NL8300369A - Werkwijze voor de bereiding van 3-enolethers van 11beta-hydroxy-delta4-pregneen-3-onen en derivaten daarvan. - Google Patents

Description

t _ ϊ 3 * C !» . 4

Werkwijze voor de bereiding van 3-enolethers van 11 (3-hydroxy-A - pregneen—3-onen en derivaten daarvan.

De uitvinding heeft betrekking op een 4 werkwij ze voor de bereiding van 3-enolethers van 11g-hydroxy-A -pregneen-3-onen en derivaten daarvan. In het bijzonder heeft de uitvinding betrekking op een werkwijze voor de bereiding van 3-enol- 4 5 ethers van 3-oxo-A -11-hydroxysteroide verbindingen door het 3-oxo- Δ^-11-hydroxysteroide te laten reageren met triethylorthoacetaat in aanwezigheid van een aanzienlijke hoeveelheid ethanol. Deze reactie draagt bij tot een nieuwe werkwijze voor de bereiding van 6-halogeen-A^’^-pregnadienen en Δ^’^’^-pregnatrienen, in het bij- 14 6 .

10 zonder de 6-ehloor-A * * -pregnatrieen-11,17a.21-triol-3,20-dionen en de overeenkomstige 21-acetaten.

Bij de bereiding van de actieve steroide verbindingen ten gebruike als b.v. anti-inflammatoire geneesmidde-len is het dikwijls nodig am uit te gaan van een gemakkelijk ver-15 krijgbare verbinding en daama een aanmerkelijk aantal trappen uit te voeren, waarbij deze trappen kunnen berusten op het laten reageren van een groep van de verbinding onder vorming van een bescher-mingsgroep en daama een andere groep van de verbinding als gewenst te laten reageren. Door deze methode is een grote reeks trappen 20 dikwijls nodig om het gewenste produkt te verkrijgen en in iedere trap ontstaat een zeker verlies aan opbrengst, die, genomen over de verschillende trappen, kan oplopen tot een aanmerkelijk en kostbaar verlies aan opbrengst voor het gehele proces. Derhalve zijn de onderzoekers op het gebied van de steroidechemie voort-25 durend aan het werk om doelmatige reactieschema’s te ontwikkelen om de totale opbrengst te verhogen door het aantal trappen dat nodig is voor een reactiereeks te verminderen, door de opbrengst voor een bepaalde trap te verhogen of beide. De totale opbrengst kan worden verbeterd hetzij door een werkwijze te verschaffen waar-30 in vrijwel al het uitgangsmateriaal tot reactie wordt gebracht onder vorming van het gewenste produkt, of nevenreacties zo gering 8300369 2 v i y ·» mogelijk worden gehouden.

Een belangrijke trap in vele reactie-4 6 schema’s voor de bereiding van 6-halogeen-A * -pregnadieen of 14 6 Δ ’ * -pregnatrieen berust op de omzetting van een ”cortisol-ach- 4 5 tige" verbinding met een 3-οχο-Δ -groep in een enolether (d.w.z.

3 5 de vorming van een 3-alkoxy-A ’ tussenprodukt) door het 3-keto- 4 Δ -steroide te laten reageren met een korte keten alkylortho-formiaat in een geschikt oplosmiddel, zoals dioxan in aanwezigheid van een znre katalysator, zoals p-tolueensulfonzuur, Wanneer men 10 uitgaat van een gemakkelijk verkrijgbare verbinding zoals cortisol (hydrocortison; 1Τβ,17a, 21-trihydroxy-3.20-dioxopregn-4-een), die een reactieve hydroxygroep op de 21- en Ιΐβ-plaats bevat, is vroeger echter reeds aangetoond, dat het de voorkeur verdient om eerst het cortisol (weergegeven door formule 1) te laten reageren 15 met formaldehyde en methyleenchloride in zoutzuur onder vorming van een di-methyleendioxo-(BMD) verbinding als weergegeven door formule 2 in schema A. Zie b.v. de Amerikaanse octrooischriften 2.888.456 en 2.888.457.

0m dan de vorming van een Δ^ ^ derivaat 20 te voorkomen tijdens de daaropvolgende reactie met het korte keten alkylorthoformiaat in zuur door dehydrateren van de OH op de 113— plaats en de H op de 9-plaats, wordt de 11β-0Η groep eerst geoxy-deerd met b.v. chroomzuur in zwavelzuur in dimethylformamide (DMF) volgens schema B.

25 De verbinding met formule 3 wordt dan behan- deld met het korte keten alkylorthoformiaat en zuur onder vorming van de gewenste enolether met formule 4 die dan verder behandeld wordt naar behoefte volgens schema C, waarin R een korte keten alkylgroep is.

30 In Amerikaans octrooischrift 3.082.224 is voorgesteld om het dehydrateringsprobleem op te lossen door een cortisol of een cortisol 21-ether te laten reageren met een korte keten alkylorthoformiaat in een oplosmiddel.dat uitsluitend uit het overeenkomstige korte keten alkanol en een zure katalysator. Bij ge-35 bruik van deze methode kan naar gesteld de dehydratering worden ver-minderd tot minder dan 10 % en de 3-enolether kan worden verkregen 8300369

* - I

3 * in. een opbrengst van 65-90 %.

Een ander octrooischrift dat de vorming van de tussenprodukt 3-enolether van het bovengenoemde type be-spreekt, is Amerikaans octrooischrift 3.087.927. In deze reeks 5 reacties was het uitgangsmateriaal b.v. 16-hydroxycortisol of 16- hydroxycortison. Dit octrooischrift beschrijft, dat deze materialen tot reactie kunnen worden gebracht in aanwezigheid van een mine-raal zuur met een ortho-ester met de formnle R^C (OR^)^3 waarin R^ waterstof of een korte keten alkylgroep (met 1-3 koolstofatomen) is 10 en R^ een korte keten alkylgroep, zoals een methyl of ethylgroep is, waardoor als reactieprodukt een verbinding met formnle 5 wordt verkregen. Meer in het bijzonder vertonen de voorbeelden de reactie die wordt uitgevoerd in dioxan met een kleine hoeveelheid methanol en zwavelznur met trimethylorthoformiaat. In de beschrijving van 15 dit octrooischrift wordt geen melding gemaakt van het dehydraterings- 'probleem als besproken in Amerikaans octrooischrift 3.082.224.

Derhalve doet de stand van de techniek ver- 4 onderstellen, dat 11-hydroxy-A -pregneen-3-onen tot reactie fcunnen worden gebracht onder vorming van de overeenkomstige enolether door 20 gebruik te maken van: (1) trialkylformiaat, met behulp van een over-wegende hoeveelheid van een oplosmiddel, zoals dioxan of een onder-geschikte hoeveelheid van de overeenkomstige korte keten alkanol (d.w.z. trimethylorthoformiaat met methanol of triethylortho-formiaat met ethanol), (2) met behulp van triethylorthoacetaat met 25 een overwegende hoeveelheid van een oplosmiddel, zoals dioxan met een ondergeschikte hoeveelheid ethanol, of, (3) met behulp van tri- ethylorthoformiaat met ethanol als enig oplosmiddel.

In elk van deze gevallen wordt een zure katalysator gebruikt om de reactie met de gewenste snelheid te laten 30 verlopen. Men heeft gevonden, dat in het eerste geval het hoofdpro-dukt het a'' } dehydrateringsprodukt is, in het tweede geval de reactiedeelnemers niet reageren en in het derde geval er enige dehydratering plaats vindt en wel tussen de 11- en 9-plaats en de reactie niet tot voltooiing loopt. Derhalve zijn in alle uit de stand 35 van de techniek bekende reacties de opbrengsten van de gewenste enolether gering en in een lange reeks trappen wordt deze opbrengst na-tuurlijk overgedragen en leidt tot een vermindering van de totale produktie van het gewenste eindprodukt.

We hebben nu gevonden, dat door gebruik te 40 maken van de werkwijze volgens de uitvinding voor het vormen van een 8300369 1»

V

« * » λ ... U - ....

' 3~enolebher uit een 3-οχο-Δ -113-hydroxysteroide fie volgende voordelen ' vorden verkregen: 1) Dehydraterir.g on de 0( 11 )plaats vordt vri.iwel. volledig vermeden; 5 2) V'egens T) bestaat er geen behoefte om eerst de 11-hydroxygroen te oxyderen tot een- oxogroep or. redenen van bescherning; 3) De opbrengst van de enolether vordt ver- « lioogd (ten dele tengevolge van 1 en 2 hierboven, en ook gedeelteli.ik 10 tengevolge van de neiging van de reactie van de verkwijze volgens de uit-vinding of tot voltooing te lopen) ·, * H) Goedkope geoxydeerde koolvaterstofhulp-oplosniddelen zoals glymen kunnen samen met ethanol vorden gebruikt; 5) Bij het laten reageren van steroiden met 15 17ct,21-hydroxygroepen is het niet nodig om deze groepen te beschermen via BMD of andere methoden; en ' · 6) De bovenstaande 5 voordelen dragen alien hi j tot een eenvoudigarverkvi.ize dan tot nu toe in de stand van de techniek bekend.

20 Het voornaamste oogmerk van de uitvinding is een verkvi.ize voor de bereiding van 3-enolethylethers, die bruikbaar zi.in als tussennrodukten bi.i de bereiding van therareutisch verkzame 6-halogeen-1 1* £ Δ 1 5 -Dregnatrieen-3-onen. Ook beoogt de uitvinding een verk.v1.7ze te

U

verschaffer. voor de bereiding van o-haloaeen-A -•Dregr.een-3~or.en die even-^ 25 eens bruikbaar zi.in als tussenprodukten voor de bereiding van deze 6-halogeen-A^,^,^-pregnatrieen-3-onen. Ook beoogt de uitvinding een bijzonder doelmatig totale verkvi.ize te verschaffen voor de bereiding van 6-halogeen-A^’^-pregnadieen-3-onen en de 6-halogeen-A * 5'-pregnatrieen- .

. . 3-onen.

30 In de eerste plaats heeft de uitvinding betrekking op een verkvi.ize voor de bereiding van 3-enolethers van 11S-hydroxy-A^-pregneen-3-onen en derivaten daarvan, met het kenmerk, dat men een verbinding net formule 6, vaarin R vaterstof of een OH, OR^ of 00(0)3^ groep is, R^ vaterstof of een groep OH of 0C(0)F^ is, water-35 stof of een n- of ?—nethylgroen is, een korte keten alkylgroep met 1-6 koolstofatoner. of een korte keten alkvlester net 1-6 koolstoiatonen is, 8300369

V

.... 5 ....

V

* * een korte keten alkvlgroep net 1-6 koolstofatonen is, X waterstof, fluor, chloor of broom is en en R0 tezanen een groep met fornule 7 kunnen vornen, vaarin en R,_ onafhankeli.ik een V.oolvaterstofgroep met 1 —it koolstofatonen zi.in, laat reageren net triethvlorthoacetaat in aan-5 wezigheid van een katalytische hoeveeiheid van een sterk zuur in een ODlosmidael, dat voor tenninste Ao sew.?; of-meer uit ethanol bestaat en voor 6o gev.~ of minder uit een daarnee verenigbare geoxydeerde vloei-bare koolwaterstof. Bij voorkeur is bet oplosmiddel een 50/50 nengsel van Φ ethanol en glyme en de katalysator is een sterk organisch zuur, zoals 10 p-tolueensulfonzuur of trifluorazi.jnzuur. De werkwi.ize is in het bijzonder bruikbaar voor cortisol en cortisol-21-alkylesters, zoals het 21-acetaat.

De verkregen 3-enolether wordt daarna gehalo- k geneerd, bid voorkeur gechloreerd, on het overeenkonstige oS-halogeen-Δ - pregneen-3-on te vornen, dat op zijn beurt behandeld' wordt on een 6-halogeen- 15 3-enolether te vornen, die daarna wordt onaezet in een 6-halogeen-A1 1 ^ 6 (o? Λ 1 5 )-pregnadieen (of -trieen)-3-on, zoals hieronder besproken.

De voming van de 3-enolether Het is belangrijk on triethvlorthoacetaat als reagens bi.j de werkwi.ize volgens de uitvinding te gebruiken. Tri ethyl ortho-20 acetaat verdient de voorkeur boven het overeenkonstige triethylortho-forniaat . "riethylorthoacetaat wordt weergegeven door de fornule: CH.C(OCK.CH-),, terwijl triethylorthoforniaat in het algeneen wordt ^ J C. J i weergegeven door de fornule:

Het chenisne zoals de bereiding en de algenene 25 reacties van de alifatische orthoesters, worden besproken in het boek "'The Chemistry of Aliphatic Orthoesters", An. Chen. Soc. Monograph van H.W. Post, uitg. Rienhold. In het algeneen kan het triethylorthoacetaat volgens verschillende method en worden bereid waarvan de twee populairste worden aangegeven door de twee vergelijkinyen weergegeven in schema D.

3D.' Verdere bereiding vir.dt nen op biz. kQ van de bovengenoem.de monografie. De bereidingswi.izen vaarin de reagentia volgens de eerste vergeli.jkins van schema D worden gebruikt, vindt nen in een art ike 1 in J.A.C.3. 5C_, biz, 516 (1928) van P. Sah.

Ofschoon in theorie de hoeveeiheid triethvl--35 orthoacetaat die nodig is on de 3-enolether te vornen door reactie net het 3-oxo-A**-3teroi&e 1 nol orthoacetaat hedraa^t i>er ieder mol steroide, Θ\ 8300369 *· ' ί 6 , blijkt, weger.s de bi.izondere aard van de reactie,. dat tenminste 2 mol triethylorthoacetaafc per mol steroide nodig zijn on de reactie fee laten verlopen en bi.i voorkeur worden tenminste 3 mol orthoaeetaat uer mol steroide gebruikt. ’Tiet.meer dan een 5:1 verhouding vordt gebruikt, omdat 5 een hogere verhouding niet leidt tot enig bijzonder voordeel vat betreft de reactiesnelheid en andere omstandigheden.

. Om de werkwijze volgens de uitvinding genoeg-zaam te laten verlopen is het belangrijk dat het gebruikte oplosmiddel- t systeem een systeem is vaarin een aanaerkelijke heeveelheid van het oplos-10 middel bestaat uit ethanol, d.v.z. dat tenminste en bi,i voorkeur oinstreeks 50 .gew.% van het oplosmiddelsysteem uit ethanol bestaat. Men kan tot 100$ ethanol gebruiken, ofschoon het de voorkeur verdient om een hulpoplosmiddel te gebruiken, zoals hieronder besproken. Ook dient het systeem vrijvel watervrij te zijn. Andere verenigbare oplosmiddelen die 15. gebruikt kunnen worden in het systeem, zijn oplosmiddelen die vrijelijk mengbaar zijn met ethanol in alle verhoudingen. Tot deze oplosmiddelen behoren geoxydeerde koolvaterstoffen, zoals b.v. alifatische ethers en cyclische ethers, zoals glycolethers, dioxan, tetrahydrofuran en tetra-hydropyran.. Bi.izonder bruikbaar zijn in dit opzicht de gedimethyleerde 20 polyethvleenglycolen veergegeven door de formule’: OH^O( CH^CHO) , vaarin n een geheel getal is van 1—U. Deze verbindingen worden in het algemeen aangeduid als "glymen", d.v.z. glyme (n = 1), diglyme (n = 2}s triglyme (n = 3) en tetraglyne (n = *0. Ieder van deze verbindingen kan alleen of in combinatie vorden gebruikt als een verenigbaar hulpoplos-25 middel met ethanol bi j de verkwi.ize volgens de uitvinding. Een bijzonder bruikbaar mengsel bestaat uit 50 gew.£ ethanol en 50 gew./? glyme.

' Verder is het nodig om een katalytische hoeveelheid van een sterk organisch zuur of zvavelzuur als katalysator op te nenen voor de verkwijze volgens de uitvinding. Geschikte organische .30 zure katalysatoren zijn b.v. n-tolueensulfonzuur (?T3A), 2,^-dinitro-oenzeensulfor.zuur, en trifiuorazi.inzuur.

3i,i voorkeur gebruikt men ΡΪ3Λ of trifiuor-azijnzuur. Een katalytische hoeveelheid van de katalysator is de hoeveelheid die nodig is om de reactie met een redelijke snelheid te laten 35 verlopen. In het algemeen beiraagt deze hoeveelheid 0,1-20 gew./?, betrokken on het totale gevicht van het steroide en bij voorkeur bedraagt deze onge- % 8 3 0 0 3 6 9 ‘ * . „7 _ · ' veer 1- gev.S.

' De reactieonstar.digheden vaaronder de werk- vi,ize volgens de uitvinding vordt uitgevoerd zi.hi niefc kritisch, maar si.ir. in het algeneen uit de stand van de techniek hekend. "o lint de 5 tenperatuur nsestal in het tra.ieet van 0-*00°C naar oi.i voorkeur in het tra.ieet van. 20—Vo°C ondat een hogere tenperatuur veelal de totals oobrengst vermindert tengevolge van afbraakverliezen. De druk op het reactiemengsel kan atnosferisch, verlaagd of verhoogd zi.in, near de verkvi.i ze wordt in het alger.een uitgevoerd onder atnosferische onstandigheden. De ti,id die 1CF nodig is voor de verkvijze volgens de uitvinding on vri.ivei tot voltooiing te verlopen hangt sanen net”de reactietenneratuur omdat de reactie bij lagere tenperatuur trager verloopt, raaar ligt in het algeneen tussen 5 min. en 3 uur, ofschoon bi.i 20-ko°C niet meer dan een half uur voor de gehele reactie nodig is om te verlopen.

T5 Het reactievat dat gebruikt kan vorden bij de werkvi.ise volgens de uitvinding kan ofvel een vat zi.in voor een discontinu proces of een vat voor een continu proces. Bi.i voorkeur is het vat een gevoon vat voor een discontinu proces, vaarin de verschillende naterialen die nodig zi.in voor het uitvoeren van de verkvijze volgens de uitvinding 20 worden gebracht en vaarbij de materialen in reactief contact net elkaar vorden gebracht, zodat de reactie kan nlaatsvinden.

_ De steroiden waaron de verkvijze volgens de

U

uitvinding kan vorden toegepast zi.in de 1 T-hydroxy-Δ -pregneen-3-onen, die dehydratering kunnen. ondergaan tussen de 11- en 9-koolstofatonen van 25 de steroidestructuur, en derhalve zi.in de steroiden, die hruikbaar zi.in bi.i de verkvi.jze volgens de uitvinding de verbindingen met formule 6, vaarin R waterstof, een hydroxygroep, een korfce keten alkvlether met 1-6 .koolstofatomen of een korte keten alkyiester net 1-6 koolstofatonen is, waterstof of een groep OH of 0C(0)R^ is, Rg waterstof of een S- of -3D α-methylgroen is, een korte keten alkylgroep met 1-6 koolstofatonen is en-recht of vertakt is, R^ en tezanen een groep met formule 7 kunnen vormen, vaarin en R^ onafharkeli .ik waterstof of een koolvaterstofgroeo net’ 1-¾ koolstofatonen zi.in, X waterstof, fluor, chloor of broon is.

De werkvi.i ze volgens de uitvinding is in het 35 bi.i zonae r hruikbaar voor de vorming van 3-enolethers die tassenprodukten zi.in voor de vorming van achieve steroids verbindingen die anti-inflnama- /r '^..

H ’ '^4 **Γγ 8300369 « > * . * _ 8 ’ toire, anti-androgene, oestrogene, of andere werking vertoner., zoals.

' de ver1:ingen verneld in Amerikaans octrooischrift 3.232.9^5.

Zo behoren tot de verb ir.dingen vaarvoor de werkwi.ize volgens de uitvinding bi.izonder geschikt is voor het vornen 5 van de overeenkoms tige 3-enolethvlether de volgende: 113,17a-dihydroxy progesteron; 110,17a-dihydroxy-160-nethyl progesteron; 110,17a-dihvdroxy-16a-nethvl-progesteron; / 110,17a-dlhydroxy-l6a-i>iethyl-progesteron-17-acetaat; 10 corticosteron (110,21-dihydroxy-3,2O-dioxopregn-H-een; corticost ero n-21-acetaat cortisol (113,17a,21-trihydroxy-3,20-dioxopregn-k-een); l6a-hydroxy-cortisol-16,17-acetonide 16a-hydroxy-cortisol-16,17-acetonide-21-acetaat 15 cortisol-17«,21-diacetaat 160-methyl-cortisol; 16a-raethy1-cortisol; 16a-methyl-cortisol-21-acetaat; cortisol-21-nethylether; 20 l6a-methyl-cortisol-21-hexylether; l6a-methyl-cortisol-21-acetaat; l6a-nethyi-cortisol-21-pivalaat; cortisol-21-acetaat; cortisol-21-propionaat; 25 cortisol-21-butvraat, en de overeenkomstige 6-halogeenderivaten van bovengenoer.de verbir.dingen, zoals de 6-broom, 6-fiuor err 6-chlocrderivaten, bi.i voorkeur de chloor en fluorderivaten, zoals b.v. · 6a-chloor-cortisol · δα-fluor-cortisol 30 6a-?luor-16a-hydroxy-corti sol-1 6, 17-acetcni de

Sa-chlocr-l6n-hydroxy-corti sol-1C,17-acetonide 6a-fluor-16a-netby1-cortisol 6a-ch.lcor-l6a-r.ethyl-cor ti sol 6?i-fluor-l6a-r.ethy l-cortisol-21 -acetaat 35 6a-ckiopr-1<D a-r.et’'.yi-oortisol-21 -acetaat

Opgemerkt dier.t te vorden, dat de verk.vi.ize (Du*Si^ ♦ 8300369 3 % J. .

* volgens de uitvinding voor het bereiden van een 3-enolether gebruikt kan worden met b.v. een 3-oxopregn-4-een dat op de 6a-plaats onge-substitueerd is of op de 66-plaats halogeen-gesubstitueerd is. Wan-neer de werkwijze in het laatste geval gebruikt wordt, wordt het 5 δβ-halogeensteroide in het oplosmiddel gebracht bij kamertempera-tuur in aanwezigheid van de zure katalysator, maar in afwezigheid van triethylorthoacetaat gedurende een tijd die voldoende is om het 6a-halogeensteroide te vormen (in het algemeen 10 min. tot 1 uur, bij voorkeur 20-40 min. bij kamertemperatuur). Daarna wordt het 10 triethylorthoacetaat in reactief contact gebracht met het 6a-halo-geensteroide in het oplosmiddel onder vorming van de 3-enolether.

Wanneer de uitgangssteroldestructuur een hydroxygroep bevat op zowel de 21- als 17-plaats resulteert een 3-enoletherstructuur volgens formule 8, waarin X en de bovenstaan-15 de betekenis hebben. De aanwezigheid van een dergelijke structuur is niet sehadelijk, omdat de 17,21-orthoester gedeeltelijk gehydro-lyseerd wordt tijdens de daaropvolgende trappen, zoals chlorering of bromering, en volledig kan worden teruggevoerd tot de 17,21-dihydroxyverbinding door transesterificatie of onder basische am-20 standigheden.

Een dergelijke reactie gebruikt echter geen aanvullend triethylorthoacetaat en om economische redenen verdient het de voorkeur dat een alkylester, b.v. acetaat, op de 21-plaats zit.

25 Een ander aspect van de uitvinding is een werkwijze voor de bereiding van 6-halogeen-A^-pregneen-3-on tussen-produkten door eerst de enolether te vormen zoals hierboven bespro-ken en daarna op de 6-plaats te halogeneren.

Halogeneren, d.w.z. bromineren, bij voor-30 keur chloreren, kan worden uitgevoerd met alle bekende methoden am op de 6-plaats te halogeneren. Halogeringsmiddelen zijn b.v. N-chloor-succinimide, N-broomsuccinimide en N,Nr-dichloorhydantoine.

Bij het uitvoeren van de halogeneringstrap wordt de 3-enolether eerst geiscleerd van de reactiedeelnemers en de 35 oplosmiddelen in de eerste trap, daarna wordt het halogeneringsmid-del in reactieve aanraking gebracht met 3-enolether in een geschikt inert oplosmiddel onder omstandigheden die voldoende zijn om de vorming van de 6-halogeen-&4-verbinding te veroorzaken. Een geschikljinert oplosmiddel is een oplosmiddel dat niet reageert met het 3-enolether of het halogene- 8300369 10 __ * ringsraiddel op een vijze die nadelig ,is voor de reactie. Bruikbare. oplos- , middelen zijn b.v, geoxydeerde koolvaterstoffen, zoals tetrahydrofuran, • * dioxan en diethylether, aceton, azijnzuur of mengsels daarvan. Bij voorkeur vordt de reactie uitgevoerd onder neutrale omstandigheden, d.v.z. bij pH 5 7 en bij een temperatuur in het traject van -5°C tot +25°C, bij voorkeur rond 0°C. .... * .

Meer in het bijzonder vordt de halogenering uitgevoerd door de enolether te laten reageren met dimethyl-N^N’-djchloor- i hydantoine in een gebufferde acetonoplossing bij een temperatuur van 10 -5°C tot +5°C gedurende 60 min.

Volgens nog een ander aspect van de uitvinding een. · 1* 6 verschaft deze /werkvijze voor de totale synthese van o-halogeen-Δ ’ -pregna- dieen-113,17a,21-triol-3,20-dionen en.6-halogeen-A* J^-pregnatrieen-113, 17a,21-triol-3,20-dionen, in het bijzonder de 6-chloorverbindingen, be- 15 schreven in Amerikaans octrooischrift 3,.232.9^5. Zowel de dienen als de trienen bezitten anti-inflammatoire verking met een minimum aan zoutreten- tie. De verkvijze is ook brulkbaar voor het bereiden van verbindingen uit de t6a,17a-acetonidereeks en andere waarbij de hierboven vermelde uitgangs- verbindingen vorden gebruikt.

20 In ruime zin kan de totale synthese volgens de uitvinding vorden beschouvd aan de hand van bijgaand reactieschema E en onderstaande samenvatting.

(1) De eerste trap berust op het veresteren van het uitgangssteroide met formule 9 (vaarin en de bovenstaande 25 betekenis hebben) op de 21-hydroxyplaats onder vorming van de overeenkom-stige 21-alkylester (formule 10). ' . (2) De 21-alkylester (formule 10) laat men daarna reageren volgens de voornaamste variant van de werkwijze volgens de · uitvinding met triethylorthoacetaat in ethanol en bij voorkeur glyme met 30 een zure katalysator onder vorming van een 3-enolether als veergegeven door formule 11.

• ' (3) De 3-enolether (formule 11) vordt op t zijn beurt gehalogeneerd, b.v. gechlorineerd of gebromineerd, onder vor- , k ' ming van b.v. een 63-chloor-A -pregneen-3-on met formule 12.

'35 (U) De structuur met formule 12 laat men daarna reageren met triethylorthoacetaat in aanvezigheid van een zure kata- 8 3 0 0" 3 6 9 _ 11 _ lysator in ethanol en bij voorkeur glyme onder vorming van een verbin-ding met formule 13» een enolether, (5a) .De 3-enolether (formule 13) kan men 1 U 6 daarna behandelen onder directe vorming van Δ ’ 1 -pregnatrieen (formule 5 15) of (5b) De 3-enolether met formule 13 laat men k 6 , eerst reageren onder vorming van een Δ ’ -pregnadieen met formule 1¾.

U g (5c) Het Δ * -pregnadieen met formule tU vordt op 2ijn beurt gedehydrogeneerd met een op zichzelf bekende methode 10 en vel op de 1-plaats onder vorming ran het overeenkomstige Δ * * -pregnatrieen met formule 15.

(6a) Het Δ^’^-pregnadieen kan men dan behandelen om de 21-alkylester te vervijderen en de overeenkomstige 21-hydroxyverbinding (formule 16) te vormen, vaarin Z een dubbele binding is, 15 of (6b) de verbinding met formule 1¼ vordt behandeld onder vorming van een verbinding met formule 16, vaarbij Z een enkelvoudige binding is, die op zijn beurt kan vorden omgezet in het Δ1’^’^-pregnatrieen.

20 Een bespreking van elk van deze trappen van de totale synthese volgt hieronder: (1) In de eerste trap vordt een verbinding veergegeven door formule 1^, bij voorkeur cortisol, veresterd onder vor-mihg van een 21-korte keten alkylester met 2-h koolstofatomen in de ester- 25 groep. Dit kan geschieden volgens ieder uit de literatuur geschikte methode voor het veresteren op de 21-plaats. In het algemeen geschiedt dit door reactie van. een korte keten alkylanhydride in een geschikt oplos-middel, b.v. de reactie van cortisol met azijnzuuranhydride in pyridine bij een temperatuur beneden 30°C. De reactie is schoon en volledig en 30 vormt een verbinding die vordt veergegeven door formule 10, die bij voorkeur cortisol-21-acetaat is. Propionzuuranhydride of boterzuur-anhydride kunnen in plaats van azijnzuuranhydride worden gebruikt.

(2) In de tveede trap vordt de verkregen 21-ester uit trap (1) eerst geisoleerd en daarna tot reactie gebracht met 35 triethylorthoacetaat volgens het voornaamste kenmerk van de verkvijze volgens de uitvinding zoals hierboven besproken om de overeenkomstige s % 8300369 12 * 3-enolethylether te vormen als veergegeven door formule 11. Bi,i voorkeur - . is formule 11 de 3-enolether van cortisol-21-acetaat.

Ofschoon het de voorkeur verdient om eerst een verbinding met formule 9, b.v. cortisol, te laten reageren met azijn-5 zuuranhydride ora het overeenkomstige 21-acetaat te vormen, kan men de verbinding met formule 9 ook van het begin af l-aten reageren met triethyl-orthoacetaat zonder dat men behoeft te gaan door de tussentijdse vorraing van het 21-acetaat. Door een verbinding raet fornule 9 te laten reageren t raet triethylorthoacetaat vordt een kleine hoeveelheid, d.v.z. 10-15% van 10 een tussenprodukt, 17,21-orthoester, gevormd, tezaraen met de enolether raet formule 11, vaarin R vaterstof is. De aanvezigheid van de 17,21-orthoester is niet schadelijk voor de totale reactie, omdat deze in de daaropvolgende chloreringstrap onder de zure omstandigheden gehydrolyseerd vordt. Omdat echter de vorming van de 17,21-orthoester gepaard gaat met 15 reactie raet aanvullend triethylorthoacetaat en omdat de reactie van een verbinding zoals cortison met azijnzuuranhydride in pyridine zo schoon is en de vorming van de overeenkomstige 3-enolethylether volledig en snel is in trap 2, verdient het de voorkeur om eerst de 21-ester te vormen alvorens deze te laten reageren met het triethylorthoacetaat. Deze voorkeursroute 20 is derhalve in het reactieschema veergegeven.

(3) Ha het isoleren van de 3-enolether (formule 11) vordt deze gehalogeneerd om een 6-halogeenverbinding te vormen zoals veergegeven in formule 12. De halogeneringstrap is ofvel een chlorerings- of een bromeringstrap zoals hierboven besproken.

25 (H) De door formule 12 veergegeven verbinding is een ββ-halogeen-gesubstitueerde verbinding. Alvorens deze tot reactie kan vorden gebracht met triethylorthoacetaat om doelmatig een 3-enolether te vormen zoals veergegeven door formule 13, moet het halogeen vorden . omgezet in een 6ct-halogeen. Dit geschiedt door de ββ-gesubstitueerde ver-'30 binding (formule 12) in een inert oplosmiddel te brengen bij kamertempera-tuur (20-25°C), daar men een kleine hoeveelheid van een zure katalysator toevoegt en de temperatuur gedurende 1 uur op minder, bi.i voorkeur 30 min. of minder te handhaven. Bi.i voorkeur vordt dit uitgevoerd in een oplosmiddel, zoals glyme in aanvezigheid van 1 gev.% of minder van een sterk 35 organisch zure katalysator, zoals trifluorazi^nzuur of p-tolueensulfonzuur. De omzetting in de 6a-halogeenverbinding is in minder dan 1 uur voltooid,.

^ 8 Γθ 0 3 6 9 * ( . . t3 ....

in het algemeen in minder dan een half uur. Daarna worden ethanol en triethylorthoacetaat aan het reactieiaengsel toegevoegd en laat men het reactiemengsel reageren volgens hSt voornaanste kenmerk van de uitvinding teneinde de 3-enolether als weergegeven door formule 13 te vormen.

5 Na het isoleren kan het tussenprodukt met formule 13 dan worden omgezet in het gewenste eindprodukt volgens ver-schillende methoden.

(5a) De verbinding als weergegeven door 1 U 6 formule 13 kan men direct laten reageren onder vorming van het Δ ’ 1 - tO pregnatrieen met formule 15. In een eentrapsmethode kan men de verbinding met formule 13 b.v. laten reageren met 2,3-dichloor-k,5-dicyaanbenzo- chinon (DDQ) en een in wezen watervrij geschikt zuurstofbevattend kool- 1 k 6 vaterstofoplosmiddel, zoals dioxan, bij kamertemperatuur on de Δ * *-pregnatrieen-21-ester met formule 15 te vormen, die op zijn beurt 15 gehydrolyseerd kan worden onder basische omstandigheden of getransesterifi-ceerd kan worden onder vorming van het 21-hydroxysteroide met formule 16, waarin Z een dubbele binding is.

(5b) Wegens hogere opbrengsten vordt bij voorkeur een tweetrapsmethode gebruikt, waarhij een structuur met formule 20 1¾ eerst gevormd wordt, en deze op zijn beurt gedehydrogeneerd wordt op de 1 -plaats onder vorming van een verbinding met formule 15. Hetzij de verbinding met formule ik'of die met formule 15 kan men dan hydrolyseren om een verbinding te vormen met formule 16, waarin Z ofwel een enkel-voudige of een dubbele binding is.

25 De verbinding als weergegeven door formule 1k wordt eerst gevormd door een verbinding met formule 13 te laten reageren met een geschikt oxydatiemiddel (een tetra-gesubstitueerd 1,U-benzo-chinon) bij lage temperatuur (d.w.z. 0-10°C) in een vochtig zuurstofbevattend oplosmiddel, zoals dioxan of aceton met 25 rol.% of minder water.

30 Een bijzonder geschikt oxydatiesiddel is 2,3-dichloor-5,6-dicvaanbenzo-’ chinon (DDQ). In het algemeen is deze reactie in 2 uur of minder voltooid.

(5c) Het k,6-pregnadi een als weergegeven door formule Ik wordt geisoleerd eh daarna op de 1-plaats gedehydrogeneerd om de verbinding met formule 15 te vormen. De dehydrogenering kan worden 35 uitgevoerd met chemische of microbiologische middelen, die de vakman bekend zijn. Het k,6-pregnadieen volgens formule 1k wordt eerst geisoleerd 4· 8300369 ... Ilv voordat het gedehydrogeneerd vordt overeenkomstig de daaropvolgende trap. Bij de selectieve chemische_dehydrogenering- op de 1-plaats laat men een verbinding met formula I4reageren met een geschikt oxydatiemiddel onder in vezen vatervrije omstandigheden in een geschikt oplosmiddel, zoals 5 een zuurstofbevattende koolvaterstof, b.v. in alkohol, dioxan of aceton, bij een temperatuur boven kamertemperatuur tot terugvloeitemperatuur. Een geschikt oxydatiemiddel is DDQ, tervijl tot de geschikte oplosmiddelen behoren xyleen, tolueen, amylalkohol, dioxan en aceton. Bij voorkeur vordt het materiaal onder terugvloeiing vervarmd in het oplosmiddel gedurende 10 een tijdsbestek dat voldoende is om de dehydrogering te doen plaatsvinden. Dit is in het algemeen 1-20 uur met chlooranil in amylalkohol of 12-16 uur in xyleen. Met DDQ in vatervrije aceton zijn slechts b uur nodig bij terugvloeitemperatuur. . ‘

Bij voorkeur echter vorden de chemische 15 methoden voor het dehydrogeneren op de Δ -plaats uitgevoerd met de methode van bromeren op de 2-plaats en dehydrobromeren tussen 1 en 2 onder vorming van de dubbele binding. Bromeren vordt uitgevoerd door een geschikt k 6 bromeringsmiddel te laten reageren met het Δ * -pregnadieen in een geschikt oplosmiddel gedurende een tijdsbestek dat voldoende is om de reactie 20 te voltooien. Geschikte bromeringsmiddelen zijn b.v. broom in combinatie met broomvaterstof en dit kan vorden gebruikt in azijnzuur bij kamertemperatuur voor een reactieduur van 10 min., waardoor een reactieprodukt vordt verkregen in een opbrengst van 85$ of meer.

Een bijzonder vaardevol bromeringsmiddel voor 25 de 2-bromering is pyridiniumhydrobromideperbromide of triraethylfenvl- ammoniumtribromide in tetrahvdrofuran vanneer dit vordt uitgevoerd bij een o temperatuur van 30 C of minder, bij voorkeur bij 20-25 C.

Het verkregen 2-gebromeerde produkt vordt daarna gedehydrobromeerd door het 2-broomprodukt te laten reageren met een 30 dehydrobromeringsmiddel. Karakteristieke dehydrobromeringsreacties vindt men op biz. 213-218 van Steroid Reactions, An Outline For Organic Chemists van Carl Djerassi, Holden-Day, 1963. Een bijzondere voorkeurs-methode berust op het vervarmen onder terugvloeien van het 2-broom-A * -pregnadieen met lithiumcarbonaat en lithiumbromide in DMF gedurende 5 uur .35 of minder, bij voorkeur minder dan 3 uur, bij een temperatuur van 100-110°C.

(5d) In plaats daarvan kan men de verbinding 8300369 15 met formule 14 dehydrogeneren met behulp van microbialogische midde- len, d.w.z. dat de verbinding bebaadeld wordt door een fermentatie- proces, waarbij men ofwel (i) groeiende microorganismen gebruikt, zo- als arthobacter simplex, of (ii) eelvrije enzymepreparaten of in kor- 5 te keten alkanol of alkanon gedroogde cellen in aanwezigheid van een waterstofacceptor. Omdat microorganismen en enzymepreparaten echter ook enige esterase-activiteit bezitten verdient het de voorkeur om de 21-hydroxyverbinding eerst te vormen door hydrolyse of transeste- 14 6 rificatie, en daama de verbinding te behandelen om de Δ * * -ver-30 binding te vormen.

Een voorbeeld van de werkwijze waarin gebruik wordt gemaakt van een groeiend microorganisme is de werkwijze beschre- 4 ven in Amerikaans octrooischrift 2.837.464, waarin men een Δ -3-keto-pregneen onderwerpt aan de inwerking van een kweek van een lid of een 15 groep die bestaat nit corynebacterien simplex (ook wel aangeduid als arthobacter simplex) en corynebacterien hoatii. In het algemeen ver-loopt de invoering van een dnbbele binding bevredigend bij pH 7,6-8 bij een temperatuur van 32-37°C.

Een voorbeeld van de eelvrije enzymeprepara-20 ten in aanwezigheid van een waterstofacceptor is de werkwijze als be-schreven in Amerikaans octrooischrift 3.047.469. Bij deze werkwijze laat men op het steroide, dat op de 1,2-plaats onverzadigd is, een mengsel inwerken van een ring A dehydrogenase-extract van een microorganisme zoals corynebacterien, waarbij het extract in wezen vrij 25 is van levende cellen.

Andere microorganismen die geextraheerd kunnen worden zijn nocardia, corynebacterium, mycobacterium, cylindro-carpon en bacterium. De waterstofdragers, die tezamen met het eelvrije extract gebruikt kunnen worden overeenkomstig de uitvinding 30 zijn oxydatie-reductiereagentia, b.v, kleurstoffen, zoals kaliumferro-cyanide; thiazinen en iminederivaten, zoals b.v. methyleenblauw, en fenacinemethosulfaat; benzochinonen en iminederivaten, b.v. ortho-chinon, toluyleenblauwchloride; naftochinonen, zoals cresylblauw, en indofenolen, in het bijzonder 2,6-dichloorindofenol.

35 Bij de werkwijze met het eelvrije extract kan het extract direct worden vermengd met het steroide uitgangsma- teriaal en de waters tof dr ager daama aan het mengsel worden toege-voegd of het kan eerst worden vermengd met de waters'tofdrager en daama in aanraking met 8300369 ...... 16 ' ' het steroide vorden gebracht. Een concentratie van de waterstofdrager is niet kritisch en iedere concentratie beginnende met een katalytische hoe- veelheid tot een stoechiometrische hoeveelheid gelijk aan de concentratie van het steroide kan vorden gebruikt. De pH en de temperatuur die tijdens 5 de dehydrogenering voorkomen zijn niet kritisch. De temperatuur kan liggen in het traject van 20-U5°C en ligt liefst bij 25-35°C. De pH kan zuur, alkalisch of neutraal zijn en ligt bij voorkeur in het traject van 6,0-8,0.

Desgewenst kan men om de pH op een bepaalde waarde te houden, een buffer- materiaal zoals een anorganisch fosfaat, b.v. natriumfosfaat, in het 10 reactiemengsel opnemen. Het reactiemengsel laat men gedurende een geschikte tijd staan tot de ring A dehydrogenering voltooid is, hetgeen gevoonlijk 1-20 uur vergt. *

Een bijzonder doelmatig dehydrogenerings- proces vordt besproken in Amerikaanse octrooiaanvrage serienummer 550.2¼, U 6 15 ingediend op de prioriteitsdatum van deze aanvrage, waarin een Δ * ver- binding, zoals een verbinding met formule 16, waarin Z een enkelvoudige binding is, selectief gedehydrogeneerd vordt met behulp van arthobacter simplex (ook aangeduid als corynebacterium simplex) in aanvezigheid van een vaterstofacceptor, zoals een chinon of chinonderivaat. De in bovengenoemde 20 octrooiaanvrage beschreven werkwijze is in het bijzonder geschikt voor de bereiding van 6-chloor-A^’^’^-pregnatrieen-l 1f5,17<x,21-triol-3,20-dion uit h 6 het overeenkomstige Δ * -pregnadieen. Een voorkeursstam van arthobacter simplex, iJRRL No. V-8055 is voor het publiek beschikbaar en kan vorden verkregen bij het Noordelijk regionaal Research Laboratorium in Peoria, 25 Illinois.

Waterstofacceptoren die bruikbaar zijn bij de werkwijze volgens de uitvinding worden gekozen uit chinonverbindingen en derivaten daarvan en hiertoe behoren benzochinonen, zoals tetramethyl-. p-benzochinon en 2-isopropyl-5-methyl-p-benzochinon; naftochinonen, zoals 30 menadion en 2-hydroxy-1Λ-naftochinon; indofenolen, zoals 2,6-dichloor-indofenol; en menadionnatriumbisulfiet. Het is van voordeel om de pH in het traject van 7,5-8,5 te houden tijdens de Δ1-dehydrogenering terwijl de temperatuur op 23-33°C blijft, bij voorkeur rond 28°C. Wanneer eenmaal een geschikt kweekmedium is verkregen, kan de hoeveelheid substraat die 35 aan het medium wordt toegevoegd zelfs 0,7 g/1 medium bedragen, maar de voorkeursconcentratie aan substraat bedraagt 0,5 g/1 medium. De hoeveel- 8300369 . IT ..

* ' ’heid waterstofacceptor kan binnen een ruim traject varieren, d.v.z. de molverhouding van substraat tot waterstofacceptor kan varieren van 30:1 tot.10:1. Wanneer menadion-natriumbisulfiet gebruikt wordt als de water-stofacceptor hedraagt de voorkeursverhouding van substraat tot acceptor 5 15:1.

'Het steroide kan aan het medium vorden toege-voegd als een suspensie in een geschikt oplosmiddel, zoals water, als een oplossing in een oplosmiddel, zoals ethanol, aceton of dimethylfoririamide, of in fijnverdeelde vorra, zoals vaste gemicroniseerde deeltjes. De water-10 stofacceptor wordt aan het medium toegevoegd als een oplossing in het oplosmiddel, zoals ethanol of dimethylf ormamide, of in het geval van menadionnatriumbisulfiet als een waterige oplossing.

Na toevoeging van substraat en waterstof-acceptor wordt het roeren en beluchten van het medium voortgezet gedurende 15 3-T uur tot de dehydrogenering voltooid is. Ti.jdens het verloop van de fermentatiereactie kan het verloop van de dehydrogenering worden gevolgd met siliciumdioxydegel, dunne laag chromatografie van met oplosmiddel geextraheerde monsters.

Wanneer de dehydrogenering voltooid is wordt 20 het produkt, δ-chloor-A^ *^ *^-pregnatrieen-11 £3,17a ,21 -triol-3,20-dion uit het fermentatiemedium teruggewonnen door extraheren met een geschikt oplosmiddel, zoals chloroform, methyleenchloride of methylisobutylketon.

Het oplosmiddel van de oplossing wordt verdanpt vaardoor een senikpistallijn produkt wordt verkregen dat gezuiverd wordt door siliciumdioxydegelchroma-25 tografie. Het produkt kan verder worden gezuiverd door omkristalliseren uit .een geschikt oplosmiddel, zoals b.v. isopropylacetaat, ethylacetaat of een mengsel van aceton en water.

De onderstaande voorbeelden dienen ter nadere toelichting van de uitvinding.

30 Voorbeeld I

20 g cortisol-21-acetaat werden toegevoegd aan 100 ml absolute ethanol en 100 ml ethvleenglycoldimethylether (glyme).

De oplossing werd op k0°C verwarmd en 2 g p-tolueensulfonzuur (?7SA) gevolgd door 2h g triethylorthoacetaat werden toegevoegd. De reactie werd 35 bi.i Uo°C geroerd tot de oplossing volledig was. Het reactiemengsel wordt nog ?0 min. bij ^0°C geroerd, afgekoeld tot kamertemperatuur en 2 ml pyri- 8300369 18 · ' dine worden toegevoegd. Het reactiemengsel wordt langzaam uitgegoten in ' ' een mengsel van 520 ml water en 52 ml hexaan. Na 30 min. bij 0-5°C werd het produkt gefiltreerd en -gewassen met water en daarna met 50 ml hexaan en het produkt werd in vacuum gedroogd bij 40°C. De opbrengst bedroeg· 90-104 5 gew.%. Dit is een voorbeeld van de werkwijze volgens de uitvinding, vaaruit blijkt dat de opbrengsten in wezen kwantitatief zijn voor dit bepaalde proces.

Voorbeeld II

*

Dit voorbeeld wordt uitgevoerd om het verschil 10 te laten zien in opbrengst en produkt tussen de werkwijze volgens de uitvinding en een werkwijze volgens de stand van de techniek. In dit bepaalde voorbeeld worden 10 g cortisol-21-acetaat toegevoegd aan 100 ml absolute ethanol, 10 ml triethylorthoformiaat en 0,300 g 2,4-dinitrobenzeen-sulfonzuur. Het mengsel wordt bij kamertemperatuur geroerd tot de oplossing 15 volledig is. Het reactiemengsel wordt nog 15 min. geroerd en 1 ml pyridine wordt toegevoegd. De oplossing wordt tot de helft van het volume geconcentreerd en 10 ml water worden toegevoegd. De concentratie wordt voortgezet tot kristallisatie optreedt. Ongeveer 100 ml water worden toegevoegd en het produkt werd afgefiltreerd, goed gewassen met water en 20 gedroogd waardoor de overeenkomstige 3-enolether wordt verkregen. In dit bepaalde geval werd enig dehydrateringsprodukt gevonden, dat volledig ontbrak in voorbeeld I en er bleef ongeveer 10% niet gereageerd materiaal bij deze werkwijze achter, alsmede een kleine hoeveelheid van andere ongewenste produkten, terwijl in vergelijking daarmee in voorbeeld I 25 vrijwel geen niet gereageerd materiaal achterbleef, zoals bepaald werd met dunne laag chromatografie (TLC).

Voorbeeld III

Dit voorbeeld laat de noodzaak zien voor de aanwezigheid van triethylorthoacetaat bij de werkwijze volgens de uitvin-30 ding. In dit voorbeeld werden de techniek en de hoeveelheden volgens voorbeeld I gebruikt, behalve dat triethylorthoformiaat vervangen werd door triethylorthoacetaat. Analyse van de eindprodukten door dunne laag chromatografie (TLC) gaf aan, dat -er nog een kleine hoeveelheid uitgangs-materiaal aanwezig was, maar dat er een aanmerkelijke hoeveelheid tussen-'35 produkten aanwezig was en ongeveer 10-15# van het Δ11^dehvdratatiepro-dukt.

8300369 19_

Voorbeeld IV

In di,t voorbeeld werden 20 j* cortisol toege-voegd aan 100 ml absolute ethanol en 100 ml ethyleenglycoldinethylether, zoals in voorbeeld I. De rest van de methode als beschreven in voorbeeld I 5 verd in dit voorbeeld gevolgd, behalve dat 0,3 g 2,1-dinitrobenzeensulfon-zuur en 10 g triethylorthoacetaat ‘gebruikt werden. Uit de resultaten bleek een vrijwel volledige reactie waarbij ongeveer 15$ van een 17,21-orthoester van de 3-enolether werd gevormd. De aanwezigheid van dit produkt is niet schadelijk bij de werkwijze volgens de uitvinding, ondat het 10 produkt verder tot reactie kan worden gebracht en aan het einde van de reeks reacties de 17,21-orthoester desgewenst gemakkelijk gehydrolvseerd kan worden onder vorming van het overeenkomstige 11β, 17a ,21 -trihydroxy-steroide .

Voorbeeld V

T5 Dezelfde methode als in voorbeeld III werd gevolgd, behalve dat geen ethyleenglycoldimethylether gebruikt werd. Aan het einde van de reactiereeks was er nog een aanmerkelijke hoeveelheid, d.w.z. omstreeks 10$ van het oorspronkelijke uitgangsmateriaal, dat niet gereageerd had. Dit duidt eens te meer op de noodzaak om triethylortho-20 acetaat aanwezig te hebben teneinde de werkwijze volgens de uitvinding volledig te laten verlopen.

Voorbeeld VI

Dit voorbeeld laat zien, dat de werkwijze volgens Amerikaans octrooischrift 3.087.927 het gewenste produkt geeft.

25 Teneinde het belang van de aanwezigheid van het triethylorthoacetaat verder te onderstrepen en ook het belang dat een overwegend deel van het oplosmiddel uit ethanol'bestaat, worden in dit voorbeeld 30 g cortisol-21-acetaat gesuspendeerd in een oplossing die bereid is uit 300 ml dioxan, 30,0 ml trimethylorthoforniaat en 1,20 ml 30 absolute methanol. Aan de snel geroerde suspensie worden druppelsgewijze * 0,60 ml geconcentreerd zwavelzuur toegevoegd. De suspensie wordt steeds dunner gedurende de eerste paar minuten en volledige oplossing wordt binnen 6 min. bewerkstelligd. 1,80 ml pyridine worden toegevoegd, waama onmiddellijk een zwak paarse verkleuring verdwijnt en het verkregen oplos-'35 sing is lichtgeel van kleur. De gehele bewerking tot dit punt wordt uitge-voerd bij kamertemperatuur. De verdunde reactieoplossing wordt in een 8300369 . 20 ♦ * scheidtrechter gebracht, waarvan de steel beneden het oppervlak steekt van 300 ml van een water-ijsmengsel dat zich~iir een grote beker bevindt.

Het reactiemengsel wordt langzaan in een tijd-bestek van 2-3 uur aan het krachtig geroerde ijs-watermengsel toegevoegd.

5 De vaste stof die zich vormt laat men in de oplossing een nacht lang bij 5°C staan en verwijdert deze dan door filtreren. Ket produkt wordt goed gewassen met water en aan de lucht gedroogd, waardoor 28,7 g produkt' worden verkregen. Uit TLC analyse van bet produkt blijkt dat het gehele produkt bestaat uit ^-21-acetaat.

10 Voorbeeld VII

In dit voorbeeld werd dezelfde methode als in voorbeeld VI gevolgd, behalve dat de absolute ethanol gebruikt werd in plaats van de methanol en triethylorthoacetaat gebruikt werd in plaats van het trimethylorthoformiaat. Door de methode van voorbeeld VI te volgen 15 werd gevonden, dat er vrijwel geen reactie optrad. Hieruit blijkt het belang om een overwegende hoeveelheid ethanol te gebruiken en dat de beschrijving van Amerikaans octrooischrift 3.086.927 onwerkzaam is.

Uit bovenstaande voorbeelden als samengevat in tabel A kan men zien, dat de werkwijze volgens de uitvinding waarin 20 het steroide tot reactie gebracht wordt met het triethylorthoacetaat in een oplosmiddel dat bestaat uit een overwegende hoeveelheid ethanol en een oridergeschikte hoeveelheid van een zuurstofbevattend koolwaterstof-oplosmiddel, zoals glyme, resultaten geeft die.beter zijn dan volgens de stand van de techniek.

8300369'

* I

21

* Tabel A

i£ar 4» , TEOA TEOF EtOH GLYME H CAT Hesultaten I (uitvinding) X X X X Rxn volledig II (stand techniek) - X X X Rxn onvolledig 5 III (stand techniek) - X X X X Rxn onvolledig; .11(9), ., ...

Δ dehydratatie- produkt f IV (uitvinding) X XXX Rxn volledig; vat 1T,21-orthoester 10: (niet schadelijk) V (stand techniek) - X X X Rxn onvolledig VI (stand techniek - - TMOF onder- Dioxan X , alleen maar

Amerikaans octrooi- ge- .11(9) . . ,..

schrift 3.087.927) schikt ^ 15 MeOH produkt VII (stand techniek - X onder- dioxan X geen Rxn

Amerikaans octrooi- ge- schrift 3.O87.92T) schikt X TMOF = trimethylorthoformiaat; minder dan methanol (MeOH); 20. dioxan als hoofdoplosmiddel gehruikt 35¾ TEOA = triethylorthoacetaat TEOF - triethylorthoformiaat EtOH - ethanol •φ» ^ ^ § H cat - zure katalysator - verschilt, zie leder voorheeld 25 Rxn - reactie "X" - aanwezig materiaal "-" - afwezig materiaal Φ Cortisol gehruikt-als uitgangsmateriaal.

Voorheeld VIII

30 De onderstaande reeks reacties geeft een bijzonder doelmatige methode voor de hereiding van 6-chloor-A^* ’ -pregnatrieen-118,17«,21-triol-3,20-dion uit cortisol.

De react!eomstandigheden zijn representatief voor de omstandigheden die geschikt zijn om te vorden gehruikt in zovel 35' de beperkte als ruime sin van de verkvijze volgens de uitvinding en ver-dienen derhalve de voorkeur. De representatieve reactieomstandigheden als in dit voorheeld vermeld dienen echter, ofschoon ze de voorkeur verdienen, niet in heperkende zin te vorden geinterpreteerd.

8300359 22 .... .

* Vorming van cortisol-21-acetaat . ' Reactie volgens schema F.

Bereidingswi i7.e:

Een kolf van 1 1 wordt gevuld met 1*00 ml 5 pyridine en 100 g {0,276 mol) hydrocortison (cortisol) worden toegevoegd tot het cortisol gedeeltelijk in oplossing gaat. Terwijl de temneratuur beneden 30°C wordt gehouden worden gedurende een tijdbestek van 10 min.

163,3 g (1,59 mol) azijnzuuranhydride toegevoegd. Het mengsel laat men t 1 uur bij kamertemperatuur staan tot de reactie volledig is. 300 ml water 10 worden langzaam aan het reactiemengsel toegevoegd, terwijl de temperatuur beneden 1*0°C wordt gehouden. Het reactiemengsel laat men 20 min. staan en brengt het dan over in een drie liter kolf. Na een tijdbestek van 20 min. worden 1500 ml verzadigde waterige natriumchloride-oplossing toegevoegd. Het mengsel wordt gekoeld tot 10°C 1 uur bewaard en daarna afge-15 filtreerd. Het produkt wordt gewassen met water en gedroogd in een vacuum-oven bij 50-60°C. Opbrengsti 110,1* g (110,1* gew./gew.j 99,2$ van de theorie).

Reactie met triethylorthoacetaat onder vorming van de 3-enolether en daaronvolgende 6B-chlorering._ 20 Reacties volgens schema G.

Bereidingswij ze;

Een 2 1 kolf wordt gevuld met 550 ml ethanol, 330 ml 1,2-dimethoxyethaan (glyme) en 110,1* g (0,272 mol) cortisol-21-acetaat. Het mengsel wordt verwarmd op 1*0-1*2°C en een oplossing van 25 9 g p-tolueensulfonzuur in 200 ml 1,2-dimethoxyethaan, gevolgd door 116 g triethylorthoacetaat, worden toegevoegd. De temperatuur wordt op 38-1*2°C gehouden. Na 20 min. worden 2,5 g p-tolueensulfonzuur toegevoegd. Het mengsel wordt 30 min. op 38-1*2°C gehouden, daarna afgekoeld tot 8-10°C en 12 ml pyridine worden toegevoegd, gevolgd door een oplossing van 30 2,7 g natriumacetaat in 50 ml water. De bleekgele oplossing wordt toege voegd aan een mengsel van 1U g natriumacetaat in 2l*50 ml water en 288 ml hexaan en daarna gekoeld tot 10°C, 20 min. bewaard, afgefiltreerd en gewassen met 800 ml water die 1 g natriumacetaat bevatten, gevolgd door 220 ml hexaan.

35 De natte koek (ongeveer 200 g) wordt in een koud (10°C) mengsel gebracht van 13,7 g natriumacetaat in 18U ml water 8300369 ... 23 - en UUo ml aceton en gekoeld tot 0-5°C. Een oplossing van 27 g "Halane" (geregistresrd handelsmerk voor 1,3-dichloor-5,5-dimethylhvdantoine) in * 720 ml aceton wordt toegevoegd vaarbij de temperatuur beneden 5 C wordt gehouden. Het mengsel wordt min. op 0-5°C gehouden en daarna wordt een 5 oplossing van 9,2 g natriumbisulfiet in 132 ml water toegevoegd en wordt het mengsel in 2200 ml water langzaam in een tijdbestek van 30 min. opge- nomen en afgekoeld tot 0-5°C, 1 uur bewaard, afgefiltreerd en in een vacuumoven gedroogd bij ^5~50°0. Opbrengst: 107,2 g (97,1 gew./gew.; &9,5% van de theorie). * 70 Reactie met trie^hglorthoacetaat onder vorming van een 3-enolether en daaronvolgende A * worming;

Reactie volgens schema H.

Bereidi ngswi jze:

Een 2 1 kolf wordt gevuld met 10¾ g (0,237 75 mol) 6g-chloor-1lS,17a,21-trihydroxypregn-U-een-3,20-dion-21-acetaat (uit de voorgaande trap), 500 ml 1,2-dimethoxyethaan en 3,03 g p-tolueensulfon-zuur en 30 min. bij 20-25°C bewaard. 500 ml ethanol worden toegevoegd, gevolgd door 91,¾ g (0,563 mol) triethylorthoacetaat. Het reactiemengsel wordt donkerrood en wordt kO min. bij 20-25°C bewaard en daarna gekoeld 20 tot 15°C en een oplossing van 13 g natriuraacetaat in 6k0 ml water wordt toegevoegd. De temperatuur wordt beneden 20°C gehouden en 220 ml methyleen-chloride worden toegevoegd, gevolgd door 1000 ml water, die langzaam worden toegevoegd terwijl de temperatuur beneden 25°C wordt gehouden. Het mengsel wordt 15 min. geroerd en de onderste organische laag wordt afge-25 scheiden. De bovenste waterige laag wordt geextraheerd met 3,75 ml hoe-veelheden methyleenchloride. De organische fracties worden gecombineerd en gewassen met een oplossing van 1,3 g natriumacetaat in 260 ml water.

Het methyleenchloride-extract (ongeveer 900 ml in totaal) wordt afge-scheiden en onder vacuum geconcentreerd tot ongeveer ml en tijdens 30 het destilleren wordt een mengsel van 850 ml dioxan en 1,3 ml pyridine toegevoegd terwijl het volume op ongeveer ^0-b5G ml wordt gehouden. Het mengsel wordt gedestilleerd tcrt een eindvolume van UOO ml (op dit tijd-stip dient geen methyleenchloride aanwezig te zijn) en 300 ml dioxan worden toegevoegd. Het mengsel wordt afgekoeld tot 10°C en 65 ml water worden 35 toegevoegd, waarna wordt afgekoeld tot 0-5°C. Een oplossing van 75 g DDQ in 300 ml dioxan wordt toegevoegd in een tijdbestek van 1 uur terwijl m 8300359 2h , de temperatuur op Q-5°C vordt gehouden, De toevoegtrechter vordt gevassen met 30 ml dioxan en het mengsel vordt 30 min. bij 0-5°C bewaard. Een oplossing van 30,h g natriumbisulfiet in 87 ml vater vordt toegevoegd, tervi,il de temperatuur beneden 10°C vordt gehouden. De brij vordt onder 5 vacuum geconcentreerd tot 600 ml. De brij vordt langzaam onder krachtig roeren toegevoegd aan 1000 ml vater, daarna gekoeld tot 10°C en 3 uur bevaard. Het produktmengsel vordt afgefiltreerd en gevassen net vater. De vochtige vaste stof vordt toegevoegd’aan 1500 ml methyleenchloride^ 1 uur geroerd, afgefiltreerd en gevassen met 100 ml methyleenchloride. De vaste 10 stof vordt toegevoegd aan 1+00 ml methyleenchloride, 20 min. geroerd, gefiltreerd en gevassen met 100 ml methyleenchloride. De methyleenchloride-oplossingen vorden gecombineerd en geroerd met 1000 ml vater. De organische laag vordt afgescheiden en de vaterige laag vordt geextraheerd met 50 ml methyleenchloride. De methyleenchloride-extracten vorden geconcentreerd 15 tot 1+00 ml en onder het destilleren vorden 1000 ml aceton toegevoegd tervijl het volume op ongeveer 360-1+00 ml vordt gehouden. De brij vordt · gedestilleerd tot een eindvolume van 300 ml en gekoeld tot 0-5°C, 30 min. bevaard, gefiltreerd en gevassen met 82 ml koude (0-5°C) aceton. Het produkt vordt in vacuum bij 50°C gedroogd. Opbrengst: 80,3 g (77,2 gev./ 20’ gev,; 77,5# van de theorie). .

A^ Vorming en daaronvolgende hydrolyse

Reacties volgens schema J,

Bereidingsvijze: 50 g RS-1+232 acetaat (uit de voorgaande "25 trap, bevat omstreeks 10% aceton) vorden toegevoegd aan 350 ml methyleenchloride. 30 g neutraal aluminiumoxyde vorden toegevoegd en het mengsel vordt 1 uur geroerd. Het aluminiumoxyde vordt afgefiltreerd en de oplossing vordt geconcentreerd tot een volume van 50 ml. Tetrahydrofuran (1+00 ml) vordt toegevoegd en de destillatie vordt voortgezet tot een kook-30 punt van ongeveer 65°C bereikt is. Het mengsel vordt afgekoeld tot 25°C en een oplossing van 3*+ g pyridiniumhydrobroraideperbromide in 130 ml tetrahydrofuran vordt toegevoegd. De reactie vordt 20 min. bij 25°C geroerd en 3 ml aceton vorden toegevoegd. Het reactiemengsel vordt afgefiltreerd en het filtraat vordt geconcentreerd tot een volume van 50 ml.

'35 Dimethylformamide (1+00 ml) vordt toegevoegd, gevolgd door 22,5 g lithium- carbonaat en 8,1 g lithiumbromide. Het systeem vordt doorgespoeld met stik- 8300368 .... 25 . .

·; * stof en het reactiamengsel wordt 2.\ uur op 105°C vervarmd, onder vacuum geconcentreerd tot 200 ml, gekoeld op 6θ C en 50 ml azijnzuur worden toege-voegd, gevolgd door TO ml water. Het reactiemengsel vord’t langzaam uitge-goten in 1600 ml water. Ha 1 uur bij 25°C wordt het product afgefiltreerd 5 en gewassen met water. Het produkt verd in vacuum hij 60°C gedroogd.

Opbrengst U1,5 g (83 gew./gew.). Het produkt wordt 2 keer omgekristalli-seerd uit aceton. Zuivering levert: 78,8 gew./gew.

6-Chloor-11β,17cc,21-trihydroxypregna-1,k,6-'trieen-3,20-dion wordt gevormd door omestering in vatervrije methanol in 10 aanwezigheid van een kleine hoeveelheid kaliumcarbonaat.

Voorbeeld IX

De methode van voorheeld VIII wordt gevolgd voor de bereiding van 6-chloor-11{5,l7a>21~trihydroxypregna-h,6-dieen-3,20-dion-21-acetaat, dat wordt omgeesterd tot de overeenkomstige 21-hydroxy-15' verbinding door reactxe met vatervrije methanol in aanwezigheid van een kleine hoeveelheid kaliumcarbonaat,

Voorb eeId X

Dit voorbeeld geeft een methode voor h"* vorming met behulp van microbiologische middelen (d.w.z, groeiende cellen 20 met een waterstofacceptor), a. Fermentatie.

Ken kveek van Arthobacter simplex NRRLB-8055 wordt 6 dagen bij 28°C gekveekt op een agarschijf van de volgende samen-stelling: 25 Voedingsbodemagar (Difco) . 20 g

Glucose v 10 g

Gistextract (Difco) 10 g

Gedestilleerd water 1 1

Een lus die vol is met de oppervlaktegroei 30 van de schijf wordt gebruikt om twee 300 ml nefelokveekkolven ieder te inoculeren, die ieder 50 ml bevatten van het onderstaande steriele voe-dingsmiddelmedium (b): 1 Hais "steep" vloeistof 5 g

Gistextract (Difco) 1 g 35 Cerelose (pract. glucose- monohydraat) 0,5 g

Gedestilleerd water 1 *1

pH = T

8300369 26

De kolven vorden geincubeerd bij 28°C op een € roterende schudder bij 280 rpm met behulp van een slag van 2,5^ cm. De incubatie is in 2k uur voltooid of vanneer de troebeling van de kveek 185-180 Kletteenheden bereikt gemeten op een Klett-Suramerson fotoelek-5 trische colorimeter, voorzien van een no, 66 filter en op 0 ingesteld met steriel medium, Daarna vordt de gehele inhoud van beide kolven gebruikt om 900 ml vers gesteriliseerd medium b te inoculeren dat zich in een 2 1 glazen fermenteerkolf bevindt. De incubatie van de fermenteerkolf vordt voortgezet bij 28°C terwijl de’beluchting gehouden vordt op een \ vol.

10 lucht/vol. medium/min, en het roeren vordt uitgevoerd met 300 rpm. 11a 2k uur vorden 500 mg 6-chloor-113,17a,21-trihydroxypregna-k,6-dieen-3,20-dion (bereid zoals in de voorbeelden VIII en IX) aan de fermentatie toege-voegd als een ethanolische oplossing (25 mg/0,U ml ethanol). Tegelijker-tijd vorden 00k 26,If mg menadion natriumbisulfiet aan de fermentatie t5 toegevoegd als een afgefiltreerde, gesteriliseerde waterige oplossing (26,¾ mg/10 ml). De incubatie vordt als boven voortgezet. De reactie is in 3-5 uur voltooid.

b. Isoleren en kenmerken

De fermentatiebouillon vordt 3 keer geextra-20 heerd met hoeveelheden chloroform van ieder 500 ml. De gecombineerde chloroforraextracten vorden gedroogd boven vatervrij natriumsulfaat en tot - droog geconcentreerd onder vacuum. Het verkregen halfkristallijne residu vordt gezuiverd door chromatograferen over siliciumdioxydegel. Het produkt vordt geelueerd met mengsels van chloroform en aceton. De fracties die 25 het gevenste produkt bevatten vorden samengevoegd en tot droog ingedampt vaardoor kJ5 mg (opbrengst 95$ van de theorie) vorden verkregen van 6-chloor-d^’^’^-pregnatrieen-l13,17a,21-triol-3,20-dion, die dan vorden omgekristalliseerd uit isopropylacetaat.

Op overeenkomstige vijze vorden bij gebruik 30 van menadion en tetramethvl-p-benzochinon in plaats van menadion natrium- bisulfiet een overeenkomstige .omzetting verkregen van 6-chloor-A * -pregna-dieen-113,17a,21-triol-3,20-dion in 6-chloor-A1 *^5 ^-pregnatrieen-113,17a, 21-triol-3,20-dion.

Voorbeeld XI

35 Een inoculum van Arthobacter simplex vordt bereid zoals in voorbeeld X.

8300369 v 27 ....

5 ml van de 2k uur entkweek worden dan gebruikt on vier Erlenmeyerkolven van ieder 250 ml, die ieder 50 ml medium b (voorbeeld I) bevatten, te inoculeren. De kolven worden bij 28°C geincu-beerd op een roterende schudder bij 280 rpm met behulp van een slag van 5 2,5¼ cm. Na 2k uur worden 25 mg S-chloor-d^’^-pregnadieen-IIBjIVct^l- triol-3,20-dion (bereid zoals in voorbeeld VIII en voorbeeld IX), opgelost in 0,k ml ethanol, aan elk van de kolven toegevoegd. Tegelijkertijd vordt aan een van de kolven 0,78 mg 2-isopropyl-5-methyl-p-benzochinon in 0,2 ml ethanol toegevoegd. Aan een tweede kolf worden 0,83 mg 2-hydroxy-1,1»-10 naftochinon toegevoegd en aan een derde kolf worden 1,2 mg natriumzout van 2,6-dichloorindofenol, opgelost in 0,5 ml HgO toegevoegd. Er wordt aan de vierde kolf, die als bianco dient, geen wa ter st of accept or toegevoegd. Dunne laag chromatografische analyse van met oplosmiddel geextra-heerde monsters na een contactduur van 7 en 2k uur wi jst op een verhoogde 15 vormingssnelheid en vormingspercentage van het produkt 6-chloor-A^’ * -pregnatrieen-118,17a,21-triol-3,20-dion in vergelijking met een onbehan-delde bianco.

Voorbeeld XII

Bij deze werkwijze wordt de methode van voor-20 beeld I .gevolgd, behoudens dat 2 g trifluorazijnzuur worden gebruikt in plants van PTSA als zure katalysator. Er worden overeenkomstige opbrengsten ' verkregen.

Voorbeeld XIII

Bij deze werkwijze wordt de methode van voor-25 beeld I gevolgd, behoudens dat 2 g zwavelzuur gebruikt worden in plaats van PTSA als de zure katalysator, Er worden overeenkomstige opbrengsten verkregen. .

8300369

Claims (1)

1. * c S Werkwijze ter bereiding van 6-chloor-113.17a.21-trihydroxypregna-1.4.6-trieen-3.20-dion met de algemene 5 formule 17, met het kenmerk, dat men (a) cortisol-21-acetaat in reactie brengt met triethylorthoacetaat in tegenwoordigbeid van een katalytische hoeveelheid van een sterk zure katalysator in een oplosmiddel bij een temperatuur van 0-100°C, dat in hoofdzaak bestaat uit ongeveer 10 40 gew.% o£ meer ethanol en ongeveer 60 gew.% of minder van een verenigbare geoxygeneerde koolwaterstofvloeistof, onder vorming van een reactieprodukt, dat een 3-enolether is, (b) vervolgens de 3-enolether uit (a) in reactie brengt met een chloreermiddel in een inert oplosmiddel op 15 een op zichzelf bekende wijze onder vorming van 63-chloor-cortisol-21-acetaat, (c) dit 63-chloor-cortisol-21-acetaat van trap (b) in reactie brengt met een katalytische hoeveelheid van een sterk zure katalysator in een inert oplosmiddel op een op zich- 20 zelf bekende wijze onder vorming van 6a-chloor-cortisol-21-acetaat, (d) vervolgens dit 6a-chloor-cortisol-21-acetaat in reactie brengt met triethylorthoacetaat in een oplosmiddel, dat een mengsel is van ongeveer 40 gew.% of meer ethanol en 60 gew.% of minder van een verenigbare geoxygeneerde koolwater- 25 stofvloeistof in tegenwoordigheid van een katalytische hoeveelheid van een sterk zure katalysator bij een temperatuur van 0-100°C onder vorming van een reactieprodukt, dat de overeenkomstige 3-enol-ether is, (e) de 3-enolether uit (d) op een op zich- 30 zelf bekende wijze oxydeert onder vorming van 6-chloor-133.17a.21- trihydroxypregna-4.6-dieen-3.20-dion-21-acetaat, (f) het produkt uit (e) op de 1-plaats op een op zichzelf bekende wijze dehydrogeneert onder vorming van 6-chloor-l3 3.17a.21-trihydroxypregna-l,4.6-trieen-3.20-dion-21- 35 acetaat of (g) de 3-enolether uit (d) op een op zich- 8300369 m* . " 29 zelf bekende wijze in reactie brengt onder directe vorming van 6-cbloor-l 1(3.17a«21-trihydroxypregna-l. 4.6-trieen-3.20-dion-21 -acetaat, (h) het 21-acetaat-produkt uit (e) hydro- 5 lyseert of omestert onder vorming van 6-chloor-lIS.17a.21-trihydroxy-pregna-4.6-dieen-3.20-dion. (i) vervolgens het produkt uit (h) op een op zichzelf bekende wijze op de 1-plaats dehydrogeneert onder vorming van 6-chloor-l 1(3.17a.21-trihydroxypregna-l,4.6-trieen- 10 3.20-dion of Cj) het produkt uit (f) of (g) hydrolyseert of omestert onder vorming van 6-chloor-116.17a.21-trihydroxypregna- 1.4.6-trieen-3.20-dion. 15 8300368 V t ckoh i 1 C - 0 , _ CK I Η 0H CHV Cl 17 Syntex (U,S.A.). Inc., te Palo Alto, California, Ver.St.y.An?eri]ca 8300369 -A — ' .ο—, ' CH2OH - H-CC0__« 1=0 HO 0-^ H0y-SA|-0H ΗΟγ^γΧ-0 0lXX^ * oW 2 . ~B~ 2 —-:---*- TJ 1 -C- ’ ^o—, ° ^CH2 O^^rL-o/ 3 :-^\pX. J ' 4 CHtOH CH2R HO ~00^.r/°R4 un Y^^Vo-^p HVNA^R' ~*-°>. /^V-1 . Ri ; JJ>Si --ο- cn Rs JUU 5 XX T 6 7 R*° x -D- _ ' ‘ · .CH*C-0C2Hs + 2CsHr0H--s-NH^Ci + CH4C (OCjHs^ (1) . ll NH-HCt · CH2«C (0 02Η^.+ C2H?0H —^ CH3C(0C2H^3 (2) 8 3 0 0 3 6 9 Syntex (U.S.A.) Inc., te Palo Alto, Californie, Ver.St.v.Amerika JNM «««•ΜΜ» t«WL3 CHgOH CHaOR CR =0 ru “0 un 5 o H · H0v ^ A~R« 0J^CXg· * 0S^J 10 (2) - J - ’ AfiR . CH?0R ni =0 CH* -=0 . HO °M.D HO^TL-R, - $Pir *»· >^iPlr~ r* 0J^AyJ 12 CHjCH.oAA^1 j, a (4) CSR . ' c^or HO' C5<"R' ,/, CHjHr chY"^"1—-R —^L*. Β0Λΐ1 Jpli_1 * " cai j p-R» .,(5b) CH.0R a CHfiH * CH3 p (5c) l(6a) CH5 — 0 Hoy^P\i. / W^\Ar-R' r* j^w^x_t-(rj ^ o^M 16 a (6b) ci -F- CHgOH . CNjOAc ch3|=o ch3 =0 Η0\^/\ψΑ~-0Η H0\^X^\-0H r-SQ-J A.,0 ^$u_) 8300 369 Syntex (U.S.A.) Inc., te Palo Alto, Californie, Ver.St.v.Amerika CHjOAc . CHjOAc ' —0 =0 HO HO>^\iAr-OH ' fYinH),·, ΜΓΥ -ifT-^ CzHjO CHe0Ac ./ =0 ' *HaEane" . Ci ' CHjOAc WAC = 0 -0 H°N/\/V|'oh ΗΟ^^^ΛγΟΗ | I CK3C(0 Cj’rij) k ^ Γ H* CjHsO J ci . L. a - . •. " . CHjOAc . ·. =0 Η0^\μΛτ-°Η DDQ dioxan -X Λ. Λ οί’ν^γ' a . 8300369 'f — ** ·- ' ~J" CH^OAc Γ CHi0AC =,0 · “O' ΓΐΤ C.HrNHBr, O^VY -THF ^ O^V Cl . L Cl * J LigCOjy^LiBr DMF Cl^OH . f CHP Ac =0 Uo Η0γ^ν./χ^-0Η HO^^^A^'-OH ΐ>Ύ jMeOH . KjC03 o ci a | * \ / ch*r o=o c I . CM / \ C = 0 HO^^Va---0 CHi -R, όΓ J r^-Rz TT Rl 8 . 9 x. Syntex (U.S.A.) Inc.,, te Palo Alto, California, Ver.St.v.Amerika 830036