NO166716B - Peptidderivater og anvendelse derav som substrater for kvantitativ bestemmelse av enzymer. - Google Patents
Peptidderivater og anvendelse derav som substrater for kvantitativ bestemmelse av enzymer. Download PDFInfo
- Publication number
- NO166716B NO166716B NO842218A NO842218A NO166716B NO 166716 B NO166716 B NO 166716B NO 842218 A NO842218 A NO 842218A NO 842218 A NO842218 A NO 842218A NO 166716 B NO166716 B NO 166716B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- group
- arg
- acoh
- cbo
- lys
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 23
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 title description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 165
- -1 p-nitrophenylamino- Chemical class 0.000 claims description 20
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 13
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 9
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 8
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 8
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 5
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 4
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 3
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 3
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 claims description 3
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 3
- 125000003143 4-hydroxybenzyl group Chemical group [H]C([*])([H])C1=C([H])C([H])=C(O[H])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000001980 alanyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004453 alkoxycarbonyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004390 alkyl sulfonyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 claims description 2
- 125000001589 carboacyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 2
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims 1
- 125000004210 cyclohexylmethyl group Chemical group [H]C([H])(*)C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims 1
- 238000002848 electrochemical method Methods 0.000 claims 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 claims 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 105
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 28
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 27
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 27
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 27
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 27
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 26
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 25
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 25
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 24
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 16
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 15
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- RUFPHBVGCFYCNW-UHFFFAOYSA-N 1-naphthylamine Chemical compound C1=CC=C2C(N)=CC=CC2=C1 RUFPHBVGCFYCNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 12
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 12
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 12
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 9
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- DEKPYXUDJRABNK-UHFFFAOYSA-N dimethyl 5-aminobenzene-1,3-dicarboxylate Chemical compound COC(=O)C1=CC(N)=CC(C(=O)OC)=C1 DEKPYXUDJRABNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 7
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 7
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- GNOIPBMMFNIUFM-UHFFFAOYSA-N hexamethylphosphoric triamide Chemical compound CN(C)P(=O)(N(C)C)N(C)C GNOIPBMMFNIUFM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 6
- JBIJLHTVPXGSAM-UHFFFAOYSA-N 2-naphthylamine Chemical compound C1=CC=CC2=CC(N)=CC=C21 JBIJLHTVPXGSAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- SFKZPTYRENGBTJ-UHFFFAOYSA-N 4-methoxynaphthalen-2-amine Chemical compound C1=CC=C2C(OC)=CC(N)=CC2=C1 SFKZPTYRENGBTJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 4-nitroaniline Chemical compound NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 5
- 159000000021 acetate salts Chemical class 0.000 description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 5
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 5
- GLNDAGDHSLMOKX-UHFFFAOYSA-N coumarin 120 Chemical compound C1=C(N)C=CC2=C1OC(=O)C=C2C GLNDAGDHSLMOKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 5
- 229940122601 Esterase inhibitor Drugs 0.000 description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 4
- 239000002329 esterase inhibitor Substances 0.000 description 4
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 4
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 3
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 3
- FANCTJAFZSYTIS-IQUVVAJASA-N (1r,3s,5z)-5-[(2e)-2-[(1r,3as,7ar)-7a-methyl-1-[(2r)-4-(phenylsulfonimidoyl)butan-2-yl]-2,3,3a,5,6,7-hexahydro-1h-inden-4-ylidene]ethylidene]-4-methylidenecyclohexane-1,3-diol Chemical compound C([C@@H](C)[C@@H]1[C@]2(CCCC(/[C@@H]2CC1)=C\C=C\1C([C@@H](O)C[C@H](O)C/1)=C)C)CS(=N)(=O)C1=CC=CC=C1 FANCTJAFZSYTIS-IQUVVAJASA-N 0.000 description 2
- SHAHPWSYJFYMRX-GDLCADMTSA-N (2S)-2-(4-{[(1R,2S)-2-hydroxycyclopentyl]methyl}phenyl)propanoic acid Chemical compound C1=CC([C@@H](C(O)=O)C)=CC=C1C[C@@H]1[C@@H](O)CCC1 SHAHPWSYJFYMRX-GDLCADMTSA-N 0.000 description 2
- AZZRYXNWFZSSTO-NSHDSACASA-N (2S)-2-[(2-aminoacetyl)amino]-5-(diaminomethylideneamino)-N-(4-nitrophenyl)pentanamide Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 AZZRYXNWFZSSTO-NSHDSACASA-N 0.000 description 2
- KAFZOLYKKCWUBI-HPMAGDRPSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-1-[(2s)-3-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-(3-cyclohexylpropanoylamino)-4-methylpentanoyl]amino]-5-methylhexanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]butanediamide Chemical compound N([C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(C)C)C(=O)N[C@@H](CN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(N)=O)C(=O)CCC1CCCCC1 KAFZOLYKKCWUBI-HPMAGDRPSA-N 0.000 description 2
- QKLXBIHSGMPUQS-FGZHOGPDSA-M (3r,5r)-7-[4-(4-fluorophenyl)-2,5-dimethyl-1-phenylpyrrol-3-yl]-3,5-dihydroxyheptanoate Chemical compound CC1=C(CC[C@@H](O)C[C@@H](O)CC([O-])=O)C(C=2C=CC(F)=CC=2)=C(C)N1C1=CC=CC=C1 QKLXBIHSGMPUQS-FGZHOGPDSA-M 0.000 description 2
- FOLCUFKJHSQMEL-BIXPGCQOSA-N (4-butylcyclohexyl) N-[(2S)-4-methyl-1-oxo-1-[[(2S)-1-oxo-3-[(3S)-2-oxopyrrolidin-3-yl]propan-2-yl]amino]pentan-2-yl]carbamate Chemical compound CCCCC1CCC(CC1)OC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2CCNC2=O)C=O FOLCUFKJHSQMEL-BIXPGCQOSA-N 0.000 description 2
- PNHBRYIAJCYNDA-VQCQRNETSA-N (4r)-6-[2-[2-ethyl-4-(4-fluorophenyl)-6-phenylpyridin-3-yl]ethyl]-4-hydroxyoxan-2-one Chemical compound C([C@H](O)C1)C(=O)OC1CCC=1C(CC)=NC(C=2C=CC=CC=2)=CC=1C1=CC=C(F)C=C1 PNHBRYIAJCYNDA-VQCQRNETSA-N 0.000 description 2
- QOLHWXNSCZGWHK-BWBORTOCSA-N (6r,7r)-1-[(4s,5r)-4-acetyloxy-5-methyl-3-methylidene-6-phenylhexyl]-4,7-dihydroxy-6-(11-phenoxyundecylcarbamoyloxy)-2,8-dioxabicyclo[3.2.1]octane-3,4,5-tricarboxylic acid Chemical compound C([C@@H](C)[C@H](OC(C)=O)C(=C)CCC12[C@@H]([C@@H](OC(=O)NCCCCCCCCCCCOC=3C=CC=CC=3)C(O1)(C(O)=O)C(O)(C(O2)C(O)=O)C(O)=O)O)C1=CC=CC=C1 QOLHWXNSCZGWHK-BWBORTOCSA-N 0.000 description 2
- UXKLQDCALAWFIU-VKNDCNMPSA-N (6r,7r)-1-[(4s,5r)-4-acetyloxy-5-methyl-3-methylidene-6-phenylhexyl]-4,7-dihydroxy-6-tetradecoxy-2,8-dioxabicyclo[3.2.1]octane-3,4,5-tricarboxylic acid Chemical compound C([C@@H](C)[C@H](OC(C)=O)C(=C)CCC12[C@H](O)[C@H](C(O2)(C(O)=O)C(O)(C(O1)C(O)=O)C(O)=O)OCCCCCCCCCCCCCC)C1=CC=CC=C1 UXKLQDCALAWFIU-VKNDCNMPSA-N 0.000 description 2
- VGNCBRNRHXEODV-XXVHXNRLSA-N (6r,7r)-1-[(4s,5r)-4-acetyloxy-5-methyl-3-methylidene-6-phenylhexyl]-6-dodecoxy-4,7-dihydroxy-2,8-dioxabicyclo[3.2.1]octane-3,4,5-tricarboxylic acid Chemical compound C([C@@H](C)[C@H](OC(C)=O)C(=C)CCC12[C@H](O)[C@H](C(O2)(C(O)=O)C(O)(C(O1)C(O)=O)C(O)=O)OCCCCCCCCCCCC)C1=CC=CC=C1 VGNCBRNRHXEODV-XXVHXNRLSA-N 0.000 description 2
- PSWDQTMAUUQILQ-UHFFFAOYSA-N 2-[(6-methoxy-4-methylquinazolin-2-yl)amino]-5,6-dimethyl-1h-pyrimidin-4-one Chemical compound N1=C(C)C2=CC(OC)=CC=C2N=C1NC1=NC(=O)C(C)=C(C)N1 PSWDQTMAUUQILQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JGMXNNSYEFOBHQ-OWOJBTEDSA-N 2-[(e)-4-morpholin-4-ylbut-2-enyl]-1,1-dioxothieno[3,2-e]thiazine-6-sulfonamide Chemical compound O=S1(=O)C=2SC(S(=O)(=O)N)=CC=2C=CN1C\C=C\CN1CCOCC1 JGMXNNSYEFOBHQ-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- OVDGUTHABMXVMI-UHFFFAOYSA-N 3-nitro-4-(propylamino)benzoic acid Chemical compound CCCNC1=CC=C(C(O)=O)C=C1[N+]([O-])=O OVDGUTHABMXVMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HIHOEGPXVVKJPP-JTQLQIEISA-N 5-fluoro-2-[[(1s)-1-(5-fluoropyridin-2-yl)ethyl]amino]-6-[(5-methyl-1h-pyrazol-3-yl)amino]pyridine-3-carbonitrile Chemical compound N([C@@H](C)C=1N=CC(F)=CC=1)C(C(=CC=1F)C#N)=NC=1NC=1C=C(C)NN=1 HIHOEGPXVVKJPP-JTQLQIEISA-N 0.000 description 2
- CYSWUSAYJNCAKA-FYJFLYSWSA-N ClC1=C(C=CC=2N=C(SC=21)OCC)OC1=CC=C(C=N1)/C=C/[C@H](C)NC(C)=O Chemical compound ClC1=C(C=CC=2N=C(SC=21)OCC)OC1=CC=C(C=N1)/C=C/[C@H](C)NC(C)=O CYSWUSAYJNCAKA-FYJFLYSWSA-N 0.000 description 2
- 229940126559 Compound 4e Drugs 0.000 description 2
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 2
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TZYWCYJVHRLUCT-VABKMULXSA-N N-benzyloxycarbonyl-L-leucyl-L-leucyl-L-leucinal Chemical compound CC(C)C[C@@H](C=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 TZYWCYJVHRLUCT-VABKMULXSA-N 0.000 description 2
- TZCCKCLHNUSAMQ-DUGSHLAESA-N NC(=O)C[C@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)NC(=O)[C@H](Cc2ccc(F)cc2)NC(=O)[C@H](Cc3c[nH]c4ccccc34)NC(=O)Cc5cccs5)C(=O)N Chemical compound NC(=O)C[C@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CCCNC(=N)N)NC(=O)[C@H](Cc2ccc(F)cc2)NC(=O)[C@H](Cc3c[nH]c4ccccc34)NC(=O)Cc5cccs5)C(=O)N TZCCKCLHNUSAMQ-DUGSHLAESA-N 0.000 description 2
- 229940125907 SJ995973 Drugs 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 2
- SRVFFFJZQVENJC-IHRRRGAJSA-N aloxistatin Chemical compound CCOC(=O)[C@H]1O[C@@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCCC(C)C SRVFFFJZQVENJC-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- AGEZXYOZHKGVCM-UHFFFAOYSA-N benzyl bromide Chemical compound BrCC1=CC=CC=C1 AGEZXYOZHKGVCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OSVHLUXLWQLPIY-KBAYOESNSA-N butyl 2-[(6aR,9R,10aR)-1-hydroxy-9-(hydroxymethyl)-6,6-dimethyl-6a,7,8,9,10,10a-hexahydrobenzo[c]chromen-3-yl]-2-methylpropanoate Chemical compound C(CCC)OC(C(C)(C)C1=CC(=C2[C@H]3[C@H](C(OC2=C1)(C)C)CC[C@H](C3)CO)O)=O OSVHLUXLWQLPIY-KBAYOESNSA-N 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 2
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 2
- 229940125796 compound 3d Drugs 0.000 description 2
- 229940125872 compound 4d Drugs 0.000 description 2
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- TWYRZWVFWYSNBU-JTQLQIEISA-N l-arg p-nitroanilide Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 TWYRZWVFWYSNBU-JTQLQIEISA-N 0.000 description 2
- QAPTWHXHEYAIKG-RCOXNQKVSA-N n-[(1r,2s,5r)-5-(tert-butylamino)-2-[(3s)-2-oxo-3-[[6-(trifluoromethyl)quinazolin-4-yl]amino]pyrrolidin-1-yl]cyclohexyl]acetamide Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1C[C@H](NC(C)(C)C)CC[C@@H]1N1C(=O)[C@@H](NC=2C3=CC(=CC=C3N=CN=2)C(F)(F)F)CC1 QAPTWHXHEYAIKG-RCOXNQKVSA-N 0.000 description 2
- XZMHJYWMCRQSSI-UHFFFAOYSA-N n-[5-[2-(3-acetylanilino)-1,3-thiazol-4-yl]-4-methyl-1,3-thiazol-2-yl]benzamide Chemical compound CC(=O)C1=CC=CC(NC=2SC=C(N=2)C2=C(N=C(NC(=O)C=3C=CC=CC=3)S2)C)=C1 XZMHJYWMCRQSSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-N phthalic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C(O)=O XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RWWYLEGWBNMMLJ-YSOARWBDSA-N remdesivir Chemical compound NC1=NC=NN2C1=CC=C2[C@]1([C@@H]([C@@H]([C@H](O1)CO[P@](=O)(OC1=CC=CC=C1)N[C@H](C(=O)OCC(CC)CC)C)O)O)C#N RWWYLEGWBNMMLJ-YSOARWBDSA-N 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 2
- WAMWSIDTKSNDCU-SSDOTTSWSA-N (2r)-2-azaniumyl-2-cyclohexylacetate Chemical compound OC(=O)[C@H](N)C1CCCCC1 WAMWSIDTKSNDCU-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- HUGAWXCWXHSPBW-RRQHEKLDSA-N (2s)-2-amino-3-(4-hydroxycyclohexyl)propanoic acid Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CC1CCC(O)CC1 HUGAWXCWXHSPBW-RRQHEKLDSA-N 0.000 description 1
- WAMWSIDTKSNDCU-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-azaniumyl-2-cyclohexylacetate Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)C1CCCCC1 WAMWSIDTKSNDCU-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- PHDIJLFSKNMCMI-ITGJKDDRSA-N (3R,4S,5R,6R)-6-(hydroxymethyl)-4-(8-quinolin-6-yloxyoctoxy)oxane-2,3,5-triol Chemical compound OC[C@@H]1[C@H]([C@@H]([C@H](C(O1)O)O)OCCCCCCCCOC=1C=C2C=CC=NC2=CC=1)O PHDIJLFSKNMCMI-ITGJKDDRSA-N 0.000 description 1
- QXQAPNSHUJORMC-UHFFFAOYSA-N 1-chloro-4-propylbenzene Chemical compound CCCC1=CC=C(Cl)C=C1 QXQAPNSHUJORMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GFNKTLQTQSALEJ-UHFFFAOYSA-N 1-isocyanato-4-nitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(N=C=O)C=C1 GFNKTLQTQSALEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NOGFHTGYPKWWRX-UHFFFAOYSA-N 2,2,6,6-tetramethyloxan-4-one Chemical compound CC1(C)CC(=O)CC(C)(C)O1 NOGFHTGYPKWWRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IKCLCGXPQILATA-UHFFFAOYSA-N 2-chlorobenzoic acid Chemical group OC(=O)C1=CC=CC=C1Cl IKCLCGXPQILATA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006282 2-chlorobenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(Cl)=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropyl carbonochloridate Chemical compound CC(C)COC(Cl)=O YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004080 3-carboxypropanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C(O[H])=O 0.000 description 1
- 125000003852 3-chlorobenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C(Cl)=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006283 4-chlorobenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1Cl)C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000004217 4-methoxybenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1OC([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000006181 4-methyl benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- PXRKCOCTEMYUEG-UHFFFAOYSA-N 5-aminoisoindole-1,3-dione Chemical compound NC1=CC=C2C(=O)NC(=O)C2=C1 PXRKCOCTEMYUEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102000016917 Complement C1 Human genes 0.000 description 1
- 108010028774 Complement C1 Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182832 D-phenylalanine Natural products 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- 125000001711 D-phenylalanine group Chemical group [H]N([H])[C@@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-Phenylalanine Natural products OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZGUNAGUHMKGQNY-ZETCQYMHSA-N L-alpha-phenylglycine zwitterion Chemical group OC(=O)[C@@H](N)C1=CC=CC=C1 ZGUNAGUHMKGQNY-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- 125000001176 L-lysyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(N([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000002435 L-phenylalanyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine Chemical compound CN(C)CCN(C)C KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100326804 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) arg-2 gene Proteins 0.000 description 1
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N Salicylic acid Natural products OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric Acid Chemical compound [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 238000005904 alkaline hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 125000005605 benzo group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000051 benzyloxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 125000004106 butoxy group Chemical group [*]OC([H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- AOGYCOYQMAVAFD-UHFFFAOYSA-N chlorocarbonic acid Chemical compound OC(Cl)=O AOGYCOYQMAVAFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000001301 ethoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 230000004992 fission Effects 0.000 description 1
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 125000002510 isobutoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])O* 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- GVOISEJVFFIGQE-YCZSINBZSA-N n-[(1r,2s,5r)-5-[methyl(propan-2-yl)amino]-2-[(3s)-2-oxo-3-[[6-(trifluoromethyl)quinazolin-4-yl]amino]pyrrolidin-1-yl]cyclohexyl]acetamide Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1C[C@H](N(C)C(C)C)CC[C@@H]1N1C(=O)[C@@H](NC=2C3=CC(=CC=C3N=CN=2)C(F)(F)F)CC1 GVOISEJVFFIGQE-YCZSINBZSA-N 0.000 description 1
- 238000006396 nitration reaction Methods 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000005588 protonation Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007070 tosylation reaction Methods 0.000 description 1
- ILWRPSCZWQJDMK-UHFFFAOYSA-N triethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN(CC)CC ILWRPSCZWQJDMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ORQXBVXKBGUSBA-QMMMGPOBSA-N β-cyclohexyl-alanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1CCCCC1 ORQXBVXKBGUSBA-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0815—Tripeptides with the first amino acid being basic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/10—Tetrapeptides
- C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/1008—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/10—Tetrapeptides
- C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/1016—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/44—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/802—Chromogenic or luminescent peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/28—Bound to a nonpeptide drug, nonpeptide label, nonpeptide carrier, or a nonpeptide resin
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Menneskeblod inneholder et virksomt stoff som er kjent under
navnet C-^-esteraseproenzym, som aktiveres under innvirkning av forbindelsen til et antistoff med et antigen til det aktive enzym C-^-esterase. Dette enzym aktiverer kaskadeaktig ytter-
ligere proenzymer til aktive enzymer i komplementsystemet.
Disse aktiverte enzymer lyserer på sin side cellemembraner hos
bakterier eller døde erytrocytter og spiller således en viktig rolle i det immunologiske forsvar. Plasmaet inneholder også
en viktig inhibitor, som hemmer C-^-esterasen og har navnet C-^-esteraseinhibitor. Ved inflammatoriske prosesser aktiveres
C-^-esterase, hvorunder komplementsystemet aktiveres hurtigere
eller langsommere avhengig av C^-esteraseinhibitornivået i blodet. Det er ønskelig fra et klinisk synspunkt å i slike tilfeller bestemme både C^-esterasenivået og C^-esterase-
inhibitornivået i blodet. Disse bestemmelser utføres for tiden med omstendelig og lite nøyaktig immunologiske og titrimetriske metoder (se W.J. Canady et al., Immunochemistry 1976, Bd.
13, 229-233, og D. Ogston et al., Thrombosis Research,
Bd. 9, 217-222 [1976]).
Man har nå funnet at bestemmelsen av C^-esterase kan utføres
vesentlig raskere og nøyaktigere når man som substrater anvender visse enkle peptidderivater som er gjenstand for foreliggende oppfinnelse.
Foreliggende oppfinnelse vedrører peptidderivater med formelen:
i hvilket
R<1> er en p-nitrofenylamino-, 1- eller 2-naftylamino, 4-metoksy-2-naftylamino-, 4-metyl-7-cumarylamino- eller 1,3-di(metoksykarbonyl)-5-fenylamino-gruppe,
a) en retfckjedefc eller forgrenet alkanoylgruppe med 2 til
6 karbonia-tcnser,
b) en W'-ka'rbofcs>yi- > w -metoksykarbonyl- eller uj-etoksykarbonyl-alkanoylgru.ppe med 2 til 4 karbonatomer i alkanoyl delen
c) en rettkjedtet eller forgrenet alkoksykarbonylgruppe med
1 til 4 karbonatomer i alkoksydelen ,
d) en alkylsulfonylgruppe med 1 til 2 karbonatomer i alkyldelen eller en fenyl- eller p-toluyl-sulfonylgruppe,
e) en benzyloksykarbonylgruppe,
benzyloksykarbonylgruppe,
R <3> er en benzylgruppe som eventuelt er substituert x • kjernen, X er en glycyl- eller alanylgruppe og
Y er en enkeitbinding eller en gruppe med formelen:
i hvilken R 4'er en benzyl-, fenyl-, cykloheksyl-, cyklo-heksylmetyl-,. 4-hydroksybenzyl-, 4-hydroksycykloheksylmetyl-gruppe og m er tallet 0 og aminosyren som er angitt, med Y har L- eller D-konfigurasjon, eller R 4 er'hydrogen, og m er tallet 0, 1 eller 2,,
og deres salter med mineralsyrer eller organiske syrer.
R^ kan f .eks., være en benzyl-, 4-metyl'benzyl-, 4-metoksy-benzy.- eller 2-, 3- eller 4-klorbenzyigr.uppe.
Spesielt høye- ømfintligheter overf.or. C'T-esterase har de peptidderivater med de-m> ovenfor angitte formel i hvilke R 2er en aLLkaiafij^lgjruippe medl 2 til 6 karbonatomer eller en alkoksy-karbo^ny/lgjirmppe; miedi 1 til 4 karbonatomer, Y er en enkelt-3 1
bimdimg og R er en benzylgruppe og R og X har den ovenfor angitte betydning.
Som eksempler på peptidderivater med den ovenfor angitte generelle formel kan de følgende forbindelser nevnes: BOC-Lys(£-Cbo)-Gly-Arg-pNA.AcOH, 2AcOH.H-Lys(£-Cbo)-Gly-Arg-pNA, Ac-Lys(E-Cbo)-Gly-Arg-pNA.AcOH, CH^OCO-Lys(fc-Cbo)-Gly-Arg-pNA.AcOH, C^OCO-Lys(SCbo)-Gly-Arg-pNA. AcOH, iso-ButOCO-Lys(£-Cbo)-Gly-Arg-pNA.AcOH, CH^CHgCO-Lys(£-Cbo)-Gly-Arg-pNA.AcOH, CH?(CHg)2C0-Lys(t-Cbo)-Gly-Arg-pNA.AcOH, CH^CHgOCO-CHg-CO-Lys(£-Cbo)-Gly-Arg-pNA.AcOH, BOC-Lys(£-Cbo)-Ala-Arg-pNA.AcOH, H-Lys(£-Cbo)-Ala-Arg-pNA.2CF5COOH, Ac-Lys(e-Cbo)-Ala-Arg-pNA.AcOH, CH5OCO-Lys(£ -Cbo)-Ala-Arg-pNA.AcOH, B0C-Cly-Lys(6-Cbo)-Gly-Arg-pNA.AcOH, 2CF5COOH.H-Gly-Lys(£-Cbo)-Gly-Arg-pNA, CH^O-CO-Gly-Lys(£-Cbo)-Gly-Arg-pNA.AcOH und CH^—CHg-CO-Gly-Lys(£-Cbo)-Gly-Arg-pNA.AcOH.
Peptidderivatene ifølge foreliggende oppfinnelse kan frem-stilles etter de metoder som vanlig anvendes i peptid-kjemien, f.eks. etter de i det følgende beskrevne metoder:
1) Den kromogene gruppe R<1> henges på karboksygruppen til
det C-terminale arginin, hvorunder dens a-aminogruppe beskyttes med en beskyttelsesgruppe, f.eks. en karbobenzoksy- eller tert.-butoksykarbonylgruppe, og S-guanidylgruppen til arginin beskyttes ved protonisering, f.eks. med HC1, nitrering eller tosylering. Den C-terminale gruppe R^- tjener under den trinnvise oppbygning av peptidkjeden likeledes
som beskyttelsesgruppe. De andre beskyttelsesgrupper kan avhengig av behovet,avspaltes selektivt for å knytte til
de videre aminosyrederivater, inntil den ønskede peptidkjede er oppbygget fullstendig. Til slutt kan de gjenværende beskyttelsesgrupper avspaltes fullstendig, uten at gruppen R^"-berøres (se f.eks. Miklos Bodansky et al., "Peptide Synthesis", Interscience Publishers, S. 163-165, 1966). 2) Først blir peptidkjeden oppbygget (etter Bodansky, loe. eit.) hvorunder imidlertid den C-terminale karboksylgruppe i arginin beskyttes med en vanlig estergruppe, f.eks. en metoksy-, etoksy- eller benzyloksygruppe. Estergruppene kan avspaltes ved alkalisk hydrolyse med unntak av tert.-butoksygruppen,
som avspaltes selektivt ved hjelp av trifluoreddiksyre.
Hvis §-guanidylgruppen til argininet protoniseres, avspaltes den nevnte estergruppe ved hjelp av trypsin, hvorunder ingen racemisering inntrer. Deretter tilknyttes den kromogene gruppe R -. Nar. 8-guanidinogruppen til arginin er beskyttet med en nitro- eller tosylgruppe <p>g den N-terminale a-aminogruppe i peptidderivatet med en karbobenzoksygruppe eller en p-metyl-, p-metoksy- eller p-klorbenzyloksykarbonylgruppe eller en tert.-butoksygruppe, avspaltes disse beskyttelsesgrupper samtidig. Avspaltningen kan utføres ved behandling av det beskyttede peptidderivat med vannfritt HF ved romtemperatur, hvorunder alle ovenfor amino- henholdsvis éi-guanidinobeskyttelsesgrupper avspaltes . Avspaltningen kan også utføres ved behandling med 2N HBr i iseddik ved romtemperatur, når det beskyttede peptidderivat ikke inneholder noen nitro- eller tosylbeskyttelsesgruppe.
I de etterfølgende utførelseseksempler er fremstillingen av peptidderivatene ifølge oppfinnelsen beskrevet mer utførlig. Temperaturene er angitt i celsiusgrader..
Analysene av eluatene og produktene som erholdes ifølge eksem-plene ble utført ved tynnsjiktkromatografi under anvendelse av glassplater overtrukket med silisiumdioksydgel (Merck, F 254). Tynnsjiktskromatogrammene ble utviklet ved hjelp av følgende løsningsmiddelsystem: n-butanol/eddiksyre/vann (3:1:1).
Det anvendes følgende forkortelser:
Ac = acetyl
<Ac>2° <=> eddiksyreanhydrid
AcOH = eddiksyre
Ala = L-alanin
&-Ala = 3-alanin
Arg = L-arginin
BOC = tert.-butoksykarbonyl
Y-But. = 4-aminosmørsyre
Bz = benzoyl
Bz^O = benzosyreanhydrid
CHA = L-3-cykloheksylalanin
CBG = L-2-cykloheksylglycin
D-CHG = D-2-cykloheksylglycin
CHT = L-3-(4-hydroksycykloheksyl)alanin = kjerne-hydrert tyrosin
Cbo = karbobenzoksy
DMF = dimetylformamid
DPA = 5-amino-isoftalsyre-dimetylester DSC = tynnsjiktkromatografi henholdsvis
sj iktkromatografi
Et = etyl
Et O = etoksy
Et3N = trietylamin
Gly = glyein
HMPTA = N,N,N',N', N",N"-heksylmetylfosforsyre-. triamid
iso-BuO = iso-butoksy
LMS = løsningsmiddelsystem
Lys = L-lysin
MCA = 7-amino-4-metylkumarin
MeO = metoksy
MeOH = metanol
NA = naftylamid
OpNP = p-nitrofenoksy
pNA = p-nitroanilid
Ph'Gly = L-2-fenylglycin
Phe = L-fenylalanin
D-Phe = D-fenylalanin
Suc = succinyl
THF = tetrahydrofuran Tos = p-toluolsulfonyl
Når ikke annet er bemerket, har aminosyrene L-form.
Eksempel I
BOC- Lys ( g.- CbO')'- Gly- Arg- pNA . AcOH
la. Cbo-Arg-pNA.HCl
I en trehalsrundkolbe med 250 ml innhold ble 16,0 g (47,0 mmol) Cbo-Arg-OH.HCl som var tørket over P2°5 va^uum °PP_ løst i 90 ml abs. HMPTA under utelukkelse av fuktighet ved 20°C. Ved romtemperatur ble den erholdte løsning først tilsatt en løsning av 4,74 g (47,0 mmol) Et^N i 10 ml HMPTA
og deretter 16,4 g (100 mMol) p-nitro-fenylisocyanat
(100%ig overskudd) porsjonsvis. Etter 24 timers reaksjons-
tid ved 20°C ble HMPTA hovedsakelig avdestillert i vakuum. Resten ble ekstrahert flere ganger med 30% AcOH. Resten
ble kastet. De samlede AcOH-ekstrakter ble for ytterligere rensing satt på en med' 3"0'%^ig AcOH ekvilibrert "Sephadex"-G-15-søyle og eluert med 30%-ig AcOH. Den fraksjonen av AcOH-eluatet som lot seg spalte ved trypsinbehandling under frigjøring av p-nitrpanilin, ble frysetørket. Man fikk 12,6 g av et amorft pulver som var enhetlig i DSC i LMS. Elementæranalyse og beregning av bruttoformelen C20H25NgO5Cl ga de følg-ende verdier: C = 51,29% (51,67%), H = 5,48% (5,42%), N = 17,92% (18,08%), Cl = 7,50% (7,63%). Verdiene i parentes er de beregnede.
lb. 2HBr. H- Arg- pNA
Under utelukkelse av fuktighet ble 4,65 g> (10 mmol) av forbindelsen la behandlet med 4-0 ml 2N HBr i iseddik under røring i 45 minutter-ved 20°C. Aminosyrederivatet løste seg derunder under C02~utvikling. Reaksjonsløsningen ble under kraftig røring dryppet til 250 ml abs. eter, hvorved 2HBr.H-Arg-pNA falt ut. Eterfasen ble filtrert fra, hvorpå
den faste fase igjen ble vasket 4. ganger med hver gang 100 ml abs. eter for å i stor- grad fjerne benzylbromidet som ble dannet som biprodukt samt overskuddet av HBr og AcOH. Resten ble oppløst, i 50 ml MeOH innstilt på pH 4,5 med Et^N og inndampet. i vakuum ved 3 0°C for tørking. Dette således erholdte produkt, ble oppløst i 75. ml MeQø og fikk løpe gjennom en søyle av '"Sepfoadex" LH-2G> tkryssbuindet dekstrangel) ekvilibrert med MeOH. Fra en fraksjon av eluatet fikk man 4,18 g (91,6% av
teoretisk) av den amorfe forbindelse lb, som var enhetlig i DSC i LMS. Elementæranalyse og beregning av bruttoformelen <C>12<H>20<N>6°3Br2ga de f^ >1<3ende verdier: C = 31,15% (31,60%),
H = 4,35% (4,42%), N = 18,84% (18,43%) og Br = 34,81% (35,
03%) .
lc. Cbo- Gly- Arg- pNA. HBr
4,56 g (10 mMol) av forbindelsen lb ble oppløst i 30 ml nydestillert DMF og etter kjøling til -10°C blandet med 1,40
ml (10 mMol) Et-^N under røring. Det dannede Et^N.HBr ble filtrert fra og vasket med litt kaldt DMF. Man tilsatte filtratet under røring ved -10°C 3,65 g (11 mMol) Cbo-Gly-OpNP
og lot blandingen reagere 2-3 timer under utelukkelse av fuktighet, hvorunder reaksjonsløsningens temperatur etterhvert steg til ca. 20°C. Løsningen ble igjen avkjølt til -10°C og pufret til 0,70 ml (5 mMol) Et^N. Man lot reaksjonsblandingen reagere ca. 2 timer ved -10°C og 3 timer ved romtemperatur. Denne prosess ble gjentatt med 0,70 ml Et^N og etter ytterligere 16 timer ble reaksjonsløsningen inndampet til tørrhet i
vakuum ved 50°C. Resten ble oppløst i 75 ml 50%-ig AcOH og renset ved gelfiltrering på en søyle av "Sephadex" G-15 ekvilibrert med 50%-ig AcOH. Den fraksjonen av AcOH-eluatet som lot seg spalte ved trypsinbehandling under frigjøring av p-nitroanilin ble inndampet i vakuum til tørrhet ved 40°C. Resten ble oppløst i 150 ml MeOH og igjen inndampet til tørr-het. Etter tørking av den erholdte rest i vakuumtørkeskap ved 60°C over P2°5 fikk man 5,85 g (88,3% av teoretisk utbytte) av den amorfe forbindelse lc, som var enhetlig i DSC i LMS. Elementæranalyse og beregning av bruttoformelen C22H28N7°6Br ga de følgende verdier: C = 46,33% (46,65%), H = 5,04% (4,98%), N-17,88% (17,31%) og Br = 14,20% (14,11%).
Id. 2HBr. H- Gly- Arg- pNA
4,56 g (8 mMol) av forbindelsen lc ble under utelukkelse av fuktighet behandlet i 40 minutter ved 20°C med 3 2 ml 2N HBr i iseddik under røring. Dipeptidderivatet løste seg derunder etterhvert under C02~utvikling. Reaksjonsløsningen ble under kraftig røring dryppet til 250 ml abs. eter, hvorved 2HBr.H-Gly-Arg-pNA falt ut. Eterfasen ble filtrert fra, hvorpå den
faste fasen igjen ble vasket med hver gang 100 ml abs. eter for å fjerne benzylbromidet som dannedes som biprodukt samt overskudd av HBr' og AcOH i stor grad. Resten ble oppløst i 50 ml MeOH. Etter innstilling av pH på 4,5 med Et^N ble løs-ningen inndampet i vakuum ved 3 0QC til tørrhet. Den således
.erholdte rest ble oppløst i 50 ml MeOH og renset på en søyle av "Sephadex" LH-20 ekvilibrert med MeOH. Den fraksjon av MeOH eluatet som lot seg spalte under frigjøring av p-nitro-analin ved trypsinbehandling ble inndampet i vakuum ved 3 0°C
til tørrhet. Etter tørking av den erholdte rest i vakuumtørke-skap ved 40°C over P2°5 fikk man 3,78 g (92,1% av teoretisk utbytte) av den amorfe forbindelse ld, som var enhetlig i DSC
i LMS. Elementæranalyse og beregning av bruttoformelen Cl4<H>23<N>7°4Br2 ga de f<t>1( 3enåe verdier: C = 32,31% (32,77%),
H = 4,59% (4,52%), N = 19,47% (19,11%) og Br = 30,78% (31,14%).
le. BOC- Lys( £- Cbo)- Gly- Arg- pNA. HBr
2,57 g (5 mMol) av forbindelsen ld ble oppløst i 20 ml nydestillert DMF og etter kjøling til -10°C under røring blandet med 0,70 ml (5 mMol) Et^N. Det dannede Et.jN.HBr ble filtrert fra og ettervasket med litt kaldt DMF. Filtratet ble under røring ved -10°C tilsatt 2,76 g (5,5 mMol) BOC-Lys(e-Cbo)-OpNP. Man lot reaksjonsblandingen reagere 2-3 timer under utelukkelse av fuktighet, hvorpå reaksjonsløsningens: temperatur gradvis steg til ca. 20°C. Løsningen ble igjen avkjølt til -10°C og pufret med 0,3 5 ml (2,5 mMol) Et^N. Man lot reaksjonsblandingen reagere ca. 2 timer ved -20 C og. ytterligere 3 timer ved romtemperatur. Denne prosess ble gjentatt med 0,3 5 ml Et3N, og etter ytterligere 16 timer ble reaksjonsløsningen inndampeti vakuum ved 50°C til tørrhet. Resten blé oppløst i 50 mi 50%-ig AcOH og renset ved gelfiltrering på en søyle
av "Sephadex" G-15 ekvilibrert med 50%ig AcOH. Den fraksjon av AcOH eluatet som lot seg spalte ved trypsinbehandling under frigjøring av p-nitroanilin ble inndampet i vakuum ved 40°C
til tørrhet. Resten ble oppløst i 100 ml MeOH hvorpå løsningen igjen ble inndampet til tørrhet. Etter tørking av den erholdte rest i vakuumtørkeskap. ved 60°C over P205 fikk man 3,57 g
(89,8% av teoretisk utbytte) av den amorfe forbindelse le,
som var enhetlig i DSC i LMS. Elementæranalyse og beregning av bruttoformele<n><C>33H4gN<gOg>Br ga de følgende verdier: C = 49,38% (49,87%), H = 6,00% (6,09%), N = 16,03% (15,86%)
og Br = 9,85% (10,05%).
Aminosyreanalysen ga de ventede aminosyrer i det riktige forhold:
Gly: 1,00 - Lys : 0,99 - Arg : 0,97.
lf. BOC- Lys ( É- Cbo) - Gly- Arg- pNA. AcOH
7,95 g (10 mMol) BOC-Lys(£-Cbo)-Gly-Arg-pNA.HBr
(fremstilt ifølge avsnitt le) ble oppløst i 75 ml 60%ig
vandig MeOH. Løsningen ble satt på en søyle av "Amberlite" JRA-401 i acetatform. Søylen ble eluert ved hjelp av 60%-ig vandig MeOH, hvorunder ved ionebytte HBr ble erstattet med AcOH. Eluatet ble inndampet i vakuum ved 40°C til tørrhet. Etter tørking i vakuumtørkeskap ved 40°C over P2°5 fikk man 7•58 9 bromidfritt BOC-Lys(£-Cbo)-Gly-Arg-pNA.AcOH (97,9% teoretisk).
Etter denne metoden kan man ut fra det ovenfor nevnte tri-peptidderivat tilsvarende fremstille andre salter med organiske syrer, f.eks. med maur-,propion-,oksal-,vin-,sitron-, melke-, benzo-, klorbenzo-, salicyl- eller ftalsyre. Man kan f.eks. anvende "Amberlite" JRA-401 som ionebytter i hydrokloridform og overføre i den ønskede syresaltform, idet man overfører den nevnte ionebytter ved behandling i natronlut i den basiske OH-form, og deretter behandler med en løsning av l:l-blanding av den ønskede organiske syre og dets natriumsalt i 60%ig vandig MeOH.
Eksempel 2
BOC- Lys ( £ - Cbo)- Gly- Arg- MCA. AcOH
2b. 2HBr. H- Arg- MCA
13,0 g (25,9 mMol) Cbo-Arg-MCA.HCl handelsvare ble frigjort med 104 ml (208 mMol) av en løsning av 2N HBr i iseddik ifølge eksempel lb. Den tørkede resten ble oppløst i 400 ml MeOH og renset på en søyle av "Sephadex" LH-20. Den fraksjonen
av MeOH eluatet som lot seg spalte ved trypsinbehandling
under frigjøring; av 4'-metyI-7-amino-kumarin, ble inndampet i vakuum ved. 3'Q°G til tørrhet. Etter tørking av den erholdte rest i vakuumtørkeskapet. ved 4 0°C over P2°5 fikk man H/2 g (87,7% av teoretisk utbytte) av den amorfe forbindelse 2b,
som var enhetlig, i DSC i LMS. Elementæranalyse og beregning av bruttoformelen ci6H23N5°3Br2 ga de ^'5-'-9ende verdier: C = 39, 40% (38,96%),. H = 4,61% (4,70%), N = 14,48% (14,20%) og Br = 31,90% (321,40%) .
2c. Cbo- Gly- ArgrMCA. HBr
4.93 g (10 mMol) av forbindelsen 2b og 3,65 (11 mMol) Cbo-Gly-OpNP ble satt til 7 5 ml nydestillert DMF. Etter kjøling
til -10 C ble under røring først 1,40 ml (10 mMol) og deretter 0,70 ml ( 5 mMol) Et^N tilsatt. Man lot blandingen først reagere under utelukkelse av fuktighet 3 timer ved -10°C og
så ytterligere 4 timer ved romtemperatur. Reaksjonsløsningen ble på nytt avkjølt til -10°C, pufret med 0,70 ml Et^N og rørt natten over ved 20°C. Reaksjonsblandingen ble inndampet til tørrhet i; vakuum ved 50°C, hvoretter resten ble oppløst
i 200 ml 50%ig.AcOH og renset på en søyle av "Sephadex" G-15. Den fraksjon av AcOH-eluatet som lot seg spalte ved trypsinbehandling under frigjøring av 4-metyl-7-amino-kumarin, ble inndampet til tørrhet i vakuum ved 4 0°C. Etter tørking av den erholdte rest i: vakuumtørkeskapet ved 60°C over P205 fikk man 4,98 g (82,5 % av teoretisk utbytte) av den amorfe forbindelse 2c, som var enhetlig i DSC i LMS. Elementæranalyse og beregning av bruttof ormelen C~ ,H.. -, N,0,Br ga de
z b o x o. b
følgende verdier: C = 51,48% (51,75%), H = 5,24% (5,18%), N = .13,70% (13,93%) og Br = 13,14% (13,24%).
4,83 g (8 mMol) av forbindelsen 2c ble avblokkert ifølge eksempel ld med 3 2 ml 2N HBr iseddik. Det erholdte råprodukt ble oppløst i 10.0 ml MeOH og renset på en søyle av "Sephadex" LH-20. Den fraksjon av MeOH;-eluatet som lot seg spalte ved trypsinbehandling- under frigjiøring av 4-metyl-7-amino-kumarin, ble inndampet til. tørrhet i vakuum ved 30°C. Etter tørking av dem erholdte rest i vakuumtørkeskapet ved 4 0°C over
P^Og, fikk man 4,05 g (92 % av teoretisk utbytte) av den
amorfe forbindelse 2d, som var enhetlig i DSC i LMS. Elementæranalyse og beregning av bruttof ormelen C^g^gNgO^Br 2 ga de følgende verdier: C = 39,02% (39,29%), H = 4,78% (4,76%), N = 15,39% (15,27%) og Br = 28,72% (29,04%).
2e. BOC- Lys( £- Cbo)- Gly- Arg- MCA. HBr
2,75 g (5 mMol) av forbindelsen 2d ble ifølge eksempel le omsatt med 2,76 g (5,5 mMol) BOC-Lys(£-Cbo)-OpNP. Det erholdte råproduktet ble oppløst i 75 ml 50%ig AcOH og renset på en søyle av "Sephadex" G-15. Den fraksjon av AcOH-eluatet som lot seg spalte ved trypsinbehandling under frigjøring av 4-metyl-7-amino-kumarin ble inndampet i vakuum til tørrhet ved 4 0°C. Etter tørking av resten i vakuumtørkeskap ved 60°C over P2°5 fikk man 3,41 g (82,0% av teoretisk utbytte) av den amorfe forbindelse 2e, som var enhetlig i DSC i LMS. Elementæranalyse og beregning av bruttoformelen C^^H^^Ng<OgBr> ga de følgende verdier: C = 53,13% (53,43%), H = 6,24% (6,18%), N = 13,76% (13,47%) og Br = 9,45% (9,61%).
Aminosyreanalysen ga de ventede aminosyrer i det riktige forhold: Gly: 1,00 - Lys: 1,02 - Arg: 0,98.
2f. BOC- Lys( £- Cbo)- Gly- Arg- MCA. AcOH
8,32 g (10 mMol) av forbindelsen 2e ble overført ifølge eksempel lf i det tilsvarende acetatsalt. Man fikk 7,95 g
(98,0% av teoretisk utbytte) av dette produkt.
Eksempel 3
BOC- Lys( £- Cbo)- Gly- Arg- DPA. AcOH
3a. Cbo- Arg- DPA. HCl
I en trehalset rundkolbe med 1000 ml innhold ble 34,48 g (0,1 mol) oppløst i en blanding av 150 ml nydelstillert vannfritt DMF og 300 ml abs. THF ved 20°C. Den til -10°C avkjølte løs-ning ble under røring og utelukkelse av fuktighet tilsatt 10,2 g (0,1 mol) Et^N. Så ble blandingen i løpet av 20 min. tilsatt en løsning av 13,65 g (0,1 mol) klormaursyreisobutyl-ester i 50 ml THF dråpevis, hvorunder man aldri lot reaksjonstemperaturen overstige -5°C. Etter en ytterligere reaksjons-tid på 10 min. ved era temperatur på -10 C til -5 C ble reaksjonsblandingen tilsatt en løsning av 20,92 g (0,1 mol) 5-amino-isoftalsyre-dimetylester i 75 ml DMF dråpevis i løpet av 30 min., hvorunder man alltid holdt reaksjonstemperaturen under -5°C. Man lot reaksjonsblandingen røres enda en time videre ved -5°C. Så rørte man natten over ved 20°C og avkjølte så til -15°C for' å la Et^N.HCl utkrystallisere. Det dannede Et3N.HCl ble frafiiltrert og ettervasket med litt kaldt DMF. Filtratet ble sammen med vaskeløsningen inndampet til tørrhet
i vakuum ved 50°C. Resten ble oppløst i 1000 ml 50%-ig AcOH
og renset ved gelfiltrering på en søyle av "Sephadex" G-15 ekvilibrert med 50%-ig AcOH. Den fraksjon av AcOH-eluatet som lot seg spalte ved trypsinbehandling under frigjøring av 5-amino-isoftalsyredimetylester, ble inndampet i vakuum ved 4 0°C til tørrhet. Etter tørking av resten i vakuumtørkeskapet ved 50°C over P205 fikk man 24,6 g (45,9% av teoretisk utbytte) av den amorfe forbindelse 3a, som var enhetlig i DSC i LMS. Elementæranalyse og beregning av bruttof ormelen C24H.jQ<N>t-O.7Cl ga de følgende verdier: C = 53,21% (53,78%), H = 5,71% (5,64%), N = 13,20% (13„07%) og Cl = 6,52% (6,62%).
3b. 2HBr. H- Arg- DPA
21,44 g (40 mMol.) av forbindelsen 3a ble avblokkert ifølge eksempel lb. Etter opparbeiding ble det erholdte råprodukt oppløst i 250 ml MeOH og renset ved gelfiltrering på en søyle av "Sephadex" LH-20. Den fraksjon av MeOH-eluatet som lot seg spalte ved trypsinbehandling ved frigjøring av 5-amino-isofatlsyredimetylester, ble inndampet i vakuum til tørrhet. Etter tørking av resten i vakuumtørkeskapet ved 4 0°C over P2°5 fikk man 19,63 g (93,1% av teoretisk utbytte) av den amorfe forbindelse 3b, som var enhetlig i DSC i LMS. Elementæranalyse og beregning av bruttoformelen c^6H25N5°5Br2 ga de følgende verdier:; C = 36,82% (36, 45%), H = 4,67% (4,78%),
N = 13,45% (13,2S.%) og Br = 29,85% (30,31%).
3c . Cbo- Gly- Arg- DPA- HBr
5,27 g (10 mMol.)) av forbindelsen 3b ble omsatt ifølge eksempel lc med 31,65 g (11 mMol) Cbo-Gly-OpNP. Det etter opparbeiding erholdte råprodukt ble oppløst i 200 ml 50%-ig AcOH og renset
på en søyle av "Sephadex" G-15. Den fraksjonen av AcOH-eluatet som lot seg spalte ved^trypsinbehandling under frigjør-ing av 5-amino-isoftalsyre-dimetylester, ble inndampet i vakuum ved 4 0°C til tørrhet. Ved tørking av resten i vakuum-tørkeskap ved 60°C over P2°5 fikk man 5'29 9 (83,0% av teoretisk utbytte) av den amorfe forbindelse 3c som var enhetlig i DSC i LMS. Elementæranalyse og beregning av bruttoformelen C2<gH3>3<N>6<0gB>r ga de følgende verdier: C = 48,50%
(48,99%), H = 5,28% (5,22%), N = 12,92% (13,18%) og Br =
12,33% (12,53%).
3d. 2HBr. H- Gly- Arg- DPA
5,10 g (8 mMol) av forbindelsen 3c ble avblokkert ifølge eksempel ld med 3 2 ml 2N HBr i iseddik. Det etter opparbeiding erholdte råprodukt ble oppløst i 100 ml MeOH og renset på en søyle av "Sephadex" LH-20. Den fraksjon av MeOH-eluatet som lot seg spalte ved trypsinbehandling under frigjøring av 5-amino-isoftalsyre-dimetylester, ble inndampet i vakuum til tørrhet ved 30°C. Etter tørking av resten i vakuumtørke-skapetved 40°C over P2°5 fikk man 4,25 g (90,9% av teoretisk utbytte) av den amorfe forbindelse 3d som var enhetlig i DSC
i LMS. Elementæranalyse og beregning av bruttoformelen C18H28N6°6Br2 ga de f<^ 1' 3ende verdier: C = 36,85% (37,00%), H = 4,90% (4,83%), N = 14,72% (14,38%) og Br = 26,95% (27,35%).
3e. BOC- Lys( £- Cbo)- Gly- Arg- DPA. HBr
2,92 g (5 mMol) av forbindelsen 3d ble omsatt ifølge eksempel le med 2,7 6 g (5,5 mMol) BOC-Lys(£-Cbo)-OpNP. Det etter opparbeiding erholdte råprodukt ble oppløst i 100 ml 50%-ig AcOH og renset på en søyle av "Sephadex" G-15. Den fraksjonen av AcOH-eluatet som lot seg spalte ved trypsinbehandling under fri-gjøring av 5-amino-isoftalsyre-dimetylester ble inndampet til tørrhet i vakuum ved 4 0°C. Etter tørking av resten i vakuum-tørkeskapet ved 40°C over P2°5 fikk man 3,64 g (84,1% av teoretisk utbytte) av den amorfe forbindelse 3e, som var enhetlig i DSC i LMS. Elementæranalyse og beregning utfra bruttoformelen <C>37H53Ng011Br ga de følgende verdier: C = 51,05% (51,33%), H = 6,25% (6,17%), N = 13,26% (12,94%) og Br = 9,10% (9,23%).
Aminosyreanalysera ga de ventede aminosyrer i riktige forhold: Gly: 1,0'Øi - Lys r 1,00' - Arg : 0,97.
3f. BOC- Lys( £- Cfoffii-) j- Gly- Arg- DPA. AcOH
8,66 g (10; mMol)' av forbindelsen 3e ble ifølge eksempel lf overført i det tilsvarende acetatsalt. Man fikk 8,24 g (97,5% av teoretisk utbytte) av dette produkt.
Eksempel 4
BOC- Lys( g- Cbo)- Ala- Arg- 2- NA. AcOH
4b. 2HBr. H- Arg- 2- NA
9,40 g (20 mMol) Cbo-Arg-2-NA.HC1 handelsvare ble avblokkert ifølge eksempel lb med en løsning av 80 ml 2N HBr i iseddik. Det etter opparbeiding erholdte produkt ble oppløst i 150 ml MeOH og renset på en søyle av "Sephadex" LH-20.
Den fraksjonen av MeOH-eluatet, som lot seg spalte ved trypsinbehandling under frigjøring av 2-naftylamin, ble inndampet i vakuum til tørrhet ved 3 0°C. Etter tørking av resten i vakuum-tørkeskap ved 4 0°C over P2°5 fikk man 8,60 g (93,2% av teoretisk utbytte)' av den amorfe forbindelse 4b, som var enhetlig i DSC i LMS. Elemntæranalyse og beregning ut fra bruttoformelen. <C>16<H>23N5OBr2 g de fØ!9ende verdier: C = 42,08% (41,67%), H = 5,12% (5,03%), N = 14,68% (15,19%)
og Br = 33,96% (34,65%).
4c. Cbo- Ala- Arg- 2. TNA. HBr
4,6 g (10 mMol) av forbindelsen 4b ble omsatt ifølge eksempel, lc med 3,80 g (11. mMol) Cbo-Ala-OpNP. Det etter opparbeiding erholdte råprodukt ble oppløst i 150 ml 50%-ig AcOH og renset på en søyle av "Sephadex" G-15. Den fraksjon av AcOH-eluatet. som lot seg spalte ved trypsinbehandling under frigjøring av 2-naftylamin, og ble inndampet i vakuum ved 40°C til tørrhet. Etter tørking av resten, i vakuumtørkeskapet ved 60°C over
P20,- fikk man 4,.9.5 g (8i4i„5%, av teoretisk utbytte) av den amorfe- forbindelse 4c, som var enhetlig i DSC i LMS. Elementæranalyse ogj beregning utfra bruttofarmelen C-^<H>^-jN<g>O^r ga de følgendle verdier:; C = 55,72% (55,39%) t H = 6,73% (5,68%), N = .14,68% (14,35%) og Br = 13,42% (13,65%).
4d. 2HBr. H- Ala- Arg- 2- NA
4,68 g (8 mMol) av forbindelsen 4c ble avblokkert ifølge eksempel ld med 28 ml 2N HBr i iseddik. Det etter opparbei-
ding erholdte råprodukt ble oppløst i 100 ml MeOH og renset på en søyle av "Sephadex" LH-20. Den fraksjon av MeOH-eluatet som lot seg spalte ved trypsinbehandling under frigjøring av 2-naftylamin, ble inndampet i vakuum til tørrhet ved 3 0°C.
Etter tørking avuresten i vakuumtørkeskapet ved 4 0°C over
P2°s ^^k man 4,08 g (95,8% av teoretisk utbytte) av den
amorfe forbindelse 4d, som var enhetlig i DSC i LMS. Elementæranalyse og beregning utfra bruttoforrael C^gH2gNg02Br2 ga de følgende verdier: C = 43,9% (42,87%), H = 5,32% (5,30%),
N = 16,02% (15,79%) og Br = 29,68% (30,02%).
4e. BOC- Lys ( g- Cbo) - Ala- Arg- 2- NA. HBr
2,66 g (5 mMol) av forbindelsen 4d ble omsatt ifølge eksempel le med 2,76 g (5,5 mMol) BOC-Lys (e-Cbo)-OpNP. Det. etter opparbeiding erholdte råprodukt ble oppløst i 100 ml 50%-ig AcOH
og renset på en søyle av "Sephadex" G-15. Den første hovedfraksjonen av AcOH-eluatet, som ved trypsinbehandling lot seg spalte under frigjøring av 2-naftylamin, ble inndampet i vakuum ved 40°C til tørrhet og deretter tørket i vakuumtørkeskap ved 60°C over P205- Man fikk 3,45 g (84,8% av teoretisk utbytte) av den amorfe forbindelse 4e, som var enhetlig i DSC i LMS. Elementæranalyseberegning utfra bruttof ormelen C-jgH^NgO^Br ga de følgende verdier: C = 55,88% (56,08%), H = 6,63% (6,56%), N = 14,02% (13,77%) og Br = 9,80% (9,82%).
Aminosyreanalysen ga de ventede aminosyrer i de riktige forhold: Ala : 1,00 - Lys : 1,02 - Arg : 0,97.
4f. BOC- Lys ( £- Cbo) - Ala - Ar g - 2 - NA. Ac OH
8,14 g (10 mMol) av forbindelsen 4e ble ifølge eksempel lf overført i det tilsvarende acetatsalt. Man fikk 7,65 g (95,
5% teoretisk utbytte) av dette produkt.
Eksempel 5
BOC- Lys( g- Cbo)- Ala- Arg- l- NA. AcOH
5a. Cbo- Arg- l- NA. HCl
3,45 g (10 mMol) godt tørket Cbo-Arg-OH.HCl ble oppløst i
100 ml tørket HHPTÆ under utelukkelse av fuktighet. Etter avkjøling til -10°C' ble løsningen tilsatt 1,39 ml (10 mMol)
Et-jN og deretter tildryppet en løsning av 1,35 g (10 mMol) klormaursyre,isobutylester i 20 ml HMPTA i løpet av 15 min. hvorunder temperaturen ble holdt mellom -10°C og -5°C. Den erholdte løsning ble så tildryppet en løsning av 1,72 g (12 mMol) 1-naftylamini i 15 ml HMPTA, hvorunder den ovenfor temperatur ble overholdt. Reaksjonsblandingen ble inndampet til tørrhet ved 80°C i vakuum. Resten ble oppløst i 100 ml MeOH
og renset ved gelfiltrering i MeOH på en søyle av "Sephadex" LH-20. Den fraksjon av eluatet, som lot seg spalte ved trypsinbehandling under frigjøring av 1-naftylamin, viste seg å være enhetlig i DSC i LMS. Denne fraksjonen ble inndampet til tørr-het. Man fikk 2,8:2 g av den amorfe forbindelse 5a (60,1%
av teoretisk utbytte).
Elementæranalyse og beregning av bruttof ormelen C24H2qN^O-jC1
ga de følgende verdier: C = 61,07% (61,33%), H = 6,10% (6,01%),
N = 15,05% (14,90%) og Cl = 7,38% (7,54%).
5b. 2HBr. H- Arg- l- NA
9,40 g (20 mMol) av forbindelsen 5a ble avblokkert ifølge eksempel lb med en løsning av 8 0 ml 2N HBr i iseddik. Det etter opparbeiding erholdte produkt ble oppløst i 150 ml MeOH
og renset på en søyle av "Sephadex" LH-20. Den fraksjon av MeOH-eluatet som lot seg spalte ved trypsinbehandling under fri-gjøring av 1-naftylamin, ble inndampet til tørrhet i vakuum ved 3 0°C. Etter tørking av resten i vakuumtørkesk?oet ved 4 0°C over P205 fikk man 8,40?g (90,8% av teoretisk) av den amorfe forbindelse 5b, som var enhetlig i DSC i LMS. Elementæranalyse og beregning utfra bruttof ormelen C^gH23N,_ONr 2 ga de følgende verdier: C = 42,20% (41,67%;), H = 5,08% (5,03%), N = 15,33% (15,19%) og Br = 34,10% (34,65%) .
5c. Cbo- Ala- Ar. grl'- NA. HBr
4,6 g (10 mMol.)) av forbindelsen 5b ble omsatt ifølge eksempel lc med 3,80i g ((11 mMol)s Cbo-Ala-OpNP. Det etter opparbeiding erholdte råproidiuikt ble oppløst i 150 ml 50%-ig AcOH og renset på en søyle av "Sephadex" G-15. Den fraksjon av AcOH-eluatet
som ved trypsinbehandling lot seg spalte under frigjøring av 1-naftylamin, ble inndampet i vakuum til tørrhet ved 40°C. Etter tørking av resten i vakuumtørkeskapet ved 60°C over & 2®5 fikk man 4,80 g (82,1% av teoretisk utbytte) av den amorfe forbindelse 5c, som var enhetlig i DSC i LMS. Elementæranalyse og beregning utfra bruttof ormelen C ^H^NgO^Br ga de følgende verdier: C = 55,62% (55,39%), H = 6,70% (5,68%), N = 14,63%
(14,35%) og Br = 13,35% (13,65%).
5d. 2HBr. H- Ala- Arg- l- NA
4,68 g (8 mMol) av forbindelsen 5c ble avblokkert ifølge eksempel ld med 28 ml 2N HBr i iseddik. Det etter opparbeiding erholdte råprodukt ble oppløst i 100 ml MeOH og renset på en søyle av "Sephadex" LH-20. Den fraksjon av MeOH-eluatet som lot seg spalte ved trypsinbehandling under frigjøring- av 1-naftylamin, ble inndampet til tørrhet i vakuum ved 30°C.
Etter tørking av resten i vakuumtørkeskapet ved 4 <0>°C over ^ 2°s f-"-kk man 3,85 g (90,3% av teoretisk utbytte) av den amorfe forbindelse 5d, som enhetlig i DSC i LMS. Elementæranalyse og beregning utfra bruttoformelen C^gH2gNg02Br2 ga de følgende verdier: C = 43,09% (42,87%), H = 5,38% (5,30%), N = 16,10% (15,79%) og Br = 29,80% (30,02%).
5e. BOC- Lys ( £- Cbo)- Ala- Arg- 1— NA. HBr
2,66 g (5 mMol) av forbindelsen 5d ble omsatt ifølge eksempel le med 2,76 g (5,5 mMol) BOC-Lys(£-Cbo)-OpNP. Det etter opparbeiding erholdte råprodukt ble oppløst i 100 ml 50%-ig AcOH og renset på en søyle av "Sephadex" G-15. Den første hovedfraksjonen av AcOH eluatet som lot seg spalte ved trypsinbehandling under frigjøring av 1-naftylamin, ble inndampet i vakuum ved 4 0°C til tørrhet og deretter tørket i vakuumtørkeskap ved 60°C over P2°5* Man fikk 3,46 g (85% av teoretisk utbytte) av den amorfe forbindelse 5e, som var enhetlig i DSC i LMS. Elementæranalyse og beregning utfra bruttoformelen C-jgH^NgO^Br ga de følgende verdier: C = 55,98% (56,08%), H = 6,68% (6,56%), N = 13,02% (13,77%) og Br = 9,80% (9,82%). ;Aminosyreanalysen ga de ventede aminosyrer i de riktige forhold: Ala : 1,00 - Lys : 1,01 - Arg : 0,97. ;5f. BOC- Lys ( £.- Cbo) - Ala- Arg- l- NA. AcOH ;8,14 g (10 mMol) av forbindelsen 5e ble ifølge eksempel lf overført i det tilsvarende acetatsalt. Man fikk 7,77 g (98, ;0% av teoretisk utbytte) av dette produkt. ;Eksempel 6 ;BOC- Lys( cf- Cbo)- Ala- Arg- 4- MeO- 2- NA. HBr ;6b. 2HBr. H- Arg- 4- MeO- 2- NA ;10,0 g (20 mMol) Cbo-Arg-4-MeO-2-NA.HCl handelsvare ble ifølge eksempel lb avblokkert med 80 ml 2N HBr i iseddik. Det etter opparbeiding erholdte råprodukt ble oppløst i 150 ml MeOH og renset på en søyle av "Sephadex" LH-20. Hovedfraksjonen av MeOH-eluatet som lot seg spalte ved trypsinbehandling under fri-gjøring av 4-metoksy-2-naftylamin ble inndampet i vakuum ved 3 0°C til tørrhet. Etter tørking av resten i vakuumtørkeskapet ved 4 0°C over P2°5 fikk man 8,98 g (91,4% av teoretisk utbytte) av den amorfe forbindelse 6b, som var enhetlig i DSC i LMS. Elementæranalyse og beregning utfra bruttoformelen ci7<H>25<N>5°2Br2 ga de følgende verdier: C = 41,22% (41,57%), H = 5,19% (5,13%), N = 14,40% (14,26%) og Br = 32,01% (32,53%). ;6c. Cbo- Ala- Arg- 4- MeO- 2- NA. HBr ;4,91 g (10 mMol) av forbindelsen 6b ble ifølge eksempel lc omsatt med 3,80 g (11 mMol) Cbo-Ala-OpNP. Det etter opparbeiding erholdte råprodukt ble oppløst i 150 ml 50%-ig AcOH og renset på en søyle av "Sephadex" G-15. Den første hovedfraksjon av AcOH-eluatet som lot seg spalte ved trypsinbehandling under fri-gjøring av 4-metoksy-2-naftylamin ble inndampet ved 4 0°C i vakuum til tørrhet. Etter tørking av resten i vakuumtørkeskapet ved 60°C P205 fikk man 4,86 g (79,0% av teoretisk utbytte) ;av den amorfe forbindelse 6c som var enhetlig i DSC i LMS. Elementæranalyse og beregning utfra bruttoformel C2gH3gNgO^Br ga de følgende verdier: C = 54,38% (54,64%), H = 5,81% (5,73%), N = 13,65%) og Br = 12,75% (12,98%). ;6d. 2HBr. H- Ala- Arg- 4- MeO- 2- NA ;4,31 g (7 mMol) av forbindelsen 6c ble avblokkert ifølge eksempel ld med 28 ml 2N HBr i iseddik. Det ietter opparbeiding erholdte råprodukt ble oppløst i 100 ml MeOH og ;renset på en søyle av "Sephadex" LH-20. Hovedfraksjonen av MeOH-eluatet som lot seg spalte ved trypsinbehandling. under dannelse av 4-metoksy-2-naftylamin, ble inndampet til tørrhet i vakuum ved 3 0°C. Etter tørking av resten i vakuumtørkeskapet ved 40°C over P205 fikk man 3,74 g (95,0% av teoretisk utbytte) av den amorfe forbindelse 6d som var enhetlig i DSC i LMS. Elementæranalyse og beregning utfra bruttoformelen C2QH3QNgO-jBr2 ga de følgende verdier: C = 43,01% (42,72%), H = 5,44% (5,38%), N = 15,25% (14,95%) og Br = 28,03% (28,42%). ;6e. BOC- Lys( cf- Cbo)- Ala- Arg- 4- MeO- 2- NA. HBr ;2,81 g (5 mMol) av forbindelsen 6d ble omsatt ifølge eksempel le med 2,7 6 g (5,5 mMol) BOC-Lys (£.-Cbo) -OpNP. Det etter opp-arbeidingen erholdte råprodukt ble oppløst i 125 ml 50%-ig AcOH og renset på en søyle av "Sephadex" G-15. Den første hovedfraksjonen av AcOH-eluatet, som lot seg spalte ved trypsinbehandling under frigjøring av 4-metoksy-2-naftylamin, ble inndampet til tørrhet i vakuum ved 40°C. Etter tørking av resten i vakuumtørkeskapet ved 60°C over P2°5 f^k man 3,31 g (78,5% av teoretisk utbytte) av den amorfe forbindelse 6e som var enhetlig i DSC i LMS. Elementæranalyse og beregning utfra bruttof ormelen C^<g>H^<N>gO<gB>r ga de følgende verdier: C = 55,05% (55,51%), H = 6,63% (6,57%), N = 13,40% (13,28%) og Br = 9,30% (9,47%) . ;6f. BOC- Lys( C- Cbo)- Ala— Arg- 4- MeO- 2- NA. AcOH ;8,44 g (10 mMol) av forbindelsen 6e ble ifølge eksempel lf overført til det tilsvarende acetatsalt. Man fikk 8,05 g (97, ;8% av teoretisk utbytte) av dette produkt. ;Den etterfølgende tabell inneholder tallangivelser som ved-rører spaltbarheten av peptidderivatene ifølge foreliggende oppfinnelse med C-j-esterase. De angitte verdier ble målt som følger: En blanding av 1,8 ml trisimidazolpuffer og 0,015 ml av en løsning, som inneholdt 800 tosyltyrosinetylester-enheter (TTEE) C-,-esterase pr. ml, ble ved 37°C tilsatt 0,2 ml av en 2 x 10 -molar peptidderivatløsning. Så ble økningen av den optiske tetthet 4 OD, som skyltes spaltningsproduktet som oppstod ved spaltning av peptidderivatet (f.eks. p-nitroanilin eller 4-metoksy-2-naftylamin eller 4-metyl-7-aminokumarin) i tidsrommet 5 min. målt ved 405 nm. I tilfellet fluoreserende spaltningsprodukter (f.eks. 1- eller 2-naftylamin eller 1,3-di(metoksykarbonyl)-5-amino-benzen) ble økningen, i optisk tetthet målt ved den tilsvarende emisjonsbølgelengde.. Fra de målte verdier regnet man ut økning i optisk tetthet pr. tidsenhet ved hjelp av de molare akstinksjonskoeffisienter den pr. tidsenhet dannede mengde av spaltningsproduktet i nanomol. ;Spaltbarheten er uttrykt i nanomol av spaltningsproduktet som dannes pr. minutt med 1 TTEE C-j-esterase. ;Bestemmelsen av C-j-esteraseinhibitornivået kan utføres som følger: En blanding av 1,6 ml trisimidazolpuffer med pH 7,4, ionestyrke 0,2 og 0,1 ml sitratplasma inkuberes ved 37°C med 0,1 ml renset C-,-esterase i 4 min. Inkubatet tilsettes 0,2 ml ;-3 ;av en 2 x 10 molar vandig løsning av et substrat ifølge oppfinnelsen. Når substratet som kromogen gruppe (R"*") har en p-nitroanilinogruppe, måles mengden av spaltningsproduktet p-nitroanilin (R^-H) som frigjøres pr. minutt spektrofotomet-risk ved 405 nm. I et forsøkssystem som ikke inneholder plasma, men ellers er likt sammensatt, måles den mengde p-nitroanilin som frigjøres pr. minutt som ovenfor beskrevet. Ut fra forskjel-len mellom de måleverdier bestemmes C-j-esteraseinhibitornivået i blodplasmaet.
Claims (6)
1. Peptidderivater, karakterisert ved formelen
hvori
R<1> er en p-nitrofenylamino-, 1- eller 2-naftylamino-, 4-metoksy-2-naftylamino-, 4-metyl-7-cumarylamino- eller 1,3-di(metoksykarbonyl)-5-fenylamino-gruppe,
R<2> er hydrogen eller a) en rettkjedet eller forgrenet, alkanoylgruppe: med, 2 til 6 karbonatomer, b) en omega-karboksyl-, en omega-metoksykarbonyl- eller en omegå-etoksykarbonyl-alkanoylgruppe med 2 til 4- karbonatomer i alkanoyl-delen, c) en rettkjedet eller forgrenet alkoksykarbonylgruppe med 1 til 4 karbonatomer i alkoksydelen, d) . en alkylsulfonylgruppe med 1 til 2 karbonatomer i alkyldelen, eller en fenyl- eller p-toluyl-sulfonylgruppe, e) en benzoylgruppe eller f) en benzoyloksykarbonylgruppe,
R<3> er en benzylgruppe som eventuelt er substituert i kjernen med lavere alkyl, lavere alkoksy eller halogen,
X er en glycyl- eller alanylgruppe, og
Y er en enkeltbinding eller en gruppe av formel
hvor R<4> er en benzyl-, fenyl-, cykloheksyl-, cykloheksyl-metyl-, 4-hydroksybenzyl-, 4-hydroksycykloheksylmetyl-gruppe og m er 0 og den ved Y definerte aminosyre har L- eller D-konfigurasjon eller R<4> er hydrogen og.m er tallet 0, 1 eller 2,
samt deres salter med mineralsyrer eller oganiske syrer.
2. Peptidderivat ifølge krav 1, karakterisert ved at det er CH3~C0-Lys(c-Cbo)-Gly-Arg-pNA.AcOH.
3. Peptidderivat ifølge krav 1, karakterisert ved at det er CH30-C0-Lys(c-Cbo)-Gly-Arg-pNA.AcOH.
4. Peptidderivat ifølge krav 1, karakterisert ved at det er CH3.CH20-CO-Lys(c-Cbo)-Gly-Arg-pNA.AcOH.
5. Peptidderivat ifølge krav 1, karakterisert ved at det er CH3.CH2-CO-Lys(c-Cbo)-Gly-Arg-pNA.AcOH.
6. Anvendelse av peptidderivater ifølge krav 1 ved kvantitativ bestemmelse av enzymet Cj-esterase i et medium under påvisning av det frigjorte spaltningsprodukt R<1->H, hvor gruppen R<1> har samme betydning som i krav 1, med fotometriske,spektrofotometriske, fluorescensspektrofoto-metriske eller elektrokjemiske metoder.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH3051/83A CH653688A5 (en) | 1983-06-03 | 1983-06-03 | Peptide derivatives and their use as substrates for quantitative determination of enzymes |
| CH221484 | 1984-05-07 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO842218L NO842218L (no) | 1984-12-04 |
| NO166716B true NO166716B (no) | 1991-05-21 |
| NO166716C NO166716C (no) | 1991-08-28 |
Family
ID=25689812
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO842218A NO166716C (no) | 1983-06-03 | 1984-06-01 | Peptidderivater og anvendelse derav som substrater for kvantitativ bestemmelse av enzymer. |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4629695A (no) |
| EP (1) | EP0128118B1 (no) |
| AU (1) | AU566936B2 (no) |
| CA (1) | CA1253998A (no) |
| DE (1) | DE3484912D1 (no) |
| DK (1) | DK168574B1 (no) |
| ES (1) | ES8606946A1 (no) |
| IL (1) | IL71941A (no) |
| NO (1) | NO166716C (no) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5034317A (en) * | 1987-01-30 | 1991-07-23 | Polaroid Corporation | Enzyme controlled release system and organic conjugate reactant |
| US5989832A (en) * | 1995-04-21 | 1999-11-23 | Microcide Pharmaceuticals, Inc. | Method for screening for non-tetracycline efflux pump inhibitors |
| CN100591690C (zh) * | 2004-10-12 | 2010-02-24 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 固相肽合成 |
| CN109265373A (zh) * | 2018-11-03 | 2019-01-25 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种氨基酸类底物及其制备方法和用途 |
| LU500777B1 (en) | 2021-10-22 | 2023-04-24 | Marek Jedrzejczak | Air-water heat pump system with rotary defrosting unit and method for optimalization of the air-to-water heat pump operation |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2343034C2 (de) * | 1973-08-25 | 1984-08-23 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Tetrapeptide mit phagocytose-stimulierender Wirkung, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung |
| SE7801373L (sv) * | 1978-02-07 | 1979-08-08 | Kabi Ab | Lett spjelkbara substrat for kvantifiering av proteaser |
| US4217269A (en) * | 1979-03-23 | 1980-08-12 | Abbott Laboratories | Dipeptide chromogenic substrates |
| US4221706A (en) * | 1979-06-14 | 1980-09-09 | Abbott Laboratories | Chromogenic substrates |
| DE2936543A1 (de) * | 1979-09-10 | 1981-04-09 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Chromogene verbindungen |
| DE2945239A1 (de) * | 1979-11-09 | 1981-05-21 | Troponwerke GmbH & Co KG, 5000 Köln | Oligopeptide, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung in arzneimitteln |
| CA1161432A (en) * | 1980-02-12 | 1984-01-31 | Lars G. Svendsen | Tripeptide derivatives and their application in assaying enzymes |
| JPS5753446A (en) * | 1980-09-16 | 1982-03-30 | Torii Yakuhin Kk | Peptide derivative |
| AT369033B (de) * | 1981-02-02 | 1982-11-25 | Immuno Ag | Verfahren zur bestimmung der c1-esterase-inhibitor-aktivitaet von c1-esterase-inhibitor-haeltigen proben |
| US4406832A (en) * | 1981-09-03 | 1983-09-27 | Mallinckrodt, Inc. | Peptide-type substrates useful in the quantitative determination of endotoxin |
| DE3244030A1 (de) * | 1982-11-27 | 1984-05-30 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Chromogene verbindungen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
-
1984
- 1984-05-21 DE DE8484810246T patent/DE3484912D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1984-05-21 EP EP84810246A patent/EP0128118B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1984-05-28 IL IL71941A patent/IL71941A/xx not_active IP Right Cessation
- 1984-05-31 AU AU28902/84A patent/AU566936B2/en not_active Ceased
- 1984-06-01 CA CA000455630A patent/CA1253998A/en not_active Expired
- 1984-06-01 NO NO842218A patent/NO166716C/no unknown
- 1984-06-01 US US06/616,257 patent/US4629695A/en not_active Expired - Lifetime
- 1984-06-01 DK DK274984A patent/DK168574B1/da not_active IP Right Cessation
- 1984-06-01 ES ES533079A patent/ES8606946A1/es not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IL71941A0 (en) | 1984-09-30 |
| ES533079A0 (es) | 1986-05-01 |
| CA1253998A (en) | 1989-05-09 |
| AU2890284A (en) | 1984-12-06 |
| NO842218L (no) | 1984-12-04 |
| IL71941A (en) | 1987-08-31 |
| EP0128118B1 (de) | 1991-08-14 |
| EP0128118A2 (de) | 1984-12-12 |
| DK168574B1 (da) | 1994-04-25 |
| NO166716C (no) | 1991-08-28 |
| EP0128118A3 (en) | 1987-07-22 |
| US4629695A (en) | 1986-12-16 |
| ES8606946A1 (es) | 1986-05-01 |
| DE3484912D1 (de) | 1991-09-19 |
| DK274984A (da) | 1984-12-04 |
| DK274984D0 (da) | 1984-06-01 |
| AU566936B2 (en) | 1987-11-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Baudin | New aspects on angiotensin-converting enzyme: from gene to disease | |
| EP0004256B1 (en) | Easily split substrates for the quantification of proteases, a process for their production and a method for the quantification of proteases | |
| EP0110306B1 (de) | Chromogene Verbindungen, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung | |
| US4480030A (en) | Tripeptide derivatives and their application in assaying enzymes | |
| NO147212B (no) | Kormogent h.h.v. fluorescerende tripeptid for kvantitativ bestemmelse av proteolytiske enzymer | |
| US4137225A (en) | Novel chromogenic enzyme substrates | |
| NO135245B (no) | ||
| US4190574A (en) | Substrate for the quantitative determination of plasminogen activators | |
| CS199631B2 (en) | Method of producing new chromogen enzyme substrate | |
| US4428874A (en) | Tripeptide derivatives | |
| US4466919A (en) | Peptide substrates for mammalian collagenase | |
| US4568636A (en) | Tripeptide derivatives | |
| EP0019589B1 (de) | Tripeptidderivate und Verfahren zur Bestimmung von Enzymen mittels derselben | |
| Carmel et al. | Intramolecularly‐Quenched Fluorescent Peptides as Fluorogenic Substrates of Leucine Aminopeptidase and Inhibitors of Clostridial Aminopeptidase | |
| NO166716B (no) | Peptidderivater og anvendelse derav som substrater for kvantitativ bestemmelse av enzymer. | |
| JPH0360837B2 (no) | ||
| US4425428A (en) | Novel peptide and peptolide substrates for mammalian collagenase | |
| US4569907A (en) | Thiopeptolide substrates for vertebrate collagenase | |
| Tsunematsu et al. | Kinetics of Hydrolysis of N αBenzoyl-p-Guanidino-L-PhenylaIaiiine p-Nitroanilide by Trypsin | |
| US4596675A (en) | Novel thiopeptolide substrates for vertebrate collagenase | |
| NO155540B (no) | Nye tripeptidderivater, og anvendelse derav for kvantitativ paavisning av proteolytiske enzymer. | |
| Somorin et al. | New lysine chromogenic substrates for trypsin | |
| JPH0780902B2 (ja) | ペプチド誘導体 | |
| JPH0798838B2 (ja) | ペプチド誘導体 |