SU1649445A1 - Способ определени чувствительности организма к пыльцевым аллергенам - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к медицине, в -частности к аллергологии, Цель изобретени  - повышение точности, ускорение и упрощение способа. Изобретение заключаетс  в том, что в суспензию лимфоцитов тимуса крысы ввод т последовательно плазму крови исследуемого больного, водный раствор аллергена и водный раствор флуоресцентного красител  4-{п-диметиламиностирил)- 1-метилпиридини . Лимфоциты инкубируют с введением ингредиентами, после чего исследуют в люминесцентном микроскопе. Подсчитывают количество флуоресцирующих клеток на каждые 100 клеток в суспензии и при его снижении более чем в 1,5 раза (на 30-70%) по сравнению с контролем/контроль проба без аллергена/ определ ют повышенную чувствительность к аллергену. Предлагаемый способ позвол ет ускорить определение не менее чем в 5 раз, повысить точность в 1,5 раза, а также упростить процедур , определени . V fe

Description

Изобретение относитс  к медицине, в частности к аллергологии, и может быть использовано в диагностике поллинозов.

Целью изобретени   вл етс  повышение точности, ускорение и упрощение способа.

Способ выполн етс  следующим образом.

В суспензию выделенных обычным способом лимфоцитов тимуса крысы ввод т последовательно плазму крови исследуемого больного, водный раствор аллергена и водный раствор красител  4-{п-диметиламино- стирил)-1-метилпиридини  (ДСМ) до его конечной концентрации 0.2-0,7 мкМ. Лимфоциты инкубируют с введенными ингредиентами , после чего исследуют в люминесцентном микроскопе. Подсчитывают количество флуоресцирующих лимфоцитов на каждые 100

клеток в суспензии и при его снижении более чем в 1,5 раза (на 30-70%) по сравнению с контролем (контроль - проба без аллергена ), определ ют повышенную чувствительность к данному аллергену.

Пример 1. Обычным способом выдел ли лимфоциты тимуса крысы. Дл  этого извлекали тимус крысы, скальпелем делали надрез вдоль органа и препаровальными иглами вытр хивали лимфоциты в раствор Хенкса. Полученную суспензию клеток разливали в лунк и по 0.1 мл в концентрации (10-30) млн/мл. В каждую пробу вводили по 2.0 мкл водного раствора ДСМ (10 мкМ - конечна  концентраци  в пробе 0,2 мкМ) и по 10 мкл плазмы больного М. (аллергический ринит, конъюнктивит) и раствора одного из пыльцевых аллергенов в конечной

Os

(Л

концентрации 1000 PNH (мл) водные растворы производства Ставропольского НИИ вакцин и сывороток, РМИ 10000. Контрольные пробы - без добавки аллергена или сыворотки. Опытные и контрольные пробы помещали в термостат и инкубировали при 37°С в течение 20 мин, после чего по капле окрашенной суспензии клеток из каждой пробы помещали на предметные стекла, накрывали их покровными стеклами и полученные препараты исследовали в поле зрени  люминесцентного микроскопа (Л юмамИ-2, производство ЛОМО, СССР) при возбуждении 405-436 нм. Подсчитывали количество флуоресцирующих лимфоцитов на каждые сто клеток.

Параллельно определ ли чувствительность к аллергенам с помощью кожных проб. Оценивали чувствительность к следующим пыльцевым аллергенам: лещины, овс ницы , березы, тимофеевки, ежи сборной, лисохвоста.

Воздействие плазмы крови больного М. на лимфоциты не измен ло соотношени  флуоресцирующих и не флуоресцирующих клеток. Аллергены из пыльцы злаковых трав и деревьев также не действовали на лимфоциты . Обработка же лимфоцитов смесью плазмы крови с некоторыми аллергенами измен ло долю флуоресцирующих клеток, так, в случае использовани  специфических дл  данного больного аллергенов (по результатам скарификационных кожных проб) дол  флуоресцирующих клеток резко снизилась . Аллергены же березы и лещины, к которым больной М. не чувствителен (отрицательные результаты кожных проб), практически не вли ли на лимфоциты и в присутствии плазмы его крови. Количественной оценкой реакции служит коэффициент К, который показывает во сколько раз снизилась дол  флуоресцирующих клеток по сравнению с контролем. В качестве контрольного образца принимали лимфоциты, обработанные только плазмой. Все специфические аллергены (дл  больного М.) снизили долю флуоресцирующих клеток более, чем в 1,7 раза, но эффект реакции выражен

по-разному: коэффициент К составил величину от 1,8 до 5,4. Таким образом, предлагаемый способ позволил вы вить аллерген из пыльцы лисохвоста, к которому больной М.

наиболее чувствителен (,4).

Пример 2. Аналогичным образом исследовали плазму крови больного С. (бронхиальна  астма, атоническа  форма). В каждую пробу (0,1 мл клеточной суспензии)

вводили по 7,0 мкл раствора ДСМ (10 мкМ - конечна  концентраци  в пробе 0,7 мкМ) и по 10 мкл плазмы больного С. и растворов аллергенов. Были оценены пыльцевые аллергены ежи сборной, тимофеевки, лисохвоста , овс ницы, ржи, м тлика, пыре .

Коэффициент К превышал дл  всех указанных аллергенов величину 1,7. Аллергены из пыльцы тимофеевки вызвал практически полное тушение флуоресценции клеток К 69. Таким образом предложенный способ позвол ет:

ускорить поределение чувствительности к аллергену по сравнению с прототипом не менее, чем в 5 раз:

повысить точность определени  до 100%; упростить процедуру определени ; уменьшить объем необходимой дл  определени  крови с 40 мл до 0,2 мл.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ определени  чувствительности организма к пыльцевым аллергенам путем инкубации пассивно сенсибилизированных лимфоцитов тимуса крысы с аллергеном и

   флуоресцентным красителем 4(п-диметила- миностирил)-1-метилпиридиний с последующим учетом результатов реакции с помощью люминесцентного микроскопа, отличающ и и с   тем, что, с целью повышени  точности, ускорение и упрощение способа, лимфоциты тимуса сенсибилизируют плазмой крови исследуемого пациента, флуоресцентный краситель используют в концентрации

   0,2-0,7 мкМ и при снижении количества флуоресцирующих клеток в поле зрени  микроскопа в 1,5 и более раз по сравнению с реакционной смесью без аллергена определ ют повышенную чувствительность к данному аллергену.