MXPA04003906A - Endoprotesis vacular o injerto revestido o impregnado con inhibidores de quinasa de tirosina de proteina y metodo para utilizar los mismos. - Google Patents

Abstract

Se describe un dispositivo, tal como una endoprotesis cardiovascular, injerto venoso/arterial autologo, injerto venoso/arterial prostetico, cateter vascular, o desviacion vascular, para colocar una endprotesis al vaso sanguineo. EL dispositivo tiene revestido sobre el mismo, absorbido al mismo, impregnando en el mismo, o unido ionicamente o covalentemente al mismo una cantidad de un inhibidor de quinasa de tirosina de proteina. La proliferacion del inhibidor de quinasa de tirosina de proteina de las celulas de musculo liso vascular en un area dentro de un vaso sanguineo inmediantemente adyacente y/o proximo al dispositivo, mientras que no se inhibe simultaneamente la proliferacion de las celulas intimas vasculares. Tambien se describe un metodo correspondiente para utilizar el dispositivo para colocar una endoprotesis a los vasos sanguineos.

Description

ENDOPRÓTESIS VASCULAR O INJERTO REVESTIDO O IMPREGNADO CON INHIBIDORES DE QUINASA DE TIROSINA DE PROTEÍNA Y MÉTODO PARA UTILIZAR LOS MISMOS SOLICITUD RELACIONADA Se reivindica en la presente la prioridad a la solicitud provisional No. de Serie 60/343,732, presentada el 25 de Octubre de 2001 , cuya solicitud provisional se incorpora en la presente para referencia.

CAMPO DE LA INVENCIÓN La invención se dirige a métodos para inhibir selectivamente la proliferación de las células de músculo liso vasculares (VS Cs) que siguen a la lesión vascular o intervenciones quirúrgicas tales como revascularización percutánea, sin inhibir la proliferación de las células endoteliales. Específicamente, la invención se dirige al uso de inhibidores de quinasa de tirosina de proteína, preferentemente aquellos que inhiben la quinasa de tirosina Bcr-Abl, y más preferentemente sulfonato de metano 4-{(4-metil-1 -piperazinil)metil}-N-{4-(metil-3-{{4-(3-pirimidinil}amino}-fenil}benzamida, revestido sobre endoprótesis vasculares, injertos nativos, o injertos vasculares prostéticos, para prevenir la proliferación de VSMCs selectivamente, mientras que no se afecta adversamente la proliferación de las células endoteliales.

ANTECEDENTES arteriosclerosis es una clase de enfermedades caracterizada por el espesamiento y endurecimiento de las paredes arteriales de los vasos sanguíneos. A pesar de que todos los vasos sanguíneos son susceptibles a esta condición degenerativa seria, las arterias coronarias y la aorta que sirven al corazón frecuentemente son las más afectadas. La arteriesclerosis es de importancia clínica profunda ya que puede aumentar el riesgo de ataques del corazón, infartos al miocardio, apoplejías, y aneurismas. El tratamiento tradicional para los vasos arterioscleróticos actualmente incluye los procedimientos de recanalización vascular para los blocajes menos serios y ci rugía de bypass coronaria para blocajes principales. En donde es posible, se prefiere más la recanalización vascular para el bypass coronario debido a que es un procedimiento mucho menos agresivo. Los procedimientos de recanalización vascular incluyen el utilizar los dispositivos intravasculares roscados a través de los vasos sanguíneos hacia el sitio obstruido, incluyendo por ejemplo, la angioplastia de globo coronario transluminal percutáneo (PTCA), también conocida como angioplastia de globo. La angioplastia de globo utiliza un catéter con un globo firmemente empaquetado sobre su punta. Cuando el catéter alcanza la obstrucción, el globo se infla, y las placas ateroscleróticas se comprimen contra la pared del vaso. Una desventaja seria de este y otros procedimientos intravasculares, sin embargo, es que un número significativo de individuos tratados, algunos o todos los vasos tratados de restenosis (es decir, los vasos nuevamente se contraen). Esto ocurre generalmente en un período de tiempo relativamente breve, rigurosamente menor a seis meses, después del tratamiento. La restenosis se considera que se debe en parte a la lesión mecánica a las paredes de los vasos sanguíneos originada por el catéter de globo u otro dispositivo intravascular. Las paredes de la mayoría de los vasos sanguíneos se componen de tres capas distintas, o túnicas, que rodean a una abertura tubular, el lumen del vaso. La capa más interna que delinea el lumen del vaso se llama túnica íntima. La capa media, la túnica media, consiste principalmente de células de músculo liso circularmente agrupadas y fibras de tejido conectivo. En un vaso no lesionado, las células de músculo liso generalmente no se dividen activamente. La capa más externa de la pared del vaso sanguíneo, la túnica adventicia, se compone mayormente de fibras de colágeno que protegen las capas internas y brinda al vaso sanguíneo integridad estructural. La lesión mecánica, que da como resultado el daño a la túnica intima, inicia una cascada de casos, incluyendo la liberación de químicos tales como factores de crecimiento derivados de plaquetas (PDGF). Esta cascada inicia la migración y proliferación de las células de músculo liso vasculares (VS Cs) en el sitio de la lesión. La acumulación de las VSMCs en el sitio de la lesión contrae el diámetro del lumen del vaso, de tal modo colocando nuevamente al paciente en peligro de tener un ataque al corazón, apoplejía, etc. Diversos métodos para inhibir la proliferación de célula de músculo liso siguiendo el uso de un dispositivo intravascular, se han reportado en la literatura del paciente. Estos incluyen administrar los agentes anti-proliferativos tales como los inhibidores de ciclo de célula y los agentes anti-coagulantes (ya sea sistemas de suministro sistémico o local). Sin embargo, el suministro de estos agentes de manera sistémica, ha requerido dosis que originan efectos secundarios inaceptables o son caros prohibitivamente. El suministro local de los agentes, por ejemplo heparina, según se describe en la Patente de E.U. No. 4,824,436, ha probado la ineficacia en la inhibición de la restenosis debido en parte al tiempo de residencia inadecuado del agente activo en el sitio de lesión. Los inhibidores de ciclo de célula tales como taxol, que no reaccionan covalentemente y por lo tanto requieren tiempo de residencia prolongado para la efectividad, padecen de problemas similares. Además, la prolongación de los tiempos de residencia para aumentar la efectividad de tales tratamientos también es probable que presente riesgos aumentados de toxicidad. Otros métodos reportados para inhibir la proliferación de VSMC incluyen el suministro local de los agentes activos contenidos en una formulación de liberación sostenida. Por ejemplo, la Patente de E.U. No. 5, 171 ,217 describe los agentes contenidos dentro de una micropartícula fisiológicamente compatible, biodegradable polimérica. Esta formulación se suministra localmente al sitio de lesión de tal forma que los agentes se liberan de la pared arterial por 72 horas o más. En contraste, la Patente de E.U. No. 6,281 ,225 describe la administración local, pero no de liberación sostenida de agentes que alquilatan ADN para prevenir la proliferación de VSMC. Otro método para inhibir la proliferación de célula de músculo liso incluye la administración de agentes fotoquímicamente activados por sistemas de suministro locales. Por ejemplo, la Patente de E.U. No. 5,354,774 describe el suministro de manera local de 8-metoxipsoralen al sitio de lesión y después la activación de una reacción fotodinámica utilizando una fuente de luz visible. Todavía otro procedimiento para prevenir la proliferación de VSMCs es el uso de catéteres que emiten radiación o alambres guía. Estos dispositivos radioactivos originan daño al ácido nucleico, inhibiendo de esta manera la duplicación e inhibiendo de tal modo la proliferación de célula de músculo liso. Todos los métodos anteriormente mencionados padecen de ciertas desventajas. Por ejemplo, las formulaciones de liberación sostenida requieren un nivel agregado de complejidad, principalmente la incorporación del agente sobre o dentro de una formulación de liberación sostenida. La terapia fotodinámica requiere tanto el suministro local del agente foto-activo como el uso de una fuente de luz intravascular compleja. El suministro de una dosis de radiación requiere la presencia de una radiólogo y presenta daños de exposición al personal de atención, así como también almacenamiento de material, manejo, y complicaciones de distribución. Las endoprótesis coronarias tratadas ahora en el mercado o en los ensayos clínicos también padecen de la desventaja distinta de que inhiben la proliferación de las células endoteliales. Esto contribuye a la trombosis en la proximidad de la endoprótesis desplegada. La trombosis se ha observado en ensayos clínicos humanos cuando se utilizan endoprótesis revestidas ya sea con taxol o rapamicin. Para prevenir tal trombosis, los pacientes clínicos han tenido que superar un tratamiento de anti-coagulación de dos a tres meses de duración. Por lo tanto, existe la necesidad de un método seguro, simple y directo para inhibir la proliferación de VSMC en un sitio de lesión siguiendo los procedimientos de recanalización vascular u otra lesión vascular, sin inhibir la proliferación de las células endoteliales. La solución ideal deberá ser no reactiva y requerir poco o nada de readiestramiento del personal médico para el implemento. La señalización celular ha llegado a ser un tema de investigación principal en biología y medicina durante los últimos veinte años. Las trayectorias complejas y componentes proteínicos en la transducción de señal aparecen solamente de manera lenta, pero con claridad en aumento. Durante los últimos 15 años, las quinasas de tirosina de proteína se han identificado como jugadores clave en la regulación celular. Estas se incluyen en la patología y fisiología del sistema nervioso, endocrino e inmune y se cree que son importantes en el desarrollo de varios cánceres, más notablemente la leucemia de mieloide crónico. Como tales, sirven como objetivos de fármaco para varias enfermedades diferentes. Un huésped de las quinasas de tirosina de proteína se conocen en la materia. La Lista de Secuencias Anexa incluye un muestreo no exclusivo de las secuencias de aminoácidos de un número de tales quinasas. Según se utiliza en la presente, el término quinasa de tirosina de proteína (PTKs) se refiere a cualquiera y todas las enzimas que caen dentro de la clasificación de enzima EC 2.1.7.1 12, sin limitación. Ver la Lista de Secuencias, anexa a la misma, para diversos ejemplos de PTKs.

Estas enzimas catalizan la transferencia del grupo gamma-fosforilo de ATP hacia la porción de hidróxilo de tirosina de un sustrato de proteína. Esta familia de quinasas comparte la homología de secuencia de aminoácidos con la familia de quinasa de serina/treonina. A pesar de que se está descubriendo que un número de quinasas de tirosina, está creciendo exponencialmente, todavía se producen detalles moleculares que pertenecen a su reconocimiento de sustrato, mecanismo catalítico, y regulación intra e intermolecular. Según se describe más completo abajo, los presente inventores han encontrado que la inhibición de la acción de PTKs selectivamente inhibe la proliferación de VS Cs.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La FIG. 1 es una gráfica que representa la proliferación de célula de músculo liso vascular coronaria de porcino siguiendo la estimulación con factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) en la presencia de concentraciones en aumento de STI-571 . La FIG. 2 es una gráfica que representa la proliferación de célula endotelial aórtica de porcino siguiendo la estimulación con el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) en la presencia de concentraciones en aumento de STI-571 . La FIG. 3 es una gráfica que representa la inhibición de proliferación de células de músculo liso vasculares de arteria coronaria humana (hCASMC) al aumentar las concentraciones de STI-571 ("Glivec"). Las células se contaron después de la estimulación con 10% de suero de bovino fetal (FBS) por 48 horas, y la información para cada experimento se normalizó para las cavidades de control positivo que contienen FBS y no STI-571 ("Glivec"). Cada punto representa 18 a 21 cavidades de ocho experimentos separados, y se presenta como el promedio +/- la desviación estándar. La FIG. 4 es una gráfica que representa la inhibición de síntesis de ADN en las células de músculo liso vasculares de arteria coronaria humana (HCAVSMC) por STI-571 ("Glivec"). La síntesis de ADN se ensayó por la incorporación de BrdU después de la estimulación de las células de músculo liso vasculares de arteria coronaria por 10% de FBS por 48 horas en la presencia o ausencia (control positivo) de STI-571 ("Glivec"). Los puntos de información representan 14 a 28 cavidades de los dos experimentos separados, y se presentan como el promedio +/- la desviación estándar. La FIG. 5 es una gráfica que representa la inhibición de migración de las células de músculo liso vasculares de arteria coronaria humana en respuesta a STI-571 ("Glivec"). La migración se ensayó al contar las células que migraron a través de una membrana porosa (poros de 20 µ?? de diámetro) en 24 horas en respuesta a la estimulación con el factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF-ßß). Las barras de información representan seis membranas, y se presentan como promedios normalizados para controlar las membranas (no STI-571 ) +/- la desviación estándar. La FIG. 6 es una gráfica que representa la falta de cualquier efecto de STI-571 ("Glivec") sobre la proliferación de las células endoteliales de arteria coronaria humana (hCAEC).

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Abreviaturas y Definiciones: Las siguientes abreviaturas y definiciones se utilizan a lo largo de la especificación y las reivindicaciones. Los términos no definidos específicamente en la presente tienen su significado aceptado y normal dentro del campo de la fisiología y/o medicina cardiovascular. "BrdU" = trifosfato 5-bromo-2'-deoxi-uridina. "D E" = medio Eagle modificado de Dulbecco. "FBS" = suero de bovino fetal. "JAK-2" = quinasas de tirosina activadas por Janus "MAPK" = quinasas de proteína activadas por mitógeno. "PDGF" = factor de crecimiento derivado por plaquetas. "Sal farmacéuticamente adecuada" = cualquier sal de adición base o ácida cuyos contraiones son no tóxicos al paciente en dosis farmacéuticas de las sales, de tal forma que los efectos inhibidores benéficos inherentes en el inhibidor PTK de ácido libre o base libre no se contaminan por efectos secundarios atribuibles a ios contraiones. Un huésped de las sales farmacéuticamente adecuadas se conoce bien en el campo farmacéutico. Para los ingredientes activos que son bases, todas las sales de adición ácidas son útiles como fuentes de la forma de base libre aún si la sal en particular, por sí misma, se desea solamente como un producto intermedio como, por ejemplo, cuando la sal se forma solamente para propósitos de purificación, e identificación, o cuando se utiliza como intermedio . en la preparación de una sal farmacéuticamente adecuada por procedimientos de intercambio de iones. Las sales de adición ácidas farmacéuticamente adecuadas incluyen, sin limitación, aquellas derivadas de los ácidos minerales y ácidos orgánicos, explícitamente incluyendo los hidrohaluros, por ejemplo, hidrocloruros e hidrobromuros, sulfatos, fosfatos, nitratos, sulfamatos, acetatos, citratos, lactatos, tartratos, malonatos, oxalatos, salicilatos, propionatos, succinatos, fumaratos, maleatos, metileno-bis-b-hidroxinaftoatos, gentisatos, isetionatos, di-p-toluoiltartratos, metano-sulfonatos, etanosulfonatos, bencenosulfonatos, p-toluenosulfonatos, ciclohexilsulfamatos, quinatos, y lo similar. En forma análoga, para los ingredientes activos que son ácidos, pueden utilizarse las sales de adición base farmacéuticamente adecuadas. Las sales de adición base incluyen, sin limitación, aquellas derivadas de bases orgánicas convencionales o bases de metal de tierra alcalina o álcali, tales como trietilamina, piridina, piperidina, morfolina, N-metilmorfolina, y lo similar. "PTCA" = angioplastia de globo de coronaria transluminal percutánea. "PTK" = quinasa de tirosina de proteína; expresamente definida en la presente como cualquiera y todas las enzimas que caen dentro de la clasificación de enzima EC 2.1 .7.1 12, sin limitación. "Inhibidor PTK" = cualquier compuesto o composición que inhibe selectivamente la actividad catalítica de uno o más inhibidores de quinasa de tirosina de proteína. "STI-571 " = 4-{(4-metil-1 -piperazin¡l)metil}-N-{4-metil-3-{{4-(3-pirimidinil}amino}-fenil}benzamida y sales farmacéuticamente adecuadas de la misma. Se prefiere la sal de metano-sulfonato. A este compuesto se le ha dado el nombre genérico trivial "imatinib". Según se utiliza en la presente, el término "STI-571 " designa imatinib ya sea como una base libre o cualquier sal farmacéuticamente adecuada de la misma, prefiriéndose la sal de mesilato. En los Estados Unidos, se comercializa por Novartis AG (Basel, Suiza) bajo la marca registrada "Glivec" (U.S.T.M. No. de Registro 2,478, 196); también se vende en cualquier lado alrededor del mundo bajo la marca comercial "Gleevec". "VEGF" = factor de crecimiento endotelial vascular. "VSMC" = células de músculo liso vasculares. Resumen : El tratamiento de arteriesclerosis con dispositivos intravasculares, incluyendo por ejemplo, procedimientos ablativos, catéteres de globo, o endoprótesis vasculares cada vez se vuelve más popular ya que la tecnología relacionada con los dispositivos intravasculares continua mejorando. Aproximadamente 1 millón de procedimientos de angioplastia de globo solos, se realizan en una base anual de manera global. Sin embargo, estos procedimientos tienen una desventaja principal. En un número significativo de casos, los vasos tratados se reocluyen o sufren restenosis, por seis meses después del tratamiento, lo que requiere que el individuo experimente tratamiento adicional. "Restenosis", se refiere a la etapa en la cual el lumen del vaso ha disminuido en diámetro por aproximadamente 50% o más en comparación con el diámetro de lumen del vaso después de un procedimiento de recanalización vascular. La patogénesis de restenosis no se entiende bien. Se cree que se debe en parte, a la retirada de la pared del vaso tratado. Adicionalmente, se tiene la hipótesis de que los procedimientos de recanaiización vascular, utilizados para tratar enfermedades tales como arteriosclerosis, pueden originar la lesión mecánica en el sitio de recanalización. Sin limitarse a cualquier mecanismo en particular de acción, se tiene como hipótesis que una vez que ocurre la ruptura íntima en el vaso sanguíneo un número de eventos comienzan a tener lugar incluyendo la migración de monocitos a la capa subendotelial de la íntima y la liberación de factores de crecimiento mitogénicos, incluyendo, por ejemplo, factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), factor de crecimiento derivado de macrófagos (MDGF), y factor de crecimiento derivado de la célula endotelial (EDGF). Estos químicos, y en particular PDGF, aparentemente juegan un papel para inducir proliferación de VSMC. Esto a su vez produce cantidades sustanciales de sustancias intercelulares que se acumulan dentro del lumen del vaso, contrayendo así su diámetro. Una primer modalidad de la presente invención, por lo tanto, se dirige a una endoprótesis cardiovascular, injerto venoso/arterial autólogo, injerto venoso/arterial prostético, catéter vascular o desviación vascular (colectivamente referidos en la presente como un "dispositivo vascular") que se reviste con uno o más compuestos que inhiben selectivamente la proliferación de VSMCs en el punto inmediatamente adyacente a y próximo al punto de lesión vascular. Específicamente, la invención comprende un dispositivo vascular que tiene revestido en el mismo, absorbido al mismo, impregnado en el mismo, o covalentemente o iónicamente unido al mismo, una cantidad de un inhibidor de quinasa de tirosina de proteína (PTK). Se prefiere que el compuesto inhiba específicamente la quinasa de tirosina Bcr-Abl, la quinasa de tirosina anormal constitutiva creada por la anormalidad de cromosoma de Filadelfia encontrada en leucemia mieloide crónica. Los inhibidores de PTK preferidos para utilizarse en la invención también son aquellos que inhiben específica o no específicamente la actividad de una o más PTKs seleccionadas del grupo que consiste de quinasas de tirosina receptoras para factor de crecimiento derivado de plaquetas y factor de célula germinal (SCF), y c-K¡t. La cantidad de PTK utilizada junto con el dispositivo vascular es una cantidad suficiente para prevenir o inhibir la proliferación de célula de músculo liso vascular en un área dentro de un vaso sanguíneo inmediatamente adyacente a y/o próximo al dispositivo vascular. En una modalidad preferida, el dispositivo vascular se reviste con 4-{{4-metil-1 -piperazinil)metil}-N-{4-metil-3-{{4-(3-pirimidinil}amino}-fenil}benzamida y/o sal farmacéuticamente aceptable de la misma (preferentemente la sal de sulfonato metano). Una segunda modalidad de la invención se dirige a un método correspondiente para prevenir o inhibir específicamente la proliferación de VSMCs. Aquí, el método comprende revestir, absorber, impregnar, o unir covalente o iónicamente al dispositivo vascular una cantidad de un inhibidor de PTK; la cantidad siendo suficiente para prevenir o inhibir la proliferación de VSMCs en un área dentro de un vaso sanguíneo inmediatamente adyacente a y/o próximo ai dispositivo vascular cuando el dispositivo se despliega dentro del lumen de un vaso sanguíneo. El inhibidor de PTK preferido es 4-{{4-metil-piperazinil)metil}-N-{4-metil-3-{{4-(3-pirimidinil}amino}-feniI}benzamida y/o una sal farmacéuticamente adecuada de la misma. Una tercer modalidad de la invención se dirige a un método sistémico para prevenir o inhibir la restenosis de vasos sanguíneos después de la intervención vascular. El método comprende administrar sistémicamente una cantidad de un inhibidor de PTK (preferentemente, oralmente) la cantidad administrada siendo suficiente para prevenir o inhibir la proliferación de VSMCs en un área dentro de un vaso sanguíneo inmediatamente adyacente a y/o próximo al área en donde tiene lugar la intervención vascular. De nuevo, el inhibidor de PTK preferido para utilizarse en esta modalidad de la invención es 4-{{4-metil-piperazinil)metil}-N-{4-metil-3-{{4-(3-pirimidinil}amino}-fenil}benzamida y/o una sal farmacéuticamente adecuada de la misma. Compuestos para Utilizarse en La Invención: Cualquier compuesto ahora conocido o descubierto en el futuro que inhibe la acción de PTKs puede utilizarse en la invención sujeto. Los compuestos específicos cuya actividad anti-PTK se ha documentado, y de esta manera pueden utilizarse en la presente invención, incluyen (sin limitación): piridopirimidinas, ftalimidas, quinolinas, quinazolinas, flavonoides, y benzotiazolas. Entre los inhibidores de PTK más extensivamente estudiados se encuentran las tirofostinas y derivados de quinasolina. Estos compuestos se encuentran actualmente bajo investigación como medicamentos anti-cáncer potenciales. Por ejemplo, tirofosfinas y quinasolina se ha mostrado que se sinergizan con anticuerpos a EGFR y a fármacos anti-cáncer establecidos como cisplatina para inhibir el crecimiento de carcinoma celular escamoso ¡n vivo y para bloquear el crecimiento de células de cáncer humanas que sobre expresan HER2-ErbB2 (respectivamente). Las tirofosftinas se basan en la estructura de bencilidenomalonitrilo. Las permutaciones ligeras en esta estructura han proporcionado un rango de inhibidores potentes que tienen como objetivo selectivamente EGFR, ErB-2 y V-Abl. De esta manera, las tirofosftinas pueden utilizarse solas o en combinación con otros inhibidores de PTK para suprimir la proliferación de VSMC en el lumen de vasos sanguíneos. La familia de quinasolina de compuestos incluye el derivado de quinasolina brominada, un inhibidor de EGFR temprano que se encontró que es más de 3 veces más potente que cualquier otro inhibidor de quinasa de tirosina aún descrito (con un IC5o de 29 pM). Además, tiene poca afinidad para PDGFR, FGFR, receptor de insulina, el receptor de CSF y Src, aún en concentraciones micromolares. Debido a esta extraordinaria actividad inhibidora y especificidad, los derivados de quinasolina son un foco principal de búsqueda para desarrollar inhibidores de quinasa como agentes anti-cáncer. De esta manera, estos compuestos también pueden utilizarse en la presente invención ya sea solos o en combinación con otros inhibidores de PTK. Otro grupo de compuestos inhibidores de PTK, dianilinoftalimidas, se diseñaron racionalmente del aglicon de staurosporina de inhibidor de PTK producto (ver Apéndice C). Estos compuestos han mostrado ser inhibidores competitivos de ATP y a la fecha más de 250 derivados de dianilinftalimida se han sintetizado y evaluado para su actividad biológica. El derivado de CGP521 1 ha desplegado una buena cantidad de especificidad hacia EGFR (IC50=3 mM), pero también muestra alguna actividad inhibidora hacia PKC. Esta observación conduce al diseño de derivado CGP53353, que mostró baja especificidad hacia isozimas de PKC. De esta manera, las dianilinoftalimidas también pueden utilizarse como un inhibidor de PTK en la presente invención. Un gran número de otros compuestos se conocen por ser inhibidores de PTK. Estos compuestos, todos de los cuales pueden utilizarse en la presente invención incluyen brioestatinas, defensinas, genisteina, H8, herbimicina A, tirofostinas, K-252a, lavendustina A, ésteres de forbol, staurosporinas, y suramina. El inhibidor de PTK preferido para utilizarse en la presente invención es 4-{{4-metil-piperazinil)metil}-N-{4-metil-3-{{4-(3-pirimidinil}amino}-fenil}benzamida y/o una sal farmacéuticamente adecuada de la misma (preferentemente la sal de mesilo).

Este compuesto, originalmente designado STI-571 , se comercializa en los Estados Unidos por Novartis bajo la marca "Glivec". Se aprueba por la Administración de Fármacos y Alimentos de E. U. para el tratamiento de leucemia mielioide crónica. Ver EP 0 564 409 A y WO 99/03854. Modos de Administración: Una modalidad de la invención es un método para prevenir la restenosis de los vasos sanguíneos después de una lesión vascular o intervención al administrar sistémicamente uno o más inhibidores de PTK. La vía preferida es oralmente. El inhibidor de PTK también puede administrarse intravenosamente, intraarterialmente, intramuscularmente, percutáneamente, parenteralmente, o rectalmente. Específicamente, la administración local o sistémica se lleva a cabo a través de una composición farmacéutica que comprende un compuesto activo, es decir, un inhibidor de PTK o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un vehículo aceptable para el mismo y opcionalmente en combinación con otros ingredientes terapéuticamente activos o ingredientes accesorios inactivos. El vehículo debe ser farmacéuticamente aceptable en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la formulación y no dañino para el recipiente. Las composiciones farmacéuticas adecuadas incluyen aquellas adecuadas para administración oral, local (intra-lumen), rectal o parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular e intravenosa). Las formulaciones pueden convenientemente presentarse en forma de dosis única y pueden prepararse por cualquiera de los métodos bien conocidos en la materia de farmacia. El término "dosis única" o "dosis unitaria" se denota para una cantidad predeterminada del ingrediente activo suficiente para ser efectiva en el tratamiento de una condición o actividad indicada. Al elaborar cada tipo de composición farmacéutica se incluye la etapa de traer en asociación el compuesto activo con un vehículo y uno o más ingredientes accesorios opcionales. En general, las formulaciones se preparan al traer en asociación, uniformemente e íntimamente, el compuesto activo con un vehículo sólido o líquido, y después, si es necesario formar el producto en la forma de dosis única deseada. Las formulaciones de la presente invención adecuadas para administración oral pueden presentarse como unidades discretas tales como cápsulas, obleas, tabletas, pildoras o pastillas, cada una conteniendo una cantidad predeterminada del compuesto activo; como un polvo o gránulos; o en forma líquida, por ejemplo, como una solución acuosa, suspensión, jarabe, elixir, emulsión, dispersión, o lo similar. Una tableta puede hacerse por compresión o moldeo, opcionalmente con uno o más ingredientes accesorios. Las tabletas comprimidas pueden prepararse al comprimir en una máquina adecuada el compuesto activo en una forma que fluye libremente, por ejemplo, un polvo o gránulos, opcionalmente mezclados con ingredientes accesorio, por ejemplo, aglutinantes, lubricantes, diluyentes inertes, agentes dispersores o activos en superficie. Las tabletas moldeadas pueden hacerse al moldear en una máquina adecuada una mezcla del compuesto activo en polvo con cualquier vehículo adecuado.

Las formulaciones adecuadas para la administración parenteral comprenden convenientemente una preparación estéril del compuesto activo en, por ejemplo, agua para inyección, salina, una solución de glicol de polietileno y lo similar, la cual es preferentemente isotónica con la sangre del recipiente. Las formulaciones útiles también comprenden soluciones concentradas o sólidos que contienen el compuesto inhibidor de PTK, las cuales en la dilución con un solvente adecuado brindan una solución adecuada para la administración parenteral. Las preparaciones para las aplicaciones, local o tópica, comprenden rociadores en aerosol, lociones, geles, pomadas, supositorios, etc., y vehículos farmacéuticamente aceptables, por lo tanto tales como agua, salina, alcoholes alifáticos inferiores, poligliceroles, tales como glicerol, glicerol de polietileno, ésteres de ácidos graso, aceites y grasas, siliconas, y otros vehículos locales convencionales. En formulaciones locales, los inhibidores se utilizan preferentemente en una concentración de desde aproximadamente 0.1 % a 5.0% en peso. Las composiciones adecuadas para administración rectal comprenden un supositorio, preferentemente en forma de bala, que contiene el ingrediente activo y vehículos farmacéuticamente aceptables, tales como grasa dura, cocoglicérido hidrogenado, glicol de polietileno y lo similar. En formulaciones supositorias, los inhibidores de PTK se utilizan preferentemente en concentraciones de desde aproximadamente 0.1 % a 10% en peso. Las composiciones adecuadas para administración rectal también comprenden una unidad enema rectal que contiene el ingrediente activo y vehículos farmacéuticamente aceptables de allí tales como 50% de etanol acuoso o una solución de sal acuosa que es fisiológicamente compatible con el recto o colon. La unidad enema rectal consiste de una punta del aplicador protegida por una cubierta inerte, preferentemente comprendida de polietileno, lubricada con un lubricante tal como petrolato blanco y preferentemente protegida por una válvula de una vía para prevenir el reflujo de la fórmula distribuida, y de suficiente longitud, preferentemente dos pulgadas, a insertarse en el colon por medio del ano. En las formulaciones rectales, los inhibidores de PTK preferentemente se utilizan en concentraciones de desde aproximadamente 5.0-10% en peso. Las formulaciones útiles también comprenden soluciones concentradas o sólidos que contienen el ingrediente activo que en la dilución con un solvente adecuado, preferentemente salina, brindan una solución adecuada para la administración rectal. Las composiciones rectales incluyen formulaciones acuosas y no acuosas que pueden contener adyuvantes convencionales tales como reguladores, bacterioestatos, azúcares, agentes espesantes y lo similar. Las composiciones pueden presentarse en dosis única rectal o contenedores de múltiples dosis, por ejemplo, unidades enema rectal. Las preparaciones para las aplicaciones quirúrgicas locales o tópicas para tratar un vaso sanguíneo dentro de su lumen comprenden catéteres o succionadores adecuados para tales propósitos. Tanto en las aplicaciones quirúrgicas locales como tópicas, las preparaciones estériles de inhibidor de PTK preferentemente se utilizan en concentraciones de desde aproximadamente 0.1 % a 5.0% en peso aplicadas a una cura. Las composiciones adecuadas para la administración por inhalación incluyen las formulaciones en donde el ingrediente activo es un sólido o líquido mezclado en un polvo micronizado que tiene un tamaño de partícula en el rango de aproximadamente 5 micrones o menos a aproximadamente 500 micrones o formulaciones líquidas en un diluyente adecuado. Estas formulaciones se diseñan para la inhalación rápida a través del paso oral de los sistemas de un suministro convencional tales como inhaladores, inhaladores de dosis medida, nebulizadores, y lo similar. Las composiciones nasales líquidas adecuadas incluyen los rociadores nasales convencionales, gotas nasales y lo similar, de soluciones acuosas del (de los) ingrediente (s) activo (s). Además de los ingredientes anteriormente mencionados, las formulaciones de esta invención pueden además incluir uno o más ingredientes accesorio opcionales utilizados en la materia de formulaciones farmacéuticas, es decir, diluyentes, reguladores, agentes saborizantes, colorantes, aglutinantes, agentes activos de superficie, espesantes, lubricantes, agentes de suspensión, conservadores (incluyendo antioxidantes) y lo similar. La cantidad del inhibidor de PTK requerida para ser eficaz para inhibir la proliferación de VS C, por supuesto, variará con el mamífero individual a tratar y será por último a discreción del médico o practicante veterinario. Los factores a considerar incluyen la condición a tratar, la vía de administración , la naturaleza de la formulación, el peso corporal del mamífero, el área de superficie, la edad y condición general, y el inhibidor de PTK particular a administrar. En general, una dosis eficaz adecuada se encuentra en el rango de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 500 mg/kg de peso corporal por día del inhibidor de PTK seleccionado. La dosis diaria total puede darse como una dosis única, dosis múltiples, por ejemplo, dos a seis veces por día, o por infusión intravenosa para una duración seleccionada. Las dosis arriba o abajo del rango citado anteriormente se encuentran dentro del alcance de la presente invención y pueden administrarse al paciente individual si se desea y es necesario. Los inhibidores de PTK pueden administrarse profilácticamente (en la modalidad preferida inmediatamente a la post-cirugía), crónicamente, o agudamente. Específicamente señalando la modalidad preferida, Novartis vende STI-571 en cápsulas que proporcionan el equivalente de 100 mg de la forma de base libre de STI-571 . Cuando se administran oralmente (la vía preferida), la cantidad preferida de STI-571 para utilizarse en la presente invención es de 100 a 800 mg diarios, tomada en una a cuatro dosis iguales. Las dosis considerablemente mayores, hasta 1 ,200 mg/m2/día, también pueden darse. Las dosis anteriores 1 ,200 mg/m2/día no se recomiendan. Los métodos de la presente invención incluyen la administración, por suministro local a un sitio de lesión, de los compuestos que tienen la habilidad de inhibir la actividad de PTK. Los ejemplos no limitantes de los sistemas de suministro local para utilizarse en la presente invención incluyen catéteres de suministro de fármaco intravascular, alambres, endoprótesis farmacológicas y pavimentado endoluminal. En la modalidad preferida utilizando ei suministro local, los compuestos para utilizarse en la presente invención se administran al sitio de recanalización por deposición intravascular directa utilizando catéteres intravasculares. Los sistemas de catéter para utilizarse en la presente invención, incluyen, por ejemplo, catéteres conducidos por presión, catéteres de difusión y catéteres mecánicos. Los sistemas de catéter conducido por presión que pueden utilizarse en la presente invención incluyen catéteres porosos; catéteres microporosos, por ejemplo, aquellos elaborados por Cordis Corporation; catéteres macroporosos; catéteres de transporte, por ejemplo, aquellos elaborados por Cardiovascular Dynamics/Boston Scientific; catéteres de globo canalizados, por ejemplo, aquellos elaborados por Boston Scientific; y catéteres de manga de infusión, por ejemplo, aquellos elaborados por LocalMed. Ver, por ejemplo, Patente de E.U. No. 5,279,565. Los inhibidores de PTK también pueden administrarse localmente por medio de los sistemas de catéter a base de difusión, incluyendo por ejemplo, el globo doble, ejecución, hidrogel y catéteres de endoprótesis revestida. Los métodos de la invención también incluyen la administración local de los compuestos utilizados en los métodos de la presente invención mediante sistemas de catéter de base de dispositivo mecánicos, tales como catéteres de globo iontoforético. Los compuestos para utilizarse en la presente invención pueden administrarse por suministro local en un tiempo aproximado al procedimiento de recanalización o en un tiempo después del procedimiento de recanalización. Los compuestos para utilizarse en la invención pueden suministrarse en una dosis única o suministrarse en dosis repetidas. La habilidad de suministrar los compuestos inhibidores de PTK utilizados en la presente invención pueden evaluarse in vivo utilizando los modelos de animal conocidos, incluyendo el modelo de coronaria de porcino descrito en los Ejemplos. De esta manera, por ejemplo, un inhibidor de PTK a utilizarse en los métodos de la presente invención se administra por suministro local a un porcino en un sitio de lesión vascular. El porcino se sacrifica y después se examina por métodos citológicos, histológicos, y otros, incluyendo, por ejemplo, microscopía de fluorescencia. Las condiciones óptimas para el suministro de los compuestos inhibidores de PTK para utilizarse en los métodos de la invención pueden variar con los diferentes sistemas de suministro local utilizados, así como también, las propiedades y concentraciones de los compuestos utilizados. Las condiciones pueden optimizarse para la inhibición de la proliferación de VSMC en el sitio de lesión de tal forma que el blocaje arterial significativo debido a la restenosis no ocurre, según se mide, por ejemplo, por la habilidad proliferativa de las VS Cs, o por los cambios en la resistencia vascular o diámetro de lumen. Las condiciones que pueden optimizarse incluyen, por ejemplo, las concentraciones de los compuestos, el volumen de suministro, la velocidad de suministro, la profundidad de la penetración de la pared del vaso, la presión de inflación próxima, la cantidad y tamaño de las perforaciones y el ajuste del globo de catéter de suministro de fármaco.

En una vía de administración particularmente preferida, el compuesto inhibidor de PTK se reviste o se absorbe sobre una endoprótesis vascular, un injerto venoso/arterial prostético, o un injerto vascular autólogo. Alternativamente, el inhibidor de PTK puede impregnarse en el mismo, o covalentemente o iónicamente unirse al mismo. La aplicación preferida del inhibidor de PTK a la endoprótesis, injerto, prótesis es mediante métodos convencionales que se conocen en la materia. Estos métodos incluyen, sin limitación, tratamiento por inmersión, impregnación y rociamiento del artículo con el inhibidor de PTK. El revestimiento adicional y las técnicas de impregnación que utilizan presión para forzar el revestimiento hacia los intersticios de sustrato, también se contemplan. Las múltiples capas del revestimiento bio-activo pueden aplicarse al artículo. La endoprótesis, el injerto o prótesis pueden revestirse primero con un revestimiento polimérico para proporcionar liberación sostenida del inhibidor de PTK durante un período de días, semanas, o meses. Preferentemente, de aproximadamente 1 a aproximadamente 10 capas del agente inhibidor de PTK se aplican a la superficie de la endoprótesis, injerto, o prótesis. Dispositivos e Injertos Autólogos de acuerdo a la Invención: Según se señala en el párrafo previo, una vía preferida para administrar los compuestos inhibidores de PTK es adherirlos sobre una endoprótesis, injerto autólogo, o prótesis vascular. En la presente invención, puede utilizarse cualquier dispositivo médico vascular, incluyendo catéteres, endoprótesis, láminas, tubos, globos, y lo similar. El término "dispositivo médico" según se utiliza en la presente deberá designarse genéricamente a todos los dispositivos médicos vasculares, ya sea sintéticos, semi-sintéticos, o de material o tejido autólogo. Preferentemente, el dispositivo médico de la presente invención es un dispositivo implantable tal como un injerto vascular, endoprótesis, que se ha tratado, revestido, o de otra forma manipulado para haber revestido sobre al menos una superficie un compuesto que inhibe la actividad de PTK. Para propósitos de esta invención, el término "injerto vascular" significa que incluye todas las endoprótesis que se introducen generalmente por medio de catéter. En la modalidad preferida, el dispositivo médico se reviste con STI-571. Otros dispositivos médicos también pueden revestirse, tales como los catéteres que son menos agresivos. El injerto vascular puede incluir un cuerpo tubular vacío que tiene una superficie hidrofóbica externa e interna, la superficie externa o ambas superficies de las cuales se revisten con el compuesto inhibidor de PTK. Más preferentemente, el dispositivo de la presente invención es un injerto o endoprótesis vascular de calibre pequeño, elaborado de metal o material polimérico (tal como poli(tetrafluoroetileno)). Este incluye endoprótesis elaboradas de materiales poliméricos y revestidos con materiales distintos, tales como la endoprótesis de politetrafluoroetileno descrita en la Patente de E.U. No. 6,306,165. Las endoprótesis vasculares, el dispositivo médico preferido de la invención sujeto, son tubos de malla en miniatura que se implantan en las arterias para mantener las partes bloqueadas abiertas después de los procedimientos de angioplastia. Trabajando como andamiaje para la arteria tratada, las endoprótesis son flexibles todavía más fuertes, generalmente son fáciles (para un experto) de suministrar por medio de catéter, y se observan fácilmente sobre un fluoroscopio. Las endoprótesis se pre-montan sobre catéteres de globo que se utilizan para suministrar la endoprótesis al sitio de tratamiento y después expandir la endoprótesis hacia su lugar después de que el blocaje se aclara. Cualquier endoprótesis ahora conocida o desarrollada en el futuro puede revestirse con un inhibidor de PTK de acuerdo a la presente invención. Quizás, el suministrador comercial más grande de las endoprótesis vasculares es Medtronic, 710 Medtronic Parkway, Minneapolis, Minnesota. Medtronic también tiene instalaciones ubicadas en Tolochenaz, Suiza; Ontario, Canadá; Causeway Bay, Hong Kong; y Gladesville, NSW, Australia. Todas endoprótesis de Medtronics, catéteres, globos, catéteres guía, alambres guía, y lo similar, pueden utilizarse en la presente invención. Actualmente, Medtronic comercializa un rango muy amplio de endoprótesis y otros dispositivos médicos vasculares bajo las marcas comerciales "Discrete Techonology", "S7", "S670", "S660" y "BeStent". Las endoprótesis vasculares se encuentran así también disponibles de los fabricantes de no base de EU. Por ejemplo, Biocompatibles Cardiovascular, de Farnham, Reino Unido, fabrica y vende un rango de endoprótesis cardiovasculares bajo la marca comercial "Biodiv Ysio".

El inhibidor de PTK puede adherirse o revestirse sobre el dispositivo médico, o puede unirse químicamente, ya sea covalente o iónicamente al dispositivo médico. El inhibidor de PTK puede unirse directamente al dispositivo médico, o unirse por medio de un grupo separador o enlazador. Para la unión covalente, se prefiere que un dispositivo médico polimérico, o un dispositivo médico revestido por polímero se utilice y que el inhibidor de PTK se una covalentemente al dispositivo médico por medio de un grupo separador o enlazador que tiene una longitud en cadena de desde 1 a 250 átomos. Por ejemplo, el grupo separador puede incluir alquilos, alquilaminas, poliolefinas oxigenadas, poliésteres alifáticos, ácidos poliamino, poliaminas, polisiloxanos hidrofílicos, polisilazanos hidrofílicos, acrilatos hidrofílicos, metacrilatos hidrofílicos, polisacáridos ligeramente ramificados y lineales, y lo similar. Todavía en otra modalidad de la invención, se proporciona un material de lámina implantable modificada por superficie cuya superficie tratada cuando se expone a la capa íntima de un vaso sanguíneo muestra la actividad de proliferación anti-VSMC durante períodos extendidos de tiempo. Este material de lámina implantable incluye un material de sustrato hidrofóbico que tiene absorbido o unido al mismo un compuesto que inhibe la actividad de PTK, siendo el compuesto preferido STI-571 . La lámina puede formarse en tubos o parches quirúrgicos para reparar las lesiones y defectos vasculares.

EJEMPLOS Los siguientes Ejemplos se incluyen solamente para proporcionar una descripción más completa de la invención reivindicada en la presente. Los Ejemplos no limitan la invención en ninguna manera.

Ejemplo 1 - Proliferación de Célula de Músculo Liso Vascular: Las VSMCs de coronaria de porcino crecieron en subconfluencia en láminas de 96 cavidades con medio DME que contiene 10% de FBS a 37°C por 3 a 5 días. Después de la sincronización en medio de DME libre de suero por 48 horas, las células se estimularon con PDGF (20 ng/mL) por 24 horas, en la presencia de STI-571 (0.01 a 10 M). Se agregó BrdU a las cavidades por las últimas 5 horas del período de estimulación. Las células se secaron subsecuentemente por 24 horas a 60°C, se fijaron y se desnaturalizaron, y la incorporación de BrdU se determinó utilizando un ensayo colorimétrico (ELISA) vendido comercialmente por Roche Molecular Biochemicals (no. de catálogo 1 ,647,229) siguiendo el protocolo del fabricante. Ver "Cell Proliferation ELISA, BrdU (Colorimetric) Instruction Manual", Versión 3, Septiembre 2000, disponible de Roche Molecular Biochemicals. En resumen, ELISA BrdU es un inmunoensayo colorimétrico para la cuantificación de la proliferación celular. Se basa en la medición de la incorporación de BrdU durante la síntesis de ADN. El procedimiento colorimétrico es una alternativa no radioactiva al ensayo de incorporación de 3H-timídina. Ver también Ejemplo 4.

Los resultados de este Ejemplo se presentan gráficamente en ia Fig. 1 . La síntesis de ADN se ensayó por la incorporación de BrdU (en la misma forma según se describe en el Ejemplo 4) después de la estimulación de las células con el factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF-ßß, 20 ng/ml) por 48 en la presencia o ausencia (control positivo) de STI-571 . Cada punto de información representa 5 a 7 cavidades, y se expresa como el promedio +/- la desviación estándar. Según puede observarse de la figura, la administración de STI-571 inhibió la proliferación de VSMCs en una forma dependiente de dosis. Este ejemplo demuestra la utilidad de la presente invención para Inhibir la proliferación de VSMCs.

Ejemplo 2 - Proliferación Celular Endotelial Vascular: Las células endoteliales vasculares aórticas de porcino crecieron en subconfluencia en láminas de 96 cavidades con medio DME que contiene 10% de FBS a 37°C por 3 a 5 días. Después de la sincronización en medio de DME libre de suero por 48 horas, las células se estimularon con VEGF (20 ng/mL) por 24 horas en la presencia de STI-571 (0.01 a 10 M). Se agregó BrdU a las cavidades por las últimas 5 horas del período de estimulación. Las células se secaron subsecuentemente por 24 horas a 60°C, se fijaron y se desnaturalizaron, y la incorporación BrdU se determinó utilizando ELISA Roche descrito en el Ejemplo 1 . Los resultados de este Ejemplo se presentan gráficamente en la Fig. 2. Según puede observarse de esta figura, STI-571 tuvo un efecto inhibidor muy bajo sobre la proliferación de las células endoteliales vasculares aórticas. Tomado junto con los resultados del Ejemplo 1 , este Ejemplo demuestra la utilidad de la presente invención para inhibir la proliferación de VSMCs selectivamente, mientras que no tiene un efecto inhibidor apreciable sobre la proliferación de células endoteliales vasculares aórticas.

Ejemplo 3 - Inhibición de la Proliferación de las Células de Músculo Liso Vasculares de Arteria Coronaria Humana al Aumentar las Concentraciones de STI-571 : Este Ejemplo demuestra que las células de músculo liso vasculares de arteria coronaria humana se inhiben en una forma dependiente de dosis por STI-571 . Las células de músculo liso vasculares de arteria coronaria humana crioconservadas (CC-25839) se adquirieron comercialmente de Clonetics (ahora una subsidiaria completamente pertenecida de Cambrex Bio Science Walkersville, Inc. , Walkersville, Maryland). Las células crecieron en matraces de cultivo de 25 cm2, de tapa filtrada, de cuello oblicuo, en una densidad de semilla inicial de 2500 células por cm2. Las células crecieron en un medio de crecimiento de músculo liso de marca "SmGM-2" (Cambrex, utilizado según se suministra del fabricante) más 10% de FBS en una incubadora de 5% de C02, húmeda a 37°C. Los medios cambiaron inicialmente después de 24 horas, y después cada 48 horas subsecuentemente. Las células pasaron a aproximadamente 80% de confluencia (-4-6 días). Los ensayos de proliferación se realizaron en láminas de cultivo de 24 cavidades. En el día 5, los medios de crecimiento se remplazaron con medios de prueba (medios de crecimiento + STI-571 ), medios de crecimiento (control positivo, medios + FBS) y medios libres de suero (control negativo, los medios de marca "SmGM-2" sin FBS agregado). Las células se contaron manualmente tripsinizando las células en el día 7, con cada condición (3 cavidades) agrupada en un tubo micro-centrífugo. Las células se centrifugaron a 1 .5 X g por 10 min. y después se volvieron a suspender en 60 µ? de solución neutralizadora de tripsina. Las células se contaron así sobre un hemacitometro en cuadruplicado. Los resultados se muestran en la Fig. 3. En la figura, las células se contaron después de estimularse con 10% de FBS por 48 horas. La información para cada experimento se normalizó para las cavidades de control positivo que contienen FBS y no STI-571 . Cada punto representa 18 a 21 cavidades de ocho experimentos separados. El centro de cada punto de información es el promedio en cada concentración de STI-571 , y las barras de error son la desviación estándar en cada nivel de concentración. El significado de esta gráfica es que indica claramente que STI-571 inhibe, en una forma dependiente de dosis, la proliferación de las células de músculo liso vasculares de arteria coronaria humana. Debido a que estas células son responsables de la restenosis, esta gráfica demuestra la efectividad de la presente invención para inhibir tal restenosis.

Ejemplo 4 - Inhibición de la Síntesis de ADN en las Células de Músculo Liso Vasculares de Arteria Coronaria Humana por STl-571 : Este ejemplo demuestra que STl-571 inhibe la síntesis de ADN en células de músculo liso vasculares de arteria coronaria humana. Se utilizaron las mismas células según se describen en el Ejemplo 3. Las condiciones de cultivo y la exposición a las diversas concentraciones de prueba de STl-571 también fueron las mismas que en el Ejemplo 3. La incorporación de ADN se midió utilizando un ensayo de BrdU comercialmente disponible (Roche Molecular Biochemicals, no. de catálogo 1 ,647,229). La solución de etiquetado BrDu se agregó en el día 6, y las células se dejaron así incubar por otras 24 hrs (hasta el día 7). La solución de etiqueta se removió así y las células se secaron a 60°C por una hora. Las células se fijaron así utilizando la solución fijadora "FixDenat" por una hora a temperatura ambiente. La solución fijadora se removió así y la solución de anticuerpo anti-BrdU se agregó a las células. Las células se incubaron así por 2 hr a 37°C. La solución de anticuerpo fue así sustrato removido agregado a las cavidades. Las láminas se incubaron a temperatura ambiente hasta que ocurrió suficiente desarrollo de color. Las reacciones se detuvieron al agregar 1 M de H2S04 a las cavidades. La absorción se midió así a 450 nm (referencia, 690 nm). Los resultados se muestran en la Fig. 4. Cada punto de información representa 14 a 28 cavidades de dos experimentos separados, y se expresan como los promedios +/- las desviaciones estándares. El significado de este Ejemplo es que muestra que STI-571 inhibe la síntesis de ADN en células de músculo liso vasculares de arteria coronaria humana. Así como en el Ejemplo previo, esto es notable pero estos tipos de células originan la restenosis de los vasos endoprotenizados. Al inhibir el crecimiento de tales células, se inhibe la restenosis.

Ejemplo 5 - Inhibición de la Migración de las Células de Músculo Liso Vasculares de Arteria Coronaria Humana por STI-571 : Este Ejemplo se realizó para determinar si STI-571 tiene algún efecto sobre la migración de las células de músculo liso vasculares de coronaria humana. Las células descritas en el ejemplo 3 se utilizaron. La densidad de semilla inicial fue 4000 células por filtro (0.3 cm2) en los medios de prueba con 1 % de BSA y 20 ng/ml de PDGF-ßß. Las células se incubaron así en un ambiente húmedo a 37°C, 5% de C02 por 24 horas. Las células sobre el lado superior del filtro se desecharon así. Las células sobre el lado inferior de los filtros se fijaron así con metanol frío por 10 min. Los filtros se enjuagaron con PBS y después se colorearon con tinte Harris AE Hematoxilina por 5 mín. y nuevamente se enjuagaron con PBS. Las células se contaron así manualmente bajo magnificación de energía alta (400X) en cuadruplicado. Los resultados se muestran en la Fig. 5. Las barras de información representan 6 membranas, y la información se presenta como los promedios para controlar las membranas (no STI-571 ) +/- desviaciones estándares.

El significado de este Ejemplo es que demuestra que STI-571 inhibe la migración de las células de músculo liso vasculares de coronaria humana en una forma dependiente de dosis. Debido a que la migración de estas células es un contribuidor principal para la restenosis después del despliegue de una endoprótesis, este Ejemplo demuestra que la presente invención puede utilizarse para inhibir esta migración y de allí inhibir la restenosis. Ejemplo 6 - Falta de Efecto Inhibidor de STI-571 sobre la Proliferación de las Células Endoteliales de Arteria Coronaria Humana: Este Ejemplo demuestra que el crecimiento de las células endoteliales de arteria coronaria humana no se inhrben en ninguna manera por STI-571 . Las células endoteliales arteria coronaria humana crioconservadas se adquirieron comercialmente de Clonetics (ahora una subsidiaria completamente pertenecida de Cambrex Bio Science Walkersville, Inc., Walkersville, aryland). Las células crecieron en matraces de cultivo de 25 cm2, de tapa filtrada, de cuello oblicuo, en una densidad de semilla inicial de 2500 células por cm2. Las células crecieron en un medio de crecimiento de músculo liso de marca "EGM-MV" (Cambrex, utilizado según se suministra del fabricante) más 10% de FBS en una incubadora de 5% de C02, húmeda a 37°C. Los medios cambiaron inicialmente después de 24 horas, y después cada 48 horas subsecuentemente. Las células pasaron a aproximadamente 80% de confluencia (-4-6 días). Los ensayos de proliferación se realizaron en láminas de cultivo de 24 cavidades.

En el día 5, los medios de crecimiento se remplazaron con medios de prueba (medios de crecimiento + STI-571 ), medios de crecimiento (control positivo, medios + FBS) y medios libres de suero (control negativo, los medios de marca "EGM-MV" sin FBS agregado). Las células se contaron manualmente tripsinizando las células en el día 7, con cada condición (3 cavidades) agrupada en un tubo micro-centrífugo. Las células se centrifugaron a 1 .5 X g por 10 min. y después se volvieron a suspender en 60 µ? de solución neutralizadora de tripsina. Las células se contaron así sobre un hemacitometro en cuadruplicado. Los resultados se muestran en la Fig. 6. Según puede observarse de la figura, STI-571 no tuvo un efecto significativo sobre la proliferación de células entoteliales de arteria coronaria humana en cualquiera de las concentraciones de STI-571 probadas. Este Ejemplo, junto con los Ejemplos 3-5, son significativos debido a que muestran que STI-571 tiene un efecto inhibidor profundo sobre las células de músculo liso vasculares humanas (inhibe la proliferación, duplicación de ADN, y migración celular), pero no inhibe la proliferación de las células endoteliales. Esto es notable debido a que la proliferación de células endoteliales alrededor de una endoprotesis vascular insertada es deseable de tal forma que la endoprotesis llega a implantarse firmemente dentro de la pared del vaso.

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES 1 . Un dispositivo para colocar una endoprótesis al vaso sanguíneo, el dispositivo comprendiendo: una endoprótesis cardiovascular, injerto venoso/arterial autólogo, injerto venoso/arterial prostético, catéter vascular, o desviación vascular que tiene revestido sobre el mismo, absorbido al mismo, impregnado en el mismo, o unido covalente o iónicamente al mismo una cantidad de un inhibidor de quinasa de tirosina de proteína; siendo suficiente la cantidad para prevenir o inhibir la proliferación de las células de músculo liso vasculares en un área dentro de un vaso sanguíneo inmediatamente adyacente y/o próximo a la endoprótesis cardiovascular, injerto venoso/arterial autólogo, injerto venoso/arterial prostético, catéter vascular o desviación vascular, mientras que no se inhibe simultáneamente la proliferación de las células íntimas vasculares. 2. El dispositivo según la reivindicación 1 , comprendiendo una endoprótesis cardiovascular. 3. El dispositivo según la reivindicación 1 , comprendiendo un injerto venoso/arterial autólogo. 4. El dispositivo según la reivindicación 1 , comprendiendo un injerto venoso/arterial protéstico. 5. El dispositivo según la reivindicación 1 , comprendiendo un catéter vascular. 6. El dispositivo según la reivindicación 1 , comprendiendo una desviación vascular. 7. El dispositivo según la reivindicación 1 , caracterizado porque el inhibidor de quinasa de tirosina de proteína es un inhibidor de factor de crecimiento derivado de plaquetas. 8. El dispositivo según la reivindicación 7, caracterizado porque el inhibidor de quinasa de tirosina de proteína también es un inhibidor de quinasa de tirosina Bcr-Abl. 9. El dispositivo según la reivindicación 1 , caracterizado porque el inhibidor de quinasa de tirosina de proteína es STI-571 . 10. El dispositivo según la reivindicación 1 , caracterizado porque el inhibidor de quinasa de tirosina de proteína es 4-{(4-metil-1 -piperazinidil)metil}-N-{4-metil-3-{{4-metil-3-{{4-(3-pirimidinil}amino}-fenil}benzamida y/o una sal farmacéuticamente adecuada de la misma, siendo la cantidad suficiente para prevenir o inhibir la proliferación de células de músculo liso vasculares en un área dentro de un vaso sanguíneo inmediatamente adyacente a y/o próximo a la endoprótesis cardiovascular, injerto venoso/arterial autólogo, injerto venoso/arterial prostético, catéter vascular o desviación vascular. 1 1 . Un dispositivo para colocar una endoprótesis al vaso sanguíneo, el dispositivo comprendiendo: una endoprótesis cardiovascular, injerto venoso/arterial autólogo, injerto venoso/arterial prostético, catéter vascular, o desviación vascular que tiene revestido sobre el mismo, absorbido al mismo, impregnado en el mismo, o unido covalente o iónicamente al mismo una cantidad de 4-{(4-metil-1 -piperazinidil)metil}-N-{4-metil-3-{{4-metil-3-{{4-(3-pirimidinil}amino}-fenil}benzamida y/o una sal farmacéuticamente adecuada de la misma; siendo suficiente la cantidad para prevenir o inhibir la proliferación de las células de músculo liso vasculares en un área dentro de un vaso sanguíneo inmediatamente adyacente y/o próximo a la endoprótesis cardiovascular, injerto venoso/arterial autólogo, injerto venoso/arterial prostético, catéter vascular o desviación vascular, mientras que no se inhibe simultáneamente la proliferación de las células íntimas vasculares. 12. El dispositivo según la reivindicación 1 1 , comprendiendo una endoprótesis cardiovascular. 13. El dispositivo según la reivindicación 1 1 , comprendiendo un injerto venoso/arterial autólogo. 14. El dispositivo según la reivindicación 1 1 , comprendiendo un injerto venoso/arterial protéstico. 15. El dispositivo según la reivindicación 1 1 , comprendiendo un catéter vascular. 16. El dispositivo según la reivindicación 1 1 , comprendiendo una desviación vascular. 17. Un método para prevenir la restenosis siguiendo la intervención vascular, el método comprendiendo revestir, absorber, impregnar, o unir covalente o iónicamente a una endoprótesis cardiovascular, injerto venoso/arterial autólogo, injerto venoso/arterial prostético, catéter vascular o desviación vascular utilizado en la intervención vascular una cantidad de un inhibidor de quinasa de tirosina de proteína; siendo suficiente la cantidad para prevenir o inhibir la proliferación de las células de músculo liso vasculares en un área dentro de un vaso sanguíneo inmediatamente adyacente a y/o próximo a la endoprótesis cardiovascular, injerto venoso/arterial autólogo, injerto venoso/arterial prostético, catéter vascular o desviación vascular, mientras que no se inhibe simultáneamente la proliferación de las células íntimas vasculares. 18. El método según la reivindicación 17, caracterizado porque la endoprótesis cardiovascular, injerto venoso/arterial autólogo, injerto venoso/arterial prostético, catéter vascular o desviación vascular se reviste con un inhibidor de factor de crecimiento derivado de plaquetas. 19. El método según la reivindicación 17, caracterizado porque la endoprótesis cardiovascular, injerto venoso/arterial autólogo, injerto venoso/arterial prostético, catéter vascular o desviación vascular se reviste con un inhibidor de quinasa de tirosina Bcr-Abl. 20. El método según la reivindicación 17, caracterizado porque la endoprótesis cardiovascular, injerto venoso/arterial autólogo, injerto venoso/arterial prostético, catéter vascular o desviación vascular se reviste con STI-571. 21. El método según la reivindicación 17, caracterizado porque la endoprótesis cardiovascular, injerto venoso/arterial autólogo, injerto venoso/arterial prostético, catéter vascular o desviación vascular se reviste con 4-{(4-metil-1 -piperazinidil)metil}-N-{4-metil-3-{{4-metil-3-{{4-(3-pirimidinil}amino}-fenil}benzamida y/o una sal farmacéuticamente adecuada de la misma. 22. Un método para prevenir la restenosis siguiendo la intervención vascular, el método comprendiendo revestir, absorber, impregnar, o unir covalente o iónicamente a una endoprótesis cardiovascular, injerto venoso/arterial autólogo, injerto venoso/arterial prostético, catéter vascular o desviación vascular utilizado ert la intervención vascular una cantidad de 4-{(4-metil-1 -piperazinidil)metil}-N-{4-metil-3-{{4-metil-3-{{4-(3-pirimidinil}amino}-fenil}benzamida y/o una sal farmacéuticamente adecuada de la misma; siendo suficiente la cantidad para prevenir o inhibir la proliferación de las células de músculo liso vasculares en un área dentro de un vaso sanguíneo inmediatamente adyacente a y/o próximo a la endoprótesis cardiovascular, injerto venoso/arterial autólogo, injerto venoso/arterial prostético, catéter vascular o desviación vascular, mientras que no se inhibe simultáneamente la proliferación de las células íntimas vasculares.