MXPA06012556A - Uso de un compuesto que comprende d-mannoheptulosa y/o perseitol para el tratamiento y prevencion de padecimientos de modificacion de inmunidad natural. - Google Patents

Abstract

La invencion se refiere al uso de un compuesto que comprende D-mannoheptulosa y/o perseitol para producir un farmaco para el tratamiento y/o la prevencion de enfermedades relacionadas con la modificacion de una inmunidad innata y/o adquirida, aumentando la produccion de peptidos antimicrobianos, de preferencia hBD-2 sin inducir reacciones inflamatorias, irritacion o intolerancia; dicho compuesto tambien puede comprender un extracto de aguacate peptidico y/o un extracto de lupina peptidica.

Description

USO DE UN COMPUESTO QUE COMPRENDE D-MANOHEPTULOSA Y/O PERSEITOL PARA EL TRATAMIENTO Y PREVENCIÓN DE PADECIMIENTOS DE MODIFICACIÓN DE INMUNIDAD NATURAL MEMORIA DESCRIPTIVA La presente invención se refiere al uso de un compuesto que comprende D-manoheptulosa y/o perseitol para elaborar un fármaco dirigido a tratar y/o prevenir padecimientos relacionados con una modificación de la inmunidad natural. Todas las especies animales se enfrentan a diario a un gran número de microorganismos, tales como bacterias, hongos, parásitos o virus que pueden amenazar su salud o incluso su vida. Dos sistemas de defensa contrarrestan estos microorganismos: un sistema llamado inmunidad natural que es común en todos los animales, incluyendo el hombre, y un sistema así llamado de inmunidad adaptiva o específica que se adquiere gracias a las células y mediadores de inmunidad después del contacto con el agresor potencial. Las respuestas de inmunidad natural o adaptiva difieren en sus mecanismos de reconocimiento para estos microorganismos. En la inmunidad natural, la especificidad de los receptores se determina genéticamente a partir del nacimiento y no cambia. Estos receptores se expresan en las células tales como ciertas células epiteliales y endoteliales, células dendríticas, monocitos y macrófagos. Todas las estructuras reconocidas por los receptores de inmunidad natural son comunes para un número bastante grande de microorganismos. A diferencia de la respuesta de inmunidad adaptiva, los mecanismos de la respuesta de inmunidad natural (fagocitosis, péptidos antimicrobianos, etc.), se activan al inicio de la infección y controlan casi inmediatamente la proliferación de patógenos que invaden al hospedero. La respuesta de inmunidad adaptiva toma el mando entonces. Se han encontrado péptidos antimicrobianos tanto en el reino vegetal como animal, y se han descubierto más de 500 péptidos antimicrobianos desde insectos hasta el hombre. Los péptidos antimicrobianos son moléculas pequeñas (10 a 50 aminoácidos) son capaces de destruir una amplia variedad de microorganismos (Gram+ y/o Gram-, hongos, virus, células transformadas), volviendo su membrana celular permeable. Además, ciertos de estos péptidos antimicrobianos, a través de sus propiedades quimio-atrayentes, son capaces de atraer las células que participan en la inmunidad adaptativa, tal como las células dendríticas o todavía más los linfocitos T. Se han encontrado numerosos péptidos antimicrobianos en la vérnix caseosa (secreción sebácea que protege el feto) y en el fluido amniótico, así como en la piel del recién nacido, sugiriendo su papel clave en la defensa antimicrobiana durante el nacimiento, aunque también desde el comienzo de la vida mientras que la inmunidad adquirida está aún inmadura. La mayoría de organismos sintetizan diversos tipos de péptidos antimicrobianos al nivel de sus diferentes epitelios con el fin de definir un amplio espectro de actividad. En los mamíferos, se han descrito dos clases principales de péptidos antimicrobianos, cuya producción se induce mediante el contacto con un microorganismo: las catelicidinas y las defensinas. La catelicidina humana (LL-37) se aisló por primera vez de a partir de las células de la médula ósea. La LL-37 principalmente se expresa en la piel humana, en las uñas, así como en la membrana sinovial sana e inflamada, especialmente en pacientes enfermos de artritis. La LL-37 tiene un amplio espectro de actividad parece actuar en coordinación con otros péptidos antimicrobianos, especialmente las defensinas. La LL-37 también tiene propiedades quimio-atrayentes, las cuales hacen posible que la misma atraiga células de inmunidad adaptativa. En base a su estructura secundaria, las defensinas se dividen en dos familias, a y ß. Las defensinas a (6 conocidas en la actualidad) se localizan principalmente en los granulos de almacenamiento de células especializadas tales como los neutrófilos, o las células intestinales de Paneth, mientras que las defensinas ß son características de los tejidos epiteliales. Aparte de su papel en la inmunidad natural, las defensinas son igualmente conocidas por sus propiedades mitógenas, las cuales sugieren su potencial implicación en los procedimientos de curación. En el hombre, se han identificado hasta ahora 4 defensinas ß (se cree que existen en nuestro genoma más de 20 genes que codifican los péptidos antimicrobianos) la defensina ß1 (hBD-1 ) por lo general se producen de manera constitutiva y se expresan en mayores cantidades en el hígado hasta en menor grado en el páncreas, las glándulas salivales, el epitelio del sistema respiratorio, en el sistema urogenital femenino, en la membrana sinovial sana, así como en la placenta. La hBD-1 también se expresa en la piel. Las otras formas de defensinas ß, hBD-2, 3 y 4, son inducibles. La hBD-3 se induce en las membranas sinoviales inflamatorias tales como por ejemplo en las patologías artríticas. La expresión de la hBD-2 ha sido reportada hasta ahora en la piel, el tracto urogenital, las glándulas sudoríparas y en la unidad pilo-sebácea. En la piel, se supone que otros péptidos o proteínas, tales como la adrenomedulina, cistatina, el inhibidor específico para la elastasa/SKALP/elafina, poseen actividades antimicrobianas. Más recientemente, la dermicidina (amplio espectro de actividad) se ha caracterizado como un péptido antimicrobiano para la piel, el cual supuestamente se produce en las glándulas sudoríparas, exocrínas, y cuya secreción simultánea con el sudor supuestamente constituye una parte importante del sistema de defensa natural contra infecciones locales y sistémicas. Por primera vez, la hBD-2 se ha caracterizado en las escamas producidas por psoriasis. La expresión de la hBD-2 y 3, así como de la LL-37, se incrementa en las lesiones por psoriasis, explicando así la gran resistencia a las infecciones de pacientes que están enfermos por esta patología. Por otro lado, en la dermatitis atópica (lesiones crónicas y lesiones por brotes), la expresión de la LL-37 y hBD-2 se disminuye bajo la influencia de la interleucina 4 (IL-4) y la interleucina 13 (IL-13), mediadores de atopia. Esta deficiencia podría explicar la susceptibilidad incrementada a infecciones de pacientes que padecen dermatitis atópica. Para el acné, la expresión de las defensinas ß (hBD-1 y 2) se incrementa como una reacción contra la proliferación de P. acnés. Además, se supone que las personas con acné padecen un desequilibrio inicial en los péptidos antimicrobianos responsables de la proliferación bacteriana, bacterias que a cambio estimulan las defensas de inmunidad natural. Por lo tanto la inflamación parece ser un factor preponderante en la inducción de péptidos antimicrobianos. Además, también se ha demostrado que la interleucina 1 , el TNF-a (Necrosis Tumoral alfa), y la irradiación ultravioleta, estimulan la producción de hBD-2. La expresión del hBD-2 también está relacionada con el estado de diferenciación de los queratinocítos. Por consiguiente, la estimulación de la producción de péptidos antimicrobianos, especialmente de la familia de las defensinas, y más particularmente las hBD-2, podría permitir la promoción y/o el reestablecimiento de la inmunidad natural, en especial de los ojos y del epitelio (epidermis, mucosa vaginal, intestinal, nasal y auricular, vías respiratorias). La cavidad bucal constantemente está expuesta a una gran variedad de microbios (bacterias, virus, hongos). Está bien establecido que las bacterias, entre otras cosas, tales como el actinobacillus, actinomycetemcomitans, porphyromonas gingivalis, son los factores clave que participan en el desarrollo de padecimientos parodontales (gingivitis y parodontitis). El epitelio gingival constituye la primera barrera de defensa contra diferentes patógenos presentes en el ambiente bucal. En este sentido, los queratinocitos gingivales producen un amplio panel de péptidos antimicrobianos, hBD-1 , 2, 3, LL-37. Estos péptidos también se producen en la membrana mucosa de la boca y mediante las glándulas salivales. Más particularmente, la estimulación de los péptidos antimicrobianos podría permitir que la inmunidad natural sea fomentada y/o re-establecida en la piel sana o patológica de bebés y niños, cuya inmunidad generalmente es deficiente, y en la piel sana o enferma de personas adultas o de edad avanzada (inmuno-depresivas). Esta estimulación por lo tanto podría completar ventajosamente el sistema de defensa pasiva de la piel, el cual está constituido por la córnea de la epidermis (comeocitos + cemento intercelular), y preparar la respuesta de inmunidad adaptativa en bebés, niños adultos y ancianos, que estén sanos o enfermos. Al mismo tiempo, también podría promoverse la cicatrización. La D-manoheptulosa, la primera ketoheptosa en identificarse en 1916 por La Forge, tiene la fórmula general (I) O) y se encuentra en ciertas plantas, especialmente en la lucerna o alfalfa (Medicago sativa L.), aguacate, higos (Picus officinalis L.) y la prímula (Prímula officinalis Jacq.). Sin embargo, los contenidos más elevados de D-manoheptulosa se encuentran en el aguacate. La D-manoheptulosa ya ha sido utilizada en aplicaciones terapéuticas. Por ejemplo, la solicitud de patente WO 95/03809 describe el uso de la D-manoheptulosa como un inhibidor de la glucoquinasa para la inhibición del desarrollo de células tumorales, y la solicitud US2003/0092669 describe un suplemento nutricional, oral, que comprende D-manoheptulosa, el cual puede disminuir el nivel de insulina y por consiguiente hace posible la pérdida de peso. El perseitol, la forma poliol de la D-manoheptulosa, tiene la fórmula general (II) y también se encuentran en el aguacate, en particular en la fruta o en el hueso de aguacate. De acuerdo a la publicación "Search for pharmacochemical leads from tropical rainforest plants", Hitotaka Shibuya et al. Puré Appl. Chem., vol. 71 , n° 6, pp 1109-1113, 1999, el perseitol está asociado con un ion de potasio, que permite a la leucina 3H incorporarse en las células tumorales del sarcoma de ascitis de Ehrlich. Sorprendentemente, los inventores han encontrado que una composición que comprende D-manoheptulosa y/o perseitol hace posible un incremento en la producción de péptidos antimicrobianos, ventajosamente h.BD-2, sin inducir reacciones inflamatorias, irritaciones o intolerancia, en especial sin estimular significativamente la secreción de moléculas que usualmente se expresan en el caso de reacciones inflamatorias. De acuerdo con esto, el objetivo de la presente invención es el uso de un compuesto que comprenda D-manoheptulosa y/o perseitol y un excipiente apropiado, farmacéuticamente aceptable, para la elaboración de un fármaco o una composición veterinaria dirigida a tratar y/o prevenir padecimientos relacionados con una modificación de la inmunidad natural y/o adquirida mediante una producción incrementada de péptidos antimicrobianos, de la familia de las catelicidinas y/o las defensinas beta, ventajosamente de las hBD-2. En el alcance de la presente invención, el término "modificación" puede significar un incremento o una disminución. La presente invención también se refiere al uso de una composición que comprende D-manoheptulosa y/o perseitol y un excipiente apropiado, farmacéuticamente aceptable, para la elaboración de un fármaco o una composición veterinaria dirigida a tratar y/o prevenir padecimientos relacionados con una modificación de la inmunidad natural y/o adquirida mediante una producción incrementada de péptidos antimicrobianos, tales como un inhibidor específico de elastasa, particularmente la elafina (SKALP). El fármaco o la composición veterinaria de conformidad con la invención, ventajosamente permite la inmunidad natural y/o la inmunidad adquirida a ser estimulada y/o completada. Generalmente, en el contexto de la presente invención, dichos padecimientos pueden estar relacionados con la presencia de microorganismos, especialmente las bacterias Gram+ y/o Gram-, hongos, levaduras o virus. Más particularmente, dichos padecimientos pueden ser algunas infecciones de los sistemas ocular y auditivo, del epitelio no-queratinizado (mucosa vaginal, intestinal, gingival, pulmonar, del tracto respiratorio, anal y uretral) y del epitelio queratinizado tales como la piel. Dichos padecimientos también pueden ser algunas infecciones de la fanera o apéndices, cutáneos (cabello, uñas, glándulas sudoríparas, glándulas sebáceas). Consecuentemente, dichos padecimientos pueden ser patologías tales como la foliculitis, furúnculos, impétigo o panadizos. Dichos padecimientos pueden ser patologías del cuero cabelludo tales como la caspa y más ampliamente las afecciones relacionadas con una hiper-seborrea. Dichos padecimientos pueden ser patologías asociadas con una modificación del equilibrio Th1/Th2 tal como la dermatitis atópica. Dichos padecimientos pueden ser patologías asociadas con una modificación de la síntesis de las citoquinas, tales como la IL-4 y/o la IL-13, especialmente en el contexto de la dermatitis atópica. Dichos padecimientos también pueden ser dermatosis inflamatorias, tales como la dermatitis atópica, eczema atópico y/o por contacto físico, psoriasis, acné e irritaciones de la piel. Dichos padecimientos también pueden ser quemaduras, en particular las quemaduras de primer grado y segundo grado. Dichos padecimientos también pueden ser patologías asociadas con un déficit de la barrera cutánea. De acuerdo con esto, el fármaco de conformidad con la invención se puede utilizar para el tratamiento de la piel que es hiper-reactiva (sensible, irritada, alérgica), atópica, seca o avejentada. Dichos padecimientos también pueden ser patologías asociadas con la piel, que se vuelve frágil por una agresión del medio ambiente, especialmente causada por el frío, contaminación, estrés, tabaco, exposición al sol. En el contexto de la presente invención, el fármaco también es adecuado para proteger la piel inmadura, sana o patológica de bebés y niños. De hecho, hace posible que las defensas naturales de la epidermis del niño se refuercen, cuya inmunidad por lo general es deficiente. En el contexto de la presente invención, el fármaco también es adecuado para proteger la piel inmadura, sana o patológica de adultos o de los ancianos, en especial de individuos inmuno-deprimidos. En el contexto de la presente invención, el fármaco también es adecuado para fomentar la cicatrización en el procedimiento de la cicatrización normal o patológica, tal como las ulceras y costras.

En el contexto de la presente invención, el fármaco también está dirigido al tratamiento y/o prevención de padecimientos parodontales, patologías articulares, inflamatorias, tales como la artritis, de infecciones mucosas, especialmente de la mucosa vaginal, intestinal, respiratoria, nasal, o auricular, o infecciones del sistema ocular. La composición de conformidad con la invención ventajosamente comprende 0.001 a 30% en peso seco de D-manoheptulosa, en base al peso total de la composición, aún más ventajosamente 0.01-20% en peso seco, aún más ventajosamente 0.01-10% en peso seco, aún más ventajosamente 0.5-5% en peso seco de D-manoheptulosa. La composición de conformidad con la invención ventajosamente comprende 0.001 a 30% en peso seco de perseitol, en base al peso total de la composición, aún más ventajosamente 0.01-20% en peso seco, aún más ventajosamente 0.01-10% en peso seco, aún más ventajosamente 0.5-5% en peso seco de perseitol. En el contexto de la presente invención, los términos "D-manoheptulosa" y "perseitol" también incluye sus derivados químicos. La fuente de D-manoheptulosa y/o perseitol puede ser un extracto hidrosoluble de azúcares de aguacate u otra planta. Por otra parte, la D-manoheptulosa y/o perseitol están disponibles comercialmente (origen sintético). De acuerdo con una variante ventajosa de la invención, la fuente de D-manoheptulosa y/o perseitol es un extracto hidrosoluble de azúcares de aguacate. El extracto hidrosoluble de azúcares de aguacate se puede obtener directamente de cualquier parte del aguacate o del árbol de aguacate, tal como la fruta, la cascara, el hueso, las hojas o las raíces del árbol de aguacate. También es posible obtener un extracto peptídico de los co-productos de la industria de conversión del aguacate, entre los cuales pueden citarse de una manera no limitante: pulpa de aguacate fresco, pulpa congelada, pulpa deshidratada, aceite oleaginoso de aguacate obtenido de los procedimientos de extracción de aceite (extracción mecánica y/o con disolventes de la fruta previamente deshidratada), sólidos desaceitados resultantes de los procedimientos en húmedo de extracción de aceite (procedimientos de centrifugación), sólidos desaceitados resultantes de los procedimientos de extracción enzimática del aguacate, masa de aguacate crudo (guacamole), residuos sólidos resultantes de las unidades de producción de estas masas. El extracto se obtiene ventajosamente de la fruta fresca del árbol de aguacate. Las frutas pueden ser elegidas de entre las variedades Hass, Fuerte, Ettinger, Bacon, Nabal, Anaheim, Lula, Reed, Zutano, Queen, Crióla Selva, Mexicana Canta, Región Dschang, Hall, Booth, Peterson, Collinson Redn, más ventajosamente entre las variedades Hass, Fuerte y Reed. Se prefieren las variedades Hass, Fuerte, Ettinger y Bacon, y más ventajosamente las variedades Hass y Fuerte. La fruta de aguacate principalmente está constituida por agua, la pulpa, el aceite y el hueso. Las proporciones de estos constituyentes son, como en el caso de todos los productos naturales y vegetales, extremadamente variable. No obstante, generalmente de acuerdo a las cifras dadas en el cuadro 1 , expresadas en porcentaje de fruta fresca, se reflejan las composiciones promedio: CUADRO 1 De hecho, el aguacate no es particularmente rico en polisacáridos. Sin embargo, la naturaleza de los monosacáridos solubles es muy especial, tal como el perseitol o la D-manoheptulosa constituida por 7 átomos de carbono. El extracto hidrosoluble de azúcares de aguacate puede obtenerse mediante un procedimiento que comprende los siguientes pasos sucesivos: - obtener una torta oleaginosa de aguacate, ventajosamente de la fruta de aguacate, secando el aguacate luego extrayendo los lípidos (aceite); luego del - molido criogénico y deslipidación total de dicha torta oleaginosa, decantar y centrifugar para recubrir la fracción soluble rica en azúcares C7 (eliminación de la torta); - desmineralización sobre una resina iónica de dicha fracción soluble obtenida del paso precedente; luego - ultrafiltración a 10,000 daltons; y - opcionalmente, concentración bajo vacío y envasado. El primer paso del procedimiento consiste en secar la fruta y luego extraer el aceite. Después cortar el fruto en rodajas delgadas, el mismo puede secarse mediante cualquiera de las técnicas conocidas para aquellas personas expertas en la técnica, entre las cuales pueden citarse secado con aire caliente, liofílización o incluso secado osmótico. En general, la temperatura se mantiene ventajosamente durante este paso de secado por debajo o igual a 80°C, sin importar la técnica empleada. En el contexto del presente procedimiento, por razones de facilidad de aplicación y por razones de costo, el secado en secadoras ventiladas, en películas delgadas y bajo una corriente de aire caliente, se prefiere a una temperatura que comprende entre 70 y 75°C. La operación puede variar entre 5 y 72 horas. Los lípidos de la fruta seca se extraen entonces ya sea mecánicamente en una prensa de husillo continuo, o químicamente, con un solvente tal como hexano, en un extractor soxhelet o en un extractor de banda continua del tipo de Smet®, especialmente de conformidad con el procedimiento descrito en la solicitud FR 2 843 027, ó mediante un procedimiento utilizando CO2 supercrítico. Entre los principales intereses del procedimiento, el co-producto de aceite constituye un producto que obviamente tiene un valor comercial. Esta es la razón por la cual se prefiere una extracción mecánica de los iípidos. La fruta seca y desaceitada, también llamada torta oleaginosa, se puede someter a los siguientes pasos: - molido criogénico - deslipidación total, especialmente con acetona y/o etanol, - decantar luego lavar la torta oleaginosa con agua, - centrifugar, recuperación de la fracción soluble (eliminación de la torta), desmineralización por intercambio iónico ultrafiltración con un umbral de tamaño de 10 kD concentración bajo vacío, adición de conservadores y envasado. En general, el extracto acuoso, final, puede comprender 0.1 a 10% en peso de materia seca, ventajosamente 1 a 7% en peso de materia seca, aún más ventajosamente 3 a 5% en peso de materia seca. El contenido de azúcar C7 es decir, la D-manoheptulosa y perseitol en la materia seca ventajosamente comprende 65 a 90% en peso, en base al peso total de la materia seca. Los datos analíticos promedio para una solución acuosa que comprende 5% de extracto seco, obtenido mediante los procedimientos previamente descritos, se dan en el cuadro 2: CUADRO 2 La concentración relativa de azúcares en el extracto hidrosoluble, en peso, en base al peso total de la materia seca en el extracto, cumple ventajosamente con los siguientes criterios (composición relativa determinada mediante HPLC, cromatografía líquida de alta resolución): - D-manoheptulosa 5 a 80% - Perseitol 5 a 80% - Sacarosa menos del 10% - Glucosa menos del 10% - Fructosa menos del 10% El extracto hidrosoluble de azúcares del aguacate ventajosamente comprende, en base al peso total de la materia seca, 10 a 80% en peso de D-manoheptulosa, más ventajosamente 15 a 70% en peso de D-manoheptulosa. El extracto hidrosoluble de azúcares de aguacate ventajosamente comprende, en base al peso total de la materia seca, 20 a 80% en peso de perseitol, más ventajosamente 25 a 70% en peso de perseitol. Preferiblemente, la composición relativa de azúcares en el extracto hídrosoluble, en peso, en base al peso total de la materia seca en el extracto, cumple ventajosamente con los siguientes criterios (composición relativa determinada mediante HPLC): - D-manoheptulosa 25 a 60% - Perseitol 25 a 60% - Sacarosa menos del 10% - Glucosa menos del 10% - Fructosa menos del 10% Sorprendentemente, los inventores han observado un efecto sínérgico entre la D-manoheptulosa y/o perseitol y los azúcares menores (fructosa, glucosa, sacarosa) presentes en el extracto de los azúcares de aguacate. Opcionalmente, el extracto obtenido se puede liofilizar para obtener un polvo sólido, completamente soluble (extracto seco). De acuerdo con una variación ventajosa de la invención, la composición comprende además un extracto peptídíco de aguacate, ventajosamente en una proporción de 0.001 a 30% en peso seco, aún más ventajosamente 0.01 a 20% en peso seco, aún más ventajosamente 0.1 a 15% en peso, aún más ventajosamente 0.5 a 10% en peso seco, aún más ventajosamente 0.7 a 8% en peso seco y aún más ventajosamente 1 a 5% en peso seco, en base a! peso total de la composición. Se observa entonces ventajosamente un efecto sinérgico. El extracto peptídico de aguacate, agregado en la composición de conformidad con la invención, ventajosamente comprende 2 a 10% en peso de nitrógeno alfa-aminado, en base al peso de la materia seca del extracto peptídico. En el contexto de la presente invención, los términos "nitrógeno alfa-aminado" se entiende que significan el contenido de nitrógeno de los péptídos en la forma de grupos alfa-amina libres. El contenido de nitrógeno alfa-aminado en los péptidos permite estimar el grado de hidrólisis de las proteínas, así como el peso molecular promedio de los péptidos. Más particularmente, el extracto peptídico de aguacate puede obtenerse mediante un procedimiento que comprende los siguientes pasos: - obtener una torta oleaginosa de aguacate, ventajosamente de la fruta del aguacate, secando el aguacate luego extrayendo los lípidos; luego del - molido criogénico y delipidación total de dicha torta oleaginosa, decantar, centrifugar y recuperar la torta; luego - una primera hidrólisis en la presencia de glucanasas, seguida por una centrifugación y la eliminación de la fracción soluble; - una segunda hidrólisis en la presencia de una o una pluralidad de proteasas, seguida por una centrifugación y la eliminación del sedimento; luego - concentrar la fase peptídica mediante nanofiltración; - decoloración, en la presencia de carbón activado, por ejemplo, seguido por una filtración simple (10 µm) luego una ultrafiltración (umbral de corte de 10 kD); por último - opcionalmente, una microfiltración esterilizante, final (0.2 µm), adición de conservadores y envasado. El método para obtener la torta oleaginosa de aguacate y la extracción de lípidos se llevan a cabo ventajosamente de la misma manera que el extracto peptídico de aguacate y los azúcares de aguacate. La fruta seca y desaceitada, también llamada torta oleaginosa, se puede someter a los siguientes pasos: - molido criogénico - deslipidación total, especialmente con acetona y/o etanol, - decantado luego lavado de la torta oleaginosa con agua, - centrifugación, recuperación de la torta, - primera hidrólisis en la presencia de una o una pluralidad de glucanasas, - centrifugación, eliminación de la fracción soluble, - segunda hidrólisis en la presencia de una o una pluralidad de proteasas, - centrifugación, eliminación del residuo, - concentración mediante nanofiltración - decoloración, especialmente en la presencia de carbón activado, - filtración simple (10 µm) luego ultrafiltración (umbral de corte 10 kD), - adición de conservadores y envasado. El extracto acuoso, final, puede comprender 1 a 60% en peso de materia seca, o aún 3 a 20% en peso de materia seca, preferiblemente 5 a 6% en peso de materia seca. Opcionalmente, el extracto obtenido se puede liofilizar para obtener un polvo sólido (extracto seco), pero completamente hidrosoluble con respecto a las proteínas originales del aguacate. En base al peso de la materia seca, el contenido de nitrógeno alfa-aminado, puede estar comprendido entre 2 y 10% en peso, preferiblemente entre 5 y 7% en peso. El pH de una solución acuosa con 1.2% en peso de extracto seco, en base al peso de la materia seca, generalmente estará comprendido entre 3 y 6, más ventajosamente entre 4 y 5. De acuerdo a una variación ventajosa de la invención, la composición comprende además un extracto peptídico de lupino, ventajosamente en una cantidad en peso de 0.001 a 30% de materia seca, aún más ventajosamente 0.01 a 10% de materia seca, en base al peso total de la composición. El extracto peptídico de lupino agregado en la composición de conformidad con la invención, comprende al menos 70%, ventajosamente al menos 80% en peso de péptidos, en base al peso de la materia seca del extracto peptídico. Luego, se observa ventajosamente un efecto sinérgico. En particular, el extracto peptídico de lupino puede obtenerse mediante un procedimiento que comprende los siguientes pasos: - preparación de una torta oleaginosa de lupino molido o de una harina micronizada de lupino; - luego, deslipidación mediante extracción con disolventes - extracción de la proteína soluble y fracciones, o precipitación de las proteínas al punto isoeléctrico; - si fuera necesario separación de la fracción de proteína; - hidrólisis enzimática de la fracción de proteína y recuperación, después de una filtración opcional, del extracto peptídico. El procedimiento para preparar un extracto peptídico se describe en la solicitud de patente francesa FR 2 792 202, presentada por Laboratorios Expascience. Además, la composición puede comprender al menos un compuesto seleccionado del grupo constituido por los emolientes, agentes hidratantes, activadores de la síntesis de queratina, querato-reguladores, queratolíticos, agentes re-estructurantes para la barrera cutánea (activadores de la síntesis de lípidos cutáneos, agonistas PPAR o Receptor Activado del Proliferador Paroxisoma), activadores en la diferenciación de queratinocitos (retinoides, Calcidone®, calcio), antibióticos, agentes antibacteriales, fungicidas, antivirales, sebo-reguladores, tales como los inhibidores de 5-alfa reductasa, especialmente la 5-alfa Avocuta® activa comercializada por los Laboratorios Expanscience, inmunomodulares, tales como tacrolimus, pimecrolimus, oxazolinas, conservadores, agentes anti-picazón, agentes suavizantes, filtros solares y protectores solares, antioxidantes, factores de crecimientos agentes de curación o moléculas eutróficas, los fármacos y agentes anti-inflamatorios, y los compuestos que comprenden sustancias insaponificables de aceite vegetal. En el contexto de la presente invención, los activadores para la síntesis de la queratina, los cuales se pueden utilizar en asociación con la D-manoheptulosa y/o perseitol, son ventajosamente retinoides, péptidos de lupino (comercializados por la compañía Silab), proteínas clave de la capa granulosa o de la córnea de la epidermis (queratinas). En el contexto de la presente invención, los antibióticos que se pueden utilizar en asociación con la D-manoheptulosa y/o perseitol, ventajosamente son ácido fucídico, penicilina, tetraciclinas, pristinamicina, eritromicina, clíndamícina, mupirocina, minociclina, doxiciclina. En el contexto de la presente invención, los agentes antivirales que se pueden utilizar en asociación con la D-manoheptulosa y/o perseitol, ventajosamente son paciclovir y valaciclovir. En el contexto de la presente invención, los agentes anti-picazón que se pueden utilizar en asociación con la D-manoheptulosa y/o perseitol, ventajosamente son glicina, azúcares y/o péptidos de lupino, Cycloceramide® (derivado de oxazolina). En el contexto de la presente invención, los agentes suavizantes que se pueden utilizar en asociación con la D-manoheptulosa y/o perseitol, ventajosamente son alfa-bísabolol, los derivados de regaliz. En el contexto de la presente invención, los querato-reguladores que se pueden utilizar en asociación con la D-manoheptulosa y/o perseitol, ventajosamente son los alfa-oxiácidos y sus derivados. En el contexto de la presente invención, un queratolítico que se puede utilizar en asociación con la D-manoheptulosa y/o perseitol, es especialmente el ácido salicíclíco y sus derivados. En el contexto de la presente invención, los antioxidantes que se pueden utilizar en asociación con la D-manoheptulosa y/o perseitol, ventajosamente son vitaminas (C, E), elementos traza (cobre, zinc, selenio). En el contexto de la presente invención, los factores de crecimiento que se pueden utilizar en asociación con la D-manoheptulosa y/o perseitol, ventajosamente son becaplermina y TFG-beta (Factor de Crecimiento Transformante beta).

En el contexto de la presente invención, los agentes de curación que se pueden utilizar en asociación con la D-manoheptulosa y/o perseitol, ventajosamente son la vitamina A, pantenol, Avocadofurane®, óxido de zinc, óxido de magnesio, óxido de silicio, ácido madecassico o asiático. En el contexto de la presente invención, los fármacos que se pueden utilizar en asociación con la D-manoheptulosa y/o perseitol, ventajosamente son fármacos que son adecuados para administración tópica u oral, para la prevención y/o tratamiento de atopías (corticoides, emolientes), de acné (antibióticos, peróxido de benzoilo, retinoides, ácido azeláico, vitamina PP, zinc, ciclinas), de eczema (inmunomoduladores, emolientes, aceite de salmón, aceite de borraja, prebióticos), de psoriasis (corticoides, calcipotriol, calcitriol, tazaroteno, aceite de enebro, acitretina, terapia PUVA). En el contexto de la presente invención, los factores de crecimiento que se pueden utilizar en asociación con la D-manoheptulosa y/o perseitol, ventajosamente son agentes anti-inflamatorios esteroides (AIS), tales como los corticoides, o agentes anti-inflamatorios no esteroides. En el contexto de la presente invención, los agentes de reestructurantes de la barrera cutánea que permiten la estimulación de la síntesis de los lípidos clave de la epidermis y los cuales se pueden utilizar en asociación con la D-manoheptulosa y/o perseitol, ventajosamente son concentrados linoléicos de girasol, tales como el agente comercializado por los Laboratorios Expascience, Soline® (ver la solicitud de patente internacional WO 01/21150); sustancias insaponificables de aceites vegetales, tales como Avocadofurane® (ver la solicitud de patente internacional WO 01/21150), agonistas PPAR (rosiglitazona, pioglitazona). Los agentes reestructurantes ventajosamente están presentes en una proporción de 0.001 a 30% en peso, en base al peso total de la composición o del fármaco. En el contexto de la presente invención, los antifúngícos que se pueden utilizar en asociación con la D-manoheptulosa y/o perseitol, ventajosamente son econazol y ketoconazol. En el contexto de la presente invención, los conservadores antisépticos que se pueden utilizar en asociación con la D-manoheptulosa y/o perseitol, son por ejemplo triclosán, clorhexidina, los amonios cuaternarios. En el contexto de la presente invención, los inmunomoduladores que se pueden utilizar en asociación, ventajosamente con un efecto sinérgico con la D-manoheptulosa y/o perseitol, ventajosamente son el tacrolimus, pimecrolimus y las oxazolinas. En el contexto de la presente invención, las oxazolinas que se pueden utilizar en asociación, ventajosamente con un efecto sinérgico con la D-manoheptulosa y/o perseitol, son ventajosamente las oxazolinas seleccionadas del grupo que consiste de 2-undecil-4-hidroximetil-4-metil-1 ,3-oxazolina, 2-undecil-4,4-dimetil-1 ,3-oxazoIina, (E)-4,4-dimetil-2-heptadec-8-enil-1 ,3-oxazolina, 4-hídrox¡metil-4-met¡l-2-heptadecíl-1 ,3-oxazol¡na, (E)-4-hidrox¡metil-4-metil-2-heptadec-8-enil-1 ,3-oxazolina, 2-undecil-4-etil-4-hidroximetil-1 ,3-oxazolina. Aún más ventajosamente, dicha oxazolina es 2-undecil-4,4-dimetil-1 ,3-oxazolina, llamada OX-100 ó Cycloceramlde®.

En el contexto de la presente invención, los compuestos que comprenden sustancias insaponificables de aceites vegetales, que se pueden utilizar, ventajosamente con un efecto sinérgico, en asociación con la D-manoheptulosa y/o perseitol, se seleccionan ventajosamente del grupo constituido por los lípidos furánicos del aguacate, sustancias insaponificables de aguacate y de la soya, concentrados de aceite de lupino, concentrados de aceite de girasol y sus mezclas. En el contexto de la presente invención, los lípidos furánicos del aguacate que se pueden utilizar, ventajosamente con un efecto sinérgico, en asociación con la D-manoheptulosa y/o perseitol, son ventajosamente los 2-alquil-furanos naturales, especialmente el Avocadofurane®, comercializado por los Laboratorios Expascience, los cuales se pueden obtener mediante el procedimiento descrito en la solicitud de patente internacional WO 01/21605. En el contexto de la presente invención, las sustancias insaponificables de aguacate y soya que se pueden utilizar, ventajosamente con un efecto sinérgico, en asociación con la D-manoheptulosa y/o perseitol, son ventajosamente una mezcla de sustancias insaponificables furánicas de aguacate y las sustancias insaponificables de soya, en una relación de aproximadamente 1/3-2/3. Las sustancias insaponificables de aguacate y soya son aún más ventajosamente el producto Piascledine®, comercializado por los Laboratorios Expascience. En el contexto de la presente invención, los concentrados de lupino que se pueden utilizar, ventajosamente con un efecto sinérgico, en asociación con la D-manoheptulosa y/o perseitol, son ventajosamente los concentrados obtenidos mediante la destilación molecular de aceite de lupino, ventajosamente aceite de lupino blanco, dulce, tal como aquéllos descritos en la solicitud de patente internacional WO 98/47479. Ventajosamente, los mismos comprende aproximadamente 60% en peso de sustancias insaponificables. En el contexto de la presente invención, los concentrados de aceite de girasol que se pueden utilizar en asociación, ventajosamente con un efecto sinérgico, con la D-manoheptulosa y/o perseitol, son ventajosamente ios concentrados linoléícos de aceite de girasol, tales como el principio activo comercializado por Laboratorios Expascience, Soline® (ver la solicitud de patente internacional WO 01/21150). La composición de conformidad con la invención se puede formular en la forma de diferentes preparaciones adaptadas para una administración tópica, administración ora!, recta, vagina!, nasal, auricular o bronquial, para una administración parenteral. Preferiblemente, estas diferentes preparaciones se adaptan para una administración tópica e incluyen cremas, ungüentos, lociones, aceites, parches, atomizadores o todos los demás productos para aplicación externa. Los modos de administración, las posologías y las formas galénicas óptimas de los compuestos y composiciones de conformidad con la invención, se pueden determinar de conformidad con los criterios que por lo general se consideran para establecer, en particular, un tratamiento farmacéutico dermatológico o veterinario, adaptado para un paciente o un animal, tales como, por ejemplo la edad y peso corporal del paciente o animal, la gravedad del estado general, la tolerancia al tratamiento, los efectos secundarios y el tipo de piel. Dependiendo del tipo deseado de administración, la composición y/o los compuestos activos de conformidad con la invención, también pueden comprender al menos un excipiente farmacéutico, en particular dermatológicamente aceptable. Preferiblemente, se utiliza un excipiente adaptado para una administración tópica, externa. La composición de conformidad con la presente invención, puede comprender además al menos un adyuvante farmacéutico conocido para la persona experta en la técnica y seleccionado entre los espesantes, los conservadores, los perfumes, los colorantes, los filtros minerales o químicos, los humectantes, las aguas minerales, etc. La presente invención también se refiere a un fármaco o una composición veterinaria que comprende 0.001 a 30% en peso de D-manoheptulosa y 0.001 a 30% en peso, en base al peso total del fármaco, aún más ventajosamente 0.01 a 10% en peso d D-manoheptulosa y 0.01 a 10% en peso de perseitol, y un excipiente farmacéuticamente apropiado. El fármaco o la composición veterinaria de conformidad con la invención, se puede formular en la forma de diferentes preparaciones adaptadas para una administración tópica, para una administración oral, rectal, vaginal, nasal, auricular o bronquial, para una parenteral. Los modos de administración, las posologías y las formas galénicas óptimas del fármaco o la composición veterinaria de conformidad con la invención, se pueden determinar de conformidad con los criterios que por lo general se consideran para establecer, en particular, un tratamiento farmacéutico dermatológico, adaptado para un paciente o un tratamiento veterinario. La presente invención también se refiere a una composición cosmética que comprende 0.001 a 30% en peso de perseitol y 0.001 a 30% en peso de D-manoheptulosa, en base al peso total de dicha composición, aún más ventajosamente 0.01 a 10% en peso de perseitol y 0.01 a 10% en peso de D-manoheptulosa. De acuerdo a una variante ventajosa de la invención, la fuente de D-manoheptulosa y/o perseitol es un extracto hidrosoluble de azúcares de aguacate, el cual se puede obtener de conformidad con un procedimiento al como aquél descrito anteriormente. De hecho, existe un efecto sinérgico entre la D-manoheptulosa, el perseitol y la minoría de azúcares (fructosa, glucosa, sacarosa) del aguacate. De acuerdo a una variante ventajosa de la invención, la composición comprende además un extracto peptídico de aguacate, ventajosamente en una cantidad sinérgica. El extracto peptídico de aguacate ventajosamente está presente en una cantidad de 0.001 a 30%, más ventajosamente 0.01 a 10%, en peso seco, en base al peso total de la composición. El extracto peptídico de aguacate, agregado en la composición de conformidad con la invención, ventajosamente comprende 2 a 10% en peso de nitrógeno alfa-aminado, en base al peso de la materia seca del extracto peptídico. El mismo se puede obtener de acuerdo a un procedimiento tal como aquél descrito anteriormente. De acuerdo a una variante ventajosa de la invención, la composición comprende además un extracto peptídico de lupino, ventajosamente en una cantidad sinérgica. El extracto peptídico de lupino ventajosamente está presente en una cantidad de 0.001 a 30%, más ventajosamente 0.1 a 10%, en peso seco, en base al peso total de la composición. El extracto peptídico de lupino, agregado en la composición de conformidad con la invención, comprende al menos 70%, ventajosamente al menos 80% en peso de péptidos, en base al peso de la materia seca del extracto peptídico. El mismo se puede obtener de acuerdo a un procedimiento tal como aquél descrito anteriormente. Además, la composición puede comprender al menos un composición seleccionado del grupo constituido por los re-estructurantes de la barrera cutánea y los compuestos que comprende las sustancias insaponificables de aceites vegetales, tal como se describe con anterioridad, ventajosamente en una cantidad sinérgica. En particular, la composición cosmética puede comprender un principio activo seleccionado del grupo que consiste de Soline®, Avocadofurane® y Piascledine®, comercializados por Laboratorios Expascience. La composición de conformidad con la invención ventajosamente comprende 0.001 a 30% en peso, en base al peso total de la composición, de al menos un re-estructurante de la barrera cutánea. La composición cosmética de conformidad con la invención se puede formular en la forma de diferentes preparaciones adaptadas para administración típica, una administración oral o rectal, vaginal, uretral, auricular, nasal o bronquial. Preferiblemente, estas diferentes preparaciones se adaptan para una administración tópica e incluyen cremas, ungüentos, lociones, aceites, parches, atomizadores o todos los demás productos para aplicación externa. Dependiendo del tipo deseado de administración, la composición y/o los compuestos activos de conformidad con la invención, también pueden comprender al menos un excipiente aceptable cosméticamente. La composición cosmética de conformidad con la presente invención, puede comprender además al menos un adyuvante farmacéutico conocido para la persona experta en la técnica y seleccionado entre los espesantes, los conservadores, los perfumes, los colorantes, los filtros minerales o químicos, los humectantes, las aguas minerales, etc. La presente invención también se refiere un método cosmético de tratamiento de piel sensible irritada, alérgica, seca, avejentada, intolerante y/o la mucosa que presenta un desorden de la barrera cutánea, que se vuelve frágil por una agresión del medio ambiente y que exhibe rojez cutánea, o que exhibe un desequilibrio inmunológico, no patológico, caracterizado en que el mismo consiste en aplicar una composición de conformidad con la invención en la piel y/o la mucosa. Finalmente, la presente invención se refiere a una composición nutriceútica que comprende D-manoheptulosa y/o perseitol y un excipiente aceptable, apropiado para alimentación. La composición nutriceútica de conformidad con la invención ventajosamente comprende 0.001 a 30% en peso de D-manoheptulosa, en base al peso total de dicha composición, aún más ventajosamente 0.01 a 10% en peso de D-manoheptulosa. La composición nutriceútica de conformidad con la invención ventajosamente comprende 0.001 a 30% en peso de perseitol, en base al peso total de dicha composición, aún más ventajosamente 0.01 a 10% en peso de perseitol. La composición nutriceútica de conformidad con la invención ventajosamente comprende 0.001 a 30% en peso de perseitol y 0.001 a 30% en peso de D-manoheptulosa, en base al peso total de dicha composición, aún más ventajosamente 0.01 a 10% en peso de perseitol y 0.01 a 10% en peso de D-manoheptulosa. De acuerdo a una variante ventajosa de la invención, la fuente de la D-manoheptulosa y/o perseitol es un extracto hidrosoluble de azúcares de aguacate, el cual se puede obtener de conformidad con un procedimiento tal como aquél descrito anteriormente. De acuerdo a una variante ventajosa de la invención, la composición comprende además un extracto peptídico de aguacate, ventajosamente en una cantidad sinérgica, ventajosamente en una cantidad de 0.001 a 30% de materia seca, en base al peso total de la composición. El extracto peptídíco de aguacate, agregado en la composición de conformidad con la invención, ventajosamente comprende 2 a 10% de nitrógeno alfa-aminado, en base al peso de la materia seca del en la presente. El mismo se puede obtener de conformidad con un procedimiento tal como aquél descrito anteriormente. De acuerdo a una variación ventajosa de la invención, la composición comprende además un extracto peptídico de lupino, ventajosamente en una cantidad sinérgica, ventajosamente en una cantidad de 0.001 a 30% de materia seca, en base al peso total de la composición. El extracto peptídico de lupino, agregado en la composición de conformidad con la invención, comprende al menos 70%, ventajosamente al menos 80% de péptidos, en base al peso de la materia seca del extracto peptídico. El mismo se puede obtener de conformidad con un procedimiento tal como aquél descrito anteriormente. Los siguientes ejemplos ilustran la presente invención, sin limitar la misma de ninguna manera.

EJEMPLO 1 Preparación de un extracto hidrosoluble de azúcares de aguacate Se cortan 50 kg de aguacates frescos de la variedad Hass en rodajas delgadas de 2 a 5 mm de grosor, incluido el hueso, por medio de un rebanador de disco. El equipo de secado fue un horno con flujo aire caliente termo-regulado. Los aguacates rebanados se distribuyeron a un grosor de 4 a 5 cm en los estantes en hileras. La temperatura de secado se estableció a 80°C y el tiempo de secado fue de 48 horas. Una vez secas, las frutas se prensaron en frío. Esta operación se llevó a cabo con una pequeña prensa de laboratorio Komet®. Los 4 kg de frutas deslipidizadas (torta oleaginosa) se molieron entonces en frío y luego se extrajeron bajo reflujo en la presencia de 25 litros de etanol. El polvo, exento de lípidos, se recuperó entonces mediante filtración a través de un embudo Büchner y se secó en el horno durante 5 horas a 50°C. La torta oleaginosa se lavó entonces con agua desmineralízada (10 litros) y luego se separó mediante centrifugación. La fracción soluble (líquido) se tomó para purificación y se concentró de conformidad con el siguiente método: Desmineralización mediante resinas de intercambio iónico: desmineralización de las heptulosas mediante su paso sobre resinas OH-luego sobre resinas H+. Ultrafiltración a 10,000 Da: La ultrafiltración se llevó a cabo con un sistema equipado con 4 membranas con un umbral de corte de 10 kDa. Concentración bajo vacío: El extracto purificado se concentra justo hasta un niye! de materia seca de 4% por medio de un evaporador bajo vacío. Empaque: La concentración del extracto se ajusta a 5% de materia seca y se agrega el conservador, luego el mismo se filtra bajo condiciones estériles con una membrana con un umbral de 0.2 µm y se envasa. El cuadro 3 proporciona la composición del extracto en azúcares C7 de aguacate, en 5% de materia seca, preparada de acuerdo al procedimiento descrito anteriormente: CUADRO 3 Se prepararon otros dos extractos siguiendo el mismo procedimiento, y el pH, la absorbancia y el contenido de azúcares C7 se proporcionan en el cuadro 4 posterior. El contenido de azúcares C7 corresponde a la suma del perseitol y D-manoheptulosa, analizada mediante HPLC.

CUADRO 4 EJEMPLO 2 Preparación de un extracto peptídico de aguacate Se cortaron 50 kg aguacates frescos de la variedad Hass en rodajas delgadas de 2 a 5 mm de grosor, incluido el hueso, por medio de un rebanador de disco. El equipo de secado fue un horno con flujo de aire caliente termo-regulado. Los aguacates rebanados se distribuyeron a un grosor de 4 a 5 cm en los anaqueles por hileras. La temperatura de secado se estableció en 80°C y el tiempo de secado fue de 48 horas. Una vez secas, las frutas se prensaron en frío. Esta operación se llevó a cabo con una pequeña prensa de laboratorio Komet®. Los 4 kg de frutas deslipidadas o sin lípidos (torta oleaginosa) se molieron entonces en frío luego se extrajeron bajo reflujo en la presencia de 25 litros de etanol. El polvo, exento de lípidos, se recuperó entonces mediante filtración a través de un embudo Büchner y se secó durante 5 horas a 50°C. La torta oleaginosa se lavó entonces con agua desmineralizada (10 litros) y luego se separó mediante centrifugación. La fracción sólida se absorbió en una solución acuosa, acidificada mediante HCl a un pH de 5, luego se puso en contacto con 2% de celulasas, en base a la materia seca. La duración de la hidrólisis se fijó en 6 horas. La mezcla se centrifugó entonces en la presencia de un adyuvante (2.5% en peso/v). El residuo recuperado se sometió entonces a una segunda hidrólisis a pH de 8.0 en la presencia de 0.5% de Alcalase® (una enzima comercial de la clase de las proteasas) a una temperatura de 55°C durante dos horas. La hidrólisis se mantuvo a pH constante mediante la adición continua de hidróxido de sodio 2M. Finalmente, la proteasa se desnaturalizó mediante calentamiento a 85°C durante 10 minutos. La mezcla resultante se centrifugó y el líquido sobrenadante se filtró a través de una membrana de 7.5 µm. Luego se sometió a ultrafiltración a través de membranas con un corte de 10 kD. El extracto peptídico crudo, resultante, tuvo 20% de materia seca y se decoloró en la presencia de carbón vegetal activado al 1 % Noria®, luego se filtró de nuevo a través de una membrana de 7.5 µm. El extracto decolorado se microfiltró entonces (0.2 µm), se diluyó a una concentración de 5% de materia seca, luego se agregó un conservador (0.4% en peso/v de Phenonip®) y el producto por último se envasó. Las propiedades del extracto peptídico hidrosoluble de aguacate (5% de materia seca) obtenido mediante este procedimiento, se proporcionan en el cuadro 5 posterior: CUADRO 5 Se prepararon otros extractos siguiendo el mismo procedimiento y los datos analíticos se proporcionan en el cuadro 6 posterior.

CUADRO 6 1N x 6.25 corresponde al contenido total de nitrógeno (N) de una muestra multiplicada por un coeficiente específico para la proteína analizada. Cuando el coeficiente para la proteína aislada no es conocido con precisión, luego el coeficiente de 6.25 se utiliza como un convencionalismo. En el aminograma dado en el cuadro 7 posterior, los valores se proporcionan en por ciento en peso en base al peso total de los aminoácidos analizados. Los valores para el ácido aspártico y ácido glutámico también incluyen contenidos de asparagina y glutamina, respectivamente.

CUADRO 7 Tri tofano no medido En los ejemplos 3 a 7, a menos que se indique de otra manera, los porcentajes se expresan en peso, en base al peso total de la materia seca.

EJEMPLO 3 Inducción de la Defensina Beta 2 medíante los azúcares de aguacate I. Inoculación de las células (JO): Los queratinocitos de humanos normales se inocularon en una placa de 96 pozos (aproximadamente 20,000 células/pozo), en la presencia de un medio específico, rico en calcio (concentración final 1.3 mM), como se describe previamente en la publicación "Human ß-Defensin-2 production in Keratinocytes is regulated by lnterleukin-1 , Bacteria, and the State of Differentiation", Alice Y. Liu et al., The Society for Investigative Dermatology, vol. 118, No. 2, Feb. 2002, páginas 275 a 281.

II. Tratamiento de células (Jl): Después de una incubación de 24 horas a 37°C, 5% de CO2: 2 enjuagues con 200 µl / pozo de PBS (amortiguador de fosfato en solución salina) estimulación de las células en 200 µl / pozo (en un medio suplementado con Ca++): mediante el extracto hidrosoluble de azúcares de aguacate a concentraciones de 0.5, 0.05 y 0.005 p/p de materia seca mediante IL-1 ß a una concentración de 100 ng/mL (control positivo de inducción dd hBD-2) III. Fin del tratamiento (J2): ELISA Después de 24 horas de incubación, se evaluó la inducción de la hBD-2 mediante un método ELISA con un anticuerpo específico (anticuerpo policlonal de cabra para BD2 humana; Abcam; ab9871). Los resultados obtenidos con el extracto hidrosolubie de azúcares de aguacate, lote A, que comprende 40% de D-manoheptulosa y 40% de perseitol, en base al peso seco, se resumen en el cuadro 8 posterior: CUADRO 8 * Estadísticamente significativo con respecto a las células de control (p<0.05 Análisis de Student) MTT: Metiltiazoliltetrazolio Se observó que la cantidad de hBD-2 producida se incrementa por el extracto hidrosoluble de azúcares de aguacate, lote A, de conformidad con la invención. Los resultados obtenidos con el lote B, que comprende 10% de D-manoheptulosa y 70% de perseitol, en base al peso seco, se resumen en el cuadro 9 posterior: OD = densidad óptica CUADRO 9 * Estadísticamente significativo con respecto a las células de control (p<0.05 Análisis de Student) Se observó que la producción de hBD-2 se incrementa de una manera dependiente de la dosificación por el extracto hidrosoluble de azúcares de aguacate, lote B.

EJEMPLO 4 Efecto de los azúcares de aguacate en la expresión de la hBD-2 en las células epiteliales 1. Células Las células KB (ATCC CCL-17), la línea de células epiteliales de un carcinoma oral humano, comúnmente utilizado en los estudios de la cavidad bucal, se inocularon en placas de 96 pozos y se cultivaron en RPMI 1640 (Roswell Park Memorial Institute Médium) con Glutamax™1 en VFS (suero fetal de ternera) al 10% + antibióticos. 2. Tratamiento Después de 24 horas de incubación, el medio de cultivo se eliminó y la capa celular se enjuagó dos veces con PBS. Las células se trataron entonces bajo las condiciones definidas anteriormente durante 24 y 48 horas: Células de control: medio solamente TNFa (comercializado por Sigma) a 100 ng/mL extracto hidrosoluble de azúcares de aguacate (40% de manoheptulosa/40% de perseitol) a 0.005-0.05 y 0.5 p/p (de materia seca) (lote A) 3. Fin del tratamiento Análisis de los péptidos antimicrobianos mediante ELISA en las células Después de 48 horas de incubación bajo las diferentes condiciones de tratamiento, las defensinas ß 2 y 3 y la LL-37 presentes en las células KB, se analizaron mediante un método ELISA en las células. Con el fin de determinar el número total de células en cada pozo, se realizó en paralelo una prueba con MTT en las células tratadas bajo las mismas condiciones.

Utilización de los resultados Para cada condición de tratamiento, la OD450 de los AMPs (péptidos antimícrobianos) se dividió por la OD570 de MTT, para calcular la cantidad de AMPs producidos por célula viva. Los promedios y las desviaciones estándar se calcularon para cada condición y la inducción de diferentes AMPs, se calculó como el incremento en porcentaje con respecto a las células de control. 4. Resultados Inducción de hBD-2 El TNF-a utilizado aquí como el control positivo de la inducción de los AMPs, provoca un incremento significativo en la producción de hBD-2 de 239% en 48 horas mediante las células KB. Este análisis valido el modelo.

El extracto hidrosoluble de azúcares de aguacate también induce un incremento estadísticamente significativo en la producción de hBD-2 en las células KB (ver los resultados en el cuadro 10).

CUADRO 10 ül Inducción de HBD-3 El TNF-a utilizado aquí como el control positivo de la inducción de los AMPs, provoca un incremento significativo en la producción de hBD-3 del 30% en 48 horas mediante las células KB. Este análisis valida el modelo. El extracto hidrosoluble de azúcares de aguacate también induce un incremento estadísticamente significativo en la producción de hBD-3 en las células KB (ver los resultados en el cuadro 11 ).

CUADRO 11 - i Inducción de LL-37 El TNF-a utilizado aquí como el control positivo de la inducción de los AMPs, provoca un incremento significativo en la producción de LL-37 del 88% en 48 horas mediante las células KB. Este análisis valida el modelo. El extracto hidrosoluble de azúcares de aguacate también induce un incremento estadísticamente significativo en la producción de LL-37 en las células KB (ver los resultados en el cuadro 12).

CUADRO 12 CD En conclusión, se ha demostrado que los azúcares de aguacate (extracto hidrosoluble de azúcares de aguacate) son capaces de inducir la síntesis de péptidos antimicrobianos, y especialmente las hBD-2, -3 y LL-37 en el tipo KB de las células epiteliales.

EJEMPLO 5 Efecto de los azúcares de aguacate en moléculas pro-inflamatorias Método: Los queratinocitos de humanos normales se inocularon en una placa de 24 pozos (aproximadamente 50,000 células/pozo), en la presencia de un medio específico, rico en calcio (concentración final 1.3 mM), como se describe previamente en la publicación "Human ß-Defensin-2 production ¡n Keratinocytes is regulated by lnterleukin-1 , Bacteria, and the State of Differentiation", Alice Y. Liu et a!., The Society for Investigative Dermatology, vol. 118, No. 2, Feb. 2002, páginas 275 a 281. Las células se trataron durante 24 horas en la presencia de 0.05% p/p de azúcares de aguacate (lote A, 40% de manoheptulosa/40% de perseitol). Las citoquínas pro-inflamatorias IL-1ß, IL-8 y TNF-a se analizaron mediante un método ELISA (equipos R&D System) en el líquido sobrenadante del cultivo. La viabilidad celular se midió mediante un análisis con rojo neutro. Los resultados se expresaron con respecto a la OD del rojo neutro para convertir la cantidad de citoquinas producidas a la cantidad de células vivas. (cuadros 13, 14, 15).

Resultados: CUADRO 13 CUADRO 14 CUADRO 15 Conclusión Los azúcares de aguacate (extracto hidrosoluble de azúcares de aguacate) no inducen la producción de moléculas pro-inflamatorias usualmente co-expresadas con las defensinas beta (IL-1 , IL-8, TNF-a). Por lo tanto, los azúcares de aguacate son inductores de AMPs pero sin ser pro-inflamatorios.

EJEMPLO 6 Modulación de la síntesis de hBD-2 mediante los diferentes azúcares presentes en el extracto de azúcares de aguacate.

Se llevó a cabo el mismo análisis que en el ejemplo 3 con: una mezcla de fructosa (5%), glucosa (5%) y sacarosa (3%); - D-manoheptulosa (40%); perseitol (40%); una mezcla de fructosa (5%), glucosa (5%) sacarosa (3%) y D-manoheptulosa (40%); una mezcla de fructosa (5%), glucosa (5%) sacarosa (3%) y perseitol (40%); una mezcla de fructosa (5%), glucosa (5%) sacarosa (3%) D-manoheptulosa (40%) y perseitol (40%); y un extracto de azúcares de aguacate (lote A).

El extracto de azúcares de aguacate comprende 40% en peso de D-manoheptulosa y 40% en peso de perseitol, en base al peso total del a materia seca. Los resultados se proporcionan en el cuadro 16 posterior: CUADRO 16 Azúcares) analizados: Modulación de laslnte=is de H BD-2 proporciones correspondientes a 1% de C% de incremento con respecto a las una solución al 5% de MS del lote A es células de control) decir 0.05% de MS mez a de fructosa, glucosa y= ac ros a 0 D-m no eptulo= a 31 Perseitol 12 mezcla de fructosa, glucosa, sacarosa 51 y D-manoheptulosa mezcla de fructosa, glucosa, sacarosa y 37 perseítol mezcla de fructosa, glucosa, sacarosa, 51 perse 'rio I y D-manoheptulosa azúcar de aguacate 49 La minoría de azúcares de aguacate (fructosa, glucosa y sacarosa) no tienen ningún efecto en la síntesis de la HBD-2. Para la misma cantidad (40% en peso con respecto al peso de la materia seca), la D-manoheptulosa es más activa que el perseitol. Cuando la D-manoheptulosa y/o perseitol se mezcla con la minoría de azúcares de aguacate (fructosa, glucosa y sacarosa), se observa un efecto sinérgico. La mezcla, fructosa, glucosa, sacarosa, perseitol y D-manoheptulosa (mezcla reconstituida), y el extracto hidrosoluble de azúcares del aguacate obtenido en el ejemplo 1 , tienen una actividad equivalente.

EJEMPLO 7 Actividad de la D-manoheptulosa y perseitol de origen comercial.

Se llevó a cabo el mismo análisis que en el ejemplo 3 con D-manoheptulosa y perseitol disponibles comercialmente. Los resultados se proporcionan en el cuadro 17 posterior: CUADRO 17 Células IL-1 beta D-manoD-manoPerseitol Perseitol de control co ntrol heptulosa heptulosa (00012%) (0012%) positivo (00012%) (OJ012%) Promedio 0.040 0.104 0.089 0£89 0063 0.090 Analizados por separado, la D-manoheptulosa y perseitol son capaces reinducir la producción de hBD-2.

EJEMPLO 8 Efecto de los azúcares de aguacate en la expresión de la hBD-2 modulada mediante IL-4, en el contexto de un modelo in vitro de dermatitis atópica Los queratinocitos de humanos normales se inocularon como se describe en el ejemplo 3. Después de 24 horas de incubación a 37°C, 5% de C02, el medio de cultivo se eliminó y la carpeta celular se enjuagó dos veces con PBS. Las células se trataron entonces durante 24 horas bajo las condiciones definidas posteriormente: Células de control: medio solamente - IL-1ß a 100 ng/mL (control positivo para la inducción de hBD-2) IL-4 a 50 ng/mL Extracto hidrosoluble de azúcares del aguacate (lote A) en 0.5% p/p de materia seca - IL-1 ß en 100 ng/ml e IL-4 a 50 ng/ml IL-4 en 50 ng/ml y extracto hidrosoluble de azúcares del aguacate (lote A) en 0.05% p/p de materia seca IL-1 en 100 ng/ml e IL-4 a 50 ng/mL y extracto hidrosoluble de azúcares del aguacate (lote A) en 0.05% p/p de materia seca. Al final del tratamiento, se evaluó la inducción de hBD-2 mediante un método ELISA en las células; en paralelo, con el fin de determinar el número total de células en cada pozo, se realizó un análisis con MTT en paralelo en las células tratadas bajo las mismas condiciones. Por consiguiente, para cada condición, la OD450 de la hBD-2 se dividió por la OD 70 de MTT, para obtener la cantidad de hBD-2 producida por célula viva. Los resultados se presentan en el cuadro 18 posterior: CUADRO 18 n 10 p < 0.01 ; ** p < 0.05 con respecto a las células de control (Análisis T de Student) p < 0.05 con respecto a las células de control positive (Análisis T de Student) p < 0.01 con respecto a la IL-1 ß + IL-4 (Análisis T de Student) 15 La IL-1ß de control positivo induce un incremento significativo en la síntesis de la hBD-2 con respecto a las células de control (+80%). De la misma manera, el extracto hidrosoluble de azúcares de aguacate, lote A, incrementa la síntesis de la hBD-2 (+48%). La IL-4 sola, no tiene influencia en la cantidad de hBD-2 expresada por los queratinocitos. En la presencia de la IL-4, la síntesis de la hBD-2 inducida por la IL-1 es significativamente inhibe en 32%. Bajo estas condiciones, la adición del lote A, a la IL-1 ß + IL-4 de nuevo incrementa la síntesis de la hBD-2: incremento significativo del 152% con respecto a la IL-1ß + IL-4.

Conclusión La dermatitis atópica se caracteriza por una deficiencia en los péptidos antimicrobianos (hBD-2, hBD-3, LL-37). Esta deficiencia se puede explicar, especialmente por una desregulación del balance TH1/TH2 y una sobreproducción de las citoquinas TH2 (IL-4 e IL-13). En este modelo, se ha demostrado que el extracto hidrosoluble de azúcares del aguacate, es capaz de contrarrestar la inhibición de la hBD-2 inducida por la IL-4. Los azúcares de aguacate por lo tanto son de interés para hacer frente a la dermatitis atópica.

EJEMPLO 9 Formulaciones cosméticas de la invención Crema anti-acné no. 1 Isononanoato de isononilo 7.000 Maleato de Di-alquilo de C12-13 7.000 Estearato de isocetilo 5.000 Butilenglicol 3.000 Oriza Sativa 2.500 Extracto hidrosoluble de azúcares de aguacate 3.000 Éter dicaprilílico 2.000 Salicilato de Silandiol 2.000 Alcohol aracnídico 1.650 Trometamina 1.180 Alcohol cetílico 1.000 Ácido salicílico 1.000 Glucósido de ascorbilo 1.000 Glicina 1.000 Acetato de tocoferilo 1.000 Alcohol behenílico 0.900 Escualeno 0.790 Citrato de sodio 0.660 Copolímero PPG-12/SMDI 0.500 Glucósido de araquidilo 0.450 Perfume 0.400 Esclerocio de goma 0.160 Alcohol cetearílico 0.130 Ácido cítrico 0.110 Sepigel 350* 0.100 Sistema conservante QS Agua QSP 100 * producto comercializado por Seppic Emulsión de lavado en espuma para pieles con acné no. 1 Agua QSP 100 Arlatone dúo* 20.00000 Glucósido de Coco- 12.00000 Hidroxipropilo de guar 2.00000 Extracto soluble de azúcares de aguacatel .00000 Palmato PEG-200 de glicerilo hidrogenado! 10000 Cocoato de glicerilo PEG-7 1.10000 Salicilato de Silandiol 1.00000 DEA de Cocamida 1.00000 Glicina de Capriliol 0.50000 Sorbato de potasio 0.50000 Policuatemio 10 0.40000 Perfume 0.40000 Ácido cítrico 0.30000 PCA de zinc 0.20000 producto comercializado por Quimasso Emulsión de lavado en espuma para pieles con acné no. 2 Agua QSP 100 Arlatone dúo* 20.00000 Glucósido de Coco 12.00000 Hidroxiproxi de guar 12.00000 Extracto soluble de azúcares de aguacate2.00000 Palmato PEG-200 de glicerilo hidrogenadol .10000 Cocoato de glicerilo PEG-7 1.10000 Salicilato de Silandiol 1.00000 DEA de Cocamida 1.00000 Capriliol de glicina 0.50000 Sorbato de potasio 0.50000 Policuaternio 10 0.40000 Perfume 0.40000 Ácido cítrico 0.30000 PCA de zinc 0.20000 producto comercializado por Quimasso Pasta dentífrica Agua QSP 100 Extracto soluble de azúcares de aguacate2.00 Monofluorofosfato de sodio 0.75 Fluoruro de sodio 0.10 Sorbitol al 70% 35 Sílice sintética, altamente abrasiva 13 Sílice sintética, débilmente abrasiva 5 Carboximetilcelulosa de sodio 1.6 Lauril-sulfato de sodio 1 Aroma de mentol 0.85 Dióxido de titanio 0.5 Lejía 0.5 Ciclamato de sodio 0.3 Mentol 0.15 Sacárido de sodio 0.07 Enjuague bucal ACTMP 193 ® (péptidos de lupino) 2.00 Cremophor RH40 ® 0.30 Glicerina 15 Sacárido de sodio 0.03 Extracto soluble de azúcares de aguacatel .00 Aroma EUCA MINT 0.08 POBM 0.20 Sorbato de potasio 0.50 Agua QSP 100

Claims (20)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- El uso de una composición que comprende D-manoheptulosa y/o perseitol y un excipiente farmacéuticamente aceptable para la elaboración de un fármaco o una composición veterinaria dirigida a tratar y/o prevenir padecimientos relacionados con una modificación de la inmunidad natural y/o adquirida por una producción incrementada de péptidos antimicrobianos de la familia de las catelicidinas y/o las defensinas beta, ventajosamente la hBD-2. 2.- El uso de una composición que comprende D-manoheptulosa y/o perseitol y un excipiente farmacéuticamente apropiado para la elaboración de un fármaco o una composición veterinaria dirigida a tratar y/o prevenir padecimientos relacionados con una modificación de la inmunidad natural y/o adquirida por una producción incrementada de péptidos antimicrobianos, tales como un inhibidor específico de la elastasa, particularmente la elafina

(SKALP).

3.- El uso como se reclama en la reivindicación 1 ó 2, en donde dichos padecimientos están relacionados con la presencia de microorganismos tales como las bacterias Gram+ y/o Gram-, los hongos, las levaduras o los virus.

4.- El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones previas, en donde dichos padecimientos se seleccionan del grupo constituido por:- infecciones de la piel y fanera, particularmente seleccionadas del grupo constituido por foliculitis, caspa, hiper-seborrea, furúnculos, apostemas, impétigo o panadizo; - dermatosis inflamatorias, tales como dermatitis atópica, eczema atópico y/o adquirido por contacto, psoriasis, acné e irritaciones de la piel; - padecimientos asociados con una modificación del equilibrio Th1 Th2; -padecimientos asociados con una modificación de la síntesis de citoquinas, tales como la lL-4 y/o IL-13; ó - quemaduras.

5.- El uso cómo se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde dichos padecimientos son patologías relacionadas con una deficiencia de la barrera cutánea, tales como la piel hiper-reactiva, atópica, seca o avejentada, o patologías relacionadas con la piel, las cuales se han atenuado por una agresión del medio ambiente.

6.- El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el fármaco es adecuado para la protección de: - la piel sana e inmadura de bebés y niños; - la pie! patológica e inmadura de bebés y niños; o - la piel sana o patológica de individuos adultos o ancianos.

7.- El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el fármaco es adecuado para mejorar el procedimiento de levantamiento en la cicatrización normal o patológica, tales como las ulceras y costras.

8.- El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el fármaco está dirigido al tratamiento y/o la prevención de padecimientos parodontales (del tejido de la fibra del diente).

9.- El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el fármaco está dirigido al tratamiento y/o la prevención de patologías inflamatorias de las articulaciones, tales como la artritis.

10.- El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el fármaco está dirigido al tratamiento y/o la prevención de infecciones de la mucosa, en especial la mucosa vaginal, intestinal, respiratoria, nasal o auricular.

11.- El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el fármaco está dirigido al tratamiento y/o la prevención de infecciones del sistema ocular.

12.- El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la composición comprende 0.001 a 30% en peso de D-manoheptulosa, en base al peso total de dicha composición, y/o 0.001 a 30% en peso de perseítol, en base al peso total de dicha composición.

13.- El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la fuente de D-manoheptulosa y/o perseitol es un extracto hidrosoluble de azúcares de aguacate.

14.- Un procedimiento para obtener un extracto hidrosoluble de azucares de aguacate, que comprende los siguientes pasos sucesivos:-obtener una torta oleaginosa de aguacate, ventajosamente de la fruta de aguacate, secando el aguacate luego extrayendo los lípidos; luego del -molido criogénico y deslipidación total de dicha torta oleaginosa, decantar y centrifugar para recuperar la fracción soluble rica en azúcares C7 (eliminación de la torta); - desmineralización sobre una resina iónica de dicha fracción soluble obtenida del paso precedente; luego - ultrafiltración a 10,000 daltons; y - concentración bajo vacío y envasado.

15.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado además porque el extracto hidrosoluble de azúcares del aguacate comprende en peso, en base al peso total de la materia seca en el extracto (composición relativa determinada mediante HPLC): - D-manoheptulosa 5 a 80%; -Perseitol 5 a 80%; - Sacarosa menos del 10%; -Glucosa menos del 10%; - Fructosa menos del 10%.

16.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado además porque la composición comprende además un extracto peptídico de aguacate, especialmente un extracto peptídico de aguacate que comprende 2 a 10% en peso de nitrógeno alfa-aminado, en base al peso de la materia seca del extracto peptídico.

17. Un fármaco que comprende 0.001 a 30% en peso de D-manoheptulosa y 0.001 a 30% en peso de perseitol, en base al peso total del fármaco, y un excipiente farmacéuticamente aceptable, apropiado.

18. Una composición cosmética o nutriceútica que comprende 0.001 a 30% en peso de D-manoheptulosa y 0.001 a 30% en peso de perseitol, en base al peso total de dicha composición, y respectivamente un excipiente alimentario o cosméticamente aceptable, apropiado.

19. La composición cosmética o nutriceútica de conformidad con la reivindicación 18, caracterizada además porque comprende un extracto peptídico de aguacate.

20.- Un método cosmético para el tratamiento de la piel sensible, irritada, alérgica, seca, avejentada, intolerante y/o la mucosa que presenta un desorden de la barrera cutánea, que se vuelve frágil por una agresión del medio ambiente y que exhibe enrojecimiento cutáneo, o que exhibe un desequilibrio inmunológico, no patológico, caracterizado porque el mismo consiste en aplicar una composición de conformidad con la reivindicación 18 ó 19, en la piel y/o la mucosa.