MXPA05007552A - Formulaciones parenterales de un peptido para el tratamiento de lupus sistemico eritematoso. - Google Patents

Abstract

La presente invencion provee una composicion farmaceutica que comprende un vehiculo acuoso de 0.1 mg/ml a 20 mg/ml de la composicion de una sal farmaceuticamente aceptable de un peptido que tiene la formula estructural NH2-Gly Tyr Tyr Tip Ser Trp lle Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Glu Glu Trp lle Gly-cooH; y una 13-ciclodextrina sustituida en una cantidad efectiva para disolver el peptido en el vehiculo acuso en donde la composicion tiene un pH entre 4 y 9, un procedimiento para su preparacion, y un metodo para aliviar los sintomas del lupus sistemico eritematoso (SLE) en un ser humano que comprende administrar a dicho ser humano la composicion farmaceutica.

Description

FORMULACIONES PARENTERALES DE UN PÉPTIDO PARA EL TRATAMIENTO DE LUPUS SISTEMICO ERITEMATOSO Esta solicitud reclama el beneficio de la solicitud provisional EUA No. 60/439, 918, presentada el 14 de Enero de 2003, cuyo contenido total se incorpora en la presente invención por referencia. En toda esta solicitud, se hace referencia a varias publicaciones por medio de citas. Las descripciones de estas publicaciones en tu totalidad se incorporan en la presente invención por referencia dentro de esta solicitud para poder describir más ampliamente el estado de la técnica tal y como se conoce por aquellos expertos en la presente invención, a partir que la fecha de invención se describió y reclamó en la presente.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El lupus eritematoso sistémico (SLE) , o lupus, es una enfermedad auto-inmune debilitante que se caracteriza por la presencia de un arreglo o disposición de anticuerpos, incluyendo anticuerpos a dsADN, a antigenos nucleicos y a ribonucleoproteinas . El lupus eritematoso sistémico (SLE) afecta aproximadamente de uno a de 2000 individuos en los Estados Unidos (1 de 700 mujeres) . La enfermedad principalmente afecta a mujeres jóvenes, con una proporción de sexo masculino a sexo femenino de aproximadamente 9:1. El lupus sistémico puede afectar casi a cualquier órgano o sistema del cuerpo. El lupus sistémico puede incluir periodos en donde pocos síntomas, sino es que ningún síntoma es evidente ("remisión") y otras ocasiones cuando la enfermedad se vuelve más activa ("erupción") . Con mucha frecuencia, cuando la gente menciona "lupus", se refieren a la forma sistémica de la enfermedad. Los corticoesteroides son el sostén principal en el tratamiento de enfermedades sistémicas auto inmunes . El riesgo de perder la vida, y severamente deshabilitando manifestaciones del SLE, se tratan con altas dosis de glucocorticoides (1-2 mg/kg/día) . Los efectos indeseables de los glucocorticoides crónicos incluyen un arreglo de exposición de efectos adversos prominentes tales como la reacción de Cushing, obesidad central, hipertensión, infección, fragilidad capilar, hirsutismo (hipertricosis ) , osteoporosis acelerada, cataratas, diabetes mellitus, miopatía y psicosis. Además de la toxicidad corticoesteroide, el cumplimiento del paciente hacia un régimen de dosificación también plantea un problema muy serio . Los agentes citotóxicos también se utilizan para controlar enfermedades activas, reduciendo la tasa de erupciones de la enfermedad, y reduciendo los requerimientos de esteroides. Los efectos colaterales indeseables de esta última incluyen depresión de " médula ósea, infecciones incrementadas con organismos oportunistas, con fallas ováricas irreversibles, alopecia y un riesgo de malignidad incrementado. El SLE es una enfermedad inflamatoria para la cual hasta la fecha no existe un tratamiento definitivo o cura. La enfermedad resulta en complicaciones crónicas y agudas. Los únicos tratamientos disponibles son paliativos, destinados a aliviar los síntomas agudos y evitar complicaciones crónicas, con frecuencia con efectos secundarios profundos. Por lo tanto, existe una necesidad en este campo que no ha sido cumplido, y que tanto médicos como pacientes darían la bienvenida a nuevos tratamientos que pudieran eliminar potencialmente - o reducir las manifestaciones indeseadas de la enfermedad. Los péptidos que se basan en la región determinante de complementariedad del anticuerpo 16/6Id anti-ADN monoclonal humano que tiene la capacidad de inmunomodular las respuestas asociadas con el SLE se han descrito en la publicación internacional PCT No. WO 02/067848 A2, cuyo contenido total se incorpora en la presente invención. Particularmente, se encontró que la región CDRl inhibe la respuesta proliferativa de linfocitos sanguíneos periféricos (PBL) de los pacientes SLE al mAfa 16/6ld anti-ADN humano, y para mejorar las manifestaciones de la enfermedad en ratones afligidos con SLE espontáneo o experimental . El CDR1 humano, que es el Compuesto 1, que se muestra en la figura 1, es un péptido sintético de 19 aminoácidos que se basa en la región 1 determinante de la complementariedad (CDR1) del mAb anti-ADN humano denotado 16/6 Id (Waisman, A., et al . "Modulation of murine systemic lupues erythematosus with peptides based on complementarity determining regions of pathogenic anti-DNA monoclonal antibodies" "Modulación de lupus sistémico eritematoso de murino con péptidos basados en regiones determinantes de complementariedad de anticuerpos monoclonales anti-ADN patogénicos". (Proc. Nati. Acad. Sci. E.ü.A. (1997), 94 (4) : 4620-4625) . En modelos SLE experimentales - el tratamiento con ratones Balb/c y ratones propensos a SLE, es decir, ratones (NZBxNZW) Flt ya sea con péptidos basados en mCDR o el Compuesto 1 significativamente redujeron el SLE relacionado, notablemente con depósitos complejos inmunes (ICD) en los ríñones, proteinuria y leucopenia. El tratamiento no tuvo efecto en la respuesta de anticuerpos específicos 16/6 Id (Waisman, A., et al. "Modúlation of murine systemic lupus erythematosus with peptides based on complementarity determining regions of pathogenic anti-DNA monoclonal antibodies" ("Modulación del lupus sistémico erimatoso de murino con péptidos basados en regiones que determinan la complementariedad de anticuerpos monoclonales anti-ADN patogénicos"), (Proc. Nati. Acad. Sci. E.ü.A. (1997), 94 (4): 620; Eilat, E.r et al. r "Prevention of systemic lupus erithematosus-like disease in (NZBxNZW) Fx mice by treating with CDR1- and CDR3- based peptides of pathogenic autoantibody" ("Prevención de enfermedad similar del lupus sistémico eritematoso en ratones (NZBxNZW) Fi tratando con péptidos basados en CDR1- y CDR3- de auto-anticuerpos patogénicos") J. Clin Immunol . (200), 20: 268, Eilat, E., et al.r "The mechanism by which a peptide Based on complementarity determining region-1 of pathogenic anti-DNA antibody ameliorates experimental SLE" (2001) . ("El mecanismo mediante el cual un péptido basado en la región-1 determinante de la complementariedad de anticuerpos anti-ADN patogénicos, disminuye el SLE experimental" (2001) , Proc. Nati. Acad. Sci. E.U.A. 98: 1148). Estos péptidos, como muchos otros péptidos, no son muy solubles. Por lo tanto, en la presente invención se presentan formulaciones que mejoran la solubilidad de los péptidos .

SUMARIO DE IA INVENCIÓN La presente invención provee una composición, f rmacéutica que comprende : Un vehículo acuoso; de 0.1 mg/ml a 20 mg/ml de la composición de una sal farmacéuticamente aceptable de un péptido que tiene la fórmula estructural NH2~Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp lie Arg ' Gln Pro Pro Gly Lys Gly Glu Glu Trp lie Gly-cooh (SEC ID NO:l). Una ß ciclodextrina sustituida en una cantidad efectiva para disolver el péptido en el vehículo acuoso, en donde la composición tiene un pH entre 4 y 9. La invención sujeto también provee una composición farmacéutica que también comprende: Un vehículo acuoso; de 0.1 mg/ml a 20 mg/ml de la composición de la sal de acetato de un péptido que tiene la fórmula estructural HH2-Gl Tyr Tyr Trp Ser Trp lie Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Glu Glu Trp lie Gly-cooh (SEC ID NO:l); y de 70 mg/ml a 170 mg/ml de la composición de hepta-sulfobutileter- -ciclodextrinaf en donde el péptido y el hepta-sulfobutileter- -ciclodextrina se disuelven en el vehículo acuoso; y en donde la solución tiene un pH entre 6.5 y 8.5. La invención sujeto también provee un método para aliviar los síntomas del lupus sistémico eritematoso (SLE) en un sujeto humano que comprende administrar al sujeto humano cualquiera de las composiciones farmacéuticas anteriores en una cantidad efectiva para aliviar los síntomas del SLE en el sujeto humano. La invención sujeto también provee un procedimiento de fabricación de la composición farmacéutica anterior que comprende los siguientes pasos: a) Preparación de una solución de un ß-ciclodextrina sustituida en un vehículo acuoso a una concentración predeterminante; b) Agregar una cantidad predeterminante de una sal farmacéuticamente aceptable del péptido NH2~Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp lie Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Glu Glu Trp lie Gly-cooh (SEC ID N0:l)a la solución del paso a); c) Ajustar el pH de la solución del paso b) hasta que el péptido se disuelva en la solución; y d) si es necesario, ajustar el pH de la solución del paso c) a un pH de 4-9, de esa manera fabricar la composición farmacéutica. La invención sujeto también provee un procedimiento de liofilización de la composición farmacéutica anterior, que comprende los pasos de: a) Reducir la temperatura de una composición farmacéutica a -40 °C; b) Sostener la temperatura a -40°C por un tiempo predeterminado; c) Elevar la temperatura de la solución a 20 °C; d) Sostener la temperatura a 20°C por un tiempo predeterminado; y e) Reducir la presión a lO barias, de esa manera liofilizar la composición farmacéutica. La invención sujeto también provee un procedimiento de liofilización de la composición farmacéutica anterior, que comprende los pasos de: a) Reducir la temperatura de la composición farmacéutica a -45 °C; b) Sostener la temperatura a -45°C por un tiempo predeterminado; c) Elevar la temperatura de la solución a -20°C; d) Elevar la temperatura de la solución a 25 °C; y e) Sostener la temperatura a 25 °C por un tiempo predeterminado, de esa manera liofilizar la composición farmacéutica . BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Figura 1.- CDR1 (compuesto 1) humano como sal de acetato que muestra las fórmulas moleculares y estructurales de hCDRl, la secuencia de aminoácidos y los parámetros físicos . Figura 2.- Secreción de IL-2 de células tomadas de ratones tratados con el Compuesto 1 y con solución de Captisol® después que las células fueron posteriormente activadas con una solución del Compuesto 1 en PBS. -¦- Compuesto 1 (RS) 50 g/ra ó -A- Compuesto 1 (RS) 200 pg/ratón -?- DP 50 pg/ratón -?- DP 200 pg/ratón -°- 12% Captisol® en ampolleta Figura 3.- Secreción de IFN-? de células tomadas de ratones con solución de Compuesto 1 después que la células fueron subsecuentemente activadas con una solución del Compuesto 1 en EM-1 (2.5 x 106 células/pozo) . -?- Placebo -·- Compuesto 1 50 g/ratón (dosis de tratamiento) -?- Compuesto 1 100 g/ratón (dosis de tratamiento) -X- Compuesto 1 200 g/ratón (dosis de tratamiento) Figura 4.- Secreción de IFN-? a partir de células tomadas de ratones tratados con la solución del Compuesto 1, después que las células fueron subsecuentemente activadas con una solución del Compuesto 1 en EM-1 (5 x 106 células/pozo) . -?- Placebo -?- Compuesto 1 25 pg/ratón -?- Compuesto 1 50 pg/ratón -X- Compuesto 1 100 pg/ratón -*- Compuesto 1 200 pg/ratón Figura 5.- Anticuerpos anti-dsADN en ratones (NZBxNZ ) Fl después de 10 inyecciones con Compuesto 1 en solución de Captisol® [OD = Densidad óptica; Compuesto 1 (C) = Compuesto 1 disuelto en Captisol©] -Ü- Placebo - - Compuesto 1 50 pg/ratón -o- Compuesto 1 25 pg/ratón Figura 6.- Las secciones de riñon de ratones (NZBxNZW) Fl que mostraban intensidad de Depósitos complejos inmunes. Las secciones de la fila superior son de ratones tratados con Captisol®, las secciones de la fila media, son de un ratón tratado con el Compuesto 1 con 50 pg/ratón, y las secciones de la fila inferior son de un ratón tratado con 25 pg/ratón Compuesto 1. Amplificación: izquierda xlOO, Derecha: x400. Inmunohistología FITC .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención provee una composición farmacéutica que comprende: un vehículo acuoso; de 0.1 mg/ml a 20 irtg/ml de una sal farmacéuticamente aceptable de de un péptido que tiene la fórmula estructural HH2~Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp lie Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Glu Glu Trp lie Gly-cooh(SEC ID NO:l) y Una ß ciclodextrina sustituida en una cantidad efectiva para disolver el péptido en el vehículo acuoso, en donde la composición tiene un pH entre 4 y 9. En una modalidad, la concentración de sal de acetato del péptido es por lo menos 0.5 mg/ml. En una modalidad, la concentración de sal del péptido es de 0.5 mg/ml a 10 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de sal del péptido es de 0.5 mg/ml a 2.5 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de sal del péptido es de 2.5 mg/ml a 5 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de sal del péptido es de 5 mg/ml a 7 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de sal del péptido es de 7 mg/ml a 8.5 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de sal del péptido es de 8.5 mg/ml a 10 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de sal del péptido es de 9 mg/ml a 10 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de sal del péptido es de 10 mg/ml a 15 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de sal del péptido es de 15 mg/ml a 20 mg/ml.

En otra modalidad, la concentración de sal del péptido es de 1.0 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de sal del péptido es de 2.5 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de sal del péptido es de 5 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de sal del péptido es de 10 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de sal del péptido es de 15 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de sal es de 0.1 mg/ml a 0.5 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de sal es de 0.1 mg/ml a 0.2 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de sal es de 0.2 mg/ml a 0.3 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de sal es de 0.3 mg/ml a 0.4 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de sal es de 0.4 mg/ml a 0.5 mg/ml. En una modalidad adicional, la composición tiene un pH entre 6.5 y 8.5. En una modalidad adicional, la composición tiene un pH entre 7.5 y 8.5.

En una modalidad adicional, la composición tiene un pH entre 4 y 5. En una modalidad adicional, la composición tiene un pH entre 5 y 6. En una modalidad adicional, la composición tiene un pH entre 6 y 7. En una modalidad adicional, la composición tiene un pH entre 7 y 8. En una modalidad adicional, la composición tiene un pH entre 8 y 9. En otra modalidad, la sal farmacéuticamente aceptable es una sal de acetato. En otra modalidad, la ß-ciclodextrina sustituida es hidroxipropilo, éter sulfobutilico, éter sulfopropilico ß-ciclodextrina sustituida. En una modalidad adicional, la ß-ciclodextrina sustituida es una ß-ciclodextrina de éter sulfobutilico sustituida . En una modalidad adicional, la sal farmacéuticamente aceptable es una sal de acetato, y la ß-ciclodextrina sustituida es hepta- (sulfobutil éter)- ß-ciclodextrina . En otra modalidad, la composición además comprende un regulador de pH farmacéuticamente aceptable en una cantidad y de un tipo adecuado para lograr que el pH de la composición farmacéuticamente sea de la escala de 4-9. El regulador de pH puede ser regulador de pH acetato, regulador de pH de citrato, o carbonato de sodio. La invención sujeto también provee una composición farmacéutica que también comprende: Un vehículo acuoso; de 0.1 mg/ml a 20 mg/ml de la composición de la sal de acetato de un péptido que tiene la fórmula estructural NH2~Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp lie Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Glu Glu Trp lie Gly-cooh (SEC ID NO:l); y de 70 mg/ml a 170 mg/ml de la composición de hepta-sulfobutileter-p-ciclodextrina, en donde el péptido y el hepta-sulfobutileter--ciclodextrina se disuelven en el vehículo acuoso; y en donde la solución tiene un pH entre 6.5 y 8.5. En una modalidad, la concentración de sal de acetato del péptido es por lo menos 0.5 mg/ml. En una modalidad, la concentración de sal de acetato del péptido es de 0.5 mg/ml a 10 mg/ml. En una modalidad adicional, la concentración de sal de acetato del péptido es de 0.5 mg/ml a 2.5 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de sal es de 0.1 mg/mi a 0.5 mg/mi . En otra modalidad, la concentración de sal es de 0.1 mg/ml a 0.2 mg/ml.

En otra modalidad, la concentración de sal es de 0.2 mg/ml a 0.3 mg/ml . En otra modalidad, la concentración de sal es de 0.3 mg/ml a 0.4 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de sal es de 0.4 mg/ml a 0.5 mg/ml . En otra modalidad, la concentración de sal del péptido es de 5 mg/ml a 7 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de sal del péptido es de 7 mg/ml a 8.5 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de sal del péptido es de 8.5 mg/ml a 10 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de sal del péptido es de 9 mg/ml a 10 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de sal del péptido es de 10 mg/ml a 15 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de sal del péptido es de 15 mg/ml a 20 mg/ml. En una modalidad adicional, la concentración de sal de acetato del péptido es de 1.0 mg/ml. En una modalidad adicional, la concentración de sal de acetato del péptido es de 2.5 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de sal del péptido es de 5 mg/ml .

En otra modalidad, la concentración de sal del péptido es de 10 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de sal del péptido es de 15 mg/ml. En otra modalidad, la concentración de hepta- (sulfobutil éter)- ß-ciclodextrina es de 120 mg/ml y el pH de la composición es entre 7.5 y 8.5, La invención sujeto también provee un método para aliviar los síntomas del lupus sistémico eritematoso (3LE) en un sujeto humano que comprende administrar al sujeto humano cualquiera de las composiciones farmacéuticas anteriores en una cantidad efectiva para aliviar los síntomas del SLE en el sujeto humano. La invención sujeto también provee las composiciones farmacéuticas anteriores para uso en tratamiento de SLE en un suj eto humano . La invención sujeto también provee un procedimiento de fabricación de la composición farmacéutica anterior que comprende los siguientes pasos: a) Preparación de una solución de un ß-ciclodextrina sustituida en u vehículo acuoso a una concentración predeterminante; b) Agregar una cantidad predeterminante de una sal farmacéuticamente aceptable del péptido HH2_Gly Tyr Tyr 1 Trp Ser Trp lie Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Glu Glu Trp lie Gly-cooh (SEC ID NO:l)a la solución del paso a); c) Ajustar el pH de la solución del paso b) hasta que el péptido se disuelva en la solución; y d) si es necesario, ajustar el pH de la solución del paso c) a un pH de 4-9, de esa manera fabricar la composición farmacéutica. En una modalidad del procedimiento, la concentración resultante final de la ß-ciclodextrina sustituida en la composición farmacéutica es de 70 mg/ l a 170 mg/ml. En una modalidad del procedimiento, la concentración resultante final de la ß-ciclodextrina sustituida y es tal que resulta en una concentración de final de ß-ciclodextrina sustituida en la composición farmacéutica de 80 mg/ml a 170 mg/ml. En una modalidad del procedimiento, la concentración resultante final de la ß-ciclodextrina sustituida y es tal que resulta en una concentración de final de ß-ciclodextrina sustituida en la composición farmacéutica de 90 mg/ml a 170 mg/ml. En una modalidad del procedimiento, la concentración resultante final de la ß-ciclodex- riria sustituida y es tal que resulta en una concentración de final de ß-ciclodextrina sustituida en la composición farmacéutica de 100 mg/ml a- 170 mg/ml. En una modalidad del procedimiento, la concentración resultante final de la ß-ciclodextrina sustituida y es tal que resulta en una concentración de final de ß-ciclodextrina sustituida en la composición farmacéutica de 110 mg/ml a 170 mg/ml. En una modalidad del procedimiento, la concentración resultante final de la ß-ciclodextrina sustituida y es tal que resulta en una concentración de final de ß-ciclodextrina sustituida en la composición farmacéutica de 120 mg/ml a 170 mg/ml. En una modalidad del procedimiento, la concentración resultante final de la ß-ciclodextrina sustituida y es tal que resulta en una concentración de final de ß-ciclodextrina sustituida en la composición farmacéutica de 130 mg/ml a 170 mg/ml. En una modalidad del procedimiento, la concentración resultante final de la ß-ciclodextrina sustituida y es tal que resulta en una concentración de final de ß-ciclodextrina sustituida en la composición farmacéutica de 140 mg/ml a 170 mg/ml. En una modalidad del procedimiento, la concentración resultante final de la ß-ciclodextrina sustituida y es tal que resulta en una concentración de final de ß-ciclodextrina sustituida en la composición farmacéutica de 150 mg/ml a 170 mg/ml. En una modalidad del procedimiento, la concentración resultante final de la ß-ciclodextrina sustituida y es tal que resulta en una concentración de final de ß-ciclodextrina sustituida en la composición farmacéutica de 160 mg/ml a 170 mg/ml. En una modalidad del procedimiento, la concentración resultante final de la ß-ciclodextrina sustituida y es tal que resulta en una concentración de final de ß-ciclodextrina sustituida en la composición farmacéutica 120 mg/ml. En otra modalidad, la cantidad predeterminada del péptido es tal que resulta en una concentración final del péptido en la composición farmacéutica que es por lo menos de 0.1 mg/mi . En otra modalidad, la cantidad predeterminada del péptido es tal que resulta en una concentración final del péptido en la composición farmacéutica que es por lo menos de 0.5 mg/ml. En otra modalidad, la cantidad predeterminada del péptido es tal que resulta en una concentración final del péptido en la composición farmacéutica que es 2.5 mg/ml, 2.0 mg/ml, 1.0 mg/ml, 0.5 mg/ml o 0.1 mg/ml.

En otra modalidad, la cantidad predeterminada del péptido es tal que resulta en una concentración final del péptido en la composición farmacéutica que es 5 mg/ml, 10 mg/ml o 15 mg/ml. En otra modalidad del procedimiento, el paso b) que además comprende la mezcla de la solución por 1 hora. En otra modalidad, en el paso c) el pH se ajusta utilizando HCl o NaOH al 1.0N. En una modalidad adicional, el procedimiento además comprende filtrar la solución de la etapa d) a través de un filtro de acetato de celulosa. En otra modalidad del procedimiento anterior, la concentración predeterminada de la ß-ciclodextrina sustituida es tal que resulta en una concentración de final de ß-ciclodextrina sustituida en la composición farmacéutica de 120 mg/ml ; la cantidad predeterminada de péptido es tal que resulta en una concentración final de péptido en la composición farmacéutica de 2.5 mg/ml, 2.0 mg/ml, 1.0 mg/ml, 0.5 mg/ml o 0.1 mg/ml; el paso b) además comprende mezclar la solución por una hora; y en la etapa c) el pH se ajusta utilizando HCl o NaOH 1.0N, que además comprende filtrar la solución de la etapa d) a través de un filtro de acetato de celulosa.

La presente invención también provee una composición preparada por medio del procedimiento anterior. La presente invención también provee un procedimiento para liofilizar cualquiera de las composiciones farmacéuticas anteriores que comprende los siguientes pasos: a) disminuir la temperatura de la composición farmacéutica a -40 °C; b) sostener la temperatura a -40°C durante un tiempo predeterminado; c) elevar la temperatura de la solución a 20 °C; d) sostener la temperatura a 20 °C durante un tiempo predeterminado; y e) reduciendo la presión y sosteniendo la temperatura a 20°C durante un tiempo predeterminado, liofilizando de esa manera la composición farmacéutica. En una modalidad, la etapa a) se desarrolla en un periodo de 2 horas . En otra modalidad, la etapa b) se desarrolla en un periodo de 3 horas. En una modalidad adicional, la etapa c) se desarrolla en un periodo de más de 13 horas . En una modalidad adicional, la etapa c) se desarrolla en una presión de 110 pbarias.

En una modalidad adicional, la etapa d) se desarrolla en un periodo de más de 13 horas. En una modalidad adicional, la etapa d) se desarrolla en una presión de 110 pbarias. En una modalidad adicional, la etapa e) la presión se reduce a 10 pbarias . En una modalidad, la etapa e) se desarrolla en un periodo de más de 5 horas. En otra modalidad del procedimiento, la etapa a) se desarrolla en un periodo de 2 horas . la etapa b) se desarrolla en un periodo de 3 horas . la etapa c) se desarrolla en un periodo de más 13 horas y a una presión de 110 pbarias la etapa d) se desarrolla en un periodo de más 13 horas y a una presión de 110 pbarias; y la etapa e) se desarrolla en un periodo de más 5 horas y a una presión de 10 pbarias La presente invención también provee una composición farmacéutica liofilizada preparada por el procedimiento anterior. La presente invención también provee un procedimiento para liofilizar la composición farmacéutica anteriore, que comprende las etapas de: a) disminuir la temperatura de la composición farmacéutica a -45 °C; b) sostener la temperatura a -45 °C durante un tiempo predeterminado; c) elevar la temperatura de la solución a -20°C; d) sostener la temperatura a 25 °C durante un tiempo predeterminado; y e) reduciendo la presión y sosteniendo la temperatura a 25 °C durante un tiempo predeterminado, liofilizando de esa manera la composición farmacéutica. En una modalidad, la etapa a) se desarrolla en un periodo de 6 horas . En una modalidad, la etapa b) se desarrolla en un periodo de 3 horas. En una modalidad, la etapa c) se desarrolla en un periodo de más de 19 horas. En una modalidad, la etapa a) se desarrolla en una presión de 150 barias . En una modalidad, la etapa d) se desarrolla en un periodo de más de 13 horas. En una modalidad, la etapa d) se desarrolla en una presión de 150pbarias. En una modalidad, la etapa e) se desarrolla en un periodo de más de 8 horas .

En una modalidad, la etapa e) se desarrolla en una presión de 15(^barias. En otra modalidad del procedimiento, la etapa a) se desarrolla en un periodo de 6 horas . la etapa b) se desarrolla en un periodo de 3 horas . la etapa c) se desarrolla en un periodo de más 19 horas y a una presión de 150 barias la etapa d) se desarrolla en un periodo de más 13 horas y a una presión de 150 pbarias la etapa e) se desarrolla en un periodo de más 8 horas y a una presión de 150 barias La presente invención también provee una composición farmacéutica liofilizada preparada por cualquiera de los procedimientos anteriores . En otra modalidad de la composición farmacéutica liofilizada anterior, el contenido de agua de la composición es menor de 5%. En una modalidad, el contenido de agua de la composición es menor que 4.0%. En una modalidad, el contenido de agua de la composición es menor que 3.5%. La presente invención también provee una composición farmacéutica liofilizada que comprende: Una sal farmacéuticamente aceptable de un péptido que tiene la fórmula estructural NH2 - Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp lie Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Glu Glu Trp lie Gly -COOH (SEC ID NO: 1); y una ß-ciclodextrina sustuida. La invención sujeto también provee una composición farmacéutica envasada que comprende: Un material de envase; y una cantidad predeterminada de la composición farmacéutica liofilizada anterior . Las preparaciones de la presente invención pueden administrarse parenteralmente, tópicamente, o rectalmente . Por supuesto se dan por formas adecuadas para cada ruta de administración. Por ejemplo, se administran mediante inyección, inhalación, ungüento, supositorio, etc. o por administración por medio de inyección, infusión, inhalación; tópica por medio de loción o ungüento; y rectal por medio de supositorios. Las frases "administración parenteral" y "parenteralmente administrada" como se utiliza en la presente invención son modos de administración diferentes de la administración tópica y enteral, generalmente por inyección e incluye, sin limitación alguna, intravenosa, muscular, intrarterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intracardiaca, intradérmica, intraperitonal , transtraqueal, subcutánea, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subaracnoidea, intraespinal e inyección e infusión intraesternal. Las frases "administración sistémica", "sistemáticamente administrada", "administración periférica" y "periféricamente administrada" como se utiliza en la presente invención significa que es la administración de un compuesto, fármaco u otro material diferente del que se inyecta directamente en el sistema nervioso central, de tal forma que entra al sistema del paciente y por lo tanto es sujeto al metabolismo y otros procedimientos similares, por ejemplo, la administración subcutánea . Los detalles de los procedimientos y la información de la formulación general en excipientes adicionales, se pueden encontrar en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, "Remington: La Ciencia y Práctica de la Farmacia", 20a. Edición. Esta invención se entenderá mejor a partir de los siguientes Detalles Experimentales; sin embargo, aquellos expertos en la técnica apreciarán fácilmente que los métodos y resultados específicos que se describen son simplemente ilustrativos de la invención tal como se analizan más completamente en las reivindicaciones a continuación .

Detalles experimentales EJEMPLO 1 Desarrollo de la formulación para el Compuesto 1 El péptido hCDRl humano (Compuesto 1) se describe en la Publicación Internacional PCT No. WO 02/067848, publicada el 6 de septiembre de 2002, y puede prepararse por métodos muy conocidos en la técnica, (véase, por ej emplo, "Peptides: Síntesis, Structure and Applications", ("Péptidos: Síntesis, Estructura y Aplicaciones") editado por B. Gutte, Academia Press, 1995: "Peptide Síntesis Protocols" ("Protocolos de Síntesis de Péptido" ) editado por M. Pennington y B. Duna, Humana Press, 1994; Schnolzer, M. et al., "In situ neutralization ín Boc-chemistry solid phase síntesis. Rapid,High yield assembly of difficult sequences" ("Neutralización In situ en la síntesis de fase sólida Bio-química. Ensamble de rápido y alto rendimiento de secuencias difíciles"') Int. J. Pept. Protein Res. (1992) 40: 180-193) . El compuesto 1 es un polipéptido sintético compuesto de 19 aminoácidos. Es provisto como üna sal de acetato. La solubilidad acuosa del péptido ha sido determinada menor que 0.5 mg/ml. La Figura 1 muestra el compuesto 1 como una sal de acetato.

Para poder desarrollar una formulación con una concentración de péptidos que excedan 2 mg/ml, de preferencia hasta 10 mg/ml, se desarrollaron experimentos con varios incrementadotes de solubilidad, los experimentos preliminares indicaron que una concentración de 2 mg/ml no se puede lograr tan fácilmente. Para poder desarrollar una formulación para inyección subcutánea, también es deseable que el pH esté en la escala de 4 a 9, y que la solución sea iso-osmótica . Basándose en estudios de literatura extensa, se adoptaron algunos enfoques principales para poder producir una formulación con una solubilidad máxima. Los factores considerados fueron: • Ajuste de pH y reguladores de pH ¦ Solventes • Co-solventes • Agentes solubilizantes Métodos El compuesto 1 se disolvió en la solución incrementadora de solubilidad elegida, ya sea separada o en combinación con otros excipientes y las soluciones se agitaron por lo menos por una hora. El pH se ajustó si se necesitaba. Las soluciones se examinaron visualmente para calcular la solubilidad, y fueron enviadas para determinación de prueba analítica. Para algunas formulaciones elegidas, también se sometió a prueba la actividad biológica. Resultados El Cuadro 1 presenta el tipo de incrementadores de solubilidad que se utilizan para el desarrollo de la formulación. Los Cuadros 2 y 3 resumen los experimentos que fueron realizados con los diversos incrementadores de solubilidad. El Cuadro 2 resume el cribado inicial desarrollado con concentraciones de péptidos en la escala de 5 a 10 mg/ml. El trabajo experimental se desarrolló con una concentración más elevada de péptidos y después se repitió con dosis menores (véase cuadro 3) . Las pruebas iniciales indicaron que el compuesto 1 era más soluble a los limites de los niveles de pH deseados, tanto ácidos como básicos, pero eran menos estables en la escala de pH básica. Por lo tanto, se sometieron a prueba varios reguladores de pH y agentes de ajustes de pH, incluyendo el regulado de pH de acetato, el regulador de pH de citrato y carbonato de sodio. Ninguno de los reguladores de pH inicialmente comprobados logró el nivel deseado de solubilidad de los péptidos. Solamente arriba de pH 9.2 y debajo de pH 3.0, los niveles de solubilidad que se observaron fueron de 2 mg/ml. Sin embargo, en la etapa inicial, las formulaciones con regulador pH de acetato y el regulador de citrato (con Manitol como agente de tonicidad) fueron seleccionadas para los estudios de toxicologia inicial. Estas formulaciones se probaron para la actividad biológica y se comprobaron activos . los solventes no acuosos (véase cuadro 1) tal como etanol, glicerina, propilenglicol, cremóforo y sus combinaciones fueron probados, más no incrementaron la solubilidad del Compuesto 1. Una solución de 30% de DMA (dimetil-acetamida) rindió una solubilidad en las escalas deseadas) (5 a 9 mg/ml), pero no fue adecuado para la formulación farmacéutica debido a su perfil de toxicidad. También se observó una solubilidad mejorada utilizando 30% (p/p) de PEG 400 (5 a 9 mg/ml) . Esta formulación fue elegida para los estudios de toxicologia, pero se comprobó que era tanto inactivo en el ensayo biológico y podria ser también la causa de ciertos efectos adversos en un estudio de toxicidad en ratones. Por lo tanto, se decidió no perseguir más esta formulación. En vista de los experimentos preliminares, no se utilizaron solventes no acuosos en las formulaciones sujeto. Se probaron varios aminoácidos (ver cuadro 1) incluyendo L-Arginina, ácido Glutámico, L-Glicina, y L-Lisina, para mejorar la solubilidad de la proteina. La solubilidad del péptido en L-Arginina fue al nivel deseado, pero el pH resultante era arriba de 9, Un intento para disminuir el pH utilizar una sal de HCl de Arginina resulto en la precipitación del péptido. También se probó Albúmina de suero humano y se mejoró la solubilidad del péptido a concentraciones del péptido bajas (1 mg/ml) (ver cuadro 3) . Sin embargo, debido a su inmunogenicidad potencial y la baja solubilidad del péptido, no se utilizó en experimentos adicionales . Los ingredientes para carga, (véase cuadro 1) incluyendo annnitol, Sorbitol y Dextrano, se sometieron a prueba solos y en combinación con otros excipientes, pero no mejoraron la solubilidad del péptido en la solución . Los co-solventes (véase cuadro 1), incluyendo Polisorbato 20 y Polisorbato 80, se sometieron a pruebas solos y en combinación con otros excipientes . Aunque concentraciones menores de Polisorbatos (hasta el 6%) no mejoraron la solubilidad del péptido, concentraciones más elevadas (hasta el 10% - véase el cuadro 2) mejoraron la solubilidad del péptido hasta 2 mg/ml. Sin embargo,' dichas concentraciones elevadas de Polisorbato se consideraron inadecuadas para las formulaciones farmacéuticas. Dos tipos de ciclodextrinas , tanto aprobadas para su uso en productos parenterales comercializados, se sometieron a prueba también: hidroxipropil-p-ciclodextrina y sulfobutileter- -ciclodextrina (Captisol) . Ambos incrementaron marcadamente la solubilidad del péptido (concentraciones en niveles de 10 mg/ml para Hidroxipropil-ß-ciclodextrina y 2.5 para Captisol) . La actividad biológica de las dos formulaciones de ciclodextrina se sometió a prueba, y se encontró que eran iguales a la actividad del péptido solo. CAPTISOL® es un derivado de ß-ciclodextrina polianinónico comercialmente disponible con una sal de sulfonato de sodio separada de la actividad hidrofóbica por medio de un grupo separador de heterbutílico, o éter sulfobutilico (SBE) . CAPTISOL® es el nombre comercial para la preparación CyDex Inc. de sulfobutiléter ß-ciclodextrina repta-sustituida de CyDex Inc. (SBE7-p~CD) (www.captisol.com). La estructura de CAPTISOL® permite que las moléculas del fármaco se ajusten en la cavidad hidrofóbica, aislando de esa manera la molécula del fármaco a partir de un solvente acuoso. Debido a que la superficie exterior de CAPTISOL® es hidrofilica, por lo tanto se mejora la solubilidad de la molécula del fármaco formada en complejos. El uso de ciclodextrinas para mejorar la solubilidad de las moléculas del fármaco, se describe en la Patente EÜA números 5,134,127 y 5,376,645, cuyos contenidos totales se incorporan en la presente por referencia. De acuerdo con la literatura del CAPTISOL® de CyDex Inc., es segura cuando se administra parenteralmente y por lo tanto, no muestra la nefrotoxicidad asociada con ß-ciclodextrina. Con relación a la ß-ciclodextrina, el CAPTISOL® provee características de formación de complejos comparables o más elevadas y una superior solubilidad en agua en un exceso de 90 gramos/100 mi - con una mejora de 50 veces. Conclusiones Se encontró que varios incrementadores de solubilidad coinciden con la escala de solubilidad deseada: DMA, PEG-400, dimetil-acetamida, polietilenglicol, aceite de castor polioxilado, N~metil-2-pirrolidinona, l-etenil-2-pirrolidinona, Polisorbato 20, Polisorbato 80, Hidroxipropil-p-ciclodextrina y Sulfobutiléter-ß-ciclodextrina (Captisol®) . De estos incrementadores de solubilidad, se ha comprobado que ambas ciclodextrinas son superiores con respecto a la solubilidad, actividad biológica y estabilidad. Por lo tanto, se decidió seleccionar Captisol® como el incrementador de solubilidad para su uso en las formulaciones del Ejemplo 5 y para estudiar adicionalmente ambas formulaciones de ciclodextrina . La formulación final para los estudios clínicos del Ejemplo 5, consisten de 120 mg/ml de Captisol en agua con la cantidad deseada de péptido (0.5, 1.0 ó 2.5 mg/ml) y HCl y NaOH para el ajuste de pH.

CUADRO 1 Incrementadores de solubilidad utilizados para el desarrollo de la formulación del compuesto 1.

Clasificación del Incrementadores de incrementador de Solubilidad solubilidad Solventes Cremofor EL, CMC, Etanol, DMA, glicerina, Propilenglicol , PEG 400, Monotioglicerol Co-s olventes Polisorbato 20, Polisorbato 80 Agentes de Argenina, HSA, Glicina, solubilización Creatinina, Ácido Glutámico, Licina (sal de acetato y base libre), Captisol, Hidroxipropil- ß-ciclodextrina, Agentes de formación Manitol Sorbitol, Dextrosa, Dextranlactosa Agentes de ajuste pH Regulador de citrato, regulador de acetato, Carbonato de sodio CUADRO 2 Lista de co-solventes y estabilizadores evaluados en las formulaciones del péptido del compuesto 1 Incrementador de % % de la Cantidad % pH de Observaciones solubilidad * Utilizado cantidad de Análisis £ormulación estándar a pé tido partir de agregado la (mg/ml) literatura Albúmina (HSA) , 1.5 0.4-5.0 5 6.0 Insoluble Dextrosa 1.5 Ajustar a 4.1 Albúmina (HSA) , 1.0 0.4-5.0 5 5.8 Insoluble Polisorbato 80 , 0.6 0.8-4.0 Ajustar a glicina 2.0 0.2-2.1 4.1 Arginina 1.5 0.8-1.6 15 93 9.8 Solución transparente Arginina HC1 2.0 0.8-1.6 5 - 3.5 Insoluble Arginina 1.5 0.8-1.6 15 93 9.8 Cuando el pH fue Lactosa 1.5 reducido bajo 8.5, el péptido se precipitó y la solución se tornó en un gel Capt i s o 1 10.0 Hasta 30.0 10 86 .9 Ajustar Solución turbia 20.0 89 a 4.4 CMC (carboxi- 0.2 5 90 5.0 Para estudios metil celulosa) 0.05M toxicológicos en acetato Incrementador de % % de la Cantidad % pH de Observacione s solubilidad * Utilizado cantidad de Anal si s formulac ón estándar a péptido partir de agregado la (mg/ml) literatura Creatinina 0.8 Hasta 0.6 5 6.1 Insoluble Ajustar a 4.1 Cremofor EL 15.0 -10.0 5 4.0 Muy turbia Etanol 10.0 0.6-32.9 Dime iiacetamida 6.0 0.012-6.0 Dextrano 4.0 a 3.0-30.0 5 — 3.9 Insoluble 15.0 Dimetilace amida 6.0-20.0 0.012-6.0 5 — 4.6 Insoluble (DMA) Dime ilacetamida 25.0 0.012-6.0 5 87 5.1 Solución ( DMA) transparente Dimetilacetamida 30.0 0.012-6.0 10 93 5.1 Solución (DMA) transparente Etanol 10.0 0.6-32.9 5 - - Insoluble Ácido glutámico 2.0 5 3.7 Cuando el pH se incrementó sobre 4, el péptido se precipitó y la solución se tornó en un gel Glicerina 1.5 1.6-32.5 5 - 4.5 Insoluble Incrementador de % % de la Cantidad % pH de Observaciones solubilidad * Utilizado cantidad de Análi si s forirra1ación estándar a péptido partir de agregado la (mg/ml ) literatura Glicerina 30.0 1.6-32.5 5 - 3.7 Insoluble Glicerina , 10.0 1.6-32.5 5 12 6.5 Insoluble Polisorbato 80 0.6 0.8-4 Ajustar a 4.5 Glicina 0.4 0.2-2.1 5 - 4.6 Insoluble Hidroxipropil-ß- 20.0 Hasta 30.0 10 99 4.6 Solución ciclodextrina transparente Sal de acetato 2.0 5 3.8 Insoluble de lisina Base libre de 2.0 5 9.2 Cuando el pH se Lisina incrementó sobre 8, el péptido se precipitó y la solución se tornó en un gel Manitol en 4.0 2.0-10.0 5 38 3.4 Para estudios de regulador de pH 0.035M toxicologia de citrato Manitol en 4.0 2.0-10.0 5 32 4.3 Para estudios de regulador de pH 0.05M toxicologia de acetato Manitol , 20.0 2.0-10.0 5 14 6.4 Insoluble Glicina 0.4 0.2-2.1 A ustar a 4.5 Incrementador de % % de la Cantidad % pH de Observaciones solubilidad * Utilizado cantidad de Análisis formulac ón estándar a péptido partir de agregado la (mg/ml ) literatura Manitol , 20.0 2.0-10.0 5 22 6.5 Insoluble Polisorbato 20 0.6 Ajustar a 4.5 Monotioglicerol 1.0 0.1-10.0 5 - 4.5 Solución turbia PEG 400 30.0 Hasta 30.0 5 88 4.2 Ligeramente opaca PEG 400 30.0 Hasta 10 89 4.2 Solución turbia 30.00 PEG 400 con DMA 30.0 Hasta 30.0 5 94 4.2 Solución 6.0 0.012-0.6 transparente PEG 400 10.0 6.0-18.0 6 58 4.2 Insoluble PEG 400 10.0 Hasta 30.0 5 — 4.3 Insoluble DMA 10.0 0.012-0.6 PEG 400 10.0 Hasta 30.0 5 4.1 Insoluble Propilenglicol 10.0 10.0 PG PEG 400 18 Hasta 30.0 5 100 4.2 . Solución Propilengliccl 50.0 10.0 transparente Polisorbato 80 1.6 0.8-4.0 5 24 7.2 Ajustar Insoluble a 4.5 Polisorbato 80 6.0 0.8-4.0 5 - 3.9 Insoluble Polisorbato 80 6.0 0.8-4.0 5 4.0 Insoluble Creatinina 0.6 hasta 0.6 Incrementador de % % de la Cantidad % pH de Observaciones solubilidad * Utilizado cantidad de Análisi s formulación estándar a péptido partir de agregado la (mg/ml) l teratura P opilenglicol 10.0 10.0 5 4.2 Insoluble PG 10.0 0.012-0.6 DMA Propilenglicol 10.0-30.0 10.0 5 — 4.2 Insoluble PG Carbonato de 1.5 5 11.4 Cuando el pH se sodio incrementó sobre 8.5 , el péptido se precipitó y la solución se tornó en un gel Sorbitol 5.0 10.0-25.0 5 6.9 Solución turbia Ajustar a 4.5 CUADRO 3 Formulaciones del compuesto 1 a concentraciones bajas del péptido Incrementador de % % de la Can idad % pH de Observaciones solubilidad * Utilizado can idad de Análisi s fo mulación estándar a péptido partir de agregado la (mg/ml ) literatura Albúmina (HSA) 5.0 0.4-5.0 1.0 90 6.9 Solución 2.5 Ajustar a transparente 4.5 Solución turbia Arginina 1.5 0.8-1.6 1.0 24 10.6 Cuando el pH se Ajustar a incrementó sobre 8.5 8.5, el péptido se precipitó y la solución se tornó en un gel Captisol® 12.0 Hasta 30.0 1.0 106 5.3 Solución 2.5 100 6.5 a 8.5 transparente Dextrano 20.0 3.0-30.0 1.0 69 4.8 Solución turbia Ajustar a 4.0 Glicerina 30.0 1.6-32.5 1.0 4.8 Solución turbia Ajustar a 4.0 Manitol 4.0 0.8-4.0 1.0 64 4.7 Aj ustar Solución turbia a 4.0 Incrementador de % % de la Cantidad % pH de Observ ciones solubilidad * Utilizado cantidad de Análisis formul ción estándar a péptido partir de agregado la (mg/ml ) li eratura Polisorbato 20 .10.0 1.0 95 5.8 Solución 2.5 88 Ajustar a transparente 4.8 Transparente con una pequeña cantidad de precipitación Polisorbato 20 10.0 2.0-10.0 2.5 115 5.1 Solución Manitol 2.0 Ajustar a transparente 4.3 Polisorbato 80 4.0 0.8-4.0 1.0 91 5.5 Solución 6.0-10.0 2.5 89 Ajustar a transparente 5.0 Solución ligeramente turbia Polisorbato 80 4.0 0.8-4.0 2.5 88 5.1 Solución Manitol 2.0 2.0-10.0 Ajustar a ligeramente 4.4 turbia Propilenglicol 10.0 10.0 1.0 78 5.0 Solución turbia PG Ajustar a 4.4 Sorbitol 20.0 10.0-25 1.0 52 4.5 Solución turbia EJEMPLO 2 Protocolo de preparación para solución del compuesto 1 en Captisol®. Los métodos de solución estándarr tales como el mezclado del Compuesto 1 en seco y Captisol® en seco en agua o agregando el Compuesto 1 a una solución preparada de Captisol® y agua no dieron como resultado la completa disolución en las concentraciones deseadas. Diversas concentraciones diferentes tanto el Compuesto 1 como de Captisol® se sometieron a prueba a varios niveles de pH. Sin embargo, el siguiente método para producir una solución del Compuesto 1 en Captisol® resultó en la completa disolución en las concentraciones deseadas. Materiales: Captisol®, Compuesto 1 y agua. Método: 1.~ Pesar la cantidad apropiada de Captisol® para dar una concentración final de 120 mg/ml. 2. - Agregar 80% de la cantidad final de agua mezclado por 10 minutos con un agitador magnético. 3.- Pesar el Compuesto 1 para dar una concentración final de 2.5 mg/ml, 2.0 mg/ml, 1.0 mg/ml, 0.5 mg/ml ó 0.1 mg/ml . 4.- Agregar el péptido a la solución de Captisol®. Mezclar por 1 hora. 5. - Elevar el pH para obtener una solución transparente (en la formulación de 2.0 mg/ml podría existir la necesidad de elevar el pH ligeramente arriba de 9) . El pH se debe ajustar utilizando HC1 1.0 N y NaOH 1.0 N. Mezclar durante 10 minutos. 6. - Corregir el pH a la escala de 7.5 a 8.5 si se necesita (utilizando ya sea HC1 o NaOH 1.0 N) . 7. - Agregar agua al volumen final. 8. - Filtrar la solución a través de un filtro de acetato de celulosa 0.2µ. 9. - Registrar el pH final. 10. -Dispensar en cantidades alícuotas y almacenar la temperatura adecuada.

EJEMPLO 3 Liofilización del Compuesto 1 y solución de Captisol®. El procedimiento de actual de liofilizacíón difiere de otros procedimientos de liofilizacíón ya que el porcentaje de sólidos en la formulación es alto (12%) mientras que los productos liofilizados normalmente contienen entre 5 y 10% de sólidos. Equipo La secadora que se utilizó fue una secadora liofi'lizadora Ed ards Lyoflex 0.6. Se desarrolló el IQ/OQ del equipo y se verificó para que tuviera su cumplimiento en aseguramiento de calidad antes del desarrollo del procedimiento . Se prepararon las soluciones del Compuesto 1 y Captisol® en concentraciones de 0.5 mg/ml, 1.0 mg/ml y 2.5 mg/ml del Compuesto 1. El volumen de relleno se ajustó a 1 mi {1.05 gr) . Principales etapas del procedimiento: 1. - Congelar 2. - Sostener (a temperatura baja) 3. - Secar bajo vacío en dos etapas: 3.1 Secado primario - entibiado en el instante para sostener la temperatura, controlar la temperatura de estante al nivel más elevado. 3.2 Secado secundario - Reducción de presión a un valor mínimo a la temperatura superior del estante. Lotes 1 - 3 Congelación - La congelación fue de temperatura ambiente a -40° C en un periodo de 2 horas. Los estantes se mantuvieron a -40° C durante 3 horas. Secado - Se desarrolló el secado a una presión de 110 ¾3???3. La temperatura de estante se incrementó a 20° C sobre 13 horas y se sostuvo a esa temperatura por otras 13 horas adicionales . El tiempo total del procedimiento fue de 31 horas .

Resultados : Los resultados de contenido de agua fueron: Lote no. 1: 3.8% Lote no. 2: 4.0% y Lote no. 3: 4.9% Lotes 4 y 5 Como los resultados del contenido de agua de los procedimientos que condujeron a los lotes 1, 2 y 3 fueron más elevados que el valor deseado, se decidió agregar una etapa secundaria de secado a la misma temperatura y a una presión baja. Secado - Se desarrolló el secado a una presión 110 barias . Se incrementó la temperatura de estante a 20° C por más de 13 horas y se sostuvo .a esa .temperatura por otras 13 horas más. (Lote 4) u 8 horas (Lote 5). Se redujo la presión a 10 µ53G?33 durante otras 5 horas adicionales . Tiempo total del procedimiento de 36 horas. Resultados : Los resultados del contenido de agua fueron Lote 4: Placebo: 3.0%. 1 mg/ml: 3.9%. Lote 5: Placebo: 4.1% Conclusiones Como se muestra, se desarrolló un procedimiento de liofilización satisfactoria para el Compuesto 1 con Captisol®. Debido al alto porcentaje de sólidos y por lo tanto a la torta condensada, el procedimiento desarrollado es más largo que los ciclos actualmente disponibles de liofilización para péptidos y muestra una etapa secundaria de secado adicional. El Cuadro 4 resume el procedimiento desarrollado . CUADRO 4 EJEMPLO 4 Reexaminación de la actividad biológica in vivo de la solución del compuesto liofilizado (DP, 1 mg/frasco , Captisol® al 12%) Se controló la actividad biológica por medio de inhibición de la secreción de IL-2 de las células T especificas de estándar de referencia (RS) del Compuesto 1 seguido de tratamiento subcutáneo (s.c.) con la solución del compuesto liofilizado, es decir, el producto del fármaco (DP) , a dos concentraciones. Los resultados del tratamiento se comparan con aquellos para tratar ratones con Compuesto 1 (RS) en solución salina regulada con pH de fosfato (PBS) . Los resultados se muestran en los cuadros a continuación y en la Figura 2. Diseño experimental: 1.- Inmunización Dia 0 (Compuesto 1 RS emulsificado con CFS, todos ellos en cuatro soportes de pedestal) 2. - Tratamiento Dia 0 (s.c. (subcutánea) en la parte trasera del cuello en solución al 200 ul) 3. - Activación in vi tro con: Dia 10 a) Compuesto 1 RS concentraciones de 0; 0.5; 1; 2.5; 5; 10; 25; 50 y 100 g/ml b) un péptido con el orden inverso de aminoácidos del Compuesto 1 (control negativo) . c) Con A (control positivo) . 4. - Incubación de cultivo durante 20 horas a 3 °C en una incubadora de 5% C02 modificada. 5. - Medición de IL-2 por medio de ELISA.

CUADRO DE GRUPOS EXPERIMENTALES Secreción de iL-2 de ratones tratados con el compuesto 1 (dp) después de la activación in- vítro con el compuesto 1 RS (pg/ml) BQL= Debajo del límite de NA = No aplica santificación Filas 1-4 no se incluyeron en la curva EJEMPLO 5 Evaluación de la dosis óptima para el tratamiento Se utilizan las siguientes abreviaturas en guíente descripción: Adyuvante completo de Freurid Concanavalina ? Producto del fármaco Sustancia del fármaco Medio DCCM-1 enriquecido Medio de suero de becerro fetal RPMI- 1640 + Suero de becerro fetal Gama interferón Nodulo linfático Solución salina regulada con fosfato Solución estándar de referencia Subcutánea Azul tripano Factor de crecimiento beta de transformación Agua para inyección Introducción Se inmunizó un grupo de 20 ratones con g/ratón de Compuesto 1 RS . Los ratones inmunizados 1 asignaron a cinco grupos de tratamiento conforme a lo que sigue: placebo, 25, 50, 100 y 200 pg/ratón de Compuesto 1 DP (administración subcutánea) . Diez días después de la inmunización y el tratamiento, se extrajo LN y se preparó una suspensión unicelular. Se midió la secreción in vitro de IFN-? y TGF-ß por la células cultivadas en respuesta a la activación con diferentes concentraciones del Compuesto 1 RS. Diseño experimental 1. - Inmunización -Dia 0 2. - Tratamiento con el Compuesto 1 DP -Día 0 3. - Activación in vitro de células LN de los ratones tratados -Día 10 4. - Recopilación de cultivo (para la determinación de IFN-?) -Día 12 5. - Recopilación de cultivo (para la determinación de TGF-ß) -Día 13 6. - ELISA para IFN-? 7. - ELISA para TGF-ß CUADRO 7 Grupos experimentales Materiales y reactivos Animales Ratones: 20 ratones hembra BALB/c, proveedos por Harían animáis breeding center, Rehoboth. Edad a la inmunización (semanas + días) : 10 Peso promedio de los ratones incluidos en el experimento: 19.01 gr. Materiales Reactivos generales Se preparó etanol al 70% a partir de 96% de etanol diluyendo con ¾0 purificada. Preparación de las soluciones del Compuesto 1 para la inmunización Se preparó una emulsión RS del Compuesto CFA-l (500 pg/itil, 50 pg/ratón) conforme a lo siguiente: 1.- Se disolvieron 1.874 mg del Compuesto 1 en 1.87 mi de WFI para rendir una solución de 1 mg/ml. 2.~ Se sometió a prueba la solución con una banda indicadora de pH y se encontró que tenia un pH de 5. 3.- Se emulsificaron 1.5 mi de la solución con CFA de 1.5 mi resultando en una concentración final de 500 pg/ml. Preparación de las soluciones para el tratamiento El tratamiento fue por medio de una inyección subcutánea con una solución de 200 pl . Preparación de la solución de Captisol® al 12% Se disolvieron 1.2 gr de captisol® en 10 mi de WFI para dar una solución de captisol® al 12%. Procedimiento experimental Pesado de los ratones Se pesaron los ratones antes de la inmunización. El peso promedio de los mismos fue de 19.01 + 0.97 gr. Inmunización Se desarrolló la inmunización inyectando 100 microlitros de la emulsión de inmunización {50 microlitros dentro de cada soporte trasero) . Tratamiento Seguido de la etapa de inmunización, se trataron los ratones por medio de inyección subcutánea de 200 µ? del Compuesto 1 DP o con soluciones del tratamiento con captisol© al 12%, en la parte posterior del cuello de los ratones . Cultivo in vítro Se sacrificaron los ratones por medio de dislocación cervical. Se extrajo LN de las patas traseras y se transfirieron a una caja de petri estéril conteniendo aproximadamente 5 mi de RPMI . Se extrajeron las células por medio de un apretado delicado del tejido contra una red de acero inoxidable de medida de 200 micrometros red. Se cultivaron las células se centrifugaron a 300 G durante 10 minutos a RT. Se prepararon suspensiones unicelulares del LN de los pozos de cada grupo experimental. Se cultivaron suspensiones de 2.5 y 5.0 millones de células/mililitro/pozo con el Compuesto 1 RS (0-100 g/ml) en EM-1. Se determinó por medio de ELISA del medio de cultivo la secreción de IFN-? y TGF-ß, como indicación de la respuesta celular (48 horas para IFN-? y 72 horas para TGF-ß) .

CUADRO 8 Grupos Experimentales In-Vitxo Preparación de suspensiones celulares CUADRO 9 Resultados del eonteo de células y preparación de las suspensiones de células (10 X 10S ) EM-1 para agregar Total Prom. (mi) para Vol. Factor Células Células Células Células células Gpo. Células suspensión (mi) Dilut. viable muertas viables% muertas% viables viables de 10 x (x 106) 10s células/ml 115 Al 10 16 — 100 — 112 179.2 17.9 109 — 100 — 50 4 92.6 7.4 A2 10 16 47.5 76 7.6 45 2 95.7 4.3 80 4 95.2 4.8 A3 10 16 80.5 128.8 12.8 81 5 94.2 5.8 87 100 A4 10 16 — 89 142 14.2 91 100 120 2 98.4 1.6 A5 10 16 112.5 180 18 105 2 98.1 1.9 Preparación de suspensiones celulares (5 x 106/ml) Se diluyeron las suspensiones 10 x 106 células/mi al 1:2 agregando 5ml EM-1 a una suspensión de 5 mi de células . Incubación de cultivos de células LN en' placas de 48 pozos Se prepararon 3 placas de cultivo de tejido. Se agregó lo siguiente a cada placa. Control antecedente (células incubadas con medio de cultivo) 0.5 mi de suspensión de células 0.5 mi de cultivo medio (EM-1) Control positivo de sistema (células estimuladas con Con A) 0.5 mi de suspensión de células 0.5 mi de cultivo medio (EM-1) 0.5 mi de Con A 5 g/ml en EM-1 (concentración final: 2.5 µg pozo) Células incubadas con soluciones de activación del Compuesto 1 (muestras) 0.5 mi de suspensión de células 0.5 mi de Compuesto 1 RS 6.25 - 200 g/ml (concentración final 3.125 - 100 µg/ml/pozo) Incubación de cultivos de células LN en placas de 96 pozos Después de que se prepararon las placas con 48 pozos, se prepararon placas con 96 pozos aplicando 100 µ? a partir de la suspensión celular y 100 µ? de las soluciones de activación. Las placas de cultivo se incubaron a 37 °C en un incubador de CO2, al 5% humidificado, tanto como para 48 como para 72 horas. Recolección de sobrenadantes Se centrifugaron las placas cultivadas a 300 g por 10 minutos a RT. Se transfirieron los sobrenadantes (850 µ? de cada pozo) a placas espejo o a tubos. El sobrenadante se dividió en cuotas alicotas de funcionamiento (dos alicotas de 200 y una alicota de 450 µ?) . Para poder evitar un congelamiento/descongelamiento repetido de las muestras . Cada tubo se etiquetó con los siguientes detalles: 1. - Código experimental y tiempo post-incubación. 2. - Número de muestra y grupo. 3. - Activador y concentración. 4. - Fecha de recopilación sobrenadante. Los sobrenadantes se almacenaron a -20°C hasta que se utilizaron para la prueba ELISA.

Resultados CUADRO 10 Resumen de grupos Grupos experimentales : Xniroonización Tratamiento i¾at±vación ixx-v ro Grupos exp. Dosis de Sub-grupo Artículo inmunización Al 12% Captisol® Control Placebo A2 Compuesto 1 Compuesto 1 25 g/M rs A 50 µg/ratón A3 Conpuesto 1 3.125-10025 50pg/M ug/ml A4 Compuesto 1 100ug/M A5 Compuesto 1 200pg/ml Concentraciones de Citosina Final CITOSINA. FINAL (pg/ml) (2.5 millones da células/pocdllo) Concentración Placebo 50 ug í 100 200 de Ccngpuesto 1 g/ pg/M 3.125 pg/ml 321.3 54.1 64.5 103.9 6.25 g/ml 238.6 81.8 116.1 126.1 12.5 pg/ml 397.1 123.1 180.9 129.0 25 pg/ml 655.5 215.1 262.8 240.3 50 pg/ml 573.9 292.5 518.3 378.1 100 pg/ml 926.0 531.8 582.7 524.1 Con A 322.6 356.2 337.4 BQL CUADRO 11-B Concentraciones finales de citosina CITOSINa. FINAL (pg/ml) (5 millones de células/pozo) Los resultados también se presentan en las Figuras 3- 4. Observaciones Secreción de IFN-? 1.- En el grupo de placebo, se mostró una respuesta lineal a la dosis con. la activación de Compuesto 1 in vitro. Esta gráfica se asemeje a la gráfica obtenida para el modelo Ex-vívo con la misma dosis de inmunización (50 yg/ratón) y medio de cultivo (E -1) . 2. - Hubo una respuesta a la dosis con la activación del Compuesto 1 in vitro con todos los grupos probados . 3. - Se apreció una inhibición significativa de la secreción IFN-? con todas las dosis utilizadas para el tratamiento (un promedio de inhibición de 95% con la dosis tratada de 25 g/ratón) . Se puede encontrar una correlación inversa entre la dosis servida para el tratamiento y el porcentaje de inhibición, principalmente cuando se utilizaron 5xl05 células/pozo. Cuando se utilizaron 2.5xl06 células/pozo, el tratamiento con animales con 50 g/ratón, dieron mejor inhibición que 100 ó 200 ig . El punto de 25 pg es faltante (carencia de células) . 4. - Se apreció una mejor inhibición cuando se utilizaron 5xl06 células/pozo en lugar de 2.5xl06 células/po'zo . 5. - En la escala lineal de las gráficas, la SD del % de inhibición fue baja. 6. - El problema técnico con A es aparente cuando se utilizaron 2.5xlD6 células /pozo .

Secreción de TGF-ß 1.- En el grupo de placebo, no se apreció ninguna respuesta a la dosis sobre activación in vitro con el Compuesto 1. El nivel secretado de TGF-ß fue debajo del limite de detección de la prueba ELISA en los demás grupos de tratamiento.

EJEMPLO 6 Optimizaciones del ciclo de secado por congelación con el compuesto 1 y Captisol® para la inyección (0, 0.5, 1.0 y 2.5 mg/f asco) Obj etivo El objetivo de este estudio fue optimizar el ciclo de secado por congelación para el Compuesto 1 con Captisol® para la inyección para mejorar la forma de la torta de liofilización y evita el colapso de fractura. Por lo tanto se decidió mejorar y optimizar el ciclo de liofilización . Este ciclo se transfiere a los liofilizadores de producción para la manufactura de los lotes de la fase I. Optimización del procedimiento Se prepararon lotes del péptido a concentraciones de 0.5 mg/ml 1.0 mg/ml, 2.5 mg/ml y Placebo y se desarrollaron varios ciclos de secado por congelación. La secadora por congelación que se utilizó fue un liofilizador Edwards Lyoflex 0.6. Se probaron la solubilidad, el contenido de agua y la apariencia de la. torta. De acuerdo con los resultados obtenidos, se seleccionó un nuevo ciclo para el Compuesto 1. Debido al alto porcentaje de sólidos (12%) y por lo tanto de la torta condensada, el nuevo procedimiento es más prolongado que el ciclo de liofilización en el Ejemplo 3 y muestra la etapa adicional primaria de secado. El Cuadro 12 resume las diferencias entre los procedimientos.

CUADRO 12 Etapa Liofilización, Nuevo ciclo de ciclo para el liofilización Compues o 1 y para el Captisol® del Compuesto 1 y Ejemplo 3 Captisol® Carga 5° C 5° C Congelamiento 2 horas a -40° 6 horas a -45° C C Sustentación 3 horas a -40° 3 horas a -45° a baja C C temperatura Secado A 20° C ? -20° C primario : presión de 13 19 horas E a a 1 horas 110 presión 150 Etapa II liba ías gibarías a 25° C 13 horas Sostener a presión 150 20° C (25° C) presión de 13 µbarias horas 110 8 horas presión barias 150 pbarias Secado presión de 5 secundario : horas 10 µ arias Almacenaje a 5° C 5° C Tiempo de 36 horas 49 horas procedimient o EJEMPLO 7 Efecto del Compuesto 1 (administrador en Captisol®) en síntomas de lupus en el ratón hembra SLE propenso a (NZBxNXW) Fl. Los pacientes que participaron en las pruebas clínicas deben ser tratados por el Compuesto 1 utilizando Captisol® (éter sulfobutílico de beta-ciclodextrina sódica) como excipiente. Por esta razón, era importante determinar si el tratamiento de los ratones (NZBxNZW) Fl con la formulación del Compuesto 1 dado en Captisol®, tendrían los mismos efectos benéficos en síntomas de Lupus como se observó cuando esta sepa de ratones fue tratada con el Compuesto 1 en PBS . Hasta este extremo, los ratones hembra (NZBxNZW) Fl (aproximadamente de 8 meses de edad) , se dividieron en 3 grupos que fueron tratados subcutáneamente una vez a la semana durante 10 semanas ya sea con Captisol® únicamente (n=8) o con 25 o 50 µg/ratón del Compuesto 1 en Captisol© (n=9 y 10, respectivamente) . Estas dosis fueron seleccionadas ya que los estudios previos indicaron que las dosis en esta escala eran más efectivas para mejorar los síntomas de SLE que las dosis más altas comprobadas (100 y 200 µg rató ) . Se utilizó el mismo lote de la sustancia del fármaco en este estudio y en la primera prueba clínica de la Fase 1 con el Compuesto 1.

Se les dio seguimiento a los ratones para verificar los anticuerpos anti-dsDNA y para proteinura. Cuando se sacrificaron los ratones, se determinó la intensidad de ICD en ríñones . Como se puede apreciar en la Figura 5, no se pudo observar ninguna diferencia significativa entre los grupos en los niveles de anticuerpos específicos a dsDNA después de 10 inyecciones del tratamiento. El Cuadro 13 también muestra que se pudo observar el efecto benéfico del tratamiento con el Compuesto 1, iniciando desde la 5a inyección y se sostuvo hasta la 10a inyección. Los niveles medios de proteinura en el grupo de control con Captisol® fueron consistentemente más elevados que en los grupos tratados con el Compuesto 1. El Cuadro 13 también muestra que se observó una reducción en la intensidad de ICD en ríñones de ambos grupos de dosis con el Compuesto 1. Hubo una tendencia general que mostraba que una dosis más baja (25 g/ratón) era más efectiva que la dosis más elevada (50 g/ratón) para reducir los síntomas clínicos de SLE en ratones .

CUADRO 13 Síntomas clínicos de SLE en (NZBXKZW) Fl ratones tratados con 25 ó 50 pg/ratón del Compuesto 1 (en Captisol®) Proteinuria media ± SEM (g/L) ICDa Grupo de Número de semanas seguido del {Media estudio inicio del tratamiento SEM) 5 7 8 10 Captisol® 1.81 ± 5 .74 ± 4.5 + 4.46 + 2.29 i 1.22 3.13 2.92 2.93 0.28 (n=8) (n=8) (n=7)b (n=7)b (n = 7) Compuesto 0.75 ± 0 .81 ± 1.09 ± 1.29 + 1.90 1 1 (50 0.3 0.3 0.4 0.3 0.23 [Jg/ratón) (n=10) ( n=10) (n-10) (n=10) (n=10) Compuesto 0.16 + 1 .26 ± 0.5 ± 0.56 ± 1.22° : 1 (25 0.05 1.09 0.31 0.3 0.32 µ?/ ratón) (n=9) (n=9) (n=9) (n=9) (n=9) a Depósitos del complejo inmune = ICD. Escala de intensidad ICD: 0 = ninguna; 1 = moderada; 2 = severa; 3 = severa/extremadamente intensa.. b Resultó en la muerte de un animal con un alto nivel de proteinura en una media más inferior del grupo . ° p<0.05 (comparado con los ratones de control tratados con Captisol®; Mann-Whitney) . La Figura 6 muestra secciones representativas de un riñon de cada grupo de tratamiento. Las secciones de la fila superior son de un ratón tratado con Captisol®, las secciones de la fila media son de un ratón tratado con el Compuesto 1 de 50 g/ratón y las secciones de la fila inferior son de un ratón tratado con el Compuesto 1 25 µg/ratón. Se puede apreciar que la intensidad de los depósitos del complejo inmune observados en secciones de riñon de los ratones 'tratados con el Compuesto 1 (disuelto en Captisol®) en cualquier nivel de dosis fue mucho menor que el observado en el grupo de control.

EJEMPLO 8 Fase 1 Estudio clínico Fase 1 A, mul icentro , aleatoriaado, doble ciego, controlado por Placebo , una sola dosis , estudio de cuatro etapas para evaluar la capacidad de tolerancia y seguridad del Compuesto 1 en inyección subcutánea con Captisol® en s etos con SLE . Este fue el primer estudio clínico con' el Compuesto 1 con Captisol® en humanos, que se condujo en Francia. Su objetivo principal fue evaluar la capacidad de tolerancia y seguridad del Compuesto 1 en Captisol®, administrado como una sola inyección subcutánea SC a sujetos con SLE. Su objetivo secundario fue evaluar las respuestas inmunológicas siguiendo una sola dosis subcutánea SC del Compuesto 1 en Captisol© en estos suj etos . Participaron en el estudio 36 (treinta y seis) sujetos. Para ser elegible para la inclusión en el estudio, los pacientes de SLE debieron haber cumplido por lo menos con cuatro criterios utilizados para el diagnóstico de lupus por el Colegio Americano de Reumatologia . Los pacientes también debieron haber sido estables, con una enfermedad estable ligera/moderada, y haber apuntado una calificación menor o igual a 10 en el índice de actividad de la enfermedad SLE, SLEDAT .

Cada paciente recibió una sola inyección subcutánea SC del Compuesto 1 reconstituido para inyección o su placebo coincidente (Captisol®) de acuerdo con la asignación del grupo siguiente. · Grupo A: Placebo (Captisol®) • Grupo B: 0.5 mg del Compuesto en Captisol® • Grupo C: 1 mg del Compuesto en Captisol® Grupo D: 2.5 mg del Compuesto en Captisol® Se desarrolló una bateria estándar de pruebas de seguridad, incluyendo la recopilación de orina y sangre para las pruebas de laboratorio, esto se elaboró en la etapa de control y monitoreo durante el dia de la-dosificación, a las 24 horas post-dosis a las 2, 4 y 8 semanas después de la dosificación. Previo a la dosificación, y en las visitas de seguimiento programadas, se retiraron las muestras para las pruebas inmunológicas relacionadas con SLE, para los anticuerpos de anti-Compuesto 1 y para el ensayo de proliferación PBL. Se realizaron las siguientes pruebas de inmunología: · Prueba de Coomb (directa e indirecta) » C3, C4 y CH50 • IgG, IgM e IgA total ANA, anti-dsDNA (ensayo Farr) , anti-ssD A • Anti-ENA (incluyendo anti-La, anti-Ro, anti-RNP, anti-Sm) • Anticuerpos anti-cardiolipina • VDRL • Anticuerpos FTA » Factor reumatoide Se evaluó la seguridad y capacidad de tolerancia al Compuesto 1 en Captisol® en la población sujeto, basándose en el siguiente criterio. • Ocurrencia de ABs, incluyendo erupción de SLE » Signos vitales • Electrocardiograma de 12-guías • Cambios en el examen físico • Pruebas rutinarias del laboratorio clínico • Calificación SLEDAI e Resultados de la prueba inmunológica Detalles del estudio clínico de la Fase la Investigadores principales del estudio y sitios respectivos del mismo: 6 (seis) centros de estudio en Francia: Profesor Jean Charles Piette (Hospital La Pitie Salpetriere, París), Profesor Oliver eyer (Hospital Bichat, París) , Profesor Jean Revuz (Hospital Henri Mondor, Credeil) , Profesor Loic Guillevin (Hospital Avicente, Bobigny) , Profesor Eric Hachulla (Hospital Claude Huriez, Lille Cedex) , Profesor Xavier ariette (Hospital Bicetre, Kremlin Bicetre) . Compuesto 1 (en Captisol®) , Placebo, agua para ámpulas de inyección, dosis y modo de administración. Se inyectaron frascos del Compuesto 1 en Captisol® (120 mg/frasco) subcutáneamente como una sola dosis por sujeto en las siguientes dosificaciones: 0.5 mg del Compuesto 1/frasco en Captisol®, i mg del Compuesto/frasco en Captisol® y 2.5 mg del Compuesto 1/frasco en Captisol®. Placebo para el Compuesto 1: 120 mg del Captisol®/frasco (idéntico en apariencia a los frascos del Compuesto 1 en Captisol®) . Metodología Esto fue un estudio de cuatro etapas de centros múltiples, aleatorizado; de doble ciego, controlado con placebo, utilizando una sola inyección subcutánea del Compuesto 1 o un placebo. Se monitorearon los pacientes SLE hasta 21 días previos a los procedimientos de línea basal. Cada sujeto elegible fue aleatorizado a uno de los 4 grupos de tratamiento: inyección subcutánea ya sea de 0.5, 1 ó 2.5 mg del Compuesto 1 o su placebo coincidente. Todos los sujetos fueron admitidos en la clínica en el día de la pre-dosificación. Cada sujeto recibió una sola dosis de uno de los tratamientos que se enlistaron anteriormente. Se dieron de alta los sujetos de la clínica 24 horas después de la dosificación. Después se controlaren ios sujetos a la semana 2, 4 y 8 seguido de la dosificación. Las muestras de sangre (suero y sangre total) ¡. para las pruebas de laboratorio de seguridad se retiraron en la etapa de Control, Día de dosificación (previa a la dosis), al Día 2 (post-dosis) a la semanas 2, 4 y 8 (visita de Conclusión) , Las muestras sanguíneas para l s pruebas inmunológicas se retiraron en las etapas de- Control,. Dia de dosificación (pre-dosis) en xas semana y 8; la proliferación da linfocítos sanguíneos periféricos ¡.PB.L'i se fe-valuó en los días de dosificación (pre-riosisj , y a las semanas 2, 4 y 8. . Nrátórp_. de_- suj_istos__ _ tot_al y para_ cad» tratamiento) : Se clasificaron aleatoriamente 36 (treinta y seis) sujetos en este estudio como sigue; 9 sujetos en el. grupo de tratamiento de 0.5 >agf 9 sujetos en el tratamiento de í mg y 1C sujetos en el tratamiento de 2,5 mg. y '¿ sujetos en ei grupo de tratamiento con. placebo. Diagnóstico <¿ ceite io princigal para la inclusión Los sujetos elegibles para, este estudio frieron pacientes con SLE que complementaron y requisitaron por lo menos cuatro criterios de diagnóstico del Colegio Americano de Reumatologia (ACR) . Su condición de enfermedad tenia que ser estable, de ligera a moderada con una calificación igual o menor a 10 en el índice de actividad de la enfermedad de SLE, en el año 2000 actualizado (SLEDAI 2K) . Los pacientes con SLE excluidos de la participación, fueron aquellos que reportaron un asma inestable o severo, infarto, infarto agudo al miocardio, angina inestable, hemorragia cerebral, embolismo pulmonar durante los seis meses previo al monitoreo del estudio. Los pacientes con SLE que tuvieron alguna condición quirúrgica o médica inestable o clínicamente significativa, o diabetes melitus, enfermedad en el hígado (como cirrosis, hepatitis activa, hipertensión portal y/o ascitos hipertensión clínicamente significativa, alguna historia médica o cualquier malignidad, diálisis o enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD) también fue excluido de la participación en el estudio. También se . excluyeron en la participación del estudio los pacientes con SLE que sufrieron plasmaféresis o que fueron tratados durante los tres meses previo a la selección con uno de los fármacos enlistados a continuación con prednisona 30 mg/al día o mayor (una dosis equivalente de otro corticoesteroide) , con corticoesteroide intravenosos, con inmunoglobina intravenosa G (IgG) , con anticoagulahtes orales y cualesquiera agentes citotóxicos (por ejemplo, con azatioprina, clorambucil, ciclofosfamida, mofetil micofenolato, con metotrexatof o con tacrolimus (fármaco inmunosupresor) . Además, los pacientes SLE que iniciaron el tratamiento con corticoesteriodes (más de + 10 mg/día con prednisona, o una dosis equivalente de otro corticoesteroide) y/o anti-malaria, durante los últimos 3 meses previo a la selección, fueron excluidos del estudio. Aunque hizo un. gran esfuerzo para retener los tratamientos médicos SLE de linea basal a lo largo del curso del estudio, los investigadores sin embargo, no pudieron cambiar el tratamiento médico participante en ningún momento, durante el estudio para poder mantener y optimizar el bienestar del paciente. Criterios para la evaluación. Seguridad; Se evaluaron los siguientes parámetros de seguridad en las etapas de control, selección, o entre la hospitalización y en las visitas de seguimiento incluyendo en la visita de . conclusión: signos vitales (presión sanguínea sistólica, presión sanguínea diastólica, pulso, saturación con oxígeno, temperatura y peso) , electrocardiograma de 12 guías, cambio en el examen físico y pruebas rutinarias de laboratorio clínicas. Se registraron los eventos adversos al día de la dosificación en cada visita posterior a la anterior. Inmunología : Se desarrollaron pruebas inmunológicas relacionadas con SLE en la etapa de selección, durante la hospitalización y en las visitas de seguimiento, incluyendo la visita de conclusión. ¦Las respuestas inmunológicas relacionadas con el fármaco fueron . seguidas utilizando el ensayo de proliferación PBL y el ensayo con anticuerpos, anti-Compuesto 1 en el día de la dosificación y, en las visitas de seguimiento incluyendo la visita de Conclusión. Actividad de la enfermedad: ¦ La valoración de la actividad de la enfermedad utilizando la puntuación .del índice de actividad de enfermedad ¦ de SLE, en el año 2000 actualizado (SLEDA.T 2K) se evaluó en las etapas de Selección, durante la hospitalización y en .las visitas de seguimiento incluyendo la vista de Conclusión. Métodos estadísticos: Se utilizó un software SAS® versión 9.0 para analizar y presentar datos recopilados durante este estudio. No se desarrolló ningún cálculo de potencia y no se condujo ninguna prueba de hipótesis formal para este estudio de Fase la.

Experiencias adversas: Se presentó la incidencia y la frecuencia de experiencias adversas por medio de Clase de órganos del sistema y por la terminología preferida de acuerdo con el diccionario edDRA versión 5.0. Los datos se tabularon por grupo de tratamiento. Datos de laboratorio clínico: Estadísticas descriptivas de valores de laboratorio, incluyendo el número de observaciones, desviación estándar, desviación media, mínima y máxima y se determinaron para, la , etapa de Selección, Día 1, (pre-dosis)- , Día 2, Semana 2, 4 y 8, y se presentaron por grupo de tratamiento.' También se presentaron los cambios de línea basal a cada visita/punto, de tiempo, para cada asignación por tratamiento. El porcentaje de los resultados anormales (bajo y alto, donde aplicaba) se presenta sobre una base de parámetro, por. grupo de tratamiento y por punto de visita/periodo. Se desarrollaron análisis de turno desde la línea basal a 24 horas post- dosis y de la línea basal hasta la visita de conclusión. Signos vitales : Estadísticas descriptivas para los signos vitales incluyen el número de observaciones, la media, desviación estándar, valores medianos, mínimos y máximos, y se determinaron para la etapa de Selección, Día 1 (pre y post- dosis, y en cada punto de periodo) . Dia 2, Semanas 2, 4 y 8, se tabulan por el tratamiento asignado. Los cambios de linea basal a cada punto de periodo/visita, se presentan por visita y por asignación de tratamiento. Peso : Estadísticas descriptivas de peso (kilogramos) en la linea basal, terminación y cambio de la linea basal, que se presente por grupo de tratamiento. Electrocardiograma (ECG) Estadísticas descriptivas de los parámetros de electrocardiograma en línea basal, terminación y cambios desde la línea basal, son los que se presentan en este párrafo. Se presenta el análisis, de turno conforme a los cuadros de turno .desde línea basal hasta la conclusión - entre parámetros- normal/anormal , o presente/ausente del electrocardiograma (ECG) . Se identificaron las medidas potencial y clínicamente significativas (PCS) QTc (Bazett) , de acuerdo con los criterios predefinidos. Se presentan los cuadros de análisis de. cambio entre el .PCS y el cuadro de incidencia, de PCS y QTc no-PCS absoluta (Bazett) de cambio de PCS en QTc (Bazett) desde la línea basal hasta cualquier visita. Examen físico: Se analizaron, los resultados del examen físico por incidencia de sujetos con hallazgos anormales o normales para cada sistema corporal en la visita de Linea basal y en la visita de terminación. Los análisis de cambio entre anormal y normal y viceversa también se aplicaron. Cuando no hubo cambio que ocurriera en la linea basal, se definió como "otros". Pruebas inmunológicas relacionadas con el Compuesto 1 Para los parámetros inmunológicos, estadísticas descriptivas, incluyendo el número de observaciones, media, desviación estándar, mediana y valores mínimo y máximo, se calcularon en este caso y se presentaron por un grupo de tratamiento y por visita. El cambio desde la línea basal a cada visita de seguimiento también se presenta por un grupo de tratamiento. Cuando aplicaba, se presentó el número y porcentaje de sujetos con resultados negativos/positivos por grupo de tratamiento y visita. SLEDAI 2K Estadísticas descriptivas incluyendo desviación estándar, media,, valores mínimos y máximos, . mediana, de SLEDAI 2K. Resultados del estudio, clínico de fase la: Disposición sujeta y características SLE Se ingresaron treinta y seis (36) sujetos del estudio y- completaron este estudio por protocolo. La mayoría de sujetos (34) en todos los grupos de tratamiento fueron del sexo femenino (94.4%) y caucásicas (30, 83.3%). La edad media para todos los grupos de tratamiento fue de 35.6 años (rango de media de 32 a 39 años) . La mayoría de los sujetos (91.7%) tenían entre 4 a 6 criterios de diagnóstico según el Colegio americano de reumatología (ACR) y una puntuación de grupo de media SLEDAI 2K que variaba de 2.1 a 4.1. Resultados de seguridad No hubo diferencia - prominente entre los grupos de tratamiento con el fármaco de estudio y el grupo de placebo en la incidencia de AEs . Los AEs más comunes en todos los grupos fueron dolor de cabeza, clasificado de ligero a moderado en naturaleza y una reacción en el sitio de inyección clasificada como ligera naturaleza. No se apreció respuesta. a la dosis. · No hubo evento adverso grave (SAE) o AE clasificado como grave que haya ocurrido durante el estudio. No hubo ningún evento clínicamente significativo atribuible al fármaco bajo estudio que se pudiera apreciar para los valores de hematología, bioquímica o análisis de orina . .. . No hubo efecto clínicamente significativo atribuible al fármaco bajo estudio que se apreciará para los parámetros de signos vitales (presión sanguínea sistólica, presión sanguínea diastólica) , pulso, saturación de oxígeno) . No hubo efecto clínicamente significativo atribuible al fármaco bajo estudio que se pudiera observar para temperatura y peso. No hubo diferencias clínicamente significativas que se apreciará entre los grupos tratados con el Compuesto 1 y . el placebo para las medidas categóricas de electrocardiograma ECG y los parámetros de ECG digitalizados . No hubo valor absoluto QTc de la PCS y no hubo cambio QTc desde línea basal > 60 mseg que se hubiera registrado. .Un número similar en sujetos en los grupos tratados con Compuesto 1 y con placebo tuvo cambio QTcB desde línea basal entre 30 a 60 mseg. No se anotaron efectos clínicamente significativos de Compuesto 1 en el examen físico. Resultados inmunológicps La evaluación de muestras de suero de todos los sujetos, indicaron que .una sola administración subcutánea del Compuesto 1 a los niveles de dosis de 0.5, 1 y 2.5 mg/paciente .no indujo , el desarrollo de anticuerpos específicos al anhi-Compueato 1. Siete sujetos tuvieron una respuesta al Compuesto 1 sobre el valor límite. Estos niveles elevados de anticuerpos no estaban presentes previo a la dosificación. No hubo incrementos en los niveles de anticuerpos que se observaran en el periodo de seguimiento (dos meses) del estudio. Los sueros de estos sujetos fueron analizados para el isotipo de los anticuerpos reactivos. La respuesta en dos de los sujetos estuvo asociada con el isotipo IgM y con el isotipo IgG en los otros dos . Ninguno de los siete tenía anticuerpos IgE específicos . El ensayo de linfocitos sanguíneos periféricos (PBL) mostró que el 50% de los sujetos (18) fueron clasificados como activos a la respuesta (SI>2) con distribución similar en. todos los grupos de tratamiento. La respuesta de células T fue relativamente baja y no hubo asociación entre .la dosis de tratamiento al Compuesto 1 o la concentración utilizada en el ensayo y se pudo detectar un estatus de activo a respuesta/sin respuesta, tomando en consideración que solamente una dosis . subcutánea SC del fármaco bajo estudio fue administrada. Además no se observó indicio de incidencia incrementada del estatus de respuesta durante el transcurso del tiempo. El ensayo de toxoide tetánico (TTX) qu.e sirve corno un control . de seguridad muestra que la respuesta a TTX es conservó a lo largo de todo el periodo de estudio en todos los grupos de tratamiento indicando que el Compuesto 1 en Captisol© no cambió la respuesta inmunológica al antígeno de respuesta libre TTX.

Los hallazgos inmunológicos son el resultado de la administración de solamente una sola dosis de Compuesto 1 del fármaco bajo estudio. Resultados de la actividad de la enfermedad No hubo efecto clínicamente significativo del Compuesto 1 en la puntuación SLEDAI, (cambio de 3, < 12 puntos) que se pudieren notado durante el estudio excepto para un sujeto en el grupo de tratamiento con 0.5 mg para quien,- se les registró un cambio 'e la puntuación SLEDAI o 2 a 10 puntos entre la línea basal y la semana 4 basándose en un análisis,. de orina que mostraba pyuri. Este hallazgo en el análisis de orina no fue confirmado por el investigador como una erupción de lupus por definición de protocolo y fue resuelto sin cambio de tratamiento. Conclusiones . Este estudio de Fase la mostró que una sola dosis inyectada subcutáneamente de Compuesto 1 con 0.5, 1 o 2.5 mg en 120 mg de Captisol® era segura y bien tolerada y permitió la continuación hacia .el estudio de dosis múltiple de fase Ib. EJEMPLO 9 ESTUDIO CLÍNICO DE FASE IB La fase I, múltiples centros, binacional, clasificado aleatoriamente, doble ciego,. Cuatro etapas controlado con placebo,, estudio de dosis múltiple para evaluar la capacidad de tolerancia y seguridad del Compuesto 1, en inyecciones subcutáneas con Captisol® en sujetos SLE. Este estudio se desarrolla para evaluar la seguridad y capacidad de tolerancia de la administración repetida subcutánea de Compuesto 1 a sujetos SLE. El objetivo secundario del estudio es evaluar las respuestas inmunológicas seguida la administración subcutánea repetida se del Compuesto 1 en Captisol® en.suj.etos con SLE. El Compuesto 1 se administra, en dosis de 0.5, 1.0 o 2.5 mg en Captisol®. El producto bajo investigación es administrado en cualquier otro .día (excluyendo fines de semana) para un total .de 12 inyecciones subcutáneas se, es decir, 3 dosis a la semana por 4 semanas. Los sujetos son controlados en visitas planeadas que fueron planeadas a las 2, 4, 8 y 12 semanas después del inicio de la dosificación. Se evaluó la seguridad y la capacidad de tolerancia utilizando . pruebas similares a aquellas descritas en el estudio clínica de fase la anterior. Resultados . Este estudio de fase Ib muestra que múltiples dosis inyectadas subcutáneamente del Compuesto 1 de 0.5, 1 o 2.5 . mg en 120 mg de Captisol®, son seguros y bien tolerados . .. .

Claims (1)

1. NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiendo descrito el presente invento, se considera como una novedad y, por lo tanto, se reclama como prioridad lo contenido en las siguientes : REIVINDICACIONES 1. - Una composición farmacéutica, que comprende un vehículo acuoso; desde 0.1 mg/ml a 20 mg/ml de la composición de una sal farmacéuticamente aceptable de un péptido que tiene la. fórmula estructural NH2 - Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp lie Arg Gln Pro Pro Gly Lys Glu Glu Trp lie Gly -COOH (SEQ ID NO: 1); y un ß-ciclodextrina sustituida en una cantidad efectiva para disolver el péptido en el vehículo acuoso, caracterizado porque la composición tiene un pH entre 4 y 9. 2. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la concentración de la sal del péptido es de por lo menos 0.5 mg/ml. 3. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada porque la concentración de la sal del péptido es de 0.5 mg/ml a 10 mg/ml. 4. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada porque la concentración de la sal del péptido es de 0.5 mg/ml a 2.5 mg/ml. 5. - La composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque la composición tiene un pH entre 6.5 y 8.5. 6. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque la composición tiene un pH entre 7.5 y 8.5. 7. - La composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizada porque la sal farmacéuticamente aceptable es una sal de acetato. 8. - La composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizada porque el ß-ciclodextrina sustituida es un hidropropil r un éter sulfobutilico , o un éter . sulfobutilico ß-ciclodextrina sustituida. 9. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 8, ca acterizada porque el ß-ciclodextrina sustituida es un éter sul fobutilico ß-ciclodextr ina sustituida. 10. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada porque el ß-ciclodext riña sustituida es hepta~(éter sulfobutilico ) - ß-ciclodextrina . 11. - La composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10r que además comprende un regulador farmacéuticamente aceptable en una cantidad y de un tipo adecuado para hacer que el pH de la composición farmacéutica se encuentre dentro del rango de 4 a 9. 12. - Una composición farmacéutica, que comprende un vehículo acuoso; desde 0.1 mg/ml a 20 mg/ml de la composición de una sal de acetato de un péptido que tiene la fórmula estructural WHa - Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp lie Arg Gln Pro Pro Gly Lys Glu Glu Trp lie Gly - COOH (SEQ ID NO: 1) ; y de 70 mg/ml a 170 mg/ml de la composición de hepta- (éter sulfobutilico ) - ß - ci el odextriña , caracterizada porque el péptido y el hepta- (éter sulfobutilico) - ß-ci clodextr ina se disuelven en el vehículo acuoso; y caracterizada porque la composición tiene un pH entre 6.5 y 8.5. 13.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 12, caracterizada porque la concentración de la sal de acetato del péptido se de por lo menos 0.5 mg/ml. 14.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 13, caracte izada porque la concentración de la sal de acetato del péptido es de 0.5 mg/ml a 10 mg/ml. 15. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 13, caracterizada porque la concentración de la sal de acetato del péptido es de 0.5 mg/ml a 2.5 mg/ml. 16. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 13, caracterizada porque la concentración de hepta- (éter sulfobutilico) - ß-ciclodext.rina es de 120 mg/ml, y caracterizada porque el pH de la composición se encuentra entre 7.5 y 8.5. 17..- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 16, caracterizada porque la concentración de la sal de acetato del péptido es de 1.0 mg/ml. 18.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 16, caracterizada porgue la concentración de la sal de acetato del péptido es de 2.5 mg/ml. 19.- Un método para aliviar síntomas de un lupus sistemático eritematoso (SLE) en un sujeto humano que comprende administrar el sujeto humano la composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18 en una cantidad efectiva para aliviar los síntomas de SLE en el sujeto humano. 20.- La composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, para utilizarla en el tratamiento de SLE en un sujeto humano. 21.- Un. procedimiento para fabricar la composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, que comprende los pasos de: a) preparar una solución de un ß-ciclodextrina sustituida en un vehículo acuoso en una concent ación predeterminada; b) agregar una cantidad predeterminada de una sal farmacéuticamente aceptable del péptido NH2 - Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp lie Arg Gln Pro Pro Gly Lys Glu Glu Trp lie Gly - COOH (SEQ ID NO: 1) a la solución del paso a) ; c) ajustar el pH de la solución del paso b) hasta que el péptido se disuelve en la solución; y d) si es necesario, ajustar el pH de la solución del paso c) a un pH de 4 a 9, de se modo fabricando la composición farmacéutica. 22. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque la concentración predeterminada del ß-ciclodextrina sustituida es tal, que resulta en una concentración final del - ß-ciclodextrina sustituida en la composición farmacéutica desde 70 mg/ml a 170 mg/ml . 23. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque la concentración predeterminada del ß-ciclodextrina sustituida es tal, que resulta en una concentración final del ß-ciclodextrina sustituida en la composición farmacéutica de 120 mg/ml. 24. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque la cantidad predeterminada de péptido es tal, que resulta en una concent ación final del péptido en la composición farmacéutica de por lo menos 0.1 mg/ml. 25. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque la cantidad predeterminada de péptido es tal, que resulta en una concentración final de péptido en la composición farmacéutica de por lo menos 0.5 mg/ml. 26. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 21, caracte izado porque la cantidad predeterminada de péptido es tal, que resulta en una concentración final de péptido en la composición farmacéutica de 2.5 mg/ml, 2.0 mg/ml, 1.0 mg/ml, 0.5 mg/ml o 0.1 mg/ml. 27. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque el paso b) además comprende mezclar la solución durante un lapso de una hora. 28. - El procedimiento de conformidad con la -reivindicación 21, caracterizado porque en el paso c) el pH se ajusta utilizando HC1 o NaOH 1.0N . 29. - El procedimien o de conformidad con la reivindicación 21, que además comprende filtrar la solución del paso d) a través de un filtro de acetato de celulosa. 30.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque la concentración predeterminada del ß-ciclodextrina sustituida es tal, que resulta en una concent ación final del ß-ciclode trina sustituida en la composición farmacéutica de 120 mg/ml; la cantidad predeterminada de péptido es tal, que resulta en una concent ación final de péptido en la composición farmacéutica de 2.5 mg/ml, 2.0 mg/ml, 1.0 mg/ml, 0.5 mg/ml o 0.1 mg/ml; el paso b) además comprende mezclar la solución durante un lapso de una hora; y en el paso c) el pH se ajusta utilizando HC1 p NaOH 1.0N, que además comprende filtrar la solución del paso d) a través de un filtro de acetato de celulosa. 31. - Una composición farmacéutica preparada por el procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 21 a 30. 32. - Un procedimiento para liofilizar la composición f armacéutica de conformidad con la reivindicación 2, que comprende los pasos de: a) disminuir la temperatura de la composición farmacéutica a -40°C; b) mantener la temperatura de la composición farmacéutica a -40°C por un tiempo predeterminado; c) elevar la temperatura de la solución a 20°C; d) mantener la temperatura en 20°C por un tiempo predeterminado; . y e) reducir la presión y mantener la temperatura a 20 °C por un tiempo predeterminado, de se modo liofilizando la composición farmacéutica. 33. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el paso a) se lleva a cabo dentro de un lapso de 2 horas. 34. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el paso b) se lleva a cabo dentro de un lapso de 3 horas . 35. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el paso c) se lleva a cabo dentro de un lapso de 13 horas . 36.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el paso c) se lleva a cabo a una presión de llOpbar. 37. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el paso d) se lleva a cabo dentro de un lapso de 13 horas. 38. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el paso d) se lleva a cabo a una presión de llO bar. 39. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque en el paso e) la presión se reduce a lOpbar. 40. - -El procedimiento de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el paso e) se lleva a cabo dentro de un lapso de 5 horas . 41. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el paso a) se lleva a cabo dentro de un lapso de 2 horas; el paso b) se lleva a cabo dentro de un lapso de 3 horas; el paso c) se lleva a cabo dentro de un lapso de 13 horas y a una presión de llO bar; el paso d) se lleva a cabo dentro de un lapso de 13 horas y a una presión de HC^bar; y el paso e) se lleva a cabo dentro de un lapso de 5 horas y a una presión de lO bar. 42. - Una composición farmacéutica liofilizada preparada por el procedimien o de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 32 a 41. 43. - Un procedimiento para liofilizar la composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 2, que comprende los pasos de: a) disminuir la temperatura de la composición farmacéutica a- -45°C; b) mantener la temperatura a -45°C por un tiempo predeterminado; c) elevar la temperatura de la solución a -20°C; d) elevar la temperatura de la solución a 25 ° C ; y mantener la temperatura a 25°C por un tiempo predeterminado, de ese modo liofilizando la composición farmacéutica. 44. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porgue el paso a) se lleva a cabo dentro de un lapso de 6 horas . 45. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porgue el paso b) se lleva a cabo dentro de un lapso de 3 horas. 46. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque el paso c) se lleva a cabo dentro de un lapso de 19 horas. 47.- El procedimiento de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque el paso c) se lleva a cabo a una presión de 15C^bar. 48. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque el paso d) se lleva a cabo dentro de un lapso de 13 horas. 49. - El pxocedimiento de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque el paso d) se lleva a cabo a una presión de 150µbar. 50. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque el paso e) se lleva a cabo dentro de un lapso de 8 horas. 51. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque el paso e) se lleva a cabo a una presión de 150 bar. 52. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque el paso a) se lleva a cabo dentro de un lapso de 6 horas; el paso b) se lleva a cabo dentro de un lapso de 3 horas; el paso c) se lleva a cabo dentro de un lapso de 19 horas y a una presión de 150 bar; el paso d) se lleva a cabo dentro de un lapso de 13 horas y a una presión de 150 bar; y el paso e) se lleva a cabo dentro de un lapso de 8 horas y a una presión de- 150pbar. 53. - Una composición farmacéutica liofilizada preparada por el procedimiento de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 43 a 52. 54.- La composición farmacéutica liofilizada de conformidad con la reivindicación 53/ caracterizada porque el contenido de agua de la composición es menor al 5%. 55. - La composición farmacéutica liofilizada de conformidad con la reivindicación 54, caracterizada porque el contenido de agua de la composición es menor al 4.0%. 56. - La composición farmacéutica liofilizada de conformidad con la reivindicación 53, caracterizada porque el contenido de agua de la composición es menor al 3.5%. 57.- Una composición farmacéutica liofilizada, que comprende una sal f rmacéuticamente aceptable de un péptido que tiene la fórmula estructural NH2 - Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp lie Arg Gln Pro Pro Gly Lys Glu Glu Trp lie Gly -COOH [SEQ ID NO: 1); y un (3-ciclodextrina sustituída. 58.- Una composición farmacéutica empacada, que comprende: un material de empaque; y una cantidad prede e minada de composición farmacéutica liofilizada de conformidad con la reivindicación 57.