FORMULACION POLIPEPTIDICA
CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con una composición farmacéutica acuosa adecuada para almacenamiento a largo plazo de polipéptidos que contienen un dominio Fe de una inmunoglobulina, métodos de fabricación de la composición, métodos de administración y equipos que contienen a los mismos. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Después de la producción, los polipéptidos típicamente deben ser almacenados antes de su uso. Con frecuencia, cuando se almacenan por periodos prolongados los polipéptidos son inestables en solución (Manning et al., 1989, Pharm. Res. 6:903-918). En consecuencia, se han desarrollado etapas de procesamiento adicionales para permitir una vida de anaquel más prolongada que incluyen secado, por ejemplo liofilización. No obstante, las composiciones farmacéuticas liofilizadas son menos convenientes para el usuario final. Las prácticas típicas para mejorar la estabilidad polipeptídica se pueden - resolver al hacer variar la concentración de elementos con la formulación o al agregar excipientes para modificar la formulación (patentes de E.U.A. números 5,580,856 y 6,171,586). El uso de aditivos, aunque
Ref. 158072 mejora el almacenamiento, aún puede resultar en polipéptidos inactivos. Además, en el caso de liofilización, la etapa de rehidratación puede introducir condiciones que resultan en la inactivación del polipeptido, por ejemplo, por agregación o desnaturalización (Hora et al., 1992, Pharm. Res., 9:33-36; Liu et al., 1991; Biotechnol . Bióeng., 37:177-184). De hecho, la agregación de polipéptidos es indeseable en la medida en que puede resultar en inmunogenicidad (Cleland et al., 1993, Crit. Rev. Therapeutic Drug Carrier Systems, 10:307-377; y Robbins et al., 1987, Diabetes, 36:838-845). La presente invención resuelve estos problemas al proporcionar una formulación líquida estable novedosa que permite el almacenamiento a largo plazo de un polipeptido que contiene un dominio Fe de una inmunoglobulina . SUMARIO DE LA INVENCIÓN La invención se relaciona, en parte con una composición farmacéutica acuosa estable que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un polipeptido que contiene un dominio Fe, un inhibidor de agregación que se selecciona del grupo que consiste de L-arginina y L-cisteína. Opcionalmente, la composición puede incluir un amortiguador, un modificador de tonicidad y uno o más excipientes. En un aspecto, el amortiguador contiene el pH de la composición en un intervalo de aproximadamente 6.0 y aproximadamente 7.0. Preferiblemente, el polipéptido que contiene el dominio Fe es estable en la presente formulación por al menos tres meses a 2-8°C o es estable después de uno o más ciclos de congelamiento y recalentamiento de la formulación. La invención también se relaciona con un método para formular una composición farmacéutica, la composición de un polipéptido que contiene un dominio Fe con un inhibidor de agregación ,que se selecciona del grupo que consiste de L-arginina y L-cisteína. Opcionalmente, uno también puede agregar la composición farmacéutica, un amortiguador, un modificador de tonicidad o un excipiente. .En un aspecto, la composición farmacéutica se formula en un intervalo de pH entre pH 6.0 y 7.0. La invención también se relaciona con un método para tratar a un mamífero que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de la composición farmacéutica que se describe en la presente, en donde el mamífero tiene una enfermedad o desorden que puede ser tratado de manera benéfica con el polipéptido que contiene el dominio Fe en' la composición. La invención también se relaciona con un método de prueba de estabilidad acelerada de un polipéptido que contiene dominio Fe en una composición farmacéutica de la invención que comprende las etapas de almacenar la composición a 37°C durante un mes y medir la estabilidad del polipéptido.
En otra modalidad, la presente invención se relaciona con un equipo o recipiente el cual contiene una composición farmacéutica de la invención. El equipo también puede estar acompañado por instrucciones para uso. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La figura 1 muestra datos de una cromatografía de exclusión de tamaño (SEC, por sus siglas en inglés) para los lotes A, B, C y D y para el lote 1 almacenado hasta por 1 año a 2-8°C. La figura 2 muestra datos de SEC para los lotes A,
B, C y D y el lote 1 almacenado hasta por 1 año a 37°C. La figura 3 muestra datos de SEC desnaturalizada (dSEC, por sus siglas en inglés) para los lotes A, B, C y D y el lote 1 almacenado hasta por 1 año a 2-8 °C. La figura 4 muestra datos dSEC para los lotes A, B,
C y D y el lote 1 almacenado hasta por 1 año a 37°C. La figura 5 muestra datos de la cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC, por sus siglas en inglés) del pico 1 y Pre-pico 1 para los lotes A, B, C y D y el lote 1 almacenado hasta por 1 año a 2-8°C. La figura 6 muestra los datos de HIC del pico 1 y el prepico 1 para los lotes A, B, C y D y el lote 1 almacenado hasta por 1 año a 37°C. La figura 7 muestra los datos de HIC del pico 2 para los lotes A, B, C y D y el lote 1 almacenado hasta por 1 año a 2-8 °C.
La figura 8 muestra los datos de HIC del pico 2 para los lotes A, B, C y D y el lote 1 almacenado hasta por 1 año a 37 °C. La figura 9 muestra los datos de HIC del pico 3 para los lotes A, B, C y D y el lote 1 almacenado hasta por 1 año a 2-8°C. La figura 10 muestra los datos de HIC del pico 3 para los lotes A, B, C y D y el lote 1 almacenado hasta por 1 año a 37°C. La figura 11 muestra la actividad de unión de los lotes A, B, C y D y el lote 1 almacenado por 12 meses a -70, 2-8, 30 y 37°C. La figura 12 muestra la bioactividad de los lotes A, B, C y D y el lote 1 almacenado durante 12 meses a -70, 2-8, 30 y 37°C. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN En el almacenamiento a largo plazo de composiciones f rmacéuticas que contienen polipéptidos , que incluyen formulaciones acuosas y liofilizadas , se pueden perder polipéptidos activos debido a la agregación o degradación. De esta manera, la presente invención se relaciona con. una formulación acuosa que sorprendentemente permite el almacenamiento estable a largo plazo de una composición farmacéutica, en donde el ingrediente activo en la composición es un polipéptido que tiene un dominio Fe de un anticuerpo. Esta formulación es útil, en parte, debido a que es más conveniente de usar para el paciente, dado que esta formulación no requiere ninguna etapa adicional tal como rehidratación . Como se utiliza , en la presente, la frase "composición farmacéutica" se refiere a una formulación comprendida de un polipéptido preparado de manera que es adecuado para inyección o administración en un paciente en necesidad de la misma. Más particularmente, una composición farmacéutica es sustancialmente estéril y no contiene ningún agente que sea indebidamente tóxico o infeccioso para el receptor. Además, debe entenderse que, como se utiliza en la presente, una formulación en solución o líquida significa una preparación líquida que contiene una o más sustancias químicas disueltas en un solvente adecuado o una mezcla de solventes mutuamente miscibles . Además, como se utiliza en la presente, se entiende que el término "aproximadamente" aquí significa una variación en la concentración de un componente de la formulación descrita que puede ser a 5%, 10%, 15% o hasta e incluyendo 20% de un valor dado. Por ejemplo, si una formulación tiene aproximadamente 10 mg/ml de un polipéptido que contiene un dominio Fe, se entiende que significa que la formulación puede tener de 8 a 12 mg/ml del polipéptido indicado. En una modalidad, la formulación está comprendida de un polipéptido que contiene un dominio Fe, un inhibidor de agregación que se selecciona del grupo que consiste de L-arginina y L-cisteína, y opcionalmente un amortiguador, un modificador de tonicidad y excipientes adicionales según sea necesario. Se ha utilizado la L-arginina para ayudar a renaturalizar los polipéptidos insolubles, particularmente aquellos expresados en concentraciones elevadas en cuerpos de inclusión en bacterias. No obstante, no se ha utilizado la L-arginina con éxito para mejorar la estabilidad de polipéptidos que contienen un dominio Fe en composiciones farmacéuticas (Soejima et al., 2001, J. Biochem. , 130:369-277) . Se contempla que la preparación de la composición debe realizarse considerando la incomodidad limitante en el sitio de inyección. Se contempla además que los ingredientes activos adicionales también se pueden incluir en una composición descrita actualmente, por ejemplo para reducir la incomodidad en el sitio de inyección. Tales ingredientes activos incluyen, pero no se limitan a medicamentos antiinflamatorios no esteroides tales como, por ejemplo, trometamina, en una dosificación apropiada. Polipéptidos En una modalidad particular, el polipeptido que contiene un dominio Fe es una forma soluble del receptor de TNF fusionado a un dominio Fe (TNFR :Fe) , no obstante, debe entenderse que cualquier polipéptido que contenga un dominio Fe es adecuado para uso en la presente formulación. Un TNFR:Fc disponible comercialmente se conoce como etanercep (EnbrelMR, Immunex Corporation) el cual es un polipéptido de fusión dimérico que consiste de un ligando extracelular-porción de unión del receptor de factor de necrosis tumoral (TNFR) de 75 kilodaltons (p75) humano, unido a la porción Fe de IgGl humana. El componente Fe de etanercep contiene el dominio constante pesado 2 (CH2) , el dominio constante pesado 3 (CH3) y la región de bisagra, pero no el dominio constante pesado 1 (CH1) de IgGl humano. Debe entenderse que un dominio Fe- puede contener una o la totalidad de los dominios descritos antes . Etanercept se produce por tecnología de ADN reco binante en un sistema de expresión de células de mamífero de ovario de hámster chino (CHO, por sus siglas en inglés) . Consiste de 934 aminoácidos y tiene un peso molecular aparente de aproximadamente 150 kilodaltons (Physicians Desk Reference, 2002, Medical Economics Company Inc . ) . Otros polipéptidos contemplados de manera específica para formulación de acuerdo con la invención incluye polipéptidos de fusión recombinante que comprenden por lo menos una porción de un dominio Fc-anticuerpo . Un polipéptido fusionado a un dominio Fe e idéntico o sustancialmente similar a uno de los siguientes polipéptidos resulta adecuado para uso en la presente composición farmacéutica: un ligando flt3 , un ligando CD40, eritropoyetina, trombopoyectina, calcitonina, ligando Fas, ligando para activador de receptor de NF-kappa B (RA KL) , ligando inductor de apoptosis relacionado con factor de necrosis tumoral (TNF) (TRAIL) , linfopoyetina derivada de estroma timico, factor estimulador de colonia de granulocitos , factor estimulador de colonia de granulocitos-macrófagos, factor de crecimiento de mastocitos, factor de crecimiento de hemocitoblastos , factor de crecimiento epidérmico, RANTES, hormona del crecimiento, insulina, insulinotropina, factores de crecimiento similares a insulina, hormona paratiroidea, interferones , factores de crecimiento de nervios, glucagon, interleucinas 1 a 18, factores estimuladores de colonias, linfotoxina-ß, factor de necrosis tumoral (TNF, por sus siglas en inglés) , factor inhibidor de leucemia, oncostatina-M y varios ligandos para moléculas de superficie celular ELK y Hek (tales como los ligandos para las cinasas relacionadas con eph o LERKS) . Los polipéptidos adecuados para formulación de acuerdo con la invención también incluyen polipéptidos de fusión recombinante que comprenden un dominio Fe de un anticuerpo más un receptor para cualquiera de los polipéptidos mencionados antes o polipéptidos sustancialmente similares a tales receptores. Estos receptores incluyen: ambas formas de TNFR (denominados como p55 y p75) , receptores de interleucina-1 (tipo 1 y 2) , receptor de interleucina- , receptor de interleucina-15 , receptor de interleucina-17 , receptor de interleucina-18 , receptor del factor estimulador de colonia de granulocitos-macrófagos , receptor del factor estimulante de colonia de granulocitos , receptores de oncostatina-M y factor inhibidor de leucemia, activador de receptor de NF-kappa B (RA K) , receptores para TRAIL (receptores de T AIL 1, 2, 3 y 4) y receptores que comprenden dominios mortales, tales como Fas o receptor inductor de apoptosis (AIR, por sus siglas en inglés) . Otros polipéptidos adecuados para uso en la presente formulación incluyen antigenos de diferenciación (denominados como polipéptidos CD) o sus ligandos o polipéptidos sustancialmente similares a cualquiera de estos, los cuales se fusionan a un dominio Fe de un anticuerpo. Tales antígenos se describen en tipificación leucocita VI (Proceedings of the vlth International Workshop and Conference, Kushimoto, Kikutani et al., eds., obe, · Japón, 1996). Se describen polipéptidos CD similares en investigaciones subsecuentes. Los e emplos de tales antígenos incluyen CD27, CD30, CD39, CD40 y ligandos para los mismos (ligando de CD27, ligando de CD30, etc.) . Varios de los antígenos CD son miembros de la familia de receptor de TNF, el cual también incluye el ligando 41BB y OX40. Los ligandos con frecuencia son miembros de la familia TNF tal como el ligando 41BB y OX40. En consecuencia, se pueden formular de acuerdo con la presente invención los miembros de TNF y de TNFR. También se pueden formular de acuerdo con la invención polipéptidos enzimáticamente activos o sus ligandos. Los ejemplos incluyen polipéptidos de fusión recombinantes que comprenden un dominio Fe de un anticuerpo fusionado a la totalidad o parte de uno de los siguientes polipéptidos o sus ligandos o un polipéptido sustancialmente similar a uno de estos : miembros de la familia de metaloproteinasa-desintegrina, diversas cinasas, glucocerebrosidasa, superóxido dismutasa, activador de plasminógeno tisular, factor VIII, factor IX, apolipoproteína E, apolipoproteína A-l, globinas, un antagonista de IL2-antitripsina a-l, enzima convertidora de TNF-a, ligandos para cualquiera de las enzimas mencionadas antes y muchas otras enzimas y sus ligandos. Las formulaciones y métodos de la invención también se pueden utilizar para preparar composiciones farmacéuticas que comprenden anticuerpos, anticuerpos humanos, anticuerpos humanizados, anticuerpos quiméricos, es decir anticuerpos que tienen dominios de inmunoglóbulina de anticuerpo constante humano acoplados a uno o más dominios de inmunoglóbulina de anticuerpo variable o anticuerpos de humanos, o fragmentos de los mismos. Los ejemplos específicos de anticuerpos adecuados para uso en la presente formulación incluyen anticuerpos disponibles comercialmente tales como muromonab-CD3 (Orthoclone 0KT-3MR, Ortho Biotech) , abciximab (ReoProMR, Lilly) , rituximab (Rituxan"31, IDEC) , dacliximab (ZenapaxMR, Roche Laboratories) , basiliximab (SimulectMR, Novartis) , infliximab (RemicadeMR, Centocor) , palivizumab (SynagisMR, Medlmmune) , trastuzumab (HerceptinMR, Genentech) , gemtuzuman ozogamicin (Mylotarg^, Wyeth-Ayerst) , y alemtuzumab (CampathMR, Berlex) . Actualmente, cada uno de los anteriores está disponible ya sea como un polvo liofilizado que requiere rehidratación o como un concentrado que requiere dilución antes de su administración. La presente formulación elimina la necesidad de cualquier manipulación antes de la administración, por ejemplo rehidratación o dilución, mientras que se conserva la estabilidad de los ingredientes activos durante almacenamiento a largo plazo. La composición farmacéutica de la invención también se puede utilizar para almacenar polipeptidos que comprenden un anticuerpo conjugado a una sustancia citotóxica o luminiscente. Tales sustancias incluyen: derivado de maytansina (tales como DM1) ; enterotoxinas (tal como las enterotoxinas estafilocócicas) ; isótopos de yodo (tales como yodo-125) ; isótopos de tecnecio (tales como Tc-99m) ; fluorocromos de cianina (tales como Cy5.5.18); y polipéptidos ianctivadores de ribosomas (tales como bouganina, gelonina o saporina-S6) .
Los ejemplos de anticuerpos o de conjugado de anticuerpo/citotoxina o anticuerpo/luminóforo contemplados para uso en la invención incluyen aquellos que reconocen uno o más de los siguientes antígenos : CD2 , CD3 , CD4 , CD8 , CDlla, CD14, CD18, CD20, CD22, CD23 , CD25, CD33, CD40, CD44, CD52, CD80 (B7.1), CD86 (B7.2 ) , CD147, IL-4, IL-5, IL-8, IL-10, receptor IL-2, receptor IL-4, receptor IL-6, receptor IL-13, PDGF-ß , VEGF, TGF, TGF-p2, TGF-ß?, receptor EGF, receptor VEGF, complemento de C5, IgE, antigeno para el tumor CA125, antígeno para el tumor MUCl, antígeno PEM, LCG (el cual es un producto genético que se expresa en asociación con cáncer de pulmón), HER-2 , una glucoproteína asociada a tumor TAG-72, el antigeno SK-1, epitopos asociados a tumor que están presentes a concentraciones elevadas en sueros de pacientes con cáncer de colon o pancreático, epítopos asociados a cáncer o polipéptidos que se expresan en cáncer de mama, colon, de células escamosas, de próstata, pancreático, de pulmón o células de cáncer de riñon en células de melanoma, glioma o neuroblastoma . Receptores TRAIL 1, 2, 3 y 4, el núcleo necrótico de un tumor, integrina 4ß7, la integrina VLA-4, integrinas B2 , TNF-cc, la molécula de adhesión VAP-1, la molécula de adhesión de células epiteliales (EpCAM) , la molécula de adhesión intercelular-3 (ICAM-3) , adhesina de leucointegrina, la glucoproteína plaquetaria gp Ilb/lIIa, cadena pesada de miocina cardíaca, hormona paratiroidea, rNAPc2 (el cual es un inhibidor de factor Vlla-factor tisular) , CPH I, antlgeno carcinoembriónico (CEA, por sus siglas en inglés) , a-fetoproteína (AFP) , factor de necrosis tumoral (TNF, por sus siglas en inglés) , CTLA-4 (el cual es un antígeno asociado a linfocito T citotóxico) , receptor de
Fc-?-?, . HLA-DR10 ß, antígeno de HLA-DR, L-selectina, INF-?, virus sincitial respiratorio, virus de inmunodeficiencia humana (VIH) , virus dé hepatitis B (HBV, por sus siglas en inglés) , Streptococcus mutans y Staphylococcus aureus. Las formulaciones de la invención también se pueden utilizar para anticuerpos antiidiotípicos o polipéptidos sustancialmente similares, que incluyen pero que no se limitan a anticuerpos antiidiotípicos contra: un anticuerpo dirigido al antígeno tumoral gp72 un anticuerpo contra el gangliósido GD3 ; o un anticuerpo contra el gangliósido GD2. El polipéptido que contiene el dominio Fe adecuado para almacenamiento en la presente composición farmacéutica se puede elaborar por células hospedadoras vivas que expresen el polipéptido, tales como hibridomas en el caso de anticuerpos, o células hospedadoras que hayan sido sometidas a ingeniería genética para producir el polipéptido en el caso de polipéptidos o anticuerpos de fusión. Los métodos para someter a ingeniería genética a células para producir polipéptidos son bien conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, Ausubel et al., eds . (1990), . Current Protocolos in Molecular Biology (Wiley, New York) . Tales métodos incluyen introducir ácidos nucleicos que codifican y permite la expresión del polipéptido en células hospedadoras vivas. Estas células hospedadoras pueden ser células bacterianas, células micóticas o preferiblemente, células animales que crecen en cultivo. Las células hospedadoras bacterianas incluyen, pero no se limitan a células de Escherichia coli. Los ejemplos de cepas adecuadas de E. coli incluyen: HB101, DH5a, GM2929, JM109, KW251, NM538, NM539 y cualquier cepa de E. coli que no rompa ADN extraño. Las células hospedadoras micóticas que se pueden utilizar incluyen, pero no se limitan a células de Saccharomyces cerevisiae, Pichia pastoris y Aspergillus . Algunos ejemplos de líneas de células animales que se pueden utilizar son CHO, VERO, BHK, HeLa, Cos, MDCK, 293, 3T3 y I38. Las líneas de células animales nuevas pueden ser establecidas utilizando métodos bien conocidos por los expertos en la técnica (por ejemplo mediante transformación, infección viral o selección) . Opcionalmente, el polipéptido se puede secretar por las células hospedadoras en el medio. La purificación del polipéptido que contiene dominio Fe expresado se puede realizar por cualquier método estándar. Cuando se produce intracelularmente el polipéptido que contiene el dominio Fe, se eliminan los residuos particulados, por ejemplo mediante centrifugación o ultrafiltración . Cuando el polipéptido se secreta al medio, los sobrenadantes de tales sistemas de expresión primero se pueden concentrar utilizando filtros de concentración de polipéptido estándar. También se pueden agregar inhibidores de proteasa para inhibir la proteólisis y se pueden incluir antibióticos para evitar el crecimiento de microorganismos. El polipéptido que contiene el dominio Fe se puede purificar utilizando, por ejemplo, cromatografía de hidroxiapatita, electroforesis en gel, diálisis y cromatografía de afinidad, y cualquier combinación de técnicas de purificación conocidas o que aún estén por descubrirse. Por ejemplo, se puede utilizar la proteína A para purificar polipéptidos que contienen el dominio Fe que se basan en las cadenas pesadas humanas ??, ?2 o ?4 (Lindmark et al., 1983, J. Immunol . Meth. 62:1-13). Se recomienda la proteína G para todos los isotipos murinos y para ?3 humana (Guss et al., 1986, EMBO J. 5:1567-1575). Otras técnicas para purificación de polipéptidos tales como el fraccionamiento en una columna de intercambio iónico, precipitación por etanol , CLAR en fase inversa, cromatografía sobre sílice, cromatografía sobre heparina SEPHAROSETMR, cromatografía en una resina de intercambio catiónico (tal como una columna de ácido poliaspártico) , cromatoenfoque, SDS-PAGE y precipitación son sulfato de amonio también se pueden utilizar, en base en las necesidades.
Composición Farmacéutica Se prepara la presente composición farmacéutica al combinar, además del polipéptido purificado descrito antes, un inhibidor de agregación. Además, se puede agregar, según se necesite, un amortiguador, un modificador de tonicidad y un excipiente adicional . Se comprenderá por una persona habitualmente experta en la técnica que la combinación de los diversos componentes se pueden incluir en la composición y se pueden realizar en cualquier orden apropiado, específicamente el amortiguador se puede agregar primero, en la parte media o ¦ al final y el modificador de tonicidad también se puede agregar primero, en la parte media o al final. También debe entenderse por una persona habitualmente experta en la técnica que algunas de estas sustancias químicas pueden ser incompatibles en ciertas combinaciones y en consecuencia, se sustituyen fácilmente con sustancias químicas diferentes que tengan propiedades similares pero que sean compatibles en la mezcla pertinente. Los inhibidores de agregación reducen la tendencia de los polipéptidos a asociarse en complejos triples o cuádruples inapropiados o no deseados. Inesperadamente, los presentes inventores han encontrado que los aminoácidos L- arginina y L-cisteína actúan al reducir la agregación del polipéptido que contiene el dominio Fe en una formulación durante períodos prolongados, por ejemplo de dos años o más.
La concentración del inhibidor de agregación en la formulación preferiblemente está entre aproximadamente 1 mM a 1M, de manera más preferible de aproximadamente 10 mM a aproximadamente 200 mM, y de manera mucho más preferible de aproximadamente 10 mM a aproximadamente 100 mM, incluso de manera más preferible de aproximadamente 15 mM a aproximadamente 75 mM y de manera aún más preferible de aproximadamente 25 mM. Estos compuestos están disponibles de proveedores comerciales . Los agentes amortiguadores mantienen el pH en un intervalo deseado y diversos amortiguadores adecuados para uso en la composición farmacéutica de la invención incluyen histidina, fosfato de potasio, citrato de sodio o de potasio, ácido maleico, acetato de amonio, tris- (hidroximetil) -aminometano (tris) , diversas formas de acetato y dietanolamina . Un amortiguador preferido es fosfato de sodio dado que su capacidad amortiguadora es cercana a pH 6.2. La concentración del amortiguador en . la formulación preferiblemente está entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 1M, de manera más preferible entre aproximadamente 10 mM y aproximadamente 200 mM. Los amortiguadores son bien conocidos en la técnica y se fabrican por métodos conocidos y están disponibles de proveedores comerciales. Cuando se ajusta el pH de una composición farmacéutica en un valor o cerca de los niveles fisiológicos, se maximiza la comodidad del paciente cuando se realiza la administración. En particular, se prefiere que el pH esté dentro del intervalo de pH de aproximadamente 5.8 a 8.4, no obstante, se prefiere de aproximadamente 6.2 a 7.4, debe entenderse que el pH se pueda a ustar según se necesite para maximizar la estabilidad y solubilidad del polipéptido en una formulación particular y de esta manera, un pH fuera de los intervalos fisiológicos, pero aún tolerable para el paciente, está dentro del ámbito de la invención. Se entiende que un modificante de tonicidad es una molécula que contribuye a la osmolalidad de la solución. La osmolalidad de una composición farmacéutica preferiblemente está regulada con el fin de maximizar la estabilidad del ingrediente activo y también para minimizar la incomodidad en el paciente cuando se realiza la administración. Cuando el suero es de aproximadamente 300 +/- 50 miliosmolales por kilogramo. Generalmente se prefiere que una composición farmacéutica sea isotónica con el suero, es decir, que tenga una osmolalidad igual o similar, lo que se obtiene por adición de un modificador de tonicidad, y por lo tanto se contempla que la osmolalidad se encuentre entre aproximadamente 180 y aproximadamente 420 miliosmolales, no obstante, debe entenderse que la osmolalidad puede ser mayor o menor según lo requieran las condiciones específicas. Los ejemplos de modificadores de tonicidad adecuados para modificar la osmolalidad incluyen, pero no se limitan a aminoácidos (por ejemplo arginina, cisteína, histidina y glicina), sales, (por ejemplo cloruro de sodio, cloruro de potasio y citrato de sodio) o sacáridos (por ejemplo sacarosa, glucosa y manitol) . La concentración del modificador de tonicidad en la formulación preferiblemente está entre aproximadamente 1 mM a 1M, de manera más preferible entre aproximadamente 10 mM a aproximadamente 200 mM. Los modificadores de tonicidad son bien conocidos en la técnica y se fabrican por métodos conocidos y están disponibles de proveedores comerciales. Los excipientes, también denominados como aditivos químicos, cosolutos o cosolventes que estabilizan al polipéptido mientras está en solución (también en formas secas o congeladas) , también se pueden agregar a una composición farmacéutica. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a azúcares/polioles tales como: sacarosa, lactosa, glicerol, xilitol, sorbitol , manitol, maltosa, inositol, trehalosa, glucosa; polímeros tales como: albúmina sérica (albúmina sérica bovina (BSA, por sus siglas en inglés) , SA humana o HA recombinante) , dextrano, PVA, hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) , polietilenimina, gelatina, polivinilpirrolidona (PVP) , hidroxietilcelulosa (HEC) ; solventes no acuosos tales como: alcoholes polihídricos (por ejemplo PEG, etilenglicol y glicerol) , sulfóxido de dimetilo (DMSO, por sus siglas en inglés) y dimetilformamida (DMF) ; aminoácidos tales como: prolina, L-serina, ácido glutámico de sodio, alanina, glicina, clorhidrato de lisina, sarcocina y ácido ?-aminobutírico; tensioactivos tales como: Tween-80, Tween-20, SDS, polysorbate, copolímero de polioxietileno y excipientes diversos tales como: fosfato de potasio, acetato de sodio, sulfato de amonio, sulfato de magnesio, sulfato de sodio, N-óxido de trimetilamina, betaína, iones metálicos (por ejemplo zinc, cobre, calcio, manganeso y magnesio) , CHAPS, monolaurato, 2-0-p-manoglicerato o cualquier combinación de los anteriores . La concentración de uno o más excipientes en una formulación de la invención preferiblemente está entre aproximadamente 0.001 a 5 por ciento en peso, de manera más preferible entre aproximadamente 0.1 a 2 por ciento en peso. Los excipientes son bien conocidos en la técnica y se fabrican por métodos conocidos y están disponibles de proveedores comerciales. En una modalidad ilustrativa, una formulación de la invención puede comprender aproximadamente 25 a 50 mg de TNFR:Fc (etanercept) , aproximadamente 10 mM a aproximadamente 100 mM de L-arginina, aproximadamente 10 mM a aproximadamente 50 mM de fosfato de sodio, aproximadamente 0.75% a aproximadamente 1.25% de sacarosa, aproximadamente 50 mM a aproximadamente 150 mM de NaCl , a aproximadamente pH 6.0 a aproximadamente pH 7.0. En otra modalidad, la L-arginina puede estar sustituida con L-cisteína (a aproximadamente 1 a aproximadamente 500 µ?) en la formulación. En otra modalidad adicional, el pH puede ser de aproximadamente pH 7.0. En otra modalidad específica, una formulación de la invención puede comprende aproximadamente 25 mg/ml de TNFR:Fc, aproximadamente 25 mM de L-arginina, aproximadamente 25 mM de fosfato de sodio, aproximadamente 98 mM de cloruro de sodio y aproximadamente 1% de sacarosa a aproximadamente pH 6.2. En otra modalidad, una formulación de la invención puede comprender aproximadamente 10 a aproximadamente 100 mg/ml de RANK:Fc en aproximadamente 10 mM a aproximadamente 100 M de L-arginina, aproximadamente 10 mM a aproximadamente 50 mM de fosfato de sodio, aproximadamente 0.75% a aproximadamente 1.25% de sacarosa, aproximadamente 50 mM a aproximadamente 150 mM de NaCl , a aproximadamente pH 6 a aproximadamente pH7. En una modalidad especifica, la formulación de la invención comprende 50 mg/ml de RANK:Fc en aproximadamente 25 mM de L-arginina, aproximadamente 25 mM de fosfato de sodio, aproximadamente 98 mM de cloruro de sodio y aproximadamente 1% de sacarosa a un pH de aproximadamente 6.2. En otra modalidad, una formulación de la invención puede comprender una cantidad eficaz de un polipéptido que contiene el dominio Fe, aproximadamente 10 mM a aproximadamente 100 mM de L-arginina, aproximadamente 10 mM a aproximadamente 50 mM de fosfato de sodio, aproximadamente 0 a 5% de manitol y 0 a 0.2% de Tween-20 a aproximadamente pH 6 a 7. En otra modalidad, una formulación de la invención puede comprender una cantidad eficaz de un anticuerpo, tal como Emab (un anticuerpo específico contra CD22) , aproximadamente 25 mM de L-arginina, aproximadamente 25 mM de fosfato de sodio, aproximadamente 4% de manitol, aproximadamente 0.02% de Tween-20 y aproximadamente pH 6.0. En otra modalidad adicional, la invención proporciona un método para tratar a un mamífero que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de la composición farmacéutica descrita en la presente, en donde el mamífero tiene una enfermedad o desorden que puede ser tratado benéficamente con un polipéptido que contiene dominios Fe en la composición. En otra modalidad adicional, el polipéptido que contiene el dominio Fe se deriva de la misma especie de mamífero que el que va a ser tratado con la composición. En una modalidad particular, el mamífero es un paciente humano en necesidad del tratamiento. Cuando el polipéptido que contiene el dominio Fe de la composición es TNFR:Fc, los ejemplos de enfermedades o desórdenes que pueden ser tratados incluyen, pero no se limitan a artritis reumatoide, artritis psoriática, espondilitis anquilosante, enfermedad de Wegener (granulomatosis) , enfermedad de Crohn (o enfermedad de intestino inflamatorio) , enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD, por sus siglas en inglés) , hepatitis C, endometriosis , asma, caquexia, psoriasis y dermatitis atópica. Las enfermedades o desórdenes adicionales que pueden ser tratados con TNFRrFc incluyen los descritos en el documento WO 00/62790, WO 01/62272 y la solicitud de patente de E.U.A. número 2001/0021380, las porciones pertinentes de las mismas se incorporan en la presente como referencia . En otra modalidad adicional , la invención proporciona un método para prueba de estabilidad acelerada de la estabilidad de un polipéptido que contiene un dominio Fe, en una composición farmacéutica de la invención, que comprende las etapas de probar la actividad del polipéptido formulado de acuerdo con la invención antes del almacenamiento, es decir, en tiempo cero, almacenamiento de la composición a 37°C durante un mes y determinación de la estabilidad del polipéptido, y comparación de la estabilidad desde el momento cero al punto de tiempo de un mes . Esta información es útil para la eliminación temprana de lotes que parezcan tener buena estabilidad inicialmente , pero que no se almacenan bien por periodos más prolongados . Además, la presente composición farmacéutica proporciona un almacenamiento mejorado a largo plazo de manera tal que el ingrediente activo, por ejemplo un polipéptido que contiene el dominio Fe, es estable durante el curso de almacenamiento ya sea en estado líquido o congelado. Como se utiliza en la presente, la frase almacenamiento "a largo plazo" se entiende que significa que la composición farmacéutica puede ser almacenada durante tres meses o más, seis meses o más, y de manera preferible un año o más. También se entiende que el almacenamiento a largo plazo significa que la composición farmacéutica se almacena ya sea como un liquido a 2-8°C o se congela, por ejemplo, a -20°C o más frío. También se contempla que la composición se puede congelar y recalentar más de una vez. El término "estable" con respecto al almacenamiento a largo plazo se entiende que significa que el polipéptido activo de la composición farmacéutica no pierde más de 20%, o de manera más preferible 15%, o incluso de manera más preferible 10% y de manera mucho más preferible 5% de su actividad en relación a la actividad de la composición al inicio del almacenamiento. Dosis eficaz de la composición farmacéutica La dosificación apropiada, o la cantidad terapéuticamente eficaz del polipéptido que contiene el dominio Fe de la formulación dependerá de la condición que va a ser tratada, la gravedad de la condición, antes del tratamiento y los antecedentes clínicos del paciente y la respuesta al agente terapéutico. La dosis adecuada se puede ajustar de acuerdo con el juicio del médico que atiende de manera que puede administrarse al paciente una vez o durante una serie de administraciones . La composición farmacéutica se puede administrar como una sustancia terapéutica única o en combinación con tratamientos adicionales, según se necesite. En una modalidad, la cantidad de polipéptido que contiene dominio Fe eficaz por dosis adulta varía de aproximadamente 1-500 mg/m2, o de aproximadamente 1-200 mg/m2, o de aproximadamente 1-40 mg/m2 o aproximadamente 5-25 mg/m2. De manera alternativa, se puede administrar una dosis básica, cuya cantidad puede variar de 2 a 500 mg/dosis, 2-100 mg/dosis o de aproximadamente 10-80 mg/dosis. Si la dosis se va a administrar más de una vez a la semana, un intervalo de dosis ejemplar es la misma que los intervalos de dosis descritos en lo anterior o menor, y de manera preferible se administra dos o más veces a la semana, en un intervalo por dosis de 25-100 mg/dosis. En otra modalidad, una dosis aceptable para administración por inyección contiene 80-100 mg/dosis, o de manera alternativa contiene 80 mg por dosis. La dosis se puede administrar dos veces a la semana, en dosis semanales o separada por varias semanas (por ejemplo de 2 a 8) . En este ejemplo, TNFR:Fc (etanercept) generalmente se administra a 25 mg mediante una sola inyección subcutánea (SC) . En muchos casos, se obtendrá una mejoría en la condición del paciente con una dosis de hasta aproximadamente 100 mg de la composición farmacéutica una a tres veces a la semana durante un período de por lo menos tres semanas, aunque pueden ser necesarios tratamientos por períodos más prolongados para inducir el grado deseado de mejoría. Para condiciones crónicas incurables, el régimen puede continuar indefinidamente. Para pacientes pediátricos (con edades de 4 a 17 años), un régimen adecuado involucra una dosis de 0.4 mg/kg a 5 mg/kg de los polipéptidos de la invención, administrados una o más veces a la semana. En otra modalidad, se contempla ¦ que la formulación farmacéutica de la invención se prepara en una formulación a granel y como tal, los componentes de la composición farmacéutica se ajustan de manera que sean mayores que los requeridos para administración y se diluyen adecuadamente antes de su administración. Administración de la Composición Farmacéutica Las composiciones farmacéuticas de esta invención son particularmente útiles para administración parenteral, es decir, por vía subcutánea, intramuscular, intravenosa, intraperitoneal , intracerebroespinal , intraarticular, intrasinovial o intratecal . La administración parenteral puede ser una inyección rápida (bolo) o una infusión continua (lenta) . Las composiciones farmacéuticas para inyección se pueden presentar en forma de dosificación unitaria, por ejemplo en ampolletas o en recipientes de dosis múltiples, con un conservador agregado. Además, se han desarrollado muchas soluciones de suministro de medicamento recientes y las composiciones farmacéuticas de la presente invención son adecuadas para administración utilizando estos métodos nuevos, por ej •emplo Inj¦ect-easeMR, Genj1ectMR, p-liumas inyectores tales como GenPenMR y dispositivos sin agujas tales como Medi ¦JectorMR y Bi'oJectorMR . La presente composi¦ci¦ó·"n farmacéutica también se puede preparar para métodos de administración aún por descubrirse. Véase también Langer, 1990, Science, 249:1527-1533. La composición farmacéutica también se puede formular como una preparación de depósito. Tales formulaciones de acción prolongada se pueden administrar por implantación (por ejemplo por vía subcutánea o intramuscular) o por inyección intramuscular. Así, por ejemplo, las formulaciones se pueden modificar con materiales adecuados poliméricos o hidrofóbicos (por ejemplo, como una emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio iónico, o como derivados escasamente solubles por ejemplo, como una sal escasamente soluble. Si se desea, las composiciones farmacéuticas se pueden presentar en un frasco, paquete o dispositivo surtidor el cual puede contener una o más formas de dosificación unitaria que contienen el ingrediente activo. En una modalidad, el dispositivo surtidor puede comprender una jeringa que tenga una dosis única de la formulación líquida lista para inyección. La jeringa puede estar acompañada por instrucciones para administración. En otra modalidad, la presente invención se relaciona con un equipo o recipiente el cual contiene una composición farmacéutica acuosa de la invención. La concentración del polipéptido en la composición farmacéutica acuosa puede variar sobre una amplia gama, pero generalmente está dentro del intervalo desde aproximadamente 0.05 a aproximadamente 20,000 microgramos por mililitro {µg/ml) de formulación acuosa. El equipo también puede acompañarse por instrucciones de uso. La invención se comprenderá más completamente con referencia a los siguientes ejemplos. No obstante, los ejemplos no deben considerarse como limitantes del alcance de la invención. EJEMPLOS Ejemplo 1 Para determinar el mejor excipiente para evitar agregación de un polipéptido que contiene dominio Fe, se produce TNFR:Fc y se prueba por dispersión de luz de una muestra (Is) que contiene TNFR:Fc con diversos excipientes después de incubación a 51°C +/-1°C, y se compara con la dispersión de luz de una muestra control (Ic) en donde únicamente tiene TNFR:Fc almacenada a 2-8°C. Se mide la proporción como Is/Ic, y la proporción de uno representa un valor inicial teórico en donde no hay cambio en la dispersión de luz, es decir, agregación del compuesto de prueba. Los diversos excipientes probados incluyen ácido ascórbico 5%, manitol 5%, sacarosa 10%, polivinilpirrolidona 1% (PVP-K15) , polietilenglicol 0.1% (PEG, Mw = 1000), etanol 0.6%, glicina 1.2%, L-arginina 2%, Pluronic F68 0.01%, betaína l.S% y L-cisteína 1.5%. Sorprendentemente, L-arginina es el único inhibidor de agregación que se encontró que mantiene la relación Is/Ic por debajo de uno durante la totalidad del período de prueba de 200 horas. Ejemplo 2 Se evalúa TNFR:Fc, producido como se indica como lotes A, B, C y D contra TNFR:Fc producido por un método diferente y que tiene una agregación inicial mayor (lote 1) para determinar estabilidad en una formulación líquida (fosfato 25 mM, L-arginina 25 mM, NaCl 98 mM, sacarosa 1% a pH 6.2) en jeringas o frascos de vidrio a -70°C, -20°C, 2.8°C, 30°C y 37°C. Las muestras se analizaron por cromatografía de exclusión de tamaño (SEC, por sus siglas en inglés) , SEC desnaturalizada (dSEC) , cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC, por ' sus siglas en inglés) , electroforesis en gel con dodecilsulfato de sodio y poliacrilamida (SDS-PAGE, por sus siglas en inglés) y para determinación de unión y bioactividad en diversos puntos en tiempo. La bioactividad se puede medir en cualquiera de los ensayos que incluyen SEC, dSEC, HIC, actividad de unión y bioactividad, como se discute en lo siguiente. Cromatografía de exclusión por tamaño: Se utiliza SEC para determinar el nivel de especies con peso molecular elevado (HMW, por sus siglas en inglés) (agregado que se forma) en las muestras durante el almacenamiento. Las especies con peso molecular bajo (LM , por sus siglas en inglés) se separan mejor por dSEC y estos datos se pueden encontrar en la sección siguiente . La figura 1 muestra los datos SEC para las muestras almacenadas a 2-8°C y la figura 2 muestra los datos SEC para muestras almacenadas bajo condiciones aceleradas de 37 °C. Los datos también se recolectan para muestras almacenadas a 30°C (datos no mostrados) y las concentraciones de las especies HMW son intermedias a aquellas observadas a 2-8 °C y 37°C. Durante el almacenamiento por 1 año a 2-8 °C, las concentraciones de agregado permanecen estables o se incrementan menos de 0.6% en el peor caso para el lote A. No se observan incrementos significativos en agregado durante el almacenamiento a 2-8°C. Bajo condiciones aceleradas durante el almacenamiento a 37°C, las concentraciones de agregado en el lote 1 aumentaron a 19% durante 12 meses y a 14% y 12% en el lote A y B, respectivamente. La pendiente de las líneas fueron muy similares, lo que muestra que las moléculas se agregaron a la misma velocidad y que las diferencias entre los lotes A-D y el lote 1 se deben a las concentraciones iniciales de agregado, mayor en el lote 1 que en los lotes A-D. Para el lote B, no hubo diferencia entre las muestras almacenadas en un frasco a -70°C, en una jeringa a -70°C, en una jeringa a -20°C o en una jeringa después de tratamiento térmico y almacenamiento a -20°C (datos no mostrados) . Todos los valores están dentro de 0.4% del frasco control de -70°C (y un valor de tiempo 0) después de 12 meses de almacenamiento. Cromatografía por Exclusión de Tamaño, Desnaturalizada: La cuantificación de SEC desnaturalizada (dSEC) de las especies de peso molecular bajo (L W) se muestra en la figura 3 para muestras almacenadas a 2-8°C, y la figura 4 para muestras almacenadas a 37°C. Los lotes A-D y el lote 1 se analizan por dSEC después de almacenamiento hasta por 1 año a 2-8°C, pero los lotes C y D no se analizan después de 6 meses de almacenamiento bajo condiciones aceleradas de 37°C. Durante el almacenamiento a 37°C, el lote 1 y los lotes A, B y C muestran una descomposición similar, mientras que el lote D muestra una descomposición mayor durante la tensión con calor en comparación con el lote 1 y los otros lotes. La similitud en los lotes A y B y el lote 1 también se observa durante el almacenamiento a 30°C (datos no mostrados) con niveles de descomposición intermedios a los observados a 2-8°C y 37°C. Para el lote B, no hay diferencia entre las muestras almacenadas en un frasco a -70 °C, en una jeringa a -70°C y en una jeringa a -20°C o en una jeringa después de tratamiento térmico y almacenamiento a -20 °C (datos no mostrados) . Todos los valores después de 12 meses de almacenamiento a -70°C y -20°C están dentro de 0.7% entre sí y el valor de tiempo 0. Durante el almacenamiento a 30°C (datos no mostrados) , el % de LMW por dSEC para el lote A sigue bien al lote B, aunque ambos lotes muestran niveles ligeramente mayores de descomposición que el lote 1 a esta temperatura. El lote D muestra niveles más elevados de especies LMW tanto a 2-8°C como a 37°C en todos los puntos de tiempo, incluyendo el tiempo 0. Los productos de descomposición en el lote D parecen ser más grandes en tamaño que los observados típicamente por el análisis dSEC de muestras de TNFRrFc sometidas a tensión. Estas especies diferentes se observan después de almacenamiento tanto a 2-8°C como a 37°C. Cromatografía de Interacción Hidrofóbica: Se utiliza HIC para separar diversas especies relacionadas con TNFR:Fc. Se ha demostrado que el pico 1 (y un pico que eluye antes, indicado como prepico 1) consiste principalmente de especies de peso molecular bajo. El pico 2 incluye al dimero intacto plegado o naturalizado (activo) . El pico 3 incluye material agregado y dímeros menos activos. En la figura 5 se muestran los datos de HIC del pico 1 para muestras almacenadas a 2-8°C y la figura 6 para muestras almacenadas a 37°C. Para todos los lotes excepto el lote D, las concentraciones de la especie LMW permanecen relativamente constantes (dentro de 1.2% durante 12 meses) para muestras almacenadas a 2-8°C. Si se utiliza el valor promedio de las muestras a -70°C en lugar del valor de tiempo 0 para el lote A, las curvas de todos los lotes, excepto el lote D, se alinean bien. El lote D muestra más pico 1 que los otros lotes, lo que corrobora las concentraciones elevadas de especies LMW observadas por dSEC. Después de someter a tensión térmica las muestras a 37°C hasta por 1 año, el lote B y el lote 1 muestran aproximadamente un pico 1 HIC 30%, mientras que el lote A muestra un pico 1 HIC 45%. EL lote D muestra un pico 1 HIC de 47% después de solo 6 meses de someterlo a tensión a 37°C. Como se indica en lo anterior, el pico 2 de HIC representa la especie activa más deseada. Las figuras 7 y 8 muestran el pico 2 de HIC, en %, para muestras almacenadas a 2-8°C y 37°C, respectivamente. Aunque el lote 1 se inicia con un pico 2% inicial menor, retiene el nivel de especies activas durante el almacenamiento por 12 meses a 2-8 °C. Los lotes A, B y C también retienen especies activas durante 12 meses de almacenamiento refrigerado. Bajo condiciones aceleradas de 37°C, todos los lotes probados pierden el pico 2 de HIC durante el . almacenamiento . Los niveles del pico 3 de HIC permanecen esencialmente constantes durante 1 año de almacenamiento a 2-8°C (véase la figura 9) . La variación en % en el pico 3 para todos los lotes varía entre 1 y 3%, que se encuentra bien dentro del error de integración. Para los lotes A, B, C y D, el pico 3 de HIC no muestra separación de línea inicial, lo que introduce más variabilidad en la integración. Para el lote 1, el pico se define más claramente. Después de almacenamiento a 37°C, los niveles de pico 3 de HIC en el lote 1 son más variables, pero permanecen constantes, excepto por un posible incremento a los 12 meses (figura 11) entre los lotes A-D, no se observan diferencias claras después del almacenamiento a 37°C, excepto a los 12 meses, en donde el lote D muestra un incremento en el nivel de pico 3 de HIC. Electroforesis en Gel con Dodecilsulfato de Sodio-Poliacrilamida : Se realizan análisis por SDS-PAGE de muestras almacenadas durante 12 meses a -70°C, -20°C, 2-8°C, 30°C y 37°C. El lote A presenta un incremento en las bandas asociadas con los fragmentos de ruptura tanto a -50 kD como a
~34 kD después de almacenamiento a 2-8°C durante 1 año. A temperaturas elevadas se observa degradación extensa, con muchas bandas de peso molecular pequeño que muestran intensidades aumentadas . El lote 1 no cambia después de 1 año de almacenamiento a 2-8°C, pero muestra ruptura de fragmentos aumentada de -50 kD y ~34 kD después de 1 año a 30 y 37°C. El lote B no muestra cambios durante el almacenamiento por 12 meses a -70°C (en frasco o jeringa) o en jeringas a -20°C, con o sin tratamiento térmico para eliminar el superenfriamiento . Después de 12 meses a 2-8°C, no obstante, las bandas que corresponden a los fragmentos de ruptura de ~50 kD y -34 kD muestran fragmentos con intensidad aumentada. El almacenamiento a 30 ó 37°C durante 1 año resulta en ruptura con muchas bandas de peso molecular pequeño además de los fragmentos de descomposición discutidos previamente de -50 kD y -34 kD. Los lotes C y D se analizaron después de almacenamiento durante 12 meses a -70°C y 2-8°C. EL lote 1 y los lotes B, C y D se analizaron después de almacenamiento durante 12 meses a -70°C y 2-8°C y mostraron patrones similares de degradación, como se indica en lo anterior. Unión y Bioactividad: La figura 11 muestra los datos de actividad de unión derivados de una prueba de ELISA para los lotes A-D y el lote 1 almacenado durante 6 y 12 meses a -70°C, 2-8°C, 30°C y 37°C. Las barras de error en las muestras de -70°C indican +/-30%. Únicamente valores fuera de estas barras de error se considerarán significativos debido a la variabilidad de ensayo. Los lotes A y B retienen actividad de unión completa después de 6 meses a 2-8 y 30°C, pero a 12 meses, únicamente las muestras almacenadas a 2-8°C mantienen actividad de unión completa. El lote 1 es capaz de mantener actividad completa hasta por 12 meses después del almacenamiento 'a 2-8 y 30°C, pese a mostrar niveles LMW de 13.6% (por dSEC; datos no mostrados) y 8% de HMW (por SEC; datos no mostrados) después de 1 año a 30°C. Los lotes C y D también retienen actividad de unión completa después de 1 año de almacenamiento a 2-8 °C, pese a los altos niveles de productos de descomposición que se observan en el lote D por dSEC y HIC. Un ejemplo de un bioensayo de TNFR:Fc es inhibir la respuesta de crecimiento negativa de una línea celular a TNF- humano. La presencia de TNF-a inhibe a las células impidiendo que crezcan a través de inducción de apoptosis. La presencia de receptor rhuTNF soluble biológicamente activo (TNFR-.Fc) neutraliza de manera específica a TNF-a de una manera dependiente de la dosis. Un estándar de referencia de TNFR, un control y muestras se agregan y se titulan en un. formato de placa de microtitulación de 96 pozos. Se agrega a cada pozo una concentración conocida de células seguido por adición de TNF-a. Después de un período de incubación, se eliminan las células no adherentes mediante lavado ligero con solución salina amortiguada con fosfato (PBS) y las células restantes se tiñen. Después de un período de incubación se lee cada pozo. Las unidades de cada pozo son directamente proporcionales a la actividad específica de TNFR . Los resultados para el ensayo de bioactividad (figura 12) corroboran los datos de ensayo de unión. Conclusiones : Los lotes B y C que se presentan en una formulación de fosfato líquido (fosfato 25 mM, L-arginina 25 mM , NaCl 98 mM, sacarosa 1% , pH 6.2) se demostró que son estables como el lote 1 en la misma formulación durante 1 año a -70°C o 2-8°C. Los lotes A-D mostraron menos agregación que el lote 1, y son equivalentes en términos de descomposición en especies de peso molecular menor (menores de LMW 4% por dSEC a 12 meses) . Tanto el lote 1 como los lotes A-D mostraron descomposición y agregación aumentadas a temperaturas elevadas de 30 y 37°C, pero los lotes que funcionaron igual al lote 1 hasta por 1 año a 2-8°C mostraron equivalencia con el lote 1 durante el tratamiento con calor durante 1 año. El lote D se demostró que es menos estable en el ensayo acelerado para concentraciones elevadas de productos de descomposición de peso molecular bajo. Los datos de la prueba de estabilidad acelerada a 30 y 37°C corresponden con la estabilidad a largo plazo a 2-8°C, y por lo tanto proporcionan un método para realizar pruebas aceleradas de estabilidad a largo plazo de un polipéptido formulado a temperaturas bajas, sin que se requiera la determinación de estabilidad a largo plazo. Las muestras del lote B almacenadas congeladas en jeringas a -70°C y -20°C mostraron una estabilidad similar a muestras congeladas almacenadas en un frasco, a -70°C, lo que fundamenta el uso de un anticuerpo en una jeringa prellenada almacenada y congelada hasta su suministro al paciente. Equivalentes y Referencias La presente invención no está limitada en alcance por las modalidades específicas que se describen en la presente, las cuales se pretende que sean ilustraciones simples de aspectos individuales de la invención, y métodos y componentes funcionalmente equivalentes están dentro del ámbito de la invención. En realidad, las diversas modificaciones de la invención, además de las mostradas y descritas en la presente se volverán evidentes para los expertos en la técnica a partir de la descripción precedente y dibujos anexos. Se pretende que tales modificaciones se encuentren dentro del alcance de las reivindicaciones anexas . Todas las publicaciones, patentes y solicitudes de patentes mencionadas en esta especificación se incorporan en la presente como referencia en la especificación en la misma medida que si cada publicación individual, patente o solicitud de patente fuera indicada específica e individualmente como incorporada en la presente como referencia . Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.