MXPA05003731A

MXPA05003731A - Seleccion y uso de bacterias de acido lactico para reducir la inflamacion ocasionada por el helicobacter.

Info

Publication number: MXPA05003731A
Application number: MXPA05003731A
Authority: MX
Inventors: Connolly Eamonn
Original assignee: Biogaia Ab
Priority date: 2002-10-07
Filing date: 2003-10-06
Publication date: 2005-06-17
Also published as: JP5439315B2; CN1694954B; US20060251636A1; US20090110670A1; US7960137B2; KR20110033943A; US20040067573A1; JP4804755B2; CN1694954A; ZA200502602B; PT1551952T; KR101064058B1; US7105336B2; EP1551952B1; ES2602679T3; US7678553B2; EP1551952A1; WO2004031368A1; AU2003269756B2; KR101107453B1

Abstract

Cepas de Lactobacillus las cuales han sido seleccionadas por su capacidad para reducir la inflamacion gastrointestinal, tales como las inflamaciones debidas al Helicobacter pylori y los productos derivados de estas cepas, incluyendo agentes para el tratamiento o profilaxis de la inflamacion asociada con el Helicobacter pylori para la administracion a humanos e incluyen medios acondicionados en los cuales las cepas seleccionadas han sido cultivadas y extractos que contienen proteina de los medios acondicionados.

Description

SELECCION Y USO DE BACTERIAS DE ACIDO LACTICO PARA REDUCIR LA INFLA ACIÓN OCASIONADA POR EL HELICOBACTER Campo de la Invención La presente invención se refiere al uso de un método para seleccionar cepas bacterianas anti-inflamatorias no patogénicas, y productos y métodos que utilizan dichas cepas para el tratamiento y profilaxis de la inflamación ocasionada por las bacterias gastrointestinales, tales como el Helicobacter pylori, otras especies de Helicobacter y otros patógenos gastrointestinales que ocasionan la inflamación. Antecedentes de la Invención El Helicobacter pylori es una bacteria de forma espiral que coloniza el estómago mediante, entre otras cosas, su capacidad para producir ureasa para neutralizar los ácidos del estómago. La ureasa convierte la urea, de la cual existe un suministro abundante en el estómago, en bicarbonato y amoníaco, los cuales son bases fuertes. Esto da como resultado una nube de bases neutralizantes de los ácidos alrededor de las células del H. pylori, protegiéndolas de los ácidos en el estómago. Las células de H pylori penetran y atraviesan la capa de mucosa gástrica y se adhieren a las células epiteliales en el recubrimiento del estómago. Por lo menos algunas de las cepas de la H pylori tienen la capacidad para producir toxinas. La infección con H. pylori activa el sistema inmunológico del huésped, el cual envía glóbulos blancos, células exterminadoras de y otros agentes que combaten la infección al área, pero el sistema inmunológico del cuerpo no es efectivo para invertir los efectos del H. pylori en el recubrimiento de la mucosa del estómago. Las células de H pylori permanecen en el recubrimiento y el sistema inmunológico aumenta su respuesta a las células, creando una inflamación, si no existen disponibles suficientes mecanismos antiinflamatorios. Durante la infección con H. pylori, las proteínas de señal de citocina intercelular generadas por las células dendríticas del epitelio del huésped, células exterminadoras naturales, las células T y otras células de defensa inmunológica, propagan la respuesta ¡nmunológica al patógeno invasor. Por consiguiente, se atraen neutrófilos huéspedes a y se infiltran al epitelio del estómago y persisten ahí a través de toda la infección. Esta célula genera, entre otros factores, productos reactivos de oxígeno, tales como radicales de superóxido, los cuales conducen a la oxidación en las células epiteliales y la muerte posterior de la célula epitelial, la formación de úlceras y finalmente la carcinogénesis. El H. pylori también incluye la filtración de nutrientes del huésped sobre el epitelio del estómago proporcionando una fuente de nutrientes para sostener las células de H. pylori y exacerbar la infección y sus consecuencias. El H. pylori puede evadir el sistema inmunológico humano y sobrevivir en el estómago a pesar de la respuesta inmunológica del huésped y los mecanismos de esta evasión son el asunto materia de la presente investigación . La terapia actual está basada en la erradicación del H. pylori a través de antibióticos e inhibidores de bomba de protones, en vez de intentar eliminar los efectos de la respuesta inmunológica excesiva del huésped a la infección, tal como poner a disposición suficientes mecanismos antiinflamatorios, lo cual es el propósito de la presente invención. Por lo tanto, la infección con H. pylori causa un riesgo creciente en la gastritis en desarrollo, úlceras gástricas y duodenales, incluyendo úlcera péptica, cáncer gástrico y linfoma del tejido linfoide asociado con la mucosa gástrica. Estos problemas no son ocasionados directamente por las células de H. pylori, sino de la inflamación del recubrimiento del estómago en respuesta al H. pylori. Se han utilizado varios tratamientos para aliviar los síntomas de las úlceras gástricas y duodenales, tales como tratamientos que reducen la producción de ácidos en el estómago combinados con antibióticos. También se han intentado vacunas nuevas contra el H. pylori, pero con un éxito limitado. También es sabido que otras especies del Helicobacter, así como otros patógenos gastrointestinales, pueden ocasionar la inflamación gastrointestinal. En un artículo de investigación reciente, [os investigadores que estudian las infecciones por H. pylori concluyeron que la infección por H. pylori, promueve la sialilación de la mucosa gástrica como parte de la respuesta inflamatoria crónica y que por lo tanto, muchas cepas virulentas pueden adherirse de una manera mejor al sitio inflamado (Science 18: páginas 573 a 578, 2002). La inflamación en el estómago y el aparato gastrointestinal es portada por las proteínas de señal intercelular conocidas como citocinas, las cuales son producidas mediante macrofagos y células dendríticas en el epitelio, en respuesta a un estímulo antigénico, tal como el que es producido por el H. pylori u otros patógenos. Al momento de hacer contacto entre el epitelio y el antígeno tal como el H. pylori o las endotoxinas producidas por el mismo, tales como la LPS, las células que presentan el antígeno (incluyendo las células dendríticas) en el epitelio propagan la señal para los macrofagos los cuales entonces responden a una respuesta del tipo denominado Th-1 en donde las citocinas pro-inflamatorias incluyendo TNFa, IL-1, IL-6, IL-12 son producidas por los macrofagos. Estas citocinas a la vez, estimulan las células exterminadoras naturales, las células T y otras células para producir el interferon ? (IFNY), el cual es el portador clave de la inflamación. El IFNy conduce a un aumento de la respuesta de inflamación y las reacciones descritas anteriormente que conducen a la citotoxicidad. Los macrófagos Cándidos también pueden responder a los antígenos con una respuesta de tipo Th-2. Esta respuesta es suprimida por el IFNy. Estas células de tipo Th-2 producen citocinas anti-inf lamatorias, tales como las citocinas IL-4, IL-5, IL-9, e IL-10. Es conocido que la IL-10 inhibe la producción de IFNY y por lo tanto, amortigua la respuesta inmunológica. El equilibrio entre las células de tipo Th-1 y Th-2 y su producción de citocina respectiva define el grado de la respuesta de inflamación a un antígeno determinado. Las células de tipo Th-2 también pueden estimular la producción de inmunoglobulinas por medio del sistema inmunológico. La actividad anti-inflamatoria en el aparato gastrointestinal, en donde existe un nivel reducido de TNFa, se correlaciona con las células epiteliales aumentadas (integridad de recubrimiento de la pared del intestino delgado) y por lo tanto, con una reducción en los efectos negativos ocasionados por los patógenos y toxinas gastrointestinales. Los resultados de una cantidad de estudios de investigación indican que el ADN puede ejercer una acción anti-inflamatoria en las células epiteliales intestinales o puede simular el sistema inmunológico. (presentación de Madsen et al. y Rachmilewitz et al, respectivamente en Digestive Disease Week, Mayo 19-22, 2002, The Moscone Center, San Francisco). Los ratones espontáneamente desarrollan colitis crónica, la cual no ocurre en animales libres de gérmenes. La colitis del ratón es similar a la enfermedad de Crohn humana, una enfermedad crónica inflamatoria seria del aparato gastrointestinal. La enfermedad de Crohn generalmente ocurre en los intestinos, pero puede ocurrir en cualquier parte del aparato gastrointestinal. Estas condiciones requieren la presencia de bacterias entéricas y son ambas formas de colitis dependientes de la IL-12, portada por las células Th1. Debido a las similitudes de las causas y síntomas, los modelos de ratón de colitis y otros modelos de ratón son utilizados para estudiar los componentes de la respuesta inflamatoria directamente, debido a que los mismos mecanismos son aplicables al hombre, aceptados para ser usados para desarrollar tratamientos para la enfermedad gastrointestinal humana. El Lactobacillus reuteri es uno de los habitantes que ocurren de manera natural en el aparato gastrointestinal de los animales y se encuentran rutinariamente en los intestinos de los animales sanos y a pesar del pH bajo, ocasionalmente también en el estómago humano. Es conocido que tienen actividad antibacteriana. Ver, por ejemplo, las Patentes Norteamericanas Nos. 5,439,678, 5,458,875, 5,534,253, 5,837,238, y 5,849,289. Cuando son cultivadas las células de L. reuteri bajo condiciones anaeróbicas en la presencia de glicerol, ellas producen una sustancia antimlcrobiana conocida como reuterina (ß-hidroxi-propionaldehído). El L. coryniformis es una especie menos conocida del Lactobacillus, la cual es un habitante común en la cavidad oral humana. También se ha descubierto en la tierra, el estiércol y materiales de plantas. Se ha descubierto en el ensilaje y como un desperdicio de la cerveza y ha presentado una buena producción de ácido láctico, así como una actividad antifúngica. El aislado MM7 del L. coryniformis (ATCC PTA-4660) aquí utilizado se descubrió en la leche materna humana. La actividad de regulación inmunológica también ha estado asociada con diferentes Lactobacillus. Aunque es conocida la posibilidad de una actividad antibacteriana efectiva mediante varios Lactobacillus, tampoco había sido conocido anteriormente, que existieran diferencias substanciales entre las cepas y su capacidad para reducir la inflamación gastrointestinal, ni que dichas cepas podrían ser seleccionadas. Por lo tanto, es un objeto de la presente invención, proporcionar cepas de Lactobacillus, las cuales han sido seleccionadas por su capacidad para reducir la inflamación gastrointestinal, tal como la inflamación ocasionada por el Helicobacter pylori. Es un objeto adicional de la presente invención proporcionar productos que contienen dichas cepas, incluyendo agentes para el tratamiento o profilaxis de la inflamación asociada con el Helicobacter pylori para la administración a los humanos, incluyendo medios acondicionados en los cuales se han cultivado dichas cepas, y extractos que contienen proteínas de los mismos. Se podrán apreciar más completamente otros objetos y ventajas de la presente invención a partir de la siguiente descripción y en las reivindicaciones adjuntas. Sumario de a Invención La presente invención comprende ciertas cepas de Lactobacillus las cuales han sido seleccionadas por su capacidad para reducir la inflamación gastrointestinal, tal como la inflamación ocasionada por el Helicobacter pylori y productos derivados de dichas cepas, incluyendo agentes para el tratamiento o profilaxis de la inflamación asociada con el Helicobacter pylori para la administración a humanos, e incluyen medios acondicionados en los cuales han sido cultivadas dichas cepas y extractos que contienen proteínas de los medios acondicionados. Otros objetos y características de la presente invención se podrán apreciar completamente a partir de la siguiente descripción y las reivindicaciones adjuntas. Breve Descripción de los Dibujos La figura 1 es una gráfica de barras que muestra el efecto de los medios acondicionados de Lactobacillus en la producción de TNFa mediante los macrofagos activados por LPS. Se probaron cuarenta y cinco cepas de Lactobacillus. La figura 2 es una gráfica de barras que muestra el cambio de dobleces en la expresión del macrófago TNFa en la presencia de los medios acondicionados provenientes de varias cepas de Lactobacillus y LPS comparados con los macrofagos con LPS solo. Descripción Detallada de la Invención La presente invención comprende cepas de Lactobacillus las cuales han sido seleccionadas por su capacidad para reducir la inflamación gastrointestinal, tal como la inflamación ocasionada por el Helicobacter pylori. Dichas cepas incluyen Lactobacillus coryniformis MM7, ATCC PTA-4660 y Lactobacillus reuteri MM2-3, ATCC PTA-4659. Los productos tales como alimentos, aditivos nutricionales e iones de fórmula y formulaciones farmacéuticas o aparatos médicos que contienen las células completas o componentes separados de estas cepas pueden ser formulados como es conocido en la técnica, y generalmente incluyen un soporte que se puede digerir como es conocido además de la cepa de Lactobacillus o sus componentes derivados. Las cepas anteriormente conocidas, ahora identificadas como que tienen la buena capacidad de reducción del TNFa, tales como las cepas de L. rhamnosus GG ATCC 53103, L. reuteri ATCC 55730 y otras, también pueden ser utilizadas en las formulaciones anteriores. Estos productos son agentes para el tratamiento o profilaxis de la inflamación asociada con el Helicobacter pylori para la administración a mamíferos. Los sistemas modelo que utilizan citocinas apropiadas son utilizados para determinar factores que reducen o aumentan la inflamación. En el ejemplo aquí proporcionado, un ensayo de macrófago de ratón, utilizando células de macrófagos RAW 264.7 (ATCC, Rockville, MD, ATCC, # TIB-71), es utilizado para seleccionar las cepas de bacterias, principalmente los Lactobacillus, por su efecto en la trayectoria inflamatoria. El IL-10 es utilizado en este ensayo como un control positivo, mostrando los tratamientos con IL-10 la inhibición de citocinas pro-inflamatorias, tales como TNFa (factor de necrosis de tumor a). Después del cultivo individual de las cepas de Lactobacillus para ser seleccionadas en medios de laboratorio, las células bacterianas vivas son removidas mediante filtración y el fluido sobrenadante (también denominado el "medio acondicionado" en la presente descripción) es probado en el ensayo de macrófagos. Los macrófagos son estimulados primero con el antígeno pro-inflamatorio, por ejemplo, LPS purificado (lipopolisacárido derivado de E. coli), ácido lipoteicoico derivado de S. aureus (LTA), o medio acondicionado libre de células de E. coli o Helicobacter, para producir las citocinas pro-inflamatorias que incluyen TNFa. El medio acondicionado de la cepa de Lactobacillus que contiene substancias inmuno-reguladoras putativas derivadas de las bacterias para ser seleccionadas, son co-incubadas con los macrófagos activados por el antígeno. La capacidad del medio acondicionado para regular la respuesta inmunológica de los macrófagos es monitoreada por el cambio en la producción de TNFa en las células. El perfil de TNFa del ensayo hace posible una selección de las cepas más efectivas para reducir la producción de TNFa por los macrófagos. Los experimentos de control con ajustes de pH en el sistema de ensayo eliminan la posibilidad de que un pH cambiado pudiera ocasionar el efecto observado. Sorprendentemente, aislados bacterianos aparentemente similares y cepas de Lactobacillus que vienen de fuentes muy similares a las humanas muestran capacidades ampliamente diferentes y ampliamente variables para influir en la producción de TNFa por los macrófagos en respuesta a un antígeno pro-inflamatorio. Estas cepas no pueden ser identificadas ni por las huellas genéticas, ya que pueden ser similares genéticamente hasta en un 98%, pero todavía muestran efectos muy diferentes en las células ¡nmunológicas. Las cepas seleccionadas de este modo y encontradas como que tienen un fuerte efecto inhibitorio contra la producción de citocina pro-inflamatoria estimulada por los macrófagos, son especialmente efectivas en el tratamiento de la inflamación del aparato gastrointestinal del hombre, incluyendo la inflamación ocasionada por el H. pylori en el estómago. Las características de la presente invención serán entendidas de una manera más clara haciendo referencia a los ejemplos siguientes, los cuales no deberán ser interpretados como limitantes de la presente invención. Ejemplo 1. Selección de Cepas Anti-inflamatorias. Se cultivo el Lactobacillus spp. (incluyendo, por ejemplo, L. rhamnosus GG ATCC 53103, L. johnsonii ATCC 33200, L. reuteri MM2-3 ATCC PTA-4659, L. coryniformis, MM7, ATCC PTA-4660) y E. coli Nissle en un medio de Man, Rogosa, Sharpe (MRS) y Luria-Bertani (LB) (Difco, Sparks, MD), respectivamente. Los cultivos que pasaron toda la noche de los Lactobacillus fueron diluidos a un ??ß?? de 1.0 (representando aproximadamente 109 células/mi) y diluidos adicionalmente 1:10 y cultivados por 4, 8 y 24 horas adicionales. El Helicobacter pylori, cepa de (Sydney SS1) y el Helicobacter hepaticus 3B1 (ATCC 51449) fueron cultivados durante 48 horas en caldo de Brúcela (Difco), suplementado con suero fetal bovino al 10% (FBS). Los cultivos fueron diluidos 1:10 y cultivados por otras 24 y 48 horas. El medio acondicionado libre de células bacterianas fue recolectado mediante centrifugación a 8500 rpm durante 10 minutos a una temperatura de 4°C. El medio acondicionado fue separado del gránulo de células, y entonces filtrado a través de una unidad de filtro de un poro de 0.22 pm (Millipore, Bedford, Mass.). Las líneas celulares de monocitos/macrófago de ratón RAW 264.7 (ATCC TIB-71) y RAW 264.7 gamma NO(-) (ATCC CRL-2278), fueron utilizadas como las células reportadoras para estudiar la trayectoria de la respuesta inflamatoria. Las células RAW 264.7 fueron cultivadas, ya sea en un Medio Eagle Modificado por Dulbecco (especie silvestre), o un Medio RPMI 1640 (gamma NO-) (Gibco- Invitrogen, Carlsbad, CA) suplementado con FBS al 10% y el 2% de antibiótico (5000 unidades/ml de Penicilina y 5 mg/ml de Estreptomicina, Sigma), en C02 al 5% a una temperatura de 37°C, hasta que hubo un confluente del 80% al 90%. Aproximadamente 5 x 104 células fueron sembradas en charolas de cultivo celular de 96 depósitos y se permitió que se adhirieran durante 2 horas previas a la activación del lipopolisacárido (LPS) y la adición del medio acondicionado. Las células Cándidas RAW 264.7 fueron expuestas a LPS purificado del serotipo de E.coli 0127:B8 (Sigma). El medio de activación se hizo agregando 2 ng de LPS a 20 µ? del medio acondicionado por depósito. Los macrófagos fueron, ya sea previamente incubados o co- incubados con el medio acondicionado de Lactobadllus libre de células. Se utilizó el mll_-10 (R&D Systems, Minneapolis, Min.) recombinante como un control positivo. La viabilidad de las células fue evaluada mediante la exclusión por azul Trypan (I nvitrogen). La presencia de TNFa en el sobrenadante de cultivo celular medida con un inmunoensayo de emparedado de enzimas, Inmunoensayo TNFa de Ratón Quantikine M® (R & D Systems). El efecto del medio acondicionado con Lactobacilíus en la producción de TNFa mediante los macrófagos activados con LPS- se muestra en la figura 1, la cual muestra que de las 45 cepas probadas, varias cepas diferentes tienen la capacidad de disminuir la producción de TNFa mediante los macrófagos activados. La figura 2 muestra el cambio de doblez de la expresión de TNFa con diferentes cepas de Lactobacilíus comparadas con el LPS solo. Los resultados de este estudio son utilizados entonces para seleccionar las cepas más eficientes. Las cepas mencionadas en las figuras pero no mencionadas específicamente en el texto, son varias cepas de Lactobacilíus que fueron probados, principalmente el L. reuteri. En este ejemplo, la cepa del L. coryniformis M7, ATCC PTA-4660, fue seleccionado utilizando el método anterior, para adición a un yogurt estándar. Las cepas de L. coryniformis fueron cultivadas y liofilizadas, utilizando métodos estándar para el cultivo de Lactobacillus, en la industria lechera. Este cultivo entonces fue agregado a la leche previamente fermentada, utilizando cultivos tradicionales de yogurt, en un nivel de 10E + 7 CFU/gramo de yogurt y el yogurt fue utilizado por los humanos como una prevención de la gastritis ocasionada por el H. pylori. Ejemplo 2. Uso del Medio Acondicionado Utilizando el método anterior, fue seleccionado el medio acondicionado de una cepa de disminución efectiva de TNFa, en este experimento el medio de la cepa L. reuteri ATCC PTA-4659. Este medio fue producido en una escala más grande cultivando la cepa en un medio de Man, Rogosa, Sharpe (MRS) (Difco, Sparks, MD). Los cultivos nocturnos de los Lactobacillus fueron diluidos a un OD6oo de 1.0 (representando aproximadamente 109 células/ml) y diluidos adicionalmente en 1:10 y cultivados durante 24 horas adicionales. El medio acondicionado libre de células bacterianas fue recolectado mediante centrifugación a 8500 rpm durante 10 minutos a una temperatura de 4°C. El medio acondicionado fue separado del pellet celular y luego filtrado a través de una unidad de filtro con un poro de 0.22 pm (Millipore, Bedford, Mass.). El medio acondicionado entonces fue Iiofilizado y formulado, utilizando métodos estándar para formar una tableta. Esta tableta fue utilizada como un fármaco por los humanos para tratar la úlcera ocasionada por el H. pilory. Ejemplo 3. Elaboración de Huella de ADN de las Cepas de Lactobacillus reuteri El método de las Patentes Norteamericanas Nos. 5,523,217 y 5,691,136 otorgadas a Lupski et al. fue utilizado para hacer la elaboración de huella genómica de las cepas de L. reuteri. Este método utiliza la amplificación del ADN bacteriano agregando un par de cebadores dirigidos hacia fuera a la muestra bacteriana. Después de la amplificación, los productos de extensión de la hibridación resultantes fueron separados por tamaños y la cepa de la bacteria fue caracterizada midiendo el patrón de los productos de extensión dimensionados. Se obtuvieron imágenes de gel por duplicado para 82 cepas de L. reuteri mediante Bacterial BarCodes, Inc. (Houston, TX) utilizando el cebador Uprime E (un cebador). Los conjuntos de datos duplicados fueron comparables. Hubo un total de 11 agrupaciones, las cuales fueron diferentes entre ellas y ocho capas exteriores las cuales parecieron ser únicas. Las cepas que se encontraron como efectivas para reducir el TNF-a (ver figuras 1 y 2) no se agrupan juntas utilizando este método, mostrando que no es suficiente utilizar la elaboración de huella del ADN de esta manera para encontrar varias cepas con una capacidad para reducir el TNFa.

Ejemplo 4. Caracterización de la Proteína Producida por las Cepas Efectivas de Lactobacillus Se trataron diferentes medios acondicionados de Lactobacillus efectivo, incluyendo la cepa L. reuteri MM2-3, con varios compuestos de desnaturalización para determinar la naturaleza de las inmunomodulinas putativas derivadas de la bacteria. De este modo, los medios acondicionados fueron sometidos a congelación-deshelado repetitivo, tratamiento térmico, digestión con enzimas digestivas de ADN, proteasas y proteasas inactivadas. La inmunomodulina putativa fue determinada de esta manera como que eran de una o más naturalezas de proteínas o péptidos. Con el objeto de determinar el tamaño de la inmunomodulina de la proteína putativa, el medio acondicionado fue fraccionado mediante filtración y los filtrados fueron probados por su efectividad. De este modo, se encontró que el componente activo de los medios acondicionados de las cepas efectivas de Lactobacillus eran de un tamaño de aproximadamente 5 kDa o menor. Aunque la presente invención ha sido descrita con referencia a modalidades específicas, se podrá apreciar que son posibles numerosas variaciones, modificaciones y modalidades y por consiguiente, todas dichas variaciones, modificaciones y modalidades deberán ser consideradas como que se encuentran dentro del espíritu y alcance de la presente invención.

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un cultivo biológicamente puro de Lactobaclllus coryniformls cepa MM7, ATCC PTA-4660. 2. Un cultivo biológicamente puro de la cepa de
Lactobacillus reuteri M 2-3, ATCC PTA-4659.
3. Un cultivo biológicamente puro de una cepa de Lactobacillus seleccionada por su capacidad para reducir la inflamación gastrointestinal asociada con la infección por Helicobacter pylorl en el aparato gastrointestinal de los mamíferos utilizando un ensayo de macrofagos de ratón para la actividad de TNFa.
4. Un H. pylorl asociado con un componente de reducción de inflamación derivado de un cultivo biológicamente puro de una cepa de Lactobacillus, dicho componente obtenido de un sobrenadante de un cultivo libre de células después del cultivo de la cepa y teniendo la capacidad de reducir la cantidad de TNFa.
5. El H. pylori asociado con el componente reductor de inflamación tal y como se describe en la reivindicación 4, caracterizado porque el componente es una proteína o parte de la misma.
6. El componente tal y como se describe en la reivindicación 5, caracterizado porque la proteína, o parte de la misma es caracterizada por ser más pequeña de 5kDa.
7. Un sobrenadante de cultivo libre de células aislado de un cultivo biológicamente puro de la cepa de Lactobacillus reuteri MM2-3, ATCC PTA-4659. 8. Un sobrenadante de un cultivo libre de células aislado de un cultivo biológicamente puro de la cepa de
Lactobacillus coryniformis MM7, ATCC PTA-4660.
9. Una composición alimenticia que comprende un soporte digerible y un componente reductor de la inflamación asociada con el H. pylori derivado de una cepa de Lactobacillus seleccionada del grupo consistente de la cepa de Lactobacillus coryniformis M7, ATCC PTA-4660 y la cepa de Lactobacillus reuteri MM2-3, ATCC PTA-4659.
10. La composición alimenticia tal y como se describe en la reivindicación 9, caracterizada porque el componente comprende células de un cultivo biológicamente puro de la cepa de Lactobacillus.
11. Una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéutico y un componente reductor de inflamación asociada con el H. pylori derivado de una cepa de Lactobacillus seleccionada del grupo consistente de la cepa de Lactobacillus coryniformis MM7, ATCC PTA-4660 y la cepa de Lactobacillus reuteri MM2-3, ATCC PTA-4659.
12. La composición farmacéutica tal y como se describe en la reivindicación 11, caracterizada porque el componente comprende células de un cultivo biológicamente puro de la cepa de Lactobacillus.
13. Un suplemento nutriclonal que comprende un soporte que se puede digerir y un componente reductor de inflamación asociada con H. pylori derivado de una cepa de Lactobacillus seleccionada del grupo consistente de la cepa de Lactobacillus coryniformis MM7, ATCC PTA-4660 y la cepa de Lactobacillus reuteri MM2-3, ATCC PTA-4659.
14. El suplemento nutricional tal y como se describe en la reivindicación 13, caracterizado porque el componente comprende células de un cultivo biológicamente puro de la cepa de Lactobacillus.
15. Un método para preparar una composición alimenticia, el cual comprende: a. seleccionar una cepa de Lactobacillus tal y como se describe en la reivindicación 3; b. obtener un componente anti-inflamatorio de dicha cepa; c. agregar dicho componente a un soporte que se puede digerir para producir un alimento.
16. Un método para preparar una composición farmacéutica, el cual comprende: a. seleccionar una cepa de Lactobacillus tal y como se describe en la reivindicación 3; b. obtener un componente anti-inflamatorio de dicha cepa; c. agregar dicho componente al vehículo farmacéutico para producir una composición farmacéutica.
17. Un método para preparar un suplemento nutricional, el cual comprende: a. seleccionar una cepa de Lactobacillus tal y como se describe en la reivindicación 3; b. obtener un componente anti-inflamatorio de dicha cepa; c. agregar el componente a un soporte que se puede digerir para producir un suplemento nutricional.
18. Un agente para el tratamiento o profilaxis de la inflamación asociada con el Helicobacter pylori que comprende un componente anti-inflamatorio de una cepa de Lactobacillus tal y como se describe en las reivindicaciones 1, 2 ó 3.
19. Un método para el tratamiento o profilaxis de la inflamación asociada con Helicobacter pylori que comprende la selección de por lo menos una cepa de Lactobacillus, caracterizada dicha al menos una cepa porque tiene la capacidad de reducir la inflamación gastrointestinal y administrar células de dicha al menos una cepa a un humano.
20. El método tal y como se describe en la reivindicación 19, caracterizado porque las células son administradas oralmente.
21. El método tal y como se describe en la reivindicación 19, caracterizado porque las células son administradas rectalmente.
22. El método tal y como se describe en la reivindicación 19, caracterizado porque la cepa produce una proteína en un medio acondicionado, la cual está asociada con la reducción de la actividad de la citocina inflamatoria.
23. El método tal y como se describe en la reivindicación 22, caracterizado porque la proteína está caracterizada por ser menor de 5kDa.