NO311218B1

NO311218B1 - Nye disubstituerte trans-3,4,4a,5,6,10b-heksahydro-2H- naft[1,2-b]-1,4-oksaziner, en fremgangsmåte ved deres fremstillingog farmasöytiske sammensetninger inneholder disse

Info

Publication number: NO311218B1
Application number: NO19984007A
Authority: NO
Inventors: Jean-Louis Peglion; Jean-Christophe Harmange; Mark Millan; Francoise Lejeune
Original assignee: Servier Lab
Priority date: 1997-09-01
Filing date: 1998-08-31
Publication date: 2001-10-29
Also published as: PT899267E; HU226059B1; PL328285A1; ATE229513T1; CA2246482A1; ES2189108T3; HUP9801951A3; AU8302498A; HUP9801951A2; BR9803933A; FR2767825A1; NZ331637A; AU740928B2; EP0899267B1; DK0899267T3; HK1020340A1; DE69810034D1; JPH11130759A; CN1222516A; CA2246482C

Description

Foreliggende oppfinnelsen vedrører nye disubstituerte trans-3,4,4a, 5,6,10b-heksahydro-2H-naft [1,2, -b] -1,4-oksa-ziner, en fremgangsmåte ved deres fremstilling og farmasøy-tiske sammensetninger som inneholder disse.

Mer spesielt vedrører forbindelser med formel I:

hvor:

♦ A representerer:

et (Ci-Cio) alkyl radikal, som er rettkjedet eller forgrenet;

♦ E representerer:

hvor:

- Rx og R2, som kan være like eller forskjellige, hver representerer hydrogenatom, C^-Cg-alkyl, fenyl eller fenyl-C1-C4-alkyl hvor fenylgruppene eventuelt kan være

substituert med C^-Cs-alkoksy, og

- R3 representerer hydrogenatom.eller et rettkjedet eller forgrenet alkylradikal som har fra 1 til 5 karbonatomer ;

i racemisk form eller i form av optiske isomerer, og addisjonssaltene derav med en farmasøytisk akseptabel syre.

Forbindelsene med formel I virker som kraftfulle dopaminergiske ligander både in vitro og in vivo.

Dopaminergiske forbindelser er bredt anvendt terapeutiske

på grunn av deres fordelaktige effekter i psykiatriske

forstyrrelser og, perifert, i Jcaraiovasjcuiære rorscyr-relser.

Fem dopaminergiske reseptor undertyper (Dx til D5) har nå blitt klonet og karakterisert. På det nåværende tidspunkt virker den store hoveddel av medikamenter på det dopaminergiske systemet ved sin virkning på D2 under-typen, enten som blokkerer (eller antagonister) eller aktivatorer (eller agonister). Disse medikamentene har en rekke bieffekter: tardidyskinesi, hyperprolaktinemi, amenorrhea i tilfelle av den tidligere, og kardiovaskulære og motoriske effekter i tilfellet av den sistnevnte.

Ulik D2-reseptorer er konsentrasjonen av D3-reseptorer svært lav i de svartstripede kjernene og i laktotrofiske cellene. På en annen side er konsentrasjonen av D3-reseptorer, slik som D2-reseptorene, svært betydelig i det limbiske systemet. Den signifikante forskjellen i lokali-seringen av disse to undertypene av reseptorer oppmuntrer forskning på nye medikamenter som virker preferensielt på Dj-undertypen og bør resultere i minskning, eller ved bort-fallet av, bieffektene typisk assosiert med D2-undertypen som nevnt over.

På det nåværende tidspunktet kreves svært få produkter en slik virkningsmekanisme.

Teknikkens stand beskriver tricykliske forbindelser av aminotetralin (jfr. US patent beskrivelse Nr. 5.486611), men disse forbindelsene virker preferensielt på det seroto-ninergiske systemet og, mer presist, på SHT^-reseptor undertypen. Forbindelsene av den foreliggende oppfinnelsen skiller seg fra disse produktene både med hensyn på deres struktur og deres virknings spesifisitet.

Studier utført in vitro (binding til klonede humane D2- og D3-reseptorer) med forbindelsene av den foreliggende oppfinnelsen demonstrerer at disse forbindelsene virker som preferensielle ligander av D3-reseptorer, med mindre affi-nitet for D2-reseptoren.

Denne karakteristikken gjør forbindelsene av den foreliggende oppfinnelsen spesielt verdifulle med hensyn på det lave nivået av bieffekter som utøves.

Flere in vivo tester har bekreftet deres virkningsmekanisme (opptak av den ekstracellulære enhets elektrisk aktiviteten i de ventrale tegmentumområdet i rotten) og verdien av deres bruk i behandlingen av tallrike forstyrrelser i sen-tralnervesystemet .

Forbindelsene av den foreliggende oppfinnelsen har spesielt demonstrert sin aktivitet i den ultrasoniske vokali-seringstesten i rotten, den tvungende svømmetesten, og i "rotasjons"-testen i rotter lesjonert med 6-OH-DPAT.

Resultater oppnådd tillater således produktene av oppfinnelsen å bli fremsatt for behandlingen av angst, depresjon, aggressivitet, Parkinsons sykdom og schizofreni.

Den foreliggende oppfinnelsen vedrører også en fremgangsmåte ved fremstilling av forbindelser med formel I som karakteriseres ved:

- en trans-forbindelse med formel II:

hvor A er som definert tidligere,

- reageres med trifluormetansulfonsyre i nærvær av pyridin for å oppnå en trans-forbindelse med formel III:

hvor A er som definert tidligere,

- og den forbindelsen reageres:

• enten med sinkcyanid og tetrakis (trifenylfosfin)pal-ladium (0) i dimetylformamid med hevet temperatur for å oppnå en trans-forbindelse med formel Ia:

hvor A er som definert tidligere,

•eller med n-butylvinyleter under Heck-reaksjonsbetingelser for å oppnå en trans-forbindelse med formel Ib:

hvor A er som definert tidligere,

og, valgfritt,

forbindelsen Ia, oppnådd tidligere, behandles med en blanding av saltsyre og eddiksyre ved refluks for å oppnå en trans-forbindelse med formel Ic:

hvor A er som definert tidligere, - der forbindelse Ic valgfritt behandles: •enten med en forbindelse med formel IV:

hvor R3 er som definert tidligere,

i nærvær av saltsyre, for å oppnå en trans-forbindelse med formel Id:

hvor A og R3 er som definert tidligere, •eller med en forbindelse med formel V:

hvor Ri og R2 er som definert tidligere,

i nærvær av 2-(lH-benzotriazol-l-yl)-1,1,3,3-tetrametyluro-ium-tetrafluorborat, trietylamin og en katalytisk mengde av 4-dimetylaminopyridin i metylenklorid, for å oppnå en trans-forbindelse med formel le:

hvor A, Rx og R2 er som definert tidligere.

Totaliteten av trans-forbindelsene med formel Ia, Ib, Ic, Id og le utgjør totaliteten av trans-forbindelsene med formel I.

Startmaterialene med formel II ble fremstilt i henhold til fremgangsmåter beskrevet i litteraturen ved å starte fra kjente substanser.

De optisk aktive formene av forbindelsene med formel I ble oppnådd enten ved å starte fra de optisk aktive formene av startmaterialene med formel II, eller ved å skille de race-miske formene av forbindelsene med formel I, i henhold til fremgangsmåter kjent fra litteraturen.

Den foreliggende oppfinnelsen vedrører også farmasøytiske sammensetninger som omfatter som aktiv ingrediens en forbindelse med formel I eller et fysiologisk tolerebart salt derav, blandet med eller forbundet med en eller flere passende farmasøytiske eksipienter.

De således oppnådde farmasøytiske sammensetninger presen-teres generelt i doseringsform som inneholder fra 0,5 til 25 mg av aktiv ingrediens. De kan, for eksempel, være i form av tabletter, drops, gelatinkapsler, stikkpiller eller injiserbare eller drikkbare løsninger og kan bli administrert ved den orale, rektale eller parenterale ruten.

Doseringen kan variere i henhold pasientens alder og vekt, administrasjonsruten, forstyrrelsens natur og assosierte behandlinger, og strekker seg fra 0,5 til 25 mg med aktiv ingrediens fra 1 til 3 timer per dag.

De følgende eksemplene, som er gitt som ikke-begrensende eksempler, illustrerer den foreliggende oppfinnelsen. Smeltepunktene ble bestemt enten ved å bruke en Kofler-varmeplate (K), eller en varmeplate under en mikroskop (MK). Protonkjerne magnetisk resonans spektra (NMR) ble utført ved 200 MHz med mindre annet er indikert.

Eksempel 1: Trans-3/4#4a,5,6,10b-heksahydro-9-cyano-4-propyl-2H-nafto[1,2,b]-1,4-oksazin og dens hydroklorid

Trinn A: trans- 3, 4, 4a, 5, 6, 10b- heksahydro- 9- [ ( trifluor-metyl) sul fonyloksy] - 4- propyl- 2H- naf t [ 1, 2- b] - 1, 4- oksazin

18,7 ml trifluormetansulfonsyre anhydrid tilsettes langsomt til en løsning av 21,0 g med trans-3,4,4a,5,6,10b-heksahydro-9-hydroksy-4-propyl-2H-nafto[1,2, -b]-1,4-oksazin i 17 ml pyridin mens temperaturen opprettholdes ved fra 0°C til 5°C. Etter en times røring ved 0°C, konsentreres reaksjonsblandingen in vacuo. Inndampet residuet kromatograferes på en silikakolonne (eluent: CH2Cl2/CH3COOC2H5; 85/15) for å gi 22,4 g av det forventede produktet.

Smp. : 56°C-57°C (K)

Utbytte; 69%

Trinn B: Tittel forbindelse

2,39 g Zn(CN)2 og 1,34 g Pd [P (C6HS) 3]« tilsettes i rekke-følge, ved romtemperatur til en degassert løsning av 11,0 g av tittelforbindelsen fra trinn A i 55 ml dimetylformamid (DMF). Reaksjonsblandingen varmes i 3 timer ved 80°C. 2,39 g Zn(CN)2 og 1,34 g Pd[P(C6H5) 3] 4 tilsettes igjen i rekke-følge ved 80°C. Etter 18 timers varming ved 80°C, helles reaksjonsblandingen i 500 ml vann. Blandingen ekstraheres med etyleter. De organiske fasene kombineres og ekstraheres fire ganger med IN HCl. De vandige fasene kombineres, gjøres alkalin med natriumhydroksidløsning og ekstraheres med etyleter. De organiske fasene kombineres, vaskes en gang med saltoppløsning, tørkes over magnesiumsulfat og konsentreres in vacuo for å gi 6,27 g av det ønskede produktet. 1 g av produktet kromatograferes på en silikakolonne (eluent: CH2Cl2/CH3COOC2Hs; 90/10) for å gi 0,66 g av den forvendede basen, hydrokloridet av hvilken krystal-liseres fra etylacetat.

Smp.: 201-203°C (MK) (sublimasjon 190-195°C)

XH-NMR:300 MHz(DMSO)ds

11,6 ppm, m, 1H; 7,75 ppm, d, 1H; 7,7 ppm, dd, 1H; 7,4 ppm, d, 1H; 5,0 ppm, d, 1H; 4,25 ppm, d, 2H; 3,6 ppm, d, 1H; 3,45-3,15 ppm, m, 3H; 3,0 ppm, m, 3H; 2,5 ppm, m, 1H; 1,75 ppm, m, 2H; 0,95 ppm, t, 3H.

Eksempel 2: Trana-3,4,4a,5,6,10b-heksahydro-9-karbamoy1-4-propyl-2H-nafto[1,2-b]-1,4-oksazin

En løsning av 1 g av tittelproduktet fra Eksempel 1 i 37 ml etanol og 0,6 g av KOH varmes ved refluks. Etter 48 timer konsentreres reaksjonsblandingen in vacuo. Residuet tas opp 1 200 ml av en 95:5 CH2Cl2/CH3OH blanding. Løsningen, vaskes med to ganger med saltoppløsning og tørkes over magnesiumsulfat, konsentreres in vacuo for å gi 0,8 g av et faststoff som omkrystalliseres fra metanol.

Smp.: 200-202°C (MK)

Utbytte: 72%

<1>H-NMR: (DMS0)d6

7,94 ppm, s, 1H; 7,90 ppm, s, 1H (utbyttbar); 7,66 ppm, dd, 1H; 7,15 ppm, s, 1H (utbyttbar); 7,14 ppm, d, 1H; 4,20 ppm, d, 1H; 4,00 ppm, dd, 1H; 3,78 ppm, m, 1H; 2,98-2,70 ppm, m, 4H; 2,40-2,0 ppm, m, 4H; 1,60-1,35 ppm, m, 3H; 0,9 ppm, t,

3H.

Eksempel 3: ( + )- Trana- 3,4,4a,5,6,10b-heksahydro-9-karba-moyl-4-propyl-2H-nafto[1,2-b] -1,4-oksazin 2 g av tittelproduktet fra eksempel 2 kromatograferes med normal fase høytrykkskromatografi på en kiralbaerer (Chir-acel AD<®>, eluent: etanol 100%, strømningshastighet: 5 ml/min, deteksjon 240 nm) for å gi 0,72 g av den minst tilbakeholdte enantiomeren. Omkrystallisering fra metanol gir 0,7 g av tittelproduktet (ee>99%) .

Smp.: 200-202°C (MK)

<X>H-NMR: (DMSO)d6

3H.

[ct]<20>°<c>: (c=l%, CHClj) .

Eksempel 4t (-)-rran£r-3,4,4a,5,6,10b-heksahydro-9-karba-moyl-4-propyl-2H-nafto[1,2-b]-1,4-oksazin 2 g av tittelproduktet fra eksempel 2 kromatograferes på normal fase høytrykkskromatografi på en kiralbærer (Chira-cel AD<®>, eluent: etanol 100%, strømningshastighet: 5 ml/min, deteksjon 240 nm) for å gi 0,71 g av den mest tilbakeholdte enantiomeren. Omkrystal li sering fra metanol gir 0,69 g av tittelproduktet (ee>99%).

Smp.: 200-202°C (MK)

<1>H-NMR: (DMS0)ds

3H.

[a]20°c: (c=l%, CHC13) .

Eksempel 5: 2'rans-3,4,4a,5,6,10b-heksahydro-9- (N-metylkar-bamoyl)-4-propyl-2H-nafto[1,2-b]-1,4-oksazin

Trinn A: trans- 3, 4, 4a, 5, 6, 10b- heksahydro- 9- ( N- metylkarba-moyl) - 4- propyl- 2H- nafto [ 1, 2- b] - 1, 4- oksazin 68 ml av 36% saltsyre tilsettes ved romtemperatur til en løsning av 6,14 g av tittelforbindelsen fra eksempel 1 i 68 ml iseddik. Etter 18 timer ved refluks, bringes reaksjonsblandingen til tørrhet. Det faste stoff residuet tritureres i etyleter, filtreres og tørkes for å gi 8,65 g siv et hvitt pulver som omkrystalliseres fra 80 ml vann. 6,9 g av det ønskede produktet blir oppnådd.

Smp.: 260°C (K)

Utbytte; 89%

Trinn B: Tittel forbindelse av eksemplet

Monometylamin introduseres i løpet av en time, ved romtemperatur, til en løsning av 1 g av forbindelsen oppnådd over., 1,13 g 2-(lH-benzotriazol-l-yl)-1,1,3,3,-tetrametyl-uronium-tetraf luorborat (TBTU) og 1,1 ml trietylamin i 14 ml metylenklorid. Etter 18 timers røring ved romtemperatur, fortynnes reaksjonsblandingen med metylenklorid, vaskes en gang med IN NaOH og tre ganger med H20, tørkes over magnesiumsulfat og konsentreres deretter in vacuo. Det faste residuet (1,14 g) omkrystalliseres fra 100 ml etylacetat for å gi 0,41 g av tittelforbindelsen.

Smp.: 179-180°C

Utbytte; 44%

^-NMR-.SOO MHz(CDCl3)

7,8 ppm, s, 1H; 7,7 ppm, d, 1H; 7,1 ppm, d, 1H; 6,2 ppm, m, 1H (utbyttbar); 4,3 ppm, d, 1H; 4,1-3,9 ppm, m, 2H; 2,98 ppm, s, 3H; 2,9 ppm, m, 2H; 2,9 ppm, m, 1H; 2,8-2,45 ppm, m, 2H; 2,3 ppm, m, 2H; 2,3-1,6 ppm, m, 2H; 1,5 ppm, m, 2H; 0,9 ppm, t, 3H.

Eksempel 6; Trans-3,4,4a,5,6,10b-heksahydro-9-(N,N-dimetyl-karbamoyl)-4-propyl-2H-nafto[1,2-b]-1,4-oksazin 1 g av produktet oppnådd i eksempel 5, trinn A behandles som beskrevet i eksempel 5, trinn B (ved å bruke dimetyl-amin istedenfor monometylamin) for å gi 0,46 g av tittelproduktet etter å ha gjort produktet fast i isopropyleter.

Smp.; 85-87°C

Utbytte; 47%

'H-NMRtSOO MHz(CDC13)

7,6 ppm, S, 1H; 7,2 ppm, d, 1H; 7,1 ppm, d, 1H; 4,30 ppm, d, 1H; 4,1-3,9 ppm, m, 2H; 3,05 ppm, s, 6H; 2,9 ppm, m, 2H; 2,9 ppm, m, 1H; 2,8-2,5 ppm, m, 2H; 2,2 ppm, m, 2H; 2,3-1,5 ppm, m, 2H; 1,5 ppm, m, 2H; 0,9 ppm, t, 3H.

Eksempel 7; Trans-3,4,4a,5,6,10b-heksahydro-9-(N-butylkar-bamoyl)-4-propyl-2H-nafto[1,2-b]-1,4-oksazin 1 g av produktet blir oppnådd i eksempel 5, trinn A, 1,13 g av TBTU og 0,26 g n-butylamin suspenderes i 14 ml metylenklorid ved romtemperatur. 1,1 ml trietylamin tilsettes ved romtemperatur og reaksjonsblandingen røres i 18 timer ved den temperaturen. Reaksjonsblandingen fortynnes med metylenklorid, vaskes en gang med IN NaOH og tre ganger med H20, tørkes over magnesiumsulfat og konsentreres deretter in vacuo. Det oljeaktige residuet gjøres til faststoff i isopropyleter for å gi 0,6 g av tittelproduktet.

Smp. : 128-131°C (MK)

Utbytte; 56%

'H-NMR.-300 MHz(CDCl3)

7,8 ppm, s, 1H; 7,7 ppm, d, 1H; 7,15 ppm, d, 1H; 6,15 ppm, t, 1H (utbyttbar); 4,1-3,95 ppm, m, 2H; 3,4 ppm, C[, 2H; 3,0 ppm, m, 1H; 2,85-2,5 ppm, m, 2H; 2,3 ppm, m, 2H; 2,3 ppm,

m, 2H; 2,3-1,6 ppm, m, 2H; 2,3-1,6 ppm, m, 2H; 1,6-1,4 ppm, m, 6H; 0,9 ppm, t, 3H.

Eksempel 8; Trans-3,4, 4a, 5,6,10b-heksahydro-9- (N-p-metoksy-fenylkarbamoyl)-4-propyl-2H-nafto[1,2-b]-1,4-oksazin

0,8 g av produktet oppnådd i eksempel 5, trinn A, 0,9 g av TBTU, en katalytisk mengde 4-dimetylaminopyridin og 0,35 g p-metoksyanilin suspenderes i 11 ml metylenklorid ved romtemperatur. 0,9 ml trietylamin tilsettes ved romtemperatur og reaksjonsblandingen røres i 18 timer ved denne temperaturen. Reaksjonsblandingen fortynnes med metylenklorid, vaskes en gang med IN NaOH og tre ganger med H20, tørkes over magnesiumsulfat og konsentreres deretter in vacuo. Det faste residuet omkrystalliseres fra etylacetat for å gi 0,42 g av tittelproduktet.

Smp. : 185-186°C (MK)

Utbytte: 43%

'H-NMR^OO MHz(CDC13)

7,92 ppm, s, 1H; 7,85 ppm, d, 1H; 7,8 ppm, m, 1H (utbyttbar); 7,5 ppm, d, 2H; 7,2 ppm, d, 1H; 6,9 ppm, d, 2H; 4,3 ppm, d, 1H; 4,1-3,45 ppm, m, 2H; 3,8 ppm, s, 3H; 2,95 ppm, m, 1H; 2,9 ppm, m, 2H; 2,8-2,5 ppm, m, 2H; 2,3-1,6 ppm, m, 2H; 1,6 ppm, m, 2H; 0,9 ppm, t, 3H.

Eksempel 9: Trans-3,4, 4a, 5,6, lOb-heksahydro-9- (N-p-metoksy-beznylkarbamoyl)-4-propyl-2H-nafto[1,2-b]-1,4-oksazin

0,7 g av produktet oppnådd i eksempel 5, trinn A behandles som beskrevet i eksmepel 7 (ved å bruke p-metoksybenzylamin istedenfor n-butylamin) for å gi 0,34 g av tittelproduktet etter omkrystallisering fra etylacetat.

Smp. ; 148-150°C (MK)

Utbytte: 38%

<X>H-MMR:300 MHz(CDCl3)

7,85 ppm, d, 1H; 7,75 ppm, dd, 1H; 7,3 ppm, d, 2H; 7,2 ppm, d, 1H; 6,9 ppm, d, 2H; 6,4 ppm, t, 1H (utbyttbar); 4,6 ppm, m, 2H; 4,3 ppm, d, 1H; 4,1-3,95 ppm, m, 2H; 3,8 ppm, S, 3H; 2,9 ppm, m, 4H; 2,3 ppm, m, 4H; 1,5 ppm, m, 3H; 0,9 ppm, t, 3H.

Eksempel 10: Trans-3,4,4a, 5,6,10b-heksahydro-9-etoksy-karbonyl-4-propyl-2H-nafto[1,2-b]-1,4-oksazin og dens hydroklorid 1 g av tittelforbindelsen fra eksempel 1 løses i en blanding av 15 ml kloroform og 15 ml etanol. Løsningen avkjøles ved 0°C og en strømm av gassformig HC1 introduseres boble for boble i 1 time. Blandingen bringes i romtemperatur og røres i 24 timer. Blandingen konsentreres deretter in vacuo, tas opp i 100 ml fosfatbuffer og røres i 3 dager ved romtemperatur. Løsningen gjøres basisk med 1N-natriumhydroksidløsning og ekstraheres med metylenklorid. Inndamping gir 1 g av tittelproduktet, som konverteres til sitt hydrogenklorid på en 4N-løsning av eterealhydroklorid. Vekt: 1,05 g.

Smp. : 220-221°C (MK)

Utbytte: 79%

'H-NMR^OO MHz(CDCl3)

13,20 ppm, stor s., 1H (utbyttbar); 8,18 ppm, s, 1H; 7,92 ppm, dd, 1H; 7,18 ppm, d, 1H; 8,35 ppm, d, 1H; 4,70 ppm, d, 1H; 4,38 ppm, g, 2H; 4,22 ppm, dd, 1H; 3,55 ppm, d, 1H; 3,33 ppm, td, 1H; 3,00 ppm, m, 5H; 2,57 ppm, m, 1H; 2,40 ppm, m, 1H; 2,02 ppm, m, 1H; 1,80 ppm, m, 1H; 1,40 ppm, t, 3H; 1,05 ppm, t, 3H.

Eksempel 11: Trans-3,4,4a,5,6,10b-heksahydro-9-acetyl-4-propyl-2H-nafto[1,2-b]-1,4-oksazin og dens hydroklorid 1,3 g av forbindelsen oppnådd i trinn A i eksempel 1 løses i 10 ml DMF. Ved romtemperatur tilsettes 0,57 ml trietylamin, 2,22 ml n-butyl-vinyleter, 42 mg av 1,3-bis-(difenyl-

fosfino)propan og 19,3 mg

Løsningen varmes i 3 timer ved 80-90°C deretter etter å returnere til romtemperatur tilsettes 15 ml IN HC1. Røringen fortsetter i 1 time. Reaksjonsblandingen fortynnes deretter med IN HCl og løsningen vaskes flere ganger med eter. Den vandige fasen gjøres alkalisk med natriumhy-droksidløsning og ektraheres fire ganger med metylenklorid. Inndamping og rensing ved flash-kromatografi (CH2C12/-CH3COOC2HS:90/10 og 80/20) gir 0,61 g av det forventede produktet, hydrokloridet av hvilket fremstilles ved virkningen av eterealhydrogenklorid. Vekt: 0,57g.

Smp.: 225-226°C (MK)

Utbytte: 54%

'H-NMR^OO MHz(DMSO)

11,58 ppm, s, 1H (utbyttbar); 8,03 ppm, s, 1H; 7,88 ppm, d, 1H; 7,33 ppm, d, 1H; 5,01 ppm, d, 1H; 4,22 ppm, d, 2H; 3,58 ppm, d, 1H; 3,40 til 3,20 ppm, m, 4H; 3,15 til 2,90 ppm, m, 3H; 2,55 ppm, s, 3H; 2,04 ppm, m, 1H; 1,72 ppm, m, 2H; 0,98 ppm, t, 3H.

Eksempel 12: Farmasøylogisk studie

A. In vi tro: human D3- og D3- reseptor bindings studie

Cellekultur

CHO (Kinesisk Hamster Ovarium) celler overføres på en stabil måte med genet som koder for den humane dopamin D2-eller D3-reseptoren i henhold til fremgangsmåter kjent fra litteraturen. De native celler er defisiente på enzymet DHFR (DiHydroFolat Reduktase) . Cellene dyrkes i en inkubator ved 37°C i en fuktig atmosfære av 5% C02, 95% luft. Overføringene utføres ved å bruke Lipfektin (Gibco). CHO-cellene ko-overføres med den humane D2-reseptoren og det flermycin resistante genet velges for sine resistens mot nærværet av at antibiotika i dyrkningsmedium. Cellene overført med den humane D3-reseptoren velges i nærvær av metotreksat i et medium som inneholder ingen hypoksantin/- tymidin. Sammensetningene av kulturmediene brukt er: for CHO-D2:DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) supplementert med 10% foetalt kalveserum og hypoksantin/tymidin; og for CHO-Dj :DMEM supplementert med 10% dialysert foetalt kalveserum. Cellene høstes ved konfluenter og membranene fremstilles deretter.

♦ Membrannfremstilling

Etter noe få minutter i nærvær av 0,2% trypsin, gjenvinnes cellene og sentrifugeres ved 2,000 g i 5 minutter. Celle-massen, som re-suspenderes i 10 mM Tris-HCl-buffer, pH 7,5, som inneholder 5 mM MgS04, passeres deretter over Poly-tron®. Homogenatet sentrifugeres deretter ved 50,000 g i 15 minutter, og massen re-suspenderes ved forsiktig sonikering i en inkubasjonsbuffer av den følgende sammen-setningen: 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, som inneholder 120 mM NaCl, 5 mM KC1, 2 mM CaCl2, 5 mM MgCl2. Membrannene divi-deres deretter i aliquoter og lagres ved -80°C til eksperiment dagen.

♦ Bindingseksperimenter

Inkuberingen utføres i polypropylenrør i et endelig volum på 400 ul inneholdende:

100 ul [<125>I] -iodsulprid (Amersham)

ved 0,1 og 0,2 nM for henholdsvis D2- og D3-reseptorene, 100 ul buffer (total rør)

eller 100 ul 10 uM racloprid (ikke-spesifikk binding)

eller 100 ul forbindelse

200 (al membran preparasjon inneholdende D2- eller D3-reseptorene i en buffer til hvilken 0,2% BSA (bovinserum-albumin) har blitt tilsatt.

Konsentrasjonsområder av hver forbindelse inkluderer minst sju punkter bestemt i triplikat, hvert eksperiment blir repetert minst to ganger.

Inkuberingen, som varer i 30 minutter ved 30°C, termineres ved hjelp av rask filtrering over et Brandle - apparat, etterfulgt av tre konsekutive rensing med Tris-HCl buffer, pH 7,4, inneholdende 120 mM NaCl. De gjenvinnende filterene blir deretter telt ved å bruke et gamma-teller.

♦ Analyse av resultatene

IC50, som representerer konsentrasjonen som inhiberer bindingen av radioliganden med 50%, beregnet ved ikke-lineær regresjon (Prism Graph-metoden).

Ki-verdien avledes fra formelen K^ IC^/ (1+L/Kd) der L er konsentrasjonen av [125I] -iodosulprid anvendt i eksperimentet og Kd er dens dissosiasjonskonstant. Resultatene uttrykkes i form av pK£ (<p>K^-logR^ .

For de humane D2- og D3-reseptorene er Kd henholdsvis 0,5 og 1,31 nM.

♦ Resultater

Eksempelvis har produktet i eksempel 3 en pKt på 8 for D3-reseptoren og 6,5 for D2-reseptoren.

B. In vivo

1. Testopptak av enhets ekstracellulær elektrisk aktivitet i det ventrale tegmentum område i rotten

♦ Prinsipp

Administrasjon av en dopaminergisk agonist senker utstrøm-ningsfrekvensen av neuroner på en dose-avhengig måte. Den effekten reverseres med haloperidol, en dopaminergisk anta-gonist .

♦ Fremgang småt e

Rottene anaesteres med kloralhydrat (400 mg/kg, i.p.) og plasseres i et stereotaktisk apparat (Unimécanique, Frankrike) etter kateterisering av den femorale vene. Nivået av anaestersi opprettholdes ved i.p. administrasjon av kloralhydrat hver time; den rektale temperaturen opprettholdes ved 37±1°C ved hjelp av et termostatisk kontrollert varme-teppe. En walfram mikro elektrode (10 Mfi, lum) innsettes ved å bruke en elektronisk mikroinnsetningsanordning (Unimécanique, Frankrike) inn i det ventrale tegmentum område (AP: -5,5/bregma; L:0,7; H:7,0-8,5/dura; Paxinos and Watson atlas, 1986). Potensiellene av de dopaminergiske cellene gjenkjennes ved deres morfologi (trifasisk potensieller +/-/+, av en varighet større enn 3 msek), deres utstrømningsrytme, enten regulær eller i utbrudd av avtagende amplitude, og deres utstrømningsrytme, som er fra 2 til 8 Hz. En enkel celle per dyr anvendes for opptaket.

Etter en periode > 5 min. (basal aktivitet) og en første injeksjon av bærer (destillert vann til hvilket noe få dråper med fortynnet melkesyre har blitt tilsatt; pH justert til 5 med IN NaOH) , administreres produkter av oppfinnelsen intravenøs i kumulativt stigende doser med intervaler på 2-3 minutter.

♦ Analyser av resultatene

Opptak av data utføres av programvaren Spike2 (Cambridge Electronic Design, England). Utstrømningsfrekvensen måles over ett minutt ved maksimums variasjonen mellom hver injeksjon og uttrykkes som prosentendring i forhold til basal aktivitet (gjennomsnitt av de 5 minuttene før den første behandling) definert som 100%. Effekten av produkter evalueres statistisk med en variasjonsanalyse over gjentatte målinger, etterfulgt av en Newman-Keuls-test for sammenligning av effektene av ulike doser med effekten av bæreren.

♦ Resultater

Eksempelvis viser tabellen som følger effekten av produktet i eksempel 3.

Individuelle verdier ( n=4) = gjennomsnitt±standard feil av gjennomsnittet.

Sammenligning av effektene av ulike doser av forbindelsen med varians analyse av gjentatte målinger: Eksempel 3, F ( 6, 18) =166, p<0, 001. Newman- Keuls test: * =p<0, 001. ;2. Ultrasonisk vokaliseringstest i rotten ;Prinsipp ;Når en rotte plasseres i et miljø tidligere forbundet med en ubehagelig opplevelse (elektrisk sjokk i lemmene), vises dets angst ved utsendelse av ikke-hørbare skrikk (eller ultrasoniske vokaliseringer). Anxiolytisk aktiviteten av et produkt demonstreres ved en reduksjon i varigheten av disse vokaliseringene. ;♦ Apparat ;Standard bur (Coulbourn Instruments), plasserse i lyd-absorberende ventilerte bokser, fylles med et lag sammen-satt av elektrifiserbare metallsbarrer (sjokk-generator og skramble Med Associates Inc) og med en mikrofon lokalisert i senteret av taket. Ultralydene, konverteres til et hør-bart område (bat-detektor Buitenbedrijf). Signaler modifi-sert på denne måte filtreres og prosesseres deretter (RTS-programvare, Engineering Design). Spektrogrammene opptatt tas opp på DAT-bånd. ;♦ Fremgangmåte ;Hann-Wistar-rotter, som veier 180-200 g ved ankomst, plasseres i burene på fire med fri tilgang til vann og mat fra fem dager før begynnelsen av studium til slutten av studium. Prosedyren anvendt deles i tre etterfølgende trinn separert med 24 timer, kalt trening, seleksjon og test. I løpet av treningsperioden plasseres dyrende individuelt i burene hvor de mottar seks elektriske sjokk (0,8 mA, 8 s) tilfeldig fordelt over en periode på sju minutter. Utvel-gelse omfatter å plassere hvert dyr i et bur i to minutter hvor dyr et enkelt sjokk og å putte dem tilbake i buret 3 0 minutter senere for å oppta de ultrasoniske vokaliseringer i en periode på ti minutter; de dyrene hvor varigheten av vokaliseringene er mindre enn 90 sekunder eksploderes fra resten av eksperimentet. Testfasen foregår på en til-svarende måte som seleksjonstrinnet, unntatt at produktene eller bæreren er administreres ved slutten av to minutters perioden. ;♦ Resultater ;Eksempelvis viser tabellen som følger effekten av produktet fra eksempel 3 administrert subkutant i et volum på 1 ml/kg. ;st. a. : standardavvik av gjennomsnittet ;n: antall rotter ;sammenligning versus bærer ( Dunnett test) : * p<0, 01

Ved doser på 0,04 og 0,16 mg/kg, forårsaket det produktet en stor reduksjon i utstrekkingen av vokaliseringer, som indikerer dets anxiolytiske aktivitet.

3. Tvunget svømmetest

♦ Prinsipp

Det tvungende svømmetesten (Porsolt R. et al, Eur. J. Pharmacol., 1978, 47, 379-91) er en oppførselstest som omfatter å indusere en tilstand av desparasjon i rotten ved å plassere det naturlige dyret i en innesperring for vann, som virket det ikke kan slippe, i en periode på femten minutter. I de første fem til ti minuttene kjemper rotten kraftig, men til slutt tar den i bruk en ubevegelig positur i løpet av siste delen av testen. Plassert i det samme innesperring den neste dag, forblir dyret ubevegelig i største delen av testen (5 minutters varighet) . Anti-depressive reduserer varigheten av ubevegeligheten av rotten i løpet av testen.

♦ Prosedyre

Eksperimentet utføres over to dager, med et 24-timers in-terval, på rotter med en gjennomsnittlig vekt på 170 g, huset dagen før i individuelle bur, med fri tilgang til mat og drikke.

På den første dagen plasseres hver rotte i femten minutter i en glasssylinder (20 cm diameter x 40 cm høyde) fylt med en høyde på 15 cm med vann opprettholdt ved 25°C. På den andre dagen plasseres dyret i en sylinder igjen i en periode på fem minutter; den totale periode av ubevegelighet (i sekunder) av rotten måles. Produktet eller løse-midlet administreres til dyret 3 0 minutter før begynnelsen av testen.

♦ Resultater

Eksempelvis og for å illustrere aktiviteten av produktene av oppfinnelsen er effektene av produktet i eksempel 3 tatt opp i den følgende tabellen.

( n) = antall rotter

Produktet i eksempel 3 reduserer perioden av ubevegelighet hos dyret på en dose-avhengig måte, presenterer således en utmerket anti-depressiv effekt med en ID50 på 0,41 mg/kg s. c. 4. "" Rotasjoner" indusert av dopaminergiske agonister i rotter som har en unilateral lesjon av det svarte hjernevevet

♦ Prinsipp

Den unilaterale injeksjonen av neruotoksin 6-hydroksy-dopamin (6-OH-DA) i det svarte hjernevevet forårsaker degene-rering av de oppadgående svartstripede baner, med hypersen-sitivitet av de post-synaptiske dopaminergiske reseptorene på side av lesjonen. I en rotte underkastet en slik lesjon, induserer systematisk administrasjon av direkte agonistpro-dukter (apomorfin) kontralaterale rotasjoner (på motsatt side av lesjonen). Denne testen gjør det mulig å vise de agonistiske dopaminergiske egenskapene av produktene rettet terapeutisk mot Parkinsons sykdom.

♦ Fremgangsmåte

Lesjon: lesjonen lages i hann-Wistar-rotter som veier fra 280 til 330 g som er anasertetisert vd pentobarbital (40-50 mg/kg i.p.) og som har mottatt en dose av 25 mg/kg i.p. av desipramin. Dyret plasseres i et KOPF-stereotaktisk apparat, med kranium orientert i overensstemmelse med Pelle-grino og Cushman Atlas (1979). Et volum på 4 ul av en løsning med 6-OH-DA (2 ug/ul) injiseres langsomt, ved å bruke en mikroperfusator, på et nivå med venstre svarte hjernevev (A=2,4 mm; L=2,0 mm; V=3,1 mm, i relasjon til det interaurale null) (U.Ungerstedt, Acta Physiol. Scandi.-Suppl., 1971, 367, 69-93).

Apparat: Opptaket av antall og retning på rotasjonene utføres automatisk av en datamaskin ved å bruke ROTACOUNT-system (Columbus Co, USA). Dyret plasseres i en flat-bunnet sylinder som er 3 0 cm i diameter og 50 cm høy. En fin semi-rigid kabel går rundt dyret under forlemmene og bundet med en optisk tellecelle som er lokalisert over sylinderen og forbundet med datamaskinen.

Seleksjon av dyrene med lesjon: en måned etter å ha indusert lesjonen med 6-OH-DA, velges det korrekt lesjonerte dyrene i overensstemmelse med en kriteri av minst 150 kontralaterale rotasjoner utført i løpet av 1 time etter administrasjon av den dopaminergiske agonisten apomorfin (0,04 mg/kg, s.c.).

Prosedyre: dyrene testes en gang per uke, produkter av oppfinnelsen administreres i veksling med den dopaminergiske agonisten. Opptak av kontralaterale rotasjoner binder med injeksjon av den dopaminergiske agonisten (TO) og varer i en time. Hvert dyr har sin egen kontroll.

Resultater

Eksempelvis viser den følgende tabellen effektene av produktet fra eksempel 3 administrert s.c.

( n) = antall rotter

Produktet fra eksempel 3 er aktivt i denne testen fra en dose på 0,04 mg/kg.

Claims

1. Forbindelser med formel I: hvor: ♦ A representerer: et (Ci-Ci,,)alkylradikal, som er rettkjedet eller forgrenet; ♦ E representerer: hvor: - Rx og Rj, som kan være like eller forskjellige, hver representerer hydrogenatom, Cj-Cg-alkyl, fenyl eller fenyl-Ci-C^-alkyl hvor fenylgruppene eventuelt kan være substituert med Ci-Cg-alkoksy, og - R3 representerer hydrogenatom eller et rettkjedet eller forgrenet alkylradikal som har fra 1 til 5 karbonatomer; i racemisk form eller i form av optiske isomerer, og addisjonssaltene derav med en farmasøytisk akseptabel syre.

2. Forbindelse ifølge krav 1, som er trans-3,4,4a,5,6,-10b,heksahydro-9-cyano-4-propyl-2H-nafto[1,2-b]-1,4-oksazin og dets hydroklorid.

3. Forbindelse ifølge krav 1, som er trans-3,4,4a,5,6,-10b,heksahydro-9-karbamoyl-4-propyl-2H-nafto[1„2-b]-1,4-oksazin.

4. Forbindelse ifølge krav 1, som er (+)-trans-3,4,4a,-5,6,10b,heksahydro-9-karbamoyl-4-propyl-2H-nafto[l,2-b]-1,4-oksazin.

5. Fremgangsmåte ved fremstillingen av forbindelser ifølge krav 1, karakterisert ved at: - en trans-forbindelse med formel II: hvor A er som definert i krav 1, - reageres med trifluormetansulfonsyre i nærvær av pyridin for å oppnå en trans-forbindelse med formel III: hvor A er som definert tidligere, - og den forbindelsen reageres: •enten med sinkcyanid og tetrakis(trifenylfosfin)pal-ladium (0) i dimetylformamid med hevet temperatur for å oppnå en trans-forbindelse med formel Ia: hvor A er som definert tidligere, •eller med n-butylvinyleter under Heck-reaksjonsbetingelser for å oppnå en trans-forbindelse med formel Ib: hvor A er som definert tidligere, og, valgfritt, forbindelsen Ia, oppnådd tidligere, behandles med en blanding av saltsyre og eddiksyr ved refluks for å oppnå en trans-forbindelse med formel Ic: hvor A er som definert tidligere, der forbindelse Ic valgfritt behandles: •enten med en forbindelse med formel IV: hvor R3 er som definert i krav 1, i nærvær av saltsyre, for å oppnå en trans-forbindelse med formel Id: hvor A og R3 er som definert tidligere, •eller med en forbindelse med formel V: hvor Rx og R2 er som definert i krav 1, i nærvær av 2-(lH-benzotriazol-l-yl)-1,1,3,3-tetrametyluro-ium-tetrafluorborat, trietylamin og en katalytisk mengde av 4-dimetylaminopyridin i metylenklorid, for å oppnå en trans-forbindelse med formel le: hvor A, R2 og R2 er som definert tidligere.

6. Farmasøytiske sammensetninger, som kan anvendes i behandlingen av forstyrrelser i sentral nervesystemet, hvilke omfatter som aktiv ingrediens en forbindelse ifølge ethvert av kravene 1 til 4 sammen med en eller flere passende farmasøytiske eksipienter.