MXPA03010456A - Peptidos reactivos a lipoproteina de alta densidad. - Google Patents

Abstract

Se describe un peptido reactivo a lipoproteina de alta densidad o un peptido reactivo a la celda de espuma como se establece en lo siguiente (a) o (b): (a) un peptido que comprende la secuencia de aminoacido representada por SEQ ID NO: 1; y (b) un peptido que comprende una secuencia de aminoacio derivada de la secuencia de aminoacido como se especifico anteriormente en (a) mediante sustitucion, supresion, adicion o insercion de uno o mas residuos de aminoacido y que es capaz de enlazarse especificamente al colesterol de lipoproteina de alta densidad o retirar el colesterol de las celdas de espuma, de este modo, los peptidos que tienen secuencias de aminoacido novedosas y son capaces de enlazarse especificamente al colesterol de HDL o retirar colesterol de las celdas de espuma se proveen, estos peptidos son utiles como farmacos para varias enfermedades provocadas por arteriosclerosis, errores metabolicos en lipidos y colesterosis periferica.

Description

PEPTIDOS REACTIVOS A LIPOPROTEINA DE ALTA DENSIDAD CAMPO TECNICO La presente invención se refiere a un péptido capaz de unirse específicamente a un colesterol de lipoproteína de alta densidad (HDL), a un péptido reactivo a celda de espuma, y a fármacos que contienen dichos póptidos.

TECNICA ANTECEDENTE En la sangre, los lípidos siempre están presenten como lipoproteinas. Los mecanismos de transporte y metabolismo de lípidos mediante la mediación de lipoproteinas ahora se aclara. Los triglicéridos (TG), colesteroles y ósteres de colesterilo (CE) se secretan en forma de lipoproteinas de muy baja densidad (VLDL) en la sangre. VLDL actúan para proveer tejido periférico con una porción de TG en forma de ácidos grasos, y también participan en la transferencia e intercambio de una porción de lípidos entre HDL y lipoproteinas de densidad intermedia (IDL). IDL, que sufren intercambio de lípidos con HDL, pierden TG, para volverse lipoproteinas de baja densidad (LDL), que su vez se toman en el tejido periférico y suministran colesteroles.

Mientras tanto, los colesteroles que se han vuelto ineficaces en el tejido periférico se retiran mediante HDL y se convierten en CE, y subsecuentemente se intercambian con TG contenido en las VLDL ricas en TG antes mencionado, IDL, o LDL, hasta que se transportan en forma inversa al hígado. Este procedimiento de transferencia de colesteroles desde el tejido periférico tal como paredes sanguíneas al hígado es conocido como transporte de colesterol inverso (RCT), y este procedimiento se considera por contribuir en la prevención de formación excesiva de colesteroles (Medical Practico, vol. 18, No. 3, 473-480 (2001 )). Las substancias que son conocidas por jugar un papel importante en el transporte de colesterol inverso o intercambio de lípidos entre HDL y lipoproteínas ricas en TG incluyen enzimas tales como colesterilacetiltranferasa de lecitina (LCAT), lipasa hepática (HTLC), lipoproteínalipasa (LPL), y proteínas de transferencia de colesterilóster (CETP). Sin embargo, sus mecanismos de acción, interacciones entre lipoproteínas, y relación con los errores metabólicos de lípidos no se han aclarado, aún Las celdas de espuma toman parte en la formación de colesterol en el tejido periférico. Es decir, los macrófagos derivados de los monocitos en la sangre y presentes en las paredes de los vasos sanguíneos se posesionan ávidamente de grasas y acumularon grandes cantidades de partículas grasas (CE principalmente) en las mismas. Las LDL químicamente modificadas se toman en las células de macrófago infinitamente mediante la mediación de los receptores barredores, con lo cual se forman las celdas de espuma. El surgimiento de las celdas de espuma es conocido por ser un factor crítico para la aparición y desarrollo de arteriesclerosis en colesterolemia superior. Un objeto de la presente invención es proveer información novedosa útil para eliminar las interacciones entre HDL y lipoproteínas ricas en TG. La presente invención también provee información sobre un componente específico de lipoproteínas ricas en TG que participan en las interacciones anteriores, regiones de dicho componente, y estructuras, y además proveen un péptido reactivo a HDL que tiene una estructura específica. La presente invención también provee información novedosa sobre interacciones entre la formación de colesteroles en el tejido periférico tal como paredes del vaso sanguíneo y lipoproteínas, y en particular información con relación al mecanismo de flujo de colesterol. Además, la presente invención provee medios útiles para la evaluación y mejoramientos de errores metabólicos de lípido que afectan en gran medida el surgimiento, desarrollo, pronóstico, etc. de enfermedades cardiacas tales como infarto al miocardio, como también diferentes tipos de arteriesclerosis, incluyendo trastornos cerebrovasculares tales como apoplejía cerebral.

DESCRIPCION DE LA INVENCION Los inventores de la presente realizaron estudios en errores metabólicos de lipido, y proveyeron, entre otras cosas, una lipoproteína similar al resto (RLP) que sirve como un índice clínico que indica dichos errores (véase, por ejemplo, Arteriosclerosis, 20, 79-88 (1992); Clin. Chim. Acta., 223, 53-71 (1993); o la patente japonesa No. 2657225) y una técnica para mejora o medición de CETP que participa en el intercambio de lípidos antes descrito (patente japonesa No. 3043528). Durante el seguimiento de sus estudios subsecuentes, los inventores de la presente han obtenido de manera inesperada un descubrimiento novedoso en cuanto a que HDL reacciona directamente con LDL. La presente invención se ha logrado con base en una determinación de que esta reacción procede mediante la mediación de una región específica de apo B-100 de LDL. El descubrimiento novedoso de que HDL reacciona directamente con una lipoproteína rica en TG para intercambiar así lípidos satisfactoriamente explica las características de RLP y las causas del fenómeno antes descrito de RLP, que es una lipoproteína anormal que se cree que se metaboliza lentamente y se forma en la sangre. RLP es una lipoproteína de suero cuya característica es que RLP no reacciona con un anticuerpo para apo B-100 (una apoproteína estructural de VLDL, IDL, y LDL) o para apo A-l (una apoproteína estructural de HDL). De este modo, diferente de las lipoproteínas ricas en TG normales, se cree que RLP no provee la región especifica de apo B-100, que participa en la reacción con HDL, y por lo tanto RLP no puede reaccionar con HDL, conduciendo al estancamiento en el intercambio de lípidos y metabolismo de RLP. Por lo tanto, la presente invención contempla la provisión de información novedosa sobre que HDL reacciona directamente con VLDL rica en TG, IDL, y LDL mediante la mediación de apo B-100 que se contiene en VLDL, IDL, y LDL en el mecanismo de transporte de llpidos antes descrito o en el mecanismo de metabolismo de lipoproteínas. Además, la presente invención contempla la provisión de una región específica determinada para participar en la reacción de apo B-100. De este modo, la presente invención provee un péptido reactivo a HDL del siguiente (a) o (b): (a) un péptido que tiene la secuencia de aminoácido representada por SEQ ID NO: 1 ; o (b) un péptido que tiene secuencia de aminoácido representada por (a) con uno o más residuos de aminoácidos que han sido modificados a través de la sustitución, supresión, adición o inserción, y que tienen una capacidad de enlace específica al colesterol de HDL. Los inventores de la presente han realizado además una variedad de estudios en efecto del péptido y el péptido modificado, y han encontrado que estos péptidos tienen un efecto de flujo de colesterol desde las celdas de espuma producidas en etapa temprana de la arteriosclerosis.

Una sustancia que tiene el efecto de flujo de colesterol desde las celdas de espuma evita la formación la placa, formación de trombosis, desarrollo de arteriosclerosis de las celdas de espuma, o reacciones similares. Por lo tanto, el péptido y el péptido modificado son útiles como un fármaco para mejorar los errores metabólicos de lípidos o un fármaco para evitar o tratar arteriosclerosis. La presente invención provee un péptido reactivo a celdas de espuma del siguiente (a) o (b): (a) un péptido que tiene la secuencia de aminoácido representada por SEQ ID NO: 1 ; o (b) un péptido que tiene una secuencia de aminoácido representada por (a) con uno o más residuos de aminoácidos que han sido modificados a través de la sustitución, supresión, adición o inserción, e inducen el flujo de colesterol de la celdas de espuma. La presente invención también provee un fármaco tal como un fármaco de flujo de colesterol de tejido periférico, un fármaco para mejorar los errores metabólicos de lípido, o un fármaco para evitar o tratar arteriosclerosis, que contiene el péptido reactivo a HDL o el péptido reactivo a celdas de espuma como un ingrediente activo. La presente invención también provee una composición de fármaco tal como un fármaco de flujo de colesterol de tejido periférico, un fármaco para mejorar los errores metabólicos de lípido, o un fármaco para evitar o tratar la arteriosclerosis, que contiene el péptido reactivo a HDL o el péptido reactivo a celda de espuma, y un portador farmacológicamente aceptable. La presente invención también provee el uso del péptido reactivo a HDL o el péptido reactivo a la celda de espuma en la producción de un fármaco tal como un fármaco de flujo de colesterol de tejido periférico, un fármaco para mejorar los errores metabólicos de lípido, o una fármaco para evitar o tratar arteriesclerosis. La presente invención también provee un método para tratar la formación de colesterol en tejidos periféricos, errores metabólicos en lípldos, o arteriesclerosis, que comprende administrar, a un sujeto en necesidad del mismo, el péptido reactivo a HDL o el péptido reactivo a celdas de espuma en una cantidad efectiva. En la especificación de la presente, las abreviaturas utilizadas para designar aminoácidos, péptidos, secuencias de nucleótldo, ácidos nucleicos, etc., de conformidad con las regulaciones de IUPAC O IUB, "Guideline for Preparing a Specification Containing a Nucleotide Sequence or an Amino Acid Sequence" (editado por la oficina de patentes japonesas) o códigos usuales empleados en la técnica. La secuencia de aminoácido y números de sitio de apo B- 00 se designan en conformidad con "apolipoprotein B-100 precursor-human, ACCESSION: LPHUB, PID: g71789, NCBI Sequence Viewer." BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS La figura 1 muestra reactividad de B100FL con anticuerpo monoclonal anti-apo B-100 (Jl-H); La figura 2 muestra los resultados del análisis de (CLAR) de lipoproteínas contenidas en una fracción que no se unió al gel (A) B100FL y una fracción que no se unió al gel del control (B); La figura 3 muestra los resultados del análisis (electroforesis de gel SDS) de proteínas contenidas en una fracción que no se unió al gel B100FL y una fracción que no se unió al gel B100FL; La figura 4 muestra el efecto del péptido de la presente en flujo del colesterol a partir de células RAW264; y} La figura 5 muestra el efecto el péptido de la presente en los tejidos de vasos sanguíneos del modelo de arterioscierosis (A (x16) y B (x40): grupos de control, y C(x16) y D(x40): los grupos a los cuales se ha administrado el péptido de la presente).

DESCRIPCION DE LAS MODALIDADES PREFERIDAS El pollpéptido reactivo a HDL de la presente Invención se describirá con detalle. Una característica típica del péptido reactivo a HDL de la presente invención reside en su capacidad de enlace específica al colesterol de HDL. Como se utiliza en la presente, la expresión "tiene una capacidad de enlace específica al colesterol HDL" se refiere una situación en donde el péptido reactivo a HDL presenta afinidad específicamente con colesterol libre y/o CE contenido en HDL para unirse específicamente al mismo. La expresión también a una situación en donde colesterol libre y/o CE contenido en HDL presenta afinidad específicamente con el péptido reactivo a HDL para unirse así específicamente al mismo. SEQ ID NO: 1 es una secuencia de aminoácido de un péptido característico que presenta capacidad de enlace al colesterol de HDL. Es decir, los péptidos que tienen dicha secuencia de aminoácidos tienen una capacidad de enlace específica al colesterol de HDL. Por lo tanto, dichos péptidos son modalidades preferidas del péptido reactivo a HDL de la presente invención. SEQ ID NO: 1 representa una región contenida en apo B-100 (una protefna estructural de VLDL, IDL, y LDL) y que tiene 51 residuos de aminoácidos; es decir, los residuos de 2,297 a 2,347 aminoácidos de apo B-100. De manera interesante, la región representada por SEQ ID NO: 1 contiene una región que es considerada por ser un epítope para el anticuerpo monoclonal "Jl-H" (un anticuerpo apo B- 00 utilizando en la medición de RLP) (J. Clin. Ligand Assay, 19(3), 77 (1996)). Por lo tanto, el descubrimiento en la presente invención también está de acuerdo con el hecho de que RLP, una lipoproteína rica en TG anormal que se metaboliza lentamente y se forma en la sangre, no tiene capacidad de enlace al anticuerpo monoclonal. En relación con el póptido reactivo a HDL, la secuencia de aminoácido de SEQ ID NO: 1 , puede tomar una forma modificada en donde los aminoácidos parciales, o uno o más residuos de aminoácidos de la secuencia, han sido modificados, siempre que el péptido presente capacidad de enlace al colesterol de HDL. No se imponen limitaciones en el grado y el sitio de modificación (es decir, sustitución, supresión, adición, o inserción), siempre que el péptido que tenga la secuencia de aminoácido modificada presente el mismo efecto que los péptidos que tiene la secuencia de aminoácido de SEQ ID NO: 1 ; es decir, que el péptido tenga la capacidad de enlace al colesterol de HDL. Ejemplos del muíante incluyen péptidos que tienen alrededor 100 residuos de aminoácido, y el muíante preferiblemente tiene alrededor de 6 a aproximadamente 60 residuos de aminoácido, más preferiblemeníe alrededor de 20 a aproximadamente 50 residuos de aminoácidos. Un requerimiento esencial es que el mutante tenga 6 residuos de aminoácidos representados por SEQ ID NO: 4, y que preferiblemente el mutante tenga los 20 residuos de aminoácidos representados por SEQ ID NO: 5. Ejemplos del mutante incluyen un péptido que tiene los 30 residuos de aminoácidos representados por SEQ ID NO: 2, y un péptido que tenga los 30 residuos de aminoácido representados por SEQ ID NO: 3. El péptido reactivo a HDL de la presente invención es en particular preferiblemente un péptido que tiene la secuencia de aminoácido de SEQ ID NO: 1 . Si o no el péptido reactivo a HDL tiene capacidad de enlace al colesterol de HDL puede confirmarse a través de una prueba de conformidad con un método usual. Un ejemplo específico de la prueba se describirá a continuación en los ejemplos. El péptido reactivo a la celda de espuma de la presente invención se describirá con detalle. Una característica típica del péptido reactivo a la celda de espuma reside en su efecto de hacer fluir el colesterol desde las celdas de espuma. En relación con el péptido reactivo a las celdas de espuma, la secuencia de aminoácido de SEQ ID NO: 1 puede tomar una forma modificada en donde los aminoácidos parciales, o uno o más residuos de aminoácidos de la secuencia, han sido modificados, siempre que el péptido presente flujo de colesterol desde las celdas de espuma. No se imponen limitaciones en el grado y el sitio de la modificación (es decir, sustitución, supresión, adición o inserción), siempre que un póptido que tenga la secuencia de aminoácido modificada presente el mismo efecto que los péptidos que tienen la secuencia de aminoácido de SEQ ID NO: 1 ; es decir, que el péptido presente flujo de colesterol desde las celdas de espuma. Ejemplos del muíante incluyen péptidos que tiene alrededor de 00 residuos de aminoácido, y el mutante preferiblemente tiene alrededor de 6 a aproximadamente 60 residuos de aminoácido, más preferiblemente alrededor de 20 a aproximadamente 50 residuos de aminoácido. Un requerimiento esencial es que el mutante tenga 6 residuos de aminoácido representados por SEQ ID NO: 4, y que preferiblemente el mutante tenga los 20 residuos de aminoácidos representados por SEQ ID NO: 5. Ejemplos del mutante incluyen un péptido que tiene los 30 residuos de aminoácido representados por SEQ ID NO: 2, y un péptido que tenga los 30 residuos de aminoácidos representados por SEQ ID NO: 3. El péptido reactivo a HDL de la presente invención es en particular preferiblemente un péptido que tiene la secuencia de aminoácido de SEQ ID NO: 1 . Si, o no el péptido reactivo a la celda de espuma tiene una capacidad para hacer fluir al colesterol desde las celdas de espuma puede confirmarse de conformidad con el procedimiento descrito a continuación en los ejemplos. De aquí en adelante, el péptido reactivo a HDL y el péptido reactivo a celdas de espuma pueden referirse colectivamente como "el péptido de la presente".

El péptido del a presente puede producirse para tener la secuencia de aminoácido antes mencionada a través de un método de síntesis químico usual. El método abarca una variedad de esquemas de síntesis de péptido en base a técnicas de fase sólida usuales y técnicas de fase líquida usuales. Específicamente, los métodos de síntesis de péptido incluyen alargamiento gradual y condensación en fragmentos. En el alargamiento gradual, el péptido se produce a través de enlazar secuencialmente un residuo de aminoácido de conformidad con la información de la secuencia de aminoácido de Interés, con lo cual la cadena se alarga. En la condensación en fragmentos, el péptido se produce a través, de conformidad con la información de la secuencia de aminoácido de interés, de la síntesis de fragmentos que tiene una pluralidad de residuos de aminoácidos y subsecuentemente someter a los fragmentos a la reacción de acoplamiento entre sí. El péptido de la presente puede sintetizarse a través de cualquiera de estos métodos. La condensación empleada en la síntesis de péptido descrita anteriormente puede realizarse a través de un método de rutina. Ejemplos específicos del método incluyen el método azida, el método de anhídrido ácido mezclado, el método de DCC, el método de éster activo, el método de oxidación-reducción, el método de DPPA (difenilfosforilazida), un método de DCC modificado que es una combinación del método de DCC y un aditivo (por ejemplo, 1 -hidroxibenztriazola, N-hidroxisuccinamida, N-hidroxi-5-norborneno-2,3-dicarboxiimida), y el método de Woodward. Los solventes a utilizar en estos métodos pueden seleccionarse de manera adecuada entre aquellos que son bien conocidos por se empleados en dicha reacción de condensación de péptido. Ejemplos de los solventes incluyen dimetilformamida (D F), dimetilsulfóxido (DMS09, hexafosforamida, dioxano, tetrahidrofurano (THF), acetato de etilo, y mezclas de los mismos. En la reacción de síntesis de péptido, un grupo carboxilo que se contiene en el aminoácido o péptido y que no participa en la reacción puede protegerse típicamente a través de la formación de un éster, por ejemplo, un éster alquílico inferior tal como éster metílico, un éster etílico, o un éster tert-butílico; un éster bencílico; un éster p-metoxibencilo; un éster p-nitrobencílico; o un éster aralquílico. Cuando un residuo de aminoácido tiene un grupo funcional en su cadena lateral, el grupo funcional puede protegerse. Por ejemplo, el grupo hidroxilo de Tyr puede protegerse con un grupo acetílo, un grupo bencilo, un grupo benciloxicarbonilo, o un grupo tert-butilo. Sin embargo, dicho grupo funcional puede no necesariamente ser protegido. Además, el grupo guanídino de Arg puede protegerse con un grupo protector adecuado tal como un grupo nitro, un grupo tosilo, un grupo 2-metoxibencensulfonilo, un grupo metilen-2-sulfonilo, un grupo benciloxicarbonilo, un grupo isoborniloxícarbonilo, o un grupo adamantiloxícarbonilo. La desprotección del aminoácido protegido antes descrito o péptido o el péptido de la presente finalmente obtenido en una forma protegida puede realizarse a través de un método de rutina; por ejemplo, reducción catalítica, o un método que emplea amoníaco líquido/sodio, fluoruro de hidrógeno, bromuro de hidrógeno, cloruro de hidrógeno, ácido trifluoroacético, ácido acético, ácido fórmico, o ácido metansulfónico. De acuerdo con las necesidades, el péptido de la presente así obtenido puede purificarse a través de un método de rutina. Ejemplos del método incluyen intercambio iónico, cromatografía por división, cromatografía de gel, cromatografía de afinidad, cromatografía líquida de alto rendimiento (CLAR) y distribución contracorriente. Estos métodos han sido utilizados usualmente en el campo de la química de péptido. Alternativamente, el péptido de la presente puede producirse a través de una técnica de ingeniería genética que utiliza una secuencia de ADN que codifica para el péptido de la presente. La técnica de ingeniería genética puede realizarse a través de un procedimiento de rutina. Por ejemplo, la síntesis de un fragmento de ADN, producción de un vector que permite la expresión del fragmento de ADN, y expresión del vector en una célula hospedero pueden realizarse a través de procedimientos similares a aquellos utilizados en las técnicas de ingeniería genética usuales (véase, por ejemplo, Molecular Cloning 2d. Ed., Cold Spring Harbor Lab. Press (1989); or Zoku-seikagaku Jikken Kouza "Idenshi Kenkyu-ho I, II, III," que se editó por la Sociedad Bioquímica Japonesa (1986)). Por ejemplo, un fragmento de ADN que codifica para el péptido de la presente se produce a través de un método de rutina de conformidad la información de secuencia de aminoácido en el péptido de enlace a HDL provisto en la presente invención (véase, por ejemplo, Science , 224, 1431 (1984); Biochem. Biophys. Res. Comm, 130, 692 (1985); or Proc. Nati. Acad. Sci., USA., 80, 5990 (1983)). Más específicamente, el fragmento de ADN puede sintetizarse químicamente a través de un método de fosforamidita o un método de triéster. Ejemplos de dicho método incluyen un método que utiliza un dispositivo de síntesis de oligonucleótido automatizado comercialmente disponible. Un fragmento de ADN de doble cadena se produce a partir del fragmento de ADN de una sola cadena químicamente sintetizado a través de la sintetización de un fragmento de ADN complementario al fragmento de ADN de una sola cadena y sometiendo a ambos de los fragmentos a un procedimiento de alineación bajo condiciones adecuadas, o a través del uso de un iniciador adecuado y una polimerasa de ADN y agregando un fragmento de ADN complementario al fragmento de ADN de una sola cadena. De acuerdo con las necesidades, la secuencia de aminoácido codificada para el fragmento de ADN puede modificarse. Esto puede realizarse a través de un método conocido. Ejemplos del método incluyen mutagénesis de sitio específico dirigida a oligonucleótidos (Zoller, M., et al., Nucí. Acids Res., 10, 6487-6500 (1982)) and mutagénesis de cassette (Well, J., et al., Gene, 34, 315-323 (1985)). La producción o expresión de un péptido deseado a través del uso del fragmento de ADN puede realizarse a través de un método usual conocido en la técnica (véase, por ejemplo, Science, 224, 1431 (1984); Biochem. Bíophys. Res. Comm., 130, 692 (1985); o Proc. Nati. Acad. Sci. USA., 80, 5990 (1983)). Un fragmento de ADN que codifica para el péptido de la presente puede prepararse mediante el uso de un fragmento de ADN existente capaz de codificar para apo B-100. El péptido así obtenido de interés puede aislarse y purificarse a través de una técnica de aislamiento utilizando sus características físicas o químicas (véase, por ejemplo, "Biochemistry Data Book II," pp. 1 175-1259, 1 ra edición, 1 ra impresión, 23 de junio, 1980, publicada por Tokyo Kagaku Dozin Co„ Ltd; Biochemistry, 25 (25), 8274-8277 (1986); o Eur. J. Biochem., 163, 313-321 (1987)). Como se describió anteriormente, el péptido de la presente incluye un péptido que tiene una capacidad de enlace específica al colesterol de HDL y un péptido que induce flujo de colesterol desde tejidos periféricos, particularmente desde celdas de espuma. Por lo tanto, utilizando estos efectos, el péptido de la presente se utiliza como un reactivo para estudios con el fin de explicar el mecanismo de la transcripción de lípidos y metabolismo, mecanismo de aparición de arteriesclerosis en tejidos periféricos, o el mecanismo de formación de trombos. Además, por ejemplo, el péptido de la presente puede utilizarse en la producción de una composición de fármaco que contiene un péptido como un ingrediente activo. Ya que la composición del fármaco contiene, como un ingrediente activo, el péptido de la presente presentando una capacidad de enlace específica al colesterol de HDL, la composición del fármaco puede utilizarse, por ejemplo, para proveer reactividad con HDL a lipoproteínas ricas en TG o lipoproteínas anormales (tales como RLP) que se metabolizan lentamente y se forman en la sangre, o para promover la reacción. Además, ya que el péptido de la presente provoca flujo de colesterol desde las células de tejido periférico, la composición del fármaco puede utilizarse para mejorar el metabolismo de lípidos en la arteria coronaria, la aorta, la arteria periférica, etc, y para evitar o tratar la arteriosclerosis. De este modo, el metabolismo de dichas lipoproteínas puede normalizarse o promoverse, y el desarrollo de la arteriosclerosis puede evitarse. Por lo tanto, la composición del fármaco puede utilizarse como un remedio para mejorar el metabolismo de lípidos o como un remedio para evitar o tratar la arteriosclerosis. La composición del fármaco se administra de tal manera que el ingrediente activo se suministre efectivamente a los sitios objetivos tales como RLP, lipoproteína rica en TG, o la arteria (particularmente el vaso sanguíneo). Por ejemplo, la composición del fármaco se administra por medio de alimento, o la composición del fármaco se procesa de manera que el ingrediente activo se absorba en el intestino para preparar así una preparación del fármaco, y la preparación se administra peroralmente. Dicha preparación del fármaco puede producirse a través de un método de rutina y se puede administrar en una manera usual. Opcionalmente, el péptido de la presente, el ingrediente activo de la composición del fármaco, puede tratarse con lípidos u otras sustancias.

La composición del fármaco puede combinarse con un sistema de suministro de fármaco (DDS) utilizan una sustancia de suministro de fármaco que se une a la RLP objetivo o la lipoprotelna rica en TG. Ejemplos de la sustancia de suministro de fármaco incluye anticuerpos (preferiblemente anticuerpos policlonales) para una apoproteína contenida en un lipoprotelna objetivo, tal como apo B-100. El péptido de la presente que ha sido modificado con dicho anticuerpo puede lograr una localización afectiva mediante la lipoproteína objetivo. La composición del fármaco contiene una cantidad farmacológicamente efectiva del péptido de la presente como un ingrediente activo, y la composición se prepara a través de un procedimiento de rutina junto con uno o más portadores farmacológicamente aceptables, para preparar así la composición del fármaco. La presente invención provee un fragmento de ADN que tiene una secuencia de nucleótido que codifica para el péptido de la presente. El fragmento de ADN es útil en la producción del péptido de la presente a través de una técnica de ingeniería genética como se describió anteriormente. Además, el fragmento de ADN puede utilizarse en la producción de una composición de fármaco que contiene un fragmento de ADN como un ingrediente activo. La composición del fármaco resultante se utiliza como un fármaco cuyo objetivo es RLP, lipoproteína rica en TG o la artería, y la composición del fármaco es útil en el mismo uso como el de la composición del fármaco que contiene el péptido de la presente como un ingrediente activo como se describió anteriormente. El péptido de la presente provoca flujo de colesterol y/o lípído tal como TG de HDL. Por lo tanto, el péptido de la presente puede utilizarse, al hacerlo reaccionar con HDL, para activación del transporte de colesterol inverso o promoción de metabolismo de HDL favorable como se describió anteriormente. Para utilizar el péptido de la presente, por ejemplo, una composición del fármaco que contiene el péptido de la presente o un fragmento de ADN del mismo como un ingrediente activo puede producirse, o el péptido de la presente puede utilizarse para producir HDL que no tiene colesterol (de aquí en adelante mencionado como "apo A-1" libre de lípido) a través del flujo del colesterol de HDL (véase, por ejemplo, Curr. Opin. Lipidol. , 7, 82-87 (1986)). Cuando el péptido de la presente se utiliza en la manera descrita anteriormente, el péptido de la presente reacciona con HDL, para lograr así una producción positiva de apo A-1 libre de lípido en la sangre. De este modo, el péptido de la presente puede utilizarse muy efectivamente en, entre otras cosas, la prevención, por medio de HDL, del depósito de colesterol en tejidos, o la prevención de artehosclerosis o restenosis de vasos sanguíneos, a través del flujo forzado de colesterol. Como se describió anteriormente, el péptido de la presente tiene un efecto directo del flujo de colesterol de las celdas de espuma en la arteria. Por lo tanto, aún si el péptido de la presente se aplica los vasos sanguíneos que ya han desarrollado la arteriesclerosis, el péptido de la presente es muy útil en, por ejemplo, la prevención del desarrollo de arteriosclerosis o tratamiento de arteriosclerosis, o prevención de restenosis de vasos sanguíneos por medio del flujo de colesterol. El uso del péptido de la presente como una composición del fármaco abarca su uso in vitro. Como se describió anteriormente, cuando el péptido de la presente reacciona con HDL, se produce apo A- libre de lípido, y el apo A-libre de lípido es útil para la prevención o tratamiento de las enfermedades anteriores o condiciones patológicas. Ejemplos del uso del péptido de la presente in vitro incluye circulación extracorporal utilizando una columna que contiene el péptido de la presente como un componente efectivo. No se imponen limitaciones en el modo de la circulación extracorporal, siempre que el modo permita que el péptido de la presente haga contacto efectivamente con las muestras sanguíneas de prueba (HDL). Por ejemplo, un portador al cual el péptido de la presente se inmoviliza se emplea preferiblemente. Además de un procedimiento que utiliza el portador al cual el péptido de la presente se inmoviliza, la circulación extracorporal puede realizarse a través del procedimiento descrito en la patente japonesa No. 2835923.

EJEMPLO La presente invención se describirá a continuación con más detalle por medio de ejemplos, que no deben construirse como limitativos de la invención.

EJEMPLO 1 1 ) Síntesis del péptido Un péptido que tiene una secuencia de aminoácido de SEQ ID NO: 1 (B100FL) se sintetizó químicamente de conformidad con el método convencional. Específicamente, el péptido se sintetizó a través del método Fmoc para lograr la secuencia anterior mediante el uso de la resina Fmoc-NH-SAL (producto de Watanabe Kagaku). La resina que porta el péptido protegido se trató con una mezcla de solvente (TFA:fenol: t¡oanisol:1 ,4-butanodiotiol: agua = 82.5:5:5:2.5:5) durante 3 horas, para remover así los grupos protectores. El producto crudo se purificó mediante HPLC de fase inversa como se describe a continuación, para producir asi el péptido objetivo. <CLAR de fase inversa> Columna: Cosmosil 5C18MS (10 x 250 mm; Nacalai Tesque) Eluyente: agua/acetonitrilo que contiene 0.1 % de TFA (gradiente lineal de acetonitrilo; 2.5 mL/min.) El péptido objetivo así obtenido se analizó mediante espectrometría en masa (Biosistemas de Percepción; DE de viajero/tiempo de vuelo por ionización - desorción de láser asistida por matriz: MALDI-TOF/matriz: ácido alfa-ciano-4-hidroxicinámlco) y análisis de aminoácido (hidrólisis en un ácido clorhídrico de ebullición constante a 110°C durante 24 horas en un tubo sellado (Hitachi L-8500 Amino Acid Analyzer)). (2) Reactividad con el anticuerpo monoclonal anti-apo B- 00 (Jl-H: J. Clin. Liaand Assav. 19 (3). 177 (1999^ La reactividad se confirmó a través de ELISA de conformidad con un método convencional al utilizar una placa revestida con el péptido obtenido anteriormente (B100FL) (véase solicitud de patente japonesa abierta al público (kokai) No. 4-104798). Como resultado, se encontró que B100FL tiene una reactividad con Jl-H (figura 1 : el eje Y y el eje X representan absorbancia (OD450) y la concentración de péptido inmovilizado (ng/mL), respectivamente). (3) Reactividad con HDL El péptido obtenido en (1 ) anterior (B100FL, 0.1 mg) se agregó al gel de afinidad (25 pL) al cual se le inmovilizó un anticuerpo monoclonal anti-apo B-100 (Jl-H), con lo cual se preparó un gel de afinidad unido a B100FL. Un gel de control se preparó al tratar gel con PBS (que no contiene B100FL) en una manera similar a la anterior. Plasma de humano (1 ml_) se agregó al gel de afinidad (2 ml_) al cual se inmovilizó un anticuerpo monoclonal anti-apo A-I, para provocar así que HDL se uniera específicamente al gel. El HDL unido se eluyó con tiocianato de sodio 3M, y el regulador de pH del eluyente así obtenido se cambió a PBS a través del uso de una columna mediante desalación, para preparar así una muestra de HDL. El gel de afinidad inmovilizado del anticuerpo monoclonal de anti-apo A-l antes mencionado y el gel de afinidad inmovilizado de anticuerpo monoclonal anti-apo B-100 (Jl-H) se prepararon de conformidad con un método convencional (solicitud de patente japonesa (kokoku) No. 7-104351 ). La muestra de HDL (que contiene 20 pg de apo A-l) se hizo reaccionar con el gel de afinidad enlazado a B100FL durante 30 minutos a temperatura ambiente. Subsecuentemente, la mezcla de reacción se dejó reposar durante 15 minutos para provocar así que el gel se precipitara, para remover así el gel de la mezcla de reacción. Las facciones que no se unieron al gel (de aquí en adelante mencionadas como "fracciones no unidas a B100FL") y las facciones que se unieron al gel (de aquí en adelante mencionadas como "fracciones unidas a B100FL") se sometieron separadamente al análisis descrito a continuación de conformidad con un método convencional. El nivel de coiesterol total: El nivel de coiesterol total se determinó con un reactivo para medir el nivel de coiesterol (L-TCII, Kyowa Medex Co., Ltd.) por medio de un autoanalizador (TBA20R; Toshiba). Análisis de lipoproteína: La lipoprotelna se analizó a través de CLAR de un sistema de análisis de lipoprotelna (Lipopropax XL, eluyente: eluyente TSK LP-1 , 1 mL/min., volumen de muestra 100 pL; Tosoh) mediante el monitoreo de colores producidos mediante el coiesterol. Concentración de proteína: Cada concentración de proteína se determinó al medir la absorbancía (OD280); o a través del método de Lowry en donde cada muestra (que ha sido deslipidizada con etanol-óter) se sometió a reacción de color. Análisis de proteína: La proteína se analizó mediante electroforesis de SDS-gel. Específicamente, cada muestra se sometió a tratamiento de deslipidización y se solubilizó con 1 % de SDS, seguido por tratamiento con un regulador de pH (2% de SDS/10% de glicerol/0.005% de BPB/20% de 2-mercaptoetanol), para preparar así una muestra para electroforesis. La muestra resultante se sometió a electroforesis en un gel de gradiente 4-20% de conformidad con un método convencional.

Resultados La figura 2 muestra los resultados obtenidos mediante el análisis de la lipoprotelna contenida en una fracción que no se unió al gel B100FL (fig. 2A) y una fracción que no se unió al gel de control (figura 2B). En la figura 2, las líneas sólidas muestran los resultados obtenidos mediante el análisis en donde cada fracción se utilizó como una muestra; y las líneas quebradas muestran los resultados obtenidos mediante el análisis en donde HDL se utilizó como una muestra (línea de base). El cuadro 1 a continuación muestra los resultados obtenidos mediante cada análisis de una fracción que no se unió al gel B100FL ("B100FL" en el cuadro 1 ) y una fracción que no se unió al gel de control ("PBS" en el cuadro 1 ). Cada análisis se realizó con respecto al nivel de colesterol total ("colesterol" en el cuadro 1 ), nivel de colesterol de HDL ("HDL-C" en el cuadro 1 ) que se obtuvo mediante análisis de lipoproteína (figura 2), la concentración de la proteína determinada al medir la absorbancia ("O.D.280" en el cuadro 1 ), y concentración de protelna medida a través de una reacción de color ("proteína Delipid" en el cuadro 1 ).

CUADRO 1 Como es evidente a partir del cuadro 1 , el nivel de colesterol total de la muestra de HDL tratada con gel de enlace a B100FL es 0.25 mg/dl, que es alrededor de 1/15 del de la muestra de HDL tratada con el gel de control.

Además, la figura 2 (análisis de lipoproteína), incluye un pico atribuido al colesterol (HDL-C) en la muestra de HDL que ha sido tratada con el gel de control, pero no incluye un pico en la muestra de HDL que ha sido tratada con el gel de enlace a B100FL. La concentración de proteínas se determinó al medir la absorbancia y a través de una reacción de color. Se encontró que la concentración de proteína de la muestra de HDL que ha sido tratada con el gel de enlace a B100FL es casi igual a la de la muestra de HDL que se trató con el gel de control (cuadro 1 ). El análisis de proteína se realizó a través de la electroforesis de SDS-gel. Los resultados se muestran en la figura 3. En la figura 3, cada campo representa la siguiente muestra. Estándar (bajo): Estándar de bajo peso molecular B 00FL (+) Sin enlazar: fracción no enlazada a B100FL B100FL (+) Enlazada: fracción enlazada a B100FL B100FL (-) No enlazada: fracción no enlazada al gel de control B100FL (-) Enlazada: fracción enlazada al gel de control B100FL (-)/Gel (-): HDLHDL que no se trató con gel HDL-4: fracción HDL 4 que no trató con gel LDL-3: fracción de LDL-3 que no trató con gel Estándar (elevado): estándar de alto peso molecular. En la figura 3, no sólo en la muestra de HDL no tratará sino también en la muestra que se trató con el gel unido a B100FL, una banda que representa A-1 (una apoproteína principal de HDL) está presente como una banda principal en la cercanía de la posición del peso molecular 28,000. Además, las bandas que representan proteínas estructurantes de HDL diferentes a A-l (apo C, apo A-ll, apo E, apo A-IV, etc.) también están presentes, y ninguna diferencia se encuentra en la relación estructural de estas proteínas. Por lo tanto, en una solución de reacción obtenida al hacer reaccionar HDL con B100FL, únicamente proteínas (por ejemplo, apo A-l de HDL) están presentes, y el colesterol y éster de colesterol están substancíalmente ausentes. Los resultados anteriores indican que B100FL tiene una interacción con el colesterol y el éster de colesterol de HDL, y tiene un efecto para poner en flujo el colesterol y el éster de colesterol desde partículas de aproproteína de HDL.

EJEMPLO 2 Síntesis de péptldo Cada péptido que tiene una secuencia una aminoácido que se muestra en el cuadro 2 se sintetizó en una manera similar a la que se describió en el ejemplo 1.

CUADRO 2 EJEMPLO 3 Prueba de flujo de colesterol Los péptidos antes mencionados se examinaron con respecto al efecto de flujo del colesterol desde las células RAW264 (un modelo de arteriosclerosis). Específicamente, las células RAW2B4 (cepa de la célula de leucemia monocftica de ratón) se agregaron al medio DMEM que se complementó con 10% de FBS, para preparar así un espécimen que tiene una concentración de 4 x 105 de células/mL. Una alícuota del espécimen (1 mL) se agregó a cada pozo de una placa de 12 pozos, seguido por cultivo durante 2 días en una incubadora de CO2 (37°C). El medio en cada pozo se removió, y las células en cada pozo se lavaron una vez con 1 MI de DMEM que contiene 0.2% de BSA y 20 mM de glutamina (de aquí en adelante también como "DMEM"). Subsecuentemente, una solución de LDL acetilada en DMEM (40 ng/mL, 1 mL) se agregó a cada pozo, seguido por cultivo durante 24 horas en una incubadora de C02 (37°C), con lo cual la LDL acetilada se introdujo en las células. Las células de lavaron dos veces con PBS complementado con 0.2% de BSA. De aquí en adelante una solución de cAMP dibutílico en DMEM (0.3 mM, 1 mL) se agregó a cada pozo, seguido por incubación durante 2 horas en una incubadora de C02 (37°C).

El péptido de prueba (20 µ?_) se agregó a cada pozo para lograr una concentración final de 20, 2.0, ó 0.2 seguido por el cultivo durante 24 horas en una incubadora de C02 (37°C). Después de 24 horas, el sobrenadante de cada pozo se recolectó en un microtubo, y el microtubo se centrifugó durante 5 minutos a 10,000 rpm. Este nivel de colesterol del sobrenadante se midió por medio de un autoanalizador descrito anteriormente. Cada péptido de prueba se disolvió en DMSO (5 mg/mL), y la solución asi formada se diluyó con DMEM para lograr una concentración de 1 mg/mL. Subsecuentemente, la solución resultante se diluyó 10 veces o 100 veces con DMEM, para preparar asf una muestra de prueba. Además, para preparar una muestra de control, únicamente DMSO se diluyó con DMEM para lograr una concentración final de 0.4, 0.04 ó 0.004%; y para preparar una muestra de control positiva, HDL Delipid se diluyó con DMEM para lograr una concentración de 2.5, 5.0, o 10 µg/mL Los resultados se muestran en la figura 4. Se encontró que tres péptidos (P51 (B-100FL, SEQ ID NO: 1 ), PS505 (SEQ ID DO: 2), y PS509 (SEQ ID NO: 3)) muestran un fuerte efecto de flujo de colesterol a partir de células RAW264 (espuma con LDL acetilada) dependiendo de las concentraciones de los péptidos empleados. Sin embargo, se encontró que cuatro péptidos (P21 , PS506, PS507, y PS508) que no contenían una secuencia compuesta de seis aminoácidos (que corresponden a 2,321 -2,326 aminoácidos de B-100) no presentaron el efecto.

De un modo imaginable, un péptido que contiene una secuencia de seis aminoácidos (2,321 -2,326 aminoácidos de B-100) (SEQ ID NO: 4) y un péptido que contiene una secuencia de 20 aminoácidos (2,307-2,326 aminoácidos de B-100) (SEQ ID NO: 5) presenta un efecto de flujo de colesterol, y tiene un efecto de anti-arteriosclerosis.

EJEMPLO 4 Prueba del efecto mediante el uso de un modelo de arteriesclerosis Colesterol (Wako Puré Chemical Industries, Ltd.) y aceite de maíz (Corn Germ Oil 100; Ajinomoto Co., Inc.) se incorporaron en un alimento comercialmente disponible (producto de Natural Pet Foods, "Chicks and nestlings (Quail)") para lograr las concentraciones finales del 2% y 15%, respectivamente, para preparar así un alimento con alto contenido de colesterol. Codornices saludables fueron criadas mientras consumían libremente los alimentos con alto contenido de colesterol durante ocho semanas. Cinco semanas después de comenzar la crianza, una solución del péptido de prueba (B-100FL) en solución salina (1.0 mg/ml) se administró a las venas braquiales (alas) (200 µ?; 200 ng/cuerpo) dos veces a la semana en el intervalo de 2 a 3 días. En una manera similar a la descrita anteriormente, solamente se administró solución salina a las codornices de un grupo de control.

Después de que se criaron las codornices durante 8 semanas, la cabeza de cada codorniz se cortó mediante exanguinación, y se obtuvo una muestra de la aorta. La muestra de la aorta se fijó inmediatamente en una solución de fijación (10% formalina) durante tres días. Subsecuentemente, un espécimen de tejido (una sección congelada que tiene un espesor de 4 µG?) de arco aórtico (en donde es más probable que suceda la arteriosclerosis) se preparó. El espécimen del tejido se sometió a coloración con hematoxilina y eosina (coloración de rutina) y a coloración en rojo oleoso (coloración de grasa), seguido por examinación bajo un microscopio. En los especímenes de tejido del grupo de control, se observó lo siguiente: espesamiento considerable de la túnica interna del vaso, acumulación de una gran cantidad de Ifpido en las porciones de espesamiento de la túnica interna, infiltración de lípidos en numerosas porciones (no únicamente la túnica interna sino la túnica media), y tejidos que incluyen lípidos y células de músculo liso que existen entre las fibras elásticas. En el espécimen de tejido de grupo al cual el péptido de prueba se administró, una pequeña cantidad de acumulación de lípido se observó en la túnica interna. Sin embargo, el tamaño de lípido acumulado y la cantidad fueron pequeñas, y ningún trastorno morfológico de la túnica interna del vaso se observó. Además, el espesor de la túnica interna y la infiltración de lípido en la túnica media estuvieron ausentes. La figura 5 muestra imágenes típicas de los especímenes de tejido. En la figura 5, A (x 16) y B (x 40) representan imágenes de los especímenes de tejido del grupo de control, y C (x 16) y D (x 40) representan imágenes de los especímenes de tejido del grupo prueba. Como es evidente a partir de la descripción anterior, los péptidos de la presente invención inhiben el suceso de los focos de arteriesclerosis en una etapa temprana al evitar la infiltración de lípidos en el vaso, y detener el desarrollo de dichos focos mediante el flujo de lípidos infiltrados del vaso.

EJEMPLO 5 En una manera similar a la descrita en el ejemplo 1 (3), la reactividad de PS509 (sintetizada en el ejemplo 2) con HDL se examinó (como un péptido de prueba, se empleó B-100FL o PS509, y el nivel de colesterol total de la muestra de HDL aplicada fue de 12.7 mg/dl). Cuando se trató HDL con B-100FL, el nivel de colesterol total se redujo alrededor de 72 puntos porcentuales, mientras que cuando HDL se trató con PS509, el nivel de colesterol total se redujo a alrededor del 48 puntos porcentuales.

Aplicabilidad industrial La presente invención provee un péptido que tiene una secuencia de aminoácido novedosa que tiene una capacidad de enlace específico al colesterol de HDL. También, la presente invención provee un péptido que provoca flujo de colesterol desde el tejido periférico. Estos péptidos son útiles como un fármaco para una variedad de enfermedades provocadas por, por ejemplo, arteriesclerosis, errores metabólicos de lípidos, y formación de colesterol en el tejido periférico.

LISTADO DE SECUENCIAS <1)0> Japan Inmuno Research Laboratories Co., <120> Pgptido reactivo a HDL <130> 0P0041 <140> <141> <150> JP P200J -) 44304 <151> 2001-05-15 <160> 5 <170> Palentln Ver. 2.1 <210> 1 <211> 51 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Descripción de la Secuencia Artificial: Péptido designado con base en apoB-100 <400> 1 Leu Leu Asp Gln Leu Gly Thr Thr lie Ser Phe Glu Arg lie Asn Asp 1 5 10 15 Val Leu Glu His Val Lys His Phe Val lie Asn Leu lie Gly Asp Phe 20 25 30 Glu Val Ala Glu Lys lie Asn Ala Phe Arg Ala Lys Val His Glu Leu 35 40 45 lie Glu Arg 50 <210> 2 <211> 30 <212> PRT <2I3> Secuencia Artificial <220> <223> Descripción de la Secuencia Artificial: Péptido designado con base en apoB-100 <400> 2 Leu Leu Asp Gln Leu Gly Thr Thr lie Ser Phe Glu Arg lie Asn Asp 1 5 10 15 Val Leu Glu His Val Lys His Phe Val lie Asn Leu He Gly ?n 25 30 <210> 3 <211> 30 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Descripción de la Secuencia Artificial designado con base en apoB-100 <400> 3 Phe Glu Arg lie Asn Asp Val Leu Glu His Val Lys His Phe Val He 1 5 10 15 Asn Leu lie Gly Asp Phe Glu Val Ala Glu Lys lie Asn Ala 20 25 30 <210> 4 <211> 6 <212> PRT <213> S ecuencía Artificial <220> <(223> Descripci&n de la Secuencia Artificial: Péptido designado con base en apoB-100 <400> 4 Val lie Asn Leu lie Gly 1 5 <210> 5 <211> 20 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Descripción de la Secuencia Artificial: Péptido designado con base en apoB-100 <400> 5 Phe Glu Arg lie Asn Asp Val Leu Glu His Val Lys His Phe Val lie , 5 10 15 Asn Leu lie Gly 20

Claims (10)

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES

1.- Un péptido reactivo a lipoproteína de alta densidad del siguiente (a) o (b); (a) un péptido que tiene una secuencia de aminoácido representada por SEQ ID NO: 1 ; o (b) un péptido que tiene una secuencia de aminoácio representada por (a) con uno o más residuos de aminoácido que han sido modificados a través de la sustitución, supresión, adición o inserción, y que tienen una capacidad de enlace específica a colesterol de lipoproteína de alta densidad.

2.- El péptido reactivo a lipoproteína de alta densidad de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque tiene una secuencia de aminoácido representada por SEQ ID NO: 4.

3.- El péptido reactivo a lipoproteína de alta densidad de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque tiene una secuencia de aminoácido representada por SEQ ID NO: 5.

4. - El péptido reactivo a lipoproteína de alta densidad de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque tiene una secuencia de aminoácido representada por SEQ ID NO: 1 , 2, ó 3.

5. - Un péptido reactivo a celda de espuma del siguiente (a) o (b): (a) un péptido que tiene una secuencia de aminoácido representada por SEQ ID NO: 1 ; o (b) un péptido que tiene una secuencia de aminoácido representada por (a) con uno o más residuos de aminoácido que han sido modificados a través de la sustitución, supresión, adición, o inserción, e inducen un flujo de colesterol desde las celdas de espuma.

6. - El péptido reactivo a la celda de espuma de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado además porque tiene una secuencia de aminoácido representada por SEQ ID NO: 4.

7. - El péptido reactivo a la celda de espuma de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado además porque tiene una secuencia de aminoácido representada por SEQ ID NO: 5.

8.- El péptido reactivo a la celda de espuma de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado además porque tiene una secuencia de aminoácido representada por SEQ ID NO: 1 , 2, ó 3.

9. - El péptido reactivo a la celda de espuma de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado además porque tiene una capacidad de enlace específica al colesterol de lipoproteína de alta densidad.

10. - Un fármaco que contiene, como un ingrediente activo, un péptido reactivo a lipoproteína de alta densidad de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4. 1. - Un fármaco que contiene, como un ingrediente activo, un péptido reactivo a la celda de espuma de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 9. 12. - El fármaco de conformidad con la reivindicación 10 u 1 1 , caracterizado además porque es un remedio para evitar o tratar arteriosclerosis, un remedio para mejorar los errores metabólicos en los Kpidos, o un remedio para provocar el flujo de colesterol desde el tejido periférico. 13. - La composición del fármaco que contiene un péptido reactivo a lipoproteína de alta densidad de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y un portador farmacológicamente aceptable. 14. - La composición del fármaco que contiene un péptido reactivo a la celda de espuma de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 9 y un portador farmacológicamente aceptable. 15.- La composición del fármaco de conformidad con la reivindicación 13 ó 14, caracterizado además porque es un remedio para prevenir o tratar arteriosclerosis, un remedio para mejorar los errores metabólicos en Ifpidos, o un remedio para provocar el flujo de colesterol desde el tejido periférico. 16.- El uso, en la producción de un fármaco, de un péptido reactivo a lipoproteína de alta densidad como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4. 17. - El uso, en la producción de un fármaco, de un péptido reactivo a la celda de espuma como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 5 a 9, y un portador farmacológicamente aceptable. 18. - El uso como se reclama en la reivindicación 16 ó 17, en donde el fármaco es un remedio para evitar o tratar arterieesclerosis, un remedio para mejorar los errores metabólicos en lípidos, o un remedio para provocar el flujo de colesterol desde el tejido periférico.