MXPA02002171A - Extracto de leucocitos dializado en la elaboracion de un farmaco para el tratamiento de enfermedades infecciosas en animales. - Google Patents

Abstract

La presente invencion consiste en un compuesto farmacologico elaborado con el extracto soluble dializado de leucocitos lisados de origen animal, los cuales se obtienen de tejido sanguineo o linfatico de animales domesticos sensibilizados o no sensiblilizados con antigenos especificos para su aplicacion en animales en el tratamiento de enfermedades infecciosas.

Description

Extracto de leucocitos dializado en la elaboración de un fármaco para el tratamiento y profilaxis de enfermedades infecciosas en animales.

Campo de la Invención. 5 La presente invención se relaciona al campo del tratamiento de enfermedades infecciosas mediante la transferencia y estimulación de inmunidad mediada por células a través de extractos de leucocitos dializados, así como a métodos de obtención y preservación del extracto.

Antecedentes de la invención. 10 Las enfermedades siempre han sido parte de la experiencia de la vida humana y animal. En f cada momento histórico el hombre se ha esforzado para atender ó controlar los problemas que las ^ nfermedades representan, lo que ha tenido que acompañarse de la interpretación de la enfermedad, en concordancia con la visión intelectual predominante. Se puede asumir, por ello, que en cada época ha existido una teoría de la enfermedad en torno a la cual la sociedad 15 estructura un valor del estado de salud y establece las medidas para darle vigencia. Las ideas acerca de las enfermedades y su origen han variado desde cuando se asociaban a causas de tipo mágico, pasando por las causas de origen divino y la generación espontánea hasta llegar a las de origen etiológico. " J ,JÍ3-en la segunda mitad del siglo XIX, con las investigaciones de Pasteur, Koch, Thuillier, 20 Roux, Chamberland, Lister, Loeffler, Behering, entre otros científicos, cuando inicia la infectología como área de estudio y se establecen las bases para la prevención y tratamiento de las infecciones y por lo tanto de las enfermedades asociadas a microorganismos patógenos. Esto ha permitido hasta nuestros días, implementar terapias efectivas contra la mayoría de las enfermedades, preservando la vida de los pacientes afectados por éstas. 25 Aun a pesar de todos los adelantos clínicos y de tratamiento de enfermedades en animales, no existían aún hasta antes de la presente invención, tratamientos terapéuticos efectivos contra ciertos tipos, tales como aquellas en las que el pronóstico es poco favorable para el animal ?f después de que los signos típicos de la enfermedad aparecen, con lo cual el paciente tiene pocas probabilidades de sobrevivir. En éstos casos, el tratamiento se había limitado a tratar de conservar 30 al animal en un estado fisiológico lo más normal posible para permitir que su propio sistema inmunológico fuese capaz de responder. Ejemplos de dichas enfermedades son enfermedad de Aujesky y moquillo1. El caso del moquillo representa hasta la fecha, una de las enfermedades más importantes a nivel doméstico y de distribución mundial.

El moquillo canino es una enfermedad sistémica, infecciosa, altamente contagiosa e inmunosupresora, de evolución aguda ó subaguda, con signos clínicos respiratorios, gastrointestinales y neurológicos. Dicho padecimiento tiene un alto índice de mortalidad que afecta a perros y otros carnívoros en todo el mundo y que se transmite mediante un agente viral. Es la 5 enfermedad viral más prevalente en los perros y se cohsidera que solo hay unos cuantos en el mundo que viven en zonas aisladas y que no se han expuesto ó infectado con el virus. , El contagio ocurre mediante exposición al virus por aerosol ó contacto directo con perros infectados, replicándose así en los tejidos linfoides sistémicos, provocando fiebre, viremia y diseminación a los tejidos epiteliales y al sistema nervioso central; la evolución varia dependiendo 10 de la cantidad del inoculo, la cepa viral y la respuesta inmunológica del huésped. La enfermedad ^^se manifiesta con signos multisistémicos, picos de fiebre y un alto porcentaje de mortalidad; en ^ áste sentido, una vez que los signos clínicos característicos del moquillo se hacen evidentes, el pronóstico de mejora es extremadamente pobre ¡ ya que la 'mayoría de ellos progresan de manera desfavorable, independientemente del tratamiento y de los periodos de mejoría aparente; como 15 consecuencia los animales mueren con ó sin signos neurológicos. El moquillo canino es la enfermedad infectocontagiosa de los perros que más altos índices de morbilidad presenta, la cual oscila entre el 25 y eli50%. La mortalidad es tan alta como del 50 al ^^ 100% de los casos dependiendo de la cepa viral, el tipo de población canina afectada, la edad de ^^ los perros, el estado de inmunización poblacional y la respuesta inmunológica de los animales. La 20 rabia es la única enfermedad que tiene un índice de mortalidad mayor a la del moquillo canino, ya que esta es siempre del 100%. Hasta antes de la presente invención, no existía tratamiento específico para ésta enfermedad. El tratamiento únicamente consistía en la administración de fármacos quimioterapéuticos, de tal manera que el tratamiento se limitaba a la instauración de medidas 5 sintomáticas y de la eutanasia una vez que se observaban signos neurológicos. Durante la evolución de la enfermedad, es posible que ocurra la recuperación espontánea en algunos perros con moquillo sistémico no nervioso, con la aplicación de medidas terapéuticas sintomáticas, lo que p puede otorgar créditos inapropiados a ciertos regímenes terapéuticos2,3'4'5'6,7. Al igual gue en el moquillo, en diversas enfermedades infecto-contagiosas se observa una 0 afectación importante en la respuesta del sistema inmunológico, lo que permite una evolución mayor de la enfermedad. Dentro de los factores que pueden' ocasionar ó favorecer inmunodeficiencias en los animales se encuentran la deprivación de calostro, descanso insuficiente, desnutrición grave, hipovitaminosis A, E ó C, deficiencia dietética de zinc y selenio, quimioterapia citotóxica, 5 tratamiento con glucocorticoides, disproteinemias, diabetes mellitus, insuficiencia renal crónica, hipotiroidísfrio, transportación, sobrepoblación, jerarquización social, ambiente frío, instalaciones inadecuadas, así como cualquier otra causa que provoque estrés, ya sea intenso ó prolongado. La inmunosupresión genera varios efectos, tales como una mayor frecuencia de infecciones de tipo grave, infecciones parasitarias, bacterianas ó virales persistentes ó recurrentes, poca ó ninguna 5 respuesta al tratamiento apropiado y la infección con microorganismos en general no patógenos. Debido a lo anterior, se han realizado estudios exhaustivos con relación al funcionamiento del sistema inmune en animales y el papel que juega en los organismos para combatir las infecciones. Una de las líneas de investigación que se ha estudiado en éste sentido ha sido el estudio de la transferencia de inmunidad de un organismo a otro a través de diversas estrategias, 0 las cuales involucran principalmente a fluidos ó células del sistema inmune. ^^ La transferencia de inmunidad se comenzó a estudiar a partir de 1942 por Landsteiner y ^Wchase, quienes describieron que ésta podría realizarse a través de células de cobayos donadores sensibilizados a cobayos receptores no sensibilizados, al inducir alergias por contacto al cloruro de picrilo inyectando células de exudado peritoneal de los animales sensibilizados en la piel de los 5 animales receptores. Posteriormente el mismo Chase demostró que la inyección intradérmica de leucocitos aislados de exudado peritonéal inducido en cobayos sensibilizados a la tuberculina puede producir hipersensibilidad cutánea específica "retardada" a la tuberculina en cobayos no sensibilizados. En ese mismo trabajo intentó realizar la transferencia de esta reactividad usando suero y células muertas, sin buenos resultados. 0 Posteriormente se determinó que bajo ciertas condiciones era posible transferir la hipersensibilidad por contacto de cobayos sensibilizados con antígenos del veneno de hiedra a cobayos receptores no sensibilizados, mediante la inyección de células linfoides muertas. Así mismo en experimentos posteriores se lograron resultados semejantes en la transferencia de inmunidad celular mediante el uso de clorodinitrobenceno como antígeno y como vehículo de 5 transferencia extractos leucocitarios. * Para el año de 1949, Lawrance expone que la inyección intradérmica de leucocitos viables obtenidos de donadores humanos positivos a la intradermorreacción con tuberculina en personas negativas al citado antígeno, puede inducir hipersensibilidad cutánea pasiva; también cita que la hipersensibilidad cutánea transferida es un fenómeno transitorio con duración de cuatro días a tres 0 meses8. En años posteriores, Lawrance, confirmó que el grado de duración del estado sensitivo transferido guarda una relación con el grado de sensibilización del leucocito donador y la cantidad de leucocitos usados; así mismo, que la sensibilidad retardada inducida tras la inyección de leucocitos lisados es similar a la observada con la inyección de leucocitos viables9. Hasta ese momento el significado de la transferencia de la hipersensibilidad cutánea era desconocido y por lo 5 tanto estos trabajos recibieron poca atención.

Los hallazgos científicos, principalmente los desarrollados por Lawrance, relacionados con el extracto de leucocitos dializado (ELD) fueron vistos con escepticismo por algunos inmunólogos y se propusieron explicaciones alternativas. Una se basaba en el punto de que Lawrance en sus experimentos siempre utilizaba antígenos de agentes infecciosos ó componentes de vacunas 5 comunes y que el organismo receptor reaccionaba por sensibilización primaria; también se propuso que receptores contenidos en los extractos dializados de leucocitos ya estaban sensibilizados a los antígenos y el extracto diálizado actuaba como reforzador ó amplificador de las sensibilidades prexistentes. En experimentos subsecuentes con antígenos sintéticos y en estudios controlados realizados con ratones fue posible rechazar estas posibilidades. Otros tantos 0 ínmunólogos postulaban que el dializado contenía fragmentos de antígeno altamente ^^inmunogénico y que el extracto de leucocitos dializado producía sus efectos por sensibilización ^^activa de los receptores, teoría que a la fecha ha sido desechada. En la década de los 70's resurge el interés por el ELD y los factores de transferencia en él contenidos, cuando se observó que su aplicación en personas con ciertos síndromes de 5 inmunodeficiencia de origen genético, como el Síndrome Wiskott-Aldrich, mejoraba los parámetros clínicos e inmunológicos. Con ello se inició la investigación clínica con la aplicación dei extracto de leucocitos dializado10. En el área clínica de la medicina humana se ha descrito la utilización del ELD para el tratamiento de diferentes enfermedades, tales como infecciones por virus herpes simplex11, viruela, 0 sarampión, afecciones dermatológicas del tipo de melasma, acné, condilomatosis y papilomatosis12. También ha mostrado eficacia contra las infecciones por Candida albicans*3, Varícella zoster14, Criptosporidium spp15, 16, Mycobacterium tuberculosis17 y Actinobacillus pluroneumoniae. En animales se ha descrito lá transferencia de hipersensibilidad retardada en diversas 5 enfermedades. Para el caso de cerdos en dolibacilosis, enfermedad de Aujesky, cólera porcino y gastroenteritis transmisible; en bovinos en rinotraqueitis infecciosa, salmonelosis y paratuberculosis; en pollos en enfermedad de Néwcastle, laringotraquitis infecciosa, enfermedad P de Marek y coccidiosis; y en conejos en catarro infeccioso. Sin embargo, en múltiples estudios realizados en animales y seres humanos para fines 0 terapéuticos utilizando el extracto, se ha observado una gran heterogeneidad en los resultados obtenidos, dado que no se reportan tratamientos que funcionen de manera consistente en un alto porcentaje de los pacientes y en los cuales se observe una recuperación completa del estado de salud, tal es el caso de infecciones ocasionadas por Cándida albicans™, Leismania y Salmonella20. En algunos casos, la aplicación "del extracto a los enfermos con infecciones crónicas 5 ó recurrentes se ha realizado como un último esfuerzo en pacientes en los cuales los tratamientos han fracasado sin * obtenerse resultados positivos en la recuperación de los mismos incluso observándose la muerte21. Según lo reportado hasta el momento, el éxito de tales terapias depende de múltiples factores, desde la condición de salud del paciente (incluyendo la etapa de evolución de la enfermedad), la enfermedad en sí, e incluso la fuente de la cual se obtuvo el extracto de leucocitos22; en éste sentido, la previa sensibilización del donador de leucocitos a los antígenos específicos involucrados en la enfermedad que va a tratarse en los pacientes, es un factor determinante para la observación de los efectos terapéuticos23 24, 34 Con relación al extracto de leucocitos, estudios posteriores permitieron determinar algunas de sus propiedades, las cuales ubicaban al extracto como dializable, termoestable, resistente a la congelación y al tratamiento con ADNasa, ARNasa ó tripsina25, que contenía moléculas de un peso molecular menor a 10,000 daltons26, adenina, guanina, citosina, uracilo y ribofosfato en material poli nucleótido27'28 y pequeños polipéptidos. Posteriormente según estudios analíticos, se determinó que el extracto contiene más de 200 moléculas diferentes con pesos moleculares de 1 ,000 a 12,000 daltons y de las cuales se han podido identificar algunas (nicotinamida, serotonina, ascorbato, timosina, prostaglandinas, interleucina-8, factores de transferencia, hipoxantina y uracilo, entre otras). Así mismo, hasta el momento se han podido determinar y aislar algunas de éstas moléculas así como fracciones del extracto y estudiar su papel en los efectos terapéuticos que se han observado derivado de su aplicación, tales como una fracción denominada inmunopéptido29 (responsable de la formación de rosetas de células T con eritrocitos de carnero), la fracción B consistente de doce aminoácidos y de tres a cuatro bases de ARN30 (responsable del efecto de hipersensibilidad retardada a receptores no inmunes), la fracción - T 3^' (capaz de transferir hipersensibilidad retardada a cobayos) y péptidos altamente polares, hidrofílicos y con una muy potente actividad biológica, como por ejemplo los péptidos LLYAQDLEDN y LLYAQDVEDN32. Por; otro lado se ha reportado que el extracto de leucocitos dializado presenta una mediana estabilidad, conservándose únicamente sus efectos terapéuticos por varios meses a temperaturas de -20°C a -70°C34. Estos métodos de conservación del extracto no son manejables, aun en situaciones de administración a los pacientes en campo (en granjas ó zonas rurales donde no existen aparatos de congelación a estas temperaturas) así como para su venta y distribución al público. En estudios posteriores, se logró aumentar su estabilidad al almacenaje a 4°C mediante la adición al extracto de albúmina sérica bovina33, con lo cual se adicionan sustancias que pueden provocar efectos adversos al paciente (transmisión de enfermedades ó incremento de respuestas inmunes al preservador) ó hacer más sulcéptible de contaminación al extracto.

En cuanto a sus efectos terapéuticos, es conocido que el extracto de leucocitos dializado tiene muchos efectos sobre la inmunidad celular dado que contiene factores inductores y supresores obtenidos de células t-auxiliares y células t-supresorás respectivamente. Se ha argumentado que la variedad de actividades biológicas observadas, se deben a que el extracto 5 contiene una mezcla heterogénea de moléculas, siendo cada una de ellas responsable de uno ó varios efectos. Las respuestas y efectos observados en las aplicaciones clínicas del extracto han permitido ubicarlo como un inmunomodulador útil para la inmunoterapia e inmunoprofilaxis de enfermedades en donde la inmunidad celular se encuentra deprimida de forma primaria ó secundaria, así como en estados morbosos en donde la inmunidad se encuentra exacerbada, 0 induciendo lesiones por autoinmunidad. ^^ Se ha observado que el extracto de leucocitos diaiizado transfiere hipersensibilidad local y ^^sistémica y no causa reacción incompatible aun entre diversas especies, transfiere rechazos de haloinjertos, ejerce una acción directa sobre la producción de interleucina 1 , 8 y 12, produce un incremento de la activación de macrófagos, aumenta la Síntesis de ADN antígeno dependiente de 5 los linfocitos, resintetiza el receptor del factor de transferencia, promueve la quimiotaxis de monocitos y neutrófilos, aumenta la actividad de células 'asesinas naturales (NK), acelera la formación de rosetas de células T, induce la formación de poblaciones de linfocitos que reaccionan específicamente ante un antígeno, expande la población de dichos linfocitos y proporciona al individuo receptor información para adquirir un estado de inmunidad celular, incrementa la 0 producción de linfocinas y aumenta la citotoxicidad de células T contra antígenos tumorales específicos; así mismo no se descarta la posibilidad de que cause otros posibles efectos34. Sin embargo hasta la fecha, no se conoce el mecanismo de acción del ELD por el cual puedan explicarse todos los efectos observados en sus aplicaciones clínicas. 5 Descripción de la invención. La presente invención utiliza el ELD como el principio activo de un medicamento que permite tratar y prevenir diversas enfermedades infecciosas en animales, preferentemente aquellas enfermedades que afecten a caninos, equinoá y porcinos, como por ejemplo perros, caballos y cerdos. 0 Este invento se sustenta en los antecedentes documentales del ELD tanto en humanos como en animales, con la diferencia de que se utiliza con fines terapéuticos, jamás descritos en Medicina Veterinaria. Se prueba en una amplia gama de enfermedades de los perros, caballos y cerdos, con dosis reducidas que optimizan su uso, obtenido de diferentes tejidos y administrados vía parenteral con ELD de origen tisular propio y diferente de la especie receptora. 1 «. KOajfm?ij?.^.*...?i^iA? tCefHiiiit?lAiA^.i tmmhmm t .¡Jfjfefrffcr borde a lo anterior, es por eso que uno de los objetivos de la presente invención es tratamiento efectivo en contra de enfermedades infecto-contagiosas con alto grado de morbilidad en etapas avanzadas mediante la aplicación de extracto de leucocitos dializado, dado que hasta antes del presente invento, no existía dicho tratamiento. Otro de los objetivos de la presente invención es proporcionar en animales un tratamiento efectivo en contra de enfermedades infecto-contagiosas que deprimen el sistema inmune mediante la administración de extracto de leucocitos dializado. Otro de los objetivos de la presente invención es proporcionar en perros un tratamiento efectivo en contra de moquillo, enfermedad con alto grado de morbilidad en etapas avanzadas, mediante la aplicación de ELD, ya que hasta antes de la presente invención no se contaba con algún tratamiento efectivo que permitiera restablecer la salud de los perros después de la aparición de los signos clínicos de la enfermedad. Es otro de los objetivos de la presente invención proporcionar un método de obtención de ELD a partir de linfonodos, bazo y timo con rendimientos mayores a los métodos conocidos hasta la fecha. Es otro de los objetivos de la presente invención proporcionar un ELD estable a 4°C sin el uso de conservadores ó preservadores con' lo cual se conservan sus propiedades terapéuticas, dado que hasta antes de la presente invención no se habían obtenido extractos dializados de leucocitos estables a ésta temperatura y sin el uso de sustancias ajenas al extracto. Otro objetivo de la presente invención es proporcionar un estuche de aplicación terapéutica (kit) conteniendo ELD para el tratamiento de animales afectados por enfermedades infecto-contagiosas con alto grado de morbilidad en etapas avanzadas. Los ELD del presente trabajo, pueden utilizarse para el tratamiento de enfermedades asociadas a inmunodepresión, tales como las siguientes, las cuales se muestran únicamente para ilustrar el espectro de aplicación de los extractos sin limitarse su uso a otras enfermedades ó bien a otros animales: ,! En bovinos: Rinotraqueitis infecciosa bovina (a herpesvirus), mamilitis ulcerativa (a herpesvirus), fiebre catarral maligna (a herpesvirus), enfermedad de Aujesky (a herpesvirus),fiebre catarral maligna (? herpesvirus), peste bovina (morbillivirus), parainfluenza-3 (morbillibirus), virus sincitial bovino (pneumovirus), diarrea neonatal de la ternera (coronavirus), papilomatosis (papilomavirus), leucosis bovina (oncomavirus), septicemia hemorrágica (Pasteurella multocida, Pasteurella hemolytica), pleuroneúm hía" contagiosa (Mycoplasma mycoides), mastitis bovina (Mycoplasma alkalescens, M. canadense, M. bovis, M. laidlawii), paratuberculosis, fCulosis, actinomicosis, actinobacilosis, leptospirosis, coccidioidomicosis, coü Ufosis, erlichiosis. En equinos: Rinoneurnonitis equina (a herpesvirus, tipo I y IV), exantema coital equino (a herpesvirus, tipo- 3), influenza equina (orthomyxovirus), parainfluenza-3 (paramyxovirus), anemia infecciosa equina (lentivirus), papilomatosis (papilomavirus), histoplasmosis, coccidiosis, erlichiosis, leptospirosis. En caninos: Moquillo canino (morbillivirus), parainfluenza SV-5 (paramyxovirus), herpesvirus canino (a herpesvirus), enfermedad de Aujesky (a herpesvirus) palilomatosis (papilomavirus), histoplasmos'is, coccidioidomicosis, criptococosis, blastomicosis, criptococosis, aspergilosis, candidiasis, coccidiosis, toxoplasmosis, neosporosis, leishmaniasis, criptosporidiosis, balantidiasis, amibiasis, erlichiosis, leptospirosis, brucelosis. En felinos: Rinotraqueitis felina (a herpesvirus), urolitiasis felina (ß herpesvirus), enfermedad de Aujesky (a herpesvirus), peritonitis infecciosa felina (coronavirus), leucemia viral felina (oncovirus). En porcinos: Herpesvirus del cerdo lactante (a herpesvirus), rinitis atrófica (ß herpesvirus, Bordetella bronchiséptica, Hemophilus suis, Pasteurella multocida), enfermedad de aujesky (a herpesvirus), influenza porcina (orthomyxovirus), gastroenteritis transmisible (coronavirus), ecefalomielitis hemoaglutinante (coronavirus), enfermedad de ojo azul (paramyxovirus), neumonía enzootica de los lechones (Mycoplasma hyopneumoniae), disenteria porcina (Treponema hyodisenteriae), coccidiosis, balantidiasis, leptospirosis, tuberculosis. En ovinos: Adenomatosis pulmonar (? herpesvirus), enfermedad de Aujesky (a herpesvirus), parainfluenza-3 (paramyxovirus), peste bovina (morbillivirus), septicemia hemorrágica (Pasteurella hemolytica, Pasteurella multocida), enteritis por coronavirus, campylobacteriósis, ectima cotagioso, paratuberculosis, tuberculosis, coccidiosis, mycoplasmosis, brucelosis, toxoplasmosis, erlichiosis. En aves: Laringotraquitis infecciosa (a herpesvirus), enfermedad de Marek (? h'erpesvirus), peste aviar (orthomyxovirus), enfermedad de Newcastle (paramyxovirus), Bronquitis infecciosa (coronavirus), leucosis aviar (oncovirus), enfermedad respiratoria crónica (Mycoplasma gallisepticum), sinovitis infecciosa (Mycoplasma sinoviae ; 'coccidiosis, colera aviar (Pasteurella multocida), aspergillosis. ¡ í mismo, los ELD de la presente invención poseen características de estabilidad en anaquel que le permiten conservar sus propiedades terapéuticas a 4°C durante un periodo de 12 meses, preferentemente de 7 a 8 meses, mediante la aplicación de ozono en cantidades de 0.2 a 0.5 ppm, preferentemente a 0.3 ppm. De manera sorpresiva, a pesar de que el ozono es una 5 sustancia altamente reactiva y con propiedades reductoras, las propiedades terapéuticas de los ELD obtenidos en éste trabajo no se modificaron, incrementándose únicamente el tiempo de conservación de los mismos. Por otra parte, los métodos de obtención de ELD de la presente invención permiten la obtención de altos rendimientos a partir'de tejidos linfoides, tales como linfonodos, bazo y timo por 0 ejemplo, ya sea de animales previamente sensibilizados a antígenos relacionados a la enfermedad ^^a tratarse ó de animales no sensibilizados. Estos métodos permiten obtener ELD con ^^concentraciones equivalentes a 6 X 106 a 1.6 X 107 leucocitos / ml a partir de sangre, de 1 X 107 a 8.3 X 107 leucocitos / g a partir de bazo, de 9 X 106 a 6 X 107 leucocitos / g a partir de timo y de 1.6 X 107 a 1.8 X 109 leucocitos / g a partir de linfonodos. 5 Por otra parte, los métodos de obtención de ELD de la presente invención permiten obtener una gran cantidad y variedad de dosis individuales de ELD para ser administradas en volúmenes pequeños al animal, con lo cual, se evitan molestias innecesarias al paciente por su administración. Así mismo, esto permite la administración a un mayor número de pacientes y ajustar la concentración del ELD con una mayor facilidad a las dosis necesarias según convenga 0 durante el transcurso del tratamiento y sin obtener volúmenes considerables. Según una de las modalidades de la invención, el voluméri otítenido de las dosis de ELD a administrarse al paciente puede fluctuar de 0.5 a 2 ml por dosis, preferentemente de 1 a 1.7 ml y más preferentemente de 1.3 a 1.5 ml. Los rendimientos obtenidos de ELD en éste trabajo, permiten obtener dosis individuales 5 para cada esquema de tratamiento, con lo cual pueden obtenerse estuches de aplicación terapéutica (kit) conteniendo ELD en las cantidades y dosis adecuadas para el tratamiento de los pacientes. En general, pueden obtenerse !f estuches de 6 a 10 dosis individuales de ELD, preferentemente de 6 a 8 dosis individuales para las enfermedades mencionadas con anterioridad. Como una modalidad del estuche de aplicación terapéutica de la invención, ios estuches 0 comprenden dosis individuales iniciales al tratamiento de 3 a 300 veces más altas en concentración (de 3 X 106 a 5 X 108) que las dosis proporcionadas posteriormente (de 1 X 105 a 1.5 X 106). En una modalidad preferida déhestuche de administración terapéutica, éste puede estar conformado por dosis individuales de ELD en concentraciones equivalentes a 3 X 106 a 5 X 108 5 línfocitos. Tales dosis conformarían del 30 al 50% del total de dosis individuales contenidas en el estuche, mientras que el resto de las dosis individuales tendrían concentraciones de ELD equivalentes a 1 X 105 a 1.5 X 106 linfocitos, conformando del 50 al 70% del total de dosis individuales contenidas en el estuche. Así mismo, la fuente de obtención del ELD de las dosis individuales iniciales del estuche, 5 puede ser de tejido sanguíneo ó linfático, preferentemente linfático y más preferentemente de bazo ó timo; en relación a la fuente de obtención del ELD de las dosis individuales finales del estuche puede ser de tejido sanguíneo ó linfático, preferentemente sanguíneo. Asi mismo, los tejidos sanguíneos ó linfáticos de donde de obtiene; el ELD, pueden derivarse de animales previamente sensibilizados ó inmunizados con el antígeno de interés ó bien sin sensibilización ó inmunización 10 previa. ^^ El método de tratamiento de la presente invención comprende una previa selección de los ^^>acientes a recibir el tratamiento, proceso en el cual se detectan signos clínicos importantes de la enfermedad, tales como reacciones positivas a pruebas de laboratorio, dentro de las que se encuentran solo para ilustrar a la invención, las pruebas de aglutinación en placa, 15 inmunofluorescencia directa en frotis de epitelio, microaglutinación sérica directa, examen coproparasitoscópico, seroneutralización, aislamiento bacteriano y diagnóstico anatomopatológico y microbiológico, entre otros. El esquema de tratamiento desarrollado en el presente trabajo comprende la administración del ELD al paciente en dosis equivalentes & ? ¡b X 105 leucocitos a 5 X 108 leucocitos por Kg de 20 peso, preferentemente a dosis equivalentes a 1.0 X 106 leucocitos a 5 X 108 leucocitos por Kg de peso ó bien más preferentemente a dosis equivalentes a 1.5 X 106 leucocitos a 5 X 108 leucocitos por Kg. de peso. Tales dosis pueden ser aplicadas en dosis únicas ó bien cada 24 a 96 horas, preferentemente cada 48 horas y hasta un periodo de 15 a 30 días ó bien hasta el completo restablecimiento del paciente. La administración del ELD se realiza vía parenteral, y aunque se 25 prefiere la vía subcutánea, otras vías de administración pueden ser utilizadas. Este esquema permite la administración de diferentes dosis del ELD con la finalidad de hacer responder al paciente de manera eficiente y mantener su recuperación hasta el completo fl restablecimiento de su estado de salud, por ello, en una modalidad del método de tratamiento de la presente invención, pueden ocuparse dosis mayores de ELD como máximo en el 50% del total de 30 dosis individuales administradas durante el tratamiento, preferentemente al inicio del mismo. El testo de las dosis individuales tendrían'cdñcéntraciones menores como máximo en el 70% del total de dosis administradas. Preferentemente el porcentaje de dosis individuales con concentraciones mayores al inicio del tratamiento sería del 30 al 50% del total de dosis individuales administradas, mientras que para dosis individuales con concentraciones menores sería del 50 al 70% del total de 35 dosis individuales administradas. Así mismo, la fuente de obtención del ELD administrado en las ^^gUl iM**^?i? ifimiiiÉii fases llliales del tratamiento puede ser de tejido sanguíneo ó linfático, preferentemente linfático y más preferentemente de bazo ó timo; en relación a la fuente de obtención del ELD administrado en las fases finales y de mantenimiento del tratamiento puede ser de tejido sanguíneo ó linfático, preferentemente sanguíneo. 5 Así mismo, como una modalidad adicional del tratamiento de la presente invención, pueden administrarse dosis individuales de la misma concentración equivalente a 1 X 105 a 5 X 108 leucocitos durante el curso del tratamiento, preferentemente a dosis equivalentes a 1 X 106 a 5 X 108 leucocitos ó bien más preferentemente a dosis equivalentes a 1.5 X 106 a 5 X 106 leucocitos. Los ELD de la presente invención pueden ser almacenados en envases diseñados para su 10 aplicación terapéutica, tales como por ejemplo ampolletas, frascos pequeños de vidrio ó cualquier otro contenedor que permita su conservación, ya sea bajo condiciones de refrigeración ó ^congelación. Los extractos pueden ser obtenidos de forma líquida ó bien en forma sólida después de someterlos a un tratamiento por liofilización u otro tratamiento que permita conservar sus cualidades terapéuticas. Si la forma de distribución elegida del ELD al paciente es por liofilízados, 15 posteriormente el ELD puede ser reconstituido mediante la adición de agua inyectable estéril ó algún otro medio líquido terapéuticamente conveniente para su administración.

^^ Para los fines de la presente invención, el ELD puede ser obtenido a través de la siguiente ^* metodología: 20 A. Obtención de extracto de leucocitos dializado (ELD). La elaboración del ELD requiere diversos pasos y cada uno se puede llevar a cabo con diferentes técnicas de las cuales se mencionan las siguientes: 25 1. Selección y preparación del donador. El ELD puede ser elaborado a partir de los tejidos de un animal de la misma especie (homólogo) ó de otra especie diferente a la del receptor (heterólogo), por lo que el individuo donante de linfocitos puede ser de cualquier especie. 30 Si el objetivo es obtener ELD específico para algún antígeno, se requiere de la sensibilización antigénica del donador previa a la obtención de los linfocitos. La sensibilización puede realizarse inoculando repetidamente el microorganismo patógeno por vía intranasal, intraperitoneal, intramuscular, ¡ntradérmica, subcutánea entre otras y obteniendo la muestra de leucocitos cuando se haya montado una respuesta inmune secundaria adecuada. En caso de 35 carecer de microorganismo patógeno, se puede sustituir por aplicaciones seriadas de vacuna ó mi-JAim.*4f¡lf** A .^.^ tm?^?. -teauA. ¿«^^Baflija^^iMtji i!^^^^!!^ bien bacterinas ó toxinas comerciales administradas por las mismas vías. También se puede determinar la sensibilización antigénica específica por pruebas inmunológicas específicas, tanto in vitro como in vivo que demuestren la exposición natural al antígeno específico. Si el objetivo es realizar ELD inespecífico, no es necesario realizar la sensibilización previa 5 de los animales. 2. Recolección celular. ' La recolección de leucocitos se podrá llevar a cabo a partir de: a) Sangre, obteniéndose ésta por ejemplo, por punción cardiaca, de la arteria carótida, femoral, 0 caudal ó del seno retro-orbitario, de las "venas radial, cefálica, safena, yugular, cava posterior ^^ ó bien cualquier otro vaso que pudiera servir para este fin, ú, ^^ b) Órganos linfoides primarios ó secundarios, tales como timo, bazo ó linfonodos. En éste sentido, y como un resultado de la presente invención, el uso de órganos linfoides permite la obtención de rendimientos significativamente mayores a los obtenidos por los métodos 5 conocidos utilizando como fuente de obtención tejido sanguíneo. Sin embargo, para los fines de éste trabajo, cualquiera de los tejidos mencionados puede ser utilizado para la obtención de ELD con actividad terapéutica. La recolección de la sangre puede realizarse en bolsas para transfusión sanguínea ó frascos estériles usando como anticoagulante heparina, ácido cítrico, dextrosa, citrato de sodio ó 0 EDTA . La recolección de órganos se podrá realizar utilizando bolsas ó frascos estériles, se refrigerarán de manera inmediata y posteriormente se disgregarán mediante macerado y tamizado de los órganos. 5 3. Obtención de leucocitos y linfocitos. La separación de los leucocitos ó linfocitos se realiza usando agentes separadores por gradiente de concentración como el ficoll hypacke, por separación manual con pipetas tras centrifugar las muestras, permitir la sedimentación del paquete celular sanguíneo con el uso o no de potenciadores de sedimentación, tales como el fibrinógeno y otros, o bien a través del uso de la 0 prensa francesa o algún otro medio o metodología conocida para fines de separación celular. 4. Lisis celular. La lisis de los leucocitos se puede realizar utilizando métodos de ruptura celular como el ultrasonido, las microondas, agentes químicos, , diferenciales de presión osmótica con agua 5 destilada ó usando métodos de lisis por cambio de temperatura y para este fin se puede emplear la refrigeración a diversas a 4°C, la mezcla de hielo seco-acetona y el posterior calentamiento de la muestra en baño maría a 37°C, repitiendo el procedimiento las veces que sean necesarias. En todos los casos se verifica que la lísis se haya completado a través de la observación microscópica del tejido. 5. Separación de moléculas. La separación de las moléculas de los leucocitos lisados, se puede llevar a cabo a través de membranas de diálisis con la capacidad de retener moléculas mayores de 10,000 a 12,000 daltons ó utilizando la ultrafiltración con bomba peristáltica y membranas con microporos menores de 10,000 a 12,000 daltons. La diálisis se realiza con agua destilada ó bien con algún buffer * convencional. El vehículo empleado para suspender las moléculas obtenidas en el proceso de separación mediante diálisis puede ser agua destilada ó inyectable y para el proceso de ultrafiltración solución salina fisiológica, solución salina buferada ó solución Hartman. 6. Esterilización. El extracto de leucocitos obtenido puede ser sometido a irradiación ultravioleta, burbujeo con ozono a 0.3 ppm, ó a filtración con membranas con poros de 0.2 µm para su esterilización. 7. Conservación. El extracto puede conservarse en refrigeración ó congelación a temperaturas inferiores a 4°C ya sea en forma líquida ó después de realizar un proceso de liofilización. Se le puede adicionar alguna combinación de antibióticos de amplio espectro para el mismo fin. Así mismo, se deberá envasar en frascos de vidrio debidamente sellados para su almacenamiento. Los siguientes ejemplos específicos Ilustraran la aplicación de la invención que permite utilizar el ELD para el tratamiento de diversas enfermedades de animales. Se deberá considerar que otros ejemplos podrán ser aplicados para las enfermedades infecciosas más comunes de algunas especies animales por alguna persona con conocimientos medios en la materia, por lo que la presente invención no se limita a los siguientes ejemplos.

Ejemplo 1. Obtención de ELD a partir de tejido sanguíneo. Se obtuvo sangre a partir del animal donador seleccionado mediante punción con jeringa de la vena radial, cefálica, safena, yugular ó de la arteria femoral, según las condiciones del donador. La sangre fue recolectada mediante bolsá? de transfusión comerciales para uso humano conectadas a la jeringa mediante mangueras, con capacidad de 500 ml conteniendo citrato de sodio como anticoagulante. Durante la recolección de la sangre, la bolsa se mantuvo en constante agitación ligera y por debajo de la zona de punción. Una vez contenida la sangre dentro de la bolsa, se tomó una muestra y se realizó un conteo leucocitario mediante observación microscópica por duplicado, utilizando pipetas de Thomas, líquido de turk, y cámara de Newbauer. Posterior al conteo, la sangre se sometió a centrifugación a 1 ,200 rpm por 20 minutos utilizando una centrífuga con contenedores con una capacidad de 500*ml. Una vez terminada la centrifugación r se > retiró la bolsa del contenedor y se colocó en una superficie previamente esterilizada con cloro y luz ultravioleta, sujetándola con pinzas quirúrgicas por los 2 extremos superiores a manera que la bolsa quedara colgando para realizar posteriormente un corte en la parte antero-superior. La fase superior del líquido contenido en la bolsa fue separada del paquete celular con pipetas de vidrio y se depositó en un frasco de vidrio con tapa hermética congelando finalmente. Los leucocitos así obtenidos fueron lisados por congelación a -20°C mediante un congelador comercial y posterior calentamiento inmediato a 38°C en baño maría. El proceso de congelación-descongelación se realizó 10 veces y se comprobó la existencia de lisis en el 98% de las células mediante conteo a través de cámara de Newbauer mediante observación microscópica. La mezcla obtenida se dializó con agua inyectable guardando una relación entre el volumen de ésta y el volumen contenido en la bolsa de diálisis de 2:1 respectivamente. La diálisis se realizó durante 48 horas a 4°C mediante membranas de diálisis con capacidad de retención de moléculas mayores a 12,000 daltons (Sigma, medida 50, diámetro 49 por mm), previamente lavadas y esterilizadas, colocadas en un frasco de vidrio. Terminado el proceso de diálisis, se retiró la membrana y el líquido contenido en el frasco de vidrio fue esterilizado mediante burbujeo con 0.3 ppm de ozono durante 5 a 10 min. Posteriormente el líquido resultante fue repartido manualmente con jeringas de plástico en envases de vidrio con capacidad de 3 ml. Una vez realizado el llenado de 10 frascos, se colocaron tapas de goma estériles y se sellaron con gárgolas de aluminio. Los frascos con el ELD se almacenaron en refrigeración ó congelación hasta su uso. Mediante éste método se obtuvieron de 6,000 a 16,000 leucocitos por µl de sangre. Así mismo, en relación al número de dosis a una concentración equivalente de 1.5 X 106 leucocitos, se obtuvieron 10 dosis por cada 13.6 ml de sangre.

Ejemplo 2. Obtención de ELD a partir de t jido linfático. Se recolectó el órgano linfáticoi'dé interés (bazo, timo, linfonodos) de individuos sanos los cuales fueron sometidos a eutanasia con anestésicos fijos, mediante extracción quirúrgica; una vez separados de residuos de tejido de órganos circundantes y limpiados con agua destilada, se mantuvieron en congelación (-17°C) hasta su procesamiento. El órgano se colocó en un frasco rti liirt ii iiíÉiHirtiitM ^^^^¡^ ^JM*m^ previamente esterilizado y se adicionaron de 50 a 250 ml de solución salina fisiológica.

Posteriormente se tomó una muestra de aproximadamente 1 gr de peso, la cual se maceró con 1 ml de solución salina fisiológica utilizando una microrejilla metálica, tomándose 5 µl con una pipeta de Thomas y diluyéndose con líquido de turk. La muestra se colocó en una cámara de Newbauer y 5 se realizó un conteo celular mediante microscopía. Al mismo tiempo, el órgano fue cortado en pequeños trozos con tijeras quirúrgicas y macerado con una licuadora previamente esterilizada utilizando de 50 a 200 mi de solución salina fisiológica. El macerado resultante se colocó en frascos de vidrio con tapa hermética y fue congelado. Los leucocitos así obtenidos fueron lisados por congelación a -20°C mediante un 10 congelador comercial y posterior calentamiento inmediato a 38°C en baño maría. El proceso de Í congelación-descongelación se realizó 10 veces y se comprobó la existencia de lisis en el 98% de *las células mediante conteo a través de cámara de Newbauer mediante observación microscópica.

La mezcla obtenida se dializó con agua inyectable guardando una relación entre el volumen de ésta y el volumen contenido en la bolsa de diálisis de 2:1 respectivamente. La diálisis se realizó 15 durante 48 horas a 4°C mediante membranas de diálisis con capacidad de retención de moléculas mayores a 12,000 daltons (Sigma, medida 50, diámetro 49 por mm), previamente lavadas y esterilizadas, colocadas en un frasco de vidrio. Terminado el proceso de diálisis, se retiró la ^^ membrana y el líquido contenido en el frasco de vidrio fue esterilizado mediante burbujeo con 0.3 ^^ ppm de ozono durante 5 a 10 min. Posteriormente el líquido resultante fue repartido manualmente 20 con jeringas de plástico en envases de vidrio con capacidad de 3 ml. Una vez realizado el llenado de 10 frascos, se colocaron tapas de goma estériles y se sellaron con gárgolas de aluminio. Los frascos con el ELD se almacenaron en refrigeración ó congelación hasta su uso. Mediante éste método se obtuvieron de 10,000 a 70,000 leucocitos por µg de tejido en el caso de bazo, de 9,000 a 60,000 leucocitos por µg de tejido en el caso de timo y 16,000 a 230,000 25 leucocitos por µg de tejido en el caso de linfonodos. Así mismo, en relación al número de dosis a una concentración equivalente de 1.5 X 106 leucocitos, se obtuvieron 10 dosis por cada 1.8 gr de bazo, 10 dosis por cada 4.4 gr de timo y 10 dosis por cada 0.08 gr de linfonodos. En el caso de que el ELD se obtuviera a partir de animales sensibilizados a la enfermedad tratada en el ensayo clínico correspondiente, previo al sacrificio se inmunizaron con dosis de 30 vacuna conteniendo el antígeno de interés con esquemas particulares de administración conforme ¡o requería el ensayo. > •'"> " " ' Ejemplo 3. Obtención de ELD de sangre de canino. Se utilizaron perros rottweiler adultos como donadores de sangre, los cuales fueron 35 clínicamente sanos, con sus calendarios de vacunación completos y vigentes (vacuna antirrábica, triple y parvovirus), desparasitados anualmente y con un adecuado estado nutricional. De los donadores se obtuvieron 450 ml de sangre completa mediante sangría y con la finalidad de obtener ELD, se procesó según lo especificado en el ejemplo no. 1. En el caso de que el ELD se obtuviera a partir de animales sensibilizados a la enfermedad tratada en el ensayo clínico 5 correspondiente, 15 días antes de su sangría se les aplicó una dosis de vacuna conteniendo el antígeno de interés. Las donaciones sanguíneas se realizaron cada 60 días hasta finalizar el ensayo clínico correspondiente.

Ejemplo 4. Obtención de ELD de sangre de bovino. 0 Se utilizó sangre de toro clínicamente sano raza Holstein de un año seis meses vacunado ^^exclusivamente contra brucelosis y sin ningún antecedente de vacunación contra rinotraqueitis viral ^Pbovina, parainfluenza 3, leptospirosis, pasteurelosis,- carbón sintomático ni edema maligno. De los donadores se obtuvieron 450 ml de sangre completa mediante sangría y con la finalidad de obtener ELD, se procesó según lo especificado en el ejemplo no. 1. En el caso de que el ELD se 5 obtuviera a partir de animales sensibilizados a la enfermedad tratada en el ensayo clínico correspondiente, se aplicaba por vía subcutánea una dosis doble de vacuna triple canina (moquillo, hepatitis y ieptospira) 30, 20 y 10 días previos a la recolección sanguínea.

Ejemplo 5. Obtención de ELD de sangre de porcino. 0 Se utilizó sangre de cerdo no sensibilizado criado en una granja comercial. De los donadores se obtuvieron 450 ml de sangre completa mediante sangría y con la finalidad de obtener ELD, se procesó según lo especificado en el ejemplo no. 1. En el caso de que el ELD se obtuviera a partir de animales sensibilizados a la enfermedad tratada en el ensayo clínico correspondiente, se inmunizaban con dosis de vacuna conteniendo el antígeno de interés con 5 esquemas particulares de administración conforme lo requería el ensayo.

Ejemplo 6. Obtención de ELD de sangre dé equino. Se utilizó sangre de caballo criollo adulto, clínicamente sano, no sensibilizado proveniente de un rastro. De los donadores se obtuvieron 15 litros de sangre completa mediante sangría y con 0 la finalidad de obtener ELD, se procesó según lo especificado en el ejemplo no. 1. En el caso de que el ELD se obtuviera a partir de animales sensibilizados a la enfermedad tratada en el ensayo clínico correspondiente, se inmunizaban eon d sis de vacuna conteniendo el antígeno de interés con esquemas particulares de administración conforme lo requería el ensayo.

Ejemplo 7. Estandarización de dosis de ELD. Previo a la lisis de los leucocitos, el no. de éstos, obtenidos del proceso de separación, fue contabilizado mediante cámara de Newbawer. Después de obtenida la cuenta de leucocitos de los 4 cuadrantes de la cámara, las cantidades obtenidas se sumaron y se multiplicaron por 50 para 5 obtener así el número total de leucocitos por microlitro contenido en el líquido. Después de realizada la lisis celular, para obtener la dosis adecuada a aplicarse en los ensayos, ésta se calculó con respecto del no. total de células antes de la lisis y posteriormente se realizaron diluciones adecuadas con agua destilada estéril hasta su obtención. Las dosis obtenidas se ajustaron a un volumen total de 1.5 ml, dosis adecuada para un animal de 10 kg de peso. Para los 10 fines de la presente invención, para referirse a las dosis obtenidas como se describió en éste ^^ejemplo, se denominarán como "dosis equivalente a (número) de leucocitos". w Ejemplo 8. Selección de pacientes caninos para tratamiento de la enfermedad. Para que un paciente pudiera ser considerado como candidato a ingresar al ensayo clínico 15 debió cumplir con los siguientes criterios: Para el caso de moquillo: 1. De inclusión: presentar signos clínicos indicativos de infección de la enfermedad, no ^^ presentar signología de tipo neurológica antes de iniciar el tratamiento y demostrar la ^^ infección viral mediante la prueba de inmunofluorescencia directa en frotis de epitelio 20 conjuntival, sanguíneo ó vesical. r - > 2. De exclusión: no tener propietario, padecer desnutrición severa, sufrir de otras enfermedades ó patologías concurrentes. 3. De eliminación: suspensión del tratamiento, muerte por otra causa diferente a la infección por moquillo, extravío del paciente, no tener al paciente bajo techo y cobijo, y no 25 suplementarle la dieta prescrita. Para el caso de leptospirosis: 1. De inclusión: presentar signos clínicos indicativos de infección por Leptospira interrogans, Q demostrar la infección mediante la prueba de microaglutinación sérica directa con títulos superiores a 1/100. 30 2. De exclusión: no tener propietario, padecer desnutrición severa, padecer deshidratación moderada a severa, tener signos de uremia, presentar niveles de creatinina mayores a 2 mg/dl, sufrir de otras enfermedades ó patologías concurrentes. 3. De eliminación: suspensión del tratamiento, muerte durante el desarrollo del ensayo clínico, no suplementarle la dieta prescrita. 35 Ejemplo 9. Preparación previa al tratamiento. Los pacientes incluidos en los ensayos recibieron terapia antimicrobiana, previo a la administración de ELD. La terapia consistió dp la administración de amoxicilina (11 mg/Kg cada 12 hrs., vía oral) y gentamicina (4 mg/Kg cada 24 hrs., vía intramuscular) por 7 días. Cada paciente 5 fue evaluado de manera individual y se le aplicaron las medidas terapéuticas necesarias para su estabilización clínica. Para cada uno de los pacientes incluidos en los ensayos, se calcularon las necesidades energéticas (con base en la formula [peso corporal X 30 + 70] x 2), las cuales se aportaron con alimento comercial secp peletjzado. Se mantuvo al paciente bajo techo y cobijo las 24 hrs. del día mientras durará el tratamiento, permitiendo solo salidas momentáneas para la 10 excreción de deyecciones fecales y orina.

E Ejjemplo 10. Evaluación de los resultados. Los criterios de discriminación de éxito ó fracaso del tratamiento fueron de vivo ó muerto ó bien de positivo ó negativo a la prueba de aglutinación en placa, según el ensayo correspondiente. 15 Los resultados obtenidos, a menos que se indique lo contrario, se sometieron a una evaluación estadística mediante la prueba de Ji-cuadrada.

Ejemplo 11. Tratamiento de moquillo canino con ELD de sangre de perro sensibilizado. Este ejemplo corresponde a un ensayo clínico prospectivo, longitudinal y observacional 20 donde se utilizó ELD obtenido de sangre de "perro sensibilizado a moquillo (como se muestra en el ejemplo no. 3) a una dosis equivalente a 1.6 x 106 leucocitos por Kg de peso con intervalos de aplicación de cada 48 hrs. por vía subcutánea para el tratamiento del moquillo canino. Para dicho ensayo se usaron 370 perros infectados naturalmente con el virus de moquillo canino y se incluyeron alternativamente en el grupo A ó en el grupo B, con lo cual se integraron 25 185 animales en el grupo con tratamiento (grupo A), y los otros 185 perros formaron el grupo control (grupo B). Los perros fueron seleccionados según lo descrito en el ejemplo no. 8 y no se consideró la raza, edad, sexo, ni vacunaciones previas. Así mismo, los pacientes fueron tratados J . previo al tratamiento con ELD conforme a lo indicado en el ejemplo no. 9. Después de obtenido el extracto, éste se estandarizó a una concentración equivalente a 1.5 30 X 106 leucocitos por dosis, según como se muestra en el ejemplo no. 7. A los perros incluidos en el grupo A se les aplicó por vía subcutánea ELD a dosis equivalente a 1.5 x 106 leucocitos por Kg-de ^so con un ¡ntervalo entre dosis de 48 hrs. durante 10 días, seguido de intervalos entre dosis de cada 96 hrs. hasta que el paciente tuviera 15 días clínicamente sano ó hasta su muerte. A los animales del grupo B se les aplicó solución salina 35 fisiológica, con la misma frecuencia de aplicación que en el grupo A. El grupo A, tuvo un recorrido "- •-' ^" f - ?>..-~~.A. ^j-^A^at^taiaKteÉ-at^-áfe-^aa-^ift^ ^ Bi pobtecwial de un mes a ocho años (media de dos años cinco meses), siendo el 60.5 % de la población menor de un año de edad. El grupo B, presentó un recorrido poblacional de dos meses a siete años, (media de dos años un mes), siendo el 65.7 % de la población menor de un año de edad.

Los resultados obtenidos, después det tratamiento, se muestran en la siguiente tabla: 10 Por Kg de peso. ?xpresado en porcentaje.

Después de la evaluación de los resultados como se indica en el ejemplo no. 10, bajo el diseño de éste ensayo clínico la aplicación de ELD en el tratamiento de moquillo canino 15 incrementa notablemente la sobrevida de los perros afectados a niveles altamente significativos (p < 0.01).

Ejemplo 12. Tratamiento de moquillo canino con diferentes dosis de ELD de sangre de perro sensibilizado. 20 En este ejemplo se describe la utilización del ELD obtenido de sangre de perro sensibilizado (como se muestra en el ejemplo no. 3) a dosis equivalente a 5 x 108 leucocitos en dosis única, 5 x 106 leucocitos por Kg de peso corporal cada 48 hrs. por 10 días, 1.5 x 106 leucocitos por Kg de peso corporal cada 48 hrs. por 10 días y 1 x 105 leucocitos por Kg por 10 días, por vía subcutánea, en perros enfermos de moquillo canino. 5 En este ensayo se usaron 50 perros de tres meses a un año de edad, infectados naturalmente con el virus de moquillo canino, los cuales se numeraron e incluyeron progresivamente en los grupos A, B, C, D ó E según el momento en que se presentaran para su atención, con lo cual se integraron cinco grupos de 10 perros cada uno. Los pacientes fueron seleccionados según lo descrito en el ejemplo no. 8 y no se consideró la raza, edad, sexo, ni ? vacunaciones previas. Así mismo, los pacierités fueron tratados previo al tratamiento con ELD conforme a lo indicado en el ejemplo no. 9. A los perros incluidos en el grupo A se les aplicó ELD a una dosis equivalente a 5 x 108 leucocitos en aplicación única. A los animales del grupo B se les aplicó una dosis equivalente a 5 x 106 leucocitos por Kg de peso corporal cada 48 hrs. por 10 días. Al grupo C se les aplicó ELD una 5 dosis equivalente a 1.5 x 106 leucocitos por Kg de peso corporal cada 48 hrs. por 10 días. Para los perros del grupo D se utilizó una dosis equivalente a 1 x 105 leucocitos por Kg cada 48 hrs. por 10 días. A los perros del grupo E se les aplicó solución salina fisiológica. En todos los pacientes se utilizó la vía subcutánea.

Los resultados obtenidos, después del tratamiento, se muestran en la siguiente tabla: Por Kg de peso. ?xpresado en porcentaje.

Después de la evaluación de los resultados como se indica en el ejemplo no. 10, bajo el diseño de éste ensayo clínico la aplicación de ELD en el tratamiento de moquillo canino de los perros tratados con las dosis de ELD de los grupos A, B, C incrementa estadísticamente la sobrevida de los perros afectados a niveles altamente significativos (p < 0.01 ) al compararlos con el grupo control (grupo E). Al analizar los resultados obtenidos de los tratamientos de los perros de los grupos A, B y C no se observó diferencia estadísticamente significativa (p>0.05), sin embargo entre los tratamientos de los perros de los grupos B y C los tratamientos si fueron mejores con diferencias significativas (p<0.05) al compararlo con el grupo D.

Ejemplo 13. Tratamiento de moquillo canino con ELD de sangre de perro sensibilizado, linfonodos y bazo. Este ejemplo describe el uso de ELD obtenido a partir de sangre (como se muestra en el ejemplo no. 3), linfonodos y bazo de perro para el tratamiento de moquillo canino. En este trabajo se usaron 45 perros de cuatro meses a de un año de edad, infectados naturalmente con el virus de moquillo canino, los cuales se numeraron y se incluyeron progresivamente en los grupos A, B' y, C l^gun "el momento en que se presentaran para su atención, con lo cual se integraron tres grupos de 15 perros cada uno. Los perros fueron seleccionados según lo descrito en el ejemplo no. 8 y no se consideró la raza, edad, sexo, ni vacunaciones previas. Así mismo, los pacientes fueron tratados previo al tratamiento con ELD conforme a lo indicado en el ejemplo no. 9.

Para la elaboración de ELD a partir de tejido, se utilizaron linfonodos y bazos de perros eutanacíados diferentes de los donadores de los linfonodos como se describe en el ejemplo no. 2.

Después de obtenido el extracto, éste se estandarizó a una concentración equivalente a 1.5 X 106 leucocitos por dosis, según como se muestra en el ejemplo no. 7. A los perros incluidos en el grupo A se les aplicó ELD de origen sanguíneo a una dosis equivalente a 1.5 x 106 leucocitos pof Kg de peso corporal cada 48 hrs. por 10 días seguido de aplicaciones cada 72 hrs. por otros 15 días. Al grupo B se les aplicó ELD de linfonodos a la misma dosis y frecuencia de aplicación. Para los perros del grupo C se utilizó ELD preparado de bazo a la misma dosis de leucocitos y a la misma frecuencia que a los perros de los grupos A y B. En todos los pacientes se utilizó la vía de aplicación subcutánea. Los resultados obtenidos, después del tratamiento, se muestran en la siguiente tabla: Canino. 'Expresado en porcentaje.

Después de la evaluación de los resultados como se indica en el ejemplo no. 10, bajo el diseño de éste ensayo clínico, se puede afirmar que no hay diferencia estadísticamente significativa entre los tres grupos de estudio (p>0.01) al usar ELD de diferentes tejidos (sangre, linfonodos y bazo).

Ejemplo 14. Tratamiento de moquillo canino con ELD de sangre de bovino sensibilizado y no sensibilizado. Este ejemplo corresponde a un ensayo clínico prospectivo, transversal, observacional que describe la utilización de ELD obtenido de sangre de bovinos sensibilizados, con vacuna triple canina, y no sensibilizados. Aplicado a una dosis equivalente a 1.5 x 106 leucocitos por Kg de peso con intervalos de aplicación de cada 48 hrs -por vía subcutánea para el tratamiento del moquillo canino. En este trabajo se usaron 45 perros de cuatro meses a un año de edad, infectados naturalmente con el virus de moquillo canino, los cuales se numeraron y se incluyeron progresivamente en los grupos A, B y C según el momento en que se presentaran para su atención, con lo cual se integraron tres grupos de 15 perros cada uno. Los perros fueron ¡I seleccionados según lo descrito en el ejemplo no. 8 y no se consideró la raza, edad, sexo, ni vacunaciones previas. Así mismo, los pacientes fueron tratados previo al tratamiento con ELD conforme a lo indicado en el ejemplo no. 9. El extracto de linfocitos (ELD) de bovino se obtuvo según como se describe en el ejemplo no. 4, mientras que el ELD de perro fue obtenido según como se muestra en el ejemplo no. 3. Después de obtenidos los extractos, éstos se estandarizaron a una concentración equivalente a 1.5 X 106 leucocitos por dosis, según como se muestra en el ejemplo no. 7. A los perros incluidos en el grupo A se les aplicó por vía subcutánea el ELD de origen bovino sensibilizado una dosis equivalente a 1.5 x 106 leucocitos por Kg de peso corporal cada 48 hrs. por 10 días y cada 72 hrs. por 15 días. Al grupo B se les aplicó ELD de origen bovino no sensibilizado por la misma vía, dosis y frecuencia de aplicación. Y al grupo denominado C se le aplicó ELD de origen canino de idéntica forma que en los otros dos grupos. Los resultados obtenidos, después del tratamiento, se muestran en la siguiente tabla: Sangre. ?xpresado en porcentaje.

Después de la evaluación de los resultados como se indica en el ejemplo no. 10, bajo el diseño de éste ensayo clínico se puede afirmar que no hay diferencia estadística entre los tres grupos de estudio (p>0.01) al usar ELD de bovino sensibilizado, bovino no sensibilizado ó perro no sensibilizado para tratar moquillo canino.

Ejemplo 15. Tratamiento de moquillo canino con ELD de linfonodos y bazo de bovino sensibilizado. - Este ejemplo corresponde a un ensayo clínico prospectivo, transversal, observacional que describe la utilización del ELD obtenido de linfonodos y bazo de bovinos sensibilizados a una dosis equivalente a 1.5 x 106 leucocitos por Kg de peso con intervalos de aplicación de cada 48 hrs. por vía subcutánea para el tratamiento del moquillo canino. En este ensayo se usaron 45 perros de cuatro meses a un año de edad, infectados naturalmente con el virus de moquillo dañino, los cuales se numeraron y se incluyeron progresivamente en los grupos A, B y C según el momento en que se presentaran para su atención. Con lo cual se integraron tres grupos de 15 perros cada uno. Los perros fueron seleccionados según lo descrito en el ejemplo no. 8 y no se consideró la raza, edad, sexo, ni vacunaciones previas. Así mismo, los pacientes fueron tratados previo al tratamiento con ELD 5 conforme a lo indicado en el ejemplo no. 9. Para la elaboración de ELD a partir de tejido, se utilizaron linfonodos y bazos de bovinos criollos adultos obtenidos de un rastro municipal, los cuales una vez limpiados fueron mantenidos en congelación (-17°C) hasta su procesamiento, según como se muestra en el ejemplo no. 2. Cabe citar que se desconocía la edad, sexo, vacunaciones previas y tipo de alimentación de los 10 animales donadores. El ELD de sangre dé perro fue obtenido según como se muestra en el ^^ ejemplo no. 3. Después de obtenidos los extractos, éstos se estandarizaron a una concentración ^ equivalente a 1.5 X 106 leucocitos por dosis, según como se muestra en el ejemplo no. 7. A los perros incluidos en el grupo A se les aplicó por vía subcutánea el ELD de origen esplénico bovino no sensibilizado a una dosis equivalente a 1.5 x 106 leucocitos por Kg de peso 15 corporal cada 48 hrs. por 10 días y cada 72 hrs. por 15 días. Al grupo B se les aplicó ELD de origen de linfonodo bovino no sensibilizado por la misma vía, dosis y frecuencia de aplicación. Al grupo C se le aplicó ELD de origen hernático canino de idéntica forma que en los otros dos grupos.

• Los resultados obtenidos, después del tratamiento, se muestran en la siguiente tabla: 20 + Bovino sensibilizado. 'Expresado en porcentaje. 25 * Canino sensibilizado.

Después de la evaluación de los resultados como se indica en el ejemplo no. 10, bajo el -W diseño de éste ensayo clínico se puede afirmar que no hay diferencia estadística significativa entre los tres grupos de estudio (p>0.05) áf usar ?LD de bazo ó linfonodo bovino sensibilizado al 30 compararlo con el ELD elaborado con sangre de perro sensibilizado para tratar moquillo canino.

Ejemplo 16. Tratamiento de moquillo canino con ELD de sangre, linfonodos y bazo de cerdo sensibilizado. Este ejemplo corresponde a un ensayo clínico prospectivo, transversal, observacional que 35 describe la utilización del ELD obtenido de sangre, linfonodos y bazo de cerdos sensibilizados a una dosis equivalente a 1.5 x 106 leucocitos por Kg de peso con intervalos de aplicación de cada 48 hrs. por vía subcutánea para el tratamiento del moquillo canino. En éste ensayo se usaron 4,0 perros de cuatro meses a un año de edad, infectados naturalmente con el virus de moquillo canino, los cuales se numeraron y se incluyeron progresivamente en los grupos A, B, C y D según el momento en que se presentaran para su atención. Con lo cual se integraron cuatro grupos de 10 perros cada uno. Los perros fueron seleccionados según lo descrito en el ejemplo no-. 8 y no se consideró la raza, edad, sexo, ni vacunaciones previas. Así mismo, los pacientes fueron tratados previo al tratamiento con ELD conforme a lo indicado en el ejemplo no. 9. Para la elaboración del ELD se utilizaron linfonodos, bazos y sangre de 3 cerdos criados en una granja comercial, los cuales fueron inmunizados dos veces con dosis dobles de vacuna triple canina (moquillo, hepatitis, leptospira) con intervalos entre dosis de 10 y 15 días previos al sacrificio. Los extractos fueron obtenidos según como se describe en el ejemplo no. 2. El ELD de sangre de perro fue obtenido según como se muestra en el ejemplo no. 3. Después de obtenidos los extractos, éstos se estandarizaron a una' concentración equivalente a 1.5 x 106 leucocitos por dosis, según como se muestra en el ejemplo no. 7. A los perros incluidos en el grupo A se les aplicó por vía subcutánea el ELD de origen esplénico porcino sensibilizado a una dosis equivalente a 1.5 x 106 leucocitos por Kg de peso corporal cada 48 hrs. por 10 días y cada 72 hrs.- por 15 días. Al grupo B se les aplicó ELD de linfonodo porcino sensibilizado por la misma vía, dosis y frecuencia de aplicación. Al grupo C se le aplicó ELD de origen hemático porcino de idéntica forma que en los otros dos grupos. Finalmente se inyectó por la misma vía y a la misma dosis ELD de origen sanguíneo canino sensibilizado a los perros del grupo D. Los resultados obtenidos, después del tratamiento, se muestran en la siguiente tabla: * Cerdo sensibilizado. + Canino sensibilizado. **Expresado en porcentaje.

Después de la evaluación de los resultados como se indica en el ejemplo no. 10, bajo el diseño de éste ensayo clínico se puede afirmar que no hay diferencia estadística entre los cuatro grupos de estudio (p>0.05) al usar ELD de sai?gre, bazo ó linfonodo de cerdos sensibilizados y ELD elaborado con sangre de perro sensibilizado para tratar moquillo canino.

Ejemplo 17. Tratamiento de moquillo c nino con ELD de sangre, linfonodos y bazo de 5 caballo no sensibilizado.

Este ejemplo corresponde a un ensayo clínico prospectivo, transversal, observacional que describe la utilización del ELD obtenido de sangre, linfonodos y bazo de caballos no sensibilizados a una dosis equivalente a 1.5 x 106 leucocitos por Kg de peso con intervalos de aplicación de cada 10 48 hrs. por vía subcutánea para el tratamiento del moquillo canino. En este ensayo se usaron 40 perros de cuatro meses a un año de edad, infectados ^naturalmente con el virus de moquillo canino, los cuales se numeraron y se incluyeron progresivamente en los grupos A, B, C y D -s gún el momento en que se presentaran para su atención. Con lo cual se integraron cúá'tro grupos de 10 perros cada uno. Los perros fueron 15 seleccionados según lo descrito en el ejemplo no. 8 y no se consideró la raza, edad, sexo, ni vacunaciones previas. Así mismo, los pacientes fueron tratados previo al tratamiento con ELD conforme a lo indicado en el ejemplo no. 9. g-s Para la elaboración del ELD se utilizaron linfonodos, bazos y sangre de equinos ^^ sacrificados en un rastro municipal. Los extractos fueron obtenidos según como se describe en el 20 ejemplo no. 2. El ELD de sangre de perro fué' obtenido según como se muestra en el ejemplo no. 3. Después de obtenidos los extractos, éstos se estandarizaron a una concentración equivalente a 1.5 X 106 leucocitos por dosis, según como se muestra en el ejemplo no. 7.

A los perros incluidos en el grupo A se les aplicó por vía subcutánea el ELD de origen 25 esplénico equino no sensibilizado a una dosis equivalente^ 1.5 x 106 leucocitos por Kg de peso corporal cada 48 hrs. por 10 días y cada 72 hrs. por 15 días. Al grupo B se les aplicó ELD de linfonodo equino no sensibilizado por la misma vía, dosis y frecuencia de aplicación. Al grupo C se le aplicó ELD de origen hemático equino de idéntica forma que en los otros dos grupos. Finalmente al grupo D se le aplicó ELD de sangre canina con los mismos criterios de aplicación que los grupos 30 anteriores.

Los resultados obtenidos, después deí tratamiento, se muestran en la siguiente tabla: f*""" -- ¿ft * Equino no sensibilizado 'Expresado en porcentaje. + Canino sensibilizado Después de la evaluación de los resultados como se indica en el ejemplo no. 10, bajo el diseño de éste ensayo clínico se puede afirmar que no hay diferencia estadística entre los tres ^grupos de estudio (p>0.05) al usar ELD de origen hemático, esplénico ó linfático de equino no Ejemplo 18. Tratamiento de leptospirosis canina con ELD de bazo de perro sensiblizado. Este ejemplo corresponde a un ensayo clínico prospectivo, transversal, observacional que describe la utilización de ELD obtenido de bazo de perros sensibilizados a una dosis equivalente a 1.5 x 106 leucocitos por Kg de peso con intervalos de aplicación de cada 48 hrs. por vía subcutánea para el tratamiento de la leptospirosis canina. En este ensayo se usaron 30 perros, infectados naturalmente con Leptospira interrogans, los cuales se numeraron por orden de aparición y se incluyeron alternativamente en los grupos A y B según el momento en que se presentaran para su atención. Con esta disposición se integraron dos grupos de 15 perros cada uno. Los perros fueron seleccionados según lo descrito en el ejemplo no. 8 y no se consideró la raza, edad, sexo, ni vacunaciones previas. Para cada uno de los pacientes incluidos en los ensayos, se calcularon las necesidades energéticas (con base en la formula [peso corporal X 30 + 70] x 2), las cuales se aportaron con alimento comercial seco peletizado. Se mantuvo al perro bajo techo y cobijo las 24 hrs. del día mientras durará el tratamiento, permitiendo solo salidas momentáneas para la excreción de deyecciones fecales y orina. Para la elaboración de ELD a partir de tejido, se utilizaron bazos de perros eutanaciados como se describe en el ejemplo no. 2. Después de obtenidos los extractos, éstos se estandarizaron a una concentración de 1.5 X 106 leucocitos por dosis, según como se muestra en el ejemplo no. 7. A los perros incluidos en el grupo A se les aplicó por vía subcutánea el ELD a una dosis equivalente a 1.5 x 106 leucocitos por Kg de peso corporal cada 48 hrs. por 15 días. Al grupo B se les apßC? penicilina G procaínica (40,000 U/kg) y estreptomicina (22mg/kg) cada 24 hrs por 15 días. Los signos clínicos se calificaron desde el inicio del ensayo y cada 7 días, de la siguiente manera: 0, cuando no hay signos. 1, cuando el paciente presentaba solo signos prodrómicos. 2, cuando los signos específicos se limitaban a vómito, diarrea, poliuria, hematuria. 3, cuando se observaba ictericia, hematuria, diarrea con melena, hematemesis.

Los resultados obtenidos, después del tratamiento, se muestran en las siguientes tablas: ffT"~" -jtfffjfti"fi Así mismo, para éstos grupos se realizó un análisis serológico al inicio del tratamiento así como otro 21 días después para detectar anticuerpos anti-Lepíosp/ra mediante la técnica de microaglutinación con antígeno vivo. Los resultados de ésta prueba se muestran a continuación: i . M Los resultados obtenidos se sometieron a una evaluación estadística. En el caso de la valoración de los signos clínicos se usó la prueba de Kruskall-Wailis y para el caso de la microaglutinación la prueba de t de Student. Después de la evaluación de los resultados bajo el diseño de éste ensayo clínico, se puede afirmar que no hay diferencia estadística entre los grupos de estudio (p>0.05) al usar ELD de origen canino no sensibilizado y el tratamiento con antimicrobianos. En otras palabras ambos tratamientos resultaron igualmente efectivos contra la leptospirosis canina.

Ejemplo 19. Tratamiento de brucelosis canina con ELD de bazo de perro no sensiblizado. 5 Este ejemplo corresponde a un ensayo clínico prospectivo, transversal, observacional que describe la utilización del ELD obtenido de bazo de perros no sensibilizados a una dosis equivalente a 1.5 x 106 leucocitos por Kg de peso con intervalos de aplicación de cada 48 hrs. por vía subcutánea para el tratamiento de la brucelosis canina. En éste ensayo se usaron 26 perros asiñtomáticos, infectados naturalmente con Brucella 10 canis, que fueron diagnosticados en una población canina abierta de un consultorio veterinario, los .cuales se numeraron por orden de diagnóstico positivo y se incluyeron alternativamente en los grupos A y B según el momento en que se detectaba su positividad. Con esta disposición se integraron dos grupos de 13 perros cada uno. No se consideró la raza, edad, sexo, ni vacunaciones previas y los pacientes fueron seleccionados en base a los siguientes criterios: 15 1. De inclusión: demostrar la infección asintomática por Brucella canis mediante la prueba positiva de aglutinación en placa. 2. De exclusión: no tener propietario, padecer desnutrición severa, sufrir de otras enfermedades ó patologías concurrentes. 3. De eliminación: suspensión del tratamiento, muerte durante el desarrollo del ensayo clínico, 20 extravío del paciente, no tener al paciente bajo techo y cobijo, y no suplementarle la dieta prescrita. Para cada uno de los pacientes incluidos en los ensayos, se calcularon las necesidades energéticas (con base en la formula [peso corporal X 30 + 70] x 2), las cuales se aportaron con alimento comercial seco peletizado. Se mantuvo al perro bajo techo y cobijo las 24 hrs. del día 25 mientras durará el tratamiento, permitiendo solo salidas momentáneas para la excreción de deyecciones fecales y orina. Para la elaboración de ELD a partir de tejido, se utilizaron bazos de perros eutanaciados QP como se describe en el ejemplo no. 2. Después de obtenidos los extractos, éstos se estandarizaron a una concentración equivalente a 1.5 X 106 leucocitos por dosis, según como se 30 muestra en el ejemplo no. 7. A los perros incluidos en el grupo A se les aplicó por vía subcutánea el ELD a una dosis equivalente a 1.5 x 106 leucocitos por Kg de peso corporal cada 48 hrs. por 30 días. Al grupo B se les aplicó un tratamiento a base de minociclina y estreptomicina por tres semanas. Los criterios de discriminación de éxito ó fracaso del tratamiento fueron de positivo ó negativo a la prueba de 35 aglutinación en placa para Brucella canis a los 45 días posteriores del inicio del ensayo clínico.

Los resultados obtenidos, después del tratamiento, se muestran en la siguiente tabla: * Por Kg de peso **A la prueba de aglutinación en placa expresado en porcentaje.

Después de la evaluación de los resultados como se indica en el ejemplo no. 10, bajo el 10 diseño de éste ensayo clínico se puede afirmar que al usar ELD de origen canino no sensibilizado ^facara el tratamiento de la brucelosis canina hay diferencia estadística altamente significativa entre ^ß los grupos de estudio A y B (p<0.01).

Ejemplo 20. Tratamiento de coccidiosis canina con ELD de bazo de perro no sensiblizado. 15 Este ejemplo corresponde a un ensayo experimental, prospectivo, que describe la utilización del ELD obtenido de bazo de perros no sensibilizados a una dosis equivalente a 1.5 x 106 leucocitos por Kg de peso con intervalos de aplicación de cada 48 hrs. por vía subcutánea para el tratamiento de coccidiosis canina. En éste ensayo se usaron 38 perros infectados naturalmente con Isospora canis, que 0 fueron diagnosticados, en un brote ocurrido en un criadero de perros pastor alemán. Se integraron dos grupos de 19 cachorros cada uno; denominados A y B. No se consideró la raza, edad, sexo, ni vacunaciones previas y los pacientes fueron seleccionados en base a los siguientes criterios: 1. De inclusión: presentar cuadro diarreico con evolución no mayor a siete días, demostrar la infección por Isospora canis mediante examen coproparasitoscópico, mediante técnica de 5 flotación, edad entre 2 y 6 meses. 2. De exclusión: no tener propietario, padecer desnutrición severa, padecer de deshidratación moderada a severa, sufrir de otras enfermedades ó patologías concurrentes. 3. De eliminación: suspensión del tratamiento, incremento de la diarrea con deshidratación severa, muerte durante el desarrollo del ensayo clínico, no suplementarle la dieta prescrita. 0 Para cada uno de los pacientes incluidos en los ensayos, se calcularon las necesidades energéticas (con base en la formula [peso corporal X 30 + 70] x 2), las cuales se aportaron con alimento comercial seco peletizado. Se mantuvo al perro bajo techo y cobijo las 24 hrs. del día mientras durará el tratamiento, permitiendo solo salidas momentáneas para la excreción de deyecciones fecales y orina. 5 Para la elaboración de ELD a partir de tejido, se utilizaron bazos de perros eutanaciados como se describe en el ejemplo no. 2. Después de obtenidos los extractos, éstos se estandarizaron a una concentración equivalente a 1.5 X 106 leucocitos por dosis, según como se muestra en el ejemplo no. 7. 5 A los perros incluidos en el grupo A se les aplicó por vía subcutánea el ELD a una dosis equivalente a 1.5 x 106 leucocitos por Kg de peso corporal cada 48 hrs. por 10 dias. Al grupo B se les aplicó un tratamiento a base de sulfamerazina y trimetropin por 10 días. Los criterios de discriminación de éxito ó fracaso del tratamiento fue de positivo ó negativo a la prueba seriada de tres muestras mediante el examen coproparasitoscópico utilizando la técnica de flotación, los días 10 11 , 13 y 15 días posteriores del inicio del ensayo clínico. Los resultados obtenidos, después del tratamiento, se muestran en la siguiente tabla: 15 * Por Kg de peso **A la prueba seriada expresado en porcentaje.

Después de la evaluación de los resultados, como se indica en el ejemplo no. 10, bajo el 0 diseño de éste ensayo clínico se puede afi?riáf' que existen diferencias estadísticas significativas entre los grupos de estudio (p<0.05) al usar ELD de origen canino no sensibilizado para el tratamiento de la coccidiosis canina.

Ejemplo 21. Tratamiento de leptospirosis equina con ELD de sangre de caballo 5 sensiblizado. Este ejemplo corresponde a un ensayo clínico prospectivo, transversal, observacional que describe la utilización del ELD obtenido de sangre de caballos sensibilizados a una dosis equivalente a 1 x 106 leucocitos por Kg de peso con intervalos de aplicación de cada 48 hrs. por vía subcutánea -para el tratamiento de leptospirosis equina. 0 En este ensayo se usaron 30 caballos pura sangre inglés, infectados naturalmente con Leptospira interrogans, que fueron muestreadds en la cuadra del agrupamiento ecuestre de la Policía, los cuales se numeraron por orden ?& positividad y se incluyeron alternativamente en los grupos A y B según el momento en que se presentaran para su atención. Con esta disposición se integraron dos grupos de 15 caballos cada uno. Los pacientes fueron seleccionados según lo 5 descrito en el ejemplo no. 8 y no se consideró la raza, edad, sexo, ni vacunaciones previas. A cada uno dejos pacientes incluidos en los ensayos, se les alimentó con alimento comercial seco peletizado. Para la elaboración del ELD se utilizaron 15 litros sangre de tres caballos criollos adultos, clínicamente sanos, no sensibilizados provenientes de un rastro. Los extractos fueron obtenidos 5 según como se describe en el ejemplo no. 6. Después de obtenidos los extractos, éstos se estandarizaron a una concentración equivalente a 1.5 X 106 leucocitos por dosis, según como se muestra en el ejemplo no. 7. A los caballos incluidos en el grupo A se les aplicó por vía subcutánea el ELD a una dosis equivalente a 1.5 x 106 leucocitos por Kg de peso corporal cada 48 hrs. por 15 días. Al grupo B se 0 les aplicó penicilina G procaínica (4,000,0007U) y estreptomicina (22mg/kg) cada 24 hrs. por 15 ^ ías. ^ Los signos clínicos se calificaron desde el inicio del ensayo y cada 7 días, de la siguiente manera: 0, cuando no hay signos. 5 1, cuando el paciente presentaba solo signos-prodrómicos. 2, cuando los signos específicos se limitaban a vómito, diarrea, poliuria, hematuria. 3, cuando se observaba ictericia, hematuria, diarrea con melena, hematemesis. Los resultados obtenidos, después del tratamiento, se muestran en las siguientes tablas: 0 5 0 ^^fflf^ - »^--^ - -' ft«-- - ->--— — * -f fr-*-*-».-^ 10 • 15 20 25 Así mismo, para éstos grupos se realizó un análisis serológico al inicio del tratamiento así ~0 como otro 21 días después para detectar anticuerpos anü-Leptospira mediante la técnica de microaglutinación con antígeno vivo.

Los resultados de ésta prueba se muestran a continuación: 35 » íMmáiAi -ima Ü u íiíé ái ákiii i?kímtáhí áá — -**-#, ,¿, ^.^ f^ .^^A * Ü. ^ g Los resultados obtenidos se sometieron a una evaluación estadística. En el caso de la valoración de los signos clínicos se usó la prueba de Kruskall-Wailis y para el caso de la microaglutinación la prueba de t de Student, Después de la evaluación de los resultados, bajo el diseño de éste ensayo clínico se puede afirmar que no hay diferencia estadística entre los grupos 10 de estudio (p>0.05) al usar ELD de origen equino no sensibilizado y el tratamiento con .antimicrobianos. En otras palabras ambos tratamientos resultaron igualmente efectivos contra la • leptospirosis equina.

Ejemplo 22. Tratamiento de influenza equina con ELD de bazo de caballo sensiblizado. 15 Este ejemplo corresponde a un ensayo clínico prospectivo, longitudinal, observacional que describe la utilización del ELD obtenido de bazo de caballos sensibilizados a una dosis equivalente a 1.5 x 106 leucocitos por Kg de peso con intervalos de aplicación de cada 48 hrs. por vía subcutánea para el tratamiento de influenza equina. En este ensayo se usaron 20 caballos raza Appaloosa, infectados naturalmente con orthomyxovirus de la influenza equina, en un brote de un criadero. Esa población equina se dividía en 4 machos y 16 hembras con edades entre dos y veinte años; con estos animales se formaron dos grupos con edades y sexos semejantes, a los cuales se les denominó grupo A y grupo B. No se consideró la raza, edad, sexo, ni vacunaciones previas y los pacientes fueron seleccionados en base a los siguientes criterios: 25 1. De inclusión: presentar signos clínicos de influenza, demostrar la infección por Orthomyxovirus mediante la prueba dé seroneutralización. 2. De exclusión: padecer desnutrición severa, padecer de deshidratación moderada a severa, sufrir de otras enfermedades ó patologías concurrentes. 3. De eliminación: suspensión del tratamiento, muerte durante el desarrollo del ensayo clínico. 30 A cada uno de' los pacientes incluidos en los ensayos, se les alimentó con alimento comercial seco peletizado y alfalfa acHicalada ' t * Para la elaboración del ELD se utilizaron tres bazos de caballos criollos, adultos, clínicamente sanos, no sensibilizados, provenientes de un rastro. Los extractos fueron obtenidos según como se describe en el ejemplo no. 2. Después de obtenidos los extractos, éstos se 'i».*. 37 esiar?Sfízaron a una concentración equivalente a 1.5 X 106 leucocitos por dosis, según como se muestra en el ejemplo no. 7. A los caballos incluidos en el grupo A se les aplicó por vía subcutánea el ELD a una dosis equivalente a 1.5 x 106 leucocitos por Kg de peso corporal cada 48 hrs. por 15 días. Al grupo B se le aplicó solución salina fisiológica por la misma, vía y a un volumen equivalente al utilizado para el ELD. El criterio de éxito en el tratamiento consistió en la desaparición clínica de todos los signos indicativos de padecer influenza equina. El criterio de fracaso fue el de la persistencia de tan solo un signo clínico de la enfermedad. Se realizaron dos valoraciones clínicas de los grupos en estudio, el primero a los siete días de iniciado y otro a los 15 días. Los resultados obtenidos, después del tratamiento, se muestran en la siguiente tabla: Después de la evaluación de los resultados como se indica en el ejemplo no. 10, bajo el diseño de éste ensayo clínico, se puede afirmar que existen diferencias estadísticas significativas a favor del grupo de caballos tratados con ELD (p<0.05) con respecto al grupo no tratado, al usar ELD de origen equino no sensibilizado para él tratamiento de influenza equina.

Ejemplo 23. Tratamiento de enfermedad de Aujesky porcina con ELD de sangre de cerdo sensiblizado. Este ejemplo corresponde a un ensayo experimental, prospectivo, transversal, observacional que describe la utilización del ELD obtenido de sangre de cerdos sensibilizados a una dosis equivalente a 1.5 x106 leucdcitos por Kg de peso con intervalos de aplicación de cada 48 hrs. por vía subcutánea para el tratamiento de la enfermedad de Aujesky en cerdos. En este ensayo se usaron 20 lechones raza Landrace de 6 semanas de edad libres de anticuerpos específicos contra la enfermedad de Aujesky. Posterior a tres días de aclimatación, en jaulas cerradas (no a la intemperie) colectivas con piso de cemento y muros de tabique, a temperaturas promedio de 20°C y humedad relativa de 40 a 50%, los animales fueron agrupados en dos grupos de 15 lechones cada uno, los cuales fueron denominados grupo A y grupo B. No se consideró la raza, edad, sexo, ni vacunaciones previas y los pacientes fueron seleccionados en base a los siguientes criterios: 1. De inclusión: estar clínicamente sano, no presentar anticuerpos contra la enfermedad de 5 Aujesky. 2. De exclusión: padecer desnutrición, sufrir de otras enfermedades ó patologías concurrentes. 3. De eliminación: suspensión del tratamiento, muerte por otra causa diferente a la infección por Aujesky. 10 Todos los cerdos que reunieron los criterios de inclusión en este ensayo fueron inoculados •vía intranasal con 3 ml de virus de desafío cepa Becker del virus de Aujesky (107 DICC50%/ml) la cual se propagó y tituló en células de riñon de bovino (MDBK) utilizando como medio esencial mínimo adicionado con 10% de suero fetal bovino. A los cinco días post inoculación y toda vez que se presentaron los signos indicativos de infección respiratoria y viremia (rinorrea, epifora, 15 estornudos, tos, depresión y fiebre), se les administró ELD. Para la elaboración del ELD se utilizaron 15 litros de sangre de cerdos sanos vacunados contra la enfermedad de Aujesky con vacuna de virus activo modificado de la cepa Bartha. Los ^ extractos fueron obtenidos según como' ?'é describe en el ejemplo no. 5. Después de obtenidos los ^* extractos, éstos se estandarizaron a una concentración equivalente a 1.5 X 106 leucocitos por 20 dosis, según como se muestra en el ejemplo no. 7. El grupo A fue tratado con ELD a una dosis equivalente a 1.5 x106 leucocitos por Kg de peso con intervalos de aplicación de cada 48 hrs. por vía intramuscular durante 10 días, el grupo B recibió exclusivamente solución salina fisiológica en volúmenes semejantes a los del ELD del grupo A. 25 Los signos clínicos se calificaron desde el inicio del ensayo y cada 24 hrs, de la siguiente manera: QP 0 cuando no hay signos. 1 cuando el paciente presentaba solo signos prodrómicos (fiebre, depresión mental, 30 anorexia). '-1' ' 2 cuando los signos específicos se limitaban a epifora, rinorrea, estornudo, tos, taquipnea. 3 cuando se observaba ataxia, parálisis, convulsiones, postración estuporosa y muerte.

Los resultados obtenidos, después del tratamiento, se muestran en la siguiente tabla: 35 0 5 0 Por Kg de peso 5 Para el análisis estadístico se utilizó la prueba de Kruskall-Wailis. El diseño de este ensayo clínico permite afirmar que si hay diferencias estadísticas significativas a favor del grupo A con respecto al B (p<0.01) al usar ELD de oíigen sanguíneo porcino sensibilizado para el tratamiento Q de la enfermedad de Aujesky.

Ejemplo 24. Tratamiento de rinitis atrófica porcina con ELD de bazo de cerdo sensiblizado. Este ejemplo corresponde a un ensayo clínico prospectivo, transversal, observacional que describe la utilización del ELD obtenido de bazo de cerdos sensibilizados a una dosis equivalente 5 11 II ÉM ¡I tf ir r i TÍT* f mrtr trr í" a 1.5 x 106 por Kg de peso con intervalos de aplicación de cada 48 hrs. por vía subcutánea para el tratamiento de la rinitis atrófica en cerdos. En este ensayo se usaron 30 cerdos raza Duroc, infectados naturalmente con Bordetella bronchiseptica y Pasterella multocida tipo D toxigénica, que fueron muestreados en una granja de ciclo completo. Con dichos pacientes se integraron dos grupos de 15 cerdos cada uno. No se tomó en consideración la edad, el sexo, ni las vacunaciones previas. Para que un cerdo pudiera ser considerado como candidato a ingresar a este ensayo clínico debió cumplir con los siguientes criterios: 1. De inclusión: presentar signos clínicos de infección por Bordetella bronchiseptica y Pasterella multocida tipo D toxigénica, demostrar la infección por Bordetella bronchiseptica y Pasterella multocida tipo D toxigénica, a las 10 semanas de edad, mediante aislamiento bacteriano. 2. De exclusión: padecer desnutrición severa, padecer deshidratación moderada a severa, sufrir de otras enfermedades ó patologías concurrentes. 3. De eliminación: suspensión del tratamiento, muerte durante el desarrollo del ensayo clínico. A todos los cerdos que se le aplicaron los criterios de inclusión y exclusión en este ensayo se les alimentó con alimento comercial seco peletizado Para la elaboración del ELD se utilizaron 20 litros de sangre de 5 cerdos sensibilizados en dos ocasiones, 30 y 15 días antes, con toxoide comercial contra Bordetella bronchiseptica y Pasterella multocida tipo D toxigénica (Atrobac, Lab". Pfizer). Los extractos fueron obtenidos según como se describe en el ejemplo no. 5. Después de obtenidos los extractos, éstos se estandarizaron a una concentración equivalente a 1.5 X 106 leucocitos por dosis, según como se muestra en el ejemplo no. 7. A los cerdos incluidos en el grupo A se les aplicó por vía intramuscular el ELD a dosis de 1.5 x 106 leucocitos por Kg de peso corporal cada 48 hrs. por 15 días, iniciando su aplicación a las 12 semanas de vida. Al grupo B se les aplicó Solución Salina Fisiológica con el mismo volumen y a la misma frecuencia. A las 24 semanas los cerdos fueron sacrificados y se evaluó el grado de braquignatia y los grados de rinitis atrófica según las técnicas descritas por Done35. Los resultados obtenidos, después del tratamiento, se muestran en la siguiente tabla: Por Kg de peso * Considerando la media y su desviación estándar. spués de la evaluación de los resultados, bajo el diseño de éste ensayo clínico se puede afífrrraT que no hay diferencia estadística en ia dimensión de la braquignatia entre los grupos de estudio (p>0.01) al usar ELD de origemporoirto no sensibilizado y el control. En cambio si se observaron diferencias altamente significativas (p<0.01) al valorar los grados de rinitis, a favor del 5 grupo de cerdos tratados con ELD de origen sanguíneo porcino sensibilizado comparado con los cerdos sin tratamiento.

Ejemplo 25. Tratamiento de neumonía porcina con ELD de bazo de cerdo sensiblizado. Este ejemplo corresponde a un ensayo clínico, prospectivo, transversal, observacional que 10 describe la utilización del ELD obtenido de bazo de cerdos sensibilizados a una dosis equivalente g?ñ 1.5 x 106 leucocitos por Kg de peso con intervalos de aplicación de cada 48 hrs. por vía ^^ubcutánea para el tratamiento de neumonía por Mycoplasmosis complicada en cerdos. En este ensayo se usaron 30 cerdos raza Landrace, infectados naturalmente con Mycoplasma hyopneumaniae y Pasterella multocida tipo D toxigénica, en un brote de enfermedad 15 respiratoria agudo en una granja de ciclo icBrripleto, en la cual se diagnosticó mycobacteriosis por lesiones anatomopatológicas y pausterelosis por cultivo microbiológico. Con los 30 cerdos se integraron dos grupos de 15 cerdos cada uno con edades entre 4 y 12 semanas de edad. No se ^fc»tomó en consideración, el sexo, ni las vacunaciones previas. Para que un cerdo pudiera ser considerado como candidato a ingresar a este ensayo clínico debió cumplir con los siguientes 20 criterios: '- 1. De inclusión: presentar signos clínicos desinfección respiratoria, estar alojado en un corral en donde de haya muerto otro cerdo con diagnóstico anatomopatológico de Mycoplasma hyopneumaniae y microbiológico de Pasterella multocida , tener una edad entre 4 y 12 semanas, no presentar más de 7 días con signos de enfermedad respiratoria. 25 2. De exclusión: padecer desnutrición severa, padecer de deshidratación moderada a severa, sufrir de otras enfermedades ó patologías concurrentes. ; ? 3. De eliminación: suspensión del tratamiehtó, muerte durante el desarrollo del ensayo clínico. OP A todos los cerdos que se le aplicaron los criterios de inclusión y exclusión en este ensayo se les alimentó con alimento comercial seco peletizado, para la etapa de crecimiento. 30 Para la elaboración del ELD se utilizaron 10 bazos de cerdos sensibilizados con bacterina contra Mycoplasma hyopneumaniae y toxoide comercial contra Bordetella bronchiseptica y Pasterella multocida tipo D toxigénica (Atrbbac, Lab. Pfizer). El tejido linfoide se obtuvo de un rastro local. Los extractos fueron obtenidos según como se describe en el ejemplo no. 2. Después de obtenidos los extractos, éstos se estandarizaron a una concentración equivalente a 1.5 X 106 35 leucocitos por dosis, según como se muestra en el ejemplo no. 7. 'i. , i . .

A los cerdos incluidos en el grupo A se les aplicó por vía intramuscular el ELD a una dosis equivalente a 1.5 x 106 leucocitos por Kg de peso corporal cada 48 hrs. por 10 días. Al grupo B se les aplicó Solución Salina Fisiológica don el mismo volumen y a la misma frecuencia que el ELD del grupo A. 5 Los signos clínicos se calificaron, en ambos grupos, desde el inicio del ensayo y cada 24 hrs. durante los siguientes 10 días, de la siguiente manera: 0, cuando no hay signos. 10 1, cuando el paciente presentaba ligera depresión mental, anorexia. ^^2, cuando los signos específicos se limitaban a estornudo, tos seca, diarrea. ^ 3, cuando se observaba taquipnea, cianosis, postración estuporosa y muerte.

Los resultados obtenidos, después del tratamiento, se muestran en las siguientes tablas: 15 • 20 25 30 * Por Kg de peso 35 10 15 • * Por Kg de peso 20 Para el análisis estadístico se utilizó la prueba de Kruskall-Wailis. Después de la evaluación de los resultados, bajo el diseño de éste ensayo clínico se puede afirmar que si hay diferencias estadística a favor del grupo A con respecto al B (p=0.05) al usar ELD de origen sanguíneo porcino sensibilizado para el tratamiento de lá. enfermedad respiratoria por micoplasmosis y pasteurelosis 25 porcina. 1. Spinelli, S.J. 1986. Farmacología Veterinaria y Terapéutica. Ed. Interamericana. México, D.F. 2. Apple MJ. Moquillo-caninos. En: Tilley LP and Smith FW, editores. La Consulta Veterinaria en 5 Minutos. Buenos Aires: Ínter-Médica, 1998. 30 3. Thompson H. 1998. Canine Distemper. In: Gorman N, editor. Canine Medicine and Therapeutics. Oxford: Blackwell Science. 4. Sherding RG. 1996. Moquillo Canino. En: Birchard SJ y Sherding RG, editores. Manual Clínico de Pequeñas Especies. México: McGraw-Hill Interamericana. 35 ..? ¡l, 5. Greene CE 1993. Moquillo Canino. En; Grene'vCE, editor. Enfermedades Infecciosas, Perros y Gatos. México: Interamericana McGraw-Hill. 6. Davenport DJ. 1993. Sistema Linfoide. En: Hoskins JD, editor. Pediatría Veterinaria, Perros y Gatos. México: Interamericana McGraw-Hill. , , 5 7. Swango LJ. 1995. Canine Viral Diseases. In: Ettinger SJ and Feldman EC, editors. Textbook of Veterinary Internal Medicine, Diseases of the Dog and Cat. 4th Ed. Vol. 1. Philadelphia: W.B. Saunders. 8. Lawrence, H.S. 1949. Proc. Soc. Exp. Biol, Med. 71: 516-522. 9. Lawrence, H.S. 1955. J. Clin. Inv. 34: 219-230 10 10. Levin, A.S. 1970. Proc. Nat. Acad. Sci. 67: 821-828. ^ 11. Ferrer Argote, V.E. 1995. Rev. Med. Hospital General de México, S.S. 58: 148-150. 912. US. Pat. 4,435,384. 13. Wolf, R.E. 1978. Clin. Immunol Immunopátho? 10: 292-297. 14. Steele. 1980. New Engl. J. Med. 303: 355-359. 15 15. Louie. 1987. Clin. Immunol Immunopath 44: 329-334. 16. McMeeking. 1990. J. Infect. Dis. 161: 108-112. 17. Estrada Parra, S. 1983. Salud Pública de México1. 6: 579-590. 18. Kirkpatrick, C.H. 1979. Immune Regulators in Transfer Factor. 547-559. Academic. Press. New York. 20 19. Delgado, O. 1981. Clin. Immunol lmmunopathol.19: 351-359. 20. Mikula, I. 1992. Vet. Immunol. Immunopathol. 32: 113-124. 21. Kirkpatrick, C.H. 1993. Annal New York Acad Sci. 362:368. 22. Klesius, P.H. 1978. Clin. Immunol Immunopathol. 10: 214-221. 23. Littman, B.H. 1978. Clin. Immunol Immunopathol. 9: 97-110. 25 24. Klesius, P.H. 1984. Poultry Sci. 63f: 1333-1337. 25. Lawrence, H.S. 1960. Ciba Foundat on Symposium on Cellular Aspects of Immunity (Boston: Little Brown). 243. Q r 26. Lawrence, H.S. 1966.Trans. Ass. Amer. Physicians. 76: 84. 27. Baram, P. 1966. J. Immunol. 97: 407. 30 28. Haddad, Z.H. 1968. J. Allergy. 41 :112. 29. Khan, A. 1980. Cell. Inmunol., 55: 420. 30. Gottlieb, A..A. 1982. Clin. Exp. Immunol., 50: 434. 31. Wilson, G.B., et. al. 1977. Clin Immunol Immunopathol, 8:551. 32. Kirkpatrick, C.H. 1999. US Pat 5,883,224. 35 33. Mikula, I. 1992. Vet. Immunol. Immunopathol. ,32: 103-112. rg, H.H.1989. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol.29: 475-516. .1980. Vet. Annual 15: 1-7 iiiiÉlillÜilli Ü-ÉMiiiilliiiiriiif •"-'-**"'-• *- J' * >ct' *- «-— — *¿"~^

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES. 1. Un extracto de leucocitos dializado para tratar un animal vertebrado con una infección causada por un microorganismo seleccionado del grupo que consiste de bacterias, hongos, protozoarios 5 y virus caracterizado porque es estable en solución a 4°C durante 7 a 12 meses sin el uso de preservadores, libre de células completas ó viables, contiene moléculas menores a 12 KDal de peso y es estéril. 2. El extracto de la reivindicación 1 , caracterizado porque contiene una concentración equivalente a 1 X 105 a 5 X 109 leucocitos por ml. 10 3. El extracto de la reivindicación 1 a 2, caracterizado porque los leucocitos son de sangre ó tejido linfático de animales. 4. El extracto de la reivindicación 3 caracterizado por que el tejido linfático se selecciona de timo, linfonodos, bazo ó combinaciones de los mismos. 5. El extracto de la reivindicación 1 a 4 caracterizado por que se prepara a partir de tejidos de 15 animales previamente sensibilizados contra un agente etiológico infeccioso específico. 6. El extracto de la reivindicación 1 a 4 caracterizado por que se prepara a partir de tejidos de animales no sensibilizados contra un agente etiológico infeccioso específico. # 7. Una composición farmacéutica para el tratamiento de un animal vertebrado con una infección causada por un microorganismo seleccionado del grupo que consiste de bacterias, hongos, 20 protozoarios y virus caracterizada porque comprende una cantidad terapéuticamente efectiva del extracto de leucocitos dializado de la reivindicación 1 a 6 en un vehículo farmacéuticamente aceptable. 8. La composición farmacéutica de la reivindicación 7, caracterizada porque contiene adicionalmente un antibiótico. 25 9. La composición farmacéutica de la reivindicación 8, caracterizada porque el antibiótico se selecciona de sulfamerazina, trimetropin, minociclina, amoxicilina, gentamicina, penicilina y estreptomicina. * 10. La composición farmacéutica de la reivindicación 7 a 9, caracterizada porque el extracto de leucocitos dializado se encuentra en una concentración equivalente a 1 X 105 a 5 X 109 30 leucocitos por ml. 11. La composición farmacéutica de la reivindicación 7 a 10, caracterizada porque se encuentra en una presentación farmacéutica de ampolleta. 12. Un estuche de aplicación terapéutica para el tratamiento de un animal vertebrado con una infección causada por un microorganismo seleccionado del grupo que consiste de bacterias, 35 hongos, protozoarios y virus caracterizado porque: **- '-"" ^^*»»-A^- .^»**^^ brande de 6 a 10 dosis individuales de la composición farmacéutica de la reivindicación 7 a 11, - el 30% al 50% de las dosis individuales totales es 3 a 300 veces mayor en la concentración del extracto de leucocitos dializado en comparación con las dosis restantes y 5 - las dosis de mayor concentración son obtenidas a partir de tejido sanguíneo ó linfático de animales previamente sensibilizados o no contra un agente etiológico infeccioso específico. 13. El estuche de aplicación terapéutica de la reivindicación 12 caracterizado porque contiene de 6 a 8 dosis individuales. 14. El estuche de aplicación terapéutica de la reivindicación 12 a 13 caracterizado porque las dosis 10 individuales con mayor concentración son el 30% del total de las dosis. ^ 15. El estuche de aplicación terapéutica de lá reivindicación 12 a 14 caracterizado porque las dosis O con mayor concentración de extracto de leucocitos dializado se administran inicialmente durante el tratamiento. 16. El estuche de aplicación terapéutica de la reivindicación 15 caracterizado porque las dosis 15 iniciales tienen una concentración equivalente a 3 X 106 a 5 X 108 leucocitos por Kg de peso. 17. El estuche de aplicación terapéutica de la reivindicación 12 a 16 caracterizado porque las dosis de menor concentración son equivalentes^ 1 X 105 a 1.5 X 106 leucocitos por Kg de peso. ?^ 18. El estuche de aplicación terapéutica de la reivindicación 12 a 17 caracterizado porque las dosis ^-" de mayor concentración son obtenidas a partir de tejido linfático. 20 19. El estuche de aplicación terapéutica de la reivindicación 18 caracterizado porque el tejido linfático se selecciona de timo, bazo ó linfonodos. 20. El estuche de aplicación terapéutiéa de la reivindicación 12 a 19 caracterizado porque las dosis de menor concentración son obtenidas a partir de sangre ó tejido linfático. 21. El estuche de aplicación terapéutica de la reivindicación 20 caracterizado porque las dosis de 25 menor concentración son obtenidas a partir de sangre. 22. Un método de obtención de un extracto de leucocitos dializado estable en solución a 4°C ^ durante 7 a 12 meses sin el uso de preservadores para tratar un animal vertebrado con una QK infección causada por un microorganismo seleccionado del grupo que consiste de bacterias, hongos, protozoarios y virus que consiste de los siguientes pasos: 30 a. Selección y preparación del donador. b. Recolección celular. c. Obtención de leucocitos. d. Lisis celular. e. Separación de moléculas: 35 f. Conservación, ' caracterizado porque entre el paso e y f el extracto se esteriliza mediante adición de ozono a una concentración de 0.2 a 0.5 ppm aplicado por burbujeo en el extracto líquido. 23. El método de la reivindicación 22, caracterizado porque el ozono se adiciona a una concentración de 0.3 ppm. 5 24. El método de la reivindicación 22 a 23, caracterizado porque el donador de leucocitos está sensibilizado previamente contra un agente etiológico infeccioso específico. 25. El método de la reivindicación 22 a 23, caracterizado porque el donador de leucocitos no está sensibilizado contra un agente etiológico infeccioso específico. 26. El método de la reivindicación 22 a 25, caracterizado porque la recolección celular se hace a 10 partir de sangre ó tejido linfoide. ^^27. El método de la reivindicación 26, caracterizado porque el tejido linfoide se selecciona de bazo, ^^ timo y linfonodos. 28. El método de la reivindicación 27, caracterizado porque el tejido linfoide es bazo y se obtienen concentraciones del extracto equivalentes a 1 X-'107 a 8.3 X 107 leucocitos por gramo de tejido. 15 29. El método de la reivindicación 27, caracterizado porque el tejido linfoide es timo y se obtienen concentraciones del extracto equivalentes a 9 X 106 a 6 X 107 leucocitos por gramo de tejido. 30. El método de la reivindicación 27, caracterizado porque el tejido linfoide es linfonodos y se Jk obtienen concentraciones del extracto equivalentes a 1.6 X 107 a 1.8 X 109 leucocitos por gramo de tejido. 20 31. Un método para tratar un animal vertebrado con una infección causada por un microorganismo seleccionado del grupo que consiste de bacterias, hongos, protozoarios y virus, que comprende el paso de administrar al animal con la infección una cantidad terapéuticamente efectiva de un extracto de leucocitos dializado estéril, estable en solución a 4°C durante 7 a 12 meses sin el uso de preservadores, libre de células completas ó viables, y que contiene moléculas menores 25 a 12 KDal de peso. 32. El método de la reivindicación 31 , caracterizado porque los animales son mamíferos y aves. 33. El método de la reivindicación 32, caracterizado porque los mamíferos se seleccionan del Q f grupo que consiste de felinos, caninos, porcinos, equinos, bovinos y ovinos. 34. El método de la reivindicación 31 a 33 caracterizado por que el microorganismo es un virus 30 seleccionado de a-herpesvirus, ß-herpesvirus, ?-herpesvirus, morbillivirus, pneumovirus, coronavirus, papilomavirus, oncornavirus, orthomyxovirus, paramyxovirus, lentívirus y oncovirus. 35. El método de la reivindicación 31 a 33caracterizado por que el microorganismo es una bacteria seleccionada de Pasteurella, Mycoplasma, Mycobacterium, Leptospira, Brucella, Bordetella, 35 Haemophilus, Treponema, y Campylobacter. rtftlt í H- ff*f A ?í- «—">•*- - ^^^^^üa^^l 36. EtiüétOdo de la reivindicación 31 a 33 caracterizado por que el microorganismo es un hongo seleccionado de Actinomyces, Coccidioidomicosis, Histoplasma, Criptococcus, Blastomyces, Aspergillus y Candida. 37. El método de la reivindicación 31 a 33 caracterizado por que el microorganismo es un 5 protozoario seleccionado de Leishmania, Entamoeba, Toxoplasma, Isospora, Erlichia, Neospora, Criptosporidium y Balantidium. 38. El método de la reivindicación 31 a 33 caracterizado por que la infección viral se selecciona de rinotraqueitis infecciosa bovina, mamilitis ulcerativa, fiebre catarral maligna, enfermedad de Aujesky, influenza, peste bovina, parainfluenza-3, virus sincitial bovino, diarrea neonatal de la 10 ternera, papilomatosis, leucosis bovina, rihoneumonitis equina, exantema coital equino, anemia # infecciosa equina, moquillo canino, parainfluenza SV-5, herpesvirus canino, rinotraqueitis felina, urolítiasis felina, peritonitis infecciosa felina, leucemia viral felina, herpesvirus del cerdo lactante, rinitis atrófica, gastroenteritis transmisible, encefalomielitis hemoaglutinante, enfermedad del ojo azul, adenomatosis' pulmonar, laringotraquitis infecciosa, enfermedad de 15 Marek, peste aviar, enfermedad de Newcástle, bronquitis infecciosa y leucosis aviar. 39. El método de la reivindicación 31 a 33 caracterizado por que la infección bacteriana se selecciona de septicemia hemorrágica, pleuroneumonía contagiosa, mastitis bovina, ^^ paratuberculosis, tuberculosis, leptospirosis, brucelosis, neumonía enzoótica de los lechones, ^* disenteria porcina, campylobacteriosis, enfermedad respiratoria crónica, sinovitis infecciosa y 20 cólera aviar. : ' ' 40. El método de la reivindicación 31" á 33 caracterizado por que la infección por hongos se selecciona de actinomicosis, coccidioidomicosis, histoplasmosis, criptococosis, blastomicosis, aspergilosis y candidiasis. 41. El método de la reivindicación 31 a 33 caracterizado por que la infección por protozoarios se 25 selecciona de toxoplasmosis, leishmaniasis, balantidiasis, amibiasis, coccidiosis, erlichiosis y neosporosis. 42. El método de la reivindicación 31 a 41 , caracterizado por que el extracto de leucocitos dializado se prepara a partir de tejido linfático ó sangre de animales. 43. El método de la reivindicación 42, caracterizado por que el tejido linfático se selecciona de 30 timo, linfonodos, bazo ó combinaciones de los mismos. 44. El método de la reivindicación 31 a 43, caracterizado por que el extracto de leucocitos dializado se prepara a partir de tejidos de animales previamente sensibilizados contra un agente etiológico infeccioso específico. 45. El método de la reivindicación 31 a 44, caracterizado por que el extracto de leucocitos dializado se prepara a partir de tejidos de animales de la misma especie ó de otra diferente a la del animal receptor del tratamiento. 46. El método de la reivindicación 31 a 45, caracterizado porque el extracto de leucocitos dializado 5 se administra a una dosis equivalente a 1 X 105 a 5 X 109 leucocitos por Kg de peso corporal. 47. El método de la reivindicación 46, caracterizado porque el extracto de leucocitos dializado se administra a una dosis equivalente a 5 X 105,a 5 X 108 leucocitos por Kg de peso corporal. 48. El método de la reivindicación 47, caracterizado por que el extracto de leucocitos dializado se administra a una dosis equivalente a 1 X 106 a 5 X 106 leucocitos por Kg de peso corporal. 10 49. El método de la reivindicación 48, caracterizado por que el extracto de leucocitos dializado se ^ administra a una dosis equivalente a 1.5 X 10a leucocitos por Kg de peso corporal. ^^ 50. El método de la reivindicación 31 a 49, caracterizado por que el extracto de leucocitos dializado se aplica con un intervalo entre dosis de 8 hrs. a 30 días. 51. El método de la reivindicación 50 caracterizado por que el extracto de leucocitos dializado se 15 aplica con un intervalo entre dosis de cada 48 hrs. 52. El método de la reivindicación 31 a 51 , caracterizado por que el extracto de leucocitos dializado se aplica en dosis única. 53. El método de la reivindicación 31 a 52, caracterizado por que el extracto de leucocitos dializado se administra vía enteral ó parenteral. 20 54. El método de la reivindicación 53, caracterizado por que el extracto de leucocitos dializado se administra vía subcutánea. 55. El uso de un extracto de leucocitos dializado estéril, estable en solución a 4°C durante 7 a 12 meses sin el uso de preservadores, libre de células completas ó viables, y que contiene moléculas menores a 12 KDal de peso para la fabricación de un medicamento para el 25 tratamiento de un animal vertebrado con una infección causada por un microorganismo seleccionado del grupo que consiste de bacterias, hongos, protozoarios y virus, que comprende f la administración al animal con la infección de una cantidad terapéuticamente efectiva del extracto. 56. El uso de la reivindicación 55, caracterizado porque los animales son mamíferos y aves. 30 57. El uso de la reivindicación 56, caracterizado porque los mamíferos se seleccionan del grupo que consiste de felinos, caninos, porcinos, equinos, bovinos y ovinos 58. El uso de la reivindicación 55 a 57, c racterizado por que el microorganismo es un virus seleccionado de a-herpesvirus, ß-herpesvirus, ?-herpesvirus, morbillivirus, pneumovirus, coronavirus, papilomavirus, oncornavirus, orthomyxovirus, paramyxovirus, lentivirus y 35 oncovirus. íde la, reivindicación 55 a 57, caracterizado por que el microorganismo es una bacteria* seleccionada de Pasteurella, Mycoplasma, Mycobacterium, Leptospira, Brucella, Bordetella, Haemophilus, Treponema, y Campylobacter. 60. El uso de la reivindicación 55 a 57, caracterizado por que el microorganismo es un hongo 5 seleccionado de Actinomyces, Coccidioidomicosis, Histoplasma, Criptococcus, Blastomyces, Aspergillus y Candida. r ;:, 61. El uso de la reivindicación 55 a 57, caracterizado por que el microorganismo es un protozoario seleccionado de Leishmania, Entamoeba, Toxoplasma, Isospora, Erlichia, Neospora, CriptOsporidium y Balantidium. 10 62. El uso de la reivindicación 55 a 57, caracterizado por que la infección viral se selecciona de rinotraqueitis infecciosa bovina, mamilitis ulcerativa, fiebre catarral maligna, enfermedad de Aujesky, influenza, peste bovina, parainfluenza-3, virus sincitial bovino, diarrea neonatal de la ternera, papilomatosis, leucosis bovina, riñoneumonitis equina, exantema coital equino, anemia infecciosa equina, moquillo canino, parainfluenza SV-5, herpesvirus canino, rinotraqueitis felina, 15 urolitíasis felina, peritonitis infecciosa felina, leucemia viral felina, herpesvirus del cerdo lactante, rinitis atrófica, gastroenteritis transmisible, encefalomielitis hemoaglutinante, enfermedad del ojo azul, adenomatosis pulmonar, laringotraquitis infecciosa, enfermedad de fc Marek, peste aviar, enfermedad de Newcastle, bronquitis infecciosa y leucosis aviar. . 63. El uso de la reivindicación 55 a 57, caracterizado por que la infección bacteriana se selecciona 20 de septicemia hemorrágica, pleuroneumonía contagiosa, mastitis bovina, paratuberculosis, tuberculosis, leptospirosis, brucelosis, neumonía enzoótica de los lechones, disenteria porcina, campylobacteriosis, enfermedad respiratoria crónica, sinovitis infecciosa y cólera aviar. 64. El uso de la reivindicación 55 a 57, caracterizado por que la infección por hongos se selecciona de actinomicosis, coccidioidomicosis, histoplasmosis, criptococosis, blastomicosis, aspergilosis 25 y candidiasis. 65. El uso de la reivindicación 55 a 57, caracterizado por que la infección por protozoarios se selecciona de toxoplasmosis, leishmaniasis, balantidiasis, amibiasis, coccidiosis, erlichiosis y neosporosis. 66. El uso de la reivindicación 55 a 65, caracterizado por que el extracto de leucocitos dializado se 30 prepara a partir de tejido linfático ó sangre de animales. 67. El uso de la reivindicación 66, caracteriz do por que el tejido linfático se selecciona de timo, linfonodos, bazo ó combinaciones de los mismos. 68. El uso de la reivindicación 55 a 67, caracterizado por que el extracto de leucocitos dialízado se prepara a partir de tejidos de animales previamente sensibilizados contra un agente etiológico 35 infeccioso específico. la reivindicación 55 a 68, caracterizado por que el extracto de leucocitos dializado se partir de tejidos de animales de la misma especie ó de otra diferente a la del animal receptor del tratamiento. 70. El uso de la reivindicación 55 a 69, caracterizado porque el extracto de leucocitos dializado se administra a una dosis equivalente a 1 X 105 a 5 X 109 leucocitos por Kg de peso corporal. 71. El uso de la reivindicación 70, caracterizado porque el extracto de leucocitos dializado se administra a una dosis equivalente a 5 X 105 a 5 X 108 leucocitos por Kg de peso corporal. 72. El uso de la reivindicación 71 , caracterizado por que el extracto de leucocitos dializado se administra a una dosis equivalente a 1 X 106 a 5 X 106 leucocitos por Kg de peso corporal. 73. El uso de la reivindicación 72, caractepzado por que el extracto de leucocitos dializado se administra a una dosis equivalente a 1.5 X 106 leucocitos por Kg de peso corporal. 74. El uso de la reivindicación 55 a 73, caracterizado por que el extracto de leucocitos dializado se aplica con un intervalo entre dosis de 8 hrs. a 30 días. 75. El uso de la reivindicación 74, caracterizado por que el extracto de leucocitos dializado se aplica con un intervalo entre dosis de cada 48 hrs. 76. El uso de la reivindicación 55 a 75, caracterizado por que el extracto de leucocitos dializado se aplica en dosis única. 77. El uso de la reivindicación 55 a 76, caracterizado por que el extracto de leucocitos dialízado se administra vía enteral ó parenteral. 78. El uso de la reivindicación 77, caracterízado por qiiie el extracto de leucocitos dializado se administra vía subcutánea. ^m^b^^^Ü^gi^^^^y