MXPA03008122A - Composiciones y metodos para el tratamiento y la remision clinica de la psoriasis. - Google Patents

Abstract

Se divulgan polipeptidos que, comprenden secuencias de aminoacidos de antigenos en particulas aislados de varias especies de protozoarios Leishrnania, o variantes inmunogenicas de los mismos, para el tratamiento y la remision clinica de la psoriasis. Se divulgan tambien secuencias de acido nucleico que codifican tales polipeptidos, vectores que incorporan tales secuencias de acido nucleico, metodos para manipular geneticamente celulas huespedes microbianas para producir tales polipeptidos, y tales celulas huespedes microbianas recombinantes. En otra modalidad, se divulgan agentes inmunoterapeuticos que incorporan los polipeptidos de las secuencias de acido nucleico para el tratamiento y la remision clinica de la psoriasis. En otra modalidad, se divulgan metodos para la produccion de los polipeptidos utilizando celulas huespedes microbianas recombinantes. Finalmente, se divulgan metodos para el tratamiento y la remision clinica de la psoriasis, que comprenden la administracion de una composicion farmaceutica que incluye uno o varios de los polipeptidos o una o varias de las secuencias de acido nucleico. Los polipeptidos indujeron una respuesta inmune celular TH1, una reaccion intradermica positiva y una respuesta blastogenica en linfocitos de sangre periferica despues de la remision clinica de las lesiones. Las poblaciones de linfocitos de sangre periferica que son alteradas en pacientes con psoriasis regresaron a los valores normales en pacientes que recibieron los polipeptidos y presentaron una remision clinica de las lesiones despues del tratamiento.

Description

COMPOSICIONES Y MÉTODOS PARA EL TRATAMIENTO Y LA REMISIÓN CLÍNICA DE LA PSORIASIS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere, en términos generales, a agentes inmunoterapéuticos o agentes terapéuticos, a composiciones que comprenden estos agentes, y a métodos de uso de estos agentes y composiciones para el tratamiento y la remisión clínica de la psoriasis. ANTECEDENTES DE LA TÉCNICA La psoriasis es una enfermedad cutánea inflamatoria y escamosa crónica, influenciada genéticamente, con remisiones y recaídas, de etiología desconocida que afecta de 1 a 3 por ciento de la población mundial. Existen varios tipos de psoriasis, incluyendo variantes de placas, pústulas, gutata y artríticas. Actualmente no hay ninguna cura para la psoriasis, sino solamente una terapia supresiva (Greaves y Weinstein, 1995, Drug Therapy, 332: 581-588) . Indicaciones para el tratamiento pueden surgir de síntomas locales, por ejemplo, dolor, comezón, reducción de la destreza manual, problemas severos al caminar, y problemas cosméticos como por ejemplo lesiones prominentes en las manos, piernas o en la cara. Debido a la toxicidad de las terapias disponibles, pacientes con una enfermedad limitada deciden frecuentemente de no someterse a tratamiento más allá de evitar los factores que desencadenan los síntomas.

El objeto de los tratamientos actuales ha sido disminuir la severidad y la magnitud de la psoriasis hasta el punto en el cual ya no interfiere sustancialmente con las ocupaciones, el bienestar o la vida personal o social del paciente. El tratamiento inicial para la psoriasis en placas estable de cualquier severidad, es el tratamiento tópico. En pacientes con más del 20 por ciento de la piel afectada, sin embargo, el tratamiento tópico solo puede ser impráctico y una terapia sistemica puede ser también indicada desde el principio. El tratamiento tópico de la psoriasis en placas incorpora el uso de emolientes, agentes queratolíticos, alquitrán de carbón, antralina, corticosteroides de potencia media a fuerte, y calpotrieno. Todos estos tratamientos tienen una eficacia variable, no evitan recaídas frecuentes de la enfermedad, presentan efectos colaterales, y plantean problemas cosméticos per se. El tratamiento sistémico ha sido utilizado en pacientes con psoriasis física, social o económicamente incapacitante que no ha respondido al tratamiento tópico. Las elecciones hasta la fecha han sido la fototerapia o terapia farmacológica sistémica. En general, el tratamiento sistémico ha empleado la fototerapia con irradiación Ultravioleta B, fotoquimioterapia que combina el fármaco fotosensibilizador metoxalen con fototerapia Ultravioleta A (PUVA) , metotrexato, etretinato, corticosteroides sistémicos, y ciclosporina. Cada uno de estos tratamientos sistémicos tiene una eficacia variable y efectos colaterales indeseados y algunos de ellos son muy tóxicos y presentan recaídas frecuentes de la enfermedad. Por consiguiente, actualmente existe la necesidad de un tratamiento efectivo de la psoriasis que evita las desventajas asociadas con los tratamientos tópicos sistémicos actualmente disponibles. COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La presente invención ofrece composiciones y métodos para el tratamiento y la remisión clínica de la psoriasis. En un aspecto, se proporcionan polipeptidos derivados de antígenos en partículas de protozoarios del género de eishmania que pueden generar una respuesta inmune en un individuo que resulta en el abatimiento de los síntomas clínicos de la psoriasis. En una modalidad de este aspecto, los polipéptidos comprenden por lo menos una de las secuencias de aminoácidos mencionadas en SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: .2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, y SEQ ID NO: 14, o variantes inmunogénicas de los mismos. Una variante inmunogénica de una secuencia de aminoácidos puede ser ya sea una versión truncada de la secuencia que conserva una cantidad sustancial de la actividad de la secuencia original, o bien una versión alterada de la secuencia que conserva dicha actividad y que tiene sustituciones y/o modificaciones conservadoras de aminoácidos . En otra modalidad de este aspecto, los polipéptidos comprenden por lo menos una porción inmunogénica de una secuencia de aminoácidos de una proteína, o una variante inmunogénica de la misma, la proteína es aislada de protozoarios del género Leishmania y tiene un peso molecular aparente de 21, 33, 44, 50, 55, 58, 65, o 77 kDa de conformidad con lo determinado por electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio (SDS-PAGE) . En otra modalidad de este aspecto, los polipéptidos comprenden por lo menos una porción inmunogénica de una secuencia de aminoácidos de una proteína, o una variante inmunogénica de la misma, la proteína es aislada de protozoarios del género de Leishmania y tiene un peso molecular promedio después de reducción total y alquilación de 73, 80, ú 82 kDa de conformidad con lo determinado por SDS-PAGE . En aspectos relacionados, la presente invención ofrece secuencias de ácido nucleico que codifican tales polipéptidos, vectores que incorporan tales secuencias de ácido nucleico, métodos para la producción de tales polipéptidos por transformación, transacción o transducción de células huéspedes microbianas, y células huéspedes microbianas transformadas por tales vectores transfectadas por tales secuencias de ácido nucleico o transducidas con tales secuencias de ácido nucleico. En otro aspecto de la presente invención, agentes inmunoterapéuticos que incorporan uno o varios polipéptidos de la presente invención se proporcionan. Estos agentes inmunoterapéuticos pueden ser polivalentes o monovalentes y pueden incorporar un adyuvante como por ejemplo alúmina para incrementar la respuesta inmune obtenida a partir de un sujeto inoculado. En una modalidad preferida, el agente inmunoterapéutico polivalente contiene aislados de polipéptidos de una mezcla de cuatro especies de Leishmania, específicamente, L. (L) amazonensisr L. (L) venezuelensisr L. (V)brasiliensisr y L. (L) chagasi. Asimismo, en una modalidad preferida, el agente inmunoterapéutico monovalente contiene un aislado de polipéptido de una de estas cuatro especies.

En otro aspecto de la invención, métodos para el tratamiento y la remisión clínica de psoriasis se proporcionan. En una modalidad, dicho método incluye la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición farmacéutica que comprende uno o varios polipéptidos de la presente invención a un sujeto con el objeto de inducir una respuesta inmune que resulte en un abatimiento de los síntomas clínicos de la psoriasis. En una modalidad relacionada, el método incluye la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición farmacéutica que comprende una o varias secuencias de ácido nucleico de la presente invención a un sujeto. El término "terapéuticamente efectiva" como se emplea aquí significa una reducción de aproximadamente 70-100% del Indice de Severidad y Área de Psoriasis como lo entienden las personas con conocimientos en la materia. Otros aspectos de la invención incluyen el uso de las secuencias de ácido nucleico de la presente invención como sondas para el análisis genético y como marcadores de pesos moleculares de ácido nucleico, y el uso de los polipéptidos de la presente invención como marcadores de pesos moleculares . DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a composiciones y métodos novedosos para el tratamiento y remisión clínica de la psoriasis. Las composiciones comprenden polipéptidos inmunogénicos o los ácidos nucleicos que los codifican. Los polipéptidos de la presente invención pueden provocar una respuesta inmune en un animal de sangre caliente, induciendo por consiguiente la remisión clínica de la psoriasis. Como se emplea aquí, el término "animal de sangre caliente" incluye seres humanos. En una modalidad de la invención, los polipéptidos de la presente invención pueden ser aislados de protozoarios del género Leishmania, y de preferencia de protozoarios de genero Leishmania en etapa de amastigoto. Los polipéptidos de la presente invención pueden ser obtenidos a partir de protozoarios del género Leishmania empleando procedimientos estándares de aislamiento de proteínas conocidos en la técnica. Se contempla también a través de la presente invención agentes inmunoterapéuticos y composiciones farmacéuticas que incorporan los polipéptidos inmunogénieos de la presente invención. En una modalidad, se proporciona un agente inmunoterapéutico polivalente de primera generación que comprende un aislado de polipéptido de una mezcla de varias especies de Leishmania, como por ejemplo L. (L) amazonensis, L. (L)venezuelensisr L. (V)brasiliensis, L. (L) chagasi , L. (L) donovanir L. (L)infantum, L- (L)major, L. (L)panamensisr L. (L) trópica y L. (L) guyanensís. De preferencia, la mezcla comprende L. (L) amazonensisf L. (L) venezuelensis, L. (V)brasiliensisr y L. (L) chagasi. Con mayor preferencia, la mezcla consiste de estas cuatro especies. Los organismos son cultivados de preferencia en la etapa de amastigoto en el medio de cultivo sintético específico en la Tabla 1, complementado con 5% de suero fetal bovino, típicamente a una temperatura de aproximadamente 30-3 °C. Subsecuentemente, y durante la fase estacionaria de crecimiento, los amastigotos son sometidos a un medio que contiene una cantidad de N"-p-tosil-L-Lisina clorometilo cetona (TLCK) o una sal farmacológicamente aceptable de la misma efectiva para matar las células. Las células muertas son después aisladas y tratadas con el detergente no iónico Nonidet p-40 (NP40) para solubilizar los antigenos de superficie, que son desechados. Los antigenos en partículas que comprenden los polipéptidos inmunogénicos de la presente invención pueden ser recogidos por centrifugación después de perturbación de las células. Estos polipéptidos son lavados con una solución salina amortiguada con fosfato (PBS) y subsecuentemente resuspendidas por sonicación durante 5 minutos a una temperatura de 4°C en PBS que contiene alúmina. En otra modalidad, se describe un agente inmunoterapéutico monovalente de primera generación que comprende un aislado de polipéptido de una sola especie de Leishmania seleccionada dentro del grupo que consiste de L. (L) amazonensisr L. (L) venezuelensisr L. (V)brasiliensisr L. (L)chagasi, L. (L) donovanir L. (L) infantina, L-(L)major, L- (L)panamensisr L. (L) trópica y L. ( ) guyanensis. De preferencia, la especie individual de Leishmania se selecciona dentro del grupo que consiste de L. (L) amazonensis, L. (L) venezuelensis, L. (V)brasiliensisr y L. (L)chagasi. Procedimientos para la preparación del agente inmunoterapéutico son idénticos por otra parte a los procedimientos divulgados arriba para el agente inmunoterapéutico polivalente de primera generación. En otra modalidad, un agente inmunoterapéutico polivalente de segunda generación es descrito, dicho agente comprende un aislado de polipéptido de una mezcla de varias especies de Leishmania, incluyendo L. (L) amazonensis, L. (L) venezuelensis, L. (V)brasiliensiSr . (L) chagasi, . (L) donovani, L. (L) infantum, L-(L)major, L- (L)panamensis, L.(L) trópica y L. (L) guyanensis. De preferencia, la mezcla comprende: L. (L) amazonensisr L. (L) venezuelensis, L. (V)brasiliensis, y L. (L) chagasi . Con mayor preferencia, la mezcla consiste de estas cuatro especies . Los organismos son cultivados de preferencia en la etapa de amastxgoto en el medio de cultivo sintético especificado en la Tabla 1, complementado con 5% de suero fetal bovino, típicamente a una temperatura de aproximadamente 30-34°C. Subsecuentemente, y durante la fase estacionaria de crecimiento, los amastigotos son sometidos a un medio que contiene una cantidad de N-p-tosil-L-Lisina clorometilo cetona (TLCK) o una sal farmacológicamente aceptable de la misma efectiva para matar las células. Las células muertas son después aisladas y tratadas con el detergente no iónico Nonidet p-40 (NP40) para solubilizar los antígenos superficiales, que son desechados. Los antigenos en partículas que comprenden los polipéptidos inmunogénieos de la presente invención pueden ser recogidos por centrifugación siguiendo la perturbación de las células. Estos polipéptidos son lavados con una solución salina amortiguada con fosfato (PBS) y subsecuentemente resuspendidas por sonicación durante 5 minutos a una temperatura de 4°C en Urea 8 M, Tris (Tris-hidroxi-metil-amino-metano) 0.025 M. Los polipéptidos son después sometidos a cromatografía en una columna DEAE-Sephadex con elusión paso a paso de NaCl 0.05-0.3 M en una solución que contiene Urea 8 M, Tris .025 M, pH 8.3. Se recogen siete fracciones de proteína y un inoculo que comprende cada fracción de proteína es elaborado mediante la resuspensión de los polipéptidos de cada fracción en PBS que contiene alúmina. En otra modalidad, se describe un agente inmunoterapéutico monovalente de segunda generación que comprende un aislado de polipéptido de una especie individual de eishmania seleccionada dentro del grupo que consiste de L. (L) amazonensis, L. (L) venezuelensis, L. (V) brasiliensis, L. (L) chagasi r L. (L) donovani, L. (L)infantum, L- (L)majorr L- (L)panamensis, L.(L)tropica y L. (L) guyanensis. De preferencia, la especie individual de Leish ania se selecciona dentro del grupo que consiste: L. (L) amazonensis, L. (L) venezuelensis, L. (V)brasiliensisr y L. ( ) chagasi . Procedimientos para la preparación del agente inmunoterapéutico son por otra parte idénticos a los procedimientos divulgados arriba para el agente inmunoterapéutico polivalente de segunda generación. Alternativamente, los polipéptidos de la presente invención pueden ser sintetizados de conformidad con procedimientos y técnicas conocidas, o bien producidas recombinantemente por transformación de una célula huésped con una o varias de las secuencias de nucleótidos que codifican los polipéptidos deseados. Los polipéptidos pueden ser expresados en una célula huésped de tal manera que puedan ser aislados y purificados hasta un grado deseado de purificación. Los polipéptidos de la presente invención pueden ser utilizados de conformidad con la invención como agente inmunoterapéutico de tercera generación para tratar la psoriasis. La presente invención se refiere además a secuencias de ácido nucleico que pueden ser útiles en la transformación de células huéspedes apropiadas para provocar la producción de los péptidos de la invención; en administración a un animal de sangre caliente, ya sea directamente o bien como parte de una composición farmacéuticamente aceptable, para generar una respuesta inmune y por consiguiente inducir una remisión clínica de la psoriasis en el animal; como sondas marcadas para análisis genético; o bien como marcadores de pesos moleculares de ácido nucleico. Una persona con conocimientos ordinarios en la materia de la biología molecular puede obtener ácidos nucleicos que codifican los polipéptidos de la presente invención tomando en cuenta las enseñanzas proporcionada aquí. Por ejemplo, los polipéptidos del agente inmunoterapéutico de primera generación de la presente invención han sido aislados y purificados a partir protozoarios del genero de Leishmania y comprenden ocho bandas, identificadas por SDS-PAGE, que representan ocho polipéptidos distintos que tienen pesos moleculares aparentes de 21, 33, 44, 50, 55, 58, 65 y 77 kDa, respectivamente. Cada una de estas bandas representa un polipéptido separado que puede ser aislado y secuenciado de conformidad con procedimientos estándares de secuenciamiento de aminoácidos. Los polipéptidos de cada agente inmunoterapéutico de segunda generación fueron purificados mediante el hecho de someter el agente inmunoterapéutico de primera generación que contiene la mezcla de ocho polipéptidos a cromatografía en dietilaminoetilo (DEAE)-Sephadex. Dos fracciones que tienen la actividad para curar psoriasis fueron aisladas y totalmente reducidas y alquiladas por procedimientos estándares. Estas fracciones fueron sometidas a electroforesis en geles de acrilamida para separar los polipéptidos constituyentes, y la secuencia de aminoácidos de cada polipéptido fue obtenida por procedimientos estándares de secuenci miento de proteina. Las secuencias de nucleótidos que codifican cada uno de estos polipéptidos pueden ser derivadas de estas secuencias de aminoácidos por aplicación del código genético. Además, la presente invención contempla la producción de grandes cantidades de los polipéptidos inmunogénieos de la presente invención a través de la introducción de los ácidos nucleicos que los codifican a células huéspedes microbianas . Los ácidos nucleicos pueden ser introducidos directamente en el genoma de la célula huésped o bien pueden ser incorporados en un vector el cual es después introducido en el huésped. Métodos ejemplares de incorporación directa incluyen la transducción por fago recombinante o cósmidos, la transfección cuando las células bacterianas huéspedes tratadas especialmente pueden absorber cromosomas de fagos desnudos, y transformación por precipitación de calcio. Estos métodos son bien conocidos en la técnica. Vectores ejemplares incluyen plásmidos, cósmido y fagos. Una biblioteca genómica para una especie de Leíshmania puede ser creada por medios rutinarios, y el ADN de interés puede ser aislado de ahí. Por ejemplo, el ADN de protozoarios de género de Leishmania puede ser aislado y restringido con enzimas de restricción conocidas. Los fragmentos de ADN resultantes pueden ser insertados entonces en vectores de clonación adecuados para introducción a un huésped compatible. Según el huésped contemplado, el vector puede incluir varias regiones regulatorias y otras regiones, incluyendo habitualmente un origen de replicación, una o varias regiones de promotor y marcadores para la selección de transformantes. En general, los vectores proporcionarán señales de regulación para la expresión y amplificación del ADN de interés . Varios marcadores pueden ser empleados para la selección de transformantes, incluyendo resistencia a los biocida, especialmente a los antibióticos como por ejemplo ampicilina, tetraciclina, trimetoprim, cloranfenicol, y penicilina; toxinas como por ejemplo colicina; y metales pesados, como por ejemplo sales de mercurio. Alternativamente, se puede emplear una complementación que proporciona un nutriente esencial a un huésped auxotrófxco. Huéspedes que pueden ser empleados de conformidad con técnicas bien conocidas para la producción de los polipéptidos de la presente invención incluyen microorganismos unicelulares, como por ejemplo procariotas, es decir, bacterias; y eucariotas, como por ejemplo hongos, incluyendo levaduras, algas, protozoarios, mohos y similares, asi como células vegetales, tanto en cultivo como in planta. Bacterias especificas que son susceptibles para transformación incluyen miembros de la familia de los Enterobacteriaceae, como por ejemplo cepas de Escherichia coli; Salmonella; Bacillaceae, como por ejemplo, Bacillus subtilis; Pneumonococos; Estreptococos; Haemophilus influenzae, y levaduras como por ejemplo Saccharomyces, entre otras. Como se emplea aqui, el término célula huésped microbiana abarca todos estos organismos procarióticos y eucarióticos, incluyendo células vegetales, tanto en cultivo como in planta. Sondas universales pueden ser obtenidas las cuales se hibridan con ciertos de los fragmentos de una biblioteca de ADN, permitiendo la identificación y selección de los genes de interés, es decir, las secuencias de nucleótidos que codifican los polipéptidos descritos como parte de la presente invención. El aislamiento de estos genes puede ser efectuado empleando técnicas bien conocidas en la biología molecular. Los genes aislados pueden ser insertados en vectores apropiados para su uso en la transformación de células huéspedes microbianos. Además, estos genes pueden ser sometidos a procedimientos estándares de secuenciamiento de ácido nucleico con el objeto de proporcionar una información específica sobre la secuencia de nucleótidos de los genes que codifican los polipéptidos de la presente invención. Se sabe en la técnica que cuando se sintetiza un gen para expresión mejorada en la célula huésped, es deseable diseñar el gen de tal manera que su frecuencia de uso de codón se acerque a la frecuencia de uso de codón preferido de la célula huésped. Para propósitos de la presente invención, la expresión "frecuencia de uso de codón preferido" se refiere a la preferencia mostrada por una célula huésped específica en el uso de codones de nucleótidos para especificar un aminoácido dado. Para determinar la frecuencia de uso de un codón particular en un gen, el número de ocurrencias de este codón en el gen se divide entre el número de total de ocurrencias en todos los codones que especifican el mismo aminoácido en el gen. De manera similar, la frecuencia de uso de codón preferido mostrada por una célula huésped puede calcularse promediando la frecuencia de uso de codón preferido en un gran número de genes expresados por la célula huésped. Es preferible que este análisis se limite a genes que son altamente expresados por la célula huésped. Asi, en una modalidad de la presente invención, bacterias, plantas y otras células pueden ser manipuladas genéticamente, por ejemplo, transformadas con genes de protozoarios de Leishmania spp, para lograr los niveles deseados de expresión de los polipéptidos o proteínas de la presente invención. Para mostrar genes que tienen la expresión incrementada, la secuencia de ADM del gen puede ser modificada de tal manera que comprenda codones preferidos por genes altamente expresados para lograr un contenido A+T en la composición de base de nucleótidos que es sustancialmente lo que se encuentra en la célula huésped transformada. Es también preferible formar una secuencia de iniciación óptima para dicha célula huésped, y eliminar secuencias que provocan la desestabilización, poliadenilación inapropiada, degradación y terminación de ARN y evitar secuencias que constituyen sitios de empalme de ARN y pasadores de estructura secundaria. Por ejemplo, en genes sintéticos, los codones utilizados para especificar un aminoácido dado pueden ser seleccionados con relación a la frecuencia de distribución del uso de codón empleado en genes altamente expresados en la célula huésped para especificar este aminoácido. Como lo observarán las personas con experiencia en la materia, la frecuencia de distribución de uso de codón utilizado en el gen sintético es un factor determinante del nivel de expresión. El ensamble de los genes de esta invención puede efectuarse utilizando tecnología estándar conocida en la técnica. Un gen estructural diseñado para incrementar la expresión en una célula huésped no puede ser ensamblado enzimáticamente dentro de un vector de ADN a partir de segmentos de dúplex de oligonucleótidos químicamente sintetizados. El gen puede ser introducido entonces en la célula huésped y expresado a través de medios conocidos en la técnica. De preferencia, la proteína producida al expresarse el gen sintético es funcionalmente equivalente a una proteína nativa. De conformidad con la presente invención, la expresión "f ncionalmente equivalente" se refiere a la identidad o casi identidad de función. Un producto de gen sintético que tiene por lo menos una propiedad que se relaciona a su actividad o función que es similar o idéntico a una proteína natural se considera funcionalmente equivalente a la misma. Se sabe también en la técnica que las secuencias de nucleótidos de la presente invención pueden ser truncadas de tal manera que ciertos de los fragmentos resultantes de la secuencia de longitud total original pueden conservar las características deseadas de la secuencia de longitud completa. Una amplia gama de enzimas de restricción son bien conocidas por parte de las personas con conocimientos en la materia y como adecuadas para generar fragmentos a partir de moléculas de ácido nucleico más grandes. Por ejemplo, se sabe que Bal31 exonucleasa puede ser utilizada conveniente para la digestión limitada controlada por tiempo del ADN. Véase, por ejemplo, Maniatis y colaboradores (1982) Molecular Cloning: ? Laboratory Manual [Clonación Molecular: Un Manual de Laboratorio] , Cold Spring Harbor Laboratory, Nueva York, páginas 135-139. Véase también Wei y colaboradores (1983) J. Biol. Chem. 258:13006-13512. Así, la Bal31 exonucleasa (conocida comúnmente como procedimientos de "borrar una base") que permite la remoción de nucleótidos de cualquier extremo o de ambos extremos de ácidos nucleicos sujetos, la generación subsecuente de un amplio aspecto de fragmentos, muchos de los cuales codifican productos que son funcionalmente equivalentes a las secuencias de polipéptidos naturales de la presente invención. Procedimientos de marcado son también conocidos, y las personas con conocimientos ordinarios en la materia pueden tamizar en forma rutinaria los fragmentos marcados para determinar sus características de hibridación con el objeto de determinar su utilidad como sondas. Por ejemplo, es rutinario marcar ácidos nucleicos para su uso como sondas específicas y selectivas en procedimientos de identificación genética o diagnóstico. Una persona con conocimientos ordinarios en la materia reconocerá que variaciones y fragmentos de estas secuencias, que se hibridan especifica y selectivamente con el MM de Leishmania spp, podrían también funcionar como sonda. Esto está dentro de la capacidad de personas con conocimientos ordinarios en la materia y no requiere de experimentos exagerados para determinar si un segmento de los ácidos nucleicos sujetos es un fragmento o variante que se híbrida específica y selectivamente de conformidad con la presente invención. Por consiguiente, fragmentos y variantes de estos ácidos nucleicos pueden ser útiles como sondas para identificar, diagnosticar o distinguir especies de Leishmania. Se reconocerá también que los polinucleótidos o péptidos de la presente invención pueden ser útiles como marcadores de pesos moleculares en determinaciones o ensayos respectivos para determinar pesos moleculares de ácido nucleico o aminoácidos . Con el objeto de obtener un agente inmunoterapéutico de primera generación según la presente invención, organismos de los genes de Leishmania pueden ser cultivados en medio de cultivo sintético que comprende los ingredientes listados ene la Tabla 1. En una modalidad preferida, el medio de cultivo es complementado con 5% de suero fetal bovino. El cultivo de los protozoarios de conformidad con la presente invención se efectúa típicamente a una temperatura dentro de un rango de 30-34°C. En una modalidad particularmente preferida, el cultivo de los protozoarios se lleva a cabo en la etapa de amastigoto de su ciclo de vida. Tabla 1: Medio de cultivo de Leishmanía Ingrediente mg/lt Metionina 140 Triptófano 50 Ácido cx-Amino Adipico 3 Asparagina 165 Cistina 47 Histidina 6 Ácido Aspártico 120 Alaniña 512 Prolina 248 Lisina 337 Taurina 6 Isoleucina 191 Ornitina 3 Tirosina 210 ß-alanina 80 Fosfoserina 23 Ácido cx-amino Butírico 8 Leucina 440 Arginina 413 Serina 220 Hidroxilisina 12 Glutamina 164 Ácido Glutámico 420 Cisteina 0.5 Fosfoetanolamina 25 Treonina 200 Glicina 235 Fenilalanina 240 Valina 266 Ácido d-Pantoténico 1 Ácido Ascórbico 0.05 Ácido p-Áminobe zoico 0.05 Ergocalciferol (D2) 0.1 L-carnitina 0.05 Cloruro DL-metionina-S-metilsulfonio (U) 0.05 Ácido 2-Desoxiadenilico (d-AMP) 3.0 Ácido 5'-Timidilico (TMP) 3.0 2 r -Desoxicitidina-5-ionofosf to (d-CMP) 3.0 Carnosina 25 Citrullina 50 Sarcosina 57 CaCl2 265 Fe(N03)9H20 0.72 C1 400 MgS04 7 ¾0 200 NaCl 5,850 NaHC03 2,000 NaH2P04H20 140 Tricina 900 Hemina 1 HEPES 2,000 Glucosa 1,000 D-ribosa 10 2-Desoxi-ribosa 10 Colecalciferol (D3) 0.1 Biotina 1 Piridoxamina 0.05 Piridoxal 1 Cianocobalamina (Bi2) 0.01 Colina 1 Tiamina (??) 1 Inositol 2 cx-Tocoferol 0.01 3-fitilmenadiona(Ki) 0.01 Menadiona (K3) 0.01 Retinol (A) 0.14 Riboflavina (B2) 0.1 Ácido 6,8-Tiótico 0.01 Piridoxina (B6) 0.025 Ácido Fólico 1 Niacinamida 1 Ácido tetrahidrofólico 0.5 Adenosin-5-Trifosfato (ATP) 5.5 2 f -Desoxiuridin-5-monofosfato (d-OMP) 3.0 Ácido 5' -Desoxiguanilico (d-GMP) 3.0 Hidroxiprolina 262.5 El medio de cultivo comprende las células de protozoario puede ser tratado entonces con el objeto de desactivar y de preferencia marcar las células. Al efectuarse el aislamiento de estas células, las proteínas antigénicas pueden ser purificadas e incluidas en un vehículo farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, solución amortiguadora, para crear un agente inmunoterapéutico de segunda generación. De preferencia, las células son desactivadas o marcadas con un agente que no provoca lisis, por ejemplo, TLCK. Las proteínas antigénicas de la presente invención son proteínas en partículas que pueden ser aisladas de las células utilizando métodos aceptados. En una modalidad más específica, el método para crear el agente inmunoterapéutico de segunda generación de la presente invención comprende los pasos de (1) cultivar protozoarios, de preferencia en la etapa de amastigoto, en un medio de cultivo apropiado; (2) tratar dichas células de protozoarios para desactivar o matar las células; (3) aislar las células tratadas; (4) extraer las proteínas antigénicas de las células aisladas; (5) formular la composición de agente inmunoterapéutico de segunda generación mediante la combinación de una o varias proteínas antigénicas aisladas con un vehículo farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, solución salina amortiguada con fosfato (PBS) . Un vehículo farmacéuticamente aceptable preferido es una solución PBS que tiene alúmina presente en la solución. Para curar la psoriasis en pacientes con diagnóstico clínico e histopatológico de la enfermedad, el agente inmunoterapéutico polivalente de primera generación fue administrado de manera intramuscular, en la región deltoide, una vez al mes, una vez cada 15 días o una vez por semana según la severidad de la enfermedad, durante 7.6 + 6.0 meses en promedio, a razón de 500 ug/dosis. Además, para curar la psoriasis, un agente inmunoterapéutico monovalente con cada uno de las Leishmania spp. presentes en el agente inmunoterapéutico polivalente de primera generación fue utilizado como composición sujeta con resultados similares al agente inmunoterapéutico polivalente. Además, para curar la psoriasis, un agente inmunoterapéutico de segunda generación que contiene las fracciones de proteína aisladas por medios cromatográficos del agente inmunoterapéutico de primera generación crudo 0.1 mi de alúmina/mg de proteína fue administrado de manera ¦ intramuscular en la región deltoide una vez cada 15 días durante 3-4 dosis a 200 g/dosis en 0.5 mi. A continuación presentan ejemplos que ilustran los procedimientos para practicar la presente invención. Estos ejemplos no deben considerarse como limitativos. Todos los porcentajes son en peso y todas las proporciones de mezcla de solvente son en volumen a menos que se indique lo contrario. EJEMPLO 1 Preparación del Inmunogeno Organismos del género de Leishmania son cultivados en la etapa de amastigoto en medio de cultivo sintético especificado en la Tabla 1, complementado con 5% de suero fetal bovino típicamente a una temperatura de aproximadamente 30-34°C (O'Daly y colaboradores, 1988, Acta Trópica (Basel) , Volumen 45, páginas 109-126) . Para el agente inmunoterapéutico de segunda generación, amastigotos en la fase de crecimiento fueron recogidos por centrifugación (800 xg durante 20 minutos a 4°C), lavados en solución Salina Amortiguada con Fosfato (PBS) , e incubados durante 3 días a una temperatura de 30-34°C en MEM de Eagle (Gibco) que contenía 150 g de TLC para desactivar los parásitos de conformidad con lo descrito (O'Daly y colaboradores, 1988, Acta Trópica (Basel) , Volumen 43, páginas 225-236) . Después de dos lavadas con PBS (12.100 xg durante 10 minutos a 4°C) se incubaron 1 x 108 parásitos/ml en MEM que contenía 0.12% de Nonidet-P-40 (NP40, Sigma) durante 30 minutos a una temperatura de 4°C para solubilizar los antígenos de superficie que fueron desechados (O'Daly y colaboradores, 1990 ?? J. Trop. Med. Hyg., Volumen 43, páginas 44-51). Antigenos en partículas fueron recogidos por centrifugación (12.100 xg durante 10 minutos a 4°C) , lavados dos veces con PBS y sonicados durante 5 minutos a una temperatura de 4°C en un Sonifier Cell Disrupter (Modelo WI 85, Health-Systems-Ultrasonic, Inc., Plainview, Nueva York) en el límite de micropunta del control de salida a 50W. El contenido de proteína fue determinado por el método de Lowry (Lowry 0. y colaboradores, 1951, J. Bíol. Chem. Vol. 193, páginas 265-275) . La preparación de inmunógeno de primera generación monovalente final contenía 1 mg/ml de cada antígenos de Leishmania spp. en PBS que contenía alúmina (Gel de baja viscosidad de idróxido de aluminio REHYDRAGEL, Reheis Inc., Nueva Jersey) a una concentración de 0.1 ml/mg (volumen/peso) de proteína de parásito. Cada paso en la preparación del inmunógeno fue revisado para determinar la esterilidad. En otra modalidad de la presente invención, antígenos en partículas fueron recogidas por centrifugación (12.100 xg durante 10 minutos a 4°C) , lavadas dos veces con PBS, disueltos en una solución que contenía Urea 8 Molar, 0.025 Tris (Tris-hidroxi-metil-amino-metano) y sonicados durante 5 minutos a 4°C en un Sonifier Cell Disrupter (Modelo WI 85, Health-Systems-Ultrasonic, Inc., Plainview, Nueva York) en el límite de dicha punta del control de salida a 50W. Fracciones de proteína fueron separadas por DEAE-cromatografía.

El agente inmunoterapéutico de segunda generación fue preparado con cada una de las siete fracciones de proteina aisladas después de DEAE-cromatografía de la composición que contiene solamente una especie de Leishmania como por ejemplo JO. (V)brasiliensís o cualquier otra especie de Leishmania presente en el agente inmunoterapéutico de primera generación crudo . El contenido de proteina fue determinado por el método de Lowry (Lowry 0. y colaboradores, 1951, J. Biol. Chem. Vol. 193, páginas 265-275) . Cada fracción de proteina fue disuelta en PBS y sonicada durante 5 minutos a 4°C en un Sonifier Cell Disrupter (Modelo WI 85, Health-Systems-Ultrasonic, Inc., Plainview, Nueva York) en el limite de micropunta del control de salida a 50W. Subsecuentemente, cada fracción fue filtrada y esterilizada a través de filtros Millipore® de 0.20 um. La preparación de inmunógeno final contenia 400 µg/ml de cada una de las fracciones antigénicas en PBS que contenia alúmina (Gel de baja viscosidad de hidróxido de aluminio REHYDRAGEL, Reheis, Inc., Nueva Jersey) a una concentración de 0.1 ml/mg (volumen/peso) de la fracción de proteina. Cada paso en la preparación del inmunógeno de segunda preparación fue también revisado para esterilidad. Alícuotas fueron incubadas en ESM que contenía 5% de Suero Fetal Bovino (FBS, Gibco) y en placas de agar que contenía 12.5% (peso/volumen) Bacto-Peptone (Difco) , 12.5% (peso/volumen) de extracto de levadura (Becton Dickinson) , 3.75% (peso/volumen) de glucosa y 3.75% (peso/volumen) de BBL agar (Becton Dickinson) . Las muestras fueron incubadas durante 72 horas a uña temperatura de 37°C para determinar las bacterias de crecimiento rápido y durante 3 semanas a una temperatura de 26°C para determinar las bacterias de crecimiento lento y los hongos. Cada lote del inmunógeno fue controlado por electroforesis en gel de poliacrilamida-SDS para cerciorarse de la consistencia en cuanto al patrón de bandas de proteina de Leishmania. Cada lote del agente inmunoterapéutico de primera generación y agente inmunoterapéutico de segunda generación fue también probado con E-TOXATE (Sigma) determinar la presencia de pirógenos. El inmunógeno de primera generación presentó estabilidad a 4°C durante por lo menos 4 semanas . EJEMPLO 2 Componentes de Proteina del Inmunógeno A partir de las preparaciones de inmunógeno obtenidas a partir de los procedimientos descritos en el Ejemplo 1 arriba, se identificaron ocho bandas de proteina a través de electroforesis en gel de poliacrilamida-SDS de los amastigotos extraídos con NP-40 tratados con TLC de Leishmania (L) amazonensis, Leishmania (L) venezuelensis, Leishmania (V)brasiliensisr y Leishmania (L) chagasí, con pesos moleculares aparentes de 21, 33, 44, 50, 55, 58, 65 y 77 kDa. En extractos de amastigotos enteros no tratados entre 28 y 30 bandas con pesos moleculares dentro de un rango de 29 a 96 kDa fueron observadas en cada especie de Leishmania, y bandas mayores de 29, 34, 43, 58 y 65 kDa fueron observadas. Las preparaciones de inmunógeno del agente inmunoterapéutico de segunda generación, que contienen fracciones de proteina 3 y 4 obtenidas después de DEAE-cromatografia y reducción total y alquilación, presentaron tres bandas con pesos moleculares de 73, 80 y 82 kDa. EJEMPLO 3 Seguridad e Inmunogenicidad La composición inmunogénica que comprende las proteínas del agente inmunoterapéutico de segunda generación, descrita en los Ejemplos 1 y 2, arriba, fue inyectada en un voluntario humano a intervalos mensuales, empezando con 50 g e incrementando la dosis por^50 iq cada mes, con el objeto de determinar la dosis que puede inducir una IDR mayor que 5 mm. Esta dosis fue de 200 g. Tanto un mes como seis meses después de la última dosis de agente inmunoterapéutico, se efectuaron las siguientes pruebas sanguíneas en este voluntario: conteo completo de sangre; conteo diferencial de leucocitos; urea; creatinina; fosfatasa alcalina de azúcar; bilirrubina; transaminasas; colesterol; triglicéridos; proteína reactiva C; pruebas serológicas como por ejemplo VDRL, VIH, anticuerpos antinucleares, células LE; y análisis de orina y de heces. Todos los valores se encontraron dentro de los límites normales, y no se observaron efectos colaterales . EJEMPLO 4 Preparación de Composiciones de Agente Inmunoterapéutico Para agente inmunoterapéutico monovalente de primera generación, amastigotos cultivados de cada especie de Leishmania fueron por centrifugación (800 xg durante 20 minutos a una temperatura de 4°C), lavados en solución salina Amortiguada con Fosfato (PBS) e incubados durante 3 días a 30-34°C en MEM de Eagle (Gibco) que contenía 150 µg de TLC para desactivar los parásitos de conformidad con lo descrito, a 1 x 10ff parásitos/ml . Este paso se efectuó de preferencia cuando los amastigotos están en la fase de crecimiento estacionario, después de dos lavadas con PBS (12.100 x g durante 10 minutos a 4°C) . En una modalidad particularmente preferida, la preparación de una composición inmunogénica de primera generación monovalente protectora de conformidad con la presente invención comprende las etapas siguientes: A) . cultivo de organismos del genero Leishmania en etapa de amastigoto en un medio de cultivo sintético que contiene los ingredientes listados en la Tabla 1 suplementados con suero fetal bovino al 5% típicamente a una temperatura de aproximadamente 30-34 °C; B) . someter los organismos del genero Leishmania en la etapa de amastigoto, y en la fase de crecimiento estacionario, a un medio que contiene una cantidad de N-p-tosil-L-Lisina clorometil cetona o una sal farmacológicamente aceptable del mismo efectiva para matar dichas células; C) . aislar dichas células matadas; D) . extraer las proteínas de superficie con el detergente no iónico Nonidet p-40; E) . centrifugar la preparación para aislar antígenos en partículas; F) . lavar dos veces con PBS; y G) . formar un inoculo inmunizante que comprende dichos antígenos en partículas a partir de dichas células matadas por resuspensión en solución salina amortiguada con fosfato que comprende alúmina. Para la composición de agente inmunoterapéutico de segunda generación, amastigotos cultivados fueron cosechados por centrifugación (800xg durante 20 minutos a 4°C) , lavados en una solución Salina Amortiguada con Fosfato (PBS) e incubados durante 3 días a 30-34°C en MEM de Eagle (Gibco) que contenía 150 µg de TLC para inactivar los parásitos de conformidad con lo descrito, a 1 x 10d parásitos/ml . Este paso se efectuó de preferencia cuando los amastigotos están en la fase de crecimiento estacionario, después de dos lavadas con PBS (12.100 x g durante 10 minutos a 4°C) . En una modalidad particularmente preferida, la preparación de una composición inmunogénica de segunda generación protectora de conformidad con la presente invención, comprende los pasos siguientes : ?) . cultivar organismos del genero Leishmania en etapa de amastigoto en un medio de cultivo sintético que contiene los ingredientes listados en la Tabla 1 suplementado con suero fetal bovino al 5% típicamente a una temperatura de aproximadamente 30-34°C; B) . someter los organismos del genero Leishmania en la etapa de amastigoto, y en la fase estacionaria de crecimiento, a un medio que contiene una cantidad de N-p-tosil-L-Lisina clorometil cetona o una sal farmacológicamente aceptable efectiva para matar dichas células; C) . aislar dichas células muertas; D) . extraer las proteínas de superficie con el detergente no iónico Nonidet p-40; E) . centrifugar la preparación para aislar los antígenos en partículas; F) . lavar dos veces con PBS; G) . disolver en una solución que contiene Urea 8 M, Tris (Tris-hidroxi-metil-amino-metano) 0.025 M, y sonicar durante 5 minutos a una temperatura de 4°C en un Sonifier Cell Disrupter (Modelo WI 85, Health-Systems-ültrasonic, Inc., Plainview, Nueva York) en el límite de micropunta del control de salida a 50W; H) . separar fracciones de proteina en una columna DEAE-Sephadex con una elusión escalonada de NaCl a partir de una concentración de NaCl 0.05-0.3 M en una solución que contiene Urea 8 M, Tris 0.025 M pH 8.3; y I) . formar un inoculo inmunizante que comprende dichos antigenos en partículas a partir de dichas células matadas mediante su resuspensión en una solución salina amortiguada con fosfato que comprende alúmina. En una modalidad particularmente preferida,- la preparación de una composición inmunogénica para remisión clínica de la psoriasis de conformidad con la segunda generación de la presente invención comprende los pasos siguientes: A) . cultivar organismos del genero Lexshmania en la etapa de amastigoto en un medio de cultivo sintético que contiene los ingredientes listados en la Tabla 1 suplementado con suero fetal bovino al 5% típicamente a una temperatura de aproximadamente 34°C; B) . someter los organismos del genero Lexshmania en la etapa de amastigoto, y en la fase estacionaria de crecimiento, a un medio que contiene una cantidad de N-p-tosil-L-Lisina clorometil cetona o una sal farmacológicamente aceptable efectiva para matar tales células; C) . aislar dichas células matadas; D) . extraer las proteínas de superficie con el detergente no iónico Nonidet p-40; E) . someter los antígenos en partículas a DEAE cromatografía Sephadex a partir de solamente una especia de Leishmania, como por ejemplo L. (V)brasiliensis o bien cualquiera otra especie de Leishmania presente en el agente inmunoterapéutico de primera generación; F) . aislar siete fracciones de proteína en urea 8 M, Tris 0.025 M; pH 8.3, separadas empleando elusión escalonada con NaCl 0.05-0.3 M; G) . diálisis versus agua destilada y liofilización de fracciones de proteina; H) . disolución de las fracciones de proteína en solución salina amortiguada con fosfato; I) . determinar el contenido de proteína de las fracciones por el método de Lowry (Lowry, O. y colaboradores, 1951, J. Biol. Chem. , Vol. 193, páginas 265-275); J) . sonicación de cada fracción de proteína en solución salina amortiguada con fosfato durante 5 minutos a una temperatura de 4°C en un Sonifier Cell Disrupter (Modelo WI 85, Health-Systems-Ultrasonic, Inc., Plainview, Nueva York) en el límite de micropunta del control de salida 50W; K) . hace pasar cada fracción a través de filtros Millipore® de 0.20 um; y L) formación de un inoculo de inmunización de segunda generación que comprende una o varias de dichas fracciones de proteína mediante la resuspensión de la fracción o de las varias fracciones en una solución salina amortiguada con fosfato que contiene alúmina. EJEMPLO 5 Tratamiento de Psoriasis con un agente inmunoterapéutico polivalente de primera generación que contiene L. (L) amazonensis, L. (L) venezuelensis, L. (L) brasiliensis, y L. (L) chagasi . Tabla 2: Grupos de edad en la población en estudio. Grupos de Edad Pacientes [0-5] 8 0.29 [6-12] 65 2.35 [13-18] 90 3.25 [19-25] 268 9.68 [26-40] 997 35.99 [41-65] 1196 43.18 >65 146 5.27 Total 2770 100 La mayoría de los pacientes (79.17%) tenían entre 26 y 65 años de edad con un promedio de 42.56 ± 26.11 años y un rango entre 1 y 88 años. Tabla 3: Características de la población en estudio. Pacientes Edad Tiempo (años) con Psoriasis Hombre 1545 (55.8%) 42.1 ± 14.3 11.2 ± 9.6 Mujer 1225 (44.2%) 38.6 ± 15.3 12.0 ± 10.0 Edad < 25 431 (15.6%) 18.7 ± 5.5 6.1 ± 4.8 Edad > 26 2339 (84.4%) 44.6 ± 12.4 12.6 ± 10.2 Total 2770 40.6 ± 14.9 11.6 ± 9.8 Tabla 3 (Continuación) Pacientes con familiares con Psoriasis Hombre 500 (32.3%) Mujer 472 (38.5%) Edad < 25 172 (39.9%) Edad > 26 800 (34.2%) Total 972 (35.0%) El 35% de los pacientes tenían padres con Psoriasis y el tiempo de evolución de la enfermedad fue de 11.6 ± 9.8 años, similar en hombres y mujeres, como rango comprendido entre 2 y 46 años. Tabla 4: tipos clínicos de Psoriasis en la población en estudio. Placa Gutata Placa Palma Eritrodermia + plantar Gutata Hombre 1229 67 78 37 36 (56.1%) (48 .9%) (56.9%) (39. 4%) (72. 0%) Mu er 963 70 59 57 14 (43.9%) (51 .1%) (43.1%) (60. 6%) (28. 0%) Edad 320 33 24 19 10 < 25 (14.6%) (24. 1%) (17.5%) (20.2%) (20%) Edad 1872 104 113 75 40 > 26 (85.4%) (75. 9%) (82.5%) (79.8%) (80%) Total 2192 137 137 94 50 (79.1%) (10. 1%) (10.1%) (0.3%) (1.8%) Tabla 4 (Continuación) Inversa Placa Uñas + artritis Hombre 14 53 29 (58.3%) (55.2%) (72.5%) Mujer 10 43 11 (41.7%) (44.8%) (27.5%) Edad 3 8 5 < 25 (12.5%) (8.3%) (12.5%) Edad 21 88 35 > 26 (87.5%) (91.7%) (87.5%) Total 24 96 40 (0.8%) (3.4%) (0.3%) El 92.6 % de los pacientes presentaba la forma clínica de Psoriasis en placa distribuida en su forma pura (79.1%) o bien asociada con gutata (10.1%) o artritis (3.4%); 10.1% presentaba la forma pura de gutata; 0.3 % presentaba la forma palmar y plantar, 1.8% presentaba Eritrodermia y 3.4% presentaba artritis psoriática. Tabla 5: Población en estudio y respuesta a la vacunación en pacientes psoriáticos distribuidos por género y edad. PASI1 Reducción de PASI1 antes del después de vacunación Agente inmunoterapéutico 100% 99-70% 69-40% Hombres 1545 18 .5 + 16. 9 323 600 185 (49.8%) (57.0%) (56.7%) Muj eres 1225 13 .7 + 14. 9 325 453 141 (50.2%) (43.0%) (43.3%) Edad <25 431 13 .0 + 14. 7 131 150 50 (20.2%) (14.2%) (15.3%) Edad >26 2339 17 .0 ± 16. 4 517 903 276 (79.8%) (85.8%) (84.7%) Total 2770 16 .4 ± 16. 2 648 1053 326 (28.0%) (46%) (14.0%) Tabla 5 (Continuación) Reducción de PASI después de Abandono vacunación 39-10% <10% Abandono Hombres 105 55 272 (61.8%) (59.8%) (56.5%) Mujere 65 37 209 (38.2%) (40.2%) (43.5%) Edad <25 24 12 69 (14.1%) (13.0%) (14.3%) Edad >26 146 80 412 (85.9%) (87.0%) (85.7%) Total 170 92 481 (7%) (4%) (17.4%) ¦"¦PASI = índice de severidad y Área de psoriasis. 20cho años de seguimiento. Noventa y seis % de los pacientes respondieron al tratamiento con una disminución en cuando a valores de PASI mayor que el 10%, y solamente 4% respondieron con una disminución de los valores de PASI inferior al 10% a partir del valor PASI inicial antes del tratamiento. Veintiocho % presentó una remisión del 100% de las lesiones, su enfermedad ha desaparecido completamente, de manera similar en hombres y mujeres. Globalmente, el 74% de los pacientes presentó una remisión comprendida entre el 70 y el 100% de las lesiones y el 21% presentó una remisión comprendida entre el 10 y el 69% en comparación con los valores de PASI iniciales, el 17.4% de loa voluntarios abandonaron el tratamiento después de 1-2 dosis de agente inmunoterapéutico (véase abajo) . Tabla 6: Comparación de dosis de agente inmunoterapéutico en cada grupo de remisión clínica. Dosis de agente inmunoterapéutico para la reducción de PASI después vacunación1 100% 99-70% 69-40% Hombres 1545 7.7 ± 6.5 11.3 ± 10.8 9.2 ± 10.2 Mujeres 1225 7.5 ± 5.6 10.6 ± 10.0 8.8 ± 8.7 Edad <25 431 6.5 ± 4.2 10.6 ± 10.0 8.2 ± 8.4 Edad >26 2339 7.8 ± 6.4 11.1 ± 10.0 9.2 ± 9.8 Total 2770 7.6 + 6.0 11.0 ± 10.0 9.0 ± 9.6 Tabla 6 (Continuación) 39-10% <10% Abandono Hombres 5.9 ± 4.5 6.1 ± 4.8 1.6 ± 1.1 Mujeres 6.0 ± 4.6 5.9 ± 5.0 1.5 ± 1.1 Edad <25 6.1 ± 6.1 6.5 ± 4.6 1.4 ± 0.6 Edad >26 5.9 ± 4.2 5.9 ± 5.0 1.7 ± 1.4 Total 6.0 ± 4.5 6.0 ± 4.9 1.7 ± 1.4 Las condiciones de los objetos fueron seguidas durante 8 años . 7.6 ± 6.0 dosis de agente inmunoterapéutico fueron necesarias para una remisión del 100% de la Psoriasis. La cantidad de dosis en los grupos con una remisión de 71-90% y 40-69% fue relativamente mayor, alcanzando valores de 11.0 ± 10.0 y 9.0 + 9.6 respectivamente, lo que sugieren que esta remisión clínica depende principalmente de la respuesta inmunológica del voluntario. El paciente capaz de responder a antígenos para agente inmunoterapéutico debe hacerlo desde el principio del tratamiento. El paciente sin respuesta permanece así a pesar de un número mayor de dosis de agente inmunoterapéutico . Tabla 7: Apariencia de recaidas después de remisión clínica de Psoriasis. Apariencia de recaída después de remisión en el grupo de remisión del 100%. Recaídas PASI Dosis para Tiempo-1 para inicial remisión al remisión al 100% 100% 188/648 (28.9%) 21.0 ± 17. 7.6 ± 6.0 7.0 + 5.4 Tabla 7 (Continuación) Recaídas PASI en Tiempo-1" a PASI en recaída partir de nueva remisión remisión hasta la recaída 188/648 (28.9%) 7.7 ± 10.1 15.4 + 20. 2.8 ± 3.3 Tabla 7 (Continuación) Recaídas Dosis para Tiempo"1 para % de remisiones nueva nueva nuevas después remisión remisión de recaídas 188/648(28.9%) 7.1 + 6.8 5.8 + 4.9 161/188 (85.6%) """Meses Entre los 648 pacientes con remisión total de lesiones, 188 voluntarios (28.9%) presentaron recaídas de la enfermedad después de 15.4 ± 20.6 meses. Los valores de PASI al momento de la recalda fueron 1/3 del valor de PASI inicial antes del tratamiento. PASI en la nueva remisión clínica fue considerablemente menor que PASI al momento de la recaída. La nueva remisión ocurrió con 7.1 + 6.8 dosis de agente inmunoterapéutico después de 5.8 ± 4.9 semanas, un período de tiempo menor que el período observado en el primer ciclo de tratamiento para la remisión clínica de las lesiones. En este grupo de recaída, el 85.6 % de los pacientes presentó otra vez remisión de lesiones después de 6-7 dosis de agente inmunoterapéutico . Tabla 8: Efectos colaterales después de vacunación. Signos en el sitio de la inoculación Dolor Ardor Rojez Nodulo 989(43.2%) 484(21.1%) 327(14.3%) 535(23.4%) Síntomas sistémicos Ninguno 588(25.7%) 1233(53.9%) Efectos colaterales menores fueron observados en el sitio de la inoculación en menos que la mitad de los pacientes con psoriasis, sin diferencias por género o edad. Todos estos efectos colaterales desaparecieron dentro de algunos días . Los resultados de los análisis de laboratorio de las muestras de 55 pacientes con psoriasis que recibieron 21.4 ± 13.1 dosis de agente inmunoterapéutico de primera generación se muestran en la tabla 9. Todos los valores fueron encontrados dentro de rangos normales. Tabla 9: Análisis del laboratorio en 55 pacientes con psoriasis con 21.4 ± 13.1 dosis de agente inmunoterapéutico de primera generación. Conteo de leucocitos/ul 6003 ± 4165 Porcentaje de neutrófilos 53.1 ± 13.3 Porcentaje de linfocitos 29.3 ± 13.3 Porcentaje de monocitos 5.8 ± 3.8 Porcentaje de eosinófilos 2.9 ± 2.3 Porcentaje de basófilos 0.7 ± 0.6 Conteo de eritrocitos xl0/ul 4.7 ± 0.6 Hemoglobina g/dl 13.3 ± 1.9 Hematocrito (%) 42.0 ± 5.9 VCM (fl) 91.6 ± 7.7 MCH (pg) 29.2 ± 3.2 MCHC (g/dl) 31.9 ± 1.0 RDW-SD (fl) 20.1 ± 14.9 Plaquetas x 10s/ul 250.3 ± 84.2 UREA (mg/dl) 19.7 ± 8.5 CREATININA (mg/dl) 0.9 ± 0.2 ÁCIDO ÚRICO (mg/dl) 5.6 ± 1.6 AZÚCAR EN LA SANGRE (mg/dl) 89.8 ± 15.1 PROTEÍNA TOTAL (g/dl) 7.2 ± 0.8 ALBÚMINA (g/dl) 3.8 + 0.9 GLOBULINAS (g/dl) 3.3 +0.8 TRIGLICÉRIDOS (mg/dl) 161.0 ± 107.1 LIPOPROTEÍNAS DE BAJA DENSIDAD (mg/dl) 102.8 ± 44.5 LIPOPROTEÍNAS DE DENSIDAD MUY BAJA (mg/dl) 35.0 ± 23.3 ÁCIDO LACTÁCTICO DESHIDROGENASA (mg/dl) 36.1 ± 13.2 TIEMPO DE PROTROMBINA 11.7 ± 1.3 TIEMPO PARCIAL DE TROMBOPLASTINA 29.5 ± 6.5 ÁCIDO OXALOACÉTICO TRANSAMINASA (u/1) 29.0 ± 14.1 ÁCIDO PIRÚVICO TRANSAMINASA (u/1) 26.1 ± 15.1 SODIO (mg/dl) 144.9 ± 2.1 POTASIO (mg/dl) 4.2 ± 0.3 CLORO (meq/dl) 105.3 ± 2.6 CALCIO (mg/dl) 8.7 ± 0.3 FÓSFORO (mg/dl) 2.9 ± 0.4 EJEMPLO 6 Ensayo de agente inmunoterapéutico monovalente de primera generación Tabla 10: Seguimiento de un ensayo en simple ciego después de inyección de pacientes con psoriasis con una de cuatro especies de Leishmania presente en el agente inmunoterapéutico de primera generación. PASI antes de Dosis de agente tratamiento inmunoterapéutico Especie de Leishmania L. (L) amazonensis 6.4 3 L. (L) amazonensis 3.8 6 L. (L) amazonensis 3.6 3 L. (L) amazonensis 9.4 5 L. (L) amazonensis 2.3 3 L. (V) brasiliensis 36 2 L. (V) brasiliensis 11.9 2 L. (V) brasiliensis 13.9 5 L. (V) brasiliensis 5.8 4 L. (L) c agasi 2.8 5 L. (L) chagasi 52.2 3 L. (L) chagasi 10 3 L. (L) venezuelensis 15.6 3 Tabla 10 (Continuación) PASI después Porcentaje de de tratamiento reducción de PASI ESPECIE DE LEISHMft IA L. (L) amazonensis 1.4 78.1 L. (L) amazonensis 1.7 55.3 L. (L) amazonensis 1.4 61.1 L. (L) amazonensis 1.3 86.2 L. (L) amazonensis 0 100.0 L. (V) brasiliensis 15.4 57.2 L. (V) brasiliensis 1.8 84.9 L. (V) brasiliensis 6.4 54.0 L. (V) brasiliensis 1.9 67.2 L. (L) chagasi 0 100.0 L. (L) c agasi 0 100.0 L. (L) chagasi 4.5 55.0 L. (L) venezuelensis 5.3 66.0 Agentes inmunoterapéuticos fueron también preparados utilizando especies individuales de Leishmania a partir del agente inmunoterapéutico de primera generación y fueron subsecuentemente probados para su capacidad para inducir la remisión clínica de lesiones por psoriasis. Los resultados en la Tabla 15 de muestran claramente que no es necesario preparar una mezcla de 4 especies Leishmania en el agente inmunoterapéutico de primera generación para obtener la remisión clínica de lesiones en pacientes psoriáticos. Una especie de Leishmania es tan efectiva como la mezcla de cuatro especies utilizadas en el agente inmunoterapéutico polivalente para inducir valores de PASI menores hasta 100% después de tratamiento. Así, en cada extracto de leishmania,. existe un factor que inhibe la inflamación asociada con psoriasis . EJEMPLO 7 Formulación y Administración Los compuestos de la presente invención son útiles para varios propósitos, tanto terapéuticos como no terapéuticos. La aplicación terapéutica de los nuevos compuestos y composiciones que los contienen puede contemplarse como lograda a través de cualquier método terapéutico y técnica actual o prospectivamente conocido de los expertos en la materia. Además, los compuestos de la presente invención son útiles para materiales iniciales o productos intermedios para preparación de otros compuestos y composiciones útiles. La dosificación administrada en un huésped en las indicaciones antes mencionadas dependerán de la identidad de la infección, del tipo de huésped involucrado incluyendo la edad de huésped, su peso y su salud, la existencia y naturaleza de tratamientos concurrentemente, eventualmente y la razón terapéutica. Los compuestos de la presente invención pueden ser formulados de conformidad con métodos conocidos para la preparación de composiciones farmacéuticas. Formulaciones son descritas con detalles en numerosas fuentes bien conocidas y fácilmente disponibles por parte de los expertos en la materia. Por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Science por E. W. Martin describe formulaciones que pueden ser utilizadas con relación a la presente invención. En general, las composiciones de la presente invención serán formuladas de tal manera que una cantidad efectiva del (de los) compuesto (s) bioactivo(s) sea combinadas con un vehículo adecuado para facilitar la administración efectiva de la composición. EJEMPLO 8 Separación cromatográfica de fracciones de proteina de especies de Leishmania y ensayo blastogénico con células mononucleares de sangre periférica humana Siete fracciones fueron separadas a partir del extracto de Leishmania chagasi en partículas (PP75) , el primer componente del agente inmunoterapéutico de primera generación, después de tratamientos de los parásitos en etapa de amastigotos respectivo con TLCK con NP-40 de conformidad con lo mencionado previamente. Las fracciones fueron probadas en un ensayo blastogénico con células mononucleares de sangre periférica a partir de pacientes psoriáticos antes y después de vacuna de conformidad con métodos habitualmente utilizados en la técnica. Para este ejemplo, alícuotas de 100 µ? (triplicado) de cada una de las fracciones disueltas en RPMI-1640 fueron pre-incubadas en placas de microtitulación de fondo plano (Falcon Plastics) con 2 x 10° células mononucleares de sangre periférica, separadas en HISTOPAQUE (Sigma)y resuspendidas en 100 µ? de RPMI-1640 que contenía 20% de suero fetal de bovino desactivado bajo métodos rutinarios en la técnica. Se utilizó Concanavalina A como control positivo de la estimulación de los linfocitos. 48 horas después, se agregó 0.2 µ??/???? de ¾-Timidina en alícuotas de 10 µ? y las muestras fueron incubadas durante 18 horas adicionales. Las células fueron cosechadas en papel filtro (Reeve Angel) utilizando una cosechadora de células automáticas (MASHII) . Los discos de papel secados fueron colocados en minif áseos con 2.5 mi de Aguasol (NEW) y contados durante 1 minuto en un contador de centello Packard Tri-Carb modelo 3385. El índice de estimulación (S.I.) fue calculada para cada muestra mediante la división de los conteos experimentales por minuto (c.p.m.) por los c.p.m. de control (cultivos con fracciones o mitogenos/cultivos de control en medio de cultivo solo) . Los resultados se ilustran en las tablas 11-14 abajo. TABLA 11: Blastogénesis de células mononucleares de sangre periférica con fracciones provenientes de L (L) . chagasi (PP75) antes y después de vacunación. ANTES DE VACUNACIÓN n = 3 DEAE ug cpm/pozo S.I. Sephadex proteína/ pozo X ± Desviación Desviación Estándar Estándar Fracción 1 20 823 ± 215 1.90 ± 0.22 sin NaCl 10 1297 ± 835 2.81 ± 1.5 5 1587 ± 1429 3.40 ± 2.79 2.5 627 ± 282 1.40 ± 0.41 Fracción 2 20 908 + 103 2.22 ± 0.79 NaCl 0.05M 10 821 + 660 1.87 + 1.1 5 761 ± 324 1.73 + 0 49 2.5 532 ± 347 1.19 ± 0.63 Fracción 3 20 933 ± 728 2.03 + 1.37 NaCl 0.1M 10 941 ± 552 2.08 + 1.77 5 706 + 376 1.57 ± 0.61 2.5 717 + 632 1.57 ± 1.21 Fracción 4 20 674 + 405 1.54 ± 0.74 NaCl 0.15M 10 600 + 305 1.38 + 0.55 5 767 + 275 1.87 ± 0.84 2.5 940 + 346 2.35 + 1.29 Fracción 5 20 549 ± 197 1.24 + 0.21 NaCl 0.2M 10 472 ± 181 1.48 + 0.58 5 470 ± 205 1.06 ± 0.31 2.5 353 ± 112 0.87 ± 0.03 Fracción 6 20 726 ± 126 1.70 ± 0.12 NaCl 0.25M 10 558 ± 225 1.26 ± 0.31 5 778 ± 456 1.71 ± 0.78 2.5 688 ± 574 1.52 ± 1.09 Fracción 7 20 694 + 325 1.54 ± 0.48 NaCl 0.3M 10 676 ± 1.54 1.56 ± 0.10 5 604 + 217 1.39 + 0.31 2.5 580 ± 315 1.28 ± 0.52 Concanaval 10 8452 ± 7470 23 .12 ± 24.89 A 5 22479 + 10642 55.05 ± 29.29 Parásitos 4x10 795 ± 209 1.85 ± 0.32 en etapa de amastigotos 2xlOó 741 ± 307 1.68 + 0.45 Medio de 323 ± 79 1.0 + 0.2 cultivo (Continuación de la Tabla 11) CURADO DESPUÉS DE VACUNACIÓN n = 5 DEAE Sephadex cpm/pozo S.I. X ± X + Desviación Desviación Estándar estándar Fracción 1 2044 + 1825 3.22 ± 286 sin NaCl 1442 ± 1425 2.59 ± 276 1424 ± 1150 2.44 ± 217 1366 ± 951 2.27 ± 1.66 Fracción 2 2643 + 1798 4.36 + 2.96 NaCl 0.05M 1880 + 1571 3.13 + 2.83 1627 + 1137 2.75 + 2.05 1129 + 900 1.94 ± 1.7 Fracción 3 1735 ± 1761 3.03 ± 3.4 NaCl 0.1M 1368 ± 1528 2.51 + 2.94 1360 + 1681 2.45 ± 3.23 1174 ± 1382 2.09 + 2.66 Fracción 4 2514 + 1552 4.25 + 2.73 NaCl 0.15M 1541 ± 1548 2.74 ± 3.0 1330 + 1520 2 .36 + 2 .93 1216 ± 1225 2 .16 + 2 .37 Fracción 5 1411 ± 1629 2 .52 + 3 .14 NaCl 0.2M 1398 + 1562 2 .49 ± 3 .01 1095 + 1023 1 .94 + 1 .98 1059 ± 907 1 .86 ± 1 .76 Fracción 6 1448 ± 1127 2 .52 + 2 .17 NaCl 0.25M 1354 ± 818 2 .46 ± 1 .77 1280 + 752 2 .28 + 1 .52 927 ± 710 1 .61 + 1 .36 Fracción 7 1180 ± 747 2 .96 ± 1 .09 NaCl 0.3M 1608 ± 1107 2 .96 ± 2 .27 1325 + 601 2 .40 ± 1 .32 1466 ± 810 2 .75 ± 1 .89 Concanavalina 7988 ± 2805 13.58 ± 4.31 A 28011 + 8183 52.67 ± 22.89 Parásitos 2099 ± 1454 3.40 + 2.02 en etapa de aiaastigotos 1725 ± 1028 2.75 ± 0.99 Medio de 987 + 226 1.0 + 0.3 cultivo El grupo de pacientes antes de vacunación presentó un S.I. > 1.0. Estos valores se incrementaron notablemente después de la vacunación. Los resultados del análisis estadístico de ambos grupos se presenta a continuación: Antes de vacunación Después de vacunación Parámetro Media 1.697143 2.571072 Núme o de 28 28 puntos Desviación 0.529883 0.6259645 estándar Error estándar 0.1001386 0.1182962 Minino 0.87 1.61 Máximo 3. 4.36 Prueba t Apareada: Diferencia media — ¦0.8739286 (Media de diferencias apareadas) Intervalo de confianza de 95% de la diferencia: -1.150029 a -0.5978283 Valor p de dos colas es <0.0001 —— extremadamente significativo-. Estos resultados demuestran que, después de vacunación de parientes psoriáticos con cualquiera de las fracciones de extracto de L. (L) chagasi, los linfocitos son significativamente estimulados. Un índice de estimulación mayor fue observado con las fracciones 3 y 4 asi como amastigotos vivos. Siete fracciones fueron separadas del extracto de (V) brasiliensis en partículas (PMH27), un segundo componente del agente inmunoterapéutico de primera generación, después de tratamiento de los parásitos en etapa de amastigotos respectivos con TLCK y extracción con NP-40 como se mencionó previamente . TABLA 12: Blastogénesis de células mononucleares de sangre periférica con fracciones de L (V)brasiliensis (PMH27) antes ' después de la clonación. ANTES DE VACUNACIÓN N = 3, S.I. < 1.0 DEAE ug de cpm/pozo S.I. Sephadex proteína/ X ± X ± pozo Desviación Desviación estándar estándar Fracción 1 ' 20.00 379 + 23 0.85 ± 0.35 sin NaCl 10.00 391 ± 65 0.84 ± 0.17 5.00 491 ± 115 1.10 ± 0.46 2.50 376 ± 105 0.80 ± 0.18 Fracción 2 20.00 902 ± 775 1.76 ± 1.28 NaCl 0.05M 10.00 709 ± 555 1.39 + 0.89 5.0 1385 + 639 3.12 + 1.65 2.50 1117 ± 1004 2.19 ± 1.67 Fracción 3 20.00 263 ± 21 0.58 ± 0.19 NaCl 0.1M 10.00 231 ± 65 0.48 ± 0.07 5.00 207 ± 44 0.44 ± 0. 05 2.50 200 ± 41 0.42 ± 0.04 Fracción 4 20.00 251 ± 51 0.58 ± 0.30 NaCl 0.15M 10.00 260 ± 87 0.54 + 0.09 5.00 279 + 67 0.59 + 0.08 2.50 233 ± 37 0.50 ± 0.13 Fracción 5 20.00 232 + 59 0.49 + 0.05 NaCl 0.2M 10.00 275 ± 37 0.62 + 0.25 5.00 252 + 64 0.54 ± 0.11 2.50 285 ± 135 0.58 ± 0.16 Fracción 6 20.00 233 ± 84 0.48 + 0.10 NaCl 0.25M 10.00 372 ± 215 0.74 + 0.3 5.00 436 ± 258 0.87 ± 0.37 2.50 310 ± 76 0.66 ± 0.14 Fracción 7 20.00 1004 ± 881 2.03 ± 1.42 NaCl 0.3M 10.00 2114 ± 1366 4.14 ± 1.92 5.00 2295 + 2915 4.19 ± 1.03 2.50 349 ± 206 0.70 ± 0.28 Concanavalina 10.00 17443 ± 9651 41.98 ± 32.89 A 5.00 30323 + 2242 67.32 ± 21.79 Parásitos 4 X 10e 1035 ± 526 2.19 ± 0.87 en etapa de amastigotos 395 ± 147 ± 0.05 Medio de 390 ± 114 .0 ± 0 cultivo (continuación la tabla 12) ANTES DE VACUNACIÓN N = 2, > 1.0 DEAE cpm/pozo S.I. Sephadex X ± X ± Desviación Desviación estándar estándar Fracción 1 8112 ± 416 1.74 + 0.47 sin NaCl 1423 ± 1173 2.99 ± 1.78 1391 ± 1120 3.04 + 1.8 879 ± 137 2.06 ± 0.59 Fracción 2 2686 ± 2098 5.55 ± 3.4 NaCl 0.05M 1971 ± 399 5.05 ± 3.13 1690 ± 203 4.30 ± 2.51 2887 ± 716 6.59 ± 1.28 Fracción 3 1028 ± 163 2.59 ± 1.46 NaCl 0.1M 928 ± 314 2.06 ± 0.25 787 ± 365 1.74 + 0.47 618 + 252 1.40 + 0.41 Fracción 4 1046 ± 335 2.41 ± 0.7 NaCl 0.15M 1272 ± 767 2.74 ± 1.04 1442 ± 821 3.27 ± 1.42 1335 ± 783 2.83 ± 0.96 Fracción 5 669 ± 157 1.54 ± 0.39 NaCl 0.2M 577 ± 170 1.29 ± 0.12 660 ± 228 1.45 ± 0.1 704 ± 94 1.69 ± 0.65 Fracción 6 873 + 566 1.81 ± 0.76 NaCl 0.25M 895 + 705 1.89 ± 1.08 1053 + 427 2.54 ± 1.24 1308 ± 489 3.24 + 1.82 Fracción 7 1406 ± 277 3.26 + 0.8 NaCl 0.3M 2545 + 1170 5.52 ± 1.16 2549 ± 1291 5.71 ± 2.02 1479 ± 1503 2.99 ± 2.42 Concanavalina 7180 ± 2557 19.31 ± 15.19 A 14665 ± 12253 31.21 + 19.01 Parásitos 2327 ± 974 5.17 ± 1.23 en etapa de amastigotos 2427 ± 1968 4.37 ± 3.52 Medio de 557 + 49 1.0 ± 0.3 cultivo [continuación de la tabla 12) DESPUÉS DE VACUNACIÓN CURADO = 3 DEAE cpm/pozo S.I. Sephadex X + X ± Desviación Desviación estándar estándar Fracción 1 1074 ± 509 1 .98 ± 0 .86 sin NaCl 1945 ± 2481 3 .51 + 4 .41 683 ± 224 1 .26 ± 0 .36 650 ± 240 1 .19 ± 0 .39 Fracción 2 2157 ± 267 4 .01 ± 0 .48 NaCl 0.05M 1428 + 351 2 .65 ± 0 .61 1911 + 533 3 .56 + 1 .01 1661 + 1225 3 .01 + 2 .15 Fracción 3 2237 ± 1002 4 .13 + 1 .75 NaCl 0.1M 1633 ± 594 3 .01 ± 1 .0 1479 ± 983 2 .74 ± 1 .76 1140 ± 767 2 .09 + 1 .36 Fracción 4 946 ± 513 2 .75 + 0 .92 NaCl 0.15M 1118 ± 349 2 .06 + 0 .56 915 + 362 1 .68 + 0 .6 930 ± 414 1 .71 + 0 .71 Fracción 5 1306 ± 365 2 .42 ± 0 .62 NaCl 0.2M 911 ± 196 1 .69 ± 0 .33 753 ± 240 1 .38 + 0 .38 822 ± 323 1 .51 + 0 .53 Fracción 6 909 ± 123 1 .68 ± 0 .17 NaCl 0.25M 1043 ± 406 1.97 ± 0.88 971 ± 201 1.82 ± 0.48 773 ± 206 1.43 ± 0.32 Fracción 7 1413 + 638 2.60 ± 1.08 NaCl 0.3M 1955 + 472 3.62 + 0.75 931 + 179 1.74 + 0.41 558 + 186 1.02 ± 0.3 Concanavalina 20051 + 12578 37.29 ± 22.55 A 33798 ± 4946 62.89 ± 8.16 Parásitos 5128 + 826 9.52 + 1.21 en etapa de amastigotos 520 ± 33 0.90 + 0.5 Medio de 580 + 0 1.0 + 0 cultivo En la tabla 12, dos grupos de pacientes fueron evidentes antes de la vacunación, específicamente, un grupo con S.I. < 1.0 y otro grupo con S.I. > 1.0. El grupo de pacientes curados después de vacunación presentó valores notablemente incrementados en comparación con cualquiera de estos grupos antes de vacunación. Los resultados del análisis estadístico se presentan a continuación: Grupo con S.I. < 1.0 Antes de vacunación Después de vacunación Parámetro Media 1.150714 2.257857 Número de 28 28 puntos Desviación 1.062052 8876538 estándar Error estándar .200709 1677508 Mínimo .42 .02 Máximo 4.19 .13 Prueba t apareada: Diferencia media = -1.107173 (Media de diferencias apareadas) Intervalo de confianza de 95% de la diferencia: -1.534381 a -.6799043 Valor p de dos colas es <0.0001 extremadamente significativo-.

Grupo con S . I . > 1.0 Antes de vacunación Después de vacunación Parámetro Media 986429 2.257857 Número de 28 puntos Desviación 504479 .8876538 estándar Error estándar .2843199 .1677508 Mínimo 1.29 1.02 Máximo 6.59 4.13 Prueba t no apareada: Diferencia media = -.7285719 (Media de B menos media de A) Intervalo de confianza de 95% de la diferencia: -1.3904 a -6.674413E-02 Valor p de dos colas es <0.0316 extremadamente significativo-. Estos resultados demuestran que los linfocitos de ambos grupos antes de la vacunación son significativamente estimulados por vacunación con cualquiera de las fracciones de extracto de L. (V) brasiliensis. Un índice de estimulación mayor fue observado con las fracciones 3 y 4 así como los amastigotos vivos. Seis fracciones fueron separadas del extracto L. ( )Venezuelensis en partículas (PMH16), el tercer componente del agente inmunoterapéutico de primera generación, después de tratamiento de los parásitos en etapa de amastigotos respectivos con TLCK y extracción con NP-40 como se mencionó previamente.

TABLA 13: Blastogénesis de células mononucleares de sangre periférica con fracciones de L. ( )venezuelensis (PMH16) antes y después de vacunación. ANTES DE VACUNACIÓN n = 5, < 1.0 DEAE ug de cpm/pozo S.I. Sephadex proteina/ X ± X ± SD pozo Desviación Desviación estándar estándar Fracción 1 20.00 1617 ± 1622 1.95 ± 1.51 sin NaCl 10.00 1455 ± 1241 1.82 ± 1.03 5.00 1222 ± 905 1.57 ± 0.66 2.50 1376 ± 1147 1.73 + 0.93 Fracción 2 20.00 1579 + 1259 1.77 ± 1.39 NaCl 0.05M 10.00 1371 + 476 1.65 ± 0.93 5.0 1003 ± 455 1.11 ± 0.48 2.50 785 ± 164 0.87 ± 0.19 Fracción 3 20.00 896 ± 358 0.98 ± 0.36 NaCl 0.1M 10.00 948 + 594 1.02 ± 0.53 5.00 689 ± 268 0.77 ± 0.35 2.50 707 ± 302 0.77 + 0.29 Fracción 4 20.00 848 ± 401 0.89 ± 0.25 NaCl 0.15M 10.00 886 ± 810 0.91 ± 0.58 5.00 1105 + 1103 1.07 ± 0.76 2.50 826 ± 479 0.90 ± 0.49 Fracción 5 20.00 1087 + 618 0.91 ± 0.53 NaCl 0.2M 10.00 848 ± 601 1.14 ± 1.26 5.00 587 ± 230 0.65 ± 0.22 2.50 553 ± 186 0.62 + 0.21 Fracción 6 20.00 767 + 15 1.14 ± 0.42 NaCl 0.25M 10.00 515 ± 91 0.74 ± 0.16 5.00 374 ± 31 0.55 ± 0.17 2.50 422 ± 17 0.62 ± 0.21 Concanavalina 20.00 29329 ± 13560 134 ± 237 A 10.00 34463 ± 10198 40 + 17 5.00 33799 + 7901 52 + 31 2.50 35113 ± 1040 52.28 ± 18 Parásitos 4 X 10ó 1315 ± 404 1.55 ± 0.78 en etapa de amastigotos 2 X 106 1665 + 452 2.36 ± 0.27 Medio de 914 + 237 1.0 + 0.3 cultivo (continuación de la tabla 13) ANTES DE VACUNACIÓN n = 2, S.I. > 1.0 DEAE cpm/pozo S.I. Sephadex X ± X ± Desviación Desviación estándar estándar Fracción 1 480 ± 92 0.89 ± 0.3 sin NaCl 737 ± 57 1.36 ± 0.72 488 + 75 0.90 ± 0.43 468 ± 63 0.87 ± 0.27 Fracción 2 1997 ± 1965 1.86 ± 1.05 NaCl 0.05M 2163 + 489 2.65 ± 102 1521 + 1235 1.52 ± 0.46 1398 ± 1309 1.33 + 0.65 Fracción 3 1859 ± 2160 1.61 ± 1.41 NaCl 0.1M 4858 ± 6397 3.92 + 4.67 1299 + 1182 1.25 ± 0.56 1760 ± 1967 1.55 ± 1.23 Fracción 4 1859 ± 1316 1.93 ± 0.3 NaCl 0.15M 1930 ± 95 2.49 ± 1.35 2024 + 402 2.81 ± 2.08 1065 ± 794 1.09 ± 0.23 Fracción 5 2416 ± 651 2.92 ± 1.0 NaCl 0.2M 1912 + 427 2.34 + 0.91 2092 ± 108 2.78 + 1.75 1434 ± 842 1.56 ± 0.1 Fracción 6 129 ± 15 2.40 ± 0.57 NaCl 0.25M 852 + 22 1.58 + 0.63 577 ± 46 1.07 ± 0.38 446 ± 24 0.82 ± 0.59 Concanavalina 22781 ± 8014 23.01 ± 6.19 A 48480 ± 8611 66.96 ± 48 49409 ± 7469 63.8 ± 39 42183 ± 10112 58.2 ± 19 Parásitos 2933 + 429 3.22 ± 0.11 en etapa de amastigotos Medio de 539 ± 74 1.0 ± 0.2 cultivo (continuación de la tabla 13} CURADO DESPUÉS DE VACUNACION n = 2 DEAE cpm/pozo S.I. Sephadex X ± X ± Desviación Desviación estándar estándar Fracción 1 826 ± 104 1.78 ± 0.42 sin NaCl 518 ± 74 1.11 ± 0.62 551 ± 42 1.1 ± 0.63 377 ± 27 0.812 ± 0.3 Fracción 2 2201 ± 419 3.52 ± 0.82 NaCl 0.05M 1840 + 1895 2.41 ± 1.89 1238 + 1093 1.68 ± 0.97 1259 ± 1256 1.66 ± 1.23 Fracción 3 3681 + 170 6.08 + 2.25 NaCl 0.1M 4178 ± 1306 7.41 ± 5.06 3802 ± 1792 6.96 ± 5.61 2775 ± 276 4.53 ± 1.45 Fracción 4 2797 ± 1204 4 .24 ± 0 .08 NaCl 0.15M 3734 + 2376 5 .40 + 1 .39 1539 ± 182 2 .63 ± 1 .37 1151 ± 442 1 .76 + 0 .06 Fracción 5 2612 + 1583 4 .90 4 .44 NaCl 0.2M 1648 ± 165 2 .80 + 1 .41 2324 ± 2119 4 .60 ± 5 .13 1235 ± 150 2 .11 + 1 .1 Fracción 6 1583 + 640 3 .41 + 1 .5 NaCl 0.25M 1659 + 315 3 .57 ± 0 .95 592 ± 92 1 .27 ± 0 .47 491 ± 27 1 .05 ± 0 .35 Concanavalxna 10028 ± 4113 21.61 ± 11.25 A 24309 ± 12540 52.39 ± 36 43290 ± 6532 93.29 ± 22.5 35165 ± 4526 75.78 ± 36.5 Parásitos 2500 ± 715 5.38 ± 1.2 en etapa de amastigotos 3032 + 1256 6.5 ± 3.4 Medio de 464 ± 59 1.0 + 0 cultivo En la tabla 13 dos grupos de pacientes son evidentes antes de la vacunación, específicamente un grupo con S.I. < 1.0 y otro grupo con S.I. > 1.0. El grupo de pacientes curados después de la clonación tiene valores notablemente incrementados en comparación con cualquiera de estos grupos antes de vacunación. Los resultados del análisis estadístico son los siguientes: Grupo con S.I. < 1.0 Antes de vacunación Después de vacunación Parámetro Media 1.089583 3.205 Número de 24 24 puntos Desviación .4250269 1.938181 estándar Error estándar 8.675825 E-02 .3956296 Mínimo .55 .81 Máximo 1.95 7.41 Prueba t Apareada: Diferencia media = -2.115417 (Media de diferencias apareadas) Intervalo de confianza de 95% de la diferencia: -3.008944 a 1.22189 Valor p de dos colas es <0.0001 extremadamente significativo-. Grupo con S . I . > 1.0 Antes de vacunación Después de vacunación Parámetro Media 1.814167 3.205 Número de 24 24 puntos Desviación .8092286 1.938181 estándar Error estándar .165183 .3956296 Mínimo .83 .81 Máximo 3.92 7.41 Prueba t no apareada: Diferencia media = -.7285719 (Media de B menos media de A) Intervalo de confianza de 95% de la diferencia: -1.3904 a -6.674413E-02 Valor p de dos colas es < 0.0316 significativo- Estos resultados demuestran que los linfocitos de grupos de pacientes antes de vacunación son significativamente estimulados por vacunación con cualquiera de las fracciones del extracto L (L)venezuelensis. Un índice de estimulación mayor fue observado con las fracciones 3 y 4 así como amastigotos vivos. Siete fracciones fueron separadas del extracto L (L) amazonensis (PMH8) , el cuarto componente del agente inmunoterapéutico de primera generación, después de tratamiento de los parásitos respectivos en etapa de amastigoto con TLCK y extracción con NP-40 de conformidad con lo previamente mencionado . TABLA 14: Blastogénesis de células mononucleares de sangre periférica con fracciones de L. (L)Amazonensis (P H8) , antes y después de vacunación. ANTES DE VACUNACIÓN n = 4, S.I. < 1.0 DEAE ug de cpm/pozo S.I. Sephadex proteína/ X ± X + pozo Desviación Desviación estándar estándar Fracción 1 20.00 450 + 22 0.84 + 0.1 sin NaCl 10.00 371 ± 19 0.70 ± 0.35 5.00 392 + 45 0.74 ± 0.14 2.50 480 + 62 0.9 + 0.32 Fracción 2 20.00 735 + 405 0.64 ± 0.16 NaCl 0.05M 10.00 574 ± 356 0.59 ± 0.26 5.0 580 + 238 0.60 + 0.13 2.50 522 + 68 0.61 ± 0.25 Fracción 3 20.00 885 ± 928 0.84 + 0.61 NaCl 0.1M 10.00 585 ± 164 0.59 ± 0.16 5.00 676 ± 284 0.75 ± 0.08 2.50 593 ± 398 0.81 + 0.51 Fracción 4 20.00 733 ± 64 1.38 ± 0.6 NaCl 0.15M 10.00 428 ± 26 0.84 ± 0.2 5.00 297 ± 37 0.56 + 0.15 2.50 374 ± 29 0.70 ± 0.14 Fracción 5 20.00 236 ± 16 0.44 ± 0.2 NaCl 0.2M 10.00 383 + 45 0.72 + 0.15 5.00 250 ± 39 0.47 + 0.18 2.50 276 + 52 0.52 ± 0.27 Fracción 6 20.00 251 ± 45 0.47 ± 0.14 NaCl 0.25M 10.00 284 ± 17 0.53 ± 0.21 5.00 262 ± 26 0.49 ± 0.11 2.50 264 ± 32 0.49 ± 0.12 Fracción 7 20.00 1038 ± 453 2.03 ± 0.5 NaCl 0.3M 10.00 507 + 144 0.96 ± 0.32 5.00 395 ± 61 0.74 ± 0.37 2.50 485 ± 56 0.91 ± 0.26 Concanavalína 10.00 33179 + 9137 37.67 ± 16.2 A 5.00 31012 + 12118 36.31 ± 7.42 Parásitos 4 X 10É 1775 + 702 2.15 ± 0.67 en etapa de amastigotos Medio de 510 + 89 1.00 + 0.1 cultivo (continuación de la tabla 14) ANTES DE VACUNACIÓN n = 4, S.I. > 1.0 DEAE cpm/pozo S.I. Sephadex X ± X ± Desviación Desviación estándar estándar Fracción 1 265 ± 22 1 + 0 sin NaCl 285 ± 45 1.07 ± 0.3 448 ± 17 1.69 + 0.45 311 ± 42 1.17 ± 0.25 Fracción 2 3576 + 4474 3.37 + 2.57 NaCl 0.05M 1107 + 1066 1.38 ± 0.07 1181 ± 1311 1.29 ± 0.47 1173 ± 1217 1.37 ± 0.27 Fracción 3 1488 ± 1524 1.76 ± 0.3 NaCl 0.1M 1582 ± 285 3.29 ± 2.71 1073 ± 850 1.53 ± 0.35 1267 ± 1003 1.81 ± 0.41 Fracción 4 349 + 15 1.31 ± 0.4 NaCl 0.15M 1293 ± 254 4.87 ± 0.52 627 ± 90 2.36 ± 0.45 397 + 26 1.49 ± 0.65 Fracción 5 287 ± 46 1.08 ± 0.4 NaCl 0.2M 231 ± 26 0.87 ± 0.22 236 ± 39 0.89 ± 0.16 302 ± 11 1.13 ± 0.45 Fracción 6 265 ± 93 1. ± 0 NaCl 0.25M 250 ± 42 0.94 ± 0.4 323 + 196 1.22 + 0.38 298 ± 29 1.12 ± 0.6 Fracción 7 522 ± 125 1.97 + 0.5 NaCl 0.3M 697 ± 74 2.63 + 0.58 611 + 85 2.30 + 0.45 626 ± 92 2.36 + 0.62 Concanavalina 25676 + 13921 43.56 i : 22.88 A 39742 ± 3747 86.32 + 75.86 Parásitos 2271 ± 2564 2.44 + 1.0 En etapa de amastigotos Medio de 265 + 59 1.0 ± 0 cultivo (continuación de la tabla 14) CURADO DESPUÉS DE VACUNACIÓN n = 4 DEAE cpm/pozo S.I. Sephadex X ± X ± Desviación Desviación estándar estándar Fracción 1 1525 + 1374 1 .48 + 0 .97 sin NaCl 1392 + 1222 1 .95 + 1 .27 1211 + 584 1 .79 ± 0 .46 1152 ± 733 1 .67 + 0 .71 Fracción 2 1614 ± 1540 2 .22 + 1 .66 NaCl 0.05M 1939 + 1297 2 .24 ± 1 .35 1569 + 970 2 .28 ± 1 .10 1180 ± 1225 1 .61 + 1 .3 Fracción 3 1716 + 1355 2 .49 ± 1 .49 NaCl 0.1M 2453 + 2095 3 .56 ± 2 .31 807 + 423 1 .21 + 0 .42 807 ± 452 1 .20 ± 0 .45 Fracción 4 1759 ± 374 2 .80 ± 0 .74 NaCl 0.15M 1424 ± 152 1 .57 + 0 .72 927 ± 97 1 .49 + 0 .4 939 + 559 1 .41 + 0 .78 Fracción 5 442 ± 226 0 .74 + 0 .5 NaCl 0.2M 421 ± 127 0 .67 + 0 .24 280 ± 55 0 .44 ± 0 .09 334 + 43 0 .54 ± 0 .17 Fracción 6 779 + 354 1 .05 + 0 .11 NaCl 0.25M 679 ± 235. 1 .03 ± 0 .24 532 + 222 1 .01 + 0 .26 450 + 236 0 .73 ± 0 .48 Fracción 7 1074 + 658 1.62 ± 0.92 NaCl 0.3M 668 ± 275 1.01 ± 0.27 898 ± 674 1.37 ± 0.9 732 ± 403 1.09 ± 0.52 Concanavalina 18975 ± 10149 28.27 ± 11.54 A 17425 ± 7521 26.31 ± 8.18 Parásitos 3027 ± 2268 4.33 + 2.69 En etapa de amastigotos Medio de 529 ± 67 1.0 ± 0 cultivo En la tabla 14, dos grupos de pacientes son evidentes antes de vacunación, específicamente, un grupo con S.I. < 1.0 y otro grupo con S.I. > 1.0. El grupo de pacientes curados después de vacunación presenta valores notablemente incrementados en comparación con cualesquiera de estos grupos antes de vacunación. Los resultados del análisis estadístico son los siguientes: Grupo con S.I. < 1.0 Antes de vacunación Después de vacunación Parámetro Media .7007408 1.271786 Número de 27 28 puntos Desviación .2043736 .5430509 estándar Error estándar .0393317. .102627 Mínimo .45 .47 Máximo 1.39 3.15 Prueba t no apareada: Diferencia media = -.5710449 (Media de diferencias apareadas) Intervalo de confianza de 95% de la diferencia: -.3475174 o .7945725 Valor p de dos colas es <0.0001 extremadamente significativo-.

Grupo con S . I . > 1.0 Antes de vacunación Después de vacunación Parámetro Media 1.726786 1.271786 Número de 28 28 puntos Desviación .9234719 .5430509 estándar Error estándar .1745198 .102627 Mínimo .88 .47 Máximo 4.88 3.15 Prueba t no apareada: Diferencia media = -.4549999 (Media de B menos media de A) Intervalo de confianza de 95% de la diferencia: -.8608927 a -4.910712E-02 Valor p de dos colas es <0.0287 extremadamente significativo-. Grupo con S . I . > 1.0 Estos resultados muestran que linfocitos de ambos grupos de pacientes antes de vacunación son significativamente estimulados por vacunación con cualquiera de las reacciones del extracto L. (L) a azonensis. Un Índice de estimulación más alto fue observado con fracciones 3 y 4 asi como con amastigotos vivos. En resumen, cada uno de los experimentos de blastogénesis demuestra que la vacunación con cualquiera de las fracciones de proteí a a partir de cada una de las especies de Leishmania incluida en el agente inmunoterapéutico, de primera generación, y especialmente las fracciones 3 y 4, resulta en una estimulación significativa de los linfocitos. Los linfocitos estimulados producen citocinas que pueden inhibir la respuesta inflamatoria en pacientes psoriáticos, induciendo así una remisión clínica de las lesiones psoriáticos . EJEMPLO 14 Inmunidad humoral en pacientes psoriáticos TABLA 15: ELISA en pacientes psoriáticos antes y después de vacunación. (O'Daly y colaboradores 1994 Acta Trópica 56:265-287). Número de Dosis de agente Densidad óptica 405 nm pacientes inmunoterapéutico (promedio + desviación estándar) La Lv 36 0 0.21 + 0.20 0.40 ± 0.18 13 1 0.12 ± 0.00 0.21 ± 0.09 18 2 0.37 ± 0.27 0.35 ± 0.16 17 3 0.47 + 0.22 0.38 ± 0.15 12 4 0.41 + 0.28 0.30 + 0.11 12 6 0.38 ± 0.27 0.34 + 0.18 16 Leishmaniasis 0.91 + 0.27 0.82 ± 0.21 activa (continuación de la tabla 15) Número de Dosis de agente Densidad óptica 405 nm pacientes inmunoterapéuti (promedio + desviación estándar) Lb Lch 36 0.37 + 0.22 0.35 ± 0.18 13 1 0.22 + 0.10 0.19 ± 0.07 18 2 0.32 + 0.17 0.33 ± 0.14 17 3 0.41 ± 0.20 0.36 ± 0.10 12 4 0.22 ± 0.09 0.26 ± 0.03 12 6 0.36 ± 0.05 0.30 ± 0.01 16 Leishmaniasis 0.77 ± 0.27 0.92 ± 0.26 activa La: Leishmania amazonensis ; Lv: L. venezuelensis Lb: L. brasiliensis ; Lch: L. chagasi Sueros de pacientes con psoriasis fueron ensayados antes y después de vacunación con un ensayo inmunoabsorbente unido a enzimas (ELISA), cuyos resultados se muestran en la tabla 15. No se observaron diferencias en cuanto a valores de densidad óptica entre las muestras antes de vacunación y después de vacunación con relación a remisión clínica de lesiones después de seis dosis del agente inmunoterapéutico de primera generación. El punto de corte para una reacción positiva puede ser 0.5 unidad. Los únicos sueros positivos pertenecieron a muestras de pacientes con leishmaniasis activa. Esto demuestra que el agente inmunoterapéutico de primera generación no está induciendo inmunidad humoral ni respuestas TH2. EJEMPLO 15 Inmunidad celular en pacientes psoriáticos TABLA 16: Reacción intradérmica a fracciones antigénicas en pacientes después de remisión clínica de psoriasis. DIAMETRO DE IDR ( m) Parásito Pacientes FRACCIONES DE CROMATOGRAFÍA 1 2 3 L.(L)c agasi 15 5.3 ± 3.5 8.6 ± 5.8 21.7 ± 5.0 L. (V) brasiliensis 20 3.4 ± 3.1 8.2 ± 6.2 14.9 ± 5.5 (continuación de la tabla 16) DIÁMETRO DE IDR (mm) Parásito FRACCIONES DE CROMATOGRAFÍA 4 5 6 L. (L)chagasi 12.3 ± 5.8 11.4 ± 6.2 5.8 ± 4.8 L. (V) brasiliensis 10.8 ± 4.9 5.8 + 4.2 3.2 + 1.9 (continuación de la tabla 16) DIÁMETRO DE IDR (mm) Parásito FRACCIONES DE CROMATOGRAFÍA 7 P1 L.(L)chagasi 4.5 ± 3.3 < 0.0001 L. (V) brasiliensis 3.0 ± 1.9 < 0.0001 Fracción 3 versus otras fracciones Los resultados de ensayos de reacción intradérmica para inmunidad celular se muestran en la tabla 16. Los datos indican que el agente inmunoterapéutico de primera generación está induciendo una respuesta THl en pacientes con psoriasis curada. Tres de los componentes antigénicos para L. (L) chagasi y L. (V) brasiliensis del agente inmunoterapéutico de primera generación demuestra la mayor actividad inmunogénica in vivo con el ensayo de reacción intradérmica después de remisión clínica de lesiones. La fracción 4 de cualquiera de estas especies muestra también un alto grado de actividad. EJEMPLO 16 Ensayo en simple ciego con agente inmunoterapéutico de segunda generación que contiene fracciones antigénicas de proteínas aisladas. TABLA 17: Respuesta a vacunación con agente inmunoterapéutico de segunda generación Número de Números PASI PASI Pacientes Fracción de dosis inicial final 3 1 2.0 ± 1.0 25.0 + 13.1 10.8 + 4.6 7 2 2.0 + 1.3 24.9 ± 22.4 13.1 ± 23.9 14 3 2.1 ± 1.1 16.1 + 14.7 1.9 ± 2.9 11 4 2.3 ± 0.5 19.3 ± 15.1 2.4 + 3.8 5 2.2 ± 0.8 28.8 + 21.3 13.5 ± 15.5 6 2.3 + 0.6 16.7 ± 1.0 8.2 + 6.8 (continuación de la tabla 17) Número de % de disminución Pacientes Fracción en PASI final 3 1 56.8 7 2 47.4 14 3 88.2 11 4 87.6 8 5 52.8 3 6 50.9 El efecto de vacunación con las fracciones del agente inmunoterapéutico de segunda generación sobre valores de PASI se muestra en la tabla 17. Las fracciones 3 y 4 muestran la mayor actividad para remisión clínica de psoriasis. Dos dosis de agente inmunoterapéutico que incorpora cualquiera de estas fracciones disminuyen P7ASI en 88% de sus valores iniciales en pacientes antes de vacunación. Estas fracciones presentaron también los índices de estimulación más altos en los experimentos de blastogénesis in vitro y el diámetro de reacción intradérmica in vivo mayor (IDR) después de vacunación en pacientes curados de psoriasis. EJEMPLO 17 Identificación y caracterización de fracciones de proteína que inducen la remisión clínica de lesiones psoriáticas Péptidos a partir de geles de acrilamida fueron transferidos a papeles de nitrocelulosa y analizados en las instalaciones de IVBR Protein Chemistry CORE de la Universidad de Florida, Gainsville, Florida. Se efectuó HPLC utilizando un HPLC Hewlett Packard 1090, la digestión fue efectuada con Endo-Lys-C, y el análisis de aminoácidos fue efectuado utilizando un secuenciador de proteínas JABI 494. La homología de secuencias de aminoácidos fue buscada utilizando el programa BLAST.

TABLA 18. Secuencia de aminoácidos de péptidos Fracción de Banda Número de Secuencia proteina péptido 82 12 YEDEINK 16 AQYEDIAQK 13 EIETYHNLLEGGQEDF 80 AQYEDAIQK 10 YEDEINK 10 YEDEINK 73 12 AEAESLY 13 NYSPYYNTIDDL 4 AEAESLYQSK 82 9 ATNAENEFV 22 X YSELNRVIQRLRSI 18 EIETYHNLLEGGQEDF 80 9 YEDEINK 11 AQYEDYAQ 8 YEDEINNK 10 KYEDEINK 73 14 EIEQYLNLLLASYLDF 19 STMQELNSRLASYLDK (continuación de la tabla 18) Fracción de Banda Longitud Homología con proteína de péptido proteínas humanas 82 2 7 QUERATINA TIPO II 9 QUERATINA TIPO II 3 16 QUERATINA TIPO I CITOESQUELETAL 80 9 QUERATINA TIPO II 3 7 QUERATINA TIPO II 4 7 QUERATINA TIPO II 73 7 - 12 QUERATINA TIPO I CITOESQUELETAL 10 QUERATINA TIPO II 82 2 9 QUERATINA TIPO II 16 QUERATINA TIPO II 16 QUERATINA TIPO I CITOESQUELETAL 4 80 3 7 QUERATINA TIPO II 8 QUERATINA TIPO II 8 8 QUERATINA TIPO II 73 4 16 QUERATINA TIPO I CITOESQUELETAL 16 QUERATINA TIPO I CITOESQUELETAL La fracción 3 contenia 3 bandas después de la reducción total y alquilación como se sabe en la técnica. Todas las secuencias de péptidos excepto dos secuencias presentaron homología con proteínas humanas de Queratina Tipo I o II. La fracción 4 mostró resultados similares a la fracción 3. Esta queratina de parásito en etapa de amastigoto explica el efecto de los agentes inmunoterapéuticos de la presente invención sobre los pacientes con psoriasis. Muchos autores han postulado que la psoriasis es un trastorno de la queratina humana a partir de queratinocitos epidérmicos . EJEMPLO 18 Análisis de linfocitos de sangre periférica con citómetro de flujo TABLA 19. Comparación de poblaciones de linfocitos versus controles sanos en pacientes con psoriasis antes de tratamiento . 0 DOSIS CONTROLES P n = 95 n = 49 CD4 30.7 ± 12. 8 4.08 ± 9.6 <0. 0001 CD8 20.3 ± 9.3 28.4 ± 9.7 <0. 0001 CD8-CD4+ 29 ± 9.9 38.9 ± 9.9 <0. 0001 CD3 66.7 ± 9.8 73.2 + 9.8 <0. 0004 CD8+CD3+ 13.1 ± 7.3 19.5 ± 8.6 <0. 0001 HLA+ 34.4 ± 9.5 29.8 ± 11.5 <0. 0150 CD8+HLA- 11.9 ± 5.9 14.7 ± 7 <0. 0129 IgE 6.7 ± 3.8 4.8 ± 2.2 <0. 0061 IgG 0.8 ± 0.5 1.2 ± 0.6 <0. 0026 Todos los pacientes con psoriasis, antes de tratamiento con el agente inmunoterapéutico de primera generación, presentaron poblaciones de linfocitos de sangre periférica significativamente menores que los controles sanos normales, a excepción de marcadores HLA e IgE, que estuvieron presentes en niveles elevados . TABLA 20: Comparación de poblaciones de linfocitos versus controles sanos en pacientes con psoriasis con diferentes grados de severidad de enfermedad siguiendo los valores PASI. PASI 1-9 p versus CONTROL PASI 10-20 p versus CONTROL n = 38 n = 49 n = 32 n = 49 CD 5 98.9 ± 1.4 0 .1283 99.0 + 0.1 0 .1 CD4 36.6 ± 9.2 0 .0353 34.7 + 12.6 0 .0334 CD8 23.1 ± 8.6 0 .0047 20.0 + 9.3 0 .0008 CD8+CD4+ 2.2 ± 1.5 0 .6253 1.7 ± 1.3 0 .8163 CD8-CD4+ 36.3 ± 9.7 0 .1838 28.6 ± 10.4 0 .0014 CD3 70.8 ± 9.4 0 .1100 66.3 + 10.9 0 .0055 CD3+CD8- 57.1 ± 10 0 .0765 51.2 + 11.6 0 .9311 CD8+CD3+ 15.5 ± 8.5 0 .0184 14.0 ± 8.5 0 .0100 CD8+CD3- 6.8 ± 3.6 0 .4337 4.7 ± 2.6 0 .1182 TCR 2.1 ± 1 0 .4337 2.1 ± 1.7 0 .3633 HLA+ 32.5 ± 7.9 0 .3389 32.8 ± 7.7 0 .2202 CD8+HLA+ 8.4 ± 4.9 0 .0574 7.6 + 5.2 0 .0418 CD8+HLA- 12.1 ± 4.6 0 .0483 12.6 ± 5.8 0 .1801 CD19 7.4 ± 3.6 0 .8455 8.4 ± 4.3 0 .2806 (continuación de la tabla 20} PASI 21-65 p versus CONTROL n = 25 n = 49 CD 5 98.9 ± 1.2 0.1 CD4 22.4 ± 10.2 <0.0001 CD8 18.0 ± 6.7 <0.0001 CD8+CD4+ 1.6 ± 1.1 0.8379 CD8-CD4+ 28.1 ± 8.3 <0.0001 CD3 62.0 ± 9.8 <0.0001 CD3+CD8- 51.3 + 7.9 0.9802 CD8+CD3+ 12.8 ± 6.9 0.0030 CD8+CD3- 4.4 + 3.9 0.0344 TCR 2.1 + 0.8 0.1441 HLA+ 35.8 + 9.2 0.0424 CD8+HLA+ 12.8 ± 9.6 0.4227 CD8+HLA- 9.8 ± 3.7 0.0039 CD19 8.0 ± 3.5 0.5216 Poblaciones de linfocitos de sangre periférica fueron estudiadas en pacientes con psoriasis antes de tratamiento con el agente inmunoterapéutico de primera generación. Pacientes fueron distribuidos de conformidad con la severidad de la enfermedad, tabulados de conformidad con valores PASI. Los resultados se muestran en la tabla 20. Conforme los valores PASI se incrementaron en pacientes con psoriasis, poblaciones de linfocitos de sangre periférica de CD4+, CD8+, CD8-CD4+, CD3, CD8+CD3+, CD8+CD3-, CD8+HLA- disminuyeron mientras que poblaciones de HLA+ se elevaron en comparación con los controles sanos. En el grupo con PASI 1-9, solamente cuatro poblaciones de linfocitos fueron inferiores a los valores de control mientras que en el grupo con PASI 21-65, siete poblaciones de linfocitos fueron inferiores a los valores para controles sanos. Esto sugiere que los linfocitos migran desde la sangre periférica hasta la dermis y epidermis en la piel de pacientes psoriáticos para inducir la inflamación crónica característica de la enfermedad. TABLA 21: Comparación de poblaciones de linfocitos en pacientes con psoriasis con diferentes grados de severidad de la enfermedad. PASI PASI P [1-9] [10-20] CD4+ 36.6 ± 9.2 30.5 ± 13. 9 <0 .4982 CD8+ 23.1 ± 8.6 23.8 ± 13. 5 <0 .1984 CD8+CD4+ 2.2 ± 1.5 2.0 ± 2.1 <0 .2139 CD8+CD4+ 36.3 ± 9.7 26.7 ± 12. 1 <0 .0330 CD3 70.8 ± 9.4 67.5 ± 11. 5 <0 .0792 CD3+CD8- 57.1 ± 10.0 50 ± 14.2 <0 .0476 CD8-HLA- 12.1 ± 4.6 13.0 ± 6.1 <0 .07337 IGA+ 5.1 ± 2.9 7.4 + 3.6 <0 .0443 IGD+ 11.5 ± 3.5 16.4 ± 9 <0 .0387 (continuación de la tabla 21) I.C. 95% PASI P [>20] CD4+ - 22.4 ± 10.2 <0.0001 CD8+ - 18.0 ± 6.7 <0.039 CD8+CD4+ - 1.6 ± 1.1 <0.0001 CD8+CD4+ [-14.7 a -0.6] 23.1 ± 8.3 <0.0001 CD3 - 62.0 ± 9.8 <0.0002 CD3+CD8- [-11.9 a 0.05] 51.3 ± 7.9 <0.0118 CD8-HLA- - 9.8 ± 3.7 <0.0310 IGA+ [0.06 a 4.6] 10.5 ± 7.0 <0.0001 IGD+ [0.17 a 6.25] 14.9 + 6.0 <0.1462 (continuación de la tabla 21) I.C. 95% CD4+ [-19.1 a -9.7] CD8+ [-9.3 a -1.8] CD8+CD4+ [34.2 a 44.5] CD8+CD4+ [-20 a -7.5] CD3 [-15.5 a -4.9] CD3+CD8- [-13.9 a -1.8] CD8-HLA- [-4.4 a -0.21] IGA+ [5.3 a 12.8] IGD+ - Se observan diferencias significativas en cuanto a poblaciones de linfocitos entre pacientes con diferentes valores de PASI. La comparación de los grupos 1-9 y 10-20 muestra cuatro poblaciones de linfocitos con valores inferiores en el grupo con una psoriasis más severa. La comparación entre grupos con PASI 1-9 y PASI mayor que 20 unidades mostró siete poblaciones de linfocitos con valores inferiores en el grupo con lesiones psoriáticas severas. Los linfocitos IgA+ fueron mayores en el grupo con enfermedad más severa . TABLA 22: Comparación de poblaciones de linfocitos versus controles sanos en pacientes con psoriasis con remisión total de lesiones después de más de 10 dosis de agente inmunoterapéutico de primera generación. Pacientes curados > 10 dosis de agente inmunoterapéutico. p versus CONTROL n = 49 n = 49 CD45 99.2 ± 0.4 0.1283 CD45 RO 43.9 ± 7.0 0.5406 CD4 43.2 ± 9.4 0.7561 CD8 27.3 ± 6.6 0.3985 CD8+CD4+ 1.4 ± 0.7 0.2537 CD8+CD4+ 40.5 + 6.6 0.9923 CD3 70.0 + 9.5 0.063 CD3+CD8+ 51.7 + 9.2 0.5583 CD8+CD3+ 16.2 ± 5.0 0.0634 HLA+ 39.1 ± 9.6 0.0108 CD8HLA+ 14.9 + 7.1 0.0766 CD8HLA- 12.4 ± 4.0 0.1113 CD19 10.9 ± 4.9 0.0031 Después de la remisión clínica de lesiones todas las poblaciones de linfocitos de sangre periférica regresaron a valores normales, similar a los controles sanos. Solamente las poblaciones de linfocitos HLA+ y CD19 presentaron valores más altos que los controles normales, probablemente debido a la estimulación de linfocitos después de tratamiento con agente inmunoterapéutico. La descripción anterior de modalidades específicas es solamente ilustrativa y varias modificaciones pueden llevarse a cabo sin desviarse del espíritu y alcance de la presente invención que es limitada solamente por las reivindicaciones siguientes .

LISTA DE SECUENCIAS <110> O'Daly, José <120> COMPOSICIONES Y MÉTODOS PARA EL TRATAMIENTO Y LA REMISIÓN CLÍNICA DE LA PSORIASIS <130> 302178 <140> US/09/809,003 <141> 2001-03-16 <160> 14 <170> Patentln Versión 3.0 <210> 1 <211> 7 <212> PRT <213> Leishmania <400> 1 Tyr Glu Asp Glu lie Asn Lys 1 5 <210> 2 <211> 9 <212> PRT <213> Leishmania <400> 2 Ala Gln Tyr Glu Asp lie Ala Gln Lys 1 5 <210> 3 <211> 16 <212> PRT <213> Leishmania <400> 3 Glu lie Glu Thr Tyr His Asn Leu Leu Glu Gly Gly Gln Glu 1 5 10 Asp P e 15 <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Leishmania <400> 4 Ala Gln Tyr Glu Asp Ala lie Gln Lys 1 5 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Leishmania <400> 5 Ala Glu Ala Glu Ser Leu Tyr 1 5 <210> 6 <211> 12 <212> PRT <213> Leishmania <400> 6 Asn Tyr Ser Pro Tyr Tyr Asn Thr lie Asp Asp Leu 1 5 10 <210> 7 <211> 10 <212> PRT <213> Leishmania <400> 7 Ala Glu Ala Glu Ser Leu Tyr Gln Ser Lys 1 5 10 <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> Leishmania <400> 8 Ala Thr Asn Ala Glu Asn Glu Phe Val 1 5 <210> 9 <211> 16 <212> PRT <213> Leishmania <220> <221> Xaa <222> (1) .. (3) <223> Xaa es aminoácido desconocido <400> 9 Xaa Xaa Xaa Ser Glu Leu Asn Arg Val lie Gln Arg Leu Arg Ser 1 5 10 15 lie <210> 10 <211> 8 <212> PRT <213> Leishmania <400> 10 Ala Gln Tyr Glu Asp Tyr Ala Gln 1 5 <210> 11 <211> 8 <212> PRT <213> Leishmania <400> 11 Tyr Glu Asp Glu lie Asn Asn Lys 1 5 <210> 12 <211> 8 <212> PRT <213> Leishmania <400> 12 Lys Tyr Glu Asp Glu lie Asn Lys 1 5 <210> 13 <211> 16 <212> PRT <213> Leis mania <400> 13 Glu lie Glu Gln Tyr Leu Asn Leu Leu Leu Ala Ser Tyr Leu Asp 1 5 10 15 Phe <210> 14 <211> 16 <212> PRT <213> Leishmania <400> 14 Ser Thr Met Gln Glu Leu Asn Ser Arg Leu Ala Ser Tyr Leu Asp 1 5 10 15 Lys

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES Un polipéptido que comprende una secuencia aislada de aminoácidos o variantes inmunogénicas de la misma que se selecciona dentro del grupo que consiste de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, y SEQ ID NO: 14. Un agente inmunoterapéutico para el tratamiento de la psoriasis que comprende por lo menos uno de los polipéptidos de la reivindicación 1. El agente inmunoterapéutico de la reivindicación 2 que comprende además alúmina. Un polipéptido que consiste de una secuencia aislada de aminoácidos seleccionada dentro del grupo que consiste de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, y SEQ ID NO: 14. Un agente inmunoterapéutico para el tratamiento de la psoriasis, que comprende por lo menos uno de los polipéptidos de la reivindicación 4. El agente inmunoterapéutico de conformidad con la reivindicación 5 que comprende además alúmina. Un polipéptido que comprende por lo menos una porción inmunogénica de una secuencia de aminoácidos de una proteina aislada de protozoarios del genero de Leishmania, o una variante inmunogénica del mismo, en donde la porción inmunogénica puede causar que una respuesta inmune resulte en un abatimiento de los síntomas clínicos de la psoriasis en donde la proteína se selecciona dentro del grupo que consiste de polipéptidos de antígeno en partículas que tienen unos pesos moleculares aparentes de 21, 33, 44, 50, 55, 58, 65 y 77 kDa. Un agente i munoterapéutico para el tratamiento de la psoriasis, que comprende por lo menos un polipéptido aislado de protozoarios del genero de Leishmania, el por lo menos un polipéptido se selecciona dentro del grupo que consiste de polipéptidos de antígeno en partículas que tienen pesos moleculares aparentes después de reducción total y alquilación de 73, 80 y 82 kDa. El agente inmunoterapéutico de conformidad con la reivindicación 8 que comprende además alúmina. El agente inmunoterapéutico de conformidad con la reivindicación 8, en donde los protozoarios de género Leishmania comprenden además por lo menos una especie seleccionada dentro del grupo que consiste de L. ( ) amazonensisr L. (L) venezuelensis, L. (V)brasiliensis, L. (L) chagasi r L. (L) donovani, L. (L)infantum, L. (L)major, L. (L)panamensis, L. (L) trópica, y L. (L) guyanensis. 11. El agente inmuno-terapéutico de conformidad con la reivindicación 10 que comprende además alúmina. 12. El agente inmunoterapéutico de conformidad con la reivindicación 8, en donde el protozoario del género de Leishmania consiste de una mezcla de L. (L) amazonensis, L. ( )venezuelensis, L. (V)brasiliensis, y . (L) chagasi. 13. El agente inmunoterapéutico de conformidad con la reivindicación 12 que comprende además alúmina. 14. Un agente inmunoterapéutico para el tratamiento de la psoriasis que comprende varios péptidos aislados de protozoarios del genero de Leishmania, los varios polipéptidos son seleccionados dentro del grupo que consiste de polipéptidos de antígeno en partículas que tienen pesos moleculares aparentes de 21, 33, 44, 50, 55, 58, 65 y 77 kDa. 15. El agente inmunoterapéutico de conformidad con la reivindicación 14 que comprende además alúmina. 16. El agente inmunoterapéutico de conformidad con la reivindicación 14, en donde el protozoario de género de Leishmania comprenden además por lo menos una especie seleccionada dentro del grupo que consiste de L. (L) amazonensis, L. (L) venezuelensisr L. (V)brasiliensis, L. (L) chagasi, L. (L) donovani, L. (L) infantum, L. ( )major, L. (L)panamensis, L. (L)txopica, y L. (L) guyanensis. 17. El agente inmunoterapéutico de conformidad con la reivindicación 16 que comprende además alúmina. 18. El agente inmunoterapéutico de conformidad con la reivindicación 14, en donde los protozoarios del género de Leishmania consisten de una mezcla de L. ( ) amazonensis, L. (L) venezuelensis, L. (V)brasiliensis, y L. (L) chagasi . 19. El agente inmunoterapéutico de conformidad con la reivindicación 18 que comprende además alúmina. 20. Una secuencia aislada de ácido nucleico o su complemento que codifica por lo menos una secuencia de aminoácidos o variantes inmunogénicas del mismo seleccionada dentro del grupo que consiste de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, y SEQ ID NO: 14. 21. Un vector de una sola cadena que comprende la secuencia aislada de ácido nucleico de la reivindicación 20. 22. Un vector de una sola cadena que comprende la secuencia aislada de ácido nucleico de la reivindicación 20, hibridada con su complemento. Una secuencia aislada de ácido nucleico o una variante inmunogénica de la misma, o su complemento, que codifica por lo menos una porción inmunogénica de una secuencia de aminoácidos de un polipéptido aislado a partir de protozoarios del genero de Leishmania, seleccionados dentro del grupo que consiste de polipéptidos de antigeno en partículas que tienen pesos moleculares aparentes de 21, 33, 44, 50, 55, 58, 65 y 77 kDa, en donde la porción inmunogénica puede provocar una respuesta inmune para resultar en el abatimiento de los síntomas clínicos de la psoriasis. Un vector de una sola cadena que comprende la secuencia aislada de ácido nucleico de la reivindicación 23. Un vector de cadena doble que comprende la secuencia aislada de ácido nucleico de la reivindicación 23, hibridada con su complemento. Un método para la producción de polipéptidos para el tratamiento y la remisión clínica de psoriasis que comprende la transformación de por lo menos una célula huésped microbiana con el vector de la reivindicación 21, 22, 24 ó 25, la selección de las células huéspedes microbianas transformadas, en cultivo de las células huéspedes microbianas transformadas, y la purificación de los polipéptidos . Una célula huésped microbiana transformada por el vector de la reivindicación 21, 22, 24 ó 25. Un método para la producción de polipéptidos para el tratamiento y la remisión clínica de la psoriasis que comprende la transducción de por lo menos una célula huésped microbiana con un ácido nucleico que comprende la secuencia aislada de ácido nucleico de la reivindicación 20 ó 23, o la secuencia aislada de ácido nucleico de la reivindicación 20 ó 23 hibridada en su complemento, la selección de células huéspedes microbianas transfectadas, el cultivo de las células huéspedes microbianas transfectadas, y la purificación de los polipéptidos . Una célula huésped microbiana transfectada por un ácido nucleico de una sola cadena, que comprende la secuencia aislada de ácido nucleico de la reivindicación 21 ó 24. Una célula huésped microbiana transfectada por un ácido nucleico de cadena doble, que comprende la secuencia aislada de ácido nucleico de la reivindicación 22 ó 25 hibridada con su complemento. Un método para la producción de polipéptidos para el tratamiento y la remisión clínica de la psoriasis que comprende la transducción de por lo menos una célula huésped microbiana con un ácido nucleico que comprende la secuencia aislada de ácido nucleico de la reivindicación 20 ó 23, o bien la secuencia aislada de ácido nucleico de la reivindicación 20 ó 23 hibridada en su complemento, la selección de las células huéspedes microbianas transducidas, el cultivo de las células huéspedes microbianas transducidas, y la purificación de los polipéptidos . 32. Una célula huésped microbiana transducida con un ácido nucleico de una sola cadena, que comprende la secuencia aislada de ácido nucleico de la reivindicación 20 ó 23. 33. Una célula huésped microbiana transducida con un ácido nucleico de cadena doble, que comprende la secuencia aislada de ácido nucleico de la reivindicación 20 ó 23 hibridada con su complemento . 34. Un método para el tratamiento y la remisión clínica de la psoriasis que comprende la administración de una cantidad terapéutica efectiva de una composición farmacéutica que comprende el polipéptido de la reivindicación 1, 3 ó 7, a un animal de sangre caliente. 35. Un método para el tratamiento y la remisión clínica de la psoriasis, que comprende la administración de una cantidad terapéutica efectiva de una composición farmacéutica que comprende el polipéptido de la reivindicación 1, 3 ó 7, a una persona. 36. Un método para el tratamiento y la remisión clínica de la psoriasis que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición farmacéutica que comprende la secuencia aislada de ácido nucleico de la reivindicación 20 ó 23, a un animal de sangre caliente. Un método para el tratamiento y la remisión clínica de la psoriasis, que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición farmacéutica que comprende la secuencia aislada de ácido nucleico de la reivindicación 20 ó 23, a una persona. La secuencia aislada de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 20 ó 23 para su uso como sonda. Un agente inmunoterapéutico capaz de provocar una respuesta inmune para que resulte en el abatimiento de los síntomas clínicos de psoriasis, el agente comprende un extracto de proteína purificada del genero de Leisnmania que tiene secuencias de aminoácidos aisladas que comprenden SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, y SEQ ID NO: 14. El agente de conformidad con la reivindicación 39 que comprende además alúmina. El agente de conformidad con la reivindicación 39, en donde dicho extracto de proteína consiste de por lo menos una especie seleccionada entre . (L) amazonensls, L. (L)venezuelensis, L. (V)brasiliensisr L. ( )chagasi, L. (L) donovani, L. ( ) infantum, . (L)major, L. ( )panamensis, L. (L) trópica, y . (L) guyanensis. El agente de conformidad con la reivindicación 41 que comprende además alúmina. El agente de conformidad con la reivindicación 39, en donde dicho extracto de proteina consiste de una mezcla de L. (L) amazonensis, L. (L) venezuelensis, L. (V)brasiliensis, y L. (L) chagasi . El agente de conformidad con la reivindicación 43 que comprende además alúmina. El agente de conformidad con la reivindicación 39, en donde dicho extracto de proteina comprende L. (V)brasiliensis. El agente de conformidad con la reivindicación 45 que comprende además alúmina. Un agente inmunoterapéutico capaz de provocar una respuesta inmune para que resulte en el abatimiento de los síntomas clínicos de la psoriasis, el agente es producido de la siguiente manera: cultivar organismos del genero Leishmania en la etapa de amastigoto; someter dichos organismos a un medio efectivo para matar dichos organismos; aislar dichos organismos matados; extraer proteínas de dichos organismos matados; separar fracciones de proteína de dichas proteínas extraídas, dichas fracciones de proteína tienen secuencias aisladas de aminoácidos que comprenden SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, y SEQ ID NO: 14. El agente de conformidad con la reivindicación 47 que comprende además el paso de formar una suspensión de dichas fracciones de proteína, dicha suspensión comprende alúmina . Un agente inmunoterapéutico capaz de provocar una respuesta inmune para que resulte en el abatimiento de los síntomas clínicos de la psoriasis, el agente es producido por: el cultivo de organismos que consisten de una mezcla de L. (L) amazonensis, L. (L)venezuelensisr i. (V)brasiliensisr y . (L) chagasi; dichos organismos encontrándose en la etapa de amastxgoto; someter dichos organismos a un medio efectivo para matar dichos organismos; aislar dichos organismos matados; extraer proteínas de dichos organismos matados; separar, fracciones de proteina de dichas proteínas extraídas, dichas fracciones de proteína tienen secuencias aisladas de aminoácidos que comprenden SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, y SEQ ID NO: 14. El agente de conformidad con la reivindicación 49 que comprende además el paso de formar una suspensión de dichas fracciones de proteína, dicha suspensión comprende alúmina. Un agente inmunoterapéutico capaz de provocar una respuesta inmune para que resulte en el abatimiento de los síntomas clínicos de la psoriasis, el agente es producido de la siguiente manera: cultivar organismos de i. (V)brasiliensis en la etapa de amastigoto; someter dichos organismos a un medio efectivo para matar dichos organismos; aislar dichos organismos matados; extraer proteínas de dichos organismos matados; separar, fracciones de proteína de dichas proteínas extraídas, dichas fracciones de proteína tienen secuencias aisladas de aminoácidos que comprenden SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, y SEQ ID NO: 14. El agente de conformidad con la reivindicación 51, que comprende además el paso de formar una suspensión de dichas fracciones de proteina, dicha suspensión comprende alúmina . RESUMEN DE LA INVENCIÓN Se divulgan polipéptidos que comprenden secuencias de aminoácidos de antigenos en partículas aislados de varias especies de protozoarios Leishmania, o variantes inmunogénicas de los mismos, para el tratamiento y la remisión clínica de la psoriasis. Se divulgan también secuencias de ácido nucleico que codifican tales polipéptidos, vectores que incorporan tales secuencias de ácido nucleico, métodos para manipular genéticamente células huéspedes microbianas para producir tales polipéptidos, y tales células huéspedes microbianas recombinantes . En otra modalidad, se divulgan agentes inmunoterapéuticos que incorporan los polipéptidos de las secuencias de ácido nucleico para el tratamiento y la remisión clínica de la psoriasis. En otra modalidad, se divulgan métodos para la producción de los polipéptidos utilizando células huéspedes microbianas recombinantes. Finalmente, se divulgan métodos para el tratamiento y la remisión clínica de la psoriasis, que comprenden la administración de una composición farmacéutica que incluye uno o varios de los polipéptidos o una o varias de las secuencias de ácido nucleico. Los polipéptidos indujeron una respuesta inmune celular TH1, una reacción intradérmica positiva y una respuesta blastogénica en linfocitos de sangre periférica después de la remisión clínica de las lesiones. Las poblaciones de linfocitos de sangre periférica que son alteradas en pacientes con psoriasis regresaron a los valores normales en pacientes que recibieron los polipéptidos y presentaron una remisión clínica de las lesiones después del tratamiento.