NL194535C

NL194535C - Farmaceutisch preparaat voor de behandeling van lepra dat diaminodifenylsulfon bevat.

Info

Publication number: NL194535C
Application number: NL8302579A
Authority: NL
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 1982-07-29
Filing date: 1983-07-19
Publication date: 2002-07-02
Also published as: JPS5933218A; GB8320438D0; NL194535B; IT8322089A0; DE3326165C2; JPH0419968B2; DE3326165A1; GB2125293A; BE897397A; FR2531861A1; NL8302579A; IT8322089A1; GB2125293B; CH651473A5; FR2531861B1; IT1171692B

Description

. 1 194535

Farmaceutisch preparaat voor de behandeling van lepra dat diaminodifenylsulfon bevat 4

De uitvinding betreft een diaminodifenylsulfon bevattend farmaceutisch preparaat voor de behandeling van lepra en/of andere mycobacteriosen.

5 Een farmaceutisch preparaat voor de behandeling van lepra dat diaminodifenylsulfon (DDS) bevat is bekend uit het Amerikaanse octrooischrift 4.005.207. In dit document worden samenstellingen die isonicoti-nezuurhydrazide, 2-propylthio-isonicotinezuuramide en diaminodifenylsulfon bevatten beschreven. Deze samenstellingen vertonen een synergistische activiteit tegen o.a. Mycobacterium marinum, een geschikt modelsysteem voor Mycobacterium leprae.

10 Gezien de voortdurende behoefte aan betere en meer efficiënte geneesmiddelen is het doel van de uitvinding een farmaceutisch preparaat voor de behandeling van lepra dat diaminodifenylsulfon bevat met een verbeterde werking te verschaffen.

Verrassenderwijs werd gevonden, dat een hierna omschreven mengsel van DDS en 2,4-diamino-5-(4-broom-3,5-dimethoxybenzyl)pyrimidine (Brodimoprim) ten opzichte van verwekkers van lepra een in 15 vergelijking met de werking van de afzonderlijke componenten synergistisch verhoogde werking ontwikkelt. Uit de Britse octrooiaanvrage 2.082.063 is bekend dat een mengsel van een sulfon en een pyrimidine-derivaat een synergistische anti-bacteriële werking kan vertonen. Daartoe wordt een combinatie van DDS en Trimethoprim vergeleken met enkel DDS, met een combinatie van Trimethoprim en Sulfamethazine, en met enkel Sulfamethazine. Hoewel het bekend is DDS voor de behandeling van lepra te gebruiken, wordt in 20 deze Britse octrooiaanvrage op geen enkele wijze ingegaan op de eventuele werkzaamheid van een mengsel van DDS en Trimethoprim tegen Mycobacterium-stammen. Deze literatuur geeft een deskundige daarom geen aanleiding te onderzoeken of Brodimoprim - een op zichzelf bekend analogon van Trimethoprim - in combinatie met DDS uit oogpunt van werkzaamheid ten opzichte van Mycobacterium-stammen een synergistisch effect vertoont.

25 De uitvinding heeft derhalve betrekking op een farmaceutisch preparaat als in de aanhef omschreven, met het kenmerk, dat het preparaat diaminodifenylsulfon en 2,4-diamino-5-(4-broom-3,5-dimethoxybenzyljpyrimidine bevat in een molaire verhouding van 20:1 tot 1:220.

De uitgesproken synergistische werking van de combinatie volgens de uitvinding van DDS en Brodimop-rim ten opzichte van verwekkers van lepra wordt uit de hieronder beschreven proeven duidelijk: 30 Een met 0,25% (gewicht/volume) runderserumalbumine (fractie V) gemodificeerde Dubos-Davis-voedingsoplossing werd met Mycobacterium lufu van een schuin geplaatste Gottsacker-cultuur besmet.

De Dubos-Davis-voedingsoplossing bestaat uit:

Stof g/l 35------- 1 KH2P04 1 2 Na2HP04.12H20 6,5 3 ijzerammoniumcitraat 0,05 4 Na-citraat.5,5 H20 1,5 40 5 MgS04.7H20 0,005 6 caseïne-hydrolysaat 1 7 asparagine 1 8 Tween 80; pH=6,5-6,8 0,5 ml 45 runderserumalbumine (fractie V) 2,5

De Gottsacker-cultuur wordt als volgt bereid: 1 Deel Sauton-oplossing en 1 deel eigeel (zonder eiwit) worden voorzichtig gemengd. Hieraan wordt een 50 1-procents oplossing malachietgroen toegevoegd in een verhouding van 1:8500. Hiermee worden buizen gevuld en gedurende 15 minuten bij 100°C gecoaguleerd en schuin geplaatst in de coagulator tot stolling gebracht.

1 · 194535 2

Sauton-oplossing: 5 asparagine 4 g 20 g citroenzuur 2 g 10 g K2HP04 0,5 g 2,5 g

MgS04.7H20 0,5 g 2,5 g ijzerammoniumcitraat 0,05 g 0,25 g 10 glycerine-bidest. 20 ml 100 ml water dest. 100 ml 5000 ml

Bestanddelen apart oplossen, pH instellen op een waarde tussen 6,8-7,2 met 25% ammoniakoplossing of 15 citroenzuuroplossing, en 45 minuten bij 115°C autoclaveren.

Om een uniforme suspensie te verkrijgen werden de bacteriën in 5 ml medium gehomogeniseerd. De suspensie werd vervolgens met 15 ml medium verdund en gedurende 4 minuten bij 150 g gecentrifugeerd.

Een deel van de bovenstaande vloeistof werd voor het elektronisch tellen gebruikt en de rest werd voor het beginnen van de culturen gebruikt. De suspensie werd verdund tot ongeveer 105 cellen/ml en porties van 50 20 ml werden in Erlenmeyers van 300 ml als cultuurflessen gebracht, die een magnetische roerder bevatten.

De remmende stof werd toegevoegd en de culturen werden bij 31 °C gehouden. Vóór het nemen van monsters voor het tellen werden de culturen gedurende 1 minuut krachtig magnetisch geroerd. Het tellen werd uitgevoerd met een Coulter-Counter. Voor de bepaling van het totale kiemgetal werden cultuur-monsters met deeltjesvrije keukenzout (0,85 gew.%)-formaldehyd (0,2 gew.%)-oplossing verdund, zodat een 25 aantal van 500-20.000 organismen werd verkregen. Voor de bepaling van het levende kiemgetal werden van tijd tot tijd monsters van 0,5 ml genomen, in 50 ml verse voedingsoplossing gebracht en bij 31 °C geïncubeerd. De culturen werden na 8 dagen - zoals beschreven - met de Coulter-Counter geteld.

De verandering van de groeisnelheden van de culturen bij aanwezigheid van de afzonderlijke remmende stoffen werd bepaald. Daartoe werd de snelheidsconstante kapp [sec.'1] voor de waargenomen 30 vermenigvuldigingssnelheid van de eerste orde, bij afwezigheid en aanwezigheid van de remmende stoffen, uit de stijging van de groeikrommen volgens de vergelijking log N = t/2,303 + log N0 bepaald, waarbij N het aantal micro-organismen in een gedefinieerd cultuurvolume, t de tijd in seconden en N0 het aantal kiemen op het tijdstip t = 0 is.

35 De resultaten zijn in tabel A voor voor DDS-gevoelige en in tabel B voor ten opzichte van DDS-resistente (> 100 μΜ DDS) mycobacteriën (M. lufu) samengevat. De constanten voor de waargenomen aanhoudende vermenigvuldigingssnelheid (steady state generation rate) voor M. lufu bij 31 °C bij aanwezigheid van verschillende inhibitoren worden bij verschillende concentraties aangegeven.

40 TABEL A

Inhibitor Prof 1 Proef 2 k [sec1.10-®] k [sec'1.10-6] 45 Controlewaarde 7,69 8,98 DDS (0,2 μΜ/ml 5,76 6,22

Brodimoprim (10 μΜ/ml) 7,70 8,90 DDS (0,2 μΜ/ml + 0 -0,50

Brodimoprim (10 μΜ/ml (totale kiemgetal) levende kiemgetal) 50 - 3 194535

TABELB

_—---

Inhibitor k [sec'MO"6] 5 Controlewaarde 7,75 DDS 50 μΜ/ml 7,22 100 μΜ/ml 7,61 200 μΜ/ml 4,88 10 Brodimoprim 5 μΜ/ml 7,77 10 μΜ/ml 7,83 DDS + Brodimoprim 10+ 10 μΜ/ml 2,55 15 50 + 5 μΜ/ml 1,27 100+ 5 μΜ/ml 0,7 100+10 μΜ/ml 0,24 20 Uit de waarden van tabel A blijkt, dat bij aanwezigheid van de werkzame stofcombinatie volgens de uitvinding geen groei van de micro-organismen en zelfs een vermindering van het levende kiemgetal in de cultuur werd waargenomen, terwijl de groei van de cultuur - zij het op vertraagde wijze - voorschrijdt, wanneer de werkzame stoffen afzonderlijk aanwezig waren. Ook ten opzichte van DDS-resistente culturen werden door de combinatie van DDS en Brodimoprim in geschikte concentraties volledig geremd.

25 De farmaceutische preparaten volgens de uitvinding bevatten de genoemde werkzame stofcombinatie samen met een verdraagbare farmaceutische drager. Deze drager kan een voor de enterale, percutane of parenterale toediening geschikt organisch of anorganisch dragermateriaal zijn, zoals bijvoorbeeld water, gelatine, arabische gom, lactose, zetmeel, magnesiumstearaat, talk, plantaardige oliën, polyalkyleenglycolen of vaseline. Bovendien kunnen de farmaceutische preparaten andere farmaceutisch waardevolle stoffen 30 bevatten, zoals koorts verlagende middelen, pijnstillende middelen of ontstekingsremmende middelen. De farmaceutische preparaten kunnen oraal, bijvoorbeeld in de vorm van tabletten, capsules, pillen, poeders, granulaten, oplossingen, siropen, suspensies of elixers worden toegediend. De toediening kan echter ook parenteraal, bijvoorbeeld in de vorm van steriele oplossingen, suspensies of emulsies, of lokaal in de vorm van oplossingen, suspensies, zalven, poeders of aërosolen plaatsvinden. De farmaceutische preparaten 35 kunnen gesteriliseerd zijn en/of bestanddelen bevatten zoals conserveermiddelen, stabiliseermiddelen, bevochtigingsmiddelen, emulgeermiddelen, zouten om de osmotische druk te variëren en bufferstoffen.

De preparaten volgens de uitvinding kunnen worden toegepast voor de behandeling van lepra, ook ten opzichte van DDS-resistente lepra. De preparaten zijn in het bijzonder geschikt bij de niet door een arts gecontroleerde therapie van lepra en voor het vermijden van de ontwikkeling van resistentie bij de 40 DDS-monotherapie.

Voor de therapeutische toepassing kunnen de preparaten volgens de uitvinding in dagelijkse doses van 500-100 mg DDS en een geschikte hoeveelheid Brodimoprim bij volwassenen worden toegediend.

De dosis kan als afzonderlijke dosis of in verscheidene, over de dag verdeelde doses worden toegediend. Bij voorkeur wordt één tablet per dag toegediend.

45 Een voorbeeld van een typische doseringsvorm is de volgende:

Tablet: DDS 100 mg 50 Brodimoprim 300 mg PRIMOJEL (zetmeelderivaat) 6 mg

Povidone K 30 (polyvinylpyrrolidon) 8 mg magnesiumsteraat 6 mg

Totaal gewicht 420 mg 55 -

Claims

194535 4 De gunstige werkzaamheid van het farmaceutisch preparaat volgens de uitvinding tegen Mycobacterium- < * stammen wordt verder geïllustreerd door de volgende vergelijkende proeven: ,* A Vergelijkende proef in vitro

5 De werkzaamheid van een preparaat van diaminodifenylsulfon (DDS) en Brodimoprim (BDP) volgens de uitvinding werd vergeleken met een preparaat van DDS en Trimethoprim (TMP) volgens de stand der techniek. In de proeven werden de constanten voor de waargenomen duurvermeerderingssnelheid (“steady state generation rate”) van voor DDS-gevoelige microbacteriën (M.lufu) bepaald. De resultaten zijn weergegeven 10 in de onderstaande tabel C: TABEL C Preparaat Snelheidsconstante Remming 15 k (uur1) Blanco 4,43.10'2 0 DDS (0,2pM/ml) + TMP (5pM/ml) 0,81.10'2 69,55% DDS (0,1pM/ml) + BDP (5pM/ml) 0.51.10’2 88,5- 100% 20 - B. Vergelijkende proef in vivo De werkzaamheid van een combinatie van DDS en BDP (volgens de uitvinding) werd in een muizenpoten-proef (zie Lepr.Rev. 49,1978, 7) vergeleken met de werkzaamheid van een combinatie van DDS en TMP 25 (stand der techniek). In deze proef vertoonde een combinatie van 0,0001% DDS en 0,1% TMP (stand der techniek) geen remming. Een combinatie van 0,0001% DDS en 0,03% DBP gaf daarentegen een vertraging van de bacteriënvermeerdering (M.Leprae) van 120 dagen.

30 De bovenstaande vergelijkende proeven laten zien dat de combinatie van DDS en BDP volgens de uitvinding aanzienlijk werkzamer is als de combinatie van DDS en TMP volgens de stand der techniek, dit ondanks dat in de bovenstaande preparaten volgens de uitvinding een aanzienlijk lagere concentratie van DDS dan wel een aanzienlijk lagere concentratie aan BDP (ten opzichte van TMP) werd toegepast. 35 Diaminodifenylsulfon bevattend farmaceutisch preparaat voor de behandeling van lepra en/of andere mycobacteriosen, met het kenmerk, dat het preparaat diaminodifenylsulfon en 2,4-diamino-5-(4-broom-3,5-40 dimethoxybenzyljpyrimidine bevat in een molaire verhouding van 20:1 tot 1:220.