MXPA02011453A - Compuestos prazicuantel para tratar enfermedades causadas por sarcocystis, neospora, toxoplasma e isospora. - Google Patents

Abstract

Se describen en la presente las composiciones y los metodos para el tratamiento terapeutico, o metafilactico, de mamiferos infectados susceptibles a, o mamiferos infectados que sufran de enfermedades neurologicas o abortigenicas causadas por parasitos, como Sarcocystis, Neosporosis o Toxoplasmosis o Ionosporosis que pueden ser tratadas con un compuesto prazicuantel, mediante la administracion a estos, de una composicion que contenga una cantidad farmaceuticamente eficaz de prazicuantel o derivado de este, e incluye esquemas de tratamiento metafilactico y de una sola dosis alta.

Description

COMPUESTOS PRAZIQUANTEL PARA TRATAR ENFERMEDADES CAUSADAS POR SARCOCISTIS, NEOSPORA, TOXOPLASMA E ISOSPORA CAMPO DE LA INVENCIÓN Campo de la invención: la presente invención se refiere a una composición de praziquantel para tratar animales infectados con parásitos que causan enfermedades abortigenas o neurológicas. Más específicamente, la presente invención se refiere a una composición de praziquantel útil en el tratamiento de parásitos protozoarios como coccidios causantes de enfermedades abortigenas o neurológicas en mamíferos.

Breve descripción de la técnica anterior: en la protección y tratamiento de algunos mamíferos, insectos y peces contra enfermedades causadas por protozoarios sospechosos de causar enfermedades abortigenas y/o neurológicas, la técnica ha usado diversos compuestos, los más recientes de los que están los compuestos triazinona. En general, los protozoarios que son sensibles a estos compuestos incluyen parásitos que infectan el intestino de aves, mamíferos e insectos, causantes de diarrea, enfermedad devastadora, nausea y vómito. En fechas recientes se ha encontrado que algunos parásitos que atraviesan la barrera hematoencefálica, asi como los parásitos que atraviesan la barrera placentaria pueden ser tratados con estas triazinonas. Los ejemplos de parásitos que, según se sabe, cruzan la barrera hematoencefálica o la barrera placentaria son aquellos que causan enfermedades coccideales, tales como Toxoplasma gondii , Sarcocystis neurona , Neospora caninum, Neospora hugessi e Isospora suis . Son ilustrativos de los compuestos triazinona, las triazindionas como los compuestos diclazurilo, y las triazintrionas como los compuestos toltrazurilo. Ver las patentes US 4,933,341; 4,935,423; 5,114,938; 5,141,938; 5,188,832; 5,196,562; 5,256,631 y 5,464,837.

Si bien otros compuestos pertinentes relacionados con la técnica entre los que están praziquantel (derivados de 2-acil-4-oxo-hexahidro-4H-pirazino [2,1-a [isoquinolina) se han publicado para su uso en el tratamiento de parásitos, las publicaciones carecen de alguna enseñanza o sugerencia con relación a los compuestos con utilidad en el tratamiento de parásitos que crucen la barrera hemática o placentaria. En general, praziquantel se ha usado como tal o en combinación con otros compuestos para formular composiciones antielminticas para tratar infestaciones por céstodos y nemátodos y los similares. Véase las patentes US 4,001,411, 4,447,414 y 5,824,653.

La patente US No. 5663,155 describe praziquantel para uso en la prevención y tratamiento de infecciones por parásitos causantes de enfermedades como malaria, tripanosomiasis, leishmania, esquistosomiasis y elefantitis. La patente también sugiere que el praziquantel podria utilizarse para tratar infecciones por parásitos limitadas a la sangre, linfa y tejidos. La toxoplasmosis y Sarcocistis están específicamente mencionadas en el contexto de su infección de tejidos musculares o intestinos. No hay mención del tratamiento o prevención de enfermedades en donde el Toxoplasma, Sarcocistis, Neospora o Isospora se incrustan en el cerebro de mamíferos adultos o pasa a través de la barrera placentaria para infectar tejido nervioso central del feto, produciendo aborto o recién nacidos débiles.

En general, el modo de acción de las triazinonas es atacando las etapas intermedias del parásito que se encuentran en el intestino y células de la pared intestinal, causando la dilatación del retículo endoplásmico, el espacio perinuclear y las mitocondrias del parásito. Esto supuestamente altera la posibilidad para las divisiones nuclear haciendo que los esquizontes y microgamontes permanezcan pequeños, formando únicamente algunos merozoitos y microgametos, respectivamente. Se reportó el resultado final como la pérdida de la capacidad de estas últimas etapas de los parásitos para penetrar en nuevas células del mamífero, obstaculizando eficazmente la reproducción del parásito en el huésped.

El modo de acción de praziquantel, según se publicó en la patente US No. 5,663,155 (Ibid.), tiene que ver con la disrupción de los procesos enzimáticos de esos parásitos que se relacionan con el metabolismo de los derivados de purina y estructuras químicas tipo purina. Los parásitos son agudamente sensibles a la interferencia de estos procesos, por tanto, las composiciones que se dirigen específicamente a estos procesos pueden ser usadas para eliminar selectivamente una infección parasitaria. El praziquantel se administra para atacar los parásitos que están relacionados con tejido muscular, infección intestinal o de la sangre. No hay mención de tratamiento de parásitos del sistema nervioso central (cerebro y médula espinal) o parásitos que pueden atravesar la barrera placentaria.

Aunque la técnica ha estado interesada en protozoarios sospechosos de causar enfermedades abortigenas y/o neurológicas en mamíferos hasta 1970, el exitoso aislamiento y cultivo in vi tro de algunos de estos protozoarios probó ser dificil. Por ejemplo, el aislamiento exitoso de parásitos del cerebro o fluido cerebroespinal no se realizó sino hasta la década de 1980. Sin embargo, una vez que se determinó que las enfermedades neurológicas pueden ser producidas por protozoarios que infectan el cerebro y que las enfermedades abortigenas pueden ser producidas por protozoarios que infectan el feto, hubo la necesidad de medicamentos antiprotozoarios eficaces que puedan atravesar la barrera hematoencefálica y la barrera placentaria sin producir efectos colaterales nocivos. Muy pocos medicamentos pueden atravesar la barrera hematoencefálica o la barrera placentaria de mamíferos. Por desgracia, muchos de los medicamentos conocidos de la técnica que cruzan la barrera hematoencefálica y/o la barrera placentaria para tratar eficazmente infecciones por parásitos del cerebro tienen efectos colaterales nocivos de modo que no pueden ser usados sin gran riesgo. Por tanto, hasta la fecha no han sido aprobados medicamentos eficaces que proporcionen un tratamiento efectivo para tales enfermedades neurológicas o abortigenas .

Merece la pena señalar que con base en el modo de acción de praziquantel revelado en la patente US 5,663,155, con relación a su amplio ataque sobre las enzimas que afectan el metabolismo de las purinas, uno pueda esperar que este compuesto también tenga posibilidad de producir efectos nocivos si se usa para tratar a mamíferos con infecciones parasitarias del cerebro.

Lo siguiente es una breve descripción de las enfermedades parasitarias de la presente invención, que se pueden tratar con praziquantel. Mieloencefalitis equina por protozoarios (EPM) es una enfermedad neurológica de caballos, con predilección para caballos jóvenes sometidos a estrés (por ejemplo, caballos de carreras de pura sangre y caballos de exhibición de raza pura) , y de esta manera es una enfermedad con impacto económico importante para la industria caballar. La EPM, por primera vez identificada como una enfermedad en las década de 1970, no fue cultivada de un caballo con EPM y se le dio el nombre de Sarcocistis Neurona until 1991. En 1997, una Neospora spp. ahora llamada Neospora hugessi, fue aislada del cerebro de un caballo con EPM. En consecuencia, ahora se propuso que la EPM puede ser causada solo por este organismo recién identificado, solo por Sarcocistis neurona o la combinación de ambos.

Otro parásito coccidial, Toxoplasma gondii , ha sido conocido durante algún tiempo y se aisló por primera vez de los intestinos y tejido muscular de gatos. El huésped definitivo para este parásito es el gato que puede hospedar el organismo por largos periodos de tiempo propagando oocitos a otros animales que incluyen bovinos, ovinos, porcinos y humanos. La infección en ovejas, ganado vacuno y humanos ha sido asociada con aborto y trastornos congénitos, que afectan principalmente el sistema nervioso central. También se ha asociado recientemente con aborto y malformación en gatitos nacidos de madres infectadas que han sido seronegativas antes de la infección durante la preñez. Los huéspedes no felinos tales como bovinos, ovinos, porcinos y humanos no producen los oocitos, pero los desarrollan y pueden sufrir de invasión de músculo y cerebro por taquizoitos y bradizoitos que producen los signos clínicos de la enfermedad -síntomas neurológicos y aborto con defecto fetales. También se ha reportado que el 60% de los gatos son seropositivos a T. gondii . De nuevo, no se ha aprobado tratamiento o profiláctico para toxoplasmosis.

Todavía otro parásito coccidial, Neospora Caninum que se aisló por primera vez de perros en 1988, produce la enfermedad neurológica y abortigena en animales. Anteriormente se confundió con Toxoplasma gondii . La enfermedad causada por este parásito se da más severamente en perritos infectados a través de la placenta y se caracteriza por parálisis ascendente progresiva en los perritos, particularmente de las extremidades traseras; también puede ocurrir polimiocitis y hepatitis. Esta enfermedad ha sido más recientemente reconocida como una causa principal de aborto y defectuosos de los miembros por causas neurológica en terneros recién nacidos. En el cerebro, médula espinal y corazón de fetos abortados se pueden observar lesiones microscópicas de encefalitis supurativa y miocarditis. El perro ha sido identificado recientemente como un huésped definitivo para Neospora caninum . A la fecha no hay tratamiento o profilaxis aprobados para cualquier Neospora caninum de perros o bovinos ni para Neospora hugessi de caballos.

Como se puede resumir de lo anterior, la técnica anterior, incluyendo las referencias ya citadas no sugieren ni enseñan el uso de praziquantel en el tratamiento de animales infectados con coccidios o más específicamente, de la familia de los Sarcocistidos, causantes de enfermedades abortigenas o neurológicas, sin causar efectos laterales intolerables. Por la presente invención se proporciona un tratamiento seguro y mejorado para animales que padecen de enfermedades parasitarias manifestándose como enfermedades neurológicas o abortigenas .

COMPENDIO DE LA INVENCIÓN De acuerdo con lo anterior, la presente invención incluye una composición y el método para tratar terapéuticamente un animal enfermo que sufra de una enfermedad parasitaria neurológica o abortigena susceptible de ser tratada con una cantidad farmacéuticamente eficaz de praziquantel. El método incluye administrar al animal una cantidad farmacéuticamente eficaz de praziquantel.

El término "cantidad farmacéuticamente eficaz" como se utiliza en la presente significa que la cantidad que se administre de praziquantel o un derivado de éste, sea suficiente para inhibir el crecimiento in vivo o in vi tro del protozoario parásito, sin causar reacciones adversas en el mamífero que se esté tratando. Por lo regular, los protozoario parásitos son coccidios que producen enfermedades neurológicas y/o abortos. La cantidad farmacéuticamente eficaz controla los parásitos en los tejidos infectados; consecuentemente, mejora la salud de los animales enfermos. Además, la cantidad farmacéuticamente eficaz, es eficaz desde para uso neurológico o placentario en cuanto a que el praziquantel o derivado de éste está en una cantidad para atravesar la barrera hematoencefálica para tratar parásitos que infectan el sistema nervioso central, o barrera placentaria sin causar reacciones adversas en el mamífero que esté siendo tratado.

Además, la presente invención incluye un método para tratar metafiláctica un animal infectado con un parásito que pueda causar una enfermedad neurológica o abortigena que es susceptible de ser tratada con praziquantel. El tratamiento metafiláctico incluye administrar al animal el praziquantel usando un régimen eficaz para uso metafiláctico. Por el término "régimen metafiláctica eficaz" se entiende administrar dosis intermitentes programadas de un compuesto praziquantel, o un derivado de éste, durante un periodo prolongado hasta que el animal supere la invasión de parásitos, por ejemplo, desarrollando una respuesta inmunoprotectora o de otra manera eliminando del parásito. Por lo regular, el régimen es tal que podria controlar eficazmente los parásitos y prevenir signos clínicos de la enfermedad. La dosis metafiláctica eficaz también puede ser administrada por un periodo prolongado hasta de 5 años o el tiempo de vida del animal, especialmente en casos cuando es dificil controlar el parásito.

Asimismo, la presente invención incluye un tratamiento de animales de una sola dosis alta. Este método consiste en administrar a los animales una sola dosis alta de una cantidad farmacéutica eficaz de praziquantel a un animal enfermo que sufra de una enfermedad neurológica o abortigena parasitaria que sea susceptible de ser tratada con un compuesto praziquantel o derivado de éste. Por el término "única dosis alta" se entiende una cantidad que se administra una sola vez para controlar los parásitos causantes de la enfermedad. Esta cantidad es mucho mayor que la cantidad de dosis empleada en el tratamiento metafiláctico o terapéutico y es eficaz en el control de los parásitos que causan la enfermedad y como tal, no debe producir efectos nocivos, como toxicidad. La única dosis alta de praziquantel en consecuencia es mayor que 10 mg/kg. Este y otros aspectos de la invención están descritos con mayor detalle más adelante.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Como se expuso antes, la presente invención se refiere a una composición y el método para tratar a un mamífero infectado o enfermo que sufra de enfermedades parasitarias, las cuales se manifiestan como enfermedades neurológicas o abortigenas, que sean susceptibles de ser tratas con un compuesto praziquantel o derivado de éste. El método consiste en administrar al mamífero una composición que contenga una cantidad de praziquantel, eficaz para uso farmacéutica. Los ejemplos no limitantes de los animales pueden ser equinos, bovinos, caninos, cerdos, ovinos, aves, insectos o humanos. Los parásitos que infectan o causan enfermedades son coccidiios de la familia de los Sarcocistidos, que puede manifestarse como enfermedades neurológicas o abortigenas. Los ejemplos no limitantes de éstos pueden ser seleccionados del grupo que consiste en Sarcocystitis spp., Neospora Spp., y Toxoplasma spp. Los sarcocistidos por lo regular se seleccionan del grupo que consiste en S . Neurona , N. Hugesi , N. Caninum y T. gondii . Las enfermedades o infecciones protozoarias incluyen, pero no están limitadas a EPM, Neosporosis y Toxoplasmosis.

En la práctica de la invención, el tratamiento de las enfermedades o infecciones parasitarias causadas por los protozoarios descritos en la presente dan como resultado el alivio de los síntomas de las enfermedades neurológicas y abortigenas. Por lo regular, los síntomas incluyen cojera, ataxia, parálisis, aborto, recién nacidos débiles y otros trastornos relacionados. Para el tratamiento terapéutico, los animales que ya sufren los signos de enfermedad mencionados son tratados con el compuesto praziquantel. Normalmente, la duración del tratamiento es desde aproximadamente 28 dias hasta 90 dias y preferiblemente es desde aproximadamente 28 hasta 60 dias. Se entiende que para el tratamiento terapéutico, el régimen de tratamiento puede ser administrado una vez al dia, dos o más veces al dia, un dia si y otro no, o una vez por semana, dependiendo de factores como la gravedad de la enfermedad y el tipo de parásito que produce la enfermedad. En algunos casos, sin embargo, el régimen de tratamiento puede durar indefinidamente, algunas veces durante la vida del animal. Éste último régimen de tratamiento será necesario en caso de infección de un animal con una especie de parásito más resistente. Sin embargo, el tratamiento puede prolongarse por mayores periodos de tiempo necesarios hasta que los signos de enfermedad sean eliminados. El tratamiento preferido es una vez al dia durante aproximadamente 28 dias. La dosis preferida para tratamiento abarca desde 1 mg/kg hasta 100 mg/kg, preferiblemente desde 2.5 mg/kg hasta 25 mg/kg.

Para el tratamiento metafiláctico, se trata a los animales infectados para protegerlos contra manifestaciones clínicas de enfermedad. Este tratamiento finalmente da como resultado que los animales adquieran la capacidad para controlar el parásito, estableciendo una respuesta inmunitaria eficaz para impartir protección contra infecciones futuras, sin necesidad de administración adicional de praziquantel. La actividad metafiláctica, de acuerdo con la invención, se refiere al uso de los compuestos praziquantel o un régimen de tratamiento intermitente programado (régimen metafiláctico efectivo) para controlar los protozoarios, que pueden haber infectado al animal después de tratamiento previo. En consecuencia, se administrado el régimen metafiláctico efectivo para reducir su habilidad para causar enfermedades, es decir, matándolos o reduciendo su número. En esencia, el régimen metafiláctico eficaz puede ser administrado aproximadamente una vez por mes, por el resto de la vida del animal o hasta alcanzar un mecanismo de eliminación inherente, por ejemplo, una respuesta inmunitaria eficaz, desarrollada dentro del animal para protegerlo de infecciones futuras. Esto último puede ocurrir en el transcurso de 5 años o menos. Cuando se lleve a cabo, el tratamiento metafiláctico se basa en el reconocimiento que cuando los animales son infectados con los protozoarios en la presente descritos, no demuestran signos clínicos como signos neurológicos o aborto hasta que ha pasado un tiempo significativo (por ejemplo, 2-6 meses posterior a la infección) . Por el contrario, las infecciones protozoarias entéricas se manifiestan poco después de la infección. De acuerdo con esta invención, el tratamiento impide al parásito estabilizarse y causar una enfermedad clínica. El régimen de tratamiento es en un programa intermitente de aproximadamente una vez cada mes, una vez cada dos meses o una vez cada tres semanas en una dosis equivalente aproximadamente entre 1.0 y 100 mg/kg, preferiblemente aproximadamente 1.0 hasta 25 mg/kg y más preferiblemente alrededor de 2.5 hasta 10 mg/kg. El intervalo alto será necesario en casos particularmente resistentes (por ejemplo, un animal infectado con una especie resistente) . El nivel de dosis y duración de tratamiento requeridos están dentro del conocimiento de un experto en la técnica. Un régimen de tratamiento preferido para caballos con EPM o bovino y perros con Neosporosis es aproximadamente 1.0 hasta 25 mg/kg, y un intervalo más preferido es aproximadamente 2.5 hasta 10 mg/kg de praziquantel o derivados de éste cada 28 dias.

Para el tratamiento de una sola dosis alta de praziquantel se administra en cantidades farmacéuticamente eficaces que sean mayores que 10 mg/kg y hasta cerca de 100 mg/kg. Es una caracteristica distintiva de la invención que los compuestos de esta invención no son tóxicos, de esta manera pueden ser administrados en niveles de dosis mayores. La ventaja de la administración de dosis mayores reside en el hecho de que no se requiere repetir la dosis.

Sin apegarse a ninguna teoria en particular de la invención, se considera que los excelentes resultados inesperados de los tratamientos en la presente descritos resultan de la propiedad del praziquantel para atravesar la barrera hematoencefálica o la barrera placentaria. Se piensa que los compuestos de esta invención atraviesan fácilmente la barrera hematoencefálica y, también son capaces de atravesar la placenta y matar el protozoario in si tu en el cerebro y el fluido cerebroespinal/médula espinal. También se encontró que los compuestos de esta clase son no tóxicos y no mutagénicos aún en las dosis altas necesarias para el régimen de tratamiento de una sola dosis alta descrito en la presente.

Hasta ahora, los medicamentos administrados fácilmente, no efectivos en costo, han estado disponibles para tratar eficazmente y contra estas enfermedades sin producir efectos laterales no aceptables, como toxicidad o mutagenicidad en mamíferos.

En la práctica de la invención, el praziquantel puede ser formulado en cualquier manera conveniente para administración a mamíferos. Las formulaciones adecuadas para administración oral, que son preferidas en la presente, pueden ser suspensiones, tabletas, cápsulas, geles, pastas, bolos, o preparaciones en forma de polvos, granulos, o cápsulas. La formulación más preferida es la administrada oralmente esta en forma de una pasta o un aditivo alimenticio. Otros modos de administración pueden ser empleados incluyendo la parenteral, tópica, intramuscular, e intramucosa o por otras rutas conocidas por aquellos expertos en la técnica. También se prefiere la administración tópica en forma de un pour-on.

Por lo regular, en las formulaciones se emplean auxiliares y vehículos farmacéuticamente aceptables. Los ejemplos de éstos pueden ser agentes espesadores seleccionados del grupo que consiste en Carbopol; espesadores inorgánicos como silicatos, bentonitas o silice coloidal; espesadores como alcoholes grasos o esteres de ácidos grasos y agentes humectantes seleccionados del grupo que consiste en polietilenglicol y lauril sulfato de sodio con Carbopoles; los agentes espesantes preferidos en la presente para las formulaciones en pasta son Carbopol 974P y Carbopol 934P. También se emplea en la presente los preservadores seleccionados del grupo que consiste en parabenos, alcoholes y aldehidos. Éstos pueden ser materiales líquidos, sólidos o gaseosos, que de otra manera sean inertes o aceptables para uso médico, y compatibles con los agentes activos.

Sorprendentemente, las pastas, de acuerdo con la invención, son eficaces cuando se usan el tratamiento de parásitos. Más específicamente, es sorprendente que las pastas de la presente invención están disponibles en una dosis neurológicamente eficaz. Estas son eficaces en liberar el praziquantel para atravesar la barrera hematoencefálica o de la placenta y ataca los parásitos que ya han invadido el cerebro o infectado el feto de un animal preñado. Como conveniencia, en la presente se proporciona una descripción de una modalidad especifica de las pastas preferidas en esta y cómo se preparó. Una pasta preferida, de acuerdo con la presente invención consiste en una suspensión micronizada de praziquantel, propilenglicol, agente espesante como Carbopol, conservadores como metilparabeno y propilparabeno, y agua. La pasta puede ser preparada combinando de agua, por lo regular, agua purificada y propilenglicol, calentando la combinación hasta cerca de 70°C; y adicionando los conservadores a esta temperatura. La mezcla resultante se enfria a la temperatura ambiente después que el Carbopol, preferiblemente en forma de Carbopol 974P o 934P, se adiciona. Finalmente se adiciona el praziquantel. Después se completa el mezclado, se ajusta el pH hasta aproximadamente 6.0 con hidróxido de sodio. La pasta más preferible incluye 15% p/p de praziquantel, 20% p/p de propilenglicol, 0.5 p/p de Carbopol 974P, 0.14% p/p de metilparabeno, 0.02% p/p propilparabeno, 0.1% p/p hidróxido de sodio siendo el resto agua purificada. Los edulcorantes incluyen dextrosa, sacarosa, lactosa, fructuosa, sorbitol, xilitol, edulcorantes artificiales y melasas que pueden ser adicionados para mejorar la aceptabilidad. Además, también pueden ser adicionados levadura o saborizante para el mismo propósito.

La invención esta descrita adicionalmente por los siguientes ejemplos ilustrativos pero no limitantes.

EJEMPLO 1 Para determinar el alcance de la protección proporcionada por praziquantel; se realizaron pruebas in vi tro . Se evaluó la sensibilidad de Sarcocistis neurona a este compuesto. Se utilizó la cepa SN3 de sarcosistis neurona. El praziquantel se probó en dos concentraciones, 10 µg/ml y 20 µg/ml.

En todas las pruebas in vitro se utilizaron células de bovino turbinado (BT) . Las células fueron desarrolladas hasta confluencia en matraces de 25 cm2 con medio RMPI 1640 complementado con suero bovino fetal al 10% v/v (FBS), con 100 unidades de penicilina (g/ml), 100 mg de estreptomicina/ml y 2-mercaptoetanol 5 x 10~2 mM. Después que se obtuvo la confluencia celular, las células se mantuvieron en el mismo medio con menos FBS (2% v/v) .

Los cultivos celulares se incubaron a 37 C [sic] en una atmósfera ' humidificada que contenia 5% de dióxido de carbono y 95% de aire.

Para el desarrollo del parásito, las monocapas de células BT fueron infectadas con parásitos y examinadas con un microscopio invertido para el desarrollo de lesiones (efecto citopático "CPE") o la presencia de múltiples merozoitos extracelulares. Una vez que se observaron lesiones, o estuvieron presentes muchos parásitos extracelulares, la monocapa fue raspada con la punta de una pipeta de 5 mL y se transfirieron de 1 hasta 3 gotas de fluido con merozoitos a 2 matraces de células BT frescas. Los pasajes de los merozoitos de S. Neurona de esta manera se hicieron cada 5 a 10 dias.

La prueba para determinar la eficacia de praziquantel fue el ensayo de Disrupción de la Monocapa de Microtitulación (MMDA) . Este ensayo se usó para determinar si los parásitos o compuestos fueron tóxicos para las células B. Las placas de microtitulación, de 96 pozos, de fondo plano, fueron inoculadas con células BT y las moncoapas resultantes se usaron para determinar el efecto de praziquantel sobre la producción de merozoitos que se midieron por CPE (efecto citopático-formación de placa) . Las monocapas fueron inoculadas con parásitos ( S . Neurona en una cuenta de 50, 000/pozo) . Todos los pozos fueron inoculados con la concentración correcta de praziquantel a las 2 horas después de la infección de las monocapas .

Los pozos con la moncoapa no tratada y no infectada sirvieron como controles de parásito y las células BT tratadas con agente no infectado sirvieron como controles de toxicidad. Cada tratamiento fue examinado en 6 repeticiones. Cada pozo fue supervisado diario visualmente y el ensayo fue interrumpido cuando 90-100% de las células infectadas con merozoito, no tratadas, se hablan lisado (90-100% CPE). Todos los pozos de las placas fueron enjuagados con solución salina amortiguada con fosfatos (PBS) y fijados en 10% de metanol durante 5 minutos después de que fueron teñidos en solución de cristal violeta. Las áreas de destrucción inducidas por merozoitos o la muerte de las células BT por toxicidad no captaron el cristal violeta. Un lector de placas ELISA se utilizó para cuantificar la incorporación del cristal violeta y se utilizaron estos datos para determinar la concentración de praziquantel que inhibe la destrucción en un 50% (concentración inhibitoriaso o IC50) . Los datos que demuestran la inhibición se presentan en la Tabla 1. Se debe señalar que tan poco como 10 µg/ml de praziquantel proporcionaron 51% de inhibición de la destrucción celular. El praziquantel en una concentración de 20 µg/ml produce una inhibición de 69% de destrucción celular. Esto indica que praziquantel puede ser eficaz para el tratamiento de enfermedades causadas por coccidios las cuales, según se sabe, están asociadas con síndromes de enfermedades neurológicas y abortigenas que incluyen enfermedades causadas por S . Neurona , N. Caninnum, N. Hugesí , T. gondii y I . Suis . Además, praziquantel no fue tóxico. para las células BT.

Tabla 1. Datos in vi tro sobre el efecto de praziquantel en Sarcocystis neurona .

Estos datos indican que una dosis de 2.5 hasta 10 µg/kg puede ser neurológicamente eficaz en el tratamiento a un mamífero que sufre de enfermedad causada por Sarcistosis neurona .

Claims (23)

REIVINDICACIONES

1. Una composición de praziquantel para tratar a un mamífero enfermo que sufra de una enfermedad parasítica, neurológica o abortigena, que sea susceptible de ser tratada con un compuesto praziquantel, la cual contiene una cantidad farmacéuticamente eficaz de praziquantel o un derivado de éste y un vehículo aceptable para uso farmacéutico.

2. La composición de la reivindicación 1, caracterizada porque la enfermedad es causada por un coccidio.

3. La composición de la reivindicación 2, caracterizada porque el coccidio es un miembro del grupo que consiste en Sarcocitis spp; Neospora ssp, Toxoplasma spp. e Isospora spp.

4. La composición de la reivindicación 3, caracterizada porque el Sarcocistis spp es Sarcocistis neurona , la Neospora spp es Neospora caninum o Neospora hugesi , el Toxoplasma spp es Toxoplasma gondii y la Isospora spp es Isospora suis .

5. La composición de la reivindicación 4, caracterizada porque el Sarcocistis neurona es el agente causante de mieloencefalitis equina causada por protozarios.

6. La composición de la reivindicación 4, caracterizada porque la Neospora caninum es el agente causante de neosporosis canina o bovina.

7. La composición de la reivindicación 4, caracterizada porque la Neospora hugesii es el agente causante de mieloencefalitis equina causada por protozarios.

8. La composición de la reivindicación 4, caracterizada porque el Toxoplasma gondii es el agente causante de aborto en mamíferos, asociado con toxoplasma.

9. Una composición de praziquantel para tratar a un mamífero enfermo que sufra de una enfermedad parasítica, neurológica o abortigena, que sea susceptible de ser tratada con un compuesto praziquantel, la cual contiene una cantidad de praziquantel placentariamente eficaz o neurológicamente eficaz, o un derivado de éste, y un vehículo aceptable para uso farmacéutico.

10. Un método de tratamiento terapéutico para un mamífero enfermo que sufre de una enfermedad parasítica, neurológica o abortigena, susceptible de ser tratada con un compuesto praziquantel, que consiste en administrar al mamífero una composición con una cantidad eficaz de praziquantel o un derivado de éste y un vehículo aceptable para uso farmacéutico.

11. El método de la reivindicación 10, caracterizado porque la enfermedad es causada por un coccidio.

12. El método de la reivindicación 11 caracterizado porque el coccidio es un miembro del grupo que consiste en Sarcocistis spp, neospora spp, toxoplasma spp e isospora spp.

13. El método de la reivindicación 12, caracterizado porque el Sarcocistis spp es Sarcocistis neurona , la Neospora spp es Neospora caninum o Neospora hugesi , el Toxoplasma spp es Toxoplasma gondii y la Isospora spp es isospora suis .

14. El método de la reivindicación 13 caracterizado porque el Sarcocistis neurona es el agente causante de mieloencefalitis equina causada por protozarios.

15. El método de la reivindicación 12 caracterizado porque la Neospora caninum es el agente causante de neosporosis canina o bovina.

16. El método de la reivindicación 12 caracterizado porque Neospora hugesi es el agente causante de mieloencefalitis equina causada por protozarios.

17. El método de la reivindicación 14, caracterizado porque el Toxoplasma gondii es el agente causante de aborto en mamíferos, asociado con toxoplasma.

18. Un método para tratar un mamífero enfermo que sufre de una enfermedad parasítica, neurológica o abortigena, susceptible de ser tratada con un compuesto praziquante, el cual consiste en administrar al mamífero una cantidad placentariamente eficaz o neurológicamente eficaz de praziquantel o un derivado de éste y un vehículo aceptable para uso farmacéutico.

19. Un método de tratamiento metafiláctico para mamíferos infectados con un parásito que es un agente causante de una enfermedad neurológica o abortigena susceptible de ser tratada con un compuesto praziquantel, el cual consiste en administrar a éste un régimen metafiláctico eficaz de una composición de una cantidad farmacéuticamente eficaz del compuesto praziquantel o un derivado de éste y un vehículo aceptable para uso farmacéutico.

20. El método de la reivindicación 10 caracterizado porque la composición se administra en dos o más dosis intermitentes .

21. El método de la reivindicación 10 caracterizado porque la composición se administra en una dosis de aproximadamente 1.0 y 100 mg/kg.

22. El método de la reivindicación 21 caracterizado porque la composición se administrada en una dosis de aproximadamente 1.0 y 50 mg/kg.

23. El método de la reivindicación 10 caracterizado porque la composición se administra en una sola dosis alta mayor que 50 mg/kg.