NO176798B - Syntetisk peptid for påvisning av AIDS, fremgangsmåte for in vitro påvisning av antistoffer mot HIV og diagnose av AIDS, testsett for in vitro påvisning av antistoffer mot HIV og diagnose av AIDS, ARC og pre-AIDS tilstander - Google Patents
Syntetisk peptid for påvisning av AIDS, fremgangsmåte for in vitro påvisning av antistoffer mot HIV og diagnose av AIDS, testsett for in vitro påvisning av antistoffer mot HIV og diagnose av AIDS, ARC og pre-AIDS tilstander Download PDFInfo
- Publication number
- NO176798B NO176798B NO861697A NO861697A NO176798B NO 176798 B NO176798 B NO 176798B NO 861697 A NO861697 A NO 861697A NO 861697 A NO861697 A NO 861697A NO 176798 B NO176798 B NO 176798B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- aids
- buffer
- peptide
- stated
- hiv
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 107
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 title claims description 86
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 70
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims description 40
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims description 30
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title claims description 15
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 24
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 21
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 20
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 19
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 19
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 16
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims description 15
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims description 15
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 13
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 11
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 9
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 claims description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 5
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 4
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 4
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 claims description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- 206010001513 AIDS related complex Diseases 0.000 description 27
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 23
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 17
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 17
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 17
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 17
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 16
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 16
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 16
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 15
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 15
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 14
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 13
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 11
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 10
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 9
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 9
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 9
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 8
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 8
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 8
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 7
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 7
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 7
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 7
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 7
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 7
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 7
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 7
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 6
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 6
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 4
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 4
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 4
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 4
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 3
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 3
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 3
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- UHPQFNXOFFPHJW-UHFFFAOYSA-N (4-methylphenyl)-phenylmethanamine Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C(N)C1=CC=CC=C1 UHPQFNXOFFPHJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 description 2
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000000389 T-cell leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000028530 T-cell lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000741 isoleucyl group Chemical group [H]N([H])C(C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])C(=O)O* 0.000 description 2
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- -1 parts thereof Proteins 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 229940126577 synthetic vaccine Drugs 0.000 description 2
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 101710113614 DNA primase small subunit PriS Proteins 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 102100027723 Endogenous retrovirus group K member 6 Rec protein Human genes 0.000 description 1
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- GVGLGOZIDCSQPN-PVHGPHFFSA-N Heroin Chemical compound O([C@H]1[C@H](C=C[C@H]23)OC(C)=O)C4=C5[C@@]12CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C4OC(C)=O GVGLGOZIDCSQPN-PVHGPHFFSA-N 0.000 description 1
- 206010020460 Human T-cell lymphotropic virus type I infection Diseases 0.000 description 1
- 241000714260 Human T-lymphotropic virus 1 Species 0.000 description 1
- 241000714259 Human T-lymphotropic virus 2 Species 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 208000007766 Kaposi sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000008771 Lymphadenopathy Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 208000031951 Primary immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 108010015780 Viral Core Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 229960002069 diamorphine Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000000652 homosexual effect Effects 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 230000036046 immunoreaction Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000018555 lymphatic system disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007981 phosphate-citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Den foreliggende oppfinnelse vedrører en høyt sensitiv metode for påvisning av antistoffer mot HIV i kroppsfluider og diagnose av AIDS (acquired immune deficiency syndrome), ARC (AIDS Related Complex) og pre-AIDS-tilstander ved bruk av et kjemisk syntetisert peptid. Aminosyresekvensen i peptidet tilsvarer et segment av det omhyllende protein, p41, i HIV og er blitt funnet å være høyt immunoreaktivt med antistoffer i sera til pasienter med AIDS, ARC og pre-AIDS-tilstander. Det kjemisk syntetiserte peptid inneholder et segment på omtrent 21 aminosyrer, eller deres analoger, og benyttes til påvisning av antistoffer mot HIV-virus i human-kroppsfluider fra AIDS-, ARC-eller pre-AIDS-pasienter. Påvisningsmetoden inkluderer en enzymbundet immunosorbent assay (ELISA) og en immunoradiometrisk assay (IRMA) og andre metoder av immunoassay-prosedyrer slik som enzym-immunoblotting på nitrocellulosepapir og hemagglutinasjon ved å bruke peptidet som antigen. Den foretrukne påvisningsmetode er ELISA.
Oppnådd-immunmangel-syndrom (AIDS) er nylig blitt erkjent.i flere land. På grunn av dets ødeleggende virkning på pasientene og indikasjoner på at sykdommen sprer seg, er mange anstren-gelser blitt viet for å forklare og identifisere årsaken til sykdommen. Epidemiologiske data anslår at AIDS er forårsaket av et infeksiøst agens som blir horisontalt overført ved intim kontakt eller utsettelse for blod eller bestemte blodprodukter.
I 1983 rapporterte F. Barre-Sinoussi et al. fra Pasteur-instituttet isolasjonen av et T-lymfotropt retrovirus fra en pasient med risiko for AIDS. Retroviruset viste seg å være et medlem av human-T-celle-leukemivirus (HTLV)-familien. Imidlertid er dets immunologiske respons forskjellig fra kjente HTLV-I eller HTLV-II. F. Barre-Sinoussi et al., Science, 220, s. 868 (mai, 1983).
Et lignende virus, betegnet HIV (tidligere HTLV-III), er også blitt isolert av R.C. Gallo's gruppe ved National Cancer Institute fra blodprøvene til et stort antall AIDS- og ARC-pasienter ved samdyrking med en valgfri T-cellelinje H9. Se M. Popovic et al., Science, 224, s. 497 (1984) og R. Gallo et al., Science, 224, s. 500 (1984). V.S. Kalyanaraman et al. fra the Center for Disease Control, Atlanta, Georgia rapporterte om isolasjonen av et lymfadenopati-assosiert virus (LAV) i pasienter med AIDS og utviklingen av en radioimmuno-presipitasjonsassay ved å bruke hovedkjerneproteinet, p25, av LAV. Deres testprosedyre involverte anvendelsen av LAV-viruset formert i primærkulturer av blodlymfocytter og høstet. p25-kjerneproteinet ble isolert fra det høstede virus, merket med I 125 og brukt som mål-antigen(er). Det merkede antigen ble tilsatt til serum, og presipitasjon på minst 15% av det merkede antigen blir ansett som et positivt resultat. Se V.S. Kalyanaraman et al., Science, 225, s. 321 (juli 1984). Imidlertid, basert på de rapporterte resultater, var testen bare positiv for 41% av AIDS-pasientene, og 72% positiv for pasienter med lymfadenopatisyndrom (LAS) ellers kjent som ARC. Dette betyr at fremgangsmåten ikke er tilstrekkelig følsom eller nøyaktig til å bli anvendt som et påvisnings- eller diagnostisk hjelpemiddel for screening av serum for tilstedeværelse av antistoffer mot AIDS-viruset.
LAV og HIV og også forskjellige stammer av beslektede retrovirus isolert fra AIDS-pasienter har flere viktige karakteristika til felles. Se P. Feorino et al., Science, 225, s. 69 (1984); J. Levy et al., Science, 225, s. 840 (1984). Disse inkluderer viral replikasjon i 0KT4<+> humane T-celle-leukocytter, in vivo og in vitro; assosiering med svekket T-celle-formering, tilstedeværelse av cytopatiske virkninger; (se Montagnier et al., Human T Cell Leukemia Virus, s. 363, Cold Spring Harbor Laboratory, 1984; M. Popovic et al., op.eit. og D. Klatzmann et al., Science, 225, s. 59 (1984)) og gjen-kjennelse av antistoffer i sera av AIDS- og ARC-pasienter. Se Montagnier et al., op.eit.;
J. Levy et al., op.eit., M. Sarngadharan et al., Science, 224, s. 505 (1984); B. Safai et al., Lancet, i, s. 1438 (1984)
F. Brun-Vezinet et al., Science, 226, s. 453 (1984);
J. Goldbert et al., Lancet, ii, s. 711 (1984) og J. Laurence et al., New England J. Med., 311, s. 1269 (nov. 1984).
I november 1984 rapporterte L.W. Kitchen et al. om anvendelsen av en HIV-infisert linje, betegnet H9/HIV, for å teste tilfellene av AIDS i blødersykepasienter. Metoden involverte inaktivering av viruset med 2% paraformaldehyd i fosfatbuffer og anvendelse av de inaktiverte celler for å bestemme om blødersykepasienter er blitt uaktsomt utsatt for AIDS-virus gjennom blodoverføring. Dataene som brukte sera-prøver fra 50 blødere, viser at det er en økende risiko for disse pasienter for å pådra seg AIDS på grunn av deres behov for blodoverføringer for å opprettholde livet. L.W. Kitchen et al., Nature, 312, s. 367 (nov. 1984). Dette betyr at det er et påtvingende behov for en trygg, pålitelig og følsom test for å sortere ("screen") blodprøven før den blir lagret i blodbanker for å isolere blodprøver som er blitt forurenset med AIDS-virus, og således unngå den uaktsomme spredning av AIDS blant pasienter som må motta blodoverføringer, f.eks. blødere og kirurgiske pasienter.
I november 1984 og januar 1985 konkluderte R.C. Gallo's gruppe ved National Cancer Institute og andre medarbeidere positivt at HIV er agenset som forårsaker AIDS og rapporterte om nukleotidsekvensen til HIV. Se Beatrice Hanh et al., Nature, 312, s. 166 (nov. 1984), George M. Shaw et al., Science, 226,
s. 1165 (des. 1984) og Lee Råtner et al., Nature, 313, s. 277 (jan. 1985).
I mellomtiden rapporterte også tre andre grupper om den fullstendige nukleotidsekvens i AIDS-viruset. Se Muesing et al., Nature, 313, s. 450 (feb. 1985); R. Sanchez-Pescados et al., Science, 227, s. 484 (feb. 1985) og Wain-Hobson et al., Cell, 40, s. 9 (jan. 1985). Disse rapporter belyste strukturen av HIV-viruset på både DNA-nivået og det prosjekterte protein-nivå og tillater videre serologiske studier av de forskjellige epitoper som er til stede på HIV-viruset.
Samtidig rapporterte gruppen på Pasteur-instituttet at LAV er blitt identifisert som et agens som forårsaker AIDS, og blir ansett å være identisk med HIV. Assay-prosedyren brukt av denne gruppen involverer også formering av LAV i T4<+->celler av friske individer. Det virale antigen ble så konsentrert og deaktivert i 0,5% natrium-dodecylsulfat ved 37°C i 15 min. Serumprøver ble så testet mot antigenet i en enzym-immunoassay med ortofenylen-diamin som substrat. Tilstedeværelsen av antistoff i serum ble funnet i 68% av AIDS-pasienter, 100% av pasienter med Kaposi's sarkom og 100% av pre-AIDS-pasienter. Jeffrey Laurence et al., op.eit.
US-patent 4.520.113 (utstedt til R.C. Gallo et al. Gallo et al.) beskriver en metode for å påvise antistoffer i sera av AIDS- og pre-AIDS-pasienter ved å bruke lysater av en cellelinje, betegnet H9/HIV, som antigenet i en enzymbundet immunosorbent assay (ELISA) eller i en strimmel radioimmuno-assay basert på Western Blot-teknikken eller en indirekte immuno-fluorescerende metode. Metoden er omtrent 85% nøyaktig. Gallo-patentet indikerte videre at flere antigener fra HIV, p65, (MW 65.000), p60 (MW 60.000), p55 (MW 55.000), p24 (24.000) og p41 (MW 41.000) blir gjenkjent av antistoffer i sera fra AIDS-pasienter, homoseksuelle og heroinmisbrukere. Av disse er hovedimmunreaktivitet eller spesifisitet rettet mot p41, et protein som utgjør det omhyllende antigen til HIV. Dette patent stadfester videre at det menes at tilleggsrensing og foredling av p41 kan lede til en enda mer følsom ELISA-assay. Basert på denne stadfestelse må antigenet egnet til å være et testreagens være et p41-segment oppnådd fra HIV dyrket i H9-cellelinje.
Det er videre rapportert i Robert C. Gallo et al., Science 228, s. 93 (april 1985) at et kombinert klonings- og ekspre-sjonssystem i E. coli er blitt brukt for å identifisere HIV-kodede peptider som reagerer immunologisk med antistoffer i sera fra AIDS-pasienter. Klonet HIV-DNA ble skåret til fragmenter og innført i en ekspresjonsvektor. Det innfelte DNA ble så uttrykt i E. coli-transformanter. Av 300 testede kloner viste 20 spesifikk reaktivitet med sera fra AIDS-pasienter. De 20 klonene ble analysert og funnet å inneholde segmenter fra ORF-segmentet av HIV og ble identifisert som kloner, 175, 191, 13, 31, 162, 113, 121 og 127. Av de 8 kloner definerer ORF-kloner 113, 121 og 127 proteinet som er kodet av den delen av env-lor-området som er produsert av HIV-infiserte celler og induserer antistoffproduksjon i de fleste, hvis ikke alle AIDS-pasienter.
Alle de rapporterte assayprosedyrene for påvisning av antistoffer mot HIV og for diagnose av AIDS eller pre-AIDS-tilstander involverer anvendelsen av HIV- eller LAV-virus. Ingen av prosedyrene er 100% nøyaktige. Dette er uønsket for anvendelse i screening av sera i blodbanker. På grunn av mindre enn 100% nøyaktighet av testene kan forurenset serum unngå påvisning og bli brukt i blodoverføringer, til alvorlig skade for blodmottagere. Videre er anvendelsen av HIV-virus som testagens farlig for friske laboratoriearbeidere, som trenger ekstreme forholdsregler for å unngå enhver risiko for smitte i løpet av den forberedende prosess for å lage testreagenset. Videre, selv om det deaktiverte virus brukes i noen av de offentliggjorte prosedyrer, kan eksponering for det deaktiverte virus forårsake antistoffproduksjon i friske arbeidere, som så feilaktig kan bli diagnostisert å ha AIDS, ARC eller pre-AIDS-tilstander. Videre kan tilstedeværelse av cellulære materialer fra H9-celler eller E. coli i testagenset frembringe et falskt positivt svar i HIV-antistoff-screening-testen fra individer som har antistoffer mot E. coli eller H9-celler. Disse falske positive reaksjoner kan bringe stor frykt til de friske individer og deres familier og kan føre til at et friskt individ blir feilaktig diagnostisert å ha AIDS og som en følge bli utelukket fra normale sosiale aktiviteter.
Videre, opp til det nåværende, er ingen levende vaksine eller metode for å gi beskyttelse mot HIV blitt rapportert for AIDS, ARC eller pre-AIDS-tilstander. Anvendelse av deaktivert virus frembringer frykt for å pådra seg sykdommen og ville forhindre dens akseptasjon og anvendelse.
På samme måte involverer utviklingen av monoklonale og polyklonale antistoffer mot HIV i pattedyr anvendelse av HIV som immunogen, og dette presenterer lignende risikoer i prosedyren.
Det er derfor et mål for den foreliggende oppfinnelse å utvikle en påvisnings- eller diagnostisk prosedyre som ikke krever anvendelse av viruset eller lysater av dette som testreagens.
Et videre mål er å utvikle en testprosedyre som er høyt sensitiv og nøyaktig, fortrinnsvis 100% nøyaktig.
Et annet mål er å utvikle en test som er høyt sensitiv slik at svært lite testreagens eller kroppsfluid trenges for å få et
nøyaktig resultat.
Et videre mål er å fremstille et testreagens ved hjelp av kjemiske metoder, som kan brukes for å påvise tilstedeværelse av antistoffer mot HIV i kroppsfluider og diagnostisere AIDS, ARC eller pre-AIDS-tilstander, for derved å unngå fare for smitte av viruset eller segmenter av dette og unødvendig formering av viruset.
Et videre mål er å gi et immunogen som kan brukes til utvikling av monoklonale og polyklonale antistoffer mot HIV i pattedyr, som ikke involverer anvendelse av HIV som immunogen.
Peptidet i henhold til foreliggende oppfinnelse, med omtrent 21 aminosyrer arrangert i en spesifikk sekvens, er fremstilt ved fastfase-peptidsyntese. 21mer-peptidet er funnet å være anvendbart i en høyt sensitiv og nøyaktig metode for påvisning av antistoffer mot HIV i sera og kroppsfluider og diagnose av AIDS, ARC eller pre-AIDS-tilstander. 21mer-peptidet er også funnet å være anvendbart til å stimulere produksjon av antistoffer mot HIV eller LAV i friske pattedyr slik som Balb/c-mus.
I henhold til foreliggende oppfinnelse tilveiebringes således et peptid for in vitro påvisning av antistoffer mot HIV og diagnose av AIDS, ARC eller pre-AIDS-tilstander i kroppsfluider, valgt fra gruppen av peptider som er angitt i krav 1.
Oppfinnelsen tilveiebringer videre en fremgangsmåte, som angitt i krav 2, for påvisning av antistoffer mot HIV og diagnose av AIDS, ARC eller pre-AIDS-tilstander ved hjelp av peptider som angitt i krav 1.
Endelig tilveiebringer oppfinnelsen et testsett for in vitro påvisning av antistoffer mot HIV og diagnose av AIDS, ARC og pre-AIDS-tilstand, som angitt i krav 17.
Den høyt følsomme og nøyaktige metode for å påvise antistoffer mot HIV i kroppsfluider og diagnose av AIDS, ARC eller pre-AIDS-tilstander omfatter følgende trinn: a) Fremstilling av et peptid valgt fra gruppen som er angitt i krav 1, hvor:
Ala = alanin
Arg = arginin
Asp = asparaginsyre
Gin = glutamin
Glu = glutaminsyre
Leu = leucin
Lys = lysin
Gly = glycin
Ile = isoleucin
Ser = serin
Trp = tryptofan
Tyr = tyrosin
Val = valin
Cys = cystein
b) Anvendelse av en effektiv mengde av peptidet som et belegnings-antigen for å påvise antistoffer mot HIV i en immunoassay-prosess.
Fortrinnsvis anvendes 0,1 /xg til 20 fiq pr. test av peptidet i en buffer ved en pH på 7 til 10 som antigenet i en immunoassay-prosedyre.
Videre, i henhold til oppfinnelsen, kan peptidet når det kobles til et protein eller en polymerbærer, brukes til å stimulere produksjon av antistoffer mot HIV eller LAV i friske pattedyr, inkludert mennesker. Metoden innbefatter tilførsel av en effektiv mengde av 21mer-peptidet konjugert til et protein, slik som human-serum-albumin, til kroppen av et friskt pattedyr ved intraperitoneal eller subkutan injeksjon.
Kort beskrivelse av tegningene:
Fig. 1 er en grafisk fremstilling som sammenligner data oppnådd med sera fra AIDS-pasienter som bruker ELISA-metoden hvor brønnplatene er dekket med (A) peptidet i henhold til oppfinnelsen, (B) deaktivert HIV-virus; og normal-sera med (a) peptidet i henhold til oppfinnelsen (b) deaktivert HIV-virus.
I henhold til foreliggende oppfinnelse er et peptid blitt kjemisk syntetisert for påvisning av antistoffer mot HIV i kroppsfluider og diagnose av AIDS, ARC og pre-AIDS-tilstander, for vaksinasjon av friske pattedyr ved stimulering av produksjonen av antistoffer mot HIV eller LAV i friske pattedyr, og for utvikling av både monoklonale og polyklonale antistoffer mot HIV i pattedyr. Peptidet omfatter ca. 21 aminosyrer eller analoger av disse arrangert i følgende sekvenser: Arg-Ile-Leu-Ala-Val-Glu-Arg-Tyr-Leu-Lys-Asp-Gln-Gln-Leu-Leu-Gly-Ile-Trp-Gly-Cys-Ser, hvor Arg er arginin, Ala er alanin, Val er valin, Glu er glutaminsyre, Tyr er tyrosin, Lys er lysin, Asp er asparaginsyre, Gin er glutamin, Leu er leucin, Gly er glycin, Ile er isoleucin, Trp er tryptofan, Ser er serin og Cys er cystein. Peptidet kan inneholde en kortere eller lengre peptidkjede ved å ha flere aminosyrer tilsatt til de terminale aminosyrer, -Arg eller -Ser-, av sekvensen ovenfor eller ved å ha noen få mindre av de terminale aminosyrer fra hver terminal.
Det er forventet at så lenge som den tredimensjonale konformasjon som kan gjenkjennes av de dominante antistoffer mot HIV, er bevart, kan det syntetiske peptid inneholde analoger av de nevnte aminosyrer av sekvensen ovenfor eller bli utvidet ved tilsetning av aminosyrer til hver terminal eller den kan bli redusert ved delesjon av noen få av de terminale aminosyrer til minst ca. 15 aminosyrer. I tillegg er det forventet at polymere former av 21mer-peptidet eller analoger av dette også kan brukes for å frembringe produksjon av antistoffer mot HIV.
Aminosyresekvensen i det polypeptidet som er anvendbart som testreagens for påvisningen av antistoffer mot HIV i kroppsfluider og diagnose av AIDS, ARC og pre-AIDS-tilstander blir fremstilt slik at det tilsvarer et delsegment av aminosyresekvensen til et protein av HIV-viruset betegnet som p41, en del av pl20, LOR (long open reading)-segmentet, som definerer det omgivende protein av HIV-viruset.
Peptidet som er anvendbart som en fast-fase-immunoadsorbent for påvisning av antistoffer mot HIV ble syntetisert ved klassisk Merrifield-metode av fast-fase-peptidsyntese i henhold til følgende skjema.
Ved å følge skjemaet ovenfor blir Boc-aminosyrer tilsatt til harpiksen ved å fremstille 21mer-peptidet i henhold til følgende sekvens:
Analoger av 21mer-peptidet kan fremstilles ved å variere sekvensen ovenfor enten ved å tilsette eller trekke fra ønsket(e) Boc-aminosyre(r).
Betegnelsen analoger av 21mer-peptidet omfatter hele 21mer-peptidet, deler av dette, peptider som inneholder substitusjoner av aminosyrerester, eller peptider som inneholder innfelte stykker og/eller delesjoner av aminosyrer i 21mer-peptidet.
Etter komplettering av samlingen av det ønskede blokkerte peptid på harpiksen blir peptid-harpiksen behandlet med vannfri fluss-syre for å spalte benzylesteren som binder peptidet til harpiksen for å frigjøre peptidet. Sidekjede-funksjonelle grupper av aminosyrer som er blokkert i løpet av syntesen av benzyl-deriverte blokkerende grupper blir også spaltet fra peptidet samtidig. Det frie peptid blir så analysert og renset ved revers-fase høytrykks-væskekromatografi (HPLC) og karakterisert biokjemisk ved aminosyreanalyse. På samme måte kan syntese av 21mer-peptidet som har en amidgruppe på sin C-terminale ende, oppnås ved å bruke en 4-metylbenzhydryl-aminharpiks i henhold til følgende skjema:
Kobling av den C-terminale rest til 4-metylbenzhydrylaminrest
Peptidet som er syntetisert i henhold til den ovenfor beskrevne prosedyre er høyt reaktivt mot antistoffer mot HIV og kan brukes som en høyt sensitiv og spesifikk immunoadsorbent for påvisningen av antistoffer mot HIV. Resultater fått med peptidet i henhold til foreliggende oppfinnelse viser at det er mer sensitivt og spesifikt mot antistoffer mot HIV i kroppsfluider enn lysatet av det tetthetsbåndformede HIV selv, rapportert i US-patent 4.520.113. Se Tabell II (fig. 1).
Basert på den høye grad av sensitivitet og spesifisitet av peptidet i henhold til foreliggende oppfinnelse i immuno-reaksjonen mot antistoffer mot HIV menes det at det også kan være anvendbart som vaksine mot AIDS, ARC eller pre-AIDS-tilstander, og som en immunogen for utvikling av både monoklonale og polyklonale antistoffer mot HIV i pattedyr. Peptidet selv, eller når det kobles til et protein eller en polymerbærer, kan innføres til normale individer for å stimulere produksjon av antistoffet mot HIV og gi beskyttelse mot infeksjon av HIV eller LAV i friske individer. Siden peptidet i henhold til den foreliggende oppfinnelse ikke er fått biokjemisk fra viruset, er det ingen fare for smitte av normale individer som skal vaksineres mot sykdommen.
Det er også blitt funnet at når 21mer-peptidet konjugert til human-serum-albumin (HSA), som bærerprotein, ble injisert intraperitonealt og subkutant inn i friske Balb/c-mus, ble antistoffer mot 21mer-peptidet som er kryssreaktivt med HIV, produsert av Balb/c-musene. Dette er beskrevet i eksempel 7.
Basert på resultatene fra eksempel 7, kan 21mer-peptidet brukes som en immunogen for utvikling av både monoklonale og polyklonale antistoffer mot HIV i pattedyr.
Fordelene ved å bruke peptidet i henhold til foreliggende oppfinnelse er mange.
Peptidet blir kjemisk syntetisert. Dette betyr at det ikke er noen involvering av HIV-viruset ved noe tidspunkt i løpet av prosessen hvor man lager testreagenset eller vaksinen. I løpet av fremstillingen av vaksinen eller vaksinasjonsprosessen er det ingen risiko for smitte av produksjonsarbeiderne, individer i helsesektoren og de som blir vaksinert mot HIV-viruset. På samme måte er det ingen risiko for smitte av HIV i anvendelsen av 21mer-peptidet for utvikling av monoklonale eller polyklonale antistoffer mot HIV i pattedyr. Videre, opp til slutt-trinnet i testen for å påvise antistoffer mot HIV, hvor testreagenset blir utsatt for prøvene av sera eller kroppsfluid, er det ingen risiko for at laboratoriearbeiderne skal bli utsatt for HIV-viruset. Og, risiko for smitte i dette slutt-trinnet kan unngås ved å ta et forebyggende trinn med deaktivering av et hvilket som helst virus som kan være til stede ved å varme prøvene av sera eller kroppsfluider som skal testes, ved 56°C i en halv time.
Et annet problem som blir unngått ved fremgangsmåten av den foreliggende oppfinnelse, er muligheten for falske positive resultater forårsaket av tilstedeværelsen av antigent materiale fra H9-celler som blir renset sammen med det virale HIV-preparat eller E. coli-deriverte proteiner renset sammen med uttrykte virale fragmenter. Noen normale individer har antistoffer mot E. coli eller humane leukocytt-antigener, f.eks. HLA, som er kryssreaktivt med antigenmaterialer fra H9-celler. Seraprøver fra disse normale individer kan vise et positivt svar i ELISA-eller IRMA-testen selv om de ikke er blitt utsatt for HIV (AIDS). En diagnose som gjør at en person kan bli involvert med AIDS basert på denne type av falskt positivt svar kan gi stor frykt til personen og hans/hennes familie, og forårsake at han/ hun blir ekskludert fra normale sosiale aktiviteter. Alle disse problemer kan unngås ved å bruke peptidet av den foreliggende oppfinnelse som testreagens.
Videre, med passende aminosyre-analoge substitusjoner, er det forventet at forskjellige peptid-analoger basert på den beskrevne aminosyresekvens kan bli syntetisert med egenskaper som fremkaller lavere bakgrunnsavlesninger eller bedre adsorp-sjonskapasitet til faste faser anvendbare til HIV-antistoff screening assays.
Forskjellige peptid-analoger basert på den ovenfor beskrevne aminosyresekvens er blitt fremstilt. Disse analoger og deres reaktiviteter med anti-HIV-antistoffer til stede i sera av AIDS- og ARC-pasienter, er beskrevet i eksempel 8 og tabell VI. Reaktiviteten i en ELISA-test for den samme mengde av hvert peptid i vekt pr. volum ble sammenlignet med reaktiviteten av 21mer-peptider, som ble gitt en reaktivitet på 100.
Våre resultater indikerer at 21mer-peptidet av den foreliggende oppfinnelse er unikt i størrelse og sekvens idet at bare delesjon av -Arg- eller -Ile- fra N-terminalen eller -Trp-Gly-Cys-Ser- fra C-terminalen, eller spalting av dette peptidet mellom -Lys- og -Asp- til å danne to peptider med 10 og 11 aminosyrer, alle resulterer i dramatisk tap av antigen virkning sammenlignet med 21mer-peptidet. I tillegg viser -Lys- i posisjon 12 fra C-terminalen seg også å være viktig, idet at tilsetning av -Lys- til det ovenfor nevnte llmer-peptid gjenoppretter den antigene virkning signifikant.
Videre, fordi peptidet av den foreliggende oppfinnelse blir syntetisk fremstilt, kan kvaliteten kontrolleres, og som resultat reproduserbarheten av testresultatene sikres. Også, siden svært små mengder av peptid kreves for hver testprosedyre, og utgiftene for fremstilling av peptidet er relativt lave, er omkostningene for screening av kroppsfluider for antistoffer mot HIV og diagnose av AIDS, ARC eller pre-AIDS og fremstilling av en vaksine relativt lav.
Peptidet i henhold til den foreliggende oppfinnelse kan brukes for å påvise HIV-infeksjon og diagnostisere AIDS, ARC og pre-AIDS-tilstander ved å bruke det som testreagenset i en enzymbundet immunosorbent assay (ELISA), en enzym-immunodot-assay, en hemagglutinasjonsassay eller en radioimmunoradio-metrisk assay (IRMA), fortrinnsvis ELISA. ELISA-teknikken er eksemplifisert i eksempel 1, IRMA-teknikken er eksemplifisert i eksempel 3, og hemagglutinasjonsassay i eksempel 3A og 5A.
Det bør bemerkes at i de følgende metoder kan 0,25% i vekt av glutaldehyd tilsettes i belegningsbufferen for å gi bedre peptidbinding på platene eller kulene. Videre kan pepperrot-peroksydase konjugert musemonoklonal antihuman IgG antistoff brukes istedet for pepperrot-peroksydase konjugert geiteantihuman IgG (Fc) som sekundær antistoff tracer.
EKSEMPEL 1
Påvisning av antistoffer mot HIV ved en enzymbundet immunoadsorbent assay
Brønner på 96-brønnplater ble dekket ved 4°C over natten (eller 3 timer ved romtemperatur), med 21mer-peptidet, fremstilt som beskrevet, ved 0,5 /ig pr. brønn i 100 /il lOmM NaHC03~buf f er, pH 9,5. Brønnene ble vasket tre ganger med fosfatbufret saltvann (PBS) og så inkubert med 250 /il av 3% i vekt gelatin i PBS ved 37°C i 1 time for å blokkere ikke-spesifikke proteinbindingssteder, fulgt av tre vaskinger til med PBS som inneholdt 0,05% i volum av Tween 20. Testsera (blod tatt fra en human pasient eller et normalt individ) ble fortynnet med PSB som inneholdt 20% i volum av normalt geiteserum, 1% i vekt av gelatin og 0,05% i volum av Tween 20 i fortynninger på henholdsvis 1:20 og 1:200, volum til volum. 200 /il av det fortynnede sera ble tilsatt til hver brønn og tillatt å reagere i 1 time ved 37°C. Brønnene ble så vasket tre ganger med 0,05% i volum av Tween 20 i PBS for å fjerne ubundne antistoffer. Pepperrot-peroksydase konjugert geiteantihuman IgG (Fc) ble brukt som sekundær antistoff-tracer for å binde seg med AIDS-antistoff-antigen-komplekset dannet i positive brønner. 100 /il av peroksydasemerket geiteantihuman IgG ved en fortynning på 1:3000 i 1% i volum av normalt geiteserum, 0,05% i volum av Tween 20 i PBS ble tilsatt til hver brønn og inkubert ved 37°C i 1 time til.
Brønnene ble vasket fem ganger med 0,05% i volum av Tween
20 i PBS for å fjerne ubundet antistoff og reagert med 100 /il av substratblanding som inneholdt 0,04% i vekt av ortofenylen-diamin (OPD) og 0,012% i volum av hydrogenperoksyd i natrium-citratbuffer, pH 5,0. Denne substratblanding ble brukt for å påvise peroksidasemerking ved å danne et farget produkt. Reaksjoner ble stoppet ved tilsetning av 50 /il av 2,5M H2S04, og fargeutbyttet målt ved å bruke en ELISA-avleser som kvantifi-serer fargen, idet den leser av ved 492nm (dvs. OD ble målt ved 492nm). Assays ble utført i duplikat med to serafortynninger (henholdsvis 1:20 og 1:200). Normale serumprøver ble brukt som negative kontroller. Absorbansavlesninger større enn gjennom-snittavlesningene + 4 SD (standard avvik) av 90 normale sera-prøver ble tatt som positive. Resultatene er vist i tabell I.
Assay ble utført ved å bruke sera ved 1:20 (v/v) fortynning med buffer.
<+> To sera fra denne kontrollpasientgruppen viste bare grense-aktivitet.
Bemerkning:
Sera fra pasienter med AIDS, ARC, primær immunmangel, leukemi/lymfomer og normale individer ble gitt av Drs.
S. Gupta ved University of California ved Irvine;
S. Cunningham-Rundels ved Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Blood Bank, New York; og J. Gold ved Infectious Disease Unit, Memorial Sloan-Kettering Cancer Center, New York. Sera fra pasienter med autoimmunsykdommer inkludert reumatoid artritt, systemisk Lupus Erythematosus og allergier ble gitt av Dr. N. Chiorazzi ved Rockerfeller University Hospital, New York. Sera fra pasienter med hepatom ble gitt av Kr. King-Jen Chang ved National Taiwan University Hospital.
Resultatene i tabell I viser at ELISA-testprosedyren som benyttes ved foreliggende oppfinnelse med 534 seraprøver viser at metoden er svært nøyaktig og høyt spesifikk. Ingen immuno-reaktivitet ble funnet i normale individer eller pasienter som ble identifisert til ikke å ha vært påført AIDS eller ARC.
Det bør bemerkes at i screening-tester for å ekskludere viruskontaminert blod fra blodbanker kan kriteriene for å definere positive reaksjoner bli gjort strengere. For eksempel, istedet for å se på gjennomsnittsavlesning av normale seraprøver + 4 SD som positive, kan det bli forandret til å ha prøver med avlesninger lik gjennomsnittsavlesning av normale seraprøver + 2 SD til å bli sett på som positive.
EKSEMPEL 2
Fremgangsmåten i eksempel 1 ble gjentatt ved å bruke de
samme seraprøver som i eksempel 1 med unntak av at brønnplåtene på forhånd ble belagt med varmeinaktivert NP40 løseliggjort HIV i henhold til Gallo et al. US-patent 4.520.113. Resultatene er presentert i tabell II.
I sammenligning med resultater fått i eksempel 1 er denne metoden mye mindre nøyaktig og er derfor mindre pålitelig.
EKSEMPEL 3
Påvisning av antistoffer mot HIV ved en immunoradiometrisk assay ( IRMA)
Brønner i 96-brønn fleksibel-polyvinylklorid (PVC)-plater blir belagt ved 4°C over natten (eller 3 timer ved romtemperatur) med 21mer-peptidet, fremstilt som beskrevet ved 0,5 /ig Pr-brønn i 100 /il lOmM NaHC03-buffer, pH 9,5. Brønnene blir vasket tre ganger med fosfatbufret saltvann (PBS) og så inkubert med 250 /il av 3% i vekt av gelatin i PBS ved 37"C i 1 time for å blokkere ikke-spesifikke proteinbindingssteder, etterfulgt av tre vaskinger til med PBS som inneholdt 0,05% i volum av Tween
20. Testsera (blod tatt fra en human pasient eller normalt individ) blir fortynnet med PBS som inneholder 20% i volum av normalt geiteserum, 1% i vekt av gelatin og 0,05% i volum av Tween 20 ved fortynninger på henholdsvis 1:20 og 1:200 (volum til volum) . 200 iil av de fortynnede sera blir tilsatt til hver brønn og tillatt å reagere i 1 time ved 37°C. Brønnene blir så vasket tre ganger med 0,05% i volum av Tween 20 i PBS for å
125
fjerne ubundet antistoff. I -merket affmitetsrenset geite-anti-human IgG (Fc) blir brukt som sekundær antistofftracer som binder seg med antistoff-antigen-komplekset dannet i positive
125
brønner. 100 /ti av I -merket geite-anti-human IgG med 50.000-2 00.000 cpm i 1% i volum av normalt geiteserum, 0,05% i volum av Tween 20 i PBS ble tilsatt til hver brønn og inkubert ved 37°C i
1 time til.
Brønnene blir vasket fem ganger med 0,05% i volum av Tween 20 i PBS for å fjerne ubundet sekundært antistoff og tørket. Brønnene blir skåret opp og talt ved en gamma-scintillasjons-teller. Assays blir utført i duplikat med to serafortynninger, henholdsvis 1:20 og 1:200, volum til volum. Normale seraprøver som negative kontroller ble også testet samtidig. Cpm-avlesninger større enn gjennomsnittsavlesningene av normale prøver + 4 SD (standard avvik) blir tatt som positive.
EKSEMPEL 3A
Påvisning av antistoffer mot HIV ved en
hemagglutinasjonsassay som bruker 21mer-peptid-
belagte gelatinpartikler, røde saueblodceller eller latexkuler som fastfase- immunoadsorbent
1 ml godt vaskede røde blodceller fra sau, gelatinpartikler eller polystyren latexkuler blir belagt med 21mer-peptidet ved konsentrasjon i området 5 /xg/ml til 1 mg/ml. De 21mer-peptidbelagte cellene, partiklene eller kulene blir så inkubert med serisk fortynnede serumprøver i brønnene av en 96-brønn U-formet mikroplate. Etter å ha blitt satt ved romtemperatur i ca. 1 time blir agglutinasjonsmønstrene på bunnen avlest, og den største fortynning som viser positiv reaksjon, blir notert.
Dette er en én-trinns assay som kan brukes både til kvali-tativ og kvantitativ analyse av tilstedeværelse av anti-HIV-antistoffer i prøver som inkluderer sera eller kroppsfluider.
EKSEMPEL 4
Et diagnostisk AIDS, ARC og pre-AIDS spesifikt testsett for HIV-antistoff-påvisning kan utformes. Testsettet omfatter en emballasje oppdelt i rom som inneholder multiple 96-brønnplater belagt før bruk med 0,5 /xg av peptidet av den foreliggende oppfinnelse i 100 jul pH 9,5 lOmM NaHC03_buffer pr. brønn. Settet omfatter videre materialer for enzympåvisning i separate for-seglede containere som består av: 1) normal-human-serum (som negativ kontroll); 2) varmeinaktivert, NP40 løseliggjort AIDS-serum (som positiv kontroll); 3) normalt geiteserum; 4) peroksidasemerket geite-anti-human_ IgG; og 5) en fargeforandringsindikator som består av orto-fenylendiamin (OPD) og hydrogenperoksid i fosfatcitrat-buffer. Fremgangsmåten beskrevet i eksempel 1 skal følges.
I dette testsettet kan 96-brønnplater, forhåndsbelagt med peptidet av den foreliggende oppfinnelse, bli erstattet av poly-styrenkuler, eller multiple minikolonner med glasskuler med kontrollert porestørrelse eller nitrocellulose-papirstrimler forhåndsbelagt med peptidet av den foreliggende oppfinnelse for anvendelse som fastfase-immunoadsorbent.
EKSEMPEL 5
Et annet testsett for å påvise antistoffer ved å bruke immunoradiometrisk assay (IRMA) omfatter en emballasje som har inndelte rom og som inneholder multiple 96-brønn bøybare polyvinylklorid (PVC)-plater forhåndsbelagt med peptid i henhold til foreliggende oppfinnelse ved en konsentrasjon på 0,5 /xg av peptid i 100 /il av pH lOmM NaHC03-buffer pr. brønn og materialer
for radioimmunoassay som inkluderer:
1) normalt humant serum (som negativ kontroll); 2) varmeaktivert, NP40 løesliggjort AIDS-serum (som positiv kontroll); 125 3) normalt geiteserum; og 4) I -merket geite-anti-human IgG. Fremgangsmåten i eksempel 3 skal følges.
I dette testsettet kan 96-brønn PVC-plater forhåndsbelagt med peptid av den foreliggende oppfinnelse, erstattes med poly-styrenkuler forhåndsbelagt med peptidet av den foreliggende oppfinnelse for anvendelse som fastfase-immunoadsorbent.
EKSEMPEL 5A
Et tredje testsett for påvisning av HIV-antistoffer ved å bruke hemagglutinasjonsassay omfatter en emballasje oppdelt i rom som inneholder multiple 96-brønn U-formede mikroplater og materialer for hemagglutinasjonsassay som inkluderer (1) en flaske med 21mer-peptidbelagte røde blodceller fra sau, gelatinpartikler eller latex polystyrehkuler; (2) normalt humant serum (som negativ kontroll); og (3) varmeinaktivert, NP40 løselig-gjort AIDS-positivt serum (som positiv kontroll). Fremgangsmåten beskrevet i eksempel 3A skal følges.
EKSEMPEL 6
Et eksperiment ble utført for å sammenligne AIDS-screening-resultater ved å bruke metoden i eksempel 1 og varmeinaktivert, NP40 løseliggjort HIV i henhold til US-patent 4.520.113. Sera fra normale individer, pasienter med AIDS, ARC, ble fortynnet (1:20 og 1:200). Duplikater av hver fortynnet seraprøve ble testet mot peptidet i henhold til den foreliggende oppfinnelse og dyrket HIV i henhold til US-patent 4.520.113. Normalt humant serum og varmeinaktivert HIV-reaktive AIDS-serumprøver ble brukt som kontroll. Resultatene er vist i tabell III.
Resultatene i tabell III viser at metoden er høyt sensitiv. Den optiske tetthet fått ved å bruke peptidet av den foreliggende oppfinnelse mot duplikat AIDS-seraprøver ved den samme fortynning er mye høyere enn den optiske tetthet oppnådd ved å bruke deaktivert HIV mot identiske seraprøver ved identiske fortynninger. Videre, der hvor det kan være spørsmål om resultatene med deaktivert HIV, f.eks. eks. 335, 335, 340, 345, 347, 357 og 361, er resultatene med peptidet av den foreliggende oppfinnelse definitive, hvilket demonstrerer den høye grad av følsomhet og spesifisitet av metoden.
EKSEMPEL 7
Fire friske Balb/c-mus ble avblødd og deres sera testet i henhold til fremgangsmåten i eksempler 1 og 2. Resultatene indikerte at Balb/c-musene var fri for antistoffer mot både HIV og 21mer-peptidet som vist i tabell IV. De fire musene ble så adskilt i to grypper, A og B og immunisert i henhold til de følgende prosedyrer.
GRUPPE A
To av Balb/c-musene ble injisert med sukrose-båndformet HIV-virus blandet med et likt volum av komplett Freund's adjuvans ved 20 fJ. g/ 0,2ml/injeksjon inn på multiple steder både intraperitonealt og subkutant. Immuniseringen ble gjentatt i henhold til det følgende skjema:
GRUPPE B
To av Balb/c-musene ble på samme måte injisert med 21mer-peptidet konjugert med humant-serum-albumin (HSA) som bærerprotein ved 20 ug/ 20 /xg HSA/0,2 ml/injeksjon. Immuniserings-skjemaet ble også det samme som gruppe A-skjemaet.
Avblødninger ble tatt fra både gruppe A og B etter den sjette immuniseringen og sera analysert ved prosedyrene i eksempel 1 og 2, med unntak av at man brukte pepperotperoksidase konjugert geite-anti-mus IgG som tracer-antistoff. Resultatene er vist i tabell V.
Resultatene indikerer at 21mer-peptidet representerer en høy immunogen epitop til stede på HIV siden sera fått fra mus som tidligere var immunisert med HIV, inneholder høytiter-antistoffer mot HIV og også 21mer-peptidet. Videre er 21mer-peptidet et potent immunogen ved at det frembringer produksjonen av antistoffer mot HIV i friske pattedyr som demonstrert ved tilstedeværelsen av høytiter-antistoffer mot HIV i sera fått fra mus tidligere immunisert med 2lmer-peptidet koblet til humant-" serum-albumin som bærerprotein.
Det er nokså bemerkelsesverdig at syntetiske peptider som representerer ørsmå fraksjoner av et stort virus, kan bli manipulert til å etterligne den antigene/immunogene prosess i den grad at nøytraliserende eller beskyttende antistoffer kan bli fremstilt fra disse syntetiske peptider. De potensielle fordeler i omkostninger og sikkerhet ved å bruke de syntetiske peptider som vaksiner gjør denne tilnærming til en realistisk fremtidsutsikt. 2lmer-peptidet, dets analoger og segmenter, som beskrevet her, som er blitt funnet å representere høyt immuno-gene epitoper av HIV ved at 2lmer-peptidet, sammen med dets konjugerte former, kan frembringe høye titere av antistoffer mot HIV, er herved blitt demonstrert, og er derfor kandidater for anvendelse som syntetiske vaksiner i pattedyr eller mennesker for å frembringe spesifikke antistoffer mot HIV for beskyttende formål. Det er også forventet at polymere former av 2lmer-peptidet, dets analoger og segmenter også vil være anvendbare som kandidater for syntetiske vaksiner for de samme formål.
GRUPPE B
Balb/C-mus immunisert med 21mer-peptid OD^g 2
EKSEMPEL 8
Åtte analoger av 2lmer-peptidet og et overlappende 19mer-peptid ble fremstilt i amidformen i henhold til den klassiske Merrifield-metode beskrevet ovenfor. Aminosyresekvensen av hver av analogene er vist i tabell VI.
En serumprøve fra en pasient diagnostisert til å ha AIDS og tidligere bestemt å inneholde antistoffer mot HIV ble oppnådd. ELISA-test i henhold til eksempel 1 ble utført ved å bruke hver av analogene som belegnings-antigen mot AIDS-serumprøven ovenfor. Reaktiviteten av hver av analogene ble sammenlignet med reaktiviteten til 2lmer-peptidet som ble gitt en verdi på 100. Resultatene er vist i tabell VII.
Eksemplene ovenfor illustrerer forskjellige utgaver av oppfinnelsen.
Claims (19)
1. Peptid for in vitro påvisning av antistoffer mot HIV i kroppsfluider og diagnose av AIDS, ARC eller pre-AIDS, karakterisert ved at det er utvalgt fra gruppen som består av følgende peptider:
og modifiserte varianter derav med 12-21 aminosyrer og med samme aktivitet.
2. Fremgangsmåte for in vitro påvisning av antistoffer mot HIV og diagnose av AIDS, ARC eller pre-AIDS-tilstander ved hjelp av peptider ifølge krav 1, karakterisert ved at det anvendes en effektiv mengde av peptidet ifølge krav 1 som et belegnings-antigen for å påvise antistoffer mot HIV i en immunoassay-prosess.
3. Fremgangsmåte som angitt i krav 2,
karakterisert ved at det som immunoassay-prosess anvendes ELISA.
4. Fremgangsmåte som angitt i krav 2, karakterisert ved at det som immunoassay-prosess anvendes IRMA.
5. Fremgangsmåte som angitt i krav 3, karakterisert ved at for hver test anvendes 0,1 Mg til 20 /xg av peptidet i en puffer ved en pH-verdi i området fra 7 til 10, som antigen.
6. Fremgangsmåte som angitt i krav 3, karakterisert ved at det for hver test anvendes ca. 0,5 |jg av peptidet i en puffer ved en pH-verdi på 7 til 10, som antigen.
7. Fremgangsmåte som angitt i krav 5, karakterisert ved at det som puffer anvendes en lOmM bikarbonatpuffer ved en pH-verdi i området fra 9 til 10.
8. Fremgangsmåte som angitt i krav 6, karakterisert ved at det som puffer anvendes en lOmM bikarbonatpuffer ved en pH-verdi på ca. 9,5.
9. Fremgangsmåte som angitt i krav 5, karakterisert ved at det som puffer anvendes en 50mM TRIS-puffer ved en pH-verdi på 7 til 8.
10. Fremgangsmåte som angitt i krav 5, karakterisert ved at det som puffer anvendes en 50mM TRIS-puffer ved en pH-verdi på ca. 7,5.
11. Fremgangsmåte som angitt i krav 4, karakterisert ved at det for hver test anvendes 0,1 fig til 20 ug av peptidet i en puffer ved en pH-verdi i området fra 7 til 10, som antigen.
12. Fremgangsmåte som angitt i krav 4, karakterisert ved at det for hver test anvendes ca. 0,5 /xg av peptidet i en puffer ved en pH-verdi på 7 til 10, som antigen.
13. Fremgangsmåte som angitt i krav 11, karakterisert ved at det som puffer anvendes en lOmM bikarbonatpuffer ved en pH-verdi i området fra 9 til 10.
14. Fremgangsmåte som angitt i krav 12, karakterisert ved at det som puffer anvendes en lOmM bikarbonatpuffer ved en pH-verdi på ca. 9,5.
15. Fremgangsmåte som angitt i krav 13, karakterisert ved at det som puffer anvendes en 50mM TRIS-puffer ved en pH-verdi på 7 til 8.
16. Fremgangsmåte som angitt i krav 14, karakterisert ved at det som puffer anvendes en 50mM TRIS-puffer ved en pH-verdi på ca. 7,5.
17. Fremgangsmåte som angitt i krav 2, karakterisert ved at det som immunoassay-prosess anvendes en hemagglutinering.
18. Fremgangsmåte som angitt i krav 2, karakterisert ved at det som immunoassay-prosess anvendes en flerflekkstrimmelanalyse-prosess.
19. Testsett for in vitro påvisning av antistoffer mot HIV og diagnose av AIDS, ARC og pre-AIDS-tilstand, karakterisert ved at settet inneholder brønnplater som er belagt med et immunoadsorbent som er et peptid ifølge krav 1, en passende puffer og materialer for enzympåvisning eller påvisning i radio-immunoassay.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US77464485A | 1985-09-11 | 1985-09-11 | |
| US83756686A | 1986-03-04 | 1986-03-04 | |
| US06/847,102 US4735896A (en) | 1986-03-04 | 1986-04-02 | Synthetic peptide and process of using same for the detection and diagnosis of AIDS and pre-AIDS conditions |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO861697L NO861697L (no) | 1987-03-12 |
| NO176798B true NO176798B (no) | 1995-02-20 |
| NO176798C NO176798C (no) | 1995-05-31 |
Family
ID=27419712
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO861697A NO176798C (no) | 1985-09-11 | 1986-04-29 | Syntetisk peptid for påvisning av AIDS, fremgangsmåte for in vitro påvisning av antistoffer mot HIV og diagnose av AIDS, testsett for in vitro påvisning av antistoffer mot HIV og diagnose av AIDS, ARC og pre-AIDS tilstander |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0214709B1 (no) |
| JP (1) | JP2702911B2 (no) |
| AU (1) | AU579467B2 (no) |
| DE (2) | DE214709T1 (no) |
| DK (1) | DK198086A (no) |
| ES (1) | ES8801839A1 (no) |
| HK (1) | HK95194A (no) |
| IL (1) | IL78696A (no) |
| NO (1) | NO176798C (no) |
Families Citing this family (40)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IE64785B1 (en) * | 1985-04-08 | 1995-09-06 | Genetic Systems Corp | Expression of immunologically reactive viral proteins |
| DE3689941D1 (de) * | 1985-10-24 | 1994-08-04 | Southwest Found Biomed Res | Synthetische peptide und deren verwendung zur diagnose und impfung für aids und arc. |
| NZ218050A (en) * | 1985-11-13 | 1989-05-29 | Wistar Inst | Test for the presence of htlv-1v |
| ATE98376T1 (de) * | 1986-03-24 | 1993-12-15 | Ortho Pharma Corp | Synthetische htlv-iii-peptid-zusammensetzungen und ihre verwendung. |
| US4879212A (en) * | 1986-04-02 | 1989-11-07 | United Biomedical Inc. | Peptide composition and method for the detection of antibodies to HTLV-III |
| US4925784A (en) * | 1986-04-04 | 1990-05-15 | Hoffmann-La Roche Inc. | Expression and purification of an HTLV-III gag/env gene protein |
| DE3789633T2 (de) * | 1986-05-27 | 1994-08-04 | Hoffmann La Roche | HTLV-III(LAV)Decke-Peptide. |
| US4943627A (en) * | 1986-06-12 | 1990-07-24 | Biogen, Inc. | Peptides involved in the pathogenesis of HIV infection |
| US5017688A (en) * | 1986-06-12 | 1991-05-21 | Biogen, Inc. | Peptides involved in the pathogenesis of HIV infection |
| US5087557A (en) * | 1986-06-23 | 1992-02-11 | Genetic Systems Corporation | Human monoclonal antibody to lymphadenopathy-associated virus |
| DK169582B1 (da) * | 1986-06-23 | 1994-12-12 | Squibb Bristol Myers Co | Humant monoklonalt antistof, der er i stand til at reagere med en epitop på LAV/HTLV-III kappeglycoproteinet gp41, cellelinier, som producerer sådant antistof, farmaceutisk præparat indeholdende antistoffet samt fremgangsmåde til bestemmelse af nærværelsen af LAV/HTLV-III i en biologisk prøve og fremgangsmåde til separering af specifikke antigendeterminanter af LAV/HTLV-III under anvendelse af ant |
| EP0276279A4 (en) * | 1986-07-21 | 1990-01-08 | Southwest Found Biomed Res | PREPARATION AND METHOD FOR IMMUNIZING AGAINST VIRAL AIDS AND ARC PATHOGENS. |
| FR2610632B1 (fr) * | 1987-02-11 | 1990-12-21 | Pasteur Institut | Peptides caracteristiques des retrovirus d'immunodeficience humaine (virus hiv) leurs applications au diagnostic des infections dues a certains de ces virus et, le cas echeant, a la vaccination contre le sida |
| ES2058259T5 (es) * | 1987-03-25 | 2000-09-01 | Genetic Systems Corp | Antigenos sinteticos para la deteccion de enfermedad relacionada con sida causada por lav-2. |
| SE8701628D0 (sv) * | 1987-04-16 | 1987-04-16 | Erling Norrby | Medel for analys mm |
| AU1711888A (en) * | 1987-04-24 | 1988-12-02 | Biogen, Inc. | Immunotherapeutic methods and compositions |
| US4921787A (en) * | 1987-05-01 | 1990-05-01 | Cambridge Bioscience Corporation | Detection of antibodies to human immunodeficiency virus by agglutination of antigen coated latex |
| US5854400A (en) * | 1987-05-29 | 1998-12-29 | Tanox, Inc. | Monoclonal antibodies which neutralize HIV-1 infection |
| ATE122237T1 (de) * | 1987-05-29 | 1995-05-15 | Tanox Biosystems Inc | Hiv-1 neutralisierende monoklonale antikörper. |
| US6657050B1 (en) | 1987-05-29 | 2003-12-02 | Tanox, Inc. | Chimeric viral-neutralizing immunoglobulins |
| SE8704185L (sv) * | 1987-10-28 | 1989-04-29 | Ferring Ab | Nya peptider, artificiella antigener och immunoanalystestsatser |
| EP0323157A3 (en) * | 1987-12-24 | 1990-07-25 | The University Of Melbourne | Antiviral compounds and methods |
| SE8705197D0 (sv) * | 1987-12-30 | 1987-12-30 | Jonas Blomberg | New peptides, two diagnostic methods using the peptides and a medicament based on the peptides |
| US5149623A (en) * | 1988-02-09 | 1992-09-22 | Virotest, Inc. | Rapid, easy, and economical screening test for antibodies to human immunodeficiency virus |
| EP0330359A3 (en) * | 1988-02-25 | 1991-06-05 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Composition useful in the diagnosis and treating of hiv-1 infection |
| AU608413B2 (en) * | 1988-03-30 | 1991-03-28 | Abbott Laboratories | Mouse monoclonal antibody (5-21-3) to human immunodeficiency virus gp41 protein |
| JPH0292298A (ja) * | 1988-09-30 | 1990-04-03 | Olympus Optical Co Ltd | Ｈｉｖ構成蛋白に対するモノクローナル抗体 |
| IL94558A0 (en) * | 1989-06-06 | 1991-03-10 | Merck & Co Inc | Conjugate immunogen for aids and vaccine and pharmaceutical compositions containing it |
| IL95738A (en) * | 1989-09-23 | 1996-11-14 | Hoechst Ag | Antibodies against the well-preserved amino acid sequences of insulin, a process for their preparation and use in immunoassay |
| US6248574B1 (en) | 1989-12-13 | 2001-06-19 | Avigdor Shaffermann | Polypeptides selectively reactive with antibodies against human immunodeficiency virus and vaccines comprising the polypeptides |
| DE69129207T2 (de) * | 1990-01-16 | 1998-10-08 | Orgenics Ltd | Peptide, von Virus-HIV-Hüllen-Glycoproteinen abstammend, deren Verwendung zum Nachweis einer Infektion dieser Viren und für die Impfung gegen AIDS |
| FR2657017B1 (fr) * | 1990-01-16 | 1995-08-18 | Clonatec Sa | Peptides derivant de la glycoproteine d'enveloppe du virus-hiv-1, leurs applications a la detection d'une infection due a ce virus et a la vaccination contre le sida. |
| ES2138784T3 (es) * | 1990-12-14 | 2000-01-16 | Innogenetics Nv | Antigenos sinteticos para la deteccion de anticuerpos contra el virus de la hepatitis c. |
| US7119182B1 (en) | 1991-02-19 | 2006-10-10 | The Regents Of The University Of California | Recombinant thrombin receptor and related pharmaceuticals |
| US5688768A (en) * | 1991-02-19 | 1997-11-18 | Cor Therapeutics, Inc. | Recombinant thrombin receptor and related pharmaceuticals |
| US6667387B1 (en) | 1996-09-30 | 2003-12-23 | N.V. Innogenetics S.A. | HCV core peptides |
| US6709828B1 (en) | 1992-03-06 | 2004-03-23 | N.V. Innogenetics S.A. | Process for the determination of peptides corresponding to immunologically important epitopes and their use in a process for determination of antibodies or biotinylated peptides corresponding to immunologically important epitopes, a process for preparing them and compositions containing them |
| CN103356636A (zh) | 2004-05-23 | 2013-10-23 | 杰勒德·M·豪斯 | Theramutein调节剂 |
| US8431110B2 (en) | 2005-05-23 | 2013-04-30 | Hmi Medical Innovations, Llc. | Compounds and method of identifying, synthesizing, optimizing and profiling protein modulators |
| CN102146116B (zh) * | 2010-12-30 | 2013-02-13 | 桂林医学院 | 罗汉果甜苷v特异性抗血清的制备及检测方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FI83662C (fi) * | 1980-07-17 | 1991-08-12 | Scripps Clinic Res | Diagnostik antikropp och foerfarande foer dess framstaellning. |
| AU600224B2 (en) * | 1984-09-19 | 1990-08-09 | Regents Of The University Of California, The | Retroviral polypeptides associated with human cellular transformation |
| IE64785B1 (en) * | 1985-04-08 | 1995-09-06 | Genetic Systems Corp | Expression of immunologically reactive viral proteins |
| FR2580177B2 (fr) * | 1985-04-15 | 1989-06-02 | Pasteur Institut | Antigenes apparentes a la glycoproteine d'enveloppe du virus du sida, notamment precurseurs de cette glycoproteine, procedes d'obtention de ces antigenes et moyens mis en oeuvre dans ces procedes, applications de ces antigenes a la preparation de compositions immunogenes ou pour le diagnostic du sida ou des affections qui lui sont apparentees |
| EP0220273B2 (en) * | 1985-04-29 | 2007-01-17 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Synthetic antigens for the detection of aids-related disease |
-
1986
- 1986-04-28 JP JP61099296A patent/JP2702911B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1986-04-29 AU AU56803/86A patent/AU579467B2/en not_active Ceased
- 1986-04-29 EP EP86303224A patent/EP0214709B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-04-29 NO NO861697A patent/NO176798C/no unknown
- 1986-04-29 DE DE198686303224T patent/DE214709T1/de active Pending
- 1986-04-29 DE DE86303224T patent/DE3689097T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1986-04-30 DK DK198086A patent/DK198086A/da not_active Application Discontinuation
- 1986-04-30 ES ES554592A patent/ES8801839A1/es not_active Expired
- 1986-05-06 IL IL78696A patent/IL78696A/xx not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-09-08 HK HK95194A patent/HK95194A/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK198086A (da) | 1987-03-12 |
| NO176798C (no) | 1995-05-31 |
| EP0214709A2 (en) | 1987-03-18 |
| NO861697L (no) | 1987-03-12 |
| EP0214709A3 (en) | 1988-09-21 |
| DK198086D0 (da) | 1986-04-30 |
| HK95194A (en) | 1994-09-16 |
| AU579467B2 (en) | 1988-11-24 |
| IL78696A0 (en) | 1986-08-31 |
| EP0214709B1 (en) | 1993-09-29 |
| JPS6261996A (ja) | 1987-03-18 |
| DE214709T1 (de) | 1987-10-15 |
| IL78696A (en) | 1991-04-15 |
| ES8801839A1 (es) | 1988-02-16 |
| AU5680386A (en) | 1987-04-16 |
| DE3689097T2 (de) | 1994-04-21 |
| ES554592A0 (es) | 1988-02-16 |
| JP2702911B2 (ja) | 1998-01-26 |
| DE3689097D1 (de) | 1993-11-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO176798B (no) | Syntetisk peptid for påvisning av AIDS, fremgangsmåte for in vitro påvisning av antistoffer mot HIV og diagnose av AIDS, testsett for in vitro påvisning av antistoffer mot HIV og diagnose av AIDS, ARC og pre-AIDS tilstander | |
| US4735896A (en) | Synthetic peptide and process of using same for the detection and diagnosis of AIDS and pre-AIDS conditions | |
| EP0278148B1 (en) | Peptide composition and method for the detection of antibodies to HTLV-III | |
| JP2851278B2 (ja) | Ｈｔｌｖ−ｉに対する抗体の検出のための抗原，ａｔｌのためのワクチンとしてのペプチド組成物およびそれを用いる方法 | |
| EP0328403B1 (en) | Synthetic peptides related to the HIV-GP120-env-protein, and their use | |
| Hale et al. | T cell multideterminant regions in the human immunodeficiency virus envelope: toward overcoming the problem of major histocompatibility complex restriction | |
| Rodman et al. | Human immunodeficiency virus (HIV) Tat-reactive antibodies present in normal HIV-negative sera and depleted in HIV-positive sera. Identification of the epitope. | |
| EP0404935B1 (en) | Synthetic peptide compositions with immunoreactivities to antibodies to htlv-1 | |
| JP2650217B2 (ja) | Ｈｔｌｖ―１感染の診断、治療及び予防接種のためのペプチド | |
| US5763160A (en) | Synthetic peptides and process of using same for the detection of antibodies to human immunodeficiency virus (HIV) gp120 envelope protein, diagnosis of AIDS and pre-AIDS conditions and as vaccines | |
| CA2034611C (en) | Synthetic peptide compositions with immunoreactivities to antibodies to htlv | |
| CA1341436C (en) | Synthetic antigens for the detection of aids-related disease caused by lav-2 | |
| NO177463B (no) | STLV-III-beslektede polypeptider, diagnostiske prövesett og in vitro analysefremgangsmåte for påvisning av anti-HIV-2-antistoffer i kroppsvæskepröve | |
| US5476765A (en) | Synthetic peptide compositions with immunoreactivities to antibodies to HTLV and as vaccines | |
| Modrow et al. | Use of synthetic oligopeptides in identification and characterization of immunological functions in the amino acid sequence of the envelope protein of HIV-1 | |
| Boucher et al. | Immune response and epitope mapping of a candidate HIV‐1 p17 vaccine HGP30 | |
| AU641554B2 (en) | Novel peptide antigens and immunoassays, test kits and vaccines using the same | |
| US5420244A (en) | Methods and compositions for diagnosing HTLV-I associated myelopathy and adult T-cell leukemia | |
| US5378805A (en) | Immunoreactive HTLV-I/II ENV and POL peptides | |
| Cheingsong-Popov et al. | Antibodies to a putative HIV gp41 immunosuppressive peptide, pHIVIS (583–599), do not correlate significantly with outcome in HIV infection | |
| AU627701B2 (en) | Hiv peptides, artificial hiv antigens and immunoassay kits | |
| US5681696A (en) | Synthetic peptide compositions with immunoreactivities to antibodies to HTLV | |
| AU621855B2 (en) | Peptide corresponding to hiv-env 583-599, and analogs thereof and applications of the peptides | |
| CA1341594C (en) | Synthetic peptides and mixtures therof for detecting hiv antibodies | |
| NO177536B (no) | HIV-1-relaterte polypeptider, preparat som omfatter en blanding med minst to polypeptider, samt diagnostisk system og anvendelse av et polypeptid for måling av anti-HIV-1-antistoffer |