NO142480B - Fremgangsmaate ved undersoekelse av proever som kan inneholde mikroorganismer, og anordning for utfoerelse av fremgangsmaaten - Google Patents

Description

Nærværende oppfinnelse vedrorer en fremgangsmåte ved under-søkelse, av prover som kan inneholde mikroorganismer, hvor proven blandes med et dyrkningsmedium for disse mikroorganis-

mer og eventuelt en indikator, og blandingen inkuberes og undersakes deretter med hensyn til forekomsten av vekst.

Ved bestemmelse av forekomsten av mikroorganismer, slik som bakterier, i en prove har det hittil vært vanlig enten ved hjelp av en pipette å overfore en viss mengde av proven til en skål, helle på dyrkningsmedium ogrore blandingen for hån-

den for å fordele bakteriene eller fordele bakteriene på

I

overflaten av et fast dyrkningssubstrat. Deretter foretas inkubering og deretter undersøkelse med hensyn til forekomsten av vekst. Ved dyrkning av anaerobe mikroorganismer er man imidlertid tvunget til å sorge for at et anaerobt miljo frembrin-ges. Den vanligste måte å gjore dette på har vært at man etter at mikroorganismene er fordelt i dyrkningsmediet (og etter storkning av dyrkningsmediet som vanligvis består av en nærings-opplosning og agar) setter inn skålen i et lukket dyrkningskar, hvor man fjerner luftoksygenet, f.eks. med hydrogengass og en katalysator for dannelse av vann. Dette innebærer således en komplisert og dyr teknikk og utstyr, da forsoksfeil kan oppstå på grunn av kontakten med luften under omroringen. Dessuten er mange av de mikroorganismer man er interessert i sykdomsfrem-bringende, hvilket innebærer at risiko kan oppstå for laborato-riepersonaiet.

Formålet med oppfinnelsen er derfor å fremskaffe en fremgangsmåte ved bestemmelse av forekomsten av mikroorganismer, ved hvilken rutinen forenkles slik at relativt ufaglært personale kan klare den, komplisert utstyr ikke kreves, og risikoen for infeksjon av laboratoriepersonal reduseres og sikkerheten ved de oppnådde resultater okes.

Ifølge oppfinnelsen oppnås dette på en måte som karakteriseres ved at prøven og dyrkningsmediet i på forhånd bestemte volum hver for seg suges inn i et dyrkningskammer med avlangt tverrsnitt, idet tverrsnittets største lengde er vesentlig større enn tverrsnittets største bredde og med gjennomsiktige eller gjennomskinnelige vegger gjennom en åpning i en vegg i dyrkningskamret ved hjelp av en idyrkningskamret anordnet, forskyvbar vegg utformet som et med en stempelstang forsynt stempel og blandes i dette, hvoretter åpningen, om så ønskes eller kreves, lukkes, inkuberingen foretas, hvoretter undersøkelsen med henblikk på forekomsten av vekst foretas gjennom dyrkningskamrets gjennomsiktige eller gjennomskinnelige vegger.

• •«...

Mår såkalte ^engangs-sprøyter med vegger av gjennomsiktig eller gjennomskinnelig ikke giftig plast anvendes, Sean pa grunn av sprØytelegemenes sylindriske form avlesnin<g>en av antallet organismeansamlinger av og til bil vanskelig.

Slike sprøyter er videre ikke egnet for blandinger av prøven med et annet medium eller blanding av proven ftted et fortynnings-medium. Oppfinnelsen angår derfor også en sp&iell anordning som er spesielt egnet for gjennomføring av framgangsmåten iføl-ge oppfinnelsen. »

Anordningen ifølge oppfinnelsen karakterisere* ved at den omfatter a) et langstrakt dyrkningskammer med n&nst to gjennomsiktige eller gjennomskinnelige vegger som står Sot hver-

andre og en tredje vegg, som har en innsugnin&såpning for prøve og dyrkningsmedium, og hvilket kammftr har avlangt tverrsnitt, idet tverrsnittets største lengdefer vesentlig stør-re enn tverrsnittets største bredde, fortrinnsvis mer enn dobbelt så stor som denne, og b) en i dyrkningskamret&nordnet, forskyvbar vegg utformet som et med en stempelstang euer med et håndtak forsynt stempel.

Oppfinnelsen skal i det følgende beskrives urmer henvisning til '•V vedføyede tegninger, hvor

fig. 1 viser et brutt perspektivriss av en utførelsesform av anordningen ifølge oppfinnelsen,

fig. 2 viser et brutt sideriss av anordningenlifolge fig. 1

med påført beskyttelseshette,

fig. 3 viser et brutt riss ovenifra av anordningen ifølge fig.

fig. 4-6 viser en modifisert utførelsesformlav anordningen, hvor fig. 4 er et snitt av dyrkningskamret. P|g. 5 er et riss av stemplet, og fig. 6 er et riss av den åpnefpel av kamret som viser det indre av dette.

På figurene 1-3 vises et dyrkningskammer 1, som avgrenses av to, hverandre motstående gjennomsiktige eller gjennomskinnelige vegger'2, 3, en tredje vegg 4, som er forsynt méd eh'til"én spiss 5 uttrukket innsugningsåpning og"tb ytterligere"vegger

6, 7, som forbinder veggehé 2 og 3 "og ér gjenhomsiktige'eller gjennomskinnelige som disse, 'i kamrét 1 er éh forskyvbar vegg anordnet, hvilken er utformet som et med en stempelstang 8 forsynt stempel 9. For stemplets tetning mot innsiden av'veggene 2, 3, 6 og 7 er det anordnet én tetningspakning IO f.eks. av gummi,bg som går i" et spor 11 rundt stemplet .

Stemplets mot spissen 5 vendte ende er trukket ut til en tapp 12, som passerer inn i spissen 5. Fortrinnsvis er denne uttrukne del åv stemplet gjort av gjennomsiktig eller gjennomskinnelig materiale.

For å lukke inhsugningsåpningeh kan éh beskytte!seshette 13 anbringes på spissen 5. En O-ringstetning 14 er anordnet inne i hetten 13. Veggen 2 er fortrinnsvis gradert f.eks. slik som det fremgårav fig. 3.

Fortrinnsvis utformes overgangen mellom spissen<;>5 og det indre av kamret 1 slik at vinklen mellom åpningen (spissen) og kamret forårsaker turbulens (og dermed god omblanding) ved dyrk-ningsmediets innsugning i kamret 1.

Når den i figurene viste anordning ifolge oppfinnelsen skal anvendes ved dyrkning av anaerobe bakterier sorges det forst for at stemplet 9 er forskjbvet mot veggen 4, slik at tappen 12 fyller opp spissen 5, hvoretter spissen 5 fores ned i proven og onsket provemengde suges opp ved at stemplet 9 forskyves inn mot kamret. Deretter dyppes spissen 5 ned i smeltet bak-teriesubstrat med agar, til hvilken hensiktsmessig en indikator er tilsatt, og onsket mengde av dette suges inn i kamret ved at stemplet 9 forskyves ytterligere inn i kamret, hvorved som foran nevnt overgangen mellom spissen 5 og det indre av kamret 1 fortrinnsvis er utformet slik at god omblanding av prove og dyrkningsmedium oppnås. Deretter anbringes beskyttel- seshetten 13 på spissen 5 for å hindre lufttilgang, og anordningen hensettes ved en egnet temperatur for inkubering. Etter inkubering tas anordningen ut og undersokebe foretas med hensyn til forekomst av vekst ved at anordningen f.eks. holdes opp mot dagslyset fra et vindu eller mot en lyskilde, og forekomsten av organismeansamlinger studeres gjennom dyrkningskamrets gjennomsiktige eller gjennomskinnelige vegger.

Med "gjennomsiktige eller gjennomskinnelige" vegger forståes foran og i etterfølgende krav ikke bare glassklare vegger, men også vegger med en viss opasitet, hvilke imidlertid gir tilstrekkelig lystransmisjon for at de ved dyrkningen oppnådde mikroorganismeansamlinger skal kunne fremstå mot sine omgivel-ser når undersøkelsen utfores med en lyskilde i bakgrunnen.

Med aerobe mikroorganismer er det ikke som med anaerobe mikroorganismer så viktig å anvende en anordning, hvor stemplets mot spissen 5 vendte ende er trukket ut til en tapp.- I stedet kan det være hensiktsmessig å hule ut denne stempelende noe, slik at man ved innsugning får en luftpute inne i kamret oven-for blandingen av prove og dyrkningsmedium. Tappen kan imidlertid også utelates ved anvendelse for anaerobe mikroorganismer, hvorved dog spissen 5 bor fylles med f.eks. hydrogengass eller carbondioksyd. I de tilfeller hvor tappen er utelatt kan man f.eks. gradere spissen og gi denne et indre volum som er tilstrekkelig stort til å kunne oppta proven, hvorved en storre noyaktighet ved provens dosering kan oppnås.

I fig. 4 er dyrkningskamret 1 et hult, fortrinnsvis formsproy-tet legeme med rektanglært tverrsnitt av gjennomskinnelig plastmateriale, f.eks. polystyren, i den ene ende forsynt med en svakt konisk smalere del 15, som avsluttes i spissen 5. Den motsatte ende av kamret har et håndtak 16 på utsiden ay: kamret. Formålet med den smalere delen 15 er at man oppnår en mere noy-aktig bestemmelse av den provemengde som innfores i anordningen.

Fig. 5 viser stemplet 9, fortrinnsvis fremstilt som et form-sprbytet legeme, med samme ytre utformning som dyrkningskam rets indre utformning og forsynt med en smalere del 17 og en tapp 2 i stedet for spissen 5. Den andre ende av stemplet er forsynt med et håndtak 18. Stemplet kan fremstilles av et plastmateriale, f.eks. ekspandert HD-polyeten. Stemplet 9 er forsynt med et tetning 19.

Den smalere delen 17 og tappen 2 kan utelates når anordningen anvendes for aerobe forsok. En luftpute kommer da til å dannes over blandingen av prove og dyrkningsmedium, og denne luftpute kommer til å ha fri tilslutning til omgivelsen gjennom spissen 5. Det er vesentlig at blandingen i selve spissen 5 fjernes ved ett slag med stemplet 9. Fig. 5 viser at aksen gjennom spissen 5 er beliggende nær en av veggene. Ved denne plasering av spissen dannes^et skikt av luft over blandingen av prove og medium i anordningen umiddelbart under den horisontale vegg i dyrkningskamret 1.

Dyrkningskamrets tverrsnitt bor ha en storste bredde på hoyst 20 mm,'fortrinnsvis 5-12 mm, slik at man lett kan betrakte eventuell bakterievekst gjennom anordningen. Tverrsnittets storste lengde kan variere innen vide grenser. Vanligvis ligger det innen området 20-70 mm, fortrinnsvis 25-50 mm. Ved gradering av kamret fra 1 til 10 ml kan anordningen anvendes for fortyn-ning av proven til 1/10 for analyse. Ved dette behover ikke pi-petter å anvendes ved bakteriologisk arbeide.

For hurtigrutine på stedet kan anordningen ifolge oppfinnelsen leveres med dyrkningsmedium (buljong) allerede innfort i dyrkningskamret , hvorved den eneste foranstaltning som behoves å foretas på stedet er å suge inn en viss mengde prove i kamret. Ved dette kan det være hensiktsmessig å forsyne anordningen med en låseanordning, som kan låse stempelstangen i to stillin-ger tilsvarende de tilfeller hvor buljong henh. blanding av buljong og prove er suget opp i dyrkningskamret.

Hvis så onskes kan stempelstangen forsynes med styrearmer som ligger an mot kamrets vegger. Måten og anordningen ifolge oppfinnelsen kan anvendes i flere sammenheng, hvor en prove under- sokes vedrorende mikroorganismeinnhold. Eksempler på dette er analyse av næringsmiddelprover, drikkevann, badevann o.s.v.. Et annet eksempel er ved vurdering av den antimikrobielle effekt hos en substans eller sammenligning av en slik effekt mellom to eller flere substanser.

Claims (8)

1. Fremgangsmåte ved undersøkelse av prøver som kan inneholde mikroorganismer, ved hvilken prøven blandes med et dyrkningsmedium for disse mikroorganismer cg eventuelt en indikator,Gg blandingen inkuberes og deretter undersøkes med henblikk på forekomsten av vekst,karakterisert vedat prøven og dyrkningsmediet i på forhånd bestemte volum hver for seg suges inn i et dyrkningskammer med avlangt tverrsnitt, idet tverrsnittets største lengde er vesentlig større enn tverrsnittets største bredde og med gjennomsiktige eller gjennomskinnelige vegger gjennom en åpning i en vegg i dyrkningskamret ved hjelp av en i dyrkningskamret anordnet, forskyvbar vegg utformet som et med en stempelstang forsynt stempel og blandes i dette, hvoretter åpningen, om så ønskes eller kreves, lukkes, inkuberingen foretas, hvoretter undersøkelsen med henblikk på forekomsten av vekst foretas gjennom dyrkningskamrets gjennomsiktige eller gjennomskinnelige vegger.
2. 2. Anordning for gjennomføring av fremgangsmåten ifølge krav 1,karakterisert vedat den omfatter a) et langstrakt dyrkningskammer (1) med minst to gjennomsi-tige eller gjennomskinnelige vegger (2,3) som står mot hverandre og en tredje vegg (4), som har en innsugningsåpning (5) for prøve og dyrkningsmedium, og hvilket kammer har avlangt tverrsnitt, idet tverrsnittets største lengde er vesentlig stør-re enn tverrsnittets største bredde, fortrinnsvis mer enn dobbelt så stor som denne, og b) en i dyrkningskamret anordnet, forskyvbar vegg utformet som et med en stempelstang (8) eller med et håndtak (18) forsynt stempel (9).
3. 3. Anordning ifølge krav 2,karakterisertved at innsugningsåpningen er trukket ut til en spiss (5).
4. 4. Anordning ifølge krav 3,karakterisertved at stemplets mot åpningen vendte, ende er trukket ut til en tapp (12) som passer inn i spissen (5), hvorved i det

   minste den til en tapp uttrukne del av stemplet (9) er utfort av et gjennomsiktig eller gjennomskinnelig materiale.
5. 5. Anordning ifolge noen av kravene 2-4,karakterisert vedat i det minste en av kamrets gjennomsiktige eller gjennomskinnelige vegger er gradert .
6. 6. Anordning ifolge krav 3 eller 4,karakterisert vedat den også omfatter en beskyttelseshette (13) bestemt til å anbringes på den til en spiss 6) uttrukne innsugningsåpningen.
7. 7- Anordning ifolge krav 3,karakterisertved at overgangen mellom innsugningsåpningen og kamrets indre er utformet slik at turbulens oppnås ved provens og dyrk-ningsmediets innsugning i kamret.
8. 8. Anordning ifolge krav 3,karakterisertved at spissen (5) er gradert og har et indre volum som er tilstrekkelig stort til å kunne oppta proven.