NO178928B - Analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt konjugat av rhodiumkompleks - Google Patents

Analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt konjugat av rhodiumkompleks Download PDF

Info

Publication number
NO178928B
NO178928B NO882784A NO882784A NO178928B NO 178928 B NO178928 B NO 178928B NO 882784 A NO882784 A NO 882784A NO 882784 A NO882784 A NO 882784A NO 178928 B NO178928 B NO 178928B
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
antibody
rhodium
group
methyl
tet
Prior art date
Application number
NO882784A
Other languages
English (en)
Other versions
NO882784L (no
NO882784D0 (no
NO178928C (no
Inventor
Jr William J Kruper
Douglas K Pollock
William A Fordyce
Michael J Fazio
Muthiah N Inbasekaran
Original Assignee
Dow Chemical Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dow Chemical Co filed Critical Dow Chemical Co
Publication of NO882784D0 publication Critical patent/NO882784D0/no
Publication of NO882784L publication Critical patent/NO882784L/no
Priority to NO951117A priority Critical patent/NO180748C/no
Publication of NO178928B publication Critical patent/NO178928B/no
Publication of NO178928C publication Critical patent/NO178928C/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C263/00—Preparation of derivatives of isocyanic acid
    • C07C263/10—Preparation of derivatives of isocyanic acid by reaction of amines with carbonyl halides, e.g. with phosgene
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D257/00—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D257/02—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6887—Antibody-chelate conjugates using chelates for therapeutic purposes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/0002—General or multifunctional contrast agents, e.g. chelated agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1093—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody conjugates with carriers being antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F15/00—Compounds containing elements of Groups 8, 9, 10 or 18 of the Periodic Table
    • C07F15/0006—Compounds containing elements of Groups 8, 9, 10 or 18 of the Periodic Table compounds of the platinum group
    • C07F15/0073—Rhodium compounds
    • C07F15/008—Rhodium compounds without a metal-carbon linkage
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2123/00—Preparations for testing in vivo

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Macromolecular Compounds Obtained By Forming Nitrogen-Containing Linkages In General (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Inorganic Compounds Of Heavy Metals (AREA)
  • Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

Den foreliggende oppfinnelse vedrører fremstilling av
funksjonaliserte polyaminchelanter og rhodiumkomplekser av disse.
Funksjonaliserte chelanter eller bifunksjonelle koordinatorer er kjent for å kunne bli kovalent bundet til et antistoff som har spesifisitet for cancer eller tumorcelleepitoper eller antigener. Radionuklidkomplekser av slike antistoff/chelantkonjugater er anvendbare for diagnostiske og/eller terapeutiske formål som et hjelpemiddel for å overføre radionuklidet til en cancer- eller tumorcelle. Se f.eks. (Meares et al., Anal. Biochem., 142, s. 68-78, (1984): og Krejcarek et al., Biochem and Biophys. Res. Comm., 77, s. 581-585 (1977).
Metodikken gjelder å fremstille slike komplekser, involverer behandling av et antistoff/chelantkonjugat med et overskudd av radionuklid for å danne et kompleks fulgt av rensing av komplekset. En hovedulempe med slik metodikk er at radionuklidet (et lantanid eller overgangsmetall) må være kinetisk labilt for å bli hurtig sekvestrert av antistoff/chelantkonjugater. Denne egenskap er ufordelaktig idet den kinetiske labilitet (eller substitusjons-labilitet) fører til problemer forbundet med kompleksets serumstabilitet, d.v.s. at radionuklidet dissosierer lett fra komplekset i nærvær av serum. Dårlig serumstabilitet av slike komplekser fører til minsket terapeutisk og/eller diagnostisk (avbildning) effektivitet og stiller et større potensiale for generell strålingsskade i normalt vev (Cole et al., J. Nucl. Med., 28., s. 83-90 (1987) . Mer spesifikt er serumstabilitet blitt vist å være et problem med komplekser som inneholder (67Cu, 90Y, 57Co, og <l11>ln (Brechbeil et al., Inorg. Chem, 25, s. 2772-2781 (1986).
En annen ulempe forbundet med anvendelse av labile radio-nuklider til antistoffmerking er at substitusjonelt labile spormetaller (som ikke er radioaktive) ofte inkorporeres i chelatet. Konkurranse for slike ikke-aktive spormetaller minsker den biologiske effektivitet av antistoff/chelatkomplekset siden en lavere mengde av radionuklid avleveres til målstedet.
Majoriteten av bifunksjonelle koordinatorer eller funksjonaliserte chelanter som er blitt kjent på området for å sekvestrere radipnuklider, er karboksymetylerte aminderivater slik som funksjonaliserte former av etylendiamintetraeddiksyre (EDTA)
(U.S.-patent 4.622.420) eller dietylentriaminpentaeddiksyre (DTPA)
(U.S.-patenter 4.479.930 og 4.454.106). I U.S.-patent 4.622.420 læres det hovedsakelig at EDTA-derivater kan sekvestrere ioniske typer av rhodium. Imidlertid er rhodium, spesielt rhodium(III), kjent for å være et substitusjonsinert overgangsmetall, og det er videre kjent at ekstreme betingelser for temperatur og varighet kreves for å danne dets EDTA-kompleks (Dwyer et al., J. Amer. Chem. Soc. 83., s. 4823-4826 (1960). I tillegg er det blitt rapportert at etylen-diamindiravsyre ikke vil danne komplekser med rhodium(III) ved noen pH under temperaturer på 100°C (J.A. Neal og N.J. Rose, Inorg. Chem., 12, 1226-1232 (1972).
(Tetraazachelanter (Troutner et al., J. Nucl. Med., 21,
s. 443-448 (1980) og alkylenaminoksimer (U.S. patent 4.615.876) er blitt anvendt for å sekvestrere "mTc, en isotop med nukleære egenskaper som kun er egnet til diagnostisk arbeid.
Rhodium-105 er både en gamma-emitter (egnet til diagnostisk arbeide) og en kort halveringstid beta-emitter (egnet til terapeutisk arbeid). Fordi rhodium-105 kan anvendes både til diagnostikk og terapi og fordi rhodium er substitusjonsinert ville det være høyt ønskelig å ha funksjonaliserte chelanter som er i stand til å danne komplekser med radioaktivt rhodium og som kan kobles til et antistoff. Tetraaza komplekser fra naturlig forekommende rhodium(III) er kjent i litteraturen, hvor begge lineære (f.eks., Bosnich et al., J. Chem. Sov. Sec. A., s. 1331-1339 (1966) og makrocykliske (E.J. Bounsall og S.R. Koprich, Canadian Journal of Chemistry, 48 (10), s. 1481-1491 (1970) aminer; imidlertid har funksjonaliserte polyazachelater egnet til kompleksdanning av radioaktivt rhodium og videre kobling til et antistoff hittil vært ukj ente.
Den foreliggende oppfinnelse er rettet mot bifunksjonelle chelater som danner komplekser med rhodium. De bifunksjonelle chelanter anvendes fortrinnsvis for å kompleksdanne radioaktivt rhodium, slik som rhodium-105 (<105>Rh) og rhodium-101m (l01Rh) .
Disse bifunksjonelle chelanter ville også være anvendbare i kompleksdanning av technetium og rhenium. Kompleksene som således blir dannet, kan kobles (kovalent) til et antistoff eller et fragment av dette og anvendes til terapeutiske eller diagnostiske formål.
Mer spesifikt er den foreliggende oppfinnelse rettet mot fremstilling av et terapeutisk aktivt konjugat som inneholder et rhodiumkompleks med den generelle formel
idet Ch er en forbindelse med formelen:
hvor:
hver R uavhengig representerer en rettkjedet eller forgrenet alkylengruppe med 2 eller 3 karbonatomer, under den forut-setning at for hvilke som helst av to tilstøtende nitrogenatomer forbundet med en R-gruppe må R-gruppen gi minst tre
enkeltbindinger mellom nitrogenatomene som den forbinder; hver R<1> uavhengig representerer hydrogen eller metyl;
- X og X<1> representerer hydrogen, eller X og X<1> tatt sammen representerer en benzyl- eller en rettkjedet eller forgrenet alkylengruppe med 2 eller 3 karbonatomer, med det forbehold at når X og X1 er tatt sammen, må gruppen de representerer gi minst tre enkeltbindinger mellom de tilstøtende nitrogenatomer den forbinder; og den stiplede linje mellom X og X<1>
betyr en eventuell binding;
n er et helt tall på 0 eller 1, forutsatt at når L-gruppen er bundet til det samme nitrogenatom, må n være 0, ellers må n være 1; og
L er en linker/spacer-gruppe kovalent bundet til, og erstatter et hydrogenatom ved, et hvilket som helst av nitrogen- eller karbonatomene som den er bundet til, idet L, som kun kan inngå ett sted i molekylet, er representert ved formelen
hvor
s representerer et helt tall på 0 eller 1;
t representerer et helt tall på 0 til 3 inklusive;
dog kan ikke s og t samtidig være 0;
R<2> representerer- isotiocyanat, semikarbazid, tiosemikarbazid, amino eller karboksyl som tillater kovalent binding
til et antistoff eller fragment av dette; og
P1 og P2 hver representerer det samme eller forskjellig
halogenid eller en H20-gruppe; og
A representerer et eller flere anioner med tilstrekkelig ladning til å gjøre komplekset nøytralt, valgt blant F"' Cl"'
Br"' I"' CN"' NCO"' SCN"' N3"' C10A"' BF4"' N03" og PF6",
og fremgangsmåten er karakterisert ved at den omfatter å omsette forbindelsen
hvor A er definert som ovenfor;
m er et helt tall fra 0 til 5;
med forbindelsen ChP.,P2
hvor Ch, P, og P2 er definert som ovenfor; fulgt av konjugat-dannelse med et antistoff eller et fragment av et antistoff.
Den foreliggende oppfinnelse er også rettet mot rhodiumkomplekser og rhodiumchelat/antistoffkonjugater dannet med chelantene med formel I; imidlertid er det for slike rhodiumkomplekser og rhodiumchelat/antistoffkonjugater ingen begrensning med henblikk på (3(-4-aminobutyl)-1, 5, 8,12-tetraazaacyklotetra-dekan). I tillegg kan rhodiumchelat/antistoffsammensetninger bestå av rhodiumchelat/antistoffkonjugatene som fremstilles i henhold til oppfinnelsen og en farmasøytisk akseptabel bærer, og typisk i disse sammensetninger er den farmasøytisk akseptable bærer i væskeform. De kan anvendes for diagnostikk eller behandling av en sykdomstilstand i et pattedyr ved administrering av rhodiumchelat/ antistoffsammensetningen(e) og er spesielt egnet til diagnostikk og behandling av cancer.
Som anvendt her har de følgende angitte begreper de følgende betydninger.
Med henblikk på definisjonen av R<2> så inkluderer "elektrofile" grupperinger, men er ikke begrenset til disse, isotiocyanat, bromacetamid, maleimid, imidoester, tioftalimid, N-hydroksy-suksinimylester, pyridyldisulfid og fenylazid; egnede "nukleofile" grupperinger inkluderer, men er ikke begrenset til, karboksyl, amino, acylhydrazid, semikarbazid og tiosemikarbazid; "syntetiske linkere" inkluderer en hvilken som helst syntetisk organisk eller uorganisk linker som er i stand til å bli kovalent bundet til et antistoff eller et antistoffragment, foretrukne syntetiske linkere er biologisk nedbrytbare syntetiske linkere som er stabile i serumet til en pasient, men som har et potensiale for enzymatisk spaltning i et utskillelsesorgan for radioisotopen, f.eks. biologisk nedbrytbare peptider eller peptidinneholdende grupper. Av de elektrofile grupperinger er isotiocyanat foretrukket, og av de nukleofile deler er amino, karboksyl, semikarbazid og tiosemikarbazid foretrukket. Det er ønskelig at naturen og/eller posisjonen av R<2> kan være slik at den ikke i vesentlig grad interfererer med chelateringsreaksjonen.
Begrepet "alkylen" representerer en gruppe -(CH2)n- hvor
n er et helt tall fra 1 til 10 inklusive. Gruppen kan også ha forgrenet kjede, men ikke overstige en total mengde på 10 karbonatomer .
Begrepet "aralkylen" representerer en gruppe
hvor n er et helt tall fra 2 til 10 inklusive, R er en aryldel slik som benzyl, fenyl eller fenyl substituert med en eller flere
hydroksy, C,-C3--alkyl, C^-Cj-alkoksy, eller halogen (fortrinnsvis klor eller brom)-grupper.
Begrepet "pattedyr" betyr dyr som ernærer ungene sine med melk utskilt av melkekjertler, fortrinnsvis varmblodige pattedyr, mer foretrukket mennesker.
"Antistoff" refererer til et hvilket som helst polyklonalt, monoklonalt, chimerisk antistoff eller heteroantistoff, fortrinnsvis et monoklonalt antistoff; "antistoff-fragment" inkluderer Fab-fragmenter og F (ab ■) 2-f ragmenter, og en hvilket som helst del av. et antistoff som har spesifisitet mot en ønsket epitop eller epitoper. Når man anvender begrepet "rhodiumchelat/antistoffkonjugat", er "antistoff" ment å inkludere hele antistoffer og/eller antistoff-fragmenter, inkludert semisyntetiske eller genetisk fremstilte varianter av disse.
"Rhodiumkompleks" refererer til et kompleks av forbindelsen med formel I hvor minst ett rhodiumatom er chelatert eller sekvestrert; "rhodiumchelat/antistoffkonjugat" refererer til et rhodiumkompleks som er kovalent bundet til et antistoff eller et antistoff fragment; "naturlig forekommende", når anvendt i til-knytning til rhodium, refererer til elementet i en form som oppnås når elementet er renset fra naturlige kilder ved å anvende standardprosedyre, d.v.s. i en form som inneholder flere isotoper, hvorav hovedmengden er ikke-radioaktiv; "radioaktiv" når anvendt i forbindelse med rhodium, refererer til en eller flere isotoper av elementer som utsender alfa-, beta- og/eller gamma-partikler, slik som <105>Rh; "rhodium" refererer til enten radioaktivt rhodium eller naturlig forekommende rhodium eller blandinger av disse.
Begrepene "bifunksjonell koordinator" og "funksjonalisert chelant" er anvendt om hverandre og refererer til forbindelser som har en chelantdel i stand til å chelatere rhodium og en linkel/ spacer-del kovalent bundet til chelantdelen som er i stand til å virke som et middel til kovalent å bli koblet til et antistoff eller antistoff-fragment.
Som anvendt her, refererer "Ba-cyklam" til forbindelsen 3-(4-(aminofenyl)metyl)-metyl)-1,5,8,12-tetra-azacyklotetradekan; "BA-2,3,2-tet" refererer til forbindelsen 6-(4-(aminofenyl)-metyl)1,4,8,11-tetraazaundekan; "PA-2,3,2-tet" refererer til forbindelsen 6-(3-aminopropyl)-1,4,8,11-tetraazaundekan; og "BA-N-cyklen" refererer til forbindelsen 1,4,7,10-tetraaza-l-((4-aminofenyl)metyl)cyklododekan. BA-cyklam, BA-2,3,2-tet, BA-N-cyklen og PA-2,3,2-tet er representert ved følgende formler:
Foretrukne forbindelser med formel I er BA-cyklam, BA-2,3,2-tet, PA-2,3,2-tet og BA-N-cyklen og de respektive Rh(III) komplekser av disse.
De foretrukne rhodiumkomplekser som inngår i den foreliggende oppfinnelse er salter som er representert ved formelen
hvor:
Ch representerer en forbindelse med formel I;
P1 og P2 representerer monodentatligander eller, hvis de er tatt sammen, en bidentatligand (P1P2) , P1 kan være lik eller forskjellig fra P2 forutsatt imidlertid at: (a) P2 er fraværende hvis y i formel I er 2; og (b) P1 og P2 er fraværende
hvis y i formel I er 3; og
A representerer et eller flere anioner med tilstrekkelig ladning til å gjøre hele komplekset nøytralt. Eksempler på P., og P2 er F"' Cl"' Br"' I"' CN"' NCO"' SCN"' N3"' OH" og H20, eksempler på P,P2 er C204<2>" og etylendiamin. Eksempler på A inkluderer F"' Ci"' Br'- I'- CN"- NCO'- SCN"' N3"- C104"' BF4"< N03" og PF6"'
Hovedsakelig blir disse rhodiumkomplekser med formel II fremstilt under tilbakeløp, i vandig løsning, av et enkelt rhodium startmateriale RhQ.mH20 (Q er. halogenid) , i tilstrekkelig mengde til å balansere Rh, og mH20 er hydratet (når det trengs) f.eks. rhodiumhalogenidhydrater) med den bifunksjonelle koordinator. pH kan titreres opp til omtrent pH = 7 eller kontrolleres ved omtrent pH = 7 ved anvendelse av en buffer. Hovedsakelig vil ligandene P1 og P2 være halogenider anvendt i rhodiumstartmaterialet eller H20. Motionet(ene), A, vil være halogenider anvendt i rhodiumstartmaterialet. Andre, ligander, P1 og P2, eller motioner, A, kan substitueres enten ved å tilsette dem til startreaksjonsblandingen eller i et påfølgende tilbakeløp-trinn. Kompleksene blir renset ved kolonnekromatografi.
Det funksjonaliserte polyamin beskrevet her (d.v.s. forbindelsene med formel I) kan anvendes for å chelatdanne eller sekvestrere rhodium for å danne rhodiumchelater (også referert til her som "rhodiumkomplekser"). Rhodiumkompleksene kan p.g.a. sin tilstedeværelse av den funksjonaliserende del (representert ved "L" i formel I) være koblet til funksjonaliserte bærere slik som funksjonaliserte polymere bærere eller fortrinnsvis kovalent bundet til antistoffer eller antistoff-fragmenter. Antistoffene eller antistoff-fragmentene som kan anvendes i rhodiumchelatet/ antistoff-konjugatene beskrevet her, kan fremstilles ved teknikker vel kjent på fagområdet. Høyt spesifiserte monoklonale antistoffer kan produseres ved hybridiseringsteknikker vel kjent på fagområdet, se f.eks. Kohler og Milstein (Nature, 256, s. 495-497
(1975) og Eur. J. Immunol., 6, s. 511-519 (1976). Slike antistoffer har normalt en høyt spesifikk reaktivitet. I de antistoff-målrettede rhodiumchelat/antistoff-konjugatene kan antistoffer rettet mot et hvilket som helst ønsket antigen eller hapten anvendes. Fortrinnsvis er antistoffene som anvendes i rhodiumchelat/antistof f-konjugatene, monoklonale antistoffer eller fragmenter av disse som har høy spesifisitet for ønsket(e) epitop(er). Antistoffer anvendt i den foreliggende oppfinnelse kan være rettet mot f.eks. tumorer, bakterier, sopper, viruser, parasitter, mykoplasma, differensierings- og andre cellemembran-antigener, patogene overflateantigener, toksiner, enzymer, allergene, medikamenter og alle biologisk aktive molokyler. For en mer komplett liste av antigener se U.S.-patent 4.193.983. Rhodiumchelat/antistoff-konjugatene er spesielt foretrukne til diagnostikk og/behandling av forskjellige cancere. Rhodiumkompleksene og rhodiumchelat/antistoff-konjugatene beskrevet, har utmerket serumstabilitet og/eller utmerket in vivo-bio-lokalisering. Rhodiumchelat/antistoff konjugatene beskrevet her, kan administreres i henhold til fremgangsmåter vel kjent på fagområdet. Forbindelsene med formel I kan fremstilles ved å anvende fremgangsmåter kjent på fagområdet. F.eks. kan forbindelser innen området med formel I fremstilles ved å anvende syntesemetoder slik som synteseskjemaer A-D som følger: De fire bifunksjonelle ligandsystemer som er blitt synteti-sert i løpet av dette arbeid (d.v.s. BA-2,3,2-tet, PA-2,2,1-tet, BA-cyklam og BA-N-cyklen) er spesifikke eksempler på den generiske bifunksjonelle struktur beskrevet ved formel I. Det er to hovedtyper av polyaza (antall nitrogenchelaterende atomer = 4-6) forbindelser som er representative for den generiske struktur: 1) Lineære polyazaforbindelser med en spacer/linker gruppe kovalent bundet til denne del (f.eks. BA-2,3,2-tet eller PA-2,3,2-tet); og 2) makrocykliske polyazaforbindelser med en spacer/linker kovalent bundet (f.eks. BA-cyklam eller BA-N-cyklen) . Begge hovedtyper kan oppdeles videre ut i fra hvordan spacer/ linker-gruppen kan bindes kovalent til den chelaterende polyaza-delen. I utgangspunktet kan kobling gjøres gjennom ringslutning enten ved et karbonatom (f.eks. BA-cyklam, BA-2,3,2-tet, PA-2,3,2-tet) eller et nitrogenatom (f.eks. BA-N-cyklen). Synteseskjema D omfatter en metode som er anvendelig for syntesen av en hvilken som helst nitrogenringsluttet linker/spacer-gruppe. Anvendeligheten av denne metode er nylig blitt dokumentert i litteraturen (E. Kimura et al., J.Chem.Soc, Chem.Comm., s. 1158-1159 (1986) og gir en fremgangsmåte for monoalkylering av en hvilket som helst polyazamakrocyklus med et egnet elektrofilt stoff (d.v.s. linker/spacer) som kunne inneholde en latent funksjonalitet som muliggjør antistoff konjugering. En rekke polyazamakrocykler er kommersielt tilgjengelige eller er blitt gjort tilgjengelige ved å anvende tosylat-erstatnings/makroring-slutningsteknikker beskrevet i litteraturen (T.J. Atkins et al., Org.Synth., Vol. 58; Ed. W.A.Sheppard, John Wiley and Sons, New York, 1978 s. 86-97). N-alkyleringsmetode gir klart den største anvendelighet gjennom en konvergerende syntetisk rute. Lineære eller makrocykliske ligander som er forbundet med linkeren/spaceren gjennom en karbonatomtilknytning, kan man komme frem til primært gjennom tre etablerte metoder. Makrocykliske aminer som inneholder 4 og 5 nitrogenatomer, er blitt laget ved kondensering av den passende substituerte malomatester med lineære tetraaminer eller pentaminer (Tabushi et al., Tetrahedron Letters, 12, s. 1049-1052 (1977) og Machida et al., Inorg. Chem., 25, s. 3461-3466 (1986)). Den foran nevnte artikkel av Tabushi et al. beskriver forbindelsen 3-(4-aminobutyl)-1,5,8,12-tetraazacyklo-tetradekan. En annen fremgangsmåte for fremstilling av karbonring-sluttede makrocykler, slik som BA-cyklam, involverer å erstatte malonatester med et stort overskudd av diamin (Skjemaer A og C) og ringlukning med akrylat eller malonat (Skjema B). Anvendeligheten av denne fremgangmåte er blitt beskrevet i litteraturen (E. Kimura et al., Inorg.Chem., 23., s. 4181-4188 (1984)) og kan også anvendes til å lage lineære polyaza-forbindelser av variabel ligand/metall-bitstørrelse. Begge disse fremgangsmåter involverer nukleofilt angrep av amin- eller azaforbindelsen på en ester-eller acyl-funksjonalitet. Således er et reduksjonstrinn nødvendig for å omdanne amider til polyaminer. En tredje potensiell metode for å syntesisere makrocykler som inneholder en karbonringsluttet linker/spacergruppe vil involvere en makroringslutning via SN2 eller enkelt alifatisk utbyttings-kjemi. Til denne dato er denne strategi bare blitt anvendt på syntese av mono-N-substituerte tetraazamakrocykler (N. Alcock et al., J. Chem.Soc.Dalton Trans., s. 237-2376 (1984)). Imidlertid kunne denne teknikk også anvendes til syntese av karbonring-sluttede systemer: Tosylatgruppene kan lett fjernes ved en rekke fremgangsmåter kjent fra fagområdet. Det bør forstås at nesten en hvilken som helst spesifikk bifunksjonell koordinator som generisk omfattes av formel I kan lages ved å anvende en av de generelle fremgangsmåter beskrevet her. Overraskende nok er ikke noe eksempel på et antistoff-konjugerbart tetramin-rhodiumkompleks dokumentert i litteraturen.
De følgende eksempeler er gitt for å illustrere oppfinnelsen.
Generelt om det eksperimentelle
Massespektra ble oppnådd på enten et Finnigan TSQ masse spektrometer (Ql MS mode) eller et VG ZAB-MS høyresolusjonsmasse-spektrometer (raskt atombombardement med Xenon). <1>H og <13>C NMR ble oppnådd ved å anvende et Varian VWR-300 spektrometer. Infrarøde (IR) spektra ble gjengitt på et Nicolet S5X FT/IR instrument.
Alle anvendte løsningsmidler var Fisher HPLC-kvalitets-materialer som ble anvendt uten videre rensing. All preparativ kromatografering av organiske forbindelser (skjemaer A-D) ble utført ved å anvende flash-kromotograferingsteknikken beskrevet i litteraturen<1>) (Merck Grade 60, 230-400 mesh silisiumdioksyd gel, 60Å - Aldrich Chemical Company) ved å anvende de følgende løsningsmiddelsystemer: (1) Løsningsmiddelsystem 1 - CHCl3/MeOH/NH4OH-2/2/l ; (2) Løsningsmiddelsystem 2 - CHCl3/MeOH/NH4OH-12/4/l; (3) Løsningsmiddelsystem 3 - CHCl3/MeOH/NH4OH-16/4/l v/v.
Rf-verdier er gjengitt ved anvendelse av disse løsningsmiddel-systemer og kommersielt tilgjengelige Analtech silisiumdioksyder (250 mikron, Analtech Inc.).
<1>} W.C. Still, M. Kahn og A. Mitra, J.Org.Chem., 43, s. 2923-2925 (1978).
Fremstilling av utgangsmateriale
(Eksemplene 1-13)
Eksempel 1
2-karbometoksy-3-(4-nitrofenyl)propensyre-metylester (p-nitro-benzylmalonatdimetyl ester), 1
2-karbometoksy-3-(4-nitrofenyl)propensyre-dimetylester ble laget ved Knovenagle kondensering av dimetylmalonat og p-nitro-benzaldehyd i henhold til fremgangsmåten av Baker og Eccles <2>): Observert smeltepunkt (smpobs) = 133-134°C. Smeltepunkt observert i litteraturen (smplit) = 136-137°C. 2-karbometoksy-3-(4-nitro-fenyl) propensyremety lester (23,0 gram (g), 86,7 millimol (mmol)) ble løst i 175 milliliter (ml) av metanol (MeOH) under nitrogen og natrium cyanoborhydrid <3>) (6,0 g, 95,5 mmol) ble forsiktig tilsatt til løsningen under røring med avkjøling. pH ble justert til 4,0 med konsentrert saltsyre, og løsningen ble rørt ved 25°C over natten. I løpet av de første 8 timene ble pH rejustert fra 6 til 4 ved flere anledninger. Den gule metanolløsning ble helt i 700 ml vann og ekstrahert med 3x200 ml porsjoner av metylenklorid.
De kombinerte organiske fraksjoner ble vasket med 400 ml mettet natriumbikarbonat og 400 ml vann, tørket over magnesiumsulfat og avdampet til en blekgul olje og en rotasjonsinndamper. Oljen krystalliserte (s<mp>obs = 82-83°C; s<mp>ljt = 82,5-83,5°C ved henstand og gav 2-karbometoksy-3-(4-nitrofenyl)propensyremetylester (p-nitrobenzylmalonatdimetylester) i 93 prosent utbytte (21,3 g, 81 mmol). <2>) J.W. Baker og A. Eccles, J.Chem.Soc. (1927), s. 2125-2133. <3>) R.O. Hutchins, D. Rotstein, N. Natale, J. Fanelli og D. Dimmel, J.Org.Chem., 41, s. 3328 (1976).
Eksempel 2
3-(4Aminofenyl)-2-karbometoksypropensyremetylester (p-amino-benzylmalonat-dimetylester), 2.
Forbindelsen 2-karbometoksy-3-(4-nitrofenyl)propensyre-metylester (p-nitrobenzylmalonatdimetylester) (2,00 g, 7,55 mmol) ble løst i 70 ml etylacetat inneholdt 5% palladium på karbon (1,0 g - Aldrich Chemical Company) katalysator og ble hydrogenert i en Parr ryster ved å anvende 50 psig hydrogen ved 22°C. Hydrogen opptak var hurtig (15 min.)/°9 blandingen ble opprettholdt under hydrogentrykk i 3 timer til. Trykkaret ble ventilert og gjennom-blåst med nitrogen (N2). Suspensjonen ble filtrert gjennom en pute av celit og løsningsmidlet ble fjernet under vakuum ved å anvende en rotasjonsevaporator for å gi 3-(4-aminofenyl)-2-karbometoksy-propensyremetylester (p-aminobenzylmalonatdimetylester) (1,76 g, 7,41 mmol) som en lys gul olje i 98% utbytte. Strukturen ble bekreftet ved1H nukleær-magnetisk resonans (PMR) og <13>C nukleær magnetisk resonans (CMR) så vel som masse spektroskopi (MS) spektral-analyse.
Eksempel 3
6-(4-aminofenyl)metyl)-1,4,8,ll-tetraaza-5,7-dioksoundekan, 2.
Forbindelsen 3-(4-aminofenyl)-2-karbometoksypropensyremetyl-ester (p-amihobenzylmalonatdimetylester) (30,0 g, 0,126 mol) ble tilsatt dråpevis til en løsning av etylen diamin (75 g, 1,15 mol) i 150 ml metanol under nitrogen atmosfære med kraftig røring (2 5°C) . Man lot løsningen stå under røring 4 dager inntil reaksjon ble bedømt å være fullstendig ved tynnsiktkromatografering (TLC). På dette punkt ble løsningmiddel og overskudd av amin fjernet under vakuum, og den lysebrune rest ble tørket over natten (7 0°C/ 0,1 mm) hvilket gav 36,3 g av den ønskede forbindelse 6-(4-(amino-fenyl)metyl)-1,4,8,ll-tetraaza-5,7-dioksoundekan som et lysebrunt fast stoff i 98% utbytte. En analytisk prøve ble fremstilt ved omkrystallisering fra kloroform/heksan smp = 157-159°C, som et hvitt krystallinsk pulver. Strukturen ble bekreftet ved PMR, CMR og MS.
Analyse
Eksempel 4
6-(4-(aminofenyl)metyl)-1,4,8,11-tetraazaundekan,
(BA-2,3,2-Tet), 4.
Forbindelsen 6-(4-(aminofenyl)metyl)-1,4,8,ll-tetraaza-5,7-dioksoundekan (7,0 g, 23,9 mmol) ble plassert i. en 3-halset, 250 ml rundkolbe utstyrt med rører og tilbakeløpskondensator under nitrogenatmosfære. Boran/tetrahydrofuran (THF) kompleks (150 ml, 150 mmol) (Aldrich Chem. Co.) ble langsomt tilsatt av den kanyle under positivt nitrogentrykk til det faste stoff ved røring. Et kort eksoterm ble notert og etter at den var sunket, ble den rørte løsning tatt under tilbakeløp i 48 timer (t). Den klare løsning ble frigjort for løsningsmiddel under vakuum og etterlot et glass-aktig, semifast materiale. Metanol (100 ml) ble forsiktig tilsatt, og hydrogenavdampning ble notert. Den resulterende løsning ble tatt til tørrhet under vakuum. På dette punkt ble 100 ml metanol tilsatt, og løsningen mettet med vannfri hydrogenklorid. Løsningen ble anbrant under tilbakeløp under nitrogen i 1 time og frigjort for løsningsmiddel ved å anvende en rotasjonsevaporator. Denne cyklus ble gjentatt, og det resulterende råhydrokloridsalt av den ønskede forbindelse ble rørt i 15 ml vann. Denne fraksjon ble ekstrahert med 2 x 20 ml porsjoner av kloroform (CHC13) , og den vandige fase ble så gjort basisk (pH større enn 12) ved tilsetning av 50% vandig natriumhydroksyd med avkjøling under argon. Den basiske løsning ble ekstrahert 6 x 75 ml porsjoner av kloroform. Disse fraksjoner ble kombinert (ingen tørking), og kloroformen ble fjernet under vakuum for å gi 5,8 g råamin som en gul olje (91%). Råmaterialer ble renset ved flash-kromatografering ved å anvende et 16:4:1 løsningsmiddel av kloroform:metanol:konsentrert ammonium hydroksyd og silisium gel (Aldrich Chemical Co./Merck grade 60 230-400 mesh), (Rf = 0,33 løsningsmiddel 1). Strukturen av det rensede produkt ble bekreftet ved hjelp av PMR, CMR og MS.
Analyse
Eksempel 5
3-(4-(aminofenyl)metyl)-1,5,8,12-tetraaza-2,4,9-trioksocyklo-tetradekan, (BA-Cyklamtriamid), 5a.
Forbindelsen 6-(4-(aminofenyl)metyl)-1,4,8,14-tetraaza-5,7-deoksotetradekan (15,0 g, 51,1 mmol) og metylakrylat (4,29 g, 51,1 mol) ble løst i 800 ml med metanol (MeOH) under nitrogen med røring. Etter 40 timer ved romtemperatur (25°C) ble løsningen brakt under tilbakeløp i 13 dager. Ved avkjøling ble et hvitt precipitat dannet. Løsningsmidlet ble fjernet ved å anvende en rotasjonsevaporator, og det resulterende voksaktige faste stoff ble kromatografert ved å anvende en 350:35:5 løsning av kloroform: metanol:konsentrert ammoniumhydroksyd og flash kromatograferings-teknikken. Den ønskede forbindelse 3-(4-(aminofenyl)metyl)-l,5,8,12-tetraaza-2,4,9-trioksocyklotetradekan ble oppnådd (7,5 g, 21,6 mmol) i 42% utbytte som et hvitt fast stoff (Rf = 0,62/ løsningsmiddel; smp = 2 50-2 52°C.
Analyse
Eksempel 6
3-(4-(aminofenyl)metyl)-1,5,8,12-tetraazacyklotetradekan, (BA-cyklam), 6.
Forbindelsen 3-(4-(aminofenyl)metyl)-1,5,8,12-tetraaza-2,4,9-trioksocyklotetradekan (2,5 g, 7,2 0 mmol) ble tatt under tilbakeløp i 2 00 ml av IM boran/THF kompleks under nitrogen i 50 timer. En fremgangsmåte som i eksempel 4 gav det rå hydroklorid-saltet. Saltet ble løst i 20 ml vann og ekstrahert i 2 x 100 ml deler kloroform. Det vandige lag ble avkjølt til 0-5°C under argon og ble behandlet med 50% natriumhydroksyd (pH = 11,5), hvorved det ble dannet et hvitt precipitat. Materialet ble ekstrahert med 3 x 100 ml deler av kloroform som ble kombinert, filtrert gjennom en glassullplugg og avdampet til tørrhet (høyt vakuum) for å gi 2,1 g (7,0 mmol) av det ønskede produkt 3-(4-(aminofenyl)-metyl)-1,5,8,12-tetraazacyklotetradekan som et hvitt fast stoff i 97% utbytte (smp = 156-158°C) . Strukturen ble bekreftet ved hjelp av PMR og CMR.
Analyse
Eksempel 7
3-(4-(aminofenyl)metyl)-1,5,8,12-tetraaza-2,4,9,11-tetraoksocyklotetradekan, (BA-cyklamtetraamid), 5b.
Forbindelsen 6-(4-(aminofenyl)metyl)-1,4,8,11-tetraaza-5,7-dioksoundekan (7,03 g, 24 mmol) og dimetylmalonat (3,17 g,
24 mmol) i 50 ml av metanol ble oppvarmet under svakt tilbakeløp med røring under N2 i 4 dager. Blandingen ble avkjølt, og det fargeløse presipitat som ble oppnådd, ble filtrert. Dette materialet ble så klomatografert på silisiumdioksyd gel ved flash kromatograferingseluering med en 85:10:2 v/v/v blanding av kloroform:metanol:konsentrert ammonium hydroksyd. Råaterialet ble oppkrystallisert fra metanol og gav 3-(4-(aminofenyl)metyl)-1,5,8,l2-tetraaza-2,4,9,ll-tetraoksocyklotetradekan som fargeløse krystaller (2,01 g, 24%) smp 288-290°C (dec) som ble karakterisert ved IR, PMR og CMR-teknikker.
Eksempel 8
BA-cyklam, 6.
Forbindelsen 3-(4-(aminofenyl)metyl)-1,5,8,12-tetraaza-2,4,9,ll-tetraoksocyklotetradekan, fremstilt i eksempel 7 ble redusert med diboran (tilbakeløp, 18 timer) i tetrahydrofuran (THF) for å gi 4-aminobenzylcyklam i 55,3% utbytte. Materialet hadde egenskaper i det vesentlige beskrevet i eksempel 6.
Eksempel 9
1,4,8,ll-Tetraaza-6-(2-cyanoetyl)-5,7-dioksoundekan, 8.
Dietyl 2-(2-cyanoetyl)malonat 7 (5,0 g, 23,5 mmol - Aldrich Chemical Company) ble. tilsatt dråpevis over en en times periode til en rørt løsning av nylig destillert etylen diamin (15 g, 0,25 mmol) som ble opprettholdt under nitrogen ved 0°C. Den rørte løsning ble tillatt å varmes til romtemperatur (25°C) og røring ble fortsatt over en 4 dagers periode. På dette punkt ble overskudd av etylendiamin fjernet under vakuum med forsikrighet for å unngå oppvarming over 4 0°C. Den rå, klare olje som resulterte ble utsatt for flash kromatografering ved å anvende løsningsmiddel-system 3 som elueringsmiddel for å gi 2,3 g (8,81 mmol) av 1,4,8,ll-tetraaza-6-(2-cyanoetyl)-5,7-dioksoundekan som en klar viskøs olje i 37% utbytte (Rf = 0,39/løsningsmiddel system 3): ] E NMR (CDC13) 5 7,59 (t, 2H,
J = 3,1 H3, amid H ), 3,29 (m, 5H, metin H og a amido CH2, 2,82 (dt, 4H, J, = 4,0 H3, <J>2<-> 0,9 H3) , /3 amido CH2) 2,48 (t, 2H, J3<= >7,1, a nitril CH2) , 2,21 (q, 2H, J3 = 7,1 H3, jø nitril CH2) , 1,39 (S, 4H, amino NH) ; <13>C NMR (CDC13) 6 169,6 (amid karbonyl), 118,9 (nitril), 52,9 42,3, 41,2, 27,1, 15,4.
Eksempel 10
6-(3-Aminopropyl)-1,4,8,11-tetraazaundekan, PA-2,3,2-Tet, 9.
Forbindelsen 1,4,8,ll-tetraaza-6-(2-cyanoetyl)-5,7-dioksoun-dekan (1,6 g, 6,13 mmol) fra eksempel 9 ble tatt under tilbakeløp under nitrogen i 1 M boran/THF (2 00 ml) løsning i 40 timer. Metanol/hydrogenklorid tilbakeløp som notert i eksempel 4 og fremgangsmåte gav 1,5 g av råhydrogenkloridsaltet av 6-(3-amino-propyl)-1,4,8,11-tetraazaundekan. Dette materialet ble løst i 1,5 ml vann og 50% natriumhydroksyd ble tilsatt. (pH = 13) med gass-frigjøring notert. Den frie base ble ekstrahert med 3 x 7 ml porsjoner av acetonitril ved å anvende en Mixor (Liddex Corporation, Ltd., Haifa Israel). Den kombinerte organiske fase ble redusert ved å anvende en rotasjonsevaporator, og den klare olje ble påført på en kort pute av flash silisiumdioksyd gel som kloroform løsning. Produktet 6-(3-aminopropyl)-1,4,8,11-tetra-azaundekan ble isolert som en klar olje ved å anvende løsning-middelsystem 1 som elueringsmiddel etter fjerning av løsnings-middel (Rf = 0,04/løsnings-middel system 1). Fri base ble løst i 5 ml metanol som videre ble mettet med vandig hydrogenklorid. Avdampning til tørrhet gav 350 mg 6-(3-aminopropyl)-1,4,8,11-tetraazaundekan som hydrokloridsalter (15% utbytte): <1>H NMR (D20, pH = 1,5) 6 3,47 (m, 8H), 3,34 (m, 4H), 3,06 (t, 2H, J = 3,8 H3, a metylen til distral amin), 2,41 (P, 1H, J = 3,8 H3, metin), 1,78 (m, 2H) , 1,67 (m, 2H) ; <13>C NMR (D20, pH = 1,5) 5 51,5, 47,7, 37,9, 36,1, 28,1, 25,7.
Eksempel 11
1,4,7,10-Tetraaza-l-((4-nitrofenyl)metyl)cyklododekan, 11.
1,4,7,10-Tetraazacyklododekan, 10, (270 mg, 1,57 mmol) fremstilt ved fremgangsmåten til Richman og Adkins <4>) ble løst i 5 ml til kloroform. p-Nitrobenzyl bromid 113 mg, 0,52 mmol - Aldrich Chemical Company) ble tilsatt til denne løsning, og røring ble foretatt i 14 timer. Tynnsjiktkromatografering åpenbarte en sterk
ninhydrin-positiv flekk (Rf = 0,58/Løsningsmiddelsystem 3) forskjellig fra startmaterialene. Løsningen ble påført på 17 X 1 centimeter (cm) flash-silisium-dioksyd-gel-kolonne og eluert med Løsningsmiddel System 3. Fraksjoner som manglet startmaterialer, ble kombinert og avdampet, hvilket gav 109 mg analytiske rene, blekgule krystaller av 1,4,7,lO-tetraaza-1-((4-nitrofenyl)metyl)-cyklodekan i 68% utbytte, smp = 128-129°C. Struktur ble bekreftet ved hjelp av NMR.
Analyse
<4>) J.E. Richman og T.J. Adkins, J. Amer. Chem. Soc. , 9<_>6, 2268-2269
(1974).
Eksempel 12
1,4,7,10-Tetraaza-l-((4-aminofenyl)metyl)cyklododekan, (BA-N-Cyklen), 12.
Forbindelsen 1,4,7,10-tetraaza-l-((4-nitrofenyl)metyl)-cyklodedekan (170 mg, 0,55 mmol) ble løst i 5 ml metanol og 100 mg 10% palladium på karbon (Lancaster Synthesis Ltd.) ble tilsatt til denne løsning med røring. En jevn strøm av hydrogen gass ble boblet gjennom den rørte blanding. Innen 3 0 minutter viste tynn-sjiktskrornatograferingsanalyse total omdannelse av 1,4,7,10-tetraaza-l- ((4-nitrofenyl)metyl)cyklododekan til 1,4,7,10-tetraaza-l-((4-aminofenyl)metyl)cyklododekan. (Rf = 0,28 Løsningsmiddel System 3). Løsningen ble renset med nitrogen og filtrert gjennom en kort plugg av celit. Avdampning av løsningsmidlet og flash kromatografering (Løsningsmiddel System 3) gav 103 mg av 1,4,7,10,-tetraaza-1-((4-aminofenyl) metyl)cyklododekan i 67% utbytte. Strukturen ble bekreftet ved <1>H og <13>C NMR analyse. Den frie base ble omdannet til tetrahydroklorid salter (mp = 255-260C (dec)) - blek-gult pulver.
Eksempel 13
<105>Rh ble oppnådd ved å anvende et system hvor fem kolber forbundet med hverandre via glassslipapparatdeler i følgende rekkefølge; en første kolbe (en oppfangingskolbe anvendt som en gassfelle), en annen kolbe (reaksjonskar), en tredje kolbe (felle nr. 1), en fjerde kolbe (felle nr. 2), og en femte kolbe (felle nr. 3).
Inne i reaksjonskaret var det plassert 10 ml 2 M NaOH. Til felle nr. 1 ble det tilsatt 150 ml CC14, til felle nr. 2 ble det tilsatt 150 ml 2 M NaOH og til felle nr. 3 ble det tilsatt 150 ml 2 M NaOH. En mengde av rutenium-metall (5,18 mg) som var blitt bestrålet i 3 0 min. i første rekke av p-rør ved MURR (University of Missouri Research Reactor) dagen før, ble tilsatt i reaksjonskaret. Stoppere ble plassert på toppen av de første fire kolber. Cl2 ble boblet gjennom apparatet i omtrent 10 min., løsningen i reaksjonskaret ble lys gul. En luftstrøm ble så ført gjennom apparatet i 2 0 min., og reaksjonskaret ble oppvarmet til tilbake-løp i omtrent 5 min. ved å anvende en oppvarmingskappe. I løpet av denne prosess ble løsningen i reaksjonskaret klar, og CC14 i felle nr. 1 ble klar gul. Løsningen ble fjernet fra reaksjonskaret og filtrert gjennom et 0,2 mm filter. En mengde av reaksjonskar-løsningen (1,0 ml) ble tatt og fortynnet til 10 ml i en scintilla-sjonsampulle for telling. En mengde på 10 ml av hver av løsningene inneholdt i feller nr. 1, nr. 2 og nr. 3 ble også tatt til telling. Løsningen i reaksjonskaret inneholdt <105>Rh.
Fremstilling av rhodiumchelatkomplekser
(Eksemplene 14 og 15)
Eksempel 14
Følgende eksempler illustrerer fremstillingen av rhodiumchelatkomplekser ved å anvende fremgangsmåter lik dem som er rapportert av S.A. Johnson og F. Basolo, Inorg.Chem. (1962), 1,
s. 925-932.
A. Materialer og teknikker
Rhodiumtrikloridhydrat og litiumhydroksyd (LiOH) (99,3%, vannfri, t4+ I4mesh) ble oppnådd fra henholdsvis (Johnson Matthey og Alfa. Chelantene BA-2,3,2-tet . 5HC1 og BA-cyklam . 5HC1 ble fremstilt som beskrevet i eksempel 4 og 6.
Pharmacia Sephadex-SP C-2 5 kationebytterharpiks ble for-handlet fra Aldrich. Glasskolonner for kromatografering var omtrent 2,5 X 70 cm og passet til en 29/42 glasslipforbindelse på toppen og en grov glassfritte og teflon stoppeklokke i bunnen. Kationebytterharpiksen ble fremstilt ved å tilsette 40 g tørr gel til 3 00 ml 0,3 normal vandig HC1 med svak røring for å danne en oppslemming. Oppslemmingen ble så overført til en stor, gradert sylinder og tillatt å svelle over en periode på en og en halv time. Ved flere intervaller i løpet av denne periode ble en del av den 0,3 normale HC1 dekantert av (i en forsøke på å fjerne fin-partikler), 0,3 N HC1 ble tilsatt på nytt, og oppslemmingen ble forsiktig blandet. Kolonnen ble tømt ved å feste en énliter Kogelrohr kolbe på toppen av kolonnen og overføre hele oppslemmingen på en gang. Gelen ble omdannet til H+ formen og pakket ved å la 2-3 liter 0,3 normal HC1 renne gjennom kolonnen.
Prøver (0,1 til 1,0 g) ble kromatografert ved å løse dem i 5-10 ml destillert vann og påføre løsningen direkte på toppen av
kolonnen. Løsningen ble vasket inn i gelen med flere små porsjoner av 0,3 normal HC1 og eluert ned gjennom kolonnen med samme løsningsmiddel. Strømhastigheten av løsningsmidlet gjennom kolonnen ble opprettholdt med en Gilson Miniplus 2 peristatisk pumpe (3-4 ml pr. minutt (min. og eluerte prøvetopper ble påvist ved 254 nanometer (nm) med en Isco modell UA-5 absorbans monitor med modell 1132 multiplekser-ekspander og type 6 optisk enhet. Nøytrale, negativt ladede, og mono-positivt ladede partikler eluerte fra kolonnen raskt (0,5 - 1,5 time), di-positivt ladede partikler ble eluert fra etter 5-8 timer, og flere høyt positivt ladede partikler forble i toppen av kolonnen.
B. (Rh(BA-2,3,2-tet)Cl2) Cl . HC1
Med små modifikasjoner ble fremgangsmåten til Martins og Sheridan (Martins, E.; Sheridan, P.S., Inorg.Chem. (1978), 17,
s. 2822-2826) for fremstilling av diklor (/3, /3' , ( 3' 1 -triamino-trietylamin)rhodium(III)klorid anvendt. RhCl3 . 3H20 (0,308 g, 263.309 g mol'<1>, 1,17 mmol ble tilsatt til en løsning av BA-2,3,2-tet . 5HC1 (0,524 g, 447,71 g mol"<1>, 1,17 mmol i 30 ml 0,1 normal LiOH. Den røde løsning ble tatt under tilbakeløp i 5 min. og så langsomt titrert opptil pH = 6 over en 4 5 min. periode ved å anvende 0,1 normal LiOH (en total mengde på 64,1 ml ble anvendt eller 5,5 ekvivalenter). pH ble kontrollert ved å anvende colougHast indikator strimler (oppnåss fra Macalaster Bicknell Co. Etter en total tid på omtrent en time med tilbakeløp ble den gulbrune blanding avkjølt, filtrert og løsningsmidlet fjernet på en rotasjonsevaporator. Det fast stoff ble løst i 10 ml destillert vann, filtrert gjennom en Celite pute på et filt porøst glass-frittefilter og Gelman Acrodisc CR engangssprøytespissfilter (oppnådd fra Fisher Scientific), og påført på toppen av en Sephadex-Sp C-25 kolonne (se ovenfor). De di-positivt ladede partikler ble eluert bort fra kolonnen som et enkelt bånd med 0,3 normal HC1 og en fraksjon ble oppsamlet. Løsningsmidlet ble fjernet på en rotasjonsevaporator og det gule faste stoffet ble tørket ved 30°C i en vakuum ovn, hvilket gav 0,205 mg produkt (34,3%). Materialet ble karakterisert ved hjelp av <1>H og <13>C NMR og rask atombombardementmassespektroskopi. NMR spektroskopi indikerte at produktet eksisterte i tre isomeriske former.
Analyser
C. (Rh (BA-cyklam) Cl2) Cl . HC1
Fremgangsmåten var den samme som den som var beskrevet ovenfor med unntak av at 0,50 g RhCl3 . 3H20 (1,90 mmol), 0,93 g BA-cyklam . 5HC1 (1,91 mmol), og 102,5 ml 0,1 N LiOH (10,3 mmol, 5,39 ekvivalenter) ble anvendt, hvilket gav 0,385 g produkt (36,8%). Produktet ble karakterisert som beskrevet ovenfor. NMR spektroskopi indikerte tilstedeværelse av multiple isomerer.
Analyse
Eksempel 15
Fremstilling av (105Rh (BA-2 , 3 , 2-tet) Cl2) +.
<105>Rhodiumklorid (omtrent 5 mCi/ml i 0,1 normal HC1) ble mottatt fra forsøksreaktoren i University of Missouri. Tre ml av denne stamløsning ble nøytralisert ved tilsetning av 0,4 ml 1,0 M NaHC03. BA-2,3,2-tet (0,2 ml av en 10 mg/ml løsning) ble tilsatt med blanding. Denne løsning ble oppvarmet til 90°C i et vannbad i en time. Rensing av <105>Rh kompleksene fra et hvilket som helst ubundet metall og chelant ble oppnådd ved å la løsningen passere gjennom en Hamilton PRP-1- Chrompak enhet. <105>Rh kompleksene ble eluert med en 3 0% acetonitril/vannvask. Analyse av dette materialet indikerte tilstedeværelse av like deler av (10<5>Rh(BA-2,3,2-tet)Cl2)<+> og 105Rh (BA-2 , 3 , 2-tet) - (Bl) (H20))<2+> kompleksene. Akvaklorkomplekset ble omdannet til diklokomplekset ved å lage løsningen 0,5 normal HC1 og varme den til 90°C i vannbad i 30 min. til. (105Rh (BA-2 , 3 , 2-tet) Cl2) + komplekset ble isolert og konsentrert med Hamilton PRP-1 Chrompak. Komplekset ble karakterisert ved sammenligning med kjent standard materiale ved å anvende kationebyttekromatografi og tynnsjiktkromatografi. Utbytter på mer enn 85% med henblikk på <105>Rh ble oppnådd.
Eksempel 16
Konjugering av (105Rh (BA-2 , 3 , 2-tet) Cl2) + til antistoff.
(105Rh (BA-2, 3, 2-tet )C12)+ komplekset ble konjugert til et antistoff gjennom karbohydratsidekjedene ved å følge grunn-prosedyren beskrevet av Murayama et al. (A. Murayama, K. Shimada og T. Yamamoto, Immunochemistry, 15, s. 523-528, (1978)). Det anvendte antistoff var CC-49, et murint monoklonal IgG, som binder seg til en epitop av TAG-72, en tumor assosiert antigen. En mg av det rensede CC-49 IgG (10 mg/ml i 0,05 M natriumacetat pH 5,2)
ble behandlet med 1 mmol (0,010 ml av en 0,100 M løsning) av NaI04 i en time ved romtemperatur i mørket. Dette aktiverte antistoff ble separert og utvunnet fra overskudd NaI04 ved sentrifugegel-. filtrering. Til den aktiverte antistoff ble 0,100 ml av (<1>05Rh(<B>A-2,3,2-tet) Cl2)+ komplekset (omtrent 5 mCi/ml, 1 x 10"<4>M) og 0,010 ml av NaCNBH4 (0,10 M) tilsatt. Binding ble tillatt å pågå
i to timer ved romtemperatur. Det <105>Rh merkede . antistof f ble isolert ved å gjenta sentrifugegelfiltreringsprosedyren. Antistoff integriteten ble verifisert ved standard biokjemiske og immunologiske prosedyrer.
Eksempel 17
Fremstilling av (105Rh (BITC-2 , 3 , 2-tet) Cl2) + .
(<105>Rh(BA-2,3,2-tet)Cl2)<+> ble omdannet til det reaktive (105Rh (BITC-2 , 3 , 2-tet) Cl2)+ derivat ("BITC" refererer til p-isotiocyanatbenzyl) ved å blande 2 ml av (105Rh (BA-2 , 3 , 2-tet)Cl2)<+> (omtrent 5 mCi/ml, 1 x 10"<4> M) med 0, 002 ml tiofosgen. Reaksjonen ble tillatt å pågå i 15 min. i romtemperatur. Produktet ble isolert ved å la løsningen passere gjennom en Hamilton PRP-1 Chrompak. (105Rh(BITC-2 , 3 , 2-tet) Cl2)+ eluerte med 2 ml av acetonitril. Produktet ble karakterisert ved sammenligning med kjente standarder ved å anvende kationebytter og revers f asekromato-grafering. Ved å anvende denne prosedyre ble det oppnådd utbytter på mellom 50 og 85%.
Eksempel 17 a
Konjugering av (105Rh (BITC-2 , 3 , 2-tet) Cl2)+ til antistoffer.
(105Rh (BITC-2, 3, 2-tet) Cl2)+ ble bundet til lysinrestene i tumor spesifikke antistoffer (IgG) ved den følgende fremgangsmåte. Antistoffene som ble anvendt, var CC-49 og B72,3 (hydridomcelle-linje B72,3 er deponert i Amerikansk Type Samling, 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland og har adgangsnummer ATCC HB 8108), begge murine monoklonale antistoffer som binder seg til epitoper av TAG-72, et tumor assosiert antigen. 1,5 x 10^° mmol (0,5 mCi) av (105Rh (BITC-2, 3, 2-tet )C12)+ ble avdampet til tørrhet under nitrogen i et 1,5 ml Eppendorff kule rør. Til dette tørkede kar ble 0,10 ml av et passende antistoff (10 mg/ml i 0,1 M Na2C03
pH 9,5) tilsatt. Bindingen ble tilatt å pågå i en time ved romtemperatur. De <105>Rh merkede antistoffer ble isolert ved sentrifugegelfiltrering. Antistoffintegritet ble verifisert ved standard biokjemiske immunologiske prosedyrer.
Eksempel 17 b
In vivo lokalisering av 105Rh merkede antistoffer.
Anvendbarheten av de <105>Rh merkede antistoffer ble demonstrert ved å måle opptaket av materialene ved hjelp av en human tumor xenograft i en atymisk mus. Hunnmus (Nu/Nu) ble inokulert subcutant (S.C.) (0,1 ml/kilde) med den humane kolon karcinm cellelinje, LS-174T (omtrent 4 x IO<6> celler/dyr). Omtrent to uker etter inokulering, ble hvert dyr injisert via halevenen med 3 |iCi (15 /xg) av <105>Rh merket antistoff (CC-49 eller B72,3). Musene ble avlivet ved forskjellige tidspunkter, tumoren og selekterte vev ble skåret ut og veiet og radioaktiviteten ble målt i en gamme-teller. Tellingene pr. min. pr. gram 105Rh i hvert vev (cpm/g) ble bestemt og vist som funksjon av den injiserte mengde. Resultatene er vist i de følgende tabeller.
Biologisk fordeling av 105Rh (BITC-2 , 3 , 2-tet) Cl2-CC-49 IgG i naken mus som har LS-174T-tumorer.
Biologisk fordeling av 105Rh (BITC-2 , 3 , 2-tet) Cl2-B72 , 3 IgG i naken mus som har LS-174T-tumorer.
Eksempel 18
Konjugering av (105Rh (BITC-2 , 3 , 2-tet) Cl2)+ til antistof f-f ragmenter.
105Rh (BITC-2, 3, 2-tet) Cl2)+ ble bundet til lysinrestene i F(ab')2 fragmentet fra CC-49 antistoff ved følgende fremgangsmåte. 1,5 x 1CT<5> mmol (0,5 mCi) av 105Rh (BITC-2 , 3 , 2-tet) Cl2)+ ble avdampet til tørrhet under N2 i et 1,5 ml Eppendorf kule rør. Til dette tørkede kar ble 0,10 ml CC-49 F(ab')2 fragmenter (10 mg/ml i 0,1 M Na2C03, pH 9,5) fremstilt ved hjelp av den enzymatriske digesjonsmetoden beskrevet av Lamoyi og Nisonoff (E. Lamoyi og A. Nisonoff, J.immunol.Methods, 56, s. 235-243, (1983)) tilsatt. Reaksjonen ble tillatt å pågå i en time ved romtemperatur. De <105>Rh-merkede antistoff fragmenter ble isolert ved senterifugegel-filtrering. Antistoffintegriteten ble verifisert ved standard biokjemiske immunologiske prosedyrer.
Eksempel 19
In vivo lokalisering av 10<5>Rh-merket CC-49 (Fab')2.
Anvendbarheten av de <105>Rh-merkede antistoff fragmenter demonstrert ved å måle opptaket av materialet ved hjelp av en human tumor xenograf i en atymisk mus. Atymisk hunnmus (Nu/Nu) ble inokulert subkutant (S.K.) (0,1 ml/kilde) med den humane kolon karcinom celle linje, LS-174T (omtrent 4 x IO<6> celle/dyr). Omtrent to uker etter inokulering ble hvert dyr injisert via halevenen med 3 juCi ( 15 m g) <105>Rh merket CC-49 (Fab')2 i fosfatbufret salt-vann. Musene ble avlivet ved forskjellige tidspunkter, tumor og selekterte vev ble skåret ut og veiet og radioaktivitet målt i en gammateller. Tallene pr. min. pr. g av <105>RH i hvert vev (cpm/g) ble bestemt og uttrykt som funksjon av den injeserte mengde. Resultatene er vist i følgende tabell.
Biologisk fordeling av 105Rh (BITC-2 , 3 , 2-tet) Cl2-CC-49 F(ab')2 i naken mus som har LS-174T-tumorer.
Presentert data over den biologiske fordeling demonstrerer klart anvendbarheten av rhodiumchelat/antistoffkonjugater i lokalisering på tumorvev. Rhodiumchelat/antistoffkonjugatene finner hurtig tumorvevet og resten utskilles fra kroppen gjennom nyrene. Forholdene mellom tumor og normalt vev er store, hvilket indikerer at immunologisk påvisning/terapi er mulig.
Eksempel 20
På en lignende måte som den beskrevet i eksempel 19 ble atymiske mus som hadde LS-174T injisert med rhodiumchelat/antistof f konjugater (105Rh- merkede, både antistoff fragmenter (d.v.s. F(ab')2) og hele igG monoklonale antistoffer ble henholdsvis testet. Ved forskjellige tidspunkter etter injeksjon ble gamme-strålebilder av hele dyret oppnådd ved å anvende 319 og 3 06 kev gammastråler. Bildene viste hurtig utskillelse av radioaktivitet fra blodet og opptak i tumoren i samsvar med de kvantitative resultater oppnådd i eksempel 19.
Ved anvendelse av rhodiumchelat/antistoffkonjugatene fremstilt ved foreliggende oppfinnelse for diagnostikk eller behandling av en sykdomstilstand i et pattedyr, blir rhodiumchelat/antistof f konjugatene fortrinnsvis administrert i form av en sammensetning som omfatter rhodiumchelat/antistoffkonjugater i blanding med en farmasøytisk akseptabel bærer (d.v.s. en bærer som er inert overfor det aktive materialet og som ikke har noen signifikante skadelige bivirkninger eller toxisitet under betingelser for anvendelse). Rhodiumchelat/antistoffsammen-setningen blir.administrert på en måte som er egnet for den spesielle anvendelse, i de typiske tilfeller parenteral, f.eks. ved intraperitonial, subkutan eller intravenøs injeksjon. I slike anvendelser blir en effektiv mengde (en mengde tilstrekkelig til å gi den ønskede effekt) av et eller flere av rhodiumchelat/antistof fkonjugatene anvendt i sammensetningen. Seleksjon av spesielle rhodiumchelat/ antistoffkonjugat eller konjugater som skal anvendes i en spesiell sammensetning, blir diktert ved betraktninger slik som lett administrering, stabilitet, forenlighet med egnete bærere, etc. I spesielle tilfeller kan mengden som skal administreres, fastslås ved prosedyrer vel kjent på fagområdet. Sammensetningene som blir administrert er i de typiske tilfeller i væskeform slik som sterile ihjiserbare suspensjoner eller løsninger. Farmasøytisk akseptable bærere som kan anvendes i en hvilken som helst spesiell situasjon, kan lett bestemmes og er vel kjent på fagområdet og kan i tillegg eventuelt inneholde andre aktive materialer og/eller tilsetningsstoffer.

Claims (6)

1. Analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt konjugat som inneholder et rhodiumkompleks med den generelle formel hvor delformelen Ch har følgende struktur: hvor hver R uavhengig representerer en rettkjedet eller forgrenet alkylengruppe med 2 eller 3 karbonatomer, under den forut-setning at for hvilke som helst av to tilstøtende nitrogenatomer forbundet med en R-gruppe må R-gruppen gi minst tre enkeltbindinger mellom nitrogenatomene som den forbinder; hver R<1> uavhengig representerer hydrogen eller metyl; X og X<1> representerer hydrogen, eller X og X<1> tatt sammen representerer en benzyl- eller en rettkjedet eller forgrenet alkylengruppe med 2 eller 3 karbonatomer, med det forbehold at når X og X<1> er tatt sammen, må gruppen de representerer gi minst tre enkeltbindinger mellom de tilstøtende nitrogenatomer den forbinder; og den stiplede linje mellom X og X<1 >betyr en eventuell binding; n er et helt tall på 0 eller 1, forutsatt at når L-gruppen er bundet til det samme nitrogenatom, må n være 0, ellers må n være 1; og - L er en linker/spacer-gruppe kovalent bundet til, og erstatter et hydrogenatom ved, et hvilket som helst av nitrogen- eller karbonatomene som den er bundet til, idet L, som kun kan inngå ett sted i molekylet, er representert ved formelen hvor - s representerer et helt tall på 0 eller 1; t representerer et helt tall på 0 til 3 inklusive; dog kan ikke s og t samtidig være 0; R<2> representerer isotiocyanat, semikarbazid, tiosemi karbazid, amino eller karboksyl som tillater kovalent binding til et antistoff eller fragment av dette; og - P1 og P2 hver representerer det samme ellér forskjellig halogenid eller en H20-gruppe; og A representerer et eller flere anioner med tilstrekkelig ladning til å gjøre komplekset nøytralt, valgt blant F"' Cl"' Br;- I"' CN"' NCO"' SCN"' N3"' C104"' BF4"' N03" og PF6', karakterisert ved at den omfatter å omsette forbindelsen hvor A er definert som ovenfor; m er et helt tall fra 0 til 5; med forbindelsen ChP1P2 hvor Ch, P1 og P2 er definert som ovenfor; fulgt av konjugat- dannelse med et antistoff eller et fragment av et antistoff.
2. Fremgangsmåten i henhold til krav 1, karakterisert ved at reaksjonen utføres ved tilbakeløp, i en vandig løsning og med en pH på ca. 7.
3. Fremgangsmåten i henhold til krav 1, karakterisert ved atCher 3-(4-amino-fenyl) metyl) -1,5,8,12-tetraazacyklotetradekan.
4. Fremgangsmåten i henhold til krav 1, karakterisert ved atCher 6-(4-(amino-fenyl) metyl) -1,4,8,11-tetraazaundekan.
5. Fremgangsmåten i henhold til krav 1, karakterisert ved atCher 6-(3-(aminopropyl)-1,4,8,11-tetraazaundekan.
6. Fremgangsmåten i henhold til krav 1, karakterisert ved atCher 1,4,7,10-tetraaza-l-[(4-aminofenyl)metyl)]-cyklododekan.
NO882784A 1987-06-24 1988-06-23 Analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt konjugat av rhodiumkompleks NO178928C (no)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NO951117A NO180748C (no) 1987-06-24 1995-03-23 Forbindelser for anvendelse ved fremstilling av funksjonaliserte polyaminchelanter

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US07/065,739 US4994560A (en) 1987-06-24 1987-06-24 Functionalized polyamine chelants and radioactive rhodium complexes thereof for conjugation to antibodies

Publications (4)

Publication Number Publication Date
NO882784D0 NO882784D0 (no) 1988-06-23
NO882784L NO882784L (no) 1988-12-27
NO178928B true NO178928B (no) 1996-03-25
NO178928C NO178928C (no) 1996-07-03

Family

ID=22064774

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO882784A NO178928C (no) 1987-06-24 1988-06-23 Analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt konjugat av rhodiumkompleks

Country Status (19)

Country Link
US (2) US4994560A (no)
EP (1) EP0296522B1 (no)
JP (1) JP2728437B2 (no)
KR (1) KR970011005B1 (no)
CN (1) CN1022839C (no)
AT (1) ATE143364T1 (no)
CA (1) CA1341349C (no)
DE (1) DE3855564T2 (no)
DK (1) DK343288A (no)
ES (1) ES2091746T3 (no)
FI (1) FI101378B (no)
GR (1) GR3021537T3 (no)
HK (1) HK1006168A1 (no)
HU (1) HU201333B (no)
IL (1) IL86835A (no)
NO (1) NO178928C (no)
NZ (1) NZ225070A (no)
PT (1) PT87802B (no)
ZA (1) ZA884545B (no)

Families Citing this family (103)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5132409A (en) * 1987-01-12 1992-07-21 Bracco Industria Chimica S.P.A. Macrocyclic chelating agents and chelates thereof
US5006643A (en) * 1987-06-24 1991-04-09 The Dow Chemical Company Process for preparing isothiocyanato functionalized metal complexes
ZA894792B (en) * 1988-06-24 1991-04-24 Dow Chemical Co Macrocyclic bifunctional chelants,complexes thereof and their antibody conjugates
US5756065A (en) * 1988-06-24 1998-05-26 The Dow Chemical Company Macrocyclic tetraazacyclododecane conjugates and their use as diagnostic and therapeutic agents
CA1341373C (en) * 1988-06-24 2002-07-02 Roberta C. Cheng Macrocyclic bifunctional chelants, complexes thereof and their antibody conjugates
WO1990007261A2 (en) * 1988-12-22 1990-07-12 The Dow Chemical Company Process for preparing mono-n-alkylated polyazamacrocycles
BR8907282A (pt) * 1988-12-23 1991-03-12 Dow Chemical Co Processo para preparar complexos de metal funcionalizados com isotiocianato
US5808003A (en) * 1989-05-26 1998-09-15 Perimmune Holdings, Inc. Polyaminocarboxylate chelators
US5292868A (en) * 1989-05-26 1994-03-08 Akzo N.V. Chelating agents for attaching metal ions to proteins
DE3930674A1 (de) * 1989-09-11 1991-03-21 Diagnostikforschung Inst Bifunktionelle chelatbildner zur komplexierung von tc- und re-isotopen, verfahren zu ihrer herstellung und darstellung von konjugaten daraus sowie deren verwendung in diagnostik und therapie
CA2072080A1 (en) * 1990-01-19 1991-07-20 Jo Klaveness Chelating compounds
AU7587091A (en) * 1990-03-26 1991-10-21 United States of America, as represented by the Secretary, U.S. Department of Commerce, The A fonctionalized complexand
US5283293A (en) * 1990-12-14 1994-02-01 Corvas, Inc. Reagents for automated synthesis of peptide analogs
GB9105489D0 (en) * 1991-03-15 1991-05-01 Johnson Matthey Plc Improvements in chemical compounds
DE4140779A1 (de) * 1991-12-06 1993-06-09 Schering Ag Berlin Und Bergkamen, 1000 Berlin, De Verfahren zur herstellung von mono-n-substituierten tetraazamakrocyclen
US5410043A (en) * 1991-12-06 1995-04-25 Schering Aktiengesellschaft Process for the production of mono-N-substituted tetraaza macrocycles
GB9126677D0 (en) * 1991-12-16 1992-02-12 Johnson Matthey Plc Improvements in chemical compounds
WO1993020852A2 (en) * 1992-04-13 1993-10-28 The Dow Chemical Company Macrocyclic chelating agents, chelates and conjugates thereof
US5310535A (en) * 1992-04-24 1994-05-10 The Dow Chemical Company Carboxamide modified polyamine chelators and radioactive complexes thereof for conjugation to antibodies
DE4218744C2 (de) * 1992-06-04 1997-11-06 Schering Ag Verfahren zur Herstellung von N-ß-Hxdroxyalkyl-tri-N-carboxylalkyl-1,4,7,10-tetraazacyclododecan- und N-ß-Hydroxyalkyl-tri-N-carboxyalkyl-1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan-Derivaten und deren Metallkomplexe
EP0588229A3 (en) * 1992-09-12 1994-06-15 Hoechst Ag Macrocyclic chelating agents for the preparation of technetium or rhenium complexes
WO1995026206A1 (en) * 1994-03-28 1995-10-05 The Regents Of The University Of California Method for preparing radionuclide-labeled chelating agent-ligand complexes
HUT76318A (en) * 1994-04-22 1997-08-28 Searle & Co Diagnostic image analysis with metal complexes
EP0757694A4 (en) * 1994-04-29 1998-05-06 Univ Missouri THIOETHER COMPOUNDS FOR THE PREPARATION OF BIFUNCTIONAL CHELATING AGENTS FOR THERAPEUTIC RADIOPHARMACEUTICALS
US7820798B2 (en) * 1994-11-07 2010-10-26 Human Genome Sciences, Inc. Tumor necrosis factor-gamma
US7597886B2 (en) * 1994-11-07 2009-10-06 Human Genome Sciences, Inc. Tumor necrosis factor-gamma
US5663161A (en) 1995-02-17 1997-09-02 The Research Foundation Of State University Of New York Anti-viral triaza compounds
US5719033A (en) * 1995-06-28 1998-02-17 Motorola, Inc. Thin film transistor bio/chemical sensor
WO1997001520A1 (en) * 1995-06-28 1997-01-16 E.I. Du Pont De Nemours And Company Composition and method for stabilizing radiolabeled organic compounds
BR9610241A (pt) 1995-08-17 1999-06-29 Monsanto Co Processos para análise de imagem de diagnóstico utilizando bioconjgados de complexos de metal de ligandos macrocíclicos contendo nitrogênio
US5871436A (en) * 1996-07-19 1999-02-16 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Radiation therapy method and device
US5782740A (en) * 1996-08-29 1998-07-21 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Radiation dose delivery catheter with reinforcing mandrel
US6143849A (en) * 1996-11-27 2000-11-07 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Synthesis of acrylate and alkyl acrylate monomers and polymers of chelators
US6776792B1 (en) * 1997-04-24 2004-08-17 Advanced Cardiovascular Systems Inc. Coated endovascular stent
US6210312B1 (en) 1997-05-20 2001-04-03 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Catheter and guide wire assembly for delivery of a radiation source
US6159139A (en) * 1998-02-17 2000-12-12 Advanced Cardiovascular Systems Inc. Radiation delivery catheter with a spring wire centering mechanism
US6224535B1 (en) 1998-02-17 2001-05-01 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Radiation centering catheters
US6159140A (en) * 1998-02-17 2000-12-12 Advanced Cardiovascular Systems Radiation shielded catheter for delivering a radioactive source and method of use
US6235363B1 (en) 1998-05-06 2001-05-22 Avery Dennison Corporation Composite construction containing barrier layer
AU3501700A (en) 1999-02-26 2000-09-14 Human Genome Sciences, Inc. Human endokine alpha and methods of use
US6790228B2 (en) * 1999-12-23 2004-09-14 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Coating for implantable devices and a method of forming the same
US6582417B1 (en) 1999-09-22 2003-06-24 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Methods and apparatuses for radiation treatment
US6605031B1 (en) 1999-09-22 2003-08-12 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Stepped centering balloon for optimal radiation delivery
US7994449B2 (en) 2000-02-16 2011-08-09 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Square-wave laser bonding
US7163504B1 (en) 2000-02-16 2007-01-16 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Multi-lumen fluted balloon radiation centering catheter
JP2003530838A (ja) 2000-04-12 2003-10-21 ヒューマン ゲノム サイエンシズ インコーポレイテッド アルブミン融合タンパク質
EP1294949A4 (en) 2000-06-15 2004-08-25 Human Genome Sciences Inc HUMAN TUMORNESCROSE FACTOR DELTA AND EPSILON
KR101287395B1 (ko) 2000-06-16 2014-11-04 휴먼 게놈 사이언시즈, 인코포레이티드 면역특이적으로 ＢＬｙＳ에 결합하는 항체
US6783793B1 (en) * 2000-10-26 2004-08-31 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Selective coating of medical devices
US6764505B1 (en) 2001-04-12 2004-07-20 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Variable surface area stent
MXPA03010747A (es) 2001-05-25 2004-03-02 Human Genome Sciences Inc Anticuerpos que se unen inmunoespecificamente a receptores de ligando inductor de apoptosis relacionado con factor de necrosis tumoral.
US7862495B2 (en) * 2001-05-31 2011-01-04 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Radiation or drug delivery source with activity gradient to minimize edge effects
US6565659B1 (en) * 2001-06-28 2003-05-20 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Stent mounting assembly and a method of using the same to coat a stent
US6656216B1 (en) * 2001-06-29 2003-12-02 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Composite stent with regioselective material
EP1411918B1 (en) 2001-07-31 2011-12-28 Genzyme Global S.à.r.l. Methods to mobilize progenitor/stem cells
CA2471363C (en) 2001-12-21 2014-02-11 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
US20080194481A1 (en) 2001-12-21 2008-08-14 Human Genome Sciences, Inc. Albumin Fusion Proteins
EP1497445A2 (en) * 2002-04-01 2005-01-19 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that specifically bind to gmad
US7371383B2 (en) 2002-04-12 2008-05-13 Medimmune, Inc. Recombinant anti-interleukin-9 antibodies
NZ537579A (en) * 2002-06-10 2006-10-27 Vaccinex Inc C35 peptide epitopes and their analogs
US7169178B1 (en) * 2002-11-12 2007-01-30 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Stent with drug coating
AU2003302254A1 (en) * 2002-12-16 2004-07-22 Avery Dennison Corporation Analyte detecting article and method
US7198675B2 (en) * 2003-09-30 2007-04-03 Advanced Cardiovascular Systems Stent mandrel fixture and method for selectively coating surfaces of a stent
GB0416062D0 (en) * 2004-07-19 2004-08-18 Amersham Plc Improved N4 chelator conjugates
NZ547591A (en) * 2003-12-04 2009-11-27 Vaccinex Inc Methods of killing tumor cells by targeting internal antigens exposed on apoptotic tumor cells
US7563324B1 (en) 2003-12-29 2009-07-21 Advanced Cardiovascular Systems Inc. System and method for coating an implantable medical device
NZ548612A (en) 2004-02-09 2009-11-27 Human Genome Sciences Inc Albumin fusion proteins comprising tandem GLP-1
US7973139B2 (en) * 2004-03-26 2011-07-05 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies against nogo receptor
US7553377B1 (en) 2004-04-27 2009-06-30 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Apparatus and method for electrostatic coating of an abluminal stent surface
US20050288481A1 (en) * 2004-04-30 2005-12-29 Desnoyer Jessica R Design of poly(ester amides) for the control of agent-release from polymeric compositions
US7632307B2 (en) 2004-12-16 2009-12-15 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Abluminal, multilayer coating constructs for drug-delivery stents
US20060216431A1 (en) * 2005-03-28 2006-09-28 Kerrigan Cameron K Electrostatic abluminal coating of a stent crimped on a balloon catheter
ES2561628T3 (es) 2005-05-06 2016-02-29 Zymogenetics, Inc. Anticuerpos monoclonales IL-31 y métodos de uso
US7867547B2 (en) 2005-12-19 2011-01-11 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Selectively coating luminal surfaces of stents
US20070148251A1 (en) * 2005-12-22 2007-06-28 Hossainy Syed F A Nanoparticle releasing medical devices
MX2008011905A (es) 2006-03-21 2008-09-30 Genentech Inc Terapia de combinacion.
US8003156B2 (en) * 2006-05-04 2011-08-23 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Rotatable support elements for stents
US8603530B2 (en) 2006-06-14 2013-12-10 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Nanoshell therapy
US8048448B2 (en) * 2006-06-15 2011-11-01 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Nanoshells for drug delivery
US20080305111A1 (en) * 2006-06-22 2008-12-11 Vaccinex, Inc. Anti-C35 antibodies for treating cancer
US8017237B2 (en) 2006-06-23 2011-09-13 Abbott Cardiovascular Systems, Inc. Nanoshells on polymers
WO2008028192A2 (en) 2006-09-01 2008-03-06 Zymogenetics, Inc. Variable region sequences of il-31 monoclonal antibodies and methods of use
WO2008105473A1 (ja) * 2007-02-28 2008-09-04 National University Corporation Chiba University 抗悪性腫瘍薬
US8048441B2 (en) 2007-06-25 2011-11-01 Abbott Cardiovascular Systems, Inc. Nanobead releasing medical devices
CN101970488B (zh) 2007-12-07 2014-06-18 津莫吉尼蒂克斯公司 对il-31特异的人源化抗体分子
EP2237792B1 (en) 2007-12-26 2017-05-24 Vaccinex, Inc. Anti-c35 antibody combination therapies and methods
AU2009335000B2 (en) 2008-12-30 2014-11-13 Children's Medical Center Corporation Method of predicting acute appendicitis
RU2011142974A (ru) 2009-03-25 2013-04-27 Дженентек, Инк. НОВЫЕ АНТИТЕЛА ПРОТИВ α5β1 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
CN102666473B (zh) * 2009-10-08 2014-04-23 安格斯化学公司 低voc多胺
US20110293629A1 (en) 2010-05-14 2011-12-01 Bastid Jeremy Methods of Treating and/or Preventing Cell Proliferation Disorders with IL-17 Antagonists
GB201008584D0 (en) * 2010-05-22 2010-07-07 Univ Warwick Novel iridium anti-cancer compounds
US10384078B2 (en) * 2013-10-15 2019-08-20 Ip Liberty Vision Corporation Polymeric radiation-sources
ES2905777T3 (es) 2014-05-30 2022-04-12 Shanghai Henlius Biotech Inc Anticuerpos anti-receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR)
EP3029032A1 (en) * 2014-12-05 2016-06-08 Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS) Bifunctional do2pa derivatives, chelates with metallic cations and use thereof
SG10201913158PA (en) 2015-04-03 2020-02-27 Eureka Therapeutics Inc Constructs targeting afp peptide/mhc complexes and uses thereof
CA2980189A1 (en) 2015-04-24 2016-10-27 Genentech, Inc. Multispecific antigen-binding proteins
AU2017327828B2 (en) 2016-09-16 2023-11-16 Shanghai Henlius Biotech, Inc. Anti-PD-1 antibodies
TW201831517A (zh) 2017-01-12 2018-09-01 美商優瑞科生物技術公司 靶向組織蛋白h3肽/mhc複合體之構築體及其用途
AU2018258049A1 (en) 2017-04-26 2019-12-12 Eureka Therapeutics, Inc. Constructs specifically recognizing glypican 3 and uses thereof
AU2019235033A1 (en) 2018-03-14 2020-07-30 Beijing Xuanyi Pharmasciences Co., Ltd. Anti-claudin 18.2 antibodies
CA3103936A1 (en) 2018-06-18 2019-12-26 Eureka Therapeutics, Inc. Constructs targeting prostate-specific membrane antigen (psma) and uses thereof
CN112300279A (zh) 2019-07-26 2021-02-02 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 针对抗cd73抗体和变体的方法和组合物
CN110818795B (zh) 2020-01-10 2020-04-24 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 抗tigit抗体和使用方法

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2803528C2 (de) 1977-03-09 1984-10-18 Tabushi, Iwao, Kyoto Schwermetallionen-Adsorbens und dessen Verwendung zum Adsorbieren von Schwermetallionen
US4622420A (en) * 1980-03-18 1986-11-11 The Regents Of The University Of California Chelating agents and method
US4454106A (en) * 1982-06-07 1984-06-12 Gansow Otto A Use of metal chelate conjugated monoclonal antibodies
US4479930A (en) * 1982-07-26 1984-10-30 Trustees Of The University Of Massachusetts Amines coupled wth dicyclic dianhydrides capable of being radiolabeled product
US4615876A (en) * 1983-04-25 1986-10-07 Curators Of The University Of Missouri Macrocyclic complexes of technetium-99m for use as diagnostic radionuclides
US4678667A (en) * 1985-07-02 1987-07-07 501 Regents of the University of California Macrocyclic bifunctional chelating agents
US4885363A (en) * 1987-04-24 1989-12-05 E. R. Squibb & Sons, Inc. 1-substituted-1,4,7-triscarboxymethyl-1,4,7,10-tetraazacyclododecane and analogs
GB8603537D0 (en) * 1986-02-13 1986-03-19 Parker D Conjugate compound
US5057302A (en) * 1987-02-13 1991-10-15 Abbott Laboratories Bifunctional chelating agents
US5006643A (en) * 1987-06-24 1991-04-09 The Dow Chemical Company Process for preparing isothiocyanato functionalized metal complexes

Also Published As

Publication number Publication date
KR890000408A (ko) 1989-03-14
FI883046A0 (fi) 1988-06-23
NZ225070A (en) 1992-10-28
JP2728437B2 (ja) 1998-03-18
IL86835A0 (en) 1988-11-30
ES2091746T3 (es) 1996-11-16
KR970011005B1 (ko) 1997-07-05
FI101378B1 (fi) 1998-06-15
ZA884545B (en) 1990-02-28
US5284644A (en) 1994-02-08
ATE143364T1 (de) 1996-10-15
HU201333B (en) 1990-10-28
AU614973B2 (en) 1991-09-19
DK343288D0 (da) 1988-06-22
EP0296522B1 (en) 1996-09-25
DE3855564D1 (de) 1996-10-31
PT87802B (pt) 1992-10-30
US4994560A (en) 1991-02-19
HUT48636A (en) 1989-06-28
PT87802A (pt) 1989-05-31
IL86835A (en) 1994-01-25
DK343288A (da) 1988-12-25
CA1341349C (en) 2002-03-19
EP0296522A3 (en) 1990-07-04
EP0296522A2 (en) 1988-12-28
FI883046A (fi) 1988-12-25
CN1022839C (zh) 1993-11-24
FI101378B (fi) 1998-06-15
GR3021537T3 (en) 1997-02-28
NO882784L (no) 1988-12-27
JPS6426586A (en) 1989-01-27
DE3855564T2 (de) 1997-02-13
HK1006168A1 (en) 1999-02-12
NO882784D0 (no) 1988-06-23
CN1030588A (zh) 1989-01-25
AU1833288A (en) 1989-01-05
NO178928C (no) 1996-07-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO178928B (no) Analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt konjugat av rhodiumkompleks
US5489425A (en) Functionalized polyamine chelants
JP2831073B2 (ja) 大環状二官能キレート剤、その錯体及びそれらの抗体接合体
AU638127B2 (en) A bifunctional dtpa-type ligand
US5756065A (en) Macrocyclic tetraazacyclododecane conjugates and their use as diagnostic and therapeutic agents
Wu et al. Stereochemical influence on the stability of radio-metal complexes in vivo. Synthesis and evaluation of the four stereoisomers of 2-(p-nitrobenzyl)-trans-CyDTPA
US5652361A (en) Macrocyclic ligands and complexes
US5183653A (en) Boronic acid adducts of metal dioxime complexes useful in labelling proteins and other amine-containing compounds
WO1993021963A2 (en) Carboxamide modified polyamine chelators and radioactive complexes and conjugation
van Staveren et al. S‐Functionalized Cysteine: Powerful Ligands for the Labelling of Bioactive Molecules with Triaquatricarbonyltechnetium‐99m (1+)([99mTc (OH2) 3 (CO) 3]+)
CA2001765C (en) Chelants possessing ortho ligating functionality and complexes thereof
WO2005087275A2 (en) Metal radiolabeled pet imaging agents
CN110496233B (zh) 一种spect显像剂及其标记前体及其制备方法、组合物和用途
AU2015203742A1 (en) Labeled inhibitors of prostate specific membrane antigen (psma), biological evaluation, and use as imaging agents
EP0630264A4 (en) LIGANDS TO IMPROVE METAL CHELATE-GENERATION KINETICS.
EP0688313B1 (en) Ligands and metal complexes thereof
KR0132614B1 (ko) 작용화된 폴리아민 킬레이트제, 및 이의 로듐 착화합물 및 이의 제조방법
US5656253A (en) Ligands useful in radiographic imaging
Mishra et al. A new bifunctional chelating agent conjugated with monoclonal antibody and labelled with technetium-99m for targeted scintigraphy: 6-(4-isothiocyanatobenzyl)-5, 7-dioxo-1, 11-(carboxymethyl)-1, 4, 8, 11-tetraazacyclotridecane
NZ239845A (en) Rhodium complexes, conjugates with antibodies or antibody fragments, and pharmaceutical compositions
EP0575583A1 (en) Bicyclopolyazamacrocyclocarboxylic acid complexes, their conjugates processes for their preparation, and use as radiopharmaceuticals
AU683213B2 (en) Bicyclopolyazamacrocyclocarboxylic acid complexes, their conjugates, processes for their preparation, and use as contrast agents
NO179585B (no) Fremgangsmåte ved fremstilling av antistoffkonjugater med makrocykliske bifunksjonelle chelaterte komplekser
HU221187B1 (en) Process for the production of 1,4,7,10-tetraazacyclododecane derivatives, complexes and conjugates with antibody thereof and medicaments containing the same and diagnostics compraising these conjugates and complexes
NO179871B (no) Diagnostisk anvendelig makrocyklisk kompleksforbindelse

Legal Events

Date Code Title Description
MM1K Lapsed by not paying the annual fees

Free format text: LAPSED IN DECEMBER 2000