MXPA03001546A - Uso de portadores porosos. - Google Patents

Abstract

Se describe un portador poroso con porosidad interconectada cargado con medicamento u otro material para liberacion controlada del medicamento u otro material.

Description

USO DE PORTADORES POROSOS.

La invención se refiere a los usos de un portador poroso .

En nuestra patente EP0598783B (Agentes referencia P00914PCT (EP) ) hemos descrito y reclamado: "Un método para fabricar un articulo refractario poroso compuesto de partículas refractarias, el método consiste en los pasos de: a) formar una dispersión que contenga partículas en un portador líquido; b) introducir gas en la dispersión; c) retirar el portador líquido para proporcionar un artículo sólido que tenga poros provenientes de las burbujas; d) secar; y e) quema .

Caracterizado porque la dispersión contiene un material monomérico que puede ser polimerizado" .

En nuestra solicitud de patente WO 98/15505 (agentes referencia: P01885PCT) hemos descrito y reclamado: "Un método para fabricar un articulo poroso compuesto de partículas aglomeradas (como pueden ser hidroxiapatita o similares", el método comprende los pasos de: a) formar una dispersión que contenga un portador líquido y las partículas y un material monomérico que pueda ser polimerizado; b) formar una espuma de la dispersión; c) polimerizar la estructura espumada; d) secar la estructura para eliminar el portador líquido y proporcionar un artículo sólido que tenga poros provenientes de las burbujas; y e) quemar el artículo para eliminar el aglomerant orgánico y proporcionar una unión cerámica caracterizado por que las burbujas pequeñas de ga se introducen en la dispersión ccn agitación para formar la espuma y se dejan coalescer antes de la polimerización del material monomérico.

Más específicamente, hemos descrito y reclamado en WO 98/15505: "Un método para fabricar un articulo poroso compuesto de partículas aglomeradas, el método comprende los pasos de: a) formar una dispersión que contenga un portador líquido y las partículas y un material monomérico que pueda ser polimerizado; b) formar una espuma de la dispersión; c) polimerizar la estructura espumada; d) secar la estructura para eliminar el portador líquido y proporcionar un artículo sólido que tenga poros provenientes de las burbujas; y e) quemar el artículo para eliminar el aglomerante orgánico y proporcionar una unión cerámica.

Caracterizado porque las burbujas pequeñas de gas se introducen en la dispersión con agitación para formar la espuma y se deja que se lleve a cabo la coalescencia antes de la polimerización, y porque la combustión se efectúa a una temperatura adecuada para el crecimiento de las células óseas".

En nuestra solicitud de Patente GB 0009731.1 (nuestra referencia: P02810GB) hemos descrito y reclamado un método para fabricar una espuma de cerámica por extrusión a baja presión. Las cerámicas espumadas fabricadas por este método son útiles en la presente invención .

Se propone que todas las descripciones de estas solicitudes anteriores sean incorporadas en la presente solo por sus referencias.

Ahora sorprendentemente se ha descubierto que la estructura de un portador poroso fabricado por los métodos conforme con las solicitudes anteriores hace al portador particularmente conveniente para llevar una amplia gama de materiales y proporcionar control sobre la manera en que los materiales portados pueden ser liberados.

De conformidad con esta invención, en un aspecto se proporciona un portador cerámico poroso preformado que consiste en un esqueleto interconectado que tiene poros la mayor parte de los cuales son en el intervalo desde aproximadamente 20 hasta aproximadamente 1000 mieras, el portador tiene una densidad menor que 40% teórico, los poros contienen un segundo material en estos, siendo controlada la velocidad de liberación del segundo material a partir del portador.

De conformidad con esta invención, el portador consiste en una red cerámica porosa preformada compuesta de un esqueleto interconectado que tiene poros, la mayor parte de los cuales son el intervalo de aproximadamente 20 mieras hasta aproximadamente 1000 mieras y una densidad menor que 40% teórica. El esqueleto esta constituido de andamiaje y columnas. La distribución del tamaño de poro se puede controlar con tamaños de poros promedio en el intervalo de 50 a 800, de preferencia 60 a 650 mieras. El tamaño del poro se optimiza para cumplir con aplicaciones especificas. Por ejemplo, para infiltración celular y vascularización general es adecuado un portador que tenga poros en el intervalo de aproximadamente 50 hasta aproximadamente 1000 mieras, mientras que para el crecimiento interno de células óseas se prefiere poros dentro del intervalo de aproximadamente 100 a aproximadamente 500 mieras. El tamaño de poros necesario para el depósito de materiales degradables dentro de los poros demandará un tamaño de poro más grande para acomodar el espesor o depósito de una capa. Un portador como este puede prepararse por un método conforme con las patentes y solicitudes de patentes antes mencionadas .

El portador tiene una porosidad con interconexión substancialmente total en densidades menores que 30% de la densidad teórica. La densidad puede abarcar desde aproximadamente 10% hasta aproximadamente 40%, de preferencia alrededor de 30%. Si la densidad teórica es menor que 10% de la teórica [sic] , entonces se observa una falta de resistencia y el portador se torna friable. Si la densidad teórica excede 40% la interconectividad puede no ser total y tal no se consideran los tamaños de poros. La densidad se determina por medición física de masa y volumen. El valor teórico se toma de la literatura .

El portador cerámico se puede fabricar a partir de partículas como óxidos y no óxidos. Estos materiales son propiamente estables en agua o tienen un recubrimiento superficial estable en las condiciones del proceso. Los materiales que se han utilizado incluyen alúmina, zircón, espinelas, carburos de silicio, óxido de titanio, NZP, hidroxiapatita u otros derivados de fosfato de calcio, zirconio, cianita, cordierita y similares. La cerámica puede ser completa o parcialmente resorbible, cuando el portador se utiliza para propósitos médicos. El proceso de resorción incluye la eliminación de materiales implantados originales por la acción de los fluidos, enzimas o células corporales. El fosfato de calcio resorbido puede, por ejemplo, ser redepositado como mineral óseo, o de otro modo puede ser reutilizado dentro del cuerpo, o excretado.

De preferencia, el portador cerámico poroso preformado tiene un grado controlado de reticulación. La reticulación debe ser alta para reducir el gradiente de presión que se genera en la infiltración y para llevar al mínimo el nivel de defectos asociados con la contracción térmica diferencial durante el enfriamiento.

La densidad de la cerámica espumada preferentemente es por debajo de 30% para garantizar porosidad con interconexiones substancialmente totales. Mayores densidades pueden ser útiles en casos en los que se necesita un material más denso por razones de resistencia o permeabilidad.

Estos materiales más densos, es decir, densidad mayor que 30% de la densidad teórica pero en el caso de la técnica de espumación con base en la agitación limitada a un máximo de 60% se puede aplicar a los materiales menos densos en el estado verde o quemado para crear gradientes de porosidad a través del articulo poroso. Antes del uso será necesario quemar el articulo. El espesor de estas capas puede variar para adecuarse a la aplicación.

Las capas de mayor densidad hasta completamente densas se pueden aplicar a la cerámica espumada en el estado verde mediante las técnicas de procesamiento como colada en gel, colada por coagulación. Será necesario quemar el articulo antes de su uso.

Las proporciones de las dos fases pueden ajustarse fácilmente de modo que la cerámica espumada constituya el componente principal en volumen del cuerpo formado o la segunda fase, por ejemplo una fase metálica.

La estructura porosa totalmente interconectada permite penetración profunda de los poros del portador. El material penetrante puede formar una matriz continua separada o puede simplemente ser depositado en las paredes interiores.

El material que puede introducirse en los poros puede seleccionarse de una amplia variedad de materiales. Estos incluyen factores de crecimiento como la hormona del crecimiento humana o proteínas morfogenétícas ; macrofagos; antibióticos como penicilina, tetraciclina, mistatina; vitaminas como la vitamina D, proteínas como polipéptidos, proteínas; hormonas y similares. Los materiales específicos incluyen: - Un material de crecimiento óseo - FGF (factor de crecimiento de fibroblastos) IGF-1 IGF-II - PDGF (factor de crecimiento derivado de plaquetas) - TGF-B (factor de crecimiento transformante) - BMP-Z (proteína morfogenética de hueso) - HGH (hormona de crecimiento humana) - Concentraciones de factores de crecimiento provenientes de humanos Otros ejemplos incluyen cuando menos una célula que sea una célula formadora de hueso o degradadora de hueso. Los tipos de células particularmente útiles incluyen condrocitos, osteocitos, osteoblastos, osteoclastos, células primordiales mesenquimales , fibroblastos, células musculares, hepatocitos, células parenquimales, células de origen intestinal, células nerviosas y células de la piel, y se pueden proporcionar como explantes de tejido primarios, preparaciones de explantes de tejido primarios, células aisladas, lineas de células, lineas de células transformadas y células hospederas. El material también puede ser un agente quimioterápico o un agente radio opacificante . Diversos sistemas de suministro de medicamentos anticáncer de liberación sostenida que emplean portadores biomateriales como partículas de carbono, etil éster de ácidos grasos yodados de aceite de semilla de adormidera y coágulos de fibrina se han desarrollado para el suministro de agentes quimioterapéuticos en altas concentraciones durante periodos prolongados y reducen los efectos laterales sistémicos, y estos se pueden incorporar también.

De este modo, la invención puede proporcionar un método para la introducción de una cerámica biocompatible en el cuerpo humano o animal para proporcionar una fuente localizada de medicamentos a una velocidad de liberación controlada para proporcionar tratamiento más eficaz de diversas enfermedades. En particular, la invención permite tratamiento más eficaz de cánceres y tumores y lleva al mínimo los efectos colaterales localizando el tratamiento en sitios específicos dentro del cuerpo para el tratamiento mediante agentes quimioterápicos como cisplatino o tratamiento radiográfico por agentes radioactivos como estroncio - 67 ó samario - 153. En algunos casos estos agentes se prefieren fijados dentro de los poros.

El osteosarcoma es un tumor maligno de hueso en el que el tejido óseo normal se destruye y se produce osteoide neoplásico por la proliferación anormal, estroma de células fusiformes. Es un tumor maligno primario, común, del hueso. La quimioterapia adyuvante, es decir, la cirugía seguida por quimioterapia, como con antimetabolitos, ayuda a prevenir tumores micrometastásicos y la reocurrencia local mientras que permite el crecimiento continuo del hueso como resultado de su selectividad hacia las células neoplásicas. Los antimetabolitos son agentes que interfieren con el metabolismo normal debido a su similitud estructural con intermediarios normales en la síntesis de los precursores de RNA y DNA. Estos sirven como sustratos para enzimas, inhiben enzimas, o ambos. Debido a las diferencias en el metabolismo entre células normales y células cancerosas, algunos antimetabolitos tienen la potencia para actuar con un cierto grado de especificad sobre las células cancerosas .

El metotrexato (MTX) , el análogo 4-amino, 10-metilo del ácido fólico sigue siendo el antifolato de uso más extendido en quimioterapia de cáncer, con actividad documentada contra leucemia, cáncer de mama, cáncer de cuello y cabeza, linfoma, cáncer purotelial, coriocarcinoma y osteosarcoma . Esta clase de agentes representa los más caracterizados y más versátiles de todos los medicamentos quimioterapéuticos en el uso clínico. El MTX es un inhibidor de la unión estrecha de la dihidrofolato reductasa (DHFR) , una enzima importante para mantener el depósito intracelular de folato en su forma completamente reducida como tetrahidrofolatos .

El MTX es más activo contra células de proliferación rápida, debido a que los efectos citotóxicos ocurren principalmente durante la fase S del ciclo celular. Durante exposiciones más prolongadas a los medicamentos, se permite que más células entren en la fase sintética del DNA del ciclo celular, dando origen a una mayor muerte celular. Además, la formación de TX poliglutamato mejora substancialmente con periodos prolongados de exposición al medicamento, aumentando de este modo la citotoxicidad. Los efectos citotóxicos de MTX también son mayores con concentraciones crecientes del medicamento. Por tanto, la citotoxicidad de MTX es altamente dependiente de la concentración absoluta del medicamento y la duración de la exposición. Asi pues, la administración para osteosarcoma se ha utilizado en dosis altas (1-33 g/m ) desde principios de la década de 1970.

El portador es aquel que tiene biocompatibilidad, es decir, "La habilidad de un material para funcionar con una actividad biológica especifica o, desarrollar una respuesta adecuada para obtener una función completamente avanzada y eficaz para una aplicación especifica".

El biomaterial debe alcanzar aceptación, reconocimiento biológico y adecuada incorporación y ser bioactivo en lugar de absolutamente inerte. Esto ha dado origen al desarrollo de los biomateriales de "segunda generación" que se están diseñando específicamente con el objetivo de que el material debe desarrollar una respuesta positiva específica a partir de las células y tejidos específicos en el sitio del implante dentro del cuerpo. Así pues, pueden mejorar la estimulación de los osteoblastos para depositar rápidamente matriz ósea mineralizada sobre la superficie o en aposición a las prótesis recién implantadas y lograr mejor oseointegración . Un material como estos que posee estas propiedades es la cerámica de fosfato de calcio hidroxilado o hidroxiapatita (HA.) .

La HA es un material biocompatible, bioactivo, que desarrolla una respuesta inmunogénica baja. La HA también posee propiedades óseo conductivas, es decir, la propiedad para estimular el crecimiento óseo directamente a lo largo o hacia su superficie cuando se coloca en las cercanías de hueso viable o células formadoras de hueso diferenciadas. Además, puede permitir el crecimiento de un borde de avance del callo cicatrizador proporcionando una retícula de soporte mecánico sobre la cual ahora puede crecer el hueso. Desde hace tiempo se ha dicho que las estructuras cristalinas de la HA sintética y el componente inorgánico del hueso, mineral óseo son sorprendentemente similares y se ha demostrado que se forma una unión no mecánica de resistencia importante entre HA y el hueso. Esta característica ha dado origen al gran interés en su uso potencial como biomaterial para la reparación de defectos óseos en vista de que permite la unión química directa del hueso, es decir, favorece el depósito óseo sobre la superficie.

A pesar de estas propiedades interesantes y útiles persiste la mala adaptación biomecánica y deficiente funcionamiento mecánico de estos materiales debido a la deficiente capacidad para portar cargas de la HA, así pues, la utilización clínica se ha limitado a aplicaciones donde la cerámica de fosfato de calcio confiere bioactividad sobre implantes inertes cercanos. Por ejemplo recubrimientos sobre prótesis metálicas) o en defectos que ocurren en áreas que soportan menos peso como aplicación maxilofacial .

Además de estas propiedades acrecentadoras de hueso, la HA puede adsorber fácilmente factores biológicos y tal vez compuestos químicos sobre su superficie. Dependiendo de la estructura de la molécula y la química de superficie de la HA particular, esta adsorción puede ocurrir por adsorción física y adsorción química. La cantidad de la sustancia química adsorbida puede corresponder a varias monocapas sobre la superficie.

La HA puede lograr propiedades bioactivas superiores solo con su presencia y en combinación con agentes que tengan influencia sobre el tejido adsorbidos sobre su superficie para ser liberados en el cuerpo en concentraciones terapéuticas, por ejemplo antibióticos y agentes anticáncer. Sus aplicaciones objetivo serían estimular el restablecimiento y reparación de la función tisular (por ejemplo del tejido óseo) y desarrollar una interacción bioactiva en un estado de equilibrio estable (por ejemplo mejor óseo integración) manteniendo la actividad natural de las células circundantes y el tejido en su entorno (por ejemplo de células óseas), destruyendo al mismo tiempo tejidos no deseados como células neoplásicas o bacterianas.

Una característica de esta invención es que cuando la HA esta presente como portador antes definido se obtienen las ventajas necesarias.

El objetivo de un sistema de suministro de medicamentos es lograr una dosis óptima local en un sitio deseado específico. Por lo regular, la administración de medicamentos (oral o intravenosa) es en zonas alejadas del tejido objetivo y de este modo la concentración de medicamento y la duración de la biodisponibilidad no se pueden controlar de modo independiente y el medicamento se libera para difundirse por todo el cuerpo lo que pueda dar origen a problemas sistémicos y complicaciones. Estos sistemas están dirigidos a aumentar la biodisponibilidad de los medicamentos y factores y por tanto permiten una acción más eficaz y controlada durante el tiempo en sitios específicos. La liberación controlada suele ser adecuada para un modelo de liberación bifásico donde se obtenga una liberación rápida durante una fase temprana seguida por una liberación sostenida más lenta durante la fase tardía.

Experimentos realizados hasta la fecha como parte de esta invención han mostrado la eficacia de la HA para suministrar antibióticos y tratar hueso después de curetaje de hueso infectado. Los bloques de HA cargados con el agente quimioterapéutico pueden ser útiles para llenar injertos después del curetaje de tumores óseos también. Este sistema logrará los efectos óptimos de la quimioterapia exponiendo el tumor a una alta concentración de un agente anticáncer durante periodos prolongados para reducir la proliferación y matar todas las células tumorales locales. Se cree, de acuerdo con. esta invención, que la liberación localizada y sostenida se puede conseguir más fácilmente mediante el uso de una estructura HA porosa concatenada con la habilidad para adsorber sustancias en su superficie. La estructura porosa permite que una mayor área de superficie del medicamento se adsorba y de este modo se libere en el cuerpo por deserción. Los medicamentos pueden ser cualquiera de los antes mencionados, y otros, por ejemplo polímeros poli (ácido láctico/glicólico) , PEMfTFHMA, gelatina y goma de fibrina.

La administración local a través de HA es posible y eficaz para el control local de tumores de hueso y tejidos blandos, por razones de mayor seguridad en la administración de medicamento, más facilidad de evaluación del efecto quimioterapéutico, prevención de reocurrencia local y baja frecuencia de efectos colaterales sistémícos.

Además, un portador HA de acuerdo con la invención muestra excelente biocompatibilidad y propiedades mecánicas y químicas similares al hueso permitiendo la incorporación de tejido y vascularización. Confiere propiedades óseo conductivas y óseo inductivas actuando como un injerto de hueso o, recubrimiento de implante evitando la necesidad de sitios donadores, que con frecuencia causan morbidez al paciente. Estas propiedades permiten a los osteoblastos migrar y crecer en el recubrimiento poroso del implante creando una unión concatenada que limita el movimiento entre el implante y el hueso y por tanto mejorando la estabilidad protésica, al mismo tiempo que el medicamento liberado realiza su acción quimioterapéutica.

De aqu que, de acuerdo con la invención, el HA impregnado con agentes quimioterapéuticos puede utilizarse después de cirugía de tumor para llenar defectos en áreas n portadoras de peso como en los lóbulos frontal, occipital del cráneo, el maxilar y la mandíbula de la cara o, en áreas portadoras de peso cuando se incorporan en una prótesis en terapia para salvar miembros.

El MTX puede utilizarse como un agente anticáncer en bloques de HA debido a su probada eficacia contra osteosarcoma, facilidad de detección en comparación con otros agentes anticáncer y su selectividad relativa hacia las células neoplásicas. Así como el examen de la cinética de elusión de un complejo HA-MTX también hemos evaluado los efectos citotóxicos de una concentración y tiempo de exposición aumentados (por encima de la duración de la administración sistémica de 24 a 42 horas) en células osteoblastos y dos células de osteosarcoma para valorar si un tiempo de exposición y concentración aumentados de MTX seria más eficaz en el tratamiento de osteosarcoma pero no afectar la proliferación de osteoblastos. Esto se estudió porque el MTX es uno de los pocos agentes quimioterapéuticos donde los estudios han indicado selectividad a las células neoplásicas, una relación concentración-efecto y tiempo-efecto. La idea de este sistema MTX-HA es proporcionar concentración y tiempo de exposición aumentados con un efecto mínimo sobre otro tejido; estas propiedades del MTX deben ser mostradas para validar el sistema HA-MTX para uso potencial en la práctica clínica.

El portador puede contener en sus poros materiales diferentes de los medicamentos antes mencionados. Estos otros materiales incluyen complejos de coordinación tipo Werner (por ejemplo sales de cobalto .(III) hexamina [sic], sales de hierro (II) tris (fenoantrolina) , cis-platino, carboplatino y oxaliplatino, complejos de EDTA) , complejos macrocíclicos (por ejemplo metalo-porfirinas) , metalícenos y complejos sándwich (por ejemplo ferroceno y titanoceno) y complejos organometálicos (por ejemplo metilcobalamina) .

Preferentemente, el control se arregla para hacer más lenta la velocidad de liberación.

El control se puede lograr en una amplia variedad de formas. Una forma preferida es modificar las propiedades superficiales de las paredes de los poros. Algunos de los agentes también pueden modificar las propiedades superficiales de las paredes. Esto se puede hacer por: i) la impregnación de la superficie con soluciones que contengan sales metalo-orgánicas o inorgánicas. Es posible utilizar diferentes técnicas de impregnación como humectación incipiente, impregnación simple, impregnación en vacío, impregnación/depósito, etcétera para establecer la concentración superficial requerida de las sales inorgánicas/metalo-orgánicas . Pueden estar presentes promotores, es decir, un material o tratamiento que favorezca el endurecimiento de un precursor hidratado para aumentar la conservación de fosfato de calcio. La concentración superficial de los iones de calcio en un articulo de hidroxiapatita poroso puede mejorarse mediante la impregnación del artículo poroso con una solución que contenga iones de calcio, el secado y calentamiento a una temperatura elevada si es necesario o por la incorporación de una sal de calcio en la composición original del artículo poroso. Una modificación como esta permite la adsorción mejorada de los materiales como ésteres del ácido fosfónico. Esto se puede hacer al portador preformado como un tratamiento posterior o a las partículas todavía por ser aglomeradas entre sí en la forma de un artículo, ó mediante la combustión del portador a una temperatura por debajo de la necesaria para el sinterizado completo de la cerámica. Este valor dependerá de la naturaleza del material del cual se fabrique el portador. iii) mediante el tratamiento de la superficie con un ácido o álcali, por ejemplo ácido nítrico, ácido fosfórico, cáustico [sic] , seleccionados de acuerdo con el material del portador o mediante el tratamiento con plasma o sometiendo a un depósito de vapores químicos. iv) mediante la colocación del segundo material en un soporte degradable, por ejemplo un soporte biodegradable como colágena o un polímero o similar. Los polímeros biodegradables específicos en el contexto incluyen PCPP.SA (ácido poli (carboxi fenoxi) propansebácico, PCC, CPP.SA, FAD-SAPTMC, ??? y similares. En términos generales, son convenientes los polianhídridos, poliortoésteres , polilacturos y poliglicoluros y copolímeros de estos.

El uso de un portador intermedio degradable es atractivo porque es muy versátil, de este modo el depósito puede ser estratificado en diferentes formas, por ejemplo: • alternando las capas de la resina o polímero libre de agente y de las capas que contienen el agente; • variando la concentración del agente a través de las diferentes capas de resina o polímero.

Un portador puede ser llenado en una variedad de formas utilizando vacío o presión, o ambas. Estas capas pueden ser construidas por impregnación secuencial simple, humectación incipiente u otras técnicas conocidas para el trabajador experto, si se requiere una distribución homogénea a lo largo del cuerpo. Otras técnicas pueden utilizarse si se requiere distribución heterogénea. Por ejemplo, mediante el uso de una técnica de impregnación centrífuga una capa específica se puede concentrar en las secciones exteriores de la cerámica espumada. Las capas se pueden construir en un modo mecánico insertando piezas de espuma con un agente específico o medicamento dentro de una espuma que contenga otro agente o medicamento. También se prefiere el secado por congelamiento.

Los medicamentos pueden ser liberados en dosis precisas en el cuerpo. Para impregnar el artículo poroso se utilizará un monómero biodegradable que incorpore concentraciones conocidas de los medicamentos y luego polimerizándolos, o se utilizará un polímero que incorpore los medicamentos para impregnar el artículo poroso.

La superficie geométrica externa y/o la superficie de los poros internos se pueden recubrir con polímeros biodegradables que incorporen medicamentos o más específicamente agentes anticáncer. Estos polímeros pueden llenar los huecos dentro del artículo poros y actuar como un depósito para los agentes de liberación lenta. Como se indica, las capas pueden ser construidas de tal forma que las capas individuales tengan diferentes funciones. Por ejemplo, la primera capa puede contener factores de crecimiento, la segunda capa es polímero puro, la tercera la capa puede incorporar factores antitumorales como cisplatino. Cada capa puede tener diferentes velocidades de biodegradabilidad, cambiando la naturaleza del polímero, de modo que las velocidades de liberación de los diferentes agentes sea controlada y predecible.

Aunque el artículo de esta invención puede ser formado para cualquier uso se prefiere que sea formado para reemplazamiento como, por ejemplo ortopédico maxilo facial, o cráneo facial o similares.

Estos injertos pueden utilizarse por ejemplo para: • sustitución de segmentos óseos después de cirugía • el llenado de pérdidas grandes de hueso, después de trauma o infección • reparación o reconstrucción de articulaciones dañadas .

Además, un articulo de la invención puede estar ubicado en el cuerpo en otros lugares, por ejemplo en sitios intramusculares, sitios intraperitoneales, sitios subcutáneos, sitios del sistema nervioso central y sitios oculares. El material no necesita ser un medicamento sino puede en cambio ser seleccionado de una amplia variedad de materiales, como sustancias químicas generales, derivados de petróleo, explosivos, etc. La red de cerámica espumada conserva estos materiales en una matriz rígida y así los protege de esfuerzos mecánicos o similares. El material penetrante también puede ser una resina. Por ejemplo, la matriz de cerámica espumada puede estar impregnada con resinas, polímeros o lubricantes hasta que los huecos se llenen con una matriz continua de resina, polímero o lubricantes en contacto íntimo con la matriz cerámica. La elección del material penetrante y la cerámica puede optimizarse para adecuarse a la aplicación final en una amplia variedad de industrias ya sea en estructuras de peso leve, formas abrasivas, cojinetes de cerámica auto-lubricantes .

La cerámica porosa se puede moldear de modo que insertos de cerámica densa como alúmina o tal vez metales se puedan colocar en el lugar donde tal vez se requiera una mayor resistencia mecánica del implante en situaciones que finalmente portarán carga. El inserto de cerámica o metal se puede exponer en una o más de las superficies externas de la cerámica espumada o estar contenidos dentro de una cubierta de cerámica espumada. El espesor de esta cubierta por lo regular puede ser de 1 MI a 10 mm, pero no se limita a este intervalo. De otro modo, la cerámica espumada puede ser el inserto contenido dentro de una cerámica densa o metal.

Para que la invención se pueda comprender mejor ahora se describirá haciendo referencia a los siguientes ej emplos .

EJEMPLO 1 Materiales HA porosos fabricados por un método de acuerdo con la invención que producen una cerámica porosa interconectada con una máxima resistencia mecánica introduciendo macroporos en una matriz densificada de acuerdo con las patentes Dytech anteriores. Estas están disponibles con la marca HI-POR®. No se introducen impurezas durante el proceso de formación. Aunque la composición química del producto terminado es la misma que la de los productos HA que existen ya en el mercado, se produce por una técnica que permite una estructura física única. Los ejemplares HA porosos fueron fabricados como cilindros (aproximadamente 13 mm de diámetro por 6 mm) . Se utilizó en el estudio un tipo de HA consistente en una densidad de poro de 18% y un tamaño de poro promedio de 300 µ?a.

Los ejemplares de HA porosos solos se mencionan como discos y una vez que estos están cargados como medicamentos como MTX para el suministro, estos se mencionan como "sistemas".

El MTX (David Bull Laboratories, Onco-Tain a 25 mg/mL) fue de la preparación clínica que contenía metotrexato B. P. 0.25 mg, cloruro de sodio B. P. 0.49% p/v hidróxido de sodio [sic] . El MTX se almacenó a 4°C. 4 mL de MTX en una concentración de 25 mg/mL entonces se mezcló con 46 mL de salina amortiguada de fosfato de Dulbecco (Sigma-D8537 ) y se mezcló perfectamente para obtener una mezcla homogénea. Se tuvo cuidado de no exponer el MTX a la luz directa porque se podría afectar su composición química. 48 unidades de HA con tamaño de poro de 300 J. lia [sic] y 18% de densidad fueron colocados en recipientes Bijou de 7 mL (Sterilin catálogo No. 1298) y 1 mL de la mezcla MTX/PBS se adicionó a cada recipiente Bijou tapado. Las muestras completamente sumergidas fueron luego cargadas en cuatro diferentes formas.

Absorción de la muestra El primer método consistió en cargar por absorción simple la solución de MTX permitiendo la dispersión pasiva a través de los poros interconectados . Esto se realizó colocando 18 discos en solución de MTX en un incubador establecido a 37 °C. Seis unidades fueron entonces retiradas después de una hora en el MTX, las siguientes 6 retiradas después de 3 horas y las 6 finales retiradas después de 6 horas.

Impregnación en vacío La carga en vacio se realizó colocando 18 unidades en una cámara de vacio (Angil Scientific, Cambridge Inglaterra, no. 1506) con las tapas de los recipientes Bijou sueltas. El vacio entonces se cambió a una presión de 150 mbar, creando así una presión negativa dentro del recipiente y permitiendo la extrusión del MTX a través de los macro y microporos de las unidades. Seis muestras fueron retiradas del MTX después de una hora en el vacio, 6 unidades fueron retiradas después de 2 horas y 6 unidades después de 4 horas.

Centrifugación Esta involucró la colocación de 6 unidades en sus recipientes Bijou con las tapas herméticamente cerradas. Cada recipiente Bijou fue colocado en un tubo cónico de polipropileno Blue Max de 50 mL (Becton Dickinson 30 x 115 mm) . Cada tubo cónico fue tapado herméticamente y colocado en una centrifuga (Centra-3, Damon/IEC, Bedfordshire, Inglaterra, no. 23670102) a 1000 rpm durante una hora. Cada tubo cónico fue equilibrado por otra muestra contenida en un tubo cónico.

Secado por congelamiento Esto involucró la eliminación de las tapas de los recipientes Bijou de 6 unidades y la colocación en un secador por congelamiento (Modulyo, Edwards, modelo No. 165005) a -60 °C y presión de 8 mbar. Todas las muestras fueron colocadas durante aproximadamente 24 horas y separadas. Todos los sistemas fueron retirados de los recipientes Bijou y se dejaron secar al aire durante la noche en condiciones asépticas.

Una vez que todas las muestras estaban secas se realizó el estudio de elusión. Este proceso consistió en la adición del eluido, 5 mL de medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) y 5 mL de salina amortiguada con fosfatos de Dulbecco (PBS) . Cada sistema luego fue colocado suavemente en un tubo universal utilizando tenazas para mantener las muestras estériles y evitar cualquier movimiento repentino que pudiera agitar cualquier MTX cargado. La mitad de los sistemas de cada técnica de carga fue cada uno adicionado a 5 mL de medio y los otros 14 y los otros 24 en PBS.

Los 48 sistemas fueron entonces colocados sobre rodillos, los cuales fueron inclinados para sumergir completamente todos los sistemas con el eluyente. Entonces los sistemas fueron retirados en una campana estéril y mediante el uso de pinzas estériles y, colocados en un nuevo tubo universal que contenia 5 mL del eluyente fresco en cinco diferentes puntos del tiempo: 2 horas, 4 horas, 24 horas, 48 horas y 168 horas. Las 240 muestras que contenían el MTX liberado entonces fueron analizadas utilizando las técnicas de la espectrometría UV.

Plantificación del MTX en muestras de elusión por espectrometría UV El análisis UV de MTX en elusiones de las muestras se realizó a 303 nm utilizando un espectrómetro Unicam ÜV4 (Cambridge, UK) . En primer lugar, se hizo una dilución en serie de MTX desde 1000 µ???/mL en PBS y DMEM para obtener una serie de concentraciones conocidas de MTX en las muestras de liberación del medicamento (Apéndice III) . Los valores tomados se hicieron a las concentraciones más bajas que parecían detectables por el espectrómetro UV y los valores grafícados estuvieron dentro del intervalo lineal de los datos de calibración.

Las ecuaciones de las calibraciones obtenidas fueron: 1) PBSly = 0.0664x + 0.0044 2) medioy = 0.0663x + 0.0074 donde y = lectura de la absorbancia (nm) y x = concentración de MTX ^g/mL) 1 mL de solución que contenia medio o PBS sin MTX se colocó en una celda de cuarzo y en el espectrómetro UV como valor de la linea base. 1 mL de los eluyentes se colocaron entonces en otra celda de cuarzo y se midió la lectura de la absorbancia contra este valor de la linea base. Las lecturas de absorbancia entonces se aplicaron a las ecuaciones 1 ó 2 para obtener las concentraciones de MTX .

Algunas lecturas de absorbancia fueron mayores que las porciones lineales de las curvas de calibración, es decir, mayores que 2.079 nm para PBS y mayores que 1.040 nm para el medio. Asi pues, ' se hizo una dilución 1 en 5 en estas muestras para obtener lecturas sobre la curva de calibración. Estas muestras fueron principalmente aquellas que fueron tomadas después de 2 horas. Los resultados de las concentraciones de liberación de los sistemas utilizando las cuatro diferentes técnicas entonces fueron tabulados y se realizó la prueba Tukey Kramer Honestly Significant Difference (TKHSDT) para determinar cualquier diferencia significativa entre las cantidades .

Cultivo celular in vitro Dos lineas de células de osteosarcoma y osteoblastos humanos primarios fueron utilizados en los estudios de cultivos celulares sobre el efecto de concentración de MTX y tiempo de duración crecientes. Las células MG63 fueron obtenidas de un joven caucásico de 14 años (ATCC-CR-1427) . Las células de osteosarcoma humano (HOS) se obtuvieron de una joven caucásica de 13 años (ATCC-CRL-1543) . Las células tipo osteoblasto humano (HOB) fueron aisladas de pacientes sometidos a reemplazo de rodilla total. Las líneas de células fueron cada una cultivada en medio Eagle modificado de Dulbecco completo (DMEM) (Gibco, UK) suplementado con 10% del suero bovino fetal (FCS) (Gibco, UK) , aminoácidos no esenciales (1%), ácido ascórbico (150 g/mL) , L-glutamina (0.02M), HEPES (0.01M), penicilina (100 unidades/mL) y estreptomicina (100 g/mL) a 37 °C y 5% C02 en una atmósfera estéril 99% humidificada . El medio se cambió cuando menos dos veces a la semana para evitar agotamiento de los nutrientes y acumulación de los productos residuales.

Una vez que las células se habían vuelto confluentes, estas fueron removidas vaciando el medio, lavando con 10 mL de PBS y adicionando 5 mL de tripsina al 0.25% e incubando a 37 °C. Después de 5 minutos, la capa celular se retiró del cultivo tisular inclinando el matraz sobre una superficie sólida. Los contenidos entonces se recolectaron en un tubo universal y el matraz se lavó con 10 mL de medio, que también se colocó en el tubo universal. El recipiente fue luego centrifugado a 2000 rpm durante 5 minutos a 18 °C después de lo cual se retiró el sobrenadante que contenia tripsina, tomando cuidado para no desbaratar el paquete de células en la base del recipiente. Después, las células se contaron bajo un microscopio luminoso y se hicieron las concentraciones de 13.2 x 104 células/mL. Estas fueron luego sembradas en placas de 96 pozos. En total, se sembraron 6 placas con 2 placas conteniendo una de las tres lineas celulares, para los propósitos de medir la proliferación celular.

Se dejó en incubación cada placa durante 2 dias y luego 12 concentraciones diferentes de MTX fueron adicionadas a cada placa. Aunque las dosificaciones de MTX se dan en mg/m BSA, no fue posible utilizar un índice como este para calcular la dosificación adecuada en este estudio. Por tanto, fue necesario averiguar de qué concentración sería la dosis en el plasma de un hombre promedio. Esto entraño hallar a proporción del peso corporal que es fluido. El volumen intravascular representó aproximadamente 60% del peso corporal. Por tanto, como 1 kg es aproximadamente igual a 1 litro, un paciente de 70 kg tiene un volumen intravascular de 42 2 litros. Por tanto, el volumen de 1 m de fluido de BSA es : 42 litros/1.73 m2 = 24.3 litros La dosis recomendada BNF para terapia con un solo ambiente de MTX (mg/mL es 600) .

Asi pues, en esta terapia se obtiene la siguiente concentración plasmática: 600 mg/24300 mL = 0.0247 mg/mL = 24.7 µg/mL Esta concentración inicial cae conforme se elimina en el cuerpo. No obstante, algunos estudios realizados han utilizado dosis de hasta 2, 3 veces este valor. Asi pues, las concentraciones utilizadas fueron en el intervalo superior e inferior de 24.7 g/mL [sic] abarcando desde 0.1 µg/mL hasta 1000 µg/mL. A tres placas, una placa con cada linea celular, se dio MTX durante 24 (un día) horas de exposición y las otras dos placas se les dio 72 horas (tres dias) de exposición para observar las diferencias en la proliferación celular con diferentes concentraciones y tiempos de exposición aumentados .

Ensayo MTT Los efectos de MTX sobre la proliferación de células de osteosarcoma fueron medidos por el ensayo MTT. Los reactivos necesarios para este ensayo fueron polvo MTT (Sigma M2128 ó M5655) , dimetil sulfóxido DMSO (Sigma D2650) y salina amortiguada con fosfatos (BPS) . El medio fue eliminado de los pozos. La solución MTT se preparó adicionando 50 mg de MTT a 10 mL de PBS en un tubo universal, el cual se calentó a 37 °C durante 15 minutos. Entonces se filtró la solución y se adicionó a cada pozo 10 µ [sic] de MTT y se regresó al incubador durante aproximadamente 3 horas a 37 °C y 5% de C02 y humedad 99% (los detalles sobre la función y acción del MTT se pueden encontrar en el Apéndice II) . Se retiró el MTT por inversión y absorción sobre papel tisú. Después, se adicionaron 100 µ? de DMSO a cada pozo y se agitó durante un minuto. Entonces se leyó la absorbancia de cada pozo por un reactor de microplacas Dynatech (BioRad Modelo 3550) a una longitud de onda de 595 nm y tiempo de mezclado 5 segundos. Estas muestras no pudieron ser reutilizadas y por tanto fueron descartadas al completar el ensayo. Una vez que se obtuvieron las lecturas estas fueron tabuladas y normalizadas como porcentaje del valor control. Las lecturas de absorbancia fueron analizadas contra los valores control por la prueba Dunnetts de significancia a nivel del 5% para determinar si hubo una diferencia son significado estadístico en la proliferación celular cuando se aumentó la concentración de TX.

RESULTADOS Evolución de HA como un sistema de suministro de medicamentos para MTX Los resultados mostraron que los diferentes sistemas de HA poroso cargado con MTX fueron satisfactorios y liberaron el medicamento anticáncer. Las diferencias en los métodos de carga tuvieron efectos importantes sobre la cinética de liberación para MTX. No obstante, los resultados de las muestras colocadas en el medio proporcionaron lecturas de absorbancia erráticas y poco confiables mediante el espectrómetro UV y de este modo no se presentaron como gráfica.

En general, en los sistemas 7 y 8, como se observa en la Tabla 1 siguiente, se observó un patrón de liberación bifásico para el suministro de medicamentos controlado. Esto incluyó una liberación de la fase temprana rápida con una liberación del medicamento en la fase tardía sostenida y lenta pero gradual. Los sistemas 1 a 6 de la Tabla 1 no mostraron este modelo y demostraron un despliegue inicial rápido de MTX en el transcurso de las primeras 24 horas con una liberación no detectable en la fase tardía. Los resultados para cada sistema representan un valor promedio de tres réplicas y los métodos de carga para cada uno de los sistemas se pueden observar abajo en la Tabla 1.

Tabla 1. Diferentes técnicas de cargar MTX en los discos de HA Los resultados se muestran en la gráfica de la Figura 1 acompañante mostrando la liberación inicial y en la Figura 2 mostrando la liberación después de 24 horas.

Este estudio es importante en relación con un sistema de liberación de medicamentos en vista de que el tratamiento sistémico de MTX normalmente es solo durante 24 a 42 horas y estudios muy intensos han mostrado ninguna diferencia en la eficacia cuando aumenta la concentración. Este estudio se dirigió a observar si la duración del tiempo que se libera MTX del estudio de suministro de medicamentos es de suficiente duración y concentración para proporcionar un mayor beneficio terapéutico aumentando la muerte celular del osteosarcoma. Además, se probó la linea de células HOB para observar si la elección del medicamento MTX podría ser selectiva para células neoplásicas y no inhibir el crecimiento óseo por las células osteoblastos .

En general, los resultados permitieron la definición de sistemas de materiales porosos óptimos con base en los perfiles cinéticos de liberación positiva. El desarrollo de métodos de carga óptimos fueron por centrifugación y secado por congelamiento, que mostraron la liberación sostenida más prolongada de todos los sistemas. Además, el tipo de exposición pareció proporcionar una disminución importante en la proliferación celular de cuando menos una de las lineas de células de osteosarcoma .

En general, los perfiles óptimos se aproximan a un "modelo bifásico" de liberación controlada (Figura 3) .

Esto incluye una liberación rápida durante la fase temprana, y liberación gradual, sostenida durante la fase tardía. Estos perfiles óptimos fueron los discos HA cargados con MTX por centrifugación (sistema 7) y secado por congelamiento (sistema 8). Estos fueron observados como sistemas óptimos en vista de que fueron los únicos que mostraron una liberación detectable de MTX en el intervalo terapéutico durante hasta 168 horas. Los sistemas 1 a 6 (cargado por absorción y vacío) mostraron una liberación inicial alta, pero liberación no detectable después de 48 horas.

La liberación de un fármaco incorporado en los poros de hidroxiapatita porosa ha sido atribuida al grado de macroporosidad y microporosidad con densidad aparente (AD) reflejando los perfiles de liberación en las etapas tempranas como función de la macroporosidad, y densidad real reflejando la liberación controlada en las etapas tardías como función del nivel de microporosidad abierta. En otras palabras, el porcentaje y tamaño de macroporosidad y el nivel de medicamento cargado portado (MTX) son factores predominantes en las etapas tempranas y el medicamento contenido dentro de microporos es el factor dominante en la fase II tardía de liberación del medicamento.

El objetivo de este estudio fue determinar el grado en el que las diferentes técnicas de carga podían cargar el medicamento en los micro y macroporos y de ahi obtener una liberación sostenida. Dado que la centrifugación y secado por congelamiento proporcionaron una liberación sostenida tardía así como una liberación temprana, se deben cargar micro y macroporos. Es importante una liberación temprana alta en tratamientos anticáncer en vista de que esta puede atrapar y matar células cancerosas tempranas que reocurren localmente y una liberación fase tardía sostenida es importante para mantener el efecto terapéutico. Así pues, la biodisponibilidad del MTX particularmente con liberación temprana rápida y liberación tardía sostenida puede ser esencial en la terapia anticáncer.

Los ocho sistemas probados mostraron una liberación inicial alta. Esta liberación inicial alta puede ser atribuida al efecto de "lavado" donde el medicamento solidificado incrustado sobre la superficie se disuelve cuando el sistema inicialmente se coloca en el primer eluyente. El sistema 8 (secado por congelamiento) mostró la liberación inicial más alta después de 2 horas y muy probablemente atribuida a la naturaleza del proceso de secado por congelamiento. Al término del proceso las muestras habían sido concentradas, con el MTX solidificado incrustado sobre la superficie el cual pudo ser parcialmente derivado, pero mucho MTX en exceso todavía permanece y de este modo este se disolvería en el primer eluyente .

La velocidad de liberación más alta después de las primeras cuatro horas también se mostró por el proceso de secado por congelamiento (sistema 8). Este fue estrechamente seguido por el proceso de centrifugación (sistema 7), luego vacío y absorción, (sistemas 1 a 6) . Esto se pudo atribuir a las siguientes razones: el proceso de secado por congelamiento puede proporcionar extrusión inmediata de la solución de MTX en los poros de la unidad HA permitiendo a la solución de MTX entrar en los macroporos pero el MTX no esta en solución cuando se retira la unidad HA. Así pues, con la eliminación del disco de HA algo del MTX líquido puede fugarse de los macroporos en los demás sistemas, reduciendo así la carga del fármaco disponible para la liberación inicial. No obstante, el sistema 8 no presentará fuga del MTX de los macroporos con la separación en vista de que ya esta solidificado dentro de los poros.

Las diferencias entre las velocidades de liberación inicial de los sistemas 1 a 8 pueden atribuirse a la habilidad de cada método para permitir extrusión o expulsión vigorosa eficaz de MTX a través de los macroporos. La centrifugación fue tal vez la más vigorosa seguida por secado por congelamiento y vacio siendo desde luego los menos vigorosos los métodos de absorción simple. Son pequeñas las diferencias en los tiempos de vacio y tiempos de absorción aumentados sin mucha diferencia estadística mostrada por la TKHSDT, indicando el máximo de carga del medicamento se obtiene después de los primeros puntos del tiempo, es decir, después de una hora de absorción y una hora de vacío. Las diferencias sutiles pueden ocurrir como resultado de variación en el tamaño del poro, densidad e interconectividad de los poros en los discos de HA como resultado de leves inconsistencias en la fabricación.

Los sistemas de liberación sostenida fueron los sistemas 7 y 8 en donde el sistema 7 proporciona mayor velocidad de liberación en la fase tardía. Como se menciona, la liberación en la fase tardía es una función de la microporosidad. El hecho de que no hubo liberación de MTX detectado para los sistemas 1 a 6 después de 24 horas indica que el espectrómetro UV fue insensible a las cantidades pequeñas de MTX o que ninguna solución de MTX entró en los microporos de los discos de HA. No obstante, es muy probable que algo de la solución de MTX entró en los microporos y una cantidad pequeña pudo haber sido liberada pero fue menor que el umbral para la detección y tal vez menor que el umbral terapéutico de 0.01 µ??.

La velocidad de liberación sostenida en la fase tardía es mayor para la centrifugación tal vez porque la solución de MTX fue centrifugada a 1000 rpm durante una hora permitiendo que los microporos se llenaran con el medicamento con mayor eficacia que la técnica de secado por congelamiento. Además, la habilidad para extruir o expulsar un líquido en los microporos de HA pudo haber sido adecuada a presión negativa del secador por congelamiento, pero la solución pudo haber solidificado antes or a mitad del proceso de entrar en los. microporos.

Las fuerzas químicas de adsorción directa del medicamento sobre la superficie pueden también desempeñar una función en la libración en la fase temprana y tardía. Todos estos métodos fueron realizados sin el uso de un portador para el suministro del medicamento, como puede ser gelatina o alginato, y los únicos medios en los que el medicamento puede permanecer unido sobre la superficie de HA es las uniones físicas y químicas. El MTX físicamente adsorbido lo hace por las fuerzas de Van Der Waals. Esto permite que varias capas de la molécula de MTX se unan a la superficie del HA. Las uniones químicas son más cortas en cuanto a su longitud y mucho más fuertes, y consisten en los tipos de unión electrostática (iónica) y/o covalente. Este tipo de unión solo permite la formación de una monocapa de la molécula sobre la superficie .

Es muy probable que el medicamento físicamente adsorbido sobre la superficie de HA contribuya a la liberación temprana cuando aumenta la temperatura en el espacio caliente (37°C) en el que se colocan los sistemas en cuanto a que las uniones físicas se rompen liberando cualquier medicamento en los primeros eluyentes. No obstante, dado que las uniones químicas son mucho más fuertes es muy probable que contribuyan a la liberación en la fase tardía en mayor medida. Dado que la centrifugación parece haber proporcionado la mayor cobertura de los microporos y por tanto del área superficial, entonces parece razonable sugerir que esto dio origen a una mayor cantidad de cobertura del HA por uniones físicas y químicas. De aquí que, el rompimiento de estas uniones dio origen a la velocidad y cantidad de liberación más alta en la fase tardía del estudio en comparación con cualquier otro sistema. Estos enlaces químicos consisten en enlaces covalentes y iónicos, no obstante es muy poco probable que las interacciones covalentes desempeñen una función en la liberación del medicamento, en vista de que la intensidad de estas uniones puede no permitir al MTX la desorción. Las uniones químicas pueden ser favorables para la liberación del medicamento y pueden ocurrir entre iones de calcio y grupos caxboxilo o entre agrupamientos fosfato y el grupo N-metilo del MTX. Otras uniones químicas como entre grupos hidroxilo del ?? y nitrógenos aromáticos, grupos carboxilo, enlaces amida/péptido pueden también ocurrir. Asimismo las diferentes interacciones tipo quelación entre los iones de calcio y la molécula del MTX mediada por combinaciones de algunos o más de los siguientes agrupamientos presentes en el medicamento: grupos amida/péptido, grupos hidroxilo, nitrógenos aromáticos, grupos amino libres.

La importancia de que el MTX sea directamente adsorbido sobre la HA es que los recubrimientos de HA sobre una endoprótesis en cirugía para salvamento de miembros puede ser cargados con MTX, reduciendo así la probabilidad de reocurrencia local del osteo-sarcoma.

La liberación acumulada más alta total se mostró en el sistema 8 y pareció estar correlacionada con la liberación inicial más alta después de 2 horas. La cantidad de MTX liberado después de 24 horas y después en proporción con la dosis inicial liberada es muy pequeña.

Asi pues, la liberación acumulada total más grande en los sistemas seria gobernada en gran medida por la cantidad inicial liberada debido al efecto de lavado".

El método opcional de cargar discos de HA con MTX se encontró por centrifugación seguido por secado por congelamiento. Otras propiedades físicas del HA pueden determinar su habilidad para actuar como un sistema de liberación de medicamentos como tiempos de sinterización alterados (que alteran la interconect vidad de los microporos) , tamaño de poros y densidad de poros. Además de estos estudios, también se debe investigar el efecto terapéutico de MTX después de la adsorción a la HA puesto que la desorción puede dar origen a una estructura química modificada.

El efecto de la concentración de medicamento y el tiempo de exposición sobre las tres líneas de células: HOS, MG63 y HOB mostró los siguientes resultados. Todas las lineas celulares después de un dia de exposición mostraron una disminución en la proliferación conforme aumentó la concentración de MTX. Las lineas de células menos sensibles fueron las células HOS, las cuales mostraron solo una pequeña disminución en la proliferación después de la adición del MTX y solo 4 diferencias con significado estadístico de las 12 concentraciones del MTX. Después de 3 d as de exposición a las mismas concentraciones, las células HOB y HOS mostraron un nivel reducido de proliferación celular en comparación con las muestras expuestas un día. En cambio, las células MG63 mostraron un comportamiento errático cuando aumentó la concentración de MTX. Así pues, estos resultados muestran que las ROS y ROB son sensibles a un mayor efecto citotoxico del tiempo de exposición aumentado del MTX. Esto se puede explicar por el hecho de que la formación de poliglutamato se aumenta substancialmente con periodos más prolongados de exposición al medicamento, aumentando de este modo la citotoxicídad. Además, parece ser que cuando se prolonga el tiempo de exposición el efecto citotoxico aumenta muy poco cuando aumenta la concentración, sugiriendo que el tiempo de exposición es un factor importante y tal vez se haya alcanzado una concentración umbral para la eficacia citotóxica.

Las G63 se afectaron solo levemente cuando aumentó la concentración y el tiempo de exposición de MTX, lo cual pudo ser debido a resistencia. Aunque con frecuencia se utiliza dosis alta de MTX en el tratamiento de osteosarcoma, la terapia con dosis habituales en ocasiones puede ser ineficaz. Algunos estudios retrospectivos han sugerido que es necesario alcanzar un nivel máximo umbral de MTX para obtener una buena respuesta de la quimioterapia/0-53. Esta relación sugiere que el osteosarcoma es por si mismo resistente a las dosis normales de MTX lo cual puede superarse mediante el uso de dosis extremadamente altas. Un mecanismo potencial para la resistencia intrínseca es el transporte disminuido en las células por el portador folato reducido (RFC) , lo cual podría explicarse porque el tiempo de exposición no tubo efecto y tal vez se requiera mayor tiempo para permitir el transporte por otros medios, como la difusión pasiva. Además, tal vez las dosis no fueron tan altas para permitir el transporte hacia las células. Un segundo potencial para la resistencia intrínseca es un resultado de poliglutamilación deteriorada, que da origen a una falta de retención del medicamento dentro de la célula, inhibiendo su acción.

Se supone que MTX es altamente selectivo para las células neoplásicas pero las células HOE fueron afectadas en un grado similar a las células HOS . La razón para esto es que el MTX es más activo contra células que proliferan con rapidez, porque su efecto citotóxico ocurre principalmente en la fase S del ciclo celular. Durante exposiciones más prolongadas, se permite que más células entren en la fase sintética del DNA del ciclo celular, dando origen a mayor muerte celular. Ya que las células HOE cultivadas in vitro se dividen rápidamente como las células del osteosarcoma, estas pueden ser afectadas en la misma forma. Este hecho estimularía el escenario clínico donde algunas células osteoblastos no se dividen con rapidez. Por otra parte, estudios in vitro han mostrado solo una disminución de 30% en la proliferación de las células osteoblastos en comparación con una disminución de 90% en la proliferación de células de osteosarcoma en MTX 5 mM.

Esta investigación demostró que la HA porosa pudo liberar con buenos resultados el MTX durante un periodo de 7 días utilizando dos de los métodos de carga del medicamento. Además, las concentraciones de medicamento liberadas estuvieron dentro del intervalo terapéutico para el tratamiento de osteosarcoma. Los estudios de proliferación celular dieron soporte a la eficacia terapéutica de un tiempo de exposición del medicamento aumentado en la prevención de la proliferación celular de las células HOS. 21 tiempo de exposición probado fue más prolongado que los tiempos permitidos para administrar el medicamento sistémicamente y dentro del periodo de tiempo que el medicamento se libera de los sistemas HA estudiados .

Asi pues, la aplicación de HA cargado con MTX como un sistema de suministro de medicamentos para el tratamiento de osteosarcoma muestra gran potencial y se puede utilizar en escenarios clínicos en áreas no portadoras de peso para llenar pequeñas defectos post-operatorios, por ejemplo, cirugía maxilofacial y se puede incorporar en una prótesis en cirugía para salvar un miembro para tratar áreas portadoras de carga.

EJEMPLO II Absórbamela de hierro (II) tris fenantrolina perclorato [Fe(Phen>3] [ClO^g en HA Se exploraron cuatro métodos para la absorbancia de perclorato [Fe (Phen) 3 ] [C104] 2 en HA, cada uno utilizando bloques de porosidad 83.35 (0006) y dimensiones aproximadas de 20 x 15 x 20 mm, peso 303.5 g. Las soluciones se prepararon disolviendo perclorato [Fe (Phen) 3] [C104]2 (0.031 mmol) en metanol (30 cm3) . Todos los bloques fueron pesados húmedos y secados en un horno aproximadamente a 100 °C durante la noche. 1. Absorbancia por inmersión de HA en una solución de [Fe (Phen) 3] [C104] 2 durante 35 minutos. 2. Absorbancia por inmersión de HA en una solución de [Fe (Phen) 3] [C104]2 durante 24 horas. 3. Absorbancia colocando HA en vacio durante 10 minutos antes de la inyección directa de una solución de [Fe (Phen) 3] [C104]2 en el bloque y el vacio mantenido durante otros 30 minutos. 4. Absorbancia por inmersión de HA en una solución de [Fe (Phen) 3] [C104]2 y la aplicación de vacio durante 35 minutos.

La cantidad de solución absorbida por los bloques abarcó entre 2.7-3.5 g, las cantidades más grandes fueron observadas para los métodos utilizando vacio. (La exactitud del pesado se limita por la evaporación del solvente) .

La penetración observada en los bloques fue pequeña en todos los casos con un alto grado de absorción superficial. La mejor penetración se observó para los bloques cargados conforme con el método 2, es decir, inmersión prolongada.

Lixiviación de [Fe(Phen)3] [ClOjjg en HA a pártir de los boques de HA preparados de acuerdo con el método 3 Lixiviación con agitación de soluciones para evitar inexactitudes debidas a los gradientes de concentración. (De acuerdo con los arreglos presentes no obstante pueden resultar algunas anomalías del sacudimiento ocasional del bloque por el seguidor magnético) .

La mitad del bloque preparado con el método 3 se 3 sumergió en agua destilada (30 cm ) y se registró la absorbancia por espectrometría UV-Vis en una longitud de onda de 512 nm. En todos los cálculos se utilizó un coeficiente de extinción de 10,620 moles ~1 dm3 cm-1.

La gráfica siguiente muestra la cantidad de [Fe (Phen) 3] [CIO4] 2 liberada del bloque con el tiempo.

Lixiviación de [Fe (Phen) 3] [CIO4] 2 a partir de HA cargado de acuerdo con el método 3 La gráfica muestra dos fases que probablemente se corresponden con la liberación inicial del [Fe (Phen) 3] [CIO4] 2 absorbido en la superficie seguido por la liberación de [Fe (Phen) 3] [C104]2 del interior del bloque. Casi todo el [Fe (Phen) 3] [CIO4] 2 se libera del bloque después de 170 minutos. Después de 330 minutos la solución es sustituida por agua destilada y se mide la absorbancia después de otras 20 horas. Las lecturas revelan la liberación de otros 0.14 mg del bloque, esto puede ser debido a la liberación de [Fe (Phen) 3] [CIO4] 2 que estaba dentro del bloque cuando el sistema llegó al equilibrio durante los primeros 330 minutos.

EJEMPLO III El uso de poli (DL-lacturo-co-glicoluro) para hacer lenta la liberación de [F (Phen) 3] [C10 ] 2 Puesto que el polímero biodegradable poli (DL-lacturo-co-glicoluro ) pLG) no es soluble en metanol, se utilizó acetonitrilo para los siguientes experimentos .

Carga Se utilizó el método de vacío 3 para cargar los compuestos en la HA, de nuevo se utilizaron bloques de porosidad 83.35% (0006) con dimensiones aproximadas 2C x 20 x 15 mm, con peso de 3.6-3.8 g. Para el bloque control con solo [Fe (Phen) 3] [C10 ] 2 (0.01 g, 0.013 mmol 3 en 6 cm de acetonitrilo) , se observo buena penetración en el bloque. Para el bloque cargado con [Fe (Phen) 3] [C104] 2 (0.01 g, 0.013 mmol) y pLG (50:50) (200 mg en 6 cm3 de acetonitrilo) se observa menos penetración pero la distribución fue más uniforme. De nuevo los bloques fueron secados en el horno. (Para disolver completamente el polímero en acetonitrilo se requiere agitación durante hasta una hora antes de la carga) .

Lixiviación Se realizaron los experimentos de lixiviación utilizando las mitades de los bloques cargados con agua destilada (30 cm ) y agitación constante. Los experimentos de lixiviación inicial mostraron que los bloques impregnados de polímero flotaron, necesitando como lastre el uso de varillas de vidrio. Esta flotación tal vez se deba a que los poros de los bloques de polímero en la HA atrapen aire dentro del bloque. Además estos experimentos revelaron que las lecturas se deben tomar durante varios días puesto que es necesario un sistema cerrado para evitar evaporación del agua que conduce a inexactitudes. De nuevo la absorbancia a ? 512 nm se registró en los intervalos adecuados.

Lixiviación de [Fe (Phen) 3] [CIO4] 2 0 50 !00 150 200 250 300 350 400 450 500 Lixiviación de [Fe (Phen) 3] [C10 ] 2 Aproximadamente todo el [Fe (Phen) 3] [C104] 2 se libera después de 300 minutos. Se tomaron otras lecturas después de 24 horas y se observó la disminución de la absorbancia. Después de otras 48 horas se observó desaparición de color más completa. Esto puede ser debido a la hidrólisis del [Fe (Phen) 3] [C104] 2 por el bloque de HA.

Lixiviación del bloque impregnado con [Pe (Phen) 3] [C104]2 PLG (50:50) Tiempo/Minutos Cuando se sumergió por primera vez el bloque se observaron burbujas de agua [sic] en la superficie del bloque, además la flotación observada indica que queda atrapado aire dentro del bloque. Después de 24 horas el bloque ya no flotaba, lo cual puede indicar penetración del agua a través del bloque. Los resultados muestran que la impregnación de PLG en el bloque hace significativamente más lenta la liberación de hierro Tris Phen. La liberación de otras cantidades de complejo se observa incluso después de 5 dias.

La cantidad de [Fe (Phen) 3] [C104] 2 absorbido en la HA aumenta por la aplicación de vacio durante la carga. Se observa aumento de penetración cuando se utiliza acetonitrilo como solvente en lugar de metanol.

La liberación de [Fe (Phen) 3] [C10 ]2 a partir de HA procede por un estallido inicial (debido a la liberación del complejo de la superficie del bloque) seguido por una fase más lenta (liberación del complejo desde dentro del bloque) . La liberación total es rápida con la mayor parte del complejo liberado después de 300 minutos. La impregnación de HA con una mezcla de [Fe (Phen) 3] [C104] 2 y PLG hace dramáticamente más lenta la liberación de [Fe (Phen) 3] [C104] 2 con la liberación continua del complejo observada incluso después de 5 días .

EJEMPLO IV Impregnación de HA con el medicamento anticáncer Cis platino Utilizando el método de vacio 3 se inyectó cis-platino (0.025 g, 0.08 mmol) en una solución acuosa 3 de cloruro de sodio (50 cm de una solución al 0.9% en peso) sobre un bloque de HA de porosidad 84.04% (0003), dimensiones 21 x 23 x 15 mm, peso 4.2 g. Después del secado se observaron parches amarillos presumiblemente de cisplatino sobre la superficie del bloque. No se observó ningún color amarillo dentro del bloque.

Lixiviación Se realizaron experimentos de lixiviación en agua destilada (35 cm ) con agitación, en ausencia de luz y cerrados para evitar evaporación. La absorbancia se registró a ? 206 nm en intervalos adecuados y todos los cálculos requirieron el coeficiente de extinción 3057 -1 3 -1 mol dm cm .

La liberación de cisplatino es rápida —casi todo el medicamento se liberó después de 45 minutos. La liberación rápida del medicamento puede indicar que la penetración en los bloques no esta ocurriendo y el medicamento solo esta siendo liberado de la superficie del bloque.

EJEMPLO V Uso de poli (DL-lacturo-co-glicoluro) para hacer lenta la liberación de cisplatino Dado que PLG no es soluble en agua y el cisplatino no es soluble en acetonitrilo, se emprende un programa de carga de dos fases. Utilizando el método de vacio 3, inicialmente se cargó en el bloque cisplatino (0.025 g, 0.08 mmol) en una solución acuosa 3 de cloruro de sodio (50 cm de una solución al 0.9% en peso) . Después de secar el bloque en un horno durante la noche, el método de vacio se utilizó otra vez para inyectar una solución de PLG (85:15) (0.105 g) en acetonitrilo (50 cm ) . De nuevo el bloque se secó en horno durante la noche.

Conclusión La liberación de cisplatino a partir del ?? también es rápida con la mayor parte del medicamento liberado después de solo 45 minutos.

EJEMPLO VI Liberación del agente anti-inflamatorio prednisolona a partir de HA Se realizaron experimentos de diluciones en serie para obtener la siguiente curva de calibración y ecuación para la prednisolona.

Dilución en serie para prednisolona 0.0005 0.001 0.0015 Concentración mol dm' Durante la preparación de soluciones para cargarlas en los discos HA (esto incluye agitación de las soluciones/suspensiones de medicamento/polímero durante una hora y en ocasiones la inmersión en un tanque sónico durante 30 segundos) se descubrió que la prednisolona se disuelve en acetonitrilo . Por tanto, se debe aclarar que la siguiente técnica no fue una carga en suspensión.

Para estos experimentos se utilizaron cuatro discos de HA del segundo lote. Se utilizó aproximadamente 0.01 g de prednisolona en cada una de las soluciones de acetonitrilo. Los experimentos fueron marcados 1AA, 1BB, ICC y 1DD. 1?? y 1BB fueron cargados por centrifugación, y 1BB contenía 0.1 g de PLG (50:50). ICC y 1DD fueron cargados utilizando la técnica de vacío, y 1DD contenía 0.1 g de PLG (50:50). Los experimentos de lixiviación normales se realizaron y los resultados se presentan a continuación.

Liberación de prednisolona a partir de HA Los resultados muestran que en presencia del polímero la liberación de prednisolona a partir de HA es lenta. Las siguientes dos gráficas muestran la liberación acumulada del medicamento a partir de HA.

Liberación acumulada de prednisolona a partir de HA Liberación acumulada de prednisolona a partir de ?? |P 1AA «1BB 01CC QIDP[ Tiempo de liberación/horas Liberación acumulada de prednisolona a partir de HA EJEMPLO VII Estratificación de los agentes terapéuticos en discos de HA Inicialmente, la liberación de MTX a partir de HA utilizando el polímero PLG (75:25) se realizó para establecer si este polímero (que se esperaba se degradara a una velocidad más lenta que el PLG (50:50)) induce una velocidad más lenta de liberación de MTX. Los discos de HA del segundo lote se utilizaron para experimento y aproximadamente las mismas cantidades de MTX, PLG y acetonitrilo . Los experimentos fueron marcados como sigue: 1A y IB fueron cargados por centrifugación, y IB contiene polímero, 1C y ID fueron cargados por la técnica de vacío, y ID contiene polímero. Los resultados obtenidos son los siguientes: Liberación de MTX a partir de HA de los experimentos que comparan liberación en presencia de PLG (75:25) Tiempo de liberaciónrtioras Los resultados confirman que la presencia de PLG (75:25) no hacen más lenta la liberación de MTX a partir de HA. No obstante, este efecto no parece ser grande para PLG (75:25) en comparación con PLG (50:50).

Liberación acumulada de MTX a partir de HA para experimentos que incluyen PLG Tiempo de liberación/horas A pesar de que estos resultados indican que este polímero no fue eficaz en disminuir más la velocidad de liberación de MTX a partir de HA, la observación de los discos en la conclusión del experimento indicó que todavía hay otras cantidades de MTX atrapadas en el disco las cuales fueron cargadas en presencia del polímero. Esto indica que se puede liberar más MTX después de más degradación del polímero.

EJEMPLO VIII Carga de HA con dos diferentes medicamentos incorporados en los polímeros Cuatro discos de HA del segundo lote fueron cargados primero con suspensiones de MTX cargadas en acetonitrilo, dos conteniendo el polímero PLG (75:25). Se utilizaron ambas técnicas de centrifuga y vacío como ya se describió. Los discos fueron entonces secados en aire y después cargados con soluciones que contenían prednisolona en solución de nuevo con dos de las soluciones conteniendo polímero, en este caso PLG (50:50). En este momento se identificó un problema potencial, para los dos discos cargados en presencia de polímero después de la carga de prednisolona las soluciones restantes después de la carga estaban de color amarillo pálido indicando la liberación de algo de MTX durante el proceso de carga. Esto es consistente con las segundas soluciones (acetonitrilo) disolviendo algo del polímero original (PLG (75:25)) en los discos y dando origen a la liberación de algo del MTX. La lixiviación de estos discos es anticipada para dar origen a la liberación simultánea de ambos medicamentos. Para lograr la estratificación eficaz de los medicamentos sobre HA, se proponen dos vías de investigación. La identificación de una variedad de polímeros biodegradables, solubles en diferentes solventes, puede permitir la estratificación de los medicamentos o puede dar buenos resultados la inyección de soluciones de polímeros en diferentes áreas de los bloques de HA.

Conclusión Las múltiples repeticiones de la liberación de MTX en presencia o ausencia de PLG (50:50) no fueron concluyentes, tal vez debido a la degradación de MTX y/o el polímero.

La lixiviación de MTX (con PLG (50:50) en algunos discos) a partir de HA con lastre de los discos mostró una tendencia similar como la observada para el experimento original con la presencia de PLG (50:50) mostrando una velocidad de liberación más lenta del MTX en comparación con la ausencia del polímero. En periodos de tiempo tardíos, la liberación de MTX en presencia de polímero es mayor cuando se compara con discos cargados en ausencia de polímero.

La liberación de los medicamentos cisplatino y prednisolona a partir de HA también se hace lenta por la presencia de PLG (50:50).

La lixiviación de MTX (con PLG (75:25) en algunos discos) a partir de HA no parece mostrar velocidad de liberación más lenta en comparación con PLG (50:50), no obstante, la observación de los discos en la conclusión de los experimentos de lixiviación indica la presencia de más cantidades de MTX. Cuando se aplica una segunda solución polímero/medicamento se observa algo de liberación del medicamento original debido a que algo del polímero original se esta disolviendo. Los polímeros biodegradables con diferentes solubilidades para facilitar la estratificación o inyección de soluciones en la HA superará este problema.

La invención se extiende a cada una y todas las combinaciones y sub-combinaciones novedosas e inventivas del portador con carga o el método de carga de un portador o el uso del portador cargado descrito en la presente .

Claims (31)

1. REIVINDICACIONES Un portador de cerámica porosa preformado que consiste en un esqueleto interconectado que tiene poros la mayoría de los cuales están en el intervalo desde aproximadamente 20 hasta aproximadamente 1000 mieras, el portador tiene una densidad de menos que aproximadamente 40% teórica, los poros contienen un segundo material en estos, la velocidad de liberación del sequndo material del portador es controlada. El portador de conformidad con la reivindicación 1, en donde el esqueleto esta constituido de andamiaje y columnas . El portador de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, en donde el esqueleto tiene tamaños de poro promedio en el intervalo de 20 a 800 mieras. El portador de conformidad con la reivindicación 3, en donde el tamaño de poro promedio es en el intervalo de 60 a 800 mieras. El portador de conformidad con la reivindicación 4, en donde los microporos fueron formados mediante la sinterización del precursor del portador en condiciones que fueron por debajo de las necesarias para la sinterización completa. El portador de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores formado de un esqueleto es material biocompatible . El portador de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la densidad abarca desde aproximadamente 10% hasta aproximadamente 30% de la densidad teórica. El portador de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde los poros contienen alguno o más de: factores de crecimiento, antibióticos, vitaminas, proteínas, hormonas, un agente quimioterapéutico o un agente radio opacificador, o similares. El portador de conformidad con la reivindicación 8, en donde los poros contiene alguno o más de los siguientes factores de crecimiento: - un material de crecimiento óseo - FGF (factor de crecimiento de fibroblastos) IGF-1 IGF-II - PDGF (factor de crecimiento derivado de plaquetas) - TGF-B (factor de crecimiento transformante) - una célula formadora de hueso o degradadota de hueso BMP-Z HGH ( - concentraciones de factores de crecimiento derivados de humanos. El portador de conformidad con la reivindicación 8, en donde el agente quimioterapéutico es cisplatino. El portador de conformidad con la reivindicación 8, en donde el agente radio opacificador es estroncio- 67 o samario-153. El portador de conformidad con la reivindicación 8, en donde el agente es MTX. 13. El portador de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde los poros contienen uno o más de los siguientes: complejos de coordinación tipo Werner, complejos macrociclicos , metalocenos y complejos sándwich y organometálicos . El portador de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la superficie de los poros ha sido modificada para controlar la liberación del segundo material. El portador de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en donde la superficie de los poros ha sido modificada mediante el tratamiento con ácido o álcali o plasma o depósito de vapores químicos . El portador de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en donde los poros contienen el segundo material en un soporte degradable, por ejemplo un soporte biodegradable . El portador de conformidad con la reivindicación 16 en donde el soporte biodegradable es una colágena polímero. 18. El portador de conformidad con la reivindicación 16 ó 17 en donde el soporte es PCPP.SA, PCC, CPP.SA, FAD-SAPTMC, PAA y similares. El portador de conformidad con la reivindicación 16 ó 17 ó 18, en donde los poros contienen capas del segundo material o soporte biodegradable, cada capa es diferente de la adyacente o las adyacentes. 20. El portador de conformidad con la reivindicación 16 ó 17, ó 18 ó 19, en donde los poros contienen material en capas, arreglados como capas alternas de capa libre de agente y de capa que contienen agente o por la concentración del agente a través de diferentes capas de colágena o polímero. El portador de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el segundo material esta contenido en los poros del portador por enlaces físicos o químicos, o ambos. El portador de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el segundo material se introduce en los poros por uno o más de las técnicas de centrifugación, inmersión, impregnación en vacio o secado por congelamiento . El portador de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la superficie exterior ha sido recubierta con un polímero biodegradable que contiene un medicamento. El portador de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el esqueleto se forma de óxido metálico o no metálico o similares . El portador de conformidad con la reivindicación 24, en donde la cerámica es parcial o completamente resorbible . El portador de conformidad con la reivindicación 25, en donde el esqueleto se forma de fosfato de calcio o HA. Un portador de cerámica porosa preformado que consiste en un esqueleto interconectado que tiene poros, la mayoría de los cuales están en el intervalo desde aproximadamente 20 hasta aproximadamente 1000 mieras, el portador tiene una densidad menor que aproximadamente 40% teórica, los poros contienen MTX, la velocidad de liberación de MTX es controlada. El portador de conformidad con la reivindicación 27, en donde el MTX ha sido cargado en los poros por centrifugación o secado por congelamiento, o ambos. 29. Un portador de cerámica porosa preformado que consiste en un esqueleto interconectado que tiene poros, la mayoría de los cuales están en el intervalo desde aproximadamente 20 hasta aproximadamente 1000 mieras, el portador tiene una densidad menor que aproximadamente 40% teórica, los poros contienen [Fe (Phen) 3] [CIO4] 2, la velocidad de liberación de [Fe ( Phen) 3] [C104] 2 es controlada. El portador de conformidad con la reivindicación 29 en donde el [Fe (Phen) 3 ] [C104] 2 ha sido cargado en lo poros por impregnación en vacío. 31. Un portador de cerámica porosa preformado que consiste en un esqueleto interconectado que tiene poros, la mayor parte de los cuales están en el intervalo desde aproximadamente 20 hasta aproximadamente 1000 mieras, el portador tiene una densidad de menos que aproximadamente 40% teórica, los poros contienen [Fe (Phen) 3] [C104] 2 y un glicoluro, la velocidad de liberación de [Fe (Phen) 3] [CIO4] 2 es controlada. Un portador de cerámica porosa preformado que consiste en un esqueleto interconectado que tiene poros, la mayor parte de los cuales están en el intervalo desde aproximadamente 20 hasta aproximadamente 1000 mieras, el portador tiene una densidad de menos que aproximadamente 40% teórica, los poros contienen cisplatino, la velocidad de liberación del cisplatino es controlada. Un portador de cerámica porosa preformado que consiste en un esqueleto interconectado que tiene poros, la mayor parte de los cuales están en el intervalo desde aproximadamente 20 hasta aproximadamente 1000 mieras, el portador tiene una densidad de menos que aproximadamente 40% teórica, los poros contienen cisplatino y un glicoluro, la velocidad de liberación del cisplatino y un glicoluro es controlada. Un portador de cerámica porosa preformado que consiste en un esqueleto interconectado que tiene poros la mayor parte de los cuales están en el intervalo desde aproximadamente 20 hasta aproximadamente 1000 mieras, el portador tiene una densidad de menos que aproximadamente 40% teórica, los poros contienen prednisolona, la velocidad de liberación de la prednisolona es controlada. El portador de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, moldeado para reemplazo ortopédico, maxilofacial o craneofacial o similares. El portador de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 34, moldeado para ubicación en un sitio intramuscular, en un sitio intraperitoneal, en un sitio subcutáneo, en sitio del sistema nervioso central u ocular. El portador de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, 14 ó 15, 20, 21 ó 22 en donde los poros contienen una sustancia química general o resina o derivado de petróleo o explosivos, o similares.