MXPA06000974A

MXPA06000974A - Antagonistas y agonistas de ldcam y metodos para su uso.

Info

Publication number: MXPA06000974A
Application number: MXPA06000974A
Authority: MX
Inventors: Wei Yan
Original assignee: Amgen Inc
Priority date: 2003-07-25
Filing date: 2004-07-23
Publication date: 2006-08-31
Also published as: US20080064104A1; ATE554108T1; EP2133362A1; EP1648935A2; EP2133362B1; WO2005012530A2; AU2004261941B2; JP2007500132A; AU2004261941A1; US20050058642A1; CA2533512A1; CA2533512C; US8043615B2; US7267960B2; ES2383328T3; WO2005012530A3

Abstract

La invencion pertenece a agonistas y antagonistas de LDCAM y metodos para tratar enfermedades e infeccion a traves de la administracion de uno o mas antagonistas o agonistas de LDCAM. Este resumen se provee para el solo proposito de habilitar al lector para que rapidamente evalue el tema principal de la descripcion tecnica y no pretende utilizarse para interpretar o limitar el alcance o significado de las reivindicaciones. 37 CFR 1.72(b).

Description

ANTAGONISTAS Y AGONISTAS DE LDCAM Y MÉTODOS PARA SU USO REFERENCIA CRUZADA CON LAS SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud reclama el beneficio de acuerdo con 35 U.S.C. ?119 de la Solicitud Provisional de E.U.A. Número de Serie 60/490,027, presentada el 25 de julio del 2003.

ANTECEDENTES 1. CAMPO DE LA INVENCIÓN Las modalidades de la invención generalmente pertenecen a agonistas y antagonistas de LDCAM, así como a métodos para tratar la enfermedad a través de la administración de uno o más antagonistas o agonistas de LDCAM. 2. DESCRIPCIÓN DE LA TÉCNICA RELACIONADA LDCAM es una molécula de adhesión de célula que ha demostrado que modula la función de la célula T a través de la interacción con una o más moléculas de superficie de la célula T, por lo tanto causando la alteración de la señalización celular. LDCAM ha demostrado que se auto-asocia para formar un omodímero o enlace a B7L-1. LDCAM también demostró que genera aumentos en las poblaciones de célula aniquiladora natural. La Solicitud de Patente de E.U.A. Serie No. 09/778,187 presenta el 6 de febrero del 2001, describe LDCAM y se incorpora aquí por referencia en su totalidad. LDCAM también es referida en la técnica como Igsf4, TSLC1, SynCAM y Nectina-de íipo-2 y se ha caracterizado como un miembro de la familia de tipo Nectina de receptores de superficie de célula de tipo inmunoglobulina y como teniendo tres dominios C2 de tipo Ig. El extremo citoplásmico de los receptores de tipo Nectina tiene un sitio de unión de proteína 4.1 de banda y un sitio de unión de proteína aPDZ. LDCAM se ha identificado como un gen supresor de tumor eliminado en el carcinoma de pulmón de célula no pequeña y teniendo homología con NCAM (Gomyo y otros Genomics 62: 139-146 (1999) y Kuramochi y otros Nat Genet 27 (4): 427-30 (2001) Masuda y otros J. Bíol. Chem. 277 (34): 31014-9 (2002)). Como se describe en la presente, se ha descubierto que LDCAM se une a CRTAM. CRTAM se ha descrito como un miembro de la familia de marcadores de superficie de célula inicialmente diseñados como una molécula asociada con la célula T restringida de clase I (CRTAM)(patente de E.U.A. No. 5,686,257). Las íécnicas de substracción de la colección de ADNc mosíraron que las íranscripciones de ARNm se expresaron a través de células T de ratónalfabeta TCR+CD4-CD8 (doble-negativo) acíivado, un subgrupo de células aniquiladoras naturales T (NKT). El CRTAM humano también se ha identificado, y comparte el mismo patrón de expresión que la molécula de ratón. LPTN y CRTAM exhiben el mismo patrón de expresión en células T, sugiriendo la existencia de programa de expresión de gen común con la clasel-MHC-células T restringidas (Kennedy, et al., J Leuk Bio 67, 725 (2000)).

COMPENDIO DE LA INVENCIÓN Las modalidades de la presente invención proveen antagonistas y agonistas de LDCAM. En una modalidad, los agonistas de LDCAM y los antagonistas de LDCAM se pueden unir a uno de los asociados de unión de LDCAM, los cuales incluyen, pero no se limitan a, LCDAM, CRTAM y B7L-1. Los agonistas y los antagonisías de LDCAM incluyen polipépíidos LDCAM solubles, así como fragmentos biológicamente activos y variantes de los mismos, proteínas de fusión, derivados y similares. Los agonistas y antagonisías de LDCAM íambién incluyen íodas las formas de aníicuerpos, pepíicuerpos, e intracuerpos dirigidos coníra LDCAM o sus asociados de unión. Los aspecíos de la preseníe invención se describen para descubrir un nuevo subgrupo de de células dendrííicas humanas (BDCA3 + ) que son la confraparíe humana de las células dendríticas CD8a+. Esíe subgrupo de células dendríticas representa un antígeno inmunoregulador único que presenta células en que son responsables de la presentación cruzada del antígeno, la preparación cruzada y también la tolerancia cruzada. Una modalidad particular comprende un anticuerpo que tiene la secuencia provista en la Figura 6. Ei scfv específico de LDCAM puede tomar la forma de varias modalidades, como se describe con mayor detalle más adelante, la cual incluye una proíeína de fusión scfv-Fc. Otro asociado de unión de LDCAM ha sido descubierío. LDCAM se une a CRTAM, el cual se expresa a niveles altos de células T activadas, células NK y células NK-T. Por consiguiente, las modalidades de la invención incluyen agonistas y antagonistas de la interacción o unión de LDCAM y CRTAM. Las modalidades adicionales se describen en detalle más adelante.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 muestra fenotípificación de un nuevo grupo de células dendríticas humanas que son la contraparíe humana de las células dendrííicas CD8a+ de raíón, las cuales son aníígenos inmunomoduladores críticos que presenían células para la presentación cruzada y la tolerancia cruzada. La Figura 2 es un cuadro de genes compartidos entre las células dendríticas CD8a+ de ratón y las células dendríticas BDCA3 + h u ma ñas. La Figura 3 es una gráfica que muestra que las células dendríticas BDCA3+ humanas con alo-simuladores potentes. La Figura 4 es una serie de exploraciones FACS que muestran que el fago IF12 que expresa scfv específicamente se une a las células dendrííicas BDCA3+ humanas. La Figura 5 es una exploración FACS que ilusíra que la proíeína de fusión IF12 scfv-Fc ("maxicuerpo") reíuvo la especificidad global con LCDAM después de la conversión de un fago scfv a una proteína de fusión scfv-Fc. La Figura 6 es la secuencia de aminoácido para las regiones variables de las cadenas pesada y ligera para scfv IF12 (anti-LDCAM scfv). La Figura 7 es una imagen de un gel de inmunoprecipitación que muestra que IF12 scfv-Fc se inmunoprecipitó en una glicoproteína 100KDa de médula espinal derivada de células dendríticas de ratón, las cuales subsecuentemente mostraron ser LDCAM a través de espectrometría de masa. La Figura 8 es una inmunotinción de puntos que muestra que el anticuerpo IF12-scfv específicamente se une a LDCAM-Fc recombinante pero no a RANK-Fc relacionado. Estos resultados demuestran que la proteína de fusión IF12 scfv-Fc específicamente se une a LDCAM. La Figura 9 muestra que las células T CD4+ se anergizaron a íravés de LDCAM para la acfivación a íravés de aníi-CD3 mAb, conA, PHA y conA + IL-2, respecíivameníe. Estos estudios demostraron que LDCAM está interacíuando con una molécula expresada en la superficie de las células T a íravés de una variedad de esiímulos. Estos estudios demostraron que LDCAM es un agente regulador en trayectorias inflamatorias.

La Figura 10 es una serie de exploraciones FACS que muestran que LDCAM-Fc se una a células T CD8+ y a una extensión menor de células T CD4+ (Figuras 10D y 10C, respectivamenfe), mieníras que el aníicuerpo 1F12 scfv-Fc (es decir, el aníicuerpo aníi-LDCAM) no lo hizo (Las Figuras 1 OA y 10B son coníroles de isoíipo). Estos esíudios demostraron que LDCAM está interactuando con una molécula expresada en la superficie de células T activadas en una naturaleza dependiente del contacto que previene o desestimula la activación de células T a través de una variedad de estímulos. Estos estudios demostraron que LDCAM es un agente regulador en trayectorias inflamatorias. La Figura 11 es una serie de exploraciones FACS que muestran que las células T CD8+ activadas-anti-CD3 se unen a LDCAM-Fc a altos niveles (Figura 11A) y solamente se unen marginalmente a través del anticuerpo 1F12 scfv-Fc (Figura 11B). En contraste, LDCAM-Fc mostró la unión marginal a LDCAM-Fc (Figura C) y una alta unión de la proteína de fusión 1F12 scfv-Fc (Figura 11D). Las células esplénicas CD8+ de ratones tratados con el ligando Flt3 mostraron una unión heterogénea tanto de LDCAM-Fc y 1F12 scfv-Fc (Figuras 11B y 11F, respectivamente). La Figura 12 es una serie de exploraciones FACS que muestran que la expresión de superficie de célula de la estructura de conteo LDCAM (CRTAM) temporalmente se expresa en la superficie de célula de células T CD4+ y CD8+ activadas. El análisis FACS mostró que la expresión de la superficie de célula de LDCAM-Fc que se une a su cognado en células T CD4+ diminuyó después de aproximadamente 24 horas (Figuras 12C, 12F y 121). Interesantemente, las células T CD8+ mostraron un fuerte incremento en la expresión de superficie de célula de CRTAM 24 horas después de la activación (Figura 12D) y una disminución progresiva de la expresión de la superficie de célula a las 48 y72 horas después de la activación (Figuras 12G y 12J, respectivamente). La expresión de LDCAM en la superficie de célula de las células T CD4+ y CD8+ fue mínima y no cambio a través del tiempo (Figuras 12B, 12E, 12H y 123K). Las Figuras 13A y 13B son un gel de una inmunoprecipitación. La Figura 13A es la banda ínmunoprecipitada a través de LDCAM-Fc de CTL acíivado. La Figura 13B es la banda inmunoprecipitada a través de 1F12 scfv-Fc de DC derivado de médula espinal.. Se obtuvieron similares resultados con CD8+ DC esplénica. La banda de la Figura 13A se extirpó y se analizó a través de espectrometría de masas, la cual confirma que CRTAM es el cognado de LDCAM. La Figura 14 es una gráfica que muestra los datos ELISA proveyendo que LDCAM específicamente se une a CRTAM. La Figura 15 representa un ensayo FACS que ilustra que las células EL4 se transdujeron con un vecíor leníivirus para expresar LDCAM (Figura 15A) o Nech (Figura 15B) en su superficie de célula. Las células íransducidas se expusieron a CRTAM-Fc humano recombinante soluble. La Figura 15A muestra que CRTAM-Fc se une a las células transducidas para expresar LDCAM (línea en negritas), pero no en células transducidas para expresar NecM (Figura 15B). La Figura 16 demuestra que el entrelazamiento de CRTAM con LDCAM-Fc regula de manera descendente la secreción de citocina (IFN?) a través de linfocitos T CD8+ de ratón activados in vitro. La Figura 17 son los datos de expresión diferencial que muestran que CRTAM se expresó a una extensión más grande en macrófagos, BDCA3+ DC, células cebadas, lesiones de la materia blanca de esclerosis múltiple activa, células NK activadas, leucocitos mezclados, y células T.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN 1. DEFINICIONES, LDCAM se define y se describe en la siguiente sección. CRTAM se define y se describe en la patente de E.U.A. No. 5,686,257, la cual se incorporan aquí por referencia en su totalidad.

Un "asociado de unión LDCAM" o "cognado LDCAM" es un cognado de LDCAM e incluye, pero no se limita a, LDCAM (a través de la agregación o asociación - cis y/o trans), CRTAM, B7L-1 (Necl-1), y B7L-4 (Nectina-3). El íérmino "biológicameníe acfivo) como se relaciona con LDCAM, significa que LDCAM es capaz de una o más de las siguientes actividades: unión LDCAM a LDCAM (tal como a través de asociación homotípica - cis y/o trans); unión a CRTAM; unión a B7L-1; unión a B7L-4 (Nectina-3); modulación de la acíividad de la célula T, tal como la prevención de la activación y la proliferación; disminución de la liberación de citocinas pro-inflamatorias, tales como, pero no limitándose a Interferón-gama e IL-2; modulación de las respuestas de la célula T para el estímulo de la activación; modulación de las respuestas de la célula T para la estimulación/activación de CD3; modulación de las respuestas de la célula T a la estimulación/activación de mitógeno; modulación de la actividad de la célula NK-T; modulación de la actividad de la célula NK; modulación de la actividad de la célula B; modulación de la expresión de citocina a través de células inmunes, tales como, pero no limitándose a, IL-1, INF-gama y otras citocinas pro-inflamatorias; modulación de la actividad entre células de presentación de antígeno y células T; modulación de la actividad entre células dendríticas y células T; modulación de la actividad entre células dendríticas BDCA3+ y células T; modulación de la actividad entre células de presentación de antígeno y células NK-T; modulación de la actividad entre células dendríticas y células NK-T; modulación de la actividad entre células dendríticas BDCA3+ y células NK-T; modulación de la actividad entre células de presentación de antígeno y células NK; modulación de la actividad entre células dendríticas y células NK; modulación de la actividad entre células dendríticas BDCA3+ y células NK; modulación de la actividad entre neuronas y células T; modulación de la actividad entre neuronas y células NK-T; y modulación de la actividad entre neuronas y células NK. La activación o desactivación de un receptor se define en la presente como la obligación de una o más trayectorias de señalización intracelular y la transducción de la señalización intracelular (es decir, la transducción de señal) en respuesta a una molécula que se une a un receptor enlazado a la membrana, tal como, pero no limitándose a, un receptor: interacción de ligando. "Transducción de señal", como se utiliza aquí, es la transmisión de una señal a través de la conversión de una forma física o química a otra. En la biología de la célula, el proceso a través del cual una celular se convierte una señal extracelular en una respuesta. Un "pepticuerpo" en general, se refiere a moléculas que comprenden por lo menos parte de un dominio Fc de inmunoglobulina y por lo menos un péptido. Dichos pepticuerpos pueden ser multímeros o dímeros o fragmentos de los mismos, y se pueden derivatizar. Los pepticuerpos son conocidos en la técnica y se describen con mayor detalle en WO 99/25044 y WO 00/24782, las cuales se incorporan aquí por referencia en su totalidad. El péptido puede estar en la forma de una secuencia de aminoácido de LDCAM B7L-1 o CRTAM. Un "péptido", como se utiliza aquí se refiere a moléculas de 1 a 100 aminoácidos. Las modalidades alternativas comprenden moléculas de 5 a 20 aminoácidos. Los péptidos ilustrativos pueden comprender porciones del domino extracelular de moléculas de existencia natural o comprenden secuencias aleatorizadsa de LDCAM- B7L-1 o CRTAM.

El término "aleatorizado" como se utiliza se refiere a secuencias de péptido que se refieren a secuencias completamente aleatorias (por ejemplo, seleccionadas a través de métodos de despliegue de fago o clasificación de ARN-péptido) y secuencias en las cuales uno o más residuos de una molécula de existencia natural es reemplazada por un residuo de aminoácido que no aparece en la posición en la molécula de existencia natural. Los méíodos ilustrativos para identificar secuencias de péptido incluyen el despliegue de fago, el despliegue E. coli, el despliegue de ribosoma, la clasificación de ARN-péptido, clasificación química y similares. El término "dominio Fc" abarca las moléculas y secuencias Fc y Fc variantes como se define más adelante. Como con las variantes Fc y las variantes nativas, el término "dominio Fc" incluye moléculas en forma monomérica o multimérica, ya sea digeridas de un aníicuerpo completo o producidas a través de otros medios. El íérmino "Fc nativo" se refiere a la molécula o secuencia que comprende la secuencia de un fragmento de unión no antígeno resultaníe de la digestión del anticuerpo completo, ya sea en forma monomérica o multimérica. La fueníe de inmunoglobulina original del Fc nativo es preferiblemente de origen humano y puede ser cualesquiera inmunoglobulinas, aunque Ig G 1 e lgG2 son preferida. Los Fes nativos se forman de polipéptidos monoméricos que pueden estar enlazados en formas diméricas o multiméricas a través de la asociación covalente (es decir, enlaces de disulfuro) o no covalentes. El número de enlaces de disulfuro intermoleculares entre las subunidades monoméricas de moléculas Fc nativas está en la escala de 1 a 4, dependiendo de la clase (por ejemplo, IgG, IgA, IgE) o subclase (por ejemplo, lgG1, lgG2, lgG3, Ig A1 , lgGA2). Un ejemplo de un Fc nativo es un dímero enlazado al disulfuro dando resultante de la digestión de papaína de un IgG ((ver Ellison y oíros (1982), Nucleic Acids Res. 10: 4071-9). El íérmino "Fc nativo" como se utiliza aquí es genérico para las formas monoméricas, diméricas y multiméricas. El término "Variante Fc" se refiere a una molécula o secuencia que se modifica a partir del Fc nativo pero aún comprende un sitio de unión para el receptor de recuperación, FcRn. Las solicitudes Internacionales WO 97/34631 (publicada el 25 de septiembre de 1997) y WO 96/32478 describen variantes Fc ilusíraíivas, así como la iníeracción con el receptor de recuperación, y se incorporan aquí por referencia en su totalidad. De esta forma, el íérmino "variante Fc" comprende una molécula o secuencia que está humanizada a paríir de Fc naíivo no humano. Además, un Fc naíivo comprende siíios que se pueden remover debido a que proveen caracterísíicas esíructurales o actividad biológica que no se requiere para las moléculas de fusión de la presente invención. De esía forma, el íérmino "variante Fc" comprende una molécula o secuencia que carece de uno o más sitios Fc nativos o residuos que afectan o están involucrados en (1) la formación del enlace de disulfuro, (2) incompatibilidad con una célula huésped seleccionada, (3) heterogenicidad N-terminal dependiendo de la expresión en una célula huésped seleccionada, (4) glicosilación, (5) interacción con el complemento, (6) enlace a un receptor Fc diferente del receptor de recuperación, o (7) ciíofoxicidad celular dependiente del anticuerpo (ADCC). Las variantes Fc se describen con mayor detalle más adelante. Un "peptidomimético" es un análogo de péptido que despliega más propiedades farmacológicas favorables que sus péptidos nativos de prototipo, tales como a) estabilidad metabólica, b) buena biodisponibilidad, c) alta afinidad del receptor y selectividad del receptor, y d) efectos laterales mínimos. El diseño de los peptidomiméticos y métodos para producir los mismos se conocen en la técnica (ver por ejemplo, U.S.P.N. 6,407,059 y 6,420,118). Los peptidomiméticos se pueden derivar del sitio de unión del dominio extracelular de LDCAM, B7L-1 o CRTAM. En modalidades alternativas, un peptidomiméíico comprende compuesíos no de pépíido que íiene la misma esíructura tridimensional que los péptidos derivados de LDCAM, B7L-1 o CRTAM, o compuestos en los cuales parte del péptido de las moléculas listadas anteriormente están reemplazados por una porción no de péptido que tiene ia misma estructura tridimensional. Un "mimótopo" se define aquí como secuencias de imiían los sitios de unión en las proteínas (ver Partidos, CD, y otros, Combinatorial Chem & High Throughput Screening, 20025:15-27). Un mimótopo puede tener la capacidad de imitar un siíio de unión dependiente de la conformación de una proteína. Las secuencias de estos mimótopos no identifican una secuencia nativa lineal coníinua o necesariamente ocurren en una proteína de existencia natural. Los mimótopos y métodos para la producción se enseñan en U. S. P. N. 5,877,155 y U. S. P. N. 5,998,577, las cuales se incorporan aquí por referencia en su totalidad. El término "residuo ácido" se refiere a los residuos de aminoácido en forma D- o L- que tienen cadenas laterales que comprenden grupos ácidos. Residuos ácidos ilustrativos incluyen D y E. El término "residuo de amida" se refiere a los aminoácidos en la forma D- o L- que tienen cadenas laterales que comprenden derivados de amida de grupos ácidos. Los residuos ilustrativos incluyen N y Q. El término "residuo aromático" se refiere a residuos de aminoácido en la forma D- o L- que tienen cadenas laterales que comprenden grupos aromáticos. Los residuos aromáticos ilustrativos incluyen, F, Y y W. El término "residuo básico" se refiere a residuos de aminoácido en la forma D- o L- que tienen cadenas laterales que comprenden grupos básicos. Los residuos básicos ilustraíivos incluyen, H, K y R. El término "residuo hidrofílico" se refiere a residuos de aminoácido en la forma D- o L- que tienen cadenas laterales que comprenden grupos polares. Los residuos hidrofílicos ilustrativos incluyen, C, S, T, N y Q. El término "residuo no funcional" se refiere a residuos de aminoácido en la forma D- o L- que tienen cadenas laterales que carecen de grupos ácidos, básicos o aromáticos. Los residuos de aminoácido no funcionales ilustrativos incluyen M, G, A, V, I, L y norleucina (Nle). El término "residuo hidrofóbico neutro" se refiere a residuos de aminoácido en la forma D- o L- que tienen cadenas laterales que carecen de grupos básicos, ácidos o polares. Los residuos de aminoácido hidrofóbico neutros ilustrativos incluyen A, V, L, I, P, W, M, y F. El término "residuo hidrofílico neutro" se refiere a residuos de aminoácido en la forma D- o L- que tienen cadenas laterales que carecen de grupos básicos, ácidos o polares. Los residuos de aminoácido hidrofóbicos neutrales ilustrativos incluyen, T, G, S, Y, C, Q y N. El término "residuo hidrofóbico" se refiere a residuos de aminoácido en la forma D- o L- que tienen cadenas laterales que carecen de grupos básicos o ácidos. Los residuos de aminoácido hidrofóbicos ilustrativos incluyen, A, V, L, I, P, W, M, F, T, G, S, Y C, Q, y N. El término "sujeto" como se utiliza aquí, se refiere a mamíferos. Por ejemplo, los mamíferos contemplados por la presente invención incluyen seres humanos; primates; mascotas de todas clases, tales como perros, gatos, etc.; animales domésticos, tales como, ovejas, ganados, cabras, puercos, caballos y similares; animales de laboratorio comunes, tales como ratones, ratas, conejos, conejillos de india, etc.; así como animales cautivos, tales como en un zoológico o animales salvajes libres. A lo largo de la especificación, el término huésped se utiliza de manera intercambiable con sujeto. "Aislado" significa que LDCAM, o un antagonisía de LDCAM o un agonisía LDCAM esíá libre de asociación con otras proteínas o polipéptidos, por ejemplo, como un producto de la purificación dei cultivo de célula recombinante o como un extracto purificado. Como se utiliza aquí las formas singulares "un", "y" y "el, la" incluye referentes plurales a menos que ei contexto claramente indique lo contrario. De esta forma, por ejemplo, la referencia a "una inmunización" incluye una pluralidad de dichas inmunizaciones y la referencia a "la célula" incluye la referencia a una o más células equivalentes de la misma conocidas por aquellos con experiencia en la técnica, etc. Todos los términos técnicos y científicos utilizados aquí tienen el mismo significado que comúnmente se entiende por uno con experiencia en la técnica a la cual está invención pertenece a menos que claramente se indique lo contrario. Para claridad, se proveen otras definiciones a lo largo de la especificación con el fin de mantener el término en el contexto apropiado de la descripción. Se entiende que Jas varias modalidades de esta invención no están limitadas a la meíodología particular, protocolos, líneas de célula, especies o géneros de animal, construcciones y reactivos descritos, ya que pueden variar. También se entiende que la terminología utilizada aquí es para el propósito de describir modalidades-particulares solamente, y no pretende limitar el alcance de la presente invención la cual se limitará solamente a través de las reivindicaciones anexas. 2. AGONISTAS Y ANTAGONISTAS DE LDCAM Un "antagonista" como se define aquí, es una molécula que parcialmente o completamente bloquea la unión de dos cognados, por lo tanío inhibiendo los efecíos biológicos en corriente descendiente de la iníeracción de los cognados. Por ejemplo, un antagonisía puede bloquear la unión de un ligando con su receptor, el cual a su vez reduce y/o previene la señalización intracelular a través de la activación de ese receptor, el cual a su vez reduce o previene los efectos biológicos en corriente descendiente de la activación del receptor, de tal forma pero no limitada a, la activación de célula, proliferación, diferenciación, liberación de citocina, sobre regulación de los genes, expresión de superficie de célula de proteínas, y similares. Por supuesto, un antagonista puede bloquear la interacción de otras formas de cognados, tales como las moléculas de adhesión. Por consiguiente, un "antagonista LDCAM" es una molécula que antagoniza una o más de las actividades biológicas de LDCAM. Un antagonista LDCAM incluye, pero no se limita a: anticuerpos específicos de LDCAM, pepticuerpos específicos de LDCAM o polipéptidos solubles que unen LDCAM (tales como los polipéptidos LDCAM, CRTAM, B7L-4 y B7L-1) que parcialmente o completamente bloquean la unión de LDCAm con uno o más asociados de unión de LDCAM (tales como, pero no limitándose a, LDCAM, CRTAM B7L-4, y B7L-1). Un antagonista LDCAM que bloquea la unión entre LDCAM y CRTAM no activa CRTAM, lal como la unión a CRTAM y el entrelazamiento del receptor CRTAM. Los ejemplos adicionales incluyen: anticuerpos específicos de CRTAM y pepticuerpos específicos de CRTAM o polipéptidos solubles de CRTAM que unen LDCAM y parcialmente o completamente bloquean la unión entre LDCAM y CRTAM, los anticuerpos específicos B7L-1, los pepticuerpos específicos B7L-1 o polipéptidos solubles de B7l-$ que unen LDCAM y parcialmente o completamente bloquean ia unión entre LDCAM y B7L-4 u oros asociados de unión de LDCAM, tales como CRTAM. Los antagonistas presentados aquí comprenden polipéptidos solubles, aislados, anticuerpos, proteínas de fusión y pépticuerpos dirigidos contra uno o más de los siguientes: LDCAM, B7L-1, B7L-4 o CRTAM. Los antagonistas presentados aquí además comprende moléculas pequeñas, tales como peptidomiméticos, y mimótopos, y similares, que antagonizan la interacción entre LDCAM, B7L-1, B7L-4 o CRTAM. Los antagonistas adicionales comprenden oligonucleótidos antisentido que específicamente activan e hibridizan el ARNm de LDCAM, B7L-1, B7L-4, o CRTAM por lo tanto previniendo la traducción del gen de sus respectivas proteínas. Las modalidades adicionales comprende la desconexión dei gen a través de moléculas de interferencia de ARN personalizadas para silenciar la expresión de LDCAM, B7L-1, B7L-4, O CRTAM. Las definiciones y ejemplos más específicos de antagonisías particulares se proveen en las siguientes secciones. Un "agonista", como se define aquí, es una molécula que activa los efectos biológicos en corriente descendiente de la interacción de los cognados. Por ejemplo, un agonista puede imitar la unión de un ligando a su receptor, lo que origina la señalización intracelular a través de la activación de ese receptor, el cual a su vez ejecuta los efectos biológicos en corriente descendiente de la activación de ese receptor, la regulación ascendente de los genes, la expresión de la superficie de célula de proteínas, y similares. Alternativamente, el agonista se puede unir a un sitio que está adyacente a ya sea los sitios de unión del cognado respectivo e induce un cambio en la conformación en la proteína de célula, por lo tanto mejorando su actividad biológica. Por ejemplo, un agonista se puede unir a LDCAM, pero no bloquea la unión entre LDCAM/LCDAM o LDCAM/CRTAM o LDCAMB/B7L-1 y causa un cambio en la conformación en LDCAM de tal forma que la unión entre LDCAM/LDCAM o LDCAM/CRTAM o LDCAM/B7L-1 se mejora, tal como a través de la afinidad o avidez incrementada entre los pares de unión. Por consiguiente, un "agonista de LDCAM" es una molécula que agoniza una o más de las actividades biológicas de LDCAM. Los agonistas LDCAM incluyen, pero no se limitan a: anticuerpos específicos de LDCAM, pepticuerpos específicos de LDCAM o polipéptidos solubles que unen LDCAM para ejecutar los efectos biológicos en corriente descendiente de LDCAM que se une a uno o más de sus asociados de unión a LDCAM (tales como, pero no limitándose a, LDCAM, CRTAM, B7L-4, y/o B7L-1). Los ejemplos adicionales incluyen: anticuerpos específicos de CRTAM, anticuerpos específicos de CRTAM que son capaces de entrecruzarse con CRTAM en la superficie de las células y activan al receptor; los pepticuerpos específicos de CRTAM o polipéptidos solubles que unen CRTAM (tal como LDCAM) que ejecuta los efectos biológicos en corriente descendiente de CRTAM que se une a uno o más de sus asociado de unión CRTAM, tal como LDCAM. Las modalidades alternativas de los agonistas LDCAM incluyen proteínas de fusión LDCAM, tales como, pero no limitándose al dominio extracelular de LDCAM enlazado a un dominio Fc (como se describió anteriormente). Las modalidades adicionales incluyen aquellos agonistas LDCAM que tienen la capacidad de unirse a CRTAM y entrelazan el receptor CRTAM en la superficie de las células y activan el receptor. Dichos agonisías LDCAM incluyen anticuerpos y pepticuerpos específicos de CRTAM y proteínas de fusión LDCAM-Fc capaces de entrelazarse y activar el receptor CRTAM. Las modalidades adicionales incluyen polipéptidos LDCAM multiméricos que unen CRTAM y tienen la capacidad de entrelazarse y activar receptores CRTAM en la superficie de las células. Los agonistas presentados aquí comprenden polipéptidos solubles, aislados, anticuerpos, proteínas de fusión y pepticuerpos dirigidos contra uno o más de los siguientes: LDCAM, B7L-1 o CRTAM. Los agonistas presentados aquí además comprenden moléculas pequeñas, tales como peptidomiméticos y mimótopos, y similares, que agonizan la interacción entre LDCAM, B7L-1 o CRTAM. Los agonistas adicionales comprenden oligonucleótidos antisentido que específicamente acíivan e hibridizan el ARNm de LDCAM, B7L-1 o CRTAM por lo tanto previenen la traducción del gen de sus proteínas respectivas. Las modalidades adicionales comprenden la desconexión del gen a través de moléculas de interferencia de ARN personalizadas para silenciar la expresión de LDCAM, B7L-1 o CRTAM. Las definiciones más específicas y ejemplos de agonistas particulares se proveen en las siguientes secciones. Es decir, un antagonista o agonista LDCAM se puede utilizar para aníagonízar o agonizar uno o más de los siguientes: el enlace LDCAM a LDCAM (tal como a través de agregación homotípica); el enlace LDCAM a CRTAM; el enlace LDCAM a B7L-1; la actividad de célula T, tal como la activación y proliferación; las respuestas de célula T para el estímulo de la activación; las respuestas de célula T a la estimulación/activación de CD3; las respuestas de la célula T a la estimulación/activación de mitógeno; la actividad de la célula NK-T; la actividad de la célula NK; la actividad de la célula B; la expresión de citocina a través de células inmunes, tales como, pero no limitándose a, IL-2, INF-gama, y otras citocinas pro-inflamatorias; la actividad entre las células que presentan el antígeno y células T; la actividad entre células dendríticas y células T; la actividad entre células dendríticas BDCA3+ y células T; la actividad entre las células de presentación de antígeno y células NK; la actividad entre células dendríticas y células NK; la actividad entre células dendríticas BDCA3+ y células NK; la actividad entre las neuronas y las células T; la actividad entre neuronas y células NK-T; y la actividad entre neuronas y células NK. 2.1 ANTICUERPOS PARA LDCAM, CRTAM o B7L-1 Los anticuerpos que son inmunoreactivos con LDCAM, CRTAM o B7L-1 se pueden utilizar como un antagonista o agonista LDCAM. Una modalidad particular comprende un anticuerpo scfv específico de LDCAM, referido como 1F12. La secuencia scfv 1F12 se presenta en la Figura 6. Una modalidad alternaíiva es la proíeína de fusión 1F12 scfv-Fc (algunas veces referida como maxicuerpo 1F12). El aníicuerpo scfv 1F12 se uíilizó para aislar un nuevo subgrupo de células dendríticas humanas que son la coníraparte humana de las células dendríticas ,CD8a+ de ratón. Este subgrupo de células dendríticas es referido como células dendríticas BDCA3 + . Las células dendríticas (DC) constituyen una población heterogénea de células de presentación de antígeno profesionales en por lo menos tres subgrupos funcionales diferentes de acuerdo con la expresión de superficie de los antígenos CD4 y CD8a. A diferencia de otros subgrupos DC de ratón, CD8a+ DC exhiben la habilidad única de engullir cuerpos apoptóticos y de esta forma se cree que juegan un papel crítico en la presentación cruzada. Se descrien aquí un método de exploración horizontal de célula/despliegue de fago para activar e identificar antígenos de superficie específicamente expresados en subgrupos DC de sangre humana. Se demostró que un anticuerpo (IF12) activa un antígeno de superficie presente tanto en DC de sangre humana BDCA3+ y HLA-DR+, como células CD13 en el área de la célula T de los nodos del bazo y de la linfa. Estas células pueden ser geográficamente diferentes representaciones de la misma subpoblación DC humana. En el ratón, IF12 específicamente etiqueta un raro subgrupo de leucocitos de sangre así como CD8a+ DC esplénicas. IF12 inmunoprecipita una proteína de superficie de 100 Kda, la cual se reconoce a través de espectrometría de masa como LDCAM. Tanto DC de LDCAM de ratón como humano expresan CD lie pero no CD llb. Estas también únicamente expresan un panel común de diez genes específicos, de esta forma refuerzan la noción de que representan las poblaciones equivalentes de células. Finalmente, a diferencia de otro subgrupo CD humano, el DC humano de LDCAM puede eficientemente asimilar los cuerpos apoptóticos. Se concluye que la expresión de LDCAM define una población única de DC en el ratón y el ser humano que comparten características fenotípicas, histológicas y funcionales. El subgrupo DC aislado y fenotipificado (ver Figura 1) tiene papeles inmunológicos importantes, incluyendo ser la fuente principal de la producción de IL en respuesta a patógenos in vivo; siendo responsable de la presentación cruzada in vivo de aníígenos para células T CD8 + ; capaz de fagocitotizar cuerpos apoptóticos in vivo; y siendo responsable de la inducción de tolerancia en condiciones de estado estable (tal como en la ausencia de inflamación). Los anticuerpos para DC de BDCA3+ se pueden utilizar en una variedad de investigaciones, configuraciones clínicas y terapéuticas, incluyendo, pero no limitándose a, la modulación de la función de DC de BDCA3+ para influenciar el resultado de las respuestas inmunes, tales como la activación de los DCs de BDCA3+ con el anticuerpo 1F12 enlazado a un antígeno y por lo tanto específicamente entregando el antígeno a la población DC de BDCA3+. Este proceso puede conferir la tolerancia inmune al sujeto a ese antígeno. Alternativamente, en la presencia de señales inflamatorias, el antígeno activado podría resaltar las respuestas inmunes específicas del antígeno para ese antígeno. El anticuerpo 1F12 y los otros anticuerpos anti-LDCAM se pueden utilizar para purificar o aislar DC de BDCA3+ de diversos fluidos del cuerpo, órganos y tejidos. El DC de BDCA3+ entonces se puede utilizar en varias inmunoterapias basadas en la célula a través de la manipulación de las células ex vivo y reinfundiendo las células manipuladas de nuevo dentro del sujeto. El anticuerpo 1F12 y los otros anticuerpos anti-LDCAM pueden utilizarse para reducir DC de BDCA3 in vivo o interferir con su función inmunológica, tal como, pero no limitándose a iniciación de célula T, centrado DC, presentación cruzada de antígeno para células T, especialmente células T CD8 + . Debido a que la presentación cruzada de los antígenos y la tolerancia cruzada de los antígenos son mecanismos celulares cenírales para muchas enfermedades inmunes, el transplante y el cáncer, el anticuerpo 1F12 y otros anticuerpos anti-LDCAM se pueden utilizar para tratar estos trastornos a través de la modulación de las respuestas inmunes a través de CD de BDCA3 + . Además, el anticuerpo 1F12 y otros anticuerpos anti-LDCAM se pueden utilizar en terapia de célula ex vivo. El DC BDCA3+ se puede aislar con el anticuerpo 1F12 y otros anticuerpos anti-LDCAM y manipularse en ex vivo y reintroducirse en el paciente para tratar la enfermedad. Para propósitos ilustrativos solamente, se puede interrumpir la tolerancia inmune al cáncer a través de la exposición del DC de BDCA3+ aislado para antígenos de cáncer (tales como, pero no limitándose a aquellos presentados en el Cuadro 2 siguiente) e infundiendo ei DC de BDCA3+/antígeno de cáncer procesado de nuevo en el paciente. El antígeno de cáncer se puede derivar del paciente y puede estar en la forma de células de cáncer. Se ha demostrado que DC de BDCA3+ es capaz de fagocitotizar las células apoptóticas y probablemente presentará dicho antígeno exógeno para células T CD8+ para generar células T CD8+ para generar ejecutadores CTL específicos de cáncer.

C UAD RO 2 Caíegoría de Algunos Ejemplos Específicos de Antígenos Representativos aníígeno Virus Rotavirus; enfermedad de los pies y la boca; influenza, incluyendo influenza A y B; parainfluenza; especies de Herpes (Herpes simple, virus de Epstein-Barr, viruela, pseudorabia, citomegalovirus); rabia; polio; hepatitis A; hepatitis B; hepatitis C; hepatitis E; mealses; moquillo; encefalomielitis de equino de Venezuela; virus de leucemia felina; reovirus; virus sincitial respiratorio; virus sincitial respiratorio de bovino; virus de fiebre de Lassa; virus de tumor de polioma; parvovirus; parvovirus canino; virus de papiloma; encefalitis de terminal de marca; peste bovina; especies de rinovirus humano; especies de enterovirus; virus Mengo; paramixovirus; virus de bronquitis infecciona aviar; HTLV 1 ; VIH-1; VIH-2; LCMV (virus de coriomeningitis de linfoclto); adenovirus; togavirus (rubéola, fiebre amarilla, fiebre de dengue); virus de corona Bacteria Bordetella pertussis; Brucella abortis; Escherichia coli; especies de4 Salmonela incluyendo Salmonella typhi ; estreptococo; especies Vibrio (V. cholera, V. parahemolyticus); especies de Shigella; especies de Pseudomonas; especies de Brúcela; especies de Micobacteria (tuberculosis, avium, BCG, leprosi); pneumococo; estafilococo; especies de Enterobacter; Rochalimaia henselae; especies de Pasterurella (P. hemolítica, P. multocida); Especies de Chlamidia (C trachomatis, C. psittaci, Lymphogranuloma venereum); Sífilis (Treponema palidum); especies de Haemophilus ; especies de Micoplasma; enfermedad de Lyme (Boirrelia burgdprgferí); enfermedad de los Legionarios; Botulismo (Colstridiuni botulínum); Corynebacterium ~ diphtheriae, Yersinia entercolítica Infecciones Fiebre encontrada en las Montañas Rocallosas. Riquetsiales Agentes Bacteria: Helicobacter pylorí (cáncer gástrico y linfona) infecciosos y Virus: Virus de Papiloma Humano (cáncer cervical y anal); Virus de Hepatitis B y Ags de cáncer C (cáncer de hígado); VIH (Sarcoma de Kaposi; linfona no de Hodgkins); Virus de Herpes Humano de Tipo B (sarcoma de Kaposi); Virus de Epstein-Barr (linfomas); Virus linfotrópico de Célula T humana (leucemia de célula T en adulto) Parásito: Esquistosomas (cáncer de vejiga); Eventos de Hígado (colangiocarcinoma) En modalidades alternativas, el anticuerpo 1F12 y otros anticuerpos anti-LDCAM se pueden utilizar para suministrar fármacos o toxinas al DC de BDCA3 + , el cual a su vez influenciaría las respuestas inmunes en corriente descendiente. Las modalidades alternativas incluyen anticuerpos que son agonistas o antagonistas que se unen a polipéptidos LDCAM, fragmentos de polipéptido LDCAM, variantes del polipéptido LDCAM, etc., y modulan las actividades biológicas descritas en la definición de la actividad biológica. Las modalidades alternaíivas de antagonistas y agonistas LCDAM incluyen anticuerpos que se unen a polipéptido CRTAM, fragmentos de polipéptido CRTAM, variantes de polipéptido CRTAM, etc. y modulan las actividades biológicas descritas en la definición de la actividad biológica. Dichos anticuerpos específicamente se unen a los polipéptido a íravés de los sitios de unión de antígeno del anticuerpo (según opuesto a la unión no específica). Por ejemplo, los anticuerpos específicos de LDCAM son aquellos que específicamente reconocerán y se unirán a los polipéptidos, homólogos y variantes de LDCAM, pero no con otras moléculas. En una modalidad preferida, los anticuerpos son específicos para los polipépíidos de la presente invención y no reaccionan de manera cruzada con otros polipépíidos. En esía forma, los polipéptidos, fragmentos, variantes, polipéptidos de fusión de LDCAM, eíc. como se esíablecen aníeriormente se pueden emplear como "inmunógenos" en la producción de anticuerpos ínmunoreacíivos ahí. Más específicameníe, los polipéptidos, fragmentos, varianíes, polipéptidos de fusión, etc. contienen determinantes antigénicas o epííopos que provocan la formación de anticuerpos. Estas determinantes antigénicas o epítopos pueden ser ya sea lineales o conformacionales (discontinuos). Los epííopos lineales están compuestos de una sola sección de aminoácidos del polipéptido, mientras que los epítopos conformacionales o discontinuos están compuestos de secciones de aminoácidos de diferentes regiones de la cadena del polipépíido que se traen en una proximidad cercana dependiendo de los dobleces del polipéptido (Janeway y Travers, Immuno Biology 3:9 (Garland Publishing Inc., 2a. ed. 1996)). Debido a que los polipépíidos plegados tienen superficies complejas, el número de epítopos disponibles es muy numeroso; sin embargo, debido a la conformación del polipéptido y los obstáculos estéricos, el número de anticuerpos que actualmeníe se unen a los epítopos es menor que el número de epítopos disponibles (Janeway y Travers, Immuno Biology 2:14 (Garland Publishing Inc., 2a. ed. 1996)). Los epítopos se pueden identificar a través de cualquiera de los métodos conocidos en la técnica. De esta forma, un aspecío de la preseníe invención se refiere a los epítopos antigénicos de los polipépíidos de la invención. Dichos epííopos son úíiles para aumentar los anticuerpos, en anticuerpos monoclonales particulares, como se describe con mayor detalle más adelante. Adicionalmente, los epítopos de los polipéptidos de la invención se pueden utilizar como reactivos de invesíigación, en ensayos, y para purificar los aníicuerpos de unión específicos, de substancias tales como suero policlonal, o sobrenadantes de hibridomas cultivados. Dichos epítopos o variantes de los mismos se pueden producir utilizando técnicas conocidas en la técnica como síntesis de fase sólida, división química o enzimática de un polipéptido, o utilizando tecnología de ADN recombinante. Ya que los anticuerpos se pueden obtener a través de epítopos de los polipéptidos de la invención, si los epítopos ha sido aislados o permanecen como parte de los polipépíidos, ambos, los anticuerpos policlonales y monoclonales se pueden preparar a través de técnicas convencionales. Ver, por ejemplo, Monoclonal Antibodies, Hybridomas : A New Dimensión in Biological Analyses, Kenneí y oíros (eds.), Plenum Press, New York (1980); y Antibodies-. A Laboratory Manual, Harlow y Land (eds.), Cold Spring Harbor Laboraíory Press, Cold Spring Harbor, NY, (1988); Kohler y Milstein, (paíeníe de E.U.A. No. 4,376,110); íhe human B-cell hybridoma íechnique (Kozbor y otros, 1984, J. Immunol. 133:3001-3005 ; Colé y otros 1983, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 80:2026-2030); y the EBV-hybridoma technique (Colé y oíros, 1985, Monoclonal Antibodies And Cáncer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96). Las líneas de célula •de hibridoma que producen aníicuerpos monoclonales específicos para los polipépíidos de la invención íambién se coníemplan aquí. Dichos hibridomas se pueden producir e ideníificar a íravés de técnicas convencionales. El hlbridoma que produce el mAb de esta invención se puede cultivar in vitro o in vivo. Un método para producir dicha línea de células de hibridoma lo convierte en el método de producción preferido. Un método para producir dicha línea de célula de hibridoma comprende la inmunización de un animal con un polipéptido; la cosecha de células de bazo del animal inmunizado; fusionando dichas células del bazo con una línea de células de mieloma, por lo tanío generando células de hibridoma; e ideníificando una línea de células de hibridoma que producen aníicuerpos monoclonales que se unen al polipépíido. Para la producción de aníicuerpos, se pueden inmunizar varios animales a íravés de inyección con uno o más de ios siguieníes: un polipéptido LDCAM, un fragmento de un polipéptido de LDCAM, un equivalente funcional de un polipéptido de LDCAM, una forma variante de LDCAM o una forma mutaníe de un polipéptido de LDCAM; un polipéptido de CRTAM, un fragmento de un polipéptido de CRTAM, un equivalente funcional de un polipéptido de CRTAM, o una forma mutaníe de un polipépíido de CRTAM. Dichos animales huésped pueden incluir, pero no se limiían a, conejos, conejillos de india, raíones, y raías. Se pueden utilizar varios auxiliares para incrementar la respuesta inmunológica, dependiendo de las especies huésped, incluyendo, pero no limitándose a geles minerales de Freund (completos e incompletos), tales como hidróxido de aluminio, substancias activas de superficie tales como lisolecitina, polioles plurónicos, polianiones, pépíidos, emulsiones de aceiíe, hemocianina de limpeío de agujero de llave, diniírofenol y poíencialmeníe los auxiliares humanos potencialmente útiles tales como BCG (Bacilo Calmette-Guerin) y Corynebacíerium parvum. Los aníicuerpos monoclonales se pueden recuperar a través de técnicas convencionales. Dichos anticuerpos monoclonales pueden ser de cualquier clase de inmunoglobulina incluyendo IgG, IgM, IgE, IgA, I g D y cualquier subclase de los mismos. Además, las técnicas desarrolladas para la producción de "aníicuerpos quiméricos" de LDCAM o CRTAM (Takeda y oros ,1985, Nature, 314: 452-454; Morrison y oíros ,1984, Proc Nati Acad Sci USA 81:6851-6855; Boulianne y otros, 1984, Nature 312:643-646; Neuberger y otros, 1985, Nature 314:268-270) medianíe la división de los genes de una molécula de aníicuerpo de raíón de la especificidad de antígeno apropiada junto con los genes de una molécula de anticuerpo humano de actividad biológica apropiada se pueden utilizar. Un aníicuerpo quimérico es una molécula en la cual las difereníes porciones se derivan de difereníes especies de animal, tales como aquellas que tienen una región variable derivada de un mAb de porcino y una región consíante de inmunoglobulina humana. Los anticuerpos monoclonales de la presente invención también incluyen versiones humanizadas de anticuerpos monoclonales de murino. Dichos aníicuerpos humanizados se pueden preparar a íravés de íécnicas conocidas y ofrecen la ventaja de reducir la inmunogenicidad cuando los anticuerpos se adminisíran a seres humanos. En una modalidad, un anticuerpo monoclonal humanizado comprende la región variable derivada de un anticuerpo de murino (o solameníe el siíio de unión de aníígeno del mismo) y una región constante derivada de un anticuerpo humano. Alternativamente, un fragmento de anticuerpo humanizado puede comprender el sitio de unión a antígeno de un anticuerpo monoclonal de murino y un fragmento de la región variable (careciendo del siíio de unión a aníígeno) derivado de un aníicuerpo humano. Los procedimieníos para la producción de aníicuerpos monoclonales quiméricos y además fabricados por ingeniería incluyen aquellos descriíos en Riechmann y oíros (Nature 332:323, 1988), Liu y oíros (PNAS 84: 3439,1987), Larrick y otros (Bio/Technology 7:934, 1989), y Winter y Harris (TIPS 14:139, Can, 1993). Las técnicas útiles para humanizar anticuerpos también se discuíen en la paíeníe de E.U.A. No. 6,054,297. Los procedimieníos para generar anticuerpos transgénicamente se pueden enconírar en GB 2,272,440, las paíentes de E.U.A. Nos. 5,569,825 y 5,545,806, y patentes relacionadas. Preferiblemente, para uso en seres humanos, los anticuerpos son humanos o humanizados; las técnicas para crear dichos anticuerpos humanos o humanizados también son bien conocidas y están comercialmente disponibles de, por ejemplo, Medarex Inc. (Princeton, NJ) y Abgenix Inc. (Fremont, CA).

En otra modalidad, los anticuerpos compleíamente humanos para uso en seres humanos se producen a través de la clasificación de una colección de dominios variables de anticuerpo humano utilizando ya sea métodos de despliegue de fago (Vaughan y oíros, 1998, Nat Biotechnol. 16(6):535-539; y la paíenle de E.U.A. No. 5,969,108), los méíodos para el despliegue de ribosoma (Schaffitzel y otros, 1999, J Immunol Methods 231 (1 -2): 119-135), o métodos para el despliegue de ARNm (Wilson y oíros, 2001, Proc Nati Acad Sci USA 98 (7):3750-3755). Un ejemplo de un aníicuerpo scfv aníi-LDCAM producido por los métodos de despliegue de fago se describe en el Ejemplo 18. Los fragmentos de unión a antígeno que reconocen epítopos específicos se pueden generar a través de técnicas conocidas. Por ejemplo, dichos fragmentos incluyen, pero no se limiían a: los fragmeníos F(ab')2 que se pueden producir a íravés de la digestión de pepsina de la molécula del anticuerpo y los fragmentos Fab que se pueden generar a través de la reducción de los puentes de disulfuro de los fragmentos (ab')2. Alternativameníe, las colecciones de expresión de Fab se pueden construir (Huse y otros, 1989, Science, 246:1275-1281) para permitir la rápida y fácil identificación de los fragmentos Fab monoclonales con la especificidad deseada. Las técnicas descritas para la producción de anticuerpos de cadena individual (patente de E.U.A. No. 4,946,778; Bird, 1988, Science 242: 423-426; Huston y otros, 1988, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; y Ward y otros, 1989, Nature 334:544-546) también se pueden adaptar para producir anticuerpos de cadena individual contra productos de gen LDCAM. Los anticuerpos de cadena individual se forman a través del enlace de los fragmenfos de cadena ligera y pesada de la reglón Fc a íravés de un pueníe de aminoácido, dando como resulíado un polipépíido de cadena individual. Dichos anticuerpos de cadena individual también pueden ser útiles intracelularmente (es decir, como "intracuerpos"), por ejemplo como se describe por Marasco y otros (J. Immunol. Methods 231:223-238,1999) para terapia genética en infección HIV. Además, los anticuerpos para el polipéptido LDCAM pueden, a su vez, utilizarse para generar anticuerpos anti-idiotipo que "imitan" al polipéptido LDCAM, y que se pueden unir a los asociados de unión del polipéptido LDCAM utilizando técnicas bien conocidas por aquellos con experiencia en la fécnica. (Ver, por ejemplo, Greenspan & Bona, 1993, FASEB J7(5):437-444; y Nissinoff, 1991, J.

Immunol. 147(8):2429-2438). Los anticuerpos que son inmunoreactivos con los polipéptidos de la invención incluyen anticuerpos biespecíficos (es decir, anticuerpos que son inmunoreactivos con los polipéptidos de la invención a través de un primer dominio de unión a antígeno, y íambién inmunoreacíivos con un polipépíido diferente a través de un segundo dominio de unión a antígeno). Una variedad de anticuerpos biespecíficos se han preparado, y se han encontrado útiles tanto in vivo como in vitro (ver, por ejemplo, patente de E.U.A. No. 5,807,706; y Cao y Suresh, 1998, Bioconjugate Chem 9: 635-644). Se conocen numerosos métodos para preparar anticuerpos biespecíficos en técnica, incluyendo el uso de hibridomas, y triomas, las cuales se forman a través de la fusión de un hibridoma con un linfocito ((Milsíein y Cuello, 1983, Nalure 305:537-540; patente de E.U.A. No. 4,474,893; y patente de E.U.A. No. 6,106,833). La patente de E.U.A. No. 6,060,285 descrie un proceso para la producción de anticuerpos biespecíficos en los cuales por lo menos los genes para la cadena ligera y la porción variable de la cadena pesada de un anticuerpo que tiene una primera especificidad se íransfecían deníro de una célula de hibridoma secreíando un aníicuerpo que fiene una segunda especificidad. El acoplamiento químico de los fragmentos del anticuerpo también se uíiliza para preparar moléculas de unión a aníígeno que íiene especificidad para dos diferentes antígenos (Brennan y otros, 1985, Science 229:81-83; Glennie y otros, J. Immunol., 1987, 139:2367-2375; y pateníe de E.U.A. No. 6,010, 902). Los anticuerpos biespecíficos también se pueden producir a través de medios recombinantes, por ejemplo, a través del uso de porciones de cierre de leucina de las proíeínas Fos y Jun (las cuales preferentemente forman heterodímeros) como se describe a través de Kostelny y otros (J. Immunol. 148:1547-4553; 1992). La 'patente de E.U.A. No. 5,582,996 describe el uso de dominios interactivos complementarios (tales como las porciones del cierre de leucina u otras estructuras de dominio interactivo de bloqueo y clave) para facilitar la formación del heterodímero en la producción de anticuerpos biespecíficos. Las moléculas tetravalentes, biespecíficas se pueden preparar a través de la fusión del ADN que codifica la cadena pesada del fragmenío F(ab')2 de un aníicuerpo con ya sea ADN que codifica la cadena pesada de una segunda molécula F(ab')2 (en la cual el dominio CH1 esíá reemplazado por un dominio CH3), o con ADN que codifica el fragmento FV de cadena individual de un anticuerpo, como se describe en la patente de E.U.A. No. 5,959,083. La expresión de los genes de fusión resultaníes en células de mamífero, junto con los genes para las cadenas ligeras correspondientes, produce moléculas biespecíficas tetravalentes que tienen especificidad para los antígenos seleccionados. Los anticuerpos biespecíficos también se pueden producir como se describe en la patente de E.U.A. No. 5,807,706. Generalmente, el método involucra la introducción de una protuberancia (consfruida a íravés del reemplazo de las cadenas laíerales de aminoácido pequeñas con cadenas laferales más grandes) en la iníerfase de un primer polipépíido y una cavidad correspondienfe (preparada a íravés del reemplazo de las cadenas laíerales de aminoácido grandes con unas más pequeñas) en la interfase del segundo polipéptido. Además, los fragmentos variables de cadena individual (sFvs) se han preparado para covalentemente enlazarse a dos dominios variables; los fragmentos del aníicuerpo resulfaníes pueden formar dímeros o írímeros, dependiendo de la longitud de un enlazador flexible entre los dos dominios variables (Kortí y otros., 1997, Proteína Engineering 10: 423-433). Los procedimientos de clasificación a través de los cuales se pueden ideníificar los aníicuerpos son bien conocidos, y pueden involucrar la cromaíografía de inmunoafinidad, por ejemplo. Los aníicuerpos se pueden clasificar para las propiedades agonísticas (es decir, simulando el ligando). Dichos anticuerpos, una vez que se unen a las porciones de la superficie de célula de los polipéptidos LDCAM, induce los efectos biológicos (por ejemplo, la íransducción de señales biológicas) similares a los efectos biológicos inducidos cuando el asociado de unión de LDCAM se une a los polipéptidos de LDCAM. Los anticuerpos agonísíicos se pueden uíilizar para inducir las írayecíorias estimuladoras de la célula medida por LDCAM o comunicación intracelular. Los anticuerpos biespecíficos se pueden identificar a íravés de la clasificación con dos ensayos separados, o con un ensayo en donde el anticuerpo biespecífico sirve como un puente eníre el primer aníígeno y el segundo antígeno (el último se acopla a una porción deíecíable). Los aníicuerpos biespecíficos que unen los polipépíido LDCAM de la invención a íravés de un primer dominio de unión a aníígeno serán úíiles en las aplicaciones de diagnóstico y en el traíamiento de autoinmunidad, inflamación y cáncer, como se describe con mayor detalle más adelante. Esos anticuerpos que bloquean la unión de los polipépíido LDCAM de la invención con los asociados de unión para LDCAM, tales como, pero no limitándose a LDCAM (agregación homotípica), B7L-1 y CRTAM, se pueden utilizar para inhibir la unión de la célula mediada por LDCAM, B7L-1 y/o CRTAM, la comunicación intracelular o la estimulación de la célula que resulta de dicha unión. Dichos anticuerpos de bloqueo se pueden identificar utilizando cualquier procedimiento de ensayo adecuado, íal como a través de la prueba de anticuerpos para la habilidad de inhibir la unión de LDCAM a ciertos asociados de unión, tales como, pero no limiíándose a LDCAM (agregación homotípica), B7L-1, y CRTAM. Los anticuerpos se pueden ensayar para la habilidad de inhibir las trayectorias estimuladoras de célula mediadas por el asociado de unión de LDCAM, tales como aquellas descritas en los Ejemplos, Dicho anticuerpo se puede emplear en un procedimiento in vivo, o administrase in vivo para inhibir una actividad biológica medida a través de la entidad que generó el anticuerpo. Los trastornos causados o exacerbados (directameníe o indirecfamenfe) a íravés de la interacción de LDCAM con el asociado de unión de superficie de célula, tal como, pero no limitándose a LDCAM (agregación homotípica), B7L-1 y CRTAM, de esfa forma se pueden tratar. Un método terapéutico involucra la administración in vivo de un anticuerpo de bloqueo para un mamífero en una cantidad efectiva en la inhibición de la actividad biológica mediada por el asociado de unión LDCAM. Los aníicuerpos monoclonales son generalmeníe preferidos para uso en dichos méíodos ferapéuíicos. En una modalidad, se emplea un fragmenío de aníicuerpo a anfígeno, tal como el anticuerpo scfv-Fc descrito en los Ejemplos. Las composiciones que comprenden un anticuerpo que está dirigido contra LDCAM, y un diluyente, excipiente o portador fisiológicamente aceptable, se proveen aquí. Los componentes adecuados de dichas composiciones se describen a continuación para composiciones que contienen polipéptidos LDCAM. También se proveen en la presente conjugados que comprenden un agente detectable (por ejemplo, diagnóstico) o terapéutico, adjuntado al anticuerpo específico de LDCAM. Ejemplos de dichos agentes se presentan a coníinuación. Los conjugados encuentran uso en procedimientos in vivo o in vivo. Los anticuerpos de la invención también se pueden utilizar en ensayos para detectar la presencia de los polipéptidos o fragmeníos de la invención, ya sea in vitro o in vivo. Los anticuerpos también se pueden emplear en la purificación de los polipéptidos o fragmeníos de la invención a través de cromatografía de inmunoafinidad. Los ejemplos de ensayos que se pueden utilizar para clasificar anticuerpos agonísticos o antagonísticos se describen a continuación. 2.2 PEPTICUERPOS PARA LDCAM, CRTAM, B7L-4, O B7L-1 Un aníagonisía o agonista LDCAM puede estar en la forma de un peptlcuerpo dirigido contra LDCAM, CRTAM, B7L-4 o B7L-1. Las modalidades del agonista LDCAM adicionales incluyen pepticuerpos dirigidos a CRTAM que tienen la capacidad de unirse y activar CRTAM en la superficie de las células, tal como, pero no limitándose al entrelazamienío de CRTAM en la superficie de las células. Los pepíicuerpos son conocidos en ia técnica. Para propósitos ilustrativos los pepticuerpos se definen y describen con mayor detalle en WO 99/25044 y WO 00/24782, las cuales se incorporan aquí por referencia en su totalidad. El péptido utilizado para crear el peptlcuerpo puede ser de la secuencia de aminoácido de LDCAM B7L-1 o CRTAM. Las secuencias scfv de anti-LCDAM humano provistas en SEC ID Nos: 12 y 13 se pueden incorporar dentro de un pepticuerpo. 2.3 DISEÑO RACIONAL DE COMPUESTOS PARA INTERACTUAR CON LOS POLIPEPTIDOS DE LDCAM Y CRTAM El objetivo del diseño de fármaco racional es producir análogos estructurales de polipéptidos biológicameníe activos de interés o de moléculas pequeñas con las cuales interactúan, por ejemplo, inhibidores, agonistas, antagonisías, eíc. Cualquiera de estos ejemplos se pueden utilizar para formar fármacos que son más activos o formas estables del polipéptido o que mejoran o interfieren con la función de un polipéptido in vivo (Hodgson J (1991) Biotechnology 9:9-21). En un método, la estructura tridimensional de un polipéptido de interés, o de un complejo inhibidor de polipéptido, se determina a través de cristalografía de rayos x, a través de resonancia magnética, o a través de modelación de homología de computadora o, más íípicameníe, a íravés de una combinación de esíos métodos. Tanto la forma como las cargas de los polipéptidos se deben constatar para esclarecer la estructura y para determinar el sitio(s) acíivo de la molécula. Menos a menudo, la información úíil con respecto a la estructura de un polipéptido se puede ganar a través de la modelación con base en la estrucíura de polipéptidos homólogos. En ambos casos, la información estructural relevante se utiliza para diseñar moléculas análogas para polipéptidos LDCAM y CRTAM, para identificar inhibidores eficientes, o para identificar moléculas pequeñas que unen polipéptidos LDCAM o CRTAM. Los ejemplos * útiles para el diseño de fármacos racionales incluyen moléculas que íienen una actividad o estabilidad mejorada como se muestra a través de Braxton S y Wells JA (1992 Biochemistry 31:7796-7801) o que actúan como inhibidores, agonistas, o antagonisías de pépíidos naíivos como se muesíra a través de Athauda SB y otros (1993 J Biochem 113:742-746). El uso de la información estrucíural del polipéptido LDCAM y CRTAM en los sistemas de software para la Modelación molecular para asistir en el diseño del inhibidor y en el esíudio de la interacción del polipéptido LDCAM o CRTAM también se abarca a través de esía invención. Un méíodo paríicular de la invención comprende el análisis de la estructura tridimensional de los polipéptidos LDCAM y CRTAM para los sitios de unión probables de subsíraíos, sintetizando una nueva molécula que incorpora un sitio reacíivo predecible, y ensayando la nueva molécula como se describe adicionalmeníe aquí. También es posible aislar un aníicuerpo específico del objeíivo, seleccionado a íravés del ensayo funcional, como se describe adicionalmeníe aquí, y después resolver su estructura de cristal. Este método, en principio, produce un núcleo del fármaco sobre el cual se puede basar el diseño del subsiguiente fármaco. Es posible evitar la cristalografía del polipépíido compleíamente a través de la generación de anticuerpos aníi-idiotípicos (anti-ids) para un anticuerpo farmacológicameníe acíivo, funcional. Como una imagen de espejo de una imagen de espejo, el sitio de unión de los anti-ids se esperaría que sea un análogo del antígeno original. El anti-id entonces podría utilizarse para identificar y aislar péptidos de bancos de péptidos producidos químicamente o biológicamente. Los péptidos aislados entonces podrían actuar como el núcleo del fármaco. 2.4 ANTAGONISTAS Y AGONISTAS LDCAM BASADOS EN ACIDO NUCLEICO En modalidades alternativas, la terapia inmune basada en ácido nucleico se puede diseñar para reducir el nivel de la expresión del gen de LDCAM, CRTAM y/o B7L-1 endógena, por ejemplo, utilizando métodos antisentido o de ribozima para inhibir o prevenir la traducción de las íranscripciones de ARNm de LDCAM, CRTAM y/o B7L-1; méíodos de hélice triple para inhibir la transcripción del gen LDCAM, CRTAM y/o B7L-1; o la recombinación homologa activada para inacíivar o "aniquilar" el gen de LDCAM, CRTAM y/o B7L-1 o su promoíor endógeno. Las moléculas de ARN y ADN aníiseníido actúan para directameníe bloquear la traducción de ARNm a través de hibridación de ARNm acíivado y previniendo la íraducción del polipépfido. Los métodos antiseníido involucran el diseño de oligonucleótidos (ya sea de ADN o de ARN) que son complementarios a un ARNm que íiene una secuencia de polinucleófido de LDCAM, CRTAM y/o B7L-1. La complemeníariedad absoluía, aunque es preferida, no es requerida. Una secuencia "complementaria" a una porción de ARN, como se refiere aquí, significa una secuencia que tiene suficieníe complementariedad para ser capaz de hibridizar con el ARN, por lo tanto formando un dúplex estable. Los oligonucleótidos que son complementarios al extremo 5' del mensaje, por ejemplo, la secuencia no traducida 5' hasta, e incluyendo el codón de iniciación AUG, debería trabajar más eficientemente en la traducción de la inhibición. Sin embargo, los oligonucleótidos complementarios a ya sea las regiones no de codificación, no traducidas 5'- o 3'- de la transcripción del gen LDCAM, CRTAM y/o B7L-1 se podrán utilizar en un método antisentido para inhibir la traducción de LDCAM, CRTAM y/o B7L-1. Los oligonucleótidos complementarios a la región no traducida 5' de un ARNm deberían incluir el complemento del codón de inicio AUG. Los ácidos nucleicos antisentido deberían ser de por lo menos seis nucleótidos en longitud, y son preferiblemeníe oligonucleóíidos en escala de 6 a alrededor de 50 nucleótidos en longitud. Los oligonucleótidos pueden ser ADN, o ARN, o mezclas quiméricas o derivados o versiones modificadas de los mismos, de estrucíura de cadena individual o esírucíura de cadena doble. El oligonucleótidos se puede modificar en la porción base, la porción de azúcar, o la estructura troncal del fosfaío, por ejemplo, para mejorar la estabilidad de la moléculas, la hibridación y similares. El oligonucleótidos puede incluir oíros grupos anexados íales como pépíidos (por ejemplo, para acíivar los receptores de célula huésped in vivo), o agentes que facilitan el transporte a través de la membrana de célula (ver, por ejemplo, Letsinger y oíros, 1989, Proc. Naíl. Acad. Sci. U. S. A. 86:6553-6556; Lemaiíre y oíros, 1987, Proc. Nafl. Acad. Sci. 84:648-652; Publicación PCT No. WO 88/09810, publicada el 15 de diciembre de 1988), o ageníes de división activada de hibridación o agentes de intercalación (ver, por ejemplo, Zon, 1988, Pharm. Res. 5:539-549). Las moléculas antisentido se suministran a las células, las cuales expresan una transcripción que tiene una secuencia de polinucleótido de LDCAM, CRTAM y/o B7L-1 in vivo a íravés de, por ejemplo, la inyección direcíameníe deníro del tejido o del sitio de la derivación de célula, o a través de moléculas antisentido modificadas, diseñadas para activar las células deseadas (por ejemplo, antiseníido enlazado a péptidos o anticuerpos que específicamente se unen a receptores o antígenos expresados en la superficie de célula objetivo) se pueden administrar su sisíémicameníe. Otro método utiliza una construcción de la ADN recombinante en el cual el oligonucleóíido antisentido se coloca bajo el control de un promoíor pol lll o pol 11 fueríe. El uso de dicha consírucción para íransfecíar células objeíivo en el sujeto dará como resultado la transcripción de cantidades suficientes de ARNs de esírucfura de cadena individual que formarán pares base complementarios con las transcripciones LDCAM, CRTAM y/o B7L-1 endógenas y por lo tanto previenen la traducción del ARNm de IL-7. Por ejemplo, se puede introducir un vector in vivo de tal forma que se absorbe a través de una célula y dirige la transcripción de una ARN antiseníido. Dicha vector puede permanecer episomal o convertirse en cromosómicamente integrado, mientras pueda ser íranscriío para producir el ARN aníisentido deseado. Los vectores pueden ser un plásmido, viral u oíros conocidos en la íécnica, uíilizados para la replicación y la expresión en células de mamífero. Las moléculas de ribozima diseñadas para catalíticameníe dividir íranscripciones de ARNm que tienen una secuencia de polinucleótido LDCAM, CRTAM y/o B7L-1 previene la traducción de el ARNm de LDCAM, CRTAM y/o B7L-1 (ver, por ejemplo, la Publicación Internacional PCT WO 90/11364, publicada el 4 de octubre de 1990; la pateníe de E.U.A. No. 5,824,519). La ribozimas son moléculas de ARN que poseen la habilidad de específicameníe dividir otro ARN de estructura de cadena individual en una forma análoga a las endonucleasas de restricción de ADN. Una veníaja principal de esíe méíodo es que, debido a que son específicas de secuencia, solamente los ARNms consecuencias particulares se inactivan. Existen dos tipos básicos de ribozimas principalmente, el tipo tetrahimena (Hasselhoff, Nature, 334:585-591, 1988) y el tipo "cabeza de martillo". La ribozima de tipo tetrahimena reconoce secuencias, las cuales son cuatro bases en longitud, mieníras que la ribozimas de íipo "cabeza de martillo" reconocen secuencias base de 11-18 bases en longitud. Entre más larga es la secuencia de reconocimiento, es mayor la probabilidad de que la secuencia ocurra exclusivameníe en las especies de ADNm objetivo.

Consecuentemeníe, las ribozimas de tipo cabeza de martillo son preferibles que la ribozima de tipo teírahimena. Como en el método antiseníido, las ríbozimas se pueden componer de oligonucleótidos modificados (por ejemplo, para la estabilidad mejorada, activación, y similares). Un método típico de suminislro involucra el uso de una consírucción de ADN que "codifica" la ribozima bajo el conírol de un promotor pol lll o pol 11 constiíuíivo fueríe, por lo que las células íransfectadas producirán suficientes cantidades de ribozima para destruidos el mensaje de LDCAM, CRTAM y B7L-1 e inhibir la traducción. Debido a que le ribozimas, a diferencia de las moléculas antiseníido, son caíalíticas, se requiere una concentración iníracelular menor en caso de eficiencia. Alíernaíivamente, la expresión de LDCAM, CRTAM y/o B7L-1 se puede reducir a través de la activación de las secuencias de desoxiribonucleótido complementarias a la región reguladora del gen objetivo (es decir, el promotor y/o mejoradores del gen objetivo) para favor estructuras helicoidales triples que previene la transcripción del gen LDCAM, CRTAM y/o B7L-1 objeíivo (ver, generalmeníe, Helene, 1991, Anticancer Drug Des., 6(6), 569-584 ; Helene, y otros, 1992, Ann. N. Y. Acad. Sci. , 660, 27-36; y Maher, 1992, Bioassays 14(12), 807-815). El ARN y ADN antisentido, ribozima, y moléculas de hélice triple de la invención se pueden preparar a través de cualquier método conocido en la íécnica para la síntesis de moléculas de ADN y ARN e Incluir técnicas para sintetizar químicamente oligodesoxiribonucleóíidos oligoribonucleóíidos íales como, por ejemplo, síníesis química de fósforamidita de fase sólida, por ejemplo, a través del uso de un sinteíizador de ADN automatizado (tales como el comerclalmenfe disponible de Biosearch, Applied Systems, y similares). Como ejemplos, los oligonucleótidos de fósforotioato se pueden sintetizar a través del método de Stein y otros, 1988, Nucí. Acids Res. 16:3209. Los oligonucleótidos de mefilfosfonato se pueden preparar a través del uso de soporíes de polímero de vidrio de poro controlado (Sarin y otros, 1988, Proc. Nati. Acad. Sci. U. S. A. 85:7448-7451). Alíernaíivameníe, las moléculas de ARN se pueden generar a través de transcripción in vitro o ín vivo de secuencias de ARN que codifican la molécula de ARN antisentido. Dichas secuencias de ADN se pueden incorporar dentro de una amplia variedad de vectores que incorporan promotores de polimerasa de ARN adecuados tales como los promotores de polimerasa T7 y SP6. Alternaíivameníe, las construcciones de ADNc antisentido que sinteíizan ARN antisentido constitutivamente o induciblemente, dependiendo del promotor utilizado, se pueden introducir establemente dentro de las líneas de célula. En modalidades alternativas la expresión de LDCAM, CRTAM y/o B7L-1 se puede bloquear a través de la silenciación del gen después de la traducción, tal como a través de la silenciación del gen inducido por ARN de estrucíura de cadena doble, íambién conocido como iníerferencia ARN (ARNi). Las secuencias de ARN de LDCAM, CRTAM y/o B7L-1 se podrán modificar para proveer secuencias esírucíura de cadena doble o ARNs de horquilla corta para uso terapéuíico. 3. LDCAM Los aníagonisías y agonisías de LDCAM comprenden fodas las formas adecuadas de LDCAM descritas aquí que exhiben actividad biológica. LDCAM es una proteína de superficie de célula que tiene homología limitada para las moléculas de adhesión que se expresan en una variedad de células incluyendo, pero no limitándose a, células dendríticas y en particular células dendríticas derivadas de linfoide. La secuencia de nucleótido que codifica LDCAM humano, aislado como se describen el Ejemplo 3, se presenta en SEC ID NO: 1, y la secuencia de aminoácido codificada por lo tanío se presenta en SEC ID NO:2. La secuencia de aminoácido LDCAM humana codificada descrita en SEC ID NO:2 tiene un dominio extracelular predicho de 374 aminoácidos incluyendo una secuencia líder de 38 aminoácidos 1-38 (de esta forma, el dominio exíracelular que carece de una secuencia libre se exíiende sobre los aminoácidos 39-374); un dominio de transmembrana de 21 aminoácidos (375-395) y un dominio citoplásmico de 47 aminoácidos (396-442). Una forma soluble de LDCAM naturalmeníe se forma a través de la división alternaíiva. Los ejemplos adicionales de LDCAM se provee en la siguiente sección, la cual incluye, pero no se limita a, variantes, fragmeníos biológicameníe activos, fragmentos, fragmentos biológicamente activos, y fragmeníos de varianíes, proíeínas de fusión, pepticuerpos, mimótopos, derivados y similares. B7L-1, el cual tiene una similitud de secuencia con B7-1, es un asociado de unión para LDCAM, como se describe en la Soliciíud de Patente de E.U.A. No. de serie 09/778,187, presentada el 6 de febrero del 2001, la cual se incorpora aquí por referencia en su íotalldad. Debido a que B7L-1 es una proteína de unión de LDCAM y debido a que B7L-1 y LDCAM despliegan un homología dentro de su dominio intracelular que incluyen sitios de unión potenciales para la banda 4.1 y los miembros de la familia PDZ, y se encuentran en muchos de los mismos tipos de célula, sus formas enlace de célula pueden distribuir señales similares cuando se compromeíen. De esía forma, estas o nombradas co-receptores o contra estructuras. La secuencia de nucleótido que codifica formas estructurales larga y corta de B7L-1 se presentan en SEC ID NO:7 y SEC ID NO:9, respectivameníe. La secuencia de aminoácido codificadas por las secuencias de nucleóíido de SEC ID NO:7 y SEC ID NO:9 se describen en SEC ID NO:8 y SEC ID NO:10, respecíivameníe. Para ideníificar líneas de célula con las cuales se une B7L-1, se preparó una proteína de fusión B7L-1/Fc como se describe en el Ejemplo 1 y los estudios de enlace, descritos en el Ejemplo 2, llevados a cabo. El Ejemplo 3 describe la clasificación de una colección de ADNc preparada a partir de WI-26, una línea de célula con la cual se une B7L-1, e identificando un clon humano LDCAM de longitud compleía. La secuencia de nucleóíido que codifica LDCAM humano, aislada como se describen el Ejemplo 3, se presenta en SEC ID NO:1 y la secuencia de aminoácido codificada por lo tanto se presenta en SEC ID NO:2. La secuencia de aminoácido LDCAM humana codificada descrita en SEC ID NO:2 tiene un dominio extracelular pronosticado de 374 aminoácidos incluyendo una secuencia líder de 38 aminoácidos 1-38; un dominio de transmembrana de , veintiún aminoácidos (375-395) y un dominio citoplásmico de 47 aminoácidos (396-442). Los Ejemplos 5 y 6 describen en la fabricación y el uso de LDCAM/Fc humanos en esíudios de enlace para idenfificar líneas de célula con las cuales se une LDCAM humano. Entre las líneas de células posltivameníe ideníificadas esíuvieron las células S49.1 y células dendrííicas linfoides de nodos de bazos y linfa de raíones tratados con Flt3-L. El Ejemplo 7 describe los depósitos de clasificación de una colección de expresión para identificar de clones LDCAM de murino. La secuencia de ADN de LDCAM de murino aislada se describe en SEC ID NO:3. La secuencia de aminoácido codificada por la secuencia de nucleótido de SEC ID NO:3 se describe en SEC ID NO:4. La secuencia de aminoácido de LDCAM de murino codificada (SEC ID NO:4) tiene un dominio exíracelular pronosíicado de 356 aminoácidos (residuos 1-356); un dominio de íransmembrana de veintiún aminoácidos (357-377); y un dominio citoplásmico que incluye los residuos de aminoácido 378-423. SEC ID NO:3 y SEC ID NO:4 describen las secuencias LDCAM de murino maduras de longitud completa. Según comparado con la secuencia LDCAM humana, las secuencias de señal no están completameníe descritas. Las moléculas LDCAM de mamífero purificadas descritas aquí son proteínas de íransmembrana de Tipo I que íienen una homología global limiíada para B7-1 y ofros moléculas de adhesión de célula. LDCAM íiene una alia homología con la región ciíoplásmica de B7L-1. Como se describe más adelaníe en el Ejemplo 6, las proíeínas LDCAM demuestran una expresión ampliamente dispersa. En particular, el ARNm de LDCAM humano se encuentra en carcinoma de pecho, retina, bazo de hígado fetal, corazón feíal, pulmón, músculo, plácenla, tiroides, y de pulmón. La línea de célula que tiene un mensaje LDCAM incluyen Wi-26. El ARNm de LDCAM de ratón se encuentra en embriones, íestículos, nodo esplénico y linfa de murino de células vengativas triples CD8 + , S49.1 y células dendríticas. El descubrimiento de las secuencias de ADN descritas en SEC ID NOs: 1 y 3 habilita la construcción de vecíores de expresión que comprenden ADNs que codifican proteínas LDCAM humanas y ratón; células huésped transfectadas o transformadas con los vecíores expresión; LDCAM biológicameníe activo como proteínas homogéneas; y aníicuerpos inmunoreactivos con LDCAM. Ai igual que B7L-1, LDCAM tiene una homología limitada con el receptor de virus de polio, la proteína de un enlace opoide delta, y las " moléculas de adhesión. Además, como se describen en el Ejemplo 13, LDCAM bloquea la proliferación de célula T causada por ConA y PHA, sugiriendo que LDAM es útil en la modulación de la respuesta inmune mediada por la célula T. LDCAM no inhibe la proliferación de célula T inducida por mAb de TCR sugiriendo que los efectos inhibidores de LDCAM en la proliferación de célula T inducida por mitógeno se debe a la inhibición de las secreción de citocina, por ejemplo, IL-2, o debido a la regulación de las respuesías en corrieníe descendiente de la célula T después de la activación e incrementos en la expresión del asociado de unión LDCAM. Ya que no se limita a esto, los usos paríiculares de las moléculas LDCAM se describen infra. Como se ufiliza aquí, el férmino LDCAM abarca los polipéptidos que tienen la secuencia de aminoácido 1-442 de SEC ID NO:2 y la secuencia de aminoácido 1-423 de SEC ID NO:4. Además, LDCAM abarca polipéptidos que tienen un alto grado de similitud un alto grado de identidad con la secuencia de aminoácido de SEC ID NO:2, la secuencia de aminoácido de SEC ID NO:4, y con los polipépíidos que son biológicameníe acíivos. El íérmino "LDCAM" se refiere a un género de polipéptidos descritos aquí que, por lo menos en parte, se unen y forman complejos con ellos mismos, se unen a B7L-1, y CRTAM y alíeran las señales de acíivación de la célula T en respuesía al antígeno y a los mltógenos.

El término "LDCAM de murino" se refiere a los productos de gen biológicamente activos del ADN de la SEC ID NO:3 y el término "LDCAM humano" se refiere a los productos de gen biológicameníe acíivos del ADN de SEC ID NO:1. Adicionalmeníe se abarcan a través del término "LDCAM" las proteínas solubles o truncadas que comprenden principalmente la porción de co-enlace de B7L-1 de la proteína, retiene la actividad biológica y son capaces de ser secretadas. Los ejemplos específicos de dichos proteínas solubles son aquellos que comprenden la secuencia aminoácidos 1-374 de SEC ID NO:2 y aquéllas que comprende la secuencia aminoácidos 1-356 de SEC ID NO:4. Alternativamente, dichos proteínas solubles pueden excluir una secuencia líder y por lo íanío abarca los aminoácidos 39-374 de SEC ID NO:2. El Ejemplo 9 describe la consírucción de una proíeína de fusión LDCAM/Fc novedosa que se puede uíilizar en los esíudios de unión LDCAM, ensayos de clasificación para anfagonisías y/o agonistas LDCAM, y estudios dirigidos al examen funcional de las caracíerísticas de la molécula. Otras regiones Fc del aníicuerpo pueden susíiíuirse para la región Fc Ig G 1 humana descriía en el Ejemplo. Otras regiones Fc adecuadas son aquellas que se pueden unir con alta afinidad a la profeína A o proíeína G, o aquellas que incluyen fragmentos de la región Fc lgG1 humana o de murino, por ejemplo, fragmentos que comprenden por lo menos la región de gozne por lo que se formarán los enlaces de disulfuro de intercadena. La proíeína de fusión LDCAM ofrece la veníaja de ser fácilmente purificada. Además, los enlaces de disulfuro se forman entre las regiones Fc de dos cadenas de proteína de fusión separadas, creando dímeros. Como se describe supra, un aspecto de la invención son los polipéptídos LDCAM solubles. Los polipéptidos LDCAM solubles comprenden todo o parte del dominio extracelular de un LDCAM nativo pero que carece de señal que podría causar la retención del polipéptido en una membrana de célula. Los polipéptidos LDCAM solubles ventajosameníe comprenden el pépíido de señal naíivo (o un heíerólogo) cuando inicialmeníe se sintetiza para promover la secreción, pero el péptido de señal se divide una vez hecha la secreción de LDCAM a partir de la célula. Los polipéptidos LDCAM solubles abarcados por la invención reíienen la habilidad de unir B7L-1, o la habilidad de unirse a ellos mismos. Alíernaíivameníe los polipépíidos LDCAM solubles en la preseníe invención reíienen la habilidad de alterar las respuestas de la célula T. LDCAM soluble puede incluir parte de la señal rojo o parte del dominio ciíoplásmico u otras secuencias, siempre que la proteína LDCAM soluble pueda ser secretada. LDCAM soluble se puede identificar (y distinguir de sus coníraparíes de enlace de membrana no solubles) a íravés de la separación de las células iníacías que expresan la proteína deseada a partir el medio de cultivo, por ejemplo, a través de centrifugación, y ensayando el medio o el sobrenadante para la presencia de la proteína deseada. La presencia de LDCAM en el medio indica que la proteína fue secretada de las células y esta forma es una forma soluble de la proteína deseada. Las formas solubles de LDCAM poseen muchas ventajas sobre la proteína LDCAM de enlace nativa. La purificación de las proteínas de células huésped recombinantes es factible, ya que las proteínas solubles se secretan a partir de las células. Además, las proíeínas solubles son generalmente más adecuadas para administración intravenosa. Los ejemplos de polipéptidos LDCAM solubles incluyen aquellos que comprenden una porción sustancial del dominio extracelular de una proteína LDCAM nativa. Por ejemplo, una proíeína LDCAM humana soluble comprende los aminoácidos 38-374 o 1-374 de SEC ID NO:2, y una LDCAM de murino soluble incluye los aminoácidos 1-356 de SEC ID NO:4. Además, las proteínas LDCAM solubles truncadas que comprenden menos que el dominio extracelular completo se incluyen en la invención. Cuando inicialmente se expresan deníro de una célula huésped, LDCAM soluble puede incluir uno de los pépíidos de señal heíerólogos descritos más adelante que es funcional dentro las células huésped empleadas. Alternativamente, la proteína puede comprender el péptido de señal activo. En una modalidad de la invención, LDCAM soluble se puede expresar como una proteína de fusión que comprenden (del íérmino N al C) el pépíido de señal del facíor a de levadura, un pépíido FLAG® descriío más adelaníe y en la patente de E.U.A. No. 5,011,912, y LDCAM soluble consiste de los aminoácidos 39-374 de SEC ID NO:2 o 21-356 de SEC ID NO:4. Esta proteína de fusión recombinante se expresa en y se secreta de células de levadura. El péptido FLAG® facilita la purificación de la proteína, y subsecuentemente se puede dividir de LDCAM soluble utilizando enterocinasa de mucosa de bovino. Las secuencias de ADN aisladas que codifican proíeínas LDCAM solubles se abarcan a íravés de la invención. LDCAM truncado, que incluye polipéptidos solubles, se puede preparar a través de cualquiera de un número de técnicas convencionales. Una secuencia de ADN deseada puede ser químicamente sintetizada utilizando técnicas conocidas per se. Los fragmentos de ADN también se pueden producir a través de la digestión de endonucleasa de restricción de una secuencia de ADN clonada de longitud completa, y aislarse a través de electroforesis en geles de agarosa. Los enlazadores que contienen siíios de escisión de endonucleasa de restricción se pueden emplear para insertar el fragmento de ADN deseado dentro de un vector de expresión, o el fragmento se puede digerir en sitios de escisión naturalmente presentes aquí. El procedimiento de reacción de cadena de polimerasa bien conocido también se puede emplear para amplificar una secuencia de ADN que codifica un fragmento de la proteína deseado. Como una alternativa adicional, las técnicas de mutagénesis conocidas se pueden emplear por insertar un codón de detención en un punto deseado, por ejemplo, inmediatamente en corriente descendiente del codón para el último aminoácido del dominio de unión del recepíor. Como se manifesfó anferiormeníe, la invención provee polipéptidos LDCAM aislados u homogéneos, tanío recombinantes como no recombinantes. Adicionalmente deníro del alcance de la preseníe invención esíán las variantes y los derivados de las proteínas LDCAM naíivas que reíienen la acíividad biológica, deseada. Es acíividad incluye la habilidad de LDCAM de unirse a si mismo, o la habilidad de unirse a B7L-1, por habilidad de alterar la señalización de la célula T. las variantes y los derivados de LDCAM se pueden obíener a través de mutaciones de las secuencias de nucleótido que codifican polipéptidos LDCAM nativos. Las alíeraciones de la secuencia de aminoácido naíiva se pueden lograr a íravés de cualquiera de un número de métodos convencionales. Las mutaciones se pueden introducir en un lugar paríicular a íravés de la síníesis de oligonucleóíidos que coníienen una secuencia muíaníe, se pueden flanquear a íravés de silios de restricción que habilitan la ligación con fragmentos de la secuencia naíiva. Después de la ligación, la secuencia reconsíruida resulíante codifica un análogo que tiene la inserción, sustitución o eliminación de aminoácido deseada. Alternaíivameníe, los procedimieníos de mutagénesis específicos del sitio dirigidos al oligonucleótido se pueden emplear para proveer un gen alterado en donde los codones predeterminados se pueden alterar a través de sustitución, eliminación o inserción. Los métodos ilustrativos para hacer las alteraciones establecidas anteriormeníe se describen a través de Walder y otros (Gene 42: 133,1986); Bauer y otros (Gene 37:73, 1985); Craik (BioTechniques, Enero 1985,12-19); Smith y otros (Genetic Engineering: Principies and Methods, Plenum Press, 1981); Kunkel (Proc. Nati. Acad. Sci. USA 82:488, 1985); Kunkel y otros (Methods in Enzymol. 154: 367, 1987); y pateníes de E.U.A. Nos. 4,518,584 y 4,737,462, íodas las cuales se incorporan aquí por referencia. Las variantes LDCAM se podrán utilizar como antagonistas o agonistas o se pueden utilizar para desarrollar aníagonisías o agonisías de LDCAM, íales como anticuerpos, pepticuerpos, y mimótopos. Una "variante LDCAM" como se refiere aquí, significa un polrpéptido sustancialmente homólogo a LDCAM nativo, pero que tiene una secuencia de aminoácido diferente de aquella de LDCAM nativo (especies humana, murino, u oirás especies mamíferos) debido a una o más eliminaciones, inserciones o susíiíuciones. Susíancialmeníe homólogo significa una secuencia de aminoácido variante es por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 96%, por lo menos 97%, por lo menos 98%, o por lo menos 99% idéntica a la secuencia de aminoácido nativa, como se describe anteriormente. El porcentaje de identidad de dos secuencias de aminoácido o dos secuencias de ácido nucleico se puede determinar a través de inspección visual y cálculo matemático, o más preferiblemente, la comparación se hace a íravés de la comparación de la información de la secuencia utilizando un programa de computadora. Un programa de compuíadora preferido, ilustrativo, es el programa del paquete 10.0 de Genetics Computer Group (GCG; Madison, Wl), 'GAP' (Devereux y otros, 1984, Nucí. Acids Res. 12:387). Los parámetros por omisión preferidos para el programa 'GAP' incluyen: (1) la implemeníación GCG de una matriz de comparación uñaría (conteniendo un valor de uno para las ideníidades y de 0 para las no identidades) para los nucleótidos, y la matriz de comparación de los aminoácidos ponderados de Gribskow y Burgess, Nucí. Acids Res. 14:6745,1986, como se describe por Schwartz y Dayhoff, eds., Atlas of Polypeptide Sequence and Síructure, National Biomedical Research Foundation, pp. 353-358, 1979; u otras matriz de comparación comparables; (2) una pluralidad de 30 para cada hueco y una penalidad adicional de 1 para cada símbolo en cada hueco para secuencias de aminoácido, o penalidad de 50 para cada hueco y una penalidad adicional de 3 para cada símbolo en cada hueco para secuencias de nucleótido; (3) no penalidad para hueco extremos; y (4) no penalidad máxima para huecos largos. Otros programas utilizados por aquellos con experiencia en la técnica de comparación de secuencia también se pueden utilizar, íales como, por ejemplo, el programa BLASTN versión 2.0.9, disponible para uso a íravés de Naíional Library of Medicine siíio web www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/wblasi2.cgi, o el algoritmo UW-BLAST 2.0. La configuración de los parámetros por omisión esíándar para UW-BLAST 2.0 se describen en el siguieníe sitio de Internet: sapiens. wustl edu/blast/b!ast/#Feaíures. Además, el algoriímo BLAST utiliza la matriz de de puntuación de aminoácido BLOSUM62, y parámetros opcionales que se pueden uíilizar como sigue: (A) Inclusión de un filtro para enmascarar segmentos de la secuencia de investigación que tiene una baja complejidad de composición (según determinado por el programa SEG de Wootton y Federhen (Computers and Chemistry, 1993); también ver Wootton y Federhen, 1996, Analysis of compositionally biased regions in sequence daíabases, Methods Enzmol. 266 : 554-71) o segmentos que consisíes de repeticiones internas de corta periodicidad (como se determina a través del programa XNU de Claverie y States (Computers and Chemistry, 1993) ), y (B) un umbral de importancia estadística para reportar coincidencias contra secuencias de la base de datos, o E-score (la probabilidad esperada de coincidencias que se encuentran meramente por casualidad, de acuerdo con el modelo esíocásíico de Karlin y Alíschul (1990); si la imporíancia estadística asignada con una coincidencia es mayor que su umbral E-score, la coincidencia no se reportará); los calores de umbral E-score preferidos son 0.5, o en el reden de preferencia en aumento 0.25, 0.1, 0.05, 0.01, 0.001, 0.0001, 1e-5, 1e-10, 1e-15, 1e-20, 1e-25, 1e-30, 1e-40, 1e-50, 1e-75, o 1e-100. Dichas variantes incluyen polipépíidos que son substancialmeníe homólogos a secuencias LDCAM naíivas, pero que íienen una secuencia de aminoácido difereníe de un receptor IL-7 nativo debido a una o más eliminaciones, inserciones, o sustiíuciones. Las modalidades paríiculares incluyen, pero no se limitan a, polipéptidos LDCAM que comprenden por lo menos una substiíución de aminoácido conservadora. Las modalidades alternativas comprenden polipéptidos LDCAM que comprenden de 1 a 10 eliminaciones, inserciones o sustituciones de residuos de aminoácido, cuando se compara con una secuencia nativa. Los polinucleótidos que codifican LDCAM de la presente invención incluyen varianíes que difieren de una secuencia de polinucleóíidos LDCAM debido a una o más eliminaciones, inserciones o susíituciones, pero que codifican un polipéptido biológicamente acíivo. Se incluyen como variantes de polipéptidos LDCAM aquellas varianíes que son de exisíencia naíural, tales como formas alélicas y alternativamente formas empalmadas, así como variantes que han sido construidas a íravés de la modificación de la secuencia de aminoácido de un polipéptido LDCAM o de la secuencia de nucleótido de un ácido nucleico que codifica un polipéptido LDCAM. Como se mencionó anteriormenfe, las variantes LDCAM pueden comprender una secuencia que tiene por lo menos un aminoácido conservadorameníe susíituido, queriendo decir que un residuo de aminoácido dado está reemplazado por un resido que tiene características fisicoquímicas similares. Las modalidades alternativas comprenden variantes LDCAM que comprenden entre 1-10, 1-20 o 1-30 de secuencias conservadoramente substituidas. Generalmente, las sustituciones para uno o más aminoácidos presentes en el polipéptido nativo deberán hacerse de manera conservadoras. Ejemplos de sustiíuciones conservadoras incluyen susíituciones de aminoácidos fuera del dominio(s) activo, y substiíución de los aminoácidos que no alíeran la estructura secundaria y/o terciaria de LDCAM. Ejemplos de sustituciones conservadoras incluyen la sustitución de un residuo alifático por otro, tal como lie, Val, Leu o Ala por otro, o sustituciones de un residuo polar por otro, íal como eníre Lys y Arg; Glu y Asp; o Gln y Gsn. Oirás susíituciones conservadoras, por ejemplo, sustituciones regiones compleías que tiene características de hidrofobicidad similares, son bien conocidas. Las variantes de existencia natural también están abarcadas a través de la presente invención. Ejemplos de dichas variantes son proteínas que resultan de eventos de empalme de ARNm alternafivo o de escisión proíeolííica de la proteína nativa, en donde la propiedad biológica nativa es retenida. Por ejemplo, una "substitución de aminoácido conservadora" puede involucrar una sustitución de un residuo de aminoácido nativo con un residuo no naíivo que tiene muy poco o ningún efecto sobre la polaridad o carga del residuo de aminoácido en esa posición. Además, cualquier residuo nativo en el polipéptido también puede estar substituido con alanina, como se ha descrito previamente por "mutagénesis de exploración de alanina " (ver, por ejemplo, MacLennan y otros, 1998, Acta Physiol. Scand. Suppl. 643: 55-67; Sasaki y otros, 1998, Adv. Biophys. 35: 1-24, que discuten la mutagénesis de la exploración de alanina). Las sustituciones de aminoácido deseadas (ya sea conservadoras o no conservadoras) se pueden determinar a través de aquellos con experiencia en la técnica en el momento en que dicha sustituciones son deseadas. Por ejemplo, las sustiíuciones de aminoácido se pueden uíilizar por ideníificar residuos imporíanfes de la secuencia de péptido, o para incrementar o disminuir la afinidad del péptido o de las moléculas vehículo-péptido (ver fórmula precedente) descritas aquí. Las sustituciones de aminoácido ilustraíivas se esíablecen en el cuadro 1.

CUADRO 1 Substituciones de aminoácido En ciertas modalidades, las sustituciones de aminoácido conservadoras también abarcan residuos de aminoácido de existencia no natural que típicamente se incorporan a través de síntesis de péptido química en lugar de través de síníesis en sistemas biológicos. Como se mencionó anteriormeníe, los residuos de exisíencía naíural se pueden dividir en dos clases con base en las propiedades de cadena naíural comunes que pueden ser útiles para modificaciones de secuencia. Por ejemplo, las sustituciones no conservadoras pueden involucrar el intercambio de un miembro de una de estas clases por un miembro de otra clase. Dichos residuos substituidos se pueden introducir dentro de las regiones del péptido que son amorosas con ortólogos no humanos, o centro de regiones no homologas de la molécula. Además, también se pueden hacer modificaciones utilizando P o G para el propósito de influenciar la orientación de la cadena. Al hacer estas modificaciones, se puede considerar el índice hidropáíico de los aminoácidos. Cada aminoácido ha sido asignado a un índice hidropático sobre las bases de su hidrofobicidad y características de carga, estas son: isoleucina ( + 4.5); Valina (+4.2); leuclna (+3.8); fenilalanina ( + 2.8); cisteina/cistina (+2.5); metionina ( + 1.9); alanina ( + 1.8); glicina (-0.4); treonina (-0.7); • serina (-0.8); triptófano (-0.9); tirosina (-1.3); prolina (-1.6); hisíidina (-3.2); glutamato (-3.5); glutamina (-3.5); aspartato (-3.5); asparagina (3.5); lisina (-3.9); y arginina (-4.5). La importancia del índice de aminoácido hidropático en conferir la función biológica interacíiva sobre una proíeína se eníiende en la íécnica. (Kyíe, y otros, J. Mol. Biol., 157:105-131(1982)). Se sabe que ciertos aminoácidos pueden estar subsíiíuidos por otros aminoácidos que tienen un índice hidropático similar o puntuación y aún retener una actividad biológica similar. En hacer los cambios con base en el índice hidropático, la sustitución de los aminoácidos cuyos índices hidropáticos se están dentro de +2 son preferidos, aquellos que están dentro de ±1 son particularmente preferidos, y aquellos dentro de ±5 son aún más particularmente preferidos. También se entiende en la técnica que la sustifución de aminoácido similares se pueda ser efecíivameníe sobre las bases de la hidrofilidad. El promedio de hidrofilidad local mayor de una profeína, según gobernaba por la hidrofilidad de sus aminoácidos adyacentes, se correlaciona con su inmunogenicidad y antigenicidad, es decir, con una proteína biológica de la proteína. Los siguientes valores de hidrofilidad han sido asignados a residuos aminoácidos: arginina ( + 3.0); lisina ( + 3.0); aspartato ( + 3.01); gluíamaío ( + 3.01); serina ( + 0.3); asparagina (+0.2); gluíamina ( + 0.2); glicina (0); íreonina (-0.4); prolina (-0.5 + 1); alanina (-0.5); histidina (-0.5); cisteina (-1.0); metionina (-1.3); valina (-1.5); leucina (-1.8); isoleucina (-1.8); tirosina (-2.3); fenilalanina (-2.5); tripíófano (-3.4). AI hacer los cambios con base en valores de hidrofilicidad similares, la sustitución de los aminoácidos cuyos valores de hidrofilidad están dentro de ± 2 son preferidos, aquellos que están dentro de ± 1 son particularmente preferidos, y aquellos que están dentro de ±0.5 son aún más particularmeníe preferidos. También se pueden ideníificar los epííopos de secuencias de aminoácido primarias sobre las bases de hidrofiiidad. Esías regiones íambién son referidas como "regiones de núcleo epitópico". Un íécnico experimentado será capaz de determinar variantes adecuadas de polipéptidos como se establece en las siguientes secuencias utilizando técnicas conocidas. Para identificar áreas adecuadas de la molécula que se pueden cambiar sin destruir la acíividad, uno con experiencia clínica puede acíivar arias que no se cree que sean importantes para la actividad. Por ejemplo, cuando polipéptidos similares con actividades similares de las mismas especies o de oirás especies son conocidas, uno con expresa la técnica puede comparar la secuencia de aminoácido de un péptido con los péptidos similares. Con dicha comparación, se pueden identificar los residuos y porciones de las moléculas que se conservan entre polipéptidos similares. Se apreciará que los cambios en áreas de un péptido que no están conservadas con relación a dichos péptidos similares será menos probable que adversamente afecten la actividad biológica y/o la estrucíura del péptido. Uno con experiencia en la técnica también sabrá que, aún en regiones relativamente conservadas, se pueden sustituir químicamente aminoácidos similares por los residuos existencia natural mieníras se retiene la actividad (susíifuciones de residuos de aminoácido conservadores). Por consiguiente aún las áreas que pueden ser importantes para la actividad biológica o para la estructura puede ser sujetas de susfituciones de aminoácido conservadoras sin destruir actividad biológica o sin adversamente afecíar la esírucfura del péptido. Adiclonalmente, uno con experiencia en la íécnica puede revisar los esíudios de esíructura-función que identifica los residuos en péptidos similares que son ¡mporíantes para la actividad o estructura. En vista de dicha comparación, se puede predecir la importancia de los residuos de aminoácido en un pépíido que corresponde a residuos de aminoácido que son imporíaníes para la actividad o estrucíura en pépfidos similares. Uno con expedieníe la técnica puede optar por químicamente sustituir aminoácidos similares por dichos residuos de aminoácidos importantes pronosticados de los péptidos. Uno con experiencia en la técnica también puede analizar la estrucíura íridimensional y la secuencia de aminoácido con relación a ésa estructura en polipéptidos similares. En vista de esa información, uno con experiencia en la técnica puede predecir la alineación de los residuos de aminoácido de un péptido con respecto a su esíructura tridimensional. Uno con exprese la íécnica puede seleccionar no hacer cambios radicales a los residuos de aminoácido pronosíicados que van esíar sobre la superficie de la proíeína, ya que dicho residuos pueden esíar involucrados en iníeracciones imporíantes con otras moléculas. Además, uno con experiencia en la íécnica puede generar varianíes de prueba que contienen una sustitución de aminoácido individual en cada residuo de aminoácido deseado. Las variantes eníonces se pueden clasificar uíilizando ensayos de actividad conocidos por aquellos con experiencia técnica. Dichos datos se podrían ufilizar para obíener información acerca de variantes adecuadas. Por ejemplo, si se descubre que un cambio a un residuo de aminoácido particular resultó en destruido, indeseable mente reducido, o acíividad inadecuada, las variantes con dicho cambio serán evitadas. En otras palabras, con base en la información obtenida de dichos experimentos de rutina, uno con experiencia en la íécnica puede fácilmeníe deíerminar los aminoácidos en donde las susíiíuciones adicionales deberán ser eviíadas ya sea solas o en combinación con otras mutaciones. Un número de publicaciones científicas se han dedicado a la predicción de la estructura secundaria. Ver, Moult J., Curr.Op. en Biotech., 7(4):422-427 (1996), Chou y otros, Biochemistry, 13(2):222-245(1974); Chou y otros, Biochemisíry, 113(2):211-222 (1974); Chou y oíros, Adv. Enzymol. Relat. Áreas Mol. Biol., 47:45-148(1978); Chou y oíros, Ann. Rev. Biochen., 47:251-276 y Chou y oíros, Biophys. J., 26:367-384 (1979). Además, los programas de compuíadora están actualmente disponibles para ayudar en la predicción de la estrucíura secundaria. Un méíodo para predecir la esírucíura secundaria se basa en la modelación de la homología. Por ejemplo, 2 polipépíidos o proíeínas que íienen una ideníidad secuencia mayor de 30%, o similitud mayor de 40% por lo general tienen topologías estrucíurales similares. El reciente crecimiento de la base de, datos estrucíura de la proteína (PDB) ha provisto una forma pronosticar mejorada del estrucíura secundaria, incluyendo el número poíencial de dobleces deníro del esfrucíura del polipépíido o de la proteína. Ver Holm, y otros, Nucí. Acid. Res., 27(1 ):244-247 (1999). Se ha sugerido (Brenner y otros, Curr. Op. Struct. Biol., 7(3): 369-376 (1997)) que hay un número ¡limitado de dobleces en un polipéptido o proteína data y una vez que se han resuelto un número crítico de estructuras, la predicción estructural ganará dramáticamente en exactitud. Los métodos adicionales para pronosticar estructuras secundarias incluyen "encadenamiento de argumentos" (Jones, D., Curr. Opin. Strucí. Biol., 7(3):377-87 (1997); Sippl, y otros, Structure, 4(1): 15-9 (1996)), "profile analysis" (Bowie, y otros, Science, 253:164-170 (1991); Gribskov, y otros, Meth. Enzym., 183:146-159 (1990); Gribskov, y otros, Proc. Naí. Acad. Sci., 84(13):4355-8(1987)), y "evoluíionary linkage" (Ver Holm, supra, y Brenner supra.

Las modificaciones adicionales en las secuencias de polipéptido LDCAM o polinucleóíido LDCAM se pueden hacer a íravés de aquellos con experiencia en la íécnica uíilizando íécnicas conocidas. Las modificaciones de inferes en las secuencias de polipépíido pueden incluir la alteración, sustiiución, reemplazo, inserción o eliminación de un aminoácido seleccionado. Por ejemplo, uno más de los residuos de cisíeina se pueden eliminar o remplazar con otro aminoácido para alterar la conformación de la molécula, una alteración que puede involucrar la prevención de la formación de puentes de disulfuro intramoleculares incorrectos una vez hecho el doblez o la restauración. Las fécnicas para dicha alíeración, sustitución, reemplazo, inserción o eliminación son bien conocidas por aquellos con experiencia en la técnica (ver, por ejemplo, la patente de E.U.A. No. 4,518,384). Como otro ejemplo, los sitios de N-glicolización en el dominio extracelular LDCAM se pueden modificar para prevenir la glicosilación, permiíiendo la expresión de un análogo de carbohidrato reducido en un mamífero y los sistemas de expresión de levadura. Los sifios de N-glicosilación en polipépíido eucarióíicos se caracterizan a través de un íriplete de aminoácido Asn-X-Y, en donde X es cualquier aminoácido excepto Pro y Y es Ser o Thr. El polipéptido LDCAM humano de SEC ID NO:2 incluyen seis de dichos tripletes, en los aminoácidos 67-69, 101-103, 113-115, 165-167, 304-306, y 308-310. Similarmente, el polipépíido LDCAM de murino de SEC ID NO:4 incluye seis de dichos íripleíes en 49-51, 83-5, 95-97, 147-149, 286-288 y 290-292. Las sustituciones, adiciones o eliminaciones apropiadas para la secuencia de nucleótido que codifica estos trípleíes dará como resulíado la prevención de la adición de residuos de carbohidraío en la cadena laíeral Asn. La alíeración de un nucleóíido individual, seleccionado de tal manera que Asn está reemplazado por un aminoácido diferente, por ejemplo, es suficiente para inactivar un sitio de N-glicosilación. Los procedimientos conocidos para inacíivar los sifios de N-glicosilación en proíeínas incluyen aquellos descriíos en la patente de U.S. A. No. 5,071,972 y EP 276,846, incorporadas aquí por referencia. Las variantes adicionales deníro del alcance de la invención incluyen polipépíidos LDCAM que pueden modificarse para crear derivados de los mismos a íravés de la formación de conjugados covalentes o acumulativos con otras porciones químicas, tales como grupos glicosilo, lípidos, fosfato, grupos acetilo y similares. Los derivados covalentes se pueden preparar a íravés del enlazamienío de porciones químicas a grupos funcionales en las cadenas laíerales del aminoácido o en el íérmino N o íérmino C de un polipépíido. Preferiblemenfe, dicha alíeración, subsíiíución, reemplazo, inserción o eliminación no disminuye la acíividad biológica de LDCAM. Un ejemplo es una varianíe que se une con esencialmeníe la misma afinidad de unión como lo hace la forma naííva. La afinidad de unión se puede medir a través de procedimientos convencionales, por ejemplo, como se describe en la pateníe de E.U.A. No. 5,512,457 y se establece aquí. Además, las moléculas LDCAM se puede modificar a través de la adición de uno o más polímeros solubles en agua, tales como, pero no limitándose a, polietilen glicol para incrementar la biodisponibilidad y/o vida media farmacocinética. Varios medios para anexar porciones químicas útiles para incrementar la biodisponibilidad y/o la vida media farmacocinéíica están actualmente disponibles, ver, por ejemplo, la publicación internacional del traíado de cooperación de paíeníe ("PCT") No. WO 96/11903, iníiíulada "Composiciones y Métodos para la Proteína N-íerminalmeníe Químícameníe Modificada", incorporada aquí por referencia en su totalidad. Esta publicación PCT describe, entre otras cosas, el anexo selectivo de polímeros solubles en agua al término N de ias proíeínas. Un vehículo de polímero alternativo es el polietilen glicol (PEG). El grupo PEG puede ser de cualquier peso molecular convenienie y puede ser lineal o ramificado. El peso molecular promedio de PEG preferiblemeníe esíará en la escala de alrededor de 2 kilodalíons ("kD") a alrededor de 100 kD, más preferiblemeníe de alrededor de 5 kD alrededor de 50 kD, más preferiblemente de aproximadamente 5 kD aproximadamente 10 kD. Los grupos PEG generalmente estarán adjuntados a los compuesfos de invención a través de acilación o alquilación reductiva a través de un grupo reactivo de la porción PEG (por ejemplo, un grupo aldehido, amino, tiol o éster) a un grupo reactivo en el compuesto de invención (por ejemplo, un grupo aldehido, amino o éster). Una estrategia útil para la PEGilación de péptidos sinféíicos consiste en la combinación, a través de la formación de un enlace de conjugado en solución, un péptido y una porción PEG, cada una llevando una funcionalidad especial que es mutuamente reactiva hacia la otra. Los péptidos pueden ser fácilmente preparados con síntesis de fase sólida convencional. Los péptidos son "pre-activados" con un grupo funcional apropiado en un sitio específico. Los precursores se purificaron y se caracterizaron completamente antes de la reacción con la porción PEG. La ligación del péptido con PEG usualmeníe íoma lugar en la fase acuosa y puede ser fácilmeníe monitoreada a través de HPLC analítica de fase inversa. Los pépíidos PEGilados pueden ser fácilmente purificados a través de HPLC de preparación y caracterizados a través de HPLC analítica, análisis de aminoácido y espectromeíría de masas de absorción láser. Los polímeros de polisacárido son oíro tipo de polímeros solubles en agua que pueden ser utilizados para la modificación de la proíeína. Los dexíranos son polímeros de polisacárido que comprenden subunidades individuales de glucosa predominantemente enlazada a través de enlaces a1-6. La dextrana por sí misma esíá disponible en muchos rangos de pesos moleculares, y es fácilmeníe disponible en pesos moleculares de alrededor de 1 kD alrededor de 70 kD. La dexírana es un polímero soluble en agua adecuado para uso en la presente invención como un vehículo por sí mismo o en combinación con otro vehículo (por ejemplo, Fc). Ver, por ejemplo, WO 96/11953 y WO 96/05309. El uso de dextrana conjugada para inmunoglobulinas terapéuíicas o de diagnósíico se ha reporíado; ver, por ejemplo, la Publicación de Patente Europea No. 0 315 456, la cual se incorpora aquí por referencia su toíalidad. La dextrana de alrededor de 1 kD a alrededor de 20 kD es preferida cuando se usa como un vehículo de acuerdo con la presente invención. Los derivados LDCAM adicionales incluyen conjugados covalentes o acumulafivos de los polipépíidos con oíros polipépíidos o polipépíidos, tal como a través de sínfesis en culíivo recombinanfe como fusiones N-terminal o C-terminal. Ejemplos de polipéptidos de fusión se discuten a continuación en conexión con oligómeros. Además, los polipéptidos de fusión pueden comprender pépíidos agregados para facilitar la purificación y la identificación. Dichos péptidos incluyen, por ejemplo, poli-His o los pépíidos de ideníificación antigénica descritos en la paíeníe de E.U.A. No. 5,011,912, y en Hope y otros, Bio/Technology 6:1204, 1988. Uno de dichos péptidos es el ocíapéptido FLAG® (SEC ID NO:3), el cual es altamente antigénico y provee un epítopo reversiblemente enlazado a través de un anticuerpo monoclonal específico, habilitando el rápido ensayo y la fácil purificación del polipéptido recombinante expresado. Un hibridoma de murino designado 4E11 produce un anticuerpo monoclonal que une el péptido FLAG® en la presencia de ciertos cationes de metal divalentes, como se describen la patente de E.U.A. No. 5,011,912. La línea de célula del hibridoma 4E11 ha sido depositada con la Colección para el Cultivo de Tipo Americano bajo el número de registro no. HB 9259. Los anticuerpos monoclonales que une el péptido FLAG® esián disponibles de Eastman Kodak Co., Scientific Imaging Systems División, New Haven, Connecticut. Las modalidades adicionales de LDCAM que se puede utilizar en los métodos descriíos aquí incluyen oligómeros o polipépíidos de fusión que coníienen el polipépíido LDCAM, uno o más fragmentos de LDCAM, o cualquiera de las formas derivadas o variantes de LDCAM como se describe aquí, así como en las patentes de E.U.A. listadas aníeriormente. En modalidades particulares, los oligómeros comprenden polipéptidos LDCAM solubles. Los oligómeros se pueden encontrar en las formas de multímeros covaleníemeníe enlazados o no covaleníemente enlazados, incluyendo dímeros, írímeros u oligómeros más alíos. En modalidades alíernaíivas, los oligómeros LDCAM comprenden múltiples polipéptidos LDCAM enlazados a íravés de interacciones covalentes o no covalentes entre porciones de péptido fusionadas con los polipéptidos, dichos polipéptidos teniendo la propiedad de promover oligomerización. Los cierres de la leucina y ciertos polipéptidos derivados de anticuerpos están entre los péptidos que pueden promover la oligomerización de los polipéptidos unidos ahí, como se describe con más detalle más adelante. LDCAM se puede modificar para crear derivados de LDCAM formando conjugados covalentes o acumulativos con otras porciones químicas, tales como los grupos glicosilo, lípidos, fosfato, grupos acetilo y similares. Los derivados covalentes de LDCAM se pueden preparar a través del enlace de porciones químicas a grupos funcionales sobre cadenas laterales de aminoácido LDCAM o en el N-íérmino o C-íérmino de un polipéptido LDCAM o el dominio extracelular del mismo. Otros derivados de LDCAM dentro del alcance de esta invención incluyen conjugados covalentes o acumulativos de LDCAM o sus fragmentos con otras proteínas o polipéptidos, tal como a íravés de síníesis en el culíivo recombinaníe como fusiones N-terminal o C-terminal. Por ejemplo, el conjugado puede comprender una secuencia de señal o de polipéptido líder (por ejemplo, el factor a líder de Saccharomyces) en el N-término de un polipéptido LDCAM. El péptido de señal o líder con-íranslacionalmenie o posí-translacionalmente dirige la íransferencia del conjugado de su sitio de síntesis a un sitio dentro o fuera de la membrana de célula o la pared celular. Las fusiones de polipéptido LDCAM pueden comprender pépíidos agregados para faciliíar la purificación y la identificación de LDCAM. Dichos péptidos incluyen, por ejemplo, los péptidos de identificación poli-His o aníigénicos descriíos en la paíente de E. U. A. No. 5,011,912 y en Hop y otros, Bio/Technology 6:1204, 1988. Las consírucciones de ADN equivalentes que codifican varias adiciones con susíituciones de secuencias o residuos de aminoácido, o eliminaciones de residuos terminales o internos o secuencias no necesarias para la acíividad o enlace biológico están abarcadas por la invención. Por ejemplo, los sitios de N-glicosilación en el dominio extracelular LDCAM se puede modificar para prevenir la glicosilación, permitiendo la expresión de un análogo de carbohidrato reducido en sisíemas expresión de mamíferos y de levadura. Los sitios de N-glicosilación en polipéptidos eucarióíicos se caracteriza a través de un tripleíe de aminoácido Asn-X-Y, en donde X es cualquier aminoácido el excepío Pro e Y es Ser o Thr. El polipépíido LDCAM humano de SEC ID NO: 2 incluyen seis de dichos íripletes, en los aminoácidos 67-69, 101-103, 113-115, 165-167, 304-306, y 308-310. Similarmente, el polipépíido LDCAM de murino de SEC ID No.4 incluye seis de dichos íriplete en 49-51, 83-85, 95-97, 147-149, 286-288 y 290-292. Las susíiíuciones, adiciones o eliminaciones apropiadas para la secuencia de nucleótido que codifica estos íripleíes dará como resulfado la prevención de la adición de los residuos de carbohidraío en la cadena laíeral a Asn. La alteración de un nucleótido individual, seleccionado de íal forma que Asn esíá reemplazada por un aminoácido difereníe, por ejemplo, es suficieníe para inactivar el sitio de N-glicosilación. Los procedimientos conocidos para inactivar los sitios N-glicosilación en proíeínas incluye aquellos descritos en la patente de E. U. A. No. 5,071,972 y EP 276,846, incorporadas aquí por referencia. En otro ejemplo, las secuencias que codifican residuos Cys que no son esenciales para la actividad biológica se pueden alterar para originar que los residuos Cys sean eliminados o reemplazados con otros aminoácidos, previniendo la formación de puentes de disulfuro Intramoleculares incorrectos dependiendo de la resíauración. Oíros equivalentes se preparan a través de la modificación de los residuos de aminoácido dibásicos adyacentes para mejorar la expresión en sisfemas de levadura en donde la actividad de proteasa KEX2 está presente. EP 212,914, describe el uso de muíagénesis específica en el sitio para inactivar los sitios de procesamienío de la proíeasa KEX2. Los sitios de procesamiento de proíeasa KEX2 se inacíivan a íravés de la adición, eliminación o susíitución de los residuos para alterar los pares Arg-Arg, Arg-Lys, y Lys-Arg para eliminar la ocurrencia de estos residuos básicos adyaceníes. Los emparejamientos Lys-Lys son considerablemente menos susceptibles a la escisión de KEX2, y la conversión de Arg-Lys o Lys-ARg en Lys-Lys representa un método conservador y preferido para inacíivar siíios KEX2. Las secuencias de ácido nucleico deníro del alcance de la invención incluyen secuencias de ADN y ARN aisladas que hibridizan las secuencias de nucleólido LDCAM descriías en la preseníe bajo condiciones de severidad moderada o severa, y que codifican LDCAM biológicameníe acíivo. Las condiciones de severidad moderada, como se definen a través de Sambrook y otros Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2a ed. Vol.1, pp. 101-104, Cold Spring Harbor Laboratory Press, (1989), incluyen el uso de una solución de 5 X SSC, 0.5% de SDS, 1.0 mM de EDTA (pH 8.0) y condiciones de hibridación de alrededor de 55°C, 5 X SSC, durante la noche. Las condiciones de rigor severo incluyen temperaturas más altas de hibridación y lavado. Los técnicos expertos reconocerán que la temperaíura y la conceníración de sal en la solución de lavado se podrán ajustar según sea necesario de acuerdo con factores tales como la longiíud de la molécula de ácido nucleico. Debido a la degeneración conocida del código genéíico en donde más de un codón puede codificar el mismo aminoácido, una secuencia de ADN puede variar de aquella mosírada en SEC ID NO:1 y 3 y aún codificar la proteína LDCAM que tiene la secuencia de aminoácido de SEC ID NO:2 y SEC ID NO:4, respecíivameníe. Dichas secuencias de ADN varianíes pueden resulíar de muiaciones silenciosas (por ejemplo, que ocurren duraníe la amplificación PCR), o pueden ser el producío de una muíagénesis deliberada de una secuencia nativa. La invención provee secuencias de ADN aisladas equivalentes que codifican LDCAM biológicamente activo, seleccionado de: (a) ADNc que compréndela secuencia de nucleóíido preseníada en SEC ID NO:3; (b) ADN capaz de hibridizar a un ADN de (a) bajo condiciones moderadamente severas y que codifica LDCAM biológicamente activo; y (c) ADN que está degenerado como un resultado del código genético para un ADN definido en (a), o (b) y que codifica LDCAM biológicamente activo. Las proteínas LDCAM codificadas por dichas secuencias equivalentes de ADN están abarcadas por la invención. Los ADNs que son equivalentes a la secuencia de ADN de SEC ID NO:1 y SEC ID NO:3 hibridizarán bajo condiciones moderadameníe y severameníe de rigor a las secuencias de ADN que codifican polipépíidos que comprenden SEC ID NO:2 y SEC ID NO:4. Ejemplos de proíeínas LDCAM codificadas por dicho ADN, incluyen, pero no se limitan a, fragmentos de LDCAM (incluyendo fragmentos soluble) y proteínas LDCAM que comprenden el sitio(s) de N-glicosilación inacíivado, el siíio(s) de p.rocesamienio de proíeasa KEX2 inacíivado, o la susíiíución(es) de aminoácido conservadora, como se describió aníeriormeníe. Las proíeínas LDCAM codificadas por ADN de otras especies de mamíferos, en donde el ADN hibridizará al ADNc de SEC ID NO:1 o SEC ID NO:3 también están abarcadas por la presente invención. Las variantes que poseen la habilidad de unir B7L-1 se pueden identificar a íravés de cualquier ensayo adecuado. La acíividad biológica de LDCAM se puede deíerminar, por ejemplo, a íravés de la competencia para el enlace con el dominio el enlace de B7L-1 (es decir, ensayos de unión competitivos). Un tipo de un ensayo de unión competitivo para un polipéptido LDCAM utiliza un LDCAM soluble, radiomarcado y células intactas que expresan de B7L-1. En lugar de células intactas, se puede sustituir su proteínas de fusión B7L-1/Fc soluble es tal como un enlace B7L-1/Fc a una fase sólida a través de la interacción de una proteína A, proteína G o un aníicuerpo para B7L-1 o porciones Fc de la molécula, con la región Fc de la proíeína de fusión. Oíro íipo de ensayos de unión compefiíivo uíiliza un recepíor LDCAM soluble radiomarcado y células intactas que expresan LDCAM. Los ensayos de unión competitivos se pueden llevar a cabo siguiendo una metodología convencional. Por ejemplo, LDCAM radiomarcado septo utilizada para competir con un homólogo LDCAM putativo para el ensayo para la actividad de unión coníra B7L-1 HHT un receptor LDCAM enlazado a la superficie. Los resultados cualitativos se pueden obtenerse a través de ensayos de unión de placa autoradiográfica compeíiíiva, o se pueden uíilizar gráficas Scatchard para generar resultados cuaníiíaíivos. Allernaíivameníe, las proteínas de unión LDCAM tales como B7L-1 y anticuerpos Anti-LDCAM, se pueden enlazar a una fase sólida íal como una maíriz de cromatografía de columna HHT o un substrafo similar adecuado para identificar, separar, o purificar células que expresan LDCAM sobre su superficie. La unión de una proteína de unión LDCAM a una fase sólida poniendo coníacío la superficie se puede lograr a través de cualquier medio, por ejemplo, a través de la construcción de una proteína difusión B7L-1/Fc tal como la fase sólida a través de la interacción de la proteína A o proteína G. Varios otros medios para fijar proíeínas a una fase sólida son bien conocidos en la íécnica y son adecuados para uso en la presente invención. Por ejemplo, las microesferas magnéticas se pueden recubrir con B7L-1 y maníenerse en un recipieníe de incubación a través de un campo magnético. Las suspensiones de las mezclas de célula coníeniendo células que expresan LDCAM se ponen en coníacto con la fase sólida que tiene polipépíidos B7L-1 en la misma. Las células que tienen LDCAM en su superficie se unen B7L-1 fija y las células no enlazadas se lavan. Este método de afinidad-enlace es útil para purificar, clasificar o separar dicha células que expresan LDCAM de la solución. Los métodos para liberar células posiíivamente seleccionadas de la fase sólida son conocidos en la técnica y abarcan, por ejemplo, el uso de enzimas. Dichos enzimas son preferiblemente no tóxicas y no dañinas. para las células y están preferiblemente dirigidas para dividir el asociado de unión de ia superficie de célula. En el caso de inferacciones B7L-1:LDCAM, la enzima preferiblemeníe libera la suspensión de célula resultante del material LDCAM. La población de células purificada, especialmente si se obtuvo de un tejido fetal, entonces se puede utilizar para repoblar los tejidos maduros (adulío). Alternativamente, las mezclas de células que se sospecha que tienen células LDCAM+ primero se pueden incubar con B7L-1 bioteñido. Los períodos incubación son íípicameníe de por lo menos una hora en duración para asegurar un enlace suficieníe a LDCAM. La mezcla resulíaníe eníonces se pasa a íravés de una columna impacíada con perlas recubierías con avidina, mienfras que la alia afinidad de la biotina para la avidina provee el enlace de la célula a las perlas. El uso de perlas cubiertas con avidina es conocida la técnica. Ver Berenson, y otros J Cell. Biochern., 10D:239(1986). Elevado el material no unido y la liberación de las células enlazadas se lleva cabo utilizando métodos convencionales. Como se describe anteriormeníe, B7L-1 se puede utilizar para separar células que expresan LDCAM. En un método alternaíivo, LDCAM o un dominio extracelular o un fragmento del mismo se puede conjugar con una porción detectable tal como 125l para detectar células que expresan B7L-1. La radiomarcación con 125l se puede llevar a cabo a través de cualquiera de varias metodologías estándares que producen una molécula 125I-LDCAM funcional marcada para una alia acíividad específica. Un anticuerpo yodinado o bioteñido contra la región B7L-1 o la región Fc de la molécula se puede utilizar. Otra porción deíectable tal como una enzima que puede caíalizar una región coloriméírica o fluorométrica, se puede utilizar biotina o avidina. Las células que se van a probar para la expresión de B7L-1 se pueden poner en coníacío con LDCAM marcado. Después de la incubación, el LDCAM marcado no enlazado se remueve y el enlace se mide ufilizando la porción deíectable. Las características de unión de LDCAM (incluyendo variantes) también se puede determinar utilizando el conjugado, LDCAM/Fc soluble (por ejemplo, 125l-LDCAM/Fc) en ensayos de competición similares a aquellos descritos anteriormente en este caso, sin embargo, las células intactas que expresan el enlace LDCAM/Fc a un substrato sólido, se utilizan para medir la extensión a la cual una muestra conteniendo una variante LDCAM putaíiva compiíe para el enlace con un asociado de unión soluble conjugado para LDCAM. Oíros medios para ensayar LDCAM incluyen el uso de aníicuerpos anti-LDCAM, líneas de célula que proliferan en respuesta a LDCAM, o líneas de célula recombinaníes que proliferan en presencia de LDCAM. Las proíeínas LDCAM descriías aquí también se pueden emplear para medir la actividad biológica de B7L-1 u oirás proteínas enlace LDCAM en términos de afinidad de unión para LDCAM. Como un ejemplo, LDCAM se puede utilizar para determinar si la acíividad biológica es reíenida después de la modificación de B7L-1 (por ejemplo, modificación química, truncamiento, mutación, etc.). La actividad biológica de una proteína B7L-1 de esta forma se puede evaluar aníes que se utilice en un estudio investigación, o posiblemente en la clínica, por ejemplo. Las proteínas LDCAM encuentran uso como reactivos que puede ser empleados por aquéllos estudios que conducen el "aseguramienío de la calidad", por ejemplo, para monitorear la vida en el estante y la estabilidad de B7L-1 u otra proteínas de unión LDCAM bajo diferentes condiciones. Para ilustrarlo, LDCAM puede emplearse en un estudio de afinidad de unión para medir la actividad biológica de una proteína B7L-1 que ha sido almacenada a diferentes temperaturas, o producida en diferentes tipos de célula. La afinidad de unión de la proíeína B7L-1 modificada para LDCAM se compara con aquella de una proíeína B7L-1 no modificada para deíectar cualquier impacto adverso sobre las modificaciones en la actividad biológica de B7L-1. Igualmente, la actividad biológica de la proteína LDCAM se puede evaluar utilizando B7L-1. Los polipéptidos LDCAM también encuentran uso como portadores para entregar agentes anexos ahí para células T u otras células que llevan B7L-1, LDCAM y/o CRTAM. Las proíeínas LDCAM se pueden utilizar para entregar agentes de diagnóstico o terapéuticos para estas células en procedimientos in Vitro o in vivo. Como se describió en el Ejemplo 5, LDCAM se encuentra en la línea de células PAE81BM, la cual es una línea de célula transformada EBV. De esta forma, un ejemplo del uso de dicho poríador es exponer esía línea de célula a un agente terapéuíico/conjugado LDCAM para evaluar si el agente exhibe citotoxicidad contra cualquier cáncer EBV. Adicionalmeníe, ya que LDCAM se expresa sobre células dendríticas y células B activadas CD40L que son importantes en la presentación de antígeno, LDCAM es un poríador úíil para acfivar, idenlificar y purificar ésías células. También, los conjugados de LDCAM/ageníe de diagnósíico se pueden emplear para defecíar la presencia de células dendrííicas y células B in Vitro o in vivo. El Ejemplo 6 demuesíra que las transcripciones de ARNm de LDCAM, se encuentran en carcinoma de pecho, retinal, hígado fetal, bazo, corazón feíal, pulmón, placenía, íiroides y pulmón humano. Los estudios similares para la expresión de ARNm de LDCAM mostraron que el ARNm de LDCAM se encueníran en células de embrión compleías, testículos, células dendríticas derivadas de linfoide y células negativas íriples. Ya que, LDCAM se une asimismo, LDCAM se puede uíilizar para esíudiar su papel funcional en estos tejidos. Alternativamente, LDCAM se puede activar para otros asociados de unión LDCAM, tales como, pero no limifándose a B7L-1, CRTAM y LDCAM, o células objeíivo adicionales. Los ejemplos incluyen, pero no se limiían a, células T CD4+ acíivadas, células CD8 + , células NK-T y/o células NK a íravés de CRTAM; células que presenían antígeno, tales como la células dendríticas, las cuales incluyen las células dendríticas humanas BDCA3+ y CD8a+ a través de LDCAM. Un número de diferentes ageníes terapéuticos u otros marcadores funcionales agregados a LDCAM, así como anticuerpos Aníi-LDCAM o CRTAM, pepíicuerpos y similares, se pueden utilizar en conjugados en un ensayo para detectar y comparar los efectos citotóxicos de los agentes sobre las células o estudiar el papel de LDCAM en tejidos y células. Los agentes de diagnóstico y terapéuticos que se pueden agregar a un polipéptido LDCAM incluyen, pero no se limiían a, fármacos, íoxinas, radionúclidos, cromóforos, enzimas que caíaliza en una región coloriméírica o fluorométrica, y similares, con el agente particular siendo seleccionado de acuerdo con la aplicación prevista. Ejemplos de fármacos incluyen aquellos utilizados para tratar varias formas de cáncer, por ejemplo, mostaza de nitrógeno íales como la mosíaza de nitrógeno de N-fenilalanina o ciclofosfamida, intercalando agentes tales como cis-diaminocloroplatino, antimetabolitos tales como 5-fluoroacüo, alcaloides vinca tales como vincristina, y antibióticos tales como bleomicina, doxorubicina, daunorubicina, y derivados de los mismos. Entre las toxinas están ricina, abrina, toxina de difteria, la exotoxina A de Pseudomonas aeruginosa, proteínas de inactivación ribozomal, micotoxinas tales como íricotecenes, y derivados y fragmentos (por ejemplo, cadenas individuales) de las mismas. Los radionúclidos adecuados para uso diagnóstico incluyen, pero no se limitan a 123l, 131l, 99mTc, mln, y 76Br. Los radionúclidos adecuados para uso terapéuíico incluyen, pero no se limitan a 131l, 211At, 77Br, 186Re, 188Re, 12Pb, 212Bi, 109Pd, 64Cu, y 67Cu. Dichos ageníes pueden estar unidos a LDCAM, así como a anticuerpos, pepíicuerpos Aníi-LDCAM o CRTAM, y similares, a través de cualquier procedimiento convencional adecuado. LDCAM, siendo una proteína, comprende grupos funcionales sobre cadenas laterales de aminoácido que pueden reaccionar con grupos funcionales sobre una gente deseado para formar enlaces covalentes, por ejemplo. Alternaíivamenfe, la proteína o agente se puede derivatizar para generar o anexar un grupo funcional reactivo deseado. La derivatización puede involucrar anexar uno de los reactivos de acoplamienío bifuncionales disponibles para anexar varias moléculas a las proíeínas (Pierce Chemical Company, Rockford, Illinois). Se conocen un número de técnicas para radiomarcar proteínas. Los metales de radionúclidos se pueden anexar a LDCAM a través del uso de un agenfe de quelaíación adecuado, por ejemplo. Los conjugados que comprenden LDCAM, así como aníicuerpos anti-LDCAM os CRTAM, pepticuerpos y similares, y un ageníe de diagnósíico o íerapéuíico adecuado (preferiblemente covalentemente enlazado) de esía forma se preparan. Los conjugados se adminisíran o por el contrario se emplean en una cantidad apropiada para la aplicación particular. Como se mencionó anteriormente, debido a que LDCAM bloquea la proliferación de célula T causada por ConA y PHA y no inhibe la proliferación de célula T inducida por TCR mAb, los efectos inhibidores de LDCAM en la proliferación de célula T inducida por nitrógeno se puede deber a la inhibición de la secreción ciíosina, por ejemplo IL-2. Por consiguiente, otro uso de LDCAM de la presente invención es como una herramienta de investigación para estudiar el papel que juega LDCAM en la producción de IL-2 en células T. Los polipéptidos LDCAM de la presente invención también se pueden emplear en ensayos in Vitro para la deíección de B7L-1 o las interacciones de los mismos. Una modalidad de la presente invención está dirigida a un método para tratar trastornos asociados con el mal funcionamiento del sistema inmune. Más paríicularmeníe, ya que se sabe que LDCAM bloquea células T esíimuladas por ConA y células T esíimuladas por PHA, LDCAM puede ser útil para tratar trastornos de inflamación y autoinmunes mediados por respuestas de célula T. una composición que incluye una proteína LDCAM, preferiblemente un polipéptido soluble, y un diluyente o poríador farmacéuíicameníe acepíable se puede adminisírar a un mamífero para íraíar dicho írastorno inflamatorio o autoinmune. Los ratones SCID que han sido infectados con LDCAM soluble, en la forma de LDCAM/Fe, experimentaron un incremenío en la celularidad esplénica. Paríe de esíe incremenío es debido a un incremenío en células DX-5 + , íambién conocidas como células aniquiladoras naíurales (células NK). Cuando se inyectan con LDCAM/Fc e IL-15, un factor de crecimienío de célula NK, los raíones SCID demostraron un incremento en células NK que es aditivo. Esío además demuesíra la habilidad de LDCAM, LDCAM soluble de fragmeníos LDCAM, así como agonisías LDCAM para generar células NK. En visía de este descubrimiento, otra modalidad de la presente invención incluye méíodos para incremeníar el número de células NK en un individuo a través de la administración, a ese individuo, de composiciones farmacéuíicas, de la presente invención, conteniendo LDCAM, fragmentos LDCAM de LDCAM soluble, así como agonistas LDCAM. En otra modalidad, las células NK se pueden incrementar in vivo poniendo en contacto las células NK con LDCAM, o formas solubles de LDCAM, así como agonistas LDCAM y permitiendo que las células NK se expandan. Similarmente, la células NK se pueden generar in vivo o ex vivo, como se acaba de describir, a íravés de la administración de LDCAM o formas solubles de LDCAM, así como agonistas de LDCAM en conexión con citocinas adicionales o factores de crecimiento. De ésta forma, los presentes métodos para generar células NK, in vivo o ex vivo además pueden incluir el uso de una cantidad efectiva de una citocina en una combinación secuencial o concurrente con LDCAM. Dichas citocinas incluyen, pero no se limiían a, iníerleucinas ("ILs"), IL-15, I L-3 e IL-4, una colonia de factores de estimulación ("CSF") seleccionados del grupo que consisíe de el factor de estimulación de la colonia de macrófago de granulocito ("GM-CSF") o fusiones GM-CSF/IL, u otras citocinas tales como TNF-a , proteínas de unión CD40 (por ejemplo CD40-L), antagonistas 4-1BB (por ejemplo anticuerpos inmunoreactivos con 4-1BB y 4-1BB-L) o ligando de equipo c.

Las células NK son linfociíos granulares grandes que se diferencia en de los linfocitos T o B en la morfología y la función. Las células NK median la aniquilación de ciertas células de tumor y células viralmeníe infecíadas en formas restringidas no de MHC. Adicionalmente, las células NK están involucradas en el rechazo de células del donador a través de receptores de transplante de médula espinal. Ya que LDCAM incrementa los números de célula NK, LDCAM, LDCAM soluble, los fragmentos de LDCAM, así como los agonistas de LDCAM son útiles para combatir células viralmeníe infectadas y enfermedades infecciosas. Similarmente, LDCAM, LDCAM soluble, y los fragmentos de LDCAM son útiles para aniquilar células de íumor. Por consiguienfe, deníro de casa de la presente invención están los métodos para íratar enfermedades infecciosas y métodos para traíar individuos afectados con tumores. Dichos métodos íerapéuíicos involucran la adminisíración de LDCAM, formas solubles de LDCAM, o fragmeníos LDCAM un individuo en la necesidad de incrementar su número de células NK con el fin de aniquilar células de tumor o mejorar su habilidad para combatir la enfermedad infecciosa. Similarmente, los métodos terapéuticos en la presente invención pueden llevarse a cabo a íravés de la administración de LDCAM, LDCAM soluble, por ejemplo proteína de fusión LDCAM, o fragmeníos LDCAM secuencialmeníe o concurrentemente en combinación con citocinas. Dichas ciíocinas incluyen, pero no se limiían a, iníerleucinas ("ILs") y IL-15, I L-3 e IL-4, un facíor estimulador de colonia ("CSF") seleccionado del grupo que consiste del factor de esíimulación de la colonia de macrófago de granulocito ("GM-CSF") o fusiones GM-CSF/IL-3, u otra citocinas tales como TNF-a, proíeínas de unión CD40 (por ejemplo, CD40-L), antagonistas 4-1BB (por ejemplo, anticuerpos inmunoreactivos con 4-1BB y 4-1BB-L) o un ligando de equipo c. Además dentro del alcance de la presente invención están los métodos para prevenir o disminuir el efecto de rechazo al transplaníe de órgano o médula espinal a través de receptores del íransplante. Dichos métodos involucran traíar los recepíores con una composición que incluye un antagonista LDCAM, De esta forma inhibiendo los incrementos en las poblaciones de célula NK y disminuyendo la habilidad de las células NK para rechazar los transplaníes. El íraíamienío de células endoteliales humanas (aórtica y cordón umbilical) con una forma soluble de LDCAM humano da como resultado flujos de calcio deníro de las células. Los flujos de calcio en células endoteliales son importantes en la modulación de la permeabilidad vascular, la migración de la célula endotelial y la angiogénesis, y la adhesión y transmigración de leucocitos. Los polipéptidos LDCAM y los inhibidores LDCAM pueden por consiguiente uíilizarse para mejorar el suminisíro de fármacos a íravés de la sangre-barrera del cerebro, para aumentar una respuesta inmune coníra un íumor o paíógeno, para disminuir un síndrome autoinmune o inflamatorio, para disminuir la adhesión de leucocito y la formación de placas ateroescleróíicas, para bloquear la angiogénesis, en el íratamiento de filtración vascular patogénica. Los polipéptidos LDCAM, así como los antagonistas y agonistas LDCAM, pueden existir como oligómeros, tal como dímeros o írímeros covalentemente enlazados o no covalentemeníe enlazados. Los oligómeros pueden esíar enlazados a íravés de enlaces de disulfuro formados enfre residuo se cisíeina en difereníes polipépíidos LDCAM. En una modalidad de invención, un dímero LDCAM se crea a través de la función de LDCAM con una región Fc de un anticuerpo (por ejemplo Ig G 1 ) en una forma que no iníerfieren con la unión de LDCAM a las células T, B7L-1 o sí mismo. El polipéptido Fc preferiblemente se fusiona con el término C de un LDCAM soluble (comprendiendo solamente el enlace del receptor). La preparación general de proteínas de fusión que comprenden polipépíidos heíerólogos fusionados a varias porciones de polipépíidos derivados de aníicuerpo (incluyendo el dominio Fc) se han descrito, por ejemplo, por Ashkenazi y otros (PNAS USA 88 : 10535,1991) y Byrn y otros (Nature344 : 677, 1990), que se incorporan aquí por referencia. Una fusión de gen que codifícala proteína de fusión LDCAM:Fc se inserta dentro de un vector de expresión apropiado. Las proteínas de fusión LDCAM:Fc tienen permiso de ensamblarse de una forma muy parecida a las moléculas de anticuerpo, por lo cual los enlaces de disulfuro entre cadenas formadas entre los polipéptidos Fc, producen LDCAM divaleníe. Si las proíeínas de fusión se hacen íanío con cadenas ligeras como pesadas de un aníicuerpo, es posible formar un oligómero LDCAM con íanías como cuaíro regiones extracelulares LDCAM. Alternaíivameníe, se pueden enlazar dos dominios LDCAM solubles con un enlazador de péptido. Antaqonisías de agonistas como Oliqómeros basados en inmunoqlobulina. Las formas adecuadas de antagonistas y agonisías LDCAM incluyen proteínas quiméricas que incluye un segundo polipéptido que puede promover la formación esponíánea a íravés de la profeína quimérica de un dímero, írímero o mulíímero de orden mayor que es capaz de unirse a sus respecíivos cognados y por lo tanto inhibido reducir los efectos de inflamación y los síntomas de la enfermedad cardiovascular. Las proteínas quiméricas utilizadas como aníagonisias o agonisías pueden ser proteínas que contienen porciones de una molécula de anticuerpo y un polipéptido soluble de LDCAM, B7L-1, o CRTAM. Las proteínas de función adecuadas incluyen un polipépíido LDCAM, B7L-1 o CRTAM, por ejemplo, el dominio exíracelular, o un fragmenío del dominio exíracelular, enlazado a una región Fc de inmunoglobulina. Los fragmentos de una región Fc también se pueden utilizar, así como muteinas Fc que exhiben una afinidad en disminución para los receptores Fc. LDCAM soluble, B7L-1 o CRTAM, así como fragmentos de los mismos, se pueden fusionar directameníe o a íravés de secuencias enlazadoras a la porción Fc de una inmunoglobulina. Una modalidad de un antagonisía o agonisía LDCAM está dirigida a un dímero que comprende dos polipéptidos de fusión creados a través de la fusión del polipéptido LDCAM, B7L-1, o CRTAM con un polipéptldo Fc derivado de un aníicuerpo. Una fusión de gen que codifica dicho polipépíido de fusión se insería dentro de un vector de expresión apropiado. Los polipéptidos de fusión LDCAM, B7L-1 o CRTAM-Fc se expresan en células huésped íransformadas con el vecíor de expresión recombinaníe, y tienen permiso de ensamblar de forma muy similar a las moléculas anticuerpo, por lo cual los enlaces de disulfuro entre cadenas se forman entre las porciones Fc para producir moléculas divalentes. Un polipéptido Fc adecuado, descrito en la solicitud PCT WO 93/10151, es un polipéptido de cadena individual que se extiende de la región de gozne N-terminal al término C de la región Fc de un anticuerpo IgG 1. Para una forma divalente de LDCAM, B7I-1 o CRTAM, dicha fusión podría ser a la porción Fc de u.na molécula IgG. Otros isotipos de inmunoglobulina íambién se podrán utilizar para generar dichas funciones. Por ejemplo, una fusión de polipéptido-lgM podría generar una forma decavalente del polipéptido de la invención. La preparación de los polipéptidos de fusión comprenden ciertos polipéptidos heterólogos fusionados a varias porciones de los polipéptidos derivados del anticuerpo (incluyendo el dominio Fc) se conoce la técnica y han sido descritas, por ejemplo, por Ashkenazi y otros (PNAS USA 88: 10535, 1991); Byrn y otros (Nature 344: 677,1990); y Hollenbaugh y Aruffo ("Construcíion of Immunoglobulin Fusión Polypepíides", ín Current Protocols in Immunology, Suppl. 4, páginas 10.9.1-10.19.11, 1992). Otro polipéptido Fc útil es la muteina Fc descrita en la patente de E.U.A. No. 5,457,035 y en Baum y otros, (EMBO J. 13: 3992-4001,1994). La secuencia de aminoácido de esta muteina es idéntica aquella de la secuencia Fc nativa en WO 93/10151, excepto que el aminoácido 19 ha sido cambiado de Leu a Ala, el aminoácido 20 ha sido cambiado de Leu a Glu, y el aminoácido 22 ha sido cambiado de Gly a Ala. La muteinas exhibe una afinidad reducida para ios recepíores Fc. Los polipéptidos de fusión anteriormente descritos comprenden porciones Fc (y oligómeros formados ahí) que ofrece la veníaja de la fácil purificación a íravés de cromaíografía de afinidad sobre las columnas del polipépíido A o el polipépíido G. En oirás modalidades, los polipéptidos de la invención se pueden sustiíuir por la porción variable de una cadena pesada o ligera del aníicuerpo. Si los polipépíidos de fusión se hacen íanío con cadenas ligeras como pesadas de un aníicuerpo, es posible formado un oligómero con íanías como 4 regiones exíracelulares IL-17R. Oliqómeros Basados en el enlazador de Aníaqonistas y Agonistas LDCAM. Alternaíivameníe, el oligómero es un polipépíido de fusión que comprende múlíiples polipépíidos LDCAM, B7L-1 y/o CRTAM, con o sin enlazadores de pépíido (pépíidos espaciadores). Entre los enlazadoras de péptido adecuados están aquellos descritos en las patentes de E.U.A. Nos. 4,751,180 y 4,935,233. Una secuencia de ADN que codifica un enlazador de péptido deseado se puede insertar entre, y en el mismo marco de lectura que, las secuencias de ADN de la invención, utilizando cualquier técnica convencional adecuada. Por ejemplo, un oligonucleótido químicamente sinteíizado que codifica al enlazador se puede ligar entre las secuencias. En modalidades particulares, un polipéptido de fusión comprende de 2 a 4 polipépfidos solubles LDCAM, B7L-1 o CRTAM, separados a fravés de los enlazadores de pépíido. Los enlazadores de péptido adecuados, su combinación con otros polipéptidos, y su uso son bien conocidos por aquellos con experiencia en la técnica. Las formas oligoméricas de los antagonistas y agonistas LDCAM pueden incluir el polipéptido LDCAM, B7L-1 o CRTAM, el dominio extracelular de LDCAM, B7L-1 o CRTAM, o el fragmento de LDCAM, B7L-1 o CRTAM del dominio extracelular asociado con un dominio de cierre, íales como las proíeínas cierre descriías en la patente de . E.U.A. No. 5,716,805, la descripción de la cual se incorpora aquí por referencia. Otros ejemplos de dominios de cierre son aquellos encontrados en el factor de transcripción de levadura GCN4 y una proteína de unión de ADN de calor estable encontrada en el hígado de rata (C/EBP; Landschulz y otros, Science 243:1681,1989), las proteínas de transformación nuclear, fos y yun, las cuales preferentemente forman un heterodímero (O'Shea y otros, Science 245: 646, 1989; Turner y Tjian, Science 243: 1689,1989), y el producto de gen del proto-oncogen de murino, c-myc (Landschulz y otros, Science 240: 1759, 1988). Las proteínas fusogénicas de varios difereníes virus, incluyendo paramixovirus, coronavirus, virus de sarampión y muchos reírovirus, íambién poseen los dominios de cierre de leucina (Buckland y Wild, Naíure 338: 547,1989; Britton, Naíure 353:394,1991; Delwarí y Mosialos, AIDS Research and Human Retroviruses 6: 703,1990). Los dominios de cierre de leucina son péptidos que promueven la oligomerización de los polipéptidos en los cuales se encuentran. Los cierres de leucina fueron originalmente identificados en varios polipéptidos de enlace de ADN y ahora se han encontrado en una variedad de diferentes polipéptidos. Entre los cierres de leucina conocidos ahí péptidos de exisíencia naíural y derivados de los mismos que dimerizan o írimerizan. El dominio de cierre (íambién referido aquí como una oligomerización, o formador de oligómero, dominio) comprende una repetición de septeío repeíitiva, por lo general con cuatro o cinco residuos de leucina entremezclados con otros aminoácidos. El uso de cierres de leucina y la preparación de los oligómeros utilizando cierres de leucina son bien conocidos en la técnica. La preseníe invención comprende polipépíidos de fusión con o sin grupos enlazadoras de aminoácido espaciadores. Por ejemplo, dos dominios LDCAM, B7L-1 o CRTAM solubles pueden estar enlazados con una secuencia enlazadora, tal como (Gly)4Ser(Gly)5Ser (SEC ID NO:32), la cual se describe en la patente de E.U.A. No. 5,073, 627. Otras secuencias enlazadoras incluyen, por ejemplo, GIyAlaGlyGIyAlaGlySer(GIy)5Ser (SEC ID NO:33), (Gly4Ser)2 (SEC ID NO:34), (GlyThrPro)3 (SEC ID NO:35), y (Gly4Ser)3Gly4SerGly5Ser (SEC ID NO:36). Las células huésped adecuadas para la expresión de antagonisías y agonisías LDCAM, íales como los polipépíidos LDCAM, B7L-1 o CRTAM incluyen células procarioíes, eucarióticos de levadura o mayores. Los vectores de clonación y expresión apropiados para uso con células huésped bacíerianas, de hongo, de levadura y de mamíferos se describen, por ejemplo, en Pouwels y oíros, Cloning Vecíors:A Laboraíory Manual, Elsevier, New York, (1985). Los sisíemas de íraducción libre de célula íambién se podrían emplear para producir polipéptidos LDCAM utilizando ARNs derivados de construcciones de ADN descriías aquí. Los procariotes incluyen organismos gran negativo o gran positivo, por ejemplo, E.coli o Bacilli. Las células huésped procaríóticas adecuadas para la transformación incluyen, por ejemplo, E. coli ,Bacillus subtilis, Salmonella typhimurium, y varias otras especies dentro del género Pseudomonas, Streptorrayces, y Staphylococcus. En una célula huésped procariótica, tal como E. coli, un polipéptido LDCAM puede incluir una residuo de metionina N-terminal para facilitar la expresión del polipéptido recombinante en la célula huésped procariótica. El Met N-íerminal puede dividirse del polipépíido LDCAM recombinaníe expresado. Los antagonistas y agonistas LDCAM íales como los polipépíidos LDCAM, B7L-1 o CRTAM se pueden expresar en células huésped de levadura, preferiblemente del género Saccharomyces (por ejemplo, S. cerevisiae). Otro género de levadura, íal como Pichia, K. lactis o Kluyveromyces, íambién se pueden emplear. Los vectores de levadura por lo general contendrán un origen de la secuencia de replicación de un plásmido de levadura 2µ, una secuencia que autónomameníe replica (ARS), una región del promolor, secuencias para la poliadenilación, secuencias para la terminación de la transcripción, y un gen marcador deíecíable. Las secuencias de promotor adecuadas para vectores de levadura incluyen, entre otros, los promotores para cinasa 3-fosfogliceraío (Hitzeman y otros, J. Biol. Chem. 255: 2073, 1980) u otras enzimas g I icol íticas (Hess y oíros, J. Adv. Enzyme Reg. 7:149, 1968; y Holland y otros, Biochem. 17:4900, 1978), tales como enolasa, deshidrogenasa de gliceraldehído-3-fosfato, hexocinasa, piruvato de descarboxilasa, fosfofructocinasa, isomerasa de glucosa-6-fosfaío, 3-fosfogliceraío de muiasa, cinasa de piruvaío, isomerasa de íriosefosfato, isomerasa de fosfoglucosa, y glucocinasa. Otros vectores y promotores adecuados para uso en la expresión de levadura además se describen en Hitzeman, EPA-73,657 o en Fleeryo ros, Gene, 107:285-195 (1991); y van den Berg y otros Bio/Technology, 8:135-139 (1990). Otra alternativa es el promotor ADH2 reprimible en glucosa descrito por Russell y oíros (J. Biol. Chem. 258:2674,1982) y Beier y otros (Nature 300:724, 1982). Los vecíores de plaíaforma tanto en levadura como en E. coli se pueden construir a través de la inserción de secuencias de ADN de pBR322 para la selección y replicación en E. coli (El ge Ampr y el origen de la replicación) dentro de los vectores anteriormente descritos. La secuencia líder del factor a de levadura se puede emplear para dirigir la secreción del polipéptido LDCAM. La secuencia líder del factor a por lo general se inserta entre la secuencia promotor y la secuencia del gen estructural. Ver, por ejemplo, Kurjan y otros, Cell 30:933, 1982; Bitter y otros, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 81: 5330, 1984; patente de E.U.A. No. 4,546,082; y EP 324,274. Otras secuencias líder adecuadas para faciliíar la secreción de polipépíidos recombinaníes de huéspedes de levadura son conocidas por aquellos con experiencia en la íécnica. Una secuencia líder se puede modificar cerca de su exlremo 3' para coníener uno o más sitios de restricción. Esto faciliíará la fusión de la secuencia líder con el gen estrucíural. Los proíocolos para la íransformación de levadura son conocidos por aquellos con experiencia en la técnica. Uno de dichos protocolos se describe por Hinnen y otros, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 75:1929, 1978. El protocolo de Hinnen y oíros selecciona los íransformantes Trp+ en un medio selectivo, en donde el medio selectivo consisfe de 0.67% de base de niírógeno de levadura, 0.5% de ácidos de casamino, 2% de glucosa, 10 µg/ml de adenina y 20 µg/ml de uracilo. Las células huésped de levadura íransformadas a íravés de vecíores coníeniendo la secuencia promoíor ADH2 pueden hacerse crecer para inducir la expresión en un medio "rico". Un ejemplo de un medio rico es uno que consisíe de 1% de exíracío de levadura, 2% de pepíona, y 1% de glucosa suplemeníada con 80 µg/ml de uracilo. La desrepresión del promofor ADH2 ocurre cuando la glucosa se agoía del medio. Los sisíemas de culíivo de célula huésped de mamífero o de insecto también se podrían emplear para expresar polipéptidos LDCAM recombinaníes. Los sisfemas de baculovirus para la producción de proteínas heterólogas en células de insecto se revisaron a través de Luckow y Summers, Bio/Technology 6:47(1988). Las líneas de célula establecidas de origen mamífero íambién se pueden emplear. Ejemplos de líneas de célula huésped de mamífero adecuadas incluyen la línea COS-7 de células de riñon de mono (ATCC CRL 1651) (Gluzman y ofros, Cell 23:175,1981), células L, células C127, células 3T3 (ATCC CCL 163), células de ovario de hámsíer Chino (CHO), células HeLa, y las líneas de célula BHK (ATCC CRL 10), y la línea de células CV-l/EBNA-1 derivada de la línea de célula de riñon de mono verde Africano CVI (ATCC CCL 70) como se describe a íravés de McMahan y oíros (EMBO J. 10:2821,1991). Las secuencias de conírol íranscripcional y de franslaciones para los vectores de expresión de célula huésped de mamífero se pueden extirpar de genomas virales. Las secuencias promotoras y secuencias mejoradotas utilizadas se derivan del virus Polioma, Adenovirus 2, Virus 40 de Simio (SV40), y citomegalovirus humano. Las secuencias de ADN derivadas del genoma viral SV40, por ejemplo, de origen SV40, el promotor anterior y el posterior, el mejorador, el empalme, y los sitios de poliadenilación se pueden utilizar para proveer oíros elemeníos genéíicos para la expresión de una secuencia del gen esíructural en una célula huésped de mamífero. Los promotores anterior y posterior virales son particularmeníe útiles debido a que ambos se obtienen fácilmente de un genoma viral como un fragmento que también puede contener un origen viral de replicación (Fiers y oíros, Naíure 273: 113,1978). Los fragmentos de SV40 más pequeños o más grandes también se pueden utilizar, siempre que aproximadamente 250 bp de la secuencia se extienda desde el sitio Hind lll hacia el sitio Bgl localizado en el origen viral de SV40 del siíio de replicación se incluya. Los vecíores de expresión ilustrativos para uso en células huésped de mamífero se pueden construir como de describe en Okayama y Berg (Mol. Cell. Biol. 3:280, 1983). Un sistema útil para la expresión de alto nivel estable de ADNcs de mamífero en células epiíeliales de mamífero de murino C127 se puede construir substancialmente como se describe a través de Cosman y otros (Mol. Immunol. 23:935, 1986). Un vector de expresión de alta expresión, PMLSV N1/N4, descrito por Cosman y oíros, Naíure 312:768, 1984 ha sido deposiíado como ATCC 39890. Los vecíores de expresión de mamífero úíiles adicionales se describen en EP-A-0367566, y la paíeníe de E.U.A. No. se serie 07/701,415, preseníada el 16 de mayo de 1991, incorporan aquí por referencia. Los vecíores se pueden derivar de reírovirus. En lugar de la secuencia de señal ' nativa, y además de una metionina iniciadora, se puede agregar una secuencia de señal heteróloga, tal como la secuencia de señal para IL-7 descrita en la patente de E.U.A. No. 4.965,195; la secuencia de señal para el receptor IL-2 descrita en Cosman y otros, Nature 312:768 (1984); el péptido de señal IL-4 descriío en EP 367,566; el péplido de señal recepíor de tipo I IL-1 descrito en la patente de E.U.A. No. 4.968,607; y el péptido de señal del recepfor de íipo II IL-2 descriío en EP 406,846. Los aníagonistas y agonistas LDCAM, como una proíeína purificada u homogénea, aislada, de acuerdo con la invención, se pueden producir a través de sistemas de expresión recombinantes como se describió anteriormenfe de células de exisíencia natural. LDCAM se puede purificar a una homogenicidad substancial, como se indica a través de un análisis de banda de proteína individual a íravés de electroforesis de gel de SDS-pollacrilamida (SDS-PAGE). Un proceso para producir LDCAM comprende cultivar una célula huésped transformada con un vector de expresión que comprende una secuencia de ADN que codifica LDCAM bajo condiciones suficientes para promover la expresión de LDCAM. LDCAM entonces se recupera del medio de cultivo o de los extracíos de célula, dependiendo del sisíema de expresión empleado. Como se sabe por los técnicos experimentados, los procedimientos para purificar una proteína recombinante variarán de acuerdo con factores tales como el tipo de la célula huésped empleada, y si la proteína recombinante se secreta o no se secreía deníro del medio de cultivo. Por ejemplo, cuando se emplean los sistemas de expresión que secreta en la proteína recombinaníe, el medio de culíivo primero se debe concentrar utilizando un filtro de concentración de proteína comercialmente disponible, por ejemplo, una unidad de ultrafiltración Amicon o Millipore Pellicon. Después del paso de concentración, el concentrado se puede aplicar a una matriz de purificación tal como un medio de filtración de gel. Alternativamente, se puede enviar una resina de intercambio de anión, por ejemplo, una matriz o substrato que tiene grupos de dietilaminoetilo pendieníes (DEAE). Las matrices pueden ser acrilamida, agarosa, dextrana, celulosa u otros íipos comúnmeníe empleados en la purificación de la proíeína. Alíernaíivameníe, se puede enviar un paso de infercambio de caíión. Los intercambiadores de catión adecuados incluyen varios matrices insolubles que comprenden los grupos sulfopropilo y carboximetilo. Los grupos sulfopropilo son preferidos. Finalmente, uno o más pasos de cromatografía de líquido de alto rendimiento de fase inversa (RP-HPLC) que emplean medio RP-HPLC hidrofóbico, (por ejemplo, gel de sílice que tiene grupos metilo u otros grupos alifáticos pendientes) se pueden uíílizar para purificar adicionalmeníe LDCAM. Algunos o iodos los pasos de purificación aníeriormente mencionados, en varias combinaciones, son bien conocidos y se pueden emplear para proveer una proteína recombinante substancialmeníe homogénea. Es posible utilizar una columna de afinidad que comprende el dominio de unión a ligando de una proteína de unión LDCAM para la afinidad-pureza de los polipéptidos LDCAM expresados. Los polipéptidos LDCAM se pueden remover de una columna de afinidad utilizando técnicas convencionales, por ejemplo, en un regulador de pH de elución alto en sal y después dializando dentro de un regulador de pH bajo en sal para uso o para cambiar el pH u otros componentes dependiendo de la matriz de afinidad utilizada.

Alternaíivamente, la columna de afinidad puede comprender un anticuerpo que se une a LDCAM. El Ejemplo 10 describe un procedimiento para emplear LDCAM de la invención para generar anticuerpos monoclonales dirigidos coníra LDCAM. La proteína recombinante producida en el cultivo bacterial se puede aislar a través de una interrupción inicial de las células huésped, configuración, extracción de pellas de célula en un polipéptido insoluble, o del fluido del sobrenadante si un polipéptido soluble, seguido por un uno o más pasos de concentración, poner una capa de sal, iníercambio de ion, purificación de afinidad, o cromatografía de exclusión de tamaño. Finalmente, RP-HPLC puede empleados los pasos de purificación finales. Las células microbiana se pueden iníerrumpir a íravés de cualquier méíodo conveniente, incluyendo el ciclo de congelado-descongelad?, sonificación, interrupción mecánica, o el uso de agentes para lisación de célula. Las células huésped de levadura transformadas preferiblemente se emplean para expresar LDCAM como un polipéptido secretado para simplificar la purificación. El polipéptido recombinante secretado de una fermentación de célula huésped de levadura se puede codificar a través de métodos análogos a aquellos descritos por Urdal y otros (J. Chromatog 296: 171,1994). Uradal y otros describen dos pasos de HPLC de fase inversa, secuenciales, para la purificación de IL-2 humano recombinante sobre una columna HPLC preparativa. Los fragmeníos úíiles de ácidos nucleicos LDCAM incluyen oligonucleótidos aníisentido o sentido que comprenden una secuencia de ácido nucleico estrucíura de cadena individual (ya sea a RM o ADN) capas de unirse a secuencias ARNm de LCDAM objeíivo (seníido) o ADN de LDCAM (aníisentido). Los oligonucleótidos antiseníido o seníido, de acuerdo con la presente invención, comprenden un fragmento de la región de codificación de ADNc de LDCAM. Dicho fragmenío generalmeníe comprende por lo menos 14 nucleófidos, preferiblemente de aproximadamente 14 a aproximadamente 30 nucleótidos. La habilidad para derivar un oligonucleótido antiseníido o un oligonucleóíido seníido, con base en la codificación de la secuencia de ADNc que codifica las proteínas dadas se describe en, por ejemplo, Stein y Cohén (Cáncer Res. 48: 2659,1988) y van der Krol y otros (BioTechniques 6: 958,1988). 4. CRTAM Como se describió anteriormente, los agonistas y antagonisías LDCAM comprenden aníicuerpos específicos de CRTAM, pepíicuerpos específicos de CRTAM o polipépíidos solubles que se unen a los efecíos biológicos en corrieníe descendieníe modulados de CRTAM (tal como LDCAM) del enlace de CRTAM a uno o más asociados de unión CRTAM, tales como LDCAM. CRTAM se describe en la patente de E.U.A. No. 5,686,657, la cual se incorpora aquí por referencia su toíalidad. La secuencia para CRTAM humana se provee en SEC ID NO:11. 5. ENSAYOS DE LAS ACTIVIDADES DE LOS ANTAGONISTAS Y AGONISTAS DE LDCAM Los polipépíidos LDCAM purificados de la invención (incluyendo polipépíidos, fragmeníos, variantes, oligómeros y otras formas) son útiles en una variedad ensayos. Las modalidades incluyen ensayos de clasificación para identificar los compuestos de prueba que actúan como agonistas o antagonistas LDCAM. Se contempla Un número de formatos y permutaciones de los mismos, incluyendo, pero no limitándose a: un método para clasificar un antagonisía o agonisía LDCAM, que comprende: (a) combinar un polipépíido LDCAM aislado con un compuesto de prueba; (b) agregar un polipéptido CRTAM aislado; y (c) determinadas el enlace relativo del polipéptido LDCAM y el polipéptido CRTAM en presencia y ausencia del compuesío de prueba. Una modalidad alternativa incluyó método para clasificar un agonista o antagonista LDCAM, que comprende: (a) combinar una célula que expresa un polipéptido LDCAM con un compuesío de prueba; (b) agregar un polipéptido CRTAM aislado; y (c) determinar el enlace relativo entre la célula que expresa un polipépíido LDCAM y el polipépíido CRTAM en presencia y ausencia del compuesto de prueba. Una modalidad alternaíiva incluye método para clasificar un agonista o antagonista LDCAM, que comprende: (a) combinar una célula que expresa un polipéptido LDCAM con un compuesto de prueba; (b) agregar una célula que expresa un polipéptido CRTAM; y (c) determinar el enlace relaíivo entre la célula que expresa un polipépíido LDCAM y la célula que expresa el polipépíido CRTAM en la presencia y ausencia del compuesto de prueba. Una modalidad alternaíiva incluye un método para clasificar un agonista o aníagonisía LDCAM, que comprende: (a) combinar un polipéptido LDCAM aislado con un compuesto de prueba; (b) agregar una célula que expresa un polipéptido CRTAM; y (c) determinadas el enlace relativo entre el polipéptido LDCAM y las células que expresan un polipéptido CRTAM en la presencia y ausencia del compuesto de prueba. Una modalidad alternafiva incluye un método para clasificar un agonista LDCAM, que comprende: (a) combinar un polipéptido CRTAM aislado con un compuesto de prueba; y (b) determinar el enlace relativo entre compuesto de prueba y el polipéptido CRTAM. Una modalidad alternativa incluye un método para clasificar un agonista LDCAM, que comprende: (a) combinar una célula que expresa un polipéptido CRTAM; y (b) determinar el enlace relativo o efectos biológicos entre la célula que expresa un polipéptido CRTAM y el compuesto de prueba. Por ejemplo, LDCAM y las moléculas de fipo LDCAM de la presente invención se pueden utilizar para identificar asociados de unión de polipéptidos LDCAM, los cuales cambios se pueden utilizar para modular la comunicación intracelular, la estimulación de célula, por activación de célula inmune. Alternativamente, se pueden utilizar per identificar moléculas o substancias asociadas no de enlace, es decir, antagonisías o agonisías LDCAM, que modulan la comunicación iníracelular, las írayecíorias de la esíimulación de célula, o la actividad de célula inmune. Los polipéptidos LDCAM fambién encuentran uso en la medición de la actividad biológica de polipéptidos de enlace LDCAM en íérminos de su afinidad de unión. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a LDCAM, CRTAM, B7L-1, B71-4, así como anticuerpos Anti-LDCAM y pepticuerpos. Los ejemplos listados anleriormente se pueden emplear por aquellos que conducen ios estudios de "aseguramiento de la calidad", por ejemplo, para monitorear la vida en el estaníe ¡nesíabilidad del polipéptido bajo diferentes condiciones. Por ejemplo, los polipéptidos LDCAM se pueden emplear en un estudio de afinidad de unión para medir la actividad biológica de un polipéptido asociado de unión tal como, pero no limiíándose a, LDCAM (agregación homoíípica), B7L-1, B71-4, y CRTAM, que se han almacenado a difereníes íemperaíuras, o producido en difereníes íipos de células. Los polipéptidos también se pueden utilizar para determinar si la actividad biológica es retenida después de la modificación de un polipépíido asociado de unión (por ejemplo, modificación química, truncamientos, mutación, etc.). La afinidad de unión del polipéptido modificado se compara con aquel de un polipéptido de unión no modificado para detecfar cualquier impacío adverso de las modificaciones sobre la acíividad biológica del polipépíido de unión. Ensayos para Identificar Asociados de Unión. Los polipéptidos LDCAM y fragmentos de los mismos se perdonó utilizar identificar asociados de unión. Los asociados de unión para LDCAM incluyen, pero no se limitan a, LDCAM (agregación homotípica), B7L-1, B7L-4 y CRTAM. Por ejemplo, se pueden probar para la habilidad para unir un asociado de unión candidaío en cualquier ensayo adecuado, íal como un ensayo de unión convencional. Para ilustrarlo, el polipéptido LDCAM se puede marcar con un reactivo detectable (por ejemplo un radionúclido, una cromófora, una enzima que cataliza una reacción colorimétrica o fluoroméírica, y similares). El polipéptido LDCAM marcado se pone contacío con las células que expresan los asociados de unión candidato. Las células después se lavan para remover el polipéptido marcado n.o enlazado, y la presencia de la etiqueta de enlace de célula se determina a través de una técnica adecuada, seleccionada de acuerdo con la naíuraleza de la etiqueta.

Los polipéptidos LDCAM de la invención cada uno se puede utilizar como un reactivo en los métodos para clasificar o identificar los asociados de unión tales como, pero no limitándose a, LDCAM (agregación homotípica), B7L-1, B7L-4 y CRTAM. Por ejemplo, los polipéptidos LDCAM se pueden anexar a un material de soporte sólido y se pueden unir a sus asociados de unión en una forma similar a la cromaíografía de afinidad. En modalidades parficulares, un polipépíidos se adjunía a un soporíe sólido a través de procedimientos convencionales. Como un ejemplo, las columnas de cromatografía que contienen grupos funcionales que reaccionarán con grupos funcionales sobre cadenas laterales de aminoácido de polipéptidos están disponibles (Pharmacia, Biotech, Inc., Piscataway). En una alternaíiva, una proíeína difusión de polipéptidos LDCAM/Fc (como se discutió anteriormente) se atiene a la proteína A o a la proteína G que contiene columnas de cromatografía a través de interacción con la porción Fc. Los polipéptidos LDCAM también encuentran uso en la identificación de células que expresan el paírón de unión LDCAM en la superficie de célula íal como, pero no limitándose • a, LDCAM (agregación homotípica), B7L-1, B7L-4 y CRTAM. Los polipéptidos LDCAM purificados, así como otras formas, tales como variantes, fragmentos, proteínas de fusión o derivados, se enlazan a una fase sólida íal como una matriz de cromatografía de columna o un substrato adecuado similar. Por ejemplo, las microesferas magnéticas se pueden cubrir con el polipépíido y mantenerse en un recipiente de incubación a través de un campo magnético. Las suspensiones de mezclas de células conteniendo células que expresan el patrón de unión se ponen en contacto con la fase sólida que tiene los polipéptidos ahí. Las células que expresan el patrón de unión sobre el enlace de la superficie de célula para los polipéptidos fijos, y las células no enlazadas se lavan. Alternaíivameníe, los polipépíidos LDCAM se pueden conjugar a una porción deíecíable, después se incuban con células que se van a probar para la expresión del asociado de unión. Después de la incubación, la maíeria marcada no enlazadas se remueve y la presencia o ausencia de la porción deíecíable en las células se deíermina. En una alternaíiva adicional, las mezclas de células que se sospecha que expresan al asociado de unión se incuban con polipéptidos bioíeñidos. Los períodos de incubación son íípicamente de por lo menos una hora en duración para asegurar un enlace suficiente. La mezcla resultanfe eníonces se pasa a íravés de una columna empacada con perlas recubierías con avidina, mieníras que la alia afinidad de la bioíina para la avidina provee el enlace de las células deseadas a las perlas. Los procedimientos para utilizar perlas recubiertas con avidina son conocidos (ver Berenson, y otros J. Cell Biochem., 10D:239, 1986). Los lavados para remover el material no enlazado, y la liberación de las células unidas, se llevan a cabo utilizando métodos convencionales. En algunos casos, los métodos anteriores para clasificar o identificar los asociados de unión también se pueden utilizar o modificar para aislado purificar las moléculas del patrón de unión o células que los expresan. Ejemplos de asociados de unión descubiertos a íravés de dichos méíodos incluyen, pero no se limitan a, LDCAM (agregación homotípica), B7L-1, B7L-4 y CRTAM, como se describe en los Ejemplos. Un ejemplo de un procedimiento de ensayo de enlace es como sigue. Se construyen un vector de expresión recombinante conteniendo el ADNc del asociado de unión candidaío (íal como, pero no limitándose a, LDCAM (agregación homotípica), B7L-1, B7L-4 y CRTAM. Las células CV1-EBNA-1 en plaíos de 10 cm2 se íransfecíaron con su vecíor de expresión recombinaníe. Las células CV-1/EBNA-1 (ATCC CRL 10478) constitutivameníe expresan el antígeno-1 nuclear EBV conducido a partir del mejorador/promotor inmediato anterior CMV. CV1-EBNA-1 se derivó de la línea de células de riñon de Mono Verde Africano CV-1 (ATCC CCL 70), como se describe por McMahan y otros, (EMBO J. 10:2821, 1991). Las células transfecíadas se culíivaron duraníe 24 horas, y las células en cada plato después se dividieron en una placa de 24 cavidades. Después del cultivo durante 48 horas, las células transfectadas (alrededor de 4 x 104 células/cavidad) se lavaron con BM-NFDM, el cual es el medio de enlace (RPMl 1640 conteniendo 25 mg/ml de albúmina de suero de bovino, 2 mg/ml de azida de sodio, 20 mM de Hepes, pH 7.2) al cual se le agregaron 50mg/ml de leche seca sin grasa. Las células después se incubaron durante 1 hora a 37°C con varias concentraciones de, por ejemplo, un polipéptido soluble/polipéptido de fusión Fc de LDCAM hecho como se estableció anteriormente. Las células después se lavaron y se incubaron con una concentración de saturación constante de IgG anti-humano de ratón 1251 en medio de enlace, con una agitación gentil durante 1 hora a 37°C. Después del lavado extensivo, las células se liberaron a través de tripsinación. El IgG anti-humano de ratón empleado anteriormente se dirigió contra la región Fc del IgG humano y se puede obtener de Jackson Immunoresearch Laboratories, Inc., West Grove, PA. El anticuerpo se radio yodinó utilizando el método de cloramina-T. El anticuerpo se unirá a la porción Fc de cualquier polipéptido LDCAM/polipéptido Fc que se haya unido a las células. En todos los ensayos, se ensayó la unión no específica del 125l-anticuerpo en ausencia del polipéptido de fusión Fc/Fc, así como en la presencia del polipépíido de fusión Fc y un exceso molar de 200 veces de anticuerpo IgG anti-humano de ratón no marcado. El enlace 125l-anticuerpo de célula se cuantificó en contador Autogama Packard. Los cálculos de afinidad (Scatchard, Ann. N.Y. Acad. Sci. 51:660, 1949) se generaron en RS/1 (BBN Software, Bosíon, MA) y se corrieron en una compuíadora Microvax. El enlace íambién se puede detectar utilizando métodos que son muy adecuados para los procedimientos de alta producción de clasificación, tales como los ensayos de proximidad de cintilacion (Udenfriend y otros ,1985, Proc Nati Acad Sci USA 82:8672-8676), méíodos de fluorescencia resueltos en el tiempo homogéneos (Park y otros, 1999, Anal Biochem 269: 94-104), méíodos de íransferencia de energía de resonancia de fluorescencia (FRET) (Clegg RM, 1995, Curr Opin Biofechnol 6:103-110), o método que miden cualquier cambio en la resonancia de plasmón de superficie cuando un polipéptido enlazado se expone a un asociado de unión potencial, utilizando por ejemplo un biosensor tal como aquel suministrado por Biacore AB (Uppsala, Sweden). Los compuestos que se pueden ensayar para la unión a los polipéptidos de íipo LDCAM y/o LDCAM incluyen, pero no se limiían a, moléculas orgánicas pequeñas, íales como aquellas que esíán comercialmente disponibles por lo general como parte de 'colecciones' de compuesíos químicos de combinación grandes íales como Sigma- Aldrich (Sí. Louis, MO), Arqule (Woburn, MA), Enzymed (lowa Cify, IA), Maybridge Chemical Co. (Trevilleíí, Cornwall, UK), MDS Panlabs (Boíhell, WA), Pharmacopeia (Princeíon, NJ), y Trega (San Diego, CA). Las moléculas pequeñas orgánicas preferidas para la clasificación que utilizan estos ensayos son usualmente de menos de 10K de peso molecular y poseen un número de propiedades fisicoquímicas y farmacológicas que mejoran la penetración de la célula, resisten la degradación, y/o prolongan sus vidas medias fisiológicas (Gibbs, y otros, J., 1994, Pharmaceutical Research en Molecular Oncology, Cell 79(2): 193-198). Los compuestos que incluyen productos nafurales, químicos inorgánicos, y maíeriales biológicamente activos íales como proíeínas y íoxinas también se pueden ensayar utilizando estos méíodos para la habilidad de unirse a los polipéptidos LDCAM. Ensayos de Dos-Híbridos de Levadura o "Trampa de Interacción". En donde el polipéptido LDCAM se une o potencialmente se une otro polipéptido (es decir, por ejemplo, LDCAM (agregación homotípica), B7L-1 y CRTAM), el ácido nucleico que codifica el polipéptido LDCAM también se puede utilizar en los ensayos de írampa de iníeracción (es decir, por ejemplo, aquel descrito en Gyuris y otros, Cell 75:791-803 (1993)) para identificar ácidos nucleicos que codifica el oíro polipéptido con el cual ocurre el enlace o para identificar inhibidores de la interacción de unión. Los polipéptidos involucrados en estas interacciones de unión También CPDs utilizar para clasificar inhibidores o agonisías de pépíido o molécula pequeña de la iníeracción de unión. Ensayos de Unión Competitivos. Otro tipo de ensayos de unión adecuados es un ensayo de unión competitivo. Para ilustrarlo, la actividad biológica de una variante se puede determinar a través del ensayo de la habilidad de la varianíe para compeür con el polipéptido nativo en la unión del asociado de unión candidato. Los ensayos de unión competitivos se pueden entrar a cabo a través de metodología convencional. Los reactivos que se pueden utilizar en los ensayos de unión competitivos Incluyen LDCAM radiomarcado y células intactas que expresan polipéptidos LDCAM, B7L-1, B7L-4 o CRTAM (endógenos o recombinantes) sobre la superficie de célula. Por ejemplo, un fragmento LDCAM soluble radiomarcado, tal como la construcción LDCAM-Fc descrita en los ejemplos, se puede utilizar para competir con una variante LDCAM soluble para la unión con los asociados de unión. Un enlace de asociado de unión soluble/polipéptido de fusión Fc a una fase sólida a través de la interacción del polipéptido A o el polipéptido G (en la fase sólida) con la porción Fc se puede utilizar. Las columnas de cromaíografía que contienen el polipéptido A y el polipéptido G incluyen aquellos disponibles de Pharmacia Biotech, Inc., Pascaíaway, NJ. Ensayos para Identificar los Moduladores de la Comunicación Intracelular, Esíimulación de Célula, o Acíividad de la Célula nmune.

La influencia de los polipépíidos LDCAM sobre la comunicación iníracelular, esíimulación de célula, o actividad de célula inmune se puede manipular para controlar estas actividades en las células objetivo. Por ejemplo, los polipéptidos LDCAM descritos, los ácidos nucleicos que codifican los polipéptidos LDCAM descritos, o agonistas o antagonistas de dichos polipéptidos, se pueden administrar a una célula o grupo de células para inducir, mejorar, suprimir o deíener el enlace de la célula, la comunicación celular, la esílmulación de la célula, o la actividad en las células objetivo. La identificación de los polipéptidos, agonistas o aníagonisías LDCAM que se puede utilizar en esía forma se puede llevar a cabo a fravés de una variedad ensayos conocidos por aquellos con experiencia en la íécnica. Se incluyen en dichos ensayos aquellos que evalúan la habilidad de un polipépíido LDCAM para influencia sobre la unión de la célula, la comunicación intracelular, la estimulación o actividad de la célula. Dicho ensayo podría involucrar, por ejemplo, el análisis de la interacción de la célula inmune en la presencia de un polipéptido LDCAM. En dicho ensayo, se podría determinar un grado de comunicación o estimulación de célula en presencia del polipéptido LDCAM y después determinar si dicha comunicación o estimulación de célula se altera en la presencia de un agonista un antagonista candidato u oíro polipépíido LDCAM. Los ensayos ilusírativos para este aspecío de invención incluyen ensayos de secreción de ciíocina ensayos de co-esfimulación de célula T, y redacciones de linfociíos mezcladas que involucran el antígeno que presenta las células y las células T. estas ensayos son bien conocidos por aquellos con experiencia la técnica. Los ensayos adicionales se presenían en la sección ejemplos a coníinuación. En oíro aspecto, la presente invención provee un método para detecíar la habilidad de un compuesío de prueba para afecíar en la unión de célula, la comunicación iníracelular o la actividad estimuladora de la célula de una célula. En este aspecto, el método comprende: (1) poner en contacto un primer grupo de células objetivo con un compuesío de prueba incluyendo un polipépíido LDCAM o fragmenío del mismo bajo condiciones apropiadas para el ensayo particular que se está utilizando; (2) media es el grado neto del enlace de la célula, la comunicación intracelular o la esíimulación de la célula eníre las células objefivo; y (3) observar el grado neío de comunicación iníracelular o la esíimulación de la célula eníre las células de control que contienen el polipéptido LDCAM o fragmentos del mismo, en la ausencia de un compuesto de prueba, por el contrario bajo condiciones idénticas que el primer grupo de células. En esta modalidad, el grado neto de comunicación intracelular o estimulación de célula en las células de control se compara con aquel de las células traíadas íanío con la molécula de LDCAM como con el compuesío de prueba. La comparación proveerá una diferencia en el grado neío del enlace de célula, la comunicación intracelular o la estimulación de la célula de tal forma que un ejecutor del enlace de la célula, la comunicación iníracelular, o la estimulación de la célula puede ser identificado. El compuesto de prueba puede funcionar común ejecutador, a través ya sea de la activación o regulación de manera ascendente, o a íravés de la inhibición o regulación de manera descendente del enlace de la célula, la comunicación intracelular o la estimulación de la célula, y se puede detectar a través de éste método. Ensayos de Proliferación de Célula, Muerte de Célula. Diferenciación de Célula y Adhesión de Célula. Un polipéptido de la presente invención puede exhibir acíividad de ciíocina, proliferación de célula (ya sea induciendo o inhibiendo), o diferenciación de célula (ya sea induciendo o inhibiendo), o puede inducir la producción de otra citocinas en cierías poblaciones de célula. Muchos factores del polipéptido descubiertos a la fecha han exhibido dicha actividad en uno o más ensayos de proliferación de célula dependientes del factor, y por lo tanío los ensayos sirven como una confirmación convenieníe de la acíividad esíimuladora de la célula. La acíividad de un polipéptido de la presente invención se demuestra a través de cualquiera de un número de ensayos de proliferación de célula dependientes del factor de rutina para líneas de células incluyendo, sin limitación, 32D, DA2, DA1G, T10, B9, B9/11, BaF3, MC9/G, M + (preB M + ), 2E8, RB5, DAI, 123, T1165, HT2, CTLL2, TF-1, Mo7e y CMK. La actividad de un polipéptido LDCAM de la invención puede, entre otros medios, medirse a través de los siguieníes méíodós: Los ensayos para la proliferación de Célula T o timocito incluyen sin limitación a aquellos descritos en; Current Proíocols ¡n Immunology, Coligan y oíros eds, Greene Publishing Associates y Wiley-lnterscience (pp. 3.1-319: In vitro assays for mouse lymphocyte funcíion; Capííulo 7: Immunologic studies in humans); Takai y otros, J. Immunol. 137:3494-3500, 1986; Beríagnolli y oíros, J. Immunol. 145:1706-1712, 1990; Bertagnolli y otros, Cellular Immunology 133: 327-341, 1991; Bertagnolli, y otros, J. Immunol. 149:3778-3783, 1992; Bowman y otros, J. Immunol. 152:1756-1761,1994.

Los Ensayos para la producción y/o proliferación de citocina en células del bazo, células del nodo de linfa o timocitos incluyen, sin limitación, aquellos descritos en: Kruisbeek y Shevach, 1994, Polyclonal T cell stimulaíion, in Currení Proíocols in Immunology, Coligan y otros eds. Vol 1 pp. 3.12.1-3.12.14, John Wiley and Sons, Toronto; y Schreiber, 1994, Measurement of mouse and human interferon gamma in Current Protocols in Immunology, Coligan y otros, eds. Vol 1 pp. 6.8.1-6.8.8, John Wiley and Sons, Toronto. Los Ensayos para la proliferación y diferenciación de células hematopoyéticas incluyen, sin limitación, aquellos descriíos en: Boííomly y oíros, 1991, Measuremení of human and murine iníerleukin 2 and iníerleukin 4, in Currení Proíocols ¡n Immunology, Coligan y otros eds. Vol 1 pp. 6.3.1-6.3.12, John Wiley and Sons, Toronto; deVries y otros, J Exp Med 173:1205-1211, 1991; Moreau y otros, Naíure 336:690-692, 1988; Greenberger y otros, Proc Nati Acad Sci. USA 80:2931-2938, 1983; Nordan, 1991, Measurement of mouse and human interleukin 6, in Current Protocols in lmmunology Coligan y otros eds. Vol 1 pp. 6.6.1-6.6.5, John Wiley and Sons, Toronío; Smith y otros, Proc Nafl Acad Sci USA 83:1857-1861, 1986; Benneíí y ofros, 1991, Measuremení of human interleukin 11, in Current Protocols in Immunology Coligany otros eds. Vol 1 pp. 6.15.1 John Wiley and Sons, Toronío; Ciarleíía y otros, 1991, Measurement of mouse and human Interleukin 9, in Current Protocols in Immunology Coligan y otros eds. Vol 1 pp. 6.13.1, John Wiley and Sons, Toronto.

Los ensayos para las respuestas del clon de la célula T a anííqenos (los cuales ideníificarán, eníre otros, los polipéptidos que afecfan las iníeracciones de la célula T con APC así como los efectos de la célula T dirigidos a través de la medición de la proliferación y la producción de citocina), incluyen, sin limitación, aquellos descritos en: Current Protocols in Immunology, Coligan y otros eds, Greene Publishing Associaíes and Wiley-Interscience (Capítulo 3 : In vífro assays for mouse lymphocyte function; Capítulo 6: Cytokines and their ceilular receptors; Capííulo 7: Immunologlc siudies in humans); Weinberger y oíros, Proc Naíl Acad Sci USA 77:6091-6095, 1980; Weinberger y oíros, Eur. J. Immun. 11:405-11, 1981; Takai y oíros, J. Immunol. 137:3494-3500, 1986; Takai y oíros, J. Immunol. 140:508-512, 1988. Los ensayos para citotoxicidad de timocito o esplenocito incluyen, sin limitación, aquellos descritos en: Currení Protocols in Immunology, Coligan y otros, eds, Greene Publishing Associates and Wiley-lnterscience (Capííulo 3, In Viíro assays for Mouse Lymphocyte Function 3.1-3.19; Capítulo 7, Immunologic studies in Humans); Herrmann y otros, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 78:2488-2492, 1981; Herrmann y otros, J. Immunol. 128:1968-1974, 1982; Handa y otros, J. Immunol. 135: 1564-1572, 1985; Takai y otros, J. Immunol. 137:3494-3500, 1986; Takai y otros, J. Immunol. 140:508-512, 1988; Herrmann y otros, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 78:2488-2492, 1981; Herrmann y otros, J. lmmunol. 128:1968-1974, 1982; Handa y otros, J. Immunol. 135:1564-1572, 1985; Takai y otros, J. Immunol. 137:3494-3500, 1986; Bow an y otros, J. Virology 61:1992-1998; Takai y otros, J. Immunol. 140:508-512, 1988; Beríagnolli y otros, Cellular Immunology 133: 327-341, 1991; Brown y otros, J. Immunol. 153:3079-3092, 1994. 5 Los Ensayos para las respuestas de inmunoglobulina dependieníe de célula T e iníercambio de isoíipo ( los cuales idenfificarán, entre otros, los polipépíidos que modulan las respuestas del anticuerpo dependiente de célula T y que afectan los perfiles Thl/Th2) incluyen, sin limitación, aquellos descritos en: 10 Maliszewski, J Immunol 144:3028-3033, 1990; y Mond y Brunswick, 1994, Assays for B cell function: in vitro antibody production, in Current Protocols in Immunology Coligan y oíros eds. Vol 1 pp. 3.8.1- 3.8.16, John Wiley and Sons, Toronto. Los ensayos para la reacción de linfocito mezclado (MLR) (los 15 cuales identifican, entre otros, los polipéptidos que generan predominantemente las respuestas Th1 y CTL), incluyen, sin r limitación, aquellos descritos en: Current Protocols in Immunology, Coligan y otros eds, Greene Publishing Associates and Wiley- Interscience (Capítulo 3, In Viíro assays for Mouse Lymphocyíe 20 Function 3.1-3.19; Capítulo 7, Immunologic studies m Humans); Takai y otros, J. Immunol. 137:3494-3500, 1986; Takai y otros, J. Immunol. 140: 508-512, 1988; Bertagnolli y otros, J. Immunol. 149:3778-3783, 1992. Los ensayos dependientes de célula dendritica (los cuales 25 identificarán, entre otros, los polipéptido expresados a través de células dendríticas que activan las células T nativas), incluyen, sin limitación, aquellos descritos en Guery y otros, J. Immunol 134:536-544,1995; Inaba y otros, J Exp Med 173:549-559, 1991; Macatonia y oíros, J Immunol 154:5071-5079, 1995; Porgador y otros, J Exp Med 182: 255-260, 1995; Nair y otros, J Virology 67:4062-4069, 1993; Huang y oíros, Science 264:961-965, 1994; Macatonia y otros, J Exp Med 169:1255-1264, 1989; Bhardwaj y otros, J Clin Invest 94:797-07, 1994; e Inaba y otros, J Exp Med 172:631-640, 1990. Los ensayos para supervivencia del linfocito/apoptosis (los cuales identificarán, entre otros, los polipépíidos que previenen la apopíosis después de la inducción del superantígeno y los polipéptidos que regular la homeostasis del linfocito) incluyen, sin limitación, aquellos descritos en: Darzynkiewicz y otros, Cytomeíry 13:795-808, 1992; Gorczyca y oíros, Leukemia 7:659-670, 1993; Gorczyca y otros, Cáncer Research 53:1945-1951, 1993; Itoh y otros, Cell 66:233-243, 1991; Zacharchuk, J Immunol 145:4037-4045, 1990; Zamai y otros, Cytometry 14:891-897, 1993; Gorczyca y otros, International Journal of Oncology 1:639-648, 1992. Los ensayos para polipéptidos gue íienen influencia en los primeros pasos de compromiso y el desarrollo de la célula T incluyen, sin limiíación, aquellos descriíos en: Aníica y oíros, Blood 84:111-117, 1994; Fine y oíros, Cell Immunol 155:111-122, 1994; Galy y oíros, Blood 85:2770-2778, 1995; Toki y otros, Proc Nati Acad Sci. USA 88:7548-7551, 1991 Los ensayos para la diferenciación de célula de tallo embriónica (los cuales identifican, entre otros, los polipéptidos que tienen influencia en la hematopoyesis de la diferenciación embriónica) incluyen, sin limitación, aquellos descriíos en: Johansson y otros Cellular Biology 15:141-151, 1995; Keller y otros, Molecular and Cellular Biology 13:473-486, 1993; McCIanahan y otros, Blood 81:2903-2915, 1993. Ensayos para la supervivencia y diferenciación de célula de tallo (los cuales identificarán, entre oíros, los polipépfidos que regulan la linfo-hematopoyesis) incluyen, sin limitación, aquellos descritos en: Methylcellulose colony forming assays, Freshney, 1994, In Culture of Hemaíopoieíic Cells, Freshney y otros eds. pp. 265-268, Wiley-Liss, Inc., New York, NY; Hirayama y otros, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89:5907-5911, 1992; Primitive hematopoietic colony forming cells with high proliferative potential, McNiece and Briddell, 1994, ln Culture of Heiiiatopoiefic Cells, Freshney y otros eds. pp. 23-39, Wiley-Liss, Inc., New York, NY; Neben y otros, Experimental Hematology 22: 353-359, 1994; Ploemacher, 1994, Cobblestone área forming cell assay, In Culture of Hematopoietic Cells, Freshney y otros eds. pp. 1-21, Wiley-Liss, Inc., New York, NY; Spooncer y oíros, 1994, Long íerm bone marrow cultures in the presence of stromal cells, In Culture of Hematopoiefic Cells, Freshney y otros eds. pp. 163-179, Wiley-Liss, Inc., New York, NY; Sutherland, 1994, Long term culture initiating cell assay, In Culture of Hematopoieíic Cells, Freshney y oíros, eds. Vol pp. 139-162, Wiley-Liss, Inc., New York, NY.

Ensayos para la acíividad de la generación del feudo, incluyen, sin limitación, aquellos descritos en: la Publicación de Patente Internacional No. WO 95/16035 (hueso, cartílago y tendón); Publicación de Pateníe Iníernacional No. WO 95/05846 (nervio, neuronal); Publicación de Patente Internacional No.

WO 91/07491 (peil, endotelio). Los ensayos para la actividad de sanación de heridas, incluyen, sin limitación, aquellos descritos en: Winter, Epidermal Wound Healing, pps. 71-112 (Maibach and Rovee, eds.), Year Book Medical Publishers, Inc., Chicago, según modificado por Eaglstein and Meríz, J. Invest. Dennatol 71:382-84 (1978). Ensayos para la actividad de activina/inhibina, incluyen, sin limitación, aquellos descritos en: Vale y otros, Endocrinology 91:562-572,1972; Ling y otros, Naíure 321: 779-782, 1986; Vale y otros, Nature 321:776-779, 1986; Masón y otros, Naíure 318: 659-663, 1985; Forage y otros, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 83:3091-3095, 1986. Ensayos para el movimiento y adhesión de la célula, incluyen, sin limitación, aquellos descritos en: Current Protocols in Immunology Coligan y otros, eds, Greene Publishing Associates and Wiley-lnterscience (Capítulo 6.12, Measurement of alpha and befa chemokines 6.12.1-6.12.28); Taub y otros J. Clin. Invest. 95:1370-1376, 1995; Lind y otros APMIS 103:140-146, 1995; Muller y otros Eur. J. Immunol. 25:1744-1748; Gruber y otros J Immunol. 152:5860-5867, 1994; Johnston y oíros J Immunol. 153:1762-1768, 1994.

Ensayos para la actividad hemostáíica y írombolííica incluyen, sin limitación, aquellos descritos en: Linet y otros, J. Clin.

Pharmacol. 26:131-140, 1986; Burdick y otros, Thrombosis Res. 45:413-419, 1987; Humphrey y otros, Fibrinolysis 5:71-79 (1991); Schaub, Prostaglandins 35: 467-474, 1988. Ensayos para la actividad del ligando del receptor incluyen, sin limitación, aquellos descritos en: Current Protocols in Immunology Coligan y otros, eds, Greene Publishing Associates and Wiley- Interscience (Capítulo 7.28, Measurement of cellular adhesión under static conditlons 7.28.1-7.28.22), Takai y ofros, Proc. Naíl. Acad.

Sci. USA 84:6864-6868, 1987; Bierer y oíros, J.

Exp. Med. 168:1145-1156, 1988; Rosensíein y oíros, J. Exp. Med. 169: 149-1601989; Stoltenborg y otros, J. Immunol. Methods 175:59- 68, 1994; Stitt y otros, Cell 80:661-670, 1995. Ensayos para la acíividad supresora adhesiva e invasiva de cadherina incluyen, sin limifación, aquellos descritos en: Hortsch y otros J Biol Chem 270(32):18809-18817, 1995; Miyaki y otros, Oncogene 11:2547-2552, 1995; Ozawa y otros, Cell 63:1033-1038, 1990. 6. DIAGNOSTICO Y OTROS USOS DE ANTAGONISTAS Y AGONISTAS DE LDCAM Los ácidos nucleicos que codifican antagonistas y agonistas LDCAM provistos a través de la presente invención se pueden uíilizar para numerosos propósitos de diagnóstico y otros propósitos útiles.

Los ácidos nucleicos de las invención se pueden utilizar para expresar el polipéptido recombinante para el análisis, caracterización uso terapéuíico; como marcadores para tejidos en los cuales el polipéptido correspondiente preferencialmeníe se expresa (ya sea consíitutivamente o en una etapa particular de la diferenciación del tejido o en el desarrollo o en los esíados del íejido); como marcadores de peso molecular en geles Souíhern; como marcadores de cromosoma o etiquetas (cuando se marcan) para identificar los cromosomas o para mapear las posiciones del gen relacionadas; para comparar con secuencias de ADN endógenas en pacientes para identificar los trastornos genéticos potenciales; como sondas para hibridizan y de esta forma descubrir, las secuencias de ADN relacionadas, novedosas; como una fueníe de información para derivar iniciadores PCR para la impresión de huellas digiíales genéticas; como una sonda para "substraer" secuencias conocidas en el proceso del descubrimiento de otros ácidos nucleicos novedosos; para seleccionar y a ser oligómeros para anexar los aún "chip de gen" u oíro soporíe, incluyendo el examen de los pafrones expresión; para hacer surgir los aníicuerpos Anfi-polipéptido utilizando técnicas de inmunización de ADN; como un antígeno para hacer surgir los anticuerpos Anti-ADN u obtener otras respuestas inmunes, y, para terapia de gen. Los usos de los polipéptidos LDCAM y polipéptidos fragmentados incluyen, pero no se limitan a, los siguientes: purificación de los polipéptidos y la medición de! actividad de los mismos; agentes de suministro; reactivos terapéutico y de investigación; identificación de polipéptidos desconocidos; y preparación de anticuerpos. Cualquiera o todos los ácidos nucleicos adecuados para estos usos son capaces de ser desarrollados en un grado de reactivo o formaío de equipo para la comercialización como producios. Los méíodos para llevar a cabo los usos listados anteriormente son bien conocidos por aquellos con experiencia en la técnica. Las referencias que describen dichos métodos incluyen sin limitación "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", 2a. edición, Cold Spring Harbor, Laboratory Press, Sambrook, J., E. F. Fritsch and T. Maniatis eds., 1989, y "Methods in Enzymology; Guide to Molecular Cloning Techniques", Academic Press, Berger, S. L. y A.R. Kimmel eds., 1987.' Sondas e Iniciadores. Entre los usos de los ácidos nucleicos LDCAM descritos, y las combinaciones de los fragmentos de los mismos, está el uso de los fragmentos como sondas o iniciadores. Dichos fragmentos generalmente comprenden por lo menos alrededor de 17 nucleótidos contiguos de una secuencia de ADN. En otras modalidades, un fragmento de ADN comprende por lo menos 30, o por lo menos 60, nucleótidos contiguos de una secuencia de ADN. Los parámetros básicos que afectan la selección de las condiciones de hibridación y la guía para diseñar las condiciones adecuadas se establecen a través de Sambrook y otros, 1989 y se describieron con detalle anteriormente. Al utilizar el conocimiento del código genético en combinación con las secuencias de aminoácido establecidas anteriormente, se establecen los oligonucleótidos degenerados que se pueden preparar. Dichos oligonucleótidos son útiles, iniciadores, por ejemplo, en reacciones de cadena de polimerasa (PCR), mientras que los fragmentos de ADN se aislan y se amplifican. En ciertas modalidades, los iniciadores degenerados se pueden utilizar como sondas para colecciones genéticas no humanas. Dichos colecciones podrían incluir pero no se limitan a colecciones de ADNc, colecciones genómicas, y a un colecciones electrónicas EST (etiqueta de la secuencia Express) o colecciones de ADN. Las secuencias como las identificadas a través de este método entonces podrían utilizarse como sondas para identificar homólogos LDCAM no humanos. Representación del Cromosoma. Los ácidos nucleicos que codifican polipéptidos LDCAM, y los fragmentos descritos y combinaciones de estos ácidos nucleicos, se pueden utilizar por aquellos con experiencia la técnica uíilizando técnicas bien conocidas para identificar el cromosoma humano al cual estos ácidos nucleicos representan. Las técnicas útiles incluyen, pero no se limitan a, utilizarla secuencia o porciones, incluyendo oligonucleótidos, como una sonda en varias íécnicas bien conocidas tales como la representación híbrida de radiación (alta resolución), en hibridación in situ para las extensiones del cromosoma (resolución moderada), y la hibridación de gráfica Souíhern para hibridar líneas de células que contienen cromosomas humanos individuales (baja resolución). Por ejemplo, los cromosomas se pueden representar a través de la hibridación de radiación. PCR se lleva cabo utilizando el panel de Whitehead Instituíe/MIT Cenler por Genome Research Genebridge4 de 93 híbridos de radiación, ulilizando iniciadores que se basan denfro de un exón puíativo de gen de interés y que amplifican un producto de un ADN genómico humano, pero no amplifican el ADN genómico de hámster. Los resultados PCR se convierten en un vector de datos que se somete al sitio de representación de radiación Whiíehead/MIT (www.seq.wi.mii.edu). Los daíos se califican y la asignación del cromosoma y la colocación relaíiva a los marcadores del Siíio de Eíiqueía de Secuencia conocidos (STS) en el mapa híbridos de radiación se proveen. Alternafivamente, las secuencias genómicas correspondientes a los ácidos nucleicos que codifican polipéptidos LDCAM se representan a través de la comparación de las secuencias en bases de datos públicas y propietarias, tales como la base de datos no redundanfe de GenBank (ncbi.nlm.nih.gov/BLAST), Locusllnk (ncbi.nlm.nih.gov:80/LocusL¡nk/), Unigene (ncbi.nhn. nih.gov/cgi-bin/UniGene), AceView (ncbi.nlm.nih.gov/AceView), Online Mendelian Inheriíance in Man (OMIM) (ncbi.nlm. nih.gov/Omim), Gene Map Viewer (ncbi.nhn.nih.gov/genemap), y las bases de daíos propieíarias íales como la Celera Discovery sysíem (celera.com). Esíos análisis de compuíadora de la información de secuencia genómica disponible puede proveer la idenfificación de la ubicación del cromosoma específico de las secuencias genómicas correspondieníes a las secuencias que codifican los polipéptidos LDCAM, y las relaciones de la representación genética única entre las secuencias genómicas LDCAM y la ubicación del mapa genéíico de los írastornos genéticos humanos conocidos. Diagnósticos y Terapia de Gen. Los ácidos nucleicos que codifican los polipéptidos LDCAM, y los fragmeníos descriíos y combinaciones de estos ácidos nucleicos se pueden utilizar a través de uno con experiencia técnica uíilizando íécnicas bien conocidas para analizar anormalidades asociadas con los genes correspondieníes a esíos polipéptidos. Esto habilita a distinguir las condiciones en las cuales este marcador esta reconfigurado o eliminado. Además, los ácidos nucleicos de la invención o los fragmentos de los mismos se pueden utilizar como un marcador posicional para representar los genes de una ubicación desconocida. El ADN se puede utilizar en el desarrollo de tratamientos para cualquier trastorno mediado (directamente o indirectamente) por cantidades defectuosas, o caníidades ¡nsuficienies de, los genes correspondientes a los ácidos nucleicos de la invención. La descripción de la presente de las secuencias de nucleótido nativa permite la detección de los genes defectuosos, y el reemplazo de los mismos con genes normales. Los genes defectuosos se pueden detecíar en ensayos de diagnósíico in vitro, y a través de la comparación de una secuencia de nucleótido nativa descrita ia preseníe con aquella de un gen derivado de una persona que se sospecha que alberga un defecto en este gen. Agentes Portadores y de Distribución. Los polipéptidos LDCAM (fragmentos, variantes, proteínas de fusión, derivados, oligómeros, y similares), antagonistas de antagonistas (que incluyen anticuerpos de todas las clases descritas aquí) así como pepticuerpos y similares, también se les puede enconfrar uso como íransportadores para suministrar los agentes a las células. Los polipéptidos LDCAM (fragmentos, variantes, proteínas de fusión, derivados, oligómeros, y similares), antagonistas de agonistas (que incluyen anticuerpos de todas las clases descritas aquí) así como pepticuerpos y similares, se pueden utilizar para enviar los agentes de diagnóstico o terapéuíicos a dichas células en procedimientos in Vitro o in vivo. Los agentes detectables (diagnóstico) y los terapéuticos que se pueden anexar a un polipéptido incluyen, pero no se limitan a, toxinas, otros agentes citotóxicos, fármacos, radionúclidos, cromóforas, enzimas que catalizan una reacción colorimétrica o fluoroméírica, y similares, con el agente particular siendo seleccionado de acuerdo con aplicación prevista. Entre las toxinas están ricina, abrina, toxina de difteria, la exotoxina A de Pseudomonas aeruginosa, proteínas de inacíivación ribozomal, micotoxinas tales como tricotecenes, y derivados y fragmentos (por ejemplo, cadenas individuales) de las mismas. Los radionúclidos adecuados para uso diagnóstico incluyen, pero no se limitan a 123l, 131l, 99mTc, lpln, y 76Br. Los radionúclidos adecuados para uso terapéutico incluyen, pero no se limitan a 13 l, 211Aí, 77Br, 186Re, 188Re, 212Pb, 212Bi, 109Pd, 64Cu, y 67Cu. Dichos agentes se pueden anexar al polipéptido a través de cualquier procedimiento convencional adecuado. El polipépíido comprende grupos funcionales en las cadenas laterales del aminoácido que pueden hacerse reaccionar con grupos funcionales sobre una gente deseado para formar enlaces covaleníes, por ejemplo. Alternativamente, el polipéptido o agente se puede derivatizar para generar o anexar un grupo funcional reactivo deseado. La derivatización puede involucrar la agregación de uno de los reactivos de acoplamiento bifuncionales disponibles para anexar varias moléculas a los polipéptldos (Pierce Chemical Company, Rockford, Illinois). Se conocen un número de íécnicas para radiomarcar polipéptidos. Los metales de radionúclido se pueden anexar a los polipéptidos utilizando un ageníe de quelaíación bifuncional adecuado, o un agente terapéutico (preferiblemente covalentemente enlazado) y de esía forma se preparan. Los conjugados de administran o por el contrario se emplean en una cantidad apropiada para la aplicación particular. 7. APLICACIÓN TERAPÉUTICA DE ANTAGONISTAS Y AGONISTAS LDCAM Los antagonisías y agonisías LDCAM, los cuales se definieron anteriormente e incluyen, pero no se limitan a, polipéptidos LDCAM (así como variantes de los mismos, fragmentos, proteínas de fusión, derivados, mimótopos, y similares), anticuerpos anti-LDCAM, pepticuerpos anti-LDCAM, polipéptidos CRTAM (así como variantes de los mismos, fragmentos, proteínas de fusión, derivados, mimóíopos, y similares), aníicuerpos aníi-CRTAM, y pepticuerpos Anti-CRTAM, probablemente serán útiles para traíar condiciones de enfermedades médicas por consiguiente, a lo largo del especificación, "antagonistas o agonistas LDCAM" se refiere a todas las varias modalidades descritas en la definición de antagonistas o agonistas LDCAM. En general estas enfermedades incluyen, pero no se limitan a, enfermedad autoinmune, inflamación, cáncer, enfermedad infecciosa, así como otras condiciones como se describen con mayor detalle más adelante. La molécula o moléculas terapéuticas que se van utilizar dependen de la etiología de la condición que se va traíar y de las trayectorias teológicas involucradas. Por ejemplo, un antagonista o agonista de la interacción LDCAM/CRTAM o LDCAM/LDCAM se puede seleccionar para tratar las condiciones involucradas con la unión celular, señalización celular, activación celular, producción de citocina que tiene influencia sobre la enfermedad autoinmune, inflamación, cáncer, enfermedad infecciosa, eícéíera. Más específicamente, un agonista LDCAM podría "enfriar" los procesos inflamatorios, íales como la proliferación de células T y la liberación de las citocinas pro-inflamatorias, tales como, pero no limitándose a, Iníerferón-gama e IL-2, como se describe en los ejemplos. Los agonistas LDCAM se pueden utilizar en el traíamienío de enfermedades aufoinmunes, poner en coníacío la hipersensibilidad, esclerosis múltiple, rechazo al injerto y similares. Un antagonista LDCAM podría mejorar las respuestas inmunes a través de la interferencia con el enlace de LDCAM y CRTAM. De esta forma, un antagonista LDCAM podría ser útil en el tratamienío de enfermedades y condiciones que requieren una respuesta inmune mejorada y en particular enfermedades caracterizadas por una respuesta de célula T deficiente, tales como, pero no limitándose a, cáncer, infección (viral o bacterial), y en algunas configuraciones de transplante. Los anticuerpos para BDCA3+ DC se pueden utilizar en una variedad de configuraciones terapéuíicas, incluyendo, pero no limitándose a, modular la función de BDCA3+ DC con el anticuerpo 1F12 enlazado a un antígeno y por lo tanío específicamenfe suminisírando el antígeno a la población DC que puede conferir una tolerancia inmune a ese antígeno. Alternativamente, en la presencia de señales inflamatorias, tales como citocinas proinflamaíorias, quimiocinas y similares, el aníígeno acíivado resallaría las respuestas inmunes específicas de antígeno a ese antígeno. El anticuerpo 1F12 y oíros aníicuerpos aníi-LDCAM pueden ser útiles para propósitos de pronóstico, tales como la cuantificación comparaíiva o relativa BDCA3+ CD en tejidos normales y patológicos. El anticuerpo 1F12 y otros anticuerpos Anti-LDCAM se puede utilizar para purificar o aislar BDCA3+ DC de diversos fluidos órganos y tejidos corporales. El anticuerpo 1F12 y otros anticuerpos Anti-LDCAM se pueden utilizar para reducir BDCA3+ CD in vivo o interferir con su función inmunológica, pero no se limita a la iniciación de la célula T, el centrado DC, la presentación cruzada de antígeno para células T CD8 + , y similares. Debido a que la preseníación cruzada de los aníígenos y la folerancia cruzada de los aníígenos son mecanismos celulares centrales para muchas enfermedades autoinmunes, transplaníes y cáncer, el aníicuerpo 1F12 y oíros aníicuerpos Aníi-LDCAM se pueden uíilizar para íratar estos trastornos a través de la modulación de las respuestas inmunes por consiguiente a través de BDCA3 + DC. Además, el aníicuerpo 1F12 y oíros aníicuerpos Aníi-LDCAM se pueden utilizar en terapia de célula ex vivo. El BDCA3+ DC se puede aislar con el anticuerpo 1F12 y oíros aníicuerpos aníi-LDCAM y manipular ex vivo y reiníroducir deníro del pacieníe para íraíar la enfermedad. Para propósitos ilustrativos solamente, se podría interrumpir la tolerancia inmune al cáncer a íravés de la exposición de BDCA3+ DC aislado para aníígenos de cánceres (íales como, pero no limitándose a, aquellos presentados el Cuadro 2, supra) infundiendo BDCA3+ DC/antígeno de cáncer procesado de nuevo en el paciente. En modalidades alternativas, el antígeno de cáncer puede venir del paciente y puede estar en la forma de células de cáncer. BDCA3+ DC es capaz de fagocitoíizar células apoptóticas y preseníar esíe aníígeno exógeno a las células T CD8+ para la generación de ejecutadores CTL específicos de cáncer. De esta forma, las células de cáncer o tumor removido del paciente se puede exponer a estímulo de inducción de apopíosis, íal como irradiación o fármacos químicos, y exponer lo ha BDCA3+ DC aislado del paciente. BDCA3+ DC podría fagocitotizar las células de cáncer apoptóticas y presentar antígenos de cáncer en el coníexto de la clase 1 MHC. Estos DCs podrían RE infundirse dentro del paciente iniciar una respuesía del ejecuíador CTL en los aníígenos del cáncer propios del paciente. Los ejecutadores CTL podrían lisar solamente aquellas células que expresan los antígenos de cáncer del paciente. Esta forma de terapia ex vivo se puede utilizar en combinación con otras terapias convencionales, tales como, pero no limiíándose a cirugía, radiación y/o quimloíerapia. El Ejemplo 19 describe el descubrimiento de que CRTAM es un cognado o asociado de unión de LDCAM. LDCAM se expresa en células dendrítícas y especialmeníe en las células dendríticas BDCA3+ recientemeníe descubierías, las cuales probablemeníe íienen las propiedades inmunológicas únicas descriías anteriormente. CRTAM se expresa en células T activadas (per Figura 7 que muestra el incremento en expresión según determinado a través de experimeníos expresión diferencial). Tanto las células T CD4+ como CD8+ expresa CRTAM, y especialmente a alfós niveles en células T CD8+ acíivadas. Por consiguieníe, la iníeracción eníre LDCAM y CRTAM se puede involucrar en la formación de una sinapsis inmunológica eníre el antígeno que presenta las células y las células del ejecutor linfoide (tal como entre las células dendríticas, incluyendo BDCA3+ CD y células T, incluyendo células T restringidas de clase I, tales como las células T CD8 + ). Sin estar unido por teoría, puede ser que la interacción LDCAM/CRTAM entre ef antígeno que presenta las células y las células T sea un regulador negativo de aniquilación. Como se muestra los ejemplos, la interacción LDCAM/CRTAM previene la activación de las células T en la presencia de una variedad del estímulo de activación de las células T, incluyendo estimulación Aníi-CD3 y varios miíógenos. Puede ser que la iníeracción eníre LDCAM/CRTAM sea una forma para que el antígeno presente la célula para comprometerse e inicie la célula T para que el antígeno no sea aniquilado por la célula T. Esto podría permitir múltiples compromisos a íravés del antígeno que presenta la célula, el cual se sabe que ocurre en DC. Además, se ha reportado que CRTAM se expresa en células NK activadas y células NK-T y que estas células han estado implicadas en la inmunopatología de diabetes (Kennedy y otros, J. Leuk Bio 67 (2000)). Esíos datos han sido confirmados a través de experimeníos de expresión diferencial, los cuales muesíran que CRTAM es alíamente expresado en células NK activadas (Figura 17). Por consiguiente, la iníeracción eníre LDCAM y CRTAM puede esíar involucrada en la formación de una sinapsis inmunológica entre el antígeno que presenta la células y las células NK-T. De esta forma, los antagonistas LDCAM de la presente invención se pueden utilizar para inhibir o bloquear la interacción entre el antígeno que presenta la células (tal como DC) y las células NK y/o NK-T que causan síntomas de la enfermedad en diabetes. Adicionalmente, LDCAM ha esíado demosírando que se puede expresar en tejido neuronal, particularmente en el cerebro (Biederer, y otros, Science 297,1525 (2002)). Por consiguiente, la interacción entre LDCAM en neuronas y CRTAM en células T puede estar involucrada en la formación de una sinapsis inmunológica entre el sisíema nervioso y el sistema inmune. De esta forma, los antagonistas LDCAM de la presente invención se pueden utilizar para inhibir o bloquear la iníeracción eníre células inmunes que expresan CRTAM (íales como las células T) y neuronas que expresan LDCAM y por lo tanto prevenido tratar enfermedades que resultan de esa interacción. Los ejemplos incluyen esclerosis múltiple y otras enfermedades del sistema nervioso listadas a continuación. Será determinado a través de experimeníos de expresión diferencial que CRTAM se expresa en lesiones de esclerosis múltiple activa (MS) (Figura 17). Esto provee un sonido con base en el cual se puede predecir que un agonista LDCAM disminuiría la respuesta p'roinflamatoria de células T acíivadas y en paríicular previene o disminuir la liberación de interferón-gama de células T activadas. Se sabe bien en la fécnica que iníerferón-gama se incremenía en lesiones MS acíivas en los niveles de circulación en pacieníes que experimenían recaídas y que los niveles incremeníados de iníerferón-gama esíando relacionados con síntomas que empeoran y destrucción de mielina. Por consiguiente, un agonista LDCAM podría prevenir o disminuir la destrucción de tipo autoinmune de la materia blanca a través del bloqueo de las células T a partir de la liberación de las citocinas proinflamatorias tales como interferón-gama. En modalidades adicionales, los antagonistas LDCAM se pueden utilizar para tratar sujetos con cáncer, tales como, pero no limitándose a: leucemia, carcinoma nasofaringeo positivo del virus Epstein-Barr, cánceres de colon, esíómago, próstata, célula renal, cervical y ovario, sarcomas canceromamarios de pulmón, y carcinomas, tales como as fibrosarcoma, mixosarcoma, liposarcoma, condrosarcoma, sarcoma osteogénico, cordoma, angiosarcoma, endoteliosarcoma, limfangiosarcoma, limfangioendoteiiosarcoma, sinovioma, mesoíelioma, íumor de Ewing, leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, carcinoma de colon, cáncer pancreático, cáncer de pecho, cáncer ovárico, cáncer de próstata, carcinoma de célula escamosa, carcinoma de célula basal, adenocarcinoma, carcinoma de glándulas sudoríparas, carcinoma de la glándula sebácea, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, cistadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinoma broncogénico, carcinoma de la célula renal, hepatoma, carcinoma del ducto biliar, coriocarcinoma, seminoma, carcinoma embrional, tumor de Wilms, cáncer cervical, tumor testicular, carcinoma de pulmón, carcinoma de pulmón de célula pequeña, carcinoma de vejiga, carcinoma epitelial, glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craniofaringioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, neuroma acústica, oligodendroglioma, meningioma, melanoma, neuroblastoma, retinoblasíoma; leucemias, tales como leucemia de linfocito aguda y leucemia de mielocítica aguda ((mieloblástica, promielocítica, mielomonocííica, monocííica y eritroleucemia); leucemia crónica (mielocítica crónica (granulocííica) leucemia y leucemia linfocítica crónica; y policitemia vera, linfoma (enfermedad de Hodgkins y enfermedad no de Hodgkins), mieloma múltiple, macroglobulinemia de Waldenstrom, y enfermedad de cadena pesada. Varios trastornos linfoproliferativos también son tratables incluyendo el síndrome linfoproliferativo auíoinmune (ALPS), leucemia linfoblásíica crónica, leucemia de célula velluda, leucemia linfocítica- pequeña, Ijnfoma de célula de manto, linfoma folicular, linfona de Burkití, linfoma de célula T de virus Epstein-Barr, linfoma histiocítica, enfermedad de Hodgkins, linfoma agresivo difuso, leucemias linfáticas agudas, enfermedad linfoproliferativa gama T, linfoma de célula B cutánea, linfoma de célula T cutánea (es decir, micosisfungoides) y síndrome de Sezary. Los antagonistas LDCAM también se pueden utilizar en combinación con otros tratamientos reconocidos conocidos en la técnica. Por ejemplo, en destacamenío de cáncer, los antagonistas y los agonistas LDCAM se pueden utilizar en combinación con cirugía, quimioterapia, terapia de radiación, inmunoterapia adopíiva, y similares. Una razón fundameníal subyacente es que ese volumen de tumores mínimo y/o las células de íumor se despojan denlro de la circulación durante y después de la cirugía y la inmunoterapia a través de antagonistas LDCAM puede ser más efectiva en esta siíuación. En una modalidad específica, la utilidad preventiva y terapéutica del invención está dirigida al mejoramiento de la inmunocompetencia del tema cáncer antes de la cirugía, a o después de cirugía, y en la inducción de inmunidad específica de tumor para células de cáncer, con el objetivo siendo la inhibición del cáncer, y con el úlíi o objeíivo clínico siendo la regresión y/o erradicación del cáncer. El efecío de los aníagonistas LDCAM en la progresión de enfermedades neoplásíicas puede monitorearse través de cualesquiera métodos conocidos por uno con experiencia técnica, incluyendo pero no limitándose a la medición de: a) hipersensibiiidad retrasada como una medición de la inmunidad celular; b) actividad de los T-linfocitos ciíolííicos in Vitro; c) niveles de antígenos específicos de tumor; d) cambios en la morfología de los íumores uíilizando técnicas tales como la exploración tomó gráfica computada (CT); e) cambios en los niveles de los biomarcadores putativos de riesgo para un cáncer particular en individuos en alto riesgo, y f) cambios en la morfología de los íumores. Alíernaíivameníe, las respuesías inmunes al antígeno de interés se puede medir uíilizando íécnicas estándares, tales como ensayos CTL, ensayos de proliferación, ensayos de captura de anticuerpo, y similares. En modalidades alternativas, los antagonistas y agonistas LDCAM pueden estar combinados con inmunoterapia adoptiva utilizando antígenos que presentan células (APC) sinteíizados con uno o más de los aníígenos descritos anteriormeníe. La inmunoíerapia adoptiva se refiere a un método terapéutico para tratar enfermedades infecciosas o cáncer en donde las células inmunes se administran a un huésped con la ayuda de la inmunidad específica mediada por las células, ya sea directamente o indirectamente en las células infectadas o células de tumor y/o componentes antihigiénicos, y da como resultado el íratamienío de enfermedades infecciosas o regresión del íumor. En una modalidad, APC sensibilizado de aníígeno se pueden esíar aníes de, concurrentemeníe con o después de la adminisíración de una vacuna. Además, el modo de administración para inmunoterapia adoptiva puede ser variado, incluyendo, pero no limitándose a, por ejemplo, subcutáneamente, intravenosamente, intraperitonealmente, intramuscularmeníe, iníradérmicameníe, o mucosamenfe. Los agonistas LDCAM se pueden utilizar para írafar una enfermedad cardiovascular. Las modalidades de la presente invención incluyen métodos para íraíar la enfermedad cardiovascular en un sujeío que tiene la enfermedad cardiovascular que comprende la administración de una cantidad efecíiva de uno o más agonisías LDCAM, solos o en cualquier combinación. La enfermedad cardiovascular incluye estados enfermedad que tienen paíofisiología del corazón y el sisíema de vasculatura, así como órganos y sistemas comprometidos a íravés de los esíados del enfermedad del corazón y los sistemas de vasculatura. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a: inflamación del corazón y/o vasculatura tal como miocarditis, miocarditis autoinmune crónica, miocarditis bacteriana y viral, así como endocarditis infectiva; falla del corazón; falla del corazón congestiva; falla del corazón crónica; caquexia de falla del corazón donde, cardiomiopaíía, incluyendo no isquémica (cardiomiopatía dilatada; cardiopatía dilatada idiopática; choque cardiogénico, falla del corazón secundaria para el soporte circulatorio extracorpóreo ("síndrome después del bombeo"), falla del corazón después de isquemia/daño por reperfusión, muerte cerebral asociada con falla del corazón (como se describe en Owen y oíros, 1999 (Circulaíion, 1999 Mayo 18;99(19):2565-70)); cardiomiopatía hipertrófica; cardiomiopatía restricíiva; hipertensión sistémica no isquémica; enfermedad valvular; cardiomiopaíía veníricular derecha ariímogénica) e isquémica (aterogénesis; ateroesclerosls; arteriosclerosis; enfermedad vascular periférica; enfermedad de arteria coronaria; infartos, incluyendo choque, ataques isquémicos temporales e infartos al miocardio). Los esíados de enfermedad adicionales abarcados por la definición de enfermedad cardiovascular incluyen: aneurismas; arteritis; angina; embolismo; trasíornos isquémicos asociados con plaqueías; isquemia/daño por reperfusión; resíenosis; el regurgiíación miíral y/o íricúspide; esíenosis miíral; isquemia al miocardio silenciosa; fenómeno de Raynaud; írombosis; trombosis venosa profunda; embolismo pulmonar; y microangiopatías írombóíicas incluyendo írombocitopénica púrpura trombóíica (TTP) y síndrome urémico hemolííico (HUS), írombociíenia esencial, o coagulación vascular diseminada (DIC), y írombosls y coagulopaíías asociadas con la exposición a una tromboflebitis de tejido foráneo o dañado; vasculitis, incluyendo vasculiíis de Kawasaki; aríeriíis de Takayasu; enfermedad oclusiva de las venas, aríeriíis de célula giganíe, granulomaíosis de Wegener, púrpura de Sxhoenlein-Henoch, así como en la enfermedad cardiovascular que surge de infecciones peridoníales a íravés de uno o más paíógenos orales, tales como la bacteria. Los ejemplos adicionales de los usos terapéuticos de uno o más agonistas LDCAM incluyen el tratamienío de individuos que sufren de enfermedad de arteria coronaria o daño después de trastornos isquémicos asociados con plaquetas incluyendo isquemia de pulmón, isquemia coronaria isquemia cerebral, y para la prevención de la reoclusión después de trombosis, írastornos trombóficos incluyendo írombosis de aríeria coronaria, írombosis de arteria cerebral, trombosis Intracardiaca, trombosis de arteria periférica; írombosis venosa, microangiopaíías írombóíicas incluyendo púrpura írombociíopénica írombótica (TTP) y síndrome urémico hemolítico (HUS), trombocitemia esencial, coagulación vascular diseminada (DIC), y trombosis y coagulopatías asociadas con la exposición a una superficie de íejido foráneo o dañado, en combinación con angioplasíía, endaríerecíomía de caróíida, anastomosis de injertos vasculares, y dispositivos cardiovasculares crónicos tale como los catéteres internos o desviadores. Las indicaciones adicionales incluyen sujetos esfán o experimentarán procedimientos se angioplástica (es decir, artroplásíica de globo, angioplásíica láser, aíerercíomía coronaria y íécnicas similares), la colocación de disposiíivos proíésicos endovasculares íales como desviadores de caróíida, coronaria, aríeria periférica, u oíros desviadores endovasculares, disposiíivos de acceso de diálisis, o procedimieníos para íratar la enfermedad vascular periférica; individuos que están experimentando cirugía que tiene un alto riesgo de formación de trombos (es decir, cirugía de bypass coronario, inserción de una válvula protésica o recipiente y similares). Un número de trastornos pulmonares también se pueden íraíar con los agonistas LDCAM. Una de dichas condiciones es el síndrome de ansiedad respiratorio en adultos (ARDS), el cual está asociado con TNFa elevado, y puede activarse a través de una variedad de causas, incluyendo la exposición a químicos tóxicos, pancreatitis, trauma y otras causas. Los compuesíos, composiciones y íerapias de combinación descriíos de la invención también son úíiles para tratar displasia bronco-pulmonar (BPF); linfangioleiomiomatosis; y enfermedad del pulmón fibróíica crónica de infaníes premaíuros. Además, los compuestos, composiciones y terapia de combinación de la invención se uíilizan para íraíar enfermedades del pulmón ocupacionales, incluyendo asbesfosis, neumoconiosis de trabajadores del carbón, silicosis y condiciones similares asociadas con la exposición a largo plazo a partículas finas. En otros aspectos de la invención, los agonisías LDCAM y íerapias de combinación se uíilizan para íraíar írasfornos pulmonares, incluyendo la enfermedad pulmonar obsírucíiva crónica (COPD) asociada con bronquiíis o enfisema crónico; enfermedades del pulmón fibróticas, tales como fibrosis quística, fibrosis pulmonar idiopáíica y fibrosis pulmonar inducida por radiación; sarcoidosis pulmonar; y alergias, incluyendo rinitis alérgica, dermatitis de contacto, dermatiíis aíópica y asma. Oirás modalidades proveen méíodos para utilizar los agonistas LDCAM o terapias de combinación para traíar una variedad de írastornos reumáticos. Esíos incluyen: aríritis reumatoide en adultos y juvenil; lupus eritemaíoso sisíémico; osteoartriíis; polimialgia reumaíoide; espondilatropafías seronegativas, incluyendo espondilitis anquilosante; y la enfermedad de Reiíer. Los agonistas LDCAM del tema y las terapias de combinación también se utilizan para iratar artriíis soriática y artritis de Lyme crónica. También son traíables con esíos antagonistas y agonistas LDCAM y terapias de combinación la enfermedad de Still y la uveiíis asociada con aríriíis reumatoide. Además, los agonistas LDCAM y las terapias de combinación de la invención se utilizan para traíar írasíornos que resultan de la inflamación del músculo voluntario, incluyendo dermatomiosiíis y plimíosiíis. Además, los agonistas LDCAM y las combinaciones descritas aquí son úíiles para íraíar la miosiíis del cuerpo de inclusión esporádica, ya que TNFa puede jugar un papel imporíante en la progresión de esta enfermedad del músculo. Además, los antagonisfas y agonistas LDCAM y combinaciones descritas aquí se utilizan para tratar reticulohisfiociíosis mulíicénírica, una enfermedad en la cual la destrucción de las articulaciones y los nodulos de las pápulas de la cara y manos esíán asociados con la producción en exceso de ciíocinas proinflamaíorias a íravés de las células giganíes mulfinucleadas. Los írastornos asociados con el transplaníe fambién son tratables con los agonistas LDCAM y las terapias de combinación, tales como la enfermedad de injerto-contra-huésped, y complicaciones que resultan de írasplaníes de órganos sólidos, incluyendo írasplante de corazón, hígado, pulmón, riñon y otros órganos. Los aníagonistas LDCAM se pueden administrar, por ejemplo, para prevenir o inhibir el desarrollo de obliterans bronquiolitis después del trasplante de pulmón. Varios otros trasfornos íraíables con los agonisías LDCAM y terapias de combinación incluyen: esclerosis múltiple; síndrome de Behceí; síndrome de Sjorgren; anemia hemolííica auíoinmune; íalasemia befa; esclerosis laíeral amioírófica (Enfermedad de Lou Gehrig); enfermedad de Parkinson; y íenosunoviíis de causa desconocida, así como varios trastornos y enfermedades autoinmune asociados con deficiencias hereditarias. Los antagonisías LDCAM se pueden uíilizar en el íraíamienío y/o prevención de infección viral, incluyendo infección por: Reíroviridae (por ejemplo, virus de inmunodeficiencia humana, íales como VIH-1 (íambién referido como HTLV-111, LAV o HTLV-IIIILAV, o VIH-111; y oíros aislados, íales como VIH-LP; Picornaviridae (por ejemplo, virus de polio, virus de hepaíiíis A; enterovirus, virus coxsackie humano, rinovirus, ecovirus); Calciviridae (por ejemplo, estirpes que causan gastroenteriíis); Togaviridae (por ejemplo, virus de encefaliíis equina, virus de rubéola); Flaviridae (por ejemplo, virus del dengue, virus de encefaliíis, virus de fiebre amarilla); Coronaviridae (por ejemplo, coronavirus); Rhabdoviridae (por ejemplo, virus de esíomaíiíis vesicular, virus de rabia); Filoviridae (por ejemplo, virus del ébola); Paramyxoviridae (por ejemplo, virus de parainfluenza, virus de paperas, virus del sarampión, virus sincitial respiratorio); Orihomyxoviridae (por ejemplo, virus de influenza); Bunyaviridae (por ejemplo, virus Hantaan, virus bunga, flebovirus y virus Nairo); Arena viridae (virus de fiebre hemorrágica); Birnaviridae; Hepadnaviridae (virus de Hepaíiíis B); Parvoviridae (parvovirus); Papovaviridae (virus de papiloma, virus de polioma); Adenoviridae (la mayoría de los adenovirus); Herpesviridae ( virus simple de herpes (HSV) 1 y 2, virus zoster de varicela, citomegalovirus (CMV), virus de herpes); Poxviridae (virus de viruela, virus de vacuna, virus de viruela); e Iridoviridae (por ejemplo, virus de fiebre de cerdo Africano); y virus no clasificado (por ejemplo, los ageníes eíiológicos de encefalopaíías Espongiformes, el agente de la hepatiíis delía (se cree que es un satélite defectuoso del virus de hepatitis B, los agentes de hepatiíis no A y no B (clase 1 transmitidos internameníe); clase 2 = íransmiíidos parenteralmente (es decir, Hepatitis C); y Norwalk y virus relacionados, y astrovirus). Los aníagonisías LDCAM se pueden uíilizar en el tratamienfo y/o prevención de infección por bacferias, incluyendo infección por: Helicobacíerpyloris, Borelia burgdorferi, Legionella pneumophilia, Mycobacteria sps (por ejemplo, M. tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, M. kansaii, M. gordonae), Staphylococcus aureus, Neisseria gonorrhoeae, Neisseriameningítidis, Listeriamonocytogenes, Streptococcus pyogenes (Grupo A de Strepíococcus), Síreptococcus agalactiae (Grupo B de Sírepíococcus), Streptococcus (grupo viridans), Streptococcus faecalis, Strepíococcus bovis, Sírepíococcus (anaerobio sps.), Streptococcus pneumoniae, Campylobacter patogénico sp., Eníerococcus sp., Haemophilus influenzae, Bacillusantracis, Corynebacterium diphíheriae, corynebacíerium sp., Erysipeloíhrix rhusiopaíhiae, Closíridium perfringers, Closíridium íetani, Enterobacter aerogenes, Klebsieila pneumoniae, Pasturellamultocida, Bacteroides sp., Fusobacíeriurn nucleatum, Strepíobacillus moniliformis, Treponema pallidium, Treponema pertenue, Leptospira, y Actinomycesisraelli. En modalidades alfernaíivas, los aníagonisías LDCAM se pueden utilizar para tratar o inmunizar sujetos contra organismos unicelulares infecciosos, incluyendo infección por: esquistosomas; tripanosoma; especies Leishmania; nemátodos filarial; íricomoniasis; sarcosporidiasis; Taenia saginaía, Taenia solium, Crypíococcus neoformans, Apergillus fumigatus, Histoplasma capsulatum, Coccidiodes immitis, íriquinelosis, Blasíomyces dermaíifidis, Chlamydia írachomatis, Candida albicans, Plasmodium falciparum, Plasmodiumvivax, Plasmodium malariae, y Toxoplasma gondii y similares. Las aplicaciones terapéuíicas adicionales incluyen: ALS; enfermedad de Alzheimer; asma; aferosclerosis; anemia hemolííica autoinmune; cáncer, particularmente cánceres relacionados con células B; caquexia/anorexia; síndrome de fatiga crónica; cirrosis (por ejemplo, cirrosis biliar primaria); diabetes (por ejemplo, diabetes de insulina); fiebre; glomerulonefritis, incluyendo glomerulonefriíis IgA y glomerulonefriíis primaria; síndrome de Goodpasture; síndrome de Guillain-Barre; enfermedad de injerto contra huésped; tiroidiíis de Hashimoto; choque hemorrágico; hiperalgesia; enfermedad del intesíino inflamatoria; condiciones inflamatorias de una articulación, incluyendo osteoartritis, artritis soriática y aríriíis reumaíoide; condiciones ¡nflamaforlas que resulían de íensión, íorceduras, daño de caríílago, trauma, cirugía ortopédica, infección u otros procesos de la enfermedad; diabetes mellitus dependiente de insulina; daño isquémico incluyendo isquemia cerebral (por ejemplo, daño al cerebro como un resultado de trauma, epilepsia, hemorragia o choque, cada una de las cuales puede conducir a la neurodegeneración); enfermedad del pulmón (por ejemplo, ARDS); mieioma múltiple; esclerosis múltiple; Myastenia grave; mielógeno (por ejemplo, AML y CML) y otras leucemias; miopatías (por ejemplo, meíabolismo de proíeína del músculo esp. en sepsis); neurotoxicidad (por ejemplo, según se induce a través de VIH); osteoporosis; dolor; enfermedad de Parkinson; Pemphigus;polimiositis/dermaíomiositis; inflamación pulmonar, incluyendo inflamación pulmonar autoinmune; psoriasis; enfermedad de Reiíer; daño por reperfusión; choque sépíico; efecíos laterales de terapia de radiación; síndrome de Sjogren; enfermedad de la articulación mandibular temporal; trombocitopenia, incluyendo trombociíopenia idiopáíica y írombociíopenia neonafal autoinmune; metásíasis de íumor; uveitis; y vasculitis. Las condiciones del sistema gastroiníesíinal íambién se pueden íraíar con aníagonistas y agonistas LDCAM o íerapias de combinación, incluyendo la enfermedad de celiaco. Los agonistas LDCAM y terapias de combinación de invención se utilizan para traíar la enfermedad de Crohn; coliíis ulceraíiva; gasíroparesis idiopática; pancreatiíis, incluyendo pancreaíiíis crónica y daño del pulmón asociado con pancreaíiíis aguda. También se incluyen los méfodos para uíilizar los agonisías LDCAM y íerapias de combinación para íraíar írastornos del sistema genitourinario, tales como glomerulonefriíis, incluyendo glomerulonefriíis auíoinmune, glomerulonefriíis debido a la exposición a íoxinas o glomerulonefritis secundaria para infecciones con estreptococo hemolítico u oíros agentes infecciosos. 8. FORMULACIÓN Y ADMINISTRACIÓN DE ANTAGONSITAS Y AGONISTAS DE LDCAM La invención provee agentes farmacéuticos o terapéuticos como composiciones, y métodos para traíar a un paciente, preferiblemente un pacieníe mamífero, y más preferiblemente un paciente ser humano, que está sufriendo de un trasíorno médico, y en paríicular un írasíorno mediado por LDCAM. Dichos írastornos mediados por LDCAM incluyen condiciones causadas (Directamente WO indirectameníe) o exacerbadas a íravés de la unión eníre LDCAM y un asociado unión, íal como, pero no limiíándose a LDCAM, CRTAM y B7L-1. Para propósiíos de esta descripción, los términos "dolencia", "enfermedad", "condición médica", "condición anormal", y similares se utilizan intercambiablemeníe con el íérmino "írasíorno médico". Los íérminos "tratar", "traíando", y "íraíamienío", uíilizados aquí incluyen el tratamienfo curafivo, preveníivo (por ejemplo, profilácíico") y paliativo o de mejoramiento. Para dichos usos terapéuficos, los aníagonisías y agonisías LDCAM pueden adminisírarse al paciente la necesidad del mismo a través de medios bien conocidos. Las composiciones farmacéuticas o terapéuíicas de la preseníe invención pueden confener uno o más aníagonisías y agonisfas LDCAM en cualquier forma como se describe aquí. Cantidad Terapéuticamente Efectiva. En la práctica del método de tratamienío o uso de la preseníe invención, una caníidad terapéuticameníe efectiva de un agente terapéutico de la presente invención se administra a un paciente que tiene una condición que se va traíar, preferiblemente para traíar o mejorar las enfermedades asociadas con actividad de un antagonisía y agonisfa LDCAM. Como se uíiliza aquí, el término "cantidad íerapéuíicameníe efecíiva" significa la caníidad íoíal de cada agenfe íerapéuíico u oíro componeníe acíivo de la composición farmacéuíica o méíodo que suficiente para demostrar un beneficio importante el paciente, es decir, traíamienío, curación, prevención o mejoramienío de la condición médica relevaníe, un incremenío en el grado de íraíamiento, curación, prevención o mejoramiento de dicha condición. Cuando se aplica un ageníe íerapéuíico individual o ingredieníe activo, administrado solo, el término se refiere a ese ingrediente solo. Cuando se aplica a una combinación, el término se refiere a caníidades combinadas de los ingredientes que dan como resultado un efecto terapéuíico, ya sea así se adminisíra en combinación, serialmeníe o simulíáneameníe. Como se utiliza aquí, la frase "administración de una cantidad ferapéuíicameníe efecíiva" de un ageníe terapéutico significa que el paciente se trata con dicho agente terapéutico en una cantidad y durante un tiempo suficieníe para inducir un mejoramienío, y preferiblemente un mejoramiento sostenido en por lo menos un indicador que refleja la severidad del trastorno. Un mejoramiento se considera "sostenido" si el paciente exhibe el mejoramiento en por lo menos dos ocasiones separadas durante uno o más días, o más preferiblemente, durante uno o más semanas. El grado de mejoramiento se defermina con base en signos o síníomas, y las deíerminaciones íambién pueden emplear cuesíionarios que se adminisíran al pacieníe, íales como cuesíionarios de calidad de vida. Varios indicadores que reflejan la exíensión del enfermedad del pacieníe se pueden evaluar para determinar si la cantidad y el tiempo de traíamienío que suficienfe. El valor de la línea de base del indicador o indicadores seleccionados se establece a través del examen del pacieníe aníes del administración de la primera dosis del agente íerapéuíico. Preferiblemeníe, el examen de la línea de base se hace deníro de alrededor de los 60 días del adminisíración de la primera dosis. Si agente el terapéuíico esíá siendo adminisírado para íraíar síntomas agudos, la primera dosis se administra ían pronío como prácticamente sea posible después de que ha ocurrido el daño. En mejoramiento se induce a través de la administración de los ageníes íerapéuíicos íales como los antagonistas o agonistas LDCAM hasía que el pacieníe manifiesía un mejoramiento sobre la línea de base para el indicador o indicadores seleccionados. En el traíamiento de condiciones crónicas, este grado de mejoramiento se obtiene a íravés del adminisíración repetida de este medicamento durante un periodo de por lo menos un mes o más, por ejemplo, durante uno, dos, o tres meses o más, o indefinidamente. Un periodo de una a seis semanas, o aún una dosis individual, por lo general es suficiente para tratar daños u otras condiciones agudas. Aunque la extensión de la enfermedad el paciente después del íratamiento puede aparecer como mejorada de acuerdo con uno o más indicadores, el traíamiento puede continuar indefinidameníe al mismo nivel o una dosis o frecuencia reducida. Una vez que el íraíamienío ha sido reducido o desconíinuado, después se puede resumir a nivel original si los síníomas reaparecen. Dosificación. Uno con experiencia en la técnica pertineníe reconocerá que las dosificaciones adecuadas variarán, dependiendo de dichos factores, según la naturaleza y la severidad del írasíorno que se va tratar, el peso del cuerpo, la edad a condición general del paciente y las enfermedades y/o tratamientos anteriores, y la ruta de administración. Las dosis preliminares se puede deíerminar de acuerdo con pruebas en animales, y el escalamienfo de las dosificaciones para administración humana se llevan acabo de acuerdo con las prácticas aceptadas en la técnica tales como los ensayos de dosificación esíándares. Por ejemplo, la dosis íerapéuticamente efecíiva puede estimarse inicialmente a paríir ensayos de cultivo de célula. La dosificación dependerá de la actividad específica del compuesto y puede ser fácilmente determinada a través de la experimeníación de ruíina. Una dosis se puede formular en modelos de animal para lograr un rango de concentración de plasma en circulación que incluye el IC50 (es decir, la concentración del compuesío de prueba que logra una inhibición máxima media de los síníomas) según deíerminado del culíivo de célula, mieníras minimiza las íoxicidad es. Dicha información se puede uíilizar para deíerminar más exacíameníe las dosis úíiles en seres humanos. Finalmente, el físico que atiende decidirá la cantidad de polipéptido de la presente invención con la cual tratar a cada paciente individual. Inicialmente, el físico que atiende administra dosis bajas del polipéptido de la invención y observará la respuesta del paciente. Las dosis más grandes del polipéptido de la presente invención se pueden adminisírar hasía que se obíiene el efecto terapéuíico óptimo para el paciente, y en ese. La dosificación no se incrementa adicionalmente. Si se coníempla que las varias composiciones farmacéuticas utilizadas para practicar el método de la preseníe invención deberán contener alrededor de 0.01 ng alrededor de 100 mg (o alrededor de 0.1 ng a alrededor de 10 mg, o alrededor de 0.1 ng microgramos a alrededor de 1 mg) de polipéptido de la presente invención por kilo de peso del cuerpo. En una modalidad del invención, los antagonistas y agonistas LDCAM se administran una vez por semana para tratar los varios trastornos médicos descritos aquí, en otra modalidad se adminisíran por lo menos dos veces por semana, y en otra modalidad se adminisíran por lo menos íres veces por semana. Si se inyecta, la cantidad efectiva de antagonistas y agonistas LDCAM de dosis por adulto está la escala de 1-20 mg/m2, y preferiblemeníe es alrededor de 5-12 mg/m2. Alíernaíivameníe, se pueda administrar una dosis única, cuya cantidad puede esíar en escala de 5-100 mg/dosis. Los rangos de dosis ilustrativos para una dosis única que se va administrar a íravés de inyección subcuíánea son 5-25 mg/dosis, 25-50 mg/dosis, y 50-100 mg/dosis. En una modalidad de la invención, las varias indicaciones descritas más adelante se tratan a través de la administración de una preparación aceptable para inyección conteniendo aníagonisías y agonisías LDCAM a 25 mg/dosis, o alíernaíivameníe, coníeniendo 50 mg por dosis. La dosis de 25 mg o 50 mg se pueden estar repetidameníe, paríicularmeníe para condiciones crónicas. Si se uíiliza una ruta de administración difereníe de inyección, la dosis es apropiadameníe ajusfada de acuerdo con las prácíicas médicas estándares. En muchas instancias, un mejoramiento en una condición del paciente se obtendrá a través de inyección de una dosis de alrededor de 25 mg de aníagonisías y agonisías LDCAM de una a íres veces por semana durante un periodo de por lo menos tres semanas, o una dosis de 50 mg de agonistas y antagonisías LDCAM una o dos veces por semana duraníe por lo menos íres semanas, sin embargo íraíamienío duraníe períodos más largos puede ser necesario para inducir el grado deseado de mejora. Para condiciones crónicas incurables, el régimen puede coníinuar indefinidameníe, haciendo ajusfes en la dosis y frecuencia si eso se esíima necesario por el doctor del paciente. Las dosis anteriormente mencionadas son ejemplos para un adulto que es una persona que íiene 18 años de edad o mayor. Para pacieníes pediáíricos (edad de 4-17), un régimen adecuado involucrara inyección subcuíánea de 0.4 mg /kg, hasía una dosis máxima de 25 mg de aníagonisías y agonisías LDCAM, adminisírados a íravés de inyección subcuíánea una o más veces por semana. Si un aníicuerpo coníra el polipéptido LDCAM se utiliza como el antagonistas LDCAM, un rango de dosis preferida es de 0.1 a 20 mg/kg, y más preferiblemente es de 1-10 mg/kg. Oíro rango de dosis preferida para un aníicuerpo del polipépfido Aníi-LDCAM es de 0.75 a 7.5 mg/kg del peso del cuerpo. Los aníicuerpos humanizados son preferidos, es decir, anticuerpos en los cuales solamente la porción de unión a antígeno de ia molécula del anticuerpo se deriva de una fuente no humana. Dichos anticuerpos se pueden inyectar o administrar intravenosamente. Formulaciones. Se proveen en la presente las composiciones comprenden una caníidad efecíiva de un agonista o antagonista LDCAM de la presente invención (derivado de cualquier fuente, incluyendo sin limitación de fuentes recombinantes y no recombinaníes), en combinación con otros componentes tales como un diluyeníe, poríador, o excipieníe fisiológicameníe aceptable. El término "farmacéuíicameníe acepíable" significa un maíerial no tóxico que no interfiere con la efecíividad de la acíividad biológica de ingredieníe(s) activo. Las formulaciones adecuadas para administración incluyen soluciones de inyección estériles no acuosas y acuosas que pueden contener antioxidantes, reguladores de pH, bacteriósíafos y soluíos que convierten las formulaciones isotónicas con la sangre del recepfor; y suspensiones esíériles acuosas y no acuosas que incluyen ageníes de suspensión o agentes de condensación. Los polipéptidos se pueden formular de acuerdo con los métodos conocidos utilizados para preparar composiciones farmacéuticamente útiles. Estos se pueden combinar en mezclas, ya sea como un solo material activo o con otros materiales activos conocidos adecuados para una indicación dada, con diluyentes farmacéuticamente aceptables (por ejemplo, salina, Tris-HCl, acetaío y soluciones reguladas en su pH de fosfaío), conservadores (por ejemplo, timerosal, alcohol bencílico, parabenes), emulsificadores, solubilizadores, auxiliares y/o portadores. Las formulaciones adecuadas para las composiciones farmacéuíicas incluyen aquellas descritas en Remington's Pharmaceutical Sciences, 16ava. edición, 1980, Mack Publishing Company, Easton, PA. Además, dichas composiciones se pueden formar en complejos con polietilen glicoles (PEG), iones metálicos, o incorporarse dentro de los compuestos poliméricos fales como ácido poliacéíico, ácido poliglicólico, hidrogeles, dexfrana, etc., o incorporarse dentro de liposomas, microemulsiones, micelas, vesículas unilaminar o mulíilaminar, faníasmas de eritrocitos y esferoblastos. Los lípidos adecuados para la formulación liposomal incluyen, sin limitación, monoglicéridos, diglicéridos, sulfatidos, lisolecitina, fosfolípidos, saponína, ácidos biliares, y similares. La preparación de dichas formulaciones liposomales está dentro del nivel de la experiencia la técnica, como se describe, por ejemplo, en la patente de E.U.A. No. 4,235,871; patente de E.U.A. No. 4,501,728; pateníe de E.U.A. No. 4,837,028; y la paíeníe de E.U.A. No. 4,737,323. Dichas composiciones tendrán influencia sobre el estado físico, solubilidad, estabilidad y velocidad de liberación in vivo, y eliminación in vivo, y por lo tanío se seleccionan de acuerdo con la aplicación previsía, por lo que las caracíerísticas del portador dependerán de la ruta seleccionada de adminisíración. En una modalidad preferida de la invención, se utilizan las formas de liberación sostenida de LDCAM O polipéptldos de tipo LDCAM .Las formas de liberación sostenida adecuadas para uso en los métodos descritos incluyen, pero no se limitan a, LDCAM y/o polipéptidos de tipo LDCAM que están encapsulados en un polímero biocompatible de lenta disolución (tales como las microparíículas de alginaío descritas en E.U.A. No. 6,036,978), mezcladas con dicho polímero (incluyendo hidrogeles tópicamente aplicados), y o incrustados en un implante semipermeable biocompaíible. En una modalidad, se utilizan las formas de liberación sostenida de los antagonistas y agonistas LDCAM. Las formas de liberación sostenida adecuadas para uso en los métodos descritos incluyen, pero no se limitan a, antagonistas y agonistas LDCAM están encapsulados en un polímero biocompaíible de lenía disolución (íales como las micropartículas de alginato descriías en E.U.A. No. 6,036,978), mezcladas con dicho polímero (incluyendo hidrogeles íópicameníe aplicados), y o incrusíados en ün implaníe semipermeable biocompaíible. Un íipo de fecnología de liberación sosíenida que se puede uíilizar en la adminisíración de composiciones íerapéuíicas de agonisías y aníagonisías LDCAM solubles es aquel que utiliza materiales de hidrogel, por ejemplo, hidrogeles fotopolimerizables (Sawhney y otros, Macromolecules 26:581; 1993). Se han utilizado hidrogeles similares para prevenir la formación de adhesión después de la cirugía (Hill-West y otros, Obsteí. Gynecol. 83: 59,1994) y para prevenir írombosis y esírechamienío de venas después de daño vascular (Hill-West y otros, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 91:5967, 1994). Los polipépíidos se pueden incorporar dentro de dichos hidrogeles para proveer una liberación localizada, sostenida de los ageníes activos (West and Hubbel, Reacíive Polymers 25:139, 1995; Hill-West y otros, J. Surg. Res. 58:759; 1995). La liberación localizada, sostenida de los antagonisías y agonisías LDCAM cuando se incorpora deníro de los hidrogeles se amplificaría a través de una vida media larga de los agonistas y antagonisías de LDCAM.

Los compuesfos de esta invención se pueden incluir en la formulación como multipariículas finas en la forma de granuloso pellas de un tamaño de partícula de alrededor de 1 mm. la formulación del material para la administración de la cápsula también podría ser como un polvo, tapones ligerameníe comprimidos, o aún íablefas. El terapéutico se podría preparar a través de compresión. Los ageníes colorantes y saborizantes también se pueden incluir. Por ejemplo, la proíeína (o derivado) se puede formular (íal como a íravés de liposoma o encapsulación de microesfera) y después además estar contenida dentro de un producío comesíible, íal como una bebida refrigerada que contiene los agentes coloraníes y saborizantes. Se puede diluir o incrementar el volumen del compuesto de la invención con un maíerial ineríe. Esíos diluyentes podrían incluir carbohidratos, especialmente manitol, alfa-lactosa, lactosa anhidra, celulosa, sacarosa, dextranas modificadas y almidón. También se pueden uíilizar cierías sales inorgánicas como llenadores, incluyendo írifosfaío de calcio, carbonaío de magnesio y cloruro de sodio. Algunos diluyeníes comercialmeníe disponibles son Fasí-Flo, Emdex, STA-Rx 1500, Emcompress y Avicell. Los desiníegrantes se pueden incluir en la formulación del terapéutico dentro de una forma de dosificación sólida. Los materiales utilizados como desiníegrantes incluyen pero no se limitan a almidón, incluyendo el desintegraníes comercial basado en almidón, Explotab. Glicolato de almidón de sodio, Amberlite, carboximefilcelulosa de sodio, ulíramilopecíina, alginaío de sodio, gelaíina, cascara de naranja, carboximeíilcelulosa acida, esponja naíural y beníonita todo se puede utilizar. Otra forma de los desintegrantes son la resina se intercambio catiónica ¡nsolubles. Las gomas en polvos se pueden utilizar como desiníegraníes y como integradores y estos pueden incluir gomas en polvo, tal como agar, Karaya o tragacanío. Acido algínico y su sal de sodio íambién son úíiles como desintegrantes. Los integradores se pueden utilizar para mantener el agente terapéuíico junio para formar una íableta dura e incluye materiales de productos naturales tales como acacia, tragacanío, almidón y gelaíina. Oíros incluyen meíilcelulosa (MC), efilcelulosa (EC), y carboximeíilcelulosa (CMC). La polivinilpirrolidona (PVP), e hidroxipropilmeíil celulosa (HPMC) ambos podrían uíilizarse en soluciones alcohólicas para granular el terapéutico. Se puede incluir un agente antifricción en la formulación del íerapéutico para prevenir que se peque durante el proceso de formulación. Los lubricaníes se pueden uíilizar como una capa eníre terapéutico y la pared del monte, y esíos pueden incluir, pero no se limiían a: ácido esíeárico incluyendo sus sales de magnesio y calcio, pollíeírafluoroeíileno (PTFE), parafina líquida, aceiíes vegeíales y ceras. Los lubricaníes solubles íambién se pueden uíilizar íales como lauril sulfaío de sodio, lauril sulfaío de magnesio, polietilen glicol de varios pesos moleculares, Carbowax 4000 y 6000. Los deslizantes que podrían mejorar las propiedades del flujo del fármaco duraníe la formulación y para ayudar a la redisposición durante la compresión se podrían agregar. Los deslizantes pueden incluir almidón, talco, sílice pirogénico y sílicoaluminato hidraíado. Para ayudar a la disolución del compuesto de esta invención dentro del ambiente acuoso se puede agregar un agente tensioactivo como un agente de humectación. Los agentes tensioactivos pueden incluir detergentes aniónicos tales como lauril sulfaío de sodio, sulfosuccinaío de diocíil sódico, y sulfonaío de diocíil sódico. Los deíergentes catiónicos se podrían uíilizar y podrían incluir cloruro de benzalconio o cloruro de benceíonio. Las lisia de los detergentes no iónicos potenciales que se podrían incluir en la formulación como agentes tensioactivos es lauromacrogol 400, estearato de de polioxilo 40, aceiíe de riño hidrogenado de polioxieíileno 10, 50 y 60, monoesíearato de glicerol, polisorbato 40, 60, 65 and 80, éster de ácido graso de sacarosa, metilcelulosa y carboximetilcelulosa. Estos agentes tensioactivos pueden estar presentes en la formulación de de la proteína o derivado ya sea solos o como una mezcla en diferentes proporciones. Los adiíivos fambién se pueden incluir en la formulación para mejorar la absorción del compuesío. Los adiíivos que potencialmente tienen esta propiedad son por ejemplo el ácido oleico de ácidos grasos, ácido linoleico y ácido linolénico.. La formulación de liberación confrolada puede ser deseable. El compuesto de esta invención se puede incorporar dentro de una matriz inerte que permite la liberación a través ya sea de mecanismos de difusión o deslavado; por ejemplo, gomas. Las matrices de degeneración lenta también se pueden incorporar deníro de la formulación, por ejemplo, alginaíos, polisacáridos. Oíra forma de una liberación controlada de los compuestos de esta invención es a través de un método basado en el sistema terapéutico Oros (Alza Corp.), es decir, el fármaco encasillado en una membrana semipermeable que permite que el agua entre y empuje el fármaco a través de una pequeña abertura debido a los efectos osmóticos. Algunas capas entéricas también tienen un efecto de liberación retrasada. Otras capas se pueden utilizar para la formulación. Estas incluyen una variedad de azúcares que podrían aplicarse en molde de la cobertura. El agente terapéutico también se puede dar en una tableta cubierta con una película y el material utilizado en esta instancia se divide en dos grupos. El primero con los materiales no entéricos e incluyen metilcelulosa, etilcelulosa, hidroxietil celulosa, metilhidroxi-etil celulosa, hidroxipropil celulosa, hidroxipropil-etil celulosa , carboxi-meíil celulosa de sodio, providona y los polietilen glicoles. El segundo grupo consiste de maíeriales eníéricos que son comúnmente esteres de ácido itálico. Una mezcla de maíeriales se podría utilizar para proveer una capa de película óptima. La capa de película se puede llevar a cabo en un recubridor de placa o en una cama para transformar líquido o a través de cobertura de compresión. También se contempla aquí la distribución pulmonar de la presente proíeína (o derivados de la misma). La proíeína (o derivado) se disíribuye a los pulmones de un mamífero duraníe la inhalación y atraviesa a través del borde epitelial del pulmón a la corriente sanguínea. (Oíros reporíes de esto incluyen Adjei y otros, Pharma. Res. (1990) 7:565-9; Adjei y otros (1990), Internáis. J; Pharmaceutics 63:135-44 (aceíaío leuprolide); Braqueí y oíros (1989), J. Cardiovasc. Pharmacol. 13 (supl. 5): s. 143-146 (endoíelina-1); Hubbard y otros (1989), Annals Vint. Med. 3:206-12 (al- antiíripsina); Smith y otros (1989), J. Clin. Invest. 84:1145-6 (al-proteinasa); Osweinet y otros (Mazo 1990), "Aerosolization of Proíeins", Proc. Symp. Resp. Drug Delivery II, Keysíone, Colorado (hormona del crecimiento humano recombinante); Debs y otros (1988), J. Immunol. 140:3482-8 (interferón-? y factor de necrosis de íumor) y Plaíz y oíros, paíeníe de E.U.A. No. 5,284, 656 (factor estimulador de la colonia de granulociío). Se contempla para este uso en la práctica de esta invención un amplio rango de dispositivos mecánicos diseñados para la distribución pulmonar de productos terapéuticos, incluyendo, pero no limitándose a, nebulizadores, inhaladores de dosis medida, e inhaladores de polvo, todos los cuales son familiares para aquellos con experiencia en la técnica. Algunos ejemplos específicos de dispositivos comercialmente disponibles adecuados para la práctica de esía invención . son el nebulizador Ultravent, fabricado por Mallinckrodt, Inc., St. Louis, Missouri; el nebulizador Acorn II, fabricado por Marquest Medical Producís, Englewood, Colorado; el inhalador de dosis medida Veníolin, fabricado por Glaxo Inc., Research Triangle Park, Noríh Carolina; y el inhalador de polvo Spinhaler, fabricado por Fisons Corp., Bedford, Massachuseíís. Todos dichos disposiíivos requieren del uso de formulaciones adecuadas para disíribuir el compuesto de la invención. Típicamente, cada formulación es específica para el íipo de disposiíivo empleado y puede involucrar el uso de un maíerial propulsor apropiado, además de diluyeníes, auxiliares y/o poríadores úíiles en la íerapia. El compuesío de. la invención deberá prepararse veníajosameníe en forma de paríícula con un famaño de paríícula promedio de menos de 10 µm (o mieras), más preferiblemeníe de 0.5 a 5 µm para la disíribución más efecíiva para el pulmón disíante. Los portadores farmacéuticameníe acepíables incluyen carbohidraíos tales como trealosa, maniíol, xiliíol, sacarosa, lacíora y sorbiíol. Otros ingredientes para uso en las formulaciones pueden incluir DPPC, DOPE, DSPC y DOPC. Se pueden utilizar agentes íensioacíivos naturales o sintéticos. Se puede utilizar PEG (aún aparte de su uso en la derivatización de la proteína o análogo). Se puede uíilizar dexíranas, tales como ciclodextrana. Se pueden ufilizar sales de bilis y oíros mejoradores relacionados. Se pueden utilizar celulosa y derivados de celulosa. Se pueden utilizar aminoácidos, tales como en el uso de una formulación de regulación de pH. También, el uso de liposomas, microcápsulas o microesferas, complejos de inclusión, u otros tipos de portadores se contempla. Las formulaciones adecuadas para uso con un nebulizador, ya sea jet o ulírasónico, íípicamente comprenderán el compuesto de la invención disuelto en agua a una conceníración de alrededor de 0.1 a 25 mg de la proteína biológicamente acíiva por ml de solución. La formulación también puede incluir un regulador de pH y azúcar simple (por ejemplo, para la esíabilización de la proíeína y la regulación de la presión osmótica). La formulación del nebulizador también puede coníener un ageníe íensioacíivo, para reducir o prevenir la agregación de la proíeína inducida hacia la superficie causada por la aíomización de la solución en la formación del aerosol. Las formulaciones para uso con un dispositivo inhalador de dosis medida generalmente comprenden un polvo finamente dividido conteniendo el compuesto del invención suspendido en un propulsor con ayuda de un agente íensioacíivo. El propulsor puede ser cualquier maíerial convencional empleado para esíe propósiío, íal como clorofluorocarbono, un hidrofluoroclorocarbono, un hidrofluorocarbono, o un hidrocarbono, incluyendo íriclorofluorometano, dicloro di fluoro met ano, diclorotetrafluoro eíanol, y 1 ,1 ,1 ,2-íefrafluoroeíano, o combinaciones de los mismos. Los agentes tensioactivo ser adecuados incluyen triolato de sorbitan y lecitina de soya. El ácido oleico también puede ser úfil como un ageníe íensioacíivo. Las formulaciones para disíribuirse a paríir de un disposiíivo inhalador de polvo comprenderán un polvo seco finameníe dividido conteniendo al compuesto del invención y íambién pueden incluir un ageníe que lo abulte, tal como lactosa, sorbitol, sacarosa, manitol, trealosa, o xilitol, en cantidades que facilitan la dispersión del polvo a partir del dispositivo, por ejemplo, de 50 a 90% en peso de la formulación.

Combinaciones de Compuestos Terapéuticos. Un antagonista y agonista LDCAM de la presente invención puede estar activo en muliímeros (por ejemplo heíerodímeros u homodímeros) o complejos con sí mismos u ofros polipéptidos. Como resultado, las composiciones farmacéuticas de la invención pueden comprender un polipéptidos la invención en dicha forma multimérica o de complejo. La composición farmacéuíica de la invención puede esíar en la forma de un complejo de polipépíido(s) en la presente invención junto con el antígeno del polipéptido o del péptido. La invención además incluye la administración de antagonistas y agonista LDCAM o concurrentemente con uno o más de otros fármacos que se administran al mismo paciente en combinación con los aníagonisfas y agonista se LDCAM, cada fármacos siendo administrado de acuerdo con un régimen adecuado para ese medicamento. "Administración concurreníe" abarca el íraíamiento simultáneo o secuencial con los componentes de la combinación, así como regímenes en los cuales los fármacos se alíernan, o en donde un componente se administra a largo plazo y el otro(s) se administra intermiíentemente. Los componentes se pueden administrar en la misma composición o en composiciones separadas, y a través de la misma o diferentes rutas de administración. Ejemplos de componentes que se pueden administrar concurrentemente con las composiciones farmacéuticas de la invención son: citocinas, linfocinas, u otros factores hematopoyéticos tales como M-CSF, GM-CSF, TNF, IL-1, IL-2, IL-3, IL4, IL-5, IL-6, IL- 7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-1 , IL-12, IL-13, IL-14, IL- 15, I L-17, IL-18, IFN, TNFO, TNF1, TNF2, G-CSF, Meg-CSF, trombopoyetina, factor de célula de tallo, y eriíropoyeíina, o inhibidores o aníagonistas de cualquiera de estos factores. La composición farmacéutica además puede contener otros agentes que ya sea mejórala acíividad del polipépíido o complementan su actividad o se usan en el tratamiento. Dichos factores y/o agentes adicionales se pueden Incluir en la composición farmacéutica para producir un efecto sinergístico con el polipéptido de la invención, o para minimizar los efectos laterales. Por el contrario, los antagonisías y agonisías LDCAM de la preseníe invención se pueden incluir en formulaciones de la citocina particular, linfocina, otro factor hemaíopoyéíico, írombóíico o factor Anti-Trombótico, o agente Anti-inflamatorio para minimizar los efectos laterales de la citocina, linfocina, otro factor hemaíopoyético, trombótico o factor Anti-Trombótico, o agente anti-inflamatorio. Los ejemplos adicionales de fármacos que se pueden administrar concurrentemente incluyen, pero no se limitan a aníivirales, antibióticos, analgésicos, corticoesíeroides, antiinflamatorios no esteroidales, pentoxifilina, talidomida, y fármacos antireumáíicos que modifican enfermedad (DMARDs) tales como azatioprina, ciclofosfamida, ciclosporina, sulfato de hidroxicloroquina, metotrexato, leflunomida, minociclina, penicilamina, sulfasalazina, y compuestos de oro tales como oro oral, tiomalato de sodio de oro, y aurotioglucosa. Adicionalmente, los antagonistas y agonistas LDCAM se pueden combinar con un segundo agonista o antagonista LDCAM , incluyendo un anticuerpo o pepticuerpo coníra el polipépíido LDCAM y/o CRTAM, un pépíido derivado del polipéptido LDCAM o CRTAM que actúa como un inhibidor competitivo de un polipéptido LDCAM y/o CRTAM nativo. La duración del tratamienío variará, pero fípicameníe se adminisíraran dosis repelidas duraníe por lo menos un período de dos semanas o más, o se puede administrar indefinidamente. Varias ondas del tratamiento se pueden dar, alternando con periodos de no íraíamienío. Si el íraíamienfo es discontinuo, se puede resumir si debe ocurrir una recaída del cáncer. El íraíamienío de cáncer con antagonistas y agonistas LDCAM se puede administrar concurrenfemeníe con ofros íratamientos, y se puede adminisírar concurreníemente con quimioterapia o fratamiento de radiación. En un ejemplo, los aníagonisfas y agonisías LDCAM serán concurreníemeníe con una geníe que es efectivo contra una variedad de tipos de tumor, tales como el ligando Apo2/TRAIL o un agente anti-angiogénico como un aníicuerpo contra VEGF un anticuerpo contra el receptor EGF. El tratamiento con antagonistas y agonistas LDCAM también se puede combinar con oíros íraíamieníos que activan clases específicas de cáncer, tales como, por ejemplo, anticuerpos monoclonales activados para antígenos específicos de tumor, o con otros tratamientos utilizados para clases particulares de cáncer. Por ejemplo, cáncer de pecho se puede tratar con un antagonista o agonistas LDCAM administrado concurrentemente con quimioterapia, traíamienío de hormona, tamoxifen, raloxifen, o agentes que activan HER2, íal como un anticuerpo aníi-HER2 tal como HERCEPTIN® (Genentech, Inc.) o cualquier combinación de los mismos. En otro ejemplo, la leucemia linfocííica crónica o linfoma no de Hodgkins se puede íratar con una combinación de antagonistas y agonistas LDCAM y el anticuerpo monoclonales anti-CD20 RITUXIN® (Geneníech, Inc.). La invención íambién coníempla la adminisíración concurrente de antagonistas y agonistas LDCAM con varios recepfores de ciíocina solubles o citocinas u otros fármacos utilizados para quimioterapia de cáncer. "Administración concurrente" abarca el tratamiento simultáneo o secuencial con los componentes de la combinación, así como regímenes en los cuales los fármacos se alternan, o en donde un componente se administra a largo plazo y el otro(s) se adminisíra intermlteníemente. Dichos otros fármacos incluyen, por ejemplo, biofosfonaíos uíilizados para resíaurar la pérdida de hueso en pacieníes con cáncer, o el uso de más de un aníagonisía RANK administrado concurrentemente. Ejemplos de otros fármacos que se van a administrar concurrentemente incluyen, pero no se limitan a, antivirales, antibíóíicos, analgésicos, corticoesteroides, antagonistas de citocinas inflamatorias, DMARDs, varios regímenes de quimioterapia sistémicos y aníi-inflamaíorios no esteroidales, tales como, por ejemplo, COX o inhibidores de COX II. Rutas de Administración. Cualquier ruta de administración eficaz se puede utilizar para terapéuíicamente administrar antagonistas y agonistas LDCAM, incluyendo aquellas composiciones que comprenden ácidos nucleicos. La administración parenteral incluye inyección, por ejemplo, a través de ruta intra-articuíar, intravenosa, intramuscular, intralesional, intraperitoneal o rutas subcutáneas a través de inyección de bolo o a través de infusión continua, y también incluye a administración localizada, por ejemplo, en el siíio de la enfermedad o el daño. Oíros medios adecuados para la adminisíración incluyen liberación sosíenida de implaníes; inhalación y/o insuflación en aerosol; gofas para los ojos; suposiíorios vaginales o reciales; preparaciones bucales; preparaciones orales, incluyendo pildoras, jarabes, grajeas, helados, o más de mascar; y preparaciones íópicas tales como lociones, geles, aspersiones, ungüentos u oirás técnicas adecuadas. Alternativamente, los polipéptidos de los antagonisías y agonisías LDCAM se pueden adminisírar a íravés de implaníe de células cultivadas expresan el polipéptido, por ejemplo, a través del implante de células expresan antagonisías y agonistas LDCAM. Las células Camín se pueden cultivar ex vivo en la presencia de polipépíidos de la preseníe invención con el fin de modular la proliferación de la célula o para producir un efecto deseado o actividad en dicha células. Las células tratadas entonces se pueden introducir in vivo para propósitos íerapéuticos. El polipéptido de la presente invención también se puede administrar a íravés del méíodo de íransducción de proteína. En este método, los antagonistas y agonistas LDCAM están covalentemente enlazados a un dominio de transducción de proteína (PTD) tal como, pero no limitándose a, TAT, Antp, o VP22 (Schwarze y otros, 2000, Cell Bioiogy 10: 290-295). Los péptidos enlazados a PTD entonces se pueden transducir deníro de las células a íravés de la adición de péptidos al medio de cultivo del ejido conteniendo las células (Schwarze y oíros, 1999, Science 285:1569; Lindgren y otros, 2000, TiPS 21:99; Derossi y otros, 1998, Cell Biology 8:84; WO 00/34308; WO99/29721; y WO 99/10376). En otra modalidad, las células propias del paciente se inducen para producir polipépíidos o aníagonistas LDCAM a través de transfección in vivo o ex vivo con un ADN que codifica a los antagonisías y agonistas LDCAM. Este ADN se puede introducir dentro de las células del pacieníe, por ejemplo, a través de infección de ADN desnudo o ADN encapsulado en liposoma que codifica antagonistas y agonistas LDCAM, o a través de otros medios de transfección. Los ácidos nucleicos del invención también se pueden administrar a los pacientes a íravés de oíros méíodos conocidos para la iníroducción del ácido nucleico deníro de la célula u organismo (incluyendo, sin limiíación, en la forma de vectores virales o ADN desnudo). Cuando los antagonisías y agonisías LDCAM se administran en combinación con uno o más de otros compuestos Iógicameníe acíivos, esíos se pueden adminisírar a través de las mismas o diferentes rufas, y se pueden adminisírar simultáneamente, separadamente, o secuencialmeníe. Adminisíración Oral. Cuando una caníidad íerapéuíicameníe efectiva del polipéptido de la presente invención se administra oralmente, el polipéptido de la presente invención estará la forma de una tableta, cápsula, polvo, solución o elixir. Cuando se administra en la forma de tableía, la composición farmacéuíica de la invención puede adicionalmeníé cóníener un poríador sólido íal como una gelatina un auxiliar. La tableta, cápsula, y el polvo contienen alrededor de 5 a 95% del polipéptido de la presente invención, y preferiblemente de aproximadamente 25 a 90% del polipéptido de la presente invención. Cuando se administra forma líquida, se puede agregar un portador líquido tal como agua, petróleo, aceites de origen animal o de planta tales como aceite de cacahuaíe, aceite mineral, aceite de fríjol de soya, o aceiíe de ajonjolí, o aceites sintéíicos. La forma líquida de la composición farmacéuíica además puede coníener una solución salina fisiológica, dexírosa u oíra solución sacárida, o glicoles íales como etilen glicol, propilen glicol, o polietilen gllcol. Cuando se administra en forma líquida, la composición farmacéutica contiene de alrededor de 0.5 a 90% en peso del polipéptido de la presente invención, y preferiblemeníe de aproximadamente 1 a 50% del polipéptido de la presente invención. Administración Intravenosa. Cuando una caníidad íerapéuticamente efecíiva del polipéptido de la invención se administra a través de inyección intravenosa, cutánea o subcutánea, el polipéptido de la presente invención esíará en la forma de una solución acuosa pareníeralmeníe acepíable, libre de pirógeno. La preparación de dichas soluciones de poiipéptido parenteralmente aceptables, teniendo debido al pH, isotonicidad, esíabilidad y similares, está dentro de la experiencia en la técnica. Una composición farmacéutica preferida para inyección intravenosa, cutánea o subcutánea deberá contener, además del polipéptido de la presente invención, un vehículo isotónico tal como inyección de Cloruro de Sodio, Inyección de Ringer, Inyección de Dextrosa, Inyección de Dextrosa y Cloruro de Sodio, Inyección de Ringer Laclada, u oíro vehículo conocido la íécnica. La composición farmacéuíica de la presente invención también puede coníener esíabilizadores, conservadores, reguladores de pH, aníioxidaníes, u oíros adiíivos conocidos por aquellos con experiencia íécnica. La duración de la terapia intravenosa utilizando la composición farmacéutica de la presente invención variará, dependiendo de la severidad de la enfermedad que se está íraíando y de la condición y respuesía y idiosincrásica poíencial de cada pacieníe individual. Se contempla que la duración de cada aplicación del polipéptido de la preseníe invención estará en escala de 12 a 24 horas de administración intravenosa continua. Finalmeníe, el médico que aíiende decidirá de la duración apropiada de la terapia intravenosa uíilizando la composición farmacéuíica de la preseníe invención. Adminisíración en Hueso y Tejido. Para composiciones de la preseníe invención que son úíiles para írasíornos de hueso, caríílago, íendón o ligamenío, el méíodo íerapéuíico incluye la adminisíración de la composición tópicamente, sistémicameníe, o localmeníe como un implaníe o disposiíivo. Cuando se adminisíra, la composición íerapéutica para uso en ésta invención está, por supuesío, en la forma fisiológicamente aceptable, libre de pirógeno. Además, la composición puede ser deseablemente encapsulado o inyectada en una forma viscosa de distribución al sitio del hueso, cartílago o tejido dañado. La adminisíración íópica puede ser adecuada para la sanación de heridas y reparación de íejido. Los agentes terapéuticamente útiles diferentes de un polipéptido de la invención que también pueden opcionalmeníe estar incluidos en la composición como se describió anteriormente, pueden alternaíivameníe o adicionalmeníe, adminisírase simuliáneamenie o secuencialmeníe con la composición en los méíodos del invención. Preferiblemeníe para formación de hueso y/o cartílago, la composición podría incluir una matriz capaz de distribuir la composición que contiene el polipéptido al siíio del daño del hueso y/o cartílago, proveyendo una estrucíura para el desarrollo del hueso y el caríílago y óptimamente capaz de ser reabsorbida dentro del cuerpo. Dichas matrices se pueden forma de materiales actualmente en uso por otras aplicaciones médicas implantadas. La selección del material de la matriz se basa en la biocompatibilidad, biodegradabilidad, propiedades mecánicas, apariencia cosméíica, y propiedades de iníerfase. La aplicación paríicular de las composiciones definirá la formulación apropiada. Las matrices potenciales para las composiciones pueden ser biodegradables y químicamente definen el sulfato de calcio, fosfaío tricálcico, hidroxipatifa, ácido pol i láctico, ácido poliglicólico, y polianhidros. Otros materiales potenciales son biodegradables y biológicamente bien definidos, tales como colágeno de hueso o térmico. Las maírices adicionales esíán comprendidas de polipéptidos puros o componentes de matriz extracelulares. Oíros maírices potenciales son no biodegradables y químicameníe definidas, íales como hidroxipaíita sinterizada, biovidrio, aluminaíos, y otros matrices de cerámica pueden estar comprendidas de combinaciones de cualquiera de los tipos de maíerial anteriormente mencionados, tales como ácido poliláctico e hidroxipatiía o colágeno y fosfafo tricálcico. Las biocerámicas se pueden alterar en la composición, tal como en el calcio-aluminato-fosfafo y el procesamienío para alterar el tamaño del poro, el tamaño de la particular, la forma de la particular, y la biodegradabilidad. Actualmente se prefiere un copolímero de 50:50 (peso en moles) de ácido láctico y ácido glicólico en la forma de partículas de poro que tienen diámetros en escala de 150 a 800 mieras. En algunas aplicaciones, será útil utilizar un agente de secuestro, tal como carboximetilcelulosa o coágulos de sangre autólogos, para prevenir que las composiciones de polipéptido se desasocien de la matriz. Una familia de agentes de secuestro preferida son los maíeriales celulósicos íales como alquilcelulosas (incluyendo hidroxialquilcelulosas), incluyendo mefilcelulosa, metilcelulosa, hidroxietilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, y carboximetil-celulosa, la más preferida siendo las sales catiónicas de carboximeíilcelulosa (CMC). Oíros ageníes de secuesíro preferidas incluyen ácido hilaurónico, alginaío de sodio, poli(elileno glicol), óxido de polietileno, polímero de carboxivinilo y poli(alcohol vinílico). La cantidad de agentes de secuestro útil aquí es 0.5-20 % en peso, preferiblemente 1. 10% en peso con base en el peso total de la formulación, lo cual representa la cantidad necesaria para prevenir la desabsorción dei polipéptido de la matriz del polímero y para proveer un manejo de la composición apropiado, aún no más que las células del progenitor se prevengan de infiltrar la matriz, por lo tanto proveyendo al polipéptido la oportunidad de ayudar en la actividad osteogénica de las células progenitoras. En composiciones adicionales, los polipéptidos de la invención se pueden combinar con otros agentes benéficos para el tratamiento de defectos en el hueso y/o cartílago, heridas, o tejidos en cuestión. Estos agentes incluyen varios factores de crecimiento tales como el facfor de crecimiento epidémico (EGF), el factor de crecimiento derivado de plaqueía (PDGF), factores de crecimiento de transformación (TGF-alfa y TGF-beta), y factor de crecimiento de tipo insulina (IGF). La composición terapéutica también es actualmente valiosa para aplicaciones veterinarias. Particularmente animales domésticos y caballos de pura sangre, además de seres humanos, son pacientes deseados para dicho íraíamienío con polipépíidos de la preseníe invención. El régimen de dosificación de una composición farmacéutica conteniendo el polipéptido que se va utilizar en la regeneración del tejido se deíerminará a través del físico que atiende considerando varios factores que modifica la acción de los polipéptidos, por ejemplo, la cantidad del peso del íejido que se desea formar, el siíio del daño, la condición del íejido dañado, el tamaño de la líquida, el tipo de tejido dañado (por ejemplo, hueso), la edad, sexo y dieía del pacieníe, la severidad de cualquier infección, el íiempo de administración y otros facíores clínicos. La dosificación puede variar con ei tipo de maíriz utilizada en la reconstitución y con la inclusión de otros polipépfidos en la composición farmacéutica. Por ejemplo, la adición de otros factores de crecimiento conocidos, tales como IGF I (facíor I de crecimienío de íipo insulina), a la composición final, íambién puede afectar la dosificación. El avance se puede monitorear a través de la evaluación periódica del crecimiento del íejido/hueso y/o reparación, por ejemplo, rayos x, deíerminaciones histomórficas, y marcación de tetraciclina. Usos Veterinarios. Además de los pacieníes humanos, los aníagonistas agonistas LDCAM son útiles en el tratamiento de condiciones de enfermedad en animales no seres humanos, tales como mascólas (perros, gafos, pájaros, primales, etc.), animales de granja domésticos (caballos, ganado, ovejas, puercos, pájaros, etc.), o cualquier animal que sufre de una condición mediada por antagonistas y agonistas LDCAM. En dichas insíancias, una dosis apropiada se puede deíerminar de acuerdo con el peso del cuerpo del animal. Por ejemplo, una dosis de 0.2-1 mg/kg se puede utilizar. Alternativamente, la dosis se determina de acuerdo con el área de superficie del animal, una dosis ilusíraíiva en la escala de 0.1-20 mg/m2, o más preferiblemente de 5-12 mg/m2. Para animales pequeños, tales como perros o gatos, una dosis adecuada es de 0.4 mg/kg. en una modalidad preferida, los aníagonisías y agonistas LDCAM (preferiblemente construidos de genes derivados de las mismas especies que el pacieníe), se adminisíran a íravés de inyección u oíra ruía adecuada una o más veces por semana hasía que la condición del animal se mejora, o se puede adminisírar indefinidamente. Fabricación de los Medicameníos. La preseníe invención íambién se refiere al uso de aníagonisías y agonisías LDCAM, según se definen de manera variada aquí en la fabricación de un medicamento para la prevención o traíamiento terapéutico de cada trastorno médico descrito la preseníe. La presente invención no está limitada en alcance a las modalidades específicas descritas aquí, las cuales son previstas como ilusíraciones individuales de aspecíos individuales del invención, y funcionalmeníe los métodos y componentes equivalentes están deníro del alcance del invención. Cieríameníe, varias modificaciones del invención, además de aquellas mosíradas y descriías aquí serán apárenles para aquellos con experiencia en la íécnica a paríir de la descripción anteriormente mencionada y de los dibujos que la acompañan. Dichas modificaciones pretenden caer dentro del alcance de las reivindicaciones anexas. La invención habiendo sido descrita, los ejemplos siguientes se ofrece una manera de ilustración y no limitación.

Números de Identidad de Secuencia y Moléculas Asociadas EJEMPLOS EJEMPLO 1 Preparación de la Proteína de Fusión B7L-1 Los siguiente describe la generación de una proteína B7L-1/Fc humana que se uíilizó para identificar células con las cuales se une B7L-1. La proteína de fusión incluye la región extracelular soluble de B7L-1 humano y la región Fc humana y se preparó primero aislando ADNc que codifica la región extracelular de B7L-1 humano utilizando iniciadores que flanquean la región extracelular de los oligo B7L-1 (Ver patente de E.U.A. No. 5,011,912). Para aislar los nucleótidos que codifican el dominio exíracelular de los oligonucleótidos B7L-1 (nucleótidos 108-1249 se SEC ID NO: 1 de la soliciíud copendieníe S/N 60/095,663 presentada el 7 de agosto de 1998) que flanquean la región extracelular B7L-1 se utilizaron como iniciaron en una reacción PCR para obtener un producto PCR del clon #44904 el cual fue la plantilla en la reacción. El producío PCR resulfante se digirió con las enzimas de restricción Salí y Bglll en los sitios Salí y Bglll incorporados a través de ios iniciadores. El fragmento resultante se ligó dentro del vector de expresión (pDC409) conteniendo la región Fc de Ig G 1 humano mutada a un enlace del receptor Fc menor. La construcción de ADN resultaníe se íransfecíó deníro de las líneas de célula de riñon de mono CV-1/EBNA (con la co-íransfección de psv3neo). Después de 7 días de cultivo en medio conteniendo 0.5% de suero de bovino bajo en inmunoglobulina se agregó una solución de 0.2% azida al sobrenadante y el sobrenadante se filtró a través de un filtro de 0.22 µm. Después aproximadamente 1 I del sobrenadante de cultivo se pasó a través de un sistema de purificación de proteína HPLC BioCad Protein A HPLC utilizando una columna de Proteína A de 4.6 x 100 mm (POROS 20A de PerSeptive Biosystems) a 10 ml/min. La columna de la Proíeína A se une a la Porción Fc de la proíeína de fusión en el sobrenadante, inmovilizando la proíeína de fusión y permitiendo que los otros componentes del sobrenadante pasen a través de la columna. La columna se lavó con 30 ml de solución de PBS y la proteína de fusión enlazada se eluyó a partir de la columna HPLC con ácido cííríco ajustado a un pH de 3.0. La proteína de fusión purificada eluída se neutralizó como su eludato uíilizando solución de 1M de HEPES a un pH de 7.4.

EJEMPLO 2 Estudios de Unión de B7L-1 La proíeína de fusión B7L-I/Fc preparada en el Ejemplo 1 se uíilizó para identificar líneas de célula la unión de B7L-1 utilizando estudios de unión cuantitativos de acuerdo con metodologías de ciíomeíría de flujo estándares. Para cada línea de célula identificada, el procedimiento involucro la incubación de las células bloqueadas con 2% de FCS (suero de becerro fetal), 5% de suero de cabra normal, y 5% se suero de conejo en PBS durante 1 hora. Después las células bloqueadas se incubaron con 5 µg/ml de la proteína de fusión B7L-I/Fc en 2% de FACS, 5% suero de cabra y 5% de suero de conejo en PBS. Después de la incubación la muestra se lavó 2 veces con regulador de pH FACS (2% de FCS en PBS) y después se írafó con FC aníi-humano de ratón/biotina (comprado en Jackson Research) y SAPE (esíreptavidina-ficoeritrina comprada en Molecular Probes). Esíe íratamiento causó que el Fc anti-humano/biotina se uniera a cualquier enlace B7L-I/Fc y que SAPE se uniera a Fc aníi-humano/biotina resulíanfe en una etiqueta de identificación fluorescente en B7L-I/Fc el cual esíá unido a las células. Las células se analizaron para cualquier proteína unida utilizando ciíomeíría de flujo de deíección fluorescente. Los resultados indicaron que B7L-1 humano se une a la línea epitelial de pulmón humana (WI-28), las líneas de Blimfoblastoide humanas (Daudi y PAE8LBM1), células B de amígdala fresca humana, células dendrííicas CD8+ de murino de nodos de bazos/linfa de animales íraíados con flt3-L y linfoma de célula T de murino S49.1.

EJEMPLO 3 Identificación de la Colección de Expresión WI-26 para Receptores del Conteo de B7L-1 Lo siguienfe describe la ideníificación de una colección de clonación de expresión con la proíeína de fusión B7L-I/Fc preparada como se describió en el Ejemplo 1. La colección de expresión se preparó a partir de la línea de células humanas Wl-26 utilizando los métodos descritos en Currení Protocols In Molecular Biology, Vol. 1, (1987). Al utilizar méíodos de unión indirectos estándares, las monocapas transfectadas de células CV1/EBNA se ensayaron a través de auíoradiografía de íransparencia para la expresión del receptor del contador B7L-1 utilizando la proteína de fusión B7L-1/Fc radioyodinada. Las diapositivas posiíivas que muestran las células que expresan un receptor del contador se identificaron y un depósito conteniendo aproximadamente 2,000 clones individuales se identificó como poíencialmente positivo para la unión de la profeína de fusión B7L-I/Fc. El depósiío se íiíuló y se colocó en placas y después se raspó para proveer ADN de plásmido agrupado para la íransfección en célula CV1/EBNA. Después de la identificación de depósitos similares, un depósito que contuvo los clones que fueron positivos para el receptor del contador de B7L-1 según indicado por la presencia de un producto de gen expresado capaz de unirse a B7L-1/Fc. El depósito positivo se íiíuló y se colocó en placas para obíener colonias individuales. El ADN se aisló de cada clon candidaío poíencial, se volvió a transfectar y se volvió a identificar. Los clones positivos resultanfes coníuvieron el inserfo de ADNac de 1535 nucleótidos. La región de codificación de ADNc del receptor del contador B7L-1 (LDCAM) corresponde a aquel descriío en SEC ID NO: 1. La secuencia de aminoácido codificada por SEC ID NO: 1 se describe en SEC ID NO: 2.

EJEMPLO 4 Expresión de LDCAM Humano Lo siguieníe describe la expresión del enlace LDCAM humano de membrana de longitud completa en células CV1/EBNA. Una construcción de vector para expresar LDCAM humano se preparó a través de la ligación de la región de codificación de SEC ID NO:1 dentro de un vector de expresión pDC409. El vecfor de expresión después se transfectó en células CV1/EBNA y LDCAM se expresó utilizando las técnicas descriías en McMahan y otros, EMBO J. 10:2821,1991. Después de que las células se impacíaron y se incubaron durante varios días, las células que tiene el LDCAM unido a la membrana se cosecharon, se fijaron en 1% paraformaldehído, se lavaron y se utilizaron en su forma intacía. Para expresar una forma soluble de LDCAM que incluye la región exíracelular LDCAM codificada a íravés de los nucleótidos 8 a 1130 de SEC ID NO: 1, se preparó un vector a través de la ligación de la región de codificación extracelular de SEC ID NO:1 deníro de un vecíor de expresión pDC409. El vector se transfectó en células CV1/EBNA. Después de un período de 3 días de incubación en medio fresco, el LDCAM soluble se recuperó a través de la colección de los sobrenadaníes de la células CV1/EBNA conteniendo la forma soluble y aislando LDCAM utilizando técnicas HPLC o técnicas de cromatografía de afinidad.

EJEMPLO 5 Estudios de Unión de LDCAM Con el fin de identificar líneas de célula a las cuales se une LDCAM, la proíeína de fusión LDCAM/Fc se describió en el Ejemplo 9 siguiente, se preparó y se utilizó en la unión de célula y ensayos FACS. Al utilizar la unión de célula estándar y metodologías FACS, LDCAM se encontró que se une a las líneas de célula de linfoblasíoide B, DAUDI y PAE8LBM1, las células se fransfecíaron con B7L-1 humano, células íransfecíadas con LDCAM, células S49.1, y para los DCs linfoides de bazos y nodos linfa de raíones íraíados con FIÍ3-L.

EJEMPLO 6 Identificación de Tejido que Expresa LDCAM Al utilizar metodologías RT-PCR estándares análisis Northern y la comparación de secuencias de la base de datos EST (GENBANK), se examinaron un número de líneas de célula para la expresión de ARNm de LDCAM humano y LDCAM de de ratón. Los resultados demostraron que LDCAM tiene una amplia difusión de distribución de tejido. La expresión de LDCAM humano se encontró en carcinoma de pecho, refina, hígado feíal, bazo, corazón feíal, pulmón, músculo, plácenla, íiroides y de pulmón. Se enconíró LDCAM de ARNm de raíón en íodas las células de embrión, testículos, y células negativas triple.

EJEMPLO 7 Aislamiento de LDCAM de Murino Ya que el B7L-1 humano soluble demostró que se une a S49.1 de linfoma de murino (Ejemplo 2), una colección de expresión S49.1 se identificó para clones LDCAMcDNA de murino. El proceso involucrado en las metodologías RT-PCR utilizan ARN de la línea de célula S49.1 y los iniciadores descriíos en SEC ID NO:7 y SEC ID NO:8. Esíos iniciadores se basan en un EST de murino, descubierío en una base de datos y teniendo homología con LDCAM humano. Los ADNcs se amplificaron a íravés de PCR utilizando los iniciadores, confirmando que el LDCAM de murino está presente en las células S49.1. El producto amplificado se clonó dentro de un vector de clonación y los clones conteniendo un inserío de ADNc LDCAM se deíecíaron a íravés de hibridación con un oligonucleótido complemeniario para la región de codificación del LDCAM humano. Para detectar ADNcs con extensiones 5' según comparado con LDCAM humano un iniciador de oligonucleótido complemeníario para el exíremo 5' de la región de codificación y un iniciador complementario para las secuencias de vector adyaceníes al inserío DNAc se utilizaron para llevar a cabo el PCR anclado por lo que la región 5' de los clones ADNc se amplificaron. Los producios PCR se examinaron a íravés de elecíroforesis de gel y sus longitudes se compararon con un producto de amplificación similarmente derivado de ADNc de LDCAM humano. La secuencia de nucleótido para LDCAM de murino se da en SEC ID NO: 3. La secuencia de aminoácido codificada a través de la secuencia de nucleótido de SEC ID NO:3 se provee en SEC ID NO:4.

EJEMPLO 8 Expresión del Polipéptido LDCAM de Murino Para preparar una construcción del vector para expresar B7L-1 exíracelular de murino la región de codificación de SEC ID NO:3 se ligó dentro de un vector de expresión pDC409. El vector de expresión después se transfecíó en células CV1/EBNA y LDCAM se expresó uíilizando fécnicas descriías en McMahan y oíros, EMBO J 10:2821,1991. Después de que las células se impactaron y se incubaron durante varios días, los sobrenadantes de la célula conteniendo LDCAM de murino soluble se recolecíaron y la proteína se recuperó utilizando técnicas HPLC.

EJEMPLO 9 Preparación de LDCAM/proteínas de fusión Lo siguieníe describe la generación la generación de una proíeína LDCAM/Fc humana que se uíilizó para ideníificar células con las cuales se une LDCAM. La proteína de fusión incluye una región extracelular soluble de LDCAM humano y la región Fc humana de muteina y se preparó primero aislando el ADNc que codifica la región extracelular del LDCAM humano utilizando iniciadores que flanquean la región exíracelular de LDCAM (Ver paíente de E.U.A. No., 5,011,912). Para aislar los nucleótidos que codifican el dominio extracelular de LDCAM, los nucleóíidos 16-1137 de SEC ID NO:1, los oligonucleótidos que flanquean la región extracelular de LDCAM se utilizaron como iniciadores en una reacción PCR para obtener un producto PCR del clon Wl-26. Los iniciadores se muestran en SEC ID NO:5 y SEC ID NO:6. El producto PCR resultante se digirió con las enzimas de restricción Salí y Bglll en los sitios Salí y Bglll incorporados a íravés de los iniciadores. El fragmento resultaníe se ligó deníro de un vecíor de expresión (pDC409) coníeniendo la región IgGI Fc humana para la unión del recepíor Fc menor. La consírucción de ADN resulíaníe se fransfectó deníro de líneas de célula de riñon de mono CV-1/EBNA. Después de 7 días de cultivo en medio conteniendo 0.5% de suero de bovino bajo en inmunoglobulina, se agregó una solución de 0.2% de azida al sobrenadante y el sobrenadante se filtró a través de un filtro de 0.22 µm. Después aproximadamente 1 l del sobrenadante del cultivo se pasó a través de un sistema de purificación de proteína HPLC BioCad Proíein A uíilizando una columna de Proíeína A de 4.6 x 100 mm (POROS 20A de PerSepíive Biosysfems) a 10ml/min. La columna de la Proteína A se une a la porción Fc de la proteína de fusión en el sobrenadaníe, inmovilizando la proíeína de fusión y permitiendo que oíros componentes del sobrenadante pasaran a través de la columna La columna se lavó con 30 ml de solución de PBS y el enlace de la proíeína de fusión se eluyó a partir de la columna HPLC con ácido cítrico ajusfado a un pH de 3.0. La proíeína de fusión purificada eluida se neuíralizó como su eluaío uíilizando una solución de 1M de HEPES a un pH de 7.4.

EJEMPLO 10 Anticuerpos Monoclonales para LDCAM Este ejemplo ilustra un método para preparar anticuerpos para LDCAM. LDCAM purificado, un fragmento del mismo tal como el dominio exíracelular, los péptidos siníéíicos o células que expresan LDCAM se pueden utilizar para generar aníicuerpos monoclonales contra LDCAM utilizando íécnicas convencionales, por ejemplo, aquellas técnicas descritas en la patente de E.U.A. No. 4,411,993. Brevemente, los ratones se inmunizaron con LDCAM como un inmunógeno emulsificado en auxiliar Freund completo, y se inyectaron en cantidades en la escala de 10-100 µg subcutáneameníe o intraperitonealmente. Diez o doce días después, los animales inmunizados se fortalecieron con LDCAM adicional emulsificado en auxiliar Freund completo. Los ratones se fortalecieron periódicamente de ahí en adelaníe en una programación de inmunización semanal o bisemanal. Las muesíras de suero se lomaron periódicameníe a íravés de sangrado reíro-orbital o extirpación de la punta de la cola para probar los anticuerpos LDCAM a través de ensayo de tinción de punios o ELISA (Ensayo Inmunoabsorbeníe Enlazado a Enzima). Después de la detección de un tifulador del aníicuerpo apropiado, a los animales positivos se les proveyó una última inyección intravenosa de LDCAM en salina. Tres o cuatro días después, los animales se sacrificaron, las células del bazo de cosecharon, y las células del bazo de fusionaron con una línea de células de mieloma de murino, por ejemplo, NS1 o preferiblemente P3x63Ag8.653 (ATCC CRL 1580). Las células de hibridoma que generaron las fusiones, las cuales se colocaron en placas en placas de titulación múltiples en un medio selectivo HAT (hipoxantina, aminopterina y timidina) para inhibir la proliferación de células no fusionadas, híbridos de mielona, e híbridos de célula del bazo. Las células de hibridoma se identificaron a íravés de ELISA para la reacíividad coníra B7L-1 purificado a través de adaptaciones de las técnicas descritas en Engvall y oíros, Immunochem. 8:871, 1971 y la paíente de E.U.A. No. 4,703,004. Una técnica de identificación preferida es la técnica de captura del anticuerpo descrita en Beckmann y otros, (J. Immunol. 144:4212, 1990). Las células de hibridoma positivas se pueden Inyectar intraperiíonealmente dentro de ratones BALB/c singenésicos para producir ascitos coníeniendo alias concentraciones de los anticuerpos monoclonales anti-LDCAM. Alternativamente, las células de hibridoma se pueden hacer crecer in vitro en frascos o botellas de rodillo a través de varias técnicas. Los anticuerpos monoclonales producidos en ascitos de ratón se pueden purificar a través de la precipitación de sulfato de amonio seguido por cromatografía de exclusión de gel. Alternativamente, cromatografía de afinidad con base en la unión del anticuerpo a la Proteína A o la Proteína G también se puede utilizar, según la cromatografía de afinidad basada en la unión a B7L-1.

EJEMPLO 11 Detección de la Expresión de LDCAM a Través de Análisis de Tinción Northen Lo siguieníe describe los experimeníos de Tinción Noríhern llevados a cabo para identificar tipos de tejido y de célula que expresan los polipéptidos LDCAM de la preseníe invención. Las tinciones Noríhern se generaron a fravés del fraccionamienío de 5 µg a 10 µg del ARN total en 1.2% de un gel de formaldehído de agarosa y tiñendo el ARN sobre membranas Hybond Nylon (Amersham, Arlington Heights, IL). Se utilizaron los procedimientos para generar la tinción northern estándar como se describen en Maniatis, (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989). Las tinciones de tejido múltiple Poli A+ conteniendo 1 µg de ARNm de un número de diferentes fuentes se compraron en Clonetech. Una ribosonda, coníeniendo la región de codificación de LDCAM, se generó utilizando el Equipo de Combinación Riboprobe de Promega y Polimerasa de ARN T7 de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Los resultados se probaron que las tinciones Northern y la visuallzación resultaníe de la película de rayos x para sondas posifivamenfe de unión mosíraron que se defecto un 5.0 kB de hibridación de ARNm para LDCAM de murino en el pulmón, hígado, cerebro, testículos y células dendríticas esplénicas. La hibridación de ARNm adicional teniendo diferentes íamaños incluyó un ARNm de aproximadameníe 1.9kB en el pulmón y íestículos; un ARNm de aproximadamente 3.0 kB en macrófagos de médula espinal estimulada por LPS, pulmón y lesíículos; un ARMn de hibridación de aproximadameníe 7.0 kB en el aníicuerpo del recepíor de anti-célula T, macrófagos de médula espinal estimulados por LPS, y testículos; y ARNm de hibridación de aproximadamente 9.0 kB se detectó en timo y en células T esplénicas estimuladas por el anticuerpo del receptor de anti-célula T.

EJEMPLO 12 Estudios de Unión de Célula del Sistema Inmune Lo siguiente describe los experimeníos de Unión de Célula FACS que LDCAM une a ciertas células del sistema inmune activado. Para propósiíos de estudio y comparación, las características de unión de B7L-1 también se incluyen. Las células estudiadas incluyeron células T de murino, células T humanas, células B de murino, células NK de murino, células endoteliales humanas, y líneas de célula de íumor humano. Para estudiar la unión de la célula T de murino, se cultivaron células de nodo de linfa de murino (LN) de BALB/c en medio de cultivo solo y en la presencia de diferentes estímulos duraníe de 18-20 horas. Las células culíivadas se cosecharon y se prepararon para los esíudíos de unión utilizando la proteína de fusión B7L1/Fc, la proteína de fusión LDCAM/Fc y una proteína Fc de control. Después de un cultivo durante la noche las células LN de murino de BALB/c son típicamente > de 90% CD3 + . La proteína enlazada se detectó utilizando el análisis de citomeíría de flujo. Los resultados mostrados en el Cuadro 1 indican la unión observada expresada como unidades de intensidad de fluorescencia media (MFI) en células T no esíimuladas (medio) y en células T esíimuladas (por estímulo).

CUADRO l Fc medio Con A TCR mAb PHA control Fc 12.7 10.4 14.5 14.2 B7L-1 Fc 11.7 14.3 24.0 12.6 LDCAM Fc 18.7 51.7 230.0 91.4 Cuando se analizaron a íravés de subgrupos de célula T, 75-80% de las células T de murino LN CD4+ desplegaron unión de LDCAM después de la esíimulación anfi-TCR in vitro. Alrededor del 50% de las células T de murino LN CD8+ murine T desplegaron la unión deíecíable. Además, las células T CD4+ T exhiben niveles más altos de unión LDCAM que las células T de murino CD8 + . Los resultados demosíraron que LDCAM/Fc se une a niveles más bajos a células T naíivas. Sin embargo, después de la acíivación durante la noche con unión de estímulo policlonal incremeníado a 5-20 veces dependiendo del estímulo. Del estímulo estudiado PMA induce la unión LDCAM menor a las células T de murino, y anti-TCR induce la unión más alta. Para estudiar la unión de las células T humanas a LDCAM y su contraestructura B7L1, la células T de sangre periférica humana (PB) se cultivaron en medio de cultivo solameníe o en la presencia de difereníes esíímulos durante 18-20 horas. Las células cultivadas se cosecharon y se prepararon para los estudios de unión utilizando ya sea la proteína de fusión B7L/IFc, la proteína de fusión LDCAM/Fc y la proteína Fc de control. La unión de la proteína a las células T de PB humano se determinó a íravés de análisis de ciíometría de flujo. El Cuadro II deíalla los resulíados observados, expresados como MFI, en células T no estimuladas (medio) y en células T estimuladas (a íravés de esíímulo).

CUADRO II Fc medio Con A TCR mAb PHA conírol Fc 4.7 4.8 3.5 4.3 B7L-1 Fc 6.3 7.5 4.5 5.7 LDCAM Fc 22.3 42.8 61.9 38.8 Los resultados mostraron que, PMA induce un enlace LDCAM mayor en células T humanas que lo que hacen las células T de murino. La presencia de la unión específica de LDCAM a ambas, las células T de murino y humanas en la ausencia de la unión de B7L-1 sugiere que LDCAM se une a B7L-1, o a una molécula diferente y no a si misma. Debido a que los estudios indican que las células T expresan muy poco o nada de B7L1, LDCAM puede tener oíro asociado de unión. Se llevaron a cabo estudios similares a aquellos descritos anteriormente para evaluar LDCAM y B7L-1 enlazado a células B esplénicas de murino. Ni la unión de B7L1 ni de LDCAM se detectó en células B esplénicas de murino no estimuladas. El cultivo de las células B esplénicas de murino con muCD40L o LPS indujo bajos niveles de unión a LDCAM pero no se detecíó un nivel apreciable de unión B7L1. Con el fin de esíudiar el enlace a células NK de murino, se removieron las células del bazo de raíones CB-17/SCID fraíados con IL-15 y se uíilizaron como una fueníe de células NK de murino enriquecidas y activadas. Las células de bazo aisladas de ratones SCID tratadas con I L- 5 son 60-80% DX-5 positivas. DX-5 es un marcador NK de molde que está expresado en células NK expresadas de muchas diferentes especies de ratón. El análisis citoméírico de flujo se llevó a cabo como se describió anteriormeníe para deíectar la unión de B7L1 y LDCAM a DX-5+ células NK de murino activadas por IL-15 in vivo. El Cuadro II da los resultados de un esíudio de unión de célula NK de muríno de unión.

CUADRO lll Molécula Fc DX-5+ Célula NK %+ / MFI Fc de conírol 8% / 88 B7L1FC 19% / 265 LDCAM Fc 38% / 432 En contraste con eso .que se observó en células T humanas y de murino, la unión de LDCAM y B7L-1 se pueden detecíar en células NK de murino acíivadas. Los resultados de los experimentos dirigidos al estudio de la unión de B7L1 y LDCAM a células endoteliales humanas demostraron no unión en células endoteliales de vena umbilical (HUVEC) de diferentes donadores. Sin embargo, un HUVEC de un donador B7L1 si indujo bajos niveles de CD62E y CD106 comparado con el Fc de conírol. El Cuadro IV deíalla los resulíados de los experimeníos dirigidos a la evaluación de la unión de B7L1 y LDCAM a líneas de célula de íumor humano. Los resulíados se expresan como porceníaje de células que unen LDCAM o B7L1.

CUADRO lll Molécula Fc DX-5+ Célula NK %+ / MFI Fc de conírol 8% / 88 B7L1FC 19% / 265 LDCAM Fc 38% / 432 En contraste con eso que se observó en células T humanas y de murino, la unión de LDCAM y B7L-1 se pueden detecíar en células NK de murino activadas. Los resulíados de los experimeníos dirigidos al esíudio de la unión de B7L1 y LDCAM a células endoíeliales humanas demosíraron no unión en células endofeliales de vena umbilical (HUVEC) de diferentes donadores. Sin embargo, un HUVEC de un donador B7L1 si indujo bajos niveles de CD62E y CD106 comparado con el Fc de control. El Cuadro IV detalla los resultados de los experimentos dirigidos a la evaluación de la unión de B7L1 y LDCAM a líneas de célula de tumor humano. Los resulíados se expresan como porceníaje de células que unen LDCAM o B7L1.

CUADRO IV Línea de célula Tipo de célula LDCAMFc (%+)** B7L1 Fc (%+)' U937 Leucemia 10 7 monocítica K562 leucemia 7 5 eritoblásíica Jurkaí leucemia de célula T 10 7 aguda MP-1 LCL de célula B 46 10 DAUDI-hi Burkííí de célula B 8 6 RPMl 8866 linfoma de célula B 0 0 #88EBV LCL de célula B 4 3 #33EBV LCL de célula B 0 0 Amígdala G EBV LCL de célula B 25 13 MDA231 adenocarcinoma de 8 9 pecho OVCAR-3 carcinoma ovárico 48 30 H2126MI adenocarcinoma de 0 0 pulmón ** la unión de Fc de confrol ha sido subsíraída por lo que esío es el %neío + células de unión sobre el fondo. Los resulíados muestran la unión LDCAM importante en la línea de célula de carcinoma ovárico y 2 de las líneas de tumor de célula B humanas (MP-1 y Amígdala G). B7L1 también se une a estas íres líneas de célula de íumor pero a niveles mucho más bajos. Estos resultados demuestran que LDCAM es un marcador para ciertos tipos de linfomas de célula B o diferentes tipos de carcinomas. Además, la señalización biológica mediada por LDCAM o B7L1 podrían mediar los efectos anti-tumor funcionales en estos tipos de tumor.

EJEMPLO 13 Efectos de LDCAM sobre la Proliferación de la Célula T La siguiente discusión describe los experimeníos llevados a cabo para evaluar los efecíos de LDCAM sobre la proliferación de células T de murino y humanas inducida por esíímulos policlonales. La profeína de fusión LDCAM/Fc y la proíeína de fusión B7L1/Fc se evaluaron en un modelo estándar de proliferación de célula T de murino in vitro. Se obtuvieron células de nodo de linfa (LN) de ratones BALB/c normales en cultivo en medio. Se colocaron diferentes cantidades de Fc de control, B7L1/Fc y LDCAM/Fc solo en la presencia de diferentes estímulos policlonales para células T incluyendo ConA, PHA o TCR mAb inmovilizado en el medio de cultivo. Los resultados de estos experimeníos demosíraron que LDCAM fuertemeníe inhibe la proliferación de célula T de murino inducida por ConA (50% de inhibición a aproximadameníe 0.625 ug/ml), moderadameníe inhibe ia proliferación inducida por PHA (50% de inhibición a aproximadameníe 5ug/ml) y no efecíúa la proliferación inducida por TCR mAb inmovilizado. En los ensayos de proliferación de célula T de sangre periférica humana, LDCAM inhibe la proliferación inducida por ConA pero no inhibe efecfivameníe la proliferación inducida por PHA u OKT3. B7L1/Fc no efecíúa las respuesías proliferativas de células T de murino o humanas. Los resultados sugieren que los efectos inhibidores de LDCAM/Fc sobre la proliferación de célula T de murino o humanas inducidas en mitógeno se debe a la proliferación de secreción de citocina (especialmente IL-2) o debido a la regulación de las respuesías en corrieníe descendieníe de la célula T después de la activación y los incremeníos en la expresión del asociado de unión de LDCAM. LDCAM íambién modula las iníeracciones de célula a célula eníre las células T, células T y APC o células T y células NK. La inhabilidad de LDCAM para inhibir la proliferación inducida por TCR mAb sugiere que la desregulación de citocina que ocurre en esa proliferación inducida por ConA y PHA es muy dependiente de citocina en donde eso inducido por anti TCR mAb en sin embargo menor.

EJEMPLO 14 Efectos de LDCAM en la producción de citocina de célula T Lo siguiente describe los experimentos llevados a cabo con el fin de evaluar LDCAM para sus efectos sobre la célula LN de murino o la secreción de citocina de célula T purificada después de la activación in vivo de la células T con PHA, ConA y TCR mAb. Los resultados se muestran en el Cuadro V. Los niveles de citocina detecíados se expresan en pg/ml.

CUADRO V condición del cultivo molécula Fc IL-2 (pg/ml) IFN-gama(pg/mi) Medio ninguno <2 <10 Fc de control <2 <10 LDCAM/Fc <2 <10 ConA ninguno 366 100 Fc de conírol 614 244 LDCAM/Fc <2 <10 PHA ninguno 36 358 Fc de conírol 39 354 LDCAM/Fc 10 <10 TCR mAb ninguno 1703 1114 inmovilizado Fc de control 1722 1215 LDCAM/Fc 1642 1027 Los resultados muestran que LDCAM/Fc inhibe de manera importante la producción de IL-2 en célula T LN de murino y IFN-gama que se induce a través de ambos, ConA y PHA. Cuando se utiliza anti TCR mAb inmovilizado para inducir la producción de citoxina de célula T de murino, se observaron menos efecíos de LDCAM en la producción de citocina. LDCAM disminuyó la producción de IFN-gama después de la activación de TCR. En contraste, la producción de IL-2 no se diminuyó después de la activación de TCR. Se generó muy poco I L-4 a través de las células T en estos experimentos por lo que no evaluaron los efecíos de LDCAM en la producción de célula T de 1 L-4 u otras citocinas/quimiocinas adicionales.

EJEMPLO 15 Efectos de LDCAM en los Ensayos de Activación de Célula Mezclados de Murino Se desarrolló un ensayo de célula mezclada in vitro para examinar la habilidad de la células T para activar células B a través de su interacción CD40L/CD40. El ensayo involucra el culíivo de células de bazo y células LN con aníi-TCR mAb in vitro durante 36 horas después del análisis citoméírico de- flujo y la activación de célula T y B/APC que ocurre después de que las células T se convierten en activadas e inferacíúan con células B/APCs. Las células del bazo se culíivaron con medio anti TCR mAb, ConA PHA o en medio solamente con Fc de control o LDCAM/Fc duraníe 36 horas. La activación de la célula B CD19+ la célula T fue seguida por examen de la expresión de la superficie de célula de CD25, CD69, CD54, CD45Rb, CD44, CD28, CD23, CD86 y CD152 utilizando tinción de dos colores y análisis ciíoméírico de flujo. Los resultados demostraron que después de la acíivación con PHA o ConA la expresión de CD69, CD54, y CD25 se ¡ncremenia varias veces en células T y células B en el cultivo. Comparado con un Fc de control el cual tiene muy poco efecto sobre estos incremeníos, LDCAM significativamente reduce la expresión (casi a los mismos niveles que las células T no activadas) de CD69, CD54 y CD25 que son inducidas en ambos tipos de célula en este sistema de cultivo a través de activación con ConA. ConA activa las células T que expresan las moléculas de activación (por ejemplo, CD40L) en su superficie. Las moléculas de activación se unen a receptores en la superficie de las células B y acíivan las células T para expresar varias proíeínas relacionadas con la acíivación en su superficie de célula. La inhibición de las células T y B activadas por PHA ocurrió a una extensión más moderada a aquella observada después de la activación con ConA. Además, LDCAM disminuyó los niveles de CD45RB expresado con ConA. Este efecto en la disminución de los niveles de CD45RB fue más pronunciado cuando LDCAM se cultivó con células de bazo esíimuladas con TCR mAb y no se observó cuando se utilizó PHA como un estímulo o cuando las células se cultivaron en medio solo. Al utilizar TCR mAb para estimular células de bazo cultivadas en la presencia de de un Fc de control o LDCAM/Fc mosíraron que los niveles de CD69, CD25, y CD25 inducidos en las células T y células B a íravés de esíe esíímulo no se ejecuíaron a íravés de LDCA. Sin embargo, LDCAM incremeníó la expresión de CD28 en ambas, las células T CD3+ y las célula no T. En un experimenío el incremenfo fue de 5-10 veces y en los oíros experimeníos el ¡ncremenfo fue de 50%. Esío íambién se observó en un experimenío cuando se utilizó ConA como un estímulo en la adición de TCR mAb. LDCAM causó disminuciones moderadas en la intensidad de la expresión de CD45RB en células B (50% de disminución) y células T (20-30% de disminución) después de la acíivación con TCR mAb.

Interesantemeníe, LDCAM no ejecuía la expresión de CD45RB en células de bazo cuando éstas se cultivan en ausencia del estímulo de célula T policlonal. La expresión de CD45RB en roedores ha sido reportada como que disminuye según las células T avanzan de inexpertas a células de memoria. También diferentes subpoblaciones de células T CD4+ expresan niveles altos o bajos de CD45RB y median disíinías funciones inmunes in vivo. Los resulíados aníeriormeníe discuíidos que bajo cierías condiciones de estimulación inmune, particularmente estimulaciones a íravés de ConA and PHA, LDCAM inhibe la activación de la célula T al nivel celular en ensayos de células mezcladas e inhibe la proliferación de la célula T inducida por estos miíógenos por lo menos parcialmente a través de la disminución en la producción de IL-2 e IFN-gama. Mientras LDCAM modestameníe regula de manera descendente la producción de IFN gama inducida por la activación inducida por TCR mAb, tiene muy poco efecío en la producción de IL-2 en este sistema y no efecíúa la proliferación de células T de murino inducidas por TCR mAb inmovilizado. LDCAM no causa un incremenío en la expresión de la célula B y la célula T Activada por TCR mAb y una disminución en la expresión de CD45RB. Con base en estos datos, LDCAM o su asociado de unión en células T puede regular (incrementar, disminuir o redirigir) las respuestas inmunes dependiente del ejecutador de la célula T in vivo incluyendo, pero no limitándose a respuestas inmunes anti-íumor, respuesías DTH, y respuestas inmunes de enfermedad anti-infecciosa dependiente de célula T. Los resultados anteriores sugieren que LDCAM es útil en la modulación de las trayecforias de la acíivación de la célula T y se puede uíilizar para íraíar enfermedades autoinmunes e inflamación.

EJEMPLO 16 LDCAM. Fc se Une a Células NK de Murino y Causa la Expansión de la Célula NK Lo siguiente describe experimentos que demuestran que' LDCAM se une a la superficie de las células NK esplénicas consíiíuíivameníe y que la acíivación de esías células con I L-15 incremeníó los niveles de la unión LDCAM. Los experimeníos también describen la administración de LDCAM: Fc a raíones CB-17 SCID y las efecíos de la adminisíración de la expansión y acíivación de la célula NK en el bazo. Doce raíones CB-17/SCID hembra de edad coincideníe se dividieron en 4 grupos, con 3 animales por grupo. En el día 0, día 1 y día 2, al grupo I, al grupo II, al grupo lll y al grupo IV se les adminisíraron las siguieníes proíeínas IP: el grupo I de raíones recibió 10 µg de IgG humano; el grupo de ratones II recibió 10 µg de IL-15 humano; el grupo lll de ratones recibió 10 µg de LDCAM humano:Fc (lote # 7488-16 de Immunex); y, el grupo IV recibió 10 µg de cada uno de LDCAM humano:Fc e IL-15 humano. En el día 3 (el 4o. día del experimento), los ratones se euíanizaron y se removieron sus bazos. Cada bazo se enumeró separadameníe y después se agruparon juntos para análisis de citromeíría de flujo. El número de las células NK en el bazo de cada grupo íratado se determinó a través de citomeíría de flujo uíilizando un aníicuerpo DX-5 como un marcador de célula NK de murino de molde. Además, otras mediciones de la activación de célula NK incluyendo la expresión de CD69 y CD54 se evaluaron. Los resultados para el experimenío se muestran en el Cuadro VI. La Administración de LDCAM:Fc solo (Grupo lll) incremeníó el íoíal recuperado en el número de células de bazo a íravés de alrededor de 5 veces sobre el grupo de conírol IgG humano (Grupo I). La administración de IL-15 humano solo, (Grupo II) incrementó el toíal en el número de células de bazo recuperadas por alrededor de 9 veces sobre el grupo de control (Grupo I). El traíamiento de combinación con IL-15 y LDCAM incrementó el número de células del bazo. El número de células NK recuperadas de los bazos se correlacionó con el total de células recuperadas en el bazo. Más particularmente, LDCAM indujo un incremento de alrededor 5 veces en las células NK recuperadas; IL-15 causó un incremento de alrededor de 9 veces en las células NK recuperadas, y, la combinación de LDCAM e IL-15 indujo un incremento de 13 veces en el número de células NK recuperadas de los bazos de los ratones íraíados. LDCAM íambién incremeníó el número de células NK en el bazo que expresaron CD69 y CD54. Esíe incremento fue debido a la expansión de células NK globales en lugar de los incremenfos específicos en la expresión de CD69 o CD54 en células NK in vivo después de la administración de LDCAM:Fc.

CUADRO VI Grupo de conteos de Número de % de DX-5+ # de células NK ratones SCID célula de bazo ratones células (NK) recuperadas X x106 106 Grupo 1 (IgG 2.3 3 67.8 1.6 humano de control) Grupo II (control 17.8 3 81.7 14.5 positivo IL15) Grupo lll 10.25 3 51.2 5.3 (LDCAM: Fc) LDCAM:Fc e 24.8 3 72.6 18.0 IL15 EJEMPLO 17 Identificación de la Población de Célula Dendrítica Derivada de Ligando- Flt3 Único Una población rara de células (0.2% de PBMC) en la sangre de seres humanos traíados con el ligandos Flí3 se ha identificado que pueden iniciar células T alo-reacíivas a CD4+ inexperías y CD8 + , la cual es una de las características funcionales de las células dendríticas (DC o DCs). Las evaluaciones clínicas de fase I se condujeron en voluntarios humanos sanos y recibieron una inyección subcuíánea diariameníe de 10mg/kg/día del ligando Flí3 (FL) durante 10 días. La inyección del ligando Flt3 mosíró que incremenía en gran medida el número de CD123 + + pDC, CDIc+DC en circulación así como monocitos. En el curso de este estudio clínico, una rara población de células CD162 + + que expresan el Antígeno-3 de Célula Dendrítica en la sangre (BDCA3) se identificó. BDCA3+ DC represenía 0.06% del total de PBMCs en donadores normales. La frecuencia de los incrementos de BDCA3+ DC es de 4 a 8 veces después de la inyección del ligando Flt3. La naíuraleza de esíe antígeno reconocida a través del aníicuerpo aníi-BDCA3 es desconocida, pero parece que esíá sobre reguladas a íravés de la estimulación de IL-3, de esta forma reforzando la noción de que CD15s"CD162++ DC podría representar una forma "más madura" de DC de sangre periférica. Como se muestra en la Figura 1, estas células despliegan algunas caracterísíicas mieloides y fueron identificadas en que no expresan sialil-lewis-X (CD15s) y expresan niveles brillantes de CD162 (PSGL1). Sialil-lewis-X es un azúcar de complejo expresado en la vasta mayoría de DC de sangre. La presencia de sialil-lewis-X en las profeínas de superficie juega un papel en la transmigración DC a través del endotelio vascular. La carencia de expresión de CD15s en DC sugiere que estas células podrían no ser capaces de dejar la corriente sanguínea a íravés de la íransmigración. La caracíerización fenoíípica adicional de estas células reveló un fenotipo relacionado con mieloide (CD11c+, CD13++, CD33dim). Iníeresaníemente, a diferencia de las otras células mieloides, DC de sangre CD15s-CD162++ no expresa los receptores Fc y tampoco CD11b. La expresión del receptor Fc se modula de manera descendente dependiendo de la maduración y las marcas de - transición de una etapa de capíura de anfígeno (inmaduro) a una etapa de presentación de antígeno (maduro). De esta forma, CD15s- CD162++ DC podría ser más maduro que los otros subgrupos DC de sangre. Para caracterizar adicionalmente la población DC en un esfuerzo por identificar las moléculas de superficie de célula únicas para la población DC, se emplearon la selección de las células compleías de despliegue de fago y la descripción del gen global. El análisis de arreglo de gen global reveló que BDCA3+ DC son probablemeníe conírapartes humanas de DC de CD8a+ de ratón. Como se muesíra en la Figura 2, un número de difereníes genes preferencialmente se expresan tanto en DC CD8a+ de ratón como DC BDCA3+ humano. Der esos genes, solameníe DC BDCA3+ y DCCD8a+ de raíón expresan LDCAM (también referido como Igsf4). Estos resultados muestran que las células BDCA3+ se definen mejor como Igsf4 expresando DC. Estás células de preseníación de antígeno (APC) son probablemente la contraparte humana de DC CD8a+ de murino, una población especializada de DC involucrada en la presentación cruzada/tolerancia cruzada del aníígeno. La preseníación/íolerancia cruzada es un mecanismo celular que juega un papel determinante en muchas enfermedades autoinmunes, procesos inflamatorios, así como en transplanfes. La activación de DC BDCA3+ (uíilizando varias formas de aníicuerpos, pepíicuerpos, profeínas solubles, tales como LDCAM y/o CRTAM) puede ser importante en muchas áreas terapéuíicas (como se describió aníeriormeníe). Para deíerminar la alo-acíividad de la población DC, las células CD162++ y CD14+ es purificaron de la sangre de volunfarios humanos sanos tratados con el ligando Flt3 y se culíivaron duraníe 4 días en la presencia de 105 linfocitos T alogéneicos. Se agregó timidina íiíulada durante las últimas 16 horas del cultivo. Los resulíados son represeníaíivos de íres experimeníos independieníes (Figura 3). Esíos resulíados muesíran que los DCs posiíivos de LDCAM son potentes alo-estimuladores.

EJEMPLO 18 Anticuerpo Específico de LDCAM (1F12) Esíos estudios muestran que los ligamentos scfv específicos de LDCAM se aislaron utilizando un méíodo de despliegue de fago de enlazador de célula compleía; esos fagos que expresan scfv aníi-aníi-LDCAM fueron exiíosameníe converíidos en proíeína de fusión ascfv-Fc (referida aquí infercambiablemeníe como un "maxicuerpo" = sin mayor alferación en su especificidad de unión; y que las proteínas de fusión anti-LDCAMscfv-Fc fueron exitosameníe uíilizadas en la inmunoquímica de inmunoprecipitación y ensayos funcionales. Las células dendríticas de sangre BDCA3 humanas se activaron en el contexío de PBMCs compleíos uíilizando una colección de fago scfv. Algunos de los fagos recuperados de este método de separación específicamente se unen a DC BDCA3 + . Brevemeníe, PBMC de voluntarios humanos saludables traíados con el ligando Flí3 fueron marcados con fago y aníicuerpo anfi-fago conjugado de fluorocromo. Los fagos filameníosos Scfv se incubaron con PBMC de los voluníarios saludables íraíados con el ligando Flt3. Los no enlazadores se eliminaron a través de lavados exíensivos. Los PBMCs se marcaron con aníicuerpo anti-BDCA3 y se purificaron a través de citometría de flujo. El fago se eluyó de la superficie de DC BDCA3+ DC a través de. choque ácido. Los enlazadores DC BDCA3+ se amplificaron en E. coli. La primera ronda del fago enlazador DC BDCA3+ se uíilizó en una segunda ronda de selección. 1F12 mosíró que específicamente se une a DC BDCA3 + . Los anticuerpos coníra CDIc, CD123, CD14 y BDCA3 después se agregaron. Los resulíados en la Figura 4 muesfran que 1F12 (fila ¡nferior) marca específicameníe DC BDCA3+ DC. La fila superior muestra la marcación de fondo sin fago filamentoso. 1F12 es uno del 4% de fagos derivados del método de fago de separación de célula compleía que es de especies enírelazadas, es decir, para ratón y ser humano. Scfv 1F12 ha estado demostrando que une DC BDCA3+ a través de citometría de flujo, histología e inmuno-precipitación. En los ratones, scfv 1F12 ha estado demostrando que específicamente se una a un subgrupo discreto de DC esplénico (DC CD8a + ) el cual se cree que juega un papel crítico en la activación de linfocitos T citotóxicos, como se describe en el Ejemplo 17.

Un fago scfv específico (1F12) se convirtió en una proíeína de fusión scfv-Fc. Al fusionar el scfv con el dominio Fc de IgG 1 humano utilizando técnicas bien conocidas en la técnica. La conversión del scfv a la proíeína de fusión scfv-Fc no afecía adversameníe la especificidad de la región de unión de scfv. (Como se muesíra en la Figura 5, observar que la proteína de fusión 1F12scfv-Fc se biotiñó para el análisis FACS). La secuencia para la región de cadena pesada variable se provee en SEC ID NO:12 y la región de cadena ligera variable se provee en SEC ID NO:13. 1F12 ha estado demosírando que específicamente une LDCAM (también conocida en la técnica como Igsf4, TSLC1, SynCAM y Necíina-de íipo-2). La scfv-Fc se infrodujo en un vecíor de expresión de mamífero y se produjo en células COS. La scfv-Fc de 1F12 mostró que inmunoprecipita a 100 KDa la glicoproteína de DC de raíón derivado de médula espinal (Ver Figura 7). La proíeína de 100KDa se confirmó como siendo LDCAM a través de espectromefría de masa. La proíeína de fusión LDCAM-Fc descrita en el Ejemplo 9 se utilizó en un ensayo de unión de gráfica de puntos para definitivamente mosírar que 1F12-Fc específicameníe se une a LDCAM. Brevemenfe, 2 ul de una solución de 1 mg/ml de LDCAM-Fc o RANK-Fc (conírol Fc no relacionado) se defecto en un filtro de niírocelulosa y se dejó secar. Después de bloquear duraníe 1 hora con una leche/BSA/PBS, se deíecíaron los siguientes reactivos en la membrana: 100 ng de anti-BDCA3-biotina mAb, 100 ng del anticuerpo 1F12scfv-Fc o IgG-biotina anti-humana (IgG anti-humana Fab'2 de raíón de Jackson Labs, Bar Harbor, ME). Después de agregar estreptococo-HRP, la marcación se reveló a través de substraío de peroxidasa (Kirkegaard Perry Laboratories, Gaithersburg, Maryland). Como se muestra en la Figura 8, el anticuerpo 1F12-scfv-Fc específicamente se une a LDCAM-Fc recombinante pero no a RANK-Fc no relacionado. El LDCAM de raíón y humano es casi idéntico, teniendo 98% de identidad al nivel de la proteína, lo cual explica la reactividad de las especies cruzadas, del aníicuerpo 1F12. El mAb coníra BDCA3 no se une significaíivameníe a LDCAM-Fc, de esta forma sugiriendo que el antígeno BDCA3 es diferente de LDCAM. Estos resultados muestran que el anticuerpo 1F12scfv-Fc (o proteína de fusión) específicamente se une a LDCAM.

EJEMPLO 19 LDCAM inhibe la Activación de Célula T Estos estudios muestran que LDCAM inhibe la activación de célula T. Se expusieron simultáneamente ratones (Blk-6) CD4+ y CD8+ a LDCAM-Fc enlazado en placa y uno de los siguientes esíímulos de acíivación de célula T: aníi-CD3 mAb, conA, PHA o conA +IL-2. Los sobrenadaníes del cultivo se ensayaron para la producción de INF-gama a través de células T, las cuales son un marcador de la activación de la célula T. Brevemente, los bazos se cosecharon de B6D2F1, se pulverizaron, las células de los glóbulos rojos de usaron y las células se coníaron. Las células CD8+ y CD4 + se purificaron utilizando perlas MACTM de anti-CDS de Miltenyi Bioíech (caí # 130-049-401) y aníi-CD4 (cat # 130-049-201) siguiendo el protocolo sugerido por el fabricante. Se cubrieron placas de 48 cavidades con ya sea LDCAM-Fc(5 ug/ml) o moléculas Fc FC P7.5 de control negativo (5 ug/ml) duraníe 2 horas a 37°C y se lavaron dos veces. También se incluyó una cavidad sin coníener la proteína Fc. Las cavidades apropiadas se cubrieron con anti-CD3 mAb durante 2 horas a 37°C y se lavaron dos veces. Las células se colocaron en placas a 1.25 x 106/ml en 1ml de medio (40% de IMDM + 40% Clicks + 10% de suero de bovino fetal + piruvato de sodio + aminoácidos no esenciales + 2Me + PSG). Se agregaron los mitógenos: conA (1 ug/ml), IL-2 (200 unidades/mi) o PHA (1%) a las cavidades apropiadas. Los sobrenadantes se empujaron en los días 1 y 5 y se ensayaron para IFN-gama utilizando un equipo elisa IFN-gama comercial. La Figura 9 muestra que las células T CD4+ se energizaron a través de LDCAM para la activación a través de anti CD3 mAb y conA (Figuras 9A y 9C, respectivameníe). Las Figuras 9B, 9D, 9F y 9H muesíran que las células T CD8+ se energizaron a través de LDCAM para la activación a través de anti-CD3 mAb, conA, PHA y conA + IL-2, respectivameníe. Esíos esíudios muesíran que LDCAM esíá iníeractuando con una molécula expresada en la superficie de las células T activadas en una naturaleza dependiente del coníacfo que previene o desesíimulan la activación de las células T a través de una variedad de estímulos. Estos estudios muestran que LDCAM es un ageníe regulador en írayectorias inflamatorias. Por consiguiente, LDCAM tiene aplicación terapéuíica como una composición farmacéuíica para prevenir la activación de células T y para el íraíamienío de enfermedades que involucran la activación de las células T, tal como en la enfermedad autoinmune, inflamación, írasplante, cáncer, infección y similares. Además, los agonistas y antagonistas de LDCAM, como se definieron anteriormente, pueden ser composiciones terapéuíicas para el íraíamienío de las enfermedades descrifas aquí.

EJEMPLO 19 CRTAM es un Cognado de LDCAM Estos estudios muesíran que CRTAM es un cognado o asociado de unión de LDCAM. El análisis FACS mosíró que LDCAM-Fc se unió a células T de CD8+ y a una extensión menor de células T de CD4+ (Figuras 10D y 10C, respectivameníe), mieníras que el aníicuerpo scfv-Fc de 1F12 (es decir el aníicuerpo anfi-LDCAM) no lo hace (las Figuras 10A y 10B son controles de isotipo). El análisis FACS adicional mostró que esas células T de CD8+ acíivadas en aníi-CD3 se unen a LDCAM-Fc a alíos niveles (Figura 11 A) y solamente un enlace marginal a través del anticuerpo scfv-Fc de 1F12 (Figure 11 B). En contraste LDCAM-Fc mostró un enlace marginal de LDCAM-Fc (Figura C) y la proíeína de fusión scfv-Fc de 1F12 (Figura 11D). Las células esplénicas CD8 + de ratones tratados con el ligando Flt3 mostraron un enlace heíerogéneo de ambas LDCAM-Fc y scfv-Fc de 1F12 (Figuras 11E y 11F, respectivamente). Tomados juntos, estos estudios muesíran que LDCAM se une a linfocitos T Citotóxicos acíivados (CTL). En conírasíe, la proíeína de fusión scfv-Fc de 1F12 falla en la marcación de esas células. Esíos resulíados demuesíran que una esírucíura coníador LDCAM o cognado esíá preseníe en la superficie de CTL activado. La expresión de la superficie de célula de la estructura del contador LDCAM demostró que temporalmente se expresa en la superficie de la célula de células T CD4+ y CD8+ activadas. El análisis FACS mosíró que la expresión de la superficie de la células de LDCAM-Fc que se enlaza a su cognado en células T de CD4+ se disminuye después de aproximadameníe 24 horas (Figuras 12C, 12F y 121). Iníeresaníemeníe, las células T CD8+ mosíraron un fueríe incremenío en la expresión de la superficie de célula del cognado LDCAM 24 horas después de la acíivación (Figura 12D) y una disminución progresiva de la expresión de la superficie de célula a las 48 y 72 horas después de la activación (Figuras 12G y 12J, respecíivameníe). La expresión de LDCAM en la superficie de la célula de las células T CD4+ y CD8+ fue mínima y no cambió a íravés del íiempo (Figuras 12B, 12E, 12H y 12K). El cognado de LDCAM se deíerminó como siendo CRTAM a través de inmunoprecipitación de los pares de enlace y llevando a cabo el análisis de especíromeíría de masas en las bandas aisladas. Scfv-Fc de 1F12 y LDCAM-Fc inmunoprecipiíaron proíeínas de pesos moleculares cercanos pero disíiníos. El CTL de raíón activado y DC derivado de médula espinal de raíón se bioíiñeron en la superficie y se Usaron con deíergeníe. Los lisaíos celulares se pre-alcararon con una maíriz de perlas de proíeína A. Scfv-Fc de 1F12 se agregó al lisaío celular DC derivado de médula espinal de raíón y LDCAM-Fc se agregó al lisaío celular CTL activado y después se uíilizaron para inmunoprecipifar sus objeíivos respectivos. La maíriz de perlas de Proteína A se agregó para empujar hacia fuera los complejos LDCAM-Fc y scfv-Fc 1F12 de los listaos. El MW aparente de las proteínas precipitadas se comparó en un gel de reducción mostrado en la Figura 13. La Figura 13A es la banda inmunoprecipitada a través de LDCAM-Fc de CTL activado. La Figura 13B es la banda inmunoprecipiíada a íravés de scfv-Fc 1F12 de DC derivado de médula espinal. Se obíuvieron resulíados similares con DC CD8+ de células esplénicas. La banda de la Figura 13A exíirpó y se analizó a íravés de espectrometría de masa. Esos resultados se presenían a coníinuación y confirman que CRTAM es un cognado de LDCAM Configuración uíilizada péptido MW: carga-estado: error de péptido: 0.75 u error de fragmenío: 0.75 u ancho del pico: 1.0 u coríe del e-valor: 1. OE-15 recalibrar: no pyrolug N-ferminal considerado: si oxidación Meí considerada (2 máximo): si cisíeina fija: carbamidomeíii (160.031) masa de cisíeina variable (2 máx.): Bases de daíos investigadas: nr_aa, patente_aa, ms_basura_aa, celera_humano_aa, celera ratón aa 2+ 2+ b b b-H2= y y E 0 — — 13 S 1 130.05 65.53 11204 1411.67 706.34 12 E 2 217.08 109.04 199.07 1324.64 662.82 11 1 3 346.13 173.56 328.11 1195.60 598.30 10 S 4 459.21 230.10 441.19 1082.51 541.76 9 E 5 546.24 273.62 528.23 995.48 498.24 8 Q 6 675.28 338.14 657.27 866.44 433.72 7 A 7 803.34 402.17 785.33 738.38 369.69 6 L 8 874.38 437.69 856.36 667.34 334.17 5 E 9 987.46 494.23 969.45 554.26 277.63 4 S 10 1116.51 558.75 1098.49 425.21 213.11 3 Y 11 1203.54 602.27 1185.52 338.18 169.59 2 R 12 1366.60 683.8 1348.59 175.12 88.06 1 MAPAENLACE CARGA E-VALOR INICIAR - TERMINAR SECUENCIA BUSCAR BD DESCRIPCIÓN PROTEÍNA MAP (01) 8.1E-26 +2 319 - 331 ESEISEQALESYR Nr_aa ref|NP06_2338. 1 ciíoíóxico y molécula de célula T; class I- Molécula asociada con célula T restringida [Mus musculus] gi ¡3930161 |gb|AAC80266.11 clase I MHC-molécula asociada con célula T restringida [Mus musculus] MAPA (01) 8.1E-26 +2 319 - 331 ESEISEQALESYR paíeníe_aa gsp |AAW04405 CRTAM de raíón MAPA (01) 8.1E-26 +2 145-157 ESEISEQALESYR nr_aa dbj | BAB24204.2 producío de proíeína no sin nombre [Mus musculus] MAPA(01) 8.1E-26 +2 331-343 ESEISEQALESYR nr_aa ref|XP_236103.1 similar a la molécula de célula T citotóxica y reguladora; clase I-molécula asociada con célula T restringida [Mus musculus] [Ratíus norvegicus] MAPA(01) 8.1E-26 +2 319 - 331 ESEISEQALESYR paíeníe_aa gb/AAC10711.1 secuencia de 4 de patente de E.U.A. 5686257 MAPA(01) 8.1E-26 +2 319-331 ESEISEQALESYR Celera_ratón_aa era | MCP17461.1/ I en = 388/profeína_u id = 197000028318745 /ga_nombre=GA_x6K02T2PVTD/ga_uid = 232000009795437/franscri pee ¡ón_nombre = mCT4204.1 /íranscripción_uid = 110 00066470850/cg_nombre = mCG5069.1/iniciar_ codón = 0 /class = Oíio En un formaío ELISA, la Figura 14 muestra que LDCAM específicamente se une a CRTAM- Fc, pero no a la proíeína Necll o a IgG de control. En un grupo de experimentos separados, la línea de célula de íioma de raíón EL4 (La Colección de Culíivo de Tipo Americano, ATCCTIB-39) se fransdujeron con vectores lentivirales que codifican LDCAM humano (Figura 15A) o Necll humano (Figura 15B). Las células íransducidas después se enriquecieron a íravés de clasificación de célula magnética utilizando el maxicuerpo 1F12 o un anticuerpo monoclonal anti-Necll, respectivamente. Las células transducidas enriquecidas se examinaron con huCRTAM-Fc (línea gruesa), 1F12scfv-Fc (línea delgada) o el anticuerpo anti-Necll (línea puníeada). Las líneas veríicales represenían el límite para la unión no específica según medida por anticuerpos comparados de isoíipo Fc no relacionados. Se demosíró que CRTAM enfrelazado regula de manera descendente ia secreción de citocina (IFN?) a través de linfocitos T CD8+ de ratón activados (Figura 16). Una placa ELISA estándar se recubrió con ya sea el anticuerpo monoclonal anti-CD3 y/o la proteína LDCAM-Fc. Las células T CD8+ activadas se aislaron utilizando procedimientos estándares y se agregaron a la cavidad(es) en la presencia de ya sea un control de isotipo IgGI o CRTAM-Fc soluble. Se vio una disminución dramática en la secreción de IFN? a través de Células T cuando las células se enírelazaron a íravés del enlace LDCAM-Fc en la placa. Inversamente, se vio un incremento en la secreción de lFN? cuando se agregó CRTAM-Fc al ensayo como un competidor eníre el enlace LDCAM-Fc en la placa y CRTAM expresado en las células. Estos estudios además demuestran que la consecuencia biológica del enlace LDCAM y el entrelazamienío de CRTAM es reducir la acíivación, de la célula T, la proliferación y la liberación de ciíocinas pro-inflamaíorios. Es decir, un agonisía LDCAM, íal como, pero no limitándose a la proteína de fusión LDCAM-Fc o la forma multimerizada de LDCAM, así como un anticuerpo anti-CRTAM que son capaces de enírelazar CRTAM en la superficie de las células sería útil en la activación de la reducción de las células T, proliferación y liberación de las citocinas pro-inflamatorias Estos estudios muestran que LDCAM esíá iníeracíuando con CRTAM expresado en la superficie de las células T activadas en una naturaleza dependiente del contacío. Los esíudios in vitro descrifos en el Ejemplo 18 clarameníe demuesíran que la inferacción de LDCAM y CRTAM previene o desestimula la activación de las células T a través de una variedad de esíímulos. Esíos esíudios demuesíran que LDCAM y su cognado CRTAM esfán involucrados en las írayectorias inflamatorias. Por consiguiente, LDCAM tiene una aplicación íerapéutica como una composición farmacéutica para prevenir la acíivación de las células T y para el íraíamienfo de enfermedades que involucran la acíivación de la célula T, íal como la enfermedad auíoinmune, inflamación, transplante, cáncer, infección y similares. Además, los agonisfas y antagonistas de la interacción LDCAM/CRTAM, como se define a lo largo de la especificación, puede íener un valor íerapéuíico como composiciones íerapéuficas para ei íratamiento de las enfermedades descriías aquí.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un agente de unión específico de LDCAM aislado, que comprende la secuencia de aminoácido de cadena pesada variable de SEC ID NO:12.

2. Un agente de unión específico de LDCAM aislado, que comprende la secuencia de aminoácido de cadena ligera variable de SEC ID NO:13.

3. Un ageníe de unión específico de LDCAM aislado, que comprende las secuencias de aminoácido de cadena pesada variable de SEC ID NO:12 y la cadena ligera variable SEC ID NO:13.

4. Una composición farmacéuíica, que comprende cualquiera de los ageníes de unión de acuerdo con las reivindicaciones 1-3 y un portador, diluyente o excipiente fisiológicamente aceptable.

5. Un método para aníagonizar la unión de LDCAM y CRTAM, que comprende exponer las células que expresan LDCAM o las células que expresan CRTAM a un polipépíido LDCAM soluble, de íal forma que el polipépíido LDCAM soluble bloquea la unión entre LDCAM y CRTAM.

6. Un método para aníagonizar la unión de LDCAM y CRTAM, que comprende exponer las células que expresan LDCAM a un aníicuerpo específico de LDCAM, de tal forma que el anticuerpo específico LDCAM bloquea la unión entre LDCAM y CRTAM.

7. Un método para agonizar los efectos biológicos de la unión de LDCAM a CRTAM, que comprende exponer las células que expresan CRTAM a un anticuerpo específico de CRTAM, de tal forma que el anticuerpo específico CRTAM se une a CRTAM y activa el receptor CRTAM.

8. Un método para antagonizar la unión de LDCAM y CRTAM, que comprende exponer las células que expresan LDCAM a un anticuerpo específico de LDCAM, de tal forma que el anticuerpo específico LDCAM bloquea la unión entre LDCAM y CRTAM, en donde el anticuerpo específico de LDCAM es el aníicuerpo de acuerdo con la reivindicación 3.

9. Una población de células dendríticas humanas aisladas, que comprenden un fenoíipo de célula dendrííica CD11c+, CD13 + , BDCA3 + , y LDCAM + .

10. Un méíodo para generar la población de la células dendrííicas de acuerdo con la reivindicación 9 in vivo, que comprende la adminisíración de una cantidad efectiva de ligando Flt3 a un sujeío.

11. Un méíodo para generar la población de las células dendrííicas de acuerdo con la reivindicación 7 ex vivo, que comprende la adminisíración de una cantidad efectiva de ligando Flt3 a un cultivo de células de fallo hemaíopoyéíicas y células progeniíoras.

12. Un méíodo para aislar la población de las células dendríticas de acuerdo con la reivindicación 7, que comprende: (a) obíener células dendrííicas de un sujeío; (b) exponer las células dendrííicas a un aníicuerpo específico LDCAM, en donde el anticuerpo se une a LDCAM sobre la superficie de las células dendríticas seleccionadas; y (c) aislar las células dendrííicas que íienen el aníicuerpo específico LDCAM enlazado a y a íravés de la capíura de células medianíe el aníicuerpo específico LDCAM.

13. Un méíodo para exponer un sujeío a un aníígeno, que comprende: (a) aislar células dendrííicas que comprenden un fenotipo de células dendríticas CD11c + , CD13 + , BDCA3 + , y LDCAM+ del sujeto; (b) exponer las células dendríticas de (a) a un antígeno ex vivo; y (c) administrar las células dendríticas de (b) de nuevo al sujeío.

14. El méíodo de acuerdo con la reivindicación 13, en donde el antígeno es un antígeno de cáncer.

15. El método de acuerdo con la reivindicación 14, en donde el aníígeno de cáncer es un polipépíido soluble.

16. El méíodo de acuerdo con la reivindicación 14, en donde el aníígeno de cáncer es un pépíido.

17. El méíodo de acuerdo con la reivindicación 14, en donde el aníígeno de cáncer esfá en la forma de una célula de cáncer apopíóíica derivada del sujeío.

18. El método de acuerdo con la reivindicación 13, en donde el antígeno es un aníígeno viral.

19. El método de acuerdo con la reivindicación 13, en donde el aníígeno es un antígeno bacterial.

20. El método de acuerdo con la reivindicación 13, en donde el aníígeno es de un organismo unicelular.

21. Un méíodo para identificar un agonista o antagonisía LDCAM, que comprende: (a) combinar un polipépíido LDCAM aislado con un compuesío de prueba; (b) agregar un polipépfido CRTAM aislado; y (c) deíerminar la unión relaíiva eníre polipépfido LDCAM y el polipéptido CRTAM en la presencia y ausencia del compuesto -de prueba.

22. Un méíodo para identificar un aníagonisía o agonisía LDCAM, que comprende: (a) combinar una célula que expresa un polipéptido LDCAM con un compuesto de prueba; (b) agregar un polipépíido CRTAM aislado; y (c) deíerminar la unión relaíiva eníre la célula que expresa un polipéptido LDCAM y el polipépíido CRTAM en presencia y ausencia del compuesío de prueba.

23. Un méíodo para ideníificar un antagonista o agonista LDCAM, que comprende: (a) combinar una célula que expresa un polipéptido LDCAM con un compuesío de prueba; (b) agregar una célula que expresa el polipépíido CRTAM; y (c) deíerminar la -unión relaíiva eníre la célula que expresa un polipéptido LDCAM y la célula que expresa eí polipéptido CRTAM en presencia y ausencia del compuesto de prueba.

24. Un méíodo para ideníificar un antagonista o agonista LDCAM, que comprende: (a) combinar un polipéptido LDCAM aislado con un compuesío de prueba; (b) agregar una célula que expresa el polipépfido CRTAM; y (c) deíerminar la unión relaíiva eníre el polipéptido LDCAM y la célula que expresa el polipéptido CRTAM en presencia y ausencia del compuesío de prueba.

25. Un méíodo para ideníificar un agonista LDCAM, que comprende: (a) combinar un polipéptido CRTAM aislado con un compuesto de prueba; y (b) determinar la unión relativa entre el compuesío de prueba y el polípéptido CRTAM.

26. Un método para ideníificar un agonisía LDCAM, que comprende: (a) combinar una célula que expresa un polipéptido CRTAM; y (b) determinar la unión relativa o efecíos biológicos eníre la célula que expresa un polipépíido CRTAM y el compuesío de prueba.

27. Un antagonista LDCAM, que comprende un polipéptido LDCAM soluble, en donde el polipéptido LDCAM une pero no acíiva el recepíor CRTAM.

28. El aníagonisía LDCAM de acuerdo con la reivindicación 27, que comprende los aminoácidos 39-374 de SEC ID NO:2.

29. El antagonista LDCAM de acuerdo con la reivindicación 28, que comprende los aminoácidos 39-374 de SEC ID NO:2 que une un polipéptido CRTAM.

30. Un agonisía LDCAM, que comprende una proteína de fusión LDCAM-Fc que une, entrelaza y activa el receptor CRTAM en la superficie de células T.

31. Un agonista LDCAM, que comprende un anticuerpo que une y acíiva un recepíor CRTAM en la superficie de células T.

32. Un méfodo para disminuir la producción de ciíocina proinflamatoria en un sujeto en la necesidad de la misma, que comprende administrar un agonista LDCAM.

33. El método de acuerdo con la reivindicación 33, en donde la ciíocina proinflamatoria se selecciona de la lista que consiste de Interferón-gama e IL-2.

34. El método de acuerdo con la reivindicación 33, en donde el agonista LDCAM comprende los aminoácidos 39-374 de SEC ID NO:2 enlazados a un dominio Fc.