MXPA02003520A

MXPA02003520A - Imitaciones de peptido y peptidos modificados para utilizarse en inmunoterapia.

Info

Publication number: MXPA02003520A
Application number: MXPA02003520A
Authority: MX
Inventors: Anna Maria Helena Boots
Original assignee: Akzo Nobel Nv
Priority date: 1999-10-18
Filing date: 2000-10-12
Publication date: 2002-08-20
Also published as: IL148778A0; AR026068A1; HK1046693A1; ZA200202577B; NZ518256A; AU1139601A; WO2001029081A1; TR200201036T2; PL354590A1; JP2003512388A; CZ20021356A3; HUP0203504A3; RU2002113107A; NO20021763L; NO20021763D0; HUP0203504A2; CN1379786A; PE20010692A1; AU780238B2; CO5271650A1

Abstract

La invencion se refiere a un peptido modificado derivado de H-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH que tiene la formula general (II): Q-A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-Z. En la formula general (II), A1 a A13 corresponden con los aminoacidos de la formula (I), Q corresponde con H y Z corresponde con OH. Las modificaciones de acuerdo con la presente invencion se seleccionan ue uno o mas de los grupos a, b o c, que consisten de a) substitucion de 1,6, preferentemente 1-4 aminoacidos en A1 a A13 con aminoacidos no naturales o aminoacidos °; b) substitucion de uno o mas enlaces de amida con enlaces de amida reducidos o isoesteres de etileno; c) substituciones en Q y/o Z; y, opcionalmente, d) substitucion con aminoacidos naturales hasta un total de 6 modificaciones. Los peptidos pueden utilizarse para fomentar la induccion de tolerancia en pacientes que padecen de enfermedades autoinmunes.

Description

IMITACIONES DE PÉPTIDO Y PÉPTIDOS MODIFICADOS PARA UTILIZARSE EN INMUNOTERAPIA La presente invención se refiere a péptidos modificados que se basan en HC gp-39 (263-275), composiciones farmacéuticas que comprenden tales péptidos así como también el uso de estos péptidos para fomentar la inducción de tolerancia en pacientes que padecen de enfermedades autoinmunes. El sistema inmune se establece en un principio de discriminación entre antígenos externos (antígenos no autónomos) y autoantígenos (antígenos autónomos, derivados del mismo cuerpo de los individuos, logrados por una tolerancia construida contra los autoantígenos. El sistema inmune protege a los individuos contra antígenos externos y responde a la exposición a un antígeno externo al activar las células específicas tales como linfocitos T y B y producir factores solubles como interleuquinas, anticuerpos y factores de complemento. El antígeno al cual el sistema inmune responde se degrada por las células que presentan antígeno (APCs) y un fragmento del antígeno se expresa en la superficie celular asociada con una glucoproteína clase II de complejo de histocompatibilidad principal (MHC). El complejo de MHC-glucoproteína-antígeno-fragmento se presenta a una célula T que en virtud de su receptor de célula T reconoce el fragmento de antígeno conjuntamente con la proteína clase II de MHC al cual se une. La célula T se activa, es decir, prolifera y/o produce interleuquinas, resultado en la expansión de los linfocitos activados dirigidos al antígeno bajo ataque (Grey eí al., Sci. Am., 261:38-46, 1989). Los antígenos autónomos también se procesan continuamente y presentan como fragmentos de antígeno por las glucoproteínas de MHC a células T (Jardetsky et al., Nature 353:326-329, 1991 ). El reconocimiento autónomo de esta manera es intrínseco al sistema inmune. Bajo circunstancias normales el sistema inmune es tolerante a antígenos autónomos y la activación de la respuesta inmune por estos antígenos autónomos se evita. Cuando la tolerancia a los antígenos autónomos se pierde, el sistema inmune se activa contra uno o más antígenos autónomos, resultando en la activación de células T autoreactivas y la producción de autoanticuerpos. Este fenómeno se refiere como autoinmunidad. Como la respuesta inmune en general es destructiva, es decir, significa destruir el antígeno externo invasivo, las respuestas autoinmunes pueden causar destrucción del tejido propio del cuerpo. La contribución de las células T a enfermedades autoinmunes se ha establecido en varios estudios. En ratones, la encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) se media por un grupo altamente restringido de células T, enlazadas por su especificidad para un epítopo único de proteína básica de mielina (MBP) en compuesto con una molécula clase II de MHC. En la rata Lewis, una especie con alta susceptibilidad a varias enfermedades autoinmunes, la enfermedad se ha mostrado que se media por células T. En humanos también se enseña que las enfermedades autoinmunes se asocian con el desarrollo de células T auto- agresivas. Una respuesta autoinmune destructiva se ha implicado en varias enfermedades tales como artritis reumatoide (RA), en la cual la integridad del cartílago articular se destruye por un proceso inflamatorio crónico que resulta de la presencia de grandes números de linfocitos activados y células que expresan clase II de MHC. La mera presencia del cartílago parece necesaria para sostener la respuesta inflamatoria local: se ha sugerido que la degradación del cartílago se asocia con la actividad de las células T autoreactivas responsivas al cartílago en RA (Sigall eí al., Clin. Exp. Rheumat. 6:59, 1988; Glant eí al., Biochem. Soc. Trans. 18:796, 1990; Burmester eí al., Rheumatoid arthritis Smolen, Kalden, Maini (Eds) Springer-Verlag Berlin Heidelberg, 1992). Además, se muestra que el retiro de cartílago de pacientes con RA por cirugía reduce el proceso inflamatorio (R.S. Laskin, J. Bone Joint Surgery (Am) 72:529, 1990). Las proteínas de cartílago por lo tanto se considera que son autoantígenos objetivo que son competentes para estimular las células T. La activación de las células T autoreactivas conduce al desarrollo de enfermedad autoinmune. Sin embargo, la identificación de los componentes autoantigénicos que juegan un papel en el inicio de artritis reumatoide hasta ahora ha permanecido elusiva. La respuesta inflamatoria que resulta de la destrucción del cartílago puede tratarse por varios medicamentos, tales como por ejemplo medicamentos de esteroides. Sin embargo, estos medicamentos con frecuencia son medicamentos ¡nmunosupresores que no son específicos y tienen efectos secundarios tóxicos. Las desventajas de la inmunosupresión no específica hace a esta una terapia altamente desfavorable. La terapia de inmunosupresión no tóxica, específica de antígeno proporciona una alternativa muy atractiva para la inmunosupresión no específica. La terapia específica de antígeno incluye el tratamiento de pacientes con el autoantígeno objetivo o con péptidos reactivos de la célula T sintéticos derivados del autoantígeno objetivo. Estos péptidos sintéticos corresponden a epítopos de célula T del autoantígeno y pueden utilizarse para inducir la tolerancia de la célula T específica tanto para ellos mismos como el antígeno. La desensibilización o tolerancia inmunológica del sistema inmune se basa en el fenómeno observado por mucho tiempo de que los animales que se han alimentado o han inhalado un antígeno o epítopo son menos capaces de desarrolar una respuesta inmune sistémica hacia dicho antígeno o epítopo cuando dicho antígeno o epítopo se introduce a través de una vía sistémica. La artritis reumatoide es una enfermedad autoinmune que ocurre de manera más frecuente en individuos positivos en HLA-DR4. La asociación de enfermedad puede indicar que las moléculas DR4 presentan autoantígenos a las células T. El objetivo de esta enfermedad autoinmune es la articulación en donde el condorcito articular presenta un tipo celular único que produce productos organizados en una matriz. Se enseña que la destrucción de la articulación como se observa en RA se media por células T autoreactivas, específicas del cartílago. El Cartílago Humano gp-39 de proteína derivada del cartílago (HC gp-39) se ha identificado recientemente como un autoantígeno candidato en RA. Un epítopo dominante de la proteína HC gp-39, el péptido que cubre la secuencia 263- 275, se reconoce preferentemente en pacientes con RA, que sugiere que este epítopo es un objetivo del ataque autoinmune en artritis reumatoide. Ocho de 18 pacientes con RA respondieron a este péptido y ningún respondedor se encontró en el grupo donador saludable (Verheijden eí al., Arthtritis Rheum. 40: 1115, 1997). De esta manera, los datos sugieren fuertemente que este péptido o la proteína HC gp-39 es un objetivo para el reconocimiento inmune en la articulación. El significado de HC gp-39 para enfermedad artrítica se demuestra además por su artritogenicidad en ratones Balb/c. Una sola inyección en la región del pecho con µg cantidades de proteína mezclada en IFA, induce una inflamación crónica de la articulación evocativo de RA. La respuesta al péptido 263-275 de HC gp-39 se examina además al generar un conjunto de hibridomas T-T específicos de péptido, DRB1 *0401 -restringidos de DRB1 *0401 -ratones transgénicos siguiente la inmunización con HC gp-39. La especificidad fina de los hibridomas específicos para el péptido 263-275 en el contexto de DR4 (DB1 *0401 ) se define y compara. Como un resultado de 3 hibridomas que diferente en su reconocimiento del epítopo 263-275 presentado por DRB1 *0401 las moléculas codificadas se identificaron. (La diferencia en reconocimiento de epítopo entre los tres hibridomas utilizados se volvió visible cuando los péptidos truncados de terminal C y N dentro de la secuencia 263-275 se utilizan para la estimulación de los diferentes hibridomas. El hibridoma 5G1 1 se encuentra que responde óptimamente a la secuencia 265-275. En contraste, el reconocimiento por el hibridoma 8B12 se centra alrededor de la secuencia 264-274 mientras que el hibridoma 14G1 1 es óptimamente responsivo a 264-275. La tolerancia de las células T reactivas a HC gp-39 (263-275) pueden ser benéfica a los pacientes con RA. La presente invención proporciona derivados de péptido modificados en base a la secuencia HC gp-39 (263-275) que son superiores en su capacidad para inducir una respuesta inmune y en sus capacidad de tolerancia. Se encontró sorprendentemente que las modificaciones de péptido específicas en base a HC gp-39 (263-275) son agonísticas para un conjunto de hibridomas de célula T específicos para el péptido HC gp-39 (263-275) y superiores en estimulación de dos clones de célula T de humano generados después de la estimulación con péptidos que acomodan la secuencia de epítopo 263-275. Además, estos péptidos modificados mostraron una capacidad de tolerancia superior in vivo. De esta manera, de acuerdo con un aspecto de la invención se proporciona un péptido modificado derivado de H-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH (fórmula I; SEQ ID NO: 1 ) que tiene la formula general Q-A1 -A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-A1 1 -A12-A13-Z (fórmula II). En la fórmula general II, A1 a A13 corresponden con los aminoácidos de la fórmula I, Q corresponde con H y Z corresponde con OH. Las modificaciones de acuerdo con la presente invención se seleccionan del grupo que consiste de a) substitución de 1 ,6, preferentemente 1 -4 aminoácidos en A1 a A13 con aminoácidos no naturales o aminoácidos ß b) substitución de uno o más enlaces de amida con enlaces de amida reducidos o isoésteres de etileno c) substituciones de Q y/o Z. El número de modificaciones a seleccionarse de uno o más de estos grupos son las cantidades 1 -6. Además, los aminoácidos pueden substituirse con otros aminoácidos naturales siempre que el número total de modificaciones no exceda el número de 6. Los péptidos modificados en base a la fórmula I (HC gp-39 (263-275)) puede estabilizarse por modificaciones de terminal C y/o N, que reducirá la hidrólisis catalizada por exopeptidasa. Tales modificaciones pueden incluir acilación de terminal N (por ejemplo acetilación = Ac- péptido). La introducción de la amida de terminal C (por ejemplo, péptido- NH2), combinaciones de acilación e introducción de amida (por ejemplo, Ac-péptido-NH2) y por ejemplo la introducción de D-aminoácidos en lugar de L-aminoácídos. Otras modificaciones se enfocan en la prevención de hidrólisis de endopeptidasas. Tabla 1 . Enlaces de Péptido Estructura Nombre Péptido reducido Péptidos vinilogosos Peptoideo N-hidroxi-péptido Oligocarbamatos Oligourea ?^V Hidracinopéptidos Oligosulfona Péptidosulfonamidas Isostero de etileno Los ejemplos de estas modificaciones son la introducción de D-aminoácidos en lugar de L-aminoácidos, aminoácidos modificados, ciclisación dentro del péptido, introducción de enlaces de péptido modificados, por ejemplo, enlaces de péptido reducidos ?[CH2NH] y peptoides (N-derivados de glicina alquilados). Otros análogos de péptido pueden relacionarse con los ,.**ÍA,r**., A ^felfetl péptidos de la fórmula I o la fórmula general II pero en su lugar de los enlaces de péptido -NH-C(O)- convencionales, los enlaces mostrados en la Tabla 1 , o cualquier combinación de los mismos pueden utilizarse en lugar de los enlaces individuales de -NH-C(O)-. Si el grupo amino en el término N se ha removido (por ejemplo, A1 = desaminoarginina en la fórmula II) Q en la fórmula II no corresponde a un átomo. Los péptidos preferidos de acuerdo con la invención son péptidos en donde Q es H, (C1 -6)alquilo, formilo, (C?-6)alquilcarbonilo, carboxi(C1 -6)alquilo, (CT.eJalquiloxicarbonilo, (C2-6)alqueniloxicarbonilo, (C6- 14)aril(C?-6)alquilo; (C6-?4)aril(C?-6)alquiloxicarbonilo, CH3(OCH2CH2)n-OCH2-C(O)-, en donde n es 1 -10, HOCH2-(CHOH)m-CH2- en donde m es 3-4; 1 -metil-piridinio-3-carbonilo, 1 -metil-piridinio-4-carbonilo o Lys o Q se encuentra ausente si A1 es H2N-C(=NH)NH-(CH2)n-C(O)- en donde n es 2-5; Z es OR en donde R es H, (C1 -6)alquilo, (C2-6)alquenilo, (Cß-i4)aril(C?. )alquilo, (C6-?4)(C4a13)heteroarilo(C1.6)alquilo o NR? R2 en donde Ri y R2 se seleccionan independientemente de H, (C1 -e)alquilo o (C6-?4)aril(C?. 6)alquilo; y opcionalmente, Q y Z contienen en adición hasta 10 aminoácidos ubicados próximos a la posición A1 y/o A13. La substitución en A1 a 413 con uno o más aminoácidos naturales preferentemente se realiza en no más de cuatro, más preferentemente dos posiciones. En los péptidos de acuerdo con la presente invención, las siguientes substituciones en la fórmula general II se prefieren: Q es H, (C?-6)alquilo, formilo, (C1 -ß)alquilcarbonilo, carboxi(C1 -6)alqu¡lo, (Ci. Í.At*?.. ¿má¡?í?..**.,... 6)alquiloxi-carbonilo, (C2.e)alqueniloxicarbonilo, (Ce-uJarílíCt.ßJalquilo; (C6-1 )aríl(C1 -6)alquiloxicarbonilo, CH3(OCH2CH2)n-OCH2-C(O)- en donde n es 1 -10, HOCH2-(CHOH)m-CH2- en donde m es 3-4; 1 -metil-pirid inio-3-carbonilo, 1 -metil-piridinio-4-carbonil o Lys, o Q se encuentra ausente si A1 es H2N-C(=NH)NH-(CH2)n-C(O)- en donde n es 2-5. Más preferidas son las substituciones en donde Q es H, (C1 -6)alquilo, (d.6)alquilocarbon¡lo, carboxiíd.ejalquilo, (C?.6)alquiloxicarbonilo, CH3(OCH2CH2)n-OCH2-C(O)-en donde n es 1 -10, HOCH2-(CHOH)m-CH2- en donde m es 3-4; 1 -metil-piridinio-3-carbonilo, 1 -metil-piridinio-4-carbonil o Lys, o Q se encuentra ausente si A1 es H2N-C(=NH)NH-(CH2)n-C(O)- en donde n es 2-5. Aún más preferidos son los péptidos en donde Q es H, metilo; acetilo; carboximetileno, metoxicarbonilo; CH3(OCH2CH2)3-OCH2-C(O)-, D-1 -glucitil, 1 -metil-piridinio-3-carbonilo o l -metil-piridinio-4-carbonilo, o Q se encuentra ausente si A1 es H2N-C(=NH)NH-(CH2)4-C(O)-, A1 es L-Arg, D-Arg, L-Lys, D-Lys, L-Ala, D-Ala, H2N-C(=NH)NH-(CH2)„-C(O)- en donde n es 2-5, H2N-(CH2)n-C(O)-, en donde n es 2-7, (-/?H-NH-CH[(CH2)n-NH-C(=NH)-NH2]-CH2-C(O)-}, en donde n es 2-5 o fSH-NH-CH[(CH2)n-NH-C(=NH)-NH2]-CH2-C(O)-}, en donde n es 2-5 o -N[(CH2)n-NH-C(=NH)-NH2]CH2C(O)-, en donde n es 2-5 Preferentemente A1 es L-Arg, D-Arg, L-Ala, H2N-C(=NH)NH-(CH2)n-C(O)- en donde n es 2-5, H2N-(CH2)n-C(O)-, en donde n es 2-7, fSH-NH-CH[(CH2)n-NH-C(=NH)-NH2]-CH2-C(O)-}, en donde n es 2-5 o -N[(CH2)n-NH-C(=NH)-NH2]CH2C(O)-, en donde n es 2-5. Más preferentemente A1 es L-Arg, D-Arg, L-Ala, H2N-C(=NH)NH-(CH2)4-C(O)-, H2N-(CH2)n-C(O)-, en donde n es 5-7, (fS -{-NH-CH[(CH2)3-NH-C(=NH)-C(=NH)-NH2]-CH2-C(O)-} o -N[(CH2)3-NH-C(=NH)-NH2]CH2C(O)-. iÁ-r . ***... tL?Uf* * . . **.i*. ** íA Zlj &A-??A.-* r£r*r. r A2 es L-Ser, D-Ser, L-hSer, D-hSer, L-Thr, D-Thr, L-Ala, D-Ala, Gly o -N[(CH2)n-OH]-CH2-C(O)- en donde n es 2-5. Preferentemente A2 es L-Ser, L-Ala, D-Ala, Gly o - N[(CH2)n-OH]-CH2-C(O)- en donde n es 2-5. Más preferentemente A2 es L-Ser, L-Ala o -N[(CH2)2-OH]-CH2-C(O)-. A3 es L-Phe, D-Phe, L-Phe(X), D-Phe(X) en donde X se selecciona de uno o más de (C?-4)alquilo, hidroxi, halo, (Ci.ßjalquilocarbonilamino, amino o nitro, L-Hfe, D-Hfe, L-Thi, D-Thi, L-Cha, D-Cha, L-Pal(3), D-Pal(3), L-1-Nal, D-1 -Nal, L-2-Nal, D-2-Nal, L-Ser(Bzl), D-Ser(Bzl), (7? -{-NH-CH(CH2-aril)-CH2-} o (S -{-NH-CH(CH2-ar??)-CH2-} 0 (f?H-NH-CH(CH2-aril)-CH2-} o (S)-{-NH-CH(CH2-aril)-CH2-}. Preferentemente A3 es L-Phe, D-Phe, L-Phe(X) o D-Phe(X) en donde X es halo or nitro, L-Hfe, L-Thi, L-Cha, L-Pal(3), L-1 -Nal, L-2-Nal, L-Ser(Bzl) o fSM-NH-CH(CH2-aril)-CH2-). Más preferentemente A3 es L-Phe, D-Phe, L-Phe(X) en donde X es halo o nitro, L-Hfe, L-Thi, L-Cha, L-Pal(3), L-1 -Nal, L-2-Nal o L-Ser(Bzl). A4 es L-Thr, D-Thr- L-Ser-, D-Ser, L-hSer. D-hSer, L-Ala, D-Ala o Gly. Preferentemente A4 es L-Thr o L-Ala. A5 es L-Leu, D-Leu, L-lle, D-lle, L-Val, D-Val-, L-Nva, D-Nva, L-Ala, D-Ala, Gly, (7??{-NH-CH(CH2-CH(CH3)2)-CH2-}, o (SH-NH-CH(CH2-CH(CH3)2)-CH2-}. Preferentemente A5 es L-Leu, L-Ala, or fSH-NH-CHÍCHz-CHÍCHs);,}. A6 es L-Ala, D-Ala o Gly. Preferentemente A6 es L-Ala o Gly. A7 es L-Ser, D-Ser, L-hSer, D-hSer, L-Thr, D-Thr, L-Ala, D-Ala o Gly. Preferentemente A7 es L-Ser o L-Ala. A8 es L-Ser, D-Ser, L-hSer, D-hSer, L-Thr, D-Thr, L-Ala, D-Ala o Gly. Preferentemente A8 es L-Ser o L-Ala. A9 es L-Glu, D-Glu, L-Asp, D-Asp, L-Ala, D-Ala o Gly. Preferentemente A9 es L-Glu o L-Ala. A10 es L-Thr, D-Thr, L-Ser, D-Ser, L-hSer, D-hSer, L-Ala, D-Ala o Gly. Preferentemente A10 es L-Thr o L-Ala. A1 1 es Gly, L-Ala, D-Ala o -NH-CH2-CH2-. Preferentemente A1 es Gly, L- Ala o -NH-CH2-CH2-. A12 es L-Val, D-Val, L-Nva, D-Nva, L-Leu, D-Leu, L-lle, D-lle, (R)-{-NH- CH[CH(CH3)2]-CH2-}, fS -{-NH-CH[CH(CH3)2]-CH2-}, C^-{-NH- CH[CH2CH2CH3]-CH2-},fSH-NH-CH[CH2CH2CH3]-CH2-}, (R)-{-H - CH[CH2CH(CH3)2]-CH2-}, fSJ-{-NH-CH[CH2CH(CH3)2]-CH2-}, (RR)-{-t*H- CH[CH2(CH(CH3)-CH2CH3]-CH2-}, C SH-NH-CH[CH2(CH(CH3)-CH2CH3]- CH2-}, CSf? -{-NH-CH[CH2(CH(CH3)-CH2CH3]-CH2-, o fSSj-{-NH- CH[CH2(CH(CH3)-CH2CH3)-CH2-}. Preferentemente A2 es L-Val o fSH-NH- CH[CH(CH3)2]-CH2-}. A13 es Gly, L-Ala o D-Ala. Preferentemente A13 es Gly or L-Ala. Además, en los péptidos de acuerdo con la invención Z es OR en donde R es H, (C1 -6)alquilo, (C2.6)alquenilo, (C6.1 )aril(C?-1 )alquilo, (C - ?3)heteroaril(C?.6)alquilo o NRiR2 en donde R^ y R2 se seleccionan independientemente de (C?-6)alquilo o (Ce- Jari Ci.eJalquilo. Preferentemente Z es OR en donde R es H o NRnR2 se seleccionan independientemente de H o (C1 -6)alquilo. Más preferentemente Z es OH, NH2 o NHEt. Los péptidos de acuerdo con la invención opcíonalmente pueden extenderse en el extremo de terminal N y C, es decir, próximo a A1 y/o A13 con varios aminoácidos. Preferentemente, pueden extenderse con hasta 10 aminoácidos. De esta manera, Q y Z pueden contener además hasta 10 aminoácidos ubicados próximos a la posición A1 y/o A13. Los péptidos pueden diferir de la fórmula general I en varias posiciones pero preferentemente se modifican en las 1 -4 posiciones, más preferentemente en las 2-3 posiciones. Como se utiliza en la presente, el término (C?-6)alquilo significa un grupo alquilo ramificado o sin ramificar que tiene 1 -6 átomos de carbono, por ejemplo metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, sec-butilo, tert-butilo y hexilo. Más preferidos son los grupos alquilo que tienen 1 -4 átomos de carbono. El término (C1 - )alquilo significa un grupo alquilo ramificado o sin ramificar que tiene 1 -4 átomos de carbono. El término (C2.6)alquenilo significa un grupo alquenilo ramificado o sin ramificar que tiene 2-6 átomos de carbono, tales como etenilo, 2-butenilo, etc. Los grupos (C?- )alquenilo se prefieren, los grupos (C1-3)alquenilo siendo los más preferidos. El término (C?-6)alquilcarbonilo significa un grupo alquilo ramificado o sin ramificar que tiene 1 -6 átomos de carbono, unido a un grupo carbonilo, por ejemplo un grupo acetilo. Más preferidos son los grupos alquilo que tienen 1 -4 átomos de carbono. El término carboxi-(C1 -6)alquilo significa un grupo carboxi unido a un grupo alquilo ramificado o sin ramificar que tiene 1 -6 átomos de carbono. Más preferidos son los grupos alquilo que tienen 1 -4 átomos de carbono. El término (C1.6)alquiloxicarbonilo significa un grupo alquilo ramificado o sin ramificar, unido a un grupo oxicarbonilo, por ejemplo un tó¿¿^^¿^ grupo metoxicarbonil-, o íerí-butoxicarbonil-(Boc-). Más preferidos son los grupos alquilo que tienen 1 -4 átomos de carbono. El término (C2-6)alqueniloxicarbonilo significa un grupo alquenilo ramificado o sin ramificare que tiene 2-6 átomos de carbono como se define previamente, unido a un grupo oxicarbonilo, por ejemplo, un grupo aliloxicarbonilo. Los grupos (C?-4)alquenilo se prefieren, los grupos (C^ísiendo los más preferidos. El término (C?-6)(di)alquilamino significa un grupo (di)alquilamino que tiene 1 -6 átomos de carbono, el elemento de alquilo teniendo el mismo significado como se define previamente. Se prefieren grupos alquilo que tienen 1 -4 átomos de carbono. El término amino(C?-6)acilo significa un grupo acilo que tiene 1 -6 átomos de carbono, funcionalizado con un grupo amino. Los preferidos son los grupos acílo que tienen 1 -4 átomos de carbono. El término (C6-?4)arilo significa un grupo hidrocarburo aromático que tiene 6-14 átomos de carbono, tales como fenilo, naftilo, tetrahidronaftilo, indenilo, antracio, que puede substituirse opcionalmente en la posición orto y/o metal con uno o más substituyentes tales como, pero no limitándose a, hidroxi, halógeno, nitro, ciano, amino(C?-6)acilo o (di)(C?-6)alquilamino, el elemento de acilo y alquilo teniendo el mismo significado como se define previamente. Los grupos (C6-?o)arilo se prefieren, fenilo siendo el más preferido. El término (C4-?3)heteroaril(C?.6)alquilo significa un grupo aromático substituido o sin substituir que tiene 4-13 átomos de carbono, preferentemente 4-o, al menos incluyendo un heteroátomo seleccionado de N, O y/o S, conectado a un grupo alquilo ramificado o sin ramificar que tiene 1 -6 átomos de carbono. Los substituyentes en el grupo heteroarilo pueden seleccionarse del grupo de substituyentes listado para el grupo arilo. Los grupos heteroarilo que contienen nitrógeno pueden conectarse ya sea a través de un átomo de nitrógeno o de carbono al grupo alquilo.

De los grupos alquilo, los grupos que tienen 1 -4 átomos de carbono se prefieren. El término (C?-ß)alquil(C6-? )arilo significa un grupo alquilo ramificado o sin ramificar como se define previamente, unido a un grupo aplo como se define previamente. Los grupos (C6-?o)arilo se prefieren, fenilo siendo el más preferido. De los grupos alquilo, los grupos que tienen 1 -4 átomos de carbono se prefieren. El término (C6-? )aril(C1 -6)alquilo significa un grupo arilalquilo, en donde el grupo alquilo es un grupo (C1-6)alquilo y el grupo arilo es un (C6.?4)arilo como se define previamente, por ejemplo un grupo bencilo- (Bzl) o trifenilmetil- (Trt). Los grupos (C6-?o)arilo se prefieren, fenílo siendo el más preferido. De los grupos alquilo, los grupos que tienen 1 -4 átomos de carbono se prefieren. El término (C?-6)alquilcarboni!amino significa un grupo alquilcarbonilamino, el grupo alquilo del cual contiene 1 -6 átomos de carbono y tiene el mismo significado como se define previamente. Los grupos alquilo que tienen 1 -4 átomos de carbono se prefieren. El término (C6-?4)aril(C?.4)alquiloxicarbonilo significa un grupo (C6-?4)arilo conectado a un grupo alquiloxicarbonilo, en donde el grupo alquilo es un grupo (C?- )alquilo, y el grupo arilo es como se define fcifaeatai . previamente, por ejemplo un grupo benciloxicarbonil- (Z) o Fluorenil-metoxicarbonil-(Fmoc). Los grupos (C6-?o)arilo se prefieren, fenilo siendo el más preferido. El término halo significa F, Cl, Br o I. Los aminoácidos que ocurren de manera natural se muestran utilizando sus abreviaciones (código de 3-letras) como sigue: alanina (Ala), arginina (Arg), asparagina (Asn), ácido aspártico (Asp), Cisteína (Cys), glutamina (Gln), ácido glutámico (Glu), glicina (Gly), histidina (His), serina (Ser), isoleucina (lie), leucina (Leu), lisina (Lys), metionina (Met), fenilalanina (Phe), prolina (Phe), treonina (Thr), triptofan (Trp), tirosina (Tyr) y valina (Val). De todos los aminoácidos la estereoquímica se define como L-. Un aminoácido no natural es un a-aminoácido, opcionalmente ? a-substituido que tiene una estructura química no idéntica a aquella de los aminoácidos naturales. Los aminoácidos no naturales son por ejemplo, Phe(X), con X es un substituyente situado en la posición para del anillo de fenilo de Phe, hSer (2-amino-4-ácido hidroxibuanóico), norleucina (Nle, 2-ácido aminohexanóico), norvalina (Nva, 2-ácido aminopentanóico, L-Hfe (L-a-homofenilalanina), D-Hfe (D-a-homofenilalanina), L-Thi (ß-tienil-L-alanina), D-Thi (ß-tienil-D-alanina), L-Cha (ß-cicIohexil-L-alanina), D-Cha (ß-cidohexil-D-alanina), L-Pal(3) (ß-3-piridil-L-alanina), D-Pal(3) (ß-3-piridil-D-alanina), L-1 -Nal (ß-1 -naftil-L-alanina), D-1 -Nal (ß-1 -naftil-D-alanina), L-2-Nal (ß-2-naftil-L-alanina), D-2-Nal (ß-2-naftil-D-alanina), L-Ser(Bzl) (O-bencil-L-serina), D-Ser(Bzl) (O-bencil-D-serina) y derivados de N-alquilglicina tal como NVa1 (N-isopropilglicina, NArg N-(3- guanidinopropil)glicina) y NhSer (N-(2-hidroxietil)glicina). Incluidos dentro de este grupo de aminoácidos también se encuentran los aminoácidos que ocurren de manera natural, la estereoquímica de los cuales se define como D-. Debe entenderse que en un péptido que incorpora un enlace de amida reducido, el grupo carbonilo del aminoácido se ha reemplazado por un grupo metileno. En un péptido que incorpora un isostero de etileno la función de la carboxamida original (-C(O)-NR-) se ha reemplazado por un grupo etileno (-CH=CR-). El término ?[CH2NH] entre dos residuos de aminoácidos en una secuencia significa que el enlace de amida original (-C(O)-NH-) entre aquellos residuos de aminoácidos se ha reemplazado por un enlace de amida reducido (-CH2NH-). Varios aminoácidos como se indica en la fórmula I se prefiere que se fijen en las posiciones correspondientes en la fórmula general 2. De esta manera, una modalidad preferida de la invención es un péptido modificado que tiene ia fórmula general Q-A1 -A2-A3-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-A1 1 -A12-Gly-Z (fórmula lll) en donde Q, A1 , A2, A3, A11 , A12 y Z son como se define previamente. Las substituciones más preferidas en la fórmula general lll son para A1 L-Arg, D-Arg, H2N-C(=NH)NH-(CH2)4-C(O)-, H2N-(CH2)n-C(O)-, en donde n es 5-7 o -N[(CH2)3-NH-C(=NH)-NH2]CH2C(O)-, para A2 L-Ser o -N[(CH2)2-OH]-CH2-C(O)- y para A3 L-Phe, L-Phe(X) en donde X es halo, L-1 -Nal, L-2-Nal, L-Ser(Bzl), L-Thi, L-Cha o L-Pal(3). Más preferidos son los péptidos de acuerdo con la fórmula til ni i 1 ÉiifcrÉÉMfti ' ' f'-^^^^-r *^-^"- -*-***- --"* *-*»«- *-**-«—* general lll en donde A1 es Arg, A3 es Phe y A1 1 es Gly dando origen a la fórmula general IV: Q-Arg-A2-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-A12- Gly-Z en donde las posiciones Q, A2, A12 y Z son como se define previamente. Los péptidos más preferidos se seleccionan del grupo que comprende desaminoargininil-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly- Val-Gly-NH2, desaminoargininil-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly- Val-Gly-OH, CH3-(OCH2CH2)3-OCH2-C(O)-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser- Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-NH2, D-1-glucitil-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser- Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH, CH3O-C(O)-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser- Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH, Ac-Arg-Ser-Phe-?-[CH2NH]-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser- Glu-Thr-Gly-Val-Gly-NH2, Ac-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-?-[CH2NH]-Ala-Ser-Ser- Glu-Thr-Gly-Val-Gly-NH2, Ac-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr- Gly- Val-?-[CH2NH]-Gly-NH2, Ac-Arg-N[(CH2)2-OH]-CH2-C(O)-Phe-Thr-Leu- Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-NH2, Ac-Arg-N[(CH2)2-OH]-CH2-C(O)-Phe- Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-?-[CH2NH]-Gly-NH2, H-Arg-Ser- Phe(CI)-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH, H2N-(CH2)5-C(O)- Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH, H2N-(CH2)6-C(O)- Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH, (N-metil-nicotinoil)+- Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH. Una metodología adecuada hacia la síntesis de péptidos HC gp 39 (263-275) modificados con modificaciones en la terminal N, como se visualiza en la fórmula v, comienza con derivados de la fórmula VI. Los péptidos modificados se sintetizan a través del método de Síntesis de Péptido de Fase Sólida (SPPS) (B. Merrifield, Solid Phase Peptide Synthesis, Peptides 1995, 93-169, Editor: B. Gutte, Academic, San Diego, California, USA; P. Lloyd-Williams, F. Albericio, E. Girait, Tetrahedron 49: 1 1065-1 1 133, 1993). Dependiendo del tipo de enlazador que se utiliza, la cadena de péptido se conecta al soporte a través de ya sea un éster (enlazador PAC) o una enlace de amida (enlazador PAL) Fórmula VII glicol de polietileno (PEG)- soporte sólido de poliestireno (PS) Fórmula VI Después de sujetar el aminoácido de terminal Fmoc-C al soporte sólido (m = 1 , A-B = Fmoc), utilizando por ejemplo los agentes de acoplamiento HATU (L. Carpino, A. El-Faham, C.A. Minor, F. Albericio, J. Chem. Soc, Chem. Comm. 201 -203, 1994) o PyBOP (J. Coste, D. Le-Nguyen, B. Castro. Tetrahedron Lett. 31:205-208, 1990) y DiPEA, la cadena se alarga (m = 2-12) por acilación secuencial con los derivados de aminoácido Fmoc apropiadamente protegidos seguido por el retiro mediado por piperidina del grupo protector Fmoc (A-B = H) utilizando un sintetizador de péptido automático. Alternativamente, los esteres activos de aminoácido de pentafluorofenil (Pfp) (A. Dryland, R.C. Sheppard, Tetragedrom 44:859-876, 1988) puede utilizarse para efectuar las ^^jj^^j^?jtoí.^^^ ^?j**k^^^|^^^ 3te¡^y^kgg^ condensaciones. Subsecuentemente, el aminoácido B de terminal N se introduce utilizando el mismo procedimiento y el grupo Fmoc se retira. El derivado de péptido 13-merico así obtenido (A = H, B = amino ácido de terminal N, m=12) es dócil entonces para la funcionalización del término N. La introducción de un enlace de amida adicional en el término N (A = alquilcarbonilo) puede llevarse a cabo al realizar otra condensación mediada por PyBOP o HATU con el ácido deseado (X-OH) o al acoplar con un cloruro de acilo (X-CI) en la presencia de piridina. La unidad de 1 -metil piridinio-4-carbonil cargada o 1 -metil piridinio-3-carbonilo puede introducirse después de la separación (vide infra) de la resina (es decir, Fórmula V = A = H, B = aminoácido de terminal N, Z = OR con R = H, alquilo o Z = NR1R2 con R1, R2 = H o alquilo) por reacción mediada por DiPEA del término N libre del péptido completamente desprotegido con el éster activo de hidroxisuccinimida iso(nicotionio) ?/-metilo (M.L. Tedjamulia, P.C. Srivastava, F.F. Knapp, J. Med. Chem., 28: 1574-1580, 1985) en medio acuoso (cf. conversión de A = H a A = ?/=metil(iso)nicotinio en la Fórmula V). La ?/-alquilación puede efectuarse a través de la aminación al tratar el péptido inmovilizado con un aldehido apropiado (Fórmula VI, conversión de A = H a A = alquilo) en la presencia de NaBH(OAc)3 en DMF/HOAC (99/1 , v/v). Alternativamente, la reacción del péptido inmovilizado (A = H) con un haluro de alquilo en la presencia de DiPEA también da acceso a péptidos ?/-alquilados (por ejemplo, reacción con tert- bromoacetato butilo). El NH2 libre (A = H en la fórmula VI) también puede funcionalizarse con un grupo carbamoilo (por ejemplo, metoxicarbonilo) a través de la reacción con el cloruro de carbamoilo correspondiente en CH2CI2/DiPEA (conversión de A = H a A = alcoxicarbonilo en la Fórmula VI). Después de la separación del péptido del soporte sólido con retiro concomitante de los grupos protectores lábiles ácidos utilizando TFA/Et3SiH/anisola/ROH (R = H, alquilo) los péptidos con la fórmula general V (Z = OR) se purifican por RP-HPLC. Alternativamente, el término C puede equiparse con una función de amida (Z = NR1R2 con R1 y R2 = H; o alquilo) durante la separación de la resina. En ese caso, un enlazador diferente (PAL: B. Merrifield, Peptides, 93-169, 1995) entre la cadena de péptido (Fórmula VI) y el soporte sólido PEG-PS se utiliza. Si el grupo amino libre del enlazador PAL se alquila antes de la unión del primer aminoácido (terminal C), las amidas de alquilo de terminal C se formarán después de la separación del soporte de polímero. Utilizando la misma estrategia de Fmoc-SPPS, los péptidos son accesibles los cuales contienen aminoácidos no naturales pero comercialmente disponibles (por ejemplo, D-aminoácidos o derivados de fenilalanina substituida). Aparte de esto, los derivados de /V-alquil glicina (monómeros de peptoide, Rn1 = cadena lateral de aminoácido, Rn2 = H en Fórmulas V y VI) se sintetizan primero en solución utilizando los procedimientos de la literatura (J. A. Kruijtzer, L.J.F. Hofmeyer, W. Heerma, C. Versluis, R.M.J. Liskamp, Chem. Eur. J. 4:1570-1580, 1998). También, ß-homo-L-arginina de aminoácido de terminal N modificado [B = NH-CH(CH2CH2CH2NH-CH(=NH)NH2)-CH2-C(O)] se prepara en solución antes de SPPS, de acuerdo a procedimientos conocidos (H.M.M. Bastiaans, A.E. Alewijnse, J.L. van der Baan, H.C.J. Ottenheijm, yfl-flm | | - p^*»»** *....-..*».».». *^ m^ , Tetrahedron Lett. 35:7659-7660, 1994. Después de la protección del grupo NH2 libre en los aminoácidos monoméricos así obtenidos con un grupo protector Fmoc, los compuestos pueden incorporarse en el péptido de alargamiento (Fórmula VI) utilizando el procedimiento SPPS. La clase final de péptidos modificados comprende péptidos que contienen uno o más enlaces de amina reducidos (Rn3 = H2 en Fórmula V). Estos derivados son accesibles (J.J. Wen, A.R. Spatola, J. Pept. Res. , 49:3-14, 1997) a través de un procedimiento SPPS modificado en el cual el amino ácido de la cadena creciente (1 <m<12 en la Fórmula VI) se alquila con el aldehido de aminoácido entrnte bajo condiciones reductivas (NaBCH3CN, DMF/HOAc, 99/1 , v/v). Los aldehidos de aminoácido protegido ?/-Fmoc requeridos se encuentran comercialmente disponibles o accesibles por los métodos de la literatura (J.J. Wen, C.M. Crews, Tetrahedron, Asymmetry 9:1855-1858, 1998). La cadena así alargada (A- B = Fmoc, Rn = H, Rn2 = cadena lateral de aminoácido, Rn3 = H2) contiene una función de amino secundaria (Rn+?1 = H) que se protege subsecuentemente con un grupo Boc. Después del retiro del grupo protector Fmoc la cadena de péptido puede alargarse además utilizando el procedimiento SPPS.

Formula Vp Alternativamente, una estructura dimérica con la fórmula general Vil puede sintetizarse en solución antes de SPPS. De esta manera, el éster de bencilo de aminoácido apropiado (H2N-CH(Rn+?2)- CO2Bzl) se alquila de manera reductiva (NaBH3CN, DMF/HOAc, 99/1 , v/v) con un aldehido de aminoácido protegido de Fmoc (Fmoc-NH-CH(Rn )- C(O)H para dar una amina secundaria dimérica. Después de la protección de la función de amino con un grupo Boc (Rn+? 1 = Boc) e hidrogenolisis subsecuente del éster de bencilo un compuesto de la Fórmula Vil se forma, que puede incorporarse en la cadena de crecimiento utilizando el procedimiento SPPS. Los péptidos de acuerdo con la invención pueden utilizarse como una substancia terapéutica. Más particularmente, pueden utilizarse para la inducción de tolerancia de la célula T específica a un autoantígeno en pacientes que padecen de desordenes de enfermedad autoinmune, más específicamente artritis. Los péptidos modificados en base a la estructura de epítopo de célula T restringida clase II de MHC con actividad estimuladora aumentada in vitro y una actividad aumentada in vivo puede seleccionarse utilizando tecnologías conocidas. Con objeto de mantener las propiedades agnósticas de un epítopo de célula T, se considera esencial no interferir demasiado ya sea con los residuos incluidos en la unión a la molécula de MHC relevante ni influenciar demasiado los residuos incluidos en la unión TCR de células T relevante. De esta manera, la selección de péptidos modificados agonísticos incluiría: 1 ) definición de la afinidad de un péptido modificado para unir la molécula de MHC relevante y comparación con la afinidad del epítopo de péptido, no modificado de tipo silvestre. 2) definición de la actividad estimuladora de un péptido modificado y comparación con la actividad del péptido, no modificado de tipo silvestre utilizando un análisis in vitro (células que presentan antígeno irradiado se co-incuban con antígeno de péptido y células T específicas). Preferentemente, un amplio panel de células T restringidas clase II de MHC, específicas de epítopo, con clonotipos de TCR diferentes, pero reactivas con el mismo epítopo en el contexto de la misma molécula clase II de MHC, debería evaluarse. Para este propósito, un panel de hibridomas de célula T específica o líneas/clones de la célula T específica pueden emplearse. La selección de un epítopo modificado para aplicación humana preferentemente requerirá el uso de líneas/clones de la célula T para salvaguardar al relevancia de los epítopos modificados seleccionados para el reconocimiento de la célula T de humano. 3) definición de la actividad del péptido modificado in vivo (opcional). Para este propósito diferentes inicios experimentales pueden utilizarse. a) una prueba de hipersensibilidad tipo retrasada b) un análisis de activación de la célula T ex vivo después de la administración de antígeno (con o sin adyuvante) in vivo c) modulación de la enfermedad en modelos experimentales de enfermedad autoinmune por la administración de antígeno de péptido modificado. Preferentemente, los compuestos con actividad agonística aumentada in vitro, en comparación con el péptido de tipo silvestre o efectos in vivo aumentados están por seleccionarse. Los péptidos derivados HC gp-39 individuales que se tá^gftlíllillilrt y-ffliBM^ reconocen en ratones se espera que submodulen la reactividad hacia estos péptidos después del tratamiento nasal. Tal reactividad puede medirse al administrar al animal el péptido en cuestión y cuantificar el hinchamiento de la pata como un resultado de una respuesta DTH. Las inmunizaciones de péptido en ratones Balb/c resulta en respuestas inmunológicas al péptido 263-275 HC gp-39. De esta manera, a los ratones inmunizados con HC gp-39 se les puede administrar HC gp-39 263-275 con objeto de detectar una respuesta DTH. Para delinear la tolerogenicidad de péptidos modificados in vivo, los ratones pueden tratarse por el orificio de la nariz con HC gp-39 263-275 o derivados de péptido en varias concentraciones. Los derivados de péptido modificados con un perfil superior en términos de inducción de tolerancia se espera que sean activos en este análisis in vivo en concentraciones inferiores que el péptido original. Para ser capaza de detectar cuantitativamente los efectos de la inducción de tolerancia con el péptido nativo contra derivados de péptido modificados, varios esquemas de aplicación y dosis pueden probarse. Finalmente, puede investigarse si las formas modificadas de HC gp-39 263-275 son más eficaces para submodular las respuestas DTH inducidas por HC gp-39 263-275 en este modelo que en el péptido 263-275 nativo. La tolerancia puede lograrse al administrar dosis elevadas o inferiores del tolerogen o péptidos de acuerdo con la invención. La cantidad de tolerogen o péptido dependerá de la vía de administración, el tiempo de administración, la edad del paciente así como también las condiciones de salud general y dieta.

En general, una dosis de 0.01 a 1000 µg de péptido o proteína por kg de peso corporal, preferentemente 0.05 a 500 µg, más preferentemente 0.1 a 100 µg de péptido o proteína puede utilizarse. Otro aspecto de la invención reside en composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más péptidos de acuerdo con la invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Los vehículos farmacéuticamente aceptables se conocen bien por aquellos expertos en la materia e incluyen, por ejemplo, salina estéril, lactosa, sucrosa, fosfato de calcio, gelatina, dextrina, agar, pectina, aceite de maní, aceite de olivo, aceite de sésamo y agua. Otros vehículos pueden ser, por ejemplo, moléculas clase II de MHC, si se desea incrustadas en liposomas. Además, la composición farmacéutica de acuerdo con la invención puede comprender uno o más adyuvantes. Los adyuvantes adecuados incluyen, entre otros, hidróxido de aluminio, fosfato de aluminio, anfígeno, tocofenoles, lípido A de monofosfenilo, dipéptido de muramilo y saponinas tales como Quill A. La cantidad de adyuvante depende de la naturaleza del adyuvante por sí mismo. Además, la composición farmacéutica de acuerdo con la invención puede comprender uno o más estabilizadores tales como, por ejemplo, carbohidratos incluyendo sorbitol, manitol, almidón, sucrosedextrina y glucosa, proteínas tales como albúmina o caseína, y reguladores como fosfatos de alcalina. Las vías de administración adecuadas son inyecciones inatramusculares, inyecciones subcutánea, inyecciones intravenosas o inyecciones intraperitoneales, administración oral e intranasal. La administración oral e intranasal son vías de administración preferidas. Especialmente, las células moduladoras específicas para el antígeno podrían generarse al aplicar el antígeno a través de la mucosa, por ejemplo la mucosa nasal. La administración mucosal de antígenos se ha mostrado que induce la tolerancia inmunológica a tales antígenos. Los péptidos de acuerdo con la invención también son muy adecuados para utilizarse en un método de diagnóstico para detectar la presencia de células T autoreactivas activadas incluidas en la inflamación crónica del cartílago articular. El método de diagnóstico de acuerdo con la invención comprende las siguientes etapas: a) aislar las células mononucleares de sangre periféricas (PBMC) de una muestra sanguínea de un individuo. b) cultivar dicho PBMC bajo condiciones adecuadas, c) incubar dicho cultivo PBMC en la presencia del autoantígeno o uno o más péptidos derivados del mismo de acuerdo con la invención, y d) detectar una respuesta de las células T, por ejemplo una respuesta proliferativa, que indica la presencia de células T autoreactivas activadas en el individuo. En caso de detección de una respuesta al medir la respuesta proliferativa de las células T autoreactivas, la incorporación de un radiosiótopo tal como por ejemplo 3H-timidina es una medida para la proliferación. Una respuesta de las células T autoreactivas presentes en PBMC también puede detectarse al medir la liberación de citoquina con f | - .r^m^.m-m* *a.^^A^^... ~ * * -* A - > -^ .. .. ^ ^ «S —««. **#*t"~~- *^^ ' ELISA específica de citoquina, o la citotoxicidad con liberación de s1Cromio. Otro método de detección es la medición de expresión de marcadores de activación por análisis FACS, por ejemplo de II-2R. Una composición de diagnóstico que comprende uno o más de los péptidos de acuerdo con la invención y un agente de detección adecuado forma así parte de la invención. Dependiendo del tipo de detección, el agente de detección puede ser un radioisótopo, una enzima, o anticuerpos específicos para la superficie celular o marcadores de activación. También dentro del alcance de la invención se encuentran los equipos de prueba que comprenden uno o más péptidos de acuerdo con la invención. Estos equipos de prueba son adecuados para utilizarse en un método de diagnóstico de acuerdo a la invención. De esta manera, de acuerdo con la presente invención, los péptidos modificados derivados de HC gp-39 pueden utilizarse para submodular la enfermedad autoinmune. Los siguientes ejemplos son ilustrativos para la invención y no deben interpretarse de ninguna manera como limitantes de la invención. Leyendas para las figuras Figura 1 La proliferación del clon 235 después de la estimulación con péptido guía o péptidos modificados, seleccionado utilizando PBMC autólogo, irradiado como APCs se mide como se describe en el ejemplo 15. Los péptidos se probaron para su actividad estimuladora en concentraciones de 0, 0.4, 2, 10 y 50 µg/ml. La respuesta del clon 235 li4AAA^iu1,J&á<?^.-<fe,&?¿i¿&t^ niulll't r después de la estimulación con el péptido guía H-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH (círculos cerrados), estimulación con Ac-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-?-[CH2NH]-Gly-NH2 (cuadrados cerrados), estimulación con Ac-Arg-NhSer-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-NH2 (círculos abiertos) o estimulación con Ac-Arg-Nhser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val--?-[CH2NH]-Gly-NH2 (cuadrados abiertos) se muestra. Tabla 2 El análisis de hibridoma (primer línea t est): + = compuesto estimula los tres hibridomas en una manera comparable con o superior al péptido 263-275 no modificado. +* = actividad agonista demostrada para 1 o 2 hibridomas pero no para los tres. Reactividad de clones humanos (proliferación del clon 235 y 243) en potencia (actividad estimuladora de análogo/actividad estimuladora de péptido guía; por ejemplo, HC gp-39 (263-275). - = potencia < 0.6, + = potencia 0.6 - 12, ++=potencia > 12 -100, +++ = potencia > 100. Ac-Arg-NhSer-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-NH2, Ac-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala- Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-?[CH2NH]-Gly-NH2, D-1 -Glucitil-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH, CH3(OCH2CH2)3-OCH2C(O)-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-NH2 y H-Arg-Ser-Phe(4CI)-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH se probaron por su afinidad para unir HLA-DRB*0401 en comparación con la afinidad del péptido guía (H-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH). Los compuestos más activos (Ac-Arg-NhSer-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-NH2) and Ac-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-?[CH2NH]-Gly- u? . H Í IÍ -km?á-ií -A* *?ff^^^1?A**^iS3^^?É^*^-*^e^¡-^ -A- t??&- A*&^Í t..aA^li» NH2, mostraron una afinidad relativa para la unión a HLA-DRB1 *0401 que es comparable con la afinidad del péptido original. Ejemplos Ejemplo 1 H-Arg-Ser-Phe(4CI)-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH (1 ) El envase de reacción del PepSynthesizaer Millipore 9050 se carga con 0.5 g de resina Fmoc-Gly-PAC-PEG-PS (comercialmente disponible de PerSeptive Biosystems, 0.20 mmol/g), pre-hinchada en N- metil-pirrolidina (NMP). El retiro del grupo Fmoc en cada ciclo de acoplamiento se efectúa con piperidina/DMF (1 :4 v/v). Las eficiencias de acoplamiento se determina por el análisis espectroscópico de la separación de Fmoc después de cada etapa de alargamiento. En cada etapa de acoplamiento 4 equivalentes del aminoácido Fmoc protegido de cadena lateral lábil acida, apropiada se utilizaron. El modo de jeringa doble del sintetizador se utiliza, en el cual una jeringa contiene 0.50 M HATU en DMF p.a. y la otra jeringa contiene 1.0 M DIPEA en DMF p.a. El enjuague principal contuvo N-metil-pirrolidinona con 0.1 & de HOBt. El procedimiento de Síntesis Análoga se utiliza. Después del retiro del grupo Fmoc final la resina con el péptido inmovilizado se saca del envase de reacción y se enjuaga sucesivamente con DMF (20 mL), CH2CI2 (20 mL), dietiléter (20 mL), CH2CI2 (20 mL), dietiléter (20 mL), CH2CI2 (20 mL) y dietiléter (20 mL). El péptido inmovilizado se seca al vacío durante la noche. El péptido se separa entonces con 10 mL de la mezcla TFA/(iPr)3SiH/anisola/H2O 88/5/5/2 v/v/v/v por 3 horas. En la etapa todos los grupos protectores de cadena lateral lábil acida también se removieron. Después de la evaporación del solvente, el péptido se precipita con 200 mL de éter de dietilo. La capa de éter se decanta y el péptido se enjuaga con una corriente de nitrógeno y liofiliza. La purificación del péptido se lleva a cabo por cromatografía de HPLC en un cartucho PrePak 40-100 mm Delta-Pak™ C18 15 µm de 100A columna de fase inversa. La fase móvil consiste de una mezcla de 20% de regulador de fosfato pH 2.1 y un gradiente de acetonitrilo y agua, como se muestra en el análisis de abajo. El péptido se desala en HPLC, utilizando 40/00 de ácido acético acuoso. El producto purificado se liofiliza. Fase Móvil: A: 0.5 mol/L NaH2PO4 + H3PO4, pH = 2.1 B: H2O C: CH3CN/H2O = 3/2 v/v gradiente: A:20%, B:80% ? 20%; C:0% ? 60% en 40 min. Producción: 68 mg: pureza HPLC: 90.1 %; MS: MW = 1 346, esto concuerda con la fórmula molecular C55H89CIN?6O2? ; análisis de aminoácido: todos los aminoácidos se encontraron en las cantidades requeridas: contenido de péptido: 74.8%; cromatografía de ion: fosfato: 0.5%, acetato: 0.6%, cloruro: 3.4% (p/p). Ejemplo 2 H2N-(CH2)5-C(O)-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH(2) El péptido se sintetiza utilizando química de péptido de fase sólida , como se reporta en la síntesis del compuesto 1 (ver arriba). En este caso, los esteres activos de Fmoc-pentafluorofenil ácido amino (Pfp) se utilizaron en lugar de los Fmoc-ácidos amino y HATU/DIPEA. El compuesto se prepara utilizando ácido 6-Fmoc-amino-hexanóico como el ^^^^-^'^lttt--'- -^'-J1????^í1fÍlltfWtl-,ftt"^a^ fe-éssa A aminoácido de terminal N, obtenido de ácido 6-amino-hexanóico, análogo al procedimiento de la literatura (A. Marston, E. Hecker, Z. Naturforsch, B. Anorg. Chem. Org. Chem., 38: 1015-1021 , 1983). El soporte fue Fmoc-Gly- PAC-PEG-PS (0.75 g, 0.170 mmol/g) y 3 equiv. De los esteres Pfp apropiados se utilizaron. Para el acoplamiento de ácido 6-Fmoc-amino- hexanóico PyBOP se aplica como el agente de acoplamiento (199 mg). La preparación como se reporta en el procedimiento estándar (ejemplo 1 ) da 168 mg de producto crudo. Este se purifica por HPLC (sistema de fosfato pH = 2.1 , con gradiente CH3CN-H2O) El producto se desala en HPLC con 5°/00 de ácido acético acuoso y liofiliza para dar 34 mg del péptido requerido. Pureza HPLC: 99.6%, MS: MW = 1268, esto concuerda con la fórmula molecular C55H89N13O2? ; análisis de aminoácido, todos los aminoácidos se encuentran en las cantidades requeridas, contenido de péptido: 67.3%; cromatografía de ion: fosfato: 10% (p/p). Ejemplo 3 H2N-(CH2)6-C(O)-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH(3) El péptido 3 se prepara en una manera idéntica que su homologo de termina N 2 utilizando ácido 7-Fmoc-amino-heptanóico (3a, preparado análogo al compuesto 2a: A. Marston, E. Hecker, Z. Naturforsch. B. Anorg. Chem. Org. Chem. , 38; 1015-1021 , 1983) como el aminoácido de terminal N. El soporte fue Fmoc-Gly-PAC-PEG-PS (1.0 g, 0.17 mmol/g). Preparación, purificación HPLC y desaltación como se reporta en el procedimiento estándar (ejemplo 1 ) da 45 mg del péptido requerido.

Pureza HPLC; 95.0%, MS: MW = 1282, esto concuerda con la fórmula molecular C56H91N13O2? ; análisis de aminoácido: todos los aminoácidos se encontraron en las cantidades requeridas; contenido de péptido: 87.4%; cromatografía de ion: acetato: 0.2% (p/p). Ejemplo 4 (N-metil-nícotinoil)+-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val- Gly-OH (4) Antes de la preparación del péptido 4, el material inicial yoduro de N-succinimidilo (1 -metil-3-piridinio)formato (4a) se sintetiza a través de un procedimiento de la literatura (M. L. Tedjamulia, P.C. Srivastava, F.F. Knapp; J. Med. Chem. 28: 1574-1580, 1985). La síntesis del compuesto 4 se lleva a cabo en solución. El péptido H-Arg-Ser-Phe- Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH (4b, 26 mg, 0.02 mmol), preparado por métodos SPPS de acuerdo al ejemplo 1 , se disuelve en DMF/H2O (1 /99 v/v, 10 mL) y DIPEA/DMF (1/1 , v/v) se agrega para dar pH = 9. Después yoduro de N-succinimidil (1 -metil-3-piridinio)formato (4a, 0.056 g, 0.1 5 mmol) se agrega en dos porciones. El pH se mantuvo a pH = 9 al agregar unas cuantas gotas de DIEA/DMF (1/1 , v/v). La mezcla se agita a temperatura ambiente por 4 horas y después se diluye con 10 mL de H2O y 5 mL de regulador de fosfato pH = 2.1 . El producto se purifica inmediatamente por HPLC con el sistema regulador de fosfato como se muestra previamente (ejemplo 1 ). Desaltación con 5°/0o de ácido acético acuoso y liofilización proporcionaron 14 mg del péptido requerido 4. Pureza HPLC: 98.1 %, MS: MW = 1430; análisis de aminoácido: todos los aminoácidos se encontraron en las cantidades requeridas; contenido de péptido: 56.3%; cromatografía de ion; cloruro: 1.4%, fosfato: 1 .0%, trifluoroacetato: 0.8%, acetato: 0.3% (p/p). Ejemplo 5 Desaminoargininil-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-ValGIy-OH (5) El péptido 5 se sintetiza de acuerdo con el procedimiento previamente descrito para el compuesto 1 utilizando aminoácidos Fmoc-protegidos, HATU, DIPEA y 1.0 g de Fmoc-Gly-PAC-PEG-PS-resina, el soporte cargando 0.17 mmol/g. En la etapa final desamino-Arg(Adoc)2-OH (5a) se acopla a la cadena de péptido inmovilizada. El ácido carboxílico 5a se prepara de acuerdo con un procedimiento conocido (R. Presentini, G. Antoni, Int. J. Pept. Protein Res., 27: 123-126, 1986). Condiciones de preparación y de purificación fueron idénticas a aquellos del péptido 1 . Producción: 58 mg, pureza HPLC: 91 .1 %; MS: MW = 1296; análisis de aminoácido: todos los aminoácidos se encontraron en las cantidades requeridas: contenido de péptido: 76.2%; cromatografía de ion: fosfato: 0.4%, trifluroacetato: 0.6%, acetato: 0.2% (p/p). Ejemplo 6 Desaminoargininil-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-NH2 (6) La unión del péptido 6 se conduce de una manera similar a aquella del péptido 5 previamente descrito, utilizando resina PAL-PEG-PS (0.17 mmol/g) en lugar de PAC-PEG-PS como el soporte sólido. En este caso, el grupo Fmoc de la resina Fmoc-PAL-PEG-PS comercialmente disponible (PerSeptive Biosystems) se remueve y el soporte H-PAL-PEG- PS resultante se condensa con Fmoc-Gly-OH bajo la agencia de HATU/DIPEA. Después del alargamiento de la cadena de péptido y separación subsecuente de la resina bajo las mismas condiciones como se describe en el ejemplo 1 , el término C de carboxamida requerida se obtiene. Las condiciones de preparación y purificación son idénticas a aquellas del péptido 1 . Producción: 43 mg, pureza HPLC: 91 .3%, MS: MW = 1295, análisis de aminoácido: todos los aminoácidos se encontraron en las cantidades requeridas; contenido de péptido: 76.5%; cromatografía de ion: cloruro: 0.5%, acetato: 4.0% (p/p). Ejemplo 7 CH3(OCH2CH2)3-OCH2-C(O)-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-NHa (7) Para la síntesis del péptido 7 el material inicial CH3(OCH2CH2)3-OCH2-CO2H (7a) se prepara primero, de acuerdo a un procedimiento de literatura (A. H. Haines, P. Karntiang, Carbohydr. Res. , 78.:205-21 1 , 1 980). La síntesis del péptido inmovilizado y protegido H-Arg(Pmc)-Ser(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Leu-Ala-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Gly-Val-Gly-PAL-PEG-PS (7b) se conduce como se muestra en el ejemplo 2 utilizando esteres Pfp de aminoácido. El péptido en la resina (7b) se pre-hincha en NMP y 142 mg (0.64 mmol) de CH3(OCH2CH2)3-OCH2CO2H (7a) se agrega, junto con 169 mg (0.64 mmol) del agente de acoplamiento TFFH (tetrametilfluoruro-formamidiniohexafluorofosfato). Los reactivos combinados se circulan durante 60 minutos en el PepSynthesizer. La separación de la resina y la preparación se ejecutan como se describe en ^^f.Í?t?lÍUUt?ÍA?*»ß Alltm el ejemplo 5. El péptido crudo se purifica entonces por HPLC con el sistema y los solventes delineados en el ejemplo 1. El producto se desala en la columna HPLC utilizando 2.5 °/0o de AcOH. Producción: 120 mg, pureza HPLC: 78%, MS: MW = 1515; cromatografía de ion: cloruro: 0.1 %, fosfato: 0.3%, trifluoroacetato: 4.0%, acetato:0.3% (p/p). Ejemplo 8 D-1 -glucitil-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH (8) Antes de la unión del péptido N-terminalmente modificado 8, el péptido H-Arg(Pmc)-Ser(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Leu-Ala-Ser(tBu)-Ser(tBu)- Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Gly-Val-Gly-PAC-PEG-PS (8a), que tiene la misma secuencia que el péptido 7b pero difiriendo en el tipo de enlazador (PAC en lugar de PAL), se prepara de acuerdo con el ejemplo 1. La aminación reductiva se efectúa por tratamiento durante la noche de 6-O-tritil-a/ß-D- glucopiranosa (8b, 422 mg, 1.0 mmol. T. Utamura, K. Kuromatsu, K. Suwa, K. Koizumi, T. Shingu, Tetsuro; Chem. Pharm. Bull. 34:2341 -2353, 1986) con el péptido inmovilizado 8a (500 mg, 0.2 mmol/g) en DMF/HOAC (99/1 , v/v, 10 mL) utilizando NaBH(Oac)3 (212 mg, 1.0 mmol) como el agente reductor. La separación subsecuente del derivado completamente protegido resultante (6-O-tritil-D-1 -glucitil)-Arg(Pmc)-Ser(tBu)-Phe- Thr(tBu)-Leu-Ala-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Thr(tBy)-Gly-Val-Gly-PAC- PEG-PS de la resina en las condiciones descritas en el ejemplo 1 , con retiro concomitante del grupo tritilo y todos los grupos protectores de aminoácidos, proporcionaron 38 mg del péptido objetivo 8, después de la purificación por HPLC preparativa y desaltación con 5 °/00 de HOAc acuoso Pureza HPLC: 84.7%; MS: MW = 1475; análisis de aminoácido: todos los aminoácidos se encuentran en las cantidades requeridas; contenido de péptido; 61 .0%; cromatografía de ion: cloruro: 0.1 % acetato: 1 .7% (p/p). Ejemplo 9 MeO-C(0)-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH (9) La síntesis del péptido 9 comenzó al suspender el péptido inmovilizado H-Arg(Pmc)-Ser(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Leu-Ala-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Gly-Val-Gly-PAC-PEG-PS (8a) en dioxano y enfriar a 0°C. A esta suspensión 1 00 µl de 4N de NaOH ac. y 100 µl de cloroformato de metilo se agregaron. La mezcla de reacción se agita por 16 h y subsecuentemente, la resina se enjuaga con EtOH/H2O, EtOH, CH2CI2 y éter. Después de secar al vacío, el producto se separa de la resina y purifica como se describe en las síntesis de péptido previas (ejemplo 1 ). Finalmente, el péptido se desala en HPLC utilizando 5 °/00 de ácido acético acuoso y después de liofiliza para dar el péptido 9. Producción: 1 1 mg, pureza HPLC: 96.8%; MS: MW = 1368; análisis de aminoácido, todos los análisis de aminoácido se encontraron en las cantidades requeridas; contenido de péptido: 60.5&; cromatografía de ion: cloruro: 2.0%, fosfato: 0.2%, acetato, 0.4% (p/p). Ejemplo 10 Ac-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-?-[CH NH]-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-NH2 (10) Antes de la síntesis del péptido 10, el bloque de construcción lll ti Él itlÉf**»-- --? J+mA *** *** * de aldehido de aminoácido requerido Fmoc-Leu-H (10a) se prepara a través de un procedimiento conocido (J. P. Meyer, P. Davis, K.B. Lee, F. Porreca, H.l. Yamamura, V. Hruby, J. Med. Chem. 38:3462-3468, 1995). El compuesto 10a se utiliza sin purificación adicional. De acuerdo al método descrito en el ejemplo 1 , la resina se funcionaliza con una cadena de péptido de 8 aminoácidos para dar H-Ala-Ser(tBtu)-Ser(tBtu)-Glu(OtBu)- Thr(tBu)-Gly-Val-Gly-PAL-PEG-PS (10b). El último derivado inmovilizado (1 g, 0.2 mmol/g) se suspende en 5 mL de 1 % de ácido acético en DMF. Dos soluciones se prepararon, siendo 148 mg de Fmoc-Leu-H (10a) en 2.5 mL de DMF y 30 mg de NaCNBH3 en 2.5 mL de DMF. Ambas soluciones se combinan . y agregan a la suspensión del péptido 10b. La mezcla se agita durante la noche a temperatura ambiente. Subsecuentemente, el compuesto intermedio así obtenido Fmoc-Leu-?[CH2NH]-Ala-Ser(tBu)- Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Gly-Val-Gly-PAL-PEG-PS (10c) se protege en la función de amina secundaria recientemente introducida con Boc2O y piridina. El péptido unido a resina 10c se suspende en 10 mL de CH2CI2 seco y 35 mg (0.16 mmol) de Boc2O y 13 µl (0.16 mmol) de piridina se agregan. El pH se mantiene a pH = 8 con piridina y la mezcla se agita durante la noche. La preparación incluyó enjuagar la resina con CH2CI2, EtOH, CH2CI2, éter y secar al vacío. La síntesis se continuo por SPPS utilizando aminoácidos Fmoc y el procedimiento HATU/DIPEA con NMP como el solvente (ejemplo 1 ). La última etapa incluyó acoplar con 4- nitrofenil acetato para introducir el grupo acetilo de terminal N. Después de la preparación como se describe en el ejemplo 1 , el péptido crudo se purifica por HPLC, desala con 5 %>o de ácido acético y liofiliza para dar el péptido objetivo 10. Producción: 28 mg; pureza HPLC: 76.3%, MS: MW = 1339; cromatografía de ion: trifluoroacetato: 1.2%, acetato: 2.0% (p/p). Ejemplo 11 Ac-Arg-Ser-Phe-?-[CH2NH]-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-T r-Gly-Val-Gly-NH2 (11 ) La síntesis de 1 1 incluyó el acoplamiento reductivo de Fmoc-Phe-H (1 1 a, J.P. Meyer, P. Davis, K.B. Lee, F. Porreca, H.l. Yamamura, V. Hruby, J. Med. Chem. 38:3462-3468, 1995) al péptido protegido unido a resina H-Thr(tBu)-Leu-Ala-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Gly-Val-Gly-PAL-PEG-PS (11 b) obtenido a través del procedimiento SPPS descrito en el ejemplo 1 . El péptido 11 b (1.0 g, 0.2 mmol/g) y aldehido 11 a (200 mg) se suspendieron en 5 mL de 1 % de ácido acético/DMF e inmediatamente 30 mg (0.48 mmol) de NaCNBH3, disueltos en 5 mL de DMF, se agregaron. La mezcla se agita por 16h, resultando en la formación de Fmoc-Phe-?-[CH2NH]-Thr(tBu)-Leu-Ala-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Gly-Val-Gly-PAL-PEG-PS. La cadena de péptido se alarga entonces con los aminoácidos Fmoc apropiados y el agente de acetilación de terminal N utilizando el procedimiento SPPS HATU/DIPEA como se describe en el Ejemplo 8. La preparación, purificación HPLC y desaltación se llevaron a cabo como se describe en el ejemplo 1. Producción: 52 mg; pureza HPLC: 97.9%; MS: MW = 1338, análisis de aminoácido: todos los aminoácidos se encontraron en las cantidades requeridas; contenido de péptido: 92.4%, cromatografía de ion: acetato; 2.5% (p/p). iáÍ?^^?^j^^^l^^^^^j^^^^j^^j^Jj^^^ií^á?iil??aSa=ia Ejemplo 12 Ac-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-?-[CH2NH]-Gly-NH2 (12) Para la síntesis de este compuesto, es imposible llevar a cabo la alquilación reductiva con Fmoc-Val-H en la resina. Por lo tanto, el análogo de dipéptido Fmoc-Val-?-[CH2NH]-Gly-OH (12d) se prepara en solución antes de la inmovilización a la resina. Fmoc-Val-?-[CH2NH]-Gly-Obzl (12c) Fmoc-Val-H (12a, 3.16 g, 10 mmol, preparado de acuerdo con T. Moriwake, S. I. Hamano, S. Saito, S. Torri, S. Casino, J. Org. Chem. 54.-41 14-4120, 1989) se disuelve en EtOH/HOAC (80 mL, 99/1 , v/v) y HCI.H-Gly-Obzl (12b, 2.02 g, 10 mmol) se agregan, seguido por NaCNBH3 (0.94 g, 15 mmol). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante la noche. Subsecuentemente, 5% de NaHCO3 acuoso (20 mL) se agregan para neutralizar la mezcla de reacción. La mezcla se concentra entonces al vacío y el residuo se extrae con CH2CI2. Las capas orgánicas combinadas se enjuagan con NaCl. Ac. sat. , secan rápidamente sobre Na2SO , filtran y el solvente se evapora para producir un aceite amarillo. Después de la purificación por cromatografía de gel de sílice (eluyente: 0-4% metanol en CH2CI2) compuesto 12c se aisla como un sólido blanco. Producción: 1.85 g (39%). Análisis: TLC: (sílice, CH2CI2/MeOH 98/2) Rf = 0.45, MS: MW = 472. Fmoc-Val-?-[CH2N(Boc)]-Gly-Obzl (12d) Fmoc-Val-?-[CH2NH]-Gly-Obzl (12c, 0.910 g, 1.93 mmol), Boc2O (0.420 g, 1.93 mmol) y DIPEA (0.336 g, 1.93 mmol) se disuelven en j ]Aj|j|^l» i * mtá ^..** * ,i&aA^*^»*ÍÍ>kr *?" 41 CH2CI2 (20 mL). El pH se mantiene básico por la adición de DIPA y la mezcla se agita durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se acidifica entonces por la adición de 10% de KHSO . El agua se agrega y la capa acuosa se extrae con CH2CI2. Las capas orgánicas combinadas se enjuagan con NaCl. Sat. ac, secan rápidamente sobre MgSO4 y el solvente se evapora para producir 0.96 g (97%) de 12d. Análisis: TLC: (sílice, CH2CI2/MeOH 98/2) Rf = 0.55; MS: MW = 572. Fmoc-Val-?-[CH2N(Boc)]-Gly-OH (12e) Fmoc-Val-?-[CH2N(Boc)]-Gly-Obzl (12d, 0.97 g, 1.70 mmol) se disuelven en una mezcla de MeOH/EtOAc (1 /1 , v/v, 100 mL) e hidrogena a presión normal con 10% de Pd/C por un tiempo de 2 h. El catalizador de paladio se filtra y el filtrado se concentra para proporcionar ácido carboxílico 12e como un aceite ligeramente amarillo. Producción: 0.661 g (81 %). Análisis: TLC (sílice, CH2CI2/MeOH/AcOH 90/9/) Rf = 0.55; MS: MW = 482. Utilizando el síntetizador de péptido con modo de jeringa doble HATU/DIPIEA y con un acoplamiento doble con HATU/DIPEA, el compuesto Fmoc-Val-?-[CH2N(Boc)]-Gly-OH (12e) (0.661 g, 1.37 mmol) se carga en la resina PAL-PEG-PS (1 .5 g, 0.15 mmol/g, 0.225 mmol). El nivel de substitución se mide con el procedimiento se separación Fmoc estándar y fue 0.13 mmol/g de resina cargada (producción: 87%). El péptido resultante H-Val-?-[CH2N(Boc)]-Gly-PAL-PEG-PS (12f) se alarga además utilizando el procedimiento SPPS HATU/DIPEA (ejemplo 1 ) con etapas de condensación dobles de 60 min para cada aminoácido Fmoc. Similar a los péptidos 9 y 1 1 el grupo acetilo de terminal N se introduce utilizando 4- Í?íúXí,l¡tí áAm b**á^4*^ »£ *^^¿^| fii_ nitrofenil acetato. La preparación, purificación y desaltación se llevan a cabo como se describe en el ejemplo 1 . Producción: 17 mg; pureza HPLC: 80.1 %; MS = MW = 1338; análisis de aminoácidos: todos los aminoácidos se encontraron en las cantidades requeridas; contenido de péptido: 63.7%; cromatografía de ion: cloruro: 1 .0%, fosfato: 0.2%, acetato: 0.2% (p/p). Ejemplo 13 Ac-Arg-NhSer-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-NH2 (13) Para la síntesis de péptido 13 el monómero de peptoideo requisito Fmoc-NhSer(tBu)-OH (13e) se prepara primero. Z-2-aminoetil-ferí-butil éter (13a) 3.25 g de MgSO4 (27 mmol) se suspenden en 80 mL de CH2CI2 (seco). Bajo N2 1 .5 mL de H2SO conc. se agregan (procedimiento: S.W. Wright, D.L. Hageman, A.S. Wright, L. McCIure, Tetrahedron Lett. , 38:7345-7348, 1 997). La mezcla se agita por 1 5 min después de que íerí- BuOH (12.9 mL) y Z-2-aminoetanol comercialmente disponibles (5.28 g, 27 mmol), disueltos en CH2CI2 (20 mL), se agregan. Después de agitar por 5 días, 200 mL de 5% de NaHCO3 ac. se agrega a la mezcla de reacción, que se agita hasta que todo el MgSO4 se ha disuelto. Las capas se separan y la capa de CH2CI2 se enjuaga con salmuera. La capa orgánica se seca sobre MgSO , filtra y el solvente se evapora para producir 5.6 g de crudo 13a. El producto se purifica por cromatografía de columna (eluyente: heptano: EtOAc 3: 1 v/v). Producción 5.00 g (78%). 1 H NMR (CDCI3) d: 1 .15 (s, 9H, tBu), 3.3-3.5 (dt, 4H, 2 x CH2) 5.1 (bs, 2H, CH2Bzl), 7.4 (m, 5H, Ar). 2-aminoetil-íerí-butil éter, HCl (13b) A una solución de 5.00 g de éster de bencilo 13a en acetato de etilo (1 50 mL) 225 mg de 10% de Pd/c se agregaron y H2 se burbujeó por 2 horas. El catalizador se filtró y 15 mL de 1 M de HCl ac. se agregaron. El solvente se evaporó y un volumen pequeño de éter se agregó. El producto precipitado 13b se filtra y seca al vacío. Producción: 2.35 g (77%). NMR (CDCI3) d: 1 .20 (s, 9H, tBu), 3.15 (t, 2H, CH2), 3.65 (t, 2H CH2), 8.1 -8.4 (bs, 2H, NH2). N-(2-íerf-butoxietil)glicina (H-NhSer(tBu)-OH) (13c) A una solución de 13b (2.30 g, 15 mmol) en 25 mL de H2O se agregan 1 .40 g (1 5.2 mmol) de ácido glioxílico. H2O. El pH se ajusta a pH = 6 con 1 .0 M de NaOH ac. A esta solución 230 mg de Pd/C se agregan y la mezcla de reacción se agita a 45 psig de presión de H2 durante la noche. El catalizador es filtra y enjuaga con 5 mL H2O. El filtrado que contiene 13c se utiliza sin purificación adicional en la siguiente etapa. Fmoc-NhSer(tBu)-OH (13d) El producto de reacción 13c, aún disuelto en H2O, se trae a pH = 9.5 con 1 N NaOH. La solución básica se diluye con 25 mL de acetona y 5.40 g (16 mmol) de Fmoc-Osu, disuelto en 25 mL de acetona, se agregan gota a gota. El pH se mantiene a pH = 9.5 con 1 N NaOH. Después de agitar durante la noche, la mezcla de reacción se concentra a 150 ML y enjuaga con 2 x 50 mL de éter/heptano (1 /1 , v/v). La capa de H2O se acidifica a pH = 2.5 con 20% de ácido cítrico y 3 x extraído con 100 mL de acetato de etilo. Las capas orgánicas se combinan y secan sobre Na2SO4. El solvente se evapora y el producto se purifica por cromatografía de columna (sílice, CH2CI2/MeOH 5/1 , v/v) y liofiliza. Producción: 5.44 g (91 %). 1H NMR (CDCI3) d: 1 .20 (s, 9H, tBu), 3.2 (dt, 2H CH2), 3.6-3.7 (dt, 2H , CH2), 4.05 (s, 2H, CH2CO2H), 4.2 (B, 1 H Fmoc), 4.4-4.6 (2H, 2 x d, Fmoc), 7.3-7.8 (m, 8H, ArH, Fmoc). La síntesis del péptido 1 3 se lleva a cabo en el Pepsintetizador utilizando la técnica de jeringa doble como se describe anteriormente (ejemplo 1 ). El soporte fue Fmoc-PAL-PEG-PS, (1 .0 g, 0.15 mmol/g) con NMP como el solvente. Los acoplamientos dobles (tiempo de acoplamiento 60 min) se utilizaron para todos los aminoácidos, incluyendo Fmoc-NhSer(tBu)-OH (13d). El grupo acetilo de terminal N se introduce utilizando 4-nitrofenil acetato. La preparación y separación de la resina y grupos protectores se conducen en la manera estándar (ejemplo 1 ). El péptido crudo se purifica por HPLC y desala con 5 °/0o de ácido acético acuoso. Producción: 50 mg; pureza HPLC: 98.6%; MS: MW = 1 366; análisis de aminoácido; todos los ácidos se encontraron en las cantidades requeridas; contenido de péptido: 82.1 %; cromatografía de ion: cloruro: 0.3%, acetato: 1 .3% (p/p). Ejemplo 14 Ac-Arg-NhSer-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-?[CH2NH]-Gly-NH2 (14) La síntesis se lleva a cabo utilizando el procedimiento HATU/DIPEA en el Pepsintetizador (ejemplo 1 ). La resina funcionalizada previamente descrita H-Val-?[CH2N(Boc)]-Gly-PAL-PEG-PS (12f) y el peptoideo protegido Fmoc-NhSer(tBu)-OH (13d) se utilizaron como bloques ?á^^«J^,iteaiÍ^a,«a. ^.a-.»^^^^.^j.a^.^. -^A. .- .t?**?« -*«-**á4*. de construcción. Como se describe antes, la técnica de jeringa doble y acoplamiento dobles de 60 min por acoplamiento se utilizaron. El alargamiento de la cadena de péptido se detiene antes del acoplamiento de Fmoc-NhSer(tBu)-OH (13d) y este aminoácido se disuelve en DMSO con sonicación antes del acoplamiento a la cadena de péptido inmovilizada (H- Phe-Thr(tBu)-Leu-Ala-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Gly-Val- ?[CH2NH]-Gly-PAL-PEG-PS). La síntesis se termina por condensación del aminoácido restante (Arg) y acetilación utilizando 4-nitrofenil acetato. La preparación, purificación, y desaltación del péptido fueron estándar, como se subraya en el ejemplo 1 . La liofilización proporcionó 47 mg de péptido 14. Pureza HPLC: 72.9%; MS: MW = 1352; cromatografía de ion; trifluoroacetato: 5.5% (p/p). Ejemplo 15 Pre-selección de péptidos agonistas utilizando hibridomas de célula T específica de antígeno (primer línea de prueba) Para probar la actividad agonista de un péptido modificado, 3 diferentes líneas celulares de hibridoma específico HC gp-39 (263-275) se utilizaron (5G1 1 , 8B12 y 14G1 1 ). 5 x 104 células de hibridoma y 2 x 105 células B EBV-transformadas, irradiadas (12000 RAD) que llevan la especificidad DRB 1 *0401 se incubaron en 1 50 µl volúmenes en cavidades de una placa de microconcentración de fondo redondo en 50 µl volúmenes a cavidades duplicadas. Cuarenta y ocho oras después 100 µl del sobrenadante de cultivo se analizaron para producción de IL-2 específica de antígeno utilizando ELISA intercalado con anticuerpos Pharmingen í 46 específicos para ratón IL-2. Selección de péptidos agonistas utilizando clones de célula T específica de antígeno (segunda línea de prueba) El clon de célula T 243 se aisla de una línea celular T específica de péptido obtenida de un respondedor RA ai péptido 263-275 (paciente con RA 243). Los clones se obtienen después de cuatro estimulaciones repetitivas con péptido HC gp-39 (263-275) en la presencia de DRB 1 *0401 -PBMC acoplada. El clon de célula T H235 se aisla de una línea de célula T estimulada por péptido obtenida de un donador positivo de HLA-DRB1 *0401. En 2 estimulaciones con péptido HC gp-39 (261 -275) en la presencia de DRB1 *0401 -PBMC acoplada, los clones se obtienen por clonación de PHA. Ambos clones, 243 y 235, se encontraron que se restringen por HLA-DRB1 *0401 en el reconocimiento del antígeno de péptido. Las células se utilizaron los días 10-14 después de la estimulación en cada experimento. Las respuestas proliferativas del clon 243 o clon 235 se miden por incubación de 2 x 104 células T y 105 DRB1 *0401 -PBMC acopladas (3,000 irradiadas Rad) en 150 µl volúmenes de medio con 10% de suero agrupado de humano normal (NHS, CLB, Ámsterdam, Países Bajos) en placas de microconcentración de fondo plano. 50 µl de solución de antígeno (que contiene la secuencia 263-275 o modificaciones como se indica) se distribuye en cavidades triplicadas. 3H-timidina se agrega el día 2 o 3 de incubación. Las células se cultivaron en filtros de fibra de vidrio y la radioactividad incorporada se midió. Resultados La mayoría de los péptidos más modificados como se listan en la Taba 2 son capaces de estimular los tres hibridomas de célula T en una manera comparable con el péptido guía H-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH. Sin embargo, algunos péptidos, no estimularon los tres hibridomas lo que ejemplifica la diferencia en especificidad de los hibridomas utilizados. Cuando estos agonistas se prueban para su capacidad para estimular los dos clones de célula T de humano, una clara diferencia en potencia de los compuestos probados se vuelve obvia (Tabla 2). La mayoría de los compuestos modificados indujeron una respuesta del clon 235 y 243. Un compuesto (Ac-Narg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thre-Gly-Val-Gly-NH2) no induce una respuesta proliferativa de cualquier clon. Tres compuestos (H-betahomoargininil-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Giy-OH, Ac-Arg-Ser-Phe-?[CH2NH]-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-NH2 y Ac-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-?[CH2NH]-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-GIY-NH2 se activan en un clon solamente (ya sea el clon 243 o 235). Tres compuestos (H-Arg-Ser-Phe(4CI)-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH, H-D-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH y CH3OC(O)-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Va¡-Gly-OH) indujeron una respuesta proliferativa en ambos clones que fue en el mismo orden de magnitud que la respuesta inducida por el péptido guía H-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH. Siete compuestos (Ac-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH ,CH3(OCH2CH2)3-OCH2C(O)-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-NH2, D-1 -glucitil-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr- ..O» 48 - Gly-Val-Gly-OH,(N-metil-nicotinoil)+-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu- Thr-Gly-Val-Gly-OH,Ac-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val- ?[CH2NH]-Gly-NH2,Ac-Arg-NhSer-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly- Val-Gly-NH2 y Ac-Arg-NhSer-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val- 5 ?[CH2NH]-Gly-NH2) fueron superiores para inducir una respuesta proliferativa de uno o ambos clones. Los compuestos más potentes identificados siendo Ac-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val- Gly-OH, Ac-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-?[CH2NH]- Gly-NH2, Ac-Arg-NhSer-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-NH2 10 y Ac-Arg-NhSer-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-?[CH2NH]-Gly- NH2 (Tabla 2 y Figura 1 ). Ejemplo 16 Los ratones Balb/c hembra de aproximadamente 8-10 semanas de edad (Charles River Germany o Charles River France) se inmunizaron 15 el día 0 con 100 µl de preparación de antígeno (50 µg de HC gp-36 263- 275) en Adyuvante Freunds Incompleto (IFA; Sigma Chemicals, St. Louis, USA). El antígeno se da subcutáneamente en dos porciones en la región del pecho de los ratones. El día 7, a los ratones se les administró la preparación de antígeno (HC gp-39 (263-275)) diluida en 0.9% de NaCI 20 (NBPI, Emmer Compascum, Países Bajos) en un volumen de 50 µl en 1 mg/ml de alum (Pharmacy Donkers-Peterse, Oss, Países Bajos) unilateralmente en la planta del pie (pata izquierda); la otra planta del pie (derecha) se inyecta con 50 µl de solución alum en 0.9% de NaCI como un control. Las respuestas de hipersensibilidad de tipo retrasado 25 (hinchamiento específico en % promedio) se determinan el día 8 al medir tá.á?í?.Í, !Í s?-i r **- *"""• *—*¿~*a*— ~.*~¿* * - 49 - el incremento en el grosor de la planta del pie de ia planta del pie trasera izquierda en comparación con la planta del pie trasera derecha (hinchamiento izquierdo (mm) - hinchamiento derecha (mm) / hinchamiento derecho (mm) x 100%), utilizando un micrómetro diseñado en casa. La aplicación nasal de la preparación de antígeno (50, 10, 2 o 0.4 µg (o concentraciones inferiores)) de HC gp-39 (263-275) o de derivados de péptido modificados se realiza bajo Isoflurano (Forne®, Abbott BV, Amstelveen, Países Bajos) anestesia una vez (día 5) antes de la inmunización el día 0 con 100 µl de preparación de antígeno que contiene 50 µg de HC gp-39 263-275 en IFA. En estos experimentos, los ratones se inmunizaron y proporcionaron con HC gp-39 263-275 y las respuestas DTH se determinan como se describe arriba. Utilizando el sistema de análisis arriba descrito, en el cual los ratones Balb/c se inmunizaron con HC gp-39 (263-275) en IFA respondieron a HC gp-39 (263-275), se vuelve posible estudiar los efectos potenciales de inducción de tolerancia por aplicación nasal de HC gp-39 (263-275) en comparación con aquellos de derivados de péptido modificados. El pre-tratamiento con HC gp-39 (263-275) submoduló el HC gp-39 (263-275) específico de reacción DTH; este efecto dependió de la dosis de péptido que se incluye en el procedimiento de pre-tratamiento. Utilizando una concentración de péptido relativamente elevada (50 µg/ratón), la aplicación nasal de una dosis de HC gp-39 (263-275) abrogó completamente la reacción DTH mientras que una dosis de 2 µg/ratón fue ineficaz. De esta manera, un procedimiento se establece para discriminar entre dosis eficaces (tolerogénicas) y no eficaces de péptido en HC gp-39 &!A¡ A *íir A?£^k*^£^^^¿í¿¿¿¿~£^^^¿¿¿¿¿^ ? 50 (263-275) específicas del sistema de análisis DTH. Suponiendo que los derivados de péptido modificados en base a HC gp-39 (263-275) pueden ser activos en concentraciones inferiores que el péptido original, tales péptidos se esperan que induzcan la tolerancia en concentraciones de péptido relativamente bajas. Después de esta suposición, una serie de péptidos modificados se probó en este procedimiento de inducción de tolerancia. En este experimento (en el cual una respuesta HC gp-39 (263- 275) confiable se induce que podría submodularse por pre-tratamiento con 50 pero no 2 µg de HC gp-39 (263-275)) se mostró que las modificaciones específicas del péptido fueron altamente activas en la inducción de tolerancia mientras que otros no (ver Tabla 3).

Tabla 2 Resumen de resultados obtenidos en las pruebas de primer linea (análisis de hibridoma) y segunda línea (análisis de proliferación de clon de humano) Péptidos probados Análisis de Reactividad de hibrldoma clones humanos 235 243 H-Aig-Ser-Phe-Tlir-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-'pir-Oly-Val-Gly-OH + 4- + H-Arg-Ser-Phe{4CI)-Thr-Let?-AI«-Ser-Ser-ai??-'pu:-G|y-Val-siy-OH + + + H-Arg-Ser-Phe(4Br)-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-'n?r-Gly-Val-Gly-OH + nd nd H-Arg-Ser-Cha-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Oly-Val-Oly-OH + nd nd Ac- D-A^-Ser-Phe-TTir-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Tlir-Gly-Val-Oly-OH + + + Desaminoarglnlnll- Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-VaI-Gly-NH2 + nd nd Desamlnoarginlnil- Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH + nd nd Ac-Arg-Ser-Phß-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr^ ly-VaI-Gly-OH + CHr{CCH?CH,h-OCHjC(0)-A«g-^r.Phe-TT?r- thAla-Ser-Ser-Gl??-Tl?r-<3ly-Val-Gly-NH2 + D^IUClt¡l-Arg-Se?>Phe-Th?^l?U-Ata-Ser-Ser<;iu-Thr-Gly-VaW3ry-OH + (N-Me-nicotlninoll)+ -.Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-TTir-Gly-Vnl-Gly-OH + + ++ Oí MeO-C(0)-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala>Ser-Ser-Glu-Thr<ily-Val-OIy-OH + + + H-betahomoarginlnll- Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH + + • Ac-Arg-Ser-Phe.?[CH,NH]-Thr-Leu-Alß-Ser-Ser-aiu-Thr-Gly-V?Wiy-NH, +* - nd Ac-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-?{CH2NH]-Ala-Ser-Ser-GIu-Thr-Gly-Val-Gly-NHl +* + - Ac-Aig-Ser^he-Thr- u-Alí?r-SwKllu-Thr-G^?ICHjNHJ-Val-GI^NH, +• nd nd A< Arg^er-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser<3lu-Thr-Gly-Vaµ?[CH,NHJ-Gly-NH? + Ac-Narg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Sa-Glu-T r-Oly-Val-Oly-NHj + Ac-A?g-NhSer-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr<Jly-Val-Giy-NH? + Ac-Arg-NhSer-Phe-Thr-Leu-AI«-Ser-Scr-Glu-Tl? -Oly.Val-f[CH NH]-GryNH? + Tabla 3 pruebas DTH Péptidos probados Dosis probada (DTH) Media dosis (µg India - 5) toleroqénlca (µg) l) H-A?g-Ser-Phe-Thr-Leu-A -Ser-Ser-Glu-Thr-01y-V«l-Gly-OH 50, 10.2, 0.4 10 H-Aig-Ser-PheííCO-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Tlir-^jly-Val-Gly-OH 50, 10,2 <2 H-Atg-Ser-Phe(4Br)-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Olu-Thr-01y-Val-Gly-OH 50, 10, 2, 04 2-10 H-Arg-Ser-Cha-Thr-Leu-A -Ser-Ser-Glu-Thr-Ory-Val-Gly-OH 50, 10, 2 50 Ac-tD-ArgJ-Serfhe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Ghi-Thr-Gly-Val-GIy-OH 50, 10,2,04 -Desa inoarglninil- Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-V»l-Gly- H2 50, 10, 2 50-10 Desamlnoarginlnll- Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gl -OH 50, 10, 2, 0.4 <04 Ac-Arg-Ser-Phe-TTir-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Giy-Val-Gly-OH 50, 10.2,0.4 • CHS-^OCHaCHJJJ-OCHaCCO^Afg-Ser-Phß-Tlir-Leu-AIa-Sfr-Ser-aiu-Thr-Gly-Val-Gly-Nm 50, 10.2, <2 D-GlucltHArg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser ilu-Thr-Gly-Val-Gly-OH 50, 10.2, 0.4 <04 (N-MeHiicotlninoil)+--Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH 50, 10,2,0.4 10-50 MeO-C(0)-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH 50, 10, 2.0.4 2-10 ai H-betahomoarglnlnil- Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Olu-Thr-Gly-Val-Gly-OH ND l\J Ae-Arg-Ser-Phe-v[CH2NH]-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-NH2 50, 10, 2, 0.4 <0.4 Ae-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-?[CH2NH]-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly- H2 50, 10, 2 10-50 Ac-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ab-S«-Ser-Glu-Thr-01y-v[CH2NH]-Val-Gly-NH2 ND Ac-Atg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-?[CH2NH]-GlyNH2 50, 10, 2, 0.4. 0.08, 0.016, 008 0.0032 Ac-NarB-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Cly-NH2 ND Ac-Arg-M?Ser-l^-Thr-Leu-Ala-Ser.Ser-Olu-Thr<5ly-VaI ly.NH2 50, 10. 2, 0.4, 0.08, 0.016, 0.016-0.08 0.0032 Ac-Arg-NhSer-H?-Thr-Lett-AIa^er-Set Clu-Thr-Gly-Val-v[CH2NH]-Gly-NH2 50, 10. 2, 0.4, 0.08, 0.016, 0.0032 0.0032 1) media dosis tolerogéplea: dosis probada con 50% de Inhibición de respuestas DTH (DTH max en ese esperiimmeenntt»o p paartrtilccuullaari r))--:: NNDD nnoo ttoolle< Mr-ooggéénnllccaa; ; no hecha LISTADO DE SECUENCIAS <110> AKZO NOBEL N .V. <120> IMITACIONES DE PÉPTIDO Y PÉPTIDOS MODIFICADOS PARA UTILIZARSE EN INMUNOTERAPIA <130> <140> <141> <160> 20 <170> Patentln Ver. 2.1 <210> 1 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Arg Ser Phe Thr Leu Ala Ser Ser Glu Thr Gly Val Gly 1 5 10 <210> 2 <211> 13 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Xaa en posición 1 es desaminoarglnllo; al NH2 Gly de terminal C se conecta <400> 2 Xaa Ser Phe Thr Leu Ala Ser Ser Glu Thr Gly Val Gly 1 5 10 <210> 3 <211> 13 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Xaa en posición 1 es desaminoarginilo <220> <223> Descripción de Secuencia Artificial: Péptido sintético <400> 3 ák **#¡* Xaa Ser Phe Thr Leu Ala Ser S<sx Glu Thr Gly Val Gly 1 5 10 <210> 4 <211> 13 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> En término N conectado a CHS- (OCH2CH3) 3-) CH2-C (O) ; en término C conectado a NH2 <220> <223> Descripción de Secuencia Artificial: Péptido sintético <400> 4 Arg Ser Phe Thr Leu Ala Ser Ser Glu Thr Gly Val Gly 1 5 10 <210> 5 <211> 13 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> En término N conectado a D-1-glucitllo <220> <223> Descripción de Secuencia Artificial: Péptido sintético <400> 5 Arg Ser Phe Thr Leu Ala Ser Ser Glu Gly Thr Val Gly 1 5 10 <210> 6 <211> 13 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> En la posición de terminal N de péptido: CH3-C(0) <220> <223> Descripción de Secuencia Artificial: Péptido sintético <400> 6 Arg Ser Phe Thr Leu Ala Ser Ser Gly Thr Gly Val Gly 1 5 10 <210> 7 <211> 13 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Descripción de Secuencia Artificial: Péptido sintético <220> <223> En término N conectado a Ac; En el término C NH2 se conecta; Xaa en posición 3 es NH-CH (CH2Ph> -CH2 <400> 7 Arg Ser Xaa Thr Leu Ala Ser Ser Glu Thr Gly Val Gly 1 5 10 <210> 8 <211> 13 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Descripción de Secuencia Artificial: Péptido sintético <220> <223> En término N conectado a Ac; En el término C NH2 se conecta; Xaa en posición 5 es NH-CH (CH2CH (CH3) 2) -CH2 <400> 8 Arg Ser Phe Thr Xaa Ala Ser Ser Glu Thr Gly Val Gly 1 5 10 <210> 9 <211> 13 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Descripción de Secuencia Artificial: Péptido sintético <220> <223> En el término N Ac se conecta; En el término C NH2 se conecta; Xaa en posición 12 es NH-CH (CH (CH3) 2) -CH2 <400> 9 Arg Ser Phe Leu Thr Ala Ser Ser Glu Thr Gly Xaa Gly 1 5 10 <210> 10 <211> 13 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Descripción de Secuencia Artificial: Péptido sintético <220> <223> En el término N Ac se conecta; En el término C NH2 se conecta; Xaa en posición 2 es N [ (CH2 ) 2-0H] -CH2-C (0) <400> 10 Arg Xaa Phß Thr Leu Ala Ser Ser Glu Thx Gly Val Gly 1 5 10 <210> 11 <211> 13 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Descripción de Secuencia Artificial: Péptldo sintético <220> <223> En el término N Ac se conecta; En el término C NH2 se conecta; Xaa en posición 2 es N [CH2 ) 2-0H] -CH2-C (0) ; Xaa en posición 12 es NH-CH (CH (CH3)2) -CH2 <400> 11 Arg Xaa Phe Thr Leu Ala Ser Ser Glu Thr Gly Xaa Gly 1 5 10 <210> 12 <211> 13 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> i-i tit mtittl.í *? ?i tí¡ímmt?außi--t A&?&í&£í? .. <223> Descripción de Secuencia Artificial: Péptido sintético <220> <223> Xaa en posición 3 es Phe (Cl) <400> 12 Arg Ser Xaa Thr Leu Ala Ser Ser Glu Thr Gly Val Gly 1 5 10 <210> 13 <211> 13 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Descripción de Secuencia Artificial: Péptido sintético <220> <223> Xaa en posición 1 es H2N- (CH2) 5-C (0) <400> 13 Xaa Ser Phß Thr Leu Ala Ser Ser Glu Thr Gly Val Gly 1 5 10 <210> 14 <211> 13 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Descripción de Secuencia Artificial: Péptldo sintético <220> <223> Xaa en posición 1 es H2N- (CH2) 6-C (0) <400> 14 Xaa Ser Phe Thr Leu Ala Ser Ser Glu Thr Gly Val Gly 1 5 10 <210> 15 <211> 13 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Descripción de Secuencia Artificial: Péptido sintético <220> <223> En el término N se conecta (N-metil-nicotinoil)+ <400> 15 Arg Ser Phe Thr Leu Ala Ser Ser Glu Thr Gly Val Gly 1 5 10 <210> 16 <211> 13 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Xaa en posición 3 es Phe(4Br) <220> <223> Descripción de Secuencia Artificial: Péptido Sintético <400> 16 Arg Ser Xaa Thr Leu Ala Ser Ser Glu Thr Gly Val Gly 1 5 10 <210> 17 <211> 13 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Xaa en posición 3 es ciclohexilalanina <220> <223> Descripción de Secuencia Artificial: Péptido Sintético <400> 17 Arg Ser Xaa Thr Leu Ala Ser Ser Glu Thr Gly Val Gly 5 10 <210> 18 <211> 13 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Xaa es posición 1 es H-betahomoarglninilo <220> <223> Descripción de Secuencia Artificial Peptido Sintético <400> 18 Xaa Ser Phe Thr Leu Ala Ser Ser Glu Thr Gly Val Gly 1 5 10 <210> 19 <211> 13 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> En el término Ac se conecta; en el termino C NH2 se conecta; Xaa en posición 11 es NH-CH2-CH2 <220> <223> Descripción de Secuencia Artificial. Péptido Sintético <400> 19 Arg Ser Phe Thr Leu Ala Ser Ser Glu Thr Xaa Val Gly 1 5 10 <210> 20 <211> 13 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> En el término Ac se conecta; en el termino C NH2 se conecta; Xaa en posición 1 es <CH2CH2CH2NH-C (-NH) -NH2) -CH2-CO <220> <223> Descripción de Secuencia Artificial- Péptido Sintético <400> 20 Xaa Ser Phß Thr Leu Ala Ser Ser Glu Thr Gly Val Gly 1 5 10 í*mÁ , *? *-im ?*iíizri.**, mjt¡u ¡t ;,*.,.,.*, .«JÉJHlll

Claims

REIVINDICACIONES 1 . Un péptido modificado derivado de H-Arg-Ser-Phe-Thr- Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH (fórmula I) que tiene la formula general Q-A1 -A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-A1 1 -A12-A13-Z (fórmula II), en donde A1 a A13 corresponden con los aminoácidos de la fórmula I, Q corresponde con H y Z corresponde con OH, caracterizado porque las modificaciones se seleccionan de uno o más de los grupos a, b o c, que consisten de: a) substitución de 1 ,6, preferentemente 1 -4 aminoácidos en A1 a A13 con aminoácidos no naturales o aminoácidos ß b) substitución de uno o más enlaces de amida con enlaces de amida reducidos o isoésteres de etileno c) substitución de Q y/o Z; y, opcionalmente, d) substitución con aminoácidos naturales hasta un total de 6 modificaciones. 2. El péptido según la reivindicación 1 , caracterizado porque Q es H, (C1 -6)alquilo, formilo, (C1-6)alquilcarbonilo, carboxi(C?.6)alquílo, (C?. 6)alquiloxicarbonilo, (C2.6)alqueniloxicarbonilo, (Cß-i4)ar¡l(C?.ß)alquilo; (C6. CH3(OCH2CH2)n-OCH2-C(O)-, en donde n es

1 -10, HOCH2-(CHOH)m-CH2- en donde m es 3-4; 1 -metíl-piridinio-3- carbonilo, 1 -metil-piridinio-4-carbonilo o Lys o Q se encuentra ausente si A1 es H2N-C(=NH)NH-(CH2)n-C(O)- en donde n es 2-5; Z es OR en donde R es H, (C?-6)alquilo, (C2-6)alquenilo, aril(C?.4)alquilo, (C .i3)heteroaril(C1.6)alquilo o NR?R2 en donde RT y R2 se seleccionan independientemente de H, (C?-6)alquilo o (C6-?4)aril(C?.6)alquilo; y opcionalmente, Q y Z contienen en adición hasta 10 aminoácidos ubicados próximos a la posición A1 y/o A13. 3. El péptido según la reivindicaciones 1 o 2, caracterizado porque las substituciones con los aminoácidos naturales en A1 a A13 ocurren en no más de 4, preferentemente no más de 2 posiciones. 4. El péptido según la reivindicaciones 1 -3, caracterizado porque Q es H, (C?-6)alquilo, formilo, (C?-6)alquilcarbonilo, carboxi(C?-6)alquilo, (CL 6)alquiloxi-carbonilo, (C2-6)alqueniloxicarbonilo, aril(C?.6)alquilo; (C6- 14)aril(C?-6)alquiloxicarbonilo, CH3(OCH2CH2)n-OCH2-C(O)- en donde n es 1 -10, HOCH2-(CHOH)m-CH2- en donde m es 3-4; 1 -metil-piridinio-3-carbonilo, 1 -metil-piridinio-4-carbonilo o Lys, o Q se encuentra ausente si A1 es H2N-C(=NH)NH-(CH2)n-C(O)- en donde n es 2-5; A1 es L-Arg, D-Arg, L-Lys, D-Lys, L-Ala, D-Ala, H2N-C(=NH)NH-(CH2)n-C(O)- en donde n es 2-5, H2N-(CH2)n-C(O)-, en donde n es 2-7, (R)-{-N -CH[(CH2)n-NH-C(=NH)-NH2]-CH2-C(O)-}, en donde n es 2-5 o (SJ-{-NH-CH[(CH2)n-NH-C(=NH)-NH2]-CH2-C(O)-}, en donde n es 2-5 o -N[(CH2)n-NH-C(=NH)-NH2]CH2C(O)-, en donde n es 2-5; A2 es L-Ser, D-Ser, L-hSer, D-hSer, L-Thr, D-Thr, L-Ala, D-Ala, Gly o -N[(CH2)n-OH]-CH2-C(O)- en donde n es 2-5; A3 es L-Phe, D-Phe, L-Phe(X), D-Phe(X) en donde X se selecciona independientemente de uno o más de (C?- )alquilo, hidroxi, halo, (Ci. ß)alquilocarbonilamino, amino o nitro, L-Hfe, D-Hfe, L-Thi, D-Thi, L-Cha, D-Cha, L-Pal(3), D-Pal(3), L-1 -Nal, D-1 -Nal, L-2-Nal, D-2-Nal, L-Ser(Bzl), D- ¿j^g^^¡(g|¡¿^^£j^£ posición A1 y/o A13. 5. El péptido según la reivindicaciones 1 -4, caracterizado porque Q es H, (C1 -6)alquilo, (C1 -6)alquilcarbonilo, carbox¡(C?-6)alqu¡lo, (d. 6)alquiloxi-carbonilo, CH3(OCH2CH2)n-OCH2-C(O)- en donde n es 1 -10, HOCH2-(CHOH)m-CH2- en donde m es 3-4; 1 -metil-piridinio-3-carbonilo, 1 - metil-piridinio-4-carbonil o Lys, o Q se encuentra ausente si A1 es H2N- C(=NH)NH-(CH2)n-C(O)- en donde n es 2-5; A1 es L-Arg, D-Arg, L-Ala, D-Ala, H2N-C(=NH)NH-(CH2)n-C(O)- en donde n es 2-5, H2N-(CH2)n-C(O)-, en donde n es 2-7, (SH-NH-CH[(CH2)n-NH- C(=NH)-NH2]-CH2-C(O)-}, en donde n es 2-5 o -N[(CH2)n-NH-C(=NH)- NH2]CH2C(O)-, en donde n es 2-5; A2 es L-Ser, L-Ala, D-Ala, Gly o -N[(CH2)n-OH]-CH2-C(O)- en donde n es

2-5; A3 es L-Phe, D-Phe, L-Phe(X) o D-Phe(X) en donde X es halo o nitro, L- Hfe, L-Thi, L-Cha, L-Pal(3), L-1 -Nal, D-1 -Nal, L-2-Nal, L-Ser(Bzl) o (S)-{- NH-CH(CH2-aril)-CH2-}; A4 es L-Thr o L-Ala; A5 es L-Leu-, L-Ala, o (SH-NH-CH(CH2-CH(CH3)2-CH2-}; A6 es L-Ala o Gly; A7 es L-Ser o L-Ala; A8 es L-Ser o L-Ala; A9 es L-Glu o L-Ala; A10 es L-Thr o L-Ala; A1 1 es Gly, L-Ala, o -NH-CH2-CH2-; A12 es L-Val, o (S -{-NH-CH[CH(CH3)2]-CH2-}; A13 es Gly o L-Ala; y Z es OR en donde R es H o NRtR2 en donde Ri y R2 se seleccionan independientemente de H o (C?-6)alquilo; y opcionalmente, Q y Z contienen en adición hasta 10 aminoácidos ubicados próximos a la posición A1 y/o A13. 6. El péptido según la reivindicaciones 1 -5, caracterizado porque Q es H, metilo; acetilo; carboximetileno, metoxicarbonilo; CH3(OCH2CH2)

3- OCH2-C(O)-, D-1 -glucitil, 1-metil-piridinio-3-carbonilo o 1 -metil-piridinio-

4- carbonilo, o Q se encuentra ausente si A1 es H2N-C(=NH)NH-(CH2) -C(O)-, A1 es L-Arg, D-Arg, L-Ala, H2N-C(=NH)NH-(CH2)n-C(O)-, H2N-(CH2)n-C(O)-, en donde n es

5-7, (SH-NH-CH[(CH2)n-NH-C(=NH)-NH2]-CH2-C(O)-} o - N[(CH2)n-NH-C(=NH)-NH2]CH2C(O)-; A2 es L-Ser, L-Ala o -N[(CH2)2-OH]-CH2-C(O)-; A3 es L-Phe, D-Phe, L-Phe(X) en donde X es halo o nitro, L-Hfe, L-Thi, L- Cha, L-Pal(3), L-1 -Nal, L-2-Nal o L-Ser(Bzl) y Z es OH, NH2 o NHEt y, opcionalmente, Q y Z contienen en adición hasta 10 aminoácios ubicados próximos a la posición A1 y/o A3. 7. El péptido según las reivindicación 1 -6, caracterizado porque la fórmula general es Q-A1-A2-A3-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr- A11 -A12-Gly-Z (fórmula lll). 8. El péptido según las reivindicaciones 1 -7 que tiene 1 -4 modificaciones- 9. El péptido según la reivindicación 8 que tiene 2-3 modificaciones. 10. El péptido según la reivindicación 7, caracterizado porque A1 es L-Arg, D-Arg, H2N-C(=NH)NH-(CH2)n-C(O)-, H2N-(CH2)n-C(O)-, en donde n es 5-7 o -N[(CH2)n-NH-C(=NH)-NH2]CH2C(O)-; A2 es L-Ser o -N[(CH2)2-OH]-CH2-C(O)-; A3 es L-Phe, L-Phe(X) en donde X es halo, L-1 -Nal, L-2-Nal, L-Ser(Bzl) y 1 1. El péptido según la reivindicaciones 9 o 10, caracterizado porque la fórmula general es Q-Arg-A2-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser- Ser-Glu-Thr-Gly-A12-Gly-Z (fórmula IV). 12. Un péptido seleccionado del grupo que comprende desaminoargininíl-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-NH2, desaminoargininil-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH, CH3-(OCH2CH2)3-OCH2-C(O)-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-NH2, D-1 -glucitil-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly- Val-Gly-OH, CH3O-C(O)-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH, Ac-Arg-Ser-Phe-?-[CH2NH]-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-NH2, Ac-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-?-[CH2NH]-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-NH2, Ac-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly- Val-?-[CH2NH]-Gly-NH2, Ac-Arg-N[(CH2)2-OH]-CH2-C(O)-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-NH2, Ac-Arg-N[(CH2)2-OH]-CH2-C(O)-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-?-[CH2NH]-Gly-NH2, H-Arg-Ser-Phe(CI)-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH, H2N-(CH2)5-C(O)-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH, H2N-(CH2)ß-C(O)-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala-Ser- * - 6

6 - Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH, (N-metil-nicotinoil)+-Arg-Ser-Phe-Thr-Leu-Ala- Ser-Ser-Glu-Thr-Gly-Val-Gly-OH. 13. Un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 - 12 para utilizarse como una substancia terapéutica. 14. La composición farmacéutica que comprende uno o más péptidos de acuerdo con las reivindicaciones 1 -12, y un vehículo farmacéuticamente aceptable. 15. El uso de uno o más péptidos de acuerdo a las reivindicaciones 1 -12 para la elaboración de una preparación farmacéutica para la inducción de tolerancia de la célula T específica a un autoantígeno en pacientes que padecen de desordenes autoinmunes, más específicamente artritis. 16. La composición de diagnóstico que comprende uno o más de los péptidos de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1 -12 y un agente de detección. ^fe* ^^&^^^^^ A^Al??.