generelle formuleringskategorier:

standard

kaloriholdig

proteinholdig

e1ementær/semi-elementær

kort-peptid semi-elementær

melkebasert, oral

fiberanriket

B) Spesialitetsformuleringer:

stress/traume

hepatisk

renal

pulmonal

diabetes

immunstimulerende.

Der er således fremdeles et behov for enterale diettpreparater som ikke lider av de mangler som man finner i forbindelse med konvensjonelle preparater. Der forblir spesifikt et behov for enterale diettpreparater som er effektive for å modifisere sammensetningen av tarmfloraen og for immunstimulering og som forhindrer diaré og tarmforstyrrelser. Der er fremdeles også et behov for enterale diettpreparater som kan anvendes til å supplere eksisterende enterale preparater.

Under hensyntagen til det faktum at det blant forbrukerne i de senere år har oppstått et økende behov for næringsmidler som har fordelaktige effekter med hensyn til daglig helse og forebygging av sykdommer, har oppfinnerne identifisert et nytt problem, nemlig problemet med å gjøre bruken av næringsmidler som inneholder melkesyrebakterier lettere tilgjengelig på markedet for alle forbrukere, enten de har en god helse-tilstand eller ikke.

Dokument EP 555618 A2 vedrører diettpreparater eller farma-søytiske preparater som er istand til å normalisere funksjon-ene til tarmfloraen og fremme kroppsomsorgen. Disse preparater inneholder en rekke forskjellige frysetørkede melkesyrebakterier valgt fra Bifidobacterium lonaum. Bifidobacterium bifidum. Bifidobacterium infantis. Lactobacillus acidophilus. Lactobacillus casei. Lactobacillus delbrueckii. sub-species bulaaricus. Lactobacillus pl antarum. Streptococcus thermophilus og Streptococcus faecium. i en konsentrasjon fra lxlO<9> til 5xl0<12> bakterier pr. gram preparat sammen med farmakologisk aksepterbare eksipienser og eventuelt fysiologisk kompatible legemidler.

Dokument EP 555618 A2 omhandler spesielt et preparat som omfatter tre frysetørkede melkesyrebakterier valgt fra Bifidobacterium lonaum. Bifidobacterium bifidum. Bifidobacterium infantis. L. acidophilus. L. casei. L. bulaaricus. L. plantarum. S. thermophilus og S. faecium (identifisert ved hensvisningsbokstaver a) til c) for enkelthetsskyld) i de etterfølgende mengder:

- fra 10 til 40 vekt% a)- fra 10 til 60 vekt% b), og

- fra 5 til 3 0 vekt% c), sammen med eventuelt fra 0 til 10% av en eksipiens og fra 0 til 2 0% av et kompatibelt lege-middel. For pasienter med behov for enteral ernæring, er de ovennevnte melkesyrebakteriepreparater ikke de beste.

Dokument JP 01 228 456 ("abstract"), omhandler en fremstilling av levedyktig bakteriekapsel. Nevnte levedyktige bakterie er f.eks. Lactobacillus bifidus. forskjellige Lactobacilli, mikroorganismer for generell industriell anvendelse .

Dokument JP 03 251 159 ("abstract"), omhandler et næringsmiddel som inneholder svært stabile bakterier tilgjengelige i tarmen. Bakteriene tilgjengelige i tarmen er ikke spesielt begrenset og vel kjente bakterier som er tilgjengelige i tarmen anvendes.

Dokument SE-B-447540 vedrører mikrokuler som omfatter mikroorganismer som Lactobacillus og/eller Bifidobacterium og/ eller andre inneholdt i tarmfloraen, hvor de nevnte mikrokuler er belagt med et fast fettstoff.

Det er følgelig et formål for den foreliggende oppfinnelse å tilveiebringe nye enterale diettpreparater.

Det er et annet formål for den foreliggende oppfinnelse å tilveiebringe nye enterale diettpreparater som kan anvendes for immunstimulering.

Det er et annet formål for den foreliggende oppfinnelse å tilveiebringe nye enterale diettpreparater som kan anvendes for å modifisere sammensetningen av tarmfloraen.

Det er et ytterligere formål for den foreliggende oppfinnelse å tilveiebringe nye enterale diettpreparater som utviser en nedsatt tendens til å bevirke diaré eller tarmforstyrrelser.

Det er et annet formål med den foreliggende oppfinnelse å tilveiebringe nye enterale diettpreparater som kan anvendes til å supplere konvensjonelle enterale eller parenterale preparater.

Det er et annet formål med den foreliggende oppfinnelse å tilveiebringe nye preparater som omfatter melkesyrebakterier, som kan anvendes av forbrukeren som et supplement til vanlige næringsmidler som er kommersielt tilgjengelige på markedet.

Det er et annet formål for den foreliggende oppfinnelse å tilveiebringe nye preparater som omfatter melkesyrebakterier, som kan bringes ut på markedet i kombinasjon med det spesifikke næringsmiddel, hvortil de skal suppleres direkte av forbrukeren.

De foran beskrevne formål oppnås med det enterale diettpreparat, med anvendelsene av en blanding av melkesyrebakterier og med kitet slik de er definert med de i kravene anførte trekk.

Som det klart vil fremgå fra den etterfølgende detaljerte beskrivelse er de ovennevnte formål oppnådd på grunn av det funn at et preparat som inneholder en blanding av melkesyrebakterier bestående av Streptococcus thermophilus og Bifidobacterium lonaum. hver stamme i en konsentrasjon som er lik eller større enn lxlO<11> CFU pr. gram bakterier, og Bifidobacterium infantis i en konsentrasjon som er lik eller større enn 1x10<10> CFU pr. gram bakterier, ikke lider av manglene hos konvensjonelle enterale preparater og kan anvendes til å modifisere tarmfloraen og/eller stimulere immunsystemet hos en pasient med behov derfor, mens det utviser en redusert tendens til å bevirke diaré, tarmforstyrrelser eller forstyrrelser i urinveiene.

Mere spesielt tilveiebringer den foreliggende oppfinnelse enterale diettpreparater og orale næringssupplementer som inneholder den ovennevnte blanding av melkesyrebakterier. Konsentrasjonen av Streptococcus thermophilus og Bifidobacterium longum er foretrukket fra lxlO<11> til lxlO<14 >CFU/gram bakterier, mere foretrukket fra lxlO<11> til lxlO<12 >CFU/gram bakterier.

Et viktig og nytt aspekt ved den foreliggende oppfinnelse er det faktum at det er mulig å modifisere egenskapene til de nåværende tilgjengelige preparater ved å supplere dem med diettpreparatet ifølge oppfinnelsen. Konsentrasjonen av Bifidobacterjum infantis er foretrukket fra lxlO<10> til lxlO<13 >CFU/gram bakterie.

CFU betyr kolonidannende enhet.

I en foretrukket utførelsesform av den foreliggende oppfinnelse består det enterale diettpreparat av kombinasjonen av Streptococcus thermophilus,, Bif idobacterium longum og Bifidobacterium infantis i en total bakteriekonsentrasjon fra 0,5 til l,5xlo1<2> CFU pr. gram bakterier.

Bakteriene kan være levende, frysetørkede eller drept med varme {80°C pr. 5 min.) i henhold til ulike utførelsesformer av oppfinnelsen. I det første tilfellet som vedrører levende, frysetørkede melkesyrebakterier, kan preparatet anvendes til å modifisere økologien i tarmen og til å stimulere immunsystemet. I det andre tilfellet, som vedrører de varme-drepte melkesyrebakterier kan disse anvendes til å stimulere immunsystemet alene eller til og med i kombinasjon med andre immunmodulerende midler eller vaksiner. Problemet med overlevelsen av levende bakterier i magen overvinnes ved det høye antall bakterier, og ved eventuell administrering av preparatet ved hjelp av en naso-enterisk sonde, hvor bakteriene føres utenom det sure miljøet i magen. Bakteriene kan også innkapsles i kapsler og pasienten kan svelge dem.

Skjønt de foreliggende preparater ikke må inneholde noen spesifikke stammer av de ovennevnte melkesyrebakterier, er spesifikke eksempler på passende stammer angitt i den etterfølgende tabell 1.

TABELL 1

Specier Deponeringsnr. 1 Streptococcus thermophilus YS 52 CNCM 1-1670 Bifidobacterium longum ATCC 15707 Bifiodobacterium infantis ATCC 15697

<1>: CNCM står for Collection Nationale de Cultures de Microorganismes - Institut Pasteur, 25, Rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex 15, mens ATCC står for American Type Culture Collection, 123 01 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, USA.

Preparatet i henhold til den foreliggende oppfinnelse er foretrukket i en tørr pulverform, men kan også fremstilles i enhver form som er egnet for administrering til et individ med behov for behandling. Således kan preparatet alternativt utgjøres av et flytende preparat omfattende melkesyrebakterier i en flytende bærer som er farmasøytisk tålbar og som er ikke-giftig for bakteriene. Den flytende bærer kan omfatte vann, og konsentrasjonen av bakteriene vil være mellom lxlO<11> og lxlO<13> melkesyrebakterier pr. ml væske. Det flytende preparat kan videre omfatte aminosyrer (dvs. glutamin), sukkere (dvs. dekstrose), salter (dvs. natriumsalter), vitaminer (dvs. vitamin A), soyaolje eller maisolje, tri-glycerider, solsikkeolje og en hvilken som helst annen komponent egnet for enterale administreringer.

Den tørre form av preparatet omfatter foretrukket mellom lxlO<11> til 1x101<4> melkesyrebakterier pr. gram av preparatets totale vekt.

I de enkleste utførelsesformer, vil preparatet i henhold til oppfinnelsen omfatte bakterier i blanding med en bærer. I den foretrukne tørre form av oppfinnelsen inkluderer preparatet, i tillegg til de ovennevnte melkesyrebakterier, en bærer omfattende resten av et egnet dyrkingsmedium for de ovennevnte bakterier, og hvis dyrkingsmediumrest klart er ikke-giftig for mennesker. Det tørre, pulverformede preparat kan videre inneholde en tilsatt bærer som aminosyrer, sukkere, salter, melkederivater, inulin, oligosakkarider. I tillegg kan preparatet inneholde fra 0 til 20 vekt%, basert på preparatets totale vekt, av et kompatibelt medikament, f.eks. vitaminer, hormoner, aminosyrer, immunresponsmodi-fiserende midler, anti-inflammatoriske legemidler, anti-cholinergiske legemidler, anti-septiske legemidler, adren-ergiske legemidler og vekstfaktorer.

Det foreliggende preparat kan fremstilles ved enten å suspendere bakteriene i et flytende preparat eller ved tørrblanding av bakteriene i en pulverblanding.

De foreliggende preparater er fordelaktige sammenlignet med dem angitt i WO 93/01823, da de foreliggende preparater inneholder et høyt antall bakteriestammer. I tillegg inneholder de foreliggende preparater bakterier i en konsentrasjon som er minst en størrelsesorden større enn dem ifølge WO 93/01823. Dessuten kreves det ikke at preparatene i henhold til oppfinnelsen, skjønt de kan inneholde ulike eksipienser, skal administreres som et fermentert nærings-middelpreparat (dvs. i form av havremel), og de er klart dannet for å modifisere egenskapene til alle enterale formuleringer og/eller orale næringssupplementer som er tilgjengelige nå og i fremtiden.

Preparatene i henhold til den foreliggende oppfinnelse er også fordelaktige sammenlignet med den relative næringsformulering for enteral ernæring inneholdende den samme stammen av Lactobacillus <p>lantarum i en konsentrasjon på l,5xl06 CFU i en 100 ml næringsoppløsning sammen med proteiner, karbohydrater, lipidkilder, mineraler og vitaminer, da de kan tilsettes til alle kommersielt tilgjengelige formuleringer, både generelle formuleringer og spesielle formuleringer, og ved at de forandrer og forbedrer deres egenskaper. I tillegg inneholder de foreliggende preparater flere stammer av bakterier og har en markert forskjellig bakteriekonsentrasjon.

Et annet aspekt av den foreliggende oppfinnelse omfatter at preparatet kan fortynnes på forskjellig måte idet man over-later til legen og/eller til pasienten å velge hvilken bakteriekonsentrasjon som skal tilføres pr. døgn, avhengig av individets behov og/eller av den sykdom som skal forebygges eller behandles.

Sist, men ikke minst, kan de enterale diettpreparater i henhold til oppfinnelsen inneholde levende frysetørkede bakterier når en immunstimulering og en modifikasjon av sammensetningen av tarmfloraen er tilrådelig, eller av varme-drepte frysetørkede bakterier når kun en immunstimulering er ønskelig, sammen med andre mulige immunmodulerende forbindelser eller vaksiner. De to preparater administreres ved hjelp av en nasoenterisk sonde, foretrukket en eller to ganger pr. døgn, eller administreres oralt i form av en drikkbar suspen-sjon eller i form av kapsler.

Skjønt den nøyaktige dosering av det foreliggende preparat som skal administreres vil variere med pasientens tilstand og størrelse, den nøyaktige sykdom eller tilstand som behandles, og den nøyaktige formulering av preparatet som skal administreres, har man oppnådd gode resultater ved å administrere det foreliggende preparat i en slik mengde at det resulterer i at pasienten mottar fra 10 til 90%, foretrukket fra 30 til 70%, av hver av Streptococcus thermophilus og Bifidobacterium Ipngum. Ved anvendelse av preparater som inneholder levende bakterier, er det foretrukket at preparatet administreres i en slik mengde og i en slik konsentrasjon at pasientens tarm får en populsjon av de bakterier som er inneholdt i preparatet. Det er således foretrukket at preparatet administreres i en slik prøvemengde at pasienten mottar fra lxlO<11> til lxlO<14> CFU/døgn, foretrukket fra lxlO<11> til lxlO<12 >CFU/døgn, av bakteriene som er inneholdt i preparatet i en periode fra 1 til 365 døgn, foretrukket fra 1 til 90 døgn. I det tilfellet at preparatet inneholder lxlO<11> CFU/gram av hver av Streptococcus thermophilus og Bifidobacterium longum. er det f.eks. foretrukket at pasienten mottar fra 0,5 til 200 g, foretrukket fra 1 til 50 g, av preparatet pr. døgn.

Ved anvendelse av et preparat som inneholder varme-drepte bakterier, er det foretrukket at preparatet administreres i en slik mengde og i en slik konsentrasjon at det resulterer i immunstimuleringen av pasienten. Varmedrepte bakterier kan også kvantifiseres som CFU/g. Den beste prosedyre var å kvantifisere bakteriene mens de var levende, bringe dem til ønsket konsentrasjon ved frysetørking og deretter drepe dem ved oppvarming. I oppfinnelsens sammenheng, betyr beteg-nelsen "immunstimulering" en økning av lymfocyttallet i det perifere blod (a 20%) med hensyn til forbehandlingsverdien og/eller en økning på > 20% av forbehandlingsverdien av en hvilken som helst parameter som vanligvis anvendes for å bestemme spesifikk og ikke-spesifikk immunitet ex vivo dvs. TCD4 tellinger, immunoglobulinhivåer men ikke disse para-metere alene.

Administreringen av preparatet i henhold til oppfinnelsen vil typisk begynne når pasienten ikke er istand til eller er uvillig til å konsumere en adekvat diett, når pasienten har et spesielt næringsbehov (f.eks. i tilfellet av renale sykdommer, leversykdommer og hjertesykdommer, cancere osv), når pasienten har et temporært eller permanent tap av det absor-ptive overflateareal i tarmen, når pasienten har tapt ^ 10% av den vanlige kroppsvekt, og når pasienten har svekket immunapparat (f.eks. negativ hudtest, lavt lymfocyttantall i det perifere blod, lav TCD4 tall og andre immunologiske tester) . Varigheten av behandlingen vil bestemmes av legen og forbedring i klinisk tilstand vil observeres i overensstem-melse med legens kliniske bedømmelse og i henhold til labora-torietester (dvs. lymfocyttall, undersøkelse av feces flora osv.).

Skjønt det foreliggende enterale diettpreparat prinsipielt kan administreres oralt, vil det foreliggende preparat i en foretrukket utførelsesform tilføres pasienten gjennom en naso-enterisk sonde. På denne måte kan bakteriene i det foreliggende preparat letter passere utenom det sure miljøet i magen og overleve for å danne populasjoner i tarmene og i kolon. Passende naso-enteriske sonder og bruken derav er beskrevet i Ziegler, T., Scientific American. Nov. 1995.

På grunn av den høye konsentrasjon av bakteriene, er imidlertid den orale rute ikke utelukket. I tilfellet av preparater inneholdende varmedrepte bakterier, kan oral administrering være tilstrekkelig til å gi immunstimulering.

Som angitt i det foregående kan de foreliggende preparater

være så enkle som en blanding av bakterier og en aksepterbar eksipiens. I en slik utførelsesform vil det være nødvendig å ko-administrere eller ko-tilføre en ytterligere næringskilde, slik som en enteral eller parenteral diettformulering eller orale næringssupplementer. Konvensjonelle enterale og parenterale formuleringer er velkjente for fagkyndige på området, og egnede eksempler er beskrevet i J. Parenter. Enter. Nutr., 1:14, 1993.

De konvensjonelle enterale eller parenterale formuleringer behøver nødvendigvis ikke å ko-administreres nøyaktig på det samme tidspunkt som diettpreparatet i henhold til oppfinnelsen. I en foretrukket utførelsesform blir heller den konvensjonelle enterale formulering først tilført gjennom en naso-enterisk sonde, etterfulgt av tilførsel av diettpreparatet i henhold til oppfinnelsen gjennom den samme naso-enteriske sonde. På denne måte kan bakteriene i det foreliggende preparat adherere til innsiden av sonden og kan forhindre eller inhibere kolonidannelse i sonden av andre eventuelt patogene bakterier. Den samme teknikk kan anvendes for å forhindre kolonidannelse av patogene bakterier i et kateter.

Dessuten har man funnet at preparatet i henhold til oppfinnelsen kan tilsettes til ethvert flytende, kremaktig eller pastaaktig næringsmiddel, for det formål å oppnå næringsmidler som er istand til å øke, supplere eller avbalansere tarmfloraen.

Man har spesielt funnet at det er foretrukket at preparatet tilsettes til et flytende, kremaktig, eller pastaaktig næringsmiddel direkte av forbrukeren på brukertidspunktet.

I en ytterligere utførelsesform tilveiebringer derfor den foreliggende oppfinnelse anvendelse av et preparat omfattende melkesyrebakterier valgt fra gruppen Streptococcus thermophilus og Bifidobacterium longum. hver i en konsentrasjon som er lik eller større enn lxlO<11> CFU pr. gram bakterier, og Bifidobacterium infantis i en konsentrasjon som er lik eller større enn lxlO<10> CFU pr. gram bakterier, som en supplering til et flytende, kremaktig eller pastaaktig næringsmiddel, idet denne supplering gjennomføres på tidspunktet for konsumering av næringsmiddelet.

I en ytterligere utførelsesform tilveiebringer dessuten den foreliggende oppfinnelse et kit som omfatter: en beholder A inneholdende et preparat omfattende melkesyrebakterier valgt fra Streptococcus thermophilus og Bifidobacterium longum, hver i en konsentrasjon som er lik eller større enn lxlO<11> CFU pr. gram bakterier, og Bifidobacterium infantis i en konsentrasjon som er lik

eller større enn lxlO<10> CFU pr. gram bakterier, og

en beholder B inneholdende et flytende, kremaktig, eller pastaaktig næringsmiddel, idet begge de nevnte beholdere er lukkede og kan åpnes på tidspunktet med konsumering av det nevnte næringsmiddel, og idet nevnte beholder A er egnet for formålet med å supplere preparatet inneholdt deri til næringsmiddelet som er inneholdt i beholderen B på tidspunktet for konsumering av det nevnte næringsmiddel .

Eksempler på næringsmidler hvortil preparatet i henhold til oppfinnelsen kan tilsettes er melkeprodukter og meieri-produkter (melk, melkebaserte eller melke-avledede produkter) og produkter som er basert på eller avledet fra vegetabilske produkter (særlig frukt). Preparatet i henhold til oppfinnelsen kan f.eks. tilsettes til melk, yoghurt, en melkebasert dessert, en fruktjuice, en tomatjuice, til en te eller andre drikkevarer.

Som allerede nevnt i det foregående, er det i det tilfellet hvor preparatet i henhold til oppfinnelsen anvendes som et supplement til et næringsmiddel, ønskelig at preparatet suppleres på det tidspunkt som næringsmiddelet konsumeres. Dersom preparatet faktisk tilsettes under fremstillings-syklusen for næringsmiddelet eller når næringsmiddelet emballeres, vil en rekke bakterier i preparatet ikke opprett-holde en levedyktig form under konserveringen, og dessuten ville noen bakterier kunne føre til fermenteringer under konserveringen av næringsmiddelet, noe som resulterer i dannelsen av eller en økning i surhet, og som således gjør at næringsmiddelet får en uakseptabel form sett ut fra et organoleptisk synspunkt.

Den foreliggende oppfinnelse er basert på det funn at melkesyrebakterier spiller en rekke viktige roller i den gastrointestinale kanal, som: 1} Produksjon av næringsstoffer for kolon mukosa: acetat,

butyrat, propionat, andre fettsyrer med kort kjede, pyruvat, laktat, og aminosyrer som arginin, cystein og

glutamin,

2) Produksjon av næringsstoffer: B-gruppe vitaminer og folin-syre, antioksydasjonsmidler og polyamider, histamin, 5-hydroksytryptamin, piperidin, tyramin, kadaverin,

pyrrolidin osv.,

3) Eliminering av toksiner og uønskede substanser,

4) Regulering av fordøyelsesfunksjon: slimutnyttelse, naeringsabsorpsjon, gastrointestinal motilitet, blodgjennomstrømning, sekresjon av gastrointestinale

hormoner,

5) Vertens beskyttelse mot potensielle patogene mikroorganismer,

6) Stimulering av immunsystemet.

Idet man nå har beskrevet oppfinnelsen generelt, kan en ytterligere forståelse derav oppnås under henvisning til de etterfølgende eksempler.

EKSEMPLER

EKSEMPEL 1

Tyve pasienter med en alder fra 24 til 61 år og med kronisk ulcerøs kolitt (CUC), diaré og som hadde tapt minst 10% av kroppsvekten i løpet av de siste to mnd., ble rekruttert til studiet. De histologiske kriterier av Lockhart-Mummery og Morson ble anvendt for å etablere CUC diagnosen og skjelne denne kolittformen fra Crohns sykdom. Alle pasienter ble først underkastet kolonskopi for å fastslå graden av CUC. Pasienter ble utelukket fra studiet dersom de var under behandling med antibiotika eller hadde bakterielle eller parasittiske patogener i avføringen, dersom de hadde positiv test for Clostridjum difficile toksin og aktive virusinfek-sjoner eller soppinfeksjoner såvel som store kliniske komplikasjoner, som megakolon, perforasjon eller septikemi. Pasienter som fulgte studieprotokollen mottok det enterale preparat innen 72 timer etter den hendelse som nødvendig-gjorde sykehusinnleggelse.

Preparatet var det samme (ENSURE) for begge grupper, med unntak av supplement av Streptococcus thermophilus. Bifidobacterium lonaum og Bifidobacterium infantis (forhold 1:1:1) i en konsentrasjon på lxlO<12> CFU pr. gram bakterier til gruppe B. Bakteriene var levende, frysetørkede. Doseringen var 6 gram av preparatet pr. dag i kun en administrering. Sett ut fra et praktisk synspunkt ble bakteriene resuspendert i 10 ml vann og gitt daglig til pasienten ved en naso-enterisk sonde på tidspunktet innen kl. 08.00 og kl. 10.00, idet man temporært stanser ENSURE administreringen. Den dag som man startet studiet ble definert som dag 0.

Det påkrevde tilførselsintervall under hvilket pasienten måtte motta formuleringen var 10 døgn, begynnende med dag 0. Etter dette tilførselsintervall, kunne undersøkeren fritt gi hvilken som helst næringstilførsel som man synes var passende under resten av sykehusoppholdet. Alle pasientene mottok 5-ASA (2 gram pr. døgn) som standard behandling for CUC. Pasienter som mottok mesalaminklyster før de gikk med i studiet fortsatte terapien. Antibiotikabehandling ble ikke initiert under studiet dersom dette ikke var indikert, f.eks. for pulmonale infeksjoner eller urinveisinfeksjoner, og antibiotikabehandlede pasienter ble trukket fra forsøket. Acetaminofen, H2-reseptorantagonister eller aluminbaserte antisyrer ble gitt etter behov.

Et fullstendig blodtall og biokjemiske studier inkluderende tester for leverfunksjon og renalfunksjon ble gjennomført på begynnelsen og deretter på slutten av forsøket. Sigmoido-skopi og kolonskppi ble utført ved innmeldingen og på slutten av forsøket. Fecesmaterial ble oppnådd på begynnelsen og på slutten av behandlingen. De synlige bakterietall ble uttrykt som loglO av kolonidannende enheter (CFU/gram våtvekt av feces). Kolonmukosaprøver ble tatt tilfeldig ved biopsi 5, 10, 15, 20, 2 5 cm fra anus under kolonskopi. Prøvene ble umiddelbart nedfrosset ved -80°C og fiksert i 10% bufret formalin. Por histologi ble 5 /im snitt av paraffin-innesluttet vev farget med hematoksylin-eosin.

I henhold til trekk funnet ved mikroskopi, ble CUC klassifisert i aktiv sykdom (A), sykdom som er i ferd med å bli redusert (svinnende kolitt) (B), og kolitt i ferd med å bli redusert (C).

I prøver omtalt som aktiv sykdom (A), var mukosa-kapillær kongestion og dilatasjon med intra-mukosa blødninger dominerende og forbundet med forskjellige grader av epitel nekrose og regenerering. Mucin deplesjon og reduksjon i slimceller var tilstede og, når et angrep var på det mest alvorlige, forsvant slimceller fullstendig. Lymfocytter og plasmaceller var tilstede i lamina propria, sammen med flekker av polymorfnukleære leukocytter inne i epitelkrypter, dannende kryptitt, krypt abscesser og krypt ruptur.

Svinnende kolitt (B) utviste reduksjon i vaskularitet og forsvinning av akutt inflammasjon og krypt abscesser med restaurering av slimcellepopulasjon i epitelet og ble fulgt av reaktiv hyperplasi av epitelet, særlig i bunnen av kryptene.

Kolitt i remisjon (C) hadde variable grader av mukosa atrofi, inkluderende tap av parallellisme og forgrening av kryptene og en mer alvorlig reduksjon i antallet krypter pr. enhetsareal og en forkortning av gapet mellom kryptenes basis og lumenoverflaten av muscularis mucosae. Epitelet var ofte hyperplastisk og intet bevis på aktiv inflammasjon ble funnet skjønt noen fokale akkumuleringer av lymfocytter og plasmaceller kunne ses.

Cytofluorografiske analyser av mononukleære celler i perifert blod (PBMCer) ble utført i henhold til standard metoder ved anvendelse av spesifikke monoklonale antistoffer og et flow-cytometer (både reagenser og flow-cytometer-Facs-scan- fra Becton-Dickinson, USA).

Uønskede bivirkninger relatert til administreringen av lactobacilli ble ikke observert.

I melkesyrebakteriegruppen (gruppe B), på slutten av forsøksperioden, hadde fire pasienter kolitt som var i ferd med å bli redusert, fire hadde svinnende kolitt og to aktiv kolitt. I kontrollgruppen (gruppe A), ble ingen forbedringer funnet på slutten av forsøksperioden sammenlignet med forbehandling. Alle pasientene (gruppe A) utviste faktisk bevis og symptomer på aktiv kolitt.

Ved forsøkets innledning var begge grupper sammenlignbare med hensyn til tilstedeværelsen av lactobacilli og koliforme bakterier i feces. Etter behandling med ENSURE supplert med det probiotiske preparat (gruppe B), økte både lactobacilli og bifidobakterier signifikant (P<0,001) mens koliforme bakterier ble signifikant redusert (P<0,01), sammenlignet med gruppe A og med innledende verdier.

Resultatene er vist i tabell I.

I de mononukleære celler i perifert blod (PBMCer) fra pasienter behandlet med melkesyrebakterier pluss ENSURE (gruppe B) var det absolutte antall aktiverte T-lymfocytter (CD3+/DR+) økt på slutten av studieperioden sammenlignet med forbehandling (henholdsvis 463 + 173 og 203 + 108 celler//il, P<0,07). NK celler (CD16+/CD56+) utviste en trend mot en økning gjennom hele studieperioden, men forskjellen nådde ikke statistisk signifikans. Cytotoksiske NK-liknende T-lymfocytter (CD3+/CD16+/CD56+) var også økt etter behandlingen sammenlignet med forbehandlingsverdier (henholdsvis 387 ± 96 og 129 ± 54 celler//il, P<0,05). Sett under ett viser disse funn en selektiv ekspansjon av de cytotoksiske lymfocytter i pasientenes perifere blod, men kun etter behandling med melkesyrebakterier pluss det enterale preparat (gruppe B). Ingen forandring i PBMC undergrupper ble funnet i gruppen behandlet med det enterale preparat alene (gruppe

A) .

De ovennevnte data viser at supplering av en hvilken som helst enteral formulering med preparatet ifølge den foreliggende oppfinnelse resulterer i en modifikasjon av tarmflora og en forbedring av en rekke immunologiske parametre.

De fordelaktige effekter vises ved forbedringen i den kliniske tilstand på slutten av forsøksperioden for pasienter tilhørende gruppe B (kun to med aktiv kolitt). Ingen signifikant forbedring ble observert i gruppe A pasienter (alle med aktiv kolitt).

EKSEMPEL 2

Tyve HIV ("human immunodeficiency virus")-positive individer som hadde tapt minst 2 0% av deres kroppsvekt under de foregående 4 mnd. ble rekruttert for studiet. Vekttap i HIV+ individer var dokumentert fra informasjonen tilveiebragt av individene og deres leger. Alle HIV+ individene hadde poeng på Karnofskys skala som var >50%. Utelukkelseskriterier for HIV+ individer inkluderte fysisk eller funksjonell obstruk-sjon overfor næringsinntak, opportunistisk infeksjon innen de foregående 3 0 døgn og andre terapier hvis formål inkluderte vektøkning eller økt apetitt. HIV+ individene var i en alder fra 28 til 44 år med en gjennomsnittsalder på 35 + 6 år.

Seks individer var enten homoseksuelle eller biseksuelle, og de gjenværende 14 hadde livshistorier med bruk av narkotika tatt intravenøst. Alle individer hadde vært på vanlige kurer for medisinsk behandling i minst en mnd. før innleggelse og fortsatte med dette gjennom studiet. Alle individer mottok antivirusterapi på innleggelsestidspunktet (AZT, 500 mg/døgn) og fortsatte med behandling gjennom studiet. Seksten pasienter mottok profylakse mot Pneumocystic carinii før og under studiet. Pasientene ble tilfeldig fordelt i to grupper og behandlet med NUTRINAUT eller med NUTRINAUT supplert med melkesyrebakteriepreparatet i 3 uker. Bakteriepreparatet inneholdt Streptococcus thermophilus. Bifidobacterium longumf og Bifidobacterium infantis (forhold 1:1:1) i en konsentrasjon på lxlO<12> CFU pr. gram bakterier, varmebehandlet ved 8 0°C i 5 min. Bakteriene ble varme-drept og lagret som et pulver. Dosen var 12 gram av preparatet pr. døgn i to administreringer pr. døgn. Sett ut fra et praktisk synspunkt, ble bakteriene resuspendert i 10 ml vann og gitt ved oral administrering. Den dag hvor studiet startet ble definert som dag 0. De nødvendige tilførselsintervaller hvorunder pasientene måtte motta preparatet de var tilfeldig utvalgt til, var 21 døgn, begynnende med dag 0. Etter dette tilførselsintervall, var undersøkeren fri til å gi hvilken som helst næringstilførsel som synes passende for resten av sykehusoppholdet.

Pasientenes immunkompetanse ble bestemt ved å måle antallet T CD4+ celler før og etter behandling, ved anvendelse av et monoklonalt antistoff mot CD4 og et flow-cytometer (Becton Dickinson).

Resultatene er angitt i tabell II.

TABELL II

Antall T CD4+ lymfocytter fra perifert blod uttrykt som absolutt antall celler pr. mm<3>.

De ovennevnte data viser at pasientene i gruppe B hadde en immunstimulering etter den kombinerte behandling. Ingen signifikant modifikasjon ble observert i pasienter behandlet med NUTRINAUT alene.

Claims (12)

1. Enteralt diettpreparat, karakterisert ved at det omfatter en blanding av melkesyrebakterier bestående av Streptpcoccus thermophilus. Bifidobacterium lonaum og Bifidobacterium infantis. hvor Streptococcus thermophilus er tilstede i en konsentrasjon som er lik eller større enn lxlO<11> CFU pr. gram Streptococcus thermophilus bakterier, Bifidobacterium lonaum er tilstede i en konsentrasjon som er lik eller større enn lxlO<11>CFU pr. gram Bifidobacterium longum bakterier og Bifidobacterium infantis er tilstede i en konsentrasjon som er lik eller større enn lxlO<10> CFU pr. gram Bif idobacterium infantis bakterier.

2. Enteralt diettpreparat som angitt i krav 1, karakterisert ved at de nevnte bakterier er levende.

3. Enteralt diettpreparat som angitt i krav l, karakterisert ved at de nevnte bakterier er døde.

4. Enteralt diettpreparat som angitt i krav l, karakterisert ved at Streptococcus thermophilus er tilstede i en konsentrasjon fra lxlO<11> til lxlO<14> CFU/gram Streptococcus thermophilus bakterier, Bifidobacterium longum er tilstede i en konsentrasjon fra lxlO<11> til lxlO<14> CFU/gram Bifidobacterium longum bakterier, og Bifidobacterium infantis er tilstede i en konsentrasjon fra lxlO1<0> til lxlO<13> CFU/gram Bifidobacterium infantis bakterier.

5. Enteralt diettpreparat som angitt i krav 1, karakterisert ved at det er flytende.

6. Enteralt diettpreparat som angitt i krav l, karakterisert ved at det er en kapsel.

7. Anvendelse av en blanding av melkesyrebakterier bestående av Streptococcus thermophilus. Bifidobacterium longum og Bifidobacterium infantis, hvor Streptococcus thermophilus er tilstede i en konsentrasjon som er lik eller større enn lxlO<11 >CFU pr. gram Streptococcus thermophilus bakterier, Bif idobacterium Ipnc fum, er tilstede i en konsentrasjon som er lik eller større enn lxlO<11> CFU pr. gram Bifidobacterium longum bakterier og Bifidobacterium infantis er tilstede i en konsentrasjon som er lik eller større enn lxlO<10> CFU pr. gram Bifidobacterium infantis bakterier, for fremstilling av et enteralt diettpreparat som er tilpasset til å modifisere sammensetningen av den humane tarmflora in vivo.

8. Anvendelse av en blanding av melkesyrebakterier bestående av Streptococcus thermophilus. Bifidobacterium longum og <p>jfidobacterium infantjg, hvor Streptococcus thermophilus er tilstede i en konsentrasjon som er lik eller større enn lxlO<11 >CFU pr. gram Streptococcus thermophilus bakterier, Bj f idobacterium longum. er tilstede i en konsentrasjon som er lik eller større enn lxlO<11> CFU pr. gram Bif idobacterium longum. bakterier og Bjfidobacterjum infanti s er tilstede i en konsentrasjon som er lik eller større enn lxlO<10> CFU pr. gram Bifidobacterium infantis bakterier, for fremstilling av et enteralt diettpreparat som er tilpasset til å stimulere immunsystemet.

9. Anvendelse av en blanding av melkesyrebakterier besstående av Streptococcus thermophilus. Bifidobacterium lonaum og Bifidobacterium infantis. hvor Streptococcus thermophilus er tilstede i en konsentrasjon som er lik eller større enn lxlO<11 >CFU pr. gram StreptocQgcu, s thermophilus bakterier, Bifidobacterium lonaum er tilstede i en konsentrasjon som er lik eller større enn lxlO<11> CFU pr. gram Bifidobacterium longum bakterier og Bifidobacterium infantis er tilstede i en konsentrasjon som er lik eller større enn lxlO<10> CFU pr. gram Bifidobacterjum infantis bakterier, for fremstilling av et enteralt diettpreparat som er tilpasset til å forbedre diaré eller tarmforstyrrelser i en pasient i et enteralt eller parenteralt elementærdiett-tilførselsprogram.

10. Anvendelse av en blanding av melkesyrebakterier bestående av Streptococcus thermophilus. Bjfidobagterium longum og Bifidobacterium infantis, hvor Streptococcus thermophilus er tilstede i en konsentrasjon som er lik eller større enn lxlO<11> CFU pr. gram Streptococcus thermophilus bakterier, Bifidobacterium longum er tilstede i en konsentrasjon som er lik eller større enn lxlO<11> CFU pr. gram Bifidobacterium lonaum bakterier og Bifidobacterium infantis er tilstede i en konsentrasjon som er lik eller større enn lxlO<10>CFU pr. gram Bifidobacterium infantis bakterier, som supplement til et flytende, kremaktig eller pastaaktig næringsmiddel, hvor nevnte supplering gjennomføres på tidspunktet for konsumering av næringsmiddelet.

11. Anvendelse som angitt i krav 10 hvor nevnte næringsmiddel er et melkeprodukt, et melkebasert produkt eller et melkeavledet produkt, eller et produkt basert på eller avledet fra vegetabilske produkter.

12. Kit, karakterisert ved at det omfatter: - en beholder A inneholdende en blanding av melkesyrebakterier bestående av Streptococcus thermophilus. Bif idobacterium longum og Bif idobacterium infiantjs, hvor Streptococcus thermophilus er tilstede i en konsentrasjon som er lik eller større enn lxlO<11> CPU pr. gram Streptococcus thermophilus bakterier, Bifidobacterium longum er tilstede i en konsentrasjon som er lik eller større enn lxlO<11> CFU pr. gram Bifidobacterium lonaum bakterier og Bifidobacterium infantis er tilstede i en konsentrasjon som er lik eller større enn lxlO<10> CFU pr. gram Bifidobacterium infantis bakterier, og - en beholder B inneholdende et flytende, kremaktig, eller pastaaktig næringsmiddel, hvor begge de nevnte beholdere er lukkede og kan åpnes på tidspunktet for konsumering av nevnte næringsmiddel, og hvor nevnte beholder A er innrettet for formålet med supplering av preparatet inneholdt deri til næringsmiddelet inneholdt i beholder B på tidspunktet for konsumering av nevnte næringsmiddel.