MXPA04010199A - Terapia en combinacion para el tratamiento de cancer. - Google Patents

Abstract

La presente invencion concierne a un metodo para el tratamiento de cancer en un paciente en necesidad del mismo. El metodo coprende administrar a un paciente en necesidad de este, una primera cantidad de un inhibidor de histoan desacetilasa en un primer procedimeitno de tratamiento, y una segunda cantidad o sdosis de reaiacion en un segundo procedimiento de tratamiento. El primer y segundo tratamientos, juntos comprenden una cantida eefectiva terapeuticamente. Al cobinacion del inhibidor de HDAC y la terapia de radiacion es sinergica terapeuticamente.

Description

TERAPIA EN COMBINACION PARA EL TRATAMIENTO DE CANCER ANTECEDENTES DE LA INVENCION La homeóstasis de tejido normal se logra por medio de un intrincado equilibrio entre la velocidad de la proliferación celular y la muerte celular. La disrupción de este equilibrio ya sea incrementando la velocidad de proliferación celular o disminuyendo la velocidad de muerte celular puede dar como resultado el crecimiento anormal de células y se piensa que es el principal evento en el desarrollo del cáncer. Las estrategias convencionales para el tratamiento de cáncer incluyen quimioterapia, radioterapia,- cirugía, terapia biológica o combinaciones de éstas; no obstante, estas estrategias están limitadas por la falta de especificidad y la excesiva toxicidad en tejidos normales. Además, ciertos cánceres son resistentes a tratamientos tales como la quimioterapia, y algunas de estas estrategias tales como la cirugía no son siempre alternativas viables. Las células cancerosas pueden ser debilitadas y finalmente muertas por bombardeo con ciertas clases de radiación y por consiguiente la terapia de radiación es un ¦ tratamiento importante para el cáncer. Los análisis retrospectivos de la radioterapia para el cáncer, por ejemplo en el caso de cáncer de próstata, ha demostrado que falla en lograr el control local del tumor primario, está asociada con diseminación metastática eventual de la enfermedad (Yorke, E. D. y colaboradores Cáncer Res. 53: 2987-93 (1993); Fuks, Z. y colaboradores. Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 21: 537-47 (1991)) . La Disponibilidad de marcadores anteriores de recurrencia, tales como PSA, han sugerido también que los regímenes de dosificación estándares usados en radioterapia de cáncer de próstata son inadecuados (Pollack A. y colaboradores, Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 53:1097-1105 (2002)). Estas dos observaciones han proporcionado un ímpetu para la investigación de técnicas tales como tratamiento conforme a 3-D y radioterapia de intensidad moderada (IMRT) que lo hace posible para incrementar la dosis de radiación terapéutica con incrementos mínimos en la exposición de órganos normales (Zelefky, M. J. y colaboradores Radiother. Oncol. 55: 241-9 (2000)) . Se ha examinado también el uso de radiosensibilizadores como un procedimiento para incrementar la eficiencia terapéutica sin incrementar la liberación de la dosis (Lawton, C. A. y colaboradores, Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 36: 673-80 (1996)). El tratamiento del cáncer puede también incluir el uso de agentes quimioterapéuticos . Por ejemplo, el Acido Suberoilanilida Hidroxámico (SARA) es un compuesto polar híbrido basado en ácido hidroxámico que inhibe la actividad de la histona desacetilasa (HDAC) y que induce la diferenciación terminal/ la detención del crecimiento celular y/o la apoptosis de células tumorales, in vitro (Richon, V. M. y colaboradores Proc. Nati. Acad. Sci. USA 95: 3003-7 (1998); Marks, P. A. y colaboradores, Curr. Opin. Oncol. 13: 477-83 {2001}; Marks, P. A. y colaboradores Wature .eview Cáncer 1: 194-202 (2001)). SAHA pertenece a una clase de inhibidores de histona desacetilasa (HDAC) capaces de inducir la diferenciación terminal, detener el crecimiento celular y/o la apoptosis de células tumorales. El compuesto ha mostrado la inhibición de xenoinjertos de tumor de próstata en ratones desnudos con mínima o ninguna toxicidad detectable (Butler, L. M. y colaboradores Cáncer Res. 60: 5165-70 (2000) . Se terminaron los ensayos en Fase I para el tratamiento de tumores hematológicos y sólidos, incluyendo cáncer de próstata (Kelly, W. K. y colaboradores Expert. Opin. Investíg. Drugs 11: 1695-713 (2002) : Kelly, . K. y colaboradores Jn; ASCO Proceedings, Orlando, FL, 2002, pág. 1831) . Típicamente los inhibidores de HDAC caen en cinco clases generales: A) derivados de ácido Hidroxámico; B) Tetrapéptidos cíclicos; C) Acidos Grasos de Cadena Corta; (SCFAs) ; D) Derivados de benzamida; y E) derivados electrofílieos de cetona. A menudo se emplean terapias en combinación en el tratamiento del cáncer. Por ejemplo, se han empleado dos o más terapias aceptadas, tales como, quimioterapia y radioterapia. La ventaja terapéutica derivada de ciertas terapias en combinación ha sido clasificada bajo cuatro categorías generales por Steel y Peckham {Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 5: 85-91 (1979)). Estas categorías son: Cooperación Espacial - la quimioterapia y radioterapia erradican enfermedades en diferentes sitios; 2) Independencia de Toxicidad - la muerte debida a la quimioterapia es añadida a la derivada de la radioterapia a causa de la toxicidad en órganos normales no sobrepuesta; 3) Protección de Tejido Normal - agentes que hacen posible liberar grandes dosis de radiación el objetivo; 4) Mejoramiento de la Respuesta del Tumor - un agente (quimioterapia o radiación) preferentemente células tumorales "sensibilizadas" a los otros tales como el efecto de dos es mayor que el que se esperaría al añadir el efecto de cada uno individualmente. La primera de las dos categorías no requiere una interacción entre los dos agentes. Ejemplos clínicos de ventajas terapéuticas debidas a radioterapia/quimioterapia combinadas generalmente caen bajo las categorías 1 y 2, con la categoría 1 que es racional clínicamente dominante para terapia en modalidad combinada. Las ventajas terapéuticas correspondientes a las categorías 3 y 4, se han observado en el laboratorio pero la transformación a la clínica ha sido lenta. En vista de lo anterior, el cáncer es una enfermedad para la cual están disponibles muchos tratamientos potencialmente efectivos. Sin embargo, debido a la prevalescencia de cánceres de varios tipos y de los serios efectos que puede tener, se necesitan tratamientos más efectivos, especialmente aquellos con menos efectos colaterales adversos que formas de tratamiento disponibles actualmente .

SUMARIO DE LA INVENCION La presente invención se basa en el descubrimiento de que pueden usarse inhibidores de histona desacetilasa, tales como SKHA en combinación con una fuente de radiación tales como irradiación de haces externos o un radioisótopo, tal como un producto radiofarmacéutico, para proporcionar efectos anticancerosos efectivos terapéuticamente . Además, una interacción sinérgica inesperada entre el inhibidor de HDAC y la fuente de radiación da como resultado un efecto terapéutico sinérgico o mejorado, en donde el efecto combinado es mayor que el efecto adicional que resulta de la administración de los dos tratamientos, cada uno a dosis terapéutica. Estas observaciones sugieren que inhibidores de HDAC, tales como SAHA pueden actuar como radio sensibilizadores que pueden usarse en combinación con radioterapia para el tratamiento del cáncer. La habilidad de inhibidores de HDAC tales como SAHA para actuar como radio sensibilizadores no han sido descritos previamente. Se ha descubierto inesperadamente que la combinación de un primer procedimiento de tratamiento que incluye la administración de un inhibidor de histona desacetilasa (HDAC) , como se describe en la presente, y un segundo procedimiento de tratamiento usando tratamiento de radiación como se describe en la presente, a un paciente en necesidad del mismo, puede proporcionar efectos anticáncer efectivos terapéuticamente. Cada uno de los tratamientos (administración de un inhibidor de HDAC y la administración de terapia de radiación) , es usado en una cantidad o dosis que en combinación con los otros proporcionan un tratamiento efectivo terapéuticamente. Como tal, la presente invención concierne a un método para el tratamiento de cáncer en un paciente en necesidad del mismo. El tratamiento del cáncer, como se usa en la presente, se refiere a inhibir parcial o totalmente, retardar o prevenir el progreso del cáncer, incluyendo la metástasis del cáncer: inhibir, retardar o prevenir la recurrencia del cáncer incluyendo la metástasis del cáncer; o prevenir el principio del desarrollo del cáncer (quimioprevención) en un mamífero, por ejemplo un humano. Los métodos de la presente invención son útiles en el tratamiento de una amplia variedad de cánceres, incluyendo pero no limitándose a tumores sólidos (por ejemplo, tumores del pulmón, seno, colon, próstata, vejiga, recto, cerebro o endometrio) , malignidades hematológicas (por ejemplo, leucemias, linfomas, mielomas) , carcinomas (por ejemplo, carcinoma de vejiga, carcinoma de seno, carcinoma colon rectal), neuroblastoma o melanoma. El método comprende administrar a un paciente en necesidad del mismo una primera cantidad de inhibidor de histona desacetilasa en un · primer procedimiento de tratamiento, y un a segunda cantidad o dosis de radiación en un segundo procedimiento de tratamiento. La primera y la segunda cantidades juntas comprenden una cantidad efectiva terapéuticamente. La invención concierne adicionalmente a composiciones farmacéuticas útiles para el tratamiento de cáncer. La composición farmacéutica comprende una primera cantidad de un inhibidor de histona desacetilasa y una segunda cantidad de radiación (por ejemplo, un producto radiofarmacéutico) . La primera y la segunda cantidad juntas comprenden una cantidad efectiva terapéuticamente. La invención concierne adicionalmente al uso de una primera cantidad de un inhibidor de HDAC y una segunda cantidad de una radiación (por ejemplo, un agente radiofarmacéutico) para la fabricación de un medicamento para tratar el cáncer. En modalidades particulares de esta invención, la combinación de la terapia del inhibidor de HDAC y de la radiación se considera terapéuticamente sinérgica cuando el régimen de tratamiento en combinación produce un resultado anticáncer, significativamente mejor (por ejemplo, inhibición del crecimiento) que el efectos aditivo de cada constituyente cuando es administrado solo a una dosis terapéutica. Puede emplearse el análisis estadístico estándar para determinar cuando los resultados son significativamente mejores. Por ejemplo, una Prueba de Mann-Whitney o algún otro análisis estadístico aceptado generalmente . La fuente de radiación usada en el tratamiento de radiación puede ser radiación electromagnética (por ejemplo, rayos X o rayos gama) o radiación por partículas (por ejemplo, haz de electrones (partículas beta), haz de protones, haz de neutrones, partículas alfa, o mesones pi negativos) . El tratamiento de radiación puede ser radiación de haces externos, o puede involucrar el uso de un radiosótopo (por ejemplo, por administración de un agente radio terapéutico, como se describe en la presente) . El tratamiento por radiación puede también ser ¦ una combinación de radiación de haces externos y un radioisótopo, tal como un agente radio farmacéutico. En una modalidad particular, la radiación es proporcionada por liberación sobre el objetivo o por liberación generalizada de conjugados radioactivos objetivo, por ejemplo un anticuerpo radiomarcado. La dosis de radiación puede determinarse dependiendo del paciente, y del tipo de cáncer a ser tratado. En modalidades particulares, el paciente puede recibir al menos aproximadamente 1 Gy de radiación, por e emplo aproximadamente 5 - 40 Gy de radiación tal como aproximadamente 5, 6, 7, 8, 9 o 10 Gy o 40 Gy de radiación y las similares. Los procedimientos de tratamiento pueden tener lugar secuencialmente en cualquier orden, simultáneamente o una combinación de las mismas. Por ejemplo, el primer procedimiento de tratamiento, administración de un inhibidor de histona desacetilada, puede tener lugar antes del segundo procedimiento de tratamiento, radiación después del tratamiento de radiación, al mismo tiempo que la radiación o una combinación de éstas. Por ejemplo, un periodo de tratamiento total puede ser decidido por el inhibidor de la histona desacetilasa. La radiación puede ser administrada antes o al principio del tratamiento con el inhibidor o después del tratamiento con el inhibidor. Además, el tratamiento de radiación puede ser administrado durante el periodo de administración del inhibidor pero no necesariamente ocurre durante el periodo completo de tratamiento con el inhibidor. Los inhibidores de HDAC adecuados para uso en la presente invención, incluyen, pero no se limitan a derivados de ácido hidroxámico, Acidos Grasos de Cadena Corta (SCFAs) , tetrapéptidos cíclicos, derivados de benzamida, o derivados electrofilicos de cetona, como se define en la presente. Ejemplos específicos no limitantes de inhibidores de HDAC para uso en los métodos de la presente invención son: A) DERIVADOS DE ACIDO HIDROXAMICO, seleccionados de SARA, piroxamida, CBHA, Tricostatina A (TSA) , Tricostatina C, Acido Salicilhidroxámico (SBHA) , Acido Azelaico Bishidroxámico (ABHA) , Azelaic-l-Hidroxamato- 9- Anilida (AAHA) , Acido 6- (3- Clorofenilureido) caproico Hidroxámico (3CI-UCHA) , Oxamflatin, A-161906, Scriplaid, PXD-101, LAQ-824, CHAP, MW2796, y MW2996; B) TETRAPEPTIDOS CICLICOS seleccionados de, Trapoxin A, FR901228 (FK 228, Depsipéptido) , FR225497, Apicidin, CHAP, HC-Toxin, WF27082, y Clamidocina; C) ACIDOS GRASOS DE CADENA CORTA (SCFAS) , seleccionados de Butírato de sodio, Isovalerato, valerato, 4-Fenilbutirato (4-PBA) , Fenilbutirato (PB) , Propionato, Butiramida, Isobutiramida, Fenilacetato, 3- Bromopropionato, Tributirin, Acido Valproico y Valproato . D) DERIVADOS DE BENZAMIDA, seleccionados de CI-994, MS-27-275 (MS-275) y un derivado 3'-amino de MS-27-275. E) DERIVADOS ELECTROFILICOS DE CETONA, seleccionados de una cetona trifluorometilica y unaa -ceto amida tal como una N-metil-a-cetoamida; y F) DEPUDECIN. Inhibidores específicos de HDAC incluyen: Acido suberoilanilida íiidroxámico (SAHA) , el cual está representado por la fórmula estructural siguiente: Piroxamida, la cual está representada guíente fórmula general : bishidroxamato del ácido m-carboxicinámico (CBHA.) , el cual está representado por la fórmula estructural : Otros ejemplos no limitantes de inhibidores de HDAC que son adecuados para uso en los métodos de la presente invención son: Un compuesto representado por la estructura: en donde ¾ y R2 pueden ser iguales o diferentes; cuando ¾ y R2 sean iguales, cada uno es arilamino (por ejemplo, fenilamino, piridinamino, 9- purin- 6- amino o tiazololamino) , cicloalquilamino, o grupo piperidino substituido o no substituido; cuando ¾. y R2 son diferentes Ri = R3- N- R4, en donde cada ' uno de R3 y R4 son independientemente iguales o diferentes entre sí y son un átomo de hidrógeno, un grupo hidroxilo, un grupo alquilo substituidos o no substituidos, ramificados o no ramificados, alquenilo, cicloalquilo, arilo (por ejemplo fenilo o piridilo) , aciloxi, ariloxi, arilalquiloxi o grupo piperidina, o R3 y R4 están enlazados juntos para formar un grupo piperidina, R2 es un grupo hidroxilamino, hidroxilo, amino, alquilamino, dialquilamino o alquiloxi y n es un entero desde aproximadamente 4 a aproximadamente 8; Un compuesto representado por la estructura: en donde R es un fenilo substituido o no substituido, piperidina, tiazol, 2- piridina, 3- piridina o 4- piridina y n es un entero desde aproximadamente 4 a aproximadamente 8; y Un compuesto representado por la estructura: en donde A es una porción amida, ¾ y ? son seleccionados cada uno de un arilo substituido o no substituido, arilamino (por ejemplo, piridinamino, 9-purin-6- amina o tiazolamino) , arilalquilo, ariloxi, arilalquiloxi, R4 es hidrógeno, un halógeno, un fenilo o un grupo cicloalquilo y n es un entero desde aproximadamente 3 a aproximadamente 10. La terapia en combinación puede proporcionar una ventaja terapéutica en vista de la toxicidad diferencial asociada con las dos modalidades de tratamiento. Más específicamente, el tratamiento con inhibidores de HDAC pueden conducir a toxicidad hematológica, mientras que la radioterapia puede ser tóxica a tejidos adyacentes al sitio del tumor. Como tal, esta toxicidad diferencial puede permitir que cada tratamiento sea administrado en su dosis terapéutica, sin incrementar la morbilidad del paciente. No obstante, sorpresivamente, los efectos terapéuticos logrados como un resultado del tratamiento en combinación son mejorados o sinérgicos, por ejemplo, significativamente mejores que los efectos terapéuticos de los aditivos.

BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS Las Figuras 1A- D son gráficas de volumen esferoidal para células LNCaP (A) sin tratar; (B) tratadas con 1 M de SAHA; (C) tratadas con 2.5 uM de SAHA; y (D) tratadas con 5 uM de SAHA tanto por tratamiento continuo como por 120 horas de tiempo de tratamiento. Las lineas llenas gruesas corresponden a la gráfica de la media para cada experimento individual. Las Figuras 2A- B son exploraciones de imágenes del microscopio óptico de las esferoidales de células LNCaP tomadas a diferentes tiempos después del comienzo de la incubación continua con (A] 5 pM de SAHA y (B) 2.5 uM de SAHA (gráficas ID y 1C anteriores) . Los números abajo a la izquierda de cada grupo corresponden al tiempo postincubación en dias. Las Figuras 3A- D, son gráficas de los volúmenes esferoidales medio (lineas gruesas} e individuales (lineas finas) para células LNCaP tratadas de conformidad con el régimen siguiente: A) sin tratar; B) incubadas por 96 horas con 5 uM de SAHA; C) irradiadas con una dosis aguda de radiación de haz externo usando 6 Gy del irradiador Cs-137 (LET 02. keV/um) ; y D) tratadas con 5 uM de SAHA por 96 horas y una dosis aguda de radiación usando 6 Gy del irradiador Cs-137 (LET 02. kéV/um) después del punto medio (después de 48 horas) del tratamiento con SAHA. la Figura , es una exploración de imágenes de microscopio óptico de una esferoide tratada con la combinación de SAHA y 6 Gy de irradiación descrito en Figura 3D. Los números abajo a la derecha de cada grupo corresponden al tiempo del principio de la incubación con SAHA.. Las Figuras 5A- C son exploraciones de secciones teñidas con TUNEL de esferoides de LNCaP tratadas . Los grupos (A-C) han sido tratados con SAHA solo (5 uM, 96 horas) . El grupo (A) muestra esferoides tratados inmediatamente después del final de la incubación; el grupo (B) muestra esferoides tratados 24 horas después del final de la incubación son SAHA; el grupo (C) muestra esferoides tratados 48 horas después del final de la incubación con SAHA. Los grupos (D-F) muestran tinciones con TUNEL para esferoides LNCaP tratados con la combinación de SAHA + radiación de 6 Gy; el grupo (D) es inmediatamente después del final de la incubación; el grupo (E) es 24 horas después del final de la incubación; y el grupo (F) es 48 horas después del final de la incubación. Se muestran también las tinciones con TUNEL para: el grupo (G) un control tratado con DNAsa positivo; el grupo (H) una esferoide sin tratar; y el grupo (I) una esferoide tratada con 6 Gy de radiación. Todas las secciones son contra-teñidas con Hematoxilina. Las Figuras 6A- C son exploraciones de secciones de esferoides de LNCaP tratadas, teñidas con Ki67. Los grupos (A-C) han sido tratados con SAHA solo (5 uM, 96 horas) . El grupo (A) muestra esferoides inmediatamente después de la incubación con SAHA; el grupo (B) muestra esferoides 24 horas después del final de la incubación; y el grupo (C) muestra esferoides 48 horas después del final de la incubación. Los grupos D hasta F muestran tinciones con i67 para esferoides tratadas con la combinación de SAHA + radiación de 6 Gy (D) inmediatamente, (E) 24 horas y (F)48 horas después del final de la incubación. Se muestran también tinciones con Ki67 para un esferoide sin tratar (G) y un esferoide tratado con 6 Gy de radiación (H) . Todas las secciones son contra teñidas con Hematoxilina. Las Figuras 7A-B son gráficas que muestran el promedio y la desviación estándar del por ciento de células teñidas positivamente por tinciones (A) TUNEL y (B) i67. De tres a cinco secciones diferentes fueron calificadas por medio de experimentos. El porcentaje de células teñidas positivamente en secciones solamente con SAHA versus SAHA + radiación fue significativamente diferente para las tinciones con Ki67 a 48 horas (p < 0.01) .

La Figura 8, es una gráfica que muestra el volumen esferoidal para células LNCaP tratadas de conformidad con el régimen siguiente: control sin tratar,* tratadas con Ac225-HuM 195; tratadas por 96 horas con 5 uM de SAHA; X, tratadas con Ac225-HuM 195 y 5 uM de SAHA. Lo anterior y otros objetos, aspectos y ventajas de la invención serán obvios de la siguiente descripción más particular de modalidades preferidas de la invención, como se ilustra en los dibujos anexos.

DESCRIPCION DETALLADA DE IA INVENCION La presente invención concierne a un método para el tratamiento de cáncer en un paciente en necesidad del mismo . El método comprende administrar a un paciente en necesidad del mismo, una primera cantidad de un inhibidor de histona desacetilasa y una segunda cantidad de dosis de radiación en un segundo procedimiento de tratamiento. La primera y segunda cantidades juntas comprenden una cantidad efectiva terapéuticamente. En una modalidad, el método proporciona un efecto anticáncer el cual es sinérgico. Tratamiento de cáncer, como se usa en la presente, se refiere a inhibir parcial o totalmente, retardar o prevenir el progreso de cáncer incluyendo la metástasis del cáncer, inhibir, retardar o prevenir la recurrencia de cáncer incluyendo la metástasis de cáncer; o prevenir el principio o el desarrollo de cáncer (quimioprevención) en un mamífero, por ejemplo un humano. En una modalidad, el inhibidor de HDAC activa las células de cáncer en el paciente a la radiación. Como tal, el inhibidor de HDAC puede actuar como un radio sensibilizador. Por ejemplo, sin desear adoptar algún mecanismo o teoría particular, el efecto terapéutico de la administración en combinación de un inhibidor de HDAC y un tratamiento de radiación puede ser debido a la habilidad del inhibidor de HDAC para actuar como un radio sensibilizador, incrementado así la actividad de células cancerosas en los pacientes al tratamiento de radiación. Como tal, el inhibidor de HDAC puede ser administrado en una cantidad radio sensibilizadora. La activación puede ser debida a una detención irreversible en el ciclo celular . En otra modalidad, la radiación sensibiliza a las células cancerosas en el paciente a la acción del inhibidor de HDAC. La invención también concierne a un método de determinar la actividad de un cáncer particular a la terapia en combinación de la invención. El método comprende exponer o poner en contacto a una célula cancerosa con una primera cantidad de un inhibidor de histona desacetilasa en un primer procedimiento de tratamiento, y una segunda cantidad o dosis de radiación en un segundo procedimiento de tratamiento y evaluar los efectos anticáncer. La primera y segunda cantidades juntas comprenden una cantidad efectiva terapéuticamente. Los efectos anticáncer pueden ser evaluados usando cualquier ensayo apropiado . En una modalidad adicional, la invención concierne a un método de cribado para determinar combinaciones óptimas de inhibidores de HDAC y terapia de radiación para tipos de cáncer particulares . El método de cribado comprende exponer a una célula cancerosa a una primera cantidad de un inhibidor de histona acetilasa en un primer procedimiento de tratamiento, y una segunda cantidad o dosis de radiación en un segundo procedimiento de tratamiento. El primero y segundo tratamientos juntos comprenden una cantidad efectiva terapéuticamente. La célula puede estar en cultivo o presente en el cuerpo del paciente en necesidad de tratamiento. Los efectos anticáncer del tratamiento pueden ser evaluados usando métodos adecuados. Como se usa en la presente el término "cantidad efectiva terapéuticamente" se pretende calificar la cantidad combinada del primer y segundo tratamientos en la terapia de combinación. La cantidad combinada logrará la respuesta biológica deseada. En la presente invención, la respuesta biológica deseada es la inhibición parcial o total, retardo o prevención del progreso de cáncer incluyendo la metástasis de cáncer; retardo de la inhibición o prevención de la recurrencia de cáncer, incluyendo metástasis de cáncer; o la prevención del principio o del desarrollo de cáncer (quimioprevención) en un mamífero, por ejemplo, un humano. La terapia en combinación de la presente invención es adecuada para uso en el tratamiento de una amplia variedad de cánceres. Como se usa en la presente, cáncer se refiere a tumores, neoplasmas, carcinomas, sarcomas, leucemias, linfornas y los similares. Por ejemplo, cánceres incluyen, pero no se limitan a, leucemias y linfomas tales como linfoma de células T cutáneas (CTLC) , linfoma de células T periféricas no cutáneas, linfoma/leucemia de células T del adulto (ATLL) , leucemia linfocitica aguda, leucemias no linfociticas agudas, leucemia linfocitica crónica, leucemia mieloginosa crónica, enfermedad de Hodgkins, linfomas diferente al de Hodgkins, y mieloma múltiple, tumores sólidos de la niñez tales como tumores cerebrales, neuroblastoma, retinoblastoma, Tumor de Wilm, tumores óseos y sarcomas del tejido blando, tumores sólidos comunes de adultos tales como cánceres de cabeza y de cuello (por ejemplo, oral laringico y esofágico), cánceres genitourinario (por ejemplo, de próstata, de vejiga, renal, uterino, ovárico, testicular, rectal y de colon) , cáncer de pulmón, cáncer de seno, cáncer pancreático, melanoma y otros cánceres de piel, cáncer de estómago, cáncer de cerebro, cáncer de hígado, y cáncer de tiroides. HISTONA DESACETILASA E INHIBIDORES DE HISTONA DESACETILASA Histona desacetilasa (HDACs) como el término es usado en la presente son enzimas que catalizan la remoción de grupos acetilo desde residuos lisina en extremos terminales amino de histonas de núcleo nucleosómico . Como tales, HDACs junto con acetil histonas transferasas (HATs) regulan el estatus de acetilación de las histonas . La acetilación de la histona afecta a la expresión genética y a los inhibidores de HDACs, tales como el compuesto polar híbrido basado en ácido hidroxámico, ácido suberoilanilida hidroxámico (SAHA) induce la detención del crecimiento, diferenciación y/o apoptosis de células transformadas in vltro e inhibir el crecimiento de tumor in vivo. Las HDACs pueden dividirse en tres clases basadas en la homología estructural. Las HDACs .de Clase I (HDACs 1, 2, 3 y 8) poseen similaridad en las proteínas RPD3 de levaduras, están localizadas en el núcleo y se encuentran en complejos asociados con co-represores transcripcionales. Las HDACs de Clase II (HDACs 4, 5, 6, 7 y 9) son similares a las proteinas HDA1 de levaduras, y tienen tanto localización subcelular nuclear como citoplásmica. Tanto las HDACs de Clase I como las de Clase II son inhibidas por inhibidores de HDAC basadas en ácido hidroxámico, tales como SAHA. Las HDACs de Clase III forman una clase distante estructuralmente de enzimas dependientes de NAD que están relacionadas con las proteinas SIR2 de levaduras y no son inhibidas por inhibidores de HDAC basados en ácido hidroxámico . Los inhibidores de histona desacetilasa o inhibidores de HDAC , como se usa el término en la presente son compuestos que son capaces de inhibir la desacetilación de histonas in vivo, ín vltro o ambos. Los inhibidores de HDAC inhiben la actividad de al menos una histona desacetilasa. Como un resultado de la inhibición de la desacetilación de al menos una histona, tiene lugar un incremento en la histona acetilada y la acumulación de histona acetilada es un marcador biológico adecuado para evaluar la actividad de inhibidores de HDAC. Por consiguiente, pueden usarse procedimientos que pueden ensayarse para la acumulación de histonas acetiladas para determinar la actividad inhibidora de HDAC de los compuestos de interés. Se comprende que, compuestos que pueden inhibir la actividad de la histona desacetilasa pueden también enlazar a otros substratos y como tales pueden inhibir a otras moléculas activas biológicamente tales como enzimas. Por ejemplo, en pacientes que reciben inhibidores de HDAC, puede determinarse la acumulación de histonas acetiladas en células mononucleares periféricas asi como también en tejidos tratados con inhibidores de HDAC contra un control adecuado. La actividad inhibidora de HDAC de un compuesto particular puede ser determinada in vitro usando, por ejemplo un ensayo enzimático que muestre la inhibición de al menos una histona desacetilasa. Adicionalmente, la determinación de la acumulación de histonas acetiladas en células tratadas con una composición particular puede ser determinante de la actividad inhibidora de HDAC de un compuesto. Los ensayos para la acumulación de histonas acetiladas son bien conocidos en la literatura. Ver, por ejemplo, Marks, P.A. y colaboradores, J. Nati. Cáncer Inst., 92:1210-1215, 2000, Butler, L. M. y colaboradores, Cáncer Res. 60:5165-5170 (2000), Richon, V. M. y colaboradores, Proc. Nati. Acad. Sci.r USA, 95: 3003-3007, 1998, y Yoshida, M. y colaboradores, J. Blol. Chem. , 265: 17174-17179, 1990. Por ejemplo, un ensayo enzimático para determinar la actividad de un compuesto inhibidor de histona desacetilasa, puede conducirse como sigue. Brevemente, el efecto de un compuesto inhibidor de HDAC sobre HDAC1 marcado con el epitope humano purificado por afinidad (Flag), puede ser ensayado por incubación de la preparación enzimática en la ausencia de substrato bajo temperaturas adecuadas por aproximadamente 20 minutos con la cantidad indicada de compuesto inhibidor. El substrato (histona derivada de células de eritroleucemia de roedor marcadas con [3H]acetilo, puede ser añadido y la muestra puede ser incubada por 20 minutos a aproximadamente 37 °C en un volumen total de 30 µ?. La reacción puede ser entonces ser detenida y el acetato liberado puede ser extraído y la cantidad de radioactividad liberada, puede ser determinada por conteo por centelleo. Un ensayo alternativo útil para determinar la actividad de un compuesto inhibidor de la histona desacetilasa es el Ensayo de Actividad de HDAC por Fluorescencia; Drug Discovery Kit-AK-500" disponible de BIOMOL® Research Laboratories, Inc., Pl mouth Meeting, PA. Pueden conducirse estudios in vivo como sigue.

Animales, por ejemplo ratones, pueden ser inyectados intraperitonealmente con un compuesto inhibidor de HDAC. Pueden aislarse tejidos seleccionados, por ejemplo de cerebro, bazo, hígado, etc., a tiempos predeterminados, post administración. Pueden aislarse histonas de tejidos, esencialmente como se describe en Yoshida y colaboradores, J. Biol. Chem. 265:17174-17179, 1990. Cantidades iguales de histonas (aproximadamente 1 ug) pueden ser electroforisadas sobre geles de SDS al 15 %-poliac ilamida y pueden ser transferidas a filtros Hybond-P (disponible de Amersham) . Los filtros pueden ser bloqueados con leche al 3 % y pueden ser sondeados con un anticuerpo H4 anti- histona acetilada policlonal purificado de conejo (<xAc-H4) y anticuerpo H3 anti-histona acetilada (OÍAC-H3) /Upstate Biotecnology, Inc.). Los niveles de histona acetilada pueden ser visualizados usando un anticuerpo anti-conejo de cabra conjugado con peroxidasa de rábano .(1:5000) y el substrato quimioluminscente SuperSignal (Pierce) . Como un control de carga para la proteina de la histona, geles paralelos pueden correrse y pueden teñirse con Azul de Coomassie (CB) . Además, inhibidores de HDAC basados en ácido hidroxámico como SAHA se ha mostrado que sobre regulan la expresión del gen de p21WA!ri, responsable de la inhibición de quinasas dependientes de ciclina que contribuyen a una detención transitoria en la fase Gi del ciclo celular (Richon, V. M. y colaboradores, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 97: 10014-9, 2000). La proteína de p21WAFI es inducida en dos horas de cultivo con inhibidores de HDAC en una variedad de células transformadas usando métodos estándares. La inducción del gen de ?S?^1 está asociada con la acumulación de histonas acetiladas en la región de cromatina de este gen. la inducción de p21WAFI puede por consiguiente, ser reconocida como involucradas en la detención del ciclo de células Gl ocasionada por inhibidores de HDAC en células transformadas. Recientemente se ha mostrado que inhibidores de HDAC como SAHA, sobre regulan la proteina-2 de enlace de tioredoxina (Buttler, L. M. y colaboradores Proc. Nati. Acad. Sci. USA 99: 11700-5, 2002). TBP-2 está involucrado en la regulación de tioredoxina (Nishiyama, A. y colaboradores, J. Biol. Chem. 274: 21645.50, 1999). Inhibe la actividad reductora de tiol y reduce el nivel de tioredoxina. La tioredoxina es una disulfuro reductasa de proteina celular importante (Amer, E. S. y colaboradores, Eur. J. Biochem. 267: 6102-9, 2000). Además, de un número de otras funciones (Gasdaska, J. R. y colaboradores, Cell Growth Differ. 6: 1643-50, 1995; Berggren, M. y colaboradores Anticancer Res. 16: 3459-66, 1996; Gallegos, A. y colaboradores Cáncer Res. 56: 5765-70, 1996; Grogan, T. M. y colaboradores Hum. Pathol. 31: 475-81, 2000; Baker, A. y colaboradores Cáncer Res. 57: 5162-7, 1997), la tioredoxina sirve como un donador de electrones en la reacción de ribonucleótido reductasa gue es responsable de la reducción de trifosfatos de nucleósidos a trifosfatos de desoxinucleósidos necesarias en la replicación y reparación del DNA (Arner, E. S. y colaboradores Eur. J. Biochem. 267:6102-9, 2000). Como el glutation, la tioredoxina es también un agente reductor involucrado en las reacciones de destoxificación y en la eliminación de especies de oxigeno reactivo inducidas por radiación y otros radicales libres (Didier, C. y colaboradores, P. Radie. Biol. ed. 30: 537-46, 2001). Como tales, los derivados de ácido hidroxámico, tales como SAHA, son adecuados para uso en el tratamiento o la prevención de una amplia variedad de enfermedades y condiciones mediadas por tioredoxina (TRX) , tales como enfermedades inflamatorias, enfermedades alérgicas, enfermedades autoinmunes, enfermedades asociadas con fatiga oxidativa o enfermedades caracterizadas por hiperproliferación celular (Solicitud US No. 10/369,094, presentada en Febrero 15 de 2003, intitulada, "Method of treating TRX-mediated diseases using istone deacetylase inhibitors" por Richon y colaboradores, cuyo contenido completo se incorpora a la presente como referencia) . Adicionalmente, derivados de ácido hidroxámico, tales como S7AHA, han mostrado recientemente ser útiles para tratar enfermedades del sistema nervioso central (CNS), tales como enfermedades neurodegenerativas y para tratar cáncer cerebral (Solicitud U.S. No. 10/273,401, presentada el 16 de Octubre de 2002, intitulada "Treatment of neurodegenerative diseases and cáncer of the brain using histone deacetylase inhibitors" por Richon y colaboradores, cuyo contenido completo se incorpora a la presente como referencia) . Típicamente, los inhibidores de HDAC caen en cinco clases generales: 1} derivados de ácido hidroxámico; 2) Acidos Grasos de Cadena Corta (SCFAs) ; 3) tetrapéptidos cíclicos; 4) benzamidas; y 5) cetonas electrofílicas . Así, todos los compuestos inhibidores de HDAC son adecuados para uso en la presente invención. Por ejemplo, inhibidores de HDAC adecuados, incluyen 19 derivados de ácido hidroxámico; 2) Acidos Grasos de Cadena Corta (SCFAs); 3) tetrapéptidos cíclicos; 4) benzamidas; 5) cetonas electrofílicas; y/o cualesguier otras clases de compuestos capaces de inhibir a la histona desacetilasa. Ejemplos de dichos inhibidores de HDAC incluyen, pero no se limitan a: A) DERIVADOS DE ACIDO HIDROXAMICO tales como el ácido suberoilanilida hidroxámico (SAHA) (Richon y colaboradores, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 95, 3003-3007 (1998)); Bishidroxamida del Acido M-Carboxicinámico (CBHA) (Richon y colaboradores, supra) ; análogos de tricostatina tales como Tricostatina A (TSA) y Tricostatina C (Koghe y colaboradores, 1998. Biochem. Pharmacol. 56: 1359-1364); Acido Salicilbromidrico (SBHA) (Andrews y colaboradores, International J. Parasitology 30, 761-768 (2000) ) ; Acido Azelaico Bishidroxámico (ABHA) (Andrews y colaboradores, supra) ; Azelaic-l-Hidroxamato-9-Anilida (AAHA) ( (Qiu y colaboradores, Mol. Biol. Cell 11, 2069-2083 (2000)); Acido 6- (3- Clorofenilureido) crapoico Hidroxámico (3C1-UCHA) , Oxamflatina [(2E)- 5- [3- [ (fenilsubinil) amino-fenil]- pent-2-en-4-inonidroxámico ( im y colaboradores Oncogene, 18: 2461-2470 (1999)); A-161906, Scriptaid (Su y colaboradores, 2000 Cáncer Research, 60: 3137-3142); PXD-101 (Prolifux) ; LAQ-824; CHAP; M 2796 (Andrews y colaboradores, supra) ; y MW2996 (Andrews y colaboradores, supra) . B) TETRAPEPTIDOS CICLICOS tales como Trapoxina A (TPX) -Tetrapéptido Cíclico (ciclo- (L-fenilalanil- L-fenilalanil- D- pipecolinil- L- 2- amino- 8- oxo, 9, 10-epoxi decanoilo) ) (Kijima y colaboradores, J. Biol. Che . 268, 22429- 22435 (1993)); FR901228 (F 228, Depsipeptide) (Nakajima y colaboradores, Ex. Cell Res. 241, 126- 133 (1998)); FR225497 Cyclic Tetrapeptide (H. Mori y colaboradores, Solicitud de PCT WO 00/08048 (17 de Febrero de 2000)); Apicidin Cyclic Tetrapeptide [ciclo (NO-metil-L- triptofanil- L- isoleucinil- D- pipecolinil- L- 2-amino- 8- oxodecanoilo}] (Darkin- Raltray y colaboradores, Proc. Nati. Acad. Sci. USA Acad. Sci. USA 93, 1314313147 (1996)); Apicidin la, Apicidin Ib, Apicidin Ic, Apicidin lia, y Apicidin Iib (P. Dulski y colaboradores, Solicitud de PCT WO 97/11366); CHAP, HC-Toxin Cyclic Tetrapeptide (Bosch y colaboradores, Plant Cell 7, 1941-1950 (1995)); WF27082 Cyclic Tetrapeptide (Solicitud de PCT WO 98/48825) ; y Clamidocina (Bosch y colaboradores, supra) . C) DERIVADOS DE ACIDOS GRASOS DE CADENA CORTA (SCFA) tales como: Butirato de Sodio (Cousens y colaboradores, J. Biol. Chem. 254, 1716- 1723 (1979)), Isovalerato (McBain y colaboradores, Biochem. Pharm. 53: 1357-1368 (1997)); Valerato (Me Bain y colaboradores, supra) ; 4- fenil butirato (4-PBA) (Lea y Tulsyan, Anticance-r Research, 15, 879-973 (1995)); Fenilbutirato (PB) (Wang y colaboradores, Cáncer Research, 59, 2766-2799 (1999) ) ; Propionato (Me Bain y colaboradores, supra) ; Butiramida (Lea y Tulsyan, supra) ; Isobutiramida (Lea y Tulsyan, supra) ; Fenilacetato (Lea y Tulsyan, supra) ; 3- Bromopropionato (Lea y Tulsyan, supra) ; Tributirin (Guan y colaboradores, Cáncer Research, 60, 749-755 (2000)); Acido Valproico y Valproato . D) DERIVADOS DE BENZ MIDA tales como CI-994; MS-27-275 [N- (2- aminofenil)- 4- [N- piridin- 3- il metoxicarbonil) aminoetil] benzamida] (Saito y colaboradores, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 96, 4592- 4597 (1999); y derivados de 3'- amino de MS- 27- 275 (Saito y colaboradores, supra) . E) DERIVADOS ELECTROFILIOOS DE CETONA tales como trifluorometil cetonas (Frey y colaboradores, Bioorganic & Med. Chem. Lett. (2002), 12, 3443-3447; ÜS 6,511,990) y a-ceto-amidas tales como N- metil- OÍ- cetoamidas. F) OTROS INHIBIDORES DE HDAC tales como Depudecin (Kwon y colaboradores, 1998. PNAS 95: 3356- 3361. Inhibidores de HDAC basados en ácido hidroxámico preferidos son ácido suberoilanilida hidroxámico (SAHA) , bishidroxamato del ácido m-carboxicinámico (CBHA) y piroxamida. SAHA ha mostrado enlazar directamente en el saco catalítico de la enzima histona desacetilasa. SAHA induce la detención, diferenciación del ciclo celular y/o apoptosis de células transformadas en cultivo e inhibe el crecimiento de tumor en roedores. SAHA es efectivo al inducir estos efectos tanto en tumores sólidos como en cánceres hematológicos . Se ha mostrado que SAHA es efectivo al inhibir el crecimiento de tumor en animales con ninguna toxicidad en el animal. La inhibición del crecimiento de tumor inducida por SAHA está asociada con una acumulación de histonas acetiladas en el tumor. SAHA es efectiva al inhibir el desarrollo y el crecimiento continuo de tumores mamarios (N-metilnitrourea) inducidos por carcinógenos en ratas. SAHA fue administrado a las ratas en su dieta durante los 130 días del estudio. Así, SAHA es un agente antitumor activo oralmente, no tóxico cuyo mecanismo de acción involucra la inhibición de la actividad de la histona acetilasa. SAHA puede ser representada por la fórmula estructural siguiente: La piroxamida, puede ser representada guíente fórmula general: CBHA puede ser representado por la fórmula estructural: En una modalidad, el inhibidor de HDAC puede ser representado por la Fórmula I . en donde ¾ y R2 pueden ser iguales o diferentes; cuando Ri y R2 sean iguales, cada uno es arilamino substituido o no substituido (por ejemplo, piridinamino, 9- purin- 6- amino o tiazololamino) , cicloalquilamino, o grupo piperidino substituido o no substituido; Cuando i y R2 son diferentes Rx = R3- N- R4, en donde cada uno de R3 y R son independientemente iguales o diferentes entre si y son un átomo de hidrógeno, un grupo hidroxilo, un grupo alquilo substituido o no substituido, ramificado o no ramificado, alquenilo, cicloalquilo, arilo, alquiloxi, ariloxi, o grupo arilalquiloxi o R3 y R están enlazados juntos para formar un grupo piperidina, R2 es un grupo hidroxilamino, hidroxilo, amino, alquilamino, dialquilamino o alquiloxi y n es un entero desde aproximadamente 4 a aproximadamente 8; Como tal, en otra modalidad los inhibidores de HDAC usados en el método de la invención pueden ser representados por la Fórmula II: («) en donde cada uno de R3 y R4 son independientemente iguales o diferentes entre si y son un átomo de hidrógeno, un grupo hidroxilo, un alquilo substituido o no substituido, ramificado o no ramificado, alquenilo, cicloalquilo, arilo, alquiloxi, ariloxi o grupo arilalquiloxi, o, 3 y R son enlazados juntos para formar un grupo piperidina, R2 es un grupo hidroxilamino, hidroxilo, amino, alquilamino, dialquilamino, o alquiloxi y n es un entero desde aproximadamente 4 a aproximadamente 8. En una modalidad particular de Fórmula II, R2 es un grupo hidroxilamino, hidroxilo, amino, metilamino, dimetilamino, o metiloxi y n es 6. En aún otra modalidad de Fórmula II, R4 es un átomo de hidrógeno, R3 es un fenilo substituido o no substituido y n es 6. En modalidades adicionales de la Fórmula II, R4 es hidrógeno y R3 es una -, ß- o y- piridina. En otras modalidades especificas de la Fórmula II, R4 es un átomo de hidrógeno y R3 es un grupo ciclohexilo; R4, es un átomo de hidrógeno y ¾, es un grupo metoxi; R3 y R4 cada uno, enlazados juntos para formar un grupo piperidina; R4 es un átomo de hidrógeno y R5 es un grupo hidroxilo; R3 y R4 son ambos un grupo metilo y R3 es fenilo y R4 es metilo. Inhibidores de HDAC adicionales adecuados para uso en la presente invención pueden ser representados por la Fórmula estructural III: en donde cada uno de X e Y son independientemente iguales o diferentes entre si y son un grupo hidroxilo, amino o hidroxilamino, un grupo alquiloxi substituido o no substituido, alquilamino, dialquilamino, arilamino, alguilarilamino, alquiloxiamino, ariloxiamino, alquiloxialquilamino, ariloxialquilamino; R es un átomo de hidrógeno, un grupo hidroxilo, alquilo substituido o no substituido, arilalquiloxi, o ariloxi; y cada uno de m y n son independientemente iguales o diferentes entre si y son cada uno un entero desde aproximadamente 0 a aproximadamente 8. En una modalidad particular, el inhibidor de HDAC es un compuesto de Fórmula III, en donde X, Y y R son cada uno idroxilo y tanto m como n son 5. En aún otra modalidad, el compuesto inhibidor de HDAC adecuado para uso en el método de la invención puede estar representado por la Fórmula estructural IV: en donde cada uno de X e Y son independientemente iguales o diferentes entre si y son un grupo hidroxilo, amino o hidroxilamino, un grupo alquiloxi substituido o no substituido, alguilamino, dialquilamino, arilamino, alquilarilamino, alquiloxiamino, ariloxiamino, alquiloxialquilamino o ariloxialquilamino; cada uno de ¾ y R.2, son independientemente iguales o diferentes entre si y son un átomo de hidrógeno, un grupo hidroxilo, un grupo alquilo substituido o no substituido, arilo, alquiloxi, o ariloxi; y cada uno de m, n y o son independientemente iguales o diferentes entre si y son cada uno un entero desde aproximadamente 0 a aproximadamente 8. Otros inhibidores de HDAC adecuados para uso en la invención incluyen compuestos que tienen la Fórmula estructural V: en donde cada uno de X e ? independientemente son iguales o diferentes entre sí y son un grupo hidroxilo, amino o hidroxilamino, un grupo alquiloxisubstituido o no substituido, alguilamino, dialquilamino, arilamino, alquilarilamino, alquiloxiamino, ariloxiamino, alquiloxiamino o ariloxialquilamino; cada uno de Rl y R2 son independientemente iguales o diferentes entre sí y son un átomo de hidrógeno, un grupo hidroxilo, un alquilo substituido o no substituido, arilo, alquiloxi, o ariloxi; y cada uno de m y n son independientemente iguales o diferentes entre sí y son independientemente un entero desde aproximadamente 0 a aproximadamente 8. En una modalidad adicional, inhibidores de HDAC adecuados para uso en el método de la presente invención pueden tener la Fórmula estructural VI: en donde cada uno de X e Y son independientemente iguales o diferentes entre si y son un grupo hidroxilo, amino o hidroxilamino, un grupo alquiloxi substituido o no substituido, alquilamino, dialquilamino, arilamino, alquilarilamino, alquiloxiamino, ariloxiamino, alquiloxialguilamino o ariloxialquilamino; y cada uno de m y n son independientemente iguales o diferentes y son cada uno un entero desde aproximadamente 0 a aproximadamente 8.

En aún otra modalidad, los inhibidores de HDAC útiles en el método de la invención puede tener la Fórmula estructural VII: (Vil) cada uno de X e Y son independientemente entre si iguales o diferentes y son un grupo hidroxilo, amino o hidroxilamino, un grupo alquiloxi substituido o no substituido, alquilamino, dialquilamino, arilamino, alquilarilamino, alquiloxiamino, ariloxiamino, alquiloxialquilamino, ariloxialquilamino; ¾. y 2 son independientemente iguales o diferentes entre si y son un átomo de hidrógeno, un grupo hidroxilo, un grupo alquilo substituido o no substituido, arilalquiloxi, o ariloxi; y cada uno de m y n son independientemente iguales o diferentes entre si y son cada uno un entero desde aproximadamente 0 a aproximadamente 8. En aún una modalidad adicional, inhibidores de HDAC adecuados para uso en la invención pueden tener la Fórmula estructural VIII: (Vffl) en donde cada uno de X e Y son independientemente iguales o diferentes entre si y son un grupo hidroxilo, amino o hidroxilamino, un grupo alquiloxi substituido o no substituido, alquilamino, dialquilamino, arilamino, alquilarilamino, o ariloxialquilamino; y n es un entero desde aproximadamente 0 a aproximadamente 8. Compuestos adicionales adecuados para uso en el método de la invención incluyen los representados por la fórmula IX: en donde cada uno de X e Y son independientemente iguales o diferentes entre si y son un grupo hidroxilo, amino o hidroxilamino, un alquiloxi substituido o no substituido, alquilamino, dialquilamino, arilamino, alquilarilamino, alquiloxiamino, ariloxiamino, alquiloxialquilamino o ariloxialquilamino; Ri y R2 son independientemente entre sí iguales o diferentes entre sí y son un átomo de hidrógeno, un grupo hidroxilo, un grupo alquilo substituido o no substituido, arilo, alquiloxi, ariloxi, carbonilhidroxilamino, o fluoro; y cada uno de m y n son independientemente entre sí iguales o diferentes y son ' cada uno un entero desde aproximadamente 0 a aproximadamente 8. En aún una modalidad adicional, inhibidores de HDAC adecuados para uso en la invención incluyen compuestos que tienen la Fórmula estructural X: (X) en donde cada uno de Ri y R2 son independientemente entre sí iguales o diferentes y son un hidroxilo, alquiloxi, amino, hidroxilamino, alquilamino, dialquilamino, arilamino, alquilarilamino, alquiloxiamino, ariloxiamino, alquiloxialquilamino, o ariloxialquilamino. En una modalidad particular, el inhibidor de HDAC es un compuesto de Fórmula estructural X en donde Rx y R2 son ambos hidroxilamino. En una modalidad adicional inhibidor de HDAC adecuado para uso en la invención la Fórmula estructural XI: (X!) en donde cada uno de ¾ y ?¾ son independientemente entre sí iguales o diferentes y son un grupo hidroxilo, alquiloxi, amino, hidroxilamino, alquilamino, dialquilamino, arilamino, alquilarilamino, alquiloxiamino, ariloxiamino, alquiloxialquilamino o ariloxialquilamino . En una modalidad particular, el inhibidor de HDAC es un compuesto de Fórmula estructural XI en donde ¾ y R2 son ambos hidroxilamino. En una modalidad adicional, inhibidores de HDAC adecuados para uso en la presente invención incluyen compuestos representados por la Fórmula estructural XII: en donde cada uno de R¿ y R2 son independientemente entre si iguales o diferentes y son un idroxilo, alquiloxi, amino, hidroxilamino, alquilamino, dialquilamino, arilamino, alquilarilamino, al uiloxiamino, ariloxiamino, alquiloxialquilamino, o ariloxialquilamino . En una modalidad particular, el inhibidor de HDAC es un compuesto de Fórmula estructural XII en donde Ri y I son ambos hidroxilamino. Compuestos adicionales adecuados para uso en el método de la invención incluyen los representados por la Fórmula estructural XIII: (???) en donde R es un fenilo substituido o no substituido, piperidina, tlazol, 2- piridina, 3- piridina o 4- piridina y n es un entero desde aproximadamente 4 a aproximadamente 8. En aún otra modalidad, los inhibidores de HDAC adecuados para uso en el método de la invención pueden ser representados por la Fórmula estructural (XIV) : (XIV) en donde R es un grupo fenilo substituido o no substituido, piridina, piperidina o tiazol y n es un entero desde aproximadamente 4 a aproximadamente 8 o una sal de los mismos aceptable farmacéuticamente. En una modalidad particular, R es fenilo y n es 5. En otra modalidad, n es 5 y R es 3— clorofenilo . Otros inhibidores de HDAC útiles en la presente invención pueden ser representados por la Fórmula estructural XV: en donde cada uno de Rx y R2 están fijados directamente o por medio de un enlazador y es un grupo hidroxilo, substituido o no substituido, arilo (por ejemplo, naftilo, fenilo, quinolilo, isoquinolilo o piridilo) , cicloalquilo, cicloalquilamino, piperidino, alquilo ramificado o no ramificado, alquenilo, arilamino, (pi idinamino, 9- purin- 6- amino o tiazolamino) , arilalquilamino, arilalquilo, alquloxi, ariloxi o arilalcoxi; n es un entero desde aproximadamente 3 a aproximadamente 10 y R3 es un ácido hidroxámico, grupo hidroxilamino, hidroxilo, amino, alquilamino o alquiloxi.

El enlazador puede ser una porción amida, -0-, -S-, -NH- o -CH2-- En ciertas modalidades, ¾ es -NH-R4 en donde de un grupo hidroxilo, substituido o no substituido, arilo (por ejemplo, naftilo, fenilo, quinolilo, isoquinolilo o piridilo) , cicloalquilo, cicloalquilamino, piperidino, alquilo ramificado o no ramificado, ' alquenilo, arilamino (por ejemplo piridinamino, 9- purin- 6- amina o tiazolamino) , arilalquilamino, alquiloxi, arilalquilo, ariloxi o arilalquiloxi. Inhibidores de HDAC adicionales y más efectivos de Fórmula XV, incluye aquellos que pueden ser representados por la Fórmula XVI: <XVI) en donde cada uno de R¿ y R2 es un grupo hidroxilo, substituido o no substituido, arilo (por ejemplo, f'enilo, naftilo, quinolinilo, isoquinolinilo o piridilo) , cicloalquilo, cicloalquilamino, piperidino, arilamino (por ejemplo, piridinamino, 9- purin- 6- amino o tiazolamino) , arilalquilamino, alquilo ramificado o no ramificado, alquenilo, alquiloxi, arilal uilo, arilalquilo, ariloxi, o arilalquiloxi; ¾ es ácido hidroxámico, grupo hidroxilamino, hidroxilo, amino, alquilamino, o alquiloxi; R4 es hidrógeno, halógeno, fenilo o una porción cicloalquilo; y A puede ser igual o diferente y representa una porción amida, -O-, -S-, -NR5- o -C¾- en donde R5 es un C1-C5 alquilo substituido o no substituido y n es un entero desde aproximadamente 3 a aproximadamente 10. Por ejemplo, compuestos adicionales que tienen una estructura más especifica en la Fórmula XVI pueden representarse por la Fórmula estructural XVII: donde A es una porción amida, Ri y R2 son cada una seleccionada de grupo arilo substituido y no substituido (por ejemplo, fenilo, naftilo, quinolinilo, isoquinolinilo o piridilo) , arilamino (por e emplo piridinamino, 9-purin- 6- amina o tiazolamino) , arilalquilamino, arilalquilo, ariloxi o arilalquiloxi y n es un entero desde aproximadamente 3 a aproximadamente 10. Por ejemplo, compuestos que tienen una porción amida en A pueden ser representados por la fórmula : En otra modalidad, el inhibidor de HDAC puede tener la Fórmula XVIII: en donde ?? es seleccionado de arilo substituido o no substituido (por ejemplo, fenilo, naftilo, quinolinilo, isoquinolinilo o piridilo) , arilamino (por ejemplo piridinamino, 9- purin- 6- amino o tiazolamino) , arilalquilamino, arilalquilo, ariloxi o arilalquiloxi y n es un entero desde aproximadamente 3 a aproximadamente 10 e Y es seleccionado de o una sal de los mismos aceptable farmacéuticamente. En una modalidad adicional, el compuesto inhibidor de HDAC puede tener la Fórmula XIX: o una sal de los mismos aceptable farmacéuticamente. Compuestos adicionales para uso en la invención pueden ser representados por la Fórmula estructural XX: (XX) en donde 2 es seleccionado de un grupo arilo substituido o no substituido, arilamino (por ejemplo piridinamino, 9- purin- 6- amino o tiazolamino) , arilalquilamino, arilalquilo o ariloxi, arilalquiloxi y n es un entero desde 3 a 10 y R7 es seleccionado de Inhibidores de HDAC adicionales útiles en 1 invención pueden ser representados por la Fórmul estructural XXI: en donde A es una porción amida, Ri y R2 son cada uno seleccionado de un grupo arilo substituido o no substituido, arilamino (por ejemplo, piridinamino , 9-purin- 6- amina o tiazolamino) arilaqu.ilam.ino, arilalquilo, ariloxi o arilalguiloxi, R4 es hidrógeno, un halógeno, un fenilo o una porción cxcloalquxlo y n es un entero desde aproximadamente 3 a aproximadamente 10 o una sal de los mismos aceptable farmacéuticamente. Por ejemplo, un compuesto de Fórmula XXI puede ser representado por la estructura: puede ser representado por la estructura: en donde ¾, R2, R4 y n tienen los significados de la Fórmula XXI . Adicionalmente, inhibidores de HDAC que tienen la Fórmula estructural XXII: en donde L es un enlazador seleccionado del grupo que consiste de -(CH2)n-# -(CH=CH)m, fenil-, -cicloalquil-, o cualquier combinación de los mismos; y en donde cada uno de R-7 y Rs son independientemente grupos arilo substituidos o no substituidos, arilo, arilamino, (por ejemplo, pridinamino, 9- purin- 6- amino o tiazolamino) , arilalquilamino, arilaquilo, ariloxi o arilalquiloxi , n es un entero desde aproximadamente 3 a aproximadamente 10 y m e sun entero desde 0 a 10. Por ejemplo, un compuesto de Fórmula XXII puede ser: Otros inhibidores de HDAC adecuados para uso en la invención incluyen los mostrados en la siguiente fórmula más especifica: en donde n es un entero de 3 a 10 o un enantiómero o, en donde n es un entero de 3 a 10 o un enantiómero o en donde n es un entero de 3 a 10 o un enantiómero o en donde n es un entero de 3 a 10 o un enantiónero. Inhibidores de HDAC específicos adicionales adecuado uso en la invención incluyen en donde n en cada uno es un entero de 3 a 10 y el compuesto Inhibidores de HDAC especificos adicionales incluyen los que pueden ser representados por la Fórmula XXIII en donde Ri es un grupo arilo substituido o no substituido, grupo arilaquilo, grupo arilamino, grupo arilalquilamino, grupo ariloxi,o grupo arilalcoxi y n es un entero de 3 a 10. En una modalidad particular, n es 5 para los compuestos de Fórmula estructural XXIII. En una modalidad específica, el compuesto de Fórmula XXIII está representado por la estructura siguiente: En otra modalidad especifica, el compuesto de Fórmula XXIII está representado por la estructura siguiente: En aún otra modalidad especifica, el compuesto de Fórmula XXIII está representado por la estructura siguiente : En aún otra modalidad especifica, el compuesto de Fórmula XXIII está representado por la estructura siguiente : Inhibidores de HDAC específicos adicionales incluyen los que pueden ser representados por la Fórmula XXIV: en donde Q es un grupo quinolinilo o isoquinolinilo substituido o no substituido y n es un entero de 3 a 10. En una modalidad particular, n es 5 para los compuestos de Fórmula estructural XXIV. En una modalidad especifica, el compuesto de Fórmula XXIV está representado por la estructura siguiente: Inhibidores de HDAC específicos adicionales incluyen que pueden ser representados por la Fórmula XXV: en donde Qi y Q2 son independientemente un grupo quinolinilo o isoquinolinilo substituidos o no substituidos y n es un entero de aproximadamente 3 a aproximadamente 10. En una modalidad particular, n es 5 para los compuestos de Fórmula estructural XXV: En una modalidad especifica, el compuesto de Fórmula XXV está representado por la estructura siguiente: Inhibidores de HDAC específicos adicionales incluyen que pueden ser representados por la Fórmula XXVI: en donde ¾ es un arilalquilo, R2 es un grupo arilo substituido o no substituido, grupo arilalquilo, grupo arilamino, grupo ari1alquilamino, grupo ariloxi o grupo arilalcoxi, A es una amida y n es un entero de 3 a 10. En una modalidad particular, n es 5 para los compuestos de Fórmula estructural XXVI . En una modalidad especifica, el compuesto de Fórmula XXV está representado por la estructura siguiente: En una modalidad especifica, el compuesto de Fórmula XXV está representado por la estructura siguiente: En una modalidad especifica, el compuesto de Fórmula XXV está representado por la estructura siguiente: Otros ejemplos de dichos compuestos y otros inhibidores de HDAC pueden encontrarse en las Patentes US Nos. 5,369,108, emitida el 29 de Noviembre de 1994, 5,700,811, emitida el 23 de Diciembre de 1997, 5,773,474, emitida el 30 de Junio de 1998, 5,932616 emitida el 3 de Agosto de 1999 y6, 511, 990, emitida el 28 de Enero de 2003 todas de Breslow y colaboradores; Patentes US Nos. 5,055,608, emitida el 8 de Octubre de 1991, 5,175,191, emitida el 29 de Diciembre de 1992 y 5,608,108, emitida el 4 de Marzo de 1997 todas de Marks y colaboradores; Solicitud Provisional US No. 60/459,826, presentada el 1 de abril de 2003 a nombre de Breslow y colaboradores; asi como también, Yoshida M. y colaboradores, Bioassays 17, 423-430 (1995); Saito, A. y colaboradores, PNAS USA 96, 4592- 4597, (1999); Furamai R. y colaboradores, PNAS USA 98 (1), 87-92 (2001); Komatsu, Y., y colaboradores, cáncer Res. 61(11), 4459- 4466 (2001); Su, G. H., y colaboradores, Cáncer Res. 60, 3137- 3142 (2000) ; Lee, B.I. y colaboradores, Cáncer Res. 61 (3), 931-934; Suzuki, T. y colaboradores, J. Med. Cñem. 42 (15), 3001- 3003 (1999) ; Solicitud de PCT publicada WO 01/18171 publicada el 15 de Marzo de 2001 de Sloan-Kettering Institute dor Cáncer Research and The Trustees of Columbia University; Solicitud de PCT publicada WO 02/246144 de Hoffmann-La Roche; Solicitud de PCT publicada WO 02/22577 de Novartis; Solicitud de PCT publicada No. WO 02/30879 de Prolifix; Solicitudes de PCT publicadas WO 01/38322 (publicada el 31 de Mayo de 2001), WO 01/70675 (publicada el 27 de Septiembre de 2001) y WO 00/71703 (publicada el 30 de Noviembre de 2000) y WO 00/71703 (publicada el 30 de Noviembre de 2000) todos de Methylgene, Inc.; Solicitud de PCT publicada WO 00/21979 publicada el 8 de Octubre de 1999 de Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd.; Solicitud de PCT publicada WO 98/40080 publicada el 11 de Marzo de 1998 de beacon Laboratories, L. L. C; y Curtin M. (status actual de la patente de inhibidores de histona desacetilasa Expert. Opin. Ther. Patents (2002) 12 (9) : 1375-1384 y referencias citadas en la presente) . Ejemplos específicos no limitantes de inhibidores de HDAC se proporcionan en la Tabla siguiente. Se observará que la presente invención abarca cualesquier compuestos que son similares estructuralmente a los compuestos representados a continuación, y que son capaces de inhibir las histonas desacetilasas .

Título MS-275 DEFINICIONES Un "grupo alifático" es no aromático, consiste solamente de carbono e hidrógeno y puede opcionalmente contener una o más unidades de insaturación, por ejemplo, dobles y/o triples enlaces. Un grupo alifático puede ser de cadena recta, ramificada o cíclica. Cuando es de cadena recta o ramificada, un grupo alifático contiene típicamente entre aproximadamente 1 y aproximadamente 12 átomos de carbono, más típicamente entre aproximadamente 1 y aproximadamente 6 átomos de carbono. Cuando es cíclico, un grupo alifático, típicamente contiene entre aproximadamente 3 y aproximadamente 10 átomos de carbono, más típicamente entre aproximadamente 3 y aproximadamente 7 átomos de carbono. Los grupos alifáticos son preferiblemente grupos C1-C12 alquilo de cadena recta o ramificada (por ejemplo, grupos alif ticos completamente saturados) , más preferiblemente grupos alquilo de cadena recta o ramificada. Los ejemplos, incluyen metilo, etilo, n- propilo, iso-propilo, n- butilo, sec- butilo y ter-butilo. Un "grupo aromático" (también mencionado como un "grupo arilo") como se usa en la presente incluye grupos aromáticos carbocíclicos, grupos aromáticos heterocíclicos (también mencionados como "heteroarilos") y sistemas anulares aromáticos policíclicos fusionados como se definieron anteriormente . Un "grupo aromático carbocíclico" es un anillo aromático de 5 a 14 átomos de carbono, e incluye un grupo aromático carbocíclico fusionado con un grupo cicloalquilo de 5- o de 6- elementos, tales como indano. Ejemplos de grupos aromáticos carbocíclicos incluyen, pero no s elimitan a fenilo, naftilo, por ejemplo, 1- naftilo y 2-naftilo; antracenilo, por ejemplo, 1- antracenilo, 2-antracenilo; fenantrenilo; fluornonilo, por ejemplo 9-fluornonilo, indanilo y los similares. Un grupo aromático carboclclico es substituido opcionalmente con un númerodeterminado de substituyentes, descritos posteriormente . Un "grupo aromático heterociclico" (o "heteroarilo") es un anillo aromático monociclico, biciclico o triciclico de 5- a 14- átomos de carbono en el anillo y de uno a cuatro heteroátomos seleccionados de 0, N, o S. Ejemplos de heteroarilo incluyen, pero no se limitan a piridilo, por ejemplo, 2- piridilo (también mencionado COICKS " -piridilo, 3- piridilo (también mencionado como ß-piridilo) y 4- piridilo (también mencionado como ?-piridilo) ; tienilo, por ejemplo, 2- tienilo y 3-tienilo; furanilo, por ejemplo, 2- furanilo y 3- furanilo; pirimidilo, por ejemplo, 2- pirimidilo y 4- pirimidilo; imidazolilo, por ejemplo, 2- imidazolilo; piranilo, por ejemplo 2- piranilo y 3 piranilo; pirazolilo,. por ejemplo 4- pirazolilo y 5- pirazolilo; tiazolilo, por ejemplo, 2-tiazolilo, 4- tiazolilo y 5- tiazolilo; tiadiazolilo; isotiazolilo; oxazolilo, por ejemplo, 2- oxazoilo, 4-oxazoilo y 4- oxazoilo y 5- oxazoilo; isoxazoilo; pirrolilo, piridazinilo; pirazinilo y los similares. Aromáticos heterocíclicos (o heteroarilos) como se definieron anteriormente pueden ser substituidos opcionalmente con un número determinado de substituyentes, como se describe posteriormente para grupos aromáticos.

Un sistema anular "aromático policíclico fusionado" es un grupo aromático carbociclico o heteroarilo fusionado con uno o más anillos heterociclicos no aromáticos o heteroarilo. Los ejemplos incluyen, quinolinilo e isoquinolinilo, por ejemplo 2- quinolinilo, 3-quinolinilo, 4- quinolinilo, 5- quinolinilo, 6-quinolinilo, 7- quinolinilo y 8- quinolinilo, 1-isoquinolinilo, 3- quinolinilo, 4- isoquinolinilo, 5-isoquinolinilo, 6- isoquinolinilo, 7- isoquinolinilo, 7-isoquinolinilo y 8- isoquinolinilo; benzofuranilo por ejemplo, 2- benzofuranilo y 3- benzofuranilo; dibenzofuranilo; por ejemplo, 2, 3- dihidrobenzofuranilo; dibenzotiofenilo; benzotienilo, por ejemplo, 2-benzotienilo; indolilo, por ejemplo, 2- indolilo y 3-indolilo; benzotiazolilo, por ejemplo, 2- benzotiazolilo; benzooxazolilo, por ejemplo, 2- benzooxazolilo; bencimidazolilo, por ejemplo, 2- benzoimidazolilo; isoindolilo, por ejemplo, 1- isoindolilo y 3- isoindolilo; benzotriazolilo; purinilo; tianaftenilo y los similares. Sistemas anulares aromáticos policiclicos fusionados pueden opcionalmente ser substituidos con un número determinado de substituyentes, como se describe en la presente . Un "grupo aralquilo" (arilalquilo) es un grupo alquilo substituido con un grupo aromático, preferiblemente un grupo fenilo. Un grupo aralquilo preferido es un grupo bencilo. Se describen en la presente grupos aromáticos adecuados y se describen en la presente grupos alquilo adecuados. Se describen en la presente substituyentes adecuados para un grupo aralquilo. Un "grupo aralquilo" es un grupo arilo que está fijado a un compuesto vía un oxigeno (por ejemplo, fenoxi) . Un "grupo alcoxi" (alquiloxi) , como se usa en la presente, es un grupo C3-Ci2 alquilo cíclico o C1-C12 ramificado que está conectado a un compuesto vía un átomo de oxígeno. Ejemplos de grupos alcoxi incluyen pero no se limitan a metoxi, etoxi y propoxi. Un "grupo arilalcoxi" (arilalquiloxi) es un grupo arilalquilo que está fijado a un compuesto vía un oxígeno sobre la porción alquilo del aralquilo (por ejemplo, fenilmetoxi) . Un "grupo arilamino" como se usa en la presente, es un grupo arilo que está fijado a un compuesto vía un nitrógeno . Como se usa en la presente, un "grupo arilalquilamino" es un grupo arilalquilo que está fijado a un compuesto vía un nitrógeno sobre la porción alquilo del arilalquilo . Como se usa en la presente, se mencionan muchas porciones o grupos como que son ya sea "substituidos o no substituidos" . Cuando se menciona una porción como substituida, se denota cualquier parte de la porción que es conocida por los expertos, en la materia como que está disponible para substitución y puede ser substituida. Por ejemplo, el grupo substituible puede ser un átomo de hidrógeno que es reemplazado con un grupo diferente de hidrógeno (es decir, un grupo substituyente) .Pueden estar presentes múltiples grupos substituyentes . Cuando están presentes grupos substituyentes múltiples, los substituyentes pueden ser iguales o diferentes y la substitución puede ser en cualquiera de los sitios substituibles. Dichos medios de substitución son bien conocidos en el arte. Para propósitos de ejemplificación, la cual no se construye como limitante del alcance de esta invención, algunos ejemplos de grupos que son substituyentes son: grupos alquilo (los cuales pueden también ser substituidos, con uno o más substituyentes, tales como CF3) , grupos alcoxi (los cuales pueden ser substituidos, tales como 0CF3) , un halógeno o grupo halo (F, Cl, Br, I) , hidroxi, nitro, oxo, -CN, -C00H, amino, azido, N-alquilamino o N, N- dialquilamino (en el cual los grupos alquilo pueden también ser substituidos), ésteres (-CO(O)-OR, donde R puede ser un grupo tal como alquilo, arilo, etc., el cual puede ser substituido), arilo (mayormente se prefiere que sea fenilo, el cual puede ser substituido) , arilalquilo (el cual puede ser substituido) y ariloxi. ESTEREOQUIMICA Existen muchos compuestos orgánicos en formas activas ópticamente que tienen la habilidad de girar el plano de la luz polarizada plana. Al describir un compuesto activo ópticamente, los prefijos D y L o R y S se usan para denotar la configuración absoluta de la molécula aproximadamente su centro (s) quiral(es). Los prefijos d y l o (+) o (-) se emplean para designar el signo de rotación de la luz polarizada plana por el compuesto, con (-) o quiere decir que el compuesto es levorotatorio . Un compuesto con el prefijo (+) o de es dextrorotatorio . Para una estructura química dada, estos compuestos, llamados estereoisómeros, son idénticos excepto que son imágenes en espejo que no pueden superponerse entre sí. Un estereoisómero puede también ser mencionado como un enantiómero, y una mezcla de dichos isómeros es menudo llamada mezcla enantiomérica. Una mezcla 50:50 de enantiómeros es mencionada como una mezcla racémica. Muchos de los compuestos. Muchos de los compuestos descritos en la presente pueden tener uno o más centros quirales y por consiguiente pueden existir en diferentes formas enantioméricas . Si se desea, un carbono quiral puede ser designado con un asterisco (*) . Cuando está enlazado al carbono quiral se presenta con lineas rectas en las fórmulas de la invención, se comprende que las configuraciones (R) y (S) del carbono quiral y por consiguiente ambos enantiómeros y mezclas de los mismos, están abarcados en la fórmula. Como se usa en el arte, cuando se desea especificar la configuración absoluta acerca de un carbono quiral, uno de los enlaces al carbono quiral puede ser representado como un prisma triangular (enlazado a átomos sobre el plano) y los otros pueden ser representados como una serie de o prismas triangulares de lineas paralelas cortas que son enlazados a átomos debajo del plano. El sistema de Cahn-Inglod-Prelog puede usarse para asignar la configuración (R) o (S) a un carbono quiral. Cuando los inhibidores de HDAC de la presente invención contienen un centro quiral, los compuestos existen en dos formas enantioméricas y la presente invención incluye tanto enantiómeros como mezclas de enantiómeros, tales como la mezcla 50:50 especifica mencionada como unas mezclas racémicas. Los enantiómeros pueden ser resueltos por medio de métodos conocidos por los expertos en la materia, por ejemplo por medio de la formación de sales diastereoisoméricas que pueden ser separadas, por ejemplo, por cristalización (ver CRC Handbook of Optical Resolutions via Diastereomeric Salts Formation por David Kozma (CRC Press, 2001) ) ; formación de derivados o complejos disatereoisoméricos que pueden ser separados, por ejemplo, por cristalización, por cromatografía líquida o gas- líquido; por reacción selectiva de un enantiómero con un reactivo específico de enantiómero, por ejemplo por esterificación enzimática; o cromatografía líquida o gas-líquido en un ambiente quiral, por ejemplo sobre un soporte quiral por ejemplo sílice con un ligando quiral enlazado o en la presencia de un solvente quiral. Se apreciará que donde el enatiómero deseado es convertido en otra entidad química por medio de uno de los procedimientos de separación descritos anteriormente, se requiere una etapa adicional para liberar la forma enantiomérica deseada. Alternativamente, pueden sintetizarse enantiómeros específico por medio de síntesis asimétrica usando reactivos, substratos, catalizadores o solventes activos ópticamente o por medio de la conversión de un enantiómero en otro por medio de transformación asimétrica. La designación de una configuración absoluta específica en un carbono quiral de los compuestos de la invención se comprende como que la forma enantiomérica designada de los compuestos está en exceso enantiomérico (ee) o en otras palabras está substancialmente libre de los otros enantiómeros . Por ejemplo, las formas "R" de los compuestos están substancialmente libres de las formas "S" de los compuestos y están asi, en exceso enantiomérico de las formas WS". Inversamente, las formas "S" de los compuestos están substancialmente libres de formas WR" de los compuestos y están asi, en exceso enantiomérico de las formas WR". Exceso enantimérico como se usa en la presente, es la presencia de enantiómeros en más de 50 %. Por ejemplo, el exceso enantiomérico puede ser de aproximadamente 60 % o más, tal como 70 % o más, por ejemplo, aproximadamente 80 % o más, tal como aproximadamente 90 % o más . En una modalidad particular, cuando una configuración absoluta especifica es designada, el exceso enantiomérico de los compuestos representados es de al menos aproximadamente 90 %. En una modalidad más particular, el exceso enantiomérico de los compuestos es de al menos aproximadamente 95 %, tal como al menos 97.5 %, por ejemplo, al menos 99 % de exceso enantiomérico. Cuando un compuesto de la presente invención tiene dos o más carbonos quirales puede tener más de dos isómeros ópticos y puede existir en formas diastereoisoméricas . Por ejemplo, cuando hay dos carbonos quirales, el compuesto puede tener hasta 4 isómeros ópticos y 2 pares de enantiómeros ((S,S)/(R,R) y (R,S)/S,R)). Los pares de enantiómeros (por ejemplo (S,S)/(R,R) son estereoisómeros de imagen en espejo entre sí. Los estereoisómeros que no son imágenes en espejo (por ejemplo (S,S) y (R,S)) son diastereoisómeros . Los pares diastereoisoméricos pueden ser separados por medio de métodos conocidos por los expertos en la materia, por ejemplo, cromatografía o cristalización y los enantiomeros individuales en cada par pueden ser separados como se ¦ describió anteriormente. La presente invención incluye cada uno de los diatereoisómeros de dichos compuestos y mezclas de los mismos. Como se usa en la presente "un", "uno" y "el, la" se refieren al singular y al plural a menos que el contexto dicte claramente otra cosa. Asi, por ejemplo, la referencia a "un agente activo" o "un agente activo farmacológicamente" incluye un solo agente activo así como también dos o más agentes activos diferentes en combinación, la referencia a "un portador" incluye mezclas de dos o más portadores así como también un solo portador, y los similares. Los compuestos activos descritos pueden, como se hizo notar anteriormente, ser preparados en la forma de sus sales aceptables farmacéuticamente. Las sales aceptables farmacéuticamente son sales que retienen la actividad biológica deseada del compuesto generador y no imparte efectos toxicológicos indeseables. Ejemplos de dichas sales son (a) sales de adición de ácido formadas con ácidos inorgánicos, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido bromhidrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido nítrico y los similares; y sales formadas con ácidos inorgánicos tales como, por ejemplo, ácido acético, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido succinico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido glucónico, ácido cítrico, ácido málico, ácido ascórbico, ácido benzoico, ácido tánico, ácido palmítico, ácido algínico, ácido poliglutámico, ácido naftalensulfónico, ácido metansulfónico, ácido p-toluensulfónico, ácido naftalendisulfónico, ácido poligalacturónico, y los similares; (b) sales formadas de aniones elementales tales como cloro, bromo y yodo, y (c) sales derivadas de bases, tales como sales de amonio, sales de metales alcalinos tales como las de sodio y potasio, sales de metales alcalino térreos tales como las de calcio y de magnesio, y sales con bases orgánicas tales como diciclohexilamina, N- metil- D- glucamina, isopropilamina, trimetilamina, 3- etilamino etanol, histidina, procaína, y los similares. Los compuestos activos descritos pueden, como se hizo notar anteriormente, ser preparados en la forma de sus hidratos, tales como hemihidrato, monohidrato, dihidrato, trihidrato, tetrahidrato y los similares. Se pretende también que esta invención abarque pro- fármacos de los inhibidores de HDAC descritos en la presente. Un profármaco de cualquiera de los compuestos puede ser elaborado usando técnicas farmacológicas bien conocidas . Se pretende que esta invención, además de los compuestos enlistados anteriormente, abarque el uso de homólogos y análogos de dichos compuestos . En este contexto, homólogos son moléculas que tienen similaridades estructurales substanciales a los compuestos descritos anteriormente y análogos son moléculas que tienen similaridades biológicas indiferentemente de las similaridades estructurales. TERAPIA DE RADIACION Las terapias de radiación que son adecuadas para uso en los tratamientos en combinación descritos en la presente, incluyen el uso de a) radiación de haces externos; y b) un agente radiofarmacéutico que comprende un radioisótopo emisor de radiación. RADIACION DE HAZ EXTERNO La terapia por radiación de haces externos para el tratamiento de cáncer usa una fuente de radiación que es externa al paciente, típicamente ya sea un radioisótopo, tal como 60Co, 137Cs/ o una fuente de rayos X de alta energía, tal como un acelerador lineal. La fuente externa, produce un haz colimado dirigido al paciente en el sitio del tumor. La terapia de radiación de fuente externa evita algunos de los problemas de la terapia de radiación de fuente interna, pero es indeseable y necesariamente irradia a un volumen significativo de tejido saludable no tumoral en la trayectoria del haz de radiación junto con el tejido tumoral. El efecto adverso de irradiar el tejido saludable puede reducirse, mientras que se mantenga una dosis dada de radiación en los tejidos tumorales, al proyectar el haz de radiación externa en el paciente a una variedad de ángulos "articulados" con los rayos convergentes en el sitio del tumor. Los elementos de volumen particular de tejido saludable, a lo largo de la trayectoria del haz de radiación, cambian, reduciendo la dosis total en cada uno de dichos elementos de tejido saludable durante el tratamiento completo . La irradiación de tejido saludable también puede ser reducida por colimación hermética del haz de radiación en la sección transversal general del tumor tomada perpendicular al eje del haz de radiación. Existen numerosos sistemas para producir una colimación circunferencial tal, algunos de los cuales usan múltiples compuertas deslizantes, las cuales por tramos, pueden generar una máscara opaca a las radiaciones de contorno arbitrario.

AGENTES RADIQFARMRCEUTICOS Un "agente radiofarmacéutico", como se define en la presente, se refiere a un agente farmacéutico que contiene al menos un radioisótopo emisor de radiación. Los agentes radiofarmacéuticos son usados rutinariamente en medicina nuclear para el diagnóstico y/o la terapia de varias enfermedades. El agente farmacéutico radiomarcado, por ejemplo, un anticuerpo radiomarcado, contiene un radioisótopo (RI) el cual sirve como la fuente de radiación. Como se contempla en la presente el término "radioisótopo" incluye radiosiótopos metálicos y no metálicos. El radioisótopo es seleccionado con base en la aplicación médica de los agentes farmacéuticos radiomarcados . Cuando el radioisótopo es un radioisótopo metálico, se emplea un secuestrante para enlazar al radiosiótopo metálico al resto de la molécula. Cuando el radioisótopo es un radioisótopo no metálico, el radiosiótopo no metálico típicamente es enlazado de manera directa, o vía un enlazador, al resto de la molécula. Como se usa en la presente un "radioisótopo metálico" es cualquier radioisótopo metálico adecuado útil en un procedimiento de diagnóstico o terapéutico in vivo o in vitro. Los radioisótpos metálicos incluyen, pero no se limitan a: Actinio-225, Antimonio-124, antimonio-125, Arsénico-74, Bario-103, Bario-140, Berilio-7, Bismuto-206, Bismuto-207, Bismuto-212, Bismuto-213, Cadmio-109, Cadmio-115m, Calcio-45, Cerio-139, Cerio-141, Cerio-144, Cesio-137, Cromo-51, Cobalto-55, Cobalto-56, Cobalto-57, Cobalto-58, Cobalto-60, Cobalto-64, Cobre-60, Cobre-62, Cobre-64, Cobre-67, Erbio-169, Europio-152, Galio-64, Galio-67, Galio-68, Gadolinio-153, Gadolinio-157 , Oro-195, Oro-199, Hafmio-175, Hafmio-175-181, Holmio-166, Indio- 110, Indio-111, Iridio-192, Hierro-55, Hierro-59, Kriptonio-85, Plomo-203, Lutetio-177, Manganeso-54, Mercurio-197, Mercurio-203, Molibdeno-99, Neodinio-147, Neptunio-237, Niquel-63, Niobio-95, Osmio-185+191, Paladio-103, Paladio-109, Platino-195m, Praseodinio-143, Prometio-147, Prometio-149, Protactinio-233, Radio-226, Renio-186, Renio-188, Rubidio-86, R tenio-97, Rutenio-103, Rutenio-105, Ruteni-106, Samario-153, Escandio-44, Escandio-46, Escandio-47, Selenio-75, Plata-llOm, Plata- 111, Sodio-22, Estroncio-85, estroncio-89, Estroncio-90, Azufre-35, Tantalio-12, Tecnetio-99m, Telurio-125, Telurio-132, Talio-204, Torio-228, Torio-232, Talio-170, Estaño-113, estaño-114, Estaño-117m, Titanio-44, Tungsteno-185, Vanadio-48, Vanadio-49, Yterbio-169, Ytrio-86, Ytrio-88, Ytrio-90, Ytrio-91, Zinc-65, Zirconio-89, y Zirconio-95. Como se usa en la presente, un "radioisótopo no metálico" es cualquier radioisótopo no metálico adecuado (radioisótopo no metálico) útil en un procedimiento de diagnóstico o terapéutico in vivo o ín vitro. Los radioisótopos no metálicos adecuados incluyen, pero no se limitan a: Yodo-113, Yodo-125, Yodo-123, Fósforo-32, Astatina-211, Flúor-18, Carbono-11, Oxigeno-15, Bromo-76, y Nitrógeno-13. Identificar el isótopo más apropiado para radioterapia requiere ponderar una variedad de factores . Estos incluyen la captación y retención del tumor, eliminación de la sangre, velocidad de liberación de la radiación, actividad especifica y vida media del radioisótopo, y la factibilidad de la producción en gran escala del radioisótopo de una manera económica. El punto clave para un producto radiofarmacéutico terapéutico es liberar la cantidad requerida de dosis de radiación en las células tumorales y lograr un efecto tumoricida y citotóxico mientras no causen efectos colaterales inmanejables. Se prefiere que la vida media física del radiosótopo terapéutico sea similar a la vida media biológica del producto radiofarmacéutico en el sitio del tumor. Por ejemplo, si la vida media del radioisótopo es demasiado corta, mucha de la decadencia ocurrirá antes de que el radiofarmacéutico haya alcanzado la proporción de fondo/ objetivo máximo. Por otro lado, tiempo de vida demasiado prolongado causarla dosis de radiación innecesarias en tejidos normales. De manera ideal, el radioisótopo tendría una vida media suficientemente prolongada para alcanzar una velocidad de dosis mínima e irradiar a todas las células durante las fases más sensibles de radiación del ciclo celular. Además, la vida media de un radioisótopo sido suficientemente larga para permitir el tiempo adecuado para fabricación, liberación, y transporte. Otras consideraciones prácticas al seleccionar un radioisótopo para una aplicación dada en terapia de tumor son la disponibilidad y la calidad. La pureza ha de ser suficiente y reproducible, ya que cantidades en trazas de impurezas pueden afectar la pureza radioquímica y el radiomarcado del producto radiofarmacéutico . Los sitios receptores objetivo en tumores son típicamente de número limitado. Como tal, se prefiere que el radioisótopo tenga actividad específica alta. La actividad específica depende primeramente del método de producción. Los contaminantes metálicos en trazas deben de ser minimizados cuando a menudo compiten con el radioisótopo por el secuestrante y sus complejos metálicos compiten por el enlace del receptor con el agente secuestrante radiomarcado. El tipo de radiación que es adecuado para uso en los métodos de la presente invención puede variar. Por ejemplo, la radiación puede ser de naturaleza electromagnética o en forma de partículas. La radiación electromagnética útil en la práctica de esta invención incluye, pero no se limita a, rayos X y rayos gama. La radiación en forma de partículas útil en la práctica de esta invención incluye, pero no se limita a, haces de electrones (partículas beta) , haces de protones, haces de neutrones, partículas alfa, y mesones pi negativos. La radiación puede ser liberada usando equipo y métodos de tratamiento radiológico convencional, y por métodos estereotácticos e intraoperativos . La discusión adicional que concierne a tratamientos por radiación adecuados para uso en la práctica de esta invención puede encontrarse en Steven A. Leibel y colaboradores, Textbook of Radiation Oncology (1998) (publ. W. B. Saunders Company) , y particularmente en los Capítulos 13 y 14. La radiación puede también ser liberada por medio de otros métodos tales como liberación objetivo, por ejemplo por medio de "simientes" radioactivas, o por medio de liberación generalizada de conjugados radioactivos objetivo J. Pada er y colaboradores, Combined Treatment with Radioestradiol lucanthone in Mouse C3HBA Mammary Adenocarcinoma and with Estradiol lucanthonein an Estrogen Bioassay, Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys . 7: 347-357 (1981) . Pueden usarse en la práctica de esta invención, otros métodos de liberar radiación. Para terapia tumoral, se han investigado tanto emisores de partículas a como ß. Las partculas alfa son particularmente buenos agentes citotóxicos porque disipan una gran cantidad de energía en uno o dos diámetros celulares. Los emisores de de partículas beta tienen un intervalo de penetración relativamente largo (2 - 12 mm en el tejido) dependiendo del nivel de energía. La penetración de intervalo largo es particularmente importante para tumores sólidos que tengan flujo sanguíneo y/o expresión del receptor heterogéneos. Los emisores de partículas beta producen una distribución de dosis más homogénea aún cuando son distribuidos heterogéneamente en el tejido objetivo. MODALIDADES ? DOSIS DE ADMINISTRACION Los métodos de la presente invención comprenden administrar a un paciente en necesidad del mismo una primera cantidad de un inhibidor de histona desacetilasa en un primer procedimiento de tratamiento, y una segunda cantidad o dosis de radiación en un segundo procedimiento de tratamiento. La primera y segunda cantidades juntas comprenden una cantidad efectiva terapéuticamente. "Paciente", como se usa el término en la presente, se refiere al recipiente del tratamiento. Se incluyen pacientes mamíferos y no mamíferos. En una modalidad especifica el paciente es un mamífero, tal como humano, canino, roedor, felino, bovino, ovino, porcino o caprino. En una modalidad particular, el paciente es un humano. ADMINISTRACION DEL INHIBIDOR DE HDAC Los inhibidores de HDAC de la invención pueden ser administrados en la forma oral, como tabletas, cápsulas, (cada una de las cuales incluye liberación sostenida o formulaciones de liberación cronometrada) , pildoras, polvos, granulos, elíxires, tinturas, suspensiones, jarabes, y emulsiones. De manera similar, los inhibidores de HDAC pueden ser administrados en forma intravenosa (bolus o infusión) , intraperitoneal, subcutánea, o intramuscular, formas bien conocidas y usadas por los expertos en las artes farmacéuticas. Los inhibidores de HDAC pueden ser administrados en la forma de una preparación de implante o inyección en depósito que puede ser formulada de una manera tal que permita una liberación sostenida del ingrediente activo'. El ingrediente activo puede ser comprimido en compactados o en pequeños cilindros e implantado subcutánea o intramusculármente como inyecciones o implantes en depósito. Los implantes pueden emplear materiales inertes tales como polímeros biodegradables o silicios sintéticos, por ejemplo, Silactic, caucho de silicio u otros polímeros fabricados por Dow-Corning Corporation.

El inhibidor de HDAC puede también ser administrado en la forma de sistemas de liberación de liposomas, tales como pequeñas vesículas unilaminares, grandes vesículas unilaminares y vesículas multilaminares . Los liposomas pueden formarse de una variedad de fosfolípidos, tales como colesterol, estearilamina o fosfatidilcolinas . Los inhibidores de HDAC pueden también ser liberados por medio del uso de anticuerpos monoclonales como portadores individuales en donde se acoplan las moléculas del compuesto. Los inhibidores de HDAC pueden también ser preparados con polímeros solubles como portadores de fármacos de importancia para considerarlos como objetivo. Dichos polímeros pueden incluir polivinilpirrolidona, copolímero de piran, polihidroxi- propil- metacrilamida- fenol, polihidroxietil- aspartamida- fenol, óxido de polietileno-polilisina substituido con residuos palmitoilo. Además, los inhibidores de HDAC pueden ser preparados con polímeros biodegradables útiles para lograr liberación controlada de un fármaco, por ejemplo, ácido poliláctico, ácido poliglicólico , copolímeros de ácidos poliláctico y poliglicólico, poliépsilon caprolactona, ácido polihidroxi butírico, poliortoésteres, poliacteales, polihidropiranos, policianoacrilatos y copolímeros de hidrogeles en bloque anfipáticos o reticulados.

El régimen de dosificación que utiliza los inhibidores de HDAC pueden ser seleccionados de conformidad con una variedad de factores que incluyen tipo, especie, edad, peso, sexo, y el tipo de cáncer que es tratado; la severidad (por ejemplo, la etapa) del cáncer a ser tratado; la ruta de administración; la función renal y hepática de los pacientes; y el compuesto particular o sal del mismo empleados. Un médico o veterinario experto, pueden determinar fácilmente y prescribir la cantidad efectiva del fármaco requerido para tratar, por ejemplo, para prevenir, inhibir (total o parcialmente) o detener el progreso de la enfermedad. Las dosificaciones orales de los inhibidores de HDAC, cuando se usan para tratar el cáncer deseado, pueden variar entre aproximadamente 2 mg a aproximadamente 2000 mg por dia, tal como desde aproximadamente 20 mg a aproximadamente 2000 mg por dia, tal como desde aproximadamente 200 mg a aproximadamente 2000 mg por dia. Por ejemplo, las dosificaciones orales pueden ser de aproximadamente 2, aproximadamente 20, aproximadamente 200, aproximadamente 400, aproximadamente 800, aproximadamente 1200, aproximadamente 1600 o aproximadamente 2000 mg por día. Se comprenderá que la cantidad total por dia puede ser administrada en una sola dosis o puede ser administrada en dosificaciones múltiples tais como dos veces, tres o cuatro veces por día. Por ejemplo, un paciente puede recibir entre aproximadamente 2 mg/día a aproximadamente 2000 mg/día, por ejemplo, desde aproximadamente 20-2000 mg/día, tal como desde aproximadamente 200 a aproximadamente 2000 mg/día, por ejemplo desde aproximadamente 400 mg/día a aproximadamente 1200 mg/día. Un medicamento preparado apropiadamente para administración una vez al día puede contener así entre aproximadamente 2 mg y aproximadamente 2000 mg, tal como desde aproximadamente 20 mg a aproximadamente 2000 mg, tal como desde aproximadamente 200 mg a aproximadamente 1200 mg, tal como desde aproximadamente 400 mg/día a aproximadamente 1200 mg/día. Los inhibidores de HDAC pueden ser administrados en una sola dosis o en dosis divididas de dos, tres, o cuatro veces diarias. Para administración dos veces al día, un medicamento preparado adecuadamente deberá contener la mitad de la dosis diaria necesaria. Intravenosa o subcutáneamente, el paciente deberá recibir el inhibidor de HDAC en cantidades suficientes para liberar entre aproximadamente 3 - 1500 mg/m2 por día, por ejemplo, aproximadamente 3, 30, 60, 90, 180, 300, 600, 900, 1200 o 1500 mg/m2 por día. Dichas cantidades pueden ser administradas de numerosas maneras adecuadas, por ejemplo grandes volúmenes de bajas concentraciones del inhibidor de HDAC durante un extenso período de tiempo o varias veces en un día. Las cantidades pueden ser administradas por una o más días consecutivos, días intermitentes o una combinación de éstos por semana (período de 7 días) . Alternativamente, bajos volúmenes de altas concentraciones del inhibidor de HDAC durante un corto período de tiempo, por ejemplo, una vez al día por uno o más días ya sea consecutivamente o bien intermitentemente o una combinación de éstos por semana (período de siete días) . Por ejemplo, una dosis de 300 mg/m2 por día puede ser administrada por cinco días consecutivos para un total de 1500 mg/m2 por tratamiento. En otro régimen de dosificación, los números de días consecutivos pueden también ser de 5, con una duración de tratmiento por 2 o 3 semanas consecutivas para un total de 3000 mg/m2 y 4500 mg/m2 de tratamiento total. Típicamente, puede prepararse una formulación intravenosa que contenga una concentracón de inhibidor de HDAC de entre aproximadamente 1.0 mg/ml a aproximadamente 10 mg/ml, por ejemplo, 2.0 mg/ml, 3.0 mg/ml, 4.0 mg/ml, 5.0 mg/ml, 6.0 mg/ml, 7.0 mg/ml, 8.0 mg/ml, 9.0 mg/ml y 10 mg/ml y puede ser administrada en cantidades para lograr las dosis descritas anteriormente. En un ejemplo, un volumen suficiente de formulación intravenosa puede ser administrado a un paciente en un día de modo que la dosis total por el día esté entre aproximadamente 300 y aproximadamente 1500 mg/m2. Pueden usarse como reguladores, acido glucurónico, ácido L-láctico, ácido acético, ácido cítrico o cualquier conjugado ácido/base aceptables farmacéuticamente con capacidad reguladora razonable en el intervalo de pH aceptable para administración intravenosa del inhibidor de HDAC. Soluciones de cloruro de sodio en donde le pH ha sido ajustado en el intervalo deseado ya sea con ácido o base, por ejemplo puede emplearse ácido clorhídrico o hidróxido de sodio. Típicamente, un intervalo de pH para la formulación intravenosa puede estar en el intervalo desde aproximadamente 5 a aproximadamente 12. Un intervalo de pH preferido para la formulación intravenosa, en donde el inhibidor de HDAC tiene una porción de ácido hidroxámico, puede ser también de aproximadamente 9 a aproximadamente 12. Al seleccionar un excipiente apropiado se tomarán en consideración la solubilidad y la compatibilidad química del inhibidor de HDAC. Las formulaciones subcutáneas, preferiblemente preparadas de conformidad con procedimientos bien conocidos en el arte a un pH en el intervalo entre aproximadamente 5 y aproximadamente 12, también incluyen reguladores adecuados y agentes de isotonicidad. Pueden ser formulados para liberar una dosis diaria de inhibidor de HDAC en una o más administraciones subcutáneas diarias, por ejemplo, una, dos, o tres veces al día. La selección del regulador apropiado y el pH de una formulación, dependiendo de la solubilidad del inhibidor de HDAC a ser administrado, es fácilmente elaborado por una persona que tenga experiencia en el arte . Puede también emplearse en la formulación subcutánea, la solución de cloruro de sodio, en donde el pH ha sido ajustado en el intervalo deseado ya sea con ácido o con base, por ejemplo, ácido clorhídrico o hidróxido de sodio. Típicamente, un intervalo de pH para la formulación subcutánea puede estar en el intervalo desde aproximadamente 5 a aproximadamente 12. Un intervalo de pH preferido para formulación subcutánea en donde el inhibidor de HDAC tiene una porción de ácido hidroxámico, puede ser de aproximadamente 9 a aproximadamente 12. Al seleccionar un excipiente apropiado, se tomarán en consideración la solubilidad y la compatibilidad química. Los inhibidores de HDAC pueden ser administrados en forma intranasal vía uso tópico de vehículos intranasales adecuados, o vía rutas transdérmicas, usando las formas de parches transdérmicos para la piel bien conocidos por los expertos en la materia. Para ser administrada en la forma de un sistema de liberación transdérmica, la administración de la dosificación será, por supuesto, continua en vez de intermitente en el transcurso del régimen de dosificación.

Los inhibidores de HDAC pueden ser administrados como ingredientes activos en mezcla con diluyentes, excipientes 0 portadores adecuados farmacéuticamente (mencionados colectivamente en la presente como materiales "portadores") , seleccionados adecuadamente con respecto a 1 forma de administración pretendida, esto es , tabletas, cápsulas, elixires, jarabes orales, o los similares, y consistentes con las prácticas farmacéuticas convencionales . Por ejemplo, para administración oral en la forma de una tableta o cápsula, el inhibidor de HDAC puede combinarse con un portador inerte, aceptable farmacéuticamente, no tóxico, oral tal como lactosa, almidón, sacarosa, glucosa, metil celulosa, celulosa microcristalina, croscaramelosa sódica, estearato de magnesio, fosfato dicálcico, sulfato de calcio, manitol, sorbitol y los similares o una combinación de los mismos; para administración oral en forma liquida, los componentes del fármaco oral pueden combinarse con cualquier portador inerte aceptable farmacéuticamente, no tóxico oral, tal como etanol, glicerol, agua y los similares. Además, cuando se desee o sea necesario, pueden incorporarse en la mezcla aglutinantes, lubricantes, agentes desintegrantes y agentes colorantes adecuados. Los aglutinantes adecuados incluyen almidón, gelatina, azúcares naturales tales como glucosa o beta-lactosa, edulcorantes de maíz, gomas naturales y sintéticas tales como acacia, tragacanto o alginato de sodio, carboximetilcelulosa, celulosa microcristalina, croscaramelosa sódica, polietilen glicol, ceras y los similares. Los lubricantes usados en estas formas de dosificación incluyen oleato de sodio, estearato de sodio, estearato de magnesio, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio y los similares. Los desintegrantes incluyen, sin limitación, metil celulosa de almidón, agar, bentonita, goma de xantano y los similares .

Sales de los compuestos de histona desacetilasa aceptables farmacéuticamente adecuadas descrias en la presente y adecuadas para uso en el método de la invención, son sales no tóxicas convencionales y pueden incluir una sal con una base o una sal de adición de ácido tal como una sal con una base inorgánica, por ejemplo, una sal de metal alcalino (por ejemplo, sal de litio, sal de sodio, sal de potasio, etc.) una sal d metal alcalino térreo (por ejemplo sal de calcio, sal de magnesio, etc.), una sal de amonio; una sal con una base orgánica, por ejemplo, una sal de amina orgánica, (por ejemplo, sal de trietiiamina, sal de piridina, sal de picolina, sal de etanolamina, sal de trietanolamina, sal de diciclohexilamina, sal de N, N- dibenciletilendiamina, etc.); una sal de adición de ácido inorgánico (por ejemplo, clorhídrico, bromhídrico, sulfato, fosfato, etc.); una sal de adición de ácido sulfónico o carboxílico orgánico (por ejemplo, formiato, acetato, trifluoroacetato, maleato, tartrato, metansulfonato, bencensulfonato, p-toluen sulfonato, etc.); una sal con un aminoácido ácido o básico (por ejemplo arginina, ácido aspártico, ácido glutámico, etc.) y los similares. Los inhibidores de histona desacetilasa y la radiación pueden ser usados en un método de tratar cáncer en una célula que comprende poner en contacto a la célula con una primera cantidad de un compuesto capaz de inhibir a una histona desacetilasa o una sal de ésta y poner en contacto a la célula con una segunda cantidad de terapia de radiación, para prevenir, inhibir (total o parcialmente) o detener el progreso del cáncer. La célula puede ser una célula transgénica. En otra modalidad la célula puede estar en un paciente, tal como un mamífero, por ejemplo un humano. En ciertas modalidades, la primera cantidad para tratar cáncer en células es una concentración de contacto de inhibidor de HDAC desde aproximadamente 50 uM tal como, desde aproximadamente 1 pM a aproximadamente 5 uM, por ejemplo desde aproximadamente 1 pM a aproximadamente 500 nM, tal como desde aproximadamente 1 pM a aproximadamente 50 p??, por ejemplo, 1 pM a aproximadamente 500 pM. En una modalidad particular, la concentración es menos de aproximadamente 5.0 uM. En otra modalidad, la concentración es de aproximadamente 500 nM. ADMINISTRACION DE RADIACION DE HAZ EXTERNO Para administración de la radiación de haces externos, la cantidad puede ser de al menos fracciones de 1 Gray (Gy) al menos una vez cada segundo día para un volumen de tratamiento. En una modalidad particular, la radiación es administrada en al menos aproximadamente fracciones de 2 Gray (Gy) , al menos una vez por día para un volumen de tratamiento. En otra modalidad particular, la radiación es administrada en al menos aproximadamente fracciones de 2 Gray (Gy) al menos una vez por día para un volumen de tratamiento por cinco días consecutivos por semana. En otra modalidad particular, la radiación es administrada en fracciones de 10 Gy cada segundo día, tres veces por semana para un volumen de tratamiento. En otra modalidad particular, un total de al menos aproximadamente 20 Gy es administrado a un paciente en necesidad del mismo . En otra modalidad particular, al menos aproximadamente 30 Gy son administrados a un paciente en necesidad de los mismos. En otra modalidad particular, al menos aproximadamente 40 Gy son administrados a un paciente en necesidad de los mismos.

Típicamente, el paciente recibe terapia de haces externos cuatro a cinco veces por semana. Una tanda completa de tratamiento usualmente dura desde una a siete semanas dependiendo del tipo de cáncer y del objetivo del tratamiento. Por ejemplo, un paciente puede recibir una dosis de 3 Gy/día durante 30 dias. ADMINISTRACION DE UN AGENTE RADIOFARMACEUTICO Hay numerosos métodos para la administración de un agente radiofarmacéutico . Por ejemplo, el agente radiofarmacéutico puede ser administrado por liberación hacia un objetivo o por liberación generalizada de conjugados radioactivos determinados, tales como un anticuerpo radiomarcado, un péptido radiomarcado y un sistema de liberación de liposomas. En una modalidad particular de liberación hacia un objetivo, el agente farmacéutico radiomarcado puede ser un anticuerpo radiomarcado. Ver, por ejemplo, Ballangrud A. M., y colaboradores Cáncer Res., 2001; 61: 2008-2014 y Goldenber, D. M. J. Nucí. Med., 2002; 43 (5) : 693-713, cuyos contenidos se incorporan a la presente como referencia. En otra modalidad particular de liberación hacia un objetivo, el agente radiofarmacéutico puede ser administrado en la forma de sistemas de liberación de liposomas, tales como pequeñas vesículas unilaminares, grandes vesículas unilaminares y vesículas multilaminares . Los liposomas pueden estar formados de una variedad de fosfolípidos, tales como colesterol, estearilamina o fosfatidilcolinas . Ver, por ejemplo, Emfietzoglou D., Kostárelos K, Sgouros G. , An analytical dosimetry study for the use of radionucleotide-liposome conjugates in internal radiotherapy. J. Nucí. Med. 2001; 42; 499-504, cuyos contenidos se incorporan ala presente como referencia. En aún una modalidad particular de liberación en un objetivo, el agente farmacéutico radiomarcado puede ser un péptido radiomarcado. Ver, por ejemplo, Weiner R. E., Thakur M. L. Radiolabeled peptides in the diagnosis and therapy of oncological diseases. Appl. Radiat. Isot. 2002 Nov; 57 (5) : 749-63, cuyos contenidos se incorporan a la presente como referencia. Además, para liberación objetiva, puede usarse la braquiterapia para liberar el agente radiofarmacéutico en el sitio objetivo. La braquiterapia es una técnica que pone las fuentes de radiación tan próximas como sea posible del sitio del tumor. A menudo la fuente es insertada directamente en el tumor. Las fuentes radioactivas pueden estar en la forma de alambres, gránulos, o barras. Generalmente se usa cesio, iridio o yodo .

Hay dos tipos de braquiterapia: tratamiento intercavitario y tratamiento intersticial . En el tratamiento intercavitario, los contenedores que retienen las fuentes radioactivas son puestas en o cerca del tumor. Las fuentes son puestas en las cavidades corporales. En el tratamiento intersticial las fuentes radioactivas solas son puestas en el tumor. Estas fuentes radioactivas pueden permanecer en el paciente permanentemente. Más a menudo, las fuentes radioactivas son retiradas del paciente después de varios dias. Las fuentes radioactivas estén en contenedores . Además, un agente radiofarmacéutico puede ser administrado a un paciente usando una cualquiera de los modos de administración detallados anteriormente para los inhibidores de HDAC. La cantidad de radicación necesaria puede ser determinada por un experto en la materia con base en dosis conocidas para un tipo particular de cáncer. Ver, por ejemplo, Cáncer Medicine, 5a. Ed., editado por R. C. Bast y colaboradores, Julio de 2000, B.C. Decker, cuyo contenido completo se incorpora a la presente como referencia. En una modalidad particular, la radiación puede ser administrada en cantidad efectiva para causar la detención o la regresión del cáncer de, cuando la radiación es administrada con el inhibidor de HDAC. ADMINISTRACION EN COMBINACION El primer procedimiento de tratamiento, la administración de un inhibidor de histona desacetilasa, puede tener lugar antes del segundo procedimiento de tratamiento, radiación, después del tratamiento de radiación, al mismo tiempo que la radiación o una combinación de los mismos. La primera y la segunda cantidades pueden ser combinada antes de la administración o administrada en diferentes sitios pero al mismo tiempo. Por ejemplo, un periodo total de tratamiento puede decidirse para el inhibidor de histona desacetilasa. La radiación puede ser administrada antes del principio del tratamiento con el inhibidor o después del tratamiento con el inhibidor. Además, el tratamiento de radiación puede ser administrado durante el periodo de administración del inhibidor pero no se necesita que ocurra durante el periodo de tratamiento completo con inhibidor. Los siguientes ejemplos ilustran más completamente las modalidades preferidas de la invención. No se construyeron, no obstante, como limitantes de la amplitud del alcance de la invención. METODOS EXPERIMENTALES MATERIALES Y METODOS CULTIVO CELULAR: La linea celular de carcinoma de próstata humana, LNCaP (CRL 1740) fue adquirida de la ATCC (Manassas, VA) . Cultivos madres en matraces en T se propagaron a 37 °C, 95 % de humedad relativa, y 5 % de C02 en RPMI 1640 (Invitrogen, Carlsbad, CA) suplementado con suero de ternera fetal al 10 % (sigma, St. Louis, MO) , 100 unidades/ml de penicilina, y 100 mg/ml de estreptomicina (Gemina Bio-products, Woodland, CA) . Se determinaron las concentraciones celulares por conteo de células triptinizadas con un hemocitometro . INICIACION DE ESFEROIDES: Aglomerados de células tumorales o Esferoides se iniciaron de conformidad con la técnica de sobreposición liquida de Yuhas y colaboradores . Ver Yuhas J. M. y colaboradores Cáncer Res., 37: 3639-3643, 1977. Los detalles concernientes a la formación de esferoides de LNCaP y la caracterización, se describen en Ballangrud A. M. y colaboradores, Clin. Cáncer Res., 5: 3171s-3176s, 1999. El contenido completo de las referencias anteriores se incorpora a la presente como referencia. Resumiendo, se prepararon las placas de superposición de liquido desde placas de petri de 100 mm o de 35 mm (Becton Dickinson Labware, Franklin Lakes, NJ) que contenían una capa fina de medio RPMI 1640 solidificado con agar al 1 ¾ (Difco, Detroit, MI) . El medio fue inoculado a 6.7 x 104 células/ml de cultivos madre triptinizado . Se usó la suspensión resultante para sembrar placas de 100 mm con aproximadamente 10s células. Después de una incubación de 5-7 días, se seleccionaron esferoides de ~ 200 um de diámetro bajo un microscopio de contraste de fase invertida (Axiophor 2; Cari Zeiss Ltd., Gottingen, Alemania) adaptado con una escala ocular , usando una pipeta de Eppendorf . PROTOCOLOS DE TRATAMIENTO: Después de cada tratamiento, los esferoides se lavaron tres veces por suspensión en medio recientemente preparado. El tratamiento completo consistió ya sea de incubación con SAHA, irradiación, o exposición tanto a SAHA como a radiación. Se usaron un mínimo de doce esferoides para cada condición en experimentos por duplicado. Para incubación con SAHA, una solución madre de 10 mM en DMSO se diluyó seriadamente en medio para producir 1 -5 uM de SAHA y para generar concentraciones finales de DMSO de < 0.01 %. 12- 24 esferoides lavadas se colocaron en una placa de petri de 35 mm preparada con agar como se describió anteriormente y se cubrió con suficiente medio que contenía SAHA para cubrir la superficie completa de agar . Para irradiación de haces externos, se expusieron los esferoides a una dosis aguda de 6 Gy de irradiación de fotones de haces externos usando un irradiador de cesio a una velocidad de dosis de 23 Gy/min (Cs-137 Modelo 68; JL Shepherd and Associates, Glendale, CA) . Para radiación de emisores alfa, se expusieron los esferoides a una concentración de radioactividad de (100 nCi/ml) de radiación de emisores alfa de Ac225-HuM 195 por 24 horas. Ac225-HuM 195 es un anticuerpo monoclonal anti-CD33 humanizado recombinante, el cual había sido marcado con actinio 225. El anticuerpo se obtuvo del Laboratorio de David Scheinberg, M. D., Ph. D., Memorial Sloan-Kettering Cáncer Center. Después del tratamiento completo, los esferoides lavados fueron colocados en pocilios preparados con agar separado de una placa de 24 pocilios. Los esferoides sin tratar se lavaron y se separaron inmediatamente después de la selección inicial. El medio en cada pocilio fue reemplazado, y se efectuaron mediciones de volumen, dos veces por semana. Usando el microscopio invertido y la escala ocular descrita previamente, se determinaron el diámetro mayor y el menor, dmax y dmin respectivamente, y se calculó el volumen de esferoide como V = (1/6) jidmaxdmin2 · el monitoreo del volumen se detuvo una vez que el esferoide hubo excedido el campo visual del microscopio o se fragmentó en células individuales o múltiples aglomerados celulares más pequeños. Al final de cada experimento, los esferoides que no recrecieron fueron calificados por viabilidad usando un ensayo de excrecencias celulares o fragmentos de esferoides desde pocilios que contenían esferoides que no recrecieron fueron colectados y colocados en pocilios individuales de una placa de 24 pocilios (adherente) libres de agar, incubada por 2 semanas y se calificaron por colonias. INMUNOHISTOQUIMICA: La proliferación o apoptosis de células tumorales en esferoides se evaluó por medio de una tinción (TUNEL) marcada al final con una pizca de biotina-dUTP mediada por TdT Ki67 o i67, respectivamente. A 0, 6, 24, o 48 horas post tratamiento los esferoides fueron lavados en medio frío, fijados por 4 horas en paraformaldehido, y se colocaron en bloques de parafina. Se cortaron secciones seriadas de 5 uM de los bloques, usando un microtomo y se colocaron sobre portaobjetos recubiertos de poli-L- lisina que fueron fijados en acetona enfriada en hielo por 10 minutos. Se efectuó la tinción de Ki67 usando un anticuerpo de ratón monoclonal dirigido contra Ki67 y el equipo MOM (Vector Labs, Burlingame, CA) . Se tiñeron células apoptósicas usando TUNEL modificado de Gavrieli y colaboradores (J. Cell Biol. 119: 493-501, 1992) . Al final, se usaron 2 min de incubación en Hematoxilina para contra teñir las secciones. Se usaron los esferoides no tratados como controles; se crearon controles positivos usando DNasa I (Boehringer, Ingelheim, Alemania) . Se capturaron digitalmente las imágenes desde un microscopio de contraste de fase invertida usando una Cámara Profesional Pixera acoplada y el programa asociado (Pixera Visual Communication Suite, Pixera, Los Gatos, CA) . Se calificaron las imágenes por tinción positiva como el porcentaje de células reactivas en la sección de esferoide . ANALISIS ESTADISTICO: Para evaluar el sinergismo entre SAHA y la radiación, se midió el área bajo la curva de volumen de tumor (AUC) para cada esferoide. La inhibición sinérgica del crecimiento del tumor se definió como el grupo de tratamiento en combinación que produce en promedio un log AUC más pequeño que se predijo por el modelo aditivo el cual incluye cada grupo de tratamiento separadamente. Se describe esta relación por medio de la desigualdad: Avg(V|S=5M, R=6 Gy) < C+ {avg [V[ S=5uM, R=0)-C} + {avg(V|S=0, R=6 Gy) -C> En donde V es el log AUC, S = 5 uM y R = 6 Gy representa las dosis de SAHA y de radiación usada en el experimento, y C es el log AUC promedio en el grupo control [C = avg (V1S=0, R=0)]. Para probar el sinergismo, se computaron 2000 réplicas autoinducidas del log AUC promedio, para cada uno de los cuatro grupos, y se computó la proporción de réplicas en donde no se obtuvo la desigualdad. Esta proporción se denominó el nivel significativo logrado (valor de p) . Un nivel significativo logrado pequeño es un indicio de que la inhibición sinérgica del crecimiento de tumor tuvo lugar debido al tratamiento en combinación. Una T de dos extremos se usó para probar las diferencias significativas en el porcentaje de células teñidas positivamente. RESULTADOS ; EJEMPLO 1 EFECTO DE SAHA SOBRE EL CRECIMIENTO DE ESFEROIDES Se llevaron a cabo los estudios en esferoides cuya respuesta a productos quimioterapéuticos y radiación ha sido mostrada para aproximar mejor la respuesta vista en tumores, in vivo (Stuschke, M. y colaboradores, Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 24: 119-26, 1992; Santini, M. T. y colaboradores Int. J. Radiat. Biol. 75: 787-99, 1999; Dertinger, H. y colaboradores Radiat. Environ Biophys. 19: 101-7, 1981) . El efecto de SAHA sobre el crecimiento de los esferoides se examinó al incubar los esferoides con 0, 1.25, 2.5 y 5 uM de SAHA ya sea por 120 horas o continuamente (Figuras 1A-D) . Se monitoreó el crecimiento de los esferoides por al menos 40 días después de incubación con SAHA por 120 horas o por los 40 días de tratamiento continuo. A una concentración de 1.25 uM de SAHA el crecimiento de los esferoides se retardó pero no se detuvo tanto por 120 horas como para las condiciones de exposición continua. A 2.5 pM, la detención del crecimiento completo se observó durante el periodo de incubación de 120 horas. La inhibición del crecimiento persistió por otros 4 a 5 dias después del final de la exposición al fármaco. Este retardo en la recuperación fue seguido entonces por crecimiento exponencial seguido por una constante (es decir, crecimiento de Gompertzian (Bassukas, I.D. Cáncer Res. 54:4385-82., 19949)) similar al obtenido con esferoides sin tratar. Cinco dias después de una incubación de 120 horas con 5 uM de SAHA, se observó una reducción del volumen medio de 2.4 veces, después de lo cual el crecimiento de los esferoides regresó a las cinéticas de Gompertzian. El tiempo requerido para que los esferoides alcancen un volumen 1000 veces mayor (Aprox. 10 veces el doble del volumen) que el volumen inicial después de 0 (ninguna exposición a SAHA) , 1.25, 2.5 y 5 uM de SAHA (5 dias de incubación) fue de 16, 20, 23 y 29 dias, respectivamente; produciendo 4.7 y 13 dias de retardos de crecimiento, respectivamente, para los esferoides tratados con SAHA. La exposición continua de esferoides a 2.5 uM dio como resultado la supresión completa del crecimiento; a 5 uM, se observó una pérdida rápida en el volumen de los esferoides con la mayoría de los esferoides que se disgregaron en el día 20. La morfología típica de esferoides que se disgregaron o se detuvieron se muestra en la Figura 2A (5 uM) y la Figura 2B (2.5 uM) . Para evaluar la actividad de SAHñ. como un agente anti células cancerosas, es instructivo comparar los resultados obtenidos usando esferoides con experimentos en cultivo monocapas. En el cultivo celular monocapa de LNCaP, 2.5 uM de SAHA causa la supresión completa del crecimiento con el mínimo a ninguna muerte celular durante un período de 4 días y 5 uM de SAHA causa inicio de la muerte celular progresiva después de 48 horas de incubación con SAHA (Butler, L. M. y colaboradores Cáncer Res. 60: 5165-70, 2000) . En estos experimentos el volumen de respuesta de los esferoides de LNCaP a estas concentraciones fue generalmente consistente con el resultado del cultivo monocapa (Figuras 1A-D) . Las imágenes (Figuras 2A-B) , no obstante, revelaron que la escala de tiempo y la etiología para estos efectos fue diferente de los observados en cultivo en monocapa. A 5 uM no tuvo lugar la disrupción completa de los esferoides hasta después de 13 a 16 días de incubación con SAHA; y la inhibición del crecimiento aparente a 2.5 M pareció aumentar primeramente debido a la pérdida continua de células sobre la superficie del esferoide. Como se muestra por medio de la tinción con TUNEL (ver posteriormente y las Figuras 5A-C) y que sugieren la morfología y la eliminación rápida de células en los esferoides (Figura 2A) , la muerte celular después de la exposición a SAHA es predominantemente por apoptosis . EJEMPLO 2 EFECTO DE SAHA Y DE LA RADIACION DE HAZ EXTERNO SOBRE EL CRECIMIENTO DE LOS ESFEROIDES La respuesta a la dosis de los esferoides de LNCaP a haces externos, bajo LET, velocidad de irradiación - dosis altas ha sido reportada previamente (Ballangrud, A. M. y colaboradores Cáncer Res. 61: 2008-14, 2001; Enmonn, R. M., y colaboradores Cáncer Res., adjudicada). Con base en estos datos se seleccionaron las dosis absorbidas de 3 y 6 Gy en los estudios en combinación, puesto que estas dosis de radiación solas, produjeron curvas de crecimiento que emparejan en forma a la curva sin tratar pero con retardos de 4 a 10 días para alcanzar 1,000 veces el volumen del esferoide original. Con base en los datos de respuesta-dosis de SAHA (Figuras 1A-D) , una incubación de 96 horas con 5 uM de SAHA se seleccionó para los estudios en combinación. El tratamiento en combinación se llevó a cabo por exposición de los esferoides a SAHA por 48 horas, irradiando y luego incubando por otros 48 o 72 horas antes de lavar y monitorear para crecimiento. Se usaron en este estudio las células LNCaP que crecieron como esferoides. Se usaron los siguientes regímenes de tratamiento: A: ningún tratamiento B: Tratamiento con 5 uM de SAHA por 96 horas. C. Tratamiento con 6 Gy de irradiación aguda usando un irradiador de Cs-113 a una velocidad de dosis de 2.3 Gy/min (Cs-137 Modelo 68: JL Shepherd y Associated, Glendale, CA) . El tratamiento fue uniforme a través de los esferoides y se usó un LET bajo de 0.2 keV/uM. D: Tratamiento con 5 M de SAHA por un total de 96 horas, con una irradiación aguda de 6 Gy usando un irradiador de Cs-137 (que se describió anteriormente) después de 48 del total de 96 horas de exposición a SAHA.

Los estudios en combinación con 3 Gy (y 120 horas de SAHA) produjeron modestos retardos dependientes de la dosis de SAHA en el crecimiento de los esferoides; a 5 uM de concentración se observó un retardo de 7 dias (no se muestran los datos) .Los estudios en combinación con 6 Gy y una incubación de 96 horas con 5 uM de SAHA causaron completa inhibición del crecimiento con ninguna de las doce colonias que formaron esferoides en el ensayo de excrecencias celulares (Figura 3D) . En contraste, la radiación de 6 Gy sola (Figura 3C) o una exposición de 96 horas a 5 uM de SAHA sola (Figura 3B) produjo 5 y 15 días de retardo, respectivamente, para un incremento de 1,000 veces en el volumen original. El análisis estadístico de estos resultados indicó la inhibición sinérgica del crecimiento de tumor que resulta del tratamiento en combinación (p < 0.01). La morfología de los esferoides típica a diferentes tiempos después de la terapia en combinación se expone en la Figura 4. Inmediatamente después del final del tratamiento (días 4 y 9) , los esferoides tuvieron una apariencia que es similar a la vista con el tratamiento solamente con SAHA. A tiempo posterior, la morfología de los esferoides se alteró considerablemente, los esferoides parecieron estar compuestos de un número pequeño de esponjamientos, posiblemente células necróticas. EJEMPLO 3 EFECTO DE SAHA Y DE LA RADIACION DE HAZ EXTERNO SOBRE LA APOPTOSIS Para examinar si SAHA incrementa la apoptosis inducida por la radiación, las secciones de esferoide teñidas con TUNEL a varios tiempos después del final de que la terapia sola y en combinación fueron llevadas a cabo. Inmediatamente después de una incubación de 96 horas de incubación con SAHA la mayoría de las células sobre la superficie de los esferoides sufrieron de apoptosis y hay poca evidencia de apoptosis en el interior del esferoide (Figura 5A) . Este descubrimiento es también consistente con la apariencia morfológica de esferoides tratados con SAHA en los dias 3 y 6 (Figura 2A) . Por 48 horas después del final de la incubación con SAHA, no se detectaron células apoptosicas sobre la superficie de los esferoides, presumiblemente debido que se encontraron células esparcidas y apoptosicas en todo el esferoide. Son también evidentes vejigas de desechos celulares en el interior. Estas son evidentes inmediatamente después del final de la incubación con SAHA pero se hicieron más prominentes 6 y 24 horas después. La tinción con TUNEL de los esferoides tratados con SAHA y radiación produjeron un patrón casi idéntico que sugiere que, aunque SAHA induce apoptosis substancial, la respuesta sinérgica del esferoide vista con la combinación no puede explicarse por la apoptosis me orada (Figura 7A) . EJEMPLO 4 EFECTO DE SAHA Y DE LA RADIACION DE HAZ EXTERNO SOBRE LA PROLIFERACION En contraste a los resultados de la tinción con TUNEL mostrados en el Ejemplo 3, los estudios de inmunohistoquímica correspondientes que examinaron la actividad proliferativa por medio de la tinción con Ki67 mostraron diferencias substanciales en la proliferación celular para cada uno de los tratamientos solos, versus la combinación (Figuras 6A-C y 7B) . Al final de 96 horas de incubación con SAHA, virtualmente todas las células que formaron esferoides detuvieron el ciclo. Esto es consistente con los efectos inhibidores del ciclo celular conocidos de SAHA. Los efectos inhibidores son de vida corta y en 6 a 24 horas pudo verse un debilitamiento en las tinciones Ki67 positivas. En 48 horas, muchas células en toda la sección mostraron intensa tinción Ki67 en esferoides tratados solamente con SAHA. Ninguna tinción similar se observó en los esferoides tratados con la combinación (p < 0.01) . EJEMPLO 5 EFECTO DE SAHA Y DE LA RADIACION ALFA SOBRE EL CRECIMIENTO DE ESFEROIDES. Para probar el efecto de una combinación de SAHA y un radioisótopo emisor de partículas alfa, el tratamiento en combinación se llevó a cabo por exposición de los esferoides por 24 horas a 100 nCi/ml de Ac-225 antes de la exposición a SAHA por 96 horas. Las células LNCaP crecieron como esferoides como anteriormente. Se usó el siguiente régimen de tratamiento: A: Ningún tratamiento B: Tratamiento con 5 uM de SAHA por 96 horas. C: Tratamiento con 100 nCi/ml de Ac225-HuM195 por 24 horas . D: Tratamiento con 5 uM de SAHA por un total de 96 horas, en combinación con tratamiento con 100 nCi/ml de Ac225-HuM 195 por 24 horas antes del tratamiento con SAHA.

Los estudios en combinación con 24 horas de exposición a Ac225-HuM195 seguido por una incubación de 96 horas con 5 uM de SAHA causó la inhibición completa del crecimiento, la cual se mantuvo por un periodo de 50 días de duración (Figura 8) . En contraste, el tratamiento con Ac225-HuM195 solo no causó la inhibición del crecimiento de los esferoides, y una exposición de 96 horas a 5 uM de SAHA solo produjo un retardo inicial de 10 dias, seguido por el crecimiento de esferoides a casi los niveles del volumen de los esferoides sin tratar control después de un periodo de 30 dias. El anticuerpo anti-CD33 fueron seleccionados en estos experimentos ya que es sabido que no enlazan a células o esferoides de cáncer de próstata, permitiendo asi el control del periodo de incubación y la dosis de partículas alfa liberada por el radioelemento Ac225. El uso de un anticuerpo irrelevante hace más fácil calcular la' dosis liberada absorbida en los esferoides ya que no hay retención de radioactividad más allá del período de incubación. Esto es importante al establecer una relación dosis-respuesta y al asegurar que los efectos sinérgicos observados son debidos primeramente a la combinación de SAHA y la radiación en vez de los efectos mediados por el anticuerpo. En la práctica, puede usarse un anticuerpo especifico que reconoce los sitios antigénicos sobre células tumorales para liberar el radioelemento . SUMARIO DEL DESCUBRIMIENTO La combinación de radiación y de SAHA produjo la supresión del crecimiento que condujo a diferencias de 10 a 100 miles de veces en los volúmenes de los esferoides en relación a cada modalidad sola (Figuras 3A-D) . Los resultados de la tinción con TUNEL para esferoides tratados con SAHA solamente versus los tratados con la combinación sugieren que el incremento sinérgico en la eficiencia no parece aumentar como resultado de apoptosis mejorada (Figura 5A versus 5B y Figura 7A) . Esta observación es consistente con las características morfológicas de los esferoides inmediatamente después del final del tratamiento en combinación y después de varias semanas a más de un mes después. Al final de la exposición a SAHA de los esferoides irradiados con 6 Gy (Figura 4, 4 días) , la apariencia morfológica de los esferoides fue similar a la observada para esferoides tratadas solamente con SAHA y es consistente con la apoptosis inducida con SAHA. En contraste, la morfología a 14 a 42 días mostró esponjamiento y lisis celular, consistente con la muerte necrótica. La evidencia más reciente de una divergencia esferoides en el destino de los esferoides entre el tratamiento solamente con SAHA y el tratamiento en combinación se observó en las tinciones con Ki67 (Figuras 6A-C y 7B) . Cuarenta y Ocho horas después del final de la incubación con 5 M de SAHA solo, se observaron células proliferadoras mientras que no se vio ninguna restauración en los esferoides tratados con SAHA y radiación; a la dosificación usada, la radiación sola no alteró la proliferación celular que se evaluó por medio de la tinción con Ki67 (Figura 6C, Grupo H) . Tomados juntos, los datos de proliferación y de apoptosis sugieren que el efecto mejorado de SAHA con radiación es debido primeramente a una disminución en la proliferación subsecuente de células después de la incubación con SAHA en vez de la disminución de la apoptosis inducida por la radiación. La incapacidad de las células para resumir el ciclo después de la exposición a la combinación de SAHA y la terapia de radiación puede señalar una disrupción en la reparación del daño inducido por la radiación o al mejoramiento del daño al ???? reparable de otra manera.

Aunque esta invención ha sido mostrada y descrita particularmente con referencia a modalidades preferidas de la misma/ los expertos en la materia comprenderán que pueden hacerse en la presente varios cambios en forma y detalle sin alejarse del alcance de la invención abarcado por las reivindicaciones anexas .

Claims (43)

NOVEDAD DE IA INVENCION . Habiendo descrito la presente invención, se considera como novedad, y por lo tanto se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes: REIVINDICACIONES

1. Un método para tratar cáncer en un paciente en necesidad del mismo, que comprende administrar al paciente una primera cantidad de un inhibidor de histona desacetilasa en un primer procedimiento de tratamiento, y una segunda cantidad de radiación en un segundo procedimiento de tratamiento caracterizado porque la primera y segunda cantidades comprenden juntas una cantidad efectiva terapéuticamente.

2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el inhibidor de HDAC es un derivado de ácido hidroxámico, un Acido Graso de Cadena Corta (SCFA) , un tetrapéptido cíclico, un derivado de benzamida, o un derivado electrofílico de cetona.

3. El método de conformidad con la reivindicación 2, está caracterizado porque el inhibidor de HDAC es un derivado de ácido hidroxámico seleccionado del grupo que consiste de SAHA, Piroxamida, CBHA, Tricostatina A (TSA) , Tricostatina C, Acido salicilhidroxámico (SBHA) , Acido Azelaico Bishidroxá ico (ABHA) , Azelaic-l-Hidroxamato-9-Anilida (AAHA) , Acido 6- (3- Clorofenilureido) caproico Hidroxámico (3C1-ÜCHA) , Oxamflatín, A- 161906, Scriptaid, PXD-101, LAQ-824, CHAP, MW2796, y MW2996.

4. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el inhibidor de HDAC es un Tatrapéptido Cíclico seleccionado del grupo que consiste de Trapoxin A. FR901228 (FK 228 o Depsipéptido) , FR225497, Apicidin, CHAP, HC-Toxin, WF27082, y Clamidocina .

5. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el inhibidor de HDAC es un Acido Graso de Cadena Corta (SCFA) , seleccionado del grupo que consiste de Butirato de Sodio, Isovalerato, Valerato, 4-Fenilbutirato (4-PBA) , Fenilbutirato (PB) , Propionato, Butiramida, Isobutiramida, Fenilacetato, 3- Bromopropionato, Tributirin, Acido Valproico y Valproato.

6. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porgue el inhibidor de HDAC es un derivado de Benzamida seleccionado del grupo que consiste de CI-994, MS-27-275 (MS-275) y un derivado 3'-amino de MS-27-275.

7. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el inhibidor de HDAC es un derivado electrofilico de cetona seleccionado del grupo que consiste de un trifluorometil cetona y una alfa-ceto amida.

8. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el inhibidor de HDAC es Depudecin.

9. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el inhibidor de HDAC está representado por la estructura siguiente: o una sal del mismos aceptable farmacéuticamente.

10. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el inhibidor de HDAC es piroxamida, representada por la fórmula: o una sal del mismo aceptable farmacéuticamente.

11. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el inhibidor de HDAC está representado por la estructura: o una sal del mismo aceptable farmacéuticamente.

12. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el inhibidor de HDAC está representado por la estructura: o sales, solvatos o hidratos del mismo en donde Ri y R2 pueden ser iguales o diferentes; cuando Rx y R2 sean iguales, cada uno es un grupo arilamino, cicloalquilamino, o piperidino substituido o no substituido; cuando R y R2 son diferentes Ri = R3-N-R4, en donde cada uno de R3 y R4 son independientemente iguales o diferentes entre si y son un átomo de hidrógeno, un grupo hidroxilo, un grupo alquilo substituido o no substituido, ramificado o no ramificado, alquenilo, cicloalquilo, arilo, alquiloxi, ariloxi, arilalquiloxi o grupo piperidina, o R3 y R4 están enlazados juntos para formar un grupo piperidina; R2 es un grupo hidroxilamino, hidroxilo, amino, alquilamino, dialquilamino o alquiloxi; y n es un entero desde aproximadamente 4 a aproximadamente 8;

13. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porgue el inhibidor de HDAC está representado por la estructura: sales, solvatos o hidratos del mismo aceptables farmacéuticamente, en donde R es un grupo fenilo substituido o no substituido, piperidino, tiazolilo, 2- piridilo, 3- piridilo o 4-piridilo; y n es un entero desde aproximadamente 4 a aproximadamente 8; y

14. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porgue el inhibidor de HDAC está representado por la estructura: o sales, solvatos o hidratos del mismo aceptables farmacéuticamente, en donde A es una porción amida; Ri y R2 son seleccionados cada uno de un grupo arilo substituido o no substituido, arilamino, arilalquilamino, arilalquilo, ariloxi, arilalquiloxi, R4 es hidrógeno, un halógeno, un fenilo o un grupo cicloalquilo; y n es un entero desde aproximadamente 3 a aproximadamente 10.

15. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la radiación del segundo procedimiento de tratamiento es radiación de haz externo.

16. El método de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque la radiación del segundo procedimiento de tratamiento es un agente radiofarmacéutico .

17. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el agente radiofarmacéutico es un conjugado radioactivo.

18. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizada porque el conjugado radioactivo es un anticuerpo radiomarcado .

19. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la radiación es seleccionada del grupo que consiste de: radiación electromagnética y radiación en forma de partículas.

20. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque la radiación electromagnética es seleccionada del grupo que consiste de rayos X, rayos gama y una combinación de éstos.

21. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque la radiación particular es seleccionada del grupo que consiste de: haces de electrones (partículas beta), haces de protones, haces de neutrones, partículas alfa y mesones pi negativos.

22. El método de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque la radiación en forma de partículas es de partículas alfa.

23. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque un total de al menos aproximadamente 1 Gy de radiación es administrado al paciente

24. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque un total de al menos aproximadamente 10 Gy de radiación es administrado al paciente.

25. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque un total de al menos aproximadamente 20 Gy de radiación es administrado al paciente.

26. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracteri ado porque un total de al menos aproximadamente 40 Gy de radiación es administrado al paciente.

27. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el efecto terapéutico del inhibidor de HDAC y el de la radiación son sinérgicos.

28. El método de conformidad con la reivindicación 26, .caracterizado porque el inhibidor de HDAC sensibiliza a células de cáncer en el paciente, a la radiación.

29. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la radiación sensibiliza a células de cáncer en el paciente al inhibidor de HDAC.

30. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el inhibidor de HDAC y la radiación son administrados simultáneamente.

31. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el inhibidor de HDAC y la radiación son administradas secuencialmente.

32. El método de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque el inhibidor de HDAC es administrado antes de administrar la radiación.

33. El método de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque el inhibidor de HDAC es administrado después de administrar la radiación.

34. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el inhibidor de HDAC es administrado oral, parenteral, intraperitoneal, intravenosa, intraarterial, transdérmica, sublingual, intramuscular, rectal, transbucal, intranasalmente, vía inhalación, vaginal, intraocular, local, subcutánea, intraadipósica, intraarticular e intraraquideamente.

35. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el inhibidor de HDAC está en una forma de dosificación de liberación lenta.

36. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el agente radiofarmacéutico es administrado oral, parenteral, intraperitoneal, intravenosa, intraarterial, transdérmica, sublingual, intramuscular, rectal, transbucal, intranasalmente, vía inhalación, vaginal, intraocular, local, subcutánea, intraadipósica, intraarticular o intraraquideamente.

37. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el agente radiofarmacéutico está en una forma de dosificación de liberación lenta.

38. Un método de determinar la sensibilidad de una célula de cáncer a una terapia en combinación de un inhibidor de HDAC y radiación, el método comprende la etapa de poner en contacto a la célula de cáncer con una primera cantidad de un inhibidor de histona desacetilasa en un primer procedimiento de tratamiento, y una segunda cantidad de radiación en un segundo procedimiento de tratamiento, caracterizado porque el primero y el segundo tratamientos juntos comprenden una cantidad efectiva terapéuticamente y evaluar la sensibilidad de la célula al tratamiento .

39. Un método de determinar una cantidad efectiva terapéuticamente de una combinación de un inhibidor de HDAC y radiación para tratar un cáncer, que comprende la etapa de exponer una célula de cáncer a una primera cantidad de un inhibidor de histona desacetilasa en un primer procedimiento de tratamiento, y una segunda cantidad c dosis de radiación en un segundo procedimiento de tratamiento, en donde el primer y segundo tratamientos juntos comprenden una cantidad efectiva terapéuticamente y evaluar los efectos anticáncer.

40. Una composición farmacéutica que comprende una primera cantidad de un inhibidor de histona desacetilasa y una segunda cantidad de radiación caracterizado porque la primera y la segunda cantidades juntas comprenden una cantidad efectiva terapéuticamente.

41. La composición de conformidad con la reivindicación 40, caracterizada porque la radiación es un agente radiofarmacéutico .

42. Uso de una primera cantidad de un inhibidor de HDAC y de una segunda cantidad de radiación para la fabricación de un medicamento para tratar el cáncer.

43. El uso de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado porgue la radiación es un agente radiofarmacéutico .