NO178647B - Fremgangsmåte for gravimetrisk analyse av blod og test-sett for denne - Google Patents
Fremgangsmåte for gravimetrisk analyse av blod og test-sett for denne Download PDFInfo
- Publication number
- NO178647B NO178647B NO901700A NO901700A NO178647B NO 178647 B NO178647 B NO 178647B NO 901700 A NO901700 A NO 901700A NO 901700 A NO901700 A NO 901700A NO 178647 B NO178647 B NO 178647B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- lymphocytes
- blood
- antigen
- patient
- lymphoblasts
- Prior art date
Links
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims abstract description 40
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims abstract description 40
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 27
- 238000004442 gravimetric analysis Methods 0.000 title claims description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 47
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 43
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 43
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 43
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000013642 negative control Substances 0.000 claims description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 claims description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims 1
- 239000000463 material Substances 0.000 claims 1
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 claims 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 14
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 14
- 230000004044 response Effects 0.000 abstract description 13
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract description 4
- 208000016604 Lyme disease Diseases 0.000 abstract description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 abstract description 2
- 206010018612 Gonorrhoea Diseases 0.000 abstract description 2
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 abstract description 2
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 241000606651 Rickettsiales Species 0.000 abstract description 2
- 206010039438 Salmonella Infections Diseases 0.000 abstract description 2
- 239000013566 allergen Substances 0.000 abstract description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 abstract description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 abstract description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 abstract description 2
- 208000001786 gonorrhea Diseases 0.000 abstract description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 abstract description 2
- 206010039447 salmonellosis Diseases 0.000 abstract description 2
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 abstract description 2
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 abstract 1
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 abstract 1
- 102000007238 Transferrin Receptors Human genes 0.000 abstract 1
- 108010033576 Transferrin Receptors Proteins 0.000 abstract 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 abstract 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 abstract 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 abstract 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 4
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 201000005404 rubella Diseases 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(tritiooxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO[3H])O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C)=C1 IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 0.000 description 1
- IRPGOXJVTQTAAN-UHFFFAOYSA-N 2,2,3,3,3-pentafluoropropanal Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C=O IRPGOXJVTQTAAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010027654 Allergic conditions Diseases 0.000 description 1
- KLZUFWVZNOTSEM-UHFFFAOYSA-K Aluminum fluoride Inorganic materials F[Al](F)F KLZUFWVZNOTSEM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000589969 Borreliella burgdorferi Species 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010012442 Dermatitis contact Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 231100000569 acute exposure Toxicity 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 208000010247 contact dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- YFHXZQPUBCBNIP-UHFFFAOYSA-N fura-2 Chemical compound CC1=CC=C(N(CC(O)=O)CC(O)=O)C(OCCOC=2C(=CC=3OC(=CC=3C=2)C=2OC(=CN=2)C(O)=O)N(CC(O)=O)CC(O)=O)=C1 YFHXZQPUBCBNIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5091—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing the pathological state of an organism
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56966—Animal cells
- G01N33/56972—White blood cells
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/975—Kit
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/25—Chemistry: analytical and immunological testing including sample preparation
- Y10T436/25375—Liberation or purification of sample or separation of material from a sample [e.g., filtering, centrifuging, etc.]
Description
Denne oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte for gravimetrisk analyse av blod for å bestemme et individs forutgående in vivo sensitivitet mot et mistenkt antigen mot hvilket lymfocytter i blodet kan ha blitt forsensitivisert, hvilken fremgangsmåte utføres ved å sette det mistenkte antigen til blod in vitro og et testsett for bestemmelse av en pasients foreksponering overfor et antatt antigen overfor hvilke lymfocytter i blodet kan ha blitt sensitivisert.
Disse er spesielt anvendelige med hensyn til antigener indikative på sykdommer, infeksjoner, allergier eller lignende sykdommer.
Når man diagnostiserer pasienter for mulige sykdommer eller lignende, vil legen typisk utføre blodprøver for å bestemme tilstedeværelse eller fravær av stoffer i blodet som er indikative på tidligere eksponering for forskjellige smittestoffer eller andre sykdommer. Tradisjonelle tester for å bestemme en pasients tidligere eksponering for antigener, hovedsakelig infeksiøse agenser, har vanligvis vært avhengig av tester for tilstedeværelse eller fravær av et sirkulerende humoralt antistoff rettet mot det foreslåtte antigen. Et eksempel på slike tester er blodtester for å påvise: immunitet overfor Rubella (tyske meslinger); og en rekke andre virus og bakterieantigener. Måtene for å påvise antistoffet er mange og inkluderer: lateksagglutinasjon, hvor agglu-tinasjonen eller mangel på agglutinasjon av antigenbelagte latekspartikler observeres; enzymbundet immuno-substratmåling (ELISA) hvor utviklingen av en farge observeres enten visuelt eller spektrofotometrisk; radioimmunomåling hvor målingen av radioaktivitet blir målt; liposomteknologi hvor tilstedeværelse og intensitet (eller fravær) av en farge eller fluorescerende farge i liposomene påvises; radioimmuno-sorbantmåling (RAST), hvor målingen av radioaktivitet heftet til et fast substrat blir målt; og indirekte immunofluorescens hvor det immobiliserte antigen går til antistoffet som skal påvises og får anledning til å reagere med prøven som blir testet, idet antigenet vaskes for å fjerne ikke-spesifikt tilheftende antistoffer, og et fluorescensmerket antistoff rettet mot klassen av antistoffet som det blir testet for, påføres, og tilstedeværelse eller fravær av fluorescens blir bestemt; så vel som andre metoder. Antistoffer som måtte være tilstede, kan titreres, og deres immunglobulinklasse (av mest interesse er: IgM, som betegner akutt eksponering; IgG, som betegner tidligere eksponering; og IgE, som betegner en allergisk tilstand) kan bestemmes, for derved å bestemme indivitets tidligere eksponering for det gitte antigen. Alle testene ovenfor er målinger av funksjonen av en gruppe av lymfocytter kalt B-lymfocytter. I tilfellene, eller sykdoms-prosessene, hvor liten eller ingen antistoffrespons oppstår, vil testene ovenfor utelukke å bestemme individets tidligere eksponering.
Mange sykdommer og kliniske tilstander resulterer imidlertid ofte ikke i påvisbare humorale antistoffer, dvs. en B-lymfocyttrespons, men produserer faktisk celleimmunitet, dvs. en T-lymfocyttrespons. Eksempler på slike sykdommer og kliniske tilstander hvor T-lymfocyttresponsen dominerer, inkluderer mange parasittsykdommer, tuberkulose, salmonellose, gonoré, soppinfeksjoner, rickettsiainfeksjonerbg Lyme disease. Som nylig rapportert av Dattwyler et al. (New England Journal; of Medicine, vol. 319, på 1441, 1988) er det en signifikant del av pasientene, inkludert noen som har mottatt noe antibiotikaterapi tidligere i forløpet av sykdommen, som ikke produserer påvisbare antistoffer mot Lyme disease spirocheten, men har en målbar T-lymfocyttrespons.
Det er to hovedmåter for påvisning av om hvorvidt en T-lymfocyttrespons har funnet sted i blodet p.g.a. tidligere eksponering for sykdommen, infeksiøse agenser eller lignende. Den første fremgangsmåte er avhengig av tilstedeværelse av morfologiske celleforandringer som fremkommer fra tidligere eksponering. Tidligere eksponerte T-lymfocytter vil anta blast-lignende karakteristika når'de blir eksponert på nytt for de spesielle antigener. F.eks. vil T-lymfocyttene utvikle en kjerne som er større en normalt og en rikelig basofil cytoplasma. Biokjemiske forandringer indikative på aktivering vil også forekomme, slik som: økt omsetning av membran- fosfolipider; økt syntese av RNA og proteiner; forandringer i intra-cellulær Ca++-konsentrasjon; ekspresjon av overflatereseptor for T-cellevekstfaktorinterleukin-2; og økning i inkorporering av 3H-tymidin, så vel som andre forandringer oppsummert i en artikkel av T. Chatila et al., (New England Medical Journal, vol.320, side 696, 1989).
Den tidligere mest anvendte fremgangsmåte for å måle T-lymfoblaster, og den som anvendes av Dattwyler et al. i 'deres studium av Lyme disease, for å påvise tilstedeværelse eller fravær av en spesifikk T-lymfocyttrespons til et gitt antigen, er den tritierte tymidinopptaksmåling (3H-tymidinopptaksmåling). Denne måling er tungvint, krever anvendelse av radioaktive isotoper, og krever isolasjon av relativt rene populasjoner av lymfocytter, og tar også flere dager å full-føre.
Denne oppfinnelse vedrører en enkel teknikk for påvisning av tilstedeværelse eller fravær av tidligere eksponerte T-lymfocytter i en pasients blod. Pasentens fullblod inkuberes med antigenet for den mistenkte sykdom som blir diagnostisert, idet antigenet dispergeres i et egnet pH-regulert medium, slik som en buffret saltløsning f.eks. Denne inkubering vil forårsake at tidligre eksponerte lymfocytter blir aktivert og tilslutt antar blastmorfologi, dvs. blir lymfoblaster. Etter en egnet inkuberingsperiode blir en fluorescerende farge, slik som acetometylesteren av den . kalsiumfølsomme farge fura-2, eller annen farge som har en affinitet for aktiverte lymfocytter■eller lymfoblaster, tilsatt til blodprøven. Fargen kan oppnå sin tiltrekning til aktiverte lymfocytter eller resulterende lymfoblaster gjennom kjemiske midler, dvs. ved å være kombinerbare med overskudd av kalsiumioner, eller på andre måter, slik som ved å merkes med et fluorescensmerket antistoff spesifikt for transferrin, Leu-23, overflatereséptoren for T-cellevekstfaktor interleukin-2 eller lignende. Tilsetningen av fargen, fargestoffet eller det fluorescensmerkede antistoff vil differensielt fremheve alle responerende lymfocytter eller lymfoblaster i blodprøven. Det bør legges merke til at det fremhevende tilsetningsstoff kan binde seg til responderende lymfocytter, enten før eller etter at de har blitt sanne lymfoblaster. Pre-sensitiviserte lymfocytter kan derfor vise de karakteristika som tiltrekker tilsetningsstoffet før fullstendig morfologisk forandring forekommer. Det behandlede blod blir så sentrifugert i et gjennomsiktig rør som har et flytelegeme som vil konsentrere alle lymfocyttene, inkludert alle lymfoblaster i et lite område i røret. Den sistnevnte cellekonsentreringsteknikk er beskrevet i U.S. patentnr. 4.027.660, bevilget 7. juni 1977 til Stephen Clark Wardlaw et al. Røret kan være et kapillært rør eller et forevakuert større rør. Etter at cellekonsen-trasjonen er blitt utført, blir lymfocyttlaget undersøkt for å påvise farging eller fluorescensnivåer som er indikative på tilstedværelse av lymfoblaster i lymfocyttlaget. Påvisningen av slik farge eller fluorescenskarakteristika kan utføres med et instrument slik som de beskrevet i U.S. patenter nr. 4.156.570, bevilget mai 1978 og 4;558.947, bevilget desember 1985, begge til Stephen C. Wardlaw.
Det er derfor et mål for denne oppfinnelsen å tilveie-bringe en forbedret fremgangsmåte og tilhørende utstyr for diagnostisering før pasientens eksponering overfor et suspekt antigen som sensitiviserer lymfocytter i pasientens blod.
Det er et videre mål for denne oppfinnelse å tilveie-bringe en fremgangsmåte av den innledningsvis nevnte art, hvor en valgfritt påvisbar indikator tilsettes til blodprøven for optisk å fremheve responderende lymfocytter i blodprøven.
Det er et tilleggsmål for denne oppfinnelse å tilveie-bringe en fremgangsmåte av den innledningsvis nevnte art, hvor de sensitiviserte lymfocytter er T-lymfocytter.
Det er et annet mål for denne oppfinnelse å tilveie-bringe en fremgangsmåte av den innledningsvis nevnte art, hvor blodprøven sentrifugeres i et gjennomsiktig rør for å konsentrere lymfocyttene i et bånd som så blir optisk analysert for indikasjon på fremheving.
Oppfinnelsens særpreg fremgår av krav l's og krav 10's karakteriserende deler.
De ovennevnte og andre mål og fordeler vil bli lettere synlig fra den følgende detaljerte beskrivelse av en fore-trukket utførelsesform av oppfinnelsen sett i sammenheng med de medfølgende tegninger, hvor: Fig. 1 er et perspektivoverblikk av tre prøverør anvendt i et testsett for å utføre prosedyren i henhold til oppfinnelsen; og Fig. 2 er et perspektivoverblikk av et sentrifugerør som viser blodcellene lagdelt for undersøkelse med optisk belysning.
Oppfinnelsen gir adgang til inklusjon av negative og positive kontroller. En negativ kontroll anvendes for å bestemme at T-lymfocyttene ikke responderer overfor ikke-spesifikke stimuli. Den positive kontroll anvendes for å bestemme hvorvidt pasientens lymfocytter er i stand til å respondere overfor antigener enten enkeltvis eller i kombina-sjon som legen vet at pasienten er blitt eksponert for tidligere, slik som tetanustoksoid, difteritoksoid, monslia eller kjemikaler kjent for å aktivere lymfocytter slik som fyto-hemagglutiminer, aluminiumfluorid eller lignende.
Pasientens blod kan plasseres i tre separate reagens-brønner eller beholdere, en negativ testkontroll-beholder 2, en prøvebehodler 4 og en positiv testkontroll-beholder 6, hvorav hver har en stoppelukning 8, hvorigjennom blodet kan overføres. Fargen kan tilsettes separat eller kan forhånds-belegges inn i det indre av de tre beholdere.
Den negative testbeholder 2 har antigenmediet i seg, men ingen antigener. Blodet tilsettes til antigenmediet, inkuberes deri, det samme som med testprøven, og fargestoffet eller det fluorescerende stoff tilsettes. Blodprøven blir så sentrifugert i et sentrifugerør 10 som inneholder et plast-flytelegeme 12 som begrenser rommet tilgjengelig for lymfo-cytt/monocyttcellebånd 14. Dette bånd blir så undersøkt for tegn på fremhevning. Hvis noe observeres, vil påliteligheten av et likt resultat i testprøven være åpent for spørsmål, siden lymfocyttaktivering kan forekomme spontant i en blod-prøve. Hvis ingen farge sees, blir\så påliteligheten av prøveresultatene bekreftet, dvs. det blir bekreftet at ingen
spontane lymfoblaster er tilstede i blodprøven.
Den positive testbeholder 6 anvendes for å blande blod-prøven med enten et antigen (som beskrevet ovenfor) fra infeksiøse agens, som er kjent for å aktivere lymfocytter i den store majoritet av normale pasienter. Den positive inkubasjohsblanding blir så sentrifugert som vist i Fig. 2 med et fargestoff eller fluorescerende stoff som har affinitet for de gjærcelleinduserte lymfoblaster som vil dannes i den inkuberte blodprøve. Tilstedeværelse eler fravær av fremhevede lymfoblaster i cellebånd 14 vil så legges merke til. Hvis de er tilstede, blir følsomheten av pasientens blod overfor testen bekreftet. Hvis ingen blir lagt merke til, kan legen bekrefte at pasienten ikke er følsom overfor testen, og det kan anvendes en fremgangsmåte for å bestemme grunnen til mangel på positiv respons overfor sykdomsantigenene det blir testet for, og den negative respons overfor det testede antigen vil ikke betraktes som indikativ på mangel på tidligere eksponering og sensitivisering for det samme.
Anvendbarheten av testen på pasienten kan således bekreftes ved pasientens positive respons overfor den positive kontroll og negative respons overfor den negative kontroll.
Denne oppfinnelse er forskjellig fra tidligere fremgangsmåte på følgende måter: 1. Den anvender til forskjell fra de individuelle celle-tellere som bestemmer fluorescenssignalet fra hver enkelt celle integrert fluorescens fra hele populasjonen av pakkede lymfocytter (flere hundre tusen inneholdt i lymfocytt/mono-cyttbåndet i et sentrifugert kapillærrør som inneholder 110 mikroliter blod);2. Den krever ikke forhåndsrensing og isolasjon av lymfocyttene, og kan derfor utføres på fullblod (antikoagulert);3. Den krever ikke anvendelse av noen radioaktive isotoper; og4.Anvendelsen av en integrert negativ og positiv kontroll sammen med en forhåndsbestemt mengde av antigen i en kombinert test-pack, sammen med et program som tolker resultatet, til-later dets enkle anvendelse av personale som ikke er trenet i
forskning.
Den potensielle anvendbarhet av en lett utformet test av T-lymfocyttrespons overfor et antigen er meget stor. I til-legg til den mulige hjelp i diagnostikk av sykdommene fremsatt tidligere, kan oppfinnelsens testingsmetodikk være anvendbar i de følgende tilstander: diagnostisering av årsaken til for-sinkede hypersensitivitetsreaksjoner slik som eksem eller kontaktdermatitt; diagnostisering av visse virusinfeksjoner i løpet av "vindu"-perioden før målbar antistoffrespons; etter forløpet av autoimmun sykdom; og i diagnostikk av tilstedeværelse av tumorantigener eller som et mål for antitumor-immunitet.
Testen kan også utføres med et panel av antigener, f.eks. antigener fra flere arter av malaria. Hvis det er sett en positiv reaksjon, kan de individuelle artstester utføres for å identifisere artene av malaria involvert. Paneltesting av allergener kan også utføres med videre spesifikke tester.
Oppfinnelsen er blitt beskrevet i forbindelse med humane pasienter, men den kan også anvendes på dyr.
De vedlagte krav angir beskyttelsesomfanget.
Claims (11)
1. Fremgangsmåte for gravimetrisk analyse av blod for å bestemme et individs forutgående in vivo sensitivitet mot et mistenkt antigen mot hvilket lymfocytter i blodet kan ha blitt forsensitivisert, hvilken fremgangsmåte utføres ved å sette det mistenkte antigen til blod%in vitro,karakterisert vedtrinnene: a) dannelse av en in vitro blanding av individets antikoagu-lerte fullstendige blod med det mistenkte antigen og inkubere nevnte blanding, b) tilsetning av en optisk påviselig indikator til blandingen, hvilken indikator har en affinitet til lymfocytter i blodet som svarer på det mistenkte antigen eller mot lymfocytter som tidligere har svart på budbringere eller signaler fra slike forsensitiviserte lymfocytter, slik at de lymfocytter som gir svar fremheves betraktelig optisk; c) sentrifugering av en del av blandingen i et gjennomsiktig rør som konsentrerer lymfocytt/monocytt-cellene i et bånd i røret; og d) bestemmelse av nærvær eller fravær av optisk fremhevede lymfocytter og/eller lymfoblaster i det sentrifugerte lymfocytt/monocytt-cellebånd ved å undersøke nevnte cellebånd under forstørrelse og sammenligne enhver frem-hevelse i nevnte cellebånd med negative og positive kontroller som henholdsvis indikerer et ikke-fremhevet cellebånd og pasientens lymfocyttreaksjon på et antigen eller den lignende sensitiviserende partikkel som pasienten var kjent for å ha blitt utsatt for forut in vivo, og derved bestemme om pasienten har vært forut in vivo utsatt for det mistenkte antigen mot hvilket en del av individets lymfocytter er blitt forsensitivisert.
2. Fremgangsmåte i henhold til krav 1,karakterisert vedat nevnte lymfocytter er T-lymfocytter.
3. Fremgangsmåte i henhold til krav 2,karakterisert vedat nevnte indikator er kjemisk reaktiv med aktiverte lymfocytter eller T-lymfoblaster.
4. Fremgangsmåte i henhold til krav 2,karakterisert vedat nevnte indikator er merket med et antistoff spesifikt for en overflatereseptor på aktiverte lymfocytter eller T-lymfoblaster.
5. Fremgangsmåte i henhold til krav 3 eller 4,karakterisert vedat nevnte indikator er et fargestoff.
6. Fremgangsmåte i henhold til krav 3 eller 4,karakterisert vedat nevnte indikator er et fluorescerende materiale.
7. Fremgangsmåte i henhold til krav 2,karakterisert vedat nevnte antatte antigen foreligger i et pH-kontrollert medium.
8. Fremgangsmåte i henhold til krav 1,karakterisert vedat den videre omfatter et trinn med plassering av et sylindrisk flytelegeme i nevnte gjennomsiktige rør for å øke cellepopulasjonstettheten i lymfocytt/monocyttcellebåndet i røret.
9. Fremgangsmåte i henhold til krav 8,karakterisert vedat nevnte bestemmelses-trinn er en kvantitativ bestemmelse opererbar for å måle styrken av den optiske fremheveIse av de fremhevede lymfocytter .
10. Testsett for bestemmelse av en pasients foreksponering overfor et antatt antigen overfor hvilke lymfocytter i blodet kan ha blitt sensitivisert,
karakterisert vedat nevnte téstsett omfatter: a) en første beholder som inneholder nevnte antatte antigen i et medium, idet nevnte første beholder er tilpasset til å motta en prøve av pasientens blod; b) en andre beholder som inneholder nevnte medium som mangler nevnte antatte antigen, idet nevnte andre beholder er tilpasset til å motta en prøve av pasientens blod; c) en tredje beholder som inneholder et antigen hvortil i det vesentlige universell human eksponering er blitt vist, idet nevnte tredje beholder er tilpasset til å motta en prøve av pasientens blod.
11. Testsettet i henhold til krav 10,karakterisert vedat nevnte medium er en pH-kontrollert væske.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US34024889A | 1989-04-19 | 1989-04-19 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO901700D0 NO901700D0 (no) | 1990-04-18 |
| NO901700L NO901700L (no) | 1990-10-22 |
| NO178647B true NO178647B (no) | 1996-01-22 |
| NO178647C NO178647C (no) | 1996-05-02 |
Family
ID=23332522
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO901700A NO178647C (no) | 1989-04-19 | 1990-04-18 | Fremgangsmåte for gravimetrisk analyse av blod og test-sett for denne |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5360719A (no) |
| EP (1) | EP0393334B1 (no) |
| JP (1) | JPH0812194B2 (no) |
| CN (1) | CN1046600A (no) |
| AT (1) | ATE140796T1 (no) |
| AU (1) | AU624221B2 (no) |
| BR (1) | BR9001808A (no) |
| CA (1) | CA2011099A1 (no) |
| DE (1) | DE69027882T2 (no) |
| DK (1) | DK0393334T3 (no) |
| ES (1) | ES2091771T3 (no) |
| FI (1) | FI901791A0 (no) |
| GR (1) | GR3021147T3 (no) |
| NO (1) | NO178647C (no) |
| RU (1) | RU2061241C1 (no) |
| UA (1) | UA24003A (no) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9225711D0 (en) * | 1992-12-09 | 1993-02-03 | Univ Guelph | Methodology for developing a superior line of domesticated animals |
| GB9503406D0 (en) * | 1995-02-21 | 1995-04-12 | Haaheim Lars R | Detection of antibody production |
| AU9233698A (en) * | 1997-11-22 | 1999-06-17 | Robert A. Levine | Method for the detection, identification, enumeration and confirmation of circulating cancer cells and/or hematologic progenitor cells in whole blood |
| US5948686A (en) * | 1998-03-07 | 1999-09-07 | Robert A. Leuine | Method for performing blood cell counts |
| GB9913819D0 (en) | 1999-06-14 | 1999-08-11 | Plasmacute As | Assay |
| US7074577B2 (en) * | 2002-10-03 | 2006-07-11 | Battelle Memorial Institute | Buffy coat tube and float system and method |
| US20130084579A1 (en) * | 2002-10-03 | 2013-04-04 | Battelle Memorial Institute | Drug susceptibility using rare cell detection system |
| US20130084594A1 (en) * | 2002-10-03 | 2013-04-04 | Battelle Memorial Institute | Drug susceptibility using rare cell detection system |
| GB0325483D0 (en) * | 2003-10-31 | 2003-12-03 | Plasmacute As | Assay |
| WO2006085897A2 (en) | 2004-05-13 | 2006-08-17 | Advanced Animal Diagnostics | Microfluidic device and leucocyte antigen mediated microfluidic assay |
| US20090233329A1 (en) | 2006-03-24 | 2009-09-17 | Rodriguez Rodolfo R | Microfluidic chamber assembly for mastitis assay |
| JP5189201B2 (ja) * | 2008-04-02 | 2013-04-24 | アボット ポイント オブ ケア インコーポレイテッド | 全血を含む生体体液のイムノアッセイを実施するためのリガンドアッセイにおける結合標識と遊離標識との仮想分離 |
| CN102047116A (zh) * | 2008-04-09 | 2011-05-04 | 艾博特健康公司 | 检测包含在薄厚度腔室中的薄膜流体样本内的非常少量的分析物的方法 |
| US20110097816A1 (en) * | 2009-10-23 | 2011-04-28 | Goodwin Paul C | Methods for changing densities of non-target particles of a suspension |
| KR102099462B1 (ko) | 2010-11-30 | 2020-04-10 | 제넨테크, 인크. | 저친화도 혈액-뇌 장벽 수용체 항체 및 그의 용도 |
| CN103344639B (zh) * | 2013-07-11 | 2015-10-28 | 山东大学 | 一种快速检测尿中吡咯加合物的检测管 |
| RU2609839C1 (ru) * | 2016-03-30 | 2017-02-06 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научный центр Институт иммунологии" Федерального медико-биологического агентства России (ФГБУ "ГНЦ Институт иммунологии" ФМБА России) | Способ дифференциальной диагностики гиперчувствительности к яду пчелы (apis mellifera) |
Family Cites Families (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3988115A (en) * | 1975-09-18 | 1976-10-26 | Modabber Farrokh Z | Diagnostic method for determining pathological condition by antigen-combining capacity of lymphocytes |
| US4027660A (en) * | 1976-04-02 | 1977-06-07 | Wardlaw Stephen C | Material layer volume determination |
| US4252538A (en) * | 1979-03-02 | 1981-02-24 | Engineering & Research Associates, Inc. | Apparatus and method for antibody screening, typing and compatibility testing of red blood cells |
| JPS5715698A (en) * | 1980-06-30 | 1982-01-27 | Nippon Electric Co | Method of boring ceramic green sheet |
| SU1237979A1 (ru) * | 1981-02-11 | 1986-06-15 | Киевский Научно-Исследовательский Рентгенорадиологический И Онкологический Институт | Способ количественного определени активации лимфоидных клеток |
| US4436824A (en) * | 1981-06-09 | 1984-03-13 | Ortho Diagnostic Systems, Inc. | Leukocyte migration through antigen containing agaroses for immunocompetence testing |
| US4717660A (en) * | 1984-01-26 | 1988-01-05 | Becton, Dickinson And Company | Detection of bacteria by fluorescent staining in an expanded buffy coat |
| US4727020A (en) * | 1985-02-25 | 1988-02-23 | Becton, Dickinson And Company | Method for analysis of subpopulations of blood cells |
| US4692405A (en) * | 1985-03-05 | 1987-09-08 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Monoclonal antibodies to antigen on activated human B-cells and assay therefor, protein antigenic determinant therefor and method of making same |
| US4689309A (en) * | 1985-09-30 | 1987-08-25 | Miles Laboratories, Inc. | Test device, method of manufacturing same and method of determining a component in a sample |
| US4788137A (en) * | 1985-10-29 | 1988-11-29 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Detection of activated T-cells |
| US4695553A (en) * | 1985-11-01 | 1987-09-22 | Becton Dickinson And Co., Inc. | Method for increasing agglutination of groups of cells to produce improved cell layer interface in centrifuged blood sample using antibodies |
| NZ214400A (en) * | 1985-12-02 | 1989-05-29 | Univ Otago | Detecting infection in ruminant including conducting assay of mononuclear cell function |
| JP2642112B2 (ja) * | 1986-03-06 | 1997-08-20 | コモンウエルス サイエンテイフイック アンド インダストリアル リサーチ オーガナイゼイシヨン | 細胞性免疫応答検出用インビトロ分析 |
| US5006459A (en) * | 1986-03-31 | 1991-04-09 | T Cell Sciences, Inc. | Therapeutic and diagnostic methods using soluble T cell surface molecules |
| CA1296622C (en) * | 1986-08-12 | 1992-03-03 | Jeffrey E. Anderson | Method and apparatus for automated assessment of the immunoregulatory status of the mononuclear leukocyte immune system |
| US4835255A (en) * | 1987-03-26 | 1989-05-30 | Yale University | T-cell membrane protein |
| EP0294216A3 (en) * | 1987-06-05 | 1990-05-30 | Interferon Sciences, Inc. | A functional assay for t-lymphocytes |
| EP0325489B1 (en) * | 1988-01-21 | 1994-01-19 | Becton, Dickinson and Company | Leu 23: Monoclonal antibody for monitoring leukocyte activation |
| SU1691751A1 (ru) * | 1988-11-09 | 1991-11-15 | Ленинградский педиатрический медицинский институт | Способ диагностики аллергии |
| SU1649445A1 (ru) * | 1988-12-09 | 1991-05-15 | Научно-исследовательский институт физико-химической медицины | Способ определени чувствительности организма к пыльцевым аллергенам |
| JP2552047B2 (ja) * | 1990-01-26 | 1996-11-06 | ワシントン リサーチ ファウンデーション | 悪性腫瘍の検査方法 |
| US5215102A (en) * | 1991-10-25 | 1993-06-01 | La Mina Ltd. | Capillary blood antigen testing apparatus |
-
1990
- 1990-02-26 CA CA002011099A patent/CA2011099A1/en not_active Abandoned
- 1990-02-27 AU AU50178/90A patent/AU624221B2/en not_active Ceased
- 1990-02-28 DK DK90103895.0T patent/DK0393334T3/da active
- 1990-02-28 EP EP90103895A patent/EP0393334B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-02-28 AT AT90103895T patent/ATE140796T1/de active
- 1990-02-28 ES ES90103895T patent/ES2091771T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-02-28 DE DE69027882T patent/DE69027882T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-03-06 JP JP2054789A patent/JPH0812194B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1990-04-09 FI FI901791A patent/FI901791A0/fi not_active Application Discontinuation
- 1990-04-11 CN CN90102029A patent/CN1046600A/zh active Pending
- 1990-04-18 RU SU904743719A patent/RU2061241C1/ru active
- 1990-04-18 UA UA4743719A patent/UA24003A/uk unknown
- 1990-04-18 BR BR909001808A patent/BR9001808A/pt not_active Application Discontinuation
- 1990-04-18 NO NO901700A patent/NO178647C/no unknown
-
1992
- 1992-09-30 US US07/954,440 patent/US5360719A/en not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-01-21 US US08/006,766 patent/US5480778A/en not_active Expired - Fee Related
-
1996
- 1996-09-25 GR GR960402513T patent/GR3021147T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE69027882D1 (de) | 1996-08-29 |
| FI901791A0 (fi) | 1990-04-09 |
| BR9001808A (pt) | 1991-06-11 |
| US5480778A (en) | 1996-01-02 |
| ATE140796T1 (de) | 1996-08-15 |
| GR3021147T3 (en) | 1996-12-31 |
| CA2011099A1 (en) | 1990-10-19 |
| AU5017890A (en) | 1990-10-25 |
| US5360719A (en) | 1994-11-01 |
| DK0393334T3 (da) | 1996-08-26 |
| AU624221B2 (en) | 1992-06-04 |
| DE69027882T2 (de) | 1996-12-12 |
| RU2061241C1 (ru) | 1996-05-27 |
| CN1046600A (zh) | 1990-10-31 |
| NO901700L (no) | 1990-10-22 |
| NO901700D0 (no) | 1990-04-18 |
| JPH0812194B2 (ja) | 1996-02-07 |
| EP0393334B1 (en) | 1996-07-24 |
| UA24003A (uk) | 1998-08-31 |
| JPH02296150A (ja) | 1990-12-06 |
| EP0393334A3 (en) | 1991-09-11 |
| EP0393334A2 (en) | 1990-10-24 |
| ES2091771T3 (es) | 1996-11-16 |
| NO178647C (no) | 1996-05-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO178647B (no) | Fremgangsmåte for gravimetrisk analyse av blod og test-sett for denne | |
| US6916626B1 (en) | Detection of Candida | |
| IL109008A (en) | Innocent, independent of antigen density, for cell determination | |
| CN110121649A (zh) | 一种血型抗原芯片及其在红细胞意外抗体检测中的应用 | |
| AU621310B2 (en) | Immunometric assay kit and method applicable to whole cells | |
| Clyne et al. | Syphilis testing | |
| JPH11511851A (ja) | 細胞計数イムノアッセイ | |
| Kassler et al. | Performance of a rapid, on-site human immunodeficiency virus antibody assay in a public health setting | |
| US5773232A (en) | Methods for measurement of lymphocyte function | |
| US6046013A (en) | Process for identifying specific antibodies associated with HLA | |
| De Klerk et al. | Comparative evaluation of the enzyme-linked immunosorbent assay in the laboratory diagnosis of brucellosis | |
| US6461825B1 (en) | Immunometric assay kit and method applicable to whole cells | |
| Fritz et al. | Hepatitis-associated antigen: detection by antibody-sensitized latex particles | |
| WO2000071168A1 (en) | Liposome immunoassay | |
| Tuffanelli | False-positive reactions for syphilis: serological abnormalities in relatives of chronic reactors | |
| Pappagianis et al. | False-positive reactions of cerebrospinal fluid and diluted sera with the coccidioidal latex-agglutination test | |
| US7169571B2 (en) | Methods for measurement of lymphocyte function | |
| US3733398A (en) | Determining and reversing anticomplementary activity in complement fixation test for australia antigen | |
| Stone et al. | Capture-S, a nontreponemal solid-phase erythrocyte adherence assay for serological detection of syphilis | |
| JPS6281566A (ja) | 微粒子の螢光強度測定による定量方法 | |
| CN113238061B (zh) | 以cd180阴性b细胞指示重症肌无力病情的试剂盒及应用 | |
| KR20220018149A (ko) | 인라인 마이크로 튜브세트를 이용한 잠복결핵 감염 검사방법 | |
| Kasten‐Jolly et al. | In Vitro evaluation of toxicant influences on the immune system | |
| Flores-Valdez | Uncovering the hidden: complexity and strategies for diagnosing latent tuberculosis | |
| US20020150952A1 (en) | Methods for measuring lymphocyte activation by mitogens and antigens |