MXPA97005535A - Portador de prueba diagnostica independiente del volumen y metodos en los cuales se usan para determinar un analito o substancia que se va a analizar - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a un portador de prueba de diagnóstico (1) que contiene una capa de soporte (2) con una capa de detección (3) arreglada en la misma que contiene los reactivos requeridos para determinar el analito en una muestra de líquido y una red (4) que cubre lacapa de detección (3) la cual es más grande que la capa de detección (3) y la cual estáfijada o unida a la capa de soporte (2), el cual estácaracterizado porque la red (4) es hidrofílica pero no activa capilarmente por símisma y una cubierta inerte (5) hecha de material impermeable para muestras estáarreglado sobre lasáreas (6) de la red que se extiende más alláde la capa de detección de manera que un sitio o lugar de aplicación de la muestra (7) permanece libre en la región de red (4) que cubre la capa de detección asícomo también el uso de un portador de prueba para la determinación de analito en un líquido. Además la invención se refiere a un método para la determinación de un analito en una muestra de líquido con la ayuda de un portador de prueba de conformidad con la invención.

Description

PORTADOR DE PRUEBA DIAGNOSTICA INDEPENDIENTE DEL VOLUMEN Y MÉTODOS EN LOS CUALES SE OSA PARA DETERMINAR ÜN ANALITO O SUBSTANCIA QUE SE VA A ANALIZAR CAMPO DE LA INVENCIÓN La invención se refiere a un portador de prueba de diagnóstico que contiene una capa de soporte con una o varias capas de detección arregladas en la misma que contiene reactivos necesarios para determinar un analito (substancia sue se va a analizar) en una muestra de líquido o muestra líauida v una red sue cubre las capas de detección la cual es más grande que las capas de detección y la cual se fija a la capa de soporte. Además, la invención se refiere al uso de este portador de prueba de diagnóstico para la determinación de un analito en un líquido y un método para la determinación de un analito en una muestra de líquido con la ayuda de un portador de prueba de diagnóstico de conformidad con la invención.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las pruebas ligadas al portador así llamadas, frecuentemente se usan para la determinación analítica REF: 24906 cualitativa o cuantitativa de componentes de fluidos corporales en particular de la sangre. En estas los reactivos se presentan sobre o en capas apropiadas de un portador de prueba de sólido el cual se pone en contacto con la muestra. La reacción de la muestra de líquido y reactivos conduce a una señal detectable en particular a un cambio en color que puede ser analizado visualmente o con la ayuda de un instrumento, usualmente por fotometría de reflexión. Los portadores de prueba están frecuentemente en la forma de tiras de prueba las cuales se componen esencialmente de una capa de soporte alargada hecha de material plástico y capas de detección como zonas de prueba montadas en la misma. Sin embargo, los portadores de prueba también se conoce que están formados o conformados como placas cuadrangulares o rectangulares, pequeñas. Los portadores de prueba del tipo referido anteriormente se conocen por ejemplo del documento de Patente Alemana 21 18 455. En este documento los portadores de diagnóstico para la detección de analitos en líquidos se describen, los cuales están compuestos de una capa de soporte y al menos una capa de detección que contiene los rectivos de detección cuya superficie que no permanece contra la capa de soporte está provista con una capa de cubierta. La capa de cubierta puede estar compuesta de una red de mallado fino en la forma de un tejido o trama, estructura reticulada o velo. Las estructuras o tejidos de plástico se estable como «que son redes preferidas para lograr una humectación rápida de la capa de detección con el líquido de muestra y para evitar efectos cromatográficos de interferencia. Para detectar un analito en un líquido un portador de prueba de diagnóstico se sumerge en un líquido correspondiente preferiblemente orina. La capa de detección así se pone en contacto con un exceso muy grande de fluido que no se puede aceptar o absorber por el portador de prueba. Sin embargo, dependiendo de la duración de contacto de la cpa de detección con el líquido a ser examinado, se observan intensidades de color diferentes. Como una regla, tiempos de contacto más largos llevan a resultados más positivos. Por lo tanto, una determinación de analito cuantitativa, correcta/ no es posible de esta manera. Una causa frecuente de valores medidos falsos en el monitoreo o detección de diabetes, es decir, el control regular de la sangre de diabéticos por el contenido de glucosa, es por una parte un volumen de muestra inadecuado. Los portadores de prueba con el requerimiento de volumen lo más pequeño posible son, por lo tanto, el objeto de una variedad de proyectos o desarrollos comunes. Sin embargo, tales portadores de prueba deben no sólo producir valores de medición correctos con volúmenes de muestra muy pequeños de aproximadamente 3 µl , sino que los mismos también deben trabajar confiablemente con los volúmenes de muestra relativamente grandes de aproximadamente 15-20 µl y deben retener el líquido de muestra. Si el líquido se escapa del portador de prueba entonces pueden ocurrir problemas higiénicos, por ejemplo si se mide sangre extraña potencialmente infecciosa o si se pretende medir el portador de prueba por un aparato y exista entonces un peligro de contaminación del instrumento. Para la comprensión de la solicitud de patente este fin u objetivo todavía no ha sido logrado o alcanzado de una manera simple y satisfactoria.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Por lo tanto, el objeto de la presente invención es proporcionar un portador de prueba de diagnóstico para la determinación cuantitativa de analito en un líquido en el cual una cantidad no dosificada de líquido de muestra puede ser aplicado. Los volúmenes de muestra arriba de 3 µl deberán ser adecuados. No obstante, un exceso de líquido muestra no deberá conducir a resultados positivos falsos dependientes del tiempo. Además el líquido muestra en exceso no deberá causar problemas higiénicos y el portador de prueba deberá ser tan simple como sea posible de fabricar. Este objeto se logra por la invención caracterizada con mayor detalle en las reivindicaciones de la patente. El tema de la invención es principalmente un portador de prueba de diagnóstico con una capa de soporte y una capa de detección arregladas en el mismo que contienen el reactivo requerido para determinar el analito en una muestra de líquido. La capa de detección se cubre por una red la cual es más grande que la capa de detección y la cual se asegura o se fija sobre la capa de soporte fuera de la capa de detección. La red del portador de prueba de diagnóstico de conformidad con la invención es hidrofílico pero solo no es activo capilarmente. Una cubierta inerte hecha de material que es impermeable al líquido de muestra, se arregla sobre aquellas áreas de la red que se extienden más allá de las capas de detección de manera que un área permanece libre para la aplicación de muestra en la región de la red la cual se localiza arriba de una capa de detección. La invención además se refiere al uso de un portador de prueba de diagnóstico para determinar el analito en un líquido. Por lo tanto, un método para la determinación de analito en una muestra de líquido con la ayuda de un portador de prueba de diagnóstico también es un tema de la invención en el cual el líquido de muestra se aplica al lugar de aplicación de la muestra. La red conduce el líquido en exceso de la capa de detección hasta la región de la red que se extiende más allá de la capa de detección después de lo cual la capa de detección entonces puede ser observada para generación de señal. La generación de señal es una medida de la presencia o la cantidad de analito en la muestra a ser examinada. La red del portador de prueba de diagnóstico de conformidad con la invención deberá por sí misma no ser capilarmente activa o absorbente de modo que el líquido de muestra esté disponible tan completamente como sea posible para la capa de detección. Aquellas redes han probado ser adecuadas que hacen posible que el agua enjuague la '-ed por menos de 2 mm cuando ésta se sumerge verticalmente en agua. Las tramas o tejidos de msnofilamento retalladas gruesas las cuales son hidrofílicas, se usan preferiblemente como la red. Para esto el material del tejido puede ser por sí mismo hidrofílico o pu«ade hacerse hidrofílico, por ejepplo, por tratamiento con agente humectante. Particularmente el poliéster se usa de manera preferida como un material de red en este caso la red fabricada de este material entonces se usa después del tratamiento con agentes humectantes. El espesor de la red debe ser tal que la cubierta que permanece en la misma y la capa abajo de ella están a una distancia entre sí que el líquido remanente es chupado o absorbido sobre la capa de detección saturada y en las mallas llenas de la red por fuerza capilar en el área debajo de la cubierta y se conduce o arrastra del lugar de aplicación de la muestra. Como una regla, un espesor de red de 50 a 400 ?m es ventajoso para esto. La red debe tener una anchura de malla adecuadamente grande de modo que el líquido pueda pasar a través de la red sobre la capa de detección. La naturaleza de la red es tal que el líquido no se extiende horizontalmente en la red encima de la superficie de la red sino que él mismo fluye verticalmente a través de la red sobre la capa de detección. En un portador de prueba de diagnóstico de conformidad con la invención, los materiales que entran en consideración particular para la capa de soporte, son aquéllos que no absorben los líquidos a ser examinados. Estos son materiales no absorbentes así llamados, hojas delgadas de plástico hechas por ejemplo de poliestireno, cloruro de polivinilo, poliéster, policarbonato o poliamida «que son particularmente preferidas. Sin embargo, también es posible impregnar materiales absorbentes tales como madera, papel o cartón con agentes repelentes al agua o para cubrirlas o revestirlas con una película resistente al agua en este caso siliconas o grasas duras pueden usarse como agentes de impermeabilización y por ejemplo la nitrocelulosa o el acetato de celulosa pueden usarse como formadores de película. Hoja delgadas de metal o vidrio también son adecuadas como materiales de soporte adicionales. En contraste para una capa de detección es necesario usar materiales que sean capaces de absorber el líquido a ser examinado junto con los componentes contenidos en éste. Estos son materiales absorbentes así llamados tales como velos, paños o telas, telas de punto o reticuladas, membranas u otros materiales de plástico porosos o materiales esponjables tales como películas de dispersión o gelatina que pueden ser usadas como materiales de capa o cubierta. Los materiales que entran en consideración para la capa de detección deben, por supuesto, también ser capaces de transportar o contener los reactivos que son necesarios para la detección del analito a ser determinado. En el caso más simple todos los reactivos requeridos para la prueba de analito están sobre o en una capa. Sin embargo, También son concebibles casos para los cuales es más ventajoso dividir los reactivos entre varias capas de material absorbente o esponjable (hinchable) que luego son arregladas en la parte superior de unas a otras con sus caras o lados completos en contacto. El término "capa de detección" usado en lo siguiente, se pretende que abarque aquellos casos en los cuales los reactivos se localizan ya sea sólo en o sobre una capa o en dos o aún más capas arregladas como se describió anteriormente. Además, la capa de detección también puede contener una capa la cual es capaz de separar el plasma o suero de la sangre entera tal como por ejemplo un velo o capa delgada de fibra de vidrio como se conoce por ejemplo de la patente europea EP-B-0 045 476. Una o varias capas de separación pueden unirse en la parte superior de una o varias capas que transportan o contienen los reactivos de detección. Una estructura también se pretende que sea incluida por el término "capa de detección". Los materiales preferidos para la capa de detección son materiales de plástico porosos o de papel tales como membranas. De estas membranas porosas asimétricas, se prefieren en forma particular aquéllas que se arreglan ventajosamente tal que la muestra de líquido a ser examinado se aplique al lado de huecos o poros grandes de la membrana y el analito se determina a partir del lado de poros finos de la membrana. Se prefieren de manera muy especial las membranas de poliamida, difluoruro de polivinilideno, polietersulfona o polisulfona como materiales de membrana porosa. Las membranas de poliamida 66 y membranas de polisulfona asimétricas, hidrofilizadas, son en particular excelentemente adecuadas. Los reactivos para la determinación del analito a ser detectado, usualmente se introducen por impregnación en los materiales mencionados anteriormente o se aplican a un lado o cara por revestimiento. Cuando se revisten las membranas asimétricas, el lado de poros finos se reviste ventajosamente. Sin embargo, las películas abiertas así llamadas también entran en consideración para la capa de detección como se describe, por ejemplo, en la solicitud de patente EP-B-0 016 387. Para esto una dispersión acuosa de sólidos de plástico orgánico formadores de película se agregan como partículas finas orgánicas o inorgánicas insolubles y los reactivos requeridos para la reacción de detección se agregan adicionalmente. Los formadores o conformadores de película adecuados son preferiblemente plásticos orgánicos tales como esteres de polivinilo, acetatos de polivinilo, esteres poliacrílicos, ácido poli-metacrílico, poliacrilamidas, poliamidas, poliestireno, polímeros mezclados tales como de butadieno y estireno o de esteres de ácido maleico y acetato de vinilo u otros polímeros orgánicos naturales y sintéticos formadores de película así como mezclas de los mismos en la forma de dispersiones acuosas. Las dispersiones acuosas se pueden pintar sobre una base para formar una capa uniforme la cual produzca una película resistente al agua después del secado. Las películas en seco tienen un espesor de 10 a 500 µm preferiblemente de 30 a 200 µm. La película se puede usar con la base juntamente como un portador o se puede montar en otro portador para la reacción de detección. Aunque los reactivos requeridos para la reacción de detección se agregan normalmente a la dispersión usada para producir las películas abiertas, también puede ser ventajoso impregnar la película que se forma con los reactivos después de que ésta ha sido fabricada. También es posible preimpregnar los rellenadores con los reactivos. Que los reactivos se puedan usar para determinar un analito particular es conocido por una persona experta en la técnica. Esto no necesita ser elucidado aquí con mayor detalle. Un ejemplo adicional de una capa de detección preferida de conformidad con la invención es una capa de película como se describe en la solicitud de patente WO-A-92 15 879. Esta capa se produce a partir de una dispersión de la emulsión de un formador de película polimérica que contiene en forma adicional un pigmento, un agente entumecedor o agente de hinchamiento y un reactivo de detección en una dispersión homogénea. Son especilmente adecuados como formadores de película polimérica los esteres de polivinilo, acetatos de polivinilo, esteres poliacrílicos, ácido polimetacrílico, amidas de polivinilo, poliamidas y poliestireno. Además los polimerizados mezclados con homopolímeros también son adecuados tales como de butadieno, estireno o éster de ácido maleico. El dióxido de titanio es un pigmento particularmente adecuado para la película. El agente de hinchamiento o agente entumecedor usado deberá tener de manera particular buenas propiedades de hinchamiento, los copolímeros anhídridos de ácido maleico —metil vinil éter son particularmente recomendados. Se deja para una persona experta en la técnica cuáles reactivos se usan para determinar un analito particular. En un portador de prueba de diagnóstico de conformidad con la invención se prefiere de manera muy especial usar un campo de prueba como una capa de detección el cual se compone de dos capas. Este campo de prueba comprende una hoja transparente en la cual una primera y una segunda capa de película, se montan en la parte superior entre sí en este orden. Es importante que la primera capa localizada en la hoja transparente disperse o difunda la luz considerablemente menos en un estado húmedo que la segunda capa superpuesta. El lado no revestido de la hoja transparente se refiere como el lado o cara de detección y el lado o cara de la segunda capa que está opuesta al lado o cara con la cual la segunda capa queda en la primera, se refiere como la cara o lado de aplicación de la muestra. Las capas de película se produce a partir de dispersiones o emulsiones de formadores de película polimérica. Los formadores o conformadores de película de dispersión contienen partículas de polímero microscópicas las cuales son insolubles en el líquido portador (usualmente agua) y se dispersan finamente en el líquido portador. Si el líquido se remueve por evaporación durante la formación de la película entonces las partículas llegan a estar más cercanas y finamente tocadas o aproximadas entre sí. Las fuerzas importantes que ocurren en este proceso y el incremento en energía de la superficie que acompaña la formación de película resulta en las partículas que crecen en una capa de película substancialmente cerrada. Alternativamente, también es posible usar una emulsión del formador de película en la cual éste se disuelve en un solvente. El polímero disuelto se emulsifica en un líquido portador el cual es inmiscible con el solvente. Son particularmente adecuados como polímeros para tales formadores de película los esteres de polivinilo, acetatos de polivinilo, esteres poliacrílicos, ácido polimetacrílico, amidas de polivinilo, poliamidas y poliestireno. Además los polimerizados mezclados de homopolímeros también son adecuados tales como de butadieno, estireno o éster de ácido maleico. Las dos capas de película así llamadas se localizan en una hoja transparente en el campo de prueba. Para esto, aquéllas hojas delgadas de plástico entran en consideración, las cuales son impermeables al líquido. La hoja de policarbonato ha probado ser particularmente adecuada. Las dos capas de película se pueden producir a partir de compuestos de revestimiento que contienen los mismos formadores de película polimérica o éstas se pueden producir a partir de compuestos de revestimiento que contienen diferentes formadores de película polimérica. Mientras que la primera capa contiene un agente de hinchamiento y opcionalmente un rellenador de difusión de luz débil, la segunda capa requiere un agente de hinchamiento y en cualquier caso al menos un pigmento que difunde la luz fuertemente. Además la segunda capa también puede contener rellenadores no porosos así como también rellenadores porosos tales como diatomita en cantidades pequeñas sin llegar a ser permeable para los eritrocitos. Agregando un agente de hinchamiento que hincha bien (es decir, una substancia que incrementa su volumen cuando éste absorbe agua) uno debe no sólo obtener capas que puedan ser penetradas relativamente rápido por el líquido de muestra pero tiene buenas propiedades de separación de eritrocito y adicionalmente también de pigmento de la sangre a pesar de este efecto de apertura del agente de hinchamiento. Las propiedades de hinchamiento deberán ser tan buenas que para una prueba en la cual la velocidad de formación de color - tal como por ejemplo de una reacción de prueba de glucosa - es principalmente dependiente de la penetración del líquido de muestra a través de la capa, la reacción ópticamente detectable se mide después de un máximo de un minuto. Especialmente, los agentes de hinchamiento adecuados han probado ser el copolímero anhídrido de ácido maleico metil vinil éter, goma de xantan y copolímero de ácido maleico metil vinil éter. La diatomita también se señala como tierra diatomácea. Estos son dispositivos que se han formado de las estructuras básicas del ácido silícico de los tipos diato áceos que se minan en varios lugares. La diatomita que se usa en forma preferida tiene un diámetro de partícula promedio de 5 - 15 µm, estos valores se determinan con un granulómetro de láser de tipo 715 el cual se vende por la Pabisch Company, Munich, Alemania. La cantidad del pigmento que difunde la luz fuertemente en la segunda capa es al menos 25% en peso con relación a la capa doble lista para su uso, seca, del campo de prueba. Puesto que los rellenadores que difunden la luz débilmente y los pigmentos que difunden la luz fuertemente son esenciales para las propiedades ópticas de las capas de película, la primera y la segunda capa de película tienen rellenadores y pigmentos diferentes. La primera capa de película deberá contener ya sea no rellenadores o aquellos rellenadores cuyo índice de refracción es cercano al índice de refracción del agua. El dióxido de silicona, silicatos y silicatos de aluminio han probado ser particularmente adecuados para esto. Un silicato de aluminio y sodio con el nombre comercial Traspafill es particularmente preferido. De conformidad con la invención, la segunda capa deberá difundir la luz muy fuertemente. De manera ideal, el índice de refracción de los pigmentos en la segunda capa de película deberá ser al menos de 2.5. Por lo que el dióxido de titanio es usado preferiblemente. Las partículas con un diámetro promedio de 0.2 a 0.8 µm han comprobado ser particularmente ventajosos. Los tipos de dióxido de titanio fácilmente procesables en la modificación de anatasa se prefieren en forma muy especial. Los sistemas de reactivo para de detección de analitos particulares por formación de color son conocidos por la persona experta en la técnica. Es posible que todos los componentes del sistema de reactivo se localicen en una capa de película. Sin embargo, también es posible que los componentes del sistema de reactivo se dividan entre dos capas de película. El color que genera el sistema reactivo se localiza ventajosamente al menos parcialmente en la primera capa de película. La formación de color dentro del alcance de la presente invención no sólo se entiende como una transición de blanco a coloreado sino también como cualquier cambio de color, tales cambios de color por supuesto que son particularmente preferidos los cuales se asocian con el más grande cambio o substitución posible de la longitud de onda de absorción máxima (??Ív). Para optimizar el campo de prueba en el portador de prueba de diagnóstico de conformidad con la invención, se ha comprobado que es particularmente ventajoso cuando ambas capas de película no contienen un agente de formación de malla de hemolisis. Agentes neutrales, es decir agentes de red no cargados o sin carga se prefieren en forma particular para esto. De manera más particular se prefiere la N-octanoil-N-metil glucamida. Para producir un campo de prueba de un portador de prueba de diagnóstico de conformidad con la invención, las capas de película respectivas se producen cada una en forma sucesiva a partir de una dispersión homogénea de los componentes. Para esto, la hoja transparente se usa como una base para formar el compuesto de revestimiento para la primera capa de película. Después de que el compuesto de revestimiento para la primera capa de película se ha aplicado con un espesor de capa particular, las capa se seca. Después el compuesto de revestimiento para la segunda capa se aplica a esta capa también con un espesor de capa delgada y se seca. Después del secado el espesor de la primera y segunda capa de película deberá ser conjuntamente no más de 0.2 mm, preferiblemente no más de 0.12 mm particularmente en forma preferible no más de 0.08 mm. La segunda capa de película seca es en forma preferible aproximadamente de 2 a 5 veces más espesa que la primera. El portador de prueba de conformidad con la invención, puede tener una capa de detección. Sin embargo, también puede contener varias capas de detección arregladas juntas entre sí. En el caso de varias capas de detección éstas pueden ser las mismas o diferentes de modo que una y el mismo analito se puedan determinar en paralelo en varias capas de detección o analitos diferentes puedan ser detectados en cada caso en otra capa de detección. Sin embargo, también es posible que varias zonas de reacción espacialmente separadas se localicen juntas entre sí en una capa de detección de modo que en este caso también ya sea el mismo analito se pueda detectar varias veces o diferentes analitos se puedan detectar en paralelo en la misma capa de detección. En el último caso, el material de la capa es el mismo aparte de los reactivos para la determinación del analito. Reactivos diferentes se localizan en zonas de reacción diferentes. Las zonas de reacción diferentes pueden estar presentes cara a cara y tocarse entre sí o ellas pueden estar separadas por áreas de intervención las cuales no forman una señal con el analito. En el portador de prueba de diagnóstico de conformidad con la invención, la red que cubre la capa de detección es más grande que la capa de detección subyacente. La parte de la red que se extiende más allá de la capa de detección, es decir, aquella parte de la red que no está en contacto con la capa de detección se fija directamente o indirectamente por separadores a la capa de soporte fuera de la capa de detección. La fijación o unión se puede lograr por métodos conocidos por una persona experta en el área de la tecnología del portador de prueba. Por ejemplo, se puede unir o pegar por adhesivo de fraguado en caliente o endureciendo el adhesivo de fraguado en frío. En este caso un punto o curado configurado es ventajoso puesto que el transporte del líquido activo capilarmente, puede ocurrir particularmente bien en este caso. Tiras de adhesivo de doble lado o cara también han probado ser ventajosas. Sin embargo, en todos los casos es importante que la fijación o unión de la red a la capa de soporte sea tal que un transporte de líquido activo capilarmente es posible a partir de la capa de detección en aquella parte de la red que se fija o une a la capa de soporte. Este transporte de líquido activo capilar debe ser posible en particular cuando la capa de detección se satura con líquido. Cintas adhesivas hechas de caucho natural o sintético han probado ser particularmente adecuadas para el procedimiento. Es muy especialmente ventajoso cuando el agente que sirve para fijar o unir la red a la capa de soporte tiene aproximadamente el mismo espesor que la(s) capa(s) de detección. Luego sirve más o menos como un separador para mantener la red total o completa en un plano continuo también afuera del área de la(s) capa(s) de detección. Si el portador de prueba para diagnóstico de conformidad con la invención contiene varias capas de detección juntas entre sí, entonces una red puede cubrir todas las capas de detección o varias redes pueden ser usadas. Para determinar el analito a ser detectado en el líquido de muestra, la capa de detección, y al menos las zonas de reacción, es decir, las áreas de la(s) capa(s) de detección que llevan o contienen reactivo las cuales se pueden observar y medir con respecto a la formación de señal, son visibles a través de la capa de soporte en el portador de prueba de diagnóstico de conformidad con la invención. Esto se puede lograr por una capa de soporte transparente. Sin embargo, también es posible que la capa de soporte tenga una perforación que se cubra o revista por la capa de detección o las capas de detección. La capa de detección o las capas de detección y al menos las zonas de reacción de las capas de detección están entonces visibles a través de la perforación. En una modalidad preferida del portador de prueba de diagnóstico de conformidad con la invención, existe un hueco o cavidad en la capa de soporte abajo de una capa de detección a través de la cual la capa de detección o una zona de reacción puede ser observada. El hueco o cavidad tiene un diámetro algo más pequeño que la dimensión linear más pequeña de la capa de detección de modo que la capa de detección afuera de la cavidad o hueco se une con la capa de soporte y puede fijarse o adherirse ahí. Las tiras de adhesivo de doble cara o lado localizadas junto a ambos lados o caras de la capa de detección ventajosamente la fijan a la red yacente o tendida encima de la capa de detección y se fija o adhiere adecuadamente a la capa de soporte. Sin embargo, la capa de detección por sí misma se fija o adhiere también de manera preferible a la capa de soporte por medio de una cinta de adhesivo delgada. Sin embargo, varias zonas de reacción de una capa de detección también pueden ser visibles a través de un agujero o cavidad. La perforación de un portador de prueba de diagnóstico de conformidad con la invención, se puede componer de dos o varios agujeros o huecos que se pueden usar para determinar el analito (uno o varios analitos). Varias capas de detección se pueden arreglar encima de los huecos o cavidades o sólo una capa de detección con varias zonas de reacción de modo que una capa de detección o una zona de reacción se puede observar a través del hueco o agujero en cada caso. También es posible que varias zonas de reacción se puedan observar a través de un hueco o agujero. Una cubierta inerte hecha de impermeable de muestras, como una regla material impermeable al agua y no absorbente se coloca sobre la red del portador de prueba de diagnóstico de la invención de tal forma que la región de la red fuera de la capa de detección se cubra. Idealmente la cubierta también sobresale un poco más allá de la región de la capa de detección. Sin embargo, en cualquier caso una parte considerable de la red que cubre la capa de detección permanece libre. Esta parte libre de la red es señalada lugar de aplicación de la muestra.

Las hojas delgadas de plástico han probado ser particularmente ventajosas como una cubierta. Si la cubierta y la red tiene diferentes colores, por ejemplo, blanco y amarillo o blanco y rojo, es posible de esta forma marcar el lugar muy bien en donde el líquido de muestra a ser examinado deberá ser aplicado. Con por ejemplo una o varias flechas impresas en la cubierta, también se puede hacer claro en que dirección, es decir, con que extremo o borde un portador de prueba para diagnóstico de conformidad con la invención, deberá ser colocado o insertado en un instrumento de medición. Un lugar de aplicación de la muestra se puede lograr de manera particularmente simple por una cubierta con la ayuda de dos hojas delgadas de plástico semejantes a la cinta que dejan una zona semejante a la cinta de la red que cubre la capa de detección libre. Si dos o varios lugares de aplicación de la muestra se proporcionan, tres o más hojas delgadas de plástico semejantes a una cinta tienen que ser usadas. Las hojas delgadas usadas para cubrir se fijan o adhieren a la red y opcionalmente a la capa de soporte. Los adhesivos fundidos en caliente que son por ejemplo aplicados como puntos o manchas o como una trama a la capa de soporte o a la parte inferior de la cubierta, son adecuados para una fijación o cintas de adhesivo si las hojas no son entre sí adhesivas'. Sin embargo, en cualquier caso se debe tener cuidado que una abertura capilar formada por la red permanezca bajo la cubierta en la cual el líquido de muestra en exceso se pueda absorber desde una capa de detección saturada con líquido. El lugar de aplicación de la muestra es preferiblemente arriba de la perforación en la capa de soporte a través de la cual se puede observar la formación de señal en la capa de detección. Para poner en práctica un método para la determinación de analito en una muestra de líquido con la ayuda de un portador de prueba para diagnóstico de conformidad con la invención, el líquido de muestra se aplica a la cara o lado de la red que se enfrenta o soporta lejos de la capa de detección, idealmente tanto que el líquido que pasa a través de la red satura completamente la capa de detección. Los fluidos corporales tales como la sangre, plasma, suero, orina, saliva, etc., entran en consideración particular como el líquido de muestra. La sangre o líquidos derivados de la sangre tales como plasma o suero así como también orina son líquidos de muestra particularmente preferidos. El líquido en exceso se conduce por la red a partir de la capa de detección hasta la región de la red la cual se extiende más allá de la capa de detección. Entonces una señal puede detectarse en la capa de detección cuando el analito a ser determinado está presente. Tal señal es preferiblemente un cambio de color lo que se entiende como una generación de color, pérdida de color así como también transición de color. La intensidad del cambio de color es una medición de la cantidad de analito en la muestra de líquido examinada. Se puede evaluar visualmente o cuantitativamente con la ayuda de un instrumento, usualmente por fotometría de reflexión. Si muy poco líquido alcanza la capa de detección, es decir, menos de lo que es necesario para saturar la capa, regiones de la capa de detección permanecen secas lo cual se puede observar desde arriba y abajo porque el líquido sólo puede alcanzar la capa de detección verticalmente a través de la red y no existe dispersión horizontal de líquido sobre la superficie de la red. Puesto que si el analito está presente, solamente se genera una señal en la región completamente humectada o mojada de la capa de detección, una generación de señal no homogénea se puede ver visualmente o por un instrumento a través de la red así como también a través de la capa de soporte. Esto es una indicación clara para la persona que realiza la examinación que muy poco líquido de muestra se ha usado y por lo tanto el resultado de la examinación o examen puede ser falso. Aún si el analito no está presente en la muestra, la medición visual o reflectométrica de varias regiones parciales de la capa de detección puede establecer por ejemplo que sólo una parte de la capa de detección se humedece y así muy poco líquido de muestra ha sido aplicado. Además para marcar el lugar de aplicación de la muestra, una cubierta también soporta las fuerzas capilares que conducen el líquido en exceso lejos de la capa de detección. Además la cubierta también protege el líquido en exceso conducido lejos de la capa de detección a partir del contacto externo e impide que el líquido se choree o escurra fácilmente del portador de prueba. Una ventaja importante del portador de prueba para diagnóstico de conformidad con la invención, es que no es necesario aplicar un volumen predeterminado de un líquido de muestra al portador de prueba. El líquido en exceso se conduce lejos de la capa de detección como ya se mencionó/ por la red que sobresale más allá de la capa de detección. Puesto que el líquido en exceso se conduce lejos de la capa de detección, los aspectos higiénicos también se toman en consideración. Una chorreadura de líquido del portador de prueba o contacto del líquido por ejemplo, con partes de un instrumento en el cual se coloca el portador de prueba para la evaluación instrumental, se evita fácilmente. Esto es un aspecto muy importante en la examinación de sangre o muestras derivadas de la sangre tal como plasma o suero. El tamaño de la región de la red que se extiende más allá de la capa de detección (la parte de la red que se extiende más allá de la capa de detección) depende del volumen de la muestra más grande esperado en la práctica de manera que el líquido que está efectivamente en exceso también pueda ser conducido lejos de la capa de detección. De esta manera la intensidad de la señal que ocurre cuando un analito se presenta, es independiente de la cantidad y la duración de contacto del líquido de muestra con la capa de detección. El color que se forma después de la terminación de la reacción de detección, usualmente dentro de unos pocos segundos hasta unos pocos minutos, así permanece sin cambios para la medición. El mismo se determina simplemente por la estabilidad del color que genera el sistema pero no, por ejemplo, por el analito que se difunde atrás del líquido en exceso en la capa de detección. También se evitan resultados positivos falsos y llega a ser posible una determinación de analito cuantitativa. La cobertura de las partes de la red y así la marcación del lugar o sitio de aplicación de la muestra, aseguran que el líquido sólo pueda ser colocado en el sitio óptimo para él sobre la capa de detección. En combinación con una capa de detección la cual sólo absorbe una pequeña cantidad de líquido y no obstante asegura una generación de señal intensiva, se asegura que las determinaciones del analito confiables sean posibles aún con volúmenes de muestra muy pequeños. Se puede fabricar a muy bajo precio debido a que el portador de prueba de conformidad con la invención se compone sólo de únicamente unos pocos componentes que se pueden ensamblar o conjuntar simplemente y en forma rápida.

Las modalidades preferidas del portador de prueba de diagnóstico de conformidad con la invención, se muestran en las Figuras 1-23. La Figura 1 muestra una vista en perspectiva de un portador de prueba de diagnóstico de conformidad con la invención, con un sitio o lugar de aplicación de la muestra. La Figura 2 muestra una vista en planta de la parte de abajo de un portador de prueba para diagnóstico de la Figura 1 de conformidad con la invención, con una perforación redonda bajo la capa de detección. La Figura 3 muestra una sección transversal a lo largo de A7A a través de un portador de prueba de diagnóstico de conformidad con la invención, de acuerdo con la Figura 1. La Figura 4 muestra un alargamiento de una parte de la sección transversal de la Figura 3. La Figura 5 muestra una vista en perspectiva de un portador de prueba para diagnóstico de conformidad con la invención, con dos sitios o lugares de aplicación de la muestra. La Figura 6 muestra una vista en planta de la parte de abajo de un portador de prueba para diagnóstico de la Figura 5, de conformidad con la invención, con una perforación que comprende un hueco o cavidad redonda y rectangular bajo dos capas de detección separadas. La Figura 7 muestra una sección transversal a lo largo de A-A a través de un portador de prueba para diagnóstico de la Figura 5 de conformidad con la invención. La Figura 8 muestra una vista en perspectiva de un portador de prueba de diagnóstico de conformidad con la invención, con un sitio o lugar de aplicación de la muestra extragrande. La Figura 9 muestra una vista en planta de la parte de abajo de un portador de prueba para diagnóstico de la Figura 8, de conformidad con la invención, con una perforación que comprende un agujero o cavidad redondo y rectangular bajo una capa de detección extragrande. La Figura 10 muestra una sección transversal a lo largo de A-A a través de un portador de prueba de diagnóstico de la Figura 8 de conformidad con la invención. La Figura 11 muestra una vista en perspectiva de un portador de prueba de diagnóstico de conformidad con la invención, con un sitio o lugar de aplicación de la muestra sobre una de las dos capas de detección. La Figura 12 muestra una vista en planta de la parte de abajo de un portador de prueba para diagnóstico de la Figura 11 de conformidad con la invención, con una perforación que comprende un agujero o cavidad redondo y rectangular bajo dos capas de detección separadas. La Figura 13 muestra una sección transversal a lo largo de A-A a través de un portador de prueba de diagnóstico de la Figura 11 de conformidad con la invención. La Figura 14 muestra una vista en pespectiva de un portador de prueba de diagnóstico de conformidad con la invención, con un sitio o lugar de aplicación de la muestra extragrande. La Figura 15 muestra una vista en planta de la parte de abajo de un portador de prueba para diagnóstico de la Figura 14 de conformidad con la invención, con una perforación que comprende un agujero o cavidad extragrande bajo una capa de detección con dos zonas de reacción adyacentes. La Figura 16 muestra una sección transversal a lo largo de A-A a través de un portador de prueba de diagnóstico de la Figura 14 de conformidad con la invención.

La Figura 17 muestra una vista en perspectiva de un portador de prueba de diagnóstico de conformidad con la invención, ;.on un sitio o lugar de aplicación de la muestra arriba de una de las dos zonas de reacción. La Figura 18 muestra una vista en planta de la parte de abajo de un portador de prueba para diagnóstico de la Figura 17 de conformidad con la invención, con una perforación que comprende un agujero o cavidad rectangular extragrande bajo una capa de detección con dos zonas de reacción adyacentes. La Figura 19 muestra una sección transversal a lo largo de A-A a través de un portador de prueba de diagnóstico de la Figura 17 de conformidad con la invención. Las Figuras 20-23 muestran «curvas de «calibración o de comprobación 1 - 4, las cuales se generan como se describe en el ejemplo 2. Los números de referencia usados en las Figuras, tienen los significados siguientes. 1 portador de prueba de diagnóstico. 2 capa de soporte 3 capa de detección 4 red 5 cubierta 6 región de la red que se extiende más allá de la capa de detección. 7 sitio o lugar de aplicación de la muestra 8 perforación 9 zona de reacción 10 separador 11 intervalo o abertura activa capilarmente 12 líquido de muestra 13 agujero o cavidad de posicionamiento 14 fijación de la cinta adhesiva para la capa de detección.

El portador de prueba de diagnóstico (1 ) de conformidad con la invención mostrado en perspectiva en la Figura 1 y en sección transversal en la Figura 3, está en la forma de una tira de prueba. En una capa de soporte (2) se localiza una capa de detección (3) la cual se cubre por un red más grande (4). La red (4) se fija o adhiere a la capa de soporte (2) junto a la capa de detección (3) por medio de separadores (10). Estos separadores pueden ser áreas de adhesivo de producto de fusión o cintas adhesivas de doble cara o lado que se fijan a la red (4) sobre la capa de soporte (2). Idealmente los separadores (10) tienen aproximadamente el mismo espesor que la capa de detección (3). Las capas que sirven como una(s) cubierta (s) se fijan a la capa de soporte (2) y la red (4). Las mismas se arreglan de tal modo que cubren la región de la red (4) que se extiende más allá de la capa de detección (3). Las cubiertas (5) también se extienden ligeramente más allá de la capa de detección (3). Sin embargo, las mismas dejan más de aquella parte de la red (4) libre la cual cubre la capa de detección (3). Esta área representa el sitio o lugar de aplicación de la muestra (7). El líquido de muestra (12) a ser examinado se aplica a esta área. El agujero o cavidad de posicionamiento (13) hace posible que la banda de prueba se conserve en una posición predeterminada exacta del aparato en el caso de medición por un aparato tal como por fotometría de reflexión. Esto se puede lograr, por ejemplo, por un perno que se extiende hasta el agujero o cavidad de posicionamiento (13) y así retener o sujetar el portador de prueba (1) en una posición predeterminada. La cubierta de izquierda (5) contiene flechas impresas que muestran al usuario qué extremo o borde del portador de prueba (1 ) deberá ser colocado o insertado en un instrumento de medición.

La Figura 4 muestra una sección transversal alargada a través de un portador de prueba de diagnóstico de conformidad con la invención como se muestra en las Figuras 1 y 3. Esta Figura se -pretende que aclare cómo un método para la determinación de un analito en una muestra de líquido procede. Para una determinación, el líquido de muestra se aplica al sitio o lugar de aplicación de la muestra (7) de la red (4). El líquido penetra verticalmente a través de la red (4) hasta la capa de detección (3) la cual a su vez se fija o adhiere con una cinta adhesiva (14) de doble cara o lado, a la capa de soporte (2). La fijación de la cinta adhesiva (14) contiene un agujero o cavidad que corresponde a la perforación (8) de la capa de soporte (2) y la cual también se une exactamente sobre esta perforación (8). Si suficiente líquido de muestra se ha aplicado, este líquido se dispersa en la capa de detección (3) sobre la zona de reacción completa (9). Si el volumen de líquido es muy pequeño la capa de detección (3) aún puede absorber a sequedad la red superpuesta (4) puesto que la red (4) no es por sí misma activa capilarmente. En el caso de medio o agente a grandes volúmenes de líquido, los espacios vacíos de la red (4) sobre la capa de detección (3) se llenan primero y subsecuentemente los vacíos capilares bajo las cubiertas (5). Para que estos vacíos o espacios capilares funcionen apropiadamente es necesario que las cubiertas (5) se superpongan a al menos ligeramente el área de la capa de detección (3) bajo la red (4). La zona de reacción (9) de la capa de detección (3) se puede observar a través de la perforación (8). Para este aspecto una vista en planta de la parte de abajo del portador de de diagnóstico de conformidad con las Figuras 1, 3 y 4 es mostrada en la Figura 2. Si el analito está presente en el líquido de muestra aplicado, la zona de reacción (9) cambiará. Una señal se forma, por ejemplo un cambio de color, la intensidad de ésta es una medición de la cantidad de analito en el líquido de muestra. El portador de prueba de diagnóstico de conformidad con la invención mostrado en las Figuras 5 a 7, es uno con dos capas de detección (3) las cuales son accesibles para el líquido de muestra (12) vía dos sitios o lugares de aplicación de la muestra (7) que se localizan arriba de éstas. Los sitios o lugares de aplicación de la muestra (7) se forman por .tres cubiertas ( 5 ) semejantes a tiras que cubren las áreas de la red que se extiende más allá de las capas de detección (3). En el ejemplo mostrado t una red continua (4) ha sido usada. Sin embargo, también es posible usar dos redes separadas (4) con una barrera de líquido que interviene tal como por ejemplo una cinta adhesiva o de adhesivo o una tira de adhesivo de fusión en caliente. Una perforación (8) se localiza en la capa de soporte ( 2 ) del portador de prueba ( 1 ) que comprende dos agujeros u orificios de los cuales cada uno permite que una zona de reacción (9) de una de las dos capas de detección (3) sea observada. Tal portador de prueba (1) es por ejemplo adecuado para la determinación simultánea de dos analitos diferentes. En este caso, la separación espacial de las capas de detección (3) es ventajosa si los reactivos o los productos de reacción pueden interferir entre sí. El portador de prueba de diagnóstico (1 ) de las Figuras 8 a 10 de conformidad con la invención, tiene un sitio o lugar de aplicación de la muestra (7) extragrande sobre una capa de detección (3) la cual se puede observar a través de una perforación (8) que comprende dos agujeros o cavidades. Las zonas de reacción diferentes (9) pueden ser arregladas, por ejemplo, arriba de los dos agujeros o cavidades que contienen reactivos para analitos diferentes. Por lo tanto dos analitos se pueden determinar de una muestra. Sin embargo, las dos zonas de reacción también se pueden usar para determinar el mismo analito con sensibilidades diferentes. Un portador de prueba de diagnóstico (1) de conformidad con la invención se muestra en las Figuras 11 - 13, en el cual dos capas de detección (3) se localizan arriba de una perforación (8) que comprende dos agujeros o cavidades. Una capa de detección (3) se localiza arriba de cada agujero o cavidad de la perforación (8). El sitio o lugar de aplicación de la muestra (7) en este caso, se localiza sólo arriba de una de las dos capas de detección (3). Así el líquido de muestra (12) primero pasa a la capa de detección (3) localizada debajo del sitio o lugar de aplicación de la muestra (7) antes que por medio de fuerzas capilares en el área de la red (4) abajo de la cubierta de derecha (5), el líquido en exceso también pasa hasta la capa de detección (3) derecha la cual se puede observar a través del agujero o cavidad rectangular en la hoja de soporte (2). Este portador de prueba es por ejemplo adecuado para la determinación de un analito con dos capas de detección (3) de sensibilidades diferentes. Ventajosamente un campo universal menos sensible se localiza directamente abajo del sitio o lugar de aplicación de la muestra y un campo adicional elevadamente sensible se localiza junto a éste. Este portador de prueba hace posible una medición con el campo universal en el caso de pequeños volúmenes de muestra y una medición mejorada con ambos campos en el caso de grandes volúmenes de muestra. El portador de prueba ( 1 ) de conformidad con las Figuras 14 - 16, tiene un sitio o lugar de aplicación de la muestra (7) extragrande sobre una capa de detección (3) que transporta o contiene dos zonas de reacción (9) las cuales están directamente adyacentes entre sí. Estas dos zonas de reacción son visibles desde la parte de abajo de la capa del portador (2) a través de la perforación (8) la cual en este caso sólo se compone de un agujero o cavidad rectangular sencillo o único. El líquido de muestra (12) que se aplica centralmente al sitio o lugar de aplicación de la muestra (7) penetra a través de la red (4) a la capa de detección (3) y alcanza ambas zonas de reacción (9) simultáneamente. Este portador de prueba puede ser usado por ejemplo para determinar dos analitos diferentes de una muestra.

El portador de prueba (1) que se muestra en las Figuras 17 - 19 corresponde esencialmente al portador de prueba de conformidad con las Figuras 14 - 16. Sin embargo, el sitio o lugar de aplicación de la muestra (7) se localiza únicamente arriba de una de las dos zonas de reacción (9). La zona de reacción de derecha (9) se protege de la aplicación directa del líquido de muestra (12) por la cubierta de derecha (5). El líquido de muestra (12) solamente puede alcanzar esto vía fuerzas capilares dentro del área de la red (4) que se localiza debajo de la cubierta de derecha. La invención se explicará con mayor detalle por los ejemplos siguientes.

Ejemplo 1 Producción de un portador de prueba de diagnóstico de conformidad con la invención para la determinación de glucosa Un portador de prueba de conformidad con la Figura 1 se produce por los siguientes pasos de trabajo: Una cinta adhesiva de doble lado o cara de 5 mm de ancho (soporte de poliéster y adhesivo de caucho sintético) se monta en una capa de soporte de poliéster que contiene dióxido de titanio. Este compuesto se perfora conjuntamente con una distancia de 6 mm entre los agujeros o cavidades para producir los agujeros o cavidades de medición. Después el papel protector del adhesivo de doble lado o cara se remueve. Una capa- de detección compuesta de 2 capas de película se produce como sigue: A. Los siguientes componentes se agregan conjuntamente en la composición siguiente a un vaso para análisis como substancias puras o en la forma de soluciones madres o concentradas y se mezclan con agitación: Agua: 820 .0 g monohidrato de ácido cítrico: 2 .5 g dihidrato de cloruro de calcio: 0 . 5 g hidróxido de sodio: 1 . 4 g goma de xantano : 3 .4 g cloruro de tetraetila onio: 2 . 0 g N-octanoil-N-metil-glucamida: 2 . 1 g polivinilpirrolidona (PM 25000): 3 . 5 g Transpafill (silicato de sodio y aluminio) 62 . 1 g dispersión de polivinilpropionato (50% en peso de agua): 60.8 g cloruro de bis-(2-hidroxietil) -(4-hidroxi-minociclohexa-2,5-dienilidin)-amonio: 1.2 g sal hexasódica de ácido 2, 18-fosforo-molíbdico: 16.1 g pirroloquinolin—quinona: 32 g rec. de glucosa deshidrogenasa de Acinetobacter 1.7 MU calcoaceticus, EC 1.1.99.17: (2.4 g) 1 -hexanol: 1.6 g 1 -metoxi-2-propanol: 20.4 g La copposición total se ajusta con NaOH a un pH de casi 6 y luego se aplica con un peso por área de 89 g/qm sobre una hoja o capa de policarbonato de 125 µ de espesor y se seca. Los componentes siguientes se agregan conjuntamente en la composición siguiente a un vaso para análisis como substancias puras o en la forma de soluciones madres o concentradas y se mezclan por agitación: agua: 579.7 g hidróxido de sodio: 3.4 g Gantrez R (copolímero de ácido maleico-metil vinil éter) : 13.8 g N-octanoil-N-metil-glucamida: 3.6 g cloruro de tetraetilamonio: 9.7 g polivinilpirrolidona ( PM 25000): 20.2 g dióxido de titanio: 177.1 g diatomita: 55.3 g dispersión de polivinilpropionato (50% en peso de agua): 70.6 g sal hexasódica de ácido 2 ,18-fosforo- molíbdico : 44.3 g hexacianoferrato de potasio (III): 0.3 g 1 -hexanol: 1.6 g 1 -metoxi-2-propanol: 20.4 g La composición total se ajusta con NaOH a un pH de casi 6 y luego se aplica con un peso por área de 104 g/qm sobre una hoja o capa de policarbonato como se describió en A. y se seca. Una tira de 5 mm de ancho de la capa de detección producida de esta forma, se fija exactamente y se pega sobre la capa de soporte con su lado o cara de hoja sobre la cinta adhesiva de doble cara o lado perforada. Las cintas adhesivas de doble cara o lado como separadores (soporte de PVC y adhesivo de caucho natural) se pegan sobre la hoja de soporte en ambos lados y directamente adyacentes a la capa de detección. En el presente ejemplo un separador es de 6 mm y el otro es de 9 mm de ancho. Posteriormente se remueve la hoja protectora de las dos cintas adhesivas de doble cara o lado. Una tela o tejido de poliéster mallado, burda o tosca, de monofilamento amarillo Scrynel PE 280 HC ("Ziircher Beuteltuchfabrik, RÜschlikon, Suiza) impregnada con un agente humectante, se coloca en esta estructura de compuesto y se pega por presión. Dos cintas adhesivas de un solo lado o cara (soporte de PVC y adhesivo de caucho natural) se pegan sobre la red amarilla que cubre de tal modo que los separadores se cubren completamente y que existe todavía al menos un ligera sobreposición con la zona de reacción. Esto completa el material de la cinta. El material de la cinta se corta en portadores de prueba de 6 mm de tal modo que el agujero o cavidad de medición está en la mitad del portador de prueba.

Ejemplo 2 Independencia del volumen de los portadores de prueba de conformidad con la invención Los portadores de prueba del ejemplo 1 se pueden medir con un fotómetro de reflexión. Los valores de reflectancia que son una medida de la intensidad del color se pueden convertir en concentraciones de glucosa cuando una curva de calibración se obtiene. Si el término "reflectancias relativas" se usa, éste se refiere a las reflectancias sobre el portador de prueba. A. Curvas de calibración se establecen midiendo un gran número de muestras de sangre venosa con diferentes concentraciones de glucosa. Los valores de reflectancia y las concentraciones de glucosa de estas muestras de sangre venosa determinadas con un método de referencia se pueden usar para establecer una curva de calibración. En la variante de calibración 1, 10 µl de sangre venosa se aplican a portadores de prueba de conformidad con el ejemplo 1 y las refl«actancias se miden después de 21 segundos. La curva de calibración 1 (Figura 20) se determina por un cálculo de regresión de las reflectancias promedio de 10 portadores de prueba y los valores de referencia de las muestras de sangre. En la variante de calibración 2, 10 µl de sangre venosa también se aplicaron a los portadores de prueba de conformidad con el ejemplo 1 y las reflectancias se midieron después de 30 segundos. La curva de calibración 2 (Figura 21 ) se determinó por un cálculo de regresión de las reflectancias promedio de 10 portadores de prueba y los valores de referencia de las muestras de sangre. En la variante de calibración 3, 10 µl de sangre venosa también se aplicaron a portadores de prueba de conformidad con el ejemplo 1 y las reflectancias se midieron a intervalos de 3 seg. Tan pronto como las diferencias en reflectancia fueron dos veces sucesivamente menos de 0.3, las medición se terminó y el valor de reflectancia se uso para la evaluación. La curva de calibración 3 (Figura 22) se determinó por un cálculo de regresión de las reflectancias promedio de 10 portadores de prueba y los valores de referencia de las muestras de sangre. En la variante de calibración 4, 10 µl de sangre venosa también se aplicaron a los portadores de prueba de conformidad con el ejemplo 1 y las reflectancias se midieron a intervalos de 3 seg. Tan pronto como las diferencias en reflectancia fueron dos veces sucesivamente menores que 0.9, la medición se terminó y el valor de reflectancia se uso para la evaluación. La curva de calibración 4 (Figura 23) se determinó por un cálculo de regresión de las reflectancias promedio de 10 portadores de prueba y los valores de referencia de las muestras de sangre. En el caso de los volúmenes diferentes de la variante de medición 1 de sangre venosa, se aplicaron a portadores de prueba de conformidad con el ejemplo 1 y las reflectancias se midieron después de 21 seg. Las reflectancias individuales se convirtieron en concentraciones de glucosa usando la curva de calibración correspondiente de acuerdo con la Figura 20. La desviación de exactitud se determinó a partir de las concentraciones promedio de 10 portadores de prueba y los valores de referencia de las muestras de sangre y se muestra en la Tabla 1. En el caso de los volúmenes diferentes de la variante de medición 2 de sangre venosa también se aplicaron a los portadores de prueba de conformidad con el ejemplo 1 y las reflectancias se midieron después de 30 seg. Las reflectancias individuales se convirtieron en concentraciones de glucosa usando la curva de calibración correspondiente de acuerdo con la Figura 21. La desviación de exactitud se determinó de las concentraciones promedio de 10 portadores de prueba y los valores de referencia de las muestras de sangre y la misma se muestra en la Tabla 2. En el caso de los volúmenes diferentes de la variante de medición 3 de sangre venosa, también se aplicaron a los portadores de prueba de conformidad con el ejemplo 1 y las reflectancias se midieron a intervalos de 3 seg. Tanto pronto como las diferencias en reflectancia fueron dos veces sucesivamente menores que 0.3, la medición se terminó y el valor de reflectancia se uso para la evaluación. Las reflectancias individuales se convirtieron en concentraciones de glucosa usando la curva de calibración correspondiente de acuerdo con la Figura 22. La desviación de exactitud se determinó de las concentraciones promedio de 10 portadores de prueba y los valores de referencia de las muestras de sangre y la misma se muestra en la Tabla 3. En el caso de los volúmenes diferentes de la variante de medición 4 de sangre venosa, también se aplicaron a portadores de prueba de conformidad con el ejemplo 1 y las reflectancias se midieron a intervalos ¿.e 3 seg. Tan pronto como las diferencias en reflectancia fueron dos veces sucesivamente menores que 0.9, la medición se terminó y el valor de reflectancia se uso para la evaluación. Las reflectancias individuales se convirtieron en concentraciones de glucosa usando la curva de calibración correspondiente de acuerdo con la Figura 23. La desviación de exactitud se determinó a partir de las concentraciones promedio de 10 portadores de prueba y los valores de referencia de las muestras de sangre y la misma se muestra en la Tabla 4.

Tabla 1 : Tolerancia de volumen de la tira de prueba en la variante de medición 1 Tabla 2 : Tolerancia de volumen de la tira de prueba en la variante de medición 2 Tabla 3 : Tolerancia de volumen de la tira de prueba en la variante de medición 3 Tabla 4: Tolerancia de volumen de la tira de prueba en la variante de medición 4 C. Como se puede observar a partir de las tablas, los portadores de prueba de conformidad con la invención son ampliamente independientes del volumen.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro a partir de la presente descripción de la invención.

Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes

Claims (14)

REIVINDICACIONES

1. Un portador de prueba de diagnóstico caracterizado porque comprende una capa de soporte con una capa de detección arreglada en la misma que contiene los reactivos requeridos para determinar el analito en una muestra de líquido y una red que cubre la capa de detección la cual es más grande que la capa de detección y la cual se fija a la capa de soporte, en donde la red es hidrofílica pero no activa capilarmente sobre sí misma y una cubierta inerte hecha de material impermeable para muestras se arregla sobre las áreas de la red que se extienden más allá de la capa de detección de manera que un sitio o lugar de aplicación de la muestra permanece libre en la región de la red que cubre la capa de detección y la red produce un espacio o intersticio activo capilarmente entre la cubierta y la capa de detección así como también entre la cubierta y la capa de soporte o entre la cubierta y los separadores sobre la capa de soporte.

2. El portador de prueba de diagnóstico de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque varias capas de detección se arreglan juntas entre sí sobre la capa de soporte.

3. El portador de prueba de diagnóstico de conformidad con las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque la capa de soporte se perfora y la(s) capa(s) de detección se arregla(n) sobre la perforación.

' 4. El portador de prueba de diagnóstico de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el sitio o lugar de aplicación de la muestra se localiza sobre la perforación de la capa de soporte.

5. El portador de prueba para diagnóstico de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el sitio o lugar de aplicación de la muestra no se localiza sobre la perforación de la capa de soporte.

6. El portador de prueba para diagnóstico de conformidad con una de las reivindicaciones previas, caracterizado porque la capa de soporte contiene varios agujeros o cavidades como la perforación sobre la cual se arreglan una o varias capas de detección.

7. El portador de prueba de diagnsotico de conformidad con una de las reivindicaciones 2-5, caracterizado porque la capa de soporte contiene varios agujeros o cavidades como la perforación sobre cada una de las cuales se localizan diferentes capas de detección.

8. El portador de prueba de diagnóstico de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque la capa de soporte contiene un agujero o cavidad sobre la cual está arreglada una capa de detección que contiene varias zonas de reacción adyacentes.

9. El portador de prueba de diagnóstico de conformidad con una de las reivindicaciones 7 u 8, caracterizado porque un sitio o lugar de aplicación de la muestra se localiza en cada caso sobre varias o todas las capas de detección o zonas de reacción.

10. El portador de prueba de diagnóstico de conformidad con una de las reivindicaciones 7 u 8, caracterizado porque el sitio o lugar de aplicación de la muestra se localiza sólo sobre una de las capas de detección o una zona de reacción.

11. El portador de prueba de diagnóstico de conformidad con una de las reivindicaciones previas, caracterizado porque la red es un tejido o tela de monofilamentos .

12. El portador de prueba de diagnóstico de conformidad con una de las reivindicaciones previas, caracterizado porque la red se fija o adhiere a la capa de soporte por medio de una cinta adhesiva preferiblemente que contiene caucho natural o sintético.

13. El uso de un portador de prueba de diagnóstico de conformidad con una de las reivindicaciones 1-12, para la determinación del analito en un líquido.

14. Un método para la determinación de analito en una muestra de líquido con la ayuda de un portador de prueba de conformidad con una de las reivindicaciones 1-12, caracterizado porque el líquido de muestra se aplica al sitio o lugar de aplicación de la muestra, el líquido en exceso el cual no se absorbe por la(s) capa(s) de detección y la(s) región(es) de la red localizada arriba de ésta(s) se conduce hasta la región de la red que se extiende más allá de la(s) capa(s) de detección y la(s) capa(s) de detección se observa(n) para la formación de la señal, la formación de la señal es una medida o medición de la presencia o cantidad de analito en la muestra de líquido examinado,