MXPA04012917A - Liposomas que contienen compuestos biologicamente activos. - Google Patents

Abstract

La actual invencion proporciona las composiciones de liposomas que contienen un compuesto biologicamente activo y metodos de fabricacion de las mismas. Los metodos de la invencion ofrecen la capacidad de fabricar las composiciones de liposoma que contienen NSAIDs y otros compuestos biologicamente activos, y la capacidad de lograr las eficacias muy altas de encapsulacion en liposomas estables y uniformes. Tambien se proporcionan las composiciones de liposomas que contienen agentes antivirus y agentes antihongos. Las composiciones de liposoma de la invencion son utiles para el tratamiento de una variedad de condiciones, incluyendo, por ejemplo, dolor e inflamacion, las infecciones bacterianas y las infecciones virales.

Description

LIPOSOMAS QUE CONTIENEN COMPUESTOS CON ACTIVIDAD BIOLÓGICA CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con composiciones de liposomas y con métodos para su fabricación y uso.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los liposomas ofrecen un modo útil para administrar compuestos con actividad biológica. Las drogas antiinflamatorias no esteroidales (KTSAID) se han usado generalmente para tratar el dolor y la inflamación, tal como aquél causado por enfermedades de las articulaciones, por administración oral. El tratamiento de la inflamación comúnmente comprende la administración oral de medicaciones esteroidales o no esteroidales, y se caracteriza por enrojecimiento, hinchazón, calor, dolor y pérdida de función. Algunos compuestos antiinflamatorios no esteroidales están disponibles como drogas orales, cremas tópicas, ungüentos y geles, pero los compuestos antiinflamatorios no esteroidales más efectivos no están disponibles como composiciones potentes de administración tópica. Además, las NSAID de administración oral pueden provocar efectos colaterales, tales como malestar estomacal, y aún falla cardiaca congestiva, falla renal y toxicidad para el recubrimiento del tracto gastrointestinal . Los métodos existentes para fabricar y preparar composiciones de liposomas no permiten que el usuario prepare una composición que contenga liposomas que encapsulen NSAID, que pueda administrarse por vía tópica con un efecto farmacéutico máximo.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN La presente invención provee composiciones de liposomas que contienen un compuesto con actividad biológica, y métodos para fabricarlas. Los liposomas son preferiblemente liposomas multilamelares apropiados para administración tópica. En realizaciones preferidas, las composiciones de liposomas utilizan un conservante soluble en agua y un antioxidante soluble en lípidos, y presentan una viscosidad elevada, aún cuando haya pocos o ningún agente potenciador de la viscosidad presente. Los métodos de fabricación ofrecen la capacidad de obtener eficiencias de encapsulación muy elevadas, tales como eficiencias de encapsulación de 50% o 60% o 70% u 80% o 90% o aún 95%. Los presentes métodos también ofrecen la capacidad de fabricar cantidades a gran escala de composiciones de liposomas, al nivel de 10 litros o más .

Los liposomas de la presente invención contienen un compuesto con actividad biológica y un conservante soluble en agua. En realizaciones preferidas, las composiciones de liposomas también contienen un antioxidante soluble en lípidos, que es más preferiblemente vitamina E. En otras realizaciones, al menos 75% de los liposomas tienen entre aproximadamente 1 µ?? y aproximadamente 10 µ?? de diámetro, preferiblemente entre aproximadamente 3 im y aproximadamente 5 um, y hasta 1% puede ser tan grande como 20 um de diámetro. En aún otras realizaciones, las presentes composiciones contienen menos de aproximadamente 1% p/p de un agente potenciador de la viscosidad, y más preferiblemente no contienen ningún agente potenciador de la viscosidad. Aún así, las composiciones de liposomas preferiblemente tienen una viscosidad de al menos 20000 centipoise a 58°C, y más preferiblemente al menos aproximadamente 30000 centipoise a 58 °C. En una realización preferida, el compuesto con actividad biológica es un compuesto antiinflamatorio no esteroidal . En una realización más preferida, el compuesto antiinflamatorio no esteroidal es naproxeno, cetoprofeno, celecoxib, o indometacina . El fluconazol y el aciclovir también son compuestos con actividad biológica preferidos para usar en las composiciones de liposomas . Sin embargo, en otras realizaciones, puede introducirse cualquier compuesto activo en el liposoma.

Un "liposoma" designa una vesícula esférica rodeada por una bicapa lipídica ordenada, que contiene una fase acuosa. La bicapa lipídica de los liposomas comúnmente está compuesta por elementos distintos de fosfolípidos . Por ejemplo, la bicapa lipídica también puede contener colesterol y otros lípidos. Los liposomas pueden contener alguna porción de partículas sólidas, pero se distinguen de los microcristales descriptos en la Patente de los EEUU N° 5091188, de Haynes, que comprenden una partícula cristalina sólida recubierta con una capa lipídica que no es una bicapa ordenada, con las cabezas y las colas de los fosfolípidos alineadas, sino que es un recubrimiento alterado. En la presente solicitud, los liposomas tienen menos de 25% de volumen sólido en la vesícula, es decir, cualquier tipo de formación cristalina. La bicapa lipídica de los liposomas es una bicapa ordenada, lo que significa que las estructuras moleculares de la "cabeza" y la "cola" de los lípidos están alineadas una al lado de la otra .

Un compuesto "con actividad farmacológica" es un compuesto que tiene un efecto mensurable cuando se lo administra al cuerpo de un ser humano o un animal, tal como una reducción en el dolor, la inflamación, propiedades antivirales o antifúngicas , o cualquier otra propiedad biológica mensurable. Un compuesto "con actividad biológica" es un compuesto que tiene algún efecto mensurable en un ensayo in vitro o in vivo, diseñado para predecir el efecto del compuesto si se lo administra al cuerpo de un ser humano o un animal . Aquellos entrenados en la técnica se percatarán de que existen numerosos ensayos para evaluar una actividad o una propiedad particular en una amplia variedad de compuestos . Los ensayos preferidos son aquellos que pueden evaluarse de una forma con significación científica y estadística, en términos de predecir la actividad que se desea evaluar, preferiblemente en ensayos que producen un resultado dentro de tres desviaciones estándar. Entonces, los compuestos con actividad biológica pueden presentar actividad f rmacológica in vivo. Los compuestos con actividad biológica apropiados para usar en la presente invención incluyen, sin limitaciones, agentes dermatológicos, agentes antibacterianos, agentes antivirales, agentes antifúngicos , anticonvulsivos , antihipertensivos , agentes anticáncer, antibióticos, agentes antipseboria, agentes antipsoriasis, inmunomoduladores , hormonas, proteínas, péptidos y NSAID. Un "conservante" designa un ingrediente agregado a la composición de liposomas, que evita que los microbios crezcan y se multipliquen sustancialmente en la formulación. El crecimiento y la multiplicación de los microbios es sustancial cuando altera la viscosidad, la estabilidad u otra propiedad importante de la composición. Se permite un cierto crecimiento de microbios, siempre que no afecte negativamente las propiedades físicas, químicas o terapéuticas de la composición, tornándola inutilizable . Los microbios pueden ser bacterias, levaduras o mohos. "Soluble en agua" representa que el ingrediente presenta una solubilidad en agua mayor que 100 g/ml (o 0,01%) en agua. En otras realizaciones, el ingrediente puede tener una solubilidad en agua mayor que 1 mg/ml (0,1%) .

Los liposomas de la presente invención pueden ser unilamelares (que tienen una bicapa lipídica) , o más preferiblemente son multilamelares . Los liposomas que son "multilamelares" tienen múltiples capas o membranas. Este tipo de liposoma tiene capas de bicapas lipídicas con un fluido acuoso alojado entre las bicapas lipídicas. Los liposomas multilamelares tienen al menos dos capas de lípidos . Los liposomas de la presente invención tienen tamaños ampliamente variables, pero preferiblemente presentan un tamaño uniforme en cada lote preparado. Los liposomas pueden tener hasta 20 µp?, 25 µ?? o aún 30 µp?. Sin embargo, en realizaciones preferidas, aproximadamente 95% de los liposomas tendrán entre aproximadamente 1 µt? y aproximadamente 10 µp? de diámetro. En una realización, la mayoría de los liposomas en una composición fabricada de acuerdo con los presentes métodos tendrán un tamaño de entre aproximadamente 3 µ?? y aproximadamente 5 um. Los diámetros reales de los liposomas serán una función de la curva de enfriamiento empleada, y de la longitud y el vigor de la agitación manual o automática, cuando se usen los procesos en la fabricación de los liposomas. En aún otras realizaciones, los liposomas pueden ser liposomas multilamelares, donde un único liposoma grande encapsula uno o más liposomas más pequeños .

La presente invención también provee métodos para fabricar los liposomas descriptos previamente. Los métodos son apropiados para fabricar grandes cantidades de composiciones de liposomas, tales como 2000 litros, 5000 litros, 10000 litros, 20000 litros, y aún hasta 50000 litros. Los métodos comprenden proporcionar una solución acuosa y proporcionar una composición de fosfolípidos que contiene un compuesto con actividad biológica, a una temperatura al menos 2CC mayor que la temperatura de la solución acuosa. Las composiciones acuosas y de fosfolípidos se combinan para fabricar liposomas que encapsulan el compuesto con actividad biológica. Cuando se combinan las composiciones, la composición de fosfolípidos está a una temperatura al menos 2°C mayor que la temperatura de la composición acuosa. En varias realizaciones, el compuesto con actividad biológica está encapsulado en liposomas, con una eficiencia de encapsulación de al menos 20%, o al menos 50%, o al menos 70%, o al menos 90%, o aún al menos 95%. En algunas realizaciones, cuando se combinan las dos composiciones, la temperatura de la composición de fosfolípidos es aproximadamente 6°C o aproximadamente 10 °C mayor que la temperatura de la composición acuosa. En las realizaciones preferidas, la temperatura de la composición de fosfolípidos es de aproximadamente 58 °C o menor, y la temperatura de la composición acuosa es 8-10°C menor cuando se combinan las dos composiciones, por ejemplo, 60°C y 52°C o 50°C, o 60°C y 50°C, o 59°C y 51°C o 50°C, o 58°C y 50°C o 49°C o 48°C. Todas las temperaturas presentan una variación de + 2°C. El término "aproximadamente" representa + 5%. La composición de fosfolípidos preferiblemente nunca se somete a temperaturas mayores que aproximadamente 60°C-65°C, para asegurar que no se degrade ninguno de sus ingredientes, lo que permitirá la formación de liposomas óptimos.

En una realización más preferida, la temperatura de la composición acuosa des de aproximadamente 50°C + 2°C, y la temperatura de la composición de fosfolípidos es de aproximadamente 58 °C + 2°C. La mezcla puede enfriarse durante un período de al menos dos horas, y preferiblemente se enfría a una velocidad de aproximadamen e 6°C por hora. En una realización preferida, el compuesto con actividad biológica es un compuesto antiinflamatorio no esteroidal, y más preferiblemente es naproxeno, cetoprofeno, indometacina o celecoxib. En otras realizaciones preferidas, el compuesto con actividad biológica es aciclovir o fluconazol . En una realización más preferida, se enfría la mezcla a aproximadamente 28 °C, a una velocidad de aproximadamente 6°C por hora. Los compuestos antiinflamatorios no esteroidales incluyen, sin limitaciones celecoxib, rofecoxib, naproxeno, cetoprofeno, diflunisal, fenoprofeno, indometacina, ácido meclofenamínico , fenilbutazona, piroxicam, salsalato, sulindac o tolectina, ácido acetilsalicílico, ibuprofeno, y salicilato de colina. Sin embargo, en otras realizaciones, el compuesto con actividad biológica puede ser un compuesto distinto de una NSAID, tal como un compuesto antiviral o antifúngico .

La "eficiencia de encapsulacion" hace referencia a la cantidad de compuesto activo encapsulado en los liposomas al emplear el método, en comparación con la cantidad de compuesto activo disponible en el método de encapsulacion. La eficiencia de encapsulacion se expresa convenientemente empleando la ecuación-. Ec = (droga encapsulada total x 100) /droga total, donde Ec es la eficiencia de encapsulacion. La eficiencia de encapsulacion puede ser afectada por la selección de los tipos de lípidos apropiados para la aplicació particular, la forma y el tamaño del recipiente donde se llevan a cabo los procedimientos, la cantidad y el tamaño de las masas sólidas de contacto, y el grado de vacío durante la evaporación y la hidratación con agitación, cuando se la usa en los procesos de fabricación de liposomas de la técnica previa, y la temperatura utilizada durante el procedimiento de fabricación. Una ventaja de los presentes métodos es que se reduce la cantidad de variables que afectan potencialmente la eficiencia de encapsulación al eliminar determinados requerimientos, tales como la presencia de masas de contacto o la evaporación al vacio.

En otro aspecto, la presente invención provee métodos para reducir la inflamación o el dolor en un mamífero, que comprenden la aplicación tópica al área donde se desea disminuir la inflamación o el dolor de una de las composiciones descriptas previamente. En una realización, se proporciona el compuesto con actividad biológica a una concentración en los liposomas de al menos aproximadamente 0,5% p/p. Una administración "tópica" denota que la composición se aplica sobre la piel exterior del sujeto tratado. La piel puede estar quebrada o no-quebrada, y la aplicación tópica incluye la aplicación a una lesión sobre la piel. Tópica no hace referencia a "aplicación ocular", que es la aplicación sobre la córnea del ojo. La "aplicación interna" incluye la aplicación en cualquier cavidad corporal, tal como la boca, la garganta, la oreja, la nariz, los pulmones, los bronquios, la vagina o el recto. La aplicación interna también hace referencia a las composiciones que se inhalan (por ejemplo, para tratar los pulmones o los bronquios) , o a la aplicación en un órgano durante un procedimiento de transplante.

En otro aspecto, la presente invención provee composiciones farmacéuticas que contienen una de las composiciones descriptas previamente. La invención también provee métodos para fabricar un medicamento o una composición farmacéutica, que comprende proporcionar una composición de la presente invención.

En otro aspecto, la presente invención provee métodos para tratar infecciones virales, fúngicas y bacterianas. Los métodos comprenden la aplicación tópica, externa o interna de una composición de liposomas de la presente invención sobre el área a tratar. La infección viral puede ser una infección de herpes, y las composiciones pueden aplicarse sobre lesiones causadas por el virus del herpes. En otras realizaciones, la infección puede ser una infección fúngica, que puede tratarse aplicando una composición sobre el área infectada. En aún otras realizaciones, las infecciones bacterianas de la piel, los ojos o las cavidades corporales pueden tratarse aplicando en forma tópica o externa una composición de la presente invención.

En otro aspecto, la presente invención provee métodos para tratar una infección viral ocular. Los métodos incluyen aplicar en forma ocular una composición de liposomas de la presente invención, que contiene un agente antiviral . En realizaciones preferidas, la infección viral es herpes y el agente antiviral es aciclovir.

En otro aspecto, la presente invención provee métodos para tratar una infección fúngica. Los métodos comprenden aplicar en forma tópica sobre el área infectada una composición de la presente invención, que contiene un agente antifúngico. En realizaciones preferidas, el agente antifúngico es fluconazol o terbinafina.

El resumen de la invención proporcionado previamente no debe considerarse como limitante, y otras características y ventajas de la invención serán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada de las realizaciones preferidas, así como a partir de las reivindicaciones.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención provee composiciones de liposomas que contienen compuestos con actividad biológica, tales como NSAID, agentes antivirales y antífúngicos . Los inventores han descubierto que, inesperadamente, las NSAID, tales como el naproxeno, el cetoprofeno, la indometacina y el celecoxib, y otros compuestos con actividad biológica, tales como los agentes antifúngicos y antivirales, pueden encapsularse en liposomas para obtener una composición útil para tratar el dolor y la inflamación, preferiblemente en un músculo o una articulación esqueletaria . Las composiciones también son útiles para tratar infecciones virales y fúngicas . Sin embargo, aquellos entrenados en la técnica comprenderán que las composiciones de la presente invención pueden usarse para tratar una variedad de trastornos, usando varios compuestos con actividad biológica. Por. ejemplo, cuando el compuesto con actividad biológica es una NSAID, las composiciones son útiles para tratar muchos tipos de dolor, tales como los dolores musculares o los calambres, los dolores de espalda, los dolores de dientes, la fiebre elevada, los dolores de articulaciones, o cualquier dolor asociado con el sistema músculo-esqueletario . Las composiciones se administran preferiblemente con la composición de liposomas en sí como vehículo. Sin embargo, en varias realizaciones, pueden administrarse los liposomas en un gel vehículo o en otro vehículo apropiado. Los liposomas de la presente invención son preferiblemente multilamelares , que son apropiados para aplicaciones sobre la piel, con el fin de administrar por vía tópica o transdérmica un compuesto con actividad biológica. Los liposomas de la presente invención permiten la liberación lenta y transdérmica de un compuesto con actividad biológica. Los liposomas de la presente invención también pueden prepararse como liposomas unilamelares en aquellas realizaciones donde se desea la inyección como modo de administración. Pueden prepararse liposomas unilamelares filtrando los liposomas o utilizando un molinillo u otros métodos de alta cizalla, para reducir el tamaño de los liposomas o tamizar los liposomas unilamelares.

Se ha descubierto que el uso de las composiciones y los métodos de la presente invención permite administrar compuestos con actividad biológica en el sitio localizado donde se aplica la composición. Se ha descubierto que la concentración del compuesto con actividad biológica en el sitio tratado es aproximadamente la misma cuando se usan los presentes métodos que cuando se usa la administración oral del compuesto. Sin embargo, la concentración del compuesto con actividad biológica en forma sistémica es aproximadamente 1/10 de aquella obtenida cuando se administra el compuesto por vía oral. Entonces, la presente invención permite administrar niveles terapéuticos de compuestos con actividad biológica, sin los efectos sístémicos indeseables que ocurren con la administración oral.

Las Patentes de los EEUU N° 4761288 y 4897269, ambas de Mezei, se incorporan por completo en la presente documentación a modo de referencia, incluyendo todas las tablas y los dibujos. Los liposomas de la presente invención no contienen conservantes solubles en lípidos, a diferencia de los liposomas de la técnica previa. En vez de esto, los liposomas de la presente invención utilizan un conservante soluble en agua que puede funcionar como agente antimicrobiano, que es preferiblemente una sal de benzetonio, tal como cloruro de benzetonio. Sin embargo, también podrán usarse otros conservantes solubles en agua en la invención, tales como ácido benzoico y sales de bencilconio, tales como cloruro de bencilconio. Inesperadamente, se ha descubierto que la elección del conservante es importante para obtener liposomas estables, ya que los conservantes solubles en lípidos pueden debilitar y desestabilizar la estructura de los liposomas debido al crecimiento de microbios, lo que puede conducir a una composición inestable con baja viscosidad. Pueden usarse otros conservantes solubles en agua, y se los selecciona ventajosamente para que sean activos al pH de la composición.

En una realización preferida, las presentes composiciones también contienen vitamina E como antioxidante soluble en lípidos. Los antioxidantes actúan como capturadores de radicales libres, facilitando la obtención de una estabilidad máxima para los liposomas. Se incluye metilcelulosa, u otro agente potenciador de la viscosidad, en las composiciones de liposomas que se aplicarán sobre la piel, con el fin de obtener una viscosidad suficiente y evitar una composición fluida. En una realización más preferida, las presentes composiciones incluyen vitamina E como antioxidante, e incluyen menos de 2% p/p o menos de 1,5% o menos de 1,0%, o menos de 0,5%, o menos de 0,25% de un agente potenciador de la viscosidad. Más preferiblemente, las composiciones no incluyen metilcelulosa u otro agente potenciador de la viscosidad. Esto es especialmente deseable para obtener una penetración transdérmica máxima del compuesto activo. En una realización, al menos 50% de la vitamina E está presente en las bicapas lipídicas de los liposomas. En otras realizaciones, al menos 70% u 80% o 90% o 95% de la vitamina E está presente en las capas lipídicas de los liposomas .

Un "agente potenciador de la viscosidad" designa un agente que se agrega a la composición para incrementar la viscosidad. Un agente potenciador de la viscosidad incrementará la viscosidad de la composición en al menos 10000 centipoise a 25 °C. Los agentes potenciadores de la viscosidad incluyen, sin limitaciones, metil celulosa, ácido algínico, gelatina, acacia (goma arábiga) , carbómero y alcohol cetoestearilico . Los fcsfolípidos no se consideran agentes potenciadores de la viscosidad según esta definición. El agente potenciador de la viscosidad incrementará la viscosidad en al menos 10000 centipoise, en comparación con la viscosidad en ausencia del agente, y, en otras realizaciones, podrá incrementar la viscosidad en 20000 ó 30000 centipoise (hasta tanto como 40000 ó 50000 centipoise, en comparación con la viscosidad de la composición en ausencia del agente) . Por consiguiente, en varias realizaciones, las composiciones de liposomas de la presente invención contienen menos de 2% p/p o menos de 1%, menos de 0,5%, o aún 0% de agentes potenciadores de la viscosidad. Por ejemplo, en varias realizaciones, las composiciones contienen menos que estas cantidades de sales orgánicas o inorgánicas, tales como sales de ácido clorhídrico , ácido nítrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido carbónico, ácido bromhídrico o ácido clorhídrico. Preferiblemente, las composiciones también contienen menos de 2% p/p o menos de 1% o aún 0% de bromuro de potasio, cloruro de potasio, bicarbonato de potasio, bicarbonato de dipotasio, sulfato de potasio, ioduro de potasio, nitrato de potasio, bromuro de litio, cloruro de litio, ioduro de litio, nitrato de litio, sulfato de litio, bromuro de amonio, cloruro de amonio, carbonato de amonio, bicarbonato de amonio, dihidrógeno fosfato de amonio, hidrógeno fosfato de diamonio de amonio, ioduro de amonio, nitrato de amonio, sulfato de amonio, bromuro de sodio, carbonato de sodio, cloruro de sodio, bicarbonato de sodio, dihidrógeno fosfato de sodio, hidrógeno fosfato de disodio, nitrato de sodio, fosfato de sodio y sulfato de sodio. Otras sales que están preferiblemente presentes en las composiciones a razón de menos de 2% p/p o menos de 1% o aún 0% incluyen cloruro de alcanolamina, sulfato, fosfato, sales de ácido benzoico, ácido acético, ácido salicílico, ácido oxálico, ácido ftálico, ácido glucónico, ácido 1-naftalensulfónico, ácido 2-naftalensulfónico, ácido tartárico, ácido maleico, ácido malónico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido propiónico, ácido ascórbico, ácido mandélico, ácido málico, ácido cítrico, cloruro de trietanolamonio, dihidrógeno fosfato de trietanolamonio, sulfato de trietanolamonio, benzoato de sodio, benzoato de potasio, benzoato de amonio, acetato de sodio, acetato de potasio, acetato de amonio, salicilato de sodio, salicilato de potasio, salicilato de amonio, oxalato de sodio, oxalato de potasio, oxalato de amonio, ftalato de sodio, ftalato de potasio, ftalato de amonio, gluconato de sodio, gluconato de potasio, gluconato de amonio, 1-naftalensulfonato de amonio, 1-naftalensulfonato de potasio, 2-naftalensulfonato de amonio, 2 -naftalensulfonato de sodio, tartrato de potasio, maleato de sodio, maleato de potasio, malonato de sodio, succinato de sodio, fumarato de sodio, propionato de sodio, propionato de trietanolamonio, ascorbato de sodio, ascorbato de trietanolamonio, ascorbato de potasio, mandelato de sodio, malato de sodio, citrato de sodio, citrato de potasio y citrato de trietanolamonio.

Inesperadamente, se ha descubierto que una composición de liposomas de la presente invención resulta en una composición de liposomas estable con viscosidad elevada. En varias realizaciones, las composiciones tienen una viscosidad de al menos 10000 centipoise, o al menos 20000 centipoise, o al menos 30000 centipoise, o al menos 40000 centipoise, o al menos 50000 centipoise, o al menos 60000 centipoise, o al menos 70000 centipoise, todo a 58°C, sin la presencia de metilcelulosa u otros agentes potenciadores de la viscosidad. Como no hay metilcelulosa u otros agentes potenciadores de la viscosidad en las formulaciones, se incrementa sustancialmente la penetración transdérmica . En una realización, puede agregarse alcohol oleílico para mejorar la penetración transdérmica del compuesto con actividad biológica que está en la composición, pero que está presente fuera de los liposomas. Sin desear apoyar una teoría en particular, se cree que la combinación del conservante soluble en agua y al antioxidante soluble en lípidos provee estabilidad a los liposomas. Esto permite que los liposomas sean estables y también presenten una viscosidad elevada. La viscosidad elevada es posible aún cuando la composición de liposomas contiene pocos o ningún agente potenciador de la viscosidad. Se cree que los agentes potenciadores .de la viscosidad alteran el movimiento del compuesto activo a través de la piel . Las presentes composiciones ofrecen la propiedad superior de un máximo grado de penetración de la piel al administrar el compuesto, al tiempo que retienen una viscosidad suficiente. Las presentes composiciones son "estables", lo que significa que pueden almacenarse por al menos 6 meses, 1 año o 2 años sin que cambien las propiedades químicas o físicas de la composición. Esto significa que ocurre un crecimiento bacteriano en una extensión tal que afecte la potencia, la estabilidad o la seguridad de las composiciones. Los ensayos biológicos de las composiciones estables producirán el mismo resultado dentro de 10% o 5% del valor determinado originalmente. En varia realizaciones, 50-60% de los liposomas tienen entre aproximadamente tienen entre aproximadamente 3 um y aproximadamente 5 um de diámetro, donde aproximadamente 20-25% de los liposomas restantes tienen un diámetro de menos de 3 um, y el 20-25% de liposomas restantes tienen un diámetro mayor que aproximadamente 5 pm. El término "aproximadamente" denota más o menos 5%. En otras realizaciones, al menos 95% de los liposomas tienen menos de 10 um de diámetro.

La presente invención provee métodos para fabricar las composiciones de liposomas de la presente invención.

Inesperadamente, los presentes inventores han descubierto que pueden lograrse eficiencias de encapsulacion muy elevadas con los presentes métodos . Los presente métodos comprenden procedimientos únicos que resultan en una eficiencia de encapsulacion superior, y que permiten la producción a gran escala de cantidades comerciales de composiciones de liposomas . Los métodos comprenden el uso de una combinación de temperaturas. Una "combinación de temperaturas" hace referencia al hecho de que las fases acuosa y lipídica de los materiales iniciales están a temperaturas diferentes al combinarse, donde la fase lipídica típicamente está a una temperatura mayor que la fase acuosa. En realizaciones preferidas, la fase lipídica se mantiene a una temperatura al menos 2°C, y más preferiblemente aproximadamente 6°C, y más preferiblemente 7°, 8o, 9° o 10°C mayor que la temperatura de la fase acuosa al combinar ambas fases . En una realización más preferida, la fase lipídica se mantiene a una temperatura de aproximadamente 58 °C + 2°C, y la fase acuosa se mantiene a aproximadamente 50 DC + 2°C. En otras realizaciones, la fase lipídica se mantiene a una temperatura de aproximadamente 60 °C + 2°C, y la fase acuosa se mantiene a aproximadamente 52 °C + 2°C; o puede mantenerse la fase lipídica a cualquier temperatura de aproximadamente 59° C, 57°C, 56°C, 55°C, 54°C, 53 °C, o 52 ± 2°C, y puede mantenerse la fase acuosa a cualquier temperatura seleccionada entre 58°C, 57°C, 56°C, 55°C, 54°C, 53°C, 52°C, 51°C, S0°C, 48°C 47°C, 46°C, O 45°C, todas ± 2°C, siempre y cuando se satisfagan los criterios mencionados . Las temperaturas reales dependerán de las formulaciones específicas usadas. Preferiblemente, pueden mantenerse y combinarse distintas formulaciones lipídicas con la acuosa, dependiendo de la composición precisa del lípido utilizado. Si la temperatura es demasiado elevada (por ejemplo, mayor que aproximadamente 65 °C) , los ingredientes lipidíeos pueden desnaturalizarse o degradarse de otro modo. Por consiguiente, será más difícil formar el liposoma, las composiciones resultantes (de haberlas) podrán ser inestables. Por consiguiente, pueden ser deseables distintas temperaturas, dependiendo de la composición lipídica usada.

El método comprende combinar rápidamente las dos fases empleando una hidratación con agitación y un golpe de temperatura. Esto se realiza preferiblemente usando recipientes equipados con una estructura en T reguladora en línea, y usando una bomba dispersante para bombear las dos fases combinadas . Cuando se combinan la fase acuosa y la fase lipídica, se forman los liposomas . La formación de los liposomas preferiblemente ocurre casi instantáneamente, por ejemplo, en 10 segundos o 15 segundos o 20 segundos o 30 segundos, dependiendo del volumen de material usado. También puede hacerse pasar la mezcla a través de una malla para eliminar agrupaciones de liposomas, mejorando la hidratación y la formación subsiguiente de liposomas. Después de hidratar exhaustivamente la fase lipídica, la composición entra en la fase de enfriamiento. El proceso de enfriamiento es preferiblemente un proceso lento, con una velocidad de enfriamiento máxima que es preferiblemente de aproximadamen e 6°C por hora. En otras realizaciones, el enfriamiento puede realizarse a una velocidad de 4-8°C por hora, preferiblemente aproximadamente 6°C por hora, pero también puede dejase que la mezcla repose y se enfríe durante un período de días. En una realización preferida, el proceso está completo cuando se alcanza una temperatura de 28 °C. En varias realizaciones, puede ser deseable alterar la curva de enfriamiento, por ejemplo, enfriando la composición más rápidamente o más lentamente, dependiendo del compuesto activo específico empleado.

La presente invención provee métodos para tratar el dolor y la inflamación, que comprenden aplicar las composiciones sobre la piel, donde hay dolor o inflamación presente o en desarrollo. Se ha descubierto que las composiciones son altamente efectivas para reducir la inflamación y calmar el dolor. Por ejemplo, el dolor en las articulaciones es una de las afecciones dolorosas menores más comunes, que afecta millones de personas. Se ha descubierto que las presentes composiciones que contienen NSAID reducen dramáticamente el dolor y la inflamación articular cuando se aplican sobre la piel en la articulación. En realizaciones particularmente preferidas, la NSAID es cetoprofeno o naproxeno . Las composiciones presentan la ventaja de permitir que la persona tratada reciba NSAID, sin los riesgos asociados con la administración oral .

Se ha demostrado que las NSAID tienen efectos de inhibición sobre la síntesis de prostaglandina y leucotrieno, presentan actividad antibradiquinina, y también presentan una acción estabilizadora de las membranas liosomales . Como varios otros compuestos tipo NSAID, el cetoprofeno no ha podido ser encapsulado exitosamente en liposomas . Al usar los métodos descriptos en la presente documen ación, los inventores han sido sorprendentemente capaces de producir composiciones de liposomas encapsulando naproxeno, cetoprofeno, indometacina y celecoxib, útiles para tratar el dolor y la inflamación. El naproxeno es un miembro del grupo de drogas NSAID semejantes al ácido arilacético, cuyo nombre químico es ácido (S) -6-metoxi-alfa-metil-2 naftilen acético. El nombre químico del cetoprofeno es ácido 2- (3-benzoilfenil) propióníco. La composición de liposomas de cetoprofeno producida empleando los presentes métodos es útil para tratar diversos trastornos que provocan dolor e inflamación, tales como artritis reumatoide, osteoartritis , espondodilitis anquilosante, artritis juvenil, tendinitis, bursitis y gota aguda .

Los inhibidores de COX-2 bloquean la actividad de la enzima ciclooxigenasa 2. Esta clase de drogas incluye el celecoxib y el ?-ofecoxib, y presenta una ventaja distintiva sobre las NSAID más antiguas, ya que actúa inhibiendo selectivamente la COX-2, la enzima que participa en las vías del dolor y la inflamación, sin inhibir COX-1, que es la enzima que participa en la protección del estómago. La presente invención provee liposomas que contienen, por ejemplo, los inhibidores de COX-2 celecoxib, rofecoxib y valdecoxib. Estos liposomas ofrecen una ventaja respecto de las composiciones de COX-2 más antiguas, ya que pueden aplicarse en forma tópica sobre el área local tratada, eliminándose de este modo los efectos perjudiciales de la administración oral de inhibidores de COX-2. Por consiguiente, la presente invención ofrece las ventajas claras de estas nuevas drogas, pero elimina las preocupaciones de seguridad relacionadas con la administración. Al utilizar la presente invención, es posible tomar una NSAID y administrarla de una forma novedosa y mucho más segura que como habría sido posible con anterioridad, ya que la presente invención se aplica en forma tópica. Este modo de administración evita el sistema gastrointestinal y localiza el efecto de la droga en el sitio de la lesión y el tratamiento. Esta es una ventaja clara de la presente invención, ya que se ha asociado la administración oral de inhibidores de COX-2 con la irritación del tracto gastrointestinal, falla cardiaca, falla renal y meningitis.

También pueden usarse otros compuestos con actividad biológica en la presente invención. Por e emplo, puede aplicarse aciclovir, fluconazol o terbinafina a la presente invención para tratar infecciones virales e infecciones fúngicas. Por consiguiente, la presente invención provee métodos para tratar las lesiones causadas por una infección de herpes, tales como las lesiones causadas por el herpes I, el hei'pes II o las irritaciones virales. La presente invención puede aplicarse para tratar una infección de herpes sobre la piel, donde se aplica una composición de la invención, que contiene un agente antiviral, sobre las lesiones. La invención también puede aplicarse para tratar una infección viral en los ojos, donde se. aplica la composición sobre la córnea del ojo. De forma similar, puede aplicarse la presente invención para tratar una infección fúngica, al aplicar una composición de la invención, que contiene un agente antifúngico (por ejemplo, fluconazol o terbinafina) , sobre el área infectada.

Aunque se describen realizaciones específicas de NSAID y composiciones de liposomas antifúngicas en la presente documentación, la presente invención puede aplicarse a cualquier compuesto con actividad biológica de interés . Los compuestos con actividad biológica son preferiblemente solubles en lípidos , de manera de poder agregar la composición lipídica antes de formar los liposomas; aunque pueden usarse compuestos solubles en agua, o compuestos solubles en lípidos y en medios acuosos, en la presente documentación. Otros compuestos útiles que pueden aplicarse a la presente invención incluyen las piretrinas, los piretroides, los carbamatos, los compuestos organofosforados solubles en agua, las benzoil ureas, las formamidinas , las triazinas, las avermectínas , las milbemicinas u otros ectoparasiticidas convencionales, y derivados, análogos y mezclas de éstos. La cihalotrina, la cipermetrína, la flumetrina, la alfametrina, la deltametrina y la permetrina son piretroides particularmente preferidos. También son útiles los carbamatos, tales como el carbarilo y el promacilo. Una formamidina efectiva es el amitraz, y una triazina efectiva es la criomazina. El diazinón, el pirimfos metilo y el pirimfos etilo son compuestos organofosforados insolubles en agua especialmente efectivos . También pueden administrarse efectivamente endoparasiticidas con la presente invención, incluyendo, por ejemplo, tiazoles y otros antihelmínticos convencionales, derivados, análogos y mezclas de éstos. Los tiazoles efectivos incluyen levamisol, dexamisol y tetramisol.

En algunas realizaciones, las composiciones de liposomas de la presente invención contienen más de un compuesto con actividad biológica. No hay límites teóricos sobre la cantidad de compuestos que pueden incorporarse. Por ejemplo, pueden encapsularse dos o más ingredientes en la misma vesícula, o, si los compuestos activos son incompatibles, pueden encapsularse los compuestos por separado, y luego pueden combinarse las composiciones de liposomas para obtener una composición con dos o más indicaciones, o que sirva para tratar una única indicación con múltiples compuestos activos. Como alternativa, puede encapsularse un ingrediente activo en la vesícula, y puede dispersarse el otro en una forma no encapsulada en la fase acuosa circundante.

En realizaciones preferidas, el lípido usado en la presente invención es fosfolipon 90H, que se obtiene y se purifica a partir de lecitina de soja, y tiene el nombre químico 1 , 2-dia-cil-5N-glicero-3-fosfatidil colina. Contiene un mínimo de 90% de fosfatidil colina y está completamente hidrogenado. Sin embargo, aquellos entrenados en la técnica comprenderán que pueden usarse otros lípidos en la presente invención. Por ejemplo, la fosf tidilcolina puede presentar una pureza baja, o puede contener otros lípidos o materiales vehículo, tales como, por ejemplo, propilenglicol/etanol , triglicéridos con cadenas medianas, aceite/etanol , ácido fosfatídico, colesterol y fosfatidilinositol . El fosfolípido puede ser cualquier fosfolípido natural o sintético, por ejemplo, fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina, fosfatidilinositol , fosf tidilglicerol , ácido fosfatídico, lisofosfolípidos , fosfolípidos de huevo o soja, o una combinación de éstos. El fosfolípido puede ser salado o desalado, hidrogenado o parcialmente hidrogenado, natural, sintético o semisintético . Los ejemplos de fosfolípidos disponibles comercialmente incluyen, sin limitaciones, los fosfolípidos de huevo P123 (Pfanstiehl, Waukegen, IL) , Lipoid E80 (Lipoid, Ludwigshafen, Alemania) , los fosfolípidos hidrogenados de soja Fosfolipon 80HS, aOG®, 90?T y 10 OH® (Nattermann, Munich, Alemania) , y la fosfatidil colina de soja con 99% de pureza (Avanti Polar Lipids, Alabaster, AL) .

Puede usarse alcohol deshidratado y propilenglicol como cosolventes de la fase lipídica, y puede incluirse acetato de vitamina E como antioxidante. En varias realizaciones, se usan otros lípidos o sustancias semejantes a lípidos en la invención, tales como ceramidas , lecitinas, fosfatidil etanolaminas , fosfatidil serinas, cardiolipinas , trilinoleinas y compuestos semejantes. También pueden usarse compuestos distintos de fosfolípidos en la presente invención. Por ejemplo, los materiales distintos de fosfolípidos que pueden ser útiles incluyen los ásteres de polioxietilen ácidos grasos formadores de vesículas lipídicas, los esteres de polioxietilen ácidos grasos, las dietanolaminas , las acil amidas de cadena larga, las acil aminoácido amidas de cadena larga , las acil amidas de cadena larga, los oleatos de polioxietilen sorbitan, los monoestearatos de polioxietilen glicerol, los monoestearatos de glicerol, y mezclas, análogos y derivados de éstos. Las vesículas también pueden incluir un esteroide y un agente productor de carga. Los esteroides preferidos incluyen colesterol, hidrocortisona y análogos, derivados y mezclas de éstos . Los materiales productores de cargas negativas preferidos son el ácido oleico, el dicetil fosfato, el ácido palmítico, el sulfato de cetilo, el ácido retinoico, el ácido fosfatídico, la fosfatidil serina y mezclas de éstos. Con el objeto de proporcionar una carga neta positiva a las vesículas cuando se lo desee, podrán usarse aminas de cadena larga, por ejemplo, estearil aminas u oleil aminas, compuestos de piridinio de cadena larga, por ejemplo, cloruro de cetil piridinio, compuestos de amonio cuaternario o mezclas de éstos. Un material productor de carga positiva preferido es el bromuro de hexadecil trimetilamonio, un desinfectante potente. El uso de este desinfectante como material productor de carga positiva en las vesículas proporciona una ventaja secundaria cuando se deterioran las vesículas, ya que actúan como vehículos germicidas de liberación sostenida. Sin embargo, puede usarse cualquier tipo de vesícula lipídica que pueda transportar cantidades suficientes de la fase acuosa.

Como alternativa, los conservantes mencionados en la presente documentación también pueden actuar como desinfectantes, pueden servir como único compuesto con actividad biológica en una formulación de liposoma. En dichas realizaciones, puede incluirse el desinfectante (por ejemplo, una sal de benzetonio, tal como cloruro de benzetonio) a razón de entre aproximadamente 0,01% y aproximadamente 1%, más preferiblemente aproximadamente 0,1-0,5%, más preferiblemente aproximadamente 0,2%, en una formulación desinfectante lipídica que permanecerá sobre la superficie donde se aplique (por ejemplo, la piel) para proporcionar una efectividad prolongada.

Ejemplo 1 - Ejemplo de formulación A Esta sección provee un ejemplo de los materiales iniciales para fabricar una composición de liposomas de la presente invención que contiene cetoprofeno. La composición de liposomas de cetoprofeno contiene los siguientes ingredientes, con los porcentajes p/p indicados. FOSFOLIPOt 90H 10,00 Alcohol, deshidratado, USP 5,00 o menos Propilenglicol, USP 5,00 Acetato de vitamina E 1,00 Cloruro de benzetonio 0,02 Cetoprofeno 1,00 Agua purificada 76, 98 Ejemplo 2 - Ejemplo de método de fabricación A Esta sección provee un ejemplo de cómo fabricar una composición de liposomas de la presente invención que contiene cetoprofeno.

Fase acuosa. El proceso se pone en práctica preferiblemente usando dos cámaras de hidratación con agitación encamisadas de acero inoxidables. En la cámara de mayor tamaño, se combinó lentamente agua purificada y cloruro de benzetonio para evitar la formación de espuma o burbujas superficiales. Se aplicó calor para obtener 50 °C + 2°C, la temperatura deseada de la fase acuosa. Se cubrió la cámara para evitar la evaporación del agua, y colocó un puerto y una válvula inferior para regular el flujo de material hacia el exterior del recipiente.

Fase lipídica. Se utilizó un segundo recipiente de mezcla encamisado de acero inoxidable muy cercano al primero. En esta segunda cámara, primero se combinaron lentamente alcohol deshidratado y propilenglicol para evitar la formación de espuma o burbujas superficiales. Se inició un mezclador superior y se aplicó calor para obtener 58 + 2°C, con una temperatura deseada de 58 °C. Cuando la solución hubo alcanzado la temperatura deseada, se agregó cetoprofeno y se lo disolvió por completo. Luego se agregó FOSFOLIPON" 90H y acetato de vitamina E, y se los combinó con la fase lipídica hasta que se hubieron disuelto/fundido. Se usó una tapa en la cámara para evitar la evaporación de alcohol durante el procedimiento .

Hidratación de la fase lipídica. Se abrieron las válvulas en los puertos inferiores de la cámara y se reguló el flujo desde ambos recipientes. La fase acuosa y la fase oleosa fluyeron y se encontraron en una estructura en T reguladora en línea, y se usó una bomba dispersante para combinar las fases. Se hizo circular la mezcla a través de una pantalla de malla 60 para optimizar la hidratación de la fase lipídica. Luego se dirigió la mezcla hacia la parte superior de la cámara, y se hizo circular el proceso completo a través de la bomba, nuevamente hacia la cámara, por 10 minutos.

Fase de enfriamiento. Después de la circulación, se dejó enfriar la camisa de la cámara con una mezcla continua, hasta que la temperatura del producto fue de 28 °C, para completar el proceso. La combinación de materiales es preferiblemente suficientemente rápida para lograr una mezcla exhaustiva, sin provocar la formación de espuma superficial o burbujas. El proceso de enfriamiento es preferiblemente lento, con un enfriamiento más preferible de aproximadamente 6°C por hora.

Ejemplo 3 - Uso de ejemplos de formulaciones para tratamiento Este ejemplo presenta historias de casos reales del uso de varias composiciones de liposomas de la presente invención para el tratamiento de varios problemas. Todos los pacientes se trataron a sí mismos con una composición de liposomas de la presente invención, de acuerdo con los métodos descriptos en la presente documentación.

Caso 1. El paciente fue un hombre de 48 años de edad que sufría gota aguda en el dedo gordo del pie izquierdo, con episodios agudos durante los 25 años anteriores . El paciente había recibido tratamientos para el dolor con tabletas de indometacina (por 5 días) durante este período. Las pildoras eran cápsulas de liberación sostenida de 75 mg, administradas dos veces por día. Usando las tabletas de indometacina, el paciente informó que el dolor se redujo de 5 a 0 (en una escala de 1-5, donde 5 es el valor más elevado y 0 indica la ausencia de dolor) por 3-5 días.

El paciente se trató con una ' composición de liposomas de la presente invención que contenía indometacina (1%) , como una formulación de 1 gramo aplicada sobre el dedo dos veces por día. El paciente informó que el dolor se redujo de 5 a 0 en 3 días .

Caso 2. El paciente fue un hombre de 30 años que había sufrido episodios de gota aguda en el dedo gordo del pie derecho durante los 3 años anteriores. Durante este período, el paciente había sido tratado con tabletas de indometacina (cápsulas de liberación sostenida de 75 mg, dos veces por día) . El paciente se trató con una formulación de liposomas de la presente invención que contenía 1% de indometacina. El paciente usó 1 gramo de formulación de liposomas en el dedo gordo, dos veces por día durante 3 días. El paciente informó que el dolor se redujo de 5 a 0.

Caso 3. El paciente fue una mujer de 49 años que había sufrido episodios de dolor en ambas muñecas por varios años . El paciente no había usado previamente ningún tratamiento con drogas para el dolor, con la excepción de neutricéuticos (por ejemplo, prímula) . El paciente usó una formulación de liposomas de la presente invención que contenía 1% de naproxeno . Se aplicó 1 gramo sobre cada muñeca en forma diaria, según resultara necesario, comúnmente una vez por día. El dolor se redujo de 5 a 0 en 1-2 horas.

Caso 4. El paciente fue un hombre de 48 años con dolor ocasional en los codos, los músculos y el esqueleto, que podía atribuirse a una lesión sufrida durante la práctica de deporte. El paciente se trató con 1 gramo de una formulación de liposomas de la presente invención que contenía 1% de naproxeno, dos veces por día por 7 días. El paciente informó que su dolor se había aliviado.

Caso 5. El paciente fue un hombre de 48 años que sufría una infección recurrente de la piel en la cara, respecto de lo cual un médico había diagnosticado que se trataba de una infección de levaduras . El paciente había usado cremas antifúngicas comerciales y tabletas SPO ANOX (itraconazol) . La infección se aliviaba en forma ocasional, pero eventualmente retornaba. El paciente se trató con una formulación de liposomas de la invención que contenía 1% de fluconazol, usando 0,5 gramos una vez por día por 14 días. El paciente informó que la infección se había aliviado y no había retornado después de 90 días .

Caso 6. El paciente fue una mujer de 48 años con una úlcera en los labios, de la que se cree que había sido causada por un virus de herpes simplex. El paciente no había recibido tratamiento para la úlcera y había tolerado la úlcera hasta que ésta hubo desaparecido en forma natural, lo que ocurre normalmente 8-9 días después de su aparición. El paciente se trató con una formulación de liposomas de la presente invención que contenía 1% de aciclovir, usando 0,5 gramos de formulación dos veces por día por 3 días . El paciente informó que la úlcera había desaparecido en 3 días .

Caso 7. El paciente fue una mujer con dolor en el lado derecho de la cadera, que había sufrido este dolor por menos de 2 meses . El paciente se trató a sí mismo con una formulación de liposomas de la presente invención que contenía 1,5% de naproxeno, aplicando 1,5 gramos de formulación sobre el área afectada por el dolor, tres veces por día por 7 días . El paciente informó que el nivel de dolor se redujo de 4 ó 5 a 0 al final del período de 7 días.

Caso 8. El paciente fue un hombre de 16 años con dolor en las piernas, las pantorrillas y los muslos, que pudo atribuirse a lesiones músculo-esqueletarias provocadas por la práctica de deporte. El paciente se trató a sí mismo con una formulación de liposomas de la presente invención que contenía 1% de naproxeno, aplicando 1 gramo de formulación dos veces por día, según fuera necesario, sobre el área lesionada. El paciente informó que el dolor inicial era de 4 ó 5 , y se había reducido a 0 después de 1 día de tratamiento.

Caso 9. El paciente fue un hombre de 41 años que se había quebrado la muñeca izquierda, cuyo yeso había sido retirado inmediatamente antes del tratamiento. El paciente se trató a sí mismo con una formulación de liposomas de la presente invención que contenía 1% de naproxeno, usando un total de 2 gramos de formulación por día en la parte superior e inferior de su muñeca por 14 días. El paciente no realizó algunas aplicaciones durante los 14 días, e informó que, cuando no usaba la formulación, el dolor era de 4 ó 5. Cuando aplicaba la formulación, el paciente informó que el dolor era de 2 en una escala de 5.

Caso 10. El paciente fue un hombre de 53 años al que un médico le había diagnosticado gota aguda en el dedo gordo del pie derecho, la rodilla izquierda y el codo izquierdo durante los 3 años anteriores. El paciente había recibido un tratamiento con tabletas de indometacina 2-3 veces por día. El paciente se trató a sí mismo con una formulación de liposomas de la presente invención que contenía 1% de indometacina, como una terapia adjunta a las tabletas de indometacina. Este paciente informó lo siguiente, en una escala de 1-10, donde 10 representa el dolor más agudo.

El paciente informó que el dolor del dedo del pie comienza en 10 y se reduce a 4 con la administración de la tableta de indometacina . Cuando se agrega la aplicación tópica, de la formulación de liposomas, el dolor se reduce adicionalmente hasta 2-3.

El paciente informó que el dolor de rodilla comienza en 8 y se reduce a 2 con la administración de la tableta de indometacina. El dolor se eleva posteriormente hasta 7-8 después de 3-4 horas. Con la administración tópica de la formulación de liposomas, el paciente informó que el dolor se reducía hasta 2-3.

El paciente informó que el dolor de codo comienza con 4, con hinchazón. Con la administración oral de la tableta de indometacina, el dolor se reduce hasta 0, pero luego aumenta hasta 3 después de 3-4 horas. Cuando se aplicó la formulación de liposomas de la presente invención, se redujo el dolor hasta 0. E emplo 4 - Ejemplo de formulación B % P/P Ingrediente 9,40 FOSFOLIPON® 8OH 1, 00 Acetato de vitamina E, USP 5, 00 Propilenglicol, USP 6, 00 Etanol, (prueba 190), FCC 0 , 05 Glucosamina HC1 % p/p Ingrediente 0 ,30 Metisulfonilmetano (MSM) 0,36 Pregnenolona 0, 05 S-adenosilmetioneno 0, 02 Cloruro de benzetonio, USP 0,10 TENOXS 4 77 ,72 Agua, destilada 100, 00 Esta sección provee un ejemplo de cómo fabricar una composición de liposomas de la presente invención que contiene una variedad de ingredientes con actividad biológica. Se seleccionaron los ingredientes particulares empleados para impartir un beneficio terapéutico máximo para manejar el dolor en una formulación de liposomas.

El metisulfonilmetano (MSM) es un compuesto orgánico de azufre hallado naturalmente en el cuerpo, y parece contribuir a la producción de colágeno.

La pregnenolona es un producto natural del metabolismo del colesterol hallado en concentraciones elevadas en el cerebro y otros tejidos del sistema nervioso. ? su vez, es un precursor en la formación de una serie de hormonas esteroides .

El S-adenosilmetioneno (SAM-e) es un producto natural del metabolismo del aminoácido metionina. Se sabe que presenta efectos beneficiosos para aliviar la rigidez, el dolor y la hinchazón, especialmente en el caso de la osteoartritis . Una deficiencia de SAM-e en los tejidos de las articulaciones contribuye a la pérdida de la naturaleza resistente, con consistencia de gel, del cartílago.

La glucosamina se halla en una concentración relativamente alta en articulaciones y tejido conectivo, y participa en la reparación y el mantenimiento del cartílago. La glucosamina está aprobada para el tratamiento de la artritis, y se ha demostrado que alivia el dolor y la inflamación, incrementa el rango de movimiento y ayuda a reparar las articulaciones envejecidas y dañadas en rodillas y caderas .

La vitamina E funciona primariamente como un antioxidante para proteger contra el daño celular, tal como aquél provocado por los compuestos tóxicos y los metabolitos de radicales libres corporales. Como es lipofílica, se incorpora con facilidad en las porciones lipídicas de las membranas celulares y las moléculas vehículo.

El TENOX° 4 es un antioxidante/conservante con grado alimenticio que contiene hidroxianizol butilado (BHA) e hidroxitolueno butilado (BHT) .

Ejemplo 5 - Ejemplo de método de fabricación B Esta sección provee un ejemplo de cómo fabricar una composición de liposomas de la presente invención que contiene cetoprofeno.

Fase acuosa. Se transfirió agua destilada (21761,60 g) a un recipiente de aluminio de 32,00 litros. Lentamente se agregaron los siguientes ingredientes en el recipiente: cloruro de benzetonio, USP (5,60 g) , glucosamina HC1 (14,00 g) y S-adenosilmetionena (14,00 g) . Se agregó cada ingrediente en forma individual, y luego se agitó la mezcla en forma continua por 10 minutos. Luego se entibió la mezcla a aproximadamente 52°C-54°C con una placa caliente. Se mantuvo el recipiente cerrado para evitar la evaporación de agua.

Fase lipídica. Se introdujo etanol (190) (1680,00 g) y propilenglicol USP (1400,00 g) en un contenedor de 7,5 litros de acero inoxidable. Luego se calentó la mezcla a aproximadamente 58°C-60°C. Se mantuvo el recipiente cerrado para evitar la evaporación de alcohol . Luego se agitó la mezcla con un mezclador superior y una hélice con palas de 4". Luego se agregó lentamente pregnenolona (100,80 g) y MS (84,00 g) . Una vez disueltos completamente estos ingredientes, se filtró la mezcla. Luego se agregó lentamente acetato de vitamina E USP (280,00 g) , FOSFOLIPONs 80H (2632,00 g) y ?????'" 4 (28,00 g) . Se ajustó la velocidad del mezclador, según resultó necesario, para obtener una mezcla apropiada y mantener la temperatura del recipiente entre 58 °C y 60°C, hasta fundir o disolver todos estos ingredientes, por un período de tiempo de entre aproximadamente 10 y 30 minutos .

Hidratación de la fase lipídica. Se agitó la fase acuosa usando un mezclador superior y una paleta de ancla de 5" . Se retiró el suministro de calor de la fase acuosa y la fase lipídica, momento en el cual se agregó rápidamente la . fase lipídica en el recipiente con la fase acuosa agitada. Se ajustó la velocidad del mezclador, según fue necesario, para lograr una hidratación óptima de la fase lipídica.

Fase de enfriamiento. Se usó un baño de hielo para enfriar el producto. Se continuó con la agitación hasta que la temperatura del producto final fue de aproximadamente 30 °C-35°C. Se redujo la velocidad del mezclador durante la fase de enfriamiento, según fue necesario, para evitar la incorporación de aire en el producto.

Ejemplo 6 - Uso del ejemplo de formulación B para tratamiento Este ejemplo presenta la historia de un caso real del uso de la formulación de liposomas B del Ejemplo 4 de la presente invención para el tratamiento del dolor.

El paciente fue una mujer de 24 años que tenía el cartílago de la rodilla izquierda desgarrado y presentaba dolor en los tobillos y las rodillas . Se aplicó la formulación de liposomas B (aproximadamente 1-2 gramos) en cada tobillo y cada rodilla dos veces por día durante una semana. El paciente informó que tenía significativamente menos dolor y más flexibilidad de movimiento, y ha vuelto a ejercitar en algún grado sin el nivel de dolor anterior al tratamiento .

La invención descripta en términos ilustrativos en la presente documentación puede ponerse en práctica en ausencia de cualquier elemento o elementos, limitación o limitaciones que no . se describan específicamente en la presente documentación. Los términos y las expresiones empleadas son términos descriptivos y no limitantes, y el uso de dichos términos y expresiones no pretende excluir equivalentes de las características presentadas o descriptas, o porciones de éstas, pero se reconoce que son posibles varias modificaciones dentro del alcance de la invención reivindicada. Por consiguiente, deberá comprenderse que, aunque la presente invención ha sido descripta específicamente a través de realizaciones preferidas y características opcionales, aquellos entrenados en la técnica pueden modificar y alterar los conceptos descriptos en la presente documentación, y se considera que estas modificaciones y variaciones están dentro del alcance de esta invención, definido a través de las reivindicaciones adjuntas .

Los contenidos de los artículos, las patentes y las solicitudes de patente, y todos los otros documentos y la información disponible por medios electrónicos, mencionada o citada en la presente documentación, se incorporan por completo en la presente documentación a modo de referencia, en la misma extensión en que se indicó que se incorporaba específica e individualmente cada publicación a modo de referencia. Los solicitantes se reservan el derecho de incorporar físicamente en esta descripción cualquier material e información de dichos artículos, patentes, solicitudes de patentes u otros documentos .

Las invenciones descriptas en forma ilustrativa en la presente documentación pueden ponerse en práctica apropiadamente en ausencia de cualquier elemento o elementos, limitación o limitaciones que no se describan específicamente en la presente documentación. Por consiguiente, por ejemplo, los términos "que comprende", "que incluye", "que contiene", etcétera, deberán interpretarse en forma expansiva y sin limitaciones. Adicionalmente, los términos y las expresiones empleadas han sido usadas como términos descriptivos y no limitantes, y el uso de dichos términos y expresiones no pretende excluir equivalentes de las características presentadas o descriptas, o porciones de éstas, pero se reconoce que son posibles varias modificaciones dentro del alcance de la invención reivindicada. Por consiguiente, deberá comprenderse que, aunque la presente invención ha sido descx'ipta específicamente a través de realizaciones preferidas y características opcionales, aquellos entrenados en la técnica pueden modificar y alterar los conceptos descriptos en la presente documentación, y se considera que estas modificaciones y variaciones están dentro del alcance de esta invención.

La invención ha sido descripta en forma amplia y genérica en la presente documentación. Cada una de las especies más estrechas y los grupos subgenéricos dentro de la descripción genérica también forman parte de la invención. Esto incluye la descripción genérica de la invención, tomando el recaudo o la limitación negativa de eliminar cualquier tema del género, sin importar si el material eliminado está o no detallado específicamente en la presente documentación.

Además, cuando se describen características o aspectos de la invención en términos de grupos de Markush, aquellos entrenados en la técnica reconocerán que la invención también se describe en términos de cualquier miembro individual o subgrupo de miembros del grupo de Markush.

Se detallan otras realizaciones en las siguientes reivindicaciones .

Claims (42)

1. NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiendo descrito el presente invento, se considera como una novedad y por lo tanto, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes: REIVINDICACIONES ; 1. Un método para fabricar liposomas que contienen un compuesto con actividad biológica, donde método comprende: proporcionar una composición acuosa, proporcionar una composición de fosfolípidos que contiene un compuesto con actividad biológica, y combinar la composición acuosa y la composición de fosfolípidos para fabricar liposomas que encapsulan el compuesto con actividad biológica ,-donde la composición de fosfolípidos está a una temperatura al menos 2°C mayor que la temperatura de la composición acuosa al realizar la combinación.
2. 2. Un método de acuerdo con la reivindicación 1, donde dicha composición acuosa contiene un conservante soluble en agua, y dicha composición de fosfolípidos contiene un antioxidante soluble en lípidos; y donde dicho compuesto con actividad biológica está encapsulado en los liposomas con una eficiencia de encapsulacion de al menos 20%.
3. 3. Un método de acuerdo con la reivindicación 2, donde la eficiencia de encapsulacion es de al menos 50%.
4. 4. Un método de acuerdo con la reivindicación 3 , donde la eficiencia de encapsulacion es de al menos 90%.
5. 5. Un método de acuerdo con la reivindicación 2, donde dicho compuesto con actividad biológica es un compuesto antiinflamatorio no esteroidal.
6. 6. Un método de. acuerdo con la reivindicación 5, donde dicho compuesto antiinflamatorio no esteroidal se selecciona del grupo que consiste en celecoxib, diflunisal, fenoprofeno, indometacina, cetoprofeno, ácido meclofenamínico, naproxeno, aciclovir, fenilbutazona, piroxicam, salsalato, sulindac, tolectina, rofecoxib, valdecoxib, y combinaciones de dos o más de éstos.
7. 7. Un método de acuerdo con la reivindicación 5, donde dicho compuesto antiinflamatorio no esteroidal se selecciona del grupo que consiste en celecoxib, naproxeno, indometacina, cetoprofeno, y combinaciones de dos o más de éstos.
8. 8. Un método de acuerdo con la reivindicación 2, donde dicho compuesto con actividad biológica es un agente antiviral o un agente antifúngico.
9. 9. Un método de acuerdo con la reivindicación 8, donde dicho agente antiviral es aciclovir y dicho agente antifúngico es fluconazol o terbinafina.
10. 10. Un método de acuerdo con la reivindicación 1, donde la temperatura de dicha composición de fosfolípidos es aproximadamente 8°C mayor que la temperatura de dicha composición acuosa cuando se combinan dichas composiciones de fosfolípidos y acuosa,- y donde dicha composición comprende además un conservante soluble en agua y un antioxidante soluble en lípidos.
11. 11. Un método de acuerdo con la reivindicación 10, donde la temperatura de dicha composición acuosa es de aproximadamente 50 °C y la temperatura de dicha composición de fosfolípidos es de aproximadamente 58 °C.
12. 12. Un método de acuerdo con la reivindicación 11, que comprende además enfriar la mezcla por un período de al menos dos horas .
13. 13. Un método de acuerdo con la reivindicación 11, donde la mezcla se enfría a una velocidad de aproximadamente 6°C por hora.
14. 14. Un método de acuerdo con la reivindicación 11, donde dicho compuesto con actividad biológica es un compuesto antiinflamatorio no esferoidal .
15. 15. Un método de acuerdo con la reivindicación 14 , donde dicho compuesto antiinflamatorio no esferoidal se selecciona del grupo que consiste en celecoxib, diflunisal, fenoprofeno, indometacina, cetoprofeno, ácido meclofenamínico, naproxeno, fenilbutazona, piroxicam, salsalato, sulindac, tolectin, rofecoxib, valdecoxib, y combinaciones de dos o más de éstos.
16. 16. Un método de acuerdo con la reivindicación 11, donde dicho compuesto con actividad biológica es un antiinflamatorio no esferoidal; dicho conservante soluble en agua es una sal de benzetonio,- y dicho antioxidante soluble en lípidos es vitamina E.
17. 17. Un método de acuerdo con la reivindicación 11, donde el compuesto antiinflamatorio no esferoidal se selecciona del grupo que consiste en celecoxib, naproxeno, indometacina, cetoprofeno, y combinaciones de dos o más de éstos.
18. 18. Un método de acuerdo con la reivindicación 11, donde dicho compuesto con actividad biológica es un agente antiviral o un agente antifúngico.
19. 19. Un método de acuerdo con la reivindicación 18, donde 5 dicho agente antiviral es aciclovir y dicho agente antifúngico es fluconazol o terbinafina.
20. 20. Un método de acuerdo con la reivindicación 11, donde la mezcla se enfría a aproximadamente 28°C.
21. 21. Un método de acuerdo con la reivindicación 16, donde 10 dicho compuesto antiinflamatorio no esferoidal se selecciona del grupo que consiste en celecoxib, diflunisal, fenoprofeno, indometacina, cetoprofeno, ácido meclofenamínico, naproxeno, fenilbutazona, piroxicam, salsalato, sulindac, tolectin, rofecoxib, valdecoxib, y combinaciones de dos o más de éstos. 15
22. 22. Un método de acuerdo con la reivindicación 16, donde dicho compuesto antiinflamatorio no esferoidal se selecciona del grupo que consiste en celecoxib, naproxeno, indometacina, cetoprofeno, y combinaciones de dos o más de éstos.
23. 23. Una composición de liposomas que comprende: 20 un compuesto con actividad biológica, un conservante soluble en agua, y un antioxidante soluble en lípidos; donde al menos 75% de los liposomas tiene entre aproximadamente 1 p y aproximadamente 10 pm de diámetro; y 25 donde la composición tiene una viscosidad de al menos 10000 centipoise y contiene menos de 2% de un agente potenciador de la viscosidad. r
24. 24. Una composición de acuerdo con la reivindicación 23, donde dicho antioxidante soluble en lípidos es vitamina E; y dicho compuesto con actividad biológica es un compuesto antiinflamatorio no esteroidal.
25. 25. Una composición de acuerdo con la reivindicación 24, donde dicho compuesto antiinflamatorio no esteroidal se selecciona del grupo que consiste en celecoxib, ácido acetilsalicílico, ' salicilato de colina, diflunisal, fenoprofeno, motrin, indometacina, cetoprofeno, ácido meclofenamínico, naproxeno, fenilbutazona, piroxicam, salsalato, sulindac, tolectin, rofecoxib, valdecoxib, y combinaciones de dos o más de éstos .
26. 26. Una composición de acuerdo con la reivindicación 23, donde dicha composición tiene una viscosidad de al menos 30000 centipoise.
27. 27. Una composición de acuerdo con la reivindicación 24, donde dicho compuesto antiinflamatorio no esteroidal se selecciona del grupo que consiste en celecoxib, naproxeno, indometacina, cetoprofeno, y combinaciones de dos o más de éstos; y donde dicho conservante soluble en agua es una sal de benzetonio.
28. 28. Una composición de acuerdo con la reivindicación 23, donde dicho compuesto con actividad biológica es un agente antiviral o un agente antifúngico.
29. 29. Una composición de acuerdo con la reivindicación 28, donde dicho agente antiviral es aciclovir y dicho agente antifúngico es fluconazol o terbinafina. fe
30. 30. Un método para reducir el dolor o la inflamación en un mamífero, donde dicho método comprende: aplicar una composición de liposomas en forma tópica sobre el área donde se desea reducir el dolor o la 5 inflamación, donde dicha composición de liposomas comprende: un compuesto antiinflamatorio no esteroidal, un conservante soluble en agua, y un antioxidante soluble en lipidos; donde al menos 75% de los liposomas tienen entre 10 aproximadamente 1 p y aproximadamente 10 um de diámetro y donde dicha composición tiene una viscosidad de al menos 20000 centipoise y contiene menos de 2% p/p de un agente potenciador de la viscosidad.
31. 31. Un método de acuerdo con la reivindicación 30, donde 15 dicho conservante soluble en agua es una sal de benzetonio y dicho antioxidante soluble en lipidos es vitamina E; y donde dicho compuesto antiinflamatorio no esteroidal se selecciona del grupo que consiste en celecoxib, ácido acetilsalicílico, salicilato de colina, diflunisal, 20 fenoprofeno, motrin, indometacina, cetoprofeno, ácido meclofenamínico, naproxeno, fenilbutazona , piroxicam, salsalato, sulindac, tolectin, rofecoxib, valdecoxib, y combinaciones de dos o más de éstos .
32. 32. Un método de acuerdo con la reivindicación 30, donde 25 dicho compuesto antiinflamatorio no esteroidal se selecciona del grupo que consiste en celecoxib, naproxeno, indometacina, cetoprofeno, y combinaciones de dos o más de éstos,- y donde dicha composición tiene una viscosidad de al menos 30000 centipoise.
33. 33. Un método para reducir el dolor o la inflamación en un mamífero, donde dicho método comprende: 5 aplicar una composición de liposomas en forma tópica sobre el área donde se desea reducir el dolor o la inflamación, donde dicha composición de liposomas comprende: un compuesto con actividad biológica, un conservante soluble en agua, y 10 un antioxidante soluble en lípidos; donde al menos 75% de los liposomas tienen entre aproximadamente 1 µp? y aproximadamente 10 m de diámetro; y donde dicha composición tiene una viscosidad de al menos 20000 centipoise y contiene menos de 2% p/p de un agente 15 potenciador de la viscosidad.
34. 34. Un método de acuerdo con la reivindicación 33, donde dicho compuesto con actividad biológica se selecciona del grupo que consiste en glucosamina, metisulfonilmetano, pregnenolona, S-adenosilmetioneno, y combinaciones de dos o 20 más de éstos .
35. 35. Un método de acuerdo con la reivindicación 34, donde dicho conservante soluble en agua es una sal de benzetonio, y donde dicho antioxidant soluble en lípidos es vitamina E.
36. 36. Un método para tratar una infección viral ocular, donde 25 dicho método comprende: aplicar una composición de liposomas por vía ocular, donde dicha composición de liposomas comprende, un agente antiviral, I t un conservante soluble en agua, y un antioxidante soluble en lípidos; donde dicha composición tiene una viscosidad de al menos 20000 centipoise y contiene menos de 2% p/p de un. agente 5 potenciador de la viscosidad.
37. 37. Un método de acuerdo con la reivindicación 36, donde dicha infección viral es herpes y dicho agente antiviral es aciclovir .
38. 38. Un método para tratar una infección fúngica, donde dicho 10 método comprende: aplicar una composición de liposomas en forma tópica sobre el área infectada, donde dicha composición de liposomas comprende : un agente antifúngico, 15 un conservante soluble en agua, y un antioxidante soluble en lípidos ; donde la composición tiene una viscosidad de al menos 20000 centipoise y contiene menos de 2% p/p de un agente potenciador de la viscosidad. 20
39. 39. Un método de acuerdo con la reivindicación 38, donde dicho agente antifúngico es fluconazol o terbinafina.
40. 40. Un método para tratar una infección, donde dicho método comprende ·. aplicar una composición de liposomas en forma tópica sobre el área infectada, donde dicha composición de liposomas comprende : un agente antiviral o antifúngico, un conservante soluble en agua, y un antioxidante soluble en lípidos donde la composición tiene una viscosidad de al menos 20000 centipoise y contiene menos de 2% p/p de un agente potenciador de la viscosidad.
41. 41. Un método de acuerdo con la reivindicación 40, donde dicha infección es una infección viral cutánea y dicho agente antiviral es aciclovir.
42. 42. Un método de acuerdo con la reivindicación 40, donde dicha infección es una infección fúngica cutánea y dicho agente antifúngico es fluconazol o terbinafina.