NO169127B - Analogifremgangsmaate for fremstilling av et terapeutisk aktivt pepti - Google Patents
Analogifremgangsmaate for fremstilling av et terapeutisk aktivt pepti Download PDFInfo
- Publication number
- NO169127B NO169127B NO864088A NO864088A NO169127B NO 169127 B NO169127 B NO 169127B NO 864088 A NO864088 A NO 864088A NO 864088 A NO864088 A NO 864088A NO 169127 B NO169127 B NO 169127B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- peptide
- asn
- cells
- tyr
- leu
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 17
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims abstract description 5
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 36
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 15
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 abstract description 11
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 28
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 11
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 9
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 9
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 8
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical class CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 108010071286 prethrombins Proteins 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 4
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 4
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 4
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 4
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 230000003399 chemotactic effect Effects 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 4
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 4
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 4
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 4
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 4
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- KPYXMALABCDPGN-HYOZMBHHSA-N (4s)-5-[[(2s)-6-amino-1-[[(2s,3s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2r)-1-[[2-[[2-[[(1s)-3-amino-1-carboxy-3-oxopropyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-1-oxo-3-sulfanylpropan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]a Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN)CC1=CC=C(O)C=C1 KPYXMALABCDPGN-HYOZMBHHSA-N 0.000 description 3
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010038512 Platelet-Derived Growth Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000010780 Platelet-Derived Growth Factor Human genes 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 229960003766 thrombin (human) Drugs 0.000 description 3
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 3
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 3
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 2
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 2
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 2
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 101800001386 Peptide II Proteins 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 2
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 2
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 2
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000058 esterolytic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- WGTYBPLFGIVFAS-UHFFFAOYSA-M tetramethylammonium hydroxide Chemical compound [OH-].C[N+](C)(C)C WGTYBPLFGIVFAS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ATCFYQUZTYQTJN-AXDSSHIGSA-N (2s)-2-amino-4-benzylpentanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ATCFYQUZTYQTJN-AXDSSHIGSA-N 0.000 description 1
- RNEMLJPSSOJRHX-NSHDSACASA-N (2s)-2-formamido-3-(1h-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](C(=O)O)NC=O)=CNC2=C1 RNEMLJPSSOJRHX-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- CNBUSIJNWNXLQQ-NSHDSACASA-N (2s)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 CNBUSIJNWNXLQQ-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- ONOURAAVVKGJNM-SCZZXKLOSA-N (2s,3r)-2-azaniumyl-3-phenylmethoxybutanoate Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](C)OCC1=CC=CC=C1 ONOURAAVVKGJNM-SCZZXKLOSA-N 0.000 description 1
- CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.C=CC1=CC=CC=C1C=C CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(tritiooxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO[3H])O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C)=C1 IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 0.000 description 1
- CFMZSMGAMPBRBE-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyisoindole-1,3-dione Chemical compound C1=CC=C2C(=O)N(O)C(=O)C2=C1 CFMZSMGAMPBRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NUIURNJTPRWVAP-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dimethylbenzidine Chemical compound C1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=CC=2)=C1 NUIURNJTPRWVAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 1
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NFVNYBJCJGKVQK-ZDUSSCGKSA-N N-[(Tert-butoxy)carbonyl]-L-tryptophan Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 NFVNYBJCJGKVQK-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- VIHYIVKEECZGOU-UHFFFAOYSA-N N-acetylimidazole Chemical compound CC(=O)N1C=CN=C1 VIHYIVKEECZGOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KAFHLONDOVSENM-HNNXBMFYSA-N O-Benzyl-L-tyrosine Chemical compound C1=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC=C1OCC1=CC=CC=C1 KAFHLONDOVSENM-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- CWBHKBKGKCDGDM-UHFFFAOYSA-N bis[(2,2,2-trifluoroacetyl)oxy]boranyl 2,2,2-trifluoroacetate Chemical compound FC(F)(F)C(=O)OB(OC(=O)C(F)(F)F)OC(=O)C(F)(F)F CWBHKBKGKCDGDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 1
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 108010019135 chemotactic peptide CB67-129 Proteins 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007265 chloromethylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 230000026058 directional locomotion Effects 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- ZFKJVJIDPQDDFY-UHFFFAOYSA-N fluorescamine Chemical compound C12=CC=CC=C2C(=O)OC1(C1=O)OC=C1C1=CC=CC=C1 ZFKJVJIDPQDDFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000003324 growth hormone secretagogue Substances 0.000 description 1
- 210000000442 hair follicle cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000012447 hatching Effects 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009863 impact test Methods 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- -1 t-butyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N trisodium borate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]B([O-])[O-] BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6429—Thrombin (3.4.21.5)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21005—Thrombin (3.4.21.5)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/26—Containing cys-cys disulfide bridge between nonadjacent cysteine residues
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Oppfinnelsen vedrører en analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt peptid med mitogen aktivitet for makrofaglignende celler.
Det er kjent at thrombin har en mangfoldighet av virkninger på celler. I tillegg til å størkne fibrinogen og andre enzymatisk aktive faktorer i plasmalevringssystemet,
er det således blitt rapportert at thrombin har mitogen aktivitet i forskjellige fibroblastcellelinjer i vevkultur. Se f.eks. Perdue et al., J. Biol. Chem. 256, 2767-2776 (1981). Dets virkning som en vekststimulator for fibroblastceller er nøye knyttet til dets esterolytiske aktivitet.
Thrombin er også i den senere tid blitt beskrevet å
ha kjemotaktisk aktitivitet i humane perifere blodmonocyter. Bar-Shavit et al., J. Cell Biol. 96, 282-285 (1983).
Forsøk har vært gjort på å identifisere området eller områdene i thrombin som er ansvarlig for dets forskjellige biologiske virkninger. Således konkluderer Bar-Shavit et al., Science 220, 728-730 (1983), med at den kjemotaktiske aktivitet formidles gjennom et bestemt område på thrombinmolekylet som er uavhengig av de stedene som kreves for esterolytisk aktivitet og fibrinogen gjenkjenning. Betydningen av den kjemotaktiske funksjon er at den kan være en viktig fysiologisk stimulator for betennelsesresponser på steder med vevskade. Denne kjemotaktiske funksjon som omfatter den rett-ningsbestemte bevegelsesevne til celler, må skjelnes fra en mitogen funksjon som er en vekstfaktoraktivitet i celler, dvs. en faktor som stimulerer delingen og differensieringen av celler. Hittil har det vært antatt at thrombin også kan fremkalle en mitogen virkning på makrofaglignende celler. Bar-Shavit et al., J. Cell. Biol. 97, 396a, Abstract 1494
(1983) .
Det er nå funnet at visse tetradecapeptidhomologer til den humane thrombin B-kjede er sterke raitogener for makrofaglignende celler.
Ifølge foreliggende oppfinnelse er det således til-veiebrakt en analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt peptid med følgende aminosyresekvens H-Tyr-Pro-Pro-X-Asn-Lys-Asn-Phe-Thr-Glu-Asn-Asp-Leu-Leu-OH (I)
hvor X = Trp eller Tyr,
eller fysiologisk akseptable salter, estere eller amider derav, som er kjennetegnet ved at de enkelte aminosyrer bindes til hverandre ved fastfasesyntese i den viste rekkefølge.
I de peptidstrukturer som her er vist, er aminosyre-bestanddelene betegnet ved hjelp av følgende vanlige for-kortelser :
Peptid I som har aminosyresekvensen:
utgjør restene 367-380 i den humane thrombin B-kjede (eller restene 96-109 i den humane prethrombin 2 sekvens). Den humane prethrombin 2 sekvens er blitt rapportert av Butowski et al., J. Biol. Chem. 252, 4942-4957 (1977). Ved utledningen av den primære struktur i human prethrombin 2 fremstilte
Butkowski et al. visse chymotryptiske peptidfragmenter av cyanbromid-spaltingsproduktet av prethrombin 1, hvorav ett fragment svarer til restene 95-109 i prethrombin 2. Ingen biologisk aktivitet ble imidlertid tilskrevet dette fragment, heller ikke ble 96-109 fragmentet fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse, fremstilt eller foreslått.
Peptid II som har aminosyresekvensen:
er en analog til peptid I hvor tyrosin erstatter tryptofan.
Overraskende oppviste de nye tetradecapeptidene fremstilt ifølge oppfinnelsen sterk mitogen aktivitet for makrofaglignende celler, mens følgende to fragmenter derav var in-aktive:
Disse funn antyder at aminoendedelen i peptidene I eller II er viktige for den mitogene aktivitet til peptidene fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse.
Oppfinnelsen vil bli bedre forstått ut fra den nær-mere beskrivelse nedenunder av foretrukne utførelsesformer sett i sammenheng med de ledsagende tegninger hvor:
Fig. 1 er en modell av human cc-thrombinstruktur.
Fig. 2 er en grafisk fremstilling av thymidin-inkorpo-reringen ved hjelp av J774 murine makrofaglignende celler og de totale celleproteinnivåer etter eksponering av cellene mot et syntetisk mitogent peptid fremstilt ved en utførelsesform ifølge oppfinnelsen.
Modellen av humant a-thrombin i fig. 1 er basert på proteinnomenklaturen for prothrombin, et enkjedet zymogen,
som senere aktiveres og spaltes til en tokjedet struktur ved restene 272 og 321 ved hjelp av faktor Xa. Det således fremstilte aktive enzym fjerner de første 13 restene av A-kjeden
ved rest 285 ved hjelp av en autokatalytisk hendelse, hvilket gir a-thrombin. Strukturen til peptid CB67-129 er vist med "sløyfe B" innskuddssekvensen (dvs. restene 367-375) angitt ved hjelp av krysskravering. Beliggenhetene til aktivt sete His 363 (hexagon) og carbohydrattilknytningssetet (ved Asn 373), viktige strukturelle trekk ved fragmentet, er også angitt. Amidangivelsen på Asx 355 og 371 er usikker, noe som også gjelder for de nøyaktige grensene til innskuddsekvensen "sløyfe B" i thrombin B-kjeden.
De nye mitogene peptider fremstilt ifølge oppfinnelsen lages ved passende tilpasning av konvensjonelle metoder for fastfase-syntese. Peptidkjeden fremstilles således ved en serie koblingsreaksjoner hvor de nødvendige aminosyrer til-føyes den voksende peptidkjede i den ønskede rekkefølge. Bruken av forskjellige N-beskyttende grupper, f.eks. carbon-benzyloxygruppen eller t-butyloxycarbonylgruppen (BOC), forskjellige koblingsreagenser, f.eks. dicyklohexylcarbodiimid eller carbonyldiimidazol, forskjellige aktive estere, f.eks. estere av N-hydroxyfthalimid eller N-hydroxysuccinimid, og forskjellige spaltingsreagenser, f.eks. trifluoreddiksyre, HC1 i dioxan, bor-tris(trifluoracetat) og cyanbromid, er velkjent i klassisk peptidmetodikk.
Peptidene ifølge oppfinnelsen fremstilles fortrinns-vis ved hjelp av den velkjente Merrifield-metode med fast bærer. Se Merrifield, J. Amer. Chem. Soc. 85, 2149-54 (1963) og Science 150, 178-85 (1965). Denne fremgangsmåte gir, selv om den bruker mange av de samme kjemiske reaksjoner og blok-keringsmidler ifølge klassiske peptidsynteser, en voksende peptidkjede forankret i sin carboxylende til en fast bærer, vanligvis kryssbundet polystyren eller styren-divinylbenzen-copolymer. Denne metode forenkler på en bekvem måte antallet fremgangsmåtemanipuleringer ettersom fjerning av overskudd reagenser på hvert trinn utføres ganske enkelt ved å vaske polymeren.
Den generelle reaksjonsrekkefølge for konvensjonell Merrifield peptidsyntese kan illustreres på følgende måte:
Klormethyleringstrinn for å tilveiebringe reaktiv gruppe for binding av peptid, hvor PS = polystyrenrest.
Forestringstrinn. Omsetning med triethylammonium-salt av den første beskyttede aminosyre (R^") under anvendelse av t-BOC beskyttelsesgruppe.
Peptiddannende trinn med dicyklohexylcarbodiimid som koblingsmiddel.
Dette trinn III etterfølger spalting av t-BOC, slik som f.eks. ved behandling med 25% trifluoreddiksyre i methylenklorid og avgivelse av N-terminalt amin med overskudd av triethylamin, noe som muliggjør reaksjon med det aktiverte carboxyl i den neste beskyttede aminosyre (R 2). Et slutt-trinn omfatter spalting av det fullførte peptid fra PS-harpiksen, slik som ved behandling f.eks. med vannfritt HF i anisol.
Ytterligere bakgrunnsinformasjon vedrørende den etab-lerte syntesefremgangsmåte i fast fase kan fåes under henvisning til avhandlingen av Stewart and Young, "Solid Phase Peptide Synthesis", W.H. Freeman & Co., San Francisco, 1969, og over-siktskapittelet av Merrifield i Advances in Enzymology 32,
s. 221-296, F.F. Nold, Ed., Interscience Publishers, New York, 1969 og Erickson and Merrifield, The Proteins, Vol. 2, s. 255 et seq. (ed. Neurath and Hill), Academic Press, New York, 1976.
Vekststimuleringen av makrofaglignende celler kan be-stemmes ved å måle thymidinmottaket til cellene ved varierende konsentrasjoner av de mitogene peptider fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse. Dette ble bestemt for flere makrofaglignende cellelinjer, deriblant J774, P388D1, RAW og PU5. Disse er velkjente murine cellelinjer som er tilgjengelige f.eks. fra American Type Culture Collection, Rockville, Maryland.
Følgende eksempler vil ytterligere illustrere oppfinnelsen.
Eksempel 1
Peptid I, H-Tyr-Pro-Pro-Trp-Asn-Lys-Asn-Phe-Thr-Glu-Asn-Asp-Leu-Leu-OH, som utgjør restene 367-380 i den humane thrombin B-kjede, og som inneholder innskuddsekvensen sløyfe B som vist i figur 1, ble syntetisert ved hjelp av en modi-fikasjon av den konvensjonelle Merrifield-peptidsyntese i fast fase som beskrevet av Wilner et al., Biochemistry _15(6) , 1209-1213 (1976) og 18 (23), 5078-5082 (1979). Det fullstendig beskyttede peptid ble på samme tid avbeskyttet og avspaltet fra sin harpiksbærer ved hjelp av den to-trinns HF-katalyserte SN2-fremgangsmåte ifølge Tam et al., J. Am. Chem. Soc. 105, 6442-6455 (1983). Råpeptidet ble endelig renset ved hjelp av ionebytterkromatografi på en "DEAE-Sephacel"-kolonne ved hjelp av fremgangsmåten beskrevet av Wilner et al., Biochemistry 15 (6), 1209-1213 (1976). Peptidrenheten ble konstatert ved hjelp av "Reversed-phase Clg high performance liquid chromatography" (HPLC) i henhold til fremgangsmåten beskrevet av Fulmer et al., J. Biol. Chem. 254, 7208-7212
(1979), med en enkel topp som resultat. Peptidet ble også funnet å være homogent ved hjelp av tynnsjiktkromatografi (TLC), idet det forflyttet seg som en enkel flekk under anvendelse av to forskjellige oppløsningsmiddelsystemer. Amino-syreanalyse ga molare forhold i overensstemmelse med den ønskede peptidsekvens.
Ved denne peptidsyntese var alle bestanddelene av rea-gensgrad. N OL-tert-butoxycarbonyl (BOC) L-aminosyrer er kommersielt tilgjengelige. BOC-aminosyrer med beskyttede sidekjeder var y-benzylglutaminsyre, B-benzylasparaginsyre, O-benzylthreonin, 2-klorbenzyloxycarbonyl-L-lysin, N-formyl-tryptofan og O-benzyltyrosin. Asparagin ble innført ubeskyttet ved direkte kobling med dicyklohexylcarbodiimid i nærvær av ekvimolart 1-hydroxybenzotriazol.
Renheten til BOC-aminosyrene ble fastsatt ved hjelp
av smeltepunkt (ukorrigert) og tynnsjiktkromatografi. "DEAE-Sephacel" ble erholdt fra produsenten. "Bio-Gel P-2" (200-400 mesh) ble levert av produsenten. Styren-divinylbenzen-kuler, 1 % kryssbundet, 200-400 mesh, klormethylert (1,16 mekv. Cl pr. g), er kommersielt tilgjengelig, og ble ekstrahert med varm (60 °C) dimethylformamid i 18 timer før bruk.
Ved peptidsyntesen ble forestring av den COOH-termi-nale rest til den uoppløselige bærer utført ved nøytrali-sering av resten (dvs. leucin) med tetramethylammoniumhydroxyd og omsetning av bestanddelene Na<->tert-BOC-L-leucin-tetra-methylammoniumsalt med den klormethylerte harpiks i dimethyl-sulfoxyd (DMSO) ved 80°C i 1 time. Fjerningen av beskyttelsesgruppe fra aminogruppen ble utført ved å bruke 25% trifluoreddiksyre i methylenklorid og nøytralisering ble gjennomført ved å bruke 10% triethylamin i methylenklorid. Alle sammenkoblinger av rester ble utført i methylenk-lorid under anvendelse av dicyklohexylcarbodiimid (4 molar overskudd av reagenser), og sammenkoblinger ble overvåket ved å bruke Kaiser-testen (Ninh.ydrin) og avsluttet (om nødvendig) ved å bruke N-acetylimidazol. Det fullførte, fullstendig beskyttede peptid ble spaltet fra sin uoppløselige bærer og beskyttelses-grupper fjernet ved hjelp av den to-trinns HF-katalyserte Sjj2-f remgangsmåte som angitt ovenfor.
Etter vasking av harpiksen med tørr ethylether, ble råpeptidet ekstrahert i 10% eddiksyre og lyofilisert. Peptidet ble på samme tid avsaltet og endelig renset på en "DEAE-Sephacel"-kolonne og eluert med lineære saltgradienter frem-kalt i et "Varigrad"-apparat. Startbufferen var 0,05M natrium-borat og grensebufferen var startbufferen inneholdende 0,5M natriumklorid i tillegg. Kolonnedimensjoner var 1,2 x 40 cm. Eluatfraksjoner ble analysert ved hjelp av absorbans ved
225 nM, og ved hjelp av tynnsjiktkromatografi under anvendelse av glassplater som var forbelagt med "Silica Gel G". Fluor-escamin og klor: o-tolidin-spray ble brukt til peptidvisuali-sering. De to oppløsningsmiddelsystemer som ble brukt for tynnsjiktkromatografi var
(1) 1-butanol:eddiksyre:vann (1:1:1, v/v/v) og
(2) ethylacetat:pyridin:eddiksyre:vann (5:5:1:3, v/v/v/v).
Det ønskede peptid eluerte som den dominerende topp. Denne topp ble deretter avsaltet på en 2,5 x 100 cm "Bio-Gel P-2" kolonne under anvendelse av en 0,15M ammoniumbicarbonat-buffer. HPLC-analyse av dette peptid under anvendelse av en Ci ,0o-kolonne med omvendt fase viste at peptidet var homogent, Dette peptid ga også de forventede molare forhold etter amino-syreanalyse.
Eksempel 2
Peptid II, H-Tyr-Pro-Pro-Tyr-Asn-Lys-Asn-Phe-Thr-Glu-Asn-Asp-Leu-Leu-OH, ble fremstilt i henhold til fremgangsmåten ifølge eksempel 1 bortsett fra at en ekvimolar mengde BOC-tyrosin ble brukt i stedet for BOC-tryptofan i fastfase-syntesen.
Virkningsforsøk
For å bestemme de mitogene virkninger av det rensede tetradecapeptid I ifølge eksempel 1 på makrofaglignende celler, ble følgende tester utført.
3[ H]- TdR- inkorporering. Forskjellige cellelinjer ble platet ut i Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) inneholdende 10% serum fra kalvefoster (FCS) i 95 % C02 fuktet atmosfære ved 37°C ved en starttetthet på 5 x IO<5> pr. brønn i 24-brønners plastplater for engangsbruk. Stans av DNA-syntese (dvs. Gq/G-l ) ble oppnådd ved å inkubere cellene i 48 timer i serumfritt DMEM inneholdende 0,1 % bovint serumalbumin (BSA). Cellene ble deretter eksponert mot peptidet eller forskjellige thrombinformer, eller mot FSC i 48 timer. Økt thymidininkor-porering ble fastslått etter en 2-timers puls med N-methyl3[H] - TdR (1 pCi/ml). Cellene ble vasket 3 ganger i PBS (fosfat-bufret saltoppløsning, pH 7,4) ved 4, utfelt med 10 % triklor-eddiksyre (30 minutter ved 4) og det uoppløselige materiale ekstrahert to ganger med ETOH:ET20 (3:1 v/v). Bunnfallet ble oppløseliggjort iNaOH og aliquoter tatt ut for proteinbestem-melse under anvendelse av en analyse med fargestoffbinding og væskescintillasj onsspektrometri.
De forskjellige cellelinjer som ble anvendt ved disse testene, var de murine makrofaglignende cellelinjer J774, P388D1, RAW og PU5. De forskjellige thrombinformer som ble brukt i disse testene, var blodplateavledet vekstfaktor (PDGF), epidermal vekstfaktor (EGF), fibroblast-vekstfaktor (FGF) og nerve-vekstfaktor (NGF). For bakgrunnsinformasjon vedrørende disse kjente polypeptid-vekstfaktorer vises det f.eks. til den nyere oversiktsartikkel av Kris et al., Biotechnology, februar 1985, s. 135-140, og den omfattende oversikt i Hormonal Proteins and Peptides, Ed. av Choh Hao Li, Vol. 12, "Growth Factors", Academic Press, 1984. EGF, NGF og FGF er kommersielt tilgjengelig. Ved en representativ test 24 timer etter eksponering av de vekst-stansede celler mot optimale konsentrasjoner av peptidet (dvs. 10<8>M) økte celleantallet omtrent to ganger fra en kontrollverdi på 1,2 x 2 x 10<5 >celler/kulturbrønn. Til sammenligning frembragte de kjente vekstfremmende midler PDGF, EGF, NGF og FGF ikke formering av disse cellene ved konsentrasjonsområder opp til 500 ng/ml. Resultatene er gjengitt i figur 2 og i tabell I nedenunder. I figur 2 var utgangsinkorporeringen av tritiert thymidin (<3>[H]-TdR) i hvilende J774-celler 5000 cpm ± 420 s.e.m. (standard feil for gjennomsnittet) pr. brønn. Resultatene er uttrykt som gjennomsnittet av tredoble bestemmelser.
a. Disse preparater stimulerte til mer enn 4 ganger økning i <3>[H]-TdR-inkorporering i hvilende HF-celler ved den viste konsentrasjon. Utgangsinkorporering i ustimulerte celler var 280 cpm ± 21 s.e.m. pr. brønn. b. Konsentrasjon som ga optimal spesifikk <3>[H]-TdR-inkorporering er vist. Der hvor stimulering ikke var signifikant større enn hos kontroll (dvs. mer enn 1,5 ganger) er den høyeste testede konsentrasjon angitt. c. <3>[H]-TdR-inkorporering ble bestemt som angitt ovenfor.
Hver verdi representerer den gjennomsnittlige prosentvise Økning ± s.e.m. fra tredoble kulturer i en representativ test. Det ble oppnådd sammenlignbare data i minst 3 uav-hengige tester. Understrekede verdier angir signifikant stimulering.
Claims (3)
1. Analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt peptid med følgende aminosyresekvens H-Tyr-Pro-Pro-X-Asn-Lys-Asn-Phe-Thr-Glu-Asn-Asp-Leu-Leu-OH (I)
hvor X = Trp eller Tyr,
eller fysiologisk akseptable salter, estere eller amider derav,
karakterisert ved at de enkelte aminosyrer bindes til hverandre ved fastfasesyntese i den viste rekke-følge .
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1 for fremstilling av et peptid med formel (I) hvor X er Trp, karakterisert ved at de enkelte aminosyrer bindes til hverandre ved fastfasesyntese i den viste rekke-følge.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1 for fremstilling av et peptid med formel (I) hvor X er Tyr, karakterisert ved at de enkelte aminosyrer bindes til hverandre ved fastfasesyntese i den viste rekke-følge.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/787,411 US4704451A (en) | 1985-10-15 | 1985-10-15 | Mitogenic peptides |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO864088D0 NO864088D0 (no) | 1986-10-14 |
| NO864088L NO864088L (no) | 1987-04-21 |
| NO169127B true NO169127B (no) | 1992-02-03 |
| NO169127C NO169127C (no) | 1992-05-13 |
Family
ID=25141385
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO864088A NO169127C (no) | 1985-10-15 | 1986-10-14 | Analogifremgangsmaate for fremstilling av et terapeutisk aktivt pepti |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4704451A (no) |
| EP (1) | EP0220157B1 (no) |
| JP (1) | JPH0689031B2 (no) |
| AT (1) | ATE69240T1 (no) |
| AU (1) | AU595249B2 (no) |
| CA (1) | CA1299814C (no) |
| DE (1) | DE3682368D1 (no) |
| DK (1) | DK169346B1 (no) |
| FI (1) | FI85379C (no) |
| IE (1) | IE59403B1 (no) |
| IL (1) | IL80300A (no) |
| NO (1) | NO169127C (no) |
| ZA (1) | ZA867783B (no) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH07507995A (ja) * | 1992-03-02 | 1995-09-07 | バイオジェン，インコーポレイテッド | トロンビンレセプターアンタゴニスト |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4376071A (en) * | 1980-08-21 | 1983-03-08 | Research Corporation | Mitogenic spinal cord growth factor |
| US4517338A (en) * | 1983-06-20 | 1985-05-14 | Chiron Corporation | Multiple reactor system and method for polynucleotide synthesis |
| US4515920A (en) * | 1984-04-30 | 1985-05-07 | The Rockefeller University | Synthesis of peptides and proteins |
-
1985
- 1985-10-15 US US06/787,411 patent/US4704451A/en not_active Expired - Lifetime
-
1986
- 1986-10-14 DE DE8686870149T patent/DE3682368D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-10-14 FI FI864146A patent/FI85379C/fi not_active IP Right Cessation
- 1986-10-14 ZA ZA867783A patent/ZA867783B/xx unknown
- 1986-10-14 EP EP86870149A patent/EP0220157B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-10-14 IL IL80300A patent/IL80300A/xx not_active IP Right Cessation
- 1986-10-14 CA CA000520437A patent/CA1299814C/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-10-14 IE IE270586A patent/IE59403B1/en not_active IP Right Cessation
- 1986-10-14 AT AT86870149T patent/ATE69240T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-10-14 DK DK489086A patent/DK169346B1/da not_active IP Right Cessation
- 1986-10-14 AU AU63878/86A patent/AU595249B2/en not_active Ceased
- 1986-10-14 NO NO864088A patent/NO169127C/no not_active IP Right Cessation
- 1986-10-14 JP JP61242216A patent/JPH0689031B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IL80300A0 (en) | 1987-01-30 |
| IE59403B1 (en) | 1994-02-23 |
| AU595249B2 (en) | 1990-03-29 |
| CA1299814C (en) | 1992-04-28 |
| FI85379B (fi) | 1991-12-31 |
| JPH0689031B2 (ja) | 1994-11-09 |
| NO864088D0 (no) | 1986-10-14 |
| AU6387886A (en) | 1987-04-16 |
| DK489086A (da) | 1987-04-16 |
| US4704451A (en) | 1987-11-03 |
| ATE69240T1 (de) | 1991-11-15 |
| ZA867783B (en) | 1987-08-26 |
| DK169346B1 (da) | 1994-10-10 |
| EP0220157A2 (en) | 1987-04-29 |
| EP0220157A3 (en) | 1989-02-15 |
| NO169127C (no) | 1992-05-13 |
| FI85379C (fi) | 1992-04-10 |
| DK489086D0 (da) | 1986-10-14 |
| EP0220157B1 (en) | 1991-11-06 |
| FI864146A (fi) | 1987-04-16 |
| DE3682368D1 (de) | 1991-12-12 |
| NO864088L (no) | 1987-04-21 |
| IE862705L (en) | 1987-04-15 |
| JPS62174098A (ja) | 1987-07-30 |
| IL80300A (en) | 1991-07-18 |
| FI864146A0 (fi) | 1986-10-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kisiel et al. | Anticoagulant properties of bovine plasma protein C following activation by thrombin | |
| de La Salle et al. | Active γ-carboxylated human factor IX expressed using recombinant DNA techniques | |
| EP0495049B1 (en) | Process for the enzymatic preparation of basic fibroblast growth factor | |
| WO1988003151A2 (en) | Thrombin derived polypeptides; compositions and methods for use | |
| US4466919A (en) | Peptide substrates for mammalian collagenase | |
| Bar-Shavit et al. | Hormone-like activity of human thrombin | |
| Brezniak et al. | Human. alpha.-to. zeta.-thrombin cleavage occurs with neutrophil cathepsin G or chymotrypsin while fibrinogen clotting activity is retained | |
| AU603552B2 (en) | Method of enhancing t-PA and SCU-PA production | |
| US4507389A (en) | Determination of collagenase by reacting with peptide substrates | |
| USRE44022E1 (en) | Cyclic peptides, method for preparing and use as angiogenesis inhibitors or activators | |
| NO844123L (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av nonapeptider og dodekopeptider | |
| NO169127B (no) | Analogifremgangsmaate for fremstilling av et terapeutisk aktivt pepti | |
| PT96224A (pt) | Producao de factor de crescimento derivado de plaquetas biologicamente activas a partir de sistema de celulas hospedeiras de elevada expressao | |
| US4443367A (en) | Peptide and peptolide substrates for mammalian collagenase | |
| US4923818A (en) | DNA clone of human type IV collagenase | |
| US4425428A (en) | Novel peptide and peptolide substrates for mammalian collagenase | |
| US4704380A (en) | Method of stimulating the growth of macrophage-like cells utilizing mitogenic peptides | |
| US4861865A (en) | Novel antithrombin peptide | |
| JPH03501685A (ja) | ウロキナーゼ誘導体の製造方法 | |
| Yaron et al. | Synthesis and immunological properties of the oligolysyl-Niε-dinitrophenyllysine and oligolysylalanylalanylalanyl-Niε-dinitrophenyllysine peptide series | |
| EP0149593B1 (en) | Novel thiopeptolide substrates for vertebrate collagenase | |
| Yamauchi et al. | Expression of rat renin in mammalian cells and its purification | |
| US6630572B1 (en) | Thrombin derived polypeptides: compositions and methods for use | |
| AU680696B2 (en) | Novel derivatives of peptides therapeutically active in the cascade sequence for blood coagulation, process for their preparation and pharmaceutical compositions containing same | |
| NO174111B (no) | Fremgangsmaate for rensing av vevsplasminogenaktivatorer (t-pa) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |
Free format text: LAPSED IN APRIL 2001 |