NO173084B - Hplc-kolonne og fremgangsmaate ved pakning av denne - Google Patents

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører en HPLC-kolonne omfattende en hul, sylindrisk beholder som inneholder et sjikt av partikkelformet materiale og en. fremgangsmåte for pakning av kromatografimedier i en slik kolonne.

De vanligste preparative HPLC-kolonner har ganske enkelt vært rør, hvori et pakningsmedium innføres og sjiktet får sette seg ved hjelp av vibrasjon og løsningsmiddelstrøm.

Denne metoden har vært brysom og har hatt problemer på området reproduserbarhet. Andre metoder har vært innført for å over-vinne disse begrensninger, men har sine ulemper. En metode omfatter radial kompresjon, hvori mediet i et fleksibelt rør plasseres i et kammer og klemmes sammen ved pneumatisk eller hydraulisk trykk. En åpenbar begrensning ved denne fremgangsmåten er varigheten av det fleksible rør, spesielt når det er i kontakt med forskjellige løsningsmidler som brukes under den kromatografiske prosessen.

Andre metoder anvender en form for aksial kompresjon, hvori et element virker på én ende av kolonnesj iktet og presser den sammen. Disse metoder har begrensninger ved at friksjonen til pakningsmediet som virker på kolonnens vegg forårsaker en viss kompresjonsgradient i sjiktet, og således fører til et tettere pakket sjikt nærmest elementenden. En annen begrensning for denne fremgangsmåten har vært trykk, slik at den er begrenset i bruk til bare den større partikkel-størrelse og mindre effektivt pakningsmedium.

Det er målet for denne oppfinnelse å tilveiebringe en kolonne som er slik oppbygget at den sikrer reproduserbart fyllingssjikt uavhengig av partikkelstørrelsen til mediet som brukes ved ikke-jevn reduksjon av tverrsnittet til sjiktet i den aksiale retning.

Det er videre målet for denne oppfinnelsen å også kom-primere sjiktet fra én ende i forbindelse med reduksjon av tverrsnittet til sjiktet for å holde sjiktet effektivt gjennom et langt tidsrom og ettersom kolonnen brukes.

Dette oppnås ifølge oppfinnelsen ved en HPLC-kolonne av den innledningsvis nevnte art som har en spindel med en konisk del som holdes sentrert i beholderen inne i sjiktet av partikkelformet materiale og er aksialt bevegelig deri for å pålegge radialt og aksialt trykk på det partikkelformede materialet som er avgrenset i beholderen.

En foretrukken utførelsesfor er en HPLC-kolonne som omfatter en hul sylindrisk beholder utstyrt med lukninger (deksler) ved motsatte ender og derved avgrenser et lukket kammer for å romme et pakningssjikt av partikkelformet væske-kromatografimateriale, hvilke lukninger inneholder åpninger og, hhv. en innløpsåpning ved én ende og en utløpsåpning ved den annen ende, et langstrakt spindel montert i behodleren med sine ender stikkende ut fra denne, hvilket spindel er aksialt bevegelig i beholderen og utgjør en aksialtgående avsmalnende del som strekker seg fra innløpsenden mot utløpsenden og anordninger ved én ende av spindelen nærmest utløpsenden av beholderen og strekker seg operativt fra denne for å bevege spindelen aksialt inne i kammeret for å justere kompresjonen av det partikkelformede materialet i det lukkede kammeret.

I en forbedret versjon av HPLC-kolonnen ifølge denne oppfinnelsen er det også anordnet en bevegelig sylinder i beholderen for å tvinge én ende av mediesjiktet i beholderen mot den annen ende av beholderen. Som vist i den forbedrede utførelsesform er sylinderen koblet til spindelen for bevegelse med denne for å legge kraft på kromatografimediesjiktet.

Fremgangsmåten ifølge oppfinnelser er særpreget ved plassering av en delvis avsmalnende spindel sentralt i én ende av sjiktet med spindelavsmalningen formet slik at når det beveges mot den andre ende av sjiktet, tvinges mediesjiktet som er i kontakt med avsmalningen mot de innvendige vegger av kolonnen og mot enden av kolonnen fjernest fra spindelavsmalningen og beveger spindelen mot enden av kolonnen lengst vekk fra spindelavsmalningen.

Når kolonnen klargjøres for bruk, innføres det partikkelformede medium i kolonnen rundt spindelen, dekslene festes på plass, sjiktet fuktes langsomt med løsningsmiddel som passer for typen av pakning, og mutteren som befinner seg på enden av spindelen strammes til en slik vridningsstørrelse at sjiktet ikke overskrider det som ville knuse partikkelmaterialet. I den forbedrede versjon av denne oppfinnelsen kobles en sylinder til spindelen, og én ende av mediesjiktet står i kontakt med dette for å skyve på innløpsenden av sjiktet når kraft legges på sjiktet med det avsmalnende spindel når det beveges mot utløpsenden av beholderen.

Slik det her brukes betyr uttrykket HPLC-kolonne en "high performance liquid chromatography column" og refererer også noen ganger til en høytrykksvæskekromatografikolonne. Det kan også vises til U.S. patent nr. 4.582.608, som beskriver en HPLC-kolonne i informativ hensikt.

KORT BESKRIVELSE AV TEGNINGENE

Oppfinnelsen skal nå beskrives under henvisning til de vedlagte tegninger, hvor: Fig. 1 er et loddrett snitt gjennom HPLC-kolonnene plassert i stilling med sin innløpsende på toppen av figuren og sin utløpsende i den nedre endedel av figuren; Fig. 2 er en utvidet tverrsnitts figur av en del av endedekselet ved innløpsenden av kolonnen på Fig. 1; Fig. 3 er en utvidet tverrsnitts figur av et strøm-fordelerhode ved innløpsenden som passer inn i endedekselet på

Fig. 2.

Fig. 4 viser ovenfra hodet som er vist på Fig. 3; Fig. 5 viser utvidet ovenfra strømfordelingsplaten ved innløpsenden av kolonnen vist på Fig. 1; Fig. 6 er et tverrsnittsbilde tatt langs linjen 6-6 på

Fig. 5.

Fig. 7 viser nedenfra platen på Fig. 5; Fig. 8 viser utvidet ovenfra fordelerbærerplaten ved utløpsenden av kolonnen på Fig. 1; Fig. 9 er et tverrsnitt tatt langs linjen 9-9 på Fig. 8; Fig. 10 viser nedenfra fordelerplaten som er vist på Fig. 8; Fig. 11 er et tverrsnittsbilde av et forskjellig strøm-fordelerhode som kan erstatte hodet som er vist på Fig. 3 og 4 ; Fig. 12 er et tverrsnittsbilde av en forbedret HPLC-kolonne ifølge oppfinnelsen; Fig. 13 er et forstørret tverrsnittsbilde med deler brutt vekk av den forbedrede kolonne på Fig. 12; Fig. 14 er et tverrsnitt tatt langs linjen 14-14 på Fig. 13; Fig. 15 viser ovenfra strømfordelerhode på Fig. 12; og Fig. 16 viser ovenfra strømfordelerplaten på Fig. 12.

Idet det vises til tegningene, Fig. 1 omfatter HPLC-kolonnen ifølge denne oppfinnelsen en hul sylindrisk beholder 10 med jevn innvendig diameter med en indre vegg 10-1 forsynt med lukninger 12 og 14 ved sin øvre og hhv. nedre ende, som i forbindelse med de innvendige vegger av den hule sylindriske beholder 10, avgrenser et lukket kammer 16, i hvilket det er innført partikkelformet materiale M. Beholderen er ved sin øvre ende (innløp) utstyrt med en ringformet krave 18 sveiset til seg, og et deksel 2 0 er løsbart festet til kraven 18 med bolter 22. På lignende måte er beholderen ved den nedre ende (utløp) forsynt med en sveiset krave 24 og et deksel 2 6 er festet til dette med bolter 28. Sentralt i dekselet 20 er det anordnet en åpning 30, og sentralt til dekselet 26 er det anordnet en åpning 3 2 på linje med åpningen 30. Dekslene 20 og 26 er forsynt med fordypninger 34 og 36 konsentriske til åpningene 30 og 32. Et langstrakt spindel (spindel) 38 er montert i beholderen med sine motsatte ender gående hhv. gjennom åpningene 3 0 og 32, og holdes aksialt oppe deri med pakningsstykker, f.eks. teflonringer omfattende en pakning 4 0 plassert i fordypningene 34 og holdt deri med en gjenget mutter 42 og en pakning, f.eks. teflonring 44 holdt i for-dypningen 36 av en mutter 46. Pakninger 48 og 50 er plassert mellom de respektive kraver og deksler.

Det øvre deksel 20 er forsynt med en innløpspassasje 52, hvis indre ende slutter nær spindelens 38 akse og dekselet 2 6 er utstyrt med en utløpspassasje 54, hvis indre ende er tett inntil spindelens akse. Fortrinnsvis er fordelere 60 og 61 trukket tilbake inn i dekslene ved motsatte ender av beholderen for å sikre jevn fordeling og samling av løsningsmidlet, slik det er vanlig. Se f.eks. U.S. patent nr. 4.582.608 for

en typisk fordeler.

Ifølge oppfinnelsen er spindelen 38 forsynt med en del 56a som går gjennom dekselet 20. En smalnende f.eks. konisk del 56b med ca. 3,02° avsmalning og som går fra den sylindriske del 56a delvis gjennom kammeret og en sylindrisk del 56c med mindre diameter enn den sylindriske del 56a som strekker seg resten av veien gjennom kammeret og gjennom dekselet 26. Den avsmalnende, f.eks. konisk formede del 56b av spindelen befinner seg sentralt i beholderen i kolonnen av partikkelformet medium (medier) som denne inneholder omfattende sjiktet av pakning som er plassert deri, og sørger, ved aksial justering i kolonnen, for å legge trykk på det partikkelformede medium (medier) både radialt og aksialt og har til hensikt å gi en jevn og reproduserbar pakning av det partikkelformede materialet. For å bevirke langsgående bevegelse av spindelen (spindelen) 38, og følgelig justering av pakningstrykket, har spindelen ved sin lavere ende utenfor beholderen en gjenget del 56, rundt hvilken det er plassert en skjerm 58, hvis ene ende hviler mot dekselet 56, og hvis andre ende inneholder en åpning hvorigjennom den gjengede del 56 forløper og hvorpå det er satt en mutter 60. Ved å dreie mutteren 60 kan spindelen trekkes nedover i beholderen og utøve både aksialt og radialt trykk på det partikkelformede materialet i beholderen.

Det partikkelformede materialet innføres i beholderen rundt spindelen, endedeksléne festes på plass og sjiktet av partikkelformet materiale fuktes langsomt med et passende løsningsmiddel for typen av pakning, hvorpå mutteren 60 strammes til en vridningsverdi slik at trykket på pakningsmediet ikke overskrider 20,5 atm. eller en annen forutbestemt verdi for å hindre knusning av det partikkelformede materialet. Kreftene som oppstår med det koniske spindelen har både vertikale og horisontale komponenter som fører til et meget jevnt og reproduserbart pakket sjikt.

Det skal nå vises til fig. 2 til 7 som illustrerer elementet 2 0 og viser innløpet 52 for fluidum som kommer inn i kolonnen, idet innløpet har en omskrivende kanal 52-1 som gir fluidum til fordeleren 60. Fordeleren 60 omfatter et hode 60-1 som har hull 60-la på linje med en kanal 52-1 og en kuppel-formet del 60-lc. Fluidet går gjennom hullene 60-la og kommer så til fordelingsplatens 60-2 topp som har hullene 60-2a ved en stilling av platen forskjøvet i forhold til hullene 60-2a, slik at fluidet ikke går direkte gjennom hull 60-la, og deretter direkte gjennom hullene 60-2a. Deretter går fluidet som inneholder prøven inn i fordelingskanaler 60-2b på linje med hullene 60-2a og følgelig gjennom en vanlig fritteplate (skive) 60-3, f.eks. en vanlig sintret type med en 2 porøs-itet slik som kan kjøpes fra Mott Metalurgical Farmington, Conn.

Fig. 8 til 10 illustrerer en bæreplate 61-1 (ved utløps-enden) med huller 61-la på den side som vender mot det partikkelformede mediesjikt M. Fluid fra sjiktet går først gjennom en fritte eller sintret porøs skive 61-1, f.eks. 2 porøsitet i kontakt med bæreplaten 61-1 (se fig. 1). Fluidum fra kanalene 61-2b går inn i utløpet 54 gjennom en omskrivende kanal 54-1.

Det skal være klart at den nøyaktige type innløpsfordeler 60 og utløpsfordeler 61 kan variere, slik det vil være åpenbart for en fagmann på området.

På fig. 11 er det vist enda et annet fordelerhode med huller 70-1 som har en ring lik en omskrivende kuppel 70-2 som kan brukes i den forannevnte kolonne som inneholder paknings-apparaturen i denne oppfinnelsen.

Det skal nå vises til fig. 12 til 16 som illustrerer en forbedret versjon av den tidligere beskrevne HPLC-kolonne.

På disse figurer 12 til 16 omfatter HPLC-kolonnen en sylindrisk beholder forsynt med lukninger på sine motstående ender som avgrenser et lukket kammer med denne for å romme et pakningssjikt av partikkelformet materiale (sjiktmedium). Lukningene inneholder sentralt-plasserte, aksialt-innrettede åpninger og et utløp på én ende, en langstrakt spindel montert i beholderen med sine ender utstrakt fra denne gjennom de aksiale åpninger. Pakninger er plassert i åpningene rundt spindelen, idet spindelen er aksialt bevegelig i beholderen og utgjør en aksialt-gående konisk del koblet til et sylindrisk segment ved innløpsenden. Spindelen går fra innløpsenden mot utløpsenden, og det foreligger anordninger ved én ende av spindelen utenfor dekselet ved den ende som er operativ for å bevege spindelen og det sylindriske segment aksialt inne i kammeret for å justere kompresjonen av det partikkelformede materialet i kammeret og anordninger på den motsatte ende av spindelen for å gi et innløp for løsningsmiddel og prøvestrøm. Anordningene for å bevirke aksial bevegelse av spindelen omfatter en gjenge på spindelen utenfor den ene ende, og en mutter tredd på den gjengede ende av spindelen mot stempelet. Det sylindriske segmentet på innløpsenden av spindelen inneholder fortrinnsvis to splittede teflonføringsringer og en teflongrafitthøytrykksstempeltetning som gir tett kontakt med den innvendige veggen av den hule sylindriske beholdervegg og anordninger til å gi innløp for en jevnt fordelt strøm over toppen av pakningssjiktet. Pakningen oppnås fortrinnsvis med fordypninger som er konsentriske med åpningene som tetnings-elementene er plassert i og holdes sammentrykket rundt spindelen med muttere tredd i fordypninger mot pakningene.

Ifølge fremgangsmåten for preparering av kolonnen for bruk festes spindelen sammen med innløpsendedekselet på plass, kolonnen snus, det partikkelformede medium innføres i kolonnen rundt spindelen med utløpsdekselet av, og deretter festes utløpet og dekselet, kolonnen føres tilbake til sin normale opprette stilling (som vist på fig. 12), sjiktet fuktes langsomt med riktig løsningsmiddel for typen pakning, og mutteren som befinner seg på enden av spindelen trekkes til til en vridningsverdi slik at trykket ikke overskrider det som ville knuse det partikkelformede materialet når sylinderen (sylindersegmentet) og spindelen trekkes nedover.

Spesielt viser disse figurer 12 til 16 en HPLC-kolonne 100 ifølge denne oppfinnelse som omfatter en hul sylindrisk beholder 110 med jevn innvendig diameter forsynt med lukninger 112 og 114 ved sin øvre og hhv. nedre ende, som i forbindelse med den hule sylindriske beholder 110 avgrenser et lukket kammer 116, hvori partikkelformet materiale M innføres. Beholderen 110 ved den øvre ende er forsynt med en ringformet krave 118 sveiset til seg, og dekselet 12 0 er løsbart festet til kraven med bolter 122. På lignende måte er beholderen ved den nedre ende forsynt med en krave 124, og et deksel 126 er festet ved bolter 128. Sentralt i dekselet 120 er det anordnet en åpning 130, og sentralt i dekselet 126 er det anordnet en åpning 132 på linje med åpningen 13 0. Dekslene 12 0 og 12 6 er forsynt med fordypninger 134 og 13 6 konsentrisk med åpningene 130 og 132. Et langstrakt spindel 138 med en sylinder 13 9 koblet til seg er montert i kolonnen 110 med de motsatte ender av spindelen 138 gående hhv. gjennom åpningene 13 0 og 132 og holdes aksialt oppe med pakningsflenser omfattende en pakning 140, f.eks. teflonpakning plassert i en fordypning 134 og holdt i denne med en gjenget mutter 142 og en pakning, f.eks. av teflon 144 holdt i en fordypning 136 med mutter 146. Den sylindriske del (segment) 139 er utstyrt med føringsringer 139a og 139b, f.eks. teflon-o-ringer og en stempeltetning 139c, f.eks. Bal-Seal brand tetning fremstilt av Bal-Seal Engineering i Santa Ana, California. Tetnings-pakninger er plassert mellom de respektive kraver og deksler.

Det nedre dekselet 126 er utstyrt med en utløpspassasje 154, hvis indre ende er tett inntil spindelens akse. Utløps-dekselet 12 6 er også utstyrt med en fordypning for å ta imot et porøst sintret element 127 og en bærerplate 128 for å holde på det pakkede sjikt og gi jevnt utløp av løsningsmiddel. Videre er det sintrede element 127 forsynt med et hull tilpasset en teflon-grafitt "Hat"-tetning 127a, som effektivt hindrer lekkasje av pakningsmedium og løsningsmiddel rundt spindeldelen 156c.

Ifølge oppfinnelsen er spindelen 138 sammensatt av fire separate segmenter: en sylindrisk del 156a, som strekker seg gjennom dekselet 120 og danner et innløp; en smalnende del 156b, f.eks. konisk formet; en sylindrisk del 156c med mindre diameter enn den sylindriske del 156d som strekker seg resten av veien gjennom kammeret og gjennom dekselet 126; og en sylindrisk del 139 som rommer det pakkede sjikt, f.eks. av silisiumdioksydkromotografimedier og en anordning 160 for jevn fordeling av løsningsmidlet til slutt gjennom et sintret element 139d, som er en del av den sylindriske del 139. Spindeldelen som består av segmenter 156b og 156c er forsynt med en anordning, f.eks. gjenget del for stramt feste til segment 156a som går gjennom midten av sylinderen 139 og holder den fast med alle dens elementer og gir en anordning til 156a-l for å innføre løsningsmidlet til fordelingsdelen av sylinderen 139. Tetning oppnås ved å innsette en væsketett tetning mellom segmentet 156a, sylinderen 139 og segmentet 156b. Den avsmalnende eller konisk formede del 156b befinner seg sentralt i beholderen sammen med den sylindriske del 139. Ved aksial justering i kolonnen gir spindeldel 156b og sylinderen 139 trykk på det partikkelformede medium både radialt og aksialt og har til hensikt å oppnå et tett pakket sjikt, dvs. pakning av det partikkelformede materialet. For å bevirke bevegelse i lengderetningen av spindelen 138 og følgelig justering av pakningstrykket, har spindelen ved sin nedre ende utenfor beholderen en gjenget del 156, rundt hvilken det er anordnet en hul sylinder 158, hvis ene ende hviler mot mutteren 146, og gjennom den andre ende går den gjengede del 156 hvorpå det er satt en mutter 160. Ved å dreie mutteren 160 kan spindelen trekkes nedover i beholderen og utøve både radiale og aksiale krefter på det partikkelformede materialet i beholderen.

Med kolonnen i en snudd stilling og innløpsendedekselet 120 og spindelen 138 fast, innføres det partikkelformede materialet i beholderen rundt spindelen. Utløpsendedekselet 126 er sammen med alle andre elementer festet og det partikkelformede materialet fuktes langsomt med et riktig løs-ningsmiddel for typen pakning, hvorpå mutteren 160 trekkes til inntil en dreiningsstyrke slik at trykket på pakningsmediet ikke overskrider 20,5 atm eller en annen forutbestemt verdi for å forhindre knusing av det partikkelformede materialet. Kreftene som dannes med sylinderen som gir en kraft vertikalt gjennom den sintrede platen når den beveges nedover med spindelen som den er koblet til for bevegelse med denne og med spindelen som pålegger både vertikale og horisontale kraft-komponenter fører til et meget jevnt og reproduserbart pakket sj ikt.

På fig. 13, 14, 15 og 16 er det vist anordninger 160 for fordeling av fluid fra kanalen 156-2a og kanalen 156-2b på mediesjiktet M. Fluidet fra kanalen 156-2b går inn i kanalen 160-lb og deretter gjennom huller 160-la i hodet 160-1. Deretter ledes fluidet som skal separeres av sjiktet mot platen 160-2, og beveger seg gjennom huller 160-2a i denne inn i sylinderens 139 kanaler 160-lb på den sintrede porøse plate 139d, og deretter på sjiktet M. Se fig. 5 til 7 for nærmere detaljer ved en plate. Ved utløpsenden er fritten eller den sintrede skive vist med 12 7 og bæreplaten er vist med 12 8 og er av den samme type som beskrevet på fig. 1 til 10. Fluid passerer gjennom huller 128-1 på toppen og så inn i kanaler 128-2 som henger sammen med den omskrivende kanal 154-1 av utløp 154. En passende avsmalning for den koniske del 156-b av spindelen er ca. 2,20°.

Det skal være klart at den foreliggénde beskrivelse bare har illustrerende hensikt og innbefatter alle modifikasjoner eller forbedringer som faller innenfor omfanget av de vedlagte krav.

Claims (10)

1. HPLC-kolonne omfattende en hul, sylindrisk beholder (10) som inneholder et sjikt av partikkelformet materiale (M), karakterisert ved at en spindel (38) med en konisk del (56b) som holdes sentrert i beholderen inne i sjiktet av partikkelformet materiale og er aksialt bevegelig deri for å pålegge radialt og aksialt trykk på det partikkelformede materialet som er avgrenset i beholderen (10).

2. HPLC-kolonne ifølge krav 1, karakterisert ved at spindeldelen i beholderen omfatter en konisk del (56b) nærmest innløpsenden av beholderen (10) og en sylindrisk del (56b) nærmest utløpsenden av beholderen (10).

3. HPLC-kolonne ifølge krav 1, karakterisert ved at en hul, sylindrisk beholder (10), innløps- (20) og utløpsdeksler (26) ved de motsatte ender av beholderen festet til dennes ender og i forbindelse med denne avgrensende et lukket kammer (16) for å romme et sjikt av partikkelformet materiale (M) avgrenset i beholderen (10),og hvori spindelen (38) plassert i beholderen (10) med sine motsatte ender gående fra dekslene (20, 26), hvilken spindel er aksialt bevegelig i beholderen (10) gjennom dekslene, idet spindelen (38) danner en konisk del (56b) som går fra innløpsdekselet (20) derav delvis mot utløpsdekselet (26), og anordninger (56, 60) ved én ende av spindelen (38) som befinner seg utenfor utløpsdekselet (26) operativt for å bevege spindelen (38) aksialt i kammeret (16) for å justere kompresjonen av det partikkelformede materialet (M) i kammeret (16).

4. HPLC-kolonne ifølge krav 3, karakterisert ved at endene (56, 56a) til spindelen (38) stikker frem fra endene av beholderen (10), og det er tredd en mutter (60) på én av de utstikkende endene (56) av spindelen (38) i kontakt med lukningen (26) ved den operable ende for å bevirke aksial bevegelse av spindelen (38) i beholderen (10).

5. HPLC-kolonne ifølge krav 1, karakterisert ved at huset er fylt med partikkelformet materiale (M) sammentrykket aksialt og radialt med et trykk som ikke knuser det partikkelformede materialet (M) som utsettes for trykket.

6. HPLC-kolonne ifølge krav 1, karakterisert ved at den omfatter en hul beholder (10) med første (112) og andre ender (114), en sylinder (139) plassert ved eller nær en første ende (112) av beholderen (110) og bevegelig i beholderen, og spindelen (138) er koblet til sylinderen (139) for bevegelse med denne, idet spindelen (138) har delen (156b) nærmest sylinderen utformet konisk med den større diameter nærmest sylinderen (139) og en sylindrisk del (156d) som strekker seg fra den avsmalnende del, og en første anordning (126, 146) som befinner seg ved den andre ende (114) av beholderen (110) for å bevege spindelen (138) og sylinderen (139) i beholderen (110).

7. HPLC-kolonne ifølge krav 6, karakterisert ved at sylinderen (139) inneholder anordninger (156a-l, 160) for å ta imot fluid og føre fluid til romdelen på den side som er nærmest den koniske del (156b) av spindelen (138).

8. HPLC-kolonne ifølge krav 7, karakterisert ved at den første anordning innbefatter anordninger (128) for å ta imot fluid fra beholderens innvendige del og bringe fluid til et utløp derav.

9. HPLC-kolonne ifølge krav 1, som inneholder den hule beholder (10), en sylinder (139) plassert i beholderen (10) for aksial bevegelse deri, karakterisert ved at spindelen (38) er koblet til sylinderen (139) for bevegelse med denne, hvilken spindel (138) er delvis avsmalnet slik at den avsmalnende del nærmest sylinderen (139) har et større tverrsnitt enn den avsmalnende del fjernest fra spindelen (138).

10. Fremgangsmåte ved pakning av kromatografimedier i en HPLC-kolonne ifølge krav 1 mellom to ender og en innvendig vegg derav, karakterisert ved plassering av en delvis avsmalnende spindel sentralt i én ende av sj iktet med spindelavsmalningen formet slik at når det beveges mot den andre ende av sjiktet, tvinges mediesjiktet som er i kontakt med avsmalningen mot de innvendige vegger av kolonnen og mot enden av kolonnen fjernest fra spindelavsmalningen og beveger spindelen mot enden av kolonnen lengst vekk fra spindelavsmalningen .