NL8101439A - Aminozuurverbindingen en bereiding en hun gebruik als farmaceutisch preparaat. - Google Patents

Description

-1-

Korte aanduiding; Aminozuurverbindingen en bereiding en bun gebruik als farmaceutisch preparaat.

Se uitvinding beeft betrekking op nieuwe aminozuurverbindingen, op bun gebruik als farmaceutische preparaten en op bun bereiding* Heer in bet bijzonder zijn de verbindingen volgens de uitvinding 2-cyaanethyl-gesubstitueerde ΙΓ-benzoylaainoalkaanzuur 5 verbindingen die immunoregulenenfe en tumorbestrijdende werkingen bezitten.

In de literatuur hebben gnobler X. et al.* J.Chem.Soc.C.

(14) 1821-4 (1969)» beachri j vei lï-(ge substitueerde benzoyl) glutamine-zuurverbindingen beschreven met een 2-carboryethylsubstituent in-10 plaats van de 2-cyanoe thylsubs ti tuent van de verbindingen volgens de onderhavige uitvinding; Vakamatsu H. et al·* J*Chem.Soc,D*Chem* Gommun.,(23}* 1540 (1971)> beschrijft de verbinding 2-(2-cyano-etbyl)-H-acetylglycine; en Pichat L. et al·* Bull.Soe.Chim.Fr. (1970), 5,1837-8, beschrijft als een tussenprodukt voor de aminozuursynthese 13 de verbinding 2-(3-cyanopropyl)-H-benzoylglycine* Van geen van deze verbindingen is echter een immunoregulerende of tumorbestrijdende werking beschreven. Anderzijds hebben ïïmezawa H. et al·, J.Antibiotics 29(8)»857"Ö59 (1978) de verbinding "bestatin" beschreven dat het £(2S* 3fi)-3-amino-2-hydrory-4-ienylbutanoylj-L-leucine is, dat- aan 20 de gastheer gebonden tumorbestrijdende werking bezit* doch de struk-tuur van deze verbinding verschilt duidelijk van die van de verbindingen volgens de onderhavige uitvinding. Tenslotte is door Kobayashi S. et al. in "Synthesis and Issulogical Activities of Huramyl Dipeptide Derivatives" aangeboden op het 7e "Symposium on 25 Progress in Organic Reactions and Synthesis, in Gifu in Japan* in 1980, medegedeeld dat dipeptiden immunologische werking bezitten en verwacht kan worden dat zij tumorbestrijdende werking bezitten, doch ook deze verbindingen verschillen duidelijk in structuur van de verbindingen volgens de uitvinding.

30 Dientengevolge zijn in de literatuur geen immunoreguleren de of anti-neoplastische stoffen beschreven met een struktuur van het type zoals voorkomt bij de verbindingen volgens de uitvinding.

De verbindingen volgens de onderhavige uitvinding zijn verbindingen met formule 1 van het formuleblad, waarin: 33 n een geheel getal is van 1 tot 3l 8101439 X i -2- *1 £ een waters tof at oom, een alkylgroep, een halogeenalkyl-groep, een halogeenatoom, een mercaptogroep, een alleylmercaptogroep, een hydroxygroep, een alkoxygroep, een acyloxygroep, een carboxy1-groep, een alkoxycarbonylgroep, een aminogroep, een alkylgesubsti-5 tueerde aminogroep, een arylgesubstitueerde aminogroep, een acylamino-groep, een halogeenalkoxycarbonylaminogroep, een alkaansulfonyl-groep, een nitrogroep of een oyaangroep (en, wanneer n een geheel j getal van 2 tot 5 is, kannen de groepen £ al dan niet gelijk zijn); 2 5 £ en £ al dan niet gelijk zijn en elk een waterstof-10 atoom of een alkylgroep is; £^ een waterstofatoom, een alkylgroep, een oyaangroep, een cyaanalkylgroep, een hydroxy alkylgroep, een alkoxycarbonyl-groep, een carboxylgroep, een arylgroep, een aralkylgroep, een mer-captoalkylgroep, een alkyl thioalkylgroep, of een thioalkylgroep 15 (de vrije binding van de zwavel/in deze thioalkylgroep verenigd met de zwavel van de andere rest van dezelfde formule); en A is een hydroxygroep, een alkoxygroep, een aminogroep, een alkylgesubstitueerde aminogroep (desgewenst halogeen- of carba-moylgesubstitueerd in de alkylrest), een hydrazinogroep, een alkyl-20 of arylgesubstitueerde hydrazinogroep, een hydroxylaminogroep, een alkoxyaminogroep of een aralkyloxyaminogroep; en de farmaceutisch verdraagbare zouten daarvan.

Be uitvinding verschaft voorts verschillende werkwijzen voor het bereiden van de verbindingen met formule 1 en hun farma-25 ceutisch verdraagbare zouten.

Voorts verschaft de uitvinding een farmaceutisch preparaat, geschikt voor immunoregulerende of tumorbestrijdende behandeling, die een verbinding met formule 1 of een farmaceutisch verdraagbaar zout daarvan bevat, tezamen met een farmaceutisch verdraagbare dra-30 ger of verdunningsmiddel.

In de verbindingen met formule 1, waarin £1 een alkylgroep voorstelt, kan deze een rechte of vertakte alkylgroep zijn en bij voorkeur met 1-4 koolstofatomen, bijvoorbeeld methyl,' ethyl, propyl, isopropyl of t.butyl.

55 Als £ een halogeenalkylgroep voorstelt, bevat deze bij voorkeur 1 of 2 koolstofatomen bijvoorbeeld trifluormethyl of 2,2^2-trichloore thyl.

Als £ een halogeenatoom voorstelt kan dit een chloor, broom, jood of fluoratoom zijn.

40 Als £ een alkylmercaptogroep is, kan dit een rechte of 81 01 439 -3- I > vertakte groep zijn bij voorkeur met 1 tot 16 koolstofatomen, bijvoorbeeld methylthio, ethylthio, propylthio, iaopropylthio, butyl-thio, t-butylthio of hexadecylthio.

Als een alkoxygroep voorstelt kan deze recht of vertakt 3 zijn en bij voorkeur 1-16 koolstofatomen bevatten, bijvoorbeeld methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, t.butoxy of hexadecyl-oxy.

Als B^ een acyloxygroep voorstelt is dit bij voorkeur een rechte of vertakte alkanoyloxygroep met 2-16 koolstofatomen of een 10 benzoyloxygroep die desgewenst in de aromatische ring gesubstitueerd kan zijn. Voorbeelden van de alkanoyloxygroep zijn acetoxy, propanoyl-oxy, butyxyloxy, isobutyryloxy, pivaloyloxy en palmitoyloxy· Be benzoyloxygroep kan desgewenst in de aromatische ring gesubstitueerd zijn met één of meer alkylgroepen, (bijvoorbeeld methyl, ethyl, pro-13 pyl of isopropyl), lagere alkoxygroepen (bijvoorbeeld methoxy, ethoxy,propoxy of isopropoxy), halogeenatomen (bijvoorbeeld chloor, broom, jood of fluor), nitrogroepen, trifluormethylgroepen, cyaan-groepen, hydroxygroepen, aminogroepen of carboxylgroepen.

Als E1 een alkoxycarbonylgroep voorstelt, kst dit een rechte 20 of vertakte groep zijn en bij voorkeur met 2-17 koolstof atomen, bijvoorbeeld methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, propoxycarbonyl, isopropoxy carbonyl, butoxycarbonyl, isobutoxycarbonyl, teskbutoxycarbo- nyl of hexadecyloxycarbonyl.

Als B een alkylgesubstitueerde aminogroep is, kan de alkyl-25 substituent of kunnen de alkylsubstituenten recht of vertakt zijn en bij voorkeur lagere alkylgroepen zijn, Voorbeelden van dergelijke alkylgesubstitueerde aminogroepen zijn methylamino, ethylamino, propylamino, isobutylamino, dimethylamino, diethylamino en diiso-propylamino.

30 Als B een arylgesubstitueerde aminogroep voorstelt kan dit bijvoorbeeld een fenylaminogroep zijn. Be arylsubstituent kan desgewenst op zijn beurt gesubstitueerd zijn in de aromatische ring met bijvoorbeeld één of meer lagere alkylgroepen zoals methyl, ethyl, propyl of isopropyl, lagere alkoxygroepen, zoals methoxy, ethoxy, 33 propoxy of isopropoxy, halogeenatomen zoals chloor, broom, jood of fluor, nitrogroepen, trifluormethylgroepen, hydroxygroepen, aminogroepen of carboxylgroepen.

Als fi1 een acylaminogroep is, kan dit een rechte of vertakte alkanoylaminogroep zijn met bij voorkeur 2-16 koolstof atomen, 40 bijvoorbeeld acetylamino, propionylamino, butyrylamino, isobutyryl- 8101439 * i a -4- amino, isobutyrylamino, pivaloylamino of palmitoylamino. Desgewenst kan het een benzoylaminogroep zijn, die desgewenst in de aromatische ring gesubstitueerd kan zijn bijvoorbeeld met één of meer lagere al-kylgroepen (bijvoorbeeld methyl» ethyl» propyl of isopropyl)» lagere 5 alkoxygroepen,(bijvoorbeeld methoxy, ethoxy, propoxy of isopropoxy), halogeenatomen (bijvoorbeeld chloor, broom, jood of fluor), nitro-groepen, trifluormethylgroepen, hydroxygroepen, aminogroepen of o arboxylgroepen.

Als fi een halogeenalkoxycarbonylaminogroep voorstelt, 10 is deze bij voorkeur een 2,2,2-trichloore thoxycarbonylamino of 2,2,2-tribroomethoxycarbonylaminogroep.

Als E1 een alkaansulfonylgroep voorstelt, omvat deze bij voorkeur 1-4 koolstofatomen, bijvoorbeeld methaansulfonyl, ethaan- sulfonyl, propaansulfonyl of butaansulfonyl.

2 3 1^ Als ofwel E of een alkylgroep voorstelt, kan deze recht of vertakt zijn en bij voorkeur 1-3 koolstof atomen omvatten bijvoorbeeld methyl, ethyl, propyl of isopropyl·

Als E^ een alkylgroep voorstelt, kan deze recht of vertakt zijn en bij voorkeur 1-4 koolstofatomen bevatten bijvoorbeeld methyl, 2fl ethyl, propyl* isopropyl, butyl, isobutyl of ter.butyl.

4 -

Als fi een oyanoalkylgroep is, omvat deze bij voorkeur 1-4 koolstofatomen in de alkylrest, bijvoorbeeld cyaanmethyl, 2-cyaan-ethyl, 3-cyaanpropyl of 4-cyaanbutyl.

Als E^ een hydroxyalkylgroep voorstelt, bevat deze bij 25 voorkeur 1-4 koolstofatomen in de alkylrest bijvoorbeeld hydroxymethyl, 2-hydroxyethyl of 4-hydroxybutyl.

A

Als E een alkoxycarbonylgroep is, kan deze recht of vertakt zijn en bij voorkeur 1-4 koolstofatomen in de alkoxyrest bevatten, bijvoorbeeld methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, propoxycarbo- 30 nyl, butoxycarbonyl of isobutoxycarbonyl.

4,

Als E een arylgroep voorstelt, is dit bij voorkeur fenyl en kan deze desgewenst in de aromatische ring gesubstitueerd zijn, bijvoorbeeld met één of meer lagere alkylgroepen (zoals methyl, ethyl, propyl of isopropyl), lagere alkoxygroepen (zoals methoxy, 33 ethoxy, propoxy of isopropoxy), trifluormethylgroepen, cyaangroepen, hydroxygroepen, nitrogroepen, aminogroepen of halogeenatomen (zoals fluor, chloor of broom).

Als E^ een aralkylgroep voorstelt is dit bij voorkeur ben* zyl, fenethyl of fenylpropyl en kan deze desgewenst in de aromatisohe 40 ring gesubstitueerd zijn bijvoorbeeld met één van de hierboven ge- 810143 9 * l -5- noeade subs tituen ten in geval £^ aryl voorstelt·

Als £^ een mercaptoalkylgroep voorstelt» omvat deze bij voorkeur 1-4 koolstofatomen in de alkylrest bijvoorbeeld mercapto-methyl, mereaptoethyl, aercaptopropyl of mercaptobutyl· 5 Als een alkyltbioalkylgroep voorstelt» kan elk van de alkylresten bij voorkeur 1-4 koolstof atomen bevatten bijvoorbeeld me thylthi ome thyl, me thylthi oe thyl, methylthiobutyl of propylthio-etbyl.

Als een thioalkylgroep voorstelt» bevat de alkylrest 10 bij voorkeur 1-4 koolstof atomen. Se vrije binding van bet zwavel- atoom in de thioalkylgroep is gebonden aan het zwavelatoom van een groep van dezelfde formule zodat de verbinding met formule 1 dan een symmetrische atruktuur zal hebben met de algemene formule 1a 12 3 waarin n, £ » £ » £ en A de hierboven genoemde betekenis bezitten 15 en Y een tweewaardige verzadigde alifatische koolwaterstofrest:(bij voorkeur met 1-4 koolstofatomen) voorstelt·

Als A een alkoxygroep is» kan deze een rechte of vertakte groep zijn bij voorkeur 1-16 koolstofatomen bevatten» bijvoorbeeld methoxy» ethoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, isobutoxy, hexyloxy, 20 decyloxy of hexadecyloxy·

Als A een alkylgesubstitueerde aoinogroep is, omvat de alkylrest bij voorkeur 1-4 koolstofatomen, bijvoorbeeld methylamino, dimethylamino, ethylamino, diethylamino, propyl amino, isopropyl-amino, butylamino of isobutylamino· Se alkylrest kan desgewenst zelf 25 halogeen- of oarbamoylgesubstitueerd zijn bijvoorbeeld 2-chloorethyl-amino, 2-brooae thylamino, 3-chloorpropylamino, 2-carbamoylethylamino of 3-carbaaoylpropylamino.

Als A een alkylgesubstitueerde hydrazinogroep voorstelt omvat deze bij voorkeur 1-4 koolstofatomen in de of elke alkylrest 30 bijvoorbeeld- me thylhydrazino, N, Ν'-dime thy lhy drazino, ethylhydrazino, of Η,Η-diethylhydrazino·

Als A een arylgesubstitueerde hydrazinogroep voorstelt is dit bij voorkeur fenylhydrazino. Seze kan ook in de aromatische ring gesubstitueerd zijn bijvoorbeeld met ééa of meer lage^alkylgroepen 35 (zoals methyl, ethyl, propyl of isopropyl), lagere alkoxygroepen (zoals methoxy, ethoxy, propoxy of isopropoxy), of halogeenatomen (zoals fluor, chloor of broom).

Als A een alkoxyaminogroep voorstelt, omvat deze bij voorkeur 1-4 koolstofatomen in de alkoxyrest, bijvoorbeeld methoxyamino, 40 ethoxyamino, propoxyamino of isopropoxyamino.

81 01439 . ι ί —6—

Als Δ een aralkyloxyaminogroep voorstelt, is dit bij voorkeur benzyloxyamino. Deze groep kan desgewenst in de aromatische ring gesubstitueerd zijn, bijvoorbeeld met één of meer lagere alkyl-groepen, lagere alkoxygroepen of halogeenatomen die genoemd zijn 5 als eventuele substituenten in geval R^ een arylgesubstitueerde hydrazinogroep voorstelt·

Voorkeursverbindingen met formule 1,vanwege hun farmaceutische werking en gemakkelijke synthese zijn die waarin: •j R een waterstofatoom, een halogeenatoom, een alkylgroep, 10 een hydroxygroep, een oyaangroep of een alkoxyearbonylgroep; 2 3 R en Rx beide waterstofatomen; R^ een alkylgroep, een carboxylgroep of een alkoxycarbonyl- groep; A een hydroxygroep of een alkoxygroep; en 15 n 1 of 2 voorstelt en de farmaceutisch verdraagbare zouten daarvan.

In het bijzonder wordt het meest de voorxeur gegeven aan de volgende verbindingen waarin: R1 een halogeenatoom, in het bijzonder chloor voorstelt; 2 3 20 R en RJ beide waterstof; R^ een alkylgroep met 1-4 koolstofatomen, in het bijzonder methyl; A een hydroxygroep of een alkoxygroep met 1-4 koolstofatomen; en 25 n het getal 1 voorstelt en de farmaceutisch verdraagbare zouten daarvan in het bijzonder de natriumzouten.

De verbindingen met formule 1 kunnen bereid worden volgens verschillende werkwijzen die als volgt verlopen.

Werkwijze 1.

30 Verbindingen met formule 4, (waarin R1, R2, R^, R^ en n de bovengenoemde betekenis bezitten en m"* een alkylgroep voorstelt) kunnen verkregen worden door reaktie van een aminozuurverbinding met formule 2(waarin R2, R^, R^ en de bovengenoemde betekenis bezitten) met een zuurhalogenide met formule 3 van het formuleblad, •j 33 (waarin R en n de bovengenoemde betekenis bezitten en X een halogeenatoom is, bijvoorbeeld chloor of broom) in tegenwoordigheid van een base en een inert oplosmiddel.

De reaktie verloopt stoichiometrisch onder toepassing van equimolaire hoeveelheden van de reaktiemiddelen. De reaktie wordt 40 uitgevoerd in tegenwoordigheid van een base, wat een organische base 810143 9 4 -7- kan zijn zoals een tertiair amine (bijvoorbeeld triethylamine, diae-thylamine, diethylamine of pyridine) of een anorganische base zoals een alkaliaetaalhydrozyde (bijvoorbeeld kaliumhydroxyde),een alkaline taalbicarbonaat (bijvoorbeeld kaliuabicarbonaat of natriumbicarbo-5 naat) of een alkaliaardiaetaalhydxoxyde (bijvoorbeeld calciumhydroxyde of magnesiuahydroxyde). Als voor de reaktie een organisch oplosmiddel gebruikt wordt, wordt de reaktie bij voorkeur uitgevoerd in tegenwoordigheid van een tertiair amine. Als anderzijds het reaktieoplos-middel ean mengsel is van een organisch oplosmiddel en water wordt 10 de reaktie bij voorkeur uitgevoerd in tegenwoordigheid van een alkaline taalbicarbonaat zoals natriumbicarbonaat of kaliumbicarbonaat.

Sr is geen bijzondere beperking wat betreft de keuze van het reaktieoplosmiddel. Het oplosmiddel kan bijvoorbeeld een alcohol zijn zoals methanol, ethanol, propanol, isopropylalcohol of butanol, 15 een aromatische koolwaterstof zoals benzeen, tolueen of xyleen, een keton, zoals aceton, me thy lbutylke ton of methylamylketon, een gehalo-geneerde koolwaterstof zoals tetrachloorethaan, chloorbenzeen of dichloorbenzeen; een nitril, zoals benzonitril of acetonitril, een aaide zoals H,H-diaethylformanri.de, Η,Η-dimethylaeeetamide of hexamethyl-20 foeforsuurtriamide; dimethylsulfoxyde, een mengsel van elk van deze oplosmiddelen; of een mengsel van elk van deze oplosmiddelen met water.

De reaktietemperatuur is niet bijzonder kritisch doch een temperatuur van -20°C tot 100°C wo&gewoonlijk gebruikt, bij voorkeur 25 van 0°C tot 30°C. he reaktietijd zal variëren afhankelijk van de aard van de uitgangsstoffen en de reaktietemperatuur maar ligt gewoonlijk tussen 1 en 5 uren.

Ha beëindiging van de reaktie kan het gewenste produkt met formule 4 uit het reaktiemengsel volgens op zichzelf bekende wijze 30 gewonnen worden. Als bijvoorbeeld het gewenste produkt in het reaktiemengsel neergeslagen wordt, kan dit gewonnen worden door filtreren. Als het niet neergeslagen kan worden, kan het produkt gewonnen worden door het oplosmiddel uit het reaktiemengsel af te destilleren. Zonodig kan het aldus verkregen produkt verder gezuiverd worden bij-35 voorbeeld door herkristalliseren, vacuumdestilleren of chromatogra-fie.

De als uitgangsstoffen bij deze reaktie gebruikte amino-zuurverbindingen met formule 2 kunnen bereid worden volgens de werkwijze beschreven in Tetrahedronletters Ho. 17♦ blz. 1455-1458 (1977)· . 4 4o Zo laat men een Schiffse base met formule 1 4 waarin R en 81 01 439 ï i ·β* de bovengenoemde betekenis bezitten reageren met een verbinding 2 3 met formule 8 van het formuleblad, waarin R en R de bovengenoemde betekenis bezitten, in tegenwoordigheid van een sterke base bijvoorbeeld trimethylbenzylammoniumhydroxyde (beschikbaar als een 40$· s 5 methanoloplossing onder de handelsnaam "Triton B"), 1,5-diazabicyclo [4·3·0J-5-noneen (BBN) of 1,8-diazabicyolo[5«4-0J-7-undeceen (BBU), waarbij men een verbinding verkrijgt met formule 14 van het formule-2 3 4 1 blad, waarin R , R , R en M de bovengenoemde betekenis bezitten, welke verbinding gehydrolyseerd wordt met een zuur (bijvoorbeeld een 10 mineraalzuur zoals zoutzuur) en het verkregen produkt geneutraliseatf. wordt met een base· Be hydrolyse geeft een zout van de gewenste amino- zuurverbinding met formule 2 met de formule 13 van het formuleblad, 2 3 4 1 1

waarin R , R , R en M de bovengenoemde betekenis bezitten en X

een halogeenatoom of een sulfaatgroep voorstelt, en deze verbinding 13 kan direkt gebruikt worden bij de reaktie met een zuurhalogenide md formule 3, in een waterig reaktiemengsel, zonder isoleren van de vrije verbinding.

Be aldus verkregen verbinding met formule 4 kan gehydrolyseerd worden met een alkalimetaalhydroxyde in water of een waterig 20 organisch oplosmiddel onder vorming van een zout van de overeenkomstige carbonzuurverbinding met formule 3 van het formuleblad waarin 3 12 3 4 W een alkalimetaal, zoals natrium of kalium en R , R , R , R en n de bovengenoemde betekenis bezitten.

Deze reaktie verloopt stoichiometrisch en de toepassing 23 van equfmolaire hoeveelheden reaktiemiddelen; doch men geeft er de voorkeur aan om een overmaat van het alkalimetaalhydroxyde te gebruiken, door toepassing van 1,0 tot 2,0 mol alkalimetaalhydroxyde per mol verbinding met formule 4*

Als men voor deze reaktietrap een waterig organisch oplos-30 middel gebruikt, is er geen bijzondere beperking gesteld aan de keuze van de organische oplosmiddelen, mits deze niet storen bij de reaktie. Het oplosmiddel kan bijvoorbeeld alcohol zijn, zoals methanol, ethanol, propanol, isopropylalcohol of butanol; of een ke-ton, zoals aceton of methylbutylketon. Het alkalimetaalhydroxyde 33 kan bijvoorbeeld natriumhydroxyde of kaliumhydroxyde zijn. Be reaktie tempera tuur is bij voorkeur 0-30°C.

Ha beëindiging van deze reaktie, kan het gewenste produkt met formule 3 uit het reaktiemengsel gewonnen worden volgens op zichzelf bekende wijze. Als de verbinding bijvoorbeeld neerslaat, kan 40 deze gewonnen worden door filtreren en gewassen worden met een niet- 8101439 -9- oplosmiddel voor het produkt. Als de verbinding niet neerslaat, kan aan het reaktiemengsel een alcohol, bijvoorbeeld methanol of ethanol of een keton, bijvoorbeeld aceton of methylethylketon, toegevoegd worden om de verbinding neer te slaan en het neerslag verdt 5 dan op gebruikelijke wijze verzameld.

De aldus verkregen verbinding met formule 5 kan geneutraliseerd worden net een zuur in water of in een waterig organisch oplosmiddel, volgens op zichzelf bekende wijze, onder vorming van het 1 2 *5 vrije carbonzuur met formule 6 van het formuleblad, waarin R , R , Br 4 10 en R en n de bovengenoemde betekenis bezitten·

De gewenste verbinding met formule 6 kan uit het reaktie-nengsel gewonnen worden volgens op zichzelf bekende wijze· Als de verbinding bijvoorbeeld het reaktiemengsel neerslaat, kan deze gewonnen worden door filtreren. Als de verbinding niet neerslaat, kan 15 deze gewonnen worden door afdestilleren van het oplosmiddel, extraheren van het residu met een niet met water mengbaar organisch oplosmiddel en het uit het extrakt afdestilleren van het oplosmiddel. Sr is geen bijzondes» beperking gesteld aan de keuze van de niet met water mengbare oplosmiddelen die voor deze extraktie gebruikt kunnen 20 worden; het kan bijvoorbeeld een ether zijn zoals dime thyle ther of diethylether; een gehalogeneerde koolwaterstof, zoals dichloormethaan of chloroform; een aromatische koolwaterstof zoals benzeen, tolueen of xyleen; of een ester zoals ethylacetaat· Desgewenst kan het verkregen produkt met formule 6 verder gezuiverd worden bijvoorbeeld 25 door herkristalliseren of chromatografie.

Werkwijze 2.

De verbindingen met formule 6 zoals hierboven omschreven kunnen ook bereid worden door.reaktie van een aminozuurverbinding 1 A 1 met formule 7> waarin R , R , M en n de bovengenoemde betekenis 2 5 30 bezitten met een verbinding met formule 8, waarin R en R' de bovengenoemde betekenis bezitten in tegenwoordigheid van een sterke base.

Deze reaktie verloopt stoichiometrisch, onder toepassing van equimolaire hoeveelheden reaktiemiddelen, doch men geeft er de voorkeur aan om een overmaat van de verbinding 8 en van de base te 35 gebruiken, onder toepassing van 1,0 tot 1,5 mol van elk per mol verbinding met formule 7· De sterke base kan doelmatig bijvoorbeeld 1,5-diazabicyclo£4*3*0J-5-noneen (DBN), 1,8-diazabicyclo£5*4*0j-undeceen of een metaalhydride zoals natriumhydride of kalium- hydride^Er1 is geen bijzondere beperking gesteld aan de keuze van 40 het voor deze reaktie gebruikte oplosmiddelen, mits dit niet stoort 8101 439 -10- bij de reaktie en geschikte oplosmiddelen zijn gehalogeneerde koolwaterstoffen zoals chloroform, dichloormethaan of dichloorethaan, ethers zoals dimethylether, diethylether, diisopropylether, dioxan of tetrahydrofuran en amiden zoals K9K-dimethylformamide, K,K-diethyl-5 acee taaide of hexamethylfosfortriamide. De reaktie temperatuur is doelmatig 0-50°G en hij voorkeur 20-30°C. De reaktietijd varieert afhankelijk van de aard van de uitgangsstoffen en de reaktietempera-tuur maar ligt gewoonlijk tussen 2 en 20 uren.

Ka beëindiging van de reaktie kan het gewenste produkt 10 verkregen worden door wassen van bet reaktiemengsel met water en afdestilleren van het oplosmiddel. Desgewenst kan het aldus verkregen produkt verder gezuiverd worden bijvoorbeeld door herkristalliseren, vacuumdestilleren of chromatografie.

Werkwijze 3.

13 Verbindingen met formule 11 van het formuleblad, waarin 1 2 3 A 2 R , R , R , R4 en n de bovengenoemde betekenis bezitten en M dezelfde betekenis bezit als A, behoudens hydroxy of alkoxy, kunnen verkregen worden door reaktie van een oxazolon met formule waarin r\

'2 3 A

R , R , R en n de bovengenoemde betekenis bezitten met een organische 20 base met formule 10 van het formuleblad waarin M2 de bovengenoemde betekenis bezit.

De reaktie verloopt stoichiometrisch onder toepassing van equimolaire hoeveelheden reaktiemiddelen doch men geeft er de voorkeur aan om te werken met een overmaat van de base met formule 10 25 onder tclassing van 1,0-1,3 mol daarvan per mol oxazolon met formule 9* Sr is geen bijzondere beperking gesteld aan de keuze van het oplosmiddel voor deze reaktie, mits deze niet stoort bij de reaktie, en geschikte voorbeelden zijn koolwaterstoffen zoals benzeen, tolueen of xyleen, ethers zoals dioxan, tetrahydrofuran of diisopropyl-30 ether en gehalogeneerde koolwaterstoffen zoals dichloorethaan of chloroform. De reaktietemperatuur bedraagt gewoonlijk 0-100°C en meer in het bijzonder 20-30°G. De reaktietijd bedraagt in het algemeen 2-12 uren.

Ka beëindiging van de reaktie kan het gewenste produkt met 33 formule 9 verkregen worden door wassen van het reaktiemengsel met water en afdestilleren van het oplosmiddel. Desgewenst kan het produkt verder gezuiverd worden bijvoorbeeld door herkristalliseren of chromatografie.

De oxazolonuitgangsverbindingen met formule 9 kunnen bereid 40 worden volgens de werkwijze beschreven in Journal für Praktische 81 01 439 -11-

Chemie {2j, 82, 60 (1910).

Werkwijze 4.

12 3

De aminozuren met formule 13 (waarin fi , fi , Er en n de bovengenoemde betekenis bezitten, kunnen bereid worden door verhitten 12 3 3 van een verbinding met formule 12 waarin £, £ t B en n de bovengenoemde betekenis bezitten.

Voor deze reaktie kan de verbinding met formule 12 opgelost worden in elk oplosmiddel dat bij de reaktie niet stoort, bijvoorbeeld een ether, zoals diieopropylether, tetrahydrofuran of dioxan, 10 of een koolwaterstof zoals benzeen, tolueen of xyleen.

Sen organische base zoals triethylamine, dimethylaniline of pyridine kan toegevoegd worden om de reaktie gelijkmatiger te laten verlopen. Desgewenst kan de uitgangsverbinding met formule 12 direkt opgelost worden in een tertiaire organische base, zoals pyri-13 dine of die thylaniline en de verkregen oplossing verwarmd worden ter verkrijging van het gewenste produkt met formule 13« De voor de reaktie gebruikte temperatuur ligt tussen 30 en 100°C en bij voorkeur tussen 30 en 100°C terwijl de reaktietijd in bet algemeen ligt tussen 1 en 8 uren.

20 ffa beëindiging van de reaktie kan het gewenste'-produkt met formule 13 volgens op zichzelf bekende wijze geïsoleerd worden. Bijvoorbeeld kan de reaktie uitgevoerd worden in tegenwoordigheid van een organische base, en de verbinding met formule 13 kan verkregen worden door wassen van het reaktiemengsel met water en afdestil-23 leren van het organische oplosmiddel. Desgewenst kan het produkt verder gezuiverd worden bijvoorbeeld door herkristalliseren, vacuum-destilleren of chromatografie·

Het zuur met formule 13 kan ook veresterd worden onder vorming van een verbinding met formule 4 waarin waterstof voorstelt, 30 door reaktie daarvan met een geschikt alkyleringsmiddel. Deze ver-estering kan uitgevoerd worden volgens één van de bekende werkwijzen, doch men geeft er de voorkeur aan om deze uit te voeren in een amide-oplosmiddel zoals Η,Η-dimethylformamide, Η,ΙΤ-diethylaceetamide of hezamethylfosfortriamide. De alkyleringsmiddelen kunnen doelmatig een 55 alkylhalogenide zijn, in welk geval de reaktie bij voorkeur uitgevoerd wordt in tegenwoordigheid van een base, bijvoorbeeld een alkali-metaaiearbonaat zoals kaliumcarbonaat of natriumcarbonaat.

De verbindingen met formule 1 die carbonzuren of hydroxan-zuren zijn kunnen volgens op zichzelf bekende wijze omgezet worden 40 in een zout onder vorming van een farmaceutisch verdraagbare zouten 810143 9 , * -12- - hier bijvoorbeeld zouten met anorganische metalen zoals lithium, natrium, kalium, calcium, magnesium of aluminium en ammonium of gesubstitueerde ammoniumzouten zoals de cyelohexylammonium-, diiso-propylammonium- of trie thylammoniumzou ten. In het algemeen geeft men de voorkeur aan de natrium, kalium en calciumzouten.

5 De verbindingen volgens de uitvinding bezitten optische isomers Het is duidelijk dat de afzonderlijke optische isomeren binnen het kader der uitvinding vallen alsmede racemische mengsels van de isomeren. Het is echter ook duidelijk dat voor elk paar optische isomeren van de verbindingen volgens de uitvinding één van de 10 afzonderlijke isomeren een aanmerkelijke grotere farmaceutische werking kan vertonen dan het andere isomeer of het racemische mengsel, zoals algemeen bekend voor andere farmaceutische verbindingen die optische isomerië vertonen.

In het algemeen kunnen racemische mengsels van de verbin-15 dingen volgens de uitvinding,bereid volgens de hierboven genoemde werkwijzen, gebruikt worden zonder scheiding in de afzonderlijke isomeren. Desgewenst kunnen de afzonderlijke optische isomeren ook verkregen worden onder toepassing van op zichzelf bekende werkwijzen, ofwel door scheiding van de racemische mengsels of door stereo-20 specifieke synthese onder toepassing van uitgangsstoffen of tussen-produkten met bekende configuratie. Bijvoorbeeld, bij gebruik van de hierboven beschreven werkwijze 1, wordt de H-benzyloxycarbonyl-L-prolylverbinding van het uitgangsprod.ukt met formule 2 bereid, de twee diazastereomeren van deze verbinding worden gescheiden en de 25 prolylbeschermende groepen verwijderd, waarbij men twee isomeren van de verbinding met formule 2 verkrijgt die men kan laten reageren met het zuurhalogenide met formule 3 ia een stereospecifieke synthese van de optische isomeren van het eindprodukt van formule 4*

Gevonden is dat de verbindingen volgens de uitvinding 30 in de geneeskunde gebruikt kunnen worden vanwege hun waardevolle immunoregulerende en tumorbestrijdende werkingen. Deze werkingen worden toegelioht aan de hand van de volgende proeven.

1) Herstel van de immunologische funk tie in tumordragende Mi zen.

ICB/Jcl vrouwelijke muizen geïmplanteerd met Ehrlich carcinoom-35 cellen werden gebruikt om het effekt van de verbindingen volgens de uitvinding te onderzoeken op hypersensitiviteitreakties van het vertraagde type geïnduceerd door inspuiten van BCG (Bacillus Calmette-Guerin) in de voetzool.

Elke groep bestond uit 10 muizen. Elke muis werd subcutaan 8101439 -15- geiamuni eerd met 500 ag BCG. Op de 9® dag voor de immunisering werden in elke muis subcutaan 2 x 1Q^ Bhrlich carcinoomcellen getransplanteerd. Op de 4e en 2e dag voor de iamunisatie, werd te te onderzoeken verbinding intraperitoniaal toegediend in een hoeveel-5 heid van 1 of 10 ag/kg lichaamsgewicht. Op de 14e dag na de immunisering werd in trade maal in de voetzool van één van de achterpoten / stoot een'injektie toegediend en de zwelling van de voetzool werd 24 uren na deze sfootinjektie bepaald door vergelijking met de voetzool van niet met BCG geinjekteerde dieren. Controlegroepen van normale en 10 tumordragende dieren werden soortgelijke wijze geinjekteerd met BCG en de zwelling van de voetzool gemeten.

Herstel van de immunologische respons bij de tumordragende dieren behandeld aet de te onderzoeken verbindingen werd berekend met behulp van de volgende formule j 15 herstel van immunologische respons ($) * 1QQ-[a/b)x 100J

waarin t A is (zwelling van de voetzool van de controlegroepen van normale dieren - zwelling van de voetzool van tuaordra-gende dieren die de te onderzoeken verbinding ontvingen) 20 B is zwelling van de voetzool van de controlegroep van de normale dieren - zwelling van voetzool van controlegroep van tumordragende dieren).

Be verkregen resultaten zijn weergegeven in tabel A en tonen de doelmatigheid van de verbindingen volgens de uitvinding, 25 bij het herstel van de immunologische respons bij tumordragende muizen.

8101439 -14-

Tabel A.

Onderzochte verbinding Herstel immunologische respons (jb) 1 mg/kg 10 mg/kg N-(p-chloorbenzoyl)-2-(2-cyaane thy1) 5 alanine 67 99 N-(p-chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl) alaninemethyleeter 43 121 N-(p-chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl) fenylglycinemethylester 71 114 10 N-(4-chloor-2-hydroxybenzoyl)-2- (2-cyaanethyl)-alaninemethyiester 60,9 56,6

Binatrium 2-(p-chloorbenzoylamino)-2- (2-cyaane thyl)malonaatdihydraat 42,7 92,8

Be bovengenoemde proef werd herhaald met de te onderzoeken 19 verbinding N-(p-chloorbenzoyl)-2-(2-cyaane thyl) alanineme thylester, doch oraal toegediend inplaats van intraperitoneaal· Het herstel . van de immunologische respons bedroeg 8I96 bij een dosis van 1 mg/kg en 116$ bij een dosis van 10 mg/kg· Beze resultaten tonen de werkzaamheid van de verbinding bij orale toediening zowel als bij intra- 20 peritoneala toediening.

2) Tumorbestrijdende werking bij Sarcoma-37 vaste tumor in muizen.

Sarcoma-37 cellen (2 x 10^)werden subcutaan geïmplanteerd in het axillaire gebied van 7 weken oude vrouwelijke ICB/Jcl muizen· Be te onderzoeken verbindingen zoals vermeld in tabel B werden intra- 29 peritoneaal toegediend in dosis als weergegeven in mg/kg liehaamsge-wicht/dag), sens per dag op elk van de eerste tot de veertiende en de 7c tot de 10e dag na de implantatie. Haast de verbindingen volgens de uitvinding werden twee controleverbindingen gebruikt welke immunoregulerende en tumorbestrijdende werking bezitten: levamisool 30 (het linksdraaiende isomeer van tetramisool) en tiloron. Beze controleverbindingen werden toegediend in de aangegeven dosis aangezien hogere dosis acute giftigheid bij de proefdieren veroorzaakte. Een niet behandelde controlegroep van dieren werd ook gebruikt.

Op de 21e dag na de implantatie, werd de diameter van de 33 tumor gemeten en vergeleken met die van de controlegroep, om het percentage onderdrukking van de tumorgroei te bepalen.

Be resultaten zijn weergegeven in tabel S.

8101439 -15- · gabel B.

Onderzochte verbinding Dosis Onderdrukking van de tumorgroei (f>) op de _21e dag_ 1 8 5 lf-(p-chloorbenzoyl)-2-(2-cyaan- , e thyl) alanineme thyle s ter ^ ^ 50 39 100 35 S- ( o-ace toxybenzoy1-2-(2-cyaane thyl) alanineme thyle ster 1 32 IT- ( o-hydroxybenzoyl) -2-( 2-cyaane thyl) 0 alaninemethylester 1 38 IT-( 3 *4-dihydroxy benzoyl) -2-(2-cyaane thyl) alaninemethylester 10 55 lf-( 3-flnor-4-methylbenzoyl)-2- (2-cyaane thyl) alanineme thyle ster 1 27 10 41 ^ ^ Dinatrium-2-(p-chloorbenzoy1amino)- 2-( 2-cyaane thyl)malonaatdihydraat 10 27

Dinatrium-2-(p-methylbenzoylamino)-2-( 2-cyaane thyl)malonaatmonohydraat 10 26 IT-( 2-aaino-4-chloor benzoyl)-2-( 2-20 cyaanethyl) alanineme thy les ter 10 26 H-(p-chloorbenzoyl)-2-(2-cyaane thyl) methioninemethylester 10 47 (Controleverbindingen)

Levamisool 3 0 25 liloroon 30 -5 1 8101439

Antitumorwerking tegen syngenetumor MM-46.

r * - 16 -

Tumorcellen van muizenborsten (2 x 10^) werden subcutaan ingeplant in het axillaire gebied van 7 weken oude C3H/He muizen en de in tabel C weergegeven onderzochte verbindingen werden eenmaal per dag intraperitoneaal toegediend in de aangegeven dosis (in mg/ 5 kg lichaamsgewicht/dag) op elk van de derde tot de tiende dag na de implantatie. Op de dertigste dag na de implantatie, werd de tumordiameter gemeten en vergeleken met die van een kontrolegroep van niet behandelde dieren· Op de vijfenveertigste dag na de implantatie werd het aantal dieren in elke groep met volledige 10 regressie van de tumor genoteerd en het percentage voor de groep berekend.

De resultaten zijn samengevat in tabel C.

Tabel C

15 Onderzochte Dosis Onderdrukking Volledige re- verbinding tumorgroei (%) gressie van de op dag 30 tumor op dag 45 (en % per groep) (|3-chloorbenzoyl)- 3 - 3 0/5 (0$) 20 2-(2-cyaanethyl)- 10 30 2/5 (4(¾¾) alanine methyl 30 36 2/5 (40%) ester 100 39 2/5 (40$) (kontroleverbindingen) 25 Levamisool 3 14 1/5 (20$)

Tiloroon 30 9 1/5 (20%) 4) Acute aiftiaheidsproef

De verbinding volgens de uitvinding, N- (£-chloorbenzoyl)-2-30 (2-cyaanethyl)alanine methylester werd intraperitoneaal toegediend aan muizen in dosis van 100 en 300 mg/kg lichaamsgewicht. Een week na de toediening, was geen van de dieren gestorven en werd geen vertraging in hun lichaamsgevichttoename waargenomen.

De resultaten van de farmacologische proeven geven aan dat de 35 verbindingen volgens de uitvinding waardevol zijn als immunoregula-toren bij gebruik tegen kankergezwellen, bacteriële infecties en auto-immune ziekten en als gastheer aangepaste tumor bestrijdende 81 01 439 - 17- stoffen. Zij zijn geschikt voor medische toediening volgens de normale parenterale, enterale en orale wijzen, onder toepassing van de bekende typen formuleringen, bijvoorbeeld door subcutane , intraveneuze of intramusculaire injectie, als suppositoria, of 5 oraal in de vorm van tabletten, capsules, poeders, korreltjes en siropen.

De volgens de uitvinding verkregen farmaceutische preparaten bevatten dientengevolge tenminste één verbinding met de bovengenoemde formule 1 van het formuleblad of een farmaceutisch verdraag-10 baar zout daarvan, tezamen met een farmaceutisch verdraagbare drager of verdunningsmiddel. De gebruikte drager of gebruikt verdun-ningsmiddel kan vast of vloeibaar zijn en zijn keuze zal afhangen van het beoogde type formulering en de wijze van toediening. De samenstelling kan ook bekende farmaceutische adjuvants bevatten die 15 geschikt zijn voor het desbetreffende type formulering.

De dosering van de verbindingen volgens de uitvinding zal afhangen van de toestand van het behandelde individu en de wijze en frekwentie van toediening, doch de dosering voor volwassenen zal in het algemeen liggen tussen 5 en 300 mg per dag, of wel in één enke-20 le dosis of in meerdere dosis. Als de farmaceutische preparaten volgens de uitvinding geformuleerd worden tot eenheidsdoserings-vormen, kan elke doseringseenheid doelmatig 5 tot 50 mg werkzaam bestanddeel bevatten.

De bereiding van de verbindingen en preparaten volgens de 25 uitvinding wordt toegeiicht door de volgende niet beperkende voorbeelden. De bereiding die op de voorbeelden volgt licht de bereiding toe van een van de uitgangsstoffen met formule 9.

Voorbeeld I

N-(p-Chloorbenzovl)-2-(2-cvaanethvl)alanine methviester en 30 N- (p-chloorbenzovl)-2-(2-cyaanethyl)alanine 2-(2-Cyaanethyl)alanine methyles.ter (7,8 g) werd opgelost in 100 ml d ichloormethaan en aan de verkregen oplossing werd bij 5°C druppelsgewijs 8,7 g p-chloorbenzoylchioride toegevoegd, gevolgd door de toevoeging van 6,0 g triethylamine bij dezelfde tempera-35 tuur. Het reaktiemengsel werd 1 uur geroerd bij 0 - 5°C en vervolgens gewassen met twee porties van 100 ml water. De organische laag werd afgescheiden en gedroogd boven magnesiumsulfaat en het 81 01 439 - 18 - oplosmiddel afgedestilleerd· Het verkregen residu werd gezuiverd door kolomchromatografie op silicagel (elutiemiddel: een 9:1 meng-t sel van benzeen en etbylacetaat) en herkristalliseexd uit ethyl-acetaat, waarbij men 12,4 g van de gewenste butylester verkrijgt in 5 de vorm van kleurloze naalden die smelten bij 91 - 92°C·

Elementaire analyses

Berekend voor C-j^H *** 57#05; H, 5,13; N, 9,50;

Cl, 12,03#

Gevonden : C, 56,81; H, 5,11; N, 9,20 10 Cl, 12,06# 29,4 g N-(p-chloorbenzoy1)-2-(2-cyaanethyl)alanine methyl-ester wwrden opgelost in 100 ml methanol en hieraan werd bij 5°C 150 ml toegevoegd van een IN oplossing van natriumhydroxyde, en het mengsel 3 uren bij 0 tot 5°C geroerd· Het reaktiemengsel werd ver-15 volgens verdund met 100 ml water en gewassen metethylacetaat (300 ml). De waterlaag werd afgescheiden, de pH ingesteld op 2,0 door toevoegen van geconcentreerd zoutzuur bij 5°C, en geextraheerd met ethylacetaat (300 ml)· Het extract werd gedroogd boven magnesium-sulfaat en het oplosmiddel werd afgedestilleerd· Het verkregen 20 residu werd herkristalliseerd uit diethylether waarbij men 21,6 g van het gewenste aminozuur verkrijgt in de vorm van een kleurloos poeder dat smelt bij 82 - 85°C.

Elementaire analyse:

Berekend voor C^Hi^Og^Gl : C, 55,62; H, 4,67; N, 9,98; 25 Cl, 12,63#

Gevonden : C, 55,57; H, 4,85; N, 9,57

Cl, 12,34#.

De volgende verbindingen werden verkregen onder toepassing van de werkwijze volgens het voorgaande voorbeeld· 30 Nk (g-Chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)fenylglycine

methylester Smeltpunt: 127-128°C

2-(2-Cyaanethyl)-^-benzoylalanine methylester

Smeltpunt: 127-128°S

2-(g-Chloorbenzamido)-4-cyaan-2-(2-cyaanethyl)boterzuur 35 methylester Smeltpunt: 168-169°C

2-(2-cyaanethyl)-N-benzoylaminomalonzuur diethylester

Smeltpunt: 61-62°C

81 01 439 - 19 - 2- (2-Cyaonethyl)-N-benzoylfenylglycine ethylester

Smeltpunt: 71-72°C

2-(2-Cyaanethyl)-N- (^-chloorbenzoyl)alanine

hexadecylester Smeltpunt: 83-84°C

5 14- (£-Chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)aminomalonzuur

diethylester Smeltpunt: 82-83°C

N- (jo-Chloorbenzoyl) -2- (2-cyaanethyl) serinemethylester

Smeltpunt: 117-118°C

N-(j?-Chloarbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)leucine raethylester 10 , Smeltpunt: 48-51°C

N- (m-Chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine tnethylester n p5= 1,5365 f4- (m-Chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine

Smeltpunt: 86-89°C

15 N-(a-Chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine raethylester

Smeltpunt: 73-74°C

hk (o-Chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine

Smeltpunt: 100-102°C (met decompositie) 20 2-(2-Cyaanethyl)-N-(2,4-dichloorbenzoyl)alanine methylester = 1,5415 2-(2-Cyaanethyl)-N- (2,4-dichloorbenzoyl)alanine

Smeltpunt: 151-153°C

2-(2-Cyaanethyl)-N- (£-fluorbenzoyl)alanine methylester 25 Smeltpunt: 111-1120C

2- (2-Cyaanet hyl) -14- (^-fluorbenzoyl) alanine

Smeltpunt: 85-88°C

2-(2-Cyaanethyl)-H- (£-broombenzoyl)alanine methylester

Smeltpunt: 108-109°C

30 2-(2-Cyaanethyl)-N- (£-broombenzoyl)alanine

Smeltpunt: 87-89°C

N-(£-Chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)glycine methylester

Smeltpunt: 110—111°C

N- (£-Chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)glycine 35 Smeltpunt: 152-154°C

2-(2-Cyaanethyl)-N- (£-toluoyl)alanine methylester

Smeltpunt: 111-112°C

8101439 * « - 20 - 2-(2-cyaanethyl)-N- (jj-toluoyl)alanine

Smeltpunt: 84-86°C

2-(2-Cyaanethyl)-N~ (£-j oodfaenzoyl)alanine methylester

Smeltpunt: 114-1150C

5 2-(2-Cyaanethyl)-N- (jj- joodbenzoyl)alanine

Smeltpunt: 87-89°C

2-(2-Cyaanethyl)-N-(pentafluorbenzoyl)alanine methylester n 1,4710

Voorbeeld II

10 N-(p-Chloorbenzoyl)-2-(2-cvaanethyl)fenvlalvcine methylester

Aan 100 ml van een oplossing van 6,0 g W~ (ja-chloor benzoyl)-fenylglycine methylester in dichloormethaan werden 1,6 g acrylo-nitril en 3,6 g 1,8-diazabicyclo(5.4.0)-7-undeceen toegevoegd gevolgd door 16 uren roeren bij kamertemperatuur. Het oplosmiddel 15 werd afgedestilleerd en 100 ml ethylether aan het verkregen residu toegevoegd. Het mengsel werd gewassen met twee porties van 100 ml water, de organische laag afgescheiden en gedroogd boven magne-siumsulfaat. Het oplosmiddel werd afgedestilleerd en het residu herkristalliseerd uit diethylether waarbij men 5,8 g van het ge-20 wenste produkt verkrijgt in de vormvan een kleurloos poeder dat smelt bij 127-128°C.

Elementair analyse:

Berekend voor .C^H-j^Qg^Cl: C, 63,95; H, 4,80; N, 7,85;

Cl, 9,94£ 25 Gevonden : C, 64,04; H, 4,85; N, 7,90

Cl, 9,76%.

De volgende verbindingen werden verkregen onder toepassing van de werkwijze volgens het voorgaande voorbeeld.

2-(2-Cyaanethyl)-H-benzoylfenylglycine ethyles ter 30 Smeltpunt: 71-72°C

N- ({3-Chloorbenzoyl) -2- (2-cyaanethyl) aminomalonzuur diethylester Smeltpunt: 82-83°C

N-Benzoyl-2-(2-cyaanpropyl)fenylglycine ethylester

Smeltpunt: 84-85°C.

35 Voorbeeld III

4-Cyaan-2-(N-p-chloorbenzamido)-2-methylbutyrvlamide 5 ml van een oplossing van 2,0 g 2-(£-chloorfenyl)-4-(2-cyaan-ethyl)-4-methyl-5-oxazolon in tetrahydrofuran werden toegevoegd aan 81014 3 9 - 21 - een mengsel van 9,5 ml van een 28j2's waterige ammoniakoplossing en 5 ml tetrahydrofuran bij 5°C, gevolgd door een uur roeren bij 0-5°C. Het reaktiemengsel werd geëxtraheerd met ethylacetaat (50 ml) en de organische laag afgescheiden en gedroogd boven raagnesiumsulfaat.

5 Het oplosmiddel werd afgedestilleerd en het verkregen residu her-kristalliseerd uit diethylether waarbij men 1,8 g van het gewenste produkt verkrijgt als een kleurloos poeder dat smelt bij 118-12Q°C. Elementair analyse;

Berekend voor : 55,82; H, 5,04; N, 15,02 10 Cl, 12,6752

Gevonden s C, 55,76; H, 5,27; N, 14,37;

Cl, 12,41J2.

De volgende verbindingen werden verkregen onder toepassing van de werkwijze volgens het voorgaande voorbeeld*

15 2- (^-g-Chloorbenzaraido)-4-cyaan-2-methyl-(H-2-carbamoylethyl) butyrylamide Smeltpunt: 138-140°C

2-(NU£-Chloorbenzamido)-4-cyaan-2~methyl-(H-2-chloorethyl)-butyrylamide Smeltpunt: 172-174°C

2-(N-£-Chloorbenzamido)-4-cyaan-2-methyibutyrylhydroxamide 20 Smeltpunt: 80-81°C

2-(i4-j>-Chloorbenzamido)-4-cyaan-2-methyl-(N-dimethyl)butyrylamide

Smeltpunt: 133-134°C.

Voorbeeld IV

N-(p-Chloorbenzovl)-2-(2-cyqanethvl)qlycine en N-(p-chloorbenzovl)-25 2-(2-cvaanethvl)glycine methviester 20 ml van een oplossing van 3,2 g N-(^-chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)aminomalonzuur in pyridine wérden 1 uur onder terugvloei-koeling gekookt en het oplosmiddel werd vervolgens afgedestilleerd· Aan het verkregen residu werd 50 ml water en 50 ml ethylacetaat toe-30 gevoegd, het mengsel ingesteld op pH 2 door toevoegen van 3N zoutzuur, en de organische laag afgescheiden en gedroogd boven magne-siumsulfaat. Het oplosmiddel werd afgedestilleerd en het verkregen residu herkristalliseerd uit ethylacetaat waarbij men 2,5 g van het gewenste aminozuur verkrijgt in de vorm van kleurloze korreltjes 35 die smelten bij 152-154°C.

Elementair analyse:

Berekend voor ^12^11^3^2^" : 54/05; H, 4,16; N, 10,50;

Cl, 13,2952 81014 39 - 22 -

Gevonden : C, 53,91; H, 4,25; N, 10,50;

Cl, 13,09# 1,6 g methyljodide en 1,1 g kaliumcarbonaat werden toegevoegd aan 5 ml van een oplossing van 1,5 g van het aldus verkregen zuur 5 in dimethylformamide· Na 16 uren roeren bij kamertemperatuur werd het reaktiemengsel verdund met 50 ml ethylacetaat gewassen met driemaal 50 ml water· De organische laag werd afgescheiden en gedroogd boven magnesiumsulfaat· Het oplosmiddel werd afgedestilleerd en het verkregen residu herkristalliseerd uit diethylether waarbij 10 men 1,3 g van de gewenste methylester verkrijgt in de vorm van een kleurloos poeder dat smelt bij 110-111°C*

Elementair analyse:

Berekend voor C^^Og^Cl: C, 55,62; H, 4,67; N, 9,98;

Cl, 12,63# 15 Gevonden ' : C, 55,78; H, 469; N, 10,01;

Cl, 12,57#.

Voorbeeld V

N-(3,4-Dihydroxvbenzovl)-2-(2-cvaanethvl) methylester 1,56 g 2-(2-cyaanethyi)alanine methylester en 1,4 ml triethyl-20 amine werden toegevoegd aan een oplossing van ruw 3,4-diacetoxy-benzoylchloride (bereid uit 1,96 g 3e,4-diacetoxybenzoezuur en 2,08 g fosforpentachloride) in 30 ml dichloormethaan, bij 5°C· Het reaktiemengsel werd 1 uur bij 0 tot 5°C geroerd en vervolgens gewassen met 30 ml water· De orgabische laag werd afgescheiden en ge-25 droogd boven magnesiumsulfaat en het oplosmiddel afgedestilleerd·

Het verkregen residu werd opgelost in 10 ml methanol, 8,3 ml van een 28#fs waterige ammoniakoplossing toegevoegd en de oplossing 23 uren bij kamertemperatuur geroerd. Het mengsel werd vervolgens afgekoeld tot 5°C, ingesteld op pH 2,0 met geconcentreerd zoutzuur, 30 verdund met 50 ml water en geëxtraheerd met tweemaal 50 ml dichloormethaan· Het organische extract werd gedroogd boven magnesiumsulfaat, het oplosmiddel werd afgedestilleerd en het verkregen residu gezuiverd door silicagel chromatografie (elutiemiddel: 2:1 mengsel van cyclohexaan en ethylacetaat), waarbij men 1,60 g van 35 hef gewenste produkt verkrijgt in de vorm van een kleurloos glas.

8101439 -2'3-

Eleraentair analyse:

Berekend voor . c, 57,53; H, 5,52; N, 9,58%

Gevonden : 0, 57,76; H, 5,58; N, 9,09&·

De volgende verbindingen werden verkregen onder toepassing 5 van de werkwijze volgens het voorgaande voorbeeld· N- (jj-Acetoxybenzoyl) -2- (2-cyaanethyl) alanine methylester

Smeltpunt: 168-170°C

N- (£-hydroxybenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methyles ter

Smeltpunt: 106-109°C

10 H-(£-Methoxybenzoyl)-2-cyaanethyl)alanine methylester

Smeltpunt: 112-114°C

N-(j>-Nitrobenzoyl)-2- (2-cyaanethyl)alanine methylester

S meltpunt: 96-98°C

N*· (fir-cyaanbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methyles ter 15 Smeltpunt: 115-Π7°0 N- (a-Acetoxybenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methylester

Smeltpunt: 110-112°C

hp(£-Hydroxybenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methylester n^5» 1,5577 20 f4-(£-Methoxycarbonylbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methylester

Smeltpunt: 120-121°C

N-/"£-(2,2,2-trichloorethoxycarbonyl)aminobenzoyl7-2-(2-cyaanethyl)alanine methylester Smeltpunt: 202T2Q4°C

N- (^-Aminobenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methylester 25 Smeltpunt: 125-126°C

N-(3,4-Methyleendioxybenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methyles ter Smeltpunt: 158-160°C

N-(2-Acetoxy—chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methylester Smeltpunt: 104-106°C

30 ££ (4-chloor-2-hydroxybenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine

methylester Smeltpunt: 118-119°C

N-(3-Fluor-4-methylbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methylester Smeltpunt: 118-119°C

N-(2-Mercaptobenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methylester

35 Smeltpunt: 90-93 °C

N- (2-Amino-4-chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methylester Smeltpunt: 115-116°C

81 01 439 * * -24- N- (4-Chloor-3-nitrobenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methylester n 1,5575

N- (js-Chloor benzoyl)-2-(2-cyaanethyl)methionine methylester Smeltpunt: 79-80°C

5 N- (g-Chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)fenylalanine methylester n jjps 1,5630

Voorbeeld VI

(a) Dinatriumzout van 2-(p-rchloorbenzoylamino)-2-(2-cyaanethyl)-malonaat dihvdfaat en 10 (b) 2-(p-chloorbenzoylamino)-2-(2-cyaanethyl)malonzuur

Aan een oplossing van 7,3 g diethyl N-(£-chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)aminomalonaat in 60 ml methanol werd bij 0 - 5°C druppelsgewijs een IN oplossing van natriumhydroxyde (80 ml) toegevoegd, en het verkregen mengsel 16 uren bij kamertemperatuur ge-15 roerd. Het reaktiemengsel werd vervolgens geconcentreerd onder ver-mindderde druk tot een volume van 80 ml en aan het concentraat 60 ml ethanol toegevoegd. Het neerslag werd afgefiltreerd, gewassen met 50 ml ethanol en 16 uren in vacuo gedroogd, waarbij men 6,0 g van het gewenste dinatriumzout (a) als een kleurloos poeder ver-20 krijgt met een smeltpunt van 254-255°C (onder ontleding).

Elementair analyse:

Berekend voor C^^1-1^20^01^2.2^2®: 39,97; H, 3,35; N, 7,19; Cl, 9,07%

Gevonden : C, 40,43; H, 3,43; 25 N, 7,14; Cl, 9,2l£r 50 ml Ethylacetaat werden druppelsgewijs toegevoegd aan 4,0 g dinatrium 2-(ja-chloor benzoylamino)-2- (2-cyaanethyl)malonaat dihy-draat in 50 ml water en de verkregen oplossing ingesteld op pH 2,0 door toevoegen van IN zoutzuur bij 0 - 5°C. 0e organische laag 30 werd afgescheiden en gedroogd boven magnesiumsuifaat. Het oplosmiddel werd afgedestilleerd en het verkregen residu herkristal-liseerd uit diethylether waarbij men 3,2 g van het gewenste zuur (b) ais een kleurloos poeder verkrijgt met een smeltpunt van 103-105°C (onder ontleding).

35 Elementair analyse:

Berekend voor 50,26; H, 3,57; N, 9,02 s Cl, 11,412 81 01 439 -25-

Gevonden: : C, 49,84; H, 3,64; N, 9,03

Cl, 11,682

De volgende voorbeelden werden verkregen onder toepossing van dezelfde werkwijze als in het voorgaande voorbeeld, 5 Dinatrium-2-(2-chloorbenzoylamino-2-(2-cyaanethyl)-

mdlonaat raonohydraat Smeltpunt: 261-2ó2°C

(onder ontleding)

Dinatrium 2-(£-raethylbenzoylamino)-2-(2-cyaanethyl)-raalonaat monohydraat Smeltpunt: 263-264°C

10 (onder ontleding) 2-(a-Chioorbenzoylamino )-2-(2-cyaanethyl)maIonzuur

Smeltpunt: 108-111°C (onder ontleding)

Voorbeeld VII

15 Iniecteerbare oplossing lOmg Dinatrium 2-(£-chloorbenzoylamino)-2-(2-cyaanethyl)-malonaat dihydraat werden opgelost in 5 ml van een fysiologische zoutoplossing· De verkregen oplossing werd gesteriliseerd door verhitting onder vorming van een injecteerbare oplossing.

20 Voorbeeld VIII

Iniecteerbare oplossing 10 mg W-(£-chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methylester werden opgelost in 0,3 ml Ν,Ν-dimethylacetamide, en aan de oplossing werd 4,7 ml van een fysiologische zoutoplossing toegevoegd· 25 De verkregen oplossing werd gesteriliseerd door verhitting waarbij men een injecteerbare oplossing verkrijgt.

Voorbeeld IX

Capsules voor orale toediening N- (js-chloorbenzoyl )-2-(2- 30 cyaanethyl)alanine methylester 50 mg lactose 100 mg mais zetmeel 148,5 mg magnesium stearaat 1,5 mg totaal: 300 mg.

35 De bovengenoemde bestanddelen, in poedervorm, werden gemengd en door een 30 mesh zeef gezeefd. 300 mg Poeder werden in een no. 3 gelatine capsule gebracht ter verkrijging van een capsulepreparaat, 8101439 -2-6*

Voorbeeld X

Capsules voor orale toediening dinatrium 2-(£-chloorbenzoylamino)- 2-(2-cyaanethyl)malonaat dihydraat 50 mg 5 lactose 100 mg mais zetmeel 148,5 mg magnesium stearaat 1,5 mg totaal: 300 mg

De bovengenoemde bestanddelen, in poedervorm, werden gemengd 10 en door een 30 mesh zeef gezeefd, 300 mg poeder werden in een no, 3 gelatineeapsale gebracht onder vorming van een capsulepreparaat. BEREIDING

2- (p-Chloorfenvl) -4- (2-cvaanethvl) -4-met hvl-5-oxazolon 2,8mg N-(£-chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine en 2,0 g 15 azijnzuur anhydride werden opgelost in 30 ml benzeen en de oplossing 1 uur onder terugvloeikoeling gekookt. Het oplosmiddel werd vervolgens afgedestilleerd en het verkregen residu herkristalli-seerd uit diisopropylether waarbij men 2,1 g van het gewenste pro-dukt verkrijgt in de vorm van een kleurloos poeder dat smelt bij 20 97 - 98°C,

Elementair analyse:

Berekend voor CigHjj02^01 ; C, 59,44; H, 4,22; N, 10,66;

Cl, 13,50*

Gevonden : C, 59,58; H, 4,24; N, 10,70 25 Cl, 13,40*.

Voorbeeld XI

Stereospecifieke synthese van N-(p-Chloorbenzovl)-2-(2-cvaanethvl)-alanine methviester (a) N-(N-benzvloxvcarbonvl-L-prolvl)-2-(2-cvaanethyl)alanine 30 methylester - isomeren (i) en (ii)

Aan een oplossing van ruw N-benzyloxycarbonyl-L-prolylchlo-ride in dichloormethaan (100 ml) verkregen uit N-benzyloxycarbonyl-L-proline (10,0 g) en fosforpentachloride (8,4 g) werden bij 5°C

2-(2-cyaanethyl)alanine methylester (6,2 g) en triethylamine 35 (5,6 ml) toegevoegd en het verkregen mengsel 1 uur bij 0-5°C ge roerd, Het reaktiemengsel werd vervolgens gewassen met water (100 ml) de organische laag afgescheiden en gedroogd boven 8101439 -27- magnesiumsulfaat. Het oplosmiddel werd afgedestilleerd en het residu gezuiverd door siiicagel Lobar kolomchromatografie (stroomsnelheid 24 ml/min; elutiemiddel: cydohexaan/ethylacetaat/tri-ethylamine IQ/IO/lt om de twee diastereoisomeren te isoleren· De 5 twee isomeren werden afzonderlijk herkristalliseerd uit diethyl-ether waarbij men respektievelijk 3,8 g en 4,1 g van de verbindingen verkrijgt in de vorm van kleurloze poeders.

Isomeer (i)

Smeltpunt: 98-99°C

10 Cjf (° = lf MeOH)

Elementair analyse:

Berekend voor ^20^25^3^5 * 62,oo; H, 6,50; N, 10,85#

Gevonden : C, 62,12; H, 6,47; N, 10,89$.

Isomeer (ii)

15 Smeltpunt: 108-109°C

Cjf- 36,6° (C = 1, MeOH).

Elementair analyse:

Gevonden : C, 62,14; H, 6,47; N, 10,88$.

(b) 2-(2-cvaanethvl)alanine methviester - isomeren (i) en (ii).

20 Aan een oplossing van isomeer (i) van N-(N-benzyloxycarbonyl- L-prolyl)-2-(2-cyaonethyl)alanine methylester (3,0 g) in dichloor-methaan (30 ml) werd 1,7 g fosforpentachloride toegevoegd en het verkregen mengsel 30 minuten onder terugvloeikoeling gekookt. Het oplosmiddel werd onder verminderde druk afgedestilleerd en het 25 residu opgelost in dichloormethaan (40 ml). De oplossing werd afgekoeld tot -40°C in een koelbad en propanol (5 ml) en triethyl-areine (10 ml) toegevoegd· Het koelbad werd verwijderd en het mengsel 30 minuten geroerd en vervolgens nog 1,5 uur bij kamertemperatuur. Het oplosmiddel werd afgedestilleerd onder verminderde druk 30 en het residu opgelost in methanol (30 ml). De methanoloplossing Werd afgekoeld tot 5°C, 30 ml 0,5 N zoutzuur toegevoegd en het mengsel 1,5 uur bij kamertemperatuur geroerd. 50 ml water werd toegevoegd en het mengsel gewassen met 100 ml diethylether. De water-laag werd ingesteld op ongeveer pH 8 met natriumbicarbonaatoplos-35 sing en geëxtraheerd met dichloormethaan (100 ml x 3). De bij elkaar gevoegde organische extracten werden gedroogd boven magnesiumsulfaat en het oplosmiddel afgedestilleerd. Het residu werd 8101439 -2*8- gezuiverd door middel van silicagel kolomchromatografie, waarbij men door elutie met ethylacetaat 0,91 g isomeer (i) van het gewenste produkt verkrijgt in de vorm van een lichtgele vloeistof·

De bovengenoemde werkwijze werd herhaald onder toepassing 5 van 3,0 g isomeer (ii) van het uitgangsmateriaal, waarbij men 0,93 g isomeer (ii) van het gewenste produkt verkrijgt in de vorm van een lichtgele vloeistof·

Isomeer (i); nD h4485 10 CJo +19'2° (C lr MeOH)

Elementair analyse:

Berekend voor 0^^2°2 : C' 53'82' H' 7'74' N' 17/94^ Gevonden : C, 53,85; H, 7,86; N, 18,10%,

Isomeer (ii); 15 njjp 1,4527 rjf -19,6° (C = 1, MeOH)

Elementair analyse:

Gevonden : C, 54,17; H, 7,94; N, 17,65%.

(c) N-(p-Chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methylester - iso~ 20 meren (i) en (ii)· £-Chloorbenzoylchloride (0,91 g) en triethylanine )0,91 ml) werden toegevoegd bij 5°C aan een oplossing van 0,85 g isomeer (i) van de 2-(2-cyaanethyl)analine methylester in dichloormethaan (20 ml) en het verkregen mengsel 2 uren bij 0-5°C geroerd· Het 25 reaktiemengsel werd vervolgens gewassen met water (20 ml) en de organische laag gedroogd boven magnesiumsulfaat· Het oplosmiddel werd afgedestilleerd en het residu gezuiverd door silicagel Lobar kolomchromatografie (elutiemiddel; 1/1 cyclohexaan/ethylacetaat; stroomsnelheid: 12 ml/min·), waarbij men 1,13 g isomeer (i) van het 30 gewenste produkt verkrijgt in de vorm van een kleurloos poeder·

De bovengenoemde werkwijze werd herhaald onder toepassing van 0,85 g isomeer (ii) van het uitgangsmateriaal waarbij men 1,10 g isomeer (ii) van het gewenste produkt verkrijgt in de vorm van een kleurloos poeder.

35 Isomeer (i);

Smeltpunt: 61-62°C rjf -19,0° (C 1, MeOH).

810143 9 -29-

El ementair analyse:

Berekend voor : C, 57,05; H, 5,13; N, 9,50

Cl, 12,03£

Gevondene : C, 57,48· H, 5,34; N, 9,45; 5 Cl, 12,02£.

Isotneer (ii):

Scneltount: 64-65°C rjf +19,9° (C = 1, MeOH)

Elementair analyse: 10 Gevonden: C, 57,20; H, 5,03; N, 9,38; Cl, Π,90£.

8101439

Claims (16)

1. 30 R^ een alkylgroep, een carboxylgroep of een alkoxycarbonyl groep; A een hydroxygroep of een alkoxygroep voorstellen; en n een getal is van 1 of 2; en de farmaceutisch verdraagbare zouten daarvan.
2. 3. Verbindingen volgens conclusie 2, met het kenmerk 81 01 439 -3L dat R^ een halogeenatoom, R^ en R^ beide waterstofatomen, R^ een alkylgroep met 1 tot 4 koolstof atomen, A een hydxoxygroep of een alkoxygroep met 1 tot 4 kaolstofatomen voorstelt; en n gelijk is aan 1 en de farmaceutisch verdraagbare zouten daarvan.
3. 4. Verbindingen volgens conclusie 3, met het kenmerk 1 2 3 4 dat R een chlooratoom; n en κ beide waterstofatomen; κ een methylgroep; A een hydroxygroep of een alkoxygroep met 1 tot 4 koolstofatomen voorstelt en n gelijk is aan 1, en de natrium, kalium en calciumzouten daarvan.
4. 5. De volgende verbindingen volgens conclusie 1: N- (j>-Chloorbenzoyl )-2-(2-cyaanethyl)alanine raethylester; N-(£-chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine; N-(£-chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl) fenylglycine methylester; 2-(2-cyaanethyl)-N-benzoylalanine methylester; 15 2-(£-chloorbenzaraido)-4-(cyaanethyl)boterzuur-methylester; 2-(2-cyaanethyl)-i4-benzoylaminomalonzuur diethylester; 2-(2-cyaanethyl)-N-benzoylfenylglycine ethylester; 2-(2-cyaanethyl)-N-(£-chloorbenzoyl)alanine hexadecylester; N- (£-chloorbenzoy!)-2-(2-cyaanethyl)arainomalonzuur diethylester; 20 (£-chloorbenzoyl)-2-(cyaanethyl)serine methylester; N-(£-chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)leucine methylester; Ni(m-chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methylester; N- (m-chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine; ht-£-chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methylester; 25 të- (a-chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine; 2-(2-cyaanethyl)-H- (2,4-dichloorbenzoyl)alanine methylester; 2-(2-cyaanethyl)-N-(2/4-dichloorbenzoyl)alanine; 2-(2-cyaanethyl)-N-(£-fluorbenzoyl)alanine methylester; 2-(2-cyaanethyl)-N- (£-fluorbenzoyl)alanine; 30 2-(2vcyaanethyl)-W- (£-broombenzoyl)alanine methylester; 2-(2-cyaanethyl)-N- (£-broombenzoyl)alanine; N-(£-chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)glycine methylester; hl- (£-chloorbenzoyl)-2-(cyaanethyl)glycine; 2-(2-cyaanethyl)-N-(£-toluoyl)alanine methylester; 35 2-(2-cyaanethyl)-N- (£-toluoyl)alanine; 2-(2-cyaanethyl)-M-(£-joodbenzoyl)alanine methylester; 2-(2-cyaanethyl)-N- (£- joodbenzoyl)alanine; 8101 439 -32- 2-(2-cyaanethyl)-N-(pentafluorbenzoyl)alanine methylester; N-benzoyl-2-(2-cyaanpropyl)fenylglycine ethylester; 4-cyaan-2- (N-£-chloorbenzamido)-2-methylbutyrylamide; 2-(N-£-chlo°rbenzaniido)-4-cyaan-2-inethyl- (N-2-carbamoylethyl)-5 butyrylamide; 2- (^£-chloorbenzamido) -4-cyaan-2-metbyl- (H-2-chloorethyl) butyryl-araide; 2- (N-£-chloorbenzamido) -4-cyaan-2-methylbutyrylhydroxamide; 2- (N-£-chloorbenzamido) -4-cyaan-2-methyl- (N-dimethyl) butyrylamide;
5. 10 N-(3,4-dihydroxybenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methylester; N- (£-acetoxybenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methylester; N-(£-hydroxybenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methylester; N- (£-methoxybenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methylester; N-(£-nitrobenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methylester;
6. 15 N-(£-cyaanbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methylester; NL (a-acetoxybenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methylester; N-(£-hydroxybenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methylester; N-(£-methoxycarbonylbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methylester; N-/“ £-(2,2,2-trichloorethoxycarbonyl)aminobenzoyl7-2-(2-cyaanethyl) 20 alanine methylester; Ni (£-aminobenzoyl) -2- ( cyaane thyl) alanine me thy les ter; N-(3,4-methyleendioxybenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methylester; N-(2-acetaxy-4-chloorbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methylester; N-(4-chloor-2-hydroxybenzoyl)-2- (2-cyaanethyl) alanine methylester;
7. 25 N- (3-fluor-4-methylbenzoyl)-2-(2-cyaanethyl) alanine methylester; N-(2-mercaptobenzoyl)-2-(2-cyaanethyl)alanine methylester; N- (2-amino-4-chloorbenzoyl )-2- (2-cyaanethyl) alanine methylester; N-(4-chloor-3-nitrobenzoyl)-2-(2-cyaanethyl) alanine methylester; N-(£-chloorbenzoyl)-2- (2-cyaanethyl)methionine methylester;
8. 30 N-Qj-chloorbenzoyl)—2-(2-cyaanethyl)fenylalanine methylester; Dinatrium 2-(£-chloorbenzoylamino)-2-(2-cyaanetbyl)malonaatdihydraat; 2-(£-chloorbenzoylamino)-2-(2-cyaanethyl)malonzuur; Oinatrium 2-(orchloorbenzoylamino)-2-(2-cyaanethyl)malonaatdihy-draat;
9. 35 Dinatri.um 2-(£-methylbenzoylamino)-2-(2-cyaanethyl)malonaat mono-hydraat; en 2-(o^chloorbenzoylamino)-2-(2-cyaanethyl)malonzuur. 81014 3 9 -33- een waterstofatoom, een alkylgroep, een cyaangroep, een cyaanalkylgroep, een hydroxyalkylgroep, een alkoxycarbonylgroep, een carboxylgroep, een arylgroep, een aralkylgroep, een mercaptool kylgroep, een cdkylthioaikylgroep of een thioalkylgroep is 5 (waarbij de vrije binding van de zwavel in deze thioalkylgroep verbonden is aan de zwavel van een andere rest van dezelfde formule); en een alkylgroep is; met het kenmerk, dat men een aminozuurverbinding met 10 formule 7 waarin R^, R^, en n de bovengenoemde betekenis bezitten laat reageren met een verbinding met formule 8 waarin en R de bovengenoemde betekenis bezitten, in tegenwoordigheid van een sterke base,
10. 8, Werkwijze voor de bereiding van verbindingen met formule 11 15 waarin: n een geheel getal is van 1 tot 5; R^ een waterstofatoom, een alkylgroep, een halogeenalkyl-groep, een halogeenatoom, een mercaptogroep, een alkylraercaptogroep, een hydroxygroep, een alkoxygroep, een acyloxygroep, een carboxyl-20 groep, een alkoxycarbonylgroep, een aminogroep, een alkyl-gesubsti-tueerde aminogroep, een aryl-gesubstitueerde aminogroep, een acyl— aminogroep, een halogeenalkoxycarbonylaminogroep, een alkaansulfo-nylgxoep, een nitrogroep of een cyaangroep voorstelt (en wanneer n een geheel getal is van 2 tot 5 de groepen R^ al dan niet gelijk 25 kunnen zijn); R^ en R'* al dan niet gelijk zijn en elk een waterstofatoom of een alkylgroep voorstellen; een waterstofatoom, een alkylgroep, een cyaangroep, een cyaanalkylgroep, een hydroxyalkylgroep, een alkoxycarbonylgroep, 30 een carboxylgroep, een arylgroep, een aralkylgroep, een mercapto-alkylgroep, een alkylthioalkylgroep of een thioalkylgroep voorstel t (waarbij de vrije binding van de zwavel in deze thioalkylgroep gebonden is aan de zwavel van een andere rest van dezelfde formule); en 35 een aminogroep, een alkyl-gesubstitueerde aminogroep (des gewenst halogeen- of carbamoyl-gesübstitueerde alkylrest), een hydrazinogroep, een alkyl- of aryl-gesubstitueerde hydrazinogroep, 810143 9 r V -34-
11. 6. Werkwijze voor de bereiding van verbindingen met formule 4 waarin n een geheel getal is van 1 tot 5, R^ een waterstofatoom, een alkylgroep, een halogeenalkylgroep, een halogeenatoom, een mercaptogroep, een alkylmercaptogroep, een hydroxygroep, een al-5 koxygroep, een acyloxygroep, een carboxylgroep, een alkoxycarbonylgroep, een aminogroep, een alkyl-gesubstitueerde aminogroep, een aryl-gesubstitueerde aminogroep, een acylaminogroep, een halogeen-alkoxycarbonylaminogroep, een alkaansulfonylgroep, een nitrogroep of een cyaangroep voorstelt (en, wanneer n een geheel getal is van 10 2 tot 5, de groepen R^ al dan niet gelijk kunnen zijn); R2 en R3 al dan niet gelijk zijn en elk een waterstofatoom of een alkylgroep voorstellen; R^ een waterstofatoom, een alkylgroep, een cyaangroep, een cyaanalkylgroep, een hydroxyalkylgroep, een alkoxycarbonylgroep, 15 een carboxylgroep, een arylgroep, een aralkylgroep, een mercapto-alkylgroep, een alkylthioalkylgroep, of een thioalkylgroep is (de vrije binding van de zwavel in deze thioalkylgroep gebonden aan de zwavel van andere rest van dezelfde formule); en een alkylgroep is; 20 met het kenmerk, dat men een aminozuurverbinding met formule 2 waarin R2, R3, R* en de bovengenoemde betekenis bezitten laat reageren met een zuurhalogenide met formule 3 waarin R en n dé bovengenoemde betekenis bezitten en X een halogeenatoom is, in tegenwoordigheid van een base en een inert oplosmiddel· 25 7· Werkwijze voor de bereiding van verbindingen met formule 4 waarin: n een geheel getal is van 1 tot 5; R^ een waterstofatoom, een alkylgroep, een halogeenalkylgroep, een halogeenatoom, een mercaptogroep, een alkylmercaptogroep, een 30 hydroxygroep, een alkoxygroep, een acyloxygroep, een carboxylgroep, een alkoxycarbonylgroep, een aminogroep, een alkyl-gesubstitueerde aminogroep, een aryl-gesubstitueerde aminogroep, een acylaminogroep, een halogeenalkoxycarbonylaminogroep, een alkaansulfonylgroep, een nitrogroep of een cyaangroep voorstelt (en, wanneer n een geheel 35 getal is van 2 tot 5 de groepen R^ al dan niet gelijk kunnen zijn); R2 en R3 al dan niet gelijk zijn en elk een waterstofatoom of een alkylgroep voorstellen; 8101439 -o5- een hydroxylaminogroep, een alkoxyaminogroep of een aralkyloxy-aminoaroep voorstelt, met het kenmerk, dat men een oxazoion met formule 9 waarin R , R , R en R en n de bovengenoemde betekenis bezitten laat reageren met een organische base o 5 met formule 10 waarin M de bovengenoemde betekenis bezit·
12. 9· Werkwijze voor de bereiding van verbindingen met formule 13 waarin: n een geheel getal is van 1 tot 5; R1 een waterstofatoom, een alkyigroep, een halogeenalkylgroep, 10 een halogeenatoom, een mercaptogroep, een alkylmercaptogroep, een hydroxygroep, een alkoxygroep, een acyloxygroep, een carboxyl-groep, een alkoxycarbonylgroep, een aminogroep, een alkyl-gesub-stitueerde aminogroep, een aryl-gesubstitueerde aminogroep, een acylaminogroep, een halogeenalkoxycarbonylaminogroep, een alkaan-15 sulfonylgroep, een nitrogroep of een cyaangroep voorstelt (en wanneer n een geheel getal is van 2 tot 5 de groepen R^ al dan niet gelijk kunnen zijn); R^ en R^ al dan niet gelijk zijn en elk een waterstofatoom of een alkyigroep voorstellen, met het kenmerk, dat 12 3 20 men een verbinding met formule 12 waarin R , R en R en n de bovengenoemde betekenis bezit verhit. 10» Farmaceutisch preparaat bevattende een werkzaam bestanddeel met immunoregulerende of tumorbestrijdende werking in vereniging met een farmaceutische drager of verdunningsmiddel, met het 25 kenmerk, dat het werkzame bestanddeel een verbinding is als omschreven in conclusie 1.
13. 11. Farmaceutisch preparaat volgens conclusie 10, m e t het kenmerk, dat het werkzame bestanddeel een verbinding is zoals omschreven in conclusie 2. 30 12« Farmaceutisch preparaat volgens conclusie 10, ra e t het kenmerk, dat het werkzame bestanddeel een verbinding is als ontschreven in conclusie 3.
14. 13. Farmaceutisch preparaat volgens conclusie 10, m e t het kenmerk, dat het werkzame bestanddeel een verbinding is zo-35 als omschreven in conclusie 4·
15. 14· Farmaceutisch preparaat volgens conclusie 10, m e t het kenmerk, dat het werkzame bestanddeel een verbinding is 8101439 -36- zoals omschreven in conclusie 5.
16. 15· Farmaceutisch preparaat volgens conclusie 10, m e t het kenmerk, dat het werkzame bestanddeel een verbinding is zoals omschreven in conclusie ó. 81 01 4 3 9 R2 R3 I I CH — CH-CN JT}-CONH-C-COA “2 ‘Λ L n Rt (10) (1) ƒ R2 R3 ii CH—CHCN (la> , <f>-COHH— C —COA k )2 ί r CH—CH—CR (R1) I n H2H—f —COOMl (3) Ri (2) R2 R3 I I o3 CH—CH—CH 1 CS_CONH-C —COOMO l.'l, (4) 8101439 β - r2 R3 r2 r3 CH—CH-CN CH—CH — CM- —COHH-C—C00M3 ("Wh-C-COOM1 |r1 n . R4 (5) (14) R2 R3 f R2 r3 I I I CH—CH —CH CH—CH —CH I I , -HX1 CONH— C—COOH Nl)2 | COOM I, [ J (ó) (15) £~S-COHH—CH—COOM1 —CH=N—CH—COOM1 L !> ^ (16) (7) R2 R3 o—1=0 I 1 .—. I ru ru ri, CH—CH—CH OTT" f}-™»-;-™* K n (R1) RV η ,Λ (9) (11) f |3 R2 R3 CH —CH-CH CH-CH-CI <f~\—COHH-C-COOH {/S—COHH— C— COOH (Ri!/W I R n COOH R η H (12) (13) 810143 9