MXPA05004434A

MXPA05004434A - Inhibidores de 11-beta-hidroxi esteroide deshidrogenasa tipo 1 y tipo 2.

Info

Publication number: MXPA05004434A
Application number: MXPA05004434A
Authority: MX
Inventors: Barry Victor Lloyd Potter
Original assignee: Sterix Ltd
Priority date: 2002-10-24
Filing date: 2003-10-23
Publication date: 2005-07-26
Also published as: EP1556040A1; CA2501228A1; NO20052469D0; NO20052469L; PL376301A1; KR20050059294A; WO2004037251A1; AU2003274373A1; BR0315605A; JP2006514614A

Abstract

Se provee un compuesto que tiene la formula (I): (ver formula (I)) en donde uno de R1 y R2 es un grupo de la formula (a), (ver formula (a)) en donde R4 se selecciona a partir de H e hidrocarbilo, R5 es un grupo hidrocarbilo y L es un grupo enlazador opcional, o R1 y R2 juntos forman un anillo sustituido con el grupo (formula (a)) en donde R3 es H o un sustituyente, y en donde X se selecciona a partir de S, O, NR6 y C(R7)(R8), en donde R6 se selecciona a partir de H y grupos hidrocarbilo, en donde cada uno de R7 y R8 se seleccionan independientemente a partir de H y grupos hidrocarbilo.

Description

INHIBIDORES DE 11-BETA-HIDROXI ESTEROIDE DESHIDROGENASA TIPO 1 Y TIPO 2 CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se refiere a un compuesto. En particular la presente invención provee compuestos capaces de inhibir a la 11ß-hidroxiesteroide deshidrogenasa (11 -HSD).

Introducción El papel de los glucocorticoides Los glucocorticoides se sintetizan en la corteza adrenal a partir del colesterol. El glucocorticoide principal en el cuerpo humano es el cortisol, esta hormona se sintetiza y se secreta en respuesta a la hormona adrenocorticotrópica (ACTH) a partir de la glándula pituitaria de manera circadiana, episódica, pero la secreción de esta hormona también se puede estimular por estrés, ejercicio e infección. El cortisol circula principalmente unido a transcortina (proteína de unión a cortisol) o albúmina y solamente una pequeña fracción está libre (5-10%) para procedimientos biológicos [1]. El cortisol tiene un amplio intervalo de efectos fisiológicos, incluyendo regulación de metabolismo de carbohidratos, proteínas y lípidos, regulación de crecimiento normal y desarrollo, influencia sobre la función cognitiva, resistencia a la tensión y actividad de mineralocorticoides. El cortisol trabaja en la dirección opuesta en comparación con la insulina significando una estimulación de la gluconeogénesis hepática, inhibición de la toma de glucosa periférica y concentración incrementada de glucosa en sangre. Los glucocorticoides también son esenciales en la regulación de la respuesta inmune. Cuando circulan a concentraciones mayores los glucocorticoides son ¡nmunosupresores y se utilizan farmacológicamente como agentes antiinflamatorios. Los glucocorticoides semejantes a otras hormonas esferoides son lipófilos y penetran la membrana celular libremente. El cortisol se une, principalmente, al receptor intracelular de glucocorticoide (GR) que actúa entonces como un factor de transcripción para inducir la expresión de genes de respuesta a glucocorticoides, y como un resultado de esa síntesis de proteína.

El papel de la enzima 11 ß HSD La conversión del cortisol (F) hacia su metabolito inactivo de cortisona (E) mediante la ? ? ß-HSD se describió inicialmente en la década de los 1950's, no obstante no fue hasta después que se sugirió la importancia biológica para esta conversión [2]. En 1983 Krozowsqui et al. mostraron que el receptor de mineralocorticoides (MR) tiene afinidades de unión iguales para glucocorticoides y mineralocorticoides [3]. Debido a que la concentración en circulación del cortisol es unas 100 veces mayor que aquella de la aldosterona y durante tiempos de estrés o de actividad alta es aún mayor, no fue claro cómo el MR permaneció específico a mineralocorticoides y no estuvo ocupado de manera consistente por glucocorticoides. Anteriormente Ulick et al. [4] habían descrito la condición hipertensiva conocida como, "exceso evidente de mineralocorticoides" (AME), y se observó que mientras que la secreción de aldosterona a partir de las glándulas adrenales fue de hecho baja, el metabolismo periférico del cortisol se alteró. Estos descubrimientos llevan a la sugerencia de un papel protector para las enzimas. Al convertir el cortisol hacia cortisona en tejidos dependientes de mineralocortlcoide, las enzimas 11ß-HSD protegen al MR de la ocupación por glucocorticoides y permiten que sea específico a mineralcorticoides. La aldosterona misma se protege a partir de la enzima por la presencia de un grupo aldehido en la posición C-18. Los defectos congénitos en la enzima ? ?ß-HSD resulta en la sobre ocupación del MR por cortisol y en síntomas hipertensivos e hipocalémicos observados en AME. La localización de la ? ?ß-HSD mostró que la enzima y su actividad está altamente presente en los tejidos dependientes de MR, riñon y parótida. No obstante en los tejidos en donde el MR no es específico de mineralocorticoides y normalmente está ocupado por glucocorticoides, la 11ß-HSD no está presente en estos tejidos, por ejemplo en el corazón e hipocampo [5]. Esta invenstigación también mostró que la inhibición de la 11ß-HSD ocasionó una pérdida de la especificidad de aldosterona del MR en estos tejidos dependientes de mineralocorticoides.

Se ha mostrado que existen dos iso-enzimas de la ? ?ß-HSD.

Ambos son miembros de la superfamilia de la alcohol deshidrogenasa de cadena corta (SCAD) la cual ha sido ampliamente conservada a lo largo de la evolución. La ? ?ß-HSD tipo 2 actúa como una deshidrogenasa para convertir el grupo alcohol secundario en la posición C-11 del cortisol hacia una cetona secundaria, produciendo así el metabolito menos activo de la cortisona. Se piensa que la ? ?ß-HSD tipo 1 actúa principalmente in vivo como una reductasa, que se encuentra en la dirección opuesta al tipo 2 [6] [véase a continuación]. Las 11ß-HSD tipo 1 y tipo 2 solamente tienen una homología de aminoácidos del 30%.

Actividad de la enzima 11 ß-HSD La actividad intracelular del cortisol es dependiente de la concentración de glucocorticoides y se puede modificar y controlar independientemente sin implicar la secreción y síntesis general de la hormona.

El papel de la 11 B-HSD tipo 1 La dirección de la reacción de la 11p-HSD tipo 1 in vivo generalmente se acepta que es opuesta a la deshidrogenación de tipo 2. In vivo los ratones homocigotos con un gen tipo 1 alterado son incapaces de convertir la cortisona hacia cortisol, proporcionando evidencia adicional para la actividad reductora de la enzima [7]. La ?ß-HSD tipo 1 se expresa en muchos tejidos regulados por glucocorticoides clave semejantes al hígado, pituitaria, gónada, cerebro, tejido adiposo y glándulas adrenales, no obstante, la función de la enzima en muchos de estos tejidos no se comprende de manera suficiente [8]. La concentración de cortisona en el cuerpo es mayor que la del cortisol, la cortisona también se une escasamente a las globulinas de unión, haciendo a la cortisona muchas veces más biológicamente disponible. Aunque el cortisol se secreta por la corteza adrenal, existe una cantidad creciente de evidencia de que la conversión intracelular de E a F puede ser un mecanismo importante en la regulación de la acción de los glucocorticoides [9]. Puede ser que la 11p-HSD tipo 1 permite que ciertos tejidos conviertan la cortisona hacia cortisol para incrementar la actividad local de los glucocorticoides y potenciar la respuesta adaptativa y contrarrestar la actividad del tipo 2 que podría resultar en una caída en los glucocorticoides activos [10]. La potenciación de la respuesta al estrés podría ser especialmente importante en el cerebro y se han encontrado altos niveles de ? ?ß-HSD tipo 1 alrededor del hipocampo, probando adicionalmente el papel de la enzima. La ? ? ß-HSD tipo 1 también parece desempeñar un papel importante en la maduración del hepatocito [8]. Otro papel que ha surgido de la enzima ? ?ß-HSD tipo 1 enzima se encuentra en el proceso de detoxificación de muchos compuestos carbonilo no esteroideos, la reducción del grupo carbonilo de muchos compuestos tóxicos es un método común para incrementar la solubilidad y por lo tanto para incrementar su excreción. Se ha mostrado recientemente que la enzima ? ?ß-HSD tipo 1 está activa en el tejido pulmonar [11]. La actividad tipo 1 no se observa hasta después del nacimiento, por lo tanto las mujeres que fuman durante la preñez exponen a sus niños a los efectos dañinos del tabaco antes de que el niño sea capaz de detoxificar metabólicamente este compuesto.

El papel de la 11 ß-HSD tipo 2 Como ya se estableció anteriormente la ? ?ß-HSD tipo 2 convierte el cortisol hacia cortisona, por lo tanto protegiendo al MR en muchos tejidos corporales reguladores clave. La importancia de la protección del MR de la ocupación por glucocorticoides se observa en pacientes con AME o con intoxicación por regaliz. Los defectos o la inactividad de la enzima tipo 2 resulta en síndromes hipertensivos y la investigación ha mostrado que los pacientes con un síndrome hipertensivo tienen una relación de excreción urinaria incrementada de cortisol:cortisona. Esto junto con un incremento reportado en la vida media del cortisol radiomarcado sugiere una reducción de la actividad de la 11ß-HSD tipo 2 [12].

Razón fundamental para el desarrollo de los inhibidores de la 11B-HSD Como se mencionó anteriormente el cortisol se opone a acción de la insulina resultando en una estimulación de la gluconeogénesis hepática, inhibición de la toma de glucosa periférica y concentración incrementada de glucosa en sangre. Los efectos del cortisol parecen mejorarse en pacientes que padecen de intolerancia a la glucosa o diabetes mellitus. La inhibición de la enzima ? ?ß-HSD tipo 1 podría incrementar la toma de glucosa e inhibir la gluconeogénesis hepática, proporcionando una reducción en los niveles circulatorios de la glucosa. El desarrollo de un inhibidor potente de la 11ß-HSD tipo 1 podría tener por lo tanto considerable potencial terapéutico para condiciones asociadas con niveles elevados de glucosa en sangre. Un exceso en los glucocorticoides pueda resultar disfunciones neuronales y también en funciones cognitivas deterioradas. Un inhibidor específico de la 11 ß-HSD tipo 1 puede ser de cierta importancia al reducir las disfunciones neuronales y la pérdida de funciones cognitivas asociadas con el envejecimiento, al bloquear la conversión de la cortisona hacia cortisol. Los glucocorticoides también tienen un papel importante en la parte reguladora de la respuesta inmune [13]. Los glucocorticoides pueden suprimir la producción de citocinas y regular los niveles del receptor. Estos también participan en la determinación de sí los linfocitos T-auxiliares (Th) progresan ya sea hacia T? fenotipo Th1 o Th2. Estos dos diferentes tipos de células Th secretan un perfil diferente de citocinas, Th2 está predominante en un ambiente de glucocorticoide. Al inhibir a la 11ß-HSD tipo 1 , la respuesta de la citocina Th1 se podría favorecer. También es posible inhibir a la ? ?ß-HSD tipo 2, por lo tanto al inhibr la inactivación del cortisol, puede ser posible potenciar los efectos anti-inflamatorios de los glucocorticoides. Los aspectos de la invención se definen en las reivindicaciones anexas.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION En un aspecto la presente invención provee un compuesto que tiene la fórmula I fórmula I en donde uno de R-i y R2 es un grupo de la fórmula en donde F¾ se selecciona a partir de H e hidrocarbilo, R5 es un grupo hidrocarbilo y L es un grupo enlazador opcional, o Ri y R2 juntos forman un anillo sustituido con el grupo en donde R3 es H o un sustituyente, y en donde X se selecciona a partir de S, O, NR6 y C(R7)(R8), en donde R6 se selecciona a partir de H y grupos hidrocarbilo, en donde cada uno de R7 y R3 se seleccionan independientemente a partir de H y grupos hidrocarbilo. En un aspecto la presente invención provee una composición farmacéutica que comprende (i) un compuesto que tiene la fórmula I Fórmula I en donde uno de Ri y R2 es un grupo de la fórmula en donde R4 se selecciona a partir de H e hidrocarbilo, R5 es un grupo hidrocarbilo y L es un grupo enlazador opcional, o R-i y R2 juntos forman un anillo sustituido con el grupo en donde R3 es H o un sustituyente, y en donde X se selecciona a partir de S, O, NR6 y C(R7)(R8), en donde R6 se selecciona a partir de H y grupos hidrocarbilo, en donde cada uno de R7 y R8 se seleccionan independientemente a partir de H y grupos hidrocarbilo. (ii) opcionalmente mezclados con un vehículo, diluyente, excipiente o adyuvante farmacéuticamente aceptable. En un aspecto la presente invención provee un compuesto que tiene la fórmula I Fórmula I en donde uno de R1 y R2 es un grupo de la fórmula en donde R4 se selecciona a partir de H e hidrocarbilo, R5 es un grupo hidrocarbilo y L es un grupo enlazador opcional, o R-i y R2 juntos forman un anillo sustituido con el grupo en donde R3 es H o un sustituyente, y en donde X se selecciona a partir de S, O, NR6 y C(R7)(R8), en donde R6 se selecciona a partir de H y grupos hidrocarbilo, en donde cada uno de R7 y Rs se selecciona independientemente a partir de H y grupos hidrocarbilo, para uso en medicina. En un aspecto la presente invención provee un uso de un compuesto en la elaboración de un medicamento para uso en la terapia de una condición o enfermedad asociada con ? ? ß-HSD, en donde el compuesto tiene la fórmula I Fórmula I en donde uno de Ri y R2 es un grupo de la fórmula en donde R4 se selecciona a partir de H e hidrocarbilo, R5 es un grupo hidrocarbilo y L es un grupo enlazador opcional, o R-? y R2 juntos forman un anillo sustituido con el grupo en donde R3 es H o un sustituyente, y en donde X se selecciona a partir de S, O, NR6 y C(R7)(R8), en donde R6 se selecciona a partir de H y grupos hidrocarbilo, en donde cada uno de R7 y R8 se selecciona independientemente a partir de H y grupos hidrocarbilo.

Algunas ventajas Una ventaja clave de la presente invención es que los compuestos de la presente invención pueden actuar como inhibidores de la ? ?ß-HSD. Los compuestos pueden inhibir la interconversión de los esteroides 11-ceto inactivos con sus equivalentes h'idroxi activos. Por lo tanto la presente invención provee métodos por medio de los cuales se puede controlar la conversión de la forma inactiva hacia la forma activa, y a efectos terapéuticos útiles los cuales se pueden obtener como un resultado de dicho control. Más específicamente, pero no exclusivamente, la invención se refiere a la interconversión entre cortisona y cortisol en humanos. Otra ventaja de los compuestos de la presente invención es que pueden ser inhibidores potentes de la 11 ß-HSD ¡n vivo. Algunos de los compuestos de la presente invención también son ventajosos en tanto que pueden ser oralmente activos. La presente invención se puede proveer para un medicamento para una o más de (i) regulación de metabolismo de carbohidratos, (ii) regulación de metabolismo de proteínas, (iii) regulación de metabolismo de líquidos, (iv) regulación del crecimiento normal y/o desarrollo, (v) influencia sobre la función cognitiva, (vi) resistencia a la tensión y actividad de mineralocorticoides. Algunos de los compuestos de la presente invención también pueden ser útiles para inhibir la gluconeogénesis hepática. La presente invención también puede proveer un medicamento para mitigar los efectos de los glucocorticoides endógenos en diabetes mellitus, obesidad (incluyendo obesidad centripetal), pérdida neuronal y/o el deterioro cognitivo de la edad adulta. Por lo tanto, en un aspecto adicional, la invención provee el uso de un inhibidor de la ? ? ß-HSD en la elaboración de un medicamento para producir uno o más efectos terapéuticos en un paciente al cual se administra el medicamento, dichos efectos terapéuticos se seleccionan a partir de inhibición de la gluconeogénesis hepática, un incremento en la sensibilidad a la insulina en el tejido adiposo y el músculo, y la prevención de o reducción en la pérdida neuronal/deterioro cognitivo debido a la neurotoxicidad potenciada por glucocorticoides o disfunción o daño neural. Desde un punto de vista alternativo, la invención provee un método para tratamiento de un paciente humano o animal que padece de una condición seleccionada a partir del grupo que consiste de: resistencia a la insulina hepática, resistencia a la insulina de tejido adiposo, resistencia a la insulina de músculo, pérdida neuronal o disfunción debida a la neurotoxicidad potenciada por glucocorticoides, y cualquier combinación de las condiciones anteriormente mencionadas, el método comprendiendo el paso de administrar a dicho paciente un medicamento que comprende una cantidad farmacéuticamente activa de un compuesto de conformidad con la presente invención. Algunos de los compuestos de la presente invención pueden ser útiles para el tratamiento de cáncer, tales como cáncer de mama, así como (o en la alternativa) condiciones no malignas, tal como la prevención de enfermedades auto-inmunes, particularmente cuando puede ser necesario que los elementos farmacéuticos se administren a partir de una edad temprana.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION En un aspecto la presente invención provee un compuesto que tiene la fórmula I Fórmula I en donde uno de y R2 es un grupo de la fórmula en donde i¾ se selecciona a partir de H e hidrocarbilo, R5 es un grupo hidrocarbilo y L es un grupo enlazador opcional, o R-i y R2 juntos forman un anillo sustituido con el grupo en donde R3 es H o un sustituyente, y en donde X se selecciona a partir de S, O, NR6 y C(R7)(Ra), en donde R6 se selecciona a partir de H y grupos hidrocarbilo, en donde cada uno de R7 y R8 se seleccionan independientemente a partir de H y grupos hidrocarbilo. En un aspecto la presente invención provee una composición farmacéutica que' comprende (i) un compuesto que tiene la fórmula I anteriormente definida (ii) opcionalmente mezclado con un vehículo, diluyente, excipiente o adyuvante farmacéuticamente aceptable. En un aspecto la presente invención provee un compuesto que tiene la fórmula I anteriormente definida, para uso en medicina. En un aspecto la presente invención provee un uso de un compuesto que tiene la fórmula I anteriormente definida en la elaboración de un medicamento para uso en la terapia de una condición o enfermedad asociada con Hp-HSD. En un aspecto la presente invención provee un uso de un compuesto que tiene la fórmula I anteriormente definida en la elaboración de un medicamento para uso en la terapia de una condición o enfermedad asociada con niveles adversos de la 11ß-HSD. En un aspecto la presente invención provee un uso de un compuesto que tiene la fórmula I anteriormente definida en la elaboración de un elemento farmacéutico para inhibir la actividad de la 11ß-HSD. En un aspecto la presente invención provee un método que comprende (a) llevar a cabo un ensayo de la ? ?ß-HSD con uno o más compuestos candidatos que tienen la fórmula I anteriormente definida; (b) determinar si uno o más de dichos compuestos candidatos es/son capaces de modular la actividad de la ? ?ß-HSD; y (c) seleccionar uno o más de dichos compuestos candidatos que es/son capaces de modular la actividad de la 11P-HSD. En un aspecto la presente invención provee un método que comprende (a) llevar a cabo un ensayo de la ? ?ß-HSD con uno o más compuestos candidatos que tienen la fórmula I anteriormente definida; (b) determinar si uno o más de dichos compuestos candidatos es/son capaces de inhibir la actividad de la ? ?ß-HSD; y (c) seleccionar uno o más de dichos compuestos candidatos que es/son capaces de inhibir la actividad de la 11 ß-HSD.

En un aspecto la presente invención provee • un compuesto identificado por el método anteriormente definido, • el uso de dicho compuesto en medicina, · una composición farmacéutica que comprende dicho compuesto, opcionalmente mezclado con un vehículo, diluyente, excipiente o adyuvante farmacéuticamente aceptable, • el uso de dicho compuesto en la elaboración de un medicamento para uso en la terapia de una condición o enfermedad asociada con 11p-HSD, y • el uso de dicho compuesto en la elaboración de un medicamento para uso en la terapia de una condición o enfermedad asociada con niveles adversos de la 11ß-HSD. Para facilidad de referencia, estos aspectos y aspectos adicionales de la presente invención se discuten ahora bajo los encabezados de la sección apropiada. No obstante, las enseñanzas bajo cada sección no se limitan necesariamente a cada sección particular.

Aspectos preferibles En un aspecto preferido el compuesto de la presente invención tiene la fórmula II Fórmula II en un aspecto preferido L no está presente. En este aspecto la presente invención provee un compuesto que tiene la fórmula I Fórmula I donde uno de R-¡ y R2 es un grupo de la fórmula en donde FU se selecciona a partir de H e hidrocarbilo, y R5 es un grupo hidrocarbilo; o Ri y R2 juntos forman un anillo sustituido con el grupo en donde R3 es H o un sustituyente En un aspecto preferido el compuesto de la presente invención R-i y R2 juntos forman un anillo sustituido con el grupo en un aspecto preferido el compuesto de la presente Invención R-? y R2 juntos forman un anillo carbocíclico. En un aspecto preferido el compuesto de la presente invención i y R2 juntos forman un anillo de seis miembros. En un aspecto preferido el compuesto de la presente invención R1 y R2 juntos forman un anillo carbocíclico de seis miembros. En un aspecto preferido el compuesto de la presente invención en donde R1 y R2 juntos forman un anillo arilo. Los compuestos preferidos de la presente invención son aquellos que tienen una de las siguientes fórmulas.

Fórmula lil Fórmula iV En aspectos preferidos de la presente invención F¾ se selecciona a partir de H, hidrocarbiio, -S-hidrocarbilo, -S-H, halógeno y N(R9) (R10), en donde cada uno de R9 y R10 se seleccionan independientemente a partir de H y grupos hidrocarbiio. En aspectos preferidos de la presente invención R3 se selecciona a partir de H, idroxi, alquilo especialmente grupos alquilo de d-Cio, alquilo de C-|-C6, por ejemplo grupo alquilo de C-1-C3, metilo, etilo, n-propilo, ¡sopropilo, n-butilo, sec-butilo, ter-butilo, n-pentilo y otros isómeros pentilo, y n-hexilo y otros isómeros hexilo, alcoxi especialmente grupos alcoxi de C1-C10, alcoxi de C C6l por ejemplo grupo alcoxi de CrC3, metoxi, etoxi, propoxi etc., alquinilo, por ejemplo etinilo, o halógeno, por ejemplo sustituyentes fluoro. Cuando R3 es -S-hidrocarbilo, preferiblemente R3 se selecciona a partir de -S-alquilo, -S-ácido carboxílico, S-éter, y -S-amida, preferiblemente se selecciona a partir de -S-alquilo de C1-10. -S-ácido carboxílico de Cno. -S-éter de Cno> y -S-amida de Cno. En aspectos preferidos de la presente invención R3 es -CH3. Además los compuestos preferidos de la presente invención son aquellos que tienen una de las siguientes fórmulas. la la Fórmula VIII Fórmula IX Fórmula X Fórmula Xa Fórmula XI Fórmula Xla En aspectos preferidos adicionales de la presente invención, tales como cuando el compuesto tiene la fórmula la, la fórmula VIII, la fórmula IX, la fórmula X, la fórmula Xa, la fórmula XI, o la fórmula Xla, R3 se selecciona a partir de O, hidrocarbilo, y N(R9) en donde R9 se selecciona a partir de H y grupos hidrocarbilo. Más preferiblemente R3 se selecciona a partir de O, grupos alquenilo de C-i-do, tal como grupo alquenilo de Ci-C6, y grupo alquenilo de C1-C3, NH y N-grupos alquilo de CrC10, tal como N- grupo alquilo de C-1-C6, y N-grupos alquilo de C1-C3. En aspectos adicionales preferidos de la presente invención R4 se selecciona a partir de H y grupos alquilo de C1-C10, tal como grupo alquilo de C-i-Ce, y grupo alquilo de C1-C3. Preferiblemente R4 es H. En aspectos adicionales preferidos de la presente invención R4 es un grupo de la fórmula.

En estos aspectos el grupo que se mostró anteriormente como puede ser de la fórmula en donde cada R5 se selecciona independientemente a partir de grupos hidrocarbilo. Cada R5 puede ser el mismo o puede ser diferente al otro R5. En un aspecto los dos grupos R5 son los mismos. En ciertos aspectos preferidos de la invención R5 es un grupo hidrocarbilo cíclico. Preferiblemente R5 es un grupo hidrocarbilo cíclico que comprende un anillo hidrocarbilo. R5 puede ser un anillo sustituido o un anillo no sustituido. En ciertos aspectos preferidos de la invención R5 es un anillo sustituido. Preferiblemente R5 es un anillo carbocíclico. Preferiblemente R5 es un anillo de seis miembros. Preferiblemente R5 es un anillo carbocíclico de seis miembros. Más preferiblemente R5 es un anillo carbocíclico sustituido de seis miembros. En ciertos aspectos preferidos de la invención R5 es un anillo arilo. Preferiblemente R5 es un anillo arilo sustituido. En un aspecto altamente preferido R5 es un grupo que tiene la fórmula en donde cada uno de R11 , R12, R13, Ru R-15 se selecciona independientemente a partir de H, halógeno, y grupos hidrocarbilo. Preferiblemente cada uno de Ru , R12, R13, R-H y R15 se selecciona independientemente a partir de H, halógeno, alquilo, tal como alquilo de C1-6, fenilo, O-alquilo, O-fenilo, nitrilo, haloalquilo, tal como CF3, CC y CBr3, carboxialquilo, -C02H, C02alquilo, y grupos NH-acetilo. Dos o más de Ru, R 2, R13, R- y R15 se pueden unir para formar un anillo. Los dos o más de Ru, R12, R13, Ru y R15 pueden o no estar adyacentes. El anillo puede ser un anillo carbocíclico o heterocíclico. El anillo puede estar opcionalmente sustituido por cualesquiera de los sustituyentes Rn, R12, R-13, R-I4 y R15 anteriormente listados. Cuando dos o más de R-p, R12> Ri3> u y -I5 se pueden unir para formar un anillo del grupo puede proveer un naftilo, quinolilo, tetrahidroquinolilo, o benzotetrahidropiranilo, cada uno de los cuales puede estar sustituido o no sustituido.

Sustituyentes El compuesto de la presente invención puede tener sustituyentes diferentes a aquellos de los sistemas de anillos que se muestran en la presente invención. Además los sistemas de anillos en la presente invención se proporcionan como las fórmulas generales y se deben interpretar como tales. La ausencia de cualesquiera sustituyentes específicamente mostrados en un miembro del anillo dado indica que el miembro del anillo puede estar sustituido con cualesquiera porciones de las cuales H es solamente un ejemplo. El sistema de anillo puede contener uno o más grados de insaturación, por ejemplo en algunos aspectos uno o más anillos del sistema de anillo es aromático. El sistema de anillo puede ser carbocíclico o puede contener uno o más heteroátomos. El compuesto de la invención, en particular el compuesto del sistema de anillo de la invención de la presente invención puede contener sustituyentes diferentes a aquellos que se muestran en la presente invención. A manera de ejemplo, estos otros sustituyentes pueden ser uno o más de: uno o más grupos halo, uno o más grupos O, uno o más grupos hidroxi, uno o más grupos amino, uno o más grupo(s) que contiene(n) azufre, uno o más grupo(s) hidrocarbilo -tal como un grupo oxihidrocarbilo. En términos generales el sistema de anillo de los presentes compuestos puede contener una variedad de sustituyentes que no interfieren. En particular, el sistema de anillo puede contener uno o más sustituyentes hidroxi, alquilo especialmente alquilo inferior de (Ci-C6), por ejemplo metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, ter-butilo, n-pentilo y otros isómeros pentilo, y n-hexilo y otros isómeros hexilo, alcoxi especialmente alcoxi inferior de (Ci-Co), por ejemplo metoxi, etoxi, propoxi etc., alquinilo, por ejemplo etinilo, o halógeno, por ejemplo fluoro. Para algunos compuestos de la presente invención, el compuesto puede estar sustituido con un grupo hidrocarbilsulfanilo. El término "hidrocarbilsulfanilo" significa un grupo que comprende al menos un grupo hidrocarbilo (como se define en la presente invención) y azufre, preferiblemente -S-hidrocarbilo, más preferiblemente -S-hidrocarburo. Ese grupo azufre puede estar opcionalmente oxidado. Preferiblemente el grupo hidrocarbilsulfanilo es -S-alquilo de Ci io, más preferiblemente -S-alquilo de C -5, más preferiblemente -S-alquilo de C1-3, más preferiblemente -S-CH2CH2CH3, -S-CH2CH3 o -SCH3 Aspectos adicionales Para algunas aplicaciones, preferiblemente los compuestos tienen una acción reversible. Para algunas aplicaciones, preferiblemente los compuestos tienen una acción irreversible. En una modalidad, los compuestos de la presente invención son útiles para el tratamiento de cáncer de mama. Los compuestos de la presente invención pueden estar en la forma de una sal. La presente invención también abarca intermediarios novedosos que son útiles para preparar los compuestos de la presente invención. Por ejemplo, la presente invención abarca precursores de alcohol novedosos para los compuestos. A manera de ejemplo adicional, la presente invención abarca precursores bis protegidos para los compuestos. Los ejemplos de cada uno de estos precursores se presentan en la presente invención. La presente invención también abarca un procedimiento que comprende cada uno o ambos de esos precursores para la síntesis de compuestos de la presente invención.

Esteroide deshidroqenasa 11 ß esteroide deshidrogenasa se puede referir como "11 ß-HSD" o "HD" como referencia corta En algunos aspectos de la invención ? ?ß-HSD es preferiblemente 11 ß-HSD tipo 1. En algunos aspectos de la invención ? ?ß-HSD es preferiblemente 11ß-HSD tipo 2.

Inhibición de la esteroide deshidroqenasa Se cree que algunas de las condiciones de enfermedad asociadas con actividad de la HD se deben a la conversión de una cortisona inactiva, hacia un cortisol activo. En las condiciones de enfermedad asociadas con actividad de la HD, esto podría ser deseable para inhibir la actividad de la HD. En la presente invención, el término "inhibe" incluye reducir y/o eliminar y/o enmascarar y/o prevenir la acción detrimental de la HD.

Inhibidor de la HD De conformidad con la presente invención, el compuesto de la presente invención es capaz de actuar como un inhibidor de la HD. En la presente invención, el término "inhibidor" como se utiliza en la presente invención con respecto al compuesto de la presente invención significa un compuesto que puede inhibir la actividad de la HD -tal como reducir y/o eliminar y/o enmascarar y/o prevenir la acción detrimental de la HD. El inhibidor de la HD puede actuar como un antagonista. La capacidad de los compuestos para inhibir la actividad de la esteroide deshidrogenasa se puede evaluar utilizando el protocolo de ensayo adecuado presentado en la sección de ejemplos. Debe mencionarse que el compuesto de la presente invención puede tener otras propiedades benéficas además de o como alternativa a su capacidad para inhibir la actividad de la HD.

Hidrocarbilo El término "grupo hidrocarbilo" como se utiliza en la presente invención significa un grupo que comprende al menos C y H y puede comprender opcionalmente uno o más de otros sustituyentes adecuados. Los ejemplos de dichos sustituyentes pueden incluir halo, alcoxi, nitro, un grupo alquilo, un grupo cíclico etc. Además de la posibilidad de los sustituyentes de ser un grupo cíclico, una combinación de los sustituyentes puede formar un grupo cíclico. Si el grupo hidrocarbilo comprende más de un C entonces aquellos carbonos no necesariamente están asociados entre sí. Por ejemplo, al menos dos de los carbonos pueden estar asociados vía un elemento adecuado o grupo. Por lo tanto, el grupo hidrocarbilo puede contener heteroátomos. Los heteroátomos adecuados serán evidentes a aquellos expertos en la técnica e incluyen, por ejemplo, azufre, nitrógeno y oxígeno. Un ejemplo no limitante de un grupo hidrocarbilo es un grupo acilo.

Un grupo hidrocarbilo típico es un grupo hidrocarburo. En la presente invención el término "hidrocarburo" significa cualquiera de un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo alquinilo, dichos grupos pueden ser lineares, ramificados o cíclicos, o un grupo arilo. El término hidrocarburo también incluye aquellos grupos pero en donde éstos han sido opcionalmente sustituidos. Si el hidrocarburo es una estructura ramificada que tiene sustituyente(s) en él, entonces la sustitución puede estar en cualquiera de las estructuras base de hidrocarburo o en la ramificación; alternativamente las sustituciones pueden estar en la estructura base de hidrocarburo y en la ramificación. En algunos aspectos de la presente invención, uno o más grupos hidrocarbilo se seleccionan independientemente a partir del grupo alquilo opcionalmente sustituido, grupo haloalquilo opcionalmente sustituido, grupo arilo, grupo alquilarilo, grupo alquilarilaquilo, y un grupo alqueno. En algunos aspectos de la presente invención, uno o más grupos hidrocarbilo se seleccionan independientemente a partir de un grupo alquilo de C-1-C10, tal como grupo alquilo de Ci-C6, y grupo alquilo de C1-C3. Los grupos alquilo típicos incluyen alquilo de d , alquilo de C2, alquilo de C3, alquilo de C4, alquilo de C5, alquilo de C7, y alquilo de C8. En algunos aspectos de la presente invención, uno o más grupos hidrocarbilo se seleccionan independientemente a partir de grupo haloalquilo de C Cio, grupo haloalquilo de C1-C6, grupo haloalquilo de C1-C3, grupo bromoalquilo de C-i-C10, grupo bromoalquilo de y grupo bromoalquilo de C-1-C-3. Los grupos haloalquilo típicos incluyen haloalquilo de C-f , haloalquilo de C2, haloalquilo de C3) haloalquilo de C4, haloalquilo de C5, haloalquilo de C7, haloalquilo de Cs, bromoalquilo de C~i, bromoalquilo de C2, bromoalquilo de C3, bromoalquilo de C4, bromoalquilo de C5, bromoalquilo de C7, y bromoalquilo de C8. En algunos aspectos de la presente invención, uno o más grupos hidrocarbilo se seleccionan independientemente a partir de grupos arilo, grupos alquilarilo, grupos alquilarilaquilo, -(CH2) arilo de i„10-, -(CH2)i-io-Ph, (CH2)i-io-Ph-alquilo de Ci. 0, -(CH2)i-5-Ph, (CH2)i-5-Ph-alquilo de C1-5) -(CH2)i-3-Ph, (CH2)i-3-Ph-alquilo de Ci-3, -CH2-Ph, y -CH2-Ph-C(CH3)3. Los grupos arilo pueden contener un heteroátomo. Por lo tanto el grupo arilo o uno o más de los grupos arilo pueden ser carbocíclicos o uno o más pueden ser heterocíclicos. Los heteroátomos típicos incluyen O, N y S, en particular N. En algunos aspectos de la presente invención, uno o más grupos hidrocarbilo se seleccionan independientemente a partir de -(CH2)cicloalquilo de no-, -(CH2)i- 0-cicloalquilo de C3-10, -(CH2)i- -cicloalquilo de C3-7, -(CH2)i.5-cicloalquilo de C3-5, -(CH2)i.3-cicloalquilo de C3-5, y -CH2-cicloalquilo de C3. En algunos aspectos de la presente invención, uno o más grupos hidrocarbilo se seleccionan independientemente a partir de grupos alqueno. Los grupos alqueno típicos incluyen grupo alqueno de C-1-C10, grupo alqueno de C1-C-6, grupo alqueno de CrC3, tal como grupo alqueno de C1 , C2, C3, C4, C5, C6, o C7. En un aspecto preferido el grupo alqueno contiene 1 , 2 ó 3 enlaces C=C. En un aspecto preferido el grupo alqueno contiene 1 enlace C=C. En algún aspecto preferido al menos un enlace C=C o solamente el enlace C=C se encuentra en el C terminal de la cadena alqueno, que es el enlace en el extremo distal de la cadena al sistema del anillo. En algunos aspectos de la presente invención, uno o más grupos hidrocarbilo se seleccionan independientemente a partir de grupos oxihidrocarbilo.

Oxihidrocarbilo El término grupo "oxihidrocarbilo" como se utiliza en la presente invención significa un grupo que comprende al menos C, H y O y puede comprender opcionalmente uno o más de otros sustituyentes adecuados. Los ejemplos de dichos sustituyentes pueden incluir halo-, alcoxi-, nitro-, un grupo alquilo, un grupo cíclico etc. Además de la posibilidad de los sustituyentes de ser un grupo cíclico, una combinación de los sustituyentes puede formar un grupo cíclico. Si el grupo oxihidrocarbilo comprende más de un C entonces aquellos carbonos no necesariamente están asociados entre sí. Por ejemplo, al menos dos de los carbonos pueden estar asociados vía un elemento adecuado o grupo. Por lo tanto, el grupo oxihidrocarbilo puede contener heteroátomos. Los heteroátomos adecuados serán evidentes a aquellos expertos en la técnica e incluyen, por ejemplo, azufre y nitrógeno. En una modalidad de la presente invención, el grupo oxihidrocarbilo es un grupo oxihidrocarburo. En la presente invención el término "oxihidrocarburo" significa cualquiera de un grupo alcoxi, un grupo oxialquenilo, un grupo oxialquinilo, dichos grupos pueden ser lineares, ramificados o cíclicos, o un grupo oxiarilo. El término oxihidrocarburo también incluye aquellos grupos antes bien en donde éstos han sido opcionalmente sustituidos. Si el oxihidrocarburo es una estructura ramificada que tiene sustituyente(s) en él, entonces la sustitución puede ser en cualquiera de las estructuras base de hidrocarburo o en la ramificación; alternativamente las sustituciones pueden estar en la estructura base de hidrocarburo y en la ramificación. Típicamente, el grupo oxihidrocarbilo es de la fórmula C-i-eO (tal Modelo de ensayo animal para determinar la actividad estrogénica (protocolo 1 ) Ausencia de estroqenicidad in vivo Los compuestos de la presente invención se pueden estudiar utilizando un modelo animal, en particular en ratas ovariectomizadas. En este modelo, los compuestos los cuales son estrogénicos estimulan el crecimiento uterino. El compuesto (10 mg/Kg/día por cinco días) se administró oralmente a las ratas con otro grupo de animales que recibieron solamente el vehículo (propilenglicol). Un grupo adicional recibió el compuesto estrogénico EMATE subcutáneamente en una cantidad de 10 µ /? \3 por cinco días. Al término del estudio se obtuvieron los úteros y se pesaron con los resultados siendo expresados como peso uterino/peso total corporal x 100. Los compuestos que no tienen efecto significativo sobre el crecimiento uterino no son estrogénicos.

Reporteros Una amplia variedad de reporteros se puede utilizar en los métodos del ensayo (así como selecciones) de la presente invención con reporteros preferidos proveyendo señales covenientemente detectables (por ejemplo mediante espectroscopia). A manera de ejemplo, un gen reportero puede codificar una enzima la cual cataliza una reacción que cual altera las propiedades de absorción de la luz. Otros protocolos incluyen ensayo inmunosorbente asociado a enzima (ELISA), radioinmunoensayo (RIA) y selección de célula activada mediante fluorescencia (FACS). Incluso se puede utilizar un inmunoensayo basado en anticuerpo monoclonal, de dos sitios utilizando anticuerpos monoclonaies reactivos a dos epítopes que no interfieren. Se describen estos y otros ensayos, entre otros lugares, en Hampton R et al (1990, Serological etods, A Laboratory Manual, APS Press, St Paul MN) y Maddox DE et al (1983, J Exp Med 15 8:121 1). Los ejemplos de moléculas receptoras incluyen pero no se limitan a (ß-galactosidasa, invertasa, proteína fluorescente verde, luciferasa, cloramfenicol, acetiltransferasa, (-glucuronidasa, exo-glucanasa y glucoamilasa. Alternativamente, los nucleótidos radiomarcados o marcados con una marca fluorescente se pueden incorporar dentro de transcritos nacientes los cuales se identifican entonces cuando se unen a las sondas oligonucleótidas. A manera de ejemplos adicionales, numerosas compañías tales como Pharmacia Biotech (Piscataway, NJ), Promega (Madison.WI), y US Biochemical Corp (Cleveland, OH) abastecen equipos comerciales y protocolos para procedimientos de ensayo. Las moléculas receptoras adecuadas o marcas incluyen aquellos radionúclidos, enzimas, agentes fluorescentes, quimioluminiscentes, o cromogénicos así como sustratos, cofactores, inhibidores, partículas magnéticas y los similares. Las Patentes que enseñan el uso de dichas marcas incluyen US-A-3817837; US-A-3850752; US-A-3939350; US-A-3996345; US-A-4277437; US-A-4275149 y US-A-4366241.

Células hospederas El término "célula hospedera" - en relación con la presente invención incluye cualquier célula que puede comprender el blanco para el agente de la presente invención. Por lo tanto, una modalidad adicional de la presente invención provee células hospederas transformadas o transfectadas con un polinucleótido que es o que expresa el blanco de la presente invención. Preferiblemente dicho polinucleótido se porta en un vector para la replicación y expresión de polinucleotidos que van a ser el blanco o que van a expesar el blanco. Las células se eligirán para que sean compatibles con dicho vector y pueden ser por ejemplo células procarióticas (por ejemplo bacterianas), fúngales, de levadura o vegetales. La bacteria gram negativa E. coli se utiliza ampliamente como un hospedero para la expresión del gen heterólogo. No obstante, tienden a acumularse grandes cantidades de proteína heteróloga dentro de la célula. Algunas veces la purificación subsecuente de la proteína deseada a partir de las proteínas ¡ntracelulares masivas de E. coli puede ser difícil. En contraste a E. coli, las bacterias a partir del género Bacillus son muy adecuadas como hospederos heterólogos debido a su capacidad para secretar proteínas dentro del medio de cultivo. Otras bacterias adecuadas como hospederos son aquellas a partir del género Streptomyces y Pseudomonas. Dependiendo de la naturaleza del polinucleótido que codifica el polipéptido de la presente invención, y/o la conveniencia de procesamientos adicionales de la proteína expresada, se pueden preferir hospederos eucarióticos tales como levaduras u otros hongos. En general, las células de levadura se prefieren sobre las células fúngales debido a que son más fáciles de manipular. No obstante, algunas proteínas son ya sea escasamente secretadas a partir de la célula de levadura, o en algunos casos no se procesan adecuadamente (por ejemplo hiperglicosilación en levadura). En estos casos, se debe seleccionar un organismo hospedero fungal diferente.

Los ejemplos de hospederos de expresión adecuados dentro del alcance de la presente invención son hongos tales como especies de Aspergillus (tales como aquellas descritas en EP-A-0184438 y EP-A-0284603) y especies de Trichoderma; bacterias tales como especies de Bacillus (tales como aquellas descritas en EP-A-0134048 y EP-A-0253455), especies de Streptomyces y especies de Pseudomonas; y levaduras tales como especies de Kluyveromyces (tales como aquellas descritas en EP-A-0096430 y EP-A-0301670) y especies de Saccharomyces. A manera de ejemplo, los hospederos de expresión típicos se pueden seleccionar a partir de Aspergillus niger, Aspergillus niger var. tubigenis, Aspergillus niger var. awamori, Aspergillus aculeatis, Aspergillus nidulans, Aspergillus orvzae, Trichoderma reesei, Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Bacillus amyloliquefaciens, Kluyveromyces lactis y Saccharomyces cerevisiae. El uso de las células hospederas adecuadas - tales como células hospederas de levadura, fúngales y vegetales- se puede proveer para modificaciones post-traduccionales (por ejemplo miristoilación, glicosilación, truncación, lapidación y fosforilación de tirosina, serina o treonina) como pueda ser necesario para conferir actividad biológica óptima sobre los productos de expresión recombinante de la presente invención.

Organismo El término "organismo" en relación con la presente invención incluye cualquier organismo que puede comprender el blanco de conformidad con la presente invención y/o productos obtenidos a partir de éste. Los ejemplos de organismos pueden incluir un hongo, una levadura o una planta. El término "organismo transgénico" en relación con la presente invención incluye cualquier organismo que comprende el blanco de conformidad con la presente invención y/o productos obtenidos.

Transformación de células hospederas/organismos hospederos Como se indicó anteriormente, el organismo hospedero puede ser un organismo procariótico o un organismo eucariótico. Los ejemplos de hospederos procarióticos adecuados incluyen E. coli y Bacillus subtilis. Las enseñanzas sobre la transformación de hospederos procarióticos se conocen bien en la técnica, por ejemplo véase Sambrook et al (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2a edición, 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press) y Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology (1995), John Wiley & Sons, Inc. Si se utiliza un hospedero procariótico entonces puede ser necesario que la secuencia nucleotídica se modifique de manera adecuada antes de la transformación -tal como mediante la remoción de intrones. En otra modalidad el organismo transgénico puede ser una levadura. A este respecto, la levadura también ha sido ampliamente utilizada como un vehículo para expresión del gen heterólogo. Las especies de Saccharomyces cerevisiae tienen una larga historia de uso industrial, incluyendo su uso para expresión del gen heterólogo. La expresión de genes heterólogos en Saccharomyces cerevisiae se ha revisado por Goodey et al (1987, Yeast Biotechnology, D R Berry et al, eds, pp 401-429, Alien y Unwin, Londres) y por King et al (1989, Molecular and Cell Biology of Yeasts, E F Walton y G T Yarronton, eds, pp 107-133, Blackie, Glasgow). Por varias razones Saccharomyces cerevisiae es adecuada para la expresión del gen heterólogo. Primero, no es patogénica a los humanos y es incapaz de producir ciertas endotoxinas. Segundo, tiene una larga historia de uso seguro siguiendo a siglos de explotación comercial para diversos propósitos. Esto ha llevado a una amplia aceptabilidad pública. Tercero, el extensivo uso comercial y la investigación dedicada al organismo ha resultado en una abundancia de conocimiento acerca de la genética y fisiología así como en características de fermentación a gran escala de Saccharomyces cerevisiae. Una revisión de los principios de expresión del gen heterólogo en Saccharomyces cerevisiae y de la secreción de productos génicos se proporciona por E Hinchcliffe E Kenny (1993, "Yeast as a vehicle for the expression of heterologous genes", Yeasts, Vol 5, Anthony H Rose y J Stuart Harrison, eds, 2a edición, Academic Press Ltd.). Están disponibles diversos tipos de vectores de levaduras, incluyendo vectores integrativos, los cuales requieren la recombinación con el genoma hospedero para su mantenimiento, y replicación de manera autónoma de vectores plasmídicos. Con el objeto de preparar los Saccharomyces transgénicos, las construcciones de expresión, se preparan mediante la inserción de la secuencia nucleotídica dentro de una construcción diseñada para expresión en levadura. Se han desarrollado diversos tipos de construcciones utilizadas para la expresión heteróloga. Las construcciones contienen un promotor activo en levadura fusionado a la secuencia nucleotídica, usualmente se utiliza un promotor de origen de levadura, tal como el promotor GAL1. Usualmente se utiliza una secuencia señal de origen de levadura, tal como la secuencia que codifica el péptido señal SUC2. Un terminador activo en levaduras finaliza el sistema de expresión. Para la transformación de levadura se han utilizado diversos protocolos de transformación. Por ejemplo, un Saccharomyces transgénico de conformidad con la presente invención se puede preparar siguiendo las enseñanzas de Hinnen et al (1978, Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA 75, 1929); Beggs, J D (1978, Nature, Londres, 275, 104); e Ito, H et al (1983, J Bacteriology 153, 163-168). Las células de levadura transformadas se seleccionan utilizando diversos marcadores de selección. Entre los marcadores utilizados para transformación se encuentran numerosos marcadores auxotróficos tales como LEU2, HIS4 y TRP1 , y marcadores dominantes de resistencia a antibióticos tales como marcadores de antibióticos aminoglicósidos, por ejemplo G418. Entre los organismos hospederos está una planta. El principio básico en la construcción de plantas genéticamente modificadas es insertar la información genética en el genoma vegetal de manera que se obtiene un mantenimiento estable del material genético insertado. Existen diversas técnicas para insertar la información genética, las dos principies siendo la introducción directa de la información genética y la introducción de la información genética mediante el uso de un sistema vector. Una revisión de las técnicas generales se puede encontrar en los artículos por Potrykus (Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol

[1991] 42: 205-225) y Christou (Agro-Food-Industre Hi-Tech Marzo/Abril 1994 17-27). Las enseñanzas adicionales sobre la transformación vegetal se pueden encontrar en EP-A-0449375. Por lo tanto, la presente invención también provee un método de transformación de una célula hospedera con una secuencia nucleotídica que va a ser el blanco o que va a expresar el blanco. Las células hospederas transformadas con la secuencia nucleotídica se pueden cultivar bajo condiciones adecuadas para la expresión de la proteína codificada. La proteína producida por una célula recombinante se puede exhibir sobre la superficie de la célula. Si se desea, y como se entenderá por aquellos expertos en la técnica, los vectores de expresión que contienen secuencias codificantes se pueden diseñar con secuencias señal las cuales dirigen la secreción directa de las secuencias codificantes a través de una membrana particular de célula procarióntica o eucarióntica. Otras construcciones recombinantes pueden unir la secuencia codificante a la secuencia nucleotídica que codifica un dominio polipéptido el cual facilitará la purificación de las proteínas solubles (Kroll DJ et al (1993) DNA Cell Biol 12: 441-53).

Variantes/homóloaos/derivados Además de las secuencias específicas de aminoácidos y secuencias nucleotídicas mencionadas en la presente invención, la presente invención también abarca el uso de variantes, homólogos y derivados de las mismas. En la presente invención, el término "homología" puede ser igualado con "identidad". En el presente contexto, una secuencia homólogo se adapta para que incluya una secuencia de aminoácidos la cual puede ser al menos 75, 85 ó 90% idéntica, preferiblemente al menos 95 ó 98% idéntica. Aunque la homología también se puede considerar en términos de similitud (por ejemplo residuos de aminoácidos que tienen propiedades/funciones químicas similares), en el contexto de la presente invención se prefiere que exprese homología en términos de identidad de secuencia. Las comparaciones de homología se pueden llevar a cabo a ojo, o más usualmente, con la ayuda de programas de comparación de secuencia fácilmente disponibles. Estos programas de cómputo comercialmente disponibles pueden calcular el % de homología entre dos o más secuencias. El % de homología se puede calcular sobre las secuencias contiguas, por ejemplo una secuencia se alinea con la otra secuencia y cada aminoácido en una secuencia se compara directamente con el aminoácido correspondiente en la otra secuencia, un residuo cada vez. Esto se denomina un alineamiento "sin espacios". Típicamente, dichos alineamientos sin espacios se llevan a cabo solamente sobre un número de residuos relativamente corto. Aunque este es un método muy simple y consistente, éste no toma en consideración que, por ejemplo, en un par de secuencias de otra manera idénticas, una inserción o deleción ocasionará que los siguientes residuos de aminoácidos se coloquen fuera del alineamiento, por lo tanto resultan potencialmente en una gran reducción en el % de homología cuando se lleva a cabo un alineamiento global. Consecuentemente, la mayoría de los métodos de comparación de secuencia se diseñan para producir alineamientos óptimos que toman en consideración posibles inserciones y deleciones sin penalizar indebidamente la evaluación de la homología general. Esto se logra mediante la inserción de "espacios" en el alineamiento de secuencia para tratar de maximizar la homología local. No obstante, estos métodos más complejo asignan "sanciones por espacio" a cada espacio que ocurre en el alineamiento de manera que, para el mismo número de aminoácidos idénticos, un alineamiento de secuencia con tan pocos espacios como sea posible - reflejando una alta relación entre las dos secuencias comparadas - logrará una evaluación mayor que una con muchos espacios. Típicamente se utilizan "costos por espacio afín" que cargan un costo relativamente alto para la existencia de un espacio y una sanción más pequeña para cada residuo subsecuente en el espacio. Este es el sistema más comúnmente utilizado para evaluación de espacio. Las sanciones altas por espacio producirán por supuesto alineamientos optimizados con menos espacios. La mayoría de los programas para alineamiento permiten que las sanciones por espacio se modifiquen. No obstante, se prefiere utilizar los valores por omisión cuando se utiliza dicho software para comparasiones de secuencia. Por ejemplo cuando se utiliza el paquete GCG Wisconsin Bestfit (véase a continuación) la sanción por omisión de espacio para secuencias de aminoácidos es -12 para un espacio y -4 para cada extensión. Por lo tanto el cálculo del % máximo de homología requiere inicialmente la producción de un alineamiento óptimo, tomando en consideración las sanciones por espacio. Un programa de cómputo adecuado para llevar a cabo dicho alineamiento es el paquete GCG Wisconsin Bestfit (University of Wisconsin, U.S.A.; Devereux et al., 1984, Nucleic Acids Research 12: 387). Los ejemplos de otros softwares que pueden llevar a cabo comparaciones de secuencias incluyen, pero no se limitan a, el paquete BLAST (véase Ausubel et al., 1999 ibid-Capítulo 18), FASTA (Atschul et al., 1990, J. Mol. Biol., 403-410) y la serie GENEWORKS de herramientas de comparación. Tanto BLAST como FASTA están disponibles para búsqueda fuera de línea y en línea (véase Ausubel et al., 1999 ibid, páginas 7-58 a 7-60). No obstante, se prefiere utilizar el programa GCG Bestfit. Una referencia útil adicional es aquella encontrada en FEMS Microbiol Lett 1999 Mayo 15; 174(2): 247-50 (y aparece una errata publicada en FEMS Microbiol Lett 1999 Agosto 1 ; 177(1): 187-8). Aunque el % de homología final se puede medir en términos de identidad, el procedimiento de alineamiento mismo no se basa típicamente en una comparación de pares todo-o-nada. De hecho, generalmente se utiliza una matriz de evaluación de similitud escalar que asigna evaluaciones a cada comparación par a par basándose en la similitud química o en la distancia evolutiva. Un ejemplo de dicha matriz comúnmente utilizada en la matriz BLOSUM62 - la matriz por omisión para la serie de programs BLAST. Los . programs GCG Wisconsin generalmente utilizados ya sea en los valores por omisión públicos o un cuadro de comparación de símbolos habituales si son abastecidos (véase manual del usuario para detalles adicionales). Se prefiere utilizar los valores de omisión públicos para el paquete GCG, o en el caso de otro software, la matriz por omisión, tal como BLOSUM62. Una vez que el software ha producido un alineamiento público, es posible calcular el % de homología, preferiblemente el % de identidad de secuencia. Típicamente el software hace esto como parte de la comparación de secuencia y genera un resultado numérico. Las secuencias también pueden tener deleciones, inserciones o sustituciones de residuos de aminoácidos las cuales producen un cambio silencioso y resultan en una sustancia funcionalmente equivalente. Las sustituciones de aminoácidos deliberadas se pueden realizar con base en la similitud en polaridad, carga, solubilidad, hidrofobicídad, hidrofilicidad, y/o la naturaleza amfipática de los residuos siempre y cuando se retenga la actividad de unión secundaria de la sustancia. Por ejemplo, los aminoácidos negativamente cargados incluyen ácido aspártico y ácido glutámico; los aminoácidos positivamente cargados incluyen lisina y arginina; y los aminoácidos con grupos de cabezas polares no cargados que tienen valores de hidrofilicidad similares incluyen leucina, isoleucina, valina, glicina, alanina, asparagina, glutamina, serina, treonina, fenilalanina, y tirosina. Las sustituciones conservativas se pueden realizar, por ejemplo de conformidad con el cuadro a continuación. Los aminoácidos en el mismo bloque en la segunda columna y preferiblemente en la misma línea en la tercera columna puede estar sustituidos entre sí: CUADRO 1 Vectores de expresión La secuencia nucleotídica para uso como el blanco o para expresar el blanco se puede incorporar dentro de un vector replicable recombinante. El vector se puede utilizar para replicar y expresar la secuencia nucleotídica en y/o a partir de una célula hospedera compatible. La expresión se puede controlar utilizando secuencias de control las cuales incluyen promotores/potenciadores y otras señales de regulación de la expresión. Se pueden utilizar promotores procarióticos y promotores funcionales en células eucarióticas. Se pueden utilizar promotores específicos de tejido y promotores específicos de estímulos. También se pueden utilizar promotores quiméricos que comprenden elementos de secuencia a partir de dos o más promotores diferentes anteriormente descritos. La proteína producida por una célula recombinante hospedera mediante la expresión de la secuencia nucleotídica se puede secretar o se puede contener intracelularmente dependiendo de la secuencia y/o del vector utilizado. Las secuencias codificantes se pueden diseñar con secuencias señal las cuales dirigen la secreción de las secuencias codificantes de la sustancia a través de una membrana de célula procarióntica o eucarióntica particular.

Proteínas de fusión La secuencia de aminoácidos blanco se puede producir como una proteína de fusión, por ejemplo para ayudar en la extracción y purificación. Los ejemplos de partícipes de proteínas de fusión incluyen glutationa-S-transferasa (GST), 6xHis, GAL4 (dominios de unión a ADN y/o dominios de activación transcripcional) y (-galactosidasa. También puede ser conveniente incluir un sitio de escisión proteolítica entre la proteína de fusión partícipe y la secuencia de proteína de interés para permitir la remoción de las secuencias de la proteína de fusión. Preferiblemente la proteína de fusión no ocultará la actividad del blanco. La proteína de fusión puede comprender un antígeno o un determinante antigénico fusionado a la sustancia de la presente invención. En esta modalidad, la proteína de fusión puede ser una proteína de fusión que no se presenta de manera natural que comprende una sustancia la cual puede actuar como un adyuvante en el sentido de proveer una estimulación generalizada del sistema inmune. El antígeno o determinante antigénico se puede unir ya sea al extremo arrimo o carboxi de la sustancia. En otra modalidad de la invención, la secuencia de aminoácidos se puede ligar a una secuencia heteróloga para codificar una proteína de fusión. Por ejemplo, para seleccionar las librerías peptídicas para agentes capaces de afectar la actividad de la sustancia, puede ser útil codificar una sustancia quimérica que expresa un epítope heterólogo que se reconoce por un anticuerpo comercíalmente disponible.

Terapia Los compuestos de la presente invención se pueden utilizar como agentes terapéuticos -por ejemplo, en aplicaciones de terapia. El término "terapia" incluye efectos curativos, efectos de alivio, y efectos profilácticos. La terapia puede ser en humanos o animales, preferiblemente en animales hembras.

Composiciones farmacéuticas En un aspecto, la presente invención provee una composición farmacéutica, la cual comprende un compuesto de conformidad con la presente invención y opcionalmente un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable (incluyendo combinaciones de los mismos). Las composiciones farmacéuticas pueden ser para uso de humano o para uso animal en medicina humana o medicina veterinaria y típicamente comprenderá cualesquiera uno o más de un diluyente, vehículo, o excipiente farmacéuticamente aceptable. Los vehículos o diluyentes aceptables para uso terapéutico se conocen bien en la técnica farmacéutica, y se describen, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A. R. Gennaro edit. 1985). La elección del vehículo, excipiente, o diluyente farmacéutico se puede seleccionar con respecto a la ruta pretendida de administración y práctica farmacéutica estándar. Las composiciones farmacéuticas pueden comprender como - o además de - el vehículo, excipiente o diluyente cualesquiera aglutinante(s), lubricante(s), agente(s) para suspensión, agente(s) para revestimiento, agente(s) para solubilización adecuados. Se pueden proveer en la composición farmacéutica los conservadores, estabilizantes, colorantes e incluso agentes saborizantes. Los ejemplos de conservadores incluyen benzoato de sodio, ácido sórbico y ésteres de ácido p-hidroxibenzóico. También se pueden utilizar antioxidantes y agentes para suspensión. Pueden existir diferentes requirimientos de composición/formulación dependientes de los diferentes sistemas de administración. A manera de ejemplo, la composición farmacéutica de la presente invención se puede formular para que se administre utilizando una mini-bomba o por una ruta mucosal, por ejemplo, como una aspersión nasal o aerosol para inhalación o solución ingerible, o parenteralmente en la cual la composición se formula en una forma inyectable, para administración, mediante, por ejemplo, una ruta intravenosa, intramuscular o subcutánea. Alternativamente, la formulación se puede diseñar para ser administrada por ambas rutas. Cuando el agente es para ser administrado mucosalmente a través de la mucosa gastrointestinal, debe ser capaz de permaneceer estable durante el tránsito a través del tracto gastrointestinal; por ejemplo, debe ser resistente a la degradación proteolítica, estable a pH ácido y resistente a los efectos detergentes de la bilis. Cuando sea apropiado, las composiciones farmacéuticas se pueden administrar mediante inhalación, en la forma de a supositorio o pesario, tópicamente en la forma de una loción, solución, crema, ungüento o polvo, mediante el uso de un parche para la piel, oralmente en la forma de tabletas que contienen excipientes tales como almidón o lactosa, o en cápsulas u óvulos ya sea solos o en mezcla con excipientes, o en la forma de elíxires, soluciones o suspensiones que contienen agentes saborizantes o colorantes, o se pueden inyectar parenteralmente, por ejemplo intravenosamente, intramuscularmente o subcutáneamente. Para administración parenteral, las composiciones se pueden utilizar mejor en la forma de una solución acuosa estéril la cual puede contener otras sustancias, por ejemplo suficientes sales o monosacáridos para elaborar la solución isotónica con la sangre. Para administración bucal o sublingual las composiciones se pueden administrar en la forma de tabletas o pastillas las cuales se pueden formular de manera convencional.

Combinación farmacéutica El compuesto de la presente invención se puede utilizar en combinación con uno o más de otros agentes activos, tales como uno o más de otros agentes farmacéuticos activos. A manera de ejemplo, los compuestos de la presente invención se pueden utilizar en combinación con otros inhibidores de la ? ?ß-HSD y/u otros inhibidores tal como un inhibidor de la aromatasa (tal como por ejemplo, 4hidroxiandrostenediona (4-OHA)), y/o inhibidores de la esteroide sulfatasa tal como EMATE y/o esferoides - tal como el sulfato de esterneuroesteroides dehidroepiandrosterona (DHEAS) que se presenta de manera natural y sulfato de pregnenolona (PS) y/u otros compuestos orgánicos estructuralmente similares. Además, o como alternativa, el compuesto de la presente invención se puede utilizar en combinación con un modificador de la respuesta biológica. El término modificador de la respuesta biológica ("BRM") incluye citocinas, moduladores inmunes, factores de crecimiento, factores reguladores de la haematopoiesis, factores estimulantes de la colonia, factores quimiotácticos, hemolíticos y trombolíticos, receptores de superficie celular, ligandos, moléculas de adhesión al leucocito, anticuerpos monoclonales, vacunas preventivas y terapéuticas, hormonas, componentes de la matriz extracelular, fibronectina, etc. Para algunas aplicaciones, preferiblemente, el modificador de la respuesta biológica es una citocina. Los ejemplos de citocinas incluyen: ¡nterleucinas (IL) -tales como IL-1 , IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-1 1 , IL-12, IL-19; Factor de Necrosis Tumoral (TNF) -tales como TNF-a; interferón alfa, beta y gamma; TGF-ß. Para algunas aplicaciones, preferiblemente la citocina es factor de necrosis tumoral (TNF). Para algunas aplicaciones, el TNF puede ser cualquier tipo de TNF - tales como TNF-a, TNF-ß, incluyendo derivados o mezclas de los mismos. Más preferiblemente la citocina es TNF-a. Las enseñanzas sobre el TNF se pueden encontrar en la técnica - tales como WO-A-98/08870 y WO-A-98/13348.

Administración Típicamente, un médico determinará la dosis real la cual será más adecuada para un sujeto individual y variará con la edad, peso y respuesta del paciente particular. Las dosis más bajas son ejemplares del caso promedio. Estos pueden, por supuesto, ser casos individuales en donde se merecen los intervalos de dosis mayores o menores. Las composiciones de la presente invención se pueden administrar mediante inyección directa. La composición se puede formular para administración parenteral, mucosal, intramuscular, intravenosa, subcutánea, intraocular o transdermal. Dependiendo de lo necesario, el agente se puede administrar a una dosis de 0.01 a 30 mg/kg de peso corporal, tales como de 0.1 a 10 mg/kg, más preferiblemente de 0.1 a 1 mg/kg peso corporal. A manera de ejemplo adicional, los agentes de la presente invención se pueden administrar de conformidad con un régimen de 1 a 4 veces por día, preferiblemente una o dos veces por día. El nivel de dosis específico y frecuencia de dosis para cualquier paciente particular puede variar y dependerá de una variedad de factores incluyendo la actividad del compuesto específico empleado, la estabilidad metabólica y longitud de acción de ese compuesto, la edad, peso corporal, salud general, sexo, dieta, modo y tiempo de administración, velocidad de excreción, combinación del fármaco, la severidad de la condición particular, y el hospedero que se somete a terapia. Además de los modos típicos de administración - anteriormente indicados - el término "administrado" también incluye administración mediante técnicas tales como transfección mediada por lípidos, liposomas, immunoliposomas, lipofectina, amfifilos catiónicos faciales (CFAs) y combinaciones de los mismos. Las rutas para dichos mecanismos de administración incluyen pero no se limitan a rutas mucosales, nasales, orales, parenterales, gastrointestinales, tópicas, o sublinguales. El término "administrado" incluye pero no se limita a la administración por una ruta mucosal, por ejemplo, como una aspersión nasal o aerosol para inhalación o como una solución ingerible; una ruta parenteral en donde la administración es mediante una forma inyectable, tales como, por ejemplo, una ruta intravenosa, intramuscular o subcutánea. Por lo tanto, para la administración farmacéutica, los compuestos de la presente invención se pueden formular en cualquier manera adecuada utilizando técnicas convencionales para formulación farmacéutica y vehículos, adyuvantes, excipientes, diluyentes farmacéuticos etc. y usualmente para administración parenteral. Las relaciones de dosis efectivas aproximadas pueden estar en el intervalo de 1 a 1000 mg/día, tales como de 10 a 900 mg/día o incluso de 100 a 800 mg/día dependiendo de las actividades individuales de los compuestos en cuestión y para una paciente de peso corporal promedio (70 Kg). Las relaciones de dosis más usuales para los compuestos más preferidos y más activos estarán en el intervalo de 200 a 800 mg/día, más preferiblemente, 200 a 500 mg/día, más preferiblemente de 200 a 250 mg/día. Estos se pueden proporcionar en regímenes de dosis particulares, regímenes de dosis divididos y/o en regímenes de dosis múltiples que tiene una duración de varios días. Para la administración oral éstos se pueden formular en tabletas, cápsulas, soluciones o suspensiones que contienen de 100 a 500 mg de compuesto por unidad de dosis. Alternativamente y preferiblemente los compuestos se formularán para administración parenteral en un vehículo adecuado parenteralmente administrable y proveyendo relaciones de dosis diarias particulares en el intervalo de 200 a 800 mg, preferiblemente de 200 a 500, más preferiblemente de 200 a 250 mg. No obstante, dichas dosis diarias efectivas variarán dependiendo de la actividad inherente del ingrediente activo y del peso corporal del paciente, dichas variaciones están dentro de la habilidad y juicio del médico.

Ciclo celular Los compuestos de la presente invención pueden ser útiles en el método de tratamiento de un trastorno del ciclo celular. Como se discute en "Molecular Cell Biology" 3a Ed. Lodish et al. páginas 177-181 diferentes células eucariónticas pueden crecer y dividirse a velocidades muy diferentes. Las células de levadura, por ejemplo, se pueden dividir cada 120 minutos, y las primeras divisiones de huevos fertilizados en células embrionarias de erizos de mar e insectos toman solamente 1530 minutos debido a que una célula grande pre-existente está subdividida. No obstante, la mayoría de las células vegetales y animales en crecimiento toman 10-20 horas para duplicar su número, y algunas se duplican a una velocidad mucho más lenta. Muchas células en adultos, tales como células nerviosas y células del músculo estriado, no se dividen; otras, semejantes a los fibroblastos que ayudan en la cicatrización de heridas, crecen según la demanda pero son quiescentes de otra manera. Incluso, cada célula eucariótica que se divide debe estar lista para donar material genético Igual a dos células hijas. La síntesis de ADN en células eucariontes no se presenta a lo largo del ciclo de división celular sino que se restringe a una parte de éste antes de la división celular. La relación entre la síntesis del ADN eucarionte y la división celular se ha analizado extensivamente en cultivo de células de mamífero que fueron capaces de crecer y de llevar a cabo división. En contraste con las bacterias, se encontró que, las células eucariontes gastan solamente una parte de su tiempo en la síntesis del ADN, y esto se completa horas antes de la división celular (mitosis). Por lo tanto se presenta un espacio de tiempo después de la síntesis del ADN y antes de la división celular; se encuentra que se presenta otro espacio después de la división y antes de la siguiente ronda de síntesis de ADN. Este análisis lleva a la conclusión de que el ciclo de la célula eucarionte consiste de una fase M (mitótica), una fase G- (el primer espacio), la fase S (síntesis de ADN), una fase G2 (el segundo espacio), y de regreso a M. Las fases entre mitosis (G-i, S, y G2) se conocen colectivamente como la fase intermedia. Muchas células que no se dividen en los tejidos (por ejemplo, todos los fibroblastos quiescentes) suspenden el ciclo después de la mitosis y justo antes de la síntesis del ADN; se dice que dichas células "en reposo" salen del ciclo celular y se encuentran en el estado de G0. Es posible identificar a las células cuando se encuentran en una de las tres etapas de la fase intermedia del ciclo celular, mediante la utilización de un seleccionador de célula activado por fluorescencia (FACS) para medir su contenido relativo del ADN: una célula que se encuentra en G1 (antes de la síntesis de ADN) tiene una cantidad definida x de ADN; durante S (replicacion del ADN), tiene entre x y 2x; y cuando se encuentra en G2 (o M), tiene 2x de ADN. Las etapas de la mitosis y citocinesis en una célula animal son las siguientes (a) Fase intermedia. La etapa Gz de la fase intermedia que inmediatamente precede al inicio de la mitosis. El ADN cromosómico ha sido replicado y unido a la proteína durante la fase S, pero los cromosomas aún no se observan como estructuras distintivas. El nucléolo es la única subestructura nuclear que es visible bajo microscopía de luz. En una célula diploide antes de la replicacion del ADN existen dos cromosomas morfológicos de cada tipo, y se dice que la célula de encuentra en 2n. En G2, después de la replicacion del ADN, la célula es 4n. Existen cuatro copias de cada ADN cromosomal. Puesto que los cromosomas hermanos aún no están separados entre sí, éstos se denominan cromátides hermanas. b) Profase temprana. Los centriolos, cada uno con un centriolo de la hermana recientemente formada, se mueven hacia polos opuestos de la célula; los cromosomas se pueden observar como hebras largas. La membrana nuclear se empieza a disgregar en vesículas pequeñas. (c) Profase media y tardía. Se completa la condensación del cromosoma; cada estructura cromosomal visible está compuesta de dos cromátides que se mantienen juntas en sus centrómeros. Cada cromátide contiene una de las dos moléculas de ADN hija recientemente replicadas. El huso microtubular empieza a radiar a partir de las regiones adyacentes a los centriolos, los cuales se mueven más cerca de los polos. Algunas fibras del huso alcanzan a colocarse de polo a polo; la mayoría va hacia las cromátides y se unen en los cinetocoros. (d) Metafase. Los cromosomas se mueven hacia el ecuador de la célula, en donde se alinean en el plano ecuatorial. Las cromátides hermanas pueden aún no estar separadas. (e) Anafase. Las dos cromátides hermanas se separan en cromosomas independientes. Cada una contiene un centrómero que está asociado con una fibra del huso a un polo, hacia el cual se mueve. Por lo tanto se dona a cada célula hija una copia de cada cromosoma. De manera simultánea, la célula se elonga, conforme lo hacen los husos de polo a polo. La citocinasis empieza conforme se empieza a formar la escisión del surco. (f) Telofase. Se forman nuevas membranas alrededor de los núcleos de las hijas; los cromosomas se desenrrollan y se vuelven menos distintivos, el nucléolo se vuelve visible de nuevo, y la membrana nuclear se forma alrededor de cada núcleo de la célula hija. La citocinesis casi se completa, y el huso desaparece conforme los microtúbulos y otras fibras se despolimerizan. A lo largo de la mitosis el centriolo de la célula "hija" en cada polo crece hasta que alcanza longitud total. Durante la telofase la duplicación de cada uno de los centriolos originales se completa, y se generarán nuevos centriolos en las células hijas durante la siguiente fase intermedia. (g) Fase intermedia. Después del término de la citocinesis, la célula entra a la fase G-i del ciclo celular y procede de nuevo alrededor del ciclo. Se apreciará que el ciclo celular es un proceso celular extremadamente importante. Las desviaciones a partir del ciclo normal de la célula pueden resultar en numerosos trastornos médicos. El ciclo celular incrementado y/o no restringido puede resultar en cáncer. El ciclo celular reducido puede resultar en condiciones degenerativas. El uso del compuesto de la presente invención puede proveer un método para tratar dichos trastornos y condiciones. Por lo tanto, el compuesto de la presente invención puede ser adecuado para uso en el tratamiento de trastornos del ciclo celular tales como cánceres, incluyendo cánceres dependientes de hormona y cánceres independientes de hormona. Además, el compuesto de la presente invención puede ser adecuado para el tratamiento de cánceres tales como cáncer de mama, cáncer ovárico, cáncer endometrial, sarcomas, melanomas, cáncer de próstata, cáncer pancreático etc. y otros tumores sólidos. Para algunas aplicaciones, el ciclo celular se inhibe y/o se previene y/o se detiene, preferiblemente en donde el ciclo celular se previene y/o se detiene. En un aspecto el ciclo celular se puede inhibir y/o prevenir y/o detener en la fase G2/M. En un aspecto el ciclo celular se puede prevenir y/o inhibir y/o detener irreversiblemente, preferiblemente en donde el ciclo celular se previene y/o se detiene irreversiblemente.

Por el término "irreversiblemente prevenido y/o inhibido y/o detenido" se entiende que después de la aplicación de un compuesto de la presente invención, o la remoción del compuesto aún se observan los efectos del compuesto, es decir prevención y/o inhibición y/o paro del ciclo celular. Más particularmente por el término "irreversiblemente prevenido y/o inhibido y/o detenido" se entiende que cuando se ensayó de conformidad con el protocolo de ensayo del ciclo celular presentado en la presente invención, las células tratadas con un compuesto de interés muestran menos crecimiento después de la etapa 2 del protocolo I que las células control. Los detalles en este protocolo se presentan a continuación. Por lo tanto, la presente invención provee compuestos los cuales: ocasionan inhibición del crecimiento de células de cáncer de mama positivas al receptor de estrógeno (ER+) y negativas al ER (ER-) in vitro mediante la prevención y/o inhibición y/o paro del ciclo celular; y/o ocasionando la regresión de los tumores mamarios inducidos por nitroso-metil urea (NMU) en animales intactos (por ejemplo no ovariectomizados), y/o prevención y/o inhibición y/o paro del ciclo celular en células cancerosas; y/o actúan in vivo mediante la prevención y/o inhibición y/o paro del ciclo celular y/o actúan como un agonista del ciclo celular.

Ensayo del ciclo celular (Protocolo 2) Procedimiento Etapa 1 Las células MCF-7 de cáncer de mama se siembran dentro de placas de cultivo de múltiples pozos a una densidad de 105 células/pozo. Las células se dejan unir y crecer hasta aproximadamente 30% de confluencia cuando son tratadas como sigue: Control-sin tratamiento Compuesto de interés (COI) 20 µ? Las células se crecen por 6 días en medio de crecimiento que contiene el COI con cambios de medio/COI cada 3 días. Al término de este periodo los números celulares se contaron utilizando un contador de células Coulter.

Etapa 2 Después del tratamiento de células por un period de 6 días con las células COI, éstas se re-sembraron a una densidad de 104 células/pozo. No se añaden tratamientos adicionales. Las células se deja que continúen creciendo por 6 días adicionales en la presencia de medio de crecimiento. Al término de este periodo se cuentan de nuevo los números celulares.

Cáncer Como se indicó, los compuestos de la presente invención pueden ser útiles en el tratamiento de un trastorno del ciclo celular. Un trastorno particular del ciclo celular es el cáncer. El cáncer permanece como una causa principal de mortalidad en la mayoría de los países occidentales. Las terapias del cáncer desarrolladas hasta ahora han incluido el bloqueo de la acción o síntesis de hormonas para inhibir el crecimiento de tumores dependientes de hormona. No obstante, se emplea de manera habitual quimioterapia más agresiva para el tratamiento de tumores independientes de hormona. Por lo tanto, el desarrollo de un elemento farmacéutico para tratamiento anti-cáncer de tumores dependientes de hormona y tumores independientes de hormona, incluso careciendo de algunos o de todos los efectos laterales asociados con quimioterapia, podría representar un avance terapéutico principal. Los inventores creen que el compuesto de la presente invención provee un método para el tratamiento de cánceres y, especialmente, cáncer de mama. Además o como alternativa el compuesto de la presente invención puede ser útil en el bloqueo del crecimiento de cánceres incluyendo leucemias y tumores sólidos tales como tumores de mama, de endometrio, de próstata, de ovario y pancreáticos.

Otras terapias También se entiende que el compuesto/composición de la presente invención puede tener otras implicaciones médicas importantes. Por ejemplo, el compuesto o composición de la presente invención puede ser útil en el tratamiento de los trastornos listados en WO-A-99/52890-viz: Además, o como alternativa, el compuesto o composición de la presente invención puede ser útil en el tratamiento de los trastornos listados en WO-A-98/05635. Para facilidad de referencia, se provee ahora parte de esa lista: diabetes incluyendo diabetes tipo II, obesidad, cáncer, inflamación o enfermedad inflamatoria, trastornos dermatológicos, fiebre, efectos cardiovasculares, hemorragia, coagulación y respuesta de fase aguda, caquexia, anorexia, infección aguda, infección por VIH, estados de choque, reacciones de injerto contra hospedero, enfermedades autoinmunes, lesión por reperfusión, meningitis, migraña y anti-trombosis dependiente de aspirina; crecimiento tumoral, invasión y extensión, angiogénesis, metástasis, malignidad, ascitos y malignidad de efusión pleural; isquemia cerebral, enfermedad isquémica cardíaca, osteoartritis, artritis reumatoide, osteoporosis, asma, esclerosis múltiple, neurodegeneración, enfermedad de Alzheimer, aterosclerosis, accidente cerebro vascular, vasculitis, enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa; periodontitis, gingivitis; psoriasis, dermatitis atópica, úlceras crónicas, epidermolisis bullosa; ulceración corneal, retinopatía y cicatrización de heridas quirúrgicas; rinitis, conjuntivitis alérgica, eczema, anafilaxis; restenosis, deficiencia cardíaca congestiva, endometriosis, aterosclerosis o endosclerosis. Además, o en la alternativa, el compuesto o composición de la presente invención puede ser útil en el tratamiento de trastornos listados en WO-A-98/07859. Para facilidad de referencia, se provee ahora parte de esa lista: citocina y actividad de proliferación celular/diferenciación; actividad ¡nmunosupresora o inmunoestimulante (por ejemplo para tratar deficiencia inmune, incluyendo infección con virus de deficiencia inmune de humano; relación de crecimiento de linfocito; tratamiento de cáncer y de muchas enfermedades autoinmunes, y para prevenir el rechazo de transplantes o la inmunidad inducida por tumor); regulación de la hematopoiesis, por ejemplo tratamiento de enfermedades mieloides o linfoides; promoción del crecimiento óseo, de cartílago, de tendón, de ligamento y de tejido nervioso, por ejemplo para cicatrización de heridas, tratamiento de quemaduras, úlceras y enfermedad · periodontal y neurodegeneración; inhibición o activación de hormona estimulante del folículo (modulación de la fertilidad); actividad quimiotáctica/quimiocinética (por ejemplo para movilizar tipos celulares específicos a sitios de lesión o infección); actividad hemostática y tromboiítica (por ejemplo para tratar hemofilia y accidente cerebro vascular); actividad antiinflamatoria (para tratar por ejemplo choque séptico o enfermedad de Crohn); como anti-microbianos; moduladores de por ejemplo metabolismo o conducta; como analgésicos; para tratar trastornos de deficiencia de especificidad; en un tratamiento de por ejemplo psoriasis, en medicina para humanos o medicina veterinaria. Además, o como alternativa, la composición de la presente invención puede ser útil en el tratamiento de trastornos listados en WO-A-98/09985. Para facilidad de referencia, se provee ahora parte de esa lista: actividad inhibitoria del macrófago y/o actividad inhibitoria de la célula T y por lo tanto, actividad anti-inflamatoria; actividad anti-inmune, por ejemplo efectos inhibidores en contra de una respuesta inmune celular y/o humoral, incluyendo una respuesta no asociada con la inflamación; inhibición de la capacidad de los macrofagos y células T para adherirse a los componentes de la matriz extracelular y a la fibronectina, así como expresión sobre-regulada del receptor fas en células T; inhibición de la reacción inmune no deseada y la inflamación incluyendo artritis, incluyendo artritis reumatoide, inflamación asociada con hipersensibilidad, reacciones alérgicas, asma, lupus eritematoso sistémico, enfermedades de la colágena y otras enfermedades autoinmunes, inflamación asociada con aterosclerosis, arteriesclerosis, enfermedad cardíaca aterosclerótica, lesión por reperfusión, paro cardíaco, infarto al miocardio, trastornos inflamatorios vasculares, síndrome de insuficiencia respiratoria u otras enfermedades cardiopulmonares, inflamación asociada con úlcera péptica, colitis ulcerativa y otras enfermedades del tracto gastrointestinal, fibrosis hepática, cirrosis hepática u otras enfermedades hepáticas, tiroiditis u otras enfermedades glandulares, glomerulonefritis u otras enfermedades renales y urológicas, otitis u otras enfermedades oto-rino-laringológicas, dermatitis u otras enfermedades dermales, enfermedades periodontales u otras enfermedades dentales, orquitis o epidídimo-orquitis, infertilidad, trauma orquidal u otras enfermedades testiculares inmuno-relacionadas, disfunción placental, insuficiencia placental, aborto habitual, eclampsia, pre-eclampsia y otras enfermedades inmunes y/o ginecológicas relacionadas con la inflamación, uveitis posterior, uveitis intermedia, uveitis anterior, conjuntivitis, corioretinitis, uveoretinitis, neuritis óptica, inflamación intraocular, por ejemplo retinitis o edema macular cistoide, oftalmía simpática, escleritis, retinitis pigmentosa, componentes inmunes e inflamatorios de la enfermedad degenerativa de fondus, componentes inflamatorios de trauma ocular, inflamación ocular ocasionada por infección, vitreo-retinopatías proiiferativas, neuropatía óptica isquémica aguda, cicatrización excesiva, por ejemplo siguiendo a la operación de filtración por glaucoma, reacción inmune y/o inflamación en contra de implantes oculares y otras enfermedades inmunes y enfermedades oftálmicas relacionadas con la inflamación, inflamación asociada con enfermedades autoinmunes o condiciones o trastornos en donde, tanto en el sistema nervioso central (SNC) como en cualquier otro órgano, la supresión inmune o la supresión de la inflamación podría ser benéfica, enfermedad de Parkinson, complicación y/o efectos laterales a partir del tratamiento de la enfermedad de Parkinson, complejo de demencia relacionada con SIDA y encefalopatía relacionada con SIDA, enfermedad de Devic, corea de Sydenham, enfermedad de Alzheimer y otras enfermedades degenerativas, condiciones o trastornos del SNC, componentes inflamatorios de accidentes cerebro vasculares, síndrome post-polio, componentes inmunes y componentes inflamatorios de trastornos siqu ¡áfricos, mielitis, encefalitis, pan-encefalitis esclerosante subaguda, encefalomielitis, neuropatía aguda, neuropatía subaguda, neuropatía crónica, síndrome de Guiliaim-Barre, corea de Sydenham, miastenia gravis, pseudo-tumoures cerebrales, Síndrome de Down, Síndrome de Huntington, esclerosis amiotrófica lateral, componentes inflamatorios de la compresión del SNC o trauma del SNC o infecciones del SNC, componentes ¡nflamatorios de atrofias y distrofias musculares, y enfermedades inmunes y enfermedades relacionadas con la inflamación, condiciones o trastornos de los sistemas nerviosos central y periférico, inflamación post-traumática, choque séptico, enfermedades infecciosas, complicaciones inflamatorias o efectos laterales de la cirugía, transplante de médula ósea u otras complicaciones del transplante y/o efectos laterales, complicaciones inflamatorias y/o complicaciones inmunes y efectos laterales de terapia génica, por ejemplo debido a infección con un vehículo viral, o inflamación asociada con SIDA, para suprimir o inhibir una respuesta inmune humoral y/o celular, para tratar o mejorar las enfermedades proliferativas de monocitos o de leucocitos, por ejemplo leucemia, al reducir la cantidad de monocitos o de linfocitos, para la prevención y/o tratamiento de rechazo del injerto en los casos de transplante de células, tejidos y órganos naturales o artificiales tales como córnea, médula ósea, órganos, lentes, marcapasos, tejido de piel natural o artificial.

Como se mencionó previamente, en un aspecto la presente invención provee el uso de un compuesto como se describe en la presente invención en la elaboración de un medicamento para uso en la terapia de una condición o enfermedad asociada con la 11 ß-HSD. Las condiciones y enfermedades asociadas con la ? ? ß-HSD se han revisado en Walker, E. A,; Stewart, P. M.; Trends in Endocrinology and Metabolism, 2003, 14 (7), 334-339. En un aspecto preferido, la condición o enfermedad se selecciona a partir del listado que consiste de: • trastornos metabólicos, tales como diabetes y obesidad • trastornos cardiovasculares, tales como hipertensión • glaucoma • trastornos inflamatorios, tales como artritis o asma • trastornos inmunes • trastornos óseos, tal como osteoporosis • cáncer • retardo de crecimiento intra-uterino • síndrome de exceso evidente de mineralocorticoides (AME) • síndrome de ovario poliquístico (PCOS) • hirsutismo • acné • oligo- o amenorrea • adenoma y carcinoma adrenal cortical • síndrome de Cushing • tumores pituitarios • carcinomas invasivos • cáncer de mama; y • cáncer endometrial. En resumen, la presente invención provee compuestos para uso como inhibidores de la esteroide deshidrogenasa, y composiciones farmacéuticas para los mismos.

BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS La presente invención se describirá con mayor detalle a manera de ejemplo solamente con referencia a las figuras anexas en las cuales:- La figura 1 es la gráfica 1 la cual muestra la cantidad de proteína por µ!_ de hígado de rata y de riñon de rata. La figura 2 es la gráfica 2 la cual muestra la concentración enzimática y curso de dependencia de tiempo, E a F, de la actividad de la 11ß-HSD tipo 1 en hígado de rata. La figura 3 es la gráfica 3 la cual muestra la concentración enzimática y curso de dependencia de tiempo, F a E, en la actividad de la 11 ß-HSD tipo 2 de riñon de rata,. La figura 4 es una gráfica que muestra eficiencias de extracción obtenidas con cuatro métodos de extracción. La figura 5 es una gráfica que muestra una comparación de la actividad de la 11ß-HSDI en microsomas hepáticos de rata y de humano. Las figuras 6A a 6D son una serie de gráficas que muestra el efecto del tiempo de incubación sobre la actividad de la 11 ß-HSDI microsomaí de humano. Las figuras 7A a 7D son una serie de gráficas que muestra el efecto de la concentración de proteína microsomaí sobre la actividad de la 11ß-HSDI microsomaí de humano, La figura 8 es una gráfica que muestra la curva de saturación del sustrato (cortisona) para la ? ?ß-HSDI microsomaí hepática de humano. La figura 9 es una gráfica Lineweaver-Burke de datos de saturación de sustrato para la 11ß-HSD microsomaí hepática de humano. La figura 10 es una gráfica que muestra la determinación de la IC50 para ácido glicirretínico. La figura 11 es una gráfica que muestra la determinación de la IC50 para carbenoxolona. Las figuras 12(A), 12(B) y 12(C) son gráficas que muestran la actividad de la 11p-HSD1 medida por inmunoensayo. La figura 12(A) muestra el efecto de la proteína; la figura 12(B) muestra el efecto de la cortisona; y la figura 12(C) muestra el efecto del Tween-80. La figura 13 es una gráfica que muestra la evaluación del ensayo para diseño de inmunoensayo de cortisol.

La figura 14 es una gráfica que muestra el efecto del incremento de la proteína microsomal sobre la medición de la actividad de la ? ?ß-HSDI detectada por el ensayo para diseño de inmunoensayo. La figura 15 es una gráfica que muestra la detección de la actividad de la 11p-HSD1 mediante RIA utilizando el anticuerpo anti-cortisol de Immunotech. La figura 16 es una gráfica que muestra el efecto de la diminución de la concentración del anticuerpo Immunotech sobre el grupo señal a ruido (grupo microsoma en comparación con el grupo blanco GA). La figura 17 es una gráfica que muestra la curva de saturación del anticuerpo de Immunotech para la detección de la actividad de la 11ß-HSD1 mediante RIA. La figura 18 es una gráfica que muestra la linearidad de la actividad de la ? ?ß-HSD microsomal hepática de humano detectada mediante RIA. La figura 19 es una gráfica que muestra el efecto de Tween 80 sobre la detección de la actividad de la ? ß-HSDI microsomal hepática de humano mediante RIA. La figura 20 es una gráfica que muestra el efecto de los sistemas de regulador de pH sobre la detección de la actividad de la ? ?ß-HSDI microsomal hepática de humano mediante RIA. La figura 21 es una gráfica que muestra la linearidad de la actividad de la 1 ip-HSD1 microsomal hepática de humano con tiempo de incubación detectada mediante RIA. La figura 22 es una gráfica que muestra la curva de saturación del sustrato para actividad de la ? ?ß-HSDI microsomal hepática de humano detectada mediante RIA. La figura 23 es una gráfica de Lineweaver-Burke de datos de saturación de sustrato para la actividad de la 1 ip-HSD1 microsomal hepática de humano detectada mediante RIA. La figura 24 es una gráfica que muestra la tolerancia al DMSO de la actividad de la ? ?ß-HSDI microsomal hepática de humano. La figura 25 es una curva IC50 para la inhibición de la actividad de la 1 1 P-HSD1 microsomal hepática de humano mediante ácido glicirretínico.

EJEMPLOS La presente invención se describirá ahora solamente a manera de ejemplo.

Materiales v métodos Materiales Enzimas - Los hígados de rata y los ríñones de rata se obtuvieron a partir de ratas Wistar normales (Harían Olac, Bicester, Oxon, RU). Tanto los ríñones como los hígados se homogeneizaron sobre hielo en regulador de pH de PBS-sacarosa (1g/10 mi) utilizando un Ultra-Turrax. Después de que los hígados y los ríñones se homogeneizaron el homogeneizado se centrifugó por cinco minutos a 4000 rpm. El sobrenadante obtenido se removió y almacenó en viales de vidro a -20°C. La cantidad de proteína por µ? de citosol de hígado de rata y de riñon se determinó utilizando el método de Bradford [14].

Aparato · Incubador: baño de agua con agitación mecánica, SW 20, Alemania. • Evaporador, Techne Driblock DB 3A, RU • Láminas de aluminio para CCF de 20 x 20 c de gel de sílice 60 F25 . Merck, Alemania. · Viales para centelleo: viales de 20 mi de polipropileno con tapas, SARSTEDT, Alemania. • Contador de centelleo: Beckman LS 6000 SC, Beckman Instruments Inc., EUA.

Soluciones • Medio de ensayo: Regulador de pH de PBS-sacarosa, Solución salina con pH regulado con fosfato de Dulbecco, 1 tableta/100 mi con sacarosa 0,25 M, pH 7,4 BDH Laboratory supplies, RU.

• Fluido para centelleo: Ecoscint A (National Diagnostics, EUA). • Soluciones de compuesto radioactivo: [1 ,2,6,7-3H]-cortisol (Sp. Ac. 84 Ci/milimoles) NEN Alemania, [4-14C]-cortisol (Sp. Ac. 53 mCi/milimoles) NEN Alemania. • Cr03 y ácido acético (Sigma Chemical Co., RU). • Fluido para extracción: Di-etiléter, Fischer Chemicals, RU. • Solución de reactivo de Bradford: Azul Brillante Coomassie G-250, 100 mg en 95% de etanol con 100 mi de ácido fosfórico (85% p/v) diluido a 1 litro.

Compuestos • Inhibidores: los compuestos se sintetizan de conformidad con las rutas sintéticas a continuación. • Cofactor: NADPH y NADP, Sigma Chemical Co., RU.

Métodos Síntesis de cortisona radio marcada La cortisona marcada (F) (3H-F y 14C-F) se oxidó en la posición C-11 con Cr03 con el objeto de sintetizar la cortisona marcada correspondiente (3H-E y 14C-E). Para esta reacción F se oxidó en Cr03 al 0,25% (p/v) en una solución de ácido acético/agua destilada al 50% (v/v). Luego el F marcado se añadió a 1 mi de la solución de Cr03, se mezcló en un vórtex y se puso en una incubadora por 20 minutos a 37°C. La mezcla de reacción acuosa se extrajo dos veces con 4 mi de di-etiléter, luego el di-etiléter se evaporó y el residuo se transfirió a una placa para CCF, la cual se desarrolló en el siguiente sistema, cloroformo:metanol 9:1 (v/v). La cortisona no marcada (E) también se procesó en una placa para CCF para localizar la posición de los estreoides marcados. Después de localizar la mancha de los esteroides marcados esta área se cortó de la placa para CCF y se eluyó con 0.5 mi de metanol.

La cantidad de proteína por L de hígado de rata y riñon de rata Se necesitó determinar la cantidad de proteína en hígado de rata y riñon de rata. El experimento se realizó de conformidad con el método de Bradford [14]. Se utilizó el siguiente método: primero se preparó una solución de BSA (proteína) (1 mg/ml). Las soluciones de proteína que contienen 10 a 100 µg de proteína se pipetearon dentro de tubos y los volúmenes se ajustaron con agua destilada. Luego se añadieron 5 mi de reactivo de proteína a los tubos y se mezclaron mediante vórtex. La absorbancia se midió a 595 nm después de 15 minutos y después de 1 hora en recipientes de 3 mi en contra del reactivo blanco. El peso de la proteína se gráfico en contra de la absorbancia correspondiente en una curva estándar utilizada para determinar la concentración de proteína en citosoles de hígado de rata y riñon de rata.

Ensayo de validación: concentración de enzima y dependencia de tiempo de la actividad de la 11 ß-HSD Antes de llevar a cabo los ensayos de la 11ß-HSD para examinar la conversión de E a F y F a E y la influencia que diferentes inhibidores tienen sobre estas conversiones se tiene que determinar la cantidad de homogeneizado de hígado de rata y de homogeneizado de rata de riñon y su tiempo de incubación. La 11 ß-HSD tipo 1 es la enzima responsable de la conversión de E a F y este tipo de enzima está presente en el hígado de rata. La solución del sustrato utilizada en este ensayo contenía 70,000 cpm/ml de 3H-E en PBS-sacarosa y 0.5 µ? de E no marcado y co-factor NADPH 89 mg/10 mi de solución de sustrato). Se añadieron a todos los tubos 1 mi de solución de sustrato y las diferentes cantidades de homogeneizado de hígado de rata. La cantidad de homogeneizado de hígado de rata necesaria para un ensayo se determinó al incubar la solución de sustrato con 25, 50, 100 y 150 µ? por 30, 60, 90 y 120 minutos a 37°C en un baño de agua con los tubos siendo agitados mecánicamente. Después de la incubación se añadieron 50 µ? de solución de recuperación, que contenía aproximadamente 8,000 cpm/50 de 14C-F y 50 µg/50 µ? de F no marcado para visualizar la mancha sobre la placa para CCF, para corregir la pérdida que se lleva a cabo en los siguientes dos pasos. Luego se extrajo F a partir de la fase acuosa con 4 mi de éter (ciclos de 2 x 30 segundos, mezclado en vórtex). Luego la fase acuosa se congeló utilizando hielo seco y la capa orgánica se decantó y se vertió dentro de tubos más pequeños y se evaporó. Luego se añadieron 6 gotas de éter a los tubos pequeños para re-disolver el residuo el cual se transfirió a una placa para cromatografía en capa fina de aluminio (placa -CCF). La placa para CCF se desarrolló en un tanque para CCF bajo condiciones saturadas. El sistema solvente utilizado fue cloroformo.metanol 9:1 (v/v). Las manchas F en la placa para CCF se visualizaron bajo luz UV y se cortaron de la placa para CCF (Rf = 0.45). Luego las manchas a partir de la placa para CCF se colocaron dentro de viales para centelleo y se añadieron 0.5 mi de metanol a todos los viales para eluir la radioactividad a partir de la placa para CCF por 5 minutos. Se añadieron 0 mi de Ecoscint a los viales para centelleo y se colocaron dentro del contador de centelleo para contar la cantidad de producto formado. El mismo procedimiento se utilizó para el ensayo de la ? ß-HSD tipo 2, la conversión de F a E, para determinar la cantidad de un riñon de rata a ser utilizado y el tiempo de incubación. Excepto que a este tiempo la solución de sustrato contenía 3H-F y F no marcado y la recuperación contenía 4C-E y E no marcada y la cortisona tuvo un valor Rf de 0.65 en la CCF.

Procedimiento del ensayo- los inhibidores de la 11 B-HSD En este ensayo se evaluó la influencia de diferentes Inhibidores sobre la actividad de la ? ? ß-HSD tanto en orientaciones reductivas (tipo 1) y oxidativas (tipo 2). En la orientación reductiva E es el sustrato y F el producto y viceversa en el caso de la oxidación. El método descrito en la presente invención es para la orientación oxidativa.

La solución de sustrato contenía aproximadamente 50,000 cpm/ml de 3H-F en PBS-sacarosa y 0.5 µ? de F. Se añadió 1 mi de la solución de sustrato a cada tubo, los inhibidores también se añadieron, a una concentración de 10 µ?, a cada tubo excepto a los tubos "control" y "blanco". Se añadieron 150 µ? a todos los tubos excepto a los blancos, esto se realizó para corregir la cantidad de 3H-F espontáneamente formado. Los tubos se incubaron por 60 minutos en un baño de agua con agitación mecánica a 37°C. La cantidad de homogeneizado de riñon o de hígado y el tiempo de incubación utilizado se produjo a partir del ensayo de dependencia de enzima y tiempo. Después de la incubación se añadieron 50 µ? de la solución de recuperación para corregir la pérdida realizada en los siguientes pasos, que contenían 5000 cpm/50 µ? de 1 C-E y 50 µg 50 µ? de E no marcada (para visualizar la mancha en la placa para CCF). Luego la mezcla acuosa se extrajo con 4 mi de éter (ciclo de 2 x 30 segundos, mezclado en vórtex). Después de congelar la fase acuosa, la capa de éter (superior) se decantó en tubos más pequeños y se evaporó a 45°C hasta que estuvo completamente seco. Luego el residuo se redisolvió en 6 gotas de éter y se transfirió a una placa para CCF. La placa para CCF se desarrolló en un sistema solvente de cloroformo:metanol (9:1 v/v), la placa para CCF se procesó por aproximadamente 90 minutos hasta que el frente del solvente se movió aproximadamente 18 cm. La posición del producto E se visualizó bajo luz UV y se cortó a partir de la placa para CCF y se colocó dentro de viales para centelleo. La radioactividad se eluyó durante 5 minutos con 0.5 mi de metanol.

Luego se añadieron 0.5 mi de PBS-sacarosa y 10 mi de Ecoscint y se mezclaron en vértex antes de contar en el contador de centelleo. Antes de contar las muestras, se prepararon dos viales con actividad total. Estos contenían 0.5 mi de la solución del sustrato, 50 µ!_ de la solución de recuperación, 0.5 mi de metano! y 10 mi de Ecoscint. Estos dos viales con actividad total fueron necesarios para determinar la cantidad de 14C-E y 3H-F al inicio para elaborar los cálculos. En el caso de la orientación reductora, E a F, se utilizó el mismo método. Solamente la solución de sustrato que contenía 3H-E y E no marcada y la solución de recuperación que contenía 14C-F y F no marcado son diferentes al método utilizado en la orientación oxidativa. Después de probar a todos los inhibidores a 10 µ? se realizó un experimento dosis-respuesta para los inhibidores más potentes de la ? ß-HSD tipo 1 y 2. Para observar el porcentaje de inhibición se utilizaron cuatro concentraciones diferentes, 1 , 5, 10 y 20 µ?. Tanto el método reductivo tipo 1 para hígado de rata, como el método oxidativo tipo 2 para riñon de rata fueron los mismos a lo largo de todo el experimento.

Resultados La cantidad de proteína por L de hígado de rata y riñon de rata Se llevó a cabo un experimento inicial para determinar la cantidad de proteína en citosol de hígado de rata y en citosol de riñon de rata, para ser añadido a cada tubo. La gráfica 1 en la figura 1 muestra la curva estándar a partir de la cual se calculó la cantidad de proteína utilizada en ambos experimentos. La cantidad de proteína añadida a cada tubo en el experimento de hígado de rata fue de 75.5 µg (por 25 µ?_). En el experimento de riñon de rata la cantidad de proteína añadida a cada tubo fue de 135.6 µg (por 150 µ?).

Concentración de la enzima y dependencia del tiempo de la actividad de la 11 ß-HSD En este experimento se determinó la cantidad de homogeneizado de hígado de rata y de homogeneizado de riñon de rata añadida a cada tubo, así como el tiempo de incubación. La gráfica 2 en la figura 2 muestra la concentración de la enzima y el curso de dependencia de tiempo del experimento de hígado de rata E a F, de la actividad de la 11ß-HSD tipo 1. La gráfica 3 en la figura 3 muestra la concentración de la enzima y el curso de dependencia de tiempo F a E, de la actividad de la ? ?ß-HSD tipo 2. Después de dibujar las gráficas, se seleccionaron la cantidad óptima del citosol de hígado de rata y del citosol de riñon de rata, así como ambos tiempos de incubación. Una regla importante cuando se seleccionan ambas variables, es seleccionar una cantidad de hígado de rata y de riñon de rata y de tiempo de incubación en una parte linear de la gráfica. Esto se realiza para evitar fluctuaciones en la actividad enzimática. La cantidad del citosol de hígado de rata seleccionada fue de 25 µ? y 90 minutos de tiempo de incubación, la cantidad del citosol de riñon de rata seleccionada fue de 150 µ? y 60 minutos de tiempo de incubación.

Los inhibidores de la 11B-HSD En este experimento se determinó la influencia de los diferentes inhibidores sobre la conversión de E a F y de F a E. La razón de porqué se examinó la inhibición en ambas orientaciones fue la de hacer una comparación entre los inhibidores y cuál tipo de ? ?ß-HSD inhibían más. Los compuestos se seleccionaron por su capacidad para inhibir a la ? ?ß-HSD tipo 1 (E a F) y tipo 2 (F a E). Todos los inhibidores se probaron inicialmente a una concentración de 10 µ?. El porcentaje de inhibición se calculó conforme el porcentaje de disminución del producto formado de 3H-E y de 3H-F, se comparaba con la actividad control (los tubos sin inhibidor). Todos los resultados calculados son medias, n=2.

CUADRO 2 Efecto inhibidor STX Estructura % de inhibición de % de inhibición de No. 11PHSD1 a 10 µ? 11 HSD2 a 10 µ estándar típico ± estándar típico + 5% 5% 707 21 11 708 39 11 709 10 13 710 55 10 711 37 6 712 24 3 713 26 3 730 32 9 Desarrollo de ensayo biológico utilizando 11 ß-hidroxiesteroide deshidrogenasa tipo 1 de humano.

Procedimiento de operación estándar para el radioinmunoensavo de la ? ? ß-hidroxiesteroide deshidrogenasa tipo 1 del cortisol.

RIA de la 1 1 B-HSD 1 de cortisol. Reactivos: Se obtuvieron cortisona, cortisol (hidrocortisona), NADPH, Glucosa-6-fosfato, ácido glicirretínico (GA), dextrán cubierto con carbón activado (C6197) y DMSO a partir de Sigma Aldrich, Carbenoxolona se obtuvo a partir de ICN Biomedicals, Producto 215493001 , 3H-cortisona se obtuvo a partir de American Radiolabelled Compounds Inc, Producto ART-743, 3H-cortisol se obtuvo a partir de NEN, Producto Net 396, 4C-cortisol se obtuvo a partir de NEN, Producto NEC 163, microsomas hepáticos de humano se obtuvieron a partir de XenoTech, producto H061 O/Lote 0210078, microsomas hepáticos de rata se obtuvieron a partir de XenoTech, glóbulos de SPA se obtuvieron a partir de Amersham, Producto RPNQ0017, el equipo de inmunoensayo se obtuvo a partir de Assay Designs, Producto 900-071 , el anticuerpo anti-cortisol de Immunologicals Direct fue el Producto OBT 0646, el anticuerpo anti-cortisol de Sigma fue el producto C8409 y el anticuerpo de Immunotech se abasteció por Beckman, Producto IMBULK3 6D6.

Soluciones de reguiador de pH Regulador de pH 1 , a partir de Barf [15]: Tris-HCI 30 mM, pH 7.2, que contiene EDTA 1 mM Regulador de pH 2, a partir del protocolo Sterix: PBS (pH 7.4) que contiene sacarosa 0.25M Regulador de pH 3, a partir del protocolo Sigma RIA: Tris-HCI 50 mM, pH 8, que contiene NaCI 0.1 M y 0.1 % de gelatina Solución de paro, a partir de Barf [ 5]: ácido glicirretínico 1 mM en 100% de DMSO Los ensayos de enzima se llevaron a cabo en la presencia de NADPH 181 µ?, Glucosa-6-fosfato 1 mM y concentraciones de cortisona indicadas para cada experimento. Regulador de pH para ensayo de enzima: Tris-HCI 30 mM, pH 7.2 que contiene EDTA 1 mM Regulador de pH para unión a anticuerpo: Tris-HCI 50 mM, pH 8, que contiene NaCI 0.1 M y 0.1 % de gelatina Preparación del compuesto: Prepare soluciones de almacenamiento 10 mM en 00% de DMSO a 100 veces la concentración de ensayo requerida. Diluya en el regulador de pH para ensayo 1 en 25. También diluya DMSO puro 1 en 25 detro del regulador de pH para ensayo para controles. Preparación del sustrato: Prepare una solución de cortisona en etanol 600 veces la concentración de ensayo requerida (175 nM). Diluya este 1 en 50 en el regulador de pH para ensayo. Prepare NADPH como una solución con 1.8 mg/ml en regulador de pH para ensayo. Prepare G-6-P como una solución con 3.65 mg/ml en regulador de pH para ensayo. Mezcle estas 3 soluciones 1:1:1 para hacer una solución de volumen adecuado para adiciones de 25 µ? a cada muestra. Añada 0.5 µ?? de cortisona tritiada por 25 µ? y mezcle la solución bien. Preparación de microsoma: Diluya la solución de almacenamiento de 20 mg/ml 1 en 100 con regulador de pH para ensayo. Preparación del anticuerpo: Diluya la solución de almacenamiento del anticuerpo a 17 µg/ml en regulador de pH para unión de anticuerpo. Preparación del dextrán cubierto con carbón activado: Haga una solución de 20 mg/ml en regulador de pH para unión de anticuerpo y enfríe sobre hielo. Ensayo de la enzima: A una placa de polipropileno de 96 pozos con fondo en forma de u añada: 25 µ? de la dilución del compuesto o DMSO diluido a los controles, NSB's y blancos 10 µ? de GA 1 mM en DMSO (solución de paro de enzima) a blancos 25 µ? de mezcla del sustrato a todas las muestras 50 µ? de microsomas diluidos a todas las muestras Incube la placa por 30 minutos a 37°C con agitación Añada 10 µ? de solución de paro de enzima a todos los pozos excepto a los blancos Añada 100 µ? de solución de anticuerpo a todos los pozos excepto los pozos con NSB's, añada el regulador de pH para unión del anticuerpo a estos pozos Incube a 37°C por 1 hora Enfríe la placa sobre hielo por 15 minutos Añada 50 µ?/???? de solución de carbón activado y mezcle con una pipeta de 8 canales (4-5 aspiraciones) Enfríe la placa sobre hielo Centrifugue a 4°C, 2000 x g por 15 minutos Transfiera 100 µ? del sobrenadante dentro de una Optiplate y también añada 25 µ? de la mezcla del sobrenadante a 2 pozos vacíos para indicar la eficiencia del conteo. Añada 200 µ? de Microscint 40 a todos los pozos y cuente sobre un Topcount Radioimnunoensavo El ensayo de la enzima ? ß-HSD se llevó a cabo siguiendo el procedimiento de operación estándar descrito anteriormente en las placas de polipropileno de 96 pozos con fondo en forma de u o en tubos. Eppendorf como se indica para cada experimento. De manera subsecuente al paro de la reacción de la enzima, se prepararon 100 µ? del anticuerpo en regulador de pH 3 a menos que se indique de otra manera a las muestras prueba y se añadieron 100 µ? del regulador de pH 3 a las muestras de NSB. Las muestras se incubaron por 1 hora a 37°C y se enfriaron sobre hielo por 15 minutos. El dextrán cubierto de carbón activado (50 µ?/muestra) se preparó a la concentración indicada en el regulador de pH 3 y las muestras se mezclaron (se sometieron a un vórtex para los tubos y se aspiraron 5 veces con una pipeta de 8 canales para placas de 96 pozos) y se enfriaron por 10 minutos adicionales. Las muestras se centrifugaron a 200 x g por 15 minutos a 4°C para concentrar el carbón activado. Las alícuotas del sobrenadante ( 00 µ?) se transfirieron a una Optiplate y se contaron en el Topcount en 150-200 µ? de Microscint 40. En algunos experimentos, las alícuotas del sobrenadante se transfirieron a viales de centelleo y se contaron en el Tricarb LSC en 5 mi de líquido de centelleo Ultima Gold.

Desarrollo del ensayo de la 11 ß HSD Ensayo con formato de CCF de la 11 ß HSD Separación de la cortisona y el cortisol Antes de llevar a cabo un ensayo de enzima, se investigaron los sistemas solventes reportados en la literatura para la separación de cortisona a partir de cortisol [16, 17]. Las soluciones de cortisona y cortisol a 10 mg/ml se prepararon en metanol, y las alícuotas se vertieron sobre una placa para CCF de gel de sílice. La placa se procesó en CH2CI2: IMS 92: 8 v/v (2). Luego la placa se secó al aire y se asperjó con 0.1 % de rodamina B en metanol para visualizar las manchas. El cuadro a continuación describe la separación obtenida.

CUADRO 3 Separación de cortisona a partir del cortisol mediante CCF Esta separación se consideró adecuada para uso en un ensayo de enzima. La literatura detalla diversos métodos para extraer el cortisol a partir de una solución acuosa [16, 17]. Con el objeto de seleccionar un método para uso, se obtuvo cortisol marcado con [14C] a partir de NEN. Se preparó una solución de almacenamiento en solución salina con pH regulado con fosfato (PBS) que contenía 4000 DPM en 50 µ? con cortisol frío (1 g) añadido como un vehículo. La concentración final de etanol fue del 0.4%. Las alícuotas de esta solución se añadieron a tubos de vidrio (100 µ?) y se llevaron a cabo las siguientes extracciones: 1.1 mi de CH2CI2, se sometió al vórtex y se pasó a través de un papel filtro separador de la fase (Whatman, IPS) se sometieron 2.1 mi de acetato de etilo, al vótex y se pasaron a través de un papel filtro separador de la fase 3. 1 mi de CH2CI2 y 200 µ? de 0.05% de Cacb, se sometió a vótex, se centrifugó (500 g por 5 minutos) y se removió la fase acuosa superior 4.1 mi acetato de etilo y 200 µ? de 0.05% de Cac , se sometieron a vótex, se centrifugaron (500 g por 5 min) y se recolectó la fase orgánica superior. Las fases orgánicas se secaron y los residuos se tomaron en 100 µ? de IMS. Una alícuota de esto se colocó sobre una placa para CCF y la placa se procesó como se mencionó anteriormente. Después de la visualización con Rhodamina B, las manchas se rasparon en tubos de centelleo y se contaron en un contador de centelleo líquido (Packard TriCarb) en 5 mi de solución de centelleo Ultima gold. Las eficiencias de extracción se calcularon y se proporcionan en la figura 4. A partir de estos resultados parece que el 90% del cortisol se pierde mediante la filtración para separación de fase. El acetato de etilo parece extraer el cortisol más eficientemente que el CH2CI2, posiblemente debido a que la fase orgánica es más fácil de recolectar. El acetato de etilo parece ser un método adecuado de extracción.

Actividad Microsomal de la 11B-HSD1 hepática de humano y de rata. Se evaluó la actividad de la ?ß-HSDI en microsomas hepáticos de rata y de humano, para determinar las concentraciones mínimas de proteína microsomal requeridas para la medición de la actividad enzimática. El experimento se realizó de conformidad con el método de Bradford [14]. El ensayo se llevó a cabo en regulador de pH 2 y la concentración de cortisona utilizada fue de 2 µ? que contenía 0.5 µ?\ de [3H]-cortisona por incubación. Los microsomas se evaluaron a concentraciones que tienen intervalos a partir de 50 µ9 a 400 µg de proteína por incubación en un volumen de incubación final de 100 µ? en tubos de ensayo de vidrio. Las muestras se incubaron por 1 hora en un baño de agua con agitación a 37°C y el ensayo se detuvo mediante la adición de 1 mi de acetato de etilo. Para corregir para la recuperación, se añadieron 50 µ? de [14C]-cortisol a las muestras seguido por 200 µ? de 0.05% de CaCI2. Las muestras se mezclaron mediante el vótex y se centrifugaron como se describió anteriormente. La fase orgánica superior se removió y se secó, y el residuo se disolvió en 100 µ? de metanol y se vertieron alícuotas de 50 µ? sobre las placas para CCF, las cuales se procesaron como se describió anteriormente. Las muestras se contaron en un contador de centelleo líquido TriCarb utilizando un programa de marcado dual. La eficiencia de recuperación se determinó a partir del DPM obtained en 50 µ? de solución de [ 4C]-cortisol, el cual se contó con las muestras. Los resultados se muestran en la figura 5. Las actividades de la ? ? ß-HSDI en microsomas de rata y de humano fueron similares, 0.7 pmoles/mg/minuto y 0.5 pmoles/mg/minuto para microsomas de rata y de humano respectivamente. La actividad en los microsomas de humano aparentemente no está relacionada con la concentración de la proteína microsomal, lo cual puede sugerir que el intervalo de la concentración de la proteína examinado es demasiado grande. Se evaluaron las concentraciones menores de proteína de microsomas de humano; 3.7, a 100 µg por muestra. El curso de tiempo de actividad también se determinó, a partir de 0 a 60 minutos a 37°C. Las condiciones de extracción fueron como se describieron anteriormente. Los resultados a partir de estos experimentos se muestran en las figuras 6A - 6D y 7A - 7D. Los resultados mostrados en las figuras 6A - 6D y 7A - 7D demuestran que la actividad enzimática es linear a tiempos de incubación superiores a 30 minutos a todas las concentraciones de proteína microsomal evaluadas, y que la actividad enzimática es linear a concentraciones de proteína microsomal por debajo de 30 µg por muestra. Se examinó la influencia de la concentración del sustrato sobre la actividad. La concentración de [3H]-cortisona se mantuvo constante a 0.5 µ0?/p??ß5?G8, y la cortisona no marcada varió a partir de 44 nM a 2 µ . El ensayo se llevó a cabo con 10 µg de proteína microsomal por muestra con un tiempo de incubación de 30 minutos a 37°C. Los resultados se muestran en la figura 8. Una doble gráfica recíproca (Lineweaver-Burke) de estos datos proporciona una Km evidente para cortisona de 660 nM, figura 9. Se examinaron los compuestos estándares ácido glicirretínico y carbenoxolona en este sistema de ensayo, como parte del procedimiento de validación. El ensayo se llevó a cabo utilizando 175 nM del sustrato de cortisona, con 10 µ9 de proteína microsomal y una incubación del 30 minuto a 37°C, como se describe por Barf [15]. Aunque los datos en las figuras 8 y 9 anteriormente mencionados sugieren que está concentración del sustrato no es saturable bajo estas condiciones de ensayo. Se evaluaron el ácido glicirretínico y carbenoxolona a concentraciones a partir de 0.012 µ? a 3 µ?, la concentración del DMSO fue del 1 % en todas las muestras. Estos resultados se muestran en las figuras 10 y 11. El ácido glicirretínico y la carbenoxolona producen valores IC50 de 40 nM y 119 nM respectivamente. La IC50 reportada para carbenoxolona por Barf et al. utiliza el formato SPA y 11 ß-HSD recombinante es 330 nM [15], aproximadamente tres veces menos potente. La diferencia en la potencia en los dos sistemas de ensayo se debe probablemente a las condiciones diferentes del ensayo, SPA en comparación con la ccf del punto terminal, y también la enzima fuente, enzima hepática nativa en comparación con la enzima recombinante. Las condiciones del ensayo anteriormente descritas apoyan la presencia de una buena actividad enzimática no obstante, la cual se puede transferir a un formato de placas de 96 pozos.

Desarrollo de ensayos de 113HSD1 de alta resolución El abastecimiento del anticuerpo utilizado por Barf [15] en el ensayo de centelleo por proximidad (SPA) ha probado ser problemático. Un lote muestra del anticuerpo (a partir de Immunotech) se evaluó para adecuación y se colocó un segundo orden para una cantidad más grande. Se desarrolló un ensayo fuerte de placa de 96 pozos utilizando formato de radioinmunoensayo (RIA) utilizando el anticuerpo Immunotech disponible, esto se describe a continuación.

Formato de inmunoensavo Se evaluó un sistema de ensayo con diseño de inmunoensayo enzimático como un formato de ensayo potencial. La base del ensayo es la competencia por la unión al anticuerpo entre el cortisol de la muestra, generado por la ? ?ß-HSDI , y la unión al cortisol marcado. El anticuerpo para la detección del anti-cortisol provisto en el equipo es un anticuerpo monoclonal de ratón, que se ha reportado que reacciona de manera cruzada menos del 0.1% con la cortisona. No obstante el equipo se diseña para el análisis de los niveles de cortisol en saliva, orina, suero y plasma y también en medio de cultivo para tejido, más que para determinar la actividad enzimática. Se utilizaron las condiciones del ensayo de la 1 ip-HSD1 que se describen por Barf et al [15]; microsomas hepáticos de humano en regulador de pH 1 a concentraciones de proteína de 25 µg a 200 µg, cortisona a concentraciones de 44 nM a 700 nM incubada por 60 minutos a 37°C. También se investigó el efecto de 0.9% de Tween 80, puesto que se reportó que este detergente mejora la actividad de las enzimas implicadas en el metabolismo de esteroides. Los resultados se muestran en las figuras 12A - 12C. La figura 12(A) muestra el efecto de la proteína. Los datos tomados a partir del grupo de cortisona 700 µ? evaluado en la presencia de Tween-80. La figura 12(B) muestra el efecto de la cortisona. Los datos tomados a partir del grupo de proteína microsomal 25 g evaluado en la presencia de Tween-80. La figura 12(C) muestra el efecto del Tween-80. Los datos tomados a partir del grupo de proteína microsomal 25 g evaluado en la presencia de cortisona 700 µ . El ensayo detectó cortisol en la curva estándar (313 pg/ml a 10,000 pg/ml) como se esperaba pero la señal obtenida a partir de las muestras del ensayo enzimático disminuyeron con la concentración de la proteína microsomal en incremento, sugiriendo que la proteína microsomal puede interferir con el inmunoensayo, figura 12(A). La adición de cortisona exógena no tuvo efecto sobre los niveles de cortisol detectado en las muestras de ensayo enzimático, sugiriendo que el anticuerpo no reacciona de manera cruzada con la cortisona, figura 12(B). La inclusión de detergente en el regulador de pH para ensayo enzimático tuvo poco efecto, figura 12(C). Las condiciones del ensayo se variaron para determinar si fue conveniente utilizar el sistema de inmunoensayo para detectar la actividad de la 11 -HSD1 ; 24 µg de proteína microsomal por muestra y 2 µ? de sustrato de cortisona en el regulador de pH 2. La actividad enzimática también se midió en las muestras después de la adición del reactivo para desplazamiento del esteroide; un componente del equipo el cual libera cortisol a partir de la proteína de unión a cortisol, si está presente en la muestra. El ensayo detectó el cortisol en la curva estándar (313 pg/ml a 10,000 pg/ml). La figura 13 muestra la absorbancia a 405 nm obtenida para los diferentes grupos: Las concentraciones más altas y más bajas del cortisol estándar se han incluido en la figura 13 como 313 pg/ml y 1000 pg/ml junto con la absorbancia NSB para mostrar el intervalo dinámico obtenido en el ensayo. La absorbancia obtenida en la presencia de la mezcla de reacción que se toma a partir de las muestras incubadas con proteína microsomal ("Enzima") son más pequeñas que aquellas en la presencia de la mezcla de reacción que no contiene proteína microsomal ("sin enzima") indicando incrementos en los niveles del cortisol. En la presencia del equipo del reactivo de desplazamiento esteroideo ("DR") estas dos mezclas de reacción muestran el mismo patrón pero la señal disminuye. El ácido glicirretínico (GA) en la presencia de la concentración más alta del cortisol estándar no tiene efecto sobre la capacidad del equipo para medir las concentraciones de cortisol. Aunque la relación señal a fondo de 2.5 para el ensayo es un poco baja, estos datos demuestran que el anticuerpo se puede unir al conjugado cortisokAP y que éste se puede desplazar por el cortisol. Se llevó a cabo un experimento para examinar el efecto del incremento en la concentración de la proteína microsomal, en un intento de mejorar la señal a ruido obtenida.

La proteína microsomal se evaluó a partir de 100 µ9/?????8???? hacia abajo a 5 µ9/?? ^3???? utilizando cortisona 2 µ? en regulador de pH 2. Todas las otras condiciones fueron idénticas a aquellas anteriormente descritas. Los resultados se muestran en la figura 14. La disminución de la proteína microsomal a partir de 10 µ9/?????3???? a 5 9/?????3???? resulta en una disminución correspondiente en la actividad enzimática. El incremento de la proteína microsomal por arriba de 10 resulta en una eliminación de la señal lo cual se puede deber al color de los microsomas. Por lo tanto el intervalo dinámico de este ensayo no puede mejorarse al incrementar la concentración de proteína microsomal.

Desarrollo de RIA utilizando anticuerpo de Immunotech El ensayo de la 1 i HSD1 se llevó a cabo utilizando 10 g/pozo de proteína microsomal hepática de humano. El anticuerpo Immunotech se utilizó en el RIA a concentraciones a partir de 6.25 µ?/???? a 25 µ9/????, los resultados se muestran en la figura 15. El anticuerpo Immunotech trabajó bien en el ensayo y produjo buenas señales a fondo a todas las concentraciones probadas. La señal a ruido con 12.5 y 6.1 µ9 de anticuerpo por pozo fue similar sugiriendo que puede ser posible reducir la concentración del anticuerpo. Se examinó el título del anticuerpo, a concentraciones a partir de 0.67 µ9/???? a 6.7 µ9/????. El ensayo 11 HSD se llevó a cabo utilizando proteína microsomal de humano a 20 µ9/????, para generar la señal óptima a fondo. Cada concentración de anticuerpo se probó en contra de un blanco "no enzima" (regulador de pH sustituido por microsomas). Un "blanco GA" (10 µ? de solución de paro añadidos antes a los microsomas) y un grupo control. Los resultados se muestran en las figuras 16 y 17. Las curvas de saturación indican que no existe diferencia en la detección de la actividad enzimática por arriba de 1.68 µg/pozo. La relación señal a fondo con esta concentración de anticuerpo es buena, (6 veces). Consecuentemente el anticuerpo será utilizado a 1.7 g/pozo en ensayos futuros. Se examinó la linearidad de la actividad enzimática con la concentración de la proteína microsomal hepática de humano utilizando detección por RIA. El ensayo 1 ipHSD1 se llevó a cabo con concentraciones de proteína microsomal variables de 1 µg/pozo a 40 µg pozo. La actividad de la 11 HSD1 fue linear con proteína hasta las concentraciones de 20 µg/pozo, figura 18, confirmando los resultados obtenidos con el ensayo clásico de enzima (figuras 7A - 7D). La concentración óptima de la proteína microsomal de humano para utilizarla en el ensayo parece ser de 10 µ9 ????. También se investigó el efecto de incluir Tween 80 en el regulador de pH para ensayo. Este ensayo se llevó a cabo en paralelo con el ensayo anteriormente mencionado y bajo las mismas condiciones excepto que el regulador de pH para ensayo enzimático (regulador de pH 2) contenía 0.005% de Tween 80. La proteína microsomal se evaluó a cuatro concentraciones. Se encontró que Tween 80 incrementa las CPM blanco, reduciendo la señal a ruido del ensayo. Los datos representativos, a partir del grupo evaluado de proteína microsomal 10 µ?/????, se muestran en la figura 19. Se obtuvieron resultados similares con todas las concentraciones de proteína microsomal examinadas, consecuentemente el Tween no será utilizado en los futuros estudios. Para simplificar el protocolo de tal manera que ambos ensayos enzimáticos y etapas de RIA se llevan a cabo en el mismo regulador de pH, ambas fases se llevaron a cabo ya sea en un regulador de pH para ensayo enzimático (regulador de pH 2) o regulador de pH 3 (regulador de pH para RIA). La concentración de proteína microsomal utilizada fue de 10 µg/pozo y la concentración de cortisona fue de 175 nM. Al llevar a cabo ambos ensayos enzimáticos y RIA en el regulador de pH 3 parece que los datos mejoran ligeramente, figura 20. Se investigó la linearidad de la actividad enzimática con el tiempo de incubación. El ensayo enzimático se llevó a cabo con 10 g pozo de proteína microsomal y con 175 nM de cortisona, y se detuvo a puntos variables de tiempo, los resultados se muestran en la figura 21. Con las concentraciones de proteína microsomal de 10 µg pozo y de 175 nM de sustrato, la reacción es linear en los puntos de tiempo hasta 30 minutos. Estos resultados indican que una concentración de sustrato de 175 nM es demasiado baja. La Km evidente observada en el ensayo clásico de la 1 ipHSD1 fue de 660 nM (figuras 8 y 9), aunque estos datos son mediciones de puntos terminales, por lo tanto no es cierto que las velocidades iniciales se midieron en los grupos con sustrato bajo con un tiempo de incubación de 30 minutos. No obstante, los valores Km publicados para la cortisona en los ensayos de la 1 ipHSD1 microsomal hepática de humano están en el intervalo micromolar [18, 19]. Aunque 175 nM del sustrato está bien por debajo de la Km evidente, puede ser posible incrementar la concentración significativamente por dos razones: (I) Si los compuestos son competitivos con la cortisona, la inhibición medida caerá si se incrementa en sustrato por arriba de la concentración utilizada en la referencia 1. (fl) Incrementar la concentración del sustrato reducirá la actividad específica de la marca, reduciendo la sensibilidad del ensayo. Esto se puede superar al añadir concentraciones mayores de [3H]-cortisona, pero el protocolo utiliza 0.5 µ /???? y existe una deducción de costo si se utilizan niveles mayores de radioactividad. Se examinó la saturación del sustrato. El ensayo de la enzima se llevó a cabo exactamente como se describió en la dección de métodos, en regulador de pH 3 con 10 g/pozo de proteína microsomal y con [cortisona fría] como se indicó. La cortisona [3H] fue 0.5 µ??/???ße?Gß a lo largo de todo el experimento. La reacción se detuvo después de 30 minutos mediante la adición de 10 µ? de solución de paro. El RIA se llevó a cabo exactamente como se indicó en la sección de métodos. Los resultados se muestran en las figuras 22 y 23. La Km evidente (700 nM), se determinó a partir de la gráfica de Lineweaver-Burke de los estos datos mostrados en la figura 23 es muy similar a aquella determinada en el formato tic del ensayo de la 11 ß HSD1 (figura 9, Km evidente -660 nM). Los datos sugieren que a 10 µ9 de proteína microsomal, la enzima no está saturada a 175 nM de cortisona, sobre un periodo de incubación de 30 minutos. La disminución de la concentración de la proteína microsomal o del tiempo de incubación para llevar la reacción dentro del intervalo linear podría resolver parcialmente el problema. No obstante cualesquiera de estos ajustes podrían disminuir la sensibilidad del ensayo, y disminuir la potencia aparente de los inhibidores. Consecuentemente los experimentos iniciales se llevaron a cabo con la cortisona 175 nM.

Validación del ensayo de la ß-HSD Antes de evaluar el compuesto, se determinó la tolerancia del ensayo enzimático al DMSO. La inclusión del DMSO a 1 % en el ensayo enzimático no afectó los valores totales o blanco, pero incrementa ligeramente la actividad enzimática y la relación señal a ruido (cuadro 4). El experimento se repitió a un intervalo de concentraciones de DMSO de 0.3 a 10%, figura 24.

CUADRO 4 CPM control y blanco obtenidas en el ensayo de IC50 de ácido glicirretínico que muestra el efecto de DMSO al 1% y la relación señal a ruido obtenida Existe un ligero incremento en la actividad enzimática microsomal en la presencia de 0.3% y 1 % de DMSO. A las concentraciones de DMSO por arriba de 1%, existe una reducción lineal en la actividad de la enzima. Se ha reportado que el DMSO puede tanto incrementar como reducir la actividad de la enzima microsomal, dependiendo de la concentración, presumiblemente debido a los efectos sobre las membranas microbianas. Con base en estos datos, se pretende que los compuestos se seleccionan en la presencia de 1% de DMSO. Un valor IC50 se generó para el ácido glicirretínico inhibidor estándar, el compuesto se evaluó a concentraciones entre 0.012 µ? y 3 µ?, con una concentración final de DMSO de 1%, figura 25. El ácido glicirretínico produce una inhibición relacionada con la concentración de la enzima con un IC50 de 41 nM, con buenos valores de ajuste de curva (r2 = 0.962) y pendiente de Hill. Estos es similar al valor de 40 nM generada utilizando el ensayo de formato tic, (véase la figura 10). Un valor IC50 de 30 nM se ha reportado para la inhibición del ácido glicirretínico de la 11 ß HSD en microsomas hepáticos de humano, utilizando dehidro-dexametasona como el sustrato [19]. No obstante, estos valores son menores que el valor reportado por Barf et al. [15].

CUADRO 5 Datos de inhibición 109 Síntesis de sulfonamidas Método A A la amina (1 equivalente) disuelta en piridina (3 equivalentes) se le añadió el cloruro de sulfonilo correspondiente (1.2 equivalentes) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente bajo N2 durante toda la noche. La mezcla resultante se vertió dentro de HCI acuoso y la capa orgánica se extrajo con acetato de etilo, se secó (MgS04), se filtró y se concentró bajo presión reducida para producir la sulfonamida deseada como un sólido cristalino o como un jarabe espeso. El compuesto sin purificar se purificó entonces mediante cromatografía instantánea utilizando EtOAc/hexano (3:2) o CH2CI2/EtOAc (4:1) como eluyente para producir un sólido cristalino.

Método B A la amina (1 equivalente) disuelta en Et3N (5 equivalentes) se le añadió el cloruro de sulfonilo correspondiente ( .2 equivalentes) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente bajo N2 durante toda la noche. La mezcla resultante se vertió en agua y la capa orgánica se extrajo con acetato de etilo, se secó ( gS04), se filtró y se concentró bajo presión reducida para producir la sulfonamida deseada como un sólido cristalino o como un jarabe espeso. El compuesto sin purificar se purificó entonces mediante cromatografía instantánea utilizando EtOAc/hexano (3:2) o CH2CI2/EtOAc (4:1) como eluyente para producir un sólido cristalino.

Nota: Aminas insolubles y cloruros de sulfonilo se disolvieron en una cantidad mínima de CH2CI2, THF o DMF.

Método C A una solución de cloruro de arilsulfonilo (1.1 equivalentes) en DCM se le añadió piridina (2.2 equivalentes) y una cantidad catalítica de DMAP. La solución se agitó a temperatura ambiente bajo nitrógeno por 10 minutos. Luego la amina (1 equivalente) se añadió y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente bajo nitrógeno por 4-16 horas. La mezcla resultante se particionó entre DCM y 5% de bicarbonato de sodio. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04, y se concentró para producir un sólido o un jarabe espeso. El compuesto sin purificar se purificó entonces mediante cromatografía instantánea para producir la arilsulfonamida deseada como un sólido cristalino.

DGS03020A (STX4 2 Sintetizado mediante el método A. Cristales blancuzcos de DGS03020A (186 mg; 55%). pf 189-190°C; CCF Rf: 0.68 EtOAc/hexano (3:2); 1H RMN (CDCI3) d 2.80 (s, 3H, CH3), 7.13 (s, 1H, N-H, intercambiado con D20), 7.212 (dd, 1H, Ar-H, J = 2.34 Hz y 8.59 Hz), 7.27 (dd, 1 H, Ar-H, J = 1.95 Hz y 8.59 Hz), 7.51 (d, H, Ar-H, J = 1.95 Hz), 7.65 (d, 1 H, Ar-H, J= .95 Hz), 7.69 (d, H, Ar-H, J = 8.59 Hz), 7.91 (d, 1H, Ar-H, J = 8.59 Hz); EM (FAB+) 372.9 [100, (M+H)+j; HRMS m/z (FAB+) 372.9627, C H^CbNaOsSa requiere 372.9639, 376.9574, C14H1037Cl2N2O2S2 requiere 376.9580; CLAR tr 3.65 minutos (92:08 = MeOH:H20).

DGS03022A ÍSTX413) Sintetizado mediante el método A. Cristales blancuzcos de DGS03022A (233 mg; 72%). pf 178°C; CCF Rf: 0.71 EtOAc/hexano (3:2); 1H RMN (CDCI3) d 2.75 (s, 3H, CH3), 2.80 (s, 3H, CH3), 6.75 (s, 1H, N-H, intercambiado con D20), 7.1 (dd, 1H, Ar-H, J = 1.95 Hz y 8.59 Hz), 7. 7-7.21 (m, 1H, Ar-H), 7.53 (d, 1H, Ar-H, J = 1.17 Hz), 7.55 (d, 1 H, Ar-H, J = 1.95 Hz), 7.68 (d, 1H, Ar-H, J = 8.20 Hz), 7.92 (dd, 1 H, Ar-H, J = 1.17 Hz y 7.81 Hz); EM (FAB+) 164.1 [35, (5-Amino-2-metil benzotiazolf], 353.0 [100, (M+H)*]; HRMS m/z (FAB+) 353.0176, C15H 435CIN202S2 requiere 353.0185, 355.0155, C 5Hi437CIN202S2 requiere 355.0156; CLAR tr 3.78 minutos (92:08 = MeOH:H20).

DGS03024A (STX421) Sintetizado mediante el método A. Cristales blancos de DGS03024A (240 mg; 76%). pf 133-134°C; CCF Rf: 0.7 EtOAc/hexano (3:2); 1H RMN (CDCI3) d 0.90 (t, 3H, CH3CH2CH2, J = 7.42 Hz), 1.56-1.66 (m, 2H, CHgCHgCHz), 2.59 (t, 2H, CHsCH?CHz, J = 7.42 Hz), 2.80 (s, 3H, CH3), 6.71 (s, 1H, N-H, intercambiado con D20), 7.17 (d 1 H, Ar-H, J = 2.34 Hz y 8.59 Hz), 7.201-7.214 (m, H, Ar-H), 7.218-7.223 (m, 1H, Ar-H), 7.57 (d, 1 H, Ar-H, J = 2.34 Hz), 7.76-7.69 (m, 3H, Ar-H); EM (FAB+) 347.1 [100, (M+Hf]; HRMS m/z (FAB+) 347.0881 , ?,t?^^?^ requiere 347.0887; CLAR tr 3.69 minutos (92:08 = MeOH:H20).

DGS03034A (STX424) Sintetizado mediante el método A. Cristales blancos de DGS03034A (262 mg; 86%). pf 152°C; CCF Rf: 0.48 EtOAc/hexano (3:2); 1H RMN (CDCI3) d 10.31 (s, H, NH, intercambio con D20), 7.85 (d, 1H, Ar-H, J = 8.59 Hz), 7.66-7.69 (m, 2H, Ar-H), 7.57 (d, 1 H, Ar-H, J = 1.95 Hz), 7.11 (dd, 1H, Ar-H, J = 2.34 Hz y 8.59 Hz), 7.02-7.05 (m, 2H, Ar-H), 3.76 (s, 3H, OCH3), 2.73 (s, 3H, CH3); EM (FAB+) 164.0 [25 (amina SM+)], 335.0 [100, (M+H)*]; HRMS m/z (FAB+) 335.0519, C^H^C^ requiere 335.0524; CLAR tr 1.94 minutos (80:20 = MeOH:H20).

DGS03036A (STX425) Sintetizado mediante el método A. Cristales blancos de DGS03036A (136 mg; 42%). pf 295-296°C; CCF Rf: 0.56 EtOAc/hexano (3:2); H RMN (DMSO-d6) d 10.66 (s, 1 H, NH, intercambiado con D20), 7.87 (d, 1 H, Ar-H, J = 8.59 Hz), 7.52 (d, 1 H, Ar-H, J = 1.95 Hz), 7.32-7.44 (m, 3H, Ar-H), 7.12 (dd, 1 H, Ar-H, J = 2.3 Hz y 8.59 Hz), 2.73 (s, 3H, CH3), 2.64 (s, 3H, CH3); EM (FAB+) 164.0 [40, (amina inicial)*], 353.0 [100, (M+Hf]; HRMS m/z (FAB+) 353.0187, C^H^CINzOaSa requiere 353.0185, 355.0165, C15H1437CIN202S2 requiere 355.0155; CLAR tr 1.94 minutos (80:20 = MeOH:H20).

DGS03Q58A (STX519) Sintetizado mediante el método A. Cristales blancos de DGS03058A (199 mg; 57%). pf 172°C; CCF Rf: 0.56 EtOAc/hexano (3:2); H RMN (DMSO-de) d 10.53 (s, 1H, NH, intercambiado con D20), 7.88 (d, 1 H, Ar-H, J = 8.59 Hz), 7.74-7.77 (m, 2H, Ar-H), 7.64-7.68 (m, 2H, Ar-H), 7.58 (d, 1H, Ar-H, J = 1.95 Hz), 7.11 (dd, 1H, Ar-H, J = 1.95 Hz y 8.59 Hz), 2.74 (s, 3H, CH3); EM (FAB+) 384.9 [100, (M+H)+]; HRMS m/z (FAB+) 384.9494, Ci4H1281BrN202S2 requiere 384.9503, 382.9501 , CuH-^BrNaOaSa requiere 382.9523; CLAR tr 2.64 minutos (90:10 = MeOH:H20).

DGS03062B (STX469) A una solución en agitación de DGS03022A (50 mg, 0.14 milimoles, 1 equivalente) en DMF anhidro (5 mi) y NaH (7 mg, 0.16 milimoles, 1.1 equivalentes) se le añadió Mel (3 mi, 0.21 milimoles, 1.5 equivalentes) y la mezcla se agitó por 1 hora. La mezcla resultante se vertió en agua y la capa orgánica se extrajo con acetato de etilo, se secó (MgSCU), se filtró y se concentró bajo presión reducida para producir una suspensión amarilla. El compuesto sin purificar (70 mg) se purificó mediante cromatografía instantánea utilizando EtOAc/hexano (3:2) como eluyente para producir cristales blancos de DGS03062A (36 mg; 69%). pf 97-98°C; CCF Rf: 0.61 EtOAc/hexano (3:2); 1H RMN (CDCI3) d 7.73 (dd, 1 H, Ar-H, J = 1.17 Hz y 7.81 Hz), 7.37 (d, 1H, Ar-H, J = 8.59 Hz), 7.59 (d, 1 H, Ar-H, J = 1.95 Hz), 7.49 (dd, 1H, Ar-H, J = 1.17 Hz y 8.2 Hz), 7.24 (dd, 1H, Ar-H, J = 2.34 Hz y 8.59 Hz), 7.11-7.15 (m, 1H, Ar-H), 3.24 (s, 3H, CH3), 2.76 (s, 3H, CH3), 2.35 (s, 3H, CH3); EM (FAB+) 366.9 [100, (M+H)+]; HRMS m/z (FAB+) 366.0262, Ci6H1535CI 202S2 requiere 366.0262, 368.0300, C16Hi537CI 202S2 requiere 368.0234; CLAR tr 1.93 minutos (96:04 = MeOH:H20).

DGS03072A (STX470) A una solución en agitación de DGS03022A (50 mg, 0.14 milimoles, 1 equivalente) en DMF anhidro (5 mi) y NaH (10 mg, 0.16 milimoles, 1.1 equivalentes) se añadió Etl (23 mg, 0.21 milimoles, 1.5 equivalentes) y la mezcla se agitó por 1 hora. La mezcla resultante se vertió en agua y la capa orgánica se extrajo con acetato de etilo, se secó (MgS04), se filtró y se concentró bajo presión reducida para producir una suspensión amarilla. El compuesto sin purificar (75 mg) se purificó mediante cromatografía instantánea utilizando EtOAc/hexano (3:2) como eluyente para producir un jarabe espeso amarillo claro de DGS03072A (16 mg; 30%). CCF Rf: 0.71 EtOAc/hexano (3:2); H RMN (CDCI3) d 7.76-7.78 (m, 2H, Ar-H), 7.66 (m, 1H, Ar-H), 7.53-7.55 (m, 1 H, Ar-H), 7.27-7.28 (m, 1H, Ar-H), 7.14-7.18 (m, 1H, Ar-H), 7.11-7.18 (m, 1H, Ar-H), 5.30 (s, 1H, NH, intercambiado con D20), 3.74 (q, 2H, Ar-H, J = 7.42 Hz y 7.03 Hz), 2.83 (s, 3H, CH3), 2.53 (s, 3H, CH3), 1.12 (t, 3H, CH3, J= 7.03 Hz), EM (FAB+) 381.1 [100, (M+H)4]; HRMS m/z (FAB+) 381.1062, C17H1735CIN202S2 requiere 381.1058, 385.0952, C17H 737CIN202S2 requiere 385.0949.

DGSQ3082A (STX521) Sintetizado mediante el método A. Cristales blancos de DGS03082A (230 mg; 67%). pf 85-86°C; CCF Rf: 0.64 EtOAc/hexano (3:2); 1H RMN (CDCI3) d 10.54 (s, 1H, NH, intercambiado con D20), 7.87 (d, H, Ar-H, J = 8.59 Hz), 7.84 (amplio s, 4H, Ar-H), 7.67-7.69 (m, 2H, Ar-H), 7.62 (d, 1 H, Ar-H, J = 1.95 Hz), 7.39-7.49 (m, 3H, Ar-H), 7.17 (dd, 1 H, Ar-H, J = 1.95 Hz y 8.59 Hz), 2.73 (s, 3H, CH3); EM (FAB+) 381.2 [100, (M+H)4]; HRMS m/z (FAB+) 381.0730, C2oH17 202S2 requiere 381.0731; CLAR tr 1.36 minutos (96:04 = MeOH:H20).

DGS03084A (STX522) Sintetizado mediante el método A. Cristales amarillos de DGS03084A (46 mg; 10%). pf 253-254°C; CCF Rf: 0.74 EtOAc/hexano (3:2); 1H RMN (DMSO-de) d 11.09 (s, 1H, NH, intercambio con D20), 7.91 (d,1H, Ar-H, J = 8.59 Hz), 7.86 (s, 2H, Ar-H), 7.59 (d,1H, Ar-H, J = 2.34 Hz), 7.15 (dd, 1 H, Ar-H, J = 1.95 Hz y 8.59 Hz), 2.74 (s, 3H, CH3); EM (FAB+) 409.1 [100, (M+H)*]; EM (FAB-) 407.0 [100, (M-H)*]; HRMS m/z (FAB+) 406.9176, Ci4Hig35Cl3 202S2 requiere 406.9167, 408.9136, C^H^Cls^C^ requiere 408.9140.

DGS03086A (STX523 Sintetizado mediante el método A. Cristales amarillo claro de DGS03086A (101 mg; 57%). pf 219°C; CCF Rf: 0.71 EtOAc/hexano (3:2); 1H RMN (DMSO-de) d 10.68 (s, 1 H, NH, intercambio con D20), 7.87 (d,1H, Ar-H, J = 8.59 Hz), 7.79 (d,1 H, Ar-H, J = 8.59 Hz), 7.64 (d, 1 H, Ar-H, J = 1.95 Hz), 7.54-7.57 (m, 2H, Ar-H), 7.11 (dd, 1 H, Ar-H, J = 2.34 Hz y 8.59 Hz), 2.73 (s, 3H, CH3), 2.59 (s, 3H, CH3); EM (FAB+) 399.0 [100, (M+Hf], 164.1 [50, (amina inicial)*]; HRMS m/z (FAB+) 398.9663, Ci5H 3s BrN202S2 requiere 398.9569, 396.9684, C15H1379BrN202S2 requiere 396.9680; CLAR tr 1.39 minutos (96:04 = MeOH:H20).

DGS03064 Acido 2,4-Diclorobenzóico (10 g, 0.0523 moles, 1 equivalente) se calentó a 115°C con un exceso de ácido clorosulfónico (10.5 ml_, 0.1571 moles, 3 equivalentes) bajo N2 por 18 horas. La mezcla resultante se enfrió y se vertió conscientemente en hielo-agua. El precipitado blanco resultante se filtró, se lavó con bastante agua y se secó bajo vacío durante toda la noche. El DGS03064 sin purificar ( 1.5 g, 76 %) se utilizó para la reacción subsecuente sin purificación subsecuente, pf 173- 74°C; CCF Rf; 0.48 (4:1 , CH2CI2/EtOAc); 1H RMN (CDCI3) d 8.28 (1H, s, Ar-H), 7.65 (1H, s, Ar-H); EM m/z (FAB+) 286.9 [100, (M+H) ]; HRMS m/z (FAB+) 287.8798, C7H335CI304S requiere 287.8818, 291.8755, C7H337CI304S requiere 291.8759.

DGS03088A (STX524) Sintetizado mediante el método B. Se aislaron dos compuestos -DGS03088A y DGS03088A. Cristales blancos de DGS03088A (48 mg; 13%). pf 153-155°C; CCF Rf: 0.79 EtOAc/hexano (3:2); 1H RMN (CDCI3) d 8.31 (s, 1 H, NH, intercambiado con D20), 8.07 (s, 1H, NH, intercambiado con D20), 8.07 (s, 1 H, Ar-H), 7.71-7.79 (m, 4H, Ar-H), 7.67 (d, 1H, Ar-H, J = 1.95 Hz), 7.58 (s,1 H, Ar-H), 7.27 (dd, 1 H, Ar-H, J = 2.72 Hz y 8.59 Hz), 2.83 (s, 3H, CH3), 2.79 (s, 3H, CH3); EM (FAB+) 562.9 [100, (M+H)4]; HRMS m/z (FAB+) 562.9825, C23H1735Cl2N403S3 requiere 562.9839, 566.9778, C23H1737CI2N403S3 requiere 566.9781 ; CLAR tr 1.33 minutos (96:04 = MeOH:H20).

DGS03088-1 (STX575) Cristales blancos de DGS03088-1 (31 mg; 12%). pf 147-148°C; CCF Rf: 0.45 EtOAc/hexano (3:2); H RMN (CDCI3) d 8.45 (s, 1 H, NH, intercambiado con D20), 8.17 (d, 1H, Ar-H, J = 8.09 Hz), 8.04 (s, 1 H, Ar-H), 7.77 (s, 1H, Ar-H), 7.50 (d, 1H, Ar-H, J = 1.83 Hz), 7.35 (dd, 1H, Ar-H, J = 1.83 Hz y 8.05 Hz), 2.85 (s, 3H, CH3); LC-EM 418.1 [100, (M+)]; CLAR tr 1.97 minutos (96:04 = MeOH:H2O).

DGS03 00A (STX552) Sintetizado mediante el método B. Cristales blancos de DGS03 00A (224 mg; 69%). pf 222-223°C; CCF Rf: 0.56 CH2CI2/EtOAc (4:1); 1H RMN (DMSO-de) d 10.27 (s, 1H, NH, intercambiado con D20), 9.16-9.17 (m, 1H, Ar-H), 8.48-8.51 (m, 2H, Ar-H), 8.36-8.38 (m, 2H, Ar-H), 8.23-8.25 (m, 1 H, Ar-H), 7.67-7.34 (m, 3H, Ar-H), 7.51-7.12 (m, 1H, Ar-H), 7.09-7.12 (m, 1H, Ar-H), 2.67 (s, 3H, CH3); LC-EM 355.7 [(M)+]; EM (FAB+) 356.0 [100, (M+H)*]; HRMS m/z (FAB+) 356.0531 , C17H14N302S2 requiere 356.0527; CLAR tr 1.86 minutos (96:04 = MeOH:H20).

DGS03102A (STX553) Sintetizado mediante el método B. Cristales amarillo claro de DGS03102A (170 mg; 52%). pf 89-90°C; CCF Rf: 0.55 CH2CI2/EtOAc (4:1); H RMN (DMSO-d6) d 10.87 (s, H, H, intercambiado con D20), 8.28-8.24 (m, 1 H, Ar-H), 8.06-8.22 (m, 2H, Ar-H), 8.05 (d, 1H, Ar-H, J = 8.20 Hz), 7.60-7.77 (m, 2H, Ar-H), 7.47 (d, 1H, Ar-H, J = 1.95 Hz), 7.04 (dd, H, Ar-H, J = 1.95 Hz y 8.59 Hz), 2.69 (s, 3H, CH3); EM (FAB+) 355.0 [100, (M+H)*]; HRMS m/z (FAB+) 355.0576, Ci8H15N202S2 requiere 355.0575; CLAR tr 1.93 minutos (96:04 = MeOH:H20).

DGS03104A (STX554) Sintetizado mediante el método B. Cristales amarillos de DGS03104A (230 mg; 63%). pf 85-86°C; CCF Rf: 0.65 CH2CI2/EtOAc (4:1); 1H RMN (DMSO-d6) d 10.84 (s, 1H, NH, intercambio con D20), 8.40-8.42 (m, 2H, Ar-H), 8.22-8.23 (m, 1H, Ar-H), 7.76-7.78 (m, 1H, Ar-H), 7.58-7.65 (m, 2H, Ar-H), 7.51-7.56 (m, 1H, Ar-H), 7.23-7.25 (m, 1 H, Ar-H), 7.05-7.07 (m, 1H, Ar-H), 2.79 (s, 6H, 2xCH3), 2.69 (s, 3H, CH3); EM (FAB+) 398.1 [100, (M+H)4]; HRMS m/z (FAB+) 398.0978, C2oH2oN302S2 requiere 398.0997; CLAR tr 2.01 minutos (96:04 = MeOH:H20).

DGS03116A (STX580) Sintetizado mediante el método B. Cristales amarillo claro de DGS03116A (151 mg; 44%). pf 153°C; CCF Rf: 0.55 CH2CI2/EtOAc (4:1); 1H RMN (DMSO-de) d 10.96 (s, H, NH, intercambio con D20), 8.00 (d, 1H, Ar-H, J = 2.34 Hz), 7.90 (d, 1H, Ar-H, J = 8.59 Hz), 7.66-7.73 (m, 2H, Ar-H), 7.58 (d, 1H, Ar-H, J = 2.34 Hz), 7.17 (dd, H, Ar-H, J = 2.34 Hz y 8.59 Hz), 2.74 (s, 3H, CH3); EM (FAB+) 372.8 [100, (M+H)+]; HRMS m/z (FAB+) 375.9599, C-uHn^CbNzOzSa requiere 375.9502, 372.9606, C14Hii35Cl2N202S2 requiere 372.9639; CLAR tr 2.98 minutos (90:10 = MeOH:H20).

DGS03118A (STX581 ) Sintetizado mediante el método B. Cristales blancos de DGS03118A (416 mg; 42%). pf 88-89°C; CCF Rf: 0.49 CH2CI2/EtOAc (4:1); 1H RMN (DMSO-d5) d 10.47 (s, 1 H, NH, intercambiado con D20), 7.74 (d, H, Ar-H, J = 8.59 Hz), 7.58-7.61 (m, 2H, Ar-H), 7.35-7.38 (m, 1 H, Ar-H), 7.13-7.17 (m, 1H, Ar-H), 4.76-4.78 (m, 2H,CH2), 3.75-3.79 (m, 2H, CH2), 2.90-2.93 (m, 2H, CH2), 2.73 (s, 3H, CH3); EM (FAB+) 456.0 [100, (M+H)4]; HRMS m/z (FAB+) 456.0663, requiere 456.0663; CLAR tr 1.63 minutos (96:04 = MeOH:HzO).

DGS03120A (STX582) Sintetizado mediante el método B. Cristales amarillo claro de DGS03120A (185 mg; 55%). pf 91-92°C; CCF Rf: 0.51 CH2CI2/EtOAc (4:1); tH RMN (DMSO-de) d 10.35 (s, 1 H, NH, intercambiado con D20), 7.85 (d, 1H, Ar-H, J = 8.98 Hz), 7.69 (d, 1H, Ar-H, J = 2.34 Hz), 7.61 (dd, 1H, Ar-H, J = 2.73 Hz y 8.98 Hz), 7.55 (d, 1 H, Ar-H, J = 2.73 Hz), 7.20 (d, 1H, Ar-H, J = 8.98 Hz), 7.15 (dd, 1 H, Ar-H, J = 2.3 Hz y 8.59 Hz), 3.89 (s, 3H, OCH3), 2.73 (s, 3H, CH3); EM (FAB+) 369.0 [100, (M+H)+]; HRMS m/z (FAB+) 371.0114, C 5H14 7Ci 203S2 requiere 371.0105, 3690135, C15Hi435CIN203S2 requiere 369.0134; CLAR tr 1.68 minutos (96:04 = MeOH:H20).

DGS03122A (STX731 ) Sintetizado mediante el método B. Se aislaron dos compuestos - DGS03122A y DGS03122B. Cristales amarillos de DGS03122A (67 mg; 22%). pf 272-273°C; CCF Rf: 0.59 CH2CI2/EtOAc (4:1); H RMN (DMSO-d6) d 8.15 (m, 5H, Ar-H), 8.02-8.09 (m, 4H, Ar-H), 7.74 (d, 1 H, Ar-H, J = 2.3 Hz), 7.14 (dd, 1 H, Ar-H, J= 1.95 Hz y 8.59 Hz), 2.84 (s, 3H, CH3); EM (FAB+) 495.0 [100, (M+H)+]; CLAR tr 1.79 minutos (90:10 = MeOH:H20).

DGS03122B (STX583) Cristales amarillos de DGS03122B (47 mg; 16%). pf 204-206°C; CCF Rf: 0.48 CH2CI2/EtOAc (4:1); H RMN (DMSO-d6) d 10.95 (s, 1H, NH, intercambiado con D20), 8.03-8.07 (m, 2H, Ar-H), 7.86-7.91 (m, 2H, Ar-H), 7.77-7.81 (m, 1 H, Ar-H), 7.55 (d, 1H, Ar-H, J = 1.95 Hz), 7.12 (dd, 1H, Ar-H, J = 2.34 Hz y 8.59 Hz), 2.74 (s, 3H, CH3); EM (FAB+) 330.0 [100, (M+Hf]; HRMS m/z (FAB+) 330.0370, C15H12N302S2 requiere 330.0371; CLAR tr 1.84 minutos (90:10 = MeOH:H20).

DGS03124A (STX584) Sintetizado mediante el método B. Cristales amarillo claro de DGS03124A (125 mg; 55%). pf 188-189°C; CCF Rf: 0.37 CH2CI2/EtOAc (4:1); 1H RMN (DMSO-de) d 10.09 (s, H, H, intercambiado con D20), 7.81 (d, 1H, Ar-H, J = 8.59 Hz), 7.63 (d, 1 H, Ar-H, J = 8.20 Hz), 7.56 (d, 1 H, Ar-H, J = 1.95 Hz), 7.14 (dd, 1H, Ar-H, J = 1.95 Hz y 8.59 Hz), 6.96 (s,1H, Ar-H), 6.81 (d, 1H, Ar-H, J = 8.59 Hz), 3.87 (s, 3H, OCH3), 2.72 (s, 3H, CH3), 2.28 (s, 3H, CH3); EM (FAB+) 219.1 [20, (cloruro de sulfonilo-H)*], 349.0 [100, (M+H)*]; HRMS m/z (FAB+) 349.0678, C16H 7N203S2 requiere 349.0681 ; CLAR tr 1.80 minutos (96:04 = MeOH:H20).

DGS03 26A ÍSTX585) Sintetizado mediante el método B. Cristales amarillo claro de DGS03126A (145 mg; 40%). pf 84-86°C; CCF Rf: 0.71 CH2CI2/EtOAc (4:1 ); H RMN (DMSO-de) d 10.42 (s, 1H, NH, intercambiado con D20), 7.88 (d, 1 H, Ar-H, J = 8.59 Hz), 7.73-7.77 (m, 2H, Ar-H), 7.59 (d, H, Ar-H, J = 1.95 Hz), 7.41-7.46 (m, 2H, Ar-H), 7.22-7.26 (m, 2H, Ar-H), 7.13 (dd, 1 H, Ar-H, J = 8.59 Hz y 2.34 Hz), 7.02-7.10 (m, 4H, Ar-H), 2.75 (s, 3H, CH3); EM (FAB+) 397.0 [100, (M+H)*]; HRMS m/z (FAB+) 397.0671 , C2oHi7 203S2 requiere 397.0681; CLAR tr 1.93 minutos (96:04 = MeOH:H20).

DGS03130A (STX730) Sintetizado mediante ei método B. Se aislaron dos compuestos -DGS03130A y DGS03130B. Sintetizado mediante el método B. Cristales amarillo claro de DGS03130A (105 mg; 33%). pf 125-126°C; CCF Rf: 0.55 CH2CI2/EtOAc (4:1); 1H RMN (DMSO-d6) d 8.21-8.24 (m, 4H, Ar-H), 8.13 (d, 1 H, Ar-H, J = 8.59 Hz), 7.99-8.03 (m, 4H, Ar-H), 7.57 (d, 1 H, Ar-H, J = 1.95 Hz), 7.03 (dd, 1H, Ar-H, J = 8.59 Hz y 1.95 Hz), 2.82 (s, 3H, CH3); 2.69 (s, 6H, 2xCH3); EM (FAB+) 529.0 [100, (M+H)+]; EM (FAB-) 527.1 [70, (M-H)4], 345.0 [100, (cloruro de M-2- acetilsulfonilo)+]; CLAR tr 1.81 minutos (96:04 = MeOH:H20).

DGS03130B (STX701) Cristales amarillo claro de DGS03130A (45 mg; 14%). pf 169°C; CCF Rf: 0.42 CH2CI2/EtOAc (4:1); H RMN (DMSO-d6) d 10.63 (s, 1 H, NH, intercambiado con D20), 8.04-8.07 (m, 2H, Ar-H), 7.86-7.89 (m, 3H, Ar-H), 7.59 (d, 1H, Ar-H, J = 1.95 Hz), 7.13 (dd, 1H, Ar-H, J = 8.9 Hz y 2.3 Hz), 3.73 (s, 3H, CH3); 2.56 (s, 3H, CH3); EM (FAB+) 347.0 [100, (M+Hf], 219.1 [10, (cloruro de sulfonilo+H)4]; HRMS m/z (FAB+) 347.0522, C16H15N203S2 requiere 347.0524; CLAR tr 1.77 minutos (96:04 = MeOH:H20).

DGS03134A (STX703) Sintetizado mediante el método B. Cristales amarillo claro de DGS03134A (91 mg; 23%). pf 206-207°C; CCF Rf: 0.81 CH2CI2/EtOAc (4:1); 1H RMN (DMSO-ds) d 10.37 (s, 1H, NH, intercambio con D20), 7.87 (d, 1 H, Ar-H, J = 8.59 Hz), 7.46 (d, 1 H, Ar-H, J = 1.95 Hz), 7.19 (s, 2H, Ar-H), 7.07 (dd, 1 H, Ar-H, J = 8.59 Hz y 1.95 Hz), 4.13-4.20 (m, 2H, 2x(CH3)2H), 2.83-2.89 (m, 1 H, (CH3)2H), 2.72 (s, 3H, CH3), 1.15 (d, 12H, 4x(CH3)2, J = 7.03 Hz), 1.11 (d, 9H, 2x(CH3)2, J = 6.64 Hz); LC-EM 429.72 (M)+; CLAR tr 2.84 minutos (90:10 = MeOH:H20).

DGS03136A ÍSTX704) Sintetizado mediante el método B. Cristales amarillo claro de DGS03136A (225 mg; 71%). pf 54-55°C; CCF Rf: 0.50 CH2CI2/EtOAc (4:1); 1H RMN (CDCI3) d 7.65 (m, 3H, Ar-H), 7.58 (d, 1 H, Ar-H, J = 2.34 Hz), 7.18 (dd, 1 H, Ar-H, J = 8.6 Hz y 1.95 Hz), 6.84-6.85 (m, 2H, Ar-H), 6.82 (s, 1 H, NH, intercambio con D20), 4.51-4.60 (m, H, (CH3)2H), 2.80 (s, 3H, CH3), 1.31 (s, 6H, (CH3)2); LC-EM 347.6 (M)+; HRMS m/z (FAB+) 347.0847, C17H19N202S2 requiere 347.0837; CLAR tr 2.39 minutos (90:10 = MeOH:H20).

DGS03138B (STX705) Sintetizado mediante el método B. Cristales amarillo claro de DGS03138B (24 mg; 7%). pf 248°C; CCF Rf: 0.52 CH2CH2/EtOAc (4:1 ); 1H RMN (CDCI3) d 8.18 (d, 1H, Ar-H, J = 8.59 Hz), 8.15 (d, 1 H, Ar-H, J = 1.95 Hz), 7.89-8.04 (m, 4H, Ar-H), 7.51 (dd, 1H, Ar-H, J = 8.20 Hz y 1.95 Hz), 7.27 (s, 1 H, NH, intercambiado con D20), 2.89 (s, 3H, CH3), 1.59 (s, 3H, CH3); LC-EM 372.90 (M+CH3CN)+; HRMS m/z (FAB+) 371.2281 , C16H15N2O4S2 requiere 371.2278; CLAR tr 2.22 minutos (90:10 = MeOH:H20).

DGS0314QA (STX711 ) Sintetizado mediante el método B. Cristales cafés de DGS03140A (85 mg; 26%). pf 73-75°C; CCF Rf: 0.59 CH2CH/EtOAc (4:1 ); 1H RMN (CDCI3) d 7.85 (d, H, Ar-H, J = 8.59 Hz), 7.80 (d, 1 H, Ar-H, J = 8.59 Hz), 7.68 (s, 1 H, NH, intercambiado con D20), 7.57 (d, 1 H, Ar-H, J = 1.95 Hz), 7.54 (s, 1H, NH, intercambio con D20), 7.24 (d, H, Ar-H, J = 2.34 Hz), 7.18 (dd, 1H, Ar-H, J = 8.20 Hz y 1.95 Hz), 7.03 (dd, 1 H, Ar-H, J = 8.59 Hz y 2.34 Hz), 6.77 (dd, 1 H, Ar-H, J = 8.59 Hz y 2.34 Hz), 2.78 (s, 3H, CH3), 2.24 (s, 3H, CH3); LC-EM 362.32 (M)+; HRMS m/z (FAB+) 361.0587, C16H16N3O3S2 requiere 361.0636; CLAR t, 2.09 minutos (90:10=MeOH:H2O).

DGS03142A (STX706) Sintetizado mediante el método B. Cristales amarillo claro de DGS03142A (79 mg; 24%). pf 89-91 °C; CCF Rf: 0.65 CH2CI2/EtOAc (4:1); 1H RMN (CDCI3) d 7.78 (d, 1H, Ar-H, J = 8.20 Hz), 7.61 (d, 1 H, Ar-H, J = 1.56 Hz), 6.98 (dd, H, Ar-H, J = 1.95 Hz y 8.20 Hz), 6.93 (s, H, Ar-H), 6.92 (s, H, NH, intercambiado con D20), 3.99 (s, 6H, 2xCH3), 3.93 (s, 6H, 2xCH3), 2.85 (s, 3H, CH3); LC-EM 361.48 (M)+; HRMS m/z (FAB+) 361.1605, C18H2 N202S2 requiere 361.1606; CLAR tr 2.26 minutos (90:10 = MeOH:H20).

DGS03144A (STX707 Sintetizado mediante el método B. Cristales amarillo claro de DGS03144A (79 mg; 24%). pf 89-91°C; CCF Rf: 0.69 CH2CI2/EtOAc (4:1); 1H RMN (CDCI3) d 7.70 (d,1 H, Ar-H, J = 8.59 Hz), 7.58 (d, 1 H, Ar-H, J = 2.34 Hz), 7.39 (dd, H, Ar-H, J = 2.34 Hz y 8.59 Hz), 7.19 (d, 1 H, Ar-H, J = 1.95 Hz), 7.17 (t, 1 H, Ar-H, J = 1.95 Hz), 6.83 (d, 1 H, Ar-H, J = 8.59 Hz), 6.59 (s, 1 H, NH, intercambiado con D20), 3.89 (s, 3H, OCH3), 3.76 (s, 3H, OCH3), 2.81 (s, 3H, CH3); LC-EM 363.02 (M)+; HRMS m/z (FAB+) 365.0642, C 6H17N204S2 requiere 365.0585; CLAR tr 2.15 minutos (90:10 = MeOH:H20).

DGS03146A (STX708) Sintetizado mediante el método B. Cristales amarillo claro de DGS03146A (181 mg; 51%). pf 175°C; CCF Rf: 0.57 CH2CI2/EtOAc (4:1); H RMN (CDCI3) d 7.71 (dd, 1 H, Ar-H, J = 2.3 Hz y 8.98 Hz), 7.59 (d, 1 H, Ar-H, J = 1.95 Hz), 7.43 (d, H, Ar-H, J = 8.98 Hz), 7.21 (dd, 1H, Ar-H, J = 1.95 Hz y 8.59 Hz), 6.67 (s, 1 H, NH, intercambio con D20), 2.81 (s, 3H, OCH3), 1.59 (s, 6H, 2xCH3), 1.29 (s, 6H, 2xCH3); LC-EM 377.01 (M)+; HRMS m/z (FAB+) 377.0988, Ci8H2iN203S2 requiere 377.0994; CLAR tr 2.53 minutos (90:10 = MeOH:H20).

DGS03148A (STX709) Sintetizado mediante el método B. Cristales blancuzcos de DGS03148A (102 mg; 31 %). pf 214-215°C; CCF Rf: 0.62 CH2CI2/EtOAc (4:1 ); 1H RMN (CDCI3) d 7.71-7.73 (m, 2H, Ar-H), 7.60-7.61 (m, 1 H, Ar-H), 7.44-7.46 (m, 2H, Ar-H), 7.21-7.24 (m, 2H, Ar-H), 6.61 (s, 1 H, NH, intercambio con D20), 2.83 (s, 3H, CH3), 1.31 (s, 9H, (CH3)3); LC-EM 360.12 (M)+; HRMS m/z (FAB+) 361.1057, C18H2iN203S2 requiere 361.1044; CLAR tr 2.67 minutos (90:10=MeOH:H2O).

DGS03150A (STX710) Sintetizado mediante el método B. Cristales amarillo claro de DGS03150A (101 mg; 30%). pf 200-201 °C; CCF Rf: 0.50 CH2CI2/EtOAc (4:1 ); 1H RMN (CDCI3) d 7.65 (d, 1 H, Ar-H, J = 8.59 Hz), 7.44 (d, 1 H, Ar-H, J = 1.95 Hz), 7.09 (dd, 1 H, Ar-H, J = 1.95 Hz y 8.59 Hz), 6.75 (s, 1 H, NH, intercambiado con D20), 2.79 (s, 3H, CH3), 2.57 (s, 6H, 2xCH3), 2.24 (s, 3H, CH3), 2.19 (s, 6H, 2xCH3); LC-EM 374.10 (M)+; HRMS m/z (FAB+) 375.1195, C19H23N202S2 requiere 375.1201 ; CLAR tr 3.15 minutos (80:20 = MeOH:H20).

DGS03152A (STX712) Sintetizado mediante el método B. Cristales amarillo claro de DGS03152A (120 mg; 33%). pf 181-182°C; CCF Rf: 0.65 CH2CI2/EtOAc (4:1 ); 1H RMN (CDCI3) d 7.63 (d, 1 H, Ar-H, J = 8.59 Hz), 7.59 (d, 1 H, Ar-H, J = 2.3 Hz), 7.22 (dd, 1 H, Ar-H, J = 2.3 Hz y 8.59 Hz), 4.91 (s, 1 H, NH, intercambio con D20), 3.82 (s, 3H, CH3); LC-EM 392.96 (M)+; HRMS m/z (FAB+) 394.9941 , C14H8F5N202S2 requiere 394.9947; CLAR tr 2.49 minutos (90:10 = MeOH:H20).

DGS03158A (STX713) Sintetizado mediante el método B. Cristales amarillos de DGS03158A (158 mg; 40%). pf 334-335°C; CCF Rf: 0.47 CH2CI2/EtOAc (4:1 ); 1H RMN (CDCI3) 7.65 (d, 1 H, Ar-H, J = 8.59 Hz), 7.47 (d, 1 H, Ar-H, J = 2.3 Hz), 7.10 (dd, 1 H, Ar-H, J = 2.3 Hz y 8.59 Hz), 6.69 (s, 1H, NH, intercambiado con D20), 2.79 (s, 3H, CH3), 2.61 (t, 2H, CH2, J = 6.64 Hz), 2.55 (s, 3H, CH3), 2.51 (s, 3H, CH3), 2.08 (s, 3H, CH3), 1.79 (t, 2H, CH2, J = 7.03 Hz), 1.29 (s, 6H, 2xCH3); LC-EM 431.11 (M)+; CLAR tr 3.24 minutos (90:10 = MeOH:H20).

Síntesis de derivados de benzotiazol arilsulfonamida a) RX, NaH, THF temperatura ambiente. b) ArS03CI, DCM, piridina o ArS03CI, DCM, piridina/DMAP c) Dietilamina, DCM, AICI3 d) RX, K2C03, Acetona, reflujo -KHGHa -N(¾Hf>j Ar=3-CK-CHa-fenilo Ar= 2í-diclonofen¡lo a) HNO3, H2S04 -5-0°C b) H2, 5% de Pd/C, C2H5OH, c) ArS03CI, DCM, piridina o ArS03CI, DCM, piridina /DMAP d) amina, THF, reflujo j¾ s3-Cl-2-GHrfenflo -iiiclorofenilo a) N-clorosucinimida, IPA b) ArS03CI, DCM, Piridina o ArS03CI, Pirdina/DMAP. c) N-bromosuccinimida, CCI4, peróxido de benzoüo d) 3-cloro-2-metilbencensulfonamida, K2C03, CH3CN S7X?S3,XP5fi-H.K 5TX7S3, XDS01V3S STX767, XOSB115»A Método general para la preparación de derivados de N-benzotiazol bencensulfonamída: A una solución de cloruro de ariisulfonilo (1.1 equivalentes) en DCM (5-10 mL) se le añadió piridina (2.2 equivalentes) y una cantidad catalítica de D AP. La solución se agitó a temperatura ambiente bajo nitrógeno por 10 minutos. Luego se añadió la amina (1 equivalente) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente bajo nitrógeno por 4-16 horas. La mezcla resultante se particionó entre DCM y 5% de bicarbonato de sodio. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04, y se concentró para producir un residuo amarillo. Luego el compuesto sin purificar se purificó mediante cromatografía instantánea para producir la bencensulfonamida deseada como un sólido cristalino. (Rendimiento del 40-90%).

Síntesis de 2-Alquilsulfanil-benzotiazol-6-il-amina A una solución de 6-amino-2-merceptobenzotiazo! (273 mg, 1.5 milimoles) en THF anhidro (10 mL) se le añadió NaH (dispersión del 60%, 1.5 milimoles), seguido por haliduro de alquilo (1.5 milimoles). La mezcla se agitó a temperatura ambiente por 24 horas, se particionó entre acetato de etilo y 5% de bicarbonato de sodio. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró in vacuo hasta obtener un sólido amarillo, el cual se purificó con recristalización o cromatografía instantánea. (Rendimiento del 60-90%). Las siguientes aminas se sintetizaron con el método anteriormente descrito: 2-Etilsulfanilbenzotiazol-6-ilamina Sólido amarillo cristalino, pf 77-78°C (lit. 77°C). CCF mancha particular en Rf 0.78 (8% de metanol/DCM); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 7.50 (1 H, d, J = 8.5 Hz, 4-H), 6.98 (1H, d, J = 2.2 Hz, 7-H), 6.69 (1 H, dd, J= 8.5, 2.2 Hz, 5-H), 5.33 (2H, amplio, NH2), 3.23 (2H, q, J = 7.3 Hz, SCH2), 1.35 (3H, t, J= 7.3 Hz, CH3). (Francolor, S. A.; US 2500093; 1945) 2-(2-Metoxietilsulfan¡0-benzotiazol-6-¡lamina Jarabe espeso amarillo. CCF mancha particular en Rf 0.65 (30% de acetato de etilo/DCM); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 7.49 (1 H, d, J = 8.8 Hz, 4-H), 6.97 (1H, d, J = 2.2 Hz, 7-H), 6.69 (1 H, dd, J = 8.8, 2.2 Hz, 5-H), 5.34 (2H, amplio, NH2), 3.63 (2H, t, J = 6.3 Hz, CH2), 3.43 (2H, t, J = 6.3 Hz, CH2), 3.26 (3H, s, CH3).

Etil éster del ácido (6-aminobenzot¡azol-2-ilmercapto)-acético Sólido blancuzco, pf 87-89°C (lit. 92°C, [20]); CCF mancha particular en Rf 0.72 (8% de metanol/DCM); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 7.48 (1 H, d, J = 8.7 Hz, 4-H), 7.01 (1 H, d, J = 1.8 Hz, 7-H), 6.71 (1 H, dd, J = 8.7, 1.8 Hz, 5-H), 5.58 (2H, amplio, NH2), 4.17 (2H, s, SCH2), 4.12 (2H, t, J = 7.3 Hz, CH2), 1.19 (3H, t, J = 7.3 Hz, CH3). Los siguientes compuestos se sintetizaron con el método general para N-benzotiazol bencensulfonamida: 3-Cloro-N-(2-etilsulfanilbenzotiazol-6-iD-2-metilbencensulfonamida (STX751 , XDS01141 ) Sólido blancuzco (220 mg; 55%). CCF mancha particular en Rf: 0.83 (17% de EtOAc/DCM); pureza CLAR 96% (tR 1.9 minutos en metanol); 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 10.8 (1 H, s, NH), 7.89 (1 H, dd, J = 8.0, 1.0 Hz, 6 -H de benceno), 7.71 (1 H, d, J = 8 Hz, 4-H de benzotiazol), 7.70 (1 H, d, J = 2 Hz, 7-H de benzotiazol), 7.70 (1H, dd, J = 8.0, 1.0 Hz, 4 -H de benceno), 7.36 (1 H, t, J = 8 Hz, 5'-H de benceno), 7.15 (1 H, dd, J = 8.0, 2.0 Hz, 5-H de benzotiazol), 3.30 (2H, q, J = 7.0 Hz, SCH2), 2.66 (3H, s, CH3), 1.38 (3H, t, J = 7.0 Hz, CH3); APCI-EM 397.99 (M)+; FAB-HRMS calculado para C16H16CIN202S3 (MH+) 399.0062, encontrado 399.0048.

Etil éster del ácido r6-(3-cloro-2-metilbencensulfon¡lam¡no)-benzotiazol-2-ilsulfan¡n-acético (STX752, XDS01142) Sólido cristalino blanco (210 mg; 46%). CCF mancha particular en Rf: 0.69 (17% de EtOAc/DCM); pureza CLAR 99% (tR 2.9 minutos en 10% de agua-metanol); 1H RMN (400 Hz, DMSO-d6) d 10.8 (1H, s, S02NH), 7.88 (1 H, dd, J = 8.0, 1.0 Hz, 6'-H de benceno), 7.72 (1 H, d, J = 2.0 Hz, 7-H de benzotiazol), 7.69 (1 H, dd, J = 8.0, 1.0 Hz, 4'-H de benceno), 7.68 (1H, d, J = 8.0 Hz, 4-H de benzotiazol), 7.36 (1H, t, J = 8.0, 5'-H de benceno), 7.15 (1 H, dd, J = 8.0, 2.0 Hz, 5-H de benzotiazol), 4.25 (2H, s, 2-SCH2-), 4.13 (2H, q, J = 7.1 Hz, COOCH2), 2.64 (3H, s, CH3), 1.17 (3H, t, J = 7.1 Hz, 2-C00CH?CH3); APCI-EM 456.0 (M)+; FAB-HRMS calculado para C18Hi8CIN204S3 (MH+) 457,0117, encontrado 457,0109. 3-Cloro-N-r2-(2-metox¡etilsulfan¡n-benzotiazol-6-in-2-metilbencensulfonamida (STX754. XDS01144) Sólido blancuzco (150 mg, 77%). CCF mancha particular en Rf 0.60 (17% de EtOAc/DCM); pureza CLAR 94% (TR 3.1 minutos en 10% de agua-metanol); 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 10.8 (1 H, s, S02NH), 7.88 (1 H, dd, J = 8, 1 Hz, 6'-H de benceno), 7.71 (1H, d, J = 8 Hz, 4-H de benzotiazol), 7.70 (1 H, dd, J = 8, 1 Hz, 4'-H de benceno), 7.69 (1H, d, J = 2 Hz, 7-H de benzotiazol), 7.36 ( H, t, J = 8 Hz, 5'-H de benceno), 7.15 (1 H, dd, J = 8,2 Hz, 5-H de benzotiazol), 3.64 (2H, t, J = 6 Hz, CH2), 3.50 (2H, t, J = 6 Hz, SCH2), 3.27 (3H, s, CH3), 2.65 (3H, s, CH3); APCI-EM 428.0 (M)+; FAB-HRMS calculado para C17Hi8CIN203S3 (MH+) 429.0168, encontrado 429.0159. 2-[6-(3-Cloro-2-metilbencensulfonilamino -benzotiazol-2-ilsulfanin-N.N-dietilacetamida (STX755. XDS01 45) y 2-r6-(3-cloro-2-metil-bencensulfonilaminoVbenzotiazol^-ill-N.N-dietilacetamida (STX763, XDS01145B) A una suspensión de AICI3 (50 mg) en DCM (5 mi) se le añadió dietilamina (0.4 mi). La solución se agitó bajo nitrógeno a temperatura ambiente por 10 minutos. Etil éster del ácido [6-(3-cloro-2-metil-bencensulfonilamino)-benzotiazol-2-ilsulfanil]-acético (STX752, 100 mg) se añadió y la mezcla se mantuvo en agitación a temperatura ambiente por 30 minutos. La reacción se detuvo con agua, se particionó entre DCM y 5% de NaHCÜ3. La fase orgánica se lavó con agua, se secó sobre MgS04 y se evaporó in vacuo para producir un residuo amarillo, el cual se purificó con cromatografía instantánea en columna utilizando 20-30% de acetato de etilo-DCM como solvente para elución. Se obtuvo STX755 (50 mg, 47%) como un sólido blanco. CCF mancha particular en Rf 0.60 (25% de EtOAc/DCM); pureza CLAR 89% (TR 2.7 minutos en 10% de agua-metanol); H RMN (270 MHz, DMSO-ds) d 10.7 (1 H, s, S02NH), 7.86 (1 H, d, J = 8 Hz, 6'-H de benceno), 7.64-7.68 (3H, m, 4'-H de benceno y 4,7-H de benzotiazol), 7.34 (1H, t, J = 8 Hz, 5 -H de benceno), 7.12 (1H, dd, J = 8, 2 Hz, 5-H de benzotiazol), 4.42 (2H, s, 2-SCH2-), 3.26-3.38 (4H, m, -N(CH2)2-), 2.50 (3H, s, 1'-CH3), 1.17 (3H, t, J = 7 Hz, -NCH7CH3), 1.00 (3H, t, J = 7 Hz, -NCH?CHa); APCI-EM 484.0 (M)+; FAB-HRMS calculado para C20H23CIN3O3S3 (MH+) 484.0590, encontrado 848.0584. Se obtuvo STX763 (25 mg, 25%) como un sólido blanco. CCF mancha particular en Rf 0.39 (25% de EtOAc/DCM); pureza LCMS 98% (tR6.9 minutos en .10% de agua-CH3CN); 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 10.8 (1 H, s, S02NH), 7.88 (1 H, dd, J = 8.1 , 1.2 Hz, 6'-H de benceno), 7.79 (1H, d, J = 8.6 Hz, 4-H), 7.72 (1 H, d, J = 2.0 Hz, 7-H), 7.68 (1H, dd, J = 8.1 , 1.2 Hz, 4'-H de benceno), 7.35 (1 H, t, J = 8.1 Hz, 5'-H de benceno), 7.17 (1 H, dd, J = 8.6, 2 Hz, 5-H de benzotiazol), 4.2 (2H, s, 2-SCH2-), 3.26-3.38 (4H, m, -N(CH2)2-), 2.65 (3H, s, CH3), 1.10 (3H, t, J = 7 Hz, -NC^CHa), 1 -02 (3H, t, J = 7 Hz, -NCH2CH3); APCI-EM 451.0 (M)+; FAB-HRMS calculado para C20H23CIN3O3S2 ( H+) 452.0869, encontrado 452.0870. 3-Cloro-N-benzotiazol-6-il-2-metilbencensulfonamida (STX75Q, XDS01139) Agujas rosa claro (260 mg; 77%). CCF mancha particular en Rf 0.46 (17% de EtOAc/DCM); pureza CLAR 99% (tR 2.5 minutos en 10% de agua-metanol); 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 10.9 (1 H, s, S02NH), 9.25 (1H, s, 2-H de benzotiazol), 7.95 (1H, d, J = 9 Hz, 4-H de benzotiazol), 7.92 (1H, dd, J = 8.0, 1.0 Hz, 6'-H de benceno), 7.84 (1 H, d, J = 2 Hz, 7-H de benzotiazol), 7.70 (1 H, dd, J = 8.0, 1.0 Hz, 4'-H de benceno), 7.37 (1 H, t, J = 8 Hz, 5'-H de benceno), 7.25 (1H, dd, J = 9.0, 2.0 Hz, 5-H de benzotiazol), 2.66 (3H, s, CH3), APCI-EM 337.9 (M)+; FAB-HRMS calculado para C20H23CIN3O3S2 (MH+) 452.0869, encontrado 452.0870. 3-Cloro-N-(2-metilbenzotiazol-6-in-2-metilbencensulfomanida (STX886, XDS01187B1 Sólido blancuzco. CCF mancha particular en 0.65 (10% de metanol/DCM); pureza CLAR >99% (tR 2.4 minutos en 10% de agua-metanol); H RMN (270 MHz, DMSO-d6) d 10.7 (1 H, s, NH), 7.87 (1 H, dd, J = 7.8, 1.9 Hz, ArH), 7.75 (1 H, d, J = 8.8 Hz, ArH), 7.69 (1 H, d, J = 2.2 Hz, ArH), 7.68 (1 H, dd, J = 7.8, 1.9 Hz, ArH), 7.34 (1H, t, J = 7.8 Hz, ArH), 7.15 (1H, dd, J = 8.8, 2.2 Hz, ArH), 2.71 (3H, s, CH3), 2.63 (3H, s, CH3); APCI-EM 351 (M-H)+; FAB-HRMS calculado para C15H 4CIN202S2 (MH+) 353.0185, encontrado 353.0 97.

N-(2-metilbenzotiazol-6-il)-N-(3-cloro-2-metilfenilsulfonil)-3-cloro-2-metilbencensulfonamida (STX887, XDS01187A) Polvo blancuzco. CCF mancha particular en Rf 0.89 (10% de metanol/DCM); pureza CLAR 91 % (tR 3.1 minutos en 10% de agua-metanol); H RMN (270 MHz, DMSO-d6) d 8.09 (1 H, d, J = 2.2 Hz, ArH), 7.92 (1 H, d, J = 8.8, 2.2 Hz, ArH), 2.81 (3H, s, CH3), 2.33 (6H, s, 2 x CH3); APCI-EM 539 (M-H)+; FAB-HRMS calculado para C22H19CI2N2O4S3 (MH+) 540.9884, encontrado 540.9897. 2,5-Dicloro-N-(2-metilbenzotiazol-6-il)-bencensulfonamida (STX888, XDS0 188B) Sólido cristalino blanco. CCF mancha particular en Rf 0.68 (10% de metanol/DCM); pureza CLAR >99% (tR 2.3 minutos en 10% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO-d6) d 10.9 (1 H, s, NH), 7.98 ( H, d, J = 2.3 Hz, ArH), 7.76 (1 H, d, J = 8.9 Hz, ArH), 7.74 ( H, d, J = 2.3 Hz, ArH), 7.69 (1H, dd, J = 8.6, 2.3 Hz, ArH), 7.66 (1 H, d, J = 8.6 Hz, ArH), 7.18 (1 H, dd, J = 8.9, 2.3 Hz, ArH), 2.71 (3H, s, CH3); APCI-EM 371 (M-H)+; FAB-HRMS calculado para C14H-HCI2N2O2S2 (MH+) 372.9639, encontrado 372.9651.

N-(2-Metilbenzotiazol-6-in-N-f2.5-diclorofenilsulfonin-2.5-dicloro-bencensulfonamida (STX889, XDS01188A) Sólido amarillo. CCF mancha particular en Rf 0.72 (10% de metanol/DCM); pureza CLAR 94% (tR 2.9 minutos en 10% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO-d6) d 8.13 (1 H. d, J = 2.2 Hz, ArH), 7.99 (2H, d, J = 2.4 Hz, ArH), 7.90-7.94 (3H, m, ArH), 7.77 (2H, d, J = 8.4 Hz, ArH), 7.29 (1H, dd, J = 8.6, 2.2 Hz, ArH), 2.86 (3H, s, CH3); APCI-EM 581 (Mf; FAB-HRMS calculado para C2oH13Ci4N204S3 (MH+) 580.8792, encontrado 580.8777.

N-(2-Metilbenzotiazol-6-¡n-4-propilbencensulfonamida (STX890, XDS01189) Sólido blancuzco. CCF mancha particular en Rf 0.72 (10% de metanol/DCM); pureza CLAR 99% (ÍR 2.3 minutos en 10% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO-d6) d 10.3 (1H, s, NH), 7.67 (1 H, d, J = 8.7 Hz, ArH) 7.64 (1 H, d, J = 1.5 Hz, ArH), 7.59 (2H, d, J = 7.7 Hz, ArH), 7.27 (2H, d, J = 7.7 Hz, ArH), 7.09 (1H, dd, J = 8.7, 1.5 Hz, ArH), 2.65 (3H, s, CH3), 2.49 (2H, t, J = 7.9 Hz, CH2), .47 (2H, sexteto, J = 7.9 Hz, CH2), 0.58 (3H, t, J = 7.9 Hz, CH3); APCI-EM 345 (M-H)+; FAB-HRMS calculado para Ci7H19N202S2 (MH+) 347.0888, encontrado 347.0904. 3-Cloro-2-met¡l-N-(2-oxo-2.3-dihidro-benzot¡azol-6-¡0-bencensulfonamida (STX753. XDS01143) Sólido cristalino blanco (160 mg; 45%). CCF mancha particular en Rf 0.42 (17% de EtOAc/DCM); pureza CLAR 98% (tR 2.3 minutos en 10% de agua-metanol); 1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) d 11.8 ( H, s, 3-NH), 10.5 (1 H, s, S02NH), 7.81 (1 H, dd, J = 8, 1 Hz, 6 -H de benceno), 7.71 (1 H, dd, J = 8, 1 Hz, 4 -H de benceno), 7.36 (1H, t, J = 8 Hz, 5'-H de benceno), 7.28 ( H, d, J = 2 Hz, 7-H de benzotiazol), 6.93-6.98 (2H, m, 4,5-H de benzotiazol), 2.63 (3H, s, CH3); APCI-EM 353.7 (M)+; FAB-HRMS calculado para C14H12CIN2O3S2 (MH+) 354.9978, encontrado 354.9980. 3-Cloro-N-met¡l-N-(3-met¡l-2-oxo-2.3-d¡hidro-benzotiazol-6-¡n-2-metilbencensulfonamida (STX831 , XDS01163) A una solución de STX753 (66 mg, 0.19 milimoles) en acetona (3 ml_) se le añadió carbonato de potasio (66 mg), seguido por yoduro de metilo (66 mg). La mezcla se agitó a temperatura ambiente por 2 horas, se extrajo con DCM y se lavó con salmuera. Después de secar sobre sulfato de magnesio, el solvente se removió in vacuo para producir un residuo oleoso que se purificó con cromatografía instantánea. Se obtuvo un sólido blancuzco (59 mg, 80%). CCF mancha particular en Rf 0.37 (100% de DCM); pureza CLAR 99% (tR 2.0 minutos en 10% de agua-metanol); 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) d 7.73-7.80 (2H, m, ArH), 7.61 (1H, d, J = 2.1 Hz, ArH), 7.42 ( H, t, J = 8.0 Hz, ArH), 7.29 (1H, d, J = 8.8 Hz, ArH), 7.21 (1H, dd, J = 8.1 , 2.1 Hz, ArH), 3.38 (3H, s, CH3), 3.32 (3H, s, CH3), 2.33 (3H, s, CH3); APCI-EM 383 (MH)+; FAB-HRMS calculado para C^HieCINsOaSz (MH+) 383.0291 , encontrado 383.0273.

Etil éster del ácido r(3-cloro-2-metilbencensulfonin-(3-etox¡carbon¡lmetil-2-oxo-2,3-dihidro-benzotiazol-6-il)-amino1-acético (STX764, XPS01149) A una solución de STX753 (20 mg, 0.056 milimoles) en acetona (3 mL) se le añadió carbonato de potasio (20 mg), seguido por acetato de metil 2-bromoetilo (50 µ?). La mezcla se agitó a temperatura ambiente por 4 horas, se extrajo en EtOAc y se lavó con salmuera. Después de secar sobre sulfato de sodio, el solvente se removió in vacuo para producir un residuo oleoso que se purificó con cromatografía instantánea. Se obtuvo un sólido cristalino blanco (20 mg, 68%) CCF mancha particular en Rf 0.51 (30% de acetato de etilo/hexano); pureza CLAR 98% (ÍR 2.6 minutos en 10% de agua-metanol); 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 7.75-7.78 (2H, m, ArH), 7.70 ( H, d, J = 2.3 Hz, ArH), 7.37 (1 H, t, J = 8.2 Hz, ArH), 7.30 (1 H, d, J = 8.6 Hz, ArH), 7.24 (1 H, dd, J = 8.6, 2.3 Hz, ArH), 4.81 (2H, s, CH2), 4.56 (2H, s, CH2), 4.14 (2H, q, J = 7.0 Hz, CH2), 4.06 (2H, q, J = 7.0 Hz, CH2), 2.44 (3H, s, CH3), 1.19 (3H, t, J = 7.0 Hz, CH3), 1.13 (3H, t, J = 7.0 Hz, CH3); FAB-EM 527 (MH)+; FAB-HRMS calculado para C22H24CIN207S2 (MH+) 527.0713, encontrado 527.0694.

Síntesis de 2-clorobenzotiazol-6-il-amina y 2-cloro-benzotiazol-5-il-amina A una solución de 2-clorobenzotiazol (12.0 g, 70.7 milimoles) en H2S04 concentrado (60 mL) se le añadió HN03 (solución al 69%, 6 mL) gota a gota a 0°C por 20 minutos. La mezcla se agitó a 5°C por 3 horas, se vertió en hielo-agua (150 ml_). El precipitado se recolectó y se lavó con 5% de bicarbonato de sodio y agua, se secó in vacuo. El análisis 1H RMN mostró que la mezcla contenía 78% de 6-nitro-2-clorobenzotiazol y 8% de 5-nitro-2-clorobenzotiazol. La recristalización a partir del etanol produjo 6-nitro-2-clorobenzotiazol como un sólido cristalino blanco (11 g, 72%). 3.5 g del sólido se disolvieron en etanol-acético ácido (150:15 mL) sometido a reflujo, se añadió polvo de hierro en una porción. La mezcla se sometió a reflujo por 1.5 horas, se filtró. El filtrado se concentró in vacuo a la mitad del volumen y se neutralizó con 10% de NaOH a pH 7.5, se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó para producir un residuo, el cual se recristalizo a partir del etanol. Se obtuvieron cristales púrpura claro (2.5 g, 83%). Pf 60-164°C; CCF mancha particular en Rf 0.27 (30% de EtOAc/hexano); H RMN (270 MHz, DMSO-d6) d 7.58 ( H, d, J = 9.0 Hz, 4-H), 7.03 (1 H, d, J = 2.0 Hz, 7-H), 6.77 (1 H, dd, J = 9.0, 2.0 Hz, 5-H), 5.55 (2H, s, NH2). El líquido madre a partir de la recristalización del producto de nitración se evaporó y se sometió a reducción a polvo de hierro como se describió anteriormente. El producto sin purificar se purificó con cromatografía instantánea (gradiente de elución de acetato de etilo-DCM) para producir 2-cloro-benzotiazol-5-il-amina como un sólido amarillo. Pf 146-149°C; CCF mancha particular en Rf 0.52 (10% de EtOAc/DCM); H RMN (270 MHz, DMSO-d6) d 7.63 (1 H, d, J = 8.6 Hz, 7-H), 7.05 (1 H, d, J = 2.3 Hz, 4-H), 6.78 (1H, dd, J = 8.6, 2.3 Hz, 6-H), 5.40 (2H, s, NH2). Los siguientes compuestos se sintetizaron con el método general para N-benzotiazol bencensulfonamida: N-(2-clorobenzotiazol-6-¡n-N-(3-cloro-2-metilfenilsulfonil)-3-cloro-2-metilbencensulfonamida (STX767, XDS01151A) Sólido cristalino blanco. CCF mancha particular en Rf 0.78 (33% de EtOAc/DCM); pureza CLAR 95% (tR 6.4 minutos en 10% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO-d6) d 8.21 (1 H, d, J = 1.3 Hz, ArH), 8.00 (1 H, d, J = 8.8 Hz, ArH), 7.83-7.90 (4H, m, ArH), 7.46 (2H, t, J = 8.0 Hz, ArH), 7.37 (1H, dd, J = 8.8, 1.8 Hz, ArH), 2.33 (6H, s, 2 x CH3); APCI-EM 560 (Mf; FAB-HRMS calculado para C2iH16Cl3N204S3 (MH+) 560.9338, encontrado 560.9344. 3-Cloro-N-(2-clorobenzotiazol-6-il)-2-metilbencensulfonamida (STX768. XDS01151 B) Sólido cristalino blancuzco. CCF mancha particular en Rf 0.68 (33% de EtOAc/DCM); pureza CLAR 99% (tR 1.7 minutos en metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO-d6) d 10.9 (1 H, s, NH), 7.91 (1 H, d, J = 8.1 Hz, ArH), 7.82 (1 H, d, J = 8.8 Hz, ArH), 7.80 (1 H, d, J = 3.1 Hz, ArH), 7.70 (1 H, d, J= 8.1 Hz, ArH), 7.36 (1H, t, J= 8.1 Hz, ArH), 7.23 (1 H, dd, J=8.8, 3.0 Hz, ArH), 2.63 (3H, s, CH3); APCI-EM 372 (M)+; FAB-HRMS calculado para CuH^CIaNaOsSa (MH+) 372.9639, encontrado 372.9651. 3-Cloro-N-(2-clorobenzot¡azol-5-in-2-metilbencensulfonam¡da (STX834, XDS01168) Sólido cristalino blanco. CCF mancha particular en Rf 0.52 (30% de EtOAc/hexano); pureza CLAR 99% (tR 1.7 minutos en metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO-de) d 10.9 (1 H, s, NH), 7.91-7.96 (2H, m, ArH), 7.71 (1H, d, J = 8.1 Hz, ArH), 7.58 (1 H, d, J = 2.2 Hz, ArH), 7.39 (1 H, d, J = 8.1 Hz, ArH), 7.22 (1 H, dd, J = 8.1 , 2.2 Hz, ArH), 2.64 (3H, s, CH3); APCI-EM 371 (M-Hf; FAB-HRMS calculado para C14H11CI2N2O2S2 (MH+) 372.9639, encontrado 372.9656. 3-Cloro-2-metil-N-(2-met¡laminobenzotiazol-6-¡D-bencensulfonamida (STX833, XDS01167) La solución de 3-cloro-N-(2-clorobenzotiazol-6-il)-2-metilbencensulfonamida (STX768, 150 mg, 0.40 milimoles) en CH3NH-THF (2M, 3 mL) se agitó a 82°C en un tubo sellado por 24 horas, se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró in vacuo para producir un residuo que se purificó con cromatografía instantánea (gradiente de elución de acetato de etilo/DCM). Se obtuvieron cristales blancos (100 mg, 68%). CCF mancha particular en Rf 0.27 (30% de EtOAc/DCM); pureza CLAR 99% (tR 1.8 minutos en 4% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO-d6) d 10.2 (1 H, s, NH), 7.82 ( H, q, J = 4.8 Hz, NH), 7.72 (1 H, d, J = 7.7 Hz, ArH), 7.61 (1 H, d, J = 7.7 Hz, ArH), 7.29 (1H, d, J = 2.2 Hz, ArH), 7.26 (1 H, t, J= 8.0 Hz, ArH), 7.15 (1 H, d, J= 8.7 Hz, ArH), 6.79 (1 H, dd, J = 8.7, 2.2 Hz, ArH), 2.80 (3H, d, J = 4.8 Hz, NCH3), 2.54 (3H, s, CH3); APCI-EM 366 (M-Hf; FAB-HR S calculado para C15H15CIN302S2 (MH+) 368.0294, encontrado 368.0292. 3-Cloro-2-met¡l-N-(2-met¡laminobenzotiazol-5-¡D-bencensulfonamida (STX835. XDS01176) El compuesto se preparó como se describió para STX833 utilizando 3-cloro-N-(2-clorobenzotiazol-5-il)-2-metilbencensulfonamida (STX834, 80 mg, 0.21 milimoles) como materia prima. Se obtuvieron cristales blancos (60 mg, 78%). CCF mancha particular en Rf 0.25 (30% de EtOAc/DCM); pureza CLAR 99% (tR 2.3 minutos en 10% de agua-metanol); H RMN (270 Hz, DMSO-d6) d 10.5 (1H, s, NH), 7.96 (1H, q, J= 4.7 Hz, NH), 7.86 (1 H, d, J= 8.1 Hz, ArH), 7.69 (1 H, d, J= 8.1 Hz, ArH), 7.47 (1 H, d, J= 8.0 Hz, ArH), 7.37 (1H, t, J= 8.1 Hz, ArH), 7.05 (1 H, d, J = 1.9 Hz, ArH), 6.73 (1H, dd, J = 8.0, 1.9 Hz, ArH), 2.88 (3H, d, J = 4.7 Hz, NCH3), 2.64 (3H, s, CH3); APCI-EM 368 (MH)+; FAB-HRMS calculado para C^H^CI aOaSz (MH+) 368.0294, encontrado 368.0292. 3-Cloro-N-(2-d¡etilaminobenzotiazol-5-iO-2-metilbencensulfonamida (STX836, XDS01177) El compuesto se preparó como se describió para STX833 utilizando 3-cloro-N-(2-clorobenzotiazol-5-il)-2-metilbencensulfonamida (STX834, 70 mg, 0.18 milimoles) y dietilamina-THF (3 mL) como materia prima. Se obtuvieron cristales blancos (50 mg, 68%). CCF mancha particular en Rf 0.60 (30% de EtOAc/DCM); pureza CLAR 97% (tR 3.0 minutos en 10% de agua-metanol), 1H RMN (270 MHz, DMSO-d6) d 10.5 (1 H, s, NH), 7.85 (1H, d, J= 7.9 Hz, ArH), 7.68 (1 H, d, J= 8.0 Hz, ArH), 7.52 (1 H, d, J= 8.4 Hz, ArH), 7.36 (1 H, t, J = 8.0 Hz, ArH), 7.06 (1H, d, J = 2.2 Hz, ArH), 6.75 (1 H, dd, J = 8.3, 2.2 Hz, ArH), 3.45 (4H, q, J = 7.0 Hz, N(CH2)2), 2.63 (3H, s, CH3), 1.15 (6H, t, J = 7.0 Hz, 2 x CH3); APCI-EM 410 (MH)+; FAB-HRMS calculado para C18H2iCIN302S2 (MH+) 410.0764, encontrado 410.0753. 3-Cloro-N-(2-dietilam¡nobenzotiazol-6-il)-2-metilbencensulfonamida (STX878. XDS01164) El compuesto se preparó como se describió para STX833 utilizando 3-cloro-N-(2-clorobenzotiazol-6-il)-2-metilbencensulfonam¡da (STX768, 240 mg, 0.64 milimoles) y dietilamina-IPA (3 ml_) como materia prima. Se obtuvo un sólido cristalino blancuzco (128 mg, 49%). CCF mancha particular en Rf 0.33 (30% de EtOAc/hexano); pureza CLAR 96% (tR 2.2 minutos en 4% de agua-metanol); H RMN (270 MHz, DMSO-d6) d 7.56-7.62 (3H, m, ArH), 7.18-7.27 (2H, m, ArH), 7.00 (1H, dd, J = 8.5, 1.7 Hz, ArH), 5.52 (1H, s, NH), 3.54 (4H, q, J = 7.0 Hz, N(CH2)2), 2.25 (3H, s, CH3), 1.22 (6H, t, J = 7.0 Hz, 2 x CH3); APCI-EM 409 (M)+; FAB-HRMS calculado para C18H2iCIN302S2 (MH+) 410.0764, encontrado 410.0698.

Síntesis de 2,6-Dimetilbenzotiazol-7-ilamina A una solución de 2,6-dimetilbenzotiazol (350 mg, 2.15 milimoles) en H2S04 concentrado (4 mL) se le añadió HN03 (69%, 0.3 milimoles) a 0°C. Después de agitar a 0°C por 0.5 horas, la mezcla se vertió sobre hielo-agua. El precipitado se recolectó y se lavó con 5% bicarbonato de sodio y agua, se recristalizó a partir del etanol para producir 7-nitro-2,6-dimetilbenzotiazol como un sólido amarillo (160 mg). El producto (150 mg) se hidrogenó sobre 5% de Pd/C en etanol-THF (10:2 mL) a presión atmosférica para producir 2,6-dimetil-benzotiazol-7-ilamina como un sólido amarillo (120 mg). CCF mancha particular en Rf 0.55 (10% de EtOAc/DCM); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 7.07 (2H, s, ArH), 5.23 (2H, s, NH2), 2.73 (3H, s, CH3), 2.20 (3H, s, CH3).

Síntesis de 6-Metoxi-2-metilbenzotiazol-7-ilamina El compuesto se preparó como se describió anteriormente iniciando a partir de 6-metoxi-2-metilbenzotiazol. Se obtuvo un sólido amarillo, pf 117-119°C (lit. 121-122°C); CCF mancha particular en Rf 0.55 (40% de EtOAc/DCM); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 7.14 (1H, d, J = 8.7 Hz, ArH), 7.05 ( H, d, J = 8.7 Hz, ArH), 5.10 (2H, amplio, NH2), 3.83 (3H, s, OCH3), 2.71 (3H, s, CH3). (Friedman, S. G. J Gen Chem USSR 31, 1961 , 3162-3167) Síntesis de 2,5-Dimetilbenzotiazol-4-ilamina v 2,5-Dimetilbenzotiazol-6-ilamina A una solución de 2,5-dimetilbenzotiazol (1.63 g, 10 milimoles) en H2S04 concentrado (12 mL) se le añadió HN03 (69%, 1 milimoles) a -5°C. Después de agitar a -5-0°C por 2 horas, la mezcla se vertió sobre hielo-agua (150 mL). El precipitado se recolectó y se lavó con 5% de bicarbonato de sodio, agua y 70% de etanol. El producto (1.98 g) fue una mezcla de 4-n¡tro-2, 5-dimetilbenzotiazol y 6-nitro-2,5-dimetilbenzotiazol en una relación 1 :1 juzgada por RMN. El producto (998 mg) se hidrogenó sobre 5% de Pd/C (600 mg) en etanol-THF (50:20 mL) a presión atmosférica para producir un sólido amarillo (880 mg). La separación con cromatografía instantánea (gradiente de elución de EtOAc/DC ) produjo 2,5-dimetilbenzotiazol-4-i!amina como cristales amarillos (400 mg). CCF mancha particular en Rf 0.60 (15% de EtOAc/DCM); H RMN (270 MHz, DMSO): d 7.05 (1 H, d, J = 8.0 Hz, ArH), 6.99 (1 H, d, J = 8.0 Hz, ArH), 5.26 (2H, s, NH2), 2.74 (3H, s, CH3), 2.18 (3H, s, CH3); APCI-EM 177 (M-H)+. 2,5-Dimetilbenzotiazol-6-ilam¡na se obtuvo como un sólido amarillo (320 mg). CCF mancha particular en Rf 0.55 (15% de EtOAc/DCM); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 7.47 (1H, s, ArH), 7.05 (1 H, s, ArH), 5.05 (2H, s, NH2), 2.65 (3H, s, CH3), 2.16 (3H, s, CH3); APCI-EM 177 (M-H)+.

Síntesis de 4-cloro-2-met¡lbenzotiazol-5-ilamina v 4.6-dicloro-2-metilbenzotiazol-5-ilamina A una solución de 5-amino-2-metilbenzotiazol (818 mg, 4.99 milimoles) en isopropanol (12 ml_) se le añadió N-clorosuccinimida (732 mg, 5.48 milimoles). La mezcla se agitó a 60°C por 15 minutos, se particionó entre DCM y 5% de bicarbonato de sodio. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró in vacuo para producir un residuo que se purificó con cromatografía instantánea (gradiente de elución de EtOAc/DCM). Se obtuvo 4-cloro-2-metilbenzotiazol-5-ilamina como un sólido cristalino blancuzco (510 mg, 51%). pf 121-122°C (lit. 124°C); CCF mancha particular en Rf 0.51 (20% de EtOAc/DCM); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 7.61 (1 H, d, J= 8.6 Hz, ArH), 6.91 (1 H, d, J = 8.6 Hz, ArH), 5.49 (2H, s, NH2), 2.75 (3H, s, CH3); APCI-EM 199 (MH)+. 4,6-D¡cloro-2-metilbenzotiazol-5-ilam¡na se obtuvo como un sólido amarillo (60 mg, 5%). TLC mancha particular en Rf 0.57 (20% de EtOAc/DCM); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 7.89 (1H, s, ArH), 5.26 (2H, s, NH2), 2.77 (3H, s, CH3); APCI-EM 233 (MH)+. Los siguientes compuestos se sintetizaron con el método general para N-benzotiazol bencensulfonamida. 3-Cloro-N-í6-metoxi-2-metilbenzot¡azol-7-in-2-metilbencensulfonamida (STX989, XDS02038 Sólido cristalino blanco. CCF mancha particular en Rf 0.71 (30% de EtOAc/DCM); pureza CLAR 99% (tR 2.3 minutos en 10% de agua-metanol); H RMN (270 MHz, DMSO-d6) d 10.1 (1 H, s, NH), 7.76 (1H, d, J = 8.9 Hz, ArH), 7.72 (1H, d, J = 8.2 Hz, ArH), 7.53 (1 H, d, J = 8.2 Hz, ArH), 7.23 (1 H, t, J = 8.2 Hz, ArH), 7.05 (1 H, d, J = 8.9 Hz, ArH), 3.29 (3H, s, OCH3), 2.74 (3H, s, CH3), 2.70 (3H, s, CH3); APCI-EM 381 (M-H)+; FAB-HRMS calculado para C16H16CIN203S2 (MH+) 383.0291 , encontrado 383.0284. 3-Cloro-N-f2,6-dimetil-benzotiazol-7-iD-2-metil-bencensulfonamida (STX1021. XDSQ2069 Sólido cristalino blancuzco. CCF mancha particular en Rf 0.49 (10% de EtOAc/DCM); pureza CLAR 98% (tR 2.0 minutos en 20% de aguámetanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO-d6) d 10.3 (1H, s, NH), 7.78 (1H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.74 (1 H, d, J = 8.4 Hz, ArH), 7.64 (1H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.34 (1H, t, J = 7.9 Hz, ArH), 7.30 (1H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 2.68 (3H, s, CH3), 2.61 (3H, s, CH3), 2.03 (3H, s, CH3), FAB-EM 367 (MH)+; FAB-HRMS calculado para (MH+) 367.0342, encontrado 367.0347. 3-Cloro-N-(2,5-dimetil-benzotiazol-4-il)-2-metil-bencensulfonamida (STX996. XDS02047) Sólido cristalino blanco. CCF mancha particular en Rf 0.76 (10% de EtOAc/DCM); pureza CLAR >99% (tR 2.9 minutos en 10% de agua-metanol); H RMN (270 MHz, DMSO-d6) d 9.98 (1H, s, NH), 7.81 (1 H, d, J = 8.3 Hz, ArH), 7.64 (1 H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.45 (1 H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.31 ( H, d, J = 8.3 Hz, ArH), 7.12 (1 H, t, J = 7.9 Hz, ArH), 2.73 (3H, s, CH3), 2.47 (3H, s, CH3), 2.44 (3H, s, CH3); APCI-EM 367 (MH)+; FAB-HRMS calculado para C^H^CINsOzSa (MH+) 367.0342, encontrado 367.0342.

N-(2.5-dimetilbenzotiazol-6-il)-N-(3-cloro-2-metilfenilsulfonin-3-cloro-2-metilbencensulfonamida (STX997. XDS02048A") Jarabe blancuzco. CCF mancha particular en Rf 0.78 (10% de EtOAc/DCM); pureza CLAR 85% (tR 4.2 minutos en 10% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO-d6) d 8.06 (1 H, s, ArH), 7.86-7.95 (5H, m, ArH), 7.68 (1 H, s, ArH), 7.52 (2H, t, J = 8.2 Hz, ArH), 2.83 (3H, s, CH3), 2.29 (6H, s, 2 x CH3), 2.05 (3H, s, CH3); APCI-EM 555 (MH)+; FAB-HRMS calculado para C23H21CI2N2O4S3 (MH+) 555.0040, encontrado 555.0041. 3-Cloro-N-(2,5-dimetilbenzotiazol-6-¡n-2-met¡lbencensulfonamida (STX998. XDS02048B Sólido cristalino blanco. CCF mancha particular en Rf 0.39 (10% de EtOAc/DCM); pureza CLAR 96% (tR 2.1 minutos en 10% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO-d6) d 10.0 (1 H, s, NH), 7.74 (1 H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.70 (1 H, s, ArH), 7.67 (1H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.63 (1 H, s, ArH), 7.33 (1H, t, J = 7.9 Hz, ArH), 2.75 (3H, s, CH3). 2.60 (3H, s, CH3), 2.13 (3H, s, CH3); APCI-EM 367 (MH)+; FAB-HRMS calculado para dsH^CINzOzSs (MH+) 367.0342, encontrado 367.0350. 2,5-D¡cloro-N-(2,5-d¡metilbenzotiazol-6-il)-bencensulfonamida (STX999. XDS02049 Sólido cristalino blanco. CCF mancha particular en Rf 0.43 (10% de EtOAc/DCM); pureza CLAR 98% (tR 2.0 minutos en 10% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO-d6) d 10.3 (1 H, s, NH), 7.76 (3H, s, ArH), 7.72 (1 H, s, ArH), 7.67 (1H, s, ArH), 2.75 (3H, s, CH3), 2.23 (3H, s, CH3); APCI-EM 387 (MH)+; FAB-HRMS calculado para C^HiaC^C^ (MH+) 386.9795, encontrado 386.9806.

N-(4-Cloro-2-metil-benzotiazol-5-in-N-(3-cloro-2-metilfenilsulfonilV3-cloro-2-metil-bencensulfonamida (STX991. XDS02042A) Polvo blanco. CCF mancha particular en Rf 0.75 (8% de EtOAc/DCM); pureza CLAR > 99% (tR 4.4 minutos en 10% de agua-metanol); H RMN (270 MHz, DMSO-d6) d 8.19 (1H, d, J = 8.7 Hz, ArH), 7.93 (4H, d, J = 8.2 Hz, ArH), 7.59 (1H, d, J = 8.7 Hz, ArH), 7.50 (2H, d, J = 8.2 Hz, ArH), 2.85 (3H, s, CH3), 2.41 (6H, s, 2 x CH3); APCI-EM 575 (MH)+; FAB-HRMS calculado para C22Hi8CI3N204S3 (MH+) 574.9494, encontrado 574.9492. 3-Cloro-N-f4-cloro-2-metilbenzotiazol-5-in-2-metílbencensulfonamida (STX992; XDS02042B) Sólido cristalino blanco. CCF mancha particular en Rf 0.69 (8% de EtOAc/DCM); pureza CLAR 99% (tR 2.5 minutos en 10% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO-d6) d 10.5 (1 H, s, NH), 7.96 (1 H, d, J = 8.7 Hz, ArH), 7.73 (1 H, d, J = 7.9, ArH), 7.64 (1H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.30 (1 H, d, J = 8.7 Hz, ArH), 7.29 (1 H, t, J = 7.9, ArH), 2.79 (3H, s, CH3), 2.70 (3H, s, CH3); APCI-EM 385 (M-H)+; FAB-HRMS calculado para dsHtsClaNaOaS (MH+) 386.9795, encontrado 386.9790. 2,5-D¡cloro-N-(4-cloro-2-metilbenzotiazol-5-¡n-bencensulfonamida (STX993. XDS02043B) Sólido cristalino blanco. CCF mancha particular en Rf 0.71 (8% de EtOAc/DCM); pureza CLAR 99% (tR 5.0 minutos en 10% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO-d6) d 10.7 (1 H, S, NH), 7.97 (1H, d, J = 8.6 Hz, ArH), 7.71-7.78 (3H, m, ArH), 7.28 (1 H, d, J = 8.6 Hz, ArH), 2.81 (3H, s, CH3); APCI-EM 407 (MH)+; FAB-HRMS calculado para (MH+) 406.9249, encontrado 406.9234.

N-(4-Cloro-2-metilbenzotiazol-5-¡l)-4-propilbencensulfonamida (STX994, XDS02044B) Sólido cristalino blanco. CCF mancha particular en Rf 0.70 (8% de EtOAc/DCM); pureza CLAR 99% (tR 2.7 minutos en 0% de agua-metanol); H RMN (270 MHz, DMSO-d6) d 10.1 (1 H, s, NH), 7.93 (1H, d, J = 8.6 Hz, ArH), 7.60 (2H, d, J = 8.2 Hz, ArH), 7.35 (2H, d, J = 8.2 Hz, ArH), 7.28 (1H, d, J = 8.4 Hz, ArH), 2.79 (3H, s, CH3), 2.69 (2H, t, J = 7.2 Hz, CH2), 1.59 (2H, m, CH2), 0.86 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3); APCI-EM 381 (MH)+; FAB-HRMS calculado para C17H-18CIN2O2S2 (MH+) 381.0498, encontrado 38 .0484.

N-(4-Cloro-2-metilbenzot¡azol-5-¡n-N-(4-propílfen¡lsulfonil)-4-propilbencensulfonamida (STX995, XDS02044A) Polvo blanco. CCF mancha particular en Rf 0.70 (8% de EtOAc/DC ); pureza CLAR 99% (tR 3.8 minutos en 0% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO-d6) d 8.10 (1H, d, J = 8.4 Hz, ArH), 7.74 (4H, d, J = 8.1 Hz, ArH), 7.50 (4H, d, J = 8.1 Hz, ArH), 7.08 (1H, d, J = 8.4 Hz, ArH), 2.91 (3H, s, CH3), 2.71 (4H, t, J = 7.1 Hz, 2 x CH2), 1.59 (4H, m, CH2), 0.86 (6H, t, J = 7.1 Hz, 2 x CH3); APCI-EM 561 (M-H)+; FAB-HRMS calculado para C26H28CIN204S3 (MH+) 563.0900, encontrado 563.0886.

Síntesis de 3-cloro-2-metil-N-(2-metil-benzotiazol-5-¡lmetiO-bencensulfonamida (STX1029, XDS02070A) v 3-cloro-2-metil-N,N-bis-(2-metil-benzotiazol-5-ilmet¡n-bencensulfonam¡da (STX1030, XDS02070B) A una solución de 3-cloro-2-metilbencensulfonam¡da (103 mg, 0.5 milimoles) en CH3CN se le añadió carbonato de potasio (100 mg), seguido por 5-bromometil-2-metilbenzotiazol (121 mg, 0.5 milimoles). La mezcla se sometió a reflujo bajo N2 por 6 horas, se particionó entre acetato de etilo y agua. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró in vacuo para producir un residuo amarillo, el cual se separó con cromatografía instantánea (gradiente de elución de acetato de etilo/DCM). Se obtuvo STX1029 como un sólido blanco. CCF mancha particular en Rf 0.55 (10% de EtOAc/DCM); pureza CLAR > 99% (tR 2.0 minutos en 10% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, CDCI3) d 7.89 (1H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.66 (1 H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.65 (1H, d, J = 1.3 Hz, ArH), 7.49 (1 H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.17 (1 H, t, J = 7.9 Hz, ArH), 7.13 (1 H, dd, J = 7.9, 1.5 Hz, ArH), 5.35 (1 H, t J = 5.9 Hz, NH), 4.24 (2H, d, J = 5.9 Hz, CH2), 2.79 (3H, s, CH3), 2.62 (3H, s, CH3); APCI-EM 367 (MH)+; FAB-HRMS calculado para C^H^CINzC^ (MH+) 367.0342, encontrado 367.0330. STX1030 se obtuvo como un sólido blanco. CCF mancha particular en Rf 0.50 (10% de EtOAc/DCM); pureza CLAR 99% (tR 6.1 minutos en 20% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO-d6) d 7.87 (3H, d, J = 8.1 Hz, ArH), 7.75 (1 H, d, J = 8.0 Hz, ArH), 7.59 (2H, amplio w1 2 =1.1 Hz, ArH), 7.38 ( H, t, J= 8.0 Hz, ArH), 7.11 (2H, dd, J= 8.1, 1.1 Hz, ArH), 4.56 (4H, s, 2 x NCH2), 2.78 (6H, s, 2 x CH3), 2.58 (3H, s, CH3); APCI-EM 528 (MH)+; FAB-HRMS calculado para C25H23CIN302S3 (MH+) 528.0641, encontrado 528.0630.

Síntesis de derivados de N-indol o de N-lndol¡n arilsulfonamida STX1Ü2O.X¡pi¾2063 STXS84, X0SD2Q2S S7X887, XDS02031 Método general para síntesis de derivados de N-indol o N-indolin arilsulfonamida (STX832, STX981-982, STX984, STX986-987, STX1018-1020): A una solución de cloruro de arilsulfonilo (1.1 equivalentes) en DCM se le añadió piridina (2.2 equivalentes) y una cantidad catalítica de DMAP, seguido por la amina correspondiente (1 equivalente). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente bajo nitrógeno por 4-6 horas, luego se particionó entre acetato de etilo y 5% de bicarbonato de sodio después de que la CCF mostró el término de la reacción. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, y se concentró ¡n vacuo para producir producto sin purificar como un sólido o como un jarabe espeso. Luego el compuesto se purificó mediante cromatografía instantánea (gradiente de elución de metanol-DCM) para producir arilsulfonamida deseada como un sólido cristalino. El rendimiento tiene un intervalo de 50-85%. 3-Cloro-2-metil-N-(2-metil-1 H-indol-5-¡n-bencensulfonamida (STX832, XDS01165) Sólido cristalino blanco. CCF mancha particular en Rf 0.68 (30% de acetato de etilo/hexano); pureza CLAR > 99% (tR 1.8 minutos en 4% de agua-metanol); H RMN (270 MHz, DMSO): d 10.9 (1 H, s, NH), 9.98 (1 H, s, NH), 7.72 (1H, d, J = 8 Hz, ArH), 7.63 (1 H, d, J = 8 Hz, ArH), 7.27 (1H, t, J = 8 Hz, ArH), 7.07 (1 H, d, J = 8 Hz, ArH), 7.05 (1H, d, J = 2 Hz, ArH), 6.67 (1H, dd, J= 8,2 Hz, ArH), 5.99 (1 H, s, 3-H), 2.60 (3H, s, CH3), 2.29 (3H, s, CH3); APCI-EM 334 (M+); FAB-HRMS calculado para C16H16CIN202S (MH+) 335.0621 , encontrado 335.0609. 3-Cloro-2-metil-N-(1 H-indol-5-in-bencensulfonamida (STX981 , XDS02019) Sólido cristalino blanco. CCF mancha particular en Rf 0.72 (6% de metanol/DCM); pureza CLAR 98% (tR 2.1 minutos en 10% de agua-metanol); H RMN (270 MHz, DMSO): d 11.1 (1 H, s, NH), 10.1 (1H, s, NH), 7.76 (1 H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.66 (1 H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.22-7.32 (4H, m, ArH), 6.81 ( H, dd, J= 7.9, 1.2 Hz, ArH), 6.33 (1 H, amplio, 3-H), 2.64 (3H, s, CH3); APCI-EM 319 (M-H+); FAB-HRMS calculado para C 5H14CIN2O2S (MH+) 321.0465, encontrado 321.0453. 3-Cloro-2-metil-N-( 1 H-indoi-6-il)-bencensulfonamida (STX982.

XDSQ2020) Sólido cristalino blanco. CCF mancha particular en Rf 0.88 (10% de metanoI/DCM); pureza CLAR 98% (tR 2.5 minutos en 20% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 11.0 (1 H, s, NH), 10.3 (1H, s, NH), 7.80 (1 H, d, J= 7.9 Hz, ArH), 7.67 (1 H, d, J= 7.9 Hz, ArH), 7.31-7.38 (2H, m, ArH), 7.26 (1 H, m, ArH), 7.80 (1 H, d, J = 1.2 Hz, ArH), 6.75 (1 H, dd, J=7.9, 1.2 Hz, ArH), 6.31 (1H, amplio, 3-H), 2.65 (3H, s, CH3); APCI-EM 319 (M-H+); FAB-HRMS calculado para C15H.14CIN2O2S (MH+) 321.0465, encontrado 321.0446.

Etil éster del ácido 5-(3-cloro-2-metilbencensulfon¡lamino)-1 H-indol-2-carboxílico (STX986. XDS02030) Sólido cristalino blanco. CCF mancha particular en Rf 0.82 (8% de metanol/DCM); pureza CLAR > 99% (tR 2.3 minutos en 10% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 11.9 (1 H, s, NH), 10.3 (1H, s, NH), 7.78 (1 H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.67 (1 H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.28-7.33 (3H, m, ArH), 7.06 (1 H, d, J = 2.2 Hz, ArH), 7.00 (1H, dd, J= 8.2, 2.2 Hz, ArH), 4.32 (2H, q, J = 6.9 Hz, OCH2), 2.63 (3H, s, CH3), 1.31 (3H, t, J = 6.9 Hz, CH3); APCI-EM 391 (M-H+); FAB-HRMS calculado para C18H18CI 204S (MH+) 393.0676, encontrado 393.0659. 3-Cloro-2-metil-N-(2,3-dimetil-1H-indol-5-il)-bencensulfonam¡da (STX1018, XDS02061) Sólido cristalino blanco. CCF mancha particular en Rf 0.83 (30% de acetato de etilo/hexano); pureza CLAR 97% (ÍR 2.9 minutos en 20% de agua-metanol); H RMN (270 MHz, DMSO): d 10.6 (1 H, s, NH), 10.0 (1H, s, NH), 7.74 (1H, d, J = 7.5 Hz, ArH), 7.65 (1 H, d, J= 7.5 Hz, ArH), 7.29 (1 H, t, J = 8.0 Hz, ArH), 7.05 (1 H, d, J = 8.6 Hz, ArH), 6.99 (1 H, d, J = 1.7 Hz, ArH), 6.66 (1 H, dd, J= 8.6, 1.7 Hz, ArH), 2.62 (3H, s, CH3), 2.25 (3H, s, CH3), 2.03 (3H, s, CH3); APCl-EM 349 (MH+); FAB-HRMS calculado para C17H18CIN202S (MH+) 349.0778, encontrado 349.0737. 2.5-Dicloro-N-(2,3-dimetil-1H-indol-5-il)-bencensulfonamida (STX1019. XDS02062) Polvo amorfo blanco. CCF mancha particular en Rf 0.82 (10% de acetato de etilo/hexano); pureza CLAR 98 % (ÍR 3.0 minutos en 20% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 10.7 (1H, s, NH), 10.2 (1H, s, NH), 7.80 (1 H, m, ArH), 7.67-7.70 (2H, m, ArH), 7.07 (1 H, d, J = 8.5 Hz, ArH), 7.05 (1H, d, J = 1.7 Hz, ArH), 6.73 (1 H, dd, J= 8.5, 1.7 Hz, ArH), 2.25 (3H, s, CH3), 2.04 (3H, s, CH3); APCl-EM 367 (M-H+); FAB-HRMS calculado para C16H14CI2N2O2S (M+) 368.0153, encontrado 368.0146. 4-n-Propil-N-(2,3-dimetil-1H-indol-5-in-bencensulfonamida (STX1020, XDS02063) Sólido cristalino blancuzco. CCF mancha particular en Rf 0.82 (10% de acetato de etilo/hexano); pureza CLAR 97% (tR 2.9 minutos en 20% de agua-metanol); H RMN (270 MHz, DMSO): d 10.6 (1H, s, NH), 9.6 (1H, s, NH), 7.56 (2H, d, J = 8.3 Hz, ArH), 7.30 (2H, d, J = 8.3 Hz, ArH), 7.03 (1H, d, J = 8.3 Hz, ArH), 6.95 (1H, d, J = 1.7 Hz, ArH), 6.68 (1H, dd, J= 8.3, 1.7 Hz, ArH), 2.56 (2H, t, J = 7.3 Hz, CH2), 2.24 (3H, s, CH3), 2.01 (3H, s, CH3), 1.55 (2H, sexteto, J = 7.3 Hz, CH2), 0.85 (3H, t, J = 7.3 Hz, CH3),; APCI-EM 343 (MH+); FAB-HRMS calculado para C19H22 2O2S (M+) 342.1402, encontrado 342.1403. 3-Cloro-2-metil-N-(1 -acetil-2.3-dihidro-1 H-indol-5-il V bencensulfonamida (STX984. XDS02Q25) Sólido cristalino blanco. CCF mancha particular en Rf 0.58 (5% de metanol/DCM); pureza CLAR 95% (tR 2.2 minutos en 20% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 10.4 (1 H, s, NH), 7.80-7.86 (2H, m, ArH), 7.71 (1 H, d, J = 7.8 Hz, ArH), 7.36 (1 H, t, J = 8.0 Hz, ArH), 6.93 (1H, d, J = 1.8 Hz, ArH), 6.83 (1 H, dd, J = 8.2, 1.8 Hz, ArH), 4.01 (2H, t, J = 8.3 Hz, CH2), 3.03 (2H, t, J = 8.4 Hz, CH2), 2.62 (3H, s, CH3), 2.09 (3H, s, CH3); APCI-EM 363 (M-H+); FAB-HRMS calculado para C17H18CIN2O3S (MH+) 365.0727, encontrado 365.0796.

Cloruro de 5-f3-cloro-2-metil-bencensulfonilamino)-1-etil-2,3-dihidro-1 H-indolio (STX987, XDS02031^ La base libre de STX987 se sintetizó como se mencionó anteriormente. Se obtuvo un polvo amorfo púrpura; CCF mancha particular en Rf 0.79 (8% de metanol/DCM); 1H RMN (270 MHz, CDCI3): d 7.79 (1H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.53 (1H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.15 (1H, t, J = 8.0 Hz, ArH), 6.75 (1H, d, J = 1.8 Hz, ArH), 6.58 (1 H, dd, J = 8.1 , 1.8 Hz, ArH), 6.35 (1 H, s, NH), 6.22 (1 H, d, J= 8.1 Hz, ArH), 3.30 (2H, t, J = 8.4 Hz, CH2), 3.05 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH2), 2.84 (2H, t, J = 8.3 Hz, CH2), 2.67 (3H, s, CH3), 1.11 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3). La base libre se trató con solución de HCI-éter para producir STX987 como un sólido cristalino rosa claro. Pureza CLAR 93% (tR 3.6 minutos en 20% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 10.3 (1H, s, NH), 7.82 (1H, d, J = 8.1 Hz, ArH), 7.72 (1H, d, J = 8.1 Hz, ArH), 7.38 (1H, t, J = 8.1 Hz, ArH), 6.79-6.89 (3H, m, amplio, ArH), 3.42 (2H, t, J = 8.4 Hz, CH2), 3. 6 (2H, q, J = 7.0 Hz, CH2), 2.91 (2H, t, J = 8.4 Hz, CH2), 2.62 (3H, s, CH3), 1.10 (3H, t, J = 7.0 Hz, CH3); APCI-EM 349 (M-HCI-H+); FAB-HRMS calculado para C17H20CIN2O2S (M-HCI+H+) 351.0934, encontrado 351.0941. 1 -Acetil-5-aminoindolina La solución de 1-acetil-5-nitroindolina (1.0 g, 4.85 milimoles) en etanol-THF (100 mL:30 mL) se hidrogenó sobre 5% de Pd/C (600 mg) a presión atmosférica por 2 horas, se filtró a través de Celite y se concentró in vacuo para producir un sólido blanco el cual se recristalizó a partir de etanol.

Se obtuvo un sólido cristalino blanco (580 mg, 68%). Pf 185-186.5°C (lit 184-185°C, [21]); H RMN (270 MHz, DMSO): d 7.73 (1H, d, J = 8.6 Hz, ArH), 6.45 (1H, s amplio, w1/2 = 1.8 Hz, ArH), 6.33 (1H, dd, J = 8.6, 1.8 Hz, ArH), 4.82 (2H, s, NH2), 3.97 (2H, t, J= 8.4 Hz, CH2), 2.99 (2H, t, J= 8.4 Hz, CH2), 2.07 (3H, s, CH3); APCI-EM 175 ( -H+). 1 -Etil-5-aminoindolina A una suspensión de 1-acetil-5-aminoindolina (130 mg, 0.74 milimoles) en THF anhidro (10 ml_) se le añadió LÍAIH4 (42 mg, 1.11 milimoles). La mezcla se agitó a temperatura ambiente por 6 horas, se detuvo con NH4CI saturado y se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró in vacuo para producir un residuo púrpura (80 mg, 67%) que se utilizó sin purificación subsecuente. 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 6.56 (1 H, s, ArH), 6.47 (1H, d amplio, J = 8.1 Hz, ArH), 6.37 (1H, d, J = 8.0 Hz, ArH), 3.29 (2H, s, NH2), 3.20 (2H, t, J = 7.6 Hz, CH2), 3.02 (2H, q, J = 6.9 Hz, CH2), 2.86 (2H, t, J = 7.6 Hz, CH2), 1.17 (3H, t, J = 6.9 Hz, CH3).

Síntesis de metil éster del ácido 5-(3-cloro-2-metil-bencensulfonamidoV1 H-indol-3-carboxílico, STX 1050 (KRB01132): Metiléster del ácido 5-amino-1H-indol-3-carboxílico (KRB01131): A una solución de metiléster del ácido 5-nitro-1 H-indol-3-carboxíIico (206 mg, 0.940 milimoles) en metanol (40 ml_) se le añadió 5% de paladio sobre carbono (40 mg) y la mezcla se agitó bajo 1 atmósfera de h por 5 horas. La mezcla se filtró a través de celite y el filtrado se evaporó para producir un sólido café que se utilizó sin purificación adicional (173 mg, 97%), mancha particular en Rf 0.64 (acetato de etilo). H RMN (d6-DMSO): d 11.50 (1H, s, N-H), 7.83 (1H, d, J= 3.2 Hz), 7.17 (1H, d, J= 2.0 Hz), 7.14 (1H, d, J= 8.4 Hz), 6.56 (1H, dd, J= 8.6, 2.2 Hz), 4.77 (2H, s, N-H2), 3.76 (3H, s). A una solución de cloruro de 3-cloro-2-metilbencensulfonilo (124 mg, 0.552 milimoles) en diclorometano (4 mL) se le añadió piridina (100 µ?, 1.3 milimoles) y la mezcla se agitó bajo N2 por 5 minutos, después de este tiempo se añadió metiléster del ácido 5-amino-1 H-indol-carboxílico (100 mg, 0.526 milimoles). La mezcla resultante se agitó por 1.5 horas a temperatura ambiente, luego se añadió solución saturada de NaHC03 (15 mL) y la mezcla se extrajo en acetato de etilo (20 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó (Na2S04), se filtró y se evaporó para producir un residuo que se purificó utilizando cromatografía instantánea para obtener un sólido blanco (129 mg, 65%), mancha particular en Rf 0.84 (acetato de etilo), pf 216.8-219.3°C, [22], pureza CLAR 99+% (tR 2.07 minutos en 10% de agua-acetonitrilo). 1H RMN (d6-DMSO): d 11.91 (1 H, s), 10.32 (1H, s), 8.03 (1 H, d, J= 3.0 Hz), 7.82 (1 H, d, J= 7.9 Hz), 7.70-7.67 (2H, m), 7.37-7.31 (2H, m), 6.95 (1H, dd, J= 8.6, 2.0 Hz), 3.77 (3H, s), 2.65 (3H, s). LCMS: 377.09. FAB-EM (MH+, C17Hi5CIN204S): calculado 378.0441 , encontrado 378.0439.

Síntesis de derivados de bencimidazol arisulfonamida ; fla Ar = ?¾1eOCI>f enilo Ar=4-n-propilfenilo R» -CH3 H- Ar= ¾S-diclorof enilo R" ?t= 2,4- diclorof enilo Rí AT= 2-f>te-4-& f enilo A< - 4- bif enilo R = •CH3 a)RX,¾C¾,A;etona ia o reflujo b]¾/S¾P<i-c, BanolMKFt.a.;t Fe-, AeOI'J-etanol e)ArS03CI, PCM, P!ridinai a AtSQjü, DCM, Pirid¡na¿J3,MAP -.ItSOBt. THF, T.t «I?J clorosuooáwrtda 1?A STXir»a XDSQ2DB9 STX£r9,XOS0«73 S¾?BSS, XDEC-K)2e Preparación de 1-alquil-5-amino-2-metilbenc¡midazol y 1-alqu¡l-6- amino-2-metilbencimidazol A una solución de 5-nitrobencimidazol (1.0 g, 5.6 milimoles) en acetona (50 mL) se le añadió carbonato de potasio (1.0 g), seguido por haliduro de alquilo (1.2-1.5 equivalentes). La mezcla se agitó bajo nitrógeno a temperatura ambiente, luego se particionó entre acetato de etilo y agua después de que la CCF mostró el término de la reacción. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró in vacuo para producir una mezcla de 1-alquil-5-nitro-2-metilbencimidazol y 1-alquil-6-nitro-2-metilbencimidazol, los cuales se disolvieron en etanol-THF (100 ml_, 2:1) y se hidrogenaron sobre 5% de Pd-C bajo presión atmosférica por 8 horas. Después de la filtración a través de celite®, el filtrado se evaporó para producir un sólido amarillo que se separó con cromatografía instantánea (gradiente de elución Metanol-DCM). Se obtuvieron 1-alquil-5-aminobencimidazol y 1-alquil-6-aminobencimidazol como un sólido amarillo o un jarabe espeso. 5-Amino-1 ,2-dimetilbencimidazol (XDS01191B, XDS02082B): Sólido amarillo, pf 126-127X (lit. 128°C, [23]). CCF mancha particular en Rf 0.30 (5% de metanol/DCM); 1H RMN (270 Hz, DIVISO): d 7.08 (1H, d, J = 8.7 Hz, 7-H), 7.65 (1H, d, J = 1.5 Hz, 4-H), 6.50 (1 H, dd, J = 8.7, 1.5 Hz, 6-H), 4.63 (2H, amplio, NH2), 3.58 (3H, s, NCH3), 2.39 (3H, s, CH3). 6-Amino-1 ,2-dimetilbencimídazol (XDS01191A, XDS02082A): Sólido amarillo. CCF mancha particular en Rf 0.33 (5% de metanol/DCM); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 7.13 (1 H, d, J = 8.4 Hz, 4-H), 6.48 (1 H, d, J = 2.0 Hz, 7-H), 6.43 (1 H, dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 5-H), 4.83 (2H, amplio, NH2), 3.53 (3H, s, NCH3), 2.39 (3H, s, CH3). 5-Amino-1 -etil-2-metilbencimidazol (XDS02079B): Jarabe amarillo. CCF mancha particular en Rf 0.27 (5% de metanol/DC ); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 7.12 (1 H, d, J = 8.3 Hz, 7-H), 6.68 (1H, d, J = 2.0 Hz, 4-H), 6.51 (1H, dd, J = 8.3, 2.0 Hz, 6-H), 4.68 (2H, amplio, NH2), 4.08 (2H, q, J = 7.2 Hz, NCH2), 2.43 (3H, s, CH3), 1.24 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3); APCI-EM 175 (M+). 6-Amino-1 -etil-2-metilbencimidazol (XDS02079A): Sólido amarillo. CCF mancha particular en Rf 0.30 (5% de metanol/DCM); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 7.16 (1 H, d, J = 8.4 Hz, 4-H), 6.68 (1 H, d, J = 1.7 Hz, 7-H), 6.46 (1H, dd, J = 8.4, 1.7 Hz, 5-H), 4.85 (2H, amplio, NH2), 4.02 (2H, q, J = 7.9 Hz, NCH2), 2.42 (3H, s, CH3), 1.24 (3H, t, J = 7.9 Hz, CH3); APCI-EM 175 (M+). 5-Amino-1 -i-butil-2-metilbencimidazol (XDS02093B): Jarabe amarillo. CCF mancha particular en Rf 0.42 (10% de metanol/DCM); 1H RMN (400 MHz, DMSO): d 7.08 (1 H, d, J = 8.5 Hz, 7-H), 6.65 (1 H, d, J = 1.9 Hz, 4-H), 6.48 (1 H, dd, J = 8.5, 1.9 Hz, 6-H), 4.63 (2H, amplio, NH2), 3.82 (2H, d, J = 7.4 Hz, NCH2), 2.41 (3H, s, CH3), 2.07 ( H, m, CH), 0.84 (6H, d, J = 7.0 Hz, 2 x CH3); APCI-EM 204 (MH+) 6-Amino-1-i-butil-2-metilbencimidazol (XDS02Q93A): Sólido amarillo. CCF mancha particular en Rf 0.45 (10% de metanol/DC ); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 7.15 (1H, d, J = 8.2 Hz, 4-H), 6.62 (1 H, d, J = 1.6 Hz, 7-H), 6.44 (1H, dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 5-H), 4.83 (2H, amplio, NH2), 3.79 (2H, d, J = 7.7 Hz, NCH2), 2.41 (3H, s, CH3), 2.10 (1H, m, CH), 0.87 (6H, d, J = 6.6 Hz, 2 x CH3); APCI-EM 204 (MH+) Etil éster del ácido (5-aminobenzoimidazol-1-¡l)-acético (XDS02012B) Sólido amarillo. CCF mancha particular en Rf 0.36 (5% de metanol/DCM); H RMN (270 MHz, DMSO): d 7.08 (1 H, d, J = 8.4 Hz, 7-H), 6.69 (1 H, d, J = 2.2 Hz, 4-H), 6.49 (1H, dd, J = 8.4, 2.2 Hz, 6-H), 5.02 (2H, s, NCH2), 4.68 (2H, s, NH2), 4.16 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH2), 2.36 (3H, s, CH3), 1.21 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3); APCI-EM 234 (MH+).

Etil éster del ácido (6-aminobenzoimidazol-1-il)-acét¡co (XDSQ2012A^ Sólido amarillo. CCF mancha particular en Rf 0.40 (5% de metanol/DCM); H RMN (270 MHz, DMSO): d 7.17 (1 H, d, J = 9.0 Hz, 4-H), 6.45-6.48 (2H, m, 5 y 7-H), 4.95 (2H, s, NCH2), 4.87 (2H, s, NH2), 4.17 (2H, q, J = 7.1 Hz, CH2), 2.36 (3H, s, CH3), 1.22 (3H, t, J = 7.1 Hz, CH3); APCI-EM 234 (MH+). 5- Am¡no-1-bencil-2-metilbencim¡dazol (XDS02086B): Jarabe amarillo. CCF mancha particular en Rf 0.27 (5% de metanol/DCM); 1H RMN (400 MHz, DMSO): d 7.26-7.32 (2H, m, ArH), 7.23 (1 H, tt, J = 7.5, 2.3 Hz, ArH), 7.05-7.09 (3H, m, ArH), 6.69 (1 H, d, J = 2.3 Hz, 4-H), 6.46 (1 H, dd, J = 8.2, 2.3 Hz, 6-H), 5.30 (2H, s, CH2), 4.68 (2H, amplio, NH2), 2.40 (3H, s, CH3); APCI-EM 238 (MH+). 6- Amino-1 -bencil-2-metilbencimidazol (XDS02086A): Sólido amarillo. CCF mancha particular en Rf 0.30 (5% de metanol/DCM); 1H RMN (400 MHz, DMSO): d 7.28-7.32 (2H, m, ArH), 7.23 (1 H, tt, J = 7.5, 2.3 Hz, ArH), 7.17 (1 H, d, J = 8.2, Hz, ArH), 7.06 (2H, m ArH), 6.43-6.46 (2H, m, ArH), 5.26 (2H, s, CH2), 4.63 (2H, s, NH2), 2.40 (3H, s, CH3); APCI-EM 238 (MH+).

Preparación de 5-amino-4-cloro- ,2-dimetilbencimidazol (XDS02096A) A una solución de 5-amino-1 ,2-dimetilbencimidazol (600 mg, 3.73 milimoles) en IPA (15 mL) se le añadió N-clorosuccinimida (548 mg, 4.10 milimoles). La mezcla se agitó a temperatura ambiente por 20 minutos, diluido con DCM (80 mL) y se lavó con 5% de bicarbonato de sodio y salmuera. La solución café oscuro se secó sobre sulfato de sodio y se concentró in vacuo para producir un residuo café, el cual se sometió a cromatografía instantánea (gradiente de elución de metanol-DCM). Se obtuvo un sólido amarillo (220 mg, 33%). CCF mancha particular en Rf 0.69 (10% de metanol/DCM); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 7.16 (1 H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 6.72 (1H, d, J = 7.9, Hz, ArH), 4.90 (2H, s, NH2), 3.64 (3H, s, NCH3), 2.40 (3H, s, CH3); APCI-EM 196 (MH+) Método general para síntesis de derivados de la N-bencimidazol arilsulfonamida: A una solución de cloruro de arilsulfonilo (1.1 equivalentes) en DCM se le añadió piridina (2.2 equivalentes) y una cantidad catalítica de DMAP, seguido por la amina correspondiente (1 equivalente). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente bajo nitrógeno por 4-16 horas, luego se particionó entre acetato de etilo y 5% de bicarbonato de sodio después de que la CCF mostró el término de la reacción. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, y se concentró in vacuo para producir producto sin purificar como un sólido o como un jarabe espeso. Luego el compuesto se purificó mediante cromatografía instantánea (gradiente de elución de Metanol-DCM) para producir la arilsulfonamida deseada como un sólido cristalino. El rendimiento tiene un intervalo de 50-80%. 3-cloro-N-( 1 ,2-dimetil-1 H-benzoimidazol-6-in-2-metilbencensulfonamida (STX975. XDS02001) Sólido cristalino blanco, pf 265-266°C; CCF mancha particular en Rf 0.43 (5% de metanol/DCM); pureza CLAR > 99% (tR 2. minutos en 0% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 10.4 (1 H, s, NH), 7.84 ( H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.67 (1 H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.34 (1 H, d, J = 8.2 Hz, ArH), 7.32 (1 H, t, J = 7.9 Hz, ArH), 7.14 (1 H, d, J = 2 Hz, ArH), 6.80 (1 H, dd, J= 8.2, 2.0 Hz, ArH), 3.61 (3H, s, NCH3), 2.64 (3H, s, CH3), 2.46 (3H, s, CH3); APCI-EM 348 (M-H+); FAB-HRMS calculado para C16Hi7CIN302S (MH+) 350.0730, encontrado 350.0749. 3-Cloro-N-(1 ,2-dimetil-1 H-benzoimidazol-5-il)-2-metilbencensulfonamida (STX976, XDS02003) Sólido cristalino blanco. Pf 283-283.5°C; CCF mancha particular en Rf 0.38 (5% de metanil/DCM); pureza CLAR <99% (tR 2.0 minutos en 10% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 10.3 (1H, s, NH), 7.77 (1 H, d, J = 7.6 Hz, ArH), 7.66 (1 H, d, J = 7.6 Hz, ArH), 7.32 (1 H, d, J = 8.4 Hz, ArH), 7.30 ( H, t, J= 7.6 Hz, ArH), 7.16 (1 H, d, J = 2 Hz, ArH), 6.90 (1H, dd, J= 8.4, 2.0 Hz, ArH), 3.64 (3H, s, NCH3), 2.64 (3H, s, CH3), 2.44 (3H, s, CH3); APCI-EM 348 (M-H+); FAB-HRMS calculado para C16H 7CIN302S (MH+) 350.0730, encontrado 350.0747. 3-Cloro-N-(4-cloro- ,2-dimetil-1 H-benzoimidazol-5-il)-2-metilbencensulfonamida (STX1121. XDS02102B) Sólido cristalino blancuzco. CCF mancha particular en Rf 0.50 (10% de metanol/DCM); pureza CLAR 95% (tR 2.1 minutos en 20% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 10.1 (1 H, s, NH), 7.70 (1 H, dd, J= 7.7, 1.7 Hz, ArH), 7.56 (1 H, dd, J= 7.8, 1.7 Hz, ArH), 7.39 (1 H, d, J = 8.2 Hz, ArH), 7.25 (1H, t, J = 7.7 Hz, ArH), 7.04 (1 H, d, J = 8.2 Hz, ArH), 3.69 (3H, s, NCH3), 2.67 (3H, s, CH3), 2.51 (3H, s, CH3); APCI-EM 384 (MH+).

N-(1,2-Dimetil-1 H-benzo¡m¡dazol-5-il)-4-propilbencensulfonamida (STX1112. XDS02088) Sólido cristalino blanco. CCF mancha particular en Rf 0.38 (5% de metanol/DCM); pureza CLAR > 99% (tR 2.1 minutos en 20% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 9.90 (1 H, s, NH), 7.58 (2H, d, J = 8.3 Hz, ArH), 7.29-7.32 (3H, m, ArH), 7.17 (1H, d, J = 1.5 Hz, ArH), 6.91 (1H, dd, J = 8.6, 2.0 Hz, ArH), 3.64 (3H, s, NCH3), 2.55 (2H, m, CH2), 2.50 (3H, s, CH3), 1.55 (2H, sexteto, J = 7.6 Hz, CH2), 0.84 (3H, t, J = 7.6 Hz, CH3); APCI-EM 344 (MH+). 2,5-Dicloro-N-( ,2-dimetil-1 H-benzoimidazol-5-iQ-bencensulfonamida (STX 113, XDS02089) Sólido cristalino blanco. CCF mancha particular en Rf 0.67 ( 0% de metanol/DCM); pureza CLAR 99% (tR 2.0 minutos en 20% de agua-metanol); H RMN (270 MHz, DMSO): d 10.5 (1 H, s, NH), 7.84 (1H, t, J = 1.4 Hz, ArH), 7.68 (2H, d, J = 2.0 Hz, ArH), 7.35 (1 H, d, J = 8.5 Hz, ArH), 7.21 (1 H, d, J = 2.0 Hz, ArH), 6.97 (1H, dd, J = 8.2, 2.0 Hz, ArH), 3.64 (3H, s, NCH3), 2.45 (3H, s, CH3); APCI-EM 370 (MH+). 2,4-Dicloro-N-( ,2-dimetil-1 H-benzoimidazol-5-iO-bencensulfonamida (STX1114, XDS02090^ Sólido cristalino blancuzco. CCF mancha particular en Rf 0.59 (10% de metanol/DCM); pureza CLAR > 99% (tR 2.0 minutos en 20% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 10.4 (1 H, s, NH), 7.88 (1 H, d, J = 8.7 Hz, ArH), 7.84 (2H, d, J = 1.9 Hz, ArH), 7.52 (1 H, dd, J = 8.7, 1.9 Hz, ArH), 7.33 (1 H, d, J= 8.5 Hz, ArH), 7.20 (1 H, d, J= 1.7 Hz, ArH), 6.95 (1 H, dd, J = 8.7, 1.7 Hz, ArH), 3.63 (3H, s, NCH3), 2.45 (3H, s, CH3); APCI-EM 370 (MH+). 4-Bromo-N-( ,2-dimetil-1 H-benzoimidazol-5-iQ-2-metilbencensulfonamida (STX1115. XDS02091 ) Sólido cristalino blanco. CCF mancha particular en Rf 0.67 (10% de metanol/DCM); pureza CLAR > 99% (tR 2.1 minutos en 20% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 10.1 (1H, s, NH), 7.62-7.69 (2H, m, ArH), 7.50 (1 H, dd, J = 8.5, 2.2 Hz, ArH), 7.32 (1 H, d, J = 8.5 Hz, ArH), 7.14 (1 H, d, J = 1.9 Hz, ArH), 6.89 (1H, dd, J = 8.5, 1.9 Hz, ArH), 3.63 (3H, s, NCH3), 2.55 (3H, s, CH3), 2.45 (3H, s, CH3); APCI-EM 394 (MH+).

N-d ^-Dimetil-I H-benzoimidazol-S-il -fenilbencensulfonamida (STX1 116. XDS02092) Sólido cristalino blanco. CCF mancha particular en Rf 0.72 (5% de metanol/DCM); pureza CLAR > 99% (tR 2.1 minutos en 20% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 10.0 (1 H, s, NH), 7.67-7.82 (6H, m, ArH), 7.41-7.50 (3H, m, ArH), 7.33 (1H, d, J = 8.5 Hz, ArH), 7.22 ( H, d, J = 1.9 Hz, ArH), 6.95 (1H, dd, J = 8.5, 1.9 Hz, ArH), 3.64 (3H, s, NCH3), 2.44 (3H, s, CH3); APCI-EM 378 ( H+). 3-Cloro-N-i1-etil-2-metil-1 H-benzoimidazol-6-in-2-metilbencensulfonamida (STX1110. XDS02084) Sólido blancuzco. CCF mancha particular en Rf 0.45 (8% de metanol/DCM); pureza CLAR > 99% (tR 2.2 minutos en 20% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 10.4 (1H, s, NH), 7.84 (1H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.67 (1 H, d, J = 7.8 Hz, ArH), 7.35 (1 H, d, J = 8.5 Hz, ArH), 7.32 (1 H, t, J = 7.9 Hz, ArH), 7.10 (1H, d, J = 2.2 Hz, ArH), 6.82 (1 H, dd, J= 8.5, 2.1 Hz, ArH), 4.09 (2H, q, J =7.1 Hz, CH2), 2.61 (3H, s, CH3), 2.46 (3H, s, CH3), 1.18 (3H, t, J = 7.1 Hz, CH3); APCI-EM 364 (MH+). 3-Cloro-N-(1-etil-2-metil-1 H-benzoimidazol-5-HV2-metilbencensulfonamida (STX1111. XDSQ2085) Sólido blancuzco. CCF mancha particular en Rf 0.42 (8% de metanol/DCM); pureza CLAR > 99% (tR 2.2 minutos en 20% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 10.3 (1 H, s, NH), 7.78 (1 H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.66 (1 H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.36 (1 H, d, J = 8.2 Hz, ArH), 7.32 (1 H, t, J = 7.9 Hz, ArH), 7.16 (1H, d, J = 1.9 Hz, ArH), 6.90 (1 H, dd, J= 7.9, 2.0 Hz, ArH), 4.12 (2H, q, J =7.1 Hz, CH2), 2.64 (3H, s, CH3), 2.46 (3H, s, CH3), 1.23 (3H, t, J = 7.1 Hz, CH3); APCI-EM 364 (MH+). 3-Cloro-N-í 1 -isobutil-2-metil-1 H-ben20¡midazol-6-il)-2-metilbencensulfonamida (STX1119, XDS02100) Sólido blancuzco. CCF mancha particular en Rf 0.57 (8% de metanol/DCM); pureza CLAR 99% (tR 2.2 minutos en 20% de agua-metanol); H RMN (270 MHz, DMSO): d 10.4 ( H, s, NH), 7.80 (1H, d, J = 8.9 Hz, ArH), 7.66 (1 H, d, J = 8.8 Hz, ArH), 7.36 (1H, d, J = 8.5 Hz, ArH), 7.29 (1H, t, J = 7.9 Hz, ArH), 7.03 (1 H, d, J = 1.9 Hz, ArH), 6.84 (1H, dd, J= 8.5, 1.8 Hz, ArH), 3.85 (2H, d, J =7.2 Hz, NCH2), 2.61 (3H, s, CH3), 2.45 (3H, s, CH3), 1.91 (1 H, m, CH), 0.81 (6H, d, J = 7.0 Hz, 2 x CH3); APCI-EM 392 (MH+). 3-Cloro-N-(1-isobutil-2-metil- H-benzoimidazol-5-in-2-metilbencensulfonamida (STX1120, XDS02101) Sólido blancuzco. CCF mancha particular en Rf 0.52 (8% de metanol/DCM); pureza CLAR 99% (tR 2.3 minutos en 20% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 10.3 (1 H, s, NH), 7.80 (1H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.68 (1 H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.38 (1H, d, J = 8.8 Hz, ArH), 7.33 (1H, t, J = 7.9 Hz, ArH), 7.16 (1H, d, J = 1.9 Hz, ArH), 6.90 (1H, dd, J= 8.7, 1.9 Hz, ArH), 3.91 (2H, d, J =7.3 Hz, NCH2), 2.62 (3H, s, CH3), 2.47 (3H, s, CH3), 2.05 (1 H, m, CH), 0.83 (6H, d, J = 7.0 Hz, 2 x CH3); APCI-EM 392 (MH+).

Etil éster del ácido [6-(3-cloro-2-metilbencensulfonilamino)-2-metilbenzoimidazol-1-ill-acético (STX977, XDSQ2015) Sólido blancuzco. CCF mancha particular en Rf 0.46 (6% de metanol/DCM); pureza CLAR > 99% (tR 2.0 minutos en 10% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 10.4 (1 H, s, NH), 7.82 (1H, d, J = 8.0 Hz, ArH), 7.67 (1 H, d, J = 8.0 Hz, ArH), 7.37 (1 H, d, J = 8.5 Hz, ArH), 7.30 (1 H, t, J= 8.0 Hz, ArH), 7.11 (1 H, d, J= 2.0 Hz, ArH), 6.83 (1 H, dd, J= 8.5, 2.0 Hz, ArH), 5.09 (2H, s,NCH2), 4.16 (2H, q, J = 7.1 Hz, CH2), 2.62 (3H, s, CH3), 2.45 (3H, s, CH3), 1.21 (3H, t, J = 7.1 Hz, CH3); APCI-EM 420 (M-H+); FAB-HRMS calculado para Ci9H2iCIN304S (MH+) 422.0941 , encontrado 422.0942.

Etil éster del ácido f5-(3-cloro-2-metilbencensulfonilamino)-2-metilbenzoimidazol-1-ill-acético (STX978. XDS02017) Sólido blancuzco. CCF mancha particular en Rf 0.40 (6% de metanol/DCM); pureza CLAR 997o (ÍR 2.0 minutos en 10% de agua-metanol); H RMN (270 MHz, DMSO): d 10.3 (1H, s, NH), 7.80 (1 H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.67 ( H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.29-7.34 (2H, m, ArH), 7.18 (1 H, d, J = 1.7 Hz, ArH), 6.90 (1H, dd, J= 8.6, 1.7 Hz, ArH), 5.1 (2H, s, NCH2), 4.15 (2H, q, J = 7.1 Hz, CH2), 2.64 (3H, s, CH3), 2.40 (3H, s, CH3), 1.19 (3H, t, J = 7.1 Hz, CH3); APCI-EM 420 (M-H+); FAB-HRMS calculado para C19H2iCIN304S (MH+) 422.0941 , encontrado 422.0944. 3-Cloro-N-( 1 -bencil-2-metil-1 H-benzoimidazol-6-in-2-metilbencensulfonamida (STX1117, XDS02098) Sólido blancuzco. CCF mancha particular en Rf 0.70 (10% de metanol/DCM); pureza CLAR 99% (tR 2.2 minutos en 20% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 10.4 (1 H, s, NH), 7.66 (1H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.64 (1 H, d, J= 7.9 Hz, ArH), 7.30-7.39 (4H, m, ArH), 7.21 (1 H, t, J = 7.9 Hz, ArH), 7.11 (1 H, d, J = 2.0 Hz, ArH), 7.02-7.06 (2H, m, ArH), 6.83 (1H, dd, J= 7.9, 2.0 Hz, ArH), 5.34 (2H, s, NCH2), 2.58 (3H, s, CH3), 2.45 (3H, s, CH3); APCI-EM 426 (MH+). 3-Cloro-N-(1 -benc¡l-2-metil-1 H-benzoimidazol-5-in-2-metilbencensulfonamida (STX1118. XDS02099) Sólido blancuzco. CCF mancha particular en Rf 0.65 (10% de metanol/DCM); pureza CLAR 99% (tR 2.2 minutos en 10% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 10.3 (1H, s, NH), 7.80 ( H, d, J= 7.9 Hz, ArH), 7.67 (1 H, d, J= 7.9 Hz, ArH), 7.25-7.35 (5H, m, ArH), 7.19 (1H, d, J = 1.9 Hz, ArH), 7.06-7.09 (2H, m, ArH), 6.87 (1 H, dd, J= 8.5, 1.9 Hz, ArH), 5.38 (2H, s, NCH2), 2.62 (3H, s, CH3), 2.45 (3H, s, CH3); APCI-EM 426 (MH+). 3-Cloro-N-(2-triflurometil-1H-benzoimidazol-5-in-2-metilbencensulfonamida (STX879. XDS01173) Sólido cristalino blanco. CCF mancha particular en Rf 0.58 (20% de acetato de etilo/DCM); pureza CLAR 99% (tR 2.4 minutos en 20% de agua- metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 13.9 (1H, s, NH), 10.7 (1H, s, NH), 7.85 (1 H, d, J = 8.0 Hz, ArH), 7.68 (1 H, d, J = 8.0 Hz, ArH), 7.60 (1 H, d amplio, J = 8.1 Hz, ArH), 7.34 (2H, m, ArH), 7.10 (1H, d, J = 8.3 Hz, ArH), 2.64 (3H, s, CH3); APCI-EM 388 ( -H+); FAB-HRMS calculado para C15H12CIF3N3O2S (MH+) 390.0291 , encontrado 390.0291.

Preparación de 3-cloro-N-(2-metil-1H-benzoimidazol-5-iQ-2-metilbencensulfonamida (STX985, XDS02026) La reacción de acoplamiento del cloruro de 3-cloro-2-metilbencensulfonilo (2 equivalentes) con 2-metiibencimidazol (1 equivalente) bajo la condición anteriormente descrita produjo una mezcla de 3-cloro-N-[1-(3-cloro-2-metilbencensulfonil)-2-metil-1H-benzoimidazol-5-il]-2-metil-bencensulfonamida y 3-cloro-N-[1-(3-cloro-2-metilbencensulfonil)-2-metil-1 H-benzoimidazol-6-il]-2-metil-bencensulfonamida en una relación 1:1 como se juzga por HRMN. 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 10.7 (2H, s, 2 x NH), 7.86-7.96 (3H, m, ArH), 7.65-7.78 (5H, m, ArH), 7.52-7.58 (5H, m, ArH), 7.25-7.40 (3H, m, ArH), 7.07 (2H, t, J = 8.2 Hz, ArH), 2.61 (3H, s, CH3), 2.58 (3H, s, CH3), 2.54 (6H, s, 2 x CH3), 2.39 (3H, s, CH3), 2.33 (3H, s, CH3). La mezcla (200 mg) se disolvió en THF (15 mL), se añadió N-hidroxibenzotriazol (200 mg). Después de agitar a temperatura ambiente por 48 horas, la mezcla se particionó entre acetato de etilo y 5% de bicarbonato de sodio. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró ¡n vacuo para producir un residuo amarillo, el cual se purificó con cromatografía instantánea (gradiente de elución metanol/DCM). Se obtuvo un polvo amorfo blancuzco. CCF mancha particular en Rf 0.38 (10% de metanol/DCM); pureza CLAR 99% (tR 2.0 minutos en 10%» de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 12.1 (1H, s, NH), 10.3 (1 H, s, NH), 7.78 (1H, d, J = 7.9 Hz, ArH), 7.68 (1H, d, J= 7.9 Hz, ArH), 7.29-7.35 (2H, m, ArH), 7.12 (1H, s, ArH), 6.83 (1 H, dd, J= 8.4, 1.8 Hz, ArH), 2.63 (3H, s, CH3), 2.41 (3H, s, CH3); APCI-EM 334 (M-H+); FAB-HRMS calculado para C15H15CIN3O2S (MH+) 336.0573, encontrado 336.0583.

Síntesis de derivados de N-Bencimldazol arilsulfonamida a) Raney-Ni, NH2NH2-H2O, etanol, temperatura ambiente b) Ac20, AcOH, 80°C c) 6N HCI, 75°C d) cloruro de 3-CI-2-Me-bencensulfonilo, DCM, piridina e) LÍAIH4, THF, 0°C N -Fenil-bencen-1 ,2.4-triamina: A una solución de 2,4-dinitrofenilamina (1.5 g, 5.8 milimoles) en etanol-THF (150:50 mL) se le añadió hidrato de hidrazina (2 mL, 65 milimoles) y níquel de Raney (2.0 g). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente por 20 minutos, se filtró a través de Celite. La evaporación del solvente produjo un residuo negro, el cual se purificó mediante cromatografía instantánea (gradiente de elución de metanol-DCM). Se obtuvo un sólido cristalino negro (1.0 g, 87%). pf 128-129°C; CCF mancha particular en Rf 0.46 (8% de metanol/DCM); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 7.25 (2H, t, J = 7.5 Hz, ArH), 6.73 (1 H, s, NH), 6.61 (1 H, d, J= 8.3 Hz, ArH), 6.49-6.55 (3H, m, ArH), 5.99 (1 H, d, J = 2.5 Hz, ArH), 5.83 (1H, dd, J= 8.2, 2.5 Hz, ArH), 4.66 (2H, s, NH2), 4.44 (2H, s, NH2); APCI-EM 198 (M-H+).

N-(2-Metil-1 -fenil- H-bencimidazol-5-iD-acetamida: N1-fenil-bencen-1,2,4-triamina (800 mg, 4 milimoles) se disolvió en ácido acético (10 mL), se le añadió a la solución anhídrido acético (1.0 mL).

La mezcla se agitó a 80°C por 6 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se neutralizó con 5% de carbonato de sodio, luego se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró para producir un residuo, el cual se cristalizó a partir de etanol. Se obtuvo un sólido café cristalino (0.85 g, 80%). pf 231-232°C; CCF mancha particular en Rf 0.39 (10% de metanol/DCM); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 9.92 (1 H, s, NH), 7.97 (1 H, d, J = 1.6 Hz, ArH), 7.51-7.67 (5H, m, ArH), 7.31 (1 H, dd, J = 8.3, 1.9 Hz, ArH), 7.04 (1 H, d, J = 8.3 Hz, ArH), 2.41 (3H, s, CH3), 2.05 (3H, s, CH3); APCI-EM 264 (M-H+). 2- etil-1 -fenil- H-benzoimidazol-5-ilamina: La solución de N-(2-metil-1 -fenil-1 H-bencimidazol-5-il)-acetamida (800 mg, 3 milimoles) en HCI 6N (5 mL) se agitó a 75°C por 3 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se neutralizó con carbonato de sodio a pH 7, luego se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró para producir un sólido café oscuro (600 mg, 90%). pf 145-146°C; CCF mancha particular en Rf 0.47 (10% de metanol/DCM); H RMN (270 MHz, DMSO): d 7.58-7.64 (2H, m, ArH), 7.46-7.53 (3H, m, ArH), 6.82 (1 H, d, J = 8.5 Hz, ArH), 6.76 (1 H, d, J = 1.9 Hz, ArH), 6.51 (1 H, dd, J = 8.5, 1.9 Hz, ArH), 4.78 (2H, s, NH2). 2.36 (3H, s, CH3); APCI-EM 223 (M+). 3- Cloro-2-metil-N-(2-met¡l-1 -fenil-1 H-benzoimidazol-5-iD-bencensulfonamida (STX1 40. XDSQ2110) El compuesto se preparó con el método general de formación de bencensulfonamida. Se obtuvo un sólido rosa claro cristalino. Pf 254-256°C; CCF mancha particular en Rf 0.62 (8% de metanol/DCM); pureza CLAR > 99% (tR 2.6 minutos en 20% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 10.4 (1H, s, NH), 7.83 (1H, dd, J = 8.6, 1.8 Hz, ArH), 7.69 (1 H, dd, J = 8.6, 1.7 Hz, ArH), 7.58-7.63 (5H, m, ArH), 7.34 (1 H, t, J = 8.0 Hz, ArH), 7.28 (1 H, d, J = 1.9 Hz, ArH), 6.90-7.00 (2H, m, ArH), 2.66 (3H, s, CH3), 2.36 (3H, s, CH3); APCI-EM 412 (MH+). 3-Cloro-N-ri-(2-h¡droxietilV2-met¡l-1 H-benzoimidazol-6-¡n-2-met¡l-bencensulfonamida (STX114 . XDS02115) A una solución de etil éster del ácido [6-(3-cloro-2-metil-bencensulfonilam¡no)-2-metil-benzoimidazol-1-il]-acético (100 mg, 0.237 milimoles) en THF anhidro (10 mL) se le añadió LiAIH4 (54 mg, 1.42 milimoles) a 0°C. La mezcla se agitó a 0°C por 0.5 horas, se detuvo con solución saturada de cloruro de amonio, se neutralizó con HCI 6N y se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró in vacuo para producir un sólido rosa cristalino (82 mg, 91%). Pf 213-214.5°C; CCF mancha particular en Rf 0.39 (12% de metanol/DCM); pureza CLAR > 99% (tR 2.0 minutos en 20% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 10.4 (1H, s, NH), 7.84 (1H, d, J = 7.7 Hz, ArH), 7.67 (1 H, d, J= 7.9 Hz, ArH), 7.28-7.35 (2H, m, ArH), 7.15 (1H, d, J = 1.9 Hz, ArH), 6.80 (1 H, dd, J = 8.5, 1.9 Hz, ArH), 4.94 (1 H, t, J = 5.2 Hz, OH), 4.10 (2H, t, J = 5.0 Hz, NCH2), 3.59 (2H, q, J = 5.2 Hz, CH2), 2.51 (3H, s, CH3), 2.47 (3H, s, CH3); APCI-EM 380 (MH+). 3-Cloro-N-ri-(2-hidroxi-etin-2-metil-1 H-benzoim¡dazol-5-¡ll-2-metil-bencensulfonamida (STX1142. XDS02116) El compuesto se preparó como se mencionó anteriormente a partir de etil éster del ácido [5-(3-cloro-2-metil-bencensulfonilamino)-2-metil-benzoimidazol-1-il]-acético (35 mg, 0.083 milimoles). Se obtuvo un sólido cristalino blanco (22 mg, 89%). Pf 245-247°C; CCF mancha particular en Rf 0.38 (12% de metanol/DCM); pureza CLAR > 99% (tR 2.0 minutos en 20% de agua-metanol); 1H RMN (270 MHz, DMSO): d 10.3 (1H, s, NH), 7.79 (1H, d, J = 8.0 Hz, ArH), 7.67 (1H, d, J = 8.0 Hz, ArH), 7.29-7.35 (2H, m, ArH), 7.16 (1H, s, ArH), 6.89 (1 H, d, J= 8.5, ArH), 4.90 (1 H, t, J = 5.0 Hz, OH), 4.14 (2H, t, J = 5.0 Hz, NCH2), 3.63 (2H, q, J= 5.2 Hz, CH2), 2.65 (3H, s, CH3), 2.48 (3H, s, CH3); APCI-EM 380 (MH+).

Síntesis de derivados de benzoxazol STX 839: R1=R2=H, R3=CI, R4=Me STX 842: R1=R2=H, R3=CI, R4=Me STX 840: Ri=R3=R4=H, R2=n-propilo STX 843: R1=R3=R4=H, R2=n-propilo STX 841 : Ri=R4=CI, R2=R3=H STX 846: R1=R4=C!, R2=R3=H Síntesis de 3-cloro-2-metil-N-(2-metil-benzooxazol-6-iO-bencensulfonamida, STX 839 (KRB010Q9): A una solución de cloruro de 3-cloro-2-metilbencensulfonilo ( 63 .723 milimoles) en diclorometano (3 mL) se le añadió piridina (140 µ?, 1.72 milimoles) y la mezcla se agitó bajo N2 por 5 minutos, después de dicho tiempo se añadió 6-amino-2-metilbenzoxazol (102 mg, 0.688 milimoles). La mezcla resultante se agitó por 1 hora a temperatura ambiente, luego se añadió solución saturada de NaHC03 (8 mL) y la mezcla se extrajo en acetato de etilo (15 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó (Na2S04), se filtró y se evaporó para producir un residuo que se purificó utilizando cromatografía instantánea para obtener un sólido blanco (151 mg, 65%), mancha particular en Rf 0.50 (60:40 hexano: acetato de etilo), pf 127.1-127.5°C, pureza CLAR 97% (tR 2.05 minutos en 10% de agua-acetonitrilo). 1H RMN (CDCI3): d 7.85 (1H, dd, J= 8.1, 1.1 Hz), 7.53 (1H, dd, J= 8.1 , 1.3 Hz), 7.45 (1 H, d, J= 8.4 Hz), 7.27 (1 H, d, J= 2.2 Hz), 7.17 (1H, t, J= 7.9 Hz), 6.93 (1H, s, N-H), 6.86 ( H, dd, J= 8.4, 2.2 Hz), 2.71 (3H, s), 2.58 (3H, s). LCMS: 335.14 (M-). FAB-EM ( H+, C15Hi3ClN203S): calculado 337.0413, encontrado 337.0406.

Síntesis de N-(2-metil-benzooxazol-6-in-4-propil-bencensulfonamida. STX 840 (KRB01010V A una solución de cloruro de 4n-propilbencensulfonilo (163 mg, 0.744 milimoles) en diclorometano (3 mL) se le añadió piridina (140 µ?, 1.72 milimoles) y la mezcla se agitó bajo N2 por 5 minutos, después de dicho tiempo se añadió 6-amino-2-metiibenzoxazol (105 mg, 0.709 milimoles). La mezcla resultante se agitó por 1 hora a temperatura ambiente, luego se añadió solución saturada de NaHC03 (8 mL) y la mezcla se extrajo en acetato de etilo (15 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó (Na2S0 ), se filtró y se evaporó para producir un residuo que se purificó utilizando cromatografía instantánea para obtener un sólido rosa claro (164 mg, 70%), mancha particular en Rf 0.49 (60:40 hexano:acetato de etilo), pf 101.7-102.3°C, pureza CLAR al 99% (tR 2.02 minutos en 10% de agua-acetonitrilo). 1H RMN (CDCl3): d 7.61 (2H, m), 7.43 (1 H, d, J= 8.4 Hz), 7.37 (1H, d, J= 1.8 Hz), 7.19 (2H, m), 6.83 (2H, m), 2.57 (5H, m), 1.58 (2H, sexteto, J= 7.3 Hz), 0.88 (3H, t, J= 7.3 Hz). LC S: 329.21 (M-). FAB-EM ( H+, C17Hi8N203S): calculado 331.1116, encontrado 331.1107.

Síntesis de 2,5-d¡cloro-(2-metil-benzooxazol-6-iD-bencensulfonamida, STX 841 (KRB01011 A una solución de cloruro de 2,5-diclorobencensulfonilo (174 mg, 0.709 milimoles) en diclorometano (3 mL) se le añadió piridina (140 µ?, 1.72 milimoles) y la mezcla se agitó bajo N2 por 5 minutos, después de dicho tiempo se le añadió 6-amino-2-met¡lbenzoxazol (100 mg, 0.675 milimoles). La mezcla resultante se agitó por 1 hora a temperatura ambiente, luego se añadió solución saturada de NaHC03 (8 mL) y la mezcla se extrajo en acetato de etilo (15 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó (Na2S04), se filtró y se evaporó para producir un residuo que se purificó utilizando cromatografía instantánea para obtener un sólido blanco (154 mg, 64%), mancha particular en Rf 0.50 (60:40 hexano:acetato de etilo), pf 167.0-167.3°C, pureza CLAR 97% (tR 1.97 minutos en 10% de agua-acetonitrilo). 1H RMN (CDCI3): d 7.93 (1 H, d, J= 2.3 Hz), 7.47 (1 H, d, J= 8.6 Hz), 7.46-7.40 (4H, m), 7.00 (1 H, dd, J= 8.6, 2.0 Hz), 2.61 (3H, s). LCMS: 355.07 (M-). FAB-EM ( H+, C14H10Cl2 2O3S): calculado 356.9867, encontrado 356.9875.

Síntesis de 3-cloro-2-metil-N-(2-metil-benzooxazol-5-iO-bencensulfonamida, STX 842 (KRB01014 : A una solución de cloruro de 3-cloro-2-metilbencensulfonilo (96 mg, 0.43 milimoles) en diclorometano (2 mL) se le añadió piridina (80 µ?, 1.0 milimoles) y la mezcla se agitó bajo N2 por 5 minutos, después de dicho tiempo se añadió 5-amino-2-metilbenzoxazol (60 mg, 0.40 milimoles). La mezcla resultante se agitó por 1 hora a temperatura ambiente, luego se añadió solución saturada de NaHC03 (8 mL) y la mezcla se extrajo en acetato de etilo (15 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó (Na2S04), se filtró y se evaporó para producir un residuo que se purificó utilizando cromatografía instantánea para obtener un sólido blanco (89 mg, 64%), mancha particular en Rf 0.52 (1 :1 hexano:acetato de etilo), pf 180.2-180.5°C, pureza CLAR 99% (tR 2.32 minutos en 10% de agua-acetonitrilo). 1H RMN (CDCI3): d 7.82 (1 H, dd, J= 8.1 , 1.1 Hz), 7.52 (1H, dd, J= 7.7, 1.1 Hz), 7.32 (1 H, d, J= 8.4 Hz), 7.25 (1 H, d, J-2.9 Hz (sobreposición con CHCI3)) 7.14 (1 H, t, J= 8.1 Hz), 6.99 (1 H, dd, J= 8.4, 2.2 Hz), 6.67 (1 H, s, N-H), 2.71 (3H, s), 2.58 (3H, s). LCMS: 335.01 (M-). FAB-EM (MH+, C15H13CIN203S): calculado 337.0413, encontrado 337.0420.

Síntesis de N-(2-metil-benzooxazol-5-i0-4-propil-bencensulfonamida, STX 843 (KRB0 015): A una solución de cloruro de 4n-propilbencensulfoniio (93 mg, 0.43 milimoles) en diclorometano (2 mL) se le añadió piridina (80 µ?, 1.0 milimoles) y la mezcla se agitó bajo N2 por 5 minutos, después de dicho tiempo se le añadió 5-amino-2-metilbenzoxazol (60 mg, 0.40 milimoles). La mezcla resultante se agitó por 1 hora a temperatura ambiente, luego se añadió solución saturada de NaHCÜ3 (8 mL) y la mezcla se extrajo en acetato de etilo (15 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó (Na2S04), se filtró y se evaporó para producir un residuo que se purificó utilizando cromatografía instantánea para obtener un aceite rosa claro (112 mg, 85%), mancha particular en Rf 0.53 (1 :1 hexano:acetato de etilo). Pureza CLAR 99+% (tR 2.38 minutos en 10% de agua-acetonitrilo) 1H RMN (CDCI3): d 7.64 (2H, dt, J= 8.1 , 1.8 Hz), 7.31 (2H, m), 7.18 (2H, d, J= 8.4 Hz), 7.06 (1H, dd, J= 8.6, 2.4 Hz), 2.59 (5H, m), 1.58 (2H, sexteto, J= 7.3 Hz), 0.89 (3H, t, J= 7.3 Hz). LC S: 329.15 (M-). FAB-EM (MH+, C17H18N203S): calculado 331.1116, encontrado 331.1118.

Síntesis de 2,5-d¡cloro-N-(2-metil-benzooxazol-5-íO-bencensulfonamida. STX 846 (KRB01016): A una solución de cloruro de 2,5-diclorobencensulfonilo (52 mg, 0.21 milimoles) en diclorometano (1.5 mL) se le añadió piridina (40 µ?, 0.5 milimoles) y la mezcla se agitó bajo N2 por 5 minutos, después de ese tiempo se añadió 5-amino-2-metilbenzoxazol (30 mg, 0.20 milimoles). La mezcla resultante se agitó por 1 hora a temperatura ambiente, luego se añadió solución saturada de NaHC03 (8 mL) y la mezcla se extrajo en acetato de etilo (15 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó (Na2S04), se filtró y se evaporó para producir un residuo que se purificó utilizando cromatografía instantánea para proporcionar un sólido rosa claro (45 mg, 63%), mancha particular en Rf 0.53 (1:1 hexano:acetato de etilo), pf 193.5-193.9°C, pureza CLAR 98% (tR 2.27 minutos en 10% de agua-acetonitrilo). H RMN (CDCI3): d 7.86 (1 H, d, J= 2.2 Hz), 7.39 (4H, m), 7.12 (1 H, dd, J= 8.4, 1.8 Hz), 2.58 (3H, s). LC S: 355.07 (M-). FAB-EM (MH+, C14H10CI2N2Q3S): calculado 356.9867, encontrado 356.9878. Todas las publicaciones mencionadas en la especificación anteriormente mencionada se incorporan en la presente invención como referencias. Diversas modificaciones y variaciones de los métodos descritos y del sistema de la invención serán evidentes a aquellos expertos en la técnica sin apartarse del alcance y espíritu de la invención. Aunque la invención se ha descrito en conexión con modalidades preferidas específicas, debe entenderse que la invención como se reclama no debe limitarse indebidamente a dichas modalidades específicas. De hecho, se pretenden diversas modificaciones de los modos descritos para llevar a cabo la invención las cuales son obvias a aquellos expertos en la química o campos relacionados que están dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones.

Referencias 1. Hammond, GH (1990): Molecular properties of corticosteroid binding globulin and sex-steroid binding proteins. Endocr. Rev. 11 , 65-79. 2. Gomez-Sanchez EP, Gomex-Sanchez CE (1997): First there was one, then two.. why not more 11 ß-Hydroxysteroid Dehydrogenases? Endocrinology vol. 138, 12. 3. Krozowski ZS, Funder JW (1983): Renal mineralocorticosterone receptors and hippocampal coríicosterone binding species have ¡dentical intrinsic steroid specificity. Proa Nati. Sci. USA 80: 6056-60 4. Ulick S, Levine LS, Gunczler P, Zanconato G, Ramírez LC, Rauh W, Rosler A, Bradlow HL, Mew MI (1979): A syndrome of apparent mineralocorticoid excess associated con defects in the periferal metabolism of cortisol. J. Clin. Endo. And Metab. 49: 757-64. 5. Edwards CRW, Stewart PM, Burt D, Brett L, Mclntyre MA, Sutanío WS, Kloet ER, Monder C (1998): Localisation of ? ?ß-HSD-tissue specific protector of the mineralocorticoid receptor. Lancet 2: 986-989. 6. Moore CCD, Melloh SH, Murai I, Siiteri PK, Miller WL (1993): Structure and function of the hepatic form of ??ß-HSD in the squirrel monkey, an animal model of glucocorticoid resistance. Endocrinology 133: 368-375. 7. Kotelevtsev YV, larnieson PM, Best R, Stewart F, Edwards CRW, Seckl JR, Mullins II (1996): Inactivation of ? ?ß-HSD type 1 by gene targeting in mice. Endocrinology Res. 22: 791-792. 8. Ricketts ML, Verhaeg J , Bujalska I, Howie AJ, Rainey WE, Stewart P (1998): Immunohistochemical localisation of type 1 ??ß-HSD in human tissues. J. Clin. Endoc. Metab. 83: 1325-35. 9. Stewart PM, Sheppard MC (1992): Novel aspects of hormone action: intracellular ligand supply and its control by a series of tissue specific enzymes. Molecular and Cellular Endocrinology 83: C 3-C 8. 10. Seckl JR, Chapman KE (1997): The 11p-HSD system, a determinant of glucocorticoids y mineralocorticoid action. Medical and physíologica! aspects. European J. Biochem. 249: 361-364. 11. Maser E (1998): ? ?ß-HSD responsible for carbonyl reduction of the tobacco-specific nitrosoamine in mouse lung microsomes. Cáncer Res. 58: 2996-3003. 12. Walker BR, Stewart PM, Shackleton C H L, Padfield PL, Edwards CRW (1993): Deficient inactivation of cortisol by 11p-HSD in essential hypertension. Clin. Endocr. 38: 221-227. 13. Daynes RA, Araneo BA (1998): Contrasting effects of glucocorticoides on the capacity of T-cells to produce the growth factors interleukin-2 and interleukin-4. Eur. J. Immunol. 9: 2319-2324. 14. Bradford MM (1976): A rapid y sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principie of protein-dye binding. Anal. Biochem. 72: 248-254. 15. Barf, T. et al., (2002), Arylsulfonamidothiazoles as a new class of potential antidiabetic drugs. Discovery of potent y selective inhibitors of theU -Hydroxysteroid Deshydrogenase Type 1. J. Med. Chem., 45, 3813-3815. 16. Stewart, P. M. y Masón, J.I., (1995), Cortisol to cortisone: Glucocorticoid to mineralocorticoid. Steroids, 60, 143-146. 17. Escher, G. et al., (1995), Furosemide ¡nhibrts 11ß- Hydroxysteroid Dehydrogenase in vitro and in vivo. Endocrinology, 136, 1759-1765. 18. Hult, M. et.al., (1998), Selective inhibition of human tipo 1 11 ß-hydroxysteroid dehydrogenase by synthetic steroids y xenobiotics. FEBS Letters, 44J., 25-28. 19. Diederich, S. et al., (2002), ln the search for specific inhibitors of human ß-hydroxysteroid-dehydrogenase ( ? ß-HSDs): chenodeoxycholic acid selectively inhibits ?ß-HSD-I . Eur. J. Endocrinol., 142, 200-207. 20. Takahashi; Okada; Yakugaku Zasshi; 73; 1953; 802, 804; Chem. Abstr.; 1954; 9364. 21. Hunt, Richard el. al. J Chem Soc C, 1966, 344, 84-185. 22. DeGraw, Joseph and Goodman, León; J. Med. Chem.; 7; 1964; 213. 23. Fríes, et. al.; Justus Liebigs Ann. Chem.; 454; 1927; 204.

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES 1.- Un compuesto que tiene la fórmula Fórmula I en donde uno de Ri y R2 es un grupo de la fórmula en donde R4 se selecciona a partir de H e hidrocarbilo, R5 es un grupo hidrocarbilo y L es un grupo enlazador opcional, o R1 y R2 juntos forman un anillo sustituido con el grupo en donde R3 es H o un sustituyente y en donde X se selecciona a partir de S, O, NR6 y C(R7)(R6), en donde Re se selecciona a partir de H y grupos hidrocarbilo, en donde cada uno de R7 y Ra se seleccionan independientemente a partir de H y grupos hidrocarbilo. 2 - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque tiene la fórmula II Fórmula II 3. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizado además porque L no está presente. 4. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, 2 ó 3, caracterizado además porque Ri y R2 juntos forman un anillo sustituido con el grupo 5.- El compuesto de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque R1 y R2 juntos forman un anillo carbocíclico. 6. - El compuesto de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque R] y R2 juntos forman un anillo de seis miembros. 7. - El compuesto de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque R y R2 juntos forman un anillo arilo. 8.- El compuesto de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque tiene la fórmula III. Fórmula III 9.- El compuesto de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque tiene la fórmula IV. Fórmula IV 10.- El compuesto de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque tiene la fórmula V. Fórmula V 11.- El compuesto de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque tiene la fórmula VI Fórmula VI 12.- El compuesto de conformidad con cualesquiera de reivindicaciones 1 a 10, caracterizado además porque tiene la fórmula VII Fórmula VII 13. - El compuesto de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque i¾ se selecciona a partir de H, hidrocarbilo, -S-hidrocarbilo, -S-H, halógeno y N(Rg)(Rio), en donde cada uno de Rg y ?½ se seleccionan independientemente a partir de H y grupos hidrocarbilo. 14. - El compuesto de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque R3 se selecciona a partir de H y grupos alquilo de C1-C10, tales como grupo alquilo de C1-C6, y grupo alquilo de C1-C3. 15. - El compuesto de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque R3 es -CH3. 16.- El compuesto de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado además porque tiene la fórmula VIII. Fórmula VIII 17.- El compuesto de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado además porque tiene la fórmula IX. Fórmula IX 18.- El compuesto de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado además porque tiene la fórmula X Fórmula X 19.- El compuesto de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado además porque tiene la fórmula XI Fórmula XI 20 - El compuesto de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 16 a 19, caracterizado además porque F¾ se selecciona a partir de O, hidrocarbilo, y N(F¾) en donde Rg se selecciona a partir de H y grupos hidrocarbilo. 21. - El compuesto de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque i¾ se selecciona a partir de O, grupos alquenilo de C1-C10, tales como grupo alquenilo de C-i-C3, y grupo alquenilo de C1-C3, NH y grupos N-alquilo de C1-C10, tales como grupo N-alquilo de C-i-Ce, y grupos N-alquilo de C1-C3. 22. - El compuesto de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque FU se selecciona a partir de H y grupos alquilo de C1-C10, tales como grupo alquilo de C1-C6, y grupo alquilo de C1-C3. 23. - El compuesto de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque FU es H. 24. - El compuesto de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 21 , caracterizado además porque FU es un grupo de la fórmula. 25. - El compuesto de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque F¾ es un anillo sustituido. 26. - El compuesto de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque F?s es un anillo carbocíclico. " 27.- El compuesto de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque R5 es un anillo de seis miembros. 28 - El compuesto de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque F¾ es un anillo de arilo. 29 - El compuesto de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque i¾ es un grupo que tiene la fórmula en donde cada uno de Rn, Ri2, R13, R14 y R15 se seleccionan independientemente a partir de H, halógeno, y grupos hidrocarbilo. 30. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 29, caracterizado además porque cada uno de Rn, 12, R13, R14 y R15 se selecciona independientemente a partir de grupos H, halógeno, alquilo, fenilo, O-alquilo, O-fenilo, nitrilo, haloalquilo, carboxialquilo, -CO2H, C02alquilo, y NH-acetilo. 31. - Una composición farmacéutica que comprende un compuesto como el que se reclama en cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 30 opcionafmente mezclado con un vehículo, diluyente, excipiente o adyuvante farmacéuticamente aceptable. 32. - El compuesto de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 30, para su uso en medicina. 33. - El uso de un compuesto como el que se reclama en cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 30, en la elaboración de un medicamento para su uso en la terapia de una condición o enfermedad asociada con ? ?ß-HSD. 34. - El uso que se reclama en la reivindicación 33, en donde la condición o enfermedad se selecciona a partir del grupo que consiste de trastornos metabólicos tales como diabetes y obesidad; trastornos cardiovasculares tal como hipertensión; glaucoma; trastornos inflamatorios tales como artritis o asma; trastornos inmunes; trastornos óseos tal como osteoporosis; cáncer; retardo de crecimiento intra-uterino; síndrome de exceso evidente de mineralocorticoide (AME); síndrome de ovario poliquístico (PCOS); hirsutismo; acné; oligo- o amenorrea; adenoma y carcinoma adrenal cortical; síndrome de Cushing; tumores pituitarios; carcinomas invasivos; cáncer de mama; y cáncer endometrial. 35. - El uso de un compuesto como el que se reclama en cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 30, en la elaboración de un medicamento para su uso en la terapia de una condición o enfermedad asociada con niveles adversos de la 11 ß-HSD. 36. - El uso de un compuesto como el que se reclama en cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 30, en la elaboración de un elemento farmacéutico para modular la actividad de la ??ß-HSD. 37. - El uso de un compuesto como el que se reclama en cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 30, en la elaboración de un elemento farmacéutico para inhibiting la actividad de la 11 ß-HSD. 38. - Un método que comprende (a) llevar a cabo un ensayo de la 11 ß-HSD con uno o más compuestos candidatos que tienen la fórmula como se define en cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 30; (b) determinar si uno o más de dichos compuestos candidatos es/son capaces de modular la actividad de la ? ?ß-HSD; y (c) seleccionar uno o más de dichos compuestos candidatos que es/son capaces de modular la actividad de la 1ß-HSD. 39.- Un método que comprende (a) llevar a cabo un ensayo de la 1 ß-HSD con uno o más compuestos candidatos que tienen la fórmula como se define en cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 30; (b) determinar si uno o más de dichos compuestos candidatos es/son capaces de inhibir la actividad de la 11 ß-HSD; y (c) seleccionar uno o más de dichos compuestos candidatos que es/son capaces de inhibir la actividad de la 11 ß-HSD. 40 - Un compuesto identificado por el método que se reclama en la reivindicación 38 o la reivindicación 39. 41.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 40, para su uso en medicina. 42.- Una composición farmacéutica que comprende el compuesto que se reclama en la reivindicación 40, opcionalmente mezclado con un vehículo, diluyente, excipiente o adyuvante farmacéuticamente aceptable. 43. - El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 40, en la elaboración de un medicamento para su uso en la terapia de una condición o enfermedad asociada con 11 ß-HSD. 44. - El uso que se reclama en la reivindicación 43, en donde la condición o enfermedad se selecciona a partir del grupo que consiste de trastornos metabólicos tales como diabetes y obesidad; trastornos cardiovasculares tal como hipertensión; glaucoma; trastornos inflamatorios tales como artritis o asma; trastornos inmunes; trastornos óseos tal como osteoporosis; cáncer; retardo de crecimiento intra-uterino; síndrome de exceso evidente de mineralocorticoide (AME); síndrome de ovario poliquístico (PCOS); hirsutismo; acné; oligo- o amenorrea; adenoma y carcinoma adrenal cortical; síndrome de Cushing; tumores pituitarios; carcinomas invasivos; cáncer de mama; y endometrial cáncer. 45. - El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 40, en la elaboración de un medicamento para su uso en la terapia de una condición o enfermedad asociada con niveles adversos de la 11 P-HSD. 46. - El uso que se reclama en las reivindicaciones 33 a 37, en donde ??ß-HSD es ??ß-HSD tipo 1. 47.- El método de conformidad con las reivindicaciones 38 a 39, caracterizado además porque 11 ß-HSD es 11 ß-HSD tipo 1. 48.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 40 y 41 , caracterizado además porque 11 ß-HSD es 11 ß-HSD tipo 1. 49. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 42, caracterizada además porque 11ß-HSD es 11 ß-HSD tipo 1. 50. - El uso que se reclama en las reivindicaciones 43 a 45, en donde 11 ß-HSD es ? ?ß-HSD tipo 1. 51.- El uso que se reclama en las reivindicaciones 33 a 37, en donde 11 ß-HSD es 1 ß-HSD tipo 2. 52.- El método de conformidad con las reivindicaciones 38 a 39, caracterizado además porque 1 ß-HSD es 1 ß-HSD tipo 2. 53 - El compuesto de conformidad con la reivindicación 40 y 4 , caracterizado además porque 1 ß-HSD es 11 ß-HSD tipo 2. 54. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 42, caracterizada además porque 11 ß-HSD es 1 ß-HSD tipo 2. 55. - El uso que se reclama en las reivindicaciones 43 a 45, en donde 11 ß-HSD es 11 ß-HSD tipo 2.