IMPLANTE INYECTABLE DE GLOBINA INSOLUBLE
DESCRIPCION DE LA INVENCION La presente invención tiene por objeto proporcionar preparaciones de globina utilizados para una administración para el hombre. Estas preparaciones pueden presentarse, principalmente, bajo la forma de pastas inyectables o de materiales sólidos implantables, o de implantes. Ya se han descrito numerosas aplicaciones médicas del colágeno, que este está bajo la forma de pastas, por ejemplo para el relleno, de formulaciones de fluidos o sólidas, como películas o compresas, o bajo la forma de implantes diversos . De hecho, solo el colágeno animal generalmente es utilizado. La preparación de colágeno humano, el cual será preferible al colágeno animal, se contempla a partir de tejidos cutáneos humanos. Pero se vuelve muy difícil porgue la extracción de tejidos humanos a partir de cadáveres plantea problemas éticos considerables y necesita de pruebas costosas para eliminar los riesgos de transmisión de enfermedades infecciosas , virales u otras . La preparación de colágeno humano a partir de placentas es costosa, compleja y difícil de organizar. La preparación de colágeno humano por los métodos modernos de recombinación genética o de cultivos celulares también es muy costosa, lo que genera ciertamente el
Ref.168028 desarrollo comercial de este producto. La globina es la proteína constitutiva de la hemoglobina la cual, por sí misma, contiene 4 cadenas peptídicas (2 cadenas OÍ y 2 cadenas ß) cada una asociada a un hemo. El hemo está constituido de una estructura tetrapirol que contiene 1 átomo de hierro cargado positivamente. Existen 4 hemos por molécula, responsables de la coloración roja de la hemoglobina. Los procedimientos de preparación de la globina están contenidos desde hace mucho tiempo y se han desarrollado en el objetivo de aplicación alimentaria o para la preparación de soluciones farmacéuticas inyectables . Contrariamente a la hemoglobina la cual es perfectamente soluble a pH fisiológico, la globina es remarcablemente insoluble en las mismas condiciones. El carácter insoluble de la globina en las condiciones fisiológicas ha impedido hasta ahora el desarrollo de sus aplicaciones farmacéuticas. Es por eso que la mayor parte de los ensayos han buscado preparar derivados solubles de la globina a pH fisiológico, principalmente por succinilación con la ayuda del anhídrido succínico o por acetilación con la ayuda del anhídrido acético, o por hidrólisis de funciones amidas a pH alcalino, lo que aumenta la carga negativa de la globina y disminuye su pH isoeléctrico. Un producto inyectable que asocia una preparación soluble de globina acida con la insulina ha sido utilizada, patentada y comercializada: REINER (1939); REINER et al. (1939). El mismo permite después de la inyección, una liberación progresiva de la insulina a partir de este complejo: RABINOWITCH et al. (1947); BERG et al. (1953) . La globina no es el elemento activo, ni el elemento principal de este producto. La presente invención se propone proporcionar nuevos materiales y preparaciones inyectables o implantes en el organismo, cuya globina es el elemento activo principal y no presenta los inconvenientes de materiales y formulaciones conocidas, por ejemplo de colágeno u otros. La invención tiene por objeto una preparación pastosa o sólida de globina insoluble a pH fisiológica, biocompatible, estéril y, de preferencia, biodegradable, principalmente bajo la forma de pasta inyectable, de materiales sólidos, por ejemplo de granulos, películas, o implantes insolubles . La presente invención propone conservar el -carácter insoluble, natural a pH neutro, de la globina, por ejemplo en recolección por centrifugación un precipitado proteico de globina formado por suspensión de este precipitado en un vehículo farmacéutico aceptable, por ejemplo una solución acuosa fisiológica de tipo PBS, que contiene 9g/l de NaCl y tamponada a pH neutro entre 6.8 y 7.5. La pasta así formada es inyectable después de la homogenización con la ayuda de una fina aguja. Esta pasta puede ser preparada en la presencia de agentes viscosos y lubricantes como soluciones de triglicéridos, de polietilenglicol , hialuronato, principalmente de sodio, ácido hialurónico u otros polisacáridos o mucopolisacáridos o celulosa oxidada. Tal aditivo facilita el paso del precipitado pastoso a través de agujas más finas (diámetro 30 g) y su inyección como implante intradérmico. La originalidad y el interés de este producto residen en el hecho que se trata de una pasta proteica, perfectamente biocompatible con los tejidos circundantes en los cuales la misma es inyectada. Esta proteina no ha sufrido ninguna alteración ni modificación química, la misma es naturalmente insoluble ya que se encuentra en un ambiente fisiológico. Una pasta proteica de globina humana se puede utilizar en el hombre para rellenar cavidades , arrugas , cicatrices cutáneas o aumentar el volumen de ciertos tejidos (esfínteres urinarios, digestivos, cuerdas vocales, etc.). Está pasta se puede utilizar para rellenar la falta -de hueso o de cartílago y para facilitar la cicatrización. Las partículas de globina insoluble también se pueden utilizar en cultivos de^ células animales o humanas . Las células de carga eléctrica negativa se fijan a la superficie de partículas de globina cargadas positivamente y se multiplican en su superficie. La degradación progresiva del soporte de globina, al contacto de células que la digieren progresivamente, puede proporcionar en la mayoría de casos un medio de nutrición de células complementarias o alternativas a los medios de cultivo líquidos utilizados hasta aquí . Las aplicaciones de relleno permitidas por esta pasta de globina son numerosas e inesperadas para esta proteína . La globina humana homologa es preferible y permite evitar toda reacción inmunológica del paciente a tratar, durante o después de la inyección. Este producto representa una ventaja importante con respecto al colágeno el cual hasta ahora es preparado a partir de pieles de animales (becerros, puercos, etc.) y el cual necesita un cierto número de precauciones y condiciones para evitar las reacciones inmunológicas en los pacientes . • Se necesitan hacer pruebas a cada paciente para una eventual alergia al colágeno animal. • Imposibilidad de tratar las personas alérgicas. La globina permanece sin embargo, soluble a pH ácidos o básicos y en estas condiciones se puede filtrar estérilmente sobre membranas porosas . Para concentraciones apropiadas de 20 a 300 mg/ml, tales soluciones pueden ser tratadas como soluciones de proteínas y permiten realizar productos tales como: esponjas, películas, granulos, utilizando o combinando las técnicas de secado, liofilización, reticulación, precipitación. Algunos ejemplos se desarrollan posteriormente . La globina es fácil de purificar a partir de glóbulos rojos que provienen de sangre animal o humana. Los glóbulos rojos humanos están disponibles en cantidad suficiente a partir de donaciones prescritas que quedan en almacenamiento en los centros de transfusión sanguínea y para los cuales se han realizado todas las pruebas previas sanitarias al momento de la toma de muestras . La preparación de globina insoluble, inyectable o de otros biomateriales a base de globina representa así nuevas aplicaciones biomédicas que permiten valorar la sangre no utilizada o las donaciones de sangre prescritas y evitar o disminuir su destrucción. La puesta en práctica de la invención es posible también a partir de una toma de muestra de sangre del paciente a tratar dé" aproximadamente 5 a 100 mi, y su transformación en globina autóloga con los mismos métodos que para grandes volúmenes, luego la inyección de la pasta obtenida para la corrección "de ¦ arrugas del mismo paciente o de otras aplicaciones tales como la cicatrización de heridas crónicas. El número de j eringas preparadas a partir de una toma de muestra del paciente puede ser importante y permite el tratamiento del paciente durante varios años . También la placenta humana la cual es expulsada desde el parto contiene sangre la cual es generalmente destruida por incineración, pero puede servir también a la invención. Las bolsas de sangre de donadores son controladas oficialmente por los organismos de transfusión sanguínea, gracias a los exámenes bioquímicos, bacteriológicos, serológicos y pruebas de tamizado de diferentes virus y otros agentes infecciosos. En el caso de sangre placentaria, será evidentemente necesario realizar los mismos exámenes sobre muestras de sangre del cordón umbilical o de la madre antes de poder colectar, conservar y extraer la sangre de esta materia prima. Para la sangre autóloga, las pruebas a efectuar pueden ser simplificadas . La realización de la invención necesita primero reunir y purificar los glóbulos rojos en estas muestras de sangre, o líquidos sanguíneos, por operaciones simples y ya conocidas. Los glóbulos rojos son recuperados por centrifugación a baja velocidad. El sobrenadante plasmático se separa y remplaza por un líquido salino fisiológico de tipo PBS; que contiene 9g/l de NaCl y tamponado a pH neutro. Después de varios lavados (3 a 5) , la suspensión de glóbulos rojos es así eliminada de proteínas del plasma. El residuo de glóbulos rojos purificados se adiciona a 1 ó 2 volúmenes de agua destilada para realizar un choque osmótico que arrastra la lisis de membranas de glóbulos rojos y libera la hemoglobina en solución concentrada y purificada. Una etapa de centrifugación de alta velocidad (10 a 20 000 t/min) permite eliminar los residuos membranarios y celulares en el residuo. Una etapa final de filtración del sobrenadante sobre la membrana de porosidad de 0.2 mieras permite preparar una solución de hemoglobina purificada y estéril, desprovista de partículas y derivados de origen de te ido, celular, o membranario. El desdoblamiento de Hemo-Globina a pH ácido se ha descrito en la presencia de alcohol por SCHULZ desde 1898. ANSON y MIRSKY en 1930 luego ROSSI-FA ELLI et col., en 1958 utilizan acetona en presencia de ácido a 0°C. TEALE (1957) prefiere la utilización de la metil etil cetona en lugar de acetona. AUTIO et col. (1984) separan la globina a pH ácido gracias a la absorción y la precipitación del hemo con la carboximetilcelulosa soluble. La globina así preparada es soluble a pH ácido o alcalino pero se vuelve insoluble desde que el pH de la solución acuosa es neutralizada entre pH 6 y 8. Los ensayos de solubilización a pH neutro se han realizado por STRUMIA et col. En 1951 y 1952 por un tratamiento alcalino prolongado el cual lleva una desaminación parcial de la globina al nivel de residuos asparagina y glutamina transformados respectivamente en ácido aspártico y ácido glutámico (VARS 1952) . Otros ensayos de solubilización se han realizado por VOLCKMANN en 1988 por succinilación.
El carácter insoluble en medio fisiológico explica la persistencia de la globina después de la implantación de tejido, lo que la vuelve también resistente a una degradación enzimática, sobretodo si la cantidad inyectada es importante, lo que es el caso en las aplicaciones de relleno o de aumento de tejido . Por el contrario, la mayor parte de otras proteínas no son precipitables más que por concentraciones elevadas de sales o de alcohol, lo que vuelve sus precipitados no biocompatibles y no utilizables por inyecciones intratisulares . Además, tales implantes desaparecerán muy rápido por difusión de agentes de precipitación y disolución progresiva del precipitado al contacto del medio fisiológico de tej idos . La verificación del interés de la invención se puede realizar fácilmente a partir de una preparación de globina de conejo. La pasta de globina precipitada, fisiológica, así preparada se puede inyectar por vía subcutánea en diferentes lugares sobre el lomo o la pared del conejo.' Es fácil verificar la inocuidad por ausencia de eritema local. La persistencia del producto bajo la piel se puede observar por palpación en función del tiempo. La ausencia de poder antigénico del producto se puede verificar por inmunización de conejos con o sin adyuvante de Preud por vía subcutánea e intramuscular. Las tomas de muestras de sangre -efectuadas después de la inmunización permiten verificar la ausencia de anticuerpos antiglobina o antihemoglobina por las pruebas habituales de control . Ejemplos de realización de productos según la invención. Ejemplo 1: Preparación de globina de conejo Cinco conejos anestesiados se desangraron por punción cardiaca. La sangre se recuperó en presencia de heparina o en presencia de citrato de sodio para evitar su coagulación. Se obtuvieron así 210 mi de sangre que se centrifugaron durante 30 minutos a 2500 t/min. El sobrenadante que contiene el plasma se recuperó con una pipeta y el residuo se lavó 5 veces por 3 volúmenes de tampón PBS, que contiene 9 g/1 de NaCl y se trató con tampón a pH 7.2. El residuo final, lavado, se adicionó, bajo agitación, de un volumen igual de agua destilada para someter a lisis los eritrocitos . La suspensión final se centrifugó a 12 000 t/min para eliminar residuos celulares y de membrana. El sobrenadante se filtró sobre membrana de acetato de celulosa de porosidad 0.22 mieras. Se obtuvieron 82 mi que contuvieron 97 g/1 de hemoglobina . La hemoglobina se transformó en globina según la técnica descrita por TAYOT y VERON (1983) . Esta solución de hemoglobina se vertió bajo agitación en 275 mi de etanol 96% que contiene 1 mi de HC1 concentrado. El pH se ajustó a 3. La concentración final fue de 74% de etanol y de 22 g/1 de hemoglobina a H ácido. Se adicionaron 3 g de carbón activo L4S de la marca CECA bajo agitación vigorosa durante 15 horas a 4°C. La suspensión se centrifugó a 15 000 t/min durante 30 minutos para eliminar el carbón bajo la forma de residuo. El sobrenadante que contiene la globina ácida decolorada se filtró sobre una serie de membranas porosas hasta la porosidad la más reducida (0.2 mieras) para eliminar las partículas finas de carbón. El filtrado se diluyó por un volumen igual de agua destilada, el pH se ajustó a 7.4 por adición de NaOH y la globina se precipitó masivamente. Después de 15 horas, el precipitado de globina se recuperó por centrifugación, luego se lavó 2 veces por 3 volúmenes de solución fisiológica PBS, que contiene 9 g/1 de NaCl y se trató con tampón a pH 7.4. Se recolectaron 58.2 g de precipitado de globina a pH 7.4. El precipitado se homogenizó por trasferencias sucesivas entre 2 jeringas de volumen 5 mi unidas por un conector de diámetro interior de 1 a 0.2 mm, apoyándose sucesivamente sobre el pistón de cada jeringa- para hacer pasar el precipitado en la otra eringa. Finalmente, el precipitado homogenizado se repartió en jeringas de 1 mi. Es posible expulsar la pasta de globina precipitada a partir de la jeringa, a través de agujas finas de diámetro 24 o 27g. la concentración de globina en la pasta se puede ¦ ajustar a valores comprendidos entre 30 y 150 mg/g.
Ejemplo 2: Preparación de globina humana Se centrifugaron 200 mi de sangre humana prescrita, prelavada sobre citrato de sodio durante 30 min a 2500 t/min. El sobrenadante que contiene el plasma se prelavó con una pipeta aspirando también la capa celular blanquecina superficial que corresponde a leucocitos. El residuo de glóbulos rojos se lavó 5 veces con 3 volúmenes de solución fisiológica PBS, que contiene 9 g/1 de NaCl y se trató con tampón a pH 7.2 por centrifugaciones sucesivas. El residuo final se adicionó de 2 volúmenes de agua destilada para someter a lisis los eritrocitos. La suspensión tratada con hemolisis se clarificó por centrifugación durante 30 min a 12 000 t/min y se filtró sobre la membrana de porosidad 0.2 mieras. Se obtuvieron 210 mi que contienen 52 g/1 de hemoglobina los cuales se conservaron a 4°C. Un volumen igual de 210 mi de HCl 0.1 N a 4°C se adicionó, luego el conjunto se vertió en 4 1 de acetona, que contiene 40 mi de HCl 1N. La suspensión se agitó vigorosamente y se dejó reposar durante 1 hora a temperatura ambiente, bajo una campana química. El hemo disuelto en acetona se eliminó por filtración sobre toalla porosa y el precipitado de globina se recuperó, se lavó en acetona acida y se secó bajo corriente de aire . En variación, diversos ácidos minerales (sulfúrico, fosfórico...) o carboxílieos, tales como ácido acético, ácido oxálico, o ácido cítrico por ejemplo, se pueden utilizar en lugar del ácido clorhídrico para acidificar la solución de hemoglobina antes de su decoloración. Otra variante de este procedimiento consiste en precipitar la solución ácida de hemoglobina antes de su decoloración. La precipitación se puede realizar por adición de NaCl a una concentración de 40 a 60 g/1. El precipitado de hemoglobina ácida se decoloró luego por suspensión en un volumen suficiente de etanol o/y acetona. El pigmento pasa en solución en el etanol o/y acetona; la globina permaneció bajo la forma precipitada y se pudo recolectar por filtración sobre tela porosa. Gracias a la eliminación de toda fase acuosa, esta variante permite reducir el volumen necesario de etanol o/y acetona de un factor al menos igual a 5. La globina se puso en solución acuosa a pH comprendido entre 2 y 3. La solución acuosa de globina ácida se filtró estérilmente sobre membrana de porosidad 0.2 mieras, luego se precipitó por neutralización del pH por adición de NaOH hasta pH 7.4. Las jeringas de pasta de globina, precipitadas a pH neutro, pueden ser preparadas como en el ejemplo precedente. La operación de neutralización de la solución de globina ácida se puede efectuar adicionando hialuronato de sodio a pH alcalino. En este caso se formó una pasta de globina insoluble compleja y se impregnó por el hialuronato, que aporta una función lubricante la cual mejora el carácter inyectable a través de agujas muy finas (diámetro 30 g) . Ejemplo 3: Otra preparación de globina humana Se realizó el procedimiento del ejemplo 1 a partir de residuo globular controlado y prescrito obtenido del centro de transfusión sanguínea. Se obtuvieron jeringas que contienen una pasta de globina humana, precipitada, biocompatible e implantable por inyección. Ejemplo 4: Preparación de globina humana que ha sufrido un tratamiento alcalino por la sosa de 0.1 o 1 durante 1 hora a 20°C Se realizó el procedimiento del ejemplo 1 ó 2 hasta la obtención del precipitado de globina a pH 7.4, antes de los lavados. Este precipitado se disolvió, de nuevo, en 3 volúmenes de sosa NaOH 0.1 M a 1M a 20°C durante 1 hora, bajo agitación. La solución se neutralizó después por adición de un volumen igual de HC1 de la misma molaridad y el pH de la suspensión se ajustó entre 7 y 7.4. El precipitado de globina se recolectó entonces por centrifugación, luego se lavó en solución fisiológica PBS como en los ej emplos precedentes . La pasta de globina precipitada, se puede adicionar con ácido hialurónico, o con otros productos viscosos y lubricantes biocompatibles : triglicéridos , polietilenglicol, celulosa oxidada, quitosán, etc., se repartió en jeringas y se verificó de nuevo el carácter inyectable del producto obtenido a través de agujas muy finas para uso intradérmico . Este tratamiento alcalino de la globina permite mejorar las garantías de seguridad sanitaria del producto sin modificar de manera significativa el carácter insoluble de la globina a pH neutro. Ejemplo 5: Preparación de una pasta de globina precipitada y reticulada por el glutaraldehído. Este tratamiento es posible para aumentar el tiempo de resorción del implante. El precipitado final de globina se puso en suspensión a 2% en PBS. El glutaraldehído se adicionó bajo agitación a una concentración de 1 mg/g de precipitado. Después de la incubación por 1 hora a 20°C, el precipitado de globina se lavó y puso en jeringa como en los ejemplos precedentes . Otros agentes de reticulación como dialdehídos o polialdehídos se pueden utilizar, principalmente polisacáridos oxidados por ácido periódico tal como el dextrano oxidado, almidón oxidado, o ácido hialurónico oxidado. Ejemplo 6: Preparación de jeringas de pasta de globina precipitada estéril Para preparar jeringas . estériles, es necesario trabajar en condiciones asépticas al mismo tiempo que la filtración esterilizante de la solución de globina acida sobre membrana de porosidad 0.2 mieras. Esto se puede hacer bajo campana a flujo laminar en una zona estéril de clase 100 o 1000, o con un recinto estéril, accesible del exterior por guantes suaves de látex. Las operaciones de precipitación, decantación, o centrifugación del precipitado deben efectuarse en recipientes estériles y envasados bajo película protectora. Otro método consiste en repartir una solución acida de globina soluble, filtrada estérilmente en una primera jeringa y una segunda solución alcalina, filtrada estérilmente en una segunda jeringa. El pH de cada jeringa se ajustó de manera que su mezcla posterior esté a pH neutro. La conexión de estas dos jeringas, gracias a un conector estéril permite realizar una mezcla estéril, homogénea, de pH neutro, por transferencias sucesivas de una jeringa en otra. Un precipitado estéril se obtuvo por precipitación espontánea de la globina. La suspensión obtenida se puede concentrar por extrusión a través de finas agujas las cuales no dejan pasar más que la fase acuosa. La ' adición opcional de hialuronato de sodio o de cualquier otro agente viscoso y lubricante en la jeringa de globina concentrada permite incorporarlo en la globina final. En variación, es posible incorporar también un agente de ' reticulación,' . al momento del mezclado de dos jeringas iniciales, para alargar el tiempo de resorción in vivo de la globina. Ejemplo 7: Esterilización final de jeringas de pasta de globina precipitada - Una esterilización de jeringas preparadas de acuerdo con cualquiera de los ejemplos precedentes, se puede realizar por irradiación a una dosis comprendida entre 5 y 30 kilogray. Las diversas preparaciones de globina son insolubles antes como después de su esterilización por irradiación. En los dos casos, la globina insoluble a pH neutro se vuelve soluble si se opera una acidificación a pH 3 por cualquier solución acuosa ácida. Ejemplo 8: Realización de un gel o de una película insoluble a partir de globina soluble no modificada. Una solución de globina soluble se realizó disolviendo el polvo acetónico de globina a pH 3, a una concentración de 20 a 120 mg/ml en solución acuosa. Esta solución se filtró estérilmente sobre membrana de porosidad 0.2 µ, luego se ajustó a pH 5 por adición de sosa estéril NaOH 1 N bajo agitación. La mezcla se adicionó de almidón oxidado a pH 3.5, o de~ otro aldehido, o polialdehído reticulante, que contiene al menos 5 átomos de carbono" por molécula, a una concentración de 0.5% bajo agitación durante 5 min. La mezcla estéril se vació sobre una superficie plana para obtener un espesor de 1 a 3 mm de líquido, a una temperatura de 20 a 37°C, bajo flujo laminar. El producto líquido se gelificó progresivamente gracias a la reticulación de cadenas de globina inducida por almidón oxidado, luego se deshidrató bajo la corriente de aire, si se desea obtener una película. La película final de espesor comprendido entre 20 y 200 µ, de acuerdo con la concentración inicial de materia, se puede esterilizar por irradiación beta o gamma o por óxido de etileno. Los agentes de formación de película bien conocidos se pueden adicionar tales como colágeno, gelatina, ácido hialurónico, celulosa oxidada u otros polisacáridos o mucopolisacáridos, el polietilenglicol, glicerol etc. Un aditivo permite dar la flexibilidad y/o la resistencia a la película. Tal película se puede utilizar solo para proteger una herida cutánea o quirúrgica, favorecer la cicatrización, o se puede asociar a diversas prótesis (prótesis vascular, mallado de refuerzo, matrices porosas) para volverlos impermeables, o mejorar su biocompatibilidad, o conferir propiedades antiadherentes o un carácter adhesivo, o acelerar la colonización celular de estas prótesis, según técnicas conocidas y ya empleadas con otros productos . En una variante, es posible realizar una película a partir de globina soluble a pH 5 como precedentemente, pero sin introducir agente de reticulación. La reticulación final de la película seca se realizó por la irradiación final la cual crea enlaces covalentes entre las cadenas de globina. Tal película se puede adherir sobre los tejidos con la ayuda de adhesivos biológicamente compatibles, reactivos con los grupos aminados de la globina. Preferiblemente son utilizables los polialdehldos obtenidos por oxidación periódica de polisacáridos . En calidad de ejemplo se prefieren el dextrano oxidado o almidón oxidado. Ejemplo 9: Aplicaciones biomédicas de partículas de globina insolubles como soporte de cultivos celulares. La pasta de precipitado de globina a pH neutro, estéril, obtenida como en cualquiera de los ejemplos precedentes, se incubó por ejemplo con el medio DMEM para cultivos celulares, a una temperatura cercana a 37 °C. Se obtuvo una suspensión en la cual las células se introdujeron a una densidad de 10000 a 100000 células/mi. Después de la agitación por 30 minutos y decantación por 1 hora a 15 horas, las células se unieron a las partículas de globina y se multiplicaron en su superficie durante la duración del cultivo el cual puede ser de 3 a 12 días. El medio de cultivo celular se eligió en función del tipo celular según los conocimientos actualmente publicados. Al final de la multiplicación, la suspensión celular fijada a las partículas de globina, se puede concentrar por decantación espontánea. La pasta celular obtenida se puede poner en jeringas e inyectar como implante de células biocompatible para aplicaciones terapéuticas diversas hoy conocidas . El cultivo de fibroblastos cutáneos, de acuerdo con esté método, puede permitir la preparación de implantes de células para estas aplicaciones de cicatrización cutánea o de relleno de tejidos conjuntivos. El cultivo de condrocitos, de acuerdo con este método, puede permitir la preparación de implantes celulares para aplicaciones de relleno y cicatrización de heridas superficiales del cartílago. El cultivo de osteoblastos, de acuerdo con este método, puede permitir la preparación de implantes celulares para aplicaciones de relleno y cicatrización de fracturas o pérdida de sustancia ósea. De la misma manera las células de cepas, principalmente de origen embrionario, o de sangre de cordón umbilical, o de médula ósea, o aisladas a partir de diferentes tejidos adultos, se pueden cultivar sobre estas partículas de globina y responder a las funciones buscadas después de la inyección o implante de la pasta celular. Para aplicaciones biomédicas como la -. fabricación de virus o vacunas derivadas, en las cuales las células se pueden separar, después del cultivo, de su soporte de globina, se pueden emplear los métodos tradicionales de tripsinación. Las partículas no degradadas de globina se decantan espontáneamente en el fondo del frasco. se pueden separar de las células por decantación. En ciertas variantes, es posible remplazar las partículas de globina por películas que contienen la globina insoluble. El cultivo de células también se puede efectuar por circulación continua del medio de cultivo al contacto de estas películas planas, como para todos los cultivos de células sobre membranas o películas hoy conocidas. Este método permite realizar también películas de células las cuales se pueden implantar para aplicaciones médicas específicas. Ejemplo 10 : Aplicaciones médicas de implantes de globina insoluble inyectable. Las preparaciones de acuerdo con la invención, y principalmente las jeringas de globina insoluble preparadas de acuerdo con cualquiera de los ejemplos 1 a 7 se pueden utilizar en las aplicaciones siguientes no limitativas : - Rellenado de arrugas y defectos cutáneos - rellenado de tejidos conjuntivos o esfínteres para aplicaciones - en urología: reflujo vesico-uretral del niño, incontinencia por esfuerzo de la mujer; en O.R.L. : corrección de volumen de cuerdas vocales . Tapón hemostático para las heridas arteriales percutáneas - Cicatrizació cutánea, mediante utilización de la pasta de globina sola o en asociación con otros productos de cicatrización o factores de crecimiento. - Cicatrización del cartílago o del hueso, mediante utilización de la globina. sola o en asociación con otros productos de cicatrización-^ fosfato de calcio, carbonato de calcio, hidroxiapatita, factores de crecimiento de tipo BMP. Asociación con antibióticos para inhibir el desarrollo bacteriano, durante el periodo de colonización y degradación del implante. La invención también tiene por objeto los procedimientos de tratamiento del cuerpo humano o animal que comprenden al menos una etapa de administración de una cantidad terapéutica eficaz de una preparación inyectable o implantable de acuerdo con la invención a un paciente el cual presenta la necesidad. Estos procedimientos comprenden principalmente las administraciones que corresponden a las aplicaciones precitadas, por las vías parenterales o quirúrgicas de inyección o de implantación, o por vía cutánea. Bibliografía ANSON M. L.-MIRSKY A. E. (1930) Protein Coagulation and its reversal . The preparation of insoluble globin, soluble globin and heme. _ J. Gen. Physiol. 13,469-476 AUTIO K-KIESVAARA M.- AL KI Y. -KANKÜ S. (1984) Chemical and functional properties of blood globin prepared by a new method Journal of Food Science 49, 859-862 BERG J. 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