MXPA96003672A - Proceso para la produccion de una ciclosporina - Google Patents

Abstract

La presente se refiere a un proceso para la producción de un [3'-desoxi-3'-oxo-MeBmt]1 ciclosporina, en particular a un proceso para la producción de [3'-desoxi-3'-oxo-MeBmt]1-[Nva]2-Ciclosporina o [3'-desoxi-3'-oxo-MeBmt]1-[Val]2-Ciclosporina.

Description

PROCESO-PARA LA PRODUCCIÓN DE UNA CICLOSPORINA Esta invención se refiere a un proceso para la producción de un [3 '-desoxi-3 '-oxo-MeBmt]1 ciclospo-riña, en particular a un proceso para la producción de [ 3* -desoxi-3' -oxo-MeBmt]1-[NvaJ2-Ciclosporina o [3'-desoxi-3 '-oxo-MeBmtJ 1 -[Val]2-Ciclosporina. De conformidad con la presente invención se proporciona un proceso para la producción de una [3 ' -desoxi-3 '-oxo-MeBmt] ciclosporina de la fórmula II -A-B-X-MeLeu-Y-MeLeu-Ala- (D) Ala-MeLeu-MeLeu-MeVal- II 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 en donde A es un residuo de 3 '-desoxi-3 '-oxo-MeBmt; B es -oCAbu-, -Thr-, -Val- o -Nva-; X es -Sar- o el residuo de un residuo de o-aminoácido ct-N-metilado, ópticamente activo que tiene la configuración (D) y Y es -Val- o adicionalmente, cuando B es Nva, Nva, que comprende cultivar un organismo para producir una ciclosporina intermediaria de la fórmula II en donde A es MeBmt, recuperar la ciclosporina intermediaria REF: 23000 y selectivamente someter a oxidación la ciclosporina intermediaria para producir una ciclosporina de la fórmula II en donde A es un residuo de 3 '-desoxi-3 '-oxo-MeBmt. Los compuestos de la fórmula II, en la cual A es un residuo 3 ' -desoxi-3 ' -oxo-MeBmt, son útiles para incrementar la sensibilidad a, o para incrementar la eficacia de, la terapia con medicamentos quimiotera-péuticos y, en particular, son útiles para revertir la resistencia a los medicamentos quimioterapéuticos de tipos variados (por ejemplo, adquirido o innato), o para incrementar o restablecer la sensibilidad a la terapia con medicamentos administrados. Formas de terapia con medicamentos quimioterapéuticos a las cuales estos compuestos pueden ser aplicados incluyen, por ejemplo, quimioterapia antiparásita, por ejemplo quimioterapia antiviral, antibacterial o antiprotozoaria y, en particular, quimioterapia antineoplástica o citostá-tica. Las ciclosporinas particularmente preferidas las cuales pueden ser producidas utilizando el proceso de la invención son [3 '-desoxi-3 '-oxo-MeBmt ] 1 -[Nva]2 -Ciclos-porina o especialmente [3 '-desoxi-3 '-oxo-MeBmt] 1 -[Val]2- Ciclosporina. Estos compuestos son preparados al someter a oxidación la [Nva]2 -ciclosporina y [Val]2-Ciclosporina y estos procesos de oxidación per se están incluidos dentro del alcance de la invención. De conformidad con un aspecto adicional, la invención proporciona un proceso para la producción de la [3 '-desoxi-3 '-oxo-MeBmt] 1 ~[B']2-Ciclosporina en donde B' es Nva o Val que comprende someter a oxidación la [B'] 2-Ciclosporma. La [Val] 2-Ciclosporina también es conocida como ciclosporina D. 2 La [B'] Ciclosporina para su uso en el proceso de oxidación, puede ser obtenida por cultivación 2 de un organismo que produce [B'] -Ciclosporina o puede ser producida por síntesis parcial o completa, que incluye la derivación de una ciclosporina diferente o el producto de fermentación referido. Cualquier agente de oxidación, solvente, ca-talizador o condiciones o esquema de reacción adecúa dos, pueden ser usados en el paso de oxidación del proceso de la invención o el proceso del aspecto adicional. Los reactivos adecuados para la reacción de oxidación incluyen el sulfuro de dimetilo en combinación con N-cloro-succinimida o preferiblemente el sulfóxi-do de dimetilo en combinación con N,N'-diciclohexil-carbodiimida, preferiblemente en un solvente orgánico no polar tal como tolueno. De manera más preferible, sin embargo, el sulfóxido de dodecil metilo en combina-ción con N,N' -diciclohexilcarbodiimida es usada como el agente de oxidación en un solvente tal como tolueno. El sulf óxido de dodecil metilo es preferido sobre tanto el sulfuro de dimetilo como el sulfóxido de dimetilo cuando el sulfuro de dimetilo es indeseable por motivos de seguridad y ecológicos y el sulfóxido de dimetilo proporciona un aumento a la producción de sulfuro de dimetilo como subproducto de la reacción. También existen problemas de olor menos indeseables asociados con el uso de sulfóxido de dodecil metilo. Preferiblemente la reacción de oxida-ción es realizada a baj a temperatura, por ej emplo, de - 1 5 a +20 °C. La invención se describe adicionalmente por medio de la única ilustración en el ej emplo siguiente el cual describe la preparación de la [ 3 ' -desoxi -3 ' -oxo-MeBmt ] 1 - [ Val ] 2 -Ciclosporina .

EJEMPLO a . Preparación de la ciclosporina D 2 La ciclosporina D (también conocida como [ l] - Ciclosporina) es preparada por fermentación de un organismo apropiado, tal como Tolypocladium inflatum GAMS (depositado con el US Northern Regional Research Laboratories Culture Collection como depósito no. NRRL 8044), recuperado a partir del caldo de fermentación y subsecuentemente purificado como se describe posteriormente. 500 1 de una solución nutriente que contiene por litro, 40 g de glucosa, 2 g de caseínato de sodio, 2.5 g de fosfato de amonio, 5 g de MgSO^H-O, 2 g de KH2P04, 3 g de NaN03, 0.5 g de KC1, 0.01 g de FeSO. y agua desmineralizada a 1 1, son inoculados con 50 1 de un precultivo de la cepa NRRL 8044 y son incubados en un fermentador de acero bajo agi-tación (170 rpm) y aireación (1 1 aire/minuto/ 1 solución nutriente) por 13 días a 27°C (véase la Solicitud de Patente Alemana No. 2 455 859 publicada). El licor de cultivo es agitado con la misma cantidad de acetato de n-butilo, concentrado por evapo-ración en un vacío después de la separación de la fase orgánica y el extracto crudo es desgrasado por una división de 3 etapas entre metanol/agua (9:1) y éter de petróleo. La fase metanólica es separada, concentrada por evaporación en un vacío y el producto crudo es precipitado por la adición de agua. El material obtenido en la filtración es sometido a cromatografía sobre gel de sílice con hexano/acetona (2:1) como eluyente. Las fracciones eluidas inicialmente contienen de manera predominante ciclosporina A y ci-closporina D y las fracciones eluidas más recientes contienen predominantemente ciclosporina C. Para la puri ficación adicional las fracciones que contienen la ciclosporina A y D son cristalizadas a partir de una cantidad de hoja o plegamiento de 2 a 2.5 de aceto-na a -15°. El producto cristalizado también es sometido a cromatografía dos veces sobre gel de sílice, las fracciones inicialmente eluidas con acetato de etilo saturado con agua, que contienen la ciclosporina D en la forma ampliamente enriquecida. Estas se disuelven en dos veces la cantidad de acetona y se les permite cristalizarse a -15°C. El producto cristalino crudo resultante de ciclosporina D se disuelve para purificación adicional en una cantidad de acetona de hoja o plegamiento 10, 2% en peso de carbón vegetal activo son agregados y el calentamiento es efectuado durante 5 minutos a 60°C. El producto filtrado claro y casi incoloro obtenido por filtración sobre talco es concentrado por evaporación a una tercera parte de su volumen y se le permite enfriarse hasta la temperatura ambiente, después de lo cual la ciclosporina D se cristaliza espontáneamente. La cristalización es completada permitiendo que permanezca a -17°C. Los cristales obtenidos por filtración son lavados con una cantidad pequeña de acetona enfriada con hielo y subsecuente-mente son secados en un alto vacío a 80 °C por 2 horas.

CARACTERIZACIÓN DE LA CICLOSPORINA D Incolora, cristales prismáticos P.F. 148o- 151°C. [ - ] ? = -245° (c=0.52 en cloroformo) [oC]D20 = -211° (c=0.51 en metanol) b. Preparación de Sulfóxido de dodecil metilo 478 g (2.2 moles) de sulfóxido de dodecil metilo, 52.5 g de ácido acético glacial y 1 1 de etanol anhidro son combinados y calentados a 70°C con agi-tación. Dentro de 90 minutos una solución de 215 g (2.2 moles) de peróxido de hidrógeno en 540 mi de agua es agregada con agitación y la agitación se continúa por aproximadamente 1 hora y hasta que la reacción es completada al menos en un 90%, como se determina por el análisis cromatográfico gaseoso. La mezcla luego es enfriada a 20-25° C y una solución de 27 g de me-tabisulfito de sodio en 41 mi de agua es agregada y la mezcla resultante es agitada durante 20 minutos mientras que se mantiene la temperatura a 20-25°C. 3 1 de tolueno y una solución de 93 g de bicarbonato de sodio en 1.07 1 de agua luego son agregados, la mezcla agitada y las fases se dejan separar. La fase acuosa luego es desechada, la fase orgánica lavada con 1 1 de agua, el agua de lavado es desechada y la fase orgánica concentrada bajo presión reducida a un volumen de aproximadamente 1.25 1. El producto de concentración es calentado a 50-55°C y 1.5 1 de hexano son agregados. La solución resultante luego es inoculada con cristales de sulfóxido de dodecil metilo y enfriada durante un periodo de aproximadamente 1 hora a 20-25°C y luego agitada a esta temperatura. La solución luego es enfriada a 0-5°C dentro de un periodo de aproximadamente 30 minutos, agitada a esta temperatura por aproximadamente 3 horas y el precipitado sólido es colectado por centrifugación.

Luego el sólido es lavado con 400 mi de hexano frío (0°C) y secado a una temperatura que no excede los 60°C bajo presión reducida para dar un rendimiento o producción de 462 g de sulfóxids de dodecil metilo (aproximadamente 90% de rendimiento teórico) . * c. Oxidación de ciclosporina D a [3 '-desoxi-3 '-oxo- MeBmt] 1 -[Val]2-Ciclosporina 269 g (0.22 moles) de ciclosporina D pura se disuelven en 2.95 1 de tolueno, 283 g (1.22 moles) de sulfóxido de dodecil metilo preparado como se descri bió anteriormente, fueron agregados, la mezcla enfriada a O-5°C y 78 g de ácido dicloroacético agregado junto con 50 mi adicionales de tolueno. La temperatura de la mezcla de reacción es mantenida a 0-5°C por aproximadamente 45 minutos después de lo cual una solución de 205 g (0.99 moles) de N,N'-diciclohexilcarbodiimida en 290 mi de tolueno es agregada. La mezcla de reacción es agitada durante aproximadamente 30 minutos y hasta que la reacción se completa al menos en un 95% como se determina por cromatografía dé CLAR. Una solución de 81 g (0.64 moles) de ácido oxálico en 630 mi de agua es agregada y la mezcla resultante es agitada a 0-5°C durante aproximadamente 3 horas. Los sólidos formados son separados por centrifugación y lavados con 440 mi de tolueno enfriado (5° C) y los sólidos luego son desechados. La fracción líquida de la mezcla de reacción y los líquidos lavados luego son combinados, a las fases sólidas se les permite separarse, la fase acuosa desechada y una solución acuosa de bicarbonato de sodio (80 g en 1.25 1) son agregadas a la fase orgánica hasta que el pH alcanza a ser de 7-8. Después de la agitación a las fases se les permite separarse, la fase acuosa es desechada y la fase orgánica es lavada con 650 mi de agua. El agua para el lavado es desechada y la fase orgánica es evaporada a sequedad bajo presión reducida a una temperatura que no exceda 60°C. El residuo se disuelve en una mezcla de 560 mi de acetato de isopropilo y 10 mi de agua con calentamiento a 55-60°C. Dentro de aproximadamente 30 minutos la solución es enfriada a aproximadamente 40°C e inoculada con cristales de sulfóxido de dodecil metilo. En un periodo de apro-ximadamente 90 minutos la mezcla luego es enfriada de -10 a -15°C y agitada a esta temperatura por aproximadamente 4 horas. Los sólidos son removidos por centrifugación, lavados con 390 mi de acetato de isopropilo y luego desechados. La fracción líquida de la mezcla de reacción y los líquidos lavados luego son combinados para dar una solución de 1.28 kg que contiene aproximadamente 256 g de [3 '-desoxi-3 '-oxo-MeBmt] 1 -[Val] 2-Ciclosporina (aproximadamente 95% de rendimiento o producción teórica). La solución obtenida como se describió anteriormente es enriquecida utilizando cromatografía sobre gel de sílice. Dos columnas son preparadas cada una contiene 1 kg de gel de sílice suspendido en 2.5 1 de acetato de isopropilo y cada una es carga-da o alimentada con 162 g de la solución. Las columnas son eluidas a una velocidad de flujo de 500 ml/hora con acetato de isopropilo saturado con agua y las fracciones son recuperadas en el intervalo del primero de 4 1 (primer eluato), el siguiente 500 mi (segundo eluato), el siguiente 4.5 1 (tercer eluato) y el siguiente de 1 1 (cuarto eluato). Como se determinó por CLAR, el producto deseado está en el tercer eluato. Por lo tanto, los primeros eluatos son desechados y los eluatos segundo y cuarto son retenidos para su reproceso. Los eluatos terceros de ambas columnas son combinados, concentrados bajo presión reducida a un volumen de aproximadamente 320 mi y luego evaporados a sequedad bajo presión reducida a una temperatura que no excede los 60°C para proporcionar aproximadamente 40 g del producto.

Este producto es además purificado por cristalización a partir del éter de ter-butil metilo. El producto 2 [3 '-desoxi-3 '-oxo-MeBmt] '-[Val] -Ciclosporina purificada resultante se encuentra que tiene un punto de fusión en la gama de 195-198°C, una rotación óptica -255.1° (c=0.5 en CHC1-.) y un peso molecular de 1214.65. 2 La [3 ' -desoxi-3 ' -oxo-MeBmt] '-[Nva] -Ciclosporina puede ser preparada en forma análoga por oxidación 2 de la [Nva] -Ciclosporina substancialmente como se describió + anteriormente para la oxidación de [Val] 2- Ciclosporina. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención. Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes

Claims (6)

REIVINDICACIONES

1. Un proceso para la producción de una ciclosporina de la fórmula II rA-B-X-MeLeu-Y-MeLeu-Ala-(D)Ala-MeLeu-MeLeu-MeVal II 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 en donde A es un residuo de 3 ' -desoxi-3 ' -oxo-MeBmt; B es -otAbu-, -Thr-, -Val- o -Nva-; X es -Sar- o el residuo de un residuo de ot-aminoácido o-N-metilado, ópticamente activo, que tiene la configuración (D) y Y es -Val- o adicionalmente, cuando B es Nva, Nva, caracterizado porque comprende cultivar un organismo para producir una ciclosporina intermediaria de la formula II en donde A es MeBmt, recuperar la ciclosporina intermediaria y selectivamente someter a oxidación la ciclosporina intermediaria para producir una ciclosporina de la fórmula II en donde A es un residuo de 3 '-desoxi-3 * -oxo-MeBmt.

2. Un proceso de conformidad con la reivindicación 1, para la producción de [3 '-desoxi-3 '-oxo- 1 2 1 MeBmt] -[Nva] -Ciclosporina o [3 '-desoxi-3' -oxo-MeBmt ] - 2 [Val] -Ciclosporina.

3. Un proceso para la producción de [ 3 ' -desoxi—3 '— oxo-MeBmt] 1 ~[B'] 2-Ciclosporina en donde B' es Nva o Val, caracterizado porque comprende someter a oxidación una [B'] 2-Ciclosporina.

4. Un proceso de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque el sulfuro de dimetilo en combinación con N clorosuccinimida es usado como el reactivo de oxidación.

5. Un proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque el sulfóxido de dimetilo en combinación con N,N' -diciclohexil-carbodimida o sulfóxido de dodecil metilo en combinación con N,N'-diciclohexilcarbodiimida son usados como el agente oxidante.

6. Un proceso de conformidad con las reivindicaciones 4 ó 5, caracterizado porque el proceso se lleva a cabo a una temperatura entre -15° a +20°C en un solvente orgánico no polar tal como el tolueno.