MXPA97009430A - Compuesto de proteina tirosina quinasa, aril y heteroaril quinazolina que tienen inhibicion de laspropiedades de autofosforilacion de her-2, composiciones que los contienen y uso de los mismos - Google Patents

Abstract

Esta invención se refiere a un método poara el tratamiento selectivo del crecimiento y la diferencición celular caracterizados por la actividad del receptor del factor de crecimiento epidérmico humano tipo 2 (HER2);más específicamente, esta envención se refiere al uso de compuestos mono o bicíclicos de arilo, heteroarilo, cicloalquilo o heterocicloalquilo substituidos o no substituidos para regular el selectivamente el crecimeito celular;también se describen las composiciones farmacéuticasútiles para el tratamiento selectivo del crecimiento y la diferenciación celular.

Description

COMPUESTOS DE PROTEINñ TIROSINft QUINflSR, RRIL Y HETERORRIL QUINRZQLINR QUE TIENEN INHIBICIÓN DE LRS PROPIEDADES DE RUTOFOSFORILRCION DE HER- , COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN Y USO DE LOS MISMOS '" ANTECEDENTES DE Lñ INVENCIÓN ksta sol i ci?ud es una con inuación en parte de a solicitud i n+ernac tonal de POT No. PCT/US94/Í 41 ÜU que t ne 0 fecha de presentación ?n\ ernacaonal del 0 de diciembre de 1 Qy? , que designan los Pistados Urudos y eJ No. de Serie G8/16h,199 de los Estados Unidos, presentada el 10 de diciembre de 1993, la cual es una continuación en parte de la solicitud No. de Sene 07/988 , ? 15 de ["s-tados Unidos, presentada el 10 de diciembre de h 199 , la cual es una conti uación en parto de l a solicitud No. de S rie 07/698,420 de Hlstados Unidos, presentada el (0 de ayo de 199] y la solicitud internacional de PCT No. de Serie PC7/US92/0373E* presentada el h de mayo de 1992 ue designa los Cs+ados Uni os, cuya designaci n ha resultado en la Patente de 0 Estados Unidos No. 5,409,930,.

CRMPO DE Lfl INVENCIÓN Es+a i vención se refiere a un método para el 5 tratamiento selectivo del crecimiento y la diferenciación celular caracteri ados por la actividad del receptor del factor de crecí rn i ent o epi érmico humano t ipo 2 (IIFR2). Mas pee i f i carne n te-, <- s t a i n vo n c io <"* o i *e f i e i *e a 1 o de c orn uo < , t o mono o t)i ciri icos de aplo, het ro p lo, '* i cloa 1 qui lo o heteroc cloalqui lo substi ui os o no substituidos en la b regulación selectiva del crecimien celular,, Se < oe que la reproducci n celular normal se activa mediante la exposici n del substrato celular a uno o mas tactores de c recimiento, ejemplos de los cuales son ia insulina, ol factor* de crecimiento epidérmico (FCE) y cl i-actor 0 de crecimiento derivado de l qu as (fCDP).. Dichos receptores del factor de crecimiento se incrustan en la membrana y penetran a través de la misma. Se piensa que la iniciación de la reproducción celular ocurre cuando se une un (actor* de crecimiento al receptor correspondiente en la superficie externa de la membrana celular., La unión do este factor* de crecimiento-receptor altera Las carac erí ticas químicas de la porción del receptor que existe den ro de La célula y la cual funciona como una enzima para catalizar la fosforilación ya sea de un substrato mtracelular o del receptor* mismo, este ultimo 0 referido como auto fosforilación. Los ejemplos de tales enzimas de fosforilación incluyen tirosma qui nasas, las cuales catalizan la fosforilación de residuos de amino cidos de ti ros ina de las proteínas de substrato. Muchos estados de enfermedad se caracterizan por la G reproducción no controlada de las células. Estos estados de enfermedad involucran una variedad de tipos de célula e i no Luyen 11 air t 01 nos tales corno la leucemia, >-*l cáncer, la -oriasis, las <?n fe? edido i n-f 1 a or*? a , Jns -^m ormodades >seas, la ,nr*te? ooscier o ,? s y la ?*'*-st ?O I s que ocurren después de los procedimien os < g íopLcist i eos „ Se piensa que l<\ b inhibici n de la tiiosina qumasa tiene utilidad o el control y en La falta de con rol en la reproducción celular*, es decn , los transtornos de proliferación ceLular.. La iniciaci n de la autofo fori lacion , es decir fosforilaci n del receptor del factor de crecimiento mi mo, y O ele la fos orilación de un huésped de substratos i n race1 ul ares son al unos de Los eventos bioquímicos que est n involucrados en la liberación dol mediador de rni togenesi s y proliferación celular. La aut ofosfop lac on del receptor de insulina y la fosforilación de las proteínas de substrato mediante otros b receptores son las respuestas hormonales bioquímicas as f cilmente i denti ti cables. La eliminaci n de la actividad do ia protema tirosina quinasa (PTQ) del receptor de insulina y del receptor del factor de crecimiento epidérmico (FCE) mediante rnut ageriesi s 0 dirigida al sitio del mater aL genético celular que es responsable de la generación de insulina y FCE da corno resultado la completa eliminación de la actividad del receptor biológico. Esto no es part icuLarrnente conveniente debido a que el cuerpo necesita la insulina para realizar otras funciones 5 biológicas que no están relacionadas con la proliferación celular. Por* lo consi uiente, los compuestos que mhiben la porci n IMQ de los receptól es l-OE y/o FCDP en concentraciones menores a las ooncent i ? cienos necesarias para inhibir la porci n l'TQ del l eceptor de msuLina ?odr?<?n proveei agentes valiosos en el t ratamiento '-elect LVO de ios t anstornos de p ro 11 fe ra e i o n ce 1 u 1 a r ,.

DESARROLLOS REPORTADOS Oeneralmento se acepta que la act ividad de la pro tema tirosina qu nasa (PTQ) asociada a los receptores del factor de creci iento es esencial para las respues as biológicas inducidas por l igando, tales como el crecimiento y la di erenciación celular. J.M.. Bishop, (1985) Cel L , 42: 23-38 y T .. Hunter (1987) Cell, 50: 823-829 han reportado pruebas par'a el crecimiento celular anormal y ia t rans-f orrnacion morfológica mediante fosforilación de t res na, Los receptores del factor de crecimiento representan una familia oncogemca autentica. En ro estos productos ontogénicos, se encuentra el receptor* del factor de crecimiento epidérmico humano tipo 2 (HER?; o~erbB-2). Carpenter y otros (1907) Annu. Rev. Biochem. , 56: 081- y GUI y otros (1987) Mol. Cell. Endocrino 1., 51: 169- han reportado que el gen c-erbB-1 codifica una gl ícoprot eina de transmembrana 170l--ua. Fl gen HER2 es el homologo humano del neu prontooneogeni co de rata corno reportaron C.l Dargrnann, M. 0. Hung y R.A. Ue berg (1986) Nature, 319: 226-229 y su producto en una gl icoproteina de la superficie celular* de t ransrnembrana 105 Da, llamada pl8b"HER2 c mo ?epor*a?on Coussens v otros (190b) Science, 230: 1132 1139 v Ya arnoto y ot?* <; (1986) Nature, 319: 230-234. liste receptor se aloja en La actividad especifica ti rosina qu asa intrínseca que es capaz ti catalizar la reacci n de auto fos fon lacion al igual que mediarla íosrop lacion del subs rato endógeno uniendo sus ligandos afines en los dominios ext acel ulares del i oceptor. Fl gen IIER2 no alterado se ha encontrado amplificado en varios tumores humanos. Ademas se ha establecido una correlación entre los niveles elevados de la expresión pl85HER2 y la prognosis pobre o de tiempo de supervivencia corto en pacientes con vanos tipos de cáncer. Dado que el uso de anticuerpos cultivados contra p 185HER2 (ese bloque receptor-funciona) ía como resultado la interrupción del crecimiento de lineas celulares derivadas del tumor* y tiene un efecto ant i tumoral en ratones, la es rategia en l a que Los agentes diseñados químicamente que inhiben selectivamente el p 185HER2 asociado con PTQ son valiosos en la terapia dei c ncer. Actualmente se ha documentado con amplitud que numerosos inhibidores de PTQ que ocurren naturalmente y sus análogos sint ticos se han evaluado sistemáticamente por su eficacia antitunorai potencial corno informan C. Uorl-rnan, V.G. Brunton y D. 3. Robins (1992) en seninars ?n Cáncer Biology, 3: 369-381 y C. Uasylyk, A. Gutrnan, R. Nicholson y Uasylyk (1991) EMBO 3. , 10: 1127-1134. Fn la presente los solicitantes describen la ident i icación c<ti*act en .\u,ion de una seno de der ivados de qu azol a que son inhibidores t r*o ?na quinasa ue exhiben selectividad i ara ipbHER , | n part icular, los sol icitante'*, demue tran la necesidad de la act Lvidad torosina quinasa asociada al pioducto del gen III. R? para mantener ol fenot ipo celular t ansformado e inducido mediante la sobrexpresion de pl0bHER2..

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN De acuerdo con la presento invenci n, se provee un método para el tratamiento seLectivo del crecimiento y la diferenciación celular caracterizados por la actividad del receptor del factor de crecimiento epidérmico humano tipo 2 (HER2) que comprende administrar a un paciente que necesite de dicho tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de quinazol ina que inhibe el receptor HER2 , descrito en esta i nvencion. Otro aspecto de la presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas para el t atamiento selectivo del crecimiento y la diferenciación celular caracterizados por la actividad del receptor del factor* ié crecimiento epidérm co humano tipo 2 (HER2) que comprende, mezclado con un vehículo farmacéuticamente aceptable, una cantidad f arrnaceuticarnente efectiva de un compuesto del ti o antes mencionado. Otro aspecto de esta invención comprende compuestos novedosos t iles <"-i? l r c i a del presente m todo. Con respecto a los a ec os de esta invención, los compuestos desoí Hos c ont i nuaei on mediante* la formula J constituyen una clase*- do los compuestos de qui na.'ol na antes mencionados pai a el uso en la prac ica do la presente i nvencion: Formula l en la que A es un sistema anuLar de ap lo, hoteroarilo, eicloalqui lo o het eroc icloal qui Lo mono o b c ci cos de a?r*ox?rnadamente 5 a aproximadamen e 12 átomos y en donde los subst i uyentes pueden ubicarse en cualquier posici n apropiada cJe L si st eina anu1 a r* y se desc r i ben medí an R ; X es un enlace, O, S, SO, O2 , OCH2 , OCH2 , CR«=CR¿, C=C, NR4 o NR4CH2 ; R incluye independientemente hidrogeno, alquilo, fenilo, halogenofenilo, aralquilo, hidroxi, alcoxi, aploxi, aciloxi, halógeno, halogenoal quilo, arnino, ono y di - l quilano, aciiarnino, carboxi, anudo, mono y di-alqui lamido, alquiitio, alqui i ul f i ni lo, y Lqu i 1 sul í on i 1 o .. R¿ es hidrogeno, alquilo o aral quilo; y l?5 , He , 1*7 y ß '' n independient men e hidrogeno, l cox i o ara l cox i ; o una sal ( apnaeout i camente aceptable do los misinos.

DESCRIPCIÓN DETALLADA Y MODALIDADES PREFERIDAS l os iguient s temimos como so emplean an eriormente y a través de toda esta descripci n, a menos que se indique de otra manera, se debe entender que t ienen Lo1*, siguientes s gm f icados: "finio inonoei cl ico" o "heteroaplo inonocí cl ico" significa un anillo aromático carhociclico o heteroc cl co. Los anillos preferidos incluyen fenilo, pirrol lo, t ienilo, fuplo, tiazol lio, uní dazo li lo, pirazolilo, pj,p<i?l , pirazinilo, piprn di ni lo, ? p daz i n lo, isot l zol lo , isoxazol i lo y oxazol io. "Aplo b cíclico" o "hete roa p lo bioicLico" s gnifica un sistema anular bieicLieo compuesto de dos anillos fundidos y por io menos uno de estos es un anillo arom tico carbociciico o heteroc cli co. Los anillos preferidos incluyen naf io, et ral i mío, 1 , 2 , 3 , 4 - 1 et rahí droqu olmilo, benzof un io, benzotiem lo, indolilo, indolmilo, 1 ,3-benzod?oxol i lo, benzodioxan lo, quinolmilo, tet rahí droqumolmilo, ísoqumol mío, quinazolmilo y qu oxalmilo substituidos y no "Ci cloal qui lo inonoc i cl ico" signi ca un anillo .tli a ico cíclico que comprende de .aproximadamente 4 aproximadamente 7 tomos de carbón tal como ci cl opent ilo, b ciclohexilo y CLCI ohopt i 1 o substituidos y no subs itu dos. "Ci cloal qui lo bi cíclico" signi ica un sistema anular b cíclico saturado compuesto de dos anillos alifaticos fundidos que comprende de aproximadamente 8 a a ro madamente 12 átomos de carbón tal como decal niio subs itui o y no substituido. 1 "l-let eroei cloal <µ,?? lo inonoc i cl ico" significa un anillo al at ico cíclicos saturado que comprende de aproximadamente cuatro a apro imadamente siete tomos que ncLuye 1-2 het eroa tornos seleccionados a partir* de N, 0 y S con la condición de que dichos heteroatomos no se encuentran ? 5 adyacentes a ios átomos de o igeno y/o azufre tal corno piperdinilo, piperazi ni lo y rnorfol i ni lo substituidos y no sub t i tu L os,. "Heterocí cloalqui lo biciclico" significa un sistema anular* biciclico saturado que comprende dos anillos alifaticos fundidos de aproximadamente 8 a aproximadamente 12 tomos e incluye 1-3 heteroatornos seleccionados a partir de N, 0 y S con la condición de que dichos heteroa tornos no sean adyacentes a los átomos de oxigeno y/o azufre tal como decahidroquinol ilo substituido o no substituido. 25 "Alquilo" significa un hidrocarburo alifatico saturado, ya sea de cadena recta o ramificada. El alquilo preferido es "alquilo inferior" que tiene de aproximadamente l a aproximadamente 6 tomos do carbón. Los ejemplos de alquilo incluyen met ilo, etilo, n-p? opilo, isopropilo, but iLo, sec- but lo, t er*c~but ilo, <\m? lo y hexilo.. b "Hlcoxi" se refiere a un grupo alquilo -0„ Los grupos aleoxi prefep os incluyen metoxi , etoxi , |>ro?oxL y butoxi. "Aploxi" se refiere a un grupo aplo-O. 1- 1 gr*u?o aploxi preferido os fenoxi . "Piral quilo" signi ica un grupo alquilo subs i uido 10 con un radical ap lo. l os grupos araiquilo preferidos son bencilo y fene i lo. Los grupos aralcoxi preferidos son benciloxy y fe neto ?? . Los grupos ac loxi preferidos son acetoxi y i b benciiox i ; "Hal geno" signi ica halógeno. Los halógenos proferidos incluyen cloro, bromo y f lúor. l os grupos halogenoa 1 qui 1 o preferidos son ono, di y t p l uoro i lo. 20 rías específicamente, los anillos ap Lo o heteroanlo monocí clicos A preferidos incluyen feniLo, pirroLilo, tiemlo, fuplo, t azol lio, irnidazol lio, pirazolilo, p pdi lo, pirazinilo, p r*?rn?dm?lo, pipdazmilo, isotiazolilo, isoxazolilo y oxazol lo substituidos o no subs i uidos. nt: Los anillos arilo o heteroaplo biciclico A preteridos incluyen naftilo, tetr*al imio, 1,2,3,4-i ot rahí droqui nol i ni lo, benzo uri lo, benzot eni lo, i ol i lo, i ndol i ni lo , 1,3- bonzodioxol i 1 , benrodioxaru lo, qui nol i ni lo, t ot rahí droqui nol mi lo, i soqu l no Lm i 1 o , qu i nazol i mi o, v qumoxali ni lo subs ituidos y no substituidos. Los anillos ei cloal quilo o hetero:i cloal qu i Lo inonocí el icos A preferidos incluyen ci clopent i lo, cicLohexilo, cicloheptilo, dec:al?mlo, pipepdinilo, ?? perazi n lo, rnorfolinilo o decahí droqu nolmiio substituidos y no sub t 11 ui dos. Los anillos oicloalquilo o heterocicloal qu Lo bi CÍCLICOS A preferidos incluyen decalmilo o decahidroqui nol i ni lo substituidos y nos subs ituidos. Los compuestos de mayor* preferencia son aquellos en los que: A es fenilo, pipdilo, ti nilo, fur lo, pir^-olilo, naft io, tet ral mi lo, L , 2 , 3 , k -t etrahí droquinol mi lo , indol lo, indolmilo, quinol imlo, tet rahidroqui nol iniio, ciclohexilo, piperidm lo o piperazin l? substituidos y no substi uidos; X es un enlace, 0, S, o NR¿ R es hidrogeno, alquilo, alcoxi, halógeno, haLogenoalqui Lo, al uiltio, alquil sul f milo, alq? lsul onilo, femlo y aral quilo ; RA es hidrogeno, alquilo o aral uilo; y Rs , Rß , 7 y Rs son independientemente hidrogeno o alcoxi; Los compuestos mas preferidos son aquellos en los quo: A os lonilo, naftilo o indolilo subst ituido v no sub t i t tu do ; X es un enlace; R es hidrogeno, rnetoxi, etoxi , cloro, t r*? fl uorornet ilo, met i i sul fon i Lo, fon i Lo y bencí Lo; R¿ es hidrogeno, met ilo o beneiLo; y R5 , Rß , ? y Rs on independientemente hidrogeno o rne< 0x1 „ Los compuestos dentro del alcance de esta invención son inhibidores t rosina qu nasa selectivos del receptor del factor* del crecimiento epid rmico humano tipo 2 (HER2). Se piensa que lo1*, compuestos inh bidores PTQ út les terapéuticamente tienen una actividad L re ina qumasa especi ica que es capaz de catalizar* la auto fos for 1 l ación.

Ademas, estos compuestos deben inhibir la proLi foraci n celular inducida por ei factor de crecimiento. los compuesto1*, que cumplen con estos criterios son de considerable valor y son particularmente útiles en la practica de la presente invención. Los compuestos que exhiben selectividad para ol anterior receptor se describen en la presente. Los compuestos de esta invención pueden ser ut Lies en La forrna de La base libre, en la forrna de sales y co o un hidrato. Todas las formas est n den ro del alcance de la invención. Las sales acidas de adición pueden formarse y simplemente son una forrna mas conveniente para el uso; y en la i ae -Hd j uso de la "*,aL for*?na inherentemen e cantidades para el uso de la forma de base. l os ácidos que pueden usarse para ?? epai'di las sales acidas de adición incluyen de pre erencia aquellos que producen, cuando se combinan con la base Libre, b sales farmacéu icamen e aceptables, es decir*, sales cuyos amones no son tóxicos para el organismo animal de **-n dosis farmacéuticas de las sales, de manera que las propiedades benéf icas inherentes en la base libre no se vician por efectos colaterales imputables a los aniones. Aunque las sales farmacéuticamente aceptables de dicho compuesto básico se pretieren, todas las sales acidas de adición son út iles corno fuentes de la forrna de base libre incluso si se desea la sal particular per se corno un producto intermedio, por* ejemplo, cuando se forma la sal solo para propósitos de puri ficación e 5 iden i icaci n, o cuando se usa corno un intermediario en la preparación de una sal farmacéut icamente aceptable mediante procedimien os ele intercambio de iones. Las sales farmacéuticamente? aceptables dentro del alcance de la invención incluyen aquellas derivadas de los 0 siguientes ácidos: ácidos minerales tales como acido clorhídrico, acido sulfúrico, acido fosfórico y acido sulfarnico; y ácidos orgánicos tales corno acido acético, acido cítrico, acido láctico, acido tartárico, acido rnalon co, acido etansulfo co, acido etansulfom co, acido bencensul ónico, 5 acido ?-toluensulfomco, acido dclohexil ful farruco, acido quimco y similares. las sale:1-, acidas de adici n correspondientes comprenden los siguientes lorhidrato, sulfato, fosfato, sul (amato, acetato, citrato, laetato, tartrito, met an<*ul fonat o, otansul fona < o , I >eneonsu 1 on t o , tol uensu 1 fonato , cíe iohex 11 -b sulfam to y quilate, ?*espe<*t i vamente., Las salo1*, acidas de adición de los compuestos de esta invención se preparan ya sea disolviendo la base libre en una solución acuosa o de alcohol acuoso u ot os solventes adecuados que contienen '*•! acido apropiado y que aislan la s l mediante 0 la evaporación de la soluci n, o haciendo reaccionar* la base libre y el acido en un r*olvente orgánico, en cuyo caso la sal se separe di ec ament o puede obtenerse mediante concentración de la solución. Los compuestos de esta invención pueden prepararse 5 empleado procedimiento conocidos en la literatura que parte de compuestos conocidos o inte mediarios preparados con facilidad. Siguen procedi ientos generales ejemplares. Fn general los compuestos útiles en el método para el tratamiento selectivo del crecimiento y la diferenciación 0 celular earact erizados por la actividad del receptor del factor- de crecimiento epidérmico humano t po 2 pueden prepararse mediante reacción de copulación de un arilo catalizado de paladio o hetero plestanano con un ari lo o heteroaplhalogenuro o triflato.

Ib en donde Y es I alógeno o t p (lato y Z es t r lal qui 1 ostanano y R es corno se describió previ amonto,, Los materiales de par ida 4 ha Logenoqui nazol i na se preparan de la manera clasica usando derivados de acido ant ra i ico y formainida a reflujo para proveer las qui nazoiinonas intermedias. El tratamiento subsecuente con POCI3 a aproximadamente 110°C durante aprox madamente dos horas provee las cloroqui nazol mas. Los productos finales se preparan mediante una condensaci n con el derivado de anilina apropiado en un solvente polar tal como etanol. En ol caso de los derivados de fenox o tiofenoxi ia sal metálica (de preferencia Na) se prepara y se lleva a reflujo durante varias horas con la halogenoquinazolma apropiada en un solvente tal corno rHF.

I I ciñió y Los heteroai i 1 e ananos pueden prepararse a par ir del haloqonuro correspondiente (de preferencia bromuro c> yoduro) mediante la conver ión a ap Lit io ?o? ) p reacción con t-but ?l?t?o tempera uras reduél las, de preferencia de aproximadamen e -7 ° seguido por la reacción con un haloqonot nal qui lest anano Desde l ego estos productos también se pueden preparar de la manera inversa usando el aillo o los het eroapl halogenuros con el estanano correspondiente.

Los estáñanos de qui nazol ina intermedios pueden prepararse mediante la acción de sodio tprneti les taño sobre halogenuros de arilo corno se describe en Chem. Phar . Bull. 1982, 30, 1731- 1737: La preparación de los compuestos útiles para esta i ,' invención se describe en las solicitudes copendi en es del sol icitante PCT/US94/ 14100 que t iene la techa de presentaci n internacional , 8 de diciembre de 1994 y que designan los l- .U.A. como un estado contratante, No. de sene 08/166,199 en E.U.A., b presentada ol 10 do diciembre de 1993 y No. de serie 08/229,086 en '.U.A, presentada ei 19 de abril de 1994 de las cuales esta solicitud reivindica prioridad. PCT/US94/14180 , No. de sene 08/lb6, 199 en los F..U.A. y No. de serie 08/229,886 en los F.U.A. incorporados a la presente por referencia. 10 Ademas los siguientes ejemplos representan los procosos usados para la síntesis de los compuestos de esta invenci n. Los siguientes ejemplos y aquellos descritos en P?r/US94/14180 y No. de sene 08/166,199 de los F.U.A. pueden Lb seguirse para preparar cualquiera eje los compuestos eJeseados de esta invención. A continuaci n se muestra una Lista que representa los compuestos r¡ue pueden prepararse.

E3EHPLO 1 0 4- ( 3-clorofenoxis) -6 , 7-dimetoxiquinazolina Se agregan 5ml de THF y 60% de NaH disp. en aceite, aproximadamente 28rng, a un matraz seco manten lelo bajo una 5 atmosfera inerte a temperatura ambiente. Se agregan 0„09g de 3- cloro fenol corno una solución en IrnL de THF y se continua la L8 agitaci n hasta que 1 .olucion so vuelve clara, so agrega toda la 4 o Lo i o b,7 di met o? i <µ,? i nazo 1 i na < cornea <? i s l joi de una vez y se mant iene la agitación durante toda la noche empera ura ambiente. La soluci n se di i e entro CH2CI2 y NaOH al b%. La capa orgánica se lava e.,on una soi ue; ion salina, se seca (Na2 ?4) y se concentra. La columna de cromatografía por vaporizaci n (40% FtOAc/Hex) proporciono el compuesto puro. La muestra analítica se obtiene mediante la recpstal í/ac on de FtOAc/Hex para proveer 0.05g de 4 - ( 3 -c 1 ore í enox 1 ) -6 , 7 -dimetox 1 qumazoli na, agujas blancas, p. f. 152-lb3°C.

EJEMPLO 2 4-(l-metilsulfon?lindol-3-il)-6J7-dimetoxiquinazolina Paso A N-met 1 i su 1 foni 1 - 3 - 1 p rnet 11 st an 111 ndo 1 Una solución de 5g ( 15. b7rnrnoL ) de N-met ilsul fonil -3-yodoineiol (b.lg; I .5? mino L ) de he xamet 11 d estaño y 0.09g (0.78 rnrnol) de Pd(PPh3U en 75?nL de tolueno seco se inunda por completo con nitrógeno y se calienta 90°C durante 4 horas.

Entonces la mezcla se evapora y se somete a cromatografía sobre gel eie sílice, eluyeneio con hexano y después con 10% de acetato de etiio/hexano para dar N-rneti lsul on?i-3-tprnet lestan?l?ndol que se usa directamente en el siguiente paso.

Paso B 4- ( 1-me isul on?l i ndol- 3- l ) -6 , 7- ?J imot ox i tjumazol ina Una solución do i.33g (4.01 mrnoi ) do N-met 11 ul foni 1 -3- < rnnet ?l-stam Li nejóla, 750?ng (3.34 mrno 1 ) de - e loro-6 , 7 dimetoxiquinazol ina y 0„19g (5 rnol % 0.16 rnrnol) de Pd (PPh.3).» en lOml de dirneti 1 fopnarn ida seca se inunda completamente con nit ógeno y se calienta a 90°C durante L2 horas. La mezcla de reacción se diluyo con cloruro de etileno lavaeio con 10% ele hidroxido de amonio y se agLta vigorosamente y después se lava con agua y los organices combinados se lavan con una solución salina (r'brnL), se secan (MgSO.;) y se evapora hasta la sequedad. La recristal izacion ele acetato de etilo produce 4-(l-rnet 11 sul fo lmdol - 3-?l )-6 , 7-d??ne ox qu nazol na ( p.1. >?2Ü°C) . Los ejemplos anteriores se pueden seguir para separar cualquiera de Los compuestos deseaejos de esta invención. A continuación se muestra una lista representativa eie los compuestos que pueden prepararse. 6 , 7-d?met 0x1 - 4-na f talen-2-?let?m lqu azolma, p.f. 158 161°C Clorhielrato de 4 - ( 4-h?drox?fen?l ) -6 , 7-d?rnetox?qu?nazoL? na p. f . >270°C (dee) 4-(naftalen-l-?l)-6, 7~d?rnetox? quinazo 11 na, p.f. 144- 147°C 4-(nafthalen-2 -il ) 6 , 7-d?rnetox 1 qui nazol ma, p.f. 115-118°C 4-( fe lace ileml -6 , 7-d?rnetox le jumazo lina, p.f. 146-148°C 4-( 3-fluoro-4-?netox? fe 1 )-6 ,7-d?rnetox? e^uinazol ina, p.f. 207~210°C 4-( 3-femlfen?l ) -6, 7-d?rnetox?qumazolma, p. f. 160-163°C 4 i? ro Let i leni L ) - b , u-dimet o? i qu azol i na, p. f . lbí)- ih9"C 4 - ( 2 - ot oxi ?? p din b i l ) -b , 7- d nnetox i qu i na/o 1 i na , p. i . l b- ?76pC 4- ( 1 -benz Limlol - 3- 11 ) -b . ?'-d une oxi quinazo 1 ma, . i . L40~lbO°C 4-( ?neiol 3 - i L )- b , - i rnet ox iqui nazol iría, ?„ f . > 40°C (eiec) Clorhi cJrato do 4 -( l mot 111 nejol -3- 11 ) -6 , 7-d?metox le-uinazol ma pf „ >230"C (dec) 4 - ( 1 - et i ls l foni 1 i ndol 3- il ) -6,7- eiirnetoxi quma/oL i na, p. í „ >220°C (dec) 4 -( 4 -feni i pi pon din 1 -l l ) -6 , 7- dunetox i qumozol i na, p.t. 150-151°C 4 - 1"4 - ( 3 -e Loro feni 1 ) ??p razm-1 - ?l]-6 , 7 - dirnet ox i quinazo 1 ina, f). f„ 15b- 156°C 4- (N-?not i L-3 , , 5- pinetox íam L no) -6 , 7~el?rne< o ?j.u?nazol ma, P„ f„ 149- 151 °C Clorhi drato ele ( * - ) -4 - ( 2 -met 11 -1 , 2 , , 4 -tet rahidroq i nol n-1- Ll ) -6 , 7 -dirnetoxiquinazol iría, p.f. 198- 201°C (elec) Clo h dr o de 4 - ( 1 , 2 , 3 , 4 -tet rahidroquinolm- 1 - 11 ) -6 , 7 - dunet ox i e ,u nazol i na, p. f. 195-197aC (dec) Clorhidrato de 4 - ( b , b , 7 , 3 tetrahidronaf talen-1 - il )arn? no-6 , 7 - 20 eJunet oxi qui rcizol na, p.f. 219-222°C 4- ( 3 ,b-dL?xanam 1 mo) -6, 7-d?rnetox?qu?nazolma, p.f . 267-2ft9°C (eie<:) 4- ferulaceti leru l-b, 7-d??netox iqumazoiina, p. f . 146-148°C 4- (i ndol -1-?i )-6,7-d rnetox? u?nazol?na, p. f . 16B-167°C ' R Clorhidrato de 4- (N-rnet 1 -4-rnetox?an? 11 no) -6 , 7 - dirnetoxi quinazo l na, p.f. 202-2ü5°C Clorhidrato ele 4 - (N-met i L - 4 - cloroam 1 i no) 6,7- eJunet oxi CJUI nazol i na, p. f. 220-222"0 Clorhi i ai de 4 - ( 2 , - di hl droi dol -1 - 1 L ) -6 , 7 cJunet ox i eµji nazol ma, p.f. , 226~229°C (clec) Clor-hidra* o ele N- (6,7 -eii rnetoxie|u? nazolm-4 -i 1 ) -N-met 11 -N- ( 3 - t p f L uo rorne 111 f em 1 ) aroma , p.f. 240-243 °C Clor*h? i -a o ele N- (3 -clor*ofem 1 ) -N- ( 6 , 7-d? me ox ?qu?nazol?n-4 - 1 ) - N-met i lamina, p.f. 23b~237"C Clorhi elrato eie N- ( 3 clorofen 11 )- N- ( c|u nazol n-4 - i 1 ) -N-rnet i 1 - amina, p.f. 233-23b°C 6 , 7- ??net ox - 4 -naftal en- 1 - ll ~et i 1 ulquinazol ina, p. f . 175-177°C 4-( t ?en-3 -i 1 ) b , 7-d ?netox?quLnazol?na , p. f. 148 „ b - 151.5°C 4 -bencí 1-6 , 7-d?rnetox?qu?nazoi ma , p.f. 122. b-125°C Clorhidrato ele ( 6 , 7-d?rneto?? q?nazol n-4 - 1 J ) -5-mdazol?larn? na, p. f. 261~263°C (dec) Clorhi e1r*a o de N- ( 6 , 7 - . dirnetox ?qu? azol?n-4 -íl ) -N-feml-N- eti lamina, p.f. 227-230°C (dec) Clorhielrat o eje N-bencil-N- ( 6 , 7-el?rnetox? qui nazol m- 4- il ) -N- fem lamina, p.f., 269-271°C N- (6-eloroqu? nazol ín- 4 -íl ) -N-metil-N- fen i lamina, p.f. 106-108°C Clorh?dr*at o de N- ( 3-cloro-feml ) -N-( 6 , 7-d?metox?qu?nazol?n-4- ?l)-N-e ?l amina, p.f. 261~263°C Clorh?dr* to de N- ( 6 , 7-d??neto ?qumazol? n-4- il ) -N-rnetil-N-p- tol lamina, p.f. 230-234°C (dec) N-bencil-N- ( 6 , 7-d?metox? qumazol?n-4-?l )arn?na, p. f . 220-225°C N-(4-?netox?benc?l) -N-( 6 , 7-d?rnet oxiqu nazoli n-4 - Ll )arnma, P„ t i'.j4- 190"(; Clorhidrato de N- ( 3 , b -dirnetox boncí 1 ) N- lb, r' d me t o x i e | u i nazo 1 i n - 4 - i L ) a i na , p. f .. 265-2 h 9 ° < 4 - ( 3, , b -t pmet ox i enoxi ) - b , 7-d??ne< oxie^ui na ol i na, p. f. 228-232°C Clorhidrato de N- ( qu azolin -4 il ) -N- femi-N-rnet ilarní na, p. f. 242 -24ñ°C (dec) CLorhL r o de N- ( 6 , 7-d?rnet o i c|u? nazol i n-4 - 11 ) -N- ( 4-?norfol n-4- i i fem 1 ) aun na, p. f. 231 235°C (dec) 4 - ( 3 -mot o?? t ?o fenoxi ) -6 , 7 - irnet ox qu azo 1 i na, P„ f ., 1 9.. b 141.5°C Clorhidrato de 4 GN- ( 5-?ndam 1 )arn? noJ -6 , 7 -dirnetoxiqumazoli na, p.f., 244-246°C (dec) 4-( 3-clor*ot ofenox? ) -6 , 7 -eiirnet oxieµjinazolina, p.f. 152 153.5°C Clorhi rato de 4 - ( 3-arn?no??razol?l) -6 , 7 -dimetoxiqui nazol i na, p.f . 262 -2 "0 (dec) Clorhidrato de 4 ( 1 , 4 -benzodioxan- 6-?larn? no) - 6 , 7 - dirnetox i e|umazol? na, p. f. 267- 269'O (dec) Clorhidrato eje b , 7 -dirnetox i -4 - ( v -na fti lamino ) eµji nazol ina , P.f. >250°C Clorhidra o de 6 , 7~d ?netox i - 4- ( -na ftiiarm no) quinazo! ma, p.f. >?50°C 4- ( c clohexi lani Lino) -6 , 7-d?rnetox?qu?nazol? na, p. . 239~244°C Clor*h?drato de 4 - ( 3 , 4 , 5- trirnetox lam lino) - 6 , 7- dirnetoxiqumazolma, p. f. 260-265°C Clor-hidrato de 6, 7-d?rne ho ?-4-(N-rne ?ian?l? no) quinazo lina, p. f .. >230°C - (3 cloro fonoxy) 6 , .'- dirnet ox iqu azol ina, p. f. 152-lb3°C 6 , / - d i rne t ox i - 4 - ( L - na f t i 1 1 o ) - quinazo i i na , p. f. 174.5 - 176.5 °C 6, 7- el??netox?-4 - (2 naf 1111.1 o ) - c-ui nazol i na , p. f. Lf'8-179°C b b , -elunetoxi- 4 - ( l -naf t i iox ) -ejuinazol i na, p. f. 214 -125.,5°C b, 7- irne oxi -4 - ( 2 -n f i Loxi ) -qui nazoL ma, p. f . 169- 170°C Clor*h? drat o de N-Í6, / eli rnetox -eju i no 1 az o 1 i n~ 4 - 11 ) -N (naft -2- i L) N- et i Lamina, p. f . 236-239uC (dec) b , 7 -elimet ox i - 4 ( na ftalon-2 -sul 11 ni 1 ) eµji nazol ina, p. . 182„5-1 5°C 6, c,~d?metoxy-4 ( naft Len-2-su 1 fonil )qu?nazol na Clorhidrato de 4 - ( 3-cloroan 1 ino) -6, 7 -dirnet i iqui nazol i na, p.f". 271-274OC Clorhidrato eie 4 -( 3 , 5- eiunet i lamlmo) - 6 , 7-e1?rnet i lquinazol ina, 5 p. f ,. >27 b°C 01 orhi dr*at o de 4- (N-rnet 11 -4~?net i Lam 11 no) -6 , 7 - dirnet ilqui nazolma , p- r . 23b- 233°C Clor*h? drat o de 6 , 7- dirnet 11-4- ( 1-naft i La ino) qui azo lina, p. f. 244-247 °C 0 Clorhidrato de 6 , c'-d?rnet?l-4- ( 7-tnfluorornet?l-3, 4-eJ? h?dro~2H- qumol in- 1 -il ) quinazolma, p. f. 240°C Clor*h?drato de 4- (N-rneti l-3-rnet ílam l mo) -6 , 7- dirnetilquinazolma, p. f. 205-207°C Cío rhid rato de 4 -( 3- cío rof emitió) -6,7 -dunet lqui nazol ina, 5 p.f. 197-202°C Clorhidr-at o de 4- ( 1-naft?lt?o) -6 , 7~d?rnet?lqu?nazol?na, p. í 204 2()9°C 4 ( 3 , -eiiineoxi feni it ?o ) eµn nazol ina, p.l. 11b 11 °C PREPARACIÓN DE COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS Y SECCIÓN DE PRUEBAS FARMACOLÓGICAS Para elet epni nar la efectividad de Los compuestos eje esta invención se usan Las pruebas f rmacológicas descritas a con inuaci n, las cuales se aceptan en la técnica y se reconoce eµje se corr lacionan con la actividad farmacol gica en mamíferos. Los compuesto eientro del alcance de esta invención se han sometí «Jo a varias de estas pruebas y los resultados contenidos se piensa que se correlacionan con la inhibí don til ele la proliferaci n (Je células inducida por* el factor ele crecimiento. Las pruebas descritas a continuación son útiles para determinar* la inhibición de ios compuestos de esta i nvonc ion.

PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES Materiales: El material de prueba se disuelve extemporáneamente en DrSO para crear soluciones ele abastecim ento que se diluyeron subsecuentemente en ol medio de cul ivo ?ar*a alcanzar las concentraciones del compuesto deseado (concentración final del vehículo de 0.1%). Los materiales utilizados son los siguientes: medio guila modificado *'•> (Mod ped Fa Le Médium) <io Dulbecco (DMEM) , RPMÍ 164(1, suero fet l ele becerro (TCS) , y solución de peni ci l?na-estr*ept ornici na ( 1 ,000 L U/m i de pe n i c 111 na y 10, 000 µ g/rn 1 de e st i *op t orn i c i na ) , ele GIBCO BRL,. El bromuro de 3 ( 4 , 5~d met ?l t i azol -2- i L ) -2 , 5- b d feml t et razol 10 (MTT), y la genetic na son eie Sigrna. El, ft- 32p]firp(cat#NEO0ü2H; 3 , OOOCí /rnrno 1 ) ra di orna rea do se adquirió de NEN. Los anticuerpos neu ant i c (Ab-b; cat#0P39) fueren de Ocogene Science. Los ant cuerpos mono clónales de an j - fos fot 11 osma de ratón ( LgG2b monoclonal) fueron de UBI y el igG ant i rat n de conejo de perox dasa de r bano conjugada fueron de Nordic Imrnunol og cal Laboratories. La estructura «le AUN plasmido de estrornel si na-CAT, que consiste de la transferasa de acet ilo clora fem dol de AT)Nc bajo el control del i ragrnento promotor* de estrornei ís na- 1100/ *-8 se preparo mediante Ib el procedimiento de C. Uasyly , A. Tutrnan, R. Nicholson y B.

Uasylyi- (1991) EMBO 3., 10: A127-A134. Todos los ernas químicos fueron de La mejor cal «1ad disponible. Líneas celulares y cultivo celular: Los fibroblastos de embrión de ratón (NTH3T3) , linea celular de carcinoma 0 epi errnoi e humado (A431) y lineas celulares de adenoearcinorna «Je pecho (SK-BR-3) y de ovario (SK-OV-3), lineas celular de carcinoma humano «ie pulmón (A549), y de pecho (BT474 y BT20) se adquirieron de ATCC. Las células de NIH3T3 transfectadas con HER2 construyen y sobreexpresan pl85HER2 t NIH/HER2 se 5 prepararon de acuerdo con R. II. Hudzial-', 3. Schlessmger y A.

Ullpch (1987) Prec. Nati. Acad. Sci. USA, 84: 7159-7163. La 2 b linea ~,eiul t NIH/Ha-Ras se estableció mediante la ransformación e las células NIII3T3 con V?l2H,?- < * do acuerdo con 1. Baai Lat , I", Schwi gho f f er, 11. C, Cheval ?or-Mul t on, M. Duchesne, l. Fa th, D. Landais, 11. .lacquet y II. roeque (1993) b Oncogene, 8: 215 210. C97 1193E. Las células NIH3T3 t ansfectadas con v-src activado «jue contiene mutación de Y527F (Nill/v-Src) se obtuvieron del Di*. B. Uasylyk. La linea celular HlR3.b (N1H/1R) rep esent n las células N1H3T3 que sobre expresan el receptor de i sulina humano y fueron provi tas por el Di*. J. Uhitai-er. Todas las lineas celulares se cult ivaron a 37°C en un incubador de Ü2 f b% C?2/9b% «ie atmosfera «le aire húmedo) en un medio complementado con 10% de ECS y solución de peni ci l est 1 ept orín cma al 1%. A menos que se especi f i ue en el texto, el medio de cultivo se cambio cada tercer día. Ib Ensayo de autofosf oplacion de ?!85HER2 i n y^rp; <±e usaren las lineas celulares ER22 o A431 y NIH/HER2 corno fuentes para ?L85HER2. Las onocapas celulares subcon f luentes se Lizaron a 4°C durante LO minutos en regulador «le pH HNFG (HNEG: bOrnM regulador de pH I-lepes, pH 7.5, IbOrnM de NaCl, 1 mi EDTA y 0 Glieerol al 10%) «|ue contiene 1% de Tritón X-100 y LrnM de PMSF.

Los l sados celular*es se diluyeron entonces con regulador de pH HNEG que con iene 0.1% de Tritón X-100 y 1% de BSA (regulador de lisis), y los extractos de célula se clarificaren mediante cen ifugación a 12,000 g durante 5 minutos. Los ensayos de 5 auto fos f orí lacion se realizaren corno describió S.M. Srnyth, T.

Stefanova, F. Hartrnan, l.D. Horak, N. Osherov, A. Levitzki y I . k>„ lluri-e ( 1993) 1. Med. Chorn., 36: 3010-3014. En poca1*, palabras, se revistieron las placa1*, «ie plástico con fondo en forrna de U «Je 96 pozos a 37°C durante 2 horas con 100 µl de i munoglobuii na antiraton de cabra (Biosys) a una concentración de 10 µg/ml. Después de vanas lavadas con PBS c|ue contiene Tween al 0.05%, 100 µL de an icuerpos neu anti- c se incubaren durante 2 horas a 3¡7°C, (ambos anticuerpos se usaron en 1 µg/ml). Los si ios de umon no ocupados se bloquearon mediante incubación durante 1 hora a 37°C con BSA al 2% en PRS. l os l sados celulares se incubaren en pozos recubiortos «Jurante 1 hora a 4°C. Después de varias lavadas con requLad?r de pH de lisis se realizo el ensayo de autofosfonlacion directamente en los pozos en 25?nM de regulador de pH Hepes, pH 7.4, que contiene HnCl2 2?nM, 0.1% de Tritón y 5 µCiT t-32 PJATP durante 20 minutos a t e?nperatur*a ambiente en ausencia o presencia de ios compuestos «Je los solicitantes. La reacción de fosforilación se extinguió añadiendo el regulador de pH muestra de Laemml preparado de conformidad con Laernmli, G.J-i. ( 1 70 ) (Nature, 225: b80-b85 y l"32pj io receptores marcados se analizaren ?ne«i?ante SDS-PAGE en 4-12% de gels gradientes <ie poliacp lamí da. Las intensidades de fosforilación se calcularon analizando los gels secos en un Tnstant Tinager (Pacl--ard). Fosforilación de t rosina «ie célula intacta: Las rnonocapas celulares contenidas se dejaren s n suero «Jurante toda la noche después de i o cual se incubaron durante 2 horas con las concentraciones de compuesto indicadas. Posteriormente 20 se aspp o el medio y las celuLas se extmguiei on a adiendo el regulador* do pl I muestra SDS de Laernmli directamente sobre las monocapas celulares. Las mues ras se trataron entonces a ÍOO'T durante 5 minutos antes de probarse para las proteínas «jue b contienen fos fot rosi na. Las proteínas so fraccionaren incidíante SDS-Pago sobre 4-20% de gei1*, gradientes de pol íacp lanuda, después de lo cual las proteínas se tran f irieron eloct roforeticament e a ?nembr*anas de dirloruro pol ivin l ideno (membr*ana PVDE, PolyScreen, NEN). La detección i nrnuno Logí ca do 10 la<*, proteínas que cont ienen fosfot iresma se realizo usando un anticuerpo rnonoclonal de ant i fos fot i rocí na de ratón. Los t intes se desarrollaren por el ?neto«lo ojuirnilurnmi scente mejorado (ECL, NEN) que emplea I G antiraton de conejo de peroxidasa de rábano <;onjugada. Ib Prelí foración Celular*: Las células se sembraron aproximadamente 20,000 células por pozo en pic a de cultivo celular* ele 24 pozos. Se permi ió <?ue las células se adhirieran al plástico durante 8 horas en 1 mi «Je medio de cultivo, después de lo cual las células se cultivaron en presencia de 0 varias concen raciones de compuestos durante 72-96 horas. Se calculo el numero de células por pozo siguiendo los tiempos de incubación indicados. Corno un ensayo del numere de células viable relativo, la reducción rnitocondr al de MTT se uso siguiendo el procedimiento «le M. C. Al ley, D. A. Scudiero, A. 5 llonks, M.L. Hursey, M. 3. Czerwinski, D. L. Fine, B. 3. Abbot, 3. G. Mayo, R. H. Shoemaker y M. R. Boyd (1988) Cáncer Res. 48: <>9 b89 b(U l"n resumen, se aqroraron 100 µl «le una solución de b q/ml «le MTT en una soluci n salina de pH i ^guiado con fosfato ( ?da pozo y las placas se incubaron duianto 4 horas a 37"C en un incubador de CO . Entonces se removieron 650 µl del medio y se reemplazaron con 750 µl «le una solución de alcohol isopropí LLCO/HCL (1N) (25:: 1) con el fin 'le disolver los cristales purpura oscuro «le fopnazan formados en el rni ocondpo de células vivientes. Después de la incubación durante 5-10 minutos a temperatura ambiento sometido agitación, se ran irieron 200 -µl de alícuotas de cada pozo a placas «Jo cultivo celular* de 96 pozos, y ya «µie ei grado del color azulado obtenido fue direct mente proporcional al numero de células, este se calculo ?ne«i?ante espec ro fotornet r la a 590 nm en un autolector de rnicroplato. Ib Crecimiento Celular Independiente al Anclaje: Se investigo el crecimiento celular independiente al anclaje examinando la capacidad de formación de colomas de las células consideradas suspendidas en agar suave. Se realizaron los experimentos 0 usando platos de cultivo celular con un «iiametro de 50 -nrn. Una subcapa al unentadora sin células e 4-?nl consisti de 0.5% de agar en un medio complementado con 10% «Je FCS las concen raciones indicadas de Los compuestos. La subcapa «Je -mi contiene aproximadamente 10,000 células y 0.3% de agar en un 5 medio complementado con 10% de FCS y las concentraciones correspondientes de ios compuestos. Después de la incubaci n durante 2 semanas a 37"C se «lo ormino el numero de « o Lomas.

Transf ccion (;elular y Ensayo SAI":: I a est ructuí a «le ADN piasmido «Je est rome L i si n-Cflí (slRM-CAT) se introdujo en células b mediante la tran feeoion usando ol reactivo I i o oct MINA. En resumen, se expusieren de 50-70% de Los platos «ie cultivo confluente (3.5 -cm) de c lulas a i µg de ADN plasmido y 10 µg de react ivo 1 ipo fect.AMTNA en 1 mi de DMEI1 libre de suero durante 4 horas a 37°C. Después '*e incubaron las c lulas LO durante 36 hoi as a 37°C con DMEM co?nplernenta<io con 0.5% de ECS y Las cantidades indicadas de los compuestos. Se desprendieron las células de las placas mediante la incubación con PBS que contiene 3 rnM de EDTA peí lado mediante centrifugación durante 5 minutos a l,b()0 rpin. Las células se volvieron a suspender en L5 0.25 II de reguLador «Je pH Tps/HCl , pH 7.8 y se sometieron a ciclos <1e congel ci on- deterret irnient o repetieJos. Los extractos celulares se calentaron a 65°C «Jurante 15 minutos y, después del enfriamiento, se some ieron a mi crocent rifuga durante 15 minutos a 14,000 rprn. l os sobrenadantes se ensayaron para 0 actividad CAT siguiendo el procedimiento ele 3. R. Neumann, C.

A. Morency and K. 0. Russian (1987) B o Technigues, 5: 444-447. Los compuestos dentro del alcance de esta invención exhiben actividad específica importante corno inhibidores de proteina ti resina «juinasa y poseen valor terapéut ico para 5 exhibir la proliferación celular inducida por el factor de crecimiento. Ademas, los compuestos de esta invención son inhibidores específ icos «JeL leceptor de factor* de crecimiento epidérmico humano ipo 2 y por* lo tanto son útiles para el tratamiento del crecimiento y la diferenciación ceL?lar.. Fl siguiente cuadro muestra ejemplos de los compuestos que representan esta invenci n y I o resul ados de Las pruebas corno se determina mediante? la anterior inhibición del receptor* de factor o crecimiento epidérmico humano tipo 2. Los resultados obten dos mediante los métodos experi entales anteriores prueban Las uti Les propiedades de inhibición de la proteina ti resma qumasa del receptor HER2 de los compuestos dentro del alcance de la presente invención y poseen valor terapéutico en la regulación del crecimiento celular anormal. 00 enlace H 0CH;j 0CH;j H ?o%at5µM ¡2 los (ornpues os de la presente invenci n e pueden tdrm ni st rar a un mam 11 ero huésped en una va cdad de formas adaptadas a la vía de admi tración elegida, os decir* oral o parontalmento . En este respecto la admi istración parental incluye La adminis raci n mediante las siguientes vías: intravenosa, intramuscular, subcutánea, int ra?cuiar, int rasmov Lal , t ransepit eiial incluyendo ransdermal, o f t a 1 m i c , sub1 i ng a 1 y bucal ; i ncl uyen«io t op i oarnente oftálmica, <ler*?n?ca, ocular*, rectal e i nal ación nasal por* ?ne«JL? de l a insufrac on y aerosol y sistemieo rectal. El compuesto ac ivo puede administrarse oralmente, por ejemplo, con un diluyente inerte o con un vehículo comestible asimilable, o pueden estar cubiertos en capsulas de gelatina protectora duras o suaves, o pueden ser comprimidos en tableta, o pueden i ncorporar'se directamente a la comida de la dieta. Para la admini tración terapéutica oral, el compuesto activo puede incorporarse con excipiente y usarse en la forrna de tabletas comest ibLo , tabletas bucales, trociscos, capsulas, elixires, suspensiones, jarabes, obleas y similares. Tales compos ciones y preparaciones deben contener por Lo menos 0.1% «Jel compuesto activo. El porcentaje de las composiciones y preparaciones, por* supuesto, puede variar y convenientemente puede ser de entre aproximadamente *2 y aproximadamente 6% del peso de la unidad. La cantidad del compuesto activo en tales compos c ones terapéuticamente útiles es tal que se obtendrá una dosis adecuada. Las compo iciones o preparac ones preferidas de con lor i d d con la presente invención se preparan e? manera que una unidad de dosif icación oral cont iene entre aproximadamente L y 1,000 ing del compuesto activo, l as tabletas, trociscos, pildoras, capsulas y similares pueden contener lo si mente: un aglutinante tal corno goma ele tra«janto, icacia, almid n «Je maíz o gelatina; excipientes tales corno fosfato dicalcico; y agente desintegran e tal co o almidón «Je ma z, almidón de papa, acido algmico y i i lares; un lubricante tal como estoroato «le magnesio; y un agente edulcorante tal corno sacarosa, lactosa o sacarina pueden añadirse o un agen e savopzante tal corno menta, aceite de daulteria o savor izante de cereza. Cuando la forrna «ie umdad de dosificación es una capsula, puede contener, ademas de los materiales del tipo anterior, un vehículo liquido. Pueden presentarse o ros materiales distintos corno revestimientos o modificar de otra manera la forma física «Je la unidad de dosis. Por* ejemplo, las tabletas, pildoras o capsulas pueden revestirse e.on «joma laca, azúcar o ambas. Un jarabe o elixir puede contener* el compuesto activo, sacarosa corno un agente edulcor'ante, metilo y pr pilparabeno corno preservativos, un colorante y un sabopzante tal corno sabor* naranja o cereza. Desde luego, cualquier material utilizado en la preparación <le cualquier forma de umdad de dosificación debe ser farmacéuticamente pura y emplearse en cantidades subs anc Lalmente no toxicas. Ademas, ei componente activo puede incorporarse dent i o de preparaciones y formulaciones de 1 í ei ación sost oni «la. El compuesto a<;t?vo también puede admini trarse parontal o int raperi t onealmente. Las soluciones del compuesto b activo cerno una base libre o sal farmacológicamente aceptable pueden prepararse en agua mezclada adecuadamente con un agente tensioactivo tai como hidrox i propil celulosa. Tambi n se puede preparar* la dispersi n en glicerol, pol le i lengli coles líquidos y mezclas de? los mismos y on aceites. Estas preparaciones contienen un preservativo para evitar el crecimien o de microorganismos bajo condiciones nórmalos de almacenaje y uso. Las formas farmacéuticas adecuadas para el uso inyectable incluyen soluciones acuosas estériles o dispersiones y polvos est nios para la preparación ex em orá ea de Ib soluciones inyectables estenios o dispersiones. En todos los casos La forma debe ser estéril y debe ser* fluí «Ja al grado «Je hacerla fácilmente inyectable. Puede ser estable bajo las condiciones «le? fabricación y almacenaje y debe ser preservada contra la acción contaminante «Je microorganismos tales corno 0 bacterias y hongos. El vehículo puede ser ?n solvente o un medio de dispersión oµje contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por* ejemplo, glicerol, propilengl icol y propí lenglicol Liquido y similares) mezclas adecuadas de los mismos y aceites vegetales. Se puede mantener* la fluidez adecuada, por ejemplo, 5 mediante el uso de ?n reves imiento tal corno lec tma, por rne«J?o del mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de la dispersión y mediante el uso «Je agente1*, tensioact i vos. I.a prevenci n de la acción de los microorga ismos se puede realizar ediante diversos agentes anti bac rianos o a ti r?n í eos, por* ejemplo, paraben, b clorobutanol , renol, acido sorbico, tirnerosaL, y similares. En muchos casos, seria preferible incluir agentes isoto cos, por ejemplo, azucares o cloruro de sodio. La absorción pr longada «le composiciones inyectables puede llevarse a cabo por* el uso «le agentes dilatadores de absorci n, por ejemplo, onoesterat o de a 1 urn i n i o y ge 1 a t i na „ l as soluciones inyectables estériles se pueden preparar- inco porando ol compuesto activo en la cantidad necesaria en el solvente adecuado con varios de los otros ingredientes mencionados anteriormente, si se requiere, seguido Ib por* la esterilizaci n filtrada. Generalmente, se preparan Las dispersiones incorporando los di erentes ingredientes activos ester lizados en un vehículo est ril <|ue contiene el medio «Je dispersión básico y los demás ingredientes necesarios a partir- de los an es ennumerados. En el caso «Je los polvos estériles 0 para La preparación de soluciones inyectables estériles, los métodos preferidos de preparación son secado al vacio y la técnica «1e secado por congelación que produce un polvo del ingrediente activo mas cualquier ingrediente adicional deseado de la solución estéril previamente filtrada deL mismo. 5 Loe compuestos terapéuticos de esta invención se pueden administrar a un mamífero solo o junto con vehículos farmacéuticamente aceptables, corno se menciono anteriormente, i uy proporción ' -- «lotepnina por la solubilidad y naturaleza «luirnica deL eompue t o, la vía e admi i ración elegida y La pract ca fapnace?t i ca convencional. La dosi icaci n do los agentes terapéu icos «Je La presen o «jue serán mas adecuados para La profilaxis o tratamiento vapai con la forma de administración, el compuesto particular elegido y Las características fisiológicas del paciente particular ba o trat miento. Generalmen e, se usaran inicialmente dosis pequeñas y si es necesario, se aumentaran en pequeño1 incrementos hasta que se alcance el efecto óptimo bajo las circunstancias. La dosificación humana terapéutica, basada en los estudios fisiológicos usan«Jo ratas, generalmente sera «Je aprex uñadamente 0.01 mg a aproximadamente 100 mg/i-g de peso corporal por día o de aproxi adamente 0.4 mg a aproximadamente LO g o mas aunque puede administrarse on vanas unidades «le dosificación diferentes de una a vanas veces al día. La admini tración oral requiere dosis mayores.

Claims (1)

17 NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES !.- I:l uso de una canti ad efectiva que inhibe el receptor* I-IER2 de un compuesto de la Formula: en donde A es un sistema anular de arilo, heter*oaplo, cicLoalqu lo o heterocicloal quilo mono o bi cíclico substituido o no substituido de aprox madament 5 a aproximadamente 12 átomos y en el que el s?bsti uyente puede Local izarse en cual«ju er posición apropiada del sistema anular y se describe por* R; X es un enlace, 0, S, SO, SO2 , OCH2 , CR4=CR¿, C=C, NR*j o NR4CH2; R incluye independientemente hiejrogeno, alquilo, ferulo, halogenofenilo, aralquilo, hidroxi , alcoxi, aplox , ac loxi, haLogeno, halogenoalqui Lo, arnmo, mono y diaiqui lamino, acilarnino, carboxi, arnido, mono y dial q? lamido, aLquiltio, alquilsulfmilo y alq?ilsul fo io. Rt, es hidrogeno, alqu lo o aral«ju?lo; y R5 , R6 , R7 y R8 son independientemente hidrogeno, alcoxi o aralcoxi o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en la preparación de composiciones !fl para <sl tratamiento select ivo «leí crecimiento v la di erenciación celular « a\ act erizados por* la act ividad <1el receptoi de factor* de crecimiento epid rmico humano tipo 2 (HER2) . ?.- EL uso de conformidad con la re vindicación 1, caracterizado ademas porque <*n ol compuesto usado, A es un anillo monooiei i co de aplo o heteroaplo substituido o no subst ituido seleccionado a partir de fe lo, pirrolilo, t ienilo, fuplo, t azo l le, itnidazol i Lo, pirazoiiio, pin d lo, pirazimlo, ?? r uní di ni Lo, pipda i lo, isot lazol lo, isoxazol ilo y oxazolilo 3.- 1-1 uso de conformidad con La reivindicación L, caracter*?zado ademas porque en el compuesto usado, A es un anillo biciclico ele aplo o heteroaplo substituido o no substituido seleccionado a partir* «Je naftilo, tetralmilo, i , 2 , 3 , 4 -tetrah i drequinol n lo, benzofur io, benzot íemlo, imianilo, indoLilo, indolimlo, 1 , 3-benzod?oxol i lo, benzodio am lo, q?i noli rulo, tet i soqu nol lo, qumazol mi lo y «jumoxal milo. 4.- Ei uso de eonforrní da«J con ia reivindicación 1, caracterizado ademas porque en el compuesto usa«io, A es anillo rnonociclico de cicloaJ. qui lo o heterocicloalquilo substituido o no subtituido seleccionado a partir de ci clopentilo, ciclohexilo, ciclohepti lo, decalmilo, pipepdimlo, piperazinilo, rnorfoli lo o eiecahidroqumoiimlo. 5.- El uso de conformidad con la reivindicación 1, 3<<) carac rizado ade as porque en el compuesto usado, A es un anillo bicicl co de ci cloal«|u? io o heterecicloal «|u? lo subst ituido o no substi uido seleccionado a partir de decalinilo o «lecahi «Jretjuí nol i ni lo „ b 6.-- El uso de conformidad con la reivin icación 1, caracterizado ademas porque en el compuesto usado, A es femlo, p pdilo, t iemlo, fuplo, p razolilo, nafti lo, tetral m lo, l , 2 , ,4-tetrah?droqu?nol?n?lo, indanilo, indoLiLo, indoliniLo, q? nolirulo, t et r*ah dro«|u? noliru lo, ciclohexilo, ?? peri di ni lo o 10 p perazimlo substit ido o no substituido; X es un enlace, 0, S, o R4 ; I? es hidrogeno, alejuilo, alcoxi, halógeno, halogenoalqui Lo, alquiltio, aL«|u?lsul fi ni lo, alquLlsulfom Lo, femio y aralquilo; Rt, es hidrogeno, alquilo o aralquilo; y R5 , Re / R7 y e son independientemente hidrogeno o alcoxi. ib ?.- L: 1 uso de conformidad con ia reivindicación fi , caracterizado a«1e?nas porque en el compuesto usado, A es fenilo, na f 111 o o 1 n do 1 1 o u b s 1 1 u 1 do y no s u b st 11 u 1 do ; X e s u n enlace; R es hidrogeno, rnetox , et?xi , cloro, tp í 1 uorornet 1 lo, rneti lsulfo io, feni lo y bencilo; Rt, es hidrogeno, metilo o 20 bencilo; y R5 , Re , R7 y Rß son independientemente hidrogeno o me 0x1. 8.- El uso eje conformidad con la reivindicación 2, caracterizado ademas porque el compuesto usado es 4~(2- fem letilemlo) -6, 7-d??neto??qu?nazolma o una sal 25 farmacéuticamente aceptable del mismo. 9.- El uso de conformidad con la reivindicación 3, c arae» en za«1o a«ie?nas porque dicho compuesto usado es ñ, 7- «lirnetoxi 4-naí * al'-*-n 1 il et i m 1 q.?? nazol i na o una sal farmaceut icament e ueptablo del mismo. 10. 1-1 uso «le conformidad con la reivindicaci n fi, b caracterizado ademas porque dicho compuesto usado se selecciona a partir «Je: 4- ( 2-?net ox ?p?pd?n-5- i L ) -b , 7 -dirnetoxi qumazolma , 4 - ( 4 - fem i pi pe p di n- 1 - 11 ) - F> , 7 - dimotox i quinazo 11 na , 4 - T 4 - ( 3 - eLorof enil ) piperazm- L- i LJ-b , 7- dunetoxiqu nazol na y 4- (1,2,3,4-tet rahí droqu ol i n-i - 1 ) - fi , 7-d?rnetox?qumazol i na o una 10 sal farrnacouti c:arnente aceptable de los mismos. 11.- El uso de con ormidad con la reivindicación f> , caracterizado ademas porque dicho compuesto usado se selecciona a par ir de: b , 7-d??netox? -4- ({3 -naf tilarní no)qumazol?na, 4-TN- (5~ ndaml )arn? no 1-6 , 7-d?metox?qumazol? na, N-bencil -N- (6,7-lb dunetoxi quinazo l n-4 -ll) N- fen i lamí na , 6 , 7-d?rnetox -4 - (N- rnet i lam l no) qui nazol ina, N- ( 3-clorof em 1 ) -N-( 6 , 7- dirnetox i qui nazol i n -4 - il ) -N-rnet i lamina, 4- ( 3-a?n nopi azolil ) - fi , 7~d?rnetox?qu? nazoi i na y 4-(c?clohe ? la í no) -fi , 7- di etoxiquinazolma o una sal farmacéuticamente aceptable «Je 0 los mismos. 12.- El uso de conformidad con la reivind cación 6, caracterizado ademas porque el compuesto usado es 6, 7-d?metox?- 4 -(a-naft lamino) quinazolina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 5 13.- El uso de conforrn ejad con la reivindicación 7, caracterizado ademas porque dicho compuesto usado se selecciona i partir de: M - ( na ftaLen-1 - 11 ) - b , i?-d??netox iqu azol ma, 4-( na ftalen-2 -i 1 ) h , 7 -dimetox i qu mazo 1 ina , 4- ( 3 f eml foml ) -b , 7 -«I irnetox i quinazol a , 4- ( i ndol - 3- 11 ) -6- 7- dimet ox qu mazo 11 na y 4- ( 1 -metí 11 ndol 3 i 1 ) -6,7 dirnet ox icµii nazoiina o una sal farmacéuticamen aceptable de los mi mos. 14.- I I uso de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado ademas porque ol compuesto usado es 4-(l-be cil i ndol -3- L l ) -6 , 7-d??netox?qu?nazolma o una sal farmacéut icamen e aceptable del mismo. 15. Un composición farrnaceut ica para tratar* select ivamen e el crecimiento y la diferenciación celular caracterizados por* la actividad del receptor del factor de crecimiento epidérmico humano tipo 2 (HER2) «jue comprende una cantidad efectiva para inhibir el receptor* HER2 de un compuesto de la Formula: en la que A es un sistema anular* mono o biciclico «Je aplo, heteroanlo, cicloalquilo o heterocicloalquilo subst ituido o no substituido de aproximadamente 5 a aproxima «lame nte 12 átomos y en el que los substi tuyentes se localizan en cualquier posición apropiada del sistema anular y se describen mediante R; X es un enla- o 0, S. SO, S02 , OCH2 , CR^OR* , 0-~0, NR4 NR4CH2 ; R incluye independientemente hidrogeno, alquilo, rom Lo, halógeno rom Lo, aral quilo, hidroxi, aicoxi , anloxi, aciioxi, halógeno, haiogenoalq?i lo, arnmo, mono y dial «jui la í no, acilarnino, carbox , amulo, mono y dial quila i <1o, alqu itio, alquilsul f in lo y aiquiisulf om lo. Rt, es hidrogeno, alquilo o ai alquilo; y R5 , Rß , R7 y Rs son independientemente? hidrogeno, alcoxi o aral cox 1; o una sal farmacéut icamente aceptable de los mismos, junto con un vehículo farmacéu icamente aceptable. 16. - Una composición de con foi rni dad con la reivindicación 15, caracterizada ademas porque: A os fenilo, piridilo, tiemlo, fuplo, pirazoiilo, naftilo, tetralimlo, 1 , 2 , 3 , 4-tetrah?dreq??nol? mío, indamLo, indolilo, indolinilo, quinolmilo, t etrahidroqumi 1 rulo, ciclohex lo, piperdiniio o piperazi rulo substituido y no substituido; X es ?n enlace, 0, , o HRt, ; R es hidrogeno, alquilo, alcoxi, halógeno, halogenoalquiio, alquiltio, alquil sul firulo, alquilsul onilo , fe lo y aralquilo; Rt, es hidrogeno, alquilo o aralquilo; y R5 , Re, R7 y Rß son independientemente hidrogeno o alcoxi. 17.- Una composición de con forrní dad con la reivindicación 16, caracterizada ademas porque el compuesto es 6, 7-d?rnetox?-4-(of-naft?lam? no) «jumazoi na o una sal farmacéuticamente aceptable del misino. 18. - Una composición de conformidad con la reivindicación 16, caracter zada ademas porque el compuesto es 4~(l-benc? i?ndol-3-?l )-&, 7-d?rnetox quinazolma o una sal farmacéut icamente aceptable del mismo. 19. b , 7- dirnotoxi - 4 (or-naft i lamino) qumazol i na o una sal farmacéut icamente aceptable del mismo. 20. - 4-U bencil i ndol -3 -íi ) 6 , 7 -di met ox ?«ju? nazol i na o una sal f arrnaeeuti earnente aceptable del misino.