MXPA00010379A - Inhibidores de cisteina proteasa - Google Patents

Inhibidores de cisteina proteasa

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MXPA00010379A
MXPA00010379A MXPA/A/2000/010379A MXPA00010379A MXPA00010379A MX PA00010379 A MXPA00010379 A MX PA00010379A MX PA00010379 A MXPA00010379 A MX PA00010379A MX PA00010379 A MXPA00010379 A MX PA00010379A
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protease
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MXPA/A/2000/010379A
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Lyle W Spruce
Albert C Gyorkos
John C Cheronis
Val S Goodfellow
Axel H Leimer
John M Young
James I Gerrity
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Cortech Inc
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Abstract

La presente invención se refiere, a inhibidores de cisteína proteasa de la fórmula general (I):en donde Z es una porción de unión a cisteína proteasa;X y Y son S, 0 u opcionalmente N sustituido, y R1 es alquilo o arilo sustituido opcionalmente.

Description

INHIBIDORES DE CISTEINA PROTEASA CAMPO DE LA INVENCIÓN * 5 En los sistemas biológicos se han identificado varias cisteína proteasas. Una "proteasa" es una enzima que degrada proteínas o péptidos en componentes más pequeños. El término "cisteína proteasa" se refiere a proteasas que se distinguen por la presencia de un residuo que desempeña una función crítica en el proceso catalítico. Los sistemas de mamíferos, incluyendo, f 10 seres humanos, normalmente degradan y procesan proteínas a través de una variedad de mecanismos que incluyen las acciones de las cisteína proteasas.
Sin embargo, cuando están presentes a niveles elevados o cuando son anormalmente activados, o cuando son introducidas en un sistema biológico en el contexto de infección viral, bacteriana o parasitaria, se piensa que las cisteína proteasas están implicadas en varios procesos fisiopatológicos y estados de enfermedad. Por ejemplo, las proteasas neutras activadas por calcio ("calpaínas") comprenden una familia de cisteína proteasas intracelulares que son ubicuotamente expresadas en tejidos de mamíferos. Se han identificado tres calpaínas importantes: calpaína I y II, y p94. La familia de calpaína de la cisteína proteasas ha sido implicada en muchas enfermedades y trastornos, incluyendo accidente vascular cerebral, neurodegeneración, tal como enfermedad de Alzheimer, amitrofía y daño de neuronas motoras; lesión de sistema nervioso central agudo, distrofia muscular, reabsorción de hueso, agregación de plaquetas, cataratas e inflamación La calpaina I ha sido implicada en trastornos de neurotoxicidad inducidos por aminoácidos excítatenos incluyendo isquemia, A hipoglicemia y epilepsia La cisteína proteasa p94, un miembro específico de ¡ 5 músculo de la familia de calpama, ha sido identificada como un producto de gen responsable de distrofia muscular de las extremidades (Barrett A J et al ICOP Newslettßr, 1-2 (1996)) Las cisteína proteasas lisosomales o catepsinas (incluyendo catepsinas B, C, H, L, S, O y 02/K) pertenecen a la subfamilia de papaína de las fe io cisterna proteasas Están ampliamente distribuidas y drferencialmente expresadas entre los tejidos Intracelularmente, tienen una variedad de funciones digestivas y de procesamiento Extracelularmente, pueden estar implicadas en remodelacion de tejido y en patologías tales como artritis, inflamación, infarto de miocardio, enfermedad de Alzheimer, cáncer y distrofia 15 muscular (El ot E, et al , Pepn Drug Disc and Des , 6 12-32 (1996)) La enzima convertidora de mterleucina-lß ("ICE") es un miembro de la familia de caspasa de la cisteína proteasas que cataliza la formación de interleucina-lß (IL-lß), así como la formación de factor inductor de interferon-? (IGIF) a partir de sus precursores inactivos, prolL-1 ß y pro-IGIF, 20 respectivamente La interleucina-lß es una proteína inmunoreguladora implicada en inflamación, diabetes, choque séptico, artritis reumatoide y enfermedad de Alzheimer ICE y/u otras caspasas también han sido relacionadas con muerte de células apoptotica de neuronas que está implicada en una variedad de trastornos neurodegenerativos que incluyen enfermedad de Parkinson, isquemia y esclerosis lateral amiotrofica (ALS)(D?narello C , et al , New Eng, J Med 328 106-113(1993)) Las cisterna proteasas también son producidas por varios patógenos virales y parece estar implicadas en cada etapa de reproducción incluyendo traducción y síntesis de ADN y ARN, y formación de capside (Gorbalenya A , et al , Per In Drug Disc , 6 64-86 (1996), Krausshch et al , Ann Rev Biochem , 57 701-54 (1988)) Ejemplos de patógenos virales incluyen Picornavipdae, el cual incluye los géneros Enterovirus, Rhmovirus, Cardiovirus y Aphthovirus, que causa numerosos síndromes de enfermedades humanos, variando desde parálisis fatal, encefalitis, meningitis, hepatitis y miocarditis hasta el resfriado común (Krausslich et al , Ann Rev Biochem , 57 701-54 (1988)) Las 3C proteinasas picornavirales, que son producidas por todos los picornavirus, son responsables de procesamiento de poliproteinas virales, una etapa esencial en el crecimiento viral (Malcolm B , et al Biochemistry, 34 8172-8179 (1995)) Ademas, las cisterna proteasas parasitarias desempeñan funciones significativas en interacciones de hospedero-parásito y patogénesis (Robertson C , et al , Pers m Drug Disc and Des , 6 99-118 (1996)) Por ejemplo, la mayor parte de la actividad de la proteinasa detectada en tnpanosomas y diversas especies de Leishmama se ha caracterizado por pertenecer a la clase de cisterna proteasa Otras proteasas son producidas por Closrndium histolyticum y parásitos de malaria tales como cepas de Plasmodium falcfarum y Plasmodium vmckei y Schistosoma El procoagulante de cáncer, CP una cisterna proteasa de células malignas, ha surgido como un activador probable del sistema de coagulación en cáncer (Alessio M G , et al , Eur J Haematol, and He o , 18, 4 424-433 (1992)) Los inhibidores de cisterna proteasa existentes son principalmente de naturaleza irreversible, solo inhiben débilmente la actividad enzimatica de la proteasa objetivo y/o son toxicas De esta manera, existe la necesidad de inhibidores efectivos de cisterna proteasas como agentes terapéuticos y como profilácticos para el tratamiento y/o prevención de patologías mediadas por cisterna proteasa BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a inhibidores de cisterna proteasa de la formula general (I) N-Y A (I) en donde Z es una porción de enlace de cisterna proteasa, Z siendo un grupo que contiene carbonilo, preferiblemente un grupo que contiene aminocarbonilo, en donde el carbono del heterociclo es directamente unido al grupo carbopilo de Z En la formula anterior (I), R-| es alquilo o alquenilo opcionalmente sustituido con 1-3 halógeno o hidroxi, alquilamino, dialquilamino, alquildialquilamino, o cicloalquilo, alquilcicloalquilo, alquenilcicloalquilo, aplo (C5-C12). aplalquilo (C5-C12) ° anlalquenilo (C5-C12) que comprende opcionalmente 1-4 heteroátomos seleccionados de N, O y S, y opcionalmente sustituidos con halógeno , ciano, nitro, halogenoalquilo, amino, aminoalquilo, dialquilammo, alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, halogenoalcoxi, carboxilo, carboalcoxi, alquilcarboxamida, anlo (C5-C6), -0-ar?lo (C5-C6), aplcarboxamida, alquiltio o halogenoalquiltio, y X y Y son independientemente O, S o N, en donde N es sustituido opcionalmente con alquilo o alquenilo opcionalmente sustituido con 1-3 átomos de halógeno, anlo (C5-C6), aplalquilo o anlalquenilo opcionalmente que comprende 1-3 heteroátomos seleccionados de N, O y S, y opcionalmente sustituido con halógeno, ciano, nitro, halogenoalquilo, ammo, aminoalquilo, dialquilamino, alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, halogenoalcoxi, carboxilo, carboalcoxi, alquilcarboxamida, anlcarboxamida, alquiltio o halogenoalquiltio, siempre que por lo menos uno de Y o X sea N Se entenderá que en donde Y o X es nitrógeno sustituido, tanto Y como X deben ser nitrógeno En una modalidad, R-j es metilo, dimetilammo, fenilo o bencilo opcionalmente sustituido con metilo, halógeno, metilenodioxi, metoxi, dimetoxi, tnmetoxi, tpfluorometilo y dimetilamino De acuerdo con varias modalidades preferidas, X es O y Y es N, X es N y Y es O, o tanto X como Y son N Típicamente Z comprende 1 a 5 residuos de aminoácidos o mimeticos de los mismos De esta manera, Z puede comprender, por ejemplo, una porción de enlace pentapeptidilo, tetrapeptidilo, tnpeptidiio o dipeptidilo De acuerdo con una modalidad preferida, Z es de la formula (II) R4A Rf en donde AA-| , AA2, AA3, AA4. y AA5 son independientemente un residuo aminoácido o un mimetico de residuo de aminoácido, un enlace directo o ausente, y R4 y R ' son independientemente -C(0)Rs, -C(0)NHR5, -S(O)-2R5,-C(0)O 5, -CR5 O R5, en donde R5 es H, alquilo, alquenilo o alquinilo opcionalmente sustituido con halógeno, ciano, nitro, halogenoalquilo, amino, ammoalquilo, dialquilammo, halogenoalcoxi, carboxilo, carboalcoxi o alquilcarboxamida, cicloalquilo, alquilcicloalquilo, a lo (C5-C12) o arilalquilo (C5-C-12) opcionalmente comprendiendo 1-4 heteroatomos seleccionados de N, O y S, y opcionalmente sustituidos con halógeno, ciano, nitro, halogenoalquilo, ammo, aminoalquilo, dialquilamino, halogenoalcoxi, carboxilo, carboalcoxi, alquilcarboxamida, alquilo, alquenilo, alquinilo o anlo (Cs-C^). o ausente, o juntos R y R4' forman un anillo que comprende 5-7 átomos seleccionados de C, N, S y O Los grupos R4 terminales típicos incluyen Cbz, derivados de acido succmico de las formulas -C(0)CH(-CH2CH(CH3)2)CH2COOH,- C(0)CH2CH2COOH, y -C(0)CH2CH2C(0)OC(CH3)3, toluensulfonilo, ? metansulfonilo, FMOC, (/)-ment?lox?-CO- y acetilo 5 Preferiblemente, los aminoácidos se seleccionan de arginma o un mimetico de arginina, prolina, acido aspartico y glutamico y esteres arílico y alquihco de los mismos, alanina y glicina opcionalmente sustituida con a-carbono o a-nitrogeno con alquilo, cicloalquilo o aplo, leucina, isoleucma, cisteina opcionalmente sustituida en el átomo de azufre con alquilo, alquenilo o fenilo io opcionalmente sustituido con halógeno, ciano, itro, halogenoalquilo, amino, aminoalquilo, dialquilamino, alquilo, alcoxi, halogenoalcoxi, carboxilo, carboalcoxi, alquilcarboxamida, arilcarboxamida, alquiltio o halogenoalquiltio, fenilalanina, homo-fenilalanma dehidro-fenilalanina, acido ?ndol?n-2-carbox?l?co, acido tetrah?dro?soqu?nol?n-2-carbox?l?co opcionalmente sustituido con halógeno, ciano, nitro, halogenoalquilo, amino, aminoalquilo, dialquilamino, alquilo, alcoxi, halogenoalcoxi, carboxilo, carboalcoxi, alquilcarboxamida, aplcarboxamida, alquiltio o halogenoalquiltio, tirosma, senna o treonina opcionalmente sustituido , con alquilo o anlo, tnptofano, histidina, metionina, valma, norvalina, norleucina, acido octah?dro?ndol?n-2-carbox?l?co, asparagina, glutamina y hsina opcionalmente sustituida en el átomo de nitrógeno con alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxialquilo, alquiltioalquilo, alquilaminoalquilo, dialquilammoalquilo, carboxialquilo, alcoxicarbonilalquilo o cicloalquilo, bicicloalquilo, cicloalquilalquilo, bicicloalquilalquilo o anl-cicloalquilalquilo fusionados opcionalmente comprendiendo 1 o más heteroatomos seleccionados de N, O y S Alternativamente, AA-| es de la formula (Illa), (Illa) en donde X' es CR2' o N, y R2, R2' y R2" son independientemente H, alquilo o alquenilo opcionalmente sustituido con 1-3 halógeno, hidroxi, tío, alquiltio, amino, alquilamino, dialquilamino, alquilguanidinilo, dialquilguanidinilo, guanidmilo, -RCOR', -RCOOR', -RNR'R"R0 0 -RC(0)NR'R" en donde R es alquilo o alquenilo, y R', R" y R° son independientemente H, alquilo, alquenilo, cicloalquilo o anlo (C5-C6), o cicloalquilo, alquilcicloalquilo, alquenilcicloalquilo, alquil-oxianlo, alquil-tioa lo, anlo (C5-C12), aplalquilo (C5-C12) o aplalquenilo (C5-C12) que comprende opcionalmente 1-4 heteroatomos seleccionados de N, O y S, y opcionalmente sustituido con hidroxi, halógeno, ciano, nitro, halogenoalquilo, ammo, aminoalquilo, dialquilamino, amidina, alquilamidma, dialquilamidina, alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, halogenoalcoxi, carboxilo, carboalcoxi, alquilcarboxamida, aplo (C5-C6), -0-ar?lo (Cs-Cg), aplcarboxamida, alquiltio o halogenoalquiltio, o R2 y R2' junto con X' forman un anillo que comprende 4-7 átomos seleccionados de C, N, S y O, dicho anillo opcionalmente sustituido con hidroxi, halógeno, ciano, nitro, halogenoalquilo, amipo, aminoalquilo, dialquilamino, amidma, alquilamidma, dialquilamidina, alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, halogenoalcoxi, carboxilo, carboalcoxi, alquilcarboxamida, anlo (Cs-Cg), -0-ar?lo (Cs-Cg), aplcarboxamida, alquiltio o halogenoalquiltio AA2 puede ser un residuo de la formula (lllb), (lllb) o seleccionado de un mimetico de residuo de las formulas IV a XXIV en donde X" es CR'3 o N, R3. R'3 y R"3 son independientemente H, alquilo o alquenilo opcionalmente sustituido con 1-3 halógeno, hidroxi, tío, alquiltio, amino, *flfc alquilamino, dialquilamino, alquilguanidinilo, dialquilguanidinilo, guanidmiio, - . 5 RCOR', -RCOOR' o -RC(0)NR'R" en donde R es alquilo o alquenilo, y R' y R" son independientemente H, alquilo, alquenilo, cicloalquilo o aplo (C5-Cg), o cicloalquilo, alquilcicloalquilo, alquenilcicloalquilo, alquil-oxiaplo, alquil-tioaplo, aplo (C5-C12). anlalquilo (C5-C-12) o aplalquenilo (C5-C12) opcionalmente comprendiendo 1-4 heteroátomos seleccionados de N, O y S y opcionalmente fio sustituidos con hidroxi, halógeno, ciano, nitro, halogenoalquilo, ammo, aminoalquilo, dialquilamino, amidina, alquilamidina, dialquilamidina, alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, halogenoalcoxi, carboxilo, carboalcoxi, alquilcarboxamida, aplo (Cs-Cg), -O-aplo (Cg-Cg), aplcarboxamida, alquiltio o halogenoalquiltio, 15 m es O, 1 ó 2, n es 0, 1 ó 2, A G es -C(O)-, -NHC(O)-, -s(0)2-, -OC(O)-, -C- o un enlace directo, Rg, R , R'g, R'7 son independientemente H, alquilo, alquenilo, halógeno, alcoxi, carboxilo, carboalcoxi, amino, aminoalquilo, dialquilamino, 20 cicloalquilo, aplo (Cg-Cg) o aplalquilo (Cg-Cg) opcionalmente comprendiendo 1-3 heteroátomos seleccionados de N, O y S, y opcionalmente sustituido con alquilo, alquenilo, alquinilo, halógeno, ciano, nitro, halogenoalquilo, halogenoalcoxi, ammo, alquilamino, dialquilamino, alcoxi, halogenoalcoxi, carboxilo, carboalcoxi, alquilcarboxamida, alquiltio, guanidina, alquilguanidina, dialquilguanidina, amidma, alquilamidina o dialquilamidina, y U, V, W y Y' son independientemente o juntos N, C, C(O), N(Rg) en donde Rg es H, alquilo, halógeno, alcoxi, carboalcoxi, cicloalcoxi, carboxilo, alquiltio, amino, alquilammo, dialquilamino o aplo, anlo fusionado o cicloalquilo opcionalmente comprendiendo 1 o mas heteroatomos seleccionados de O, S y N, y opcionalmente sustituido con halógeno o alquilo, N(R-|Q) en donde R-|o es H, alquilo, alquenilo o cicloalquilo, aplo, aplalquilo o anlo-cicloalquilo fusionados opcionalmente comprendiendo 1-4 heteroatomos seleccionados de N, O y S y opcionalmente sustituido con alquilo, alquenilo, alquinilo, halógeno, ciano, nitro, halogenoalquilo, halogenoalcoxi, amino, alquilamino, dialquilamino, alcoxi, halogenoalcoxi, carboxilo, carboalcoxi, alquilcarboxamida, alquiltio, guanidina, alquilguanidina, dialquilguanidina, amidina, alquilamidina o dialquilamidina, o C(R-] -| )(R-|2) en donde Rj j y R-|2 son independientemente o juntos H, alquilo, alquiltio, alquiltioalquilo o cicloalquilo, alquilcicloalquilo, fenilo o fenilalquilo opcionalmente sustituido con guanidina, carboalcoxi, hidroxi, halogenoalquilo, alquiltio, alquilguanidina, dialquilguanidina, amidina, alquilamidina o dialquilamidina En una modalidad preferida, X' y X" son C, y '2 y R'3 son H En otra modalidad, X' y/o X" son N En donde Z es una porción de enlace de calpaína, preferiblemente R2 es bencilo opcionalmente sustituido con alcoxi, H2NC(=~ NH2)NHCH2CH2CH2-, -R'-C(=-NH2)NH2, -R'-NHC(=-NR")NR°, O -R'-NR"R? en donde R' es cicloalquilo, aplo o aplalquilo opcionalmepte sustituido con uno o mas heteroatomos seleccionados de N, S o O, y R" y R° son alquilo o cicloalquilo, o CH3SCH2CH2-, HOOC(CH2)2CH2-, c?clohex?lo-CH2-, imidazolilo-CH2, bencilo opcionalmente sustituido con OH o -0-benc?lo, (CH3)2CHCH2-, (CH3)2CH-, CH3CH2CH2- o CH3(CH2)2CH2-, y R3 es -CH2-benc?lo, bencilo, (CH3)3C-, (CH3)3CCH2-, (CH-3)2CH-, CH3(CH2)2CH2-, CH3CH2CH(CH3)- o (CH3)2CHCH2- Preferiblemente, R5 es bencilo, isoqumo nilo, quinolinilo, naftilo o HOOCCH2C(CH2CH(CH3)2)-, o R4 es Cbz en donde el fenilo es opcionalmente sustituido con nitro Ademas, R4 puede ser toluensulfonilo, metansulfonilo, F OC o (+)-met?lo-ox?-CO- En una modalidad, AA3 es leucina, AA¿j y AAg son enlaces directos o están ausentes y Rg es alquilo Vanas modalidades particulares incluyen aquellas en donde Z es R4-Leu-Leu-Leu-, R4-Leu-Leu-, R -Leu-Leu-Phe-, R4-Leu-Abu-, R4-Val-Phe-, P^-Leu-Leu-Nle-, R4-Ala-t-BuGly-Val-, R4-t-BuGly-Val-, R4-Leu-Nle- Preferiblemente, Z es Cbz-Leu-Nle-, o Cbz-Leu-Val- Z también puede ser una porción de enlace de cisteina-catepsina, en donde preferiblemente R2 es -CH3-, (CH3)2CH-, (CH3)2CHCH2-, -A CH3(CH2)2CH2-, H2NC(=-NH2)NHCH2CH2CH2-, -R'-C(=-NH2)NH2, -R'-NHC(=" NR")NR°, o -R' -NR"R° en donde R' es cicloalquilo, aplo o aplalquilo opcionalmente sustituido con uno o mas heteroatomos seleccionados de N, S o O, y R" y R° son alquilo o cicloalquilo, bencilo o -CH2-benc?lo opcionalmente sustituido con OH o -OR' en donde R' es alquilo o aplo, CH3CH(-0-benc?lo)- o benc?lo-S-CH2-, y R3 es H (CH3)2CH- (CH3)2CHCH2-, CH3(CH2)2CH2-, fo H2N(CH2)3CH2-, H2N(CH2)2CH2-, H2NC(=-NH2)NHCH2CH2CH2-, -R'- C(=" NH2)NH2, -R'-NHC(=-NR")NR°, o -R'-NR"R° en donde R' es cicloalquilo, anlo o aplalquilo opcionalmente sustituido con uno o mas heteroatomos seleccionados de N, S o O, y R" y R° son alquilo o cicloalquilo, bencilo, bencilo sustituido con hidroxi y halógeno, o (naft?lo)-CH2- 15 En una modalidad, Z es una porción de enlace de catepsina B, en donde preferiblemente R2 y R3 son independientemente bencilo, -CH2-benc?lo, A H2NC(=-NH2)NHCH2CH2CH2-, -R'-C(=-NH2)NH2, -R'-NHC(=-NR")NR°, o -R'- NR"R° en donde R' es cicloalquilo, aplo o aplalquilo opcionalmente sustituido con uno o mas heteroatomos seleccionados de N, S o O, y R" y R° son alquilo o cicloalquilo, H2N(CH2)3CH2- o H2N(CH2)2CH2-, y preferiblemente AA3 es lie, Leu, esta ausente o es un enlace directo De acuerdo con una modalidad particular, -AA2-AA-J- se seleccionan de -Phe-hPhe-, -Arg-hPhe-, -mimetico de Arg-hPhe-, -Leu-hPhe-, y -Orn-hPhe Z puede ser una porción de enlace de catepsina L, en donde R3 es preferiblemente bencilo o (CH3)2CHCH2-, y R2 es -CH2-benc?lo En donde Z es una porción de enlace de catepsina S, preferiblemente R2 y R3 son alquilo, muy preferiblemente (CH3)2CH-, (CH3)2CHCH2- o CH3(CH2)2CH2- En otra modalidad, R3 es bencilo, (CH3)2CHCH2- o (CH-3)2CH-, y R2 es -CH2-benc?lo De acuerdo con una modalidad particular, AA3, AA^y AAg son enlaces directos o están ausentes, Rg es bencilo, isoquinolinilo, quino nilo, naftilo o HOOCCH2C(CH2CH(CH3)2)-, o R es Cbz En donde Z es una porción de enlace de catepsina H, Z es preferiblemente R4-hPhe-, o HCI-hPhe- Z también puede ser una porción de enlace de catepsina K, en donde preferiblemente R3 es bencilo, (CH3)2CHCH2- o (CH3)2CH-, y preferiblemente AA3 es Gly, y AA4 es Val o D-Val En otra modalidad, AA-| es Arg, mimetico de Arf o hPhe, AA2 es Pro; AA3 es Gly; y ^ es Val o D-Val; o preferiblemente Z es H F^-Pro-AA-i-; R -Gly-Pro-AA-|-; í^-Val-Gly-Pro-AA-i-; D-Val-Gly-Pro-AA-|-; o R4-D-Val-Gly-Pro-AA? ; en donde AA-|es Apa, Arg o mimético de Arg, o hPhe. Otras modalidades incluyen compuestos en donde Z es R4-AA3-Leu-hPhe-; R4-AA3-Phe-hPhe-; o R -AA3-Val-hPhe-; en donde AA3 es Gly, Val, D-Val, un enlace directo o ausente. En donde Z es una porción de enlace de caspasa, preferiblemente 2 es -RCOOR'; en donde preferiblemente R es -CH2- y preferiblemente R' es H; en donde preferiblemente AA3 y AA4 son residuos de aminoácidos y AAg es un enlace directo. En donde Z es una porción de enlace de enzima convertidora de interleuc¡na-1ß; AA-4 puede ser opcionalmente tirosina sustituida o leucina; AA3 puede ser valina, glutamato o un éster de glutamato; y R3 puede ser -CH3 o (CH3)2CH-.
En otra modalidad, R3 es -CH3 o imidazolilo-CH2; AA3 es valina o glutamato; y Rg es -CH3. Z puede ser también R-|-AAg-AA4-AA3-Pro-AA-| ; en donde AA-| es Asp o éster de Asp; en donde -AAg-AA^-AA;}- puede ser -Ala-; -Glu-; -Val-; -Tyr-Ala-; -Tyr-Glu-; -Tyr-Val-; -Leu-Ala-; -Leu-Glu-; o -Leu-Val-. En otra modalidad en donde Z es una porción de enlace de enzima convertidora de interleucina-1 ß, AA2 es de la fórmula (VI); en donde X" es CR'3 en donde preferiblemente R'3 es H; y R2 es -RCOOR' en donde R es alquilo o alquenilo, y R' es H, alquilo, alquenilo, cicloalquilo o arilo (Cg-Cg). En otra, AA4 y AAg son enlaces directos o están ausentes, AA3 es Tyr o Tyr(O-R') o un enlace directo o está ausente; R2 es -RCOOR' en donde R es alquilo o alquenilo, y R' es H, alquilo, alquenilo, cicloalquilo o arilo (Cg-Cg); Rg es fenilo o bencilo sustituido con halógeno; y Rg puede ser bencilo, isoquinolinilo, quinolinilo, naftilo o HOOCCH2C(CH2CH(CH3)2)-. En donde Z es una porción de enlace de YA A, preferiblemente R2 es -RCOOR' en donde preferiblemente R es -CH2- y AA4 es Asp o un éster del mismo. En otra modalidad, AA3 es opcionalmente glutamina sustituida o ácido glutámico o un éster del mismo. En otra modalidad más R2 es (CH3)2CH-o CH-3SCH2CH.2-. En donde Z es una porción de enlace de FLICE, preferiblemente R2 es -RCOOR', en donde preferiblemente R es -CH2-; AA es opcionalmente lisina sustituida; y preferiblemente AA3 ácido glutámico; y R3 es (CH3)2CH-.
Z también puede ser una porción de enlace de cisteína proteasa viral o microbiana. En otra modalidad, Z es una porción de enlace de gingipaína.
En donde Z es una porción de enlace de gingipaína K; R2 es preferiblemente - ' RNR'R"R° en donde preferiblemente R es alquilo (C-|-C4); R' es H; y , 5 preferiblemente R" y R° son H o alquilo (C- -C^¡. En una modalidad R2 es - H3N(CH2)3CH2-. En donde Z es una porción de enlace de gingipaína R, preferiblemente R2 es H2NC(=-NH2)NHCH CH2CH2-; -R'-C(=-NH2)NH2; -R'- NHC(=-NR")NR°; o -R'-NR"R° en donde R' es cicloalquilo, arilo o arilalquilo opcionalmente sustituido con uno o más heteroátomos seleccionados de N, S o feo O; y R" y R° son alquilo o cicloalquilo. De acuerdo con una modlidad, AA2 es prolina, en donde Z es R4- Leu-pro-AAi-, en donde AA-| es arginina o un mimético de arginina. Z también puede ser una porción de enlace de proteasa de coronavirus humano, en donde preferiblemente R2 es H2NC(=- 15 NH2)NHCH2CH2CH2-; R'-C(=-NH2)NH2; -R'-NHC(=-NR")NR°; o R'-NR"R0 en donde R' es cicloalquilo, arilo o arilalquilo opcionalmente sustituido con uno o más heteroátomos seleccionados de N, S o O; y R" y R° son alquilo o # cicloalquilo; y preferiblemente R3 es (CH3)2CH-, (CH3)2CHCH2- o CH3(CH2)2CH2-; AA3 es Asp o éster del mismo, Leu, Arg o un mimético de Arg, 20 o un enlace directo; A ^ y AAg son enlaces directos o están ausentes; y Rg es alquilo. En donde Z es una porción de enlace de proteinasa de virus 3C de hepatitis A, R2 es preferiblemente -RC(0)NR'R" en donde R' y R" son H o -CH3; o RCOOR' en donde R' es CH3; y AA3 y AA4 son residuos de aminoácidos. Preferiblemente, AA,^ es Leu; R3 es -CH3 y AA3 es Ala. Z también puede ser una porción de enlace de proteinasa de virus 3C de hepatitis A, en donde Z es • 5 R4-Leu-AA3-Thr-Gln-; R4-Trp-AA3-Thr-Gln-; R -Val-AA3-Thr-Gln-; R4-lle-AA3-Thr-Gln-; o R4-D-Leu-AA3-Thr-Gln-; ho en donde AA3 es Arg o un mimético de Arg. En donde Z es una porción de enlace de proteasa Ad2 23K, R2 y R3 son preferiblemente H; AA3 es alanina; A es leucina; AAg es un enlace directo; y R está ausente. En donde Z es una porción de enlace de proteasa de rinovirus 3C 15 humano, preferiblemente R2 es RCOOR' en donde R es -CH2-; R3 es bencilo; y AA3 es leucina, isoleucina o un enlace directo. En otra modalidad más, R2 es -RC(0)NR'R" en donde R' y R" son • H, -CH3 o -CH2CH3; o RCOOR' en donde R' es -CH3 o -CH2CH3. Z también puede ser una proteasa de picornaína 2A humana; en eonde R3 es -CH(OR')CH3 en donde R' es H, alquilo o arilo; y preferiblemente R2 es una cadena lateral hidrofóbica. Alternativamente, AA-| es Val o dehidro- Phe; AA2 es pro; y AA3 es Val. Ejemplos incluyen compuestos CE-2072, CE- 2060 y CE-2061 , cuyas estructuras se muestran más adelante.
En otra modalidad, Z es R -Ala-Ala-Pro-Val, o R4-Ala-Ala-Pro-Ala- Ademas, Z puede ser una porción de enlace de proteasa de • 5 protozoapo, tal como una porción de enlace de proteasa de Trypanosoma, Leishmania o Schistosoma La proteasa puede ser una proteasas similar a catepsma L o similar a catepsina B En una modalidad, R2 es H2N(CH2)3CH2-, H2NC(=-NH2)NHCH2CH2CH2-, -R'-C(=-NH2)NH2, -R'-NHC("NR")NR°, o -R'- NR"R° en donde R' es cicloalquilo, aplo o aplalquilo opcionalmente sustituido fco con uno o mas heteroatomos seleccionados de N, S o O, y R" y R° son alquilo o cicloaqluilo, -CH2-benc?lo o bencilo opcionalmente sustituido con OH, y preferiblemente R3 es bencilo, (CH3)2CHCH2- o (CH3)2CH-, y AA3 es Phe Leu, Pro o un enlace directo En un ejemplo, R4 es Boc o Suc Z puede ser también seleccionado de -Pro-Phe-Arg-, -Phe-Arg-, - 15 Val-Leu-Lys-, -Leu-Val-Tyr-, Suc-Leu-Tyr- o -Phe-Ala- En donde Z es una porción de enlace de proteasas de Plasmodium, preferiblemente R2 es (CH3)2CH-, -CH2-benc?lo, bencilo o fenilo opcionalmente sustituido con hidroxilo, H2NC(="NH2)NHCH2CH2CH2-, -R'-C(=" NH2)NH2, -R'-NHC(=-NR")NR°, o -R'-NR"R° en donde R' es cicloalquilo, aplo o 20 aplalquilo opcionalmente sustituido con uno o mas heteroatomos seleccionados de N, S o O, y R" y R° son alquilo o cicloalquilo, o -R'-N(R")(R°) en donde R' es alquilo, y R" y R° son alquilo o cicloalquilo, o alqui midazolilo, y R3 es bencilo, (CH3)2CHCH2-, (CH3)2CH-, HOCH2- o -CH3OR' En una modalidad, Z es R -Phe-Arg-; R -Phe-(mimético de arginina)-; R4-Phe-Lys-; # 5 R -Leu-hPhe-; R4-Val-Leu-Arg-; R -Phe(e-Z)-Lys-; R4-Val-Leu-(mimético de Arg)- R -Phe-Val-; o ho Pv -Phe-SeríOBzl)-. En otra modalidad, Z es R4-Phe-AA-|-; o R -Leu-AA-|-; en donde AA-| es lisina opcionalmente sustituida; y en donde R puede ser 15 morfolino. En otra modalidad, AA3, AA y AAg son enlaces directos o están ausentes y R4 es Cbz. La presente invención también provee métodos para inhibir la actividad enzimática de una o más cisteína proteasas que consiste en poner en contacto una proteasa con una cantidad inhibidora de un compuesto que aquí se 20 describe. Preferiblemente, el compuesto se selecciona de Acido [2-[5-(3-metilbencil)-1 ,3,4-oxadiazolil]carbonil]-2-(S)- metilpropil]-L-fenilalanamido-(3R)-(isobutil)succínico; Acet?l-L-leuc?l-N-[1-[2-[5-fen?l]-1 ,3,4-oxad?azol?l]carbon?l]-4-(guan?d?no)-but?l-L-leuc?lam?da, Acet?l-L-leuc?l-N-[1-[3-[5-met?l]-1 ,2,4-oxad?azol?l]carbon?l]-et?l-L-leucilamida, Acet?l-L-leuc?l-N-[1 -[3-[5-met?l]-1 ,2,4-oxad?azol?l]carbon?l]-4- (guan?d?no)-but?l-L-leuc?lam?da, Acet?l-L-t?roa?n?l-L-val?l-N-[1-[2-[(5-fen?l]-1 ,3,4-oxad?azol?l]carbon?l]-2-carbox?-et?l]-L-alan?noam?da, Acet?l-L-aspart?l-val?l-N-[1-[2-[(5-fep?l]-1 ,3,4-oxad?azol?l]carbon?l]-2-(carbox?)-et?l]-L-glutam?lam?da, (Benz?lox?carbon?l)-L-va l-N-[1 -(2-[5-(3-met?lbenc?l)-1 ,3,4-oxad?azol?l]carbon?l)-2-(S)-met?lprop?l]-L-prol?nam?da, (t-butox?succ?n?l)-L-val?l-N-[1-[3-[5-(3-tr?fluoromet?lbenc?l)-1 2,4-oxad?azol?l]carbon?l)-2-benz?l?dona]-L-prol?nam?da, y (Carbox?succ?n?l)-L-val?l-N-[1-[3-[5-(3-tpfluoromet?lbenc?l)-1 ,2,4-oxad?azol?l]carbon?l)-2-benz?l?dona]-L-prol?nam?da La presente invención también provee un método para inhibir el crecimiento de células cancerosas o la progresión tumoral o metástasis tumoral o invasión tumoral, al inhibir la actividad enzimatica de las cisterna proteasas asociadas con dicho crecimiento o progresión tal como catepsina B o catepsina L Ademas se provee un método para inhibir el crecimiento o reproducción de células microbianas o crecimiento o reproducción viral al inhibir la actividad enzimática de las cisteína proteasas asociadas con dicho crecimiento o reproducción. Los objetivos patógenos adecuados incluyen, por ejemplo, únicamente proteinasa de virus 3C de hepatitis A, endopeptidasa 2 de ' virus de hepatitis C, proteasa de rinovirus de picornaína 3C, endopeptidasa 2 de . 5 virus de encefalomielitis y proteasa de picornaína 2A. La presente invención también provee un método para el tratamiento de los síntomas asociados con respuestas alérgicas al inhibir la actividad enzimática de proteasas de cisteína asociadas con ciertos alérgenos, tales como por ejemplo Der p I. fo La invención provee un método para tratar los síntomas asociados con trastornos neurodegenerativos, tales como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, esclerosis múltiple. La invención también provee un método para el tratamiento de los síntomas asociados con accidente vascular cerebral. 15 También se provee un método para tratar los síntomas asociados con enfermedades inflamatorias y degenerativas tales como artriditis, incluyendo artritis reumatoide u osyteoartritis, o enfermedad periodontal. * Tal como se usa aquí, el término "porción de enlace de cisteína proteasa" significa un grupo químico capaz de enlazarse al sitio de enlace de 20 sustrato de una cisteína proteasa, típicamente definida en la literatura como el sitio S-|-Sn. El término incluye tanto péptidos como miméticos de péptidos. preferiblemente, la porción de enlace se selecciona de tal manera que cuando se enlaza al ceto-heterociclo, la porción provee el compuesto resultante con actividad inhibidora contra la cisteína proteasa objetivo de menos de 100 µM (valor de K-| ), y muy preferiblemente de menos de 10 µM Tal como se usa aquí, el termino "opcionalmente sustituidos" significa, cuando es sustituido, mono o completamente sustituido Tal como se usa aquí, el término "independientemente" significa que los sustituyentes pueden ser los mismos o diferentes Tal como se usa aquí, el termino "alquilo" significa C-|-C-|g, sin embargo, preferiblemente Cj-C Tal como se usa aquí, el término "alquenilo" significa C?-C-| g, sin embargo, preferiblemente C-|-C Tal como se usa aquí, el termino "alquinilo" significa C-|-C-| g, sin embargo, preferiblemente C-|-C7 Se e entenderá que los grupos alquilo, alquenilo y alqumilo, ya sean sustituidos o no sustituidos, pueden ser lineales o ramificados Tal como se usa aquí, el tempno "aplo" a menos que se indique otra cosa, significan grupos aplo que comprenden preferiblemente de 5 a 12 átomos de carbono, y muy preferiblemente de 5 a 6 átomos de carbono A menos que se indique otra cosa, el termino aplo incluye mono y bicíclico, así como sistemas de anillo fusionados Tal como se usa aquí, el término "aplalquilo" incluye grupos alquilo mono-sustituidos (por ejemplo, bencilo), así como grupos alquilo di-sustituidos tales como -alqu?l(fen?lo)2 (por ejemplo, -CH(fen?lo)2) Tal como se usa aquí, en donde el término "aplalquilo" o "aplalquenilo" está definido por la formula general aplalqu?lo(Cx-Cy) o aplalquen?lo(Cx-Cy), x e y se refieren al numero de átomos de carbono que constituyen el grupo aplo El grupo alquilo es como se definió antes Tal como se usa aquí, el termino "aplalquenilo" incluye compuestos aplo que tiene una cadena de alquenilo que comprende 1-3 o mas dobles enlaces Grupos -# aplalquenilo ilustrativos incluyen =CH-CH2-ar?lo y -CH=CH-ar?lo, en donde aplo es preferiblemente fenilo Tal como se usa aquí, el termino "mimetico de arginina" significa un residuo de aminoácido con una cadena lateral sustituyente de la formula -R'-C(=~ NH2)NH2, -R'-NHC(=-NR")NR°, o -R'-NR"R° en donde R' es cicloalquilo, anlo o aplalquilo opcionalmente sustituido con uno o mas heteroatomos seleccionados de N, S o O, y R" y R° son alquilo o cicloalquilo Tal como se usa aquí, el termino "Cbz" significa benziloxicarbonil, y el término "Mu" significa morfolino Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos anteriormente descritos están dentro del alcance de la invención BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La figura 1 muestra la inhibición de la producción de linea celular 20 IL-lß en THP-1 madura por ciertos compuestos de la presente invención Las figuras 2A y 2B muestran la inhibición de la producción de IL- 1 madura en sangre entera por ciertos compuestos de la presente invención La figura 3 es una representación esquemática de la síntesis de un compuesto de conformidad con la invención (CM-0019).
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN - La presente invención provee compuestos que son útiles como inhibidores de cisteína proteasa. Estos compuestos se caracterizan por su peso molecular relativamente bajo, inhibición reversible, potencia elevada y selectividad con respecto a varios tipos de cisteína proteasas. Los compuestos feo pueden ponerse en práctica para prevenir, aliviar y/o tratar de otra manera enfermedades que son mediadas por los efectos asociados con la presencia de cisteína proteasas. Su uso es de particular importancia ya que se relacionan con varios tratamientos humanos in vivo y como herramientas de diagnóstico in vitro. Los inhibidores peptidílicos de serina proteasas que comprenden porciones de enlace de serina proteasas y ciertos ceto-heterociclos han sido descritos anteriormente (véase WO 96/16080). Se ha encontrado también . sorprendentemente que compuestos que comprenden porciones de enlace de cisteína proteasa y estos ceto-heterociclos son inhibidores altamente potentes y específicos de una amplia variedad de cisteína proteasas. La actividad inhibitoria puede ser dirigida contra cualquier cisteína proteasa identificando la porción de enlace específica para esa proteasa. Las características para los residuos P|...Pn (usando nomenclatura de sustrato por Schechter y Berger (Biochem.
Biophys. Res Commun. 27:157 (1967); Biochem. Biophys. Res Commun. 32:898 (1968)), que define la secuencia de reconocimiento mínima de enzimas para sustratos de péptidos sintéticos pequeños o inhibidores son conocidos para muchas enzimas o se pueden determinar midiendo velocidades de hidrólisis devarios sustratos. Algunos ejemplos se listan en el Cuadro 1. '• CUADRO 1. Cisteína proteasas y elementos de reconocimiento ilustrativos Nva= norvalina, Abu= a acido aminobutipco, Agly= azaglicilo, Aala= azaalanilo, Np2= 2-naft?lalan?na, Nle= norleucina, Eps= epoxisuccinilo Ademas de alterar la, porción de enlace Z, el sustituyente en el heterociclo (v gr , R-| ) se puede variar para incrementar mas la especificidad de estos compuestos hacia la cisterna proteasa deseada A manera de ejemplo, el compuesto CM-0019 comprende la porción de enlace especifica para papama y 1 ,3,4-oxad?azol sustituido CM-0019 A manera de ejemplo, los compuestos CQ-0010 y CQ-0011 inhiben las caspasas. Los compuestos CQ-0002 y CQ-0008 son análogos de leupeptina, cuya estructura se provee a continuación para fines de comparación.
Los compuestos CQ-0004, 0008, 0010 y 0011 se representan a continuación: Otros inhibidores específicos incluyen los compuestos CE-2072, CE-2060 y CE-2061 , que han mostrado actividad inhibidora contra proteasa de pocornaína 2A (100% de inhibición a 100 µM): Los compuestos de la presente invención, sales de los mismos y sus intermediarios se pueden preparar o fabricar como se describe aquí o por vanos métodos conocidos por la técnica química, asi como por extensión y modificación de métodos anteriormente descritos (véase WO 96/16080, incorporada aquí por referencia) '?k Se ha usado un método alternativo en donde peptidos . 5 adecuadamente protegidos son convertidos por la acción de un reactivo de acoplamiento activante tal como BOP-CI o HBTU a una amida de Weinreb La amida de Weinreb después se hace reaccionar con un 2-l?t?o-1 ,3,4-oxad?azol 5- sustituida a temperaturas apropioadas que vanan de -78°C a -25°C en un solvente adecuados tal como THF o éter para proveer los ceto-oxidazoles fo deseados en un solo paso Los grupos protectores, si están presentes, después se remueven para proveer los inhibidores de enzima en una forma eficiente y convergente Vanos métodos eficientes para sintetizar 1 ,3,4-oxad?azol 5- sustutidos se conocen en la técnica Convenientemente, estos compuestos se pueden sintetizar en un solo paso poniendo en reflujo hidrazidas de ácidos carboxilicos comunes con exceso de ortoformiato de etilo a temperaturas elevadas El exceso de ortoformiato se hidroliza en el tratamiento y los 1 ,3,4- oxadiazol 5-sust?tu?dos a menudo se obtienen en forma esencialmente pura sin purificación adicional necesaria Este método completo de síntesis se ilustra en forma general en el esquema 1 mas adelante Casos en los que R2 se correlaciona con las cadenas laterales de aminoácidos de acido aspartico, arginina y alanina se proveen en los ejemplos ESQUEMA 1 lo ? O u X feo en donde AAn significa AA2 AAg Los compuestos que aquí se describen son útiles para inhibir la actividad de cisteína proteasas, mediante contacto del compuesto con la proteasa objetivo, ya sea en un ambiente m vivo o m vitro Tal como se usa aquí, el termino "poniendo en contacto" significa hacer que directa o indirectamente el 15 inhibidor y la proteasa entren en asociación física uno con otro De esta manera el contacto incluye actos físicos tales como colocar el inhibidor y ia proteasa k juntos en un contenedor, o administrar los inhibidores a un paciente Así, por ejemplo, la administración de un compuesto de la invención a un paciente humano muestra la evidencia de una enfermedad o trastorno asociado con actividad anormal y/o aberrante de dichas proteasas en un método para inhibir la actividad enzimática de dichas proteasas que están asociadas con enfermedad o trastorno, caen dentro del alcance de la definición del término "poner en contacto" Las sales farmacéuticamente aceptables de los inhibidores de cisterna proteasa también caen dentro del alcance de los compuestos como se describe aquí El término "sales farmacéuticamente aceptables" tal como se usa aquí incluyen sales acidas de adición orgánicas e inorgánicas tales como • cloruro, acetato, maleato, fumarato, tartrato y citrato Ejemplos de sales de metales farmacéuticamente aceptables son sales de metal alcalino tales como sal de sodio o al de potasio, sales de metales alcalino terreos tales como sal de magnesio y sal de calcio, sal de aluminio y sal de zinc Ejemplos de sales de amonio farmacéuticamente aceptables son sal de amonio, tpshidroximetilaminometano y sal de tetrametilamonio Ejemplos de sales de adición de aminoácidos farmacéuticamente aceptables son sales con licina, glicina y fenilalanina Las cisteína proteasas que pueden ser inhibidas por los compuestos que aquí se describen incluyen cisteína proteasas de mamíferos, bacterias, parásitos, virus, hongos, insectos y plantas Las cisterna proteasas incluyen papaina, actinidama, aleurama (cebada), alérgeno (Dermatophagoides), alérgeno (Euroglyphus), ananaína (Ananas comosus), asclepaína {Asepias Sypaca), bleomicina hidrolasa, calotropina (Calotropis), capcaína, clostnpaína, catepsina B, catepsina H, catepsina L, catepsina S, catepsina O, catepsma K, catepsina T, quimopaína, cisteína aminopeptidasa (Lactococcus), cisteína endopeptidasa 2 y 3 (cebada), cisterna endopeptidasa (Brassica napus), cisteína endopeptidasa (Caenorhabditis), cisterna endopeptidasa 1 y 2 (Dicryostelium), cisterna endopeptidasa (Entamoeba), cisteína endopeptidasa 1 y 2 (Haemonchus), cisterna endopeptidasa (Hemerocallis), cisterna endopeptidasa 1 , 2 y 3 (Homarus), cisterna endopeptidasa (Leishmania), cisteína endopeptidasa (mung bean), cisteína endopeptidasa (Ostertagia), cisteína endopeptidasa (pea), cisterna endopeptidasa (Plasmodium), cisteína endopeptidasa tpr 5 (Porphyromonas), cisterna endopeptidasa (Tetrahymena), cisteína endopeptidasa (Theilena), cisteína endopeptidasa (tobáceo), cisteína endopeptidasa (Trypanosoma), dipeptidilo peptidasa I, endopeptidasa (baculovirus de Auitographa), endopeptidasa EP-CI (Phaseolus vulgaps), glicilendopeptidasa, opzaína (incluye a, ß y ?) (arroz), bromelama (incluyendo o bromelaína de tallo y fruto), fiema, taurnatopaína (Thaumatococcus), gmgipaína R y gingipaína K, calpainas, incluyendo calpaína (Schistosoma) calpaína I, calpaína II, calpaina p94, proteína de unión de calcio PMP41 , producto de gen en sol (Drosophila), estreptopaína y cisteína endopeptidasa (Porphyromonas), picornaina 2A, picornaína 3C, apotovirus endopeptidasa, cardiovirus 5 endopeptidasa, cornovirus endopeptidasa, nepovirus endopeptidasa, endopeptidasa de virus de grabado de tabaco Nía, virus de hepatitis C endopeptidasa 2, adenovirus endopeptidasa, virus de grabado de tabaco HC- proteinasa, endopeptidasa de virus de tizón de la nuez p29, endopeptidasa de virus de tizón de la nuez p-48, endopeptidasa sindbis virus ns92, endopeptidasa 0 de virus de hepatitis de ratón, endopeptidasa de virus de bronquitis infecciosa de aves, a-clostppaína, ubiquitina carboxil terminal hidrolasa, enzima deubiquinante (proteína DOA4), peptidasa de procesamiento especifico de ubiquitina 1 , peptidasa de procesamiento especifico de ubiquitina 2, peptidasa de procesamiento especifico de ubiquitina 3, protema oncogen tre (humano), protema unp (ratón), hemoglobinasa (Schistosoma), legurnaina (jack bean), enzima convertidora interleucina y caspasas, tales como caspasa 2 (ICH-I), -fh caspasda 3 (CPP32, YAMA), caspasa 4 (ICErel-ll), caspasa 5 (ICErel-lll), caspasa 6 (Mch2), caspasa 7 (Mch3), caspasa 8 (FLICE, Mch5), caspasa 9 (Mchd, ICErel-lll), caspasa 10 (Mch4), piroglutamil-peptidasa I, endopeptidasa de protema ER60 microsomal, peptidasa de prepilina líder, PCP a- endopeptidasa de virus de artentis PRRS, endopeptidasa de virus Nsp2 de artentis equina, L proteinasa de virus de enfermedad de pie y boca, protesasa áfc? viral de hepatitis A, proteasa de virus de corona, endopeptidasa de virus de encefalomielitis, hemoglobinasa malarial, producto de gen de virus de drosofila, dipeptidil peptidasa I (catepsina C), Der pl (acaro del polvo) ?-glutamil hidrolasa, actinida (Actmidia), cisterna proteinasa E delevadura, proteinasa D de levadura, proteinasa F de levadura, procoagulante de cáncer, y histolisina Los inhibidores de enzima para las cisterna proteasas pueden ser útiles como fármacos terapéuticos potenciales para seres humanos y animales, como herramientas de ? diagnostico o de investigación, como agentes antibactepanos, herbicidas, fungicidas o plaguicidas Las indicaciones potenciales para inhibidores de cisterna proteasa que aquí se describen usados en profilaxis, curación o terapia incluyen trastornos cardiovasculares - daño o reperfusion isquémica de trasplantes y/o cirugía vascular, angiogenesis, neovasculapzacion, disfunción de aloinjerto cardiaco agudo, daño cardiaco isquémico, supresión miocárdica inducida por quimioterapia, trastornos inflamatorios - artritis reumatoide y otras artritis '?k inflamatorias, enfermedades intestinales inflamatorias, peritonitis inflamatoria, 5 sepsis, síndrome de respusta inflamatoria sistémica, insuficiencia de órganos múltiple, trastornos musculoesqueléticos - osteoartptis, osteoporosis, distrofia muscular, miositis, trastornos neurologicos - esclerosis múltiple, accidente vascular ß cerebral, enfermedad de Alzheimer, trastornos asociados con ppones, telangiectasia de ataxia, daño del sistema nervioso central, trastornos pulmonares - asma, COPD, síndrome de dificultad respiratoria en adultos, granulomatosis de Wegener, enfisema, trastornos alérgicos, inmunologicos y autoinmunes - alergia de acaras del polvo doméstico, rechazo de trasplantes, enfermedad de injerto contra hospedero, diabetes mehtis de tipo 1 , tiroiditis autoinmune, psoriasis, A enfermedad autoinmune mediada por anticuerpo, lupus eptematoso, síndrome de Sjogren, encefalomiehtis autoinmune, tumores sólidos, linfomas, leucamias y otras malignidades y trastornos relacionados - leucemia mielogena aguda y crónica, cáncer neuronal, invasión de cáncer y metástasis, angiogenesis tumoral, nfomas de células B y T, leucemia nfocitica aguda y crónica, resistencia a quimioterapia, granulopatías asociadas con cáncer (incluyendo trombosis venosa profunda, trastorno de arteria coronaria, embolia pulmonar, coagulación intravascular diseminada), enfermedad de Hodkms, carcinomas del colon, hígado, pulmón, mama, riñon, estomago, páncreas, esófago, faringe oral, intestino, tiroides, próstata, vejiga, 'f cerebro, osteo sarcoma, condro sarcoma y lipo sarcoma, neuroblastoma, melanoma, y carcinomas derivados de ampios y/o copon), enfermedades infecciosas y síndromes asociados - choque séptico (incluyendo sepsis por gram negativos), infección por VIH y SIDA, herpes genital, zoster, sarampión, infecciones por EBV y encefalitis, coreoretinitis por CMV o encefalitis, infecciones por citomegalovirus en neonatos (incluyendo Bo neumonitis relacionada), infecciones oportunistas en individuos inmunocomprometidos (incluyendo SIDA y pacientes con transplantes), disenteria, hepatitis C, hepatitis A, queratoconjuntivitis, bronconeumonia (inlcuyendo neumonía en individuos inmunocomprometidos), gastroenteritis, malaria pnovirus, polio, infecciones por enterovirus, resfriado común, meningitis aséptica, enfermedades de pies y boca, infección de neumonía por Klebsiella, epidermitis por Eschenchia coli o Staphylococcus, bacteremia leprosica, otitis A media, lambliasis, sinusitis no atopica, hepatitis fulminante, enfermedades renales - enfermedad renal po quistica, glomerulonefptis, 20 otros trastornos diversos - enfermedad pepodontal, hepatitis por alcohol, hipertrofia de próstata, trauma, mastocitosis cutánea, diarrea inducida por radiación y por VIH, caquexia (incluyendo cáncer y desnutrición asociadas) Ejemplos de cisteína proteasas y enfermedad asociada se describe en el Cuadro 2. CUADRO 2 f • Aunque los compuestos que aquí se describen y/o sus sales se pueden administrar como las sustancias químicas puras, es preferible presentar el ingrediente activo como una composición farmacéutica. La invención por lo tanto provee el uso de una composición farmacéutica que comprende uno o más compuestos y/o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, junto con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables de los mismos y opcionalmente otros ingredientes terapéuticos y/o profilácticos. Los vehículos deben ser "aceptables" en el sentido de ser compatibles con los otros ingredientes de la composición y no deletéreos al receptor de los mismos. Las composiciones farmacéuticas incluyen aquellas adecuadas para administración oral, tópico o parenteral, (incluyendo intramuscular, subcutánea e intravenosa). Las composiciones, cuando son apropiadas, pueden ser convenientemente presentadas en formas de dosis unitarias discretas y se pueden preparar por cualesquiera de los métodos bien conocidos en la técnica de farmacia Dichos métodos incluyen el paso de llevar a asociación el compuesto activo con vehículos líquidos, matrices sñolidas, vehículos semisólidos, vehículos sólidos finamente divididos o una combinación de los 5 mismos, y después, si es necesario, configurar el producto en el sistema de suministro deseado Las composiciones farmacéuticas adecuadas para administración oral pueden presentarse como formas de dosis unitarias discretas tales como cápsulas de gelatina dura o blanda, cápsulas, cachets o tabletas que contienen fc) cada una, una cantidad predeterminada del ingrediente activo, como un polvo o como granulos, como una solución, una suspensión o como una emulsión El ingrediente activo también puede estar presente como un bolo, electuapo o pasta Las tabletas o capsulas para administración oral pueden contener excipientes convencionales tales como agentes aglutinantes, llenadores, lubricantes, desintegradores o agentes humectantes Las tabletas pueden ser revestidas de acuerdo con métodos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, k con revestimientos entéricos Las preparaciones liquidas orales pueden estar en forma de, por ejemplo, suspensión acuosa u oleosa, soluciones, emulsiones, jarabes o elíxires, o pueden estar presentes como un producto seco para constitución con agua u otros vehículo adecuado antes de usarse Dichas preparaciones liquidas pueden contener aditivos convencionales tales como agentes de suspensión, agentes emulsificantes, vehículos no acuosos (que pueden incluir aceites comestibles) o conservadores Los compuestos también se pueden formular para administración parenteral (por ejemplo, por inyección, por ejemplo, inyección de bolo o infusión continua) y se pueden presentar en forma de dosis unitaria en ampolletas, jeringas prellenadas, contenedores de infusión de bolo pequeños o en contenedores de dosis múltiples con un conservador añadido Las compuestos pueden adoptar formas tales como suspensiones, soluciones, emulsiones en vehículos oleosos u acuosos, y pueden contner agentes formuladores tales como agentes de suspensión estabilización y/o dispersión En forma alternativa, • el ingrediente activo puede estar en forma de polvo obtenido por aislamiento aséptico de solido estéril o por leofilizacion de solución para constituirse con un vehículo adecuado, por ejemplo, agua estéril libre de pirógenos, antes de usarse 15 Para administración tópica a la epidermis, los compuestos se pueden formular como pomadas, cremas o lociones, o como el ingrediente activo de un parche transdermico Los sistemas de suministro transdermico • adecuados se describen, por ejemplo, en Fisher et al, (Patente de E U A No 4,788,603) o Bawas et al, (Patente de E U A No 4,931 ,279, 4,668,504 y 4,713,224) Las pomadas y cremas, por ejemplo, se pueden formular con una base acuosa u oleosa con la adición de agentes espesantes y/o gehficantes adecuados Las lociones se pueden formular con una base acuosa u oleosa y generalmente también contendrán uno o más agentes emulsificantes, agentes estabilizadores, agentes dispersantes, agentes de suspensión, agentes espesantes o agentes colorantes. El ingrediente activo también puede ser suministrado a través de iontoforesis, por ejemplo, como se describe en las ^ Patentes de E.U.A. Nos. 4,140,122, 4,383,529 ó 4,051 ,842. 5 Las composiciones adecuadas para administración tópica en la boca incluyen formas de dosis unitaria tales como trociscos que comprenden I ingrediente activo en una base de sabor, por lo general sacarosa y acacia o tragacanto; pastillas que comprenden el ingrediente activo en una base inerte tales comogelatina y glicerina o sacarosa y acacia; geles mucoadherentes, y feo enjuages bucales que comprenden el ingrediente activo en un vehículo líquido adecuado. Cuando se desea, las composiciones anteriormente descritas se pueden adaptar para proveer liberación sostenida del ingrediente activo empleado, por ejemplo, mediante combinación del mismo con ciertas matrices de polímero hidrofílico, por ejemplo, geles naturales, geles de polímeros sintéticos o mezclas de los mismos. . Las composiciones farmacéuticas de conformidad con la invención también pueden contener otros adyuvantes tales como saborizantes, colorantes, agentes antimicrobianos o conservadores. 20 Las composiciones también se pueden administrar a través de inhalación, usando un vehículo de suministro adecuado. Además se apreciará que la cantidad del compuesto o una sal activa o derivado del mismo, requerida para usarse en el tratamiento variará no sólo con la sal particular seleccionada sino también con la rutina de administración, la naturaleza de la condición que se está tratando y la edad y condición del paciente y finalmente será a discreción del médico que atiende al paciente. Sin embargo, en general una dosis adecuada estará en la escala de alrededor de 0.5 a aproximadamente 100 mg/kg/día, por ejemplo, de alrededor de 10 a aproximadamente 75 mg/kg de peso corporal por día, tal como 3 a aproximadamente 50 mg por kilogramo de peso corporal del receptor por día, preferiblemente en la escala de 6 a 90 mg/kg/día, muy preferiblemente en la escala de 15 a 60 mg/kg/día. El compuesto se administra convenientemente en una forma de dosis; por ejemplo, que contiene de 5 a 1000 mg; convenientemente de 10 a 750 mg, muy convenientemente, de 50 a 500 mg de ingrediente activo por forma de dosis unitaria. Idealmente, el ingrediente activo se administrará para lograr concentraciones máximas en el plasma del compuesto activo de alrededor de 0.5 a aproximadamente 75 µM, muy preferiblemente de alrededor de 1 a aproximadamente 50 µM, muy preferiblemente de alrededor de 2 a aproximadamente 30 µM. Esto se puede lograr, por ejemplo, por inyección intravenosa de una solución al 0.05 a 5% del ingrediente activo opcionalmente en solución salina o se puede administrar oralmente como un bolo que contenga aproximadamente 1-100 mg del ingrediente activo. Los niveles deseables en la sangre se pueden mantener por infusión continua para proveer aproximadamente 0 01-5 0 mg/kg/hora o por infusiones intermitentes que contengan aproximadamente 04-15 mg/kg del ingrediente activo La dosis deseada se puede presentar convenientemente en una sola dosis o como dosis divididas administradas a intervalos apropiados, por • ejemplo, como dos, tres, cuatro o mas subdosis por día La subdosis misma se puede dividir, por ejemplo, en vanas administraciones discretas muy separadas, tales como inhalaciones múltiples de un insuflador o por aplicación de una pluralidad de gotas en los ojos Los inhibidores que aquí se describen también se pueden usar para la detección y cuantificacion de la actividad de una cisterna proteasa en una muestra pura, mezcla o fluido biológico o tejido La actividad se puede medir con un sustrato de proteasa en ausencia y presencia de una concentración conocida del inhibidor Los inhibidores específicos también se pueden usar para confirmar que la actividad observada se debe a una proteasa particular Los inhibidores que aquí se describen también se pueden usar para identificar y purificar cisterna proteasas Los inhibidores pueden ser covalentemente ligados a un soporte solido, tal como una columna de afinidad o esferas de afinidad usadas en métodos intermitentes, y se pueden usar para purificar una proteasa o enriquecer una mezcla que contenga la proteasa El inhibidor puede ser ligado a un soporte solido o esfera ya sea directamente o a través de un enlazador de longitud variable, de tal manera que el enlazador no interfiera con las propiedades de enlace (véase, por ejemplo, Thomberry, N , Methods m Enz , 244 615-31 (1994)) Aunque la invención se ha descrito en relación con modalidades especificas de la misma, se entenderá que puede sufpr modificaciones y esta solicitud esta diseñada para cubrir cualesquiera variaciones, usos o f adaptaciones de la invención siguiendo en general los principios de la invención e incluyendo dichas desviaciones de la presente descripción que estén dentro de la practica conocida o acostumbrada en la técnica a la cual se refiera la invención y según pueda aplicarse a las características esenciales hasta ahora expuestas, y que este dentro del alcance de las reivindicaciones anexas Los siguientes ejemplos se dan para ilustrar la invención y no pretenden ser inclusivas de ninguna manera EJEMPLOS Las abreviaturas usadas aquí se definen de la siguiente manera DMF - dimetilformamida, HBTU - hexafluorofosfato de 2-(1 H- benzotpazol-1-?l)-1 ,1 ,3,3-tetramet?luron?o, DIEA - diisopropiletilamina, THF - Í tetrahidrofurano, CH3CN-aceton?tplo, EDTA-Na2 - sal de sodio de acido etilendiaminotetraacetico, Mtr -4-metox?-2,3 6-tpmet?lbencensulfon?lo, Bop-CI — cloruro b?s(2-oxo-3-oxazol?d?n?l)fosfon?co, EtOH alcohol etílico, EtOAc -acetato de etilo, LDA diisopropilamida de litio, EDCI - clorhidrato de 1-(3-d?met?lam?noprop?l)- 3-et?lcarbod??m?da, NMM - N-metilmorfo na, HOBT - 1-h?drox?benzotpazol, TFA - acido tpfluoroacetico EJEMPLO 1 Síntesis de ácido ff2-í5-(3-metilbencil)-1,3.4-oxadiazolil1carbonil1-2-(S)- metilpropilí-L-fenilalanamido-(3R)-(isobutil)succínico (CM-0019) f El intermediario (benciloxicarbonil)-L-valil-N-[1 -(2-[5-(3-metilbencil)- 1,3,4-oxadiazolil]hidrox¡metil)-2-(S)-met?lprop¡l]-L-prolinamida se preparó de la siguiente manera: a. Acido 3-(S)-amino-2-(R,S)-hidroxi-4-metil pentanoico fco A una solución que contenía 3-(S)-[(benciloxicarbonil)amino]-2- acetoxi-4-metilpentanenitrilo (véase ejemplo 1 de WO 96/16080 (15.2 g, 50.0 mmoles) en 183 ml de dioxano se añadieron 183 ml de ácido clorhídrico concentrado y 7.45 ml de anisol. La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante la noche. La reacción de hidrólisis se dejó enfriar a temperatura ambiente y después se concentró bajo vacío. La solución acuosa resultante se extrajo con éter (2X). La fase acuosa se colocó en una columna de Dowex 50X8- . 100 (forma H+, previamente eluída con agua desionizada a un pH = 7). La columna se eluyó con hidróxido de amonio 2.0 N y las fracciones puras se concentraron para dar 5.53 g (75%) de ácido 3-(S)-amino-2-(R,S)-hidroxi-4- 20 metilpentanoico como un sólido amarillo pálido. FAB MS [M+H] m/z: calculado: 148, encontrado: 148. b. Acido 3-(S)[(benciloxicarbonil)amino]-2-(R,S)-hidrox?-4-metil pentanoico A una solución bajo una atmósfera de nitrógeno que contenía 1.0 g (6.8 mmoles) de ácido 3-(S)-amino-2-(R,S)-hidroxi-4-metilpentanoico en 9.5 ml de NaOH 1 N y 10 ml de dioxano se añadieron 1.43 g (8.4 mmoles) de cloroformiato de bencilo. El pH se mantuvo por arriba de 8 con NaOH 1 N según fuera necesario. La mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se diluyó con agua y se lavó con éter. La capa acuosa se acidificó con HCl 1 N a un pH de 2 y se extrajo con éter (2X). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se evaporaron al vacío para dar 1.75 g (92%) de ácido 3-(S)-[(benciloxicarbonil)am¡no]-2-(R,S)-hidroxi-4-met?lpentanoico como un aceite viscoso amarillo. FAB MS [M+H] m/z: calculado: 282, encontrado: 282. c. Acido 3-(S)-[(benciloxicarbonil)amino]-2-(R,S)-acetoxi-4-metil pentanoico A una solución de ácido 3-(S)-[(benciloxicarbonil)-amino]-2-(R,S)-hidroxi-4-metilpentanoico (1.70 g, 6.04 mmoles) y piridina (4.9 ml) se añadió anhídrido acético (5.7 ml, 6.17 g, 60.4 mmoles) gota a gota a temperatura ambiente. La reacción se dejó agitar durante la noche y se diluyó con acetato de etilo y se lavó con agua (2X). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó al vacío para dar un aceite espeso. El residuo se purificó por cromatografía de columna sobre gel de sílice con 15% de metanol/diclorometano para dar 1.56 g (80%) de ácido 3-(S)-[(benciloxicarbonil)- amino]-2-(R,S)-acetoxi-4-metilpentanoico como un aceite viscoso amarillo claro. FAB MS [M+H] m/z: calculado: 324, encontrado: 324. • 5 d. 1-[(3-metilfenilacetil)-2-(2-(R,S)-acetoxi)-3-(S)-[(benciloxicarbo- nil)amino]-4-metilpentanoil]hidrazina A una solución que contenía ácido 3-(S)-[(benciloxicarbonil)- amino]-2-(R,S)-acetoxi-4-metilpentanoico (2.3 g, 7.11 mmoles) en 40 ml de DMF bajo una atmósfera de nitrógeno a 0°C se añadió 1.31 g (9.69 mmoles) de ||0 HOBT y 1.36 g (7.09 mmoles) de EDCI. Después de agitarse durante 30 minutos, se añadieron 1.20 g (7.31 mmoles) de hidracida 3-metilfenil acética [preparada análogamente a las hidracidas monoácidas citadas por Rabins et al., (J. Org. Chem., 30.2486 (1965))] y 1.0 ml (9.10 mmoles) de NMM. La reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. La reacción se diluyó con acetato de etilo y se lavó con sulfato ácido de potasio al 5%, bicarbonato de sodio saturado, salmuera y agua. La fase orgánica se secó sobre , sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó bajo presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía de columna sobre gel de sílice con 10% de metanol/diclorometano para dar 2.31 g (89.0%) del compuesto como un sólido blanco. FAB MS [M+H] m/z: calculado: 470, encontrado: 470. e. 1 -[2-[5-(3-metilbencil)-1 ,3, 4-oxod¡azolil]-1-acetoxi-2-(S)-(bencil- oxicarbonil)amino]-3-metilbutano A una solución que contenía 2.31 g (4.92 mmoles) de 1-[(3- metilfenilacetil)-2-(2-(R,S)-acetoxi)-3-(S)-[(benciloxicarbonil)amino]-4- '# metilpentanoil]hidraz¡na en 25 ml de piridina y 1.88 g (9.86 mmoles) de cloruro de toluensulfonilo se calentó a reflujo bajo una atmósfera de nitrógeno durante 72 horas. El solvente se removió bajo presión reducida y el residuo se disolvió en acetato de etilo y se lavó con agua. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó bajo presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía de columna en gel de sílice con 5% de acetato de etilo/hexano para dar 1.41 g (63.5%) del compuesto del título. FAB MS [M+H] m/z: calculado: 452, encontrado: 452. f. 1-[2-[5-(3-metilbencil)-1,3,4-oxodiazolil]-2-(S)-(benciloxicarbonil)- amino]-3-metilbutan-1-ol A una solución que contenía 1.80 g (3.99 mmoles) de 1-[2-[5-(3- metilbenci )-1 ,3,4-oxadiazolil)-1-1-acetoxi-2-(S)-(benc¡loxicarbon¡l)amino]-3- metilbutano y 0.72 g (5.21 mmoles) de carbonato de potasio en 30 ml de metanol y 8 ml de agua se dejó agitar a temperatura ambiente durante 30 minutos. Bl solvente se removió bajo presión reducida y el residuo se disolvió en acetato de etilo y se lavó con agua. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó bajo presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía de columna sobre gel de sílice con 60% de acetato de etilo/ hexano para dar 1 46 g (89 3%) del compuesto del titulo FAB MS [M+H] m/z calculado 410, encontrado 410 g Clorhidrato de 1-[2-[5-(3-met?lbenc?l)-1,3,4-oxad?azol?l]-2-(S)- ^ am?no-3-met?lbutan-1-ol 5 A una solución que contenía 1 31 g (3 20 mmoles) de 1-[2-[5-(3- met?lbenc?l)-1 ,3,4-oxad?azol?l]-2-(S)-(benc?lox?carbon?l)am?no]-3-met?lbutan-1 -ol en 25 ml de acido tpfluoroacetico bajo una atmosfera de nitrógeno a 0°C se añadió 0 43 ml (3 94 mmoles) de tioanisol La reacción se dejo calentar a temperatura ambiente durante la noche El solvente se removió bajo presión reducida y el feo residuo se disolvió en éter y se enfrio a -78°C bajo una atmosfera de nitrógeno A esta solución se añadieron 3 ml (3 mmoles) de acido clorhídrico 1N en éter El solido blanco resultante se dejo sedimentar y el éter se decanto Se añadió mas éter y se decanto (3X) El solido se seco bajo vacio para dar 0 92 g (92 2%) del compuesto del titulo FAB MS [M+H] m/z calculado 276, encontrado 276 15 (4S)-4-benc?l-3-[4'-(met?l)pentano?l]-2-oxazol?d?nona , a acido 4-met?lvalepco (6 56 g, 55 6 mmoles) se disolvió en CH2CI2 seco (40 ml) bajo 2 y se enfrio a 4°C Se añadió cloruro de oxalilo (54 ml, 63 5 mmoles), seguido de 4 gotas de DMF seco Ocurrió evolución rápida de 20 CO2 La mezcla de reacción se dejo calentar a temperatura ambiente durante 2 horas no hubo evolución evidente de CO2 adicional Los solventes se evaporaron mediante evaporación giratoria y el cloruro acido se destilo bajo vacío 'H-RMN (300 MHz, CDCI3) d 0 88-0 93 (m, 6H), 1 59-1 64 (m, 3H), 2 90 (t, 2H, . = 7 5 Hz) b (S)-(-)-4-benc?l-2-oxazol?d?nona (8 93 g, 504 mmoles) se disolvió en THF secó bajo N2 y se enfrió a -78°C Se añadió nbutil-litio (1 6 M en hexano, 32 ml, 504 mmoles) gota a gota para mantener la temperatura <-70°C La mezcla se agitó durante 25 minutos a -78°C, después una solución del cloruro ácido preparada como se indicó anteriormente en THF (30 ml) seco se añadió gota a gota para mantener la temperatura <-65°C La mezcla de reacción se agito durante la noche y se dejó calentar a 15°C la reacción se extinguió mediante adición cuidadosa de NH4CI saturado (70 ml) Se removió THF bajo presión reducida y la suspensión acuosa resultante se extrajo con EtOAc (100 ml) La capa orgánica se lavo con NaOH 0 5 N, H2O, salmuera La capa orgánica se secó sobre MgS04, se filtro y se evaporó bajo vacio para regresar 12 7 g de aceite amarillo crudo El material crudo se purificó cromatografía de gel de sílice (10% de EtOAc/hexano) y se secó bajo vacio para regresar 9 0 g (69% de rendimiento) de aceite amarillo pálido C-18 CLAR RT=16 5 min , 96% puro a 215 nm (10-100% solv B/25 min, solvente A=0 1% (v/v)TFA/H2?, solvente B=0 1 % TFA acetonitplo, FAB-MS m/z 276(M-H)-, 1 H-RMN (300 MHz, CDCI3) d 0 94 (d, 6H, J=6 3 Hz, d-[(CH3)2]), 1 53-1 72 (m, 3H, tí CH2,g CH), 2 76 (dd, 1H, J=13 3, 9 6 Hz, oxazolidmona 5-CHJH), 2 90-2 97 (m, 2H), 3 29 (dd, 1H, J=13 2, 3 3 Hz, oxazohdinona 5CHH), 4 15-4 20 (m, 2H), 4 64-4 70 (m, 1 H, oxazohdinona 4-CH), 7 17-7 39 (m, 5H, Ph-H) c. (4S)-4-bencil-3-(2'R)-2'-[[(ter-butoxicarbonil]-4'-(metil)pentanoil]-2-oxazolidinona Diisopropilamina (5.05 ml, 36 mmoles) se diluyó con THF seco (20 ml) y se enfrió a -20°C bajo N2. Se añadió n-butil-litio (1.6 M en hexano, 23 ml, 36 mmoles) gota a gota para mantener la temperatura <-10°C. La temperatura se incrementó a 4°C y se agitó durante 30 minutos para generar LDA. El matraz se enfrió a -78°C y se añadió (4S)-4-bencil-3-[4'-(metil)pentanoil]-2-oxazolidinona en THF seco (15 ml) gota a gota para mantener la temperatura <-70°C. La reacción se agitó durante 30 minutos a -78°C, después se añadió bromoacetato de butilo (4.9 ml, 33 mmoles) en THF seco gota a gota para mantener la temperatura <-65°C. La mezcla se agitó y se dejó calentar a -10°C durante la noche. Después de 15 horas, la reacción se extinguió mediante adición cuidadosa de agua seguida de evaporación de THF. Se añadió agua (100 ml) a la suspensión y la mezcla cruda se extrajo con EtOAc (100 ml). La capa orgánica se lavó con agua y salmuera; después se secó sobre MgS04, se filtró y se secó bajo vacío para dar 13.3 g de aceite amarillo crudo. La cromatografía de gel de sílice en 15% de EtOAc/hexano dio 7.84 g (61 % de rendimiento) de un producto sólido blanco. C-18 CLAR a TA = 19.5 min, 99% puro a 215 nm (10-100% solv. B/25 min; solvente A=0.1 % (v/v)TFA H2?; solvente B=0.1% TFA/acetonitrilo; FAB-MS m/z 390 (M+H)-, 334 (M-tBu+H)-. "?-NRM: (300 MHz, CDCI3) d 0.92 (d, 3H, J=6.0 Hz), 0.94 (d, 3H, j=5.8 Hz), 1.28-1.40 (m, 1 H, CHMe2), 1.43 (s, 9H3), 2.49 (dd, 1 h, J=16.7, 4.6 Hz), 2.72 (dd, 1 H, J=10.3, 1.1 Hz), CQ2C (CH3)3), 2.76 (dd, 1 H, J=10.3, 2.2 Hz, Ph-CHH), 3.35 (dd, 1 h, J=13.5, 3.1 Hz), 4.15-4.18 (m, 2H), 4.21- 4.26 (m, 1 H), 4.52-4.61 (m, 1 H), 7.27-7.34 (m, 5H, Ph-H). d. Acido (2R)-2-[(ter-butoxicarbonil)metil]-4-(metil)pentanoico • . 5 4(S)-4-bencil-3-(2'R)-2'-[[(ter-butoxicarbonil)met¡l]-4'-(metil)penta- noil]-2-oxazolidinona (5.89, 15.1 mmoles) se disolvió en THF seco (100 ml) y agua (25 ml) se añadieron. La mezcla se enfrió a 4°C bajo N2- Se añadió H2O2 (7.6 ml) seguido de la adición gota a gota de LiOH (0.76 g, 18.2 mmoles) en H2O (20 ml) durante 20 minutos. La mezcla se agitó durante 1 hora y se dejó k? calentar a temperatura ambiente. La mezcla se enfrió nuevamente en un baño de hielo y se extinguió mediante la adición de Na2S03 (3.1 g) en agua (20 ml).
Se removió THF mediante evaporación giratoria, la capa acuosa restante se lavó con EtOAc (4x70 ml), después se acidificó a aproximadamente pH 2 con HCl concentrado después de estratificar con EtOAc fresco. La mezcla se extrajo inmediatamente con EtOAc (3x80 ml). Los extractos de EtOAc combinados se secaron sobre MgS04, se filtraron y se evaporaron para dar 3.29 g de aceite A claro (95% de rendimiento de crudo) que no mostró trazas de material de partida por CLAR. este material se uso sin purificación adicional. 1 H-RMN (300 MHz, CDCI3) d 0.90 (d, 3H, J=6.4 Hz, CH3), 0.94 (d, 20 3H, J=6.5 Hz, CH-3), 1.20-1.48 (m, 1 H, CHM32), 1.44 (s, 9H, C(CH3)3), 1.50- 1.72 (m,2H), 2.37 (dd, 1 H, J=16.4, 2.4 Hz), 2.59 (dd, 1H, J=16.4, 2.6 Hz), 2.80- 2.95 (m, 1 H). e Ester metílico de ter-but?l(3R}-3-(?sobut?l)succ?n?l~L-fen?lalan?no A una solución de succinato de ter-but?l-(3R)-3-(?sobut?lo) (10 82 g, 47 0 mmoles) en 90 ml de DMF seco se añadió HBTU (17 45 g, 46 0 mmoles), seguido de DIEA (18 43 g, 142 6 mmoles) Después de agitarse durante 10 -# 5 minutos, se añadió clorhidrato de ester metílico de L-fenilalanina (10 0 g, 46 36 mmoles) Esto se dejo agitar a temperatura ambiente durante la noche El solvente se removió bajo presión reducida y el residuo se disolvió en 200 ml de acetato de etilo La solución se lavo con agua, HCl 1 M (2x), NaHC03 saturado (2x), salmuera, y los compuestos orgánicos se secaron con MgS04 anhidro La fo mezcla se filtro y el solvente se removió bajo presión reducida El residuo se cristalizo a un solido blanquecino bajo agitación durante la noche dando 13 3 g (74%) de ester metílico de ter-but?l(3R)-3-(?sobut?l)succ?n?l-L-fen?lalan?no C-18 CLAR RT=16 9 min , 98% puro a 215 nm (10 a 100% solvente B/25 mm, solvente A=0 1 % TFA H.20, solvente B=0 1% TFA/acetonitplo) 15 FAB-espectro de masa m/z (M+H)- = 392, teoría = 392 1 H RMN (CDCI3) d [0 85 (d, J= 7 5 hz), 0 88 (d, J = 7 5 hz), 6H], [1 10-1 23 (m, 1 H)], [1 44 (s, 9H)], [1 45-1 65 (m, 2H)], [2 22-2 32 (m, 1 H)], [2 50- 2 66 (m, 2H)], [3 10 (d, J = 6 Hz) 2H], [3 69 (s 3H)], [4 82-4 92 (m, 1H)], [6 19 (d, J = 9 hz), 1 H], [7 13-7 33 (m, 5H)] 20 f ter-but?l(3R)-3-(?sobut?l)succ?n?l-L-fen?lalan?na Una solución de ester metílico de ter-but?l(3R)-3-(?sobut?l)succ?n?l- fenilalanino (2 0 g, 5 10 mmoles) en 5 ml de metanol se enfrio a 4°C en un baño de hielo A esa solución se añadieron 4 ml de una solución acuosa de hidroxido de litio (333 mg, 7 94 mmoles) y esta solución se agito y se dejo calentar a temperatura ambiente durante la noche La solución se concentro a un aceite bajo presión reducida El residuo se disolvió en 100 ml de acetato de etilo, se lavo con acido cítrico al 10%, agua y se seco con MgS0 anhidro La mezcla se filtro y el solvente se removió bajo presión reducida, se seco bajo vacio durante la noche para dar 1 8 g (95%) de ter-but?l(3R)-3-(?sobut?l)succ?n?l-L-fen?lalan?na como un aceite amarillo claro C-18 CLAR RT = 14 7 min , 95% puro a 254 nm (10 a 100% solvente B/25 min, solvente A = 0 1 % TFA/H2O, solvente B = 0 1 % TFA aceton?tplo= Fab espectro de masa M+H = 378, teoría = 378 1 H RMN (CDCI3) d [0 83 (d, J = 6 0 hz), 0 85 (d, J = 6 0 hz), 6H], [1 10-1 25 (m, 1 H)], [1 44 (s 9H)], [1 45-1 65 (m, 2H)], [2 24-2 35 (m, 1 H)], [2 48-2 58 (m, 2H)], [3 07-3 27 (m, 2H)], [4 79-4 93 (m, 1 H)], [6 36 (d, J = 9 Hz), 1 H], [7 20-741 (m, 5H)] g ter-but?l(3R)-3-(?sobut?l)succ?n?l-[[2-[5-(3-met?lbenc?l)-1,3,4-oxad?azol?l]-(R,S)-h?drox?met?l]-2-(S)-met?lprop?l]-L-fen?lalan?nam?da A una solución de ter-but?l(3R)-3-(?sobut?l)succ?n?l-fen?lalan?na (1 8 g, 4 80 mmoles) en 40 ml de DMF se añadió HOBT (676 mg, 5 0 mmoles) Esto se enfrio en un baño de hielo a 4°C Después se añadió EDCI (921 mg, 4 80 mmoles) Después de agitarse durante 30 minutos, una solución de clorhidrato de [2-[5-(3-met?lbenc?l)-1 ,3,4-oxad?azol?l]-2-(S)-am?no-3-met?lbutan-1 -(R,S)-ol (1 50 g, 4 24 mmoles) en 20 ml se añadió gota a gota, seguido de N-metilmorfohna (0 77 g, 7 66 mmoles) y la reacción se dejo agitar y calentar a temperatura ambiente durante la noche La mayor parte del solvente se removió bajo presión reducida y la mezcla se diluyo con acetato de etilo Después se lavó con NaHC03 saturado, KHS04 al 5%, salmuera, y los compuestos orgánicos se secaron con MgS04 anhidro La mezcla se filtró y el solvente se removió bajo presión reducida El residuo se purifico por cromatografía de columna (gel de sílice, acetato de etilo hexano 50 50 a 65 35) para dar 1 30 g, 43% de ter-but?l(3R)-3-(?sobut?l)succ?n?l-[[2-[5-(3-met?lbenc?l)-1 ,3,4-oxad?azol?l]-(R,S)-h?drox?met?l]-2-(S)-met?lprop?l]-L-fen?lalan?nam?da como un solido espumoso blanquecino C-18 CLAR RT = 18 3, 18 7 min diaesteréomeros, 90% puro a 215 nm (10 a 100% solvente B/25 min, solvente A = 0 1 % TFA H2O, solvente B = 0 1 % TFA/ acetonitplo) FAB espectro de masa m/z (M+H)- = 635, teoría = 635 h ter-but?l-(3R)-3-(?sobut?l)succ?n?l-[[2-[5-(3-met?lbenc?l)-1,3,4-oxad?azol?l]carbon?l]-2-(S)-met?lprop?l]-L-fen?lalan?nam?da A una mezcla agitada de N-clorosuccinamida (1 07 g, 8 0 mmoles) en 25 ml de tolueno seco a 4°C se añadió 0 84 ml (11 45 mmoles) de sulfuro de dimetilo (DMS) bajo una atmósfera de nitrógeno Se formó un precipitado blando después de la adición de DMS Después de 30 minutos, la suspensión resultante se enfrio a -25°C usando tetracloruro de carbono y un baño de hielo seco. Una solución de ter-but?l(3R)-3-(?sobut?l)succ?n?l-[[2-[5-(3-met?lbenc?l)-1 ,3,4- oxad?azol?l]-(R,S)-h?drox?met?l]-2-(S)-met?lprop?l]-L-fen?lalan?nam?da (1 25 g, 1 97 mmoles) en 30 ml de tolueno seco se añadió gota a gota La mezcla resultante se agito durante 1 5 horas a -25°C y se añadió 1 19 ml (8 5 mmoles) de '^fc tpetilamina Después de 15 minutos, se removió el baño frío y la reacción se . 5 monitoreó por CCD, gel de sílice, acetato de etilo hexano (30 70) Después de 1 hora, la mezcla se diluyo con 500 ml de acetato de etilo y se lavo con NaHC03 saturado, salmuera y los compuestos orgánicos se secaron con MgS04 anhidro La mezcla se filtró y el solvente se removió bajo presión reducida El residuo se purifico por cromatografía de columna (gel de sílice), metanol cloroformo, o 0 5 99 5 a 2 5 97 5) para dar ter-but?l(3R)-3-(?sobut?l)succ?n?l-[[2-[5-(3- met?lbenc?l)-1 ,3,4-oxad?azol?l]carbon?l]-2-(S)-met?lprop?l]-L-fen?lalan?nam?da como un solido espumoso blanquecino, 1 0 g, (80 2%) C-18 CLAR a TA = 20 2, 20 7 min diastereoisómeros, 90% puro a 215 nm (10 a 100% solvente B/25 min, solvente A = 0 1% TFA H2O, solvente B = 0 1% TFA acetonitplo) 15 FAB espectro de masa m/z (M+H)- = 633, teoría = 633 1 Acido [[2-[5-(3-met?lbenc?l)-1,3,4-oxad?azol?l]carbon?l]-2-(S)- met?lprop?l]-L-fen?lalan?nam?da-(3R)-(?sobut?l)succ?n?co A una solución de ter-but?l(3R)-3-(?sobut?l)succ?n?l-[[2-[5-(3- 20 met?lbenc?l)-1 ,3,4-oxad?azol?l]carbon?l]-2-(S)-met?lprop?l]-L-fen?lalan?nam?da (1 0 g, 1 58 mmoles) en 25 ml de diclorometano (DCM) enfriada a 4°C en un baño de hielo, se añadió 25 ml d ácido tpfluoroacético (TFA) Este se agitó durante 1 hora El solvente y TFA se removieron bajo presión reducida, seguido de coevaporación con DCM (3x). El material se purificó por gradiente RP-CLAR CH3CN:H2? (25:75 a 100:0 en 60 minutos) para dar 292 mg (32%, 0.51 mmoles) del cual 52 mg fueron puros como un sólido blanco después de la 'F liofilización. C-18 CLAR a TA = 15.8 min, 95% puro a 215 nm (10 a 100% . 5 solvente B/25 min; solvente A = 0.1% TFA H2O; solvente B = 0-1 % TFA/acetonitrilo). FAB espectro de masa: m/z (M+H)- = 577; teoría = 577. 1 H-RMN (400 MHz, CDCI3)d 0.76 (d, 3H, J = 6.8 Hz), 0.85 (d, 3H, J=6.4 Hz), 0.87 (d, 3H, J = 6.4 Hz), 0.93 (d, 3H, J = 6.8 Hz), 1.25-1.32 (m, 1 H), 1.48-1.61 (m, 2H), 2.28- fo 2.36 (m, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.44-2-49 (m, 1 H), 2.61-2.69 (m, 2H), 2.95 (dd, 1 H, J=13.6, 8.4 Hz), 3.09 (dd, 1 H, J=16.6, 6.4 Hz), 4.24 (s, 2H), 4.67 (dt, 1 H, J=8.0, 6.8 Hz), 5.19 (dd, 1 H, J=8.4, 6.0 Hz), 6.52 (br. d, 1 H, J=8.4 Hz), 6.81 (br. d,1 H, J=7.6 Hz), 6.94-6.99 (m, 1 H), 7.10-7.19 (m, 7H). 13C-R N(100 MHz> CDCI3) d 17.26, 19.54, 21.33, 22.13, 22.17, 25.75, 30.84, 31.82, 36.74, 38.16, 40.54, 15 41.29, 55.16, 61.55, 126.1 , 126.8, 128.6, 128.8, 129.0, 129.1 , 129.7, 132.5, 136.2, 139.0, 160.2, 167.9, 171.6, 175.0, 175.7, 184.4. • EJEMPLO I Acetil-L-leucil-N-H-f2-.(5-feniD-1 ,3,4-oxadiazolil1carbonill-4-(quanidino)- *f butill-L-leucillamida (CQ-0002) • 5 Intermediario 2-fenil-1 ,3,4-oxadiazol Benzoilhidrazida (200 mg) recién cristalizada de cloroformo se suspendió en 5 ml de ortoformiato de trietilo y se calentó a reflujo bajo nitrógeno en un baño de aceite a 160°C durante 3 horas. La mezcla se enfrió a fo temperatura ambiente, se enfrió en hielo y se trató con 50 ml de agua y 10 ml de solución de KHS04 al 10%. La mezcla se agitó aproximadamente durante 2 minutos, después se añadieron 50 ml de EtOAc y la agitación se continuó durante 10 minutos. La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo. Todas las capas de acetato de etilo se combinaron y se lavaron con solución de bicarbonato de sodio al 10% y solución de cloruro de sodio saturada. Secando sobre sulfato de sodio, la evaporación giratoria y el f secado adicional bajo alto vacío dieron 204 mg de un aceite analíticamente puro que se cristalizó durante el reposo. La benzoilhidrazida (Aldrich) comercialmente disponible en esta reacción se puede usar, pero el producto resultante a menudo contiene una menor impureza que puede ser removida después de la cristalización, por cromatografía instantánea sobre gel de sílice eluyendo con 0.10% de acetona en hexano. 1 H-RMN-CDCI3, 7.49-7.62 (m, 3H), 8.12 (d, J=6, 2H), 8.49 (s, 1 H).
A. Acetil-L-leucil-arginina(Mtr) (N-metil)-(N-metoxi)-amida: acetil:Leu-Leu-OH (133 mg) y arginina (Mtr) -N-metil-N-metoxi amida (100 mg) se disolvieron en 10 ml de DMF y se trataron con 243 uL de DIEA y 212 mg de HBTU. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas y se trató de acuerdo con el método A. Secando sobre Na2S04, evaporación giratoria del solvente y cromatografía instantánea sobre gel de sílice (50% de acetona en hexano) dio 270 mg del compuesto del título como una espuma.
B. Acetil-L-leucil-N-[1-[2-[(5-fenil)-1,3,4-oxadiazolil]carbonil]-4-[(4-metoxi-2,3,6-trímetilbencen-sulfonil)-guanidino]-but¡IJ-L-leucilamida: 2-fenil-1 ,3,4-oxadiazol (194 mg) en 2 ml de THF seco se enfrió a -78°C. Se añadió n-butil-litio (1.46 mmoles) como una solución 2.5 M en hexanos. La reacción se agitó durante 20 minutos a -78°C y después se colocó en un baño de enfriamiento a 0°C. Después se añadió acetil-Leu-Leu-Arg-(Mtr)-N-(CH3)-OCH3 en 2 ml de THF seco. La reacción se colocó en un baño de agua a temperatura ambiente y se agitó durante 1 hora, después la solución se enfrió a 0°C, y se añadieron 20 ml de solución de cloruro de amonio saturada bajo nitrógeno con agitación rápida. Después de varios minutos de agitación vigorosa, la solución se extrajo con EtOAc. la solución de acetato de etilo se lavó con una solución de cloruro de sodio saturada, se secó sobre sulfato de sodio, se concentró a un aceite de color café pálido por evaporación giratoria.
C Acet?l-L-leuc?l-N-[1-[2-[(5-fen?l)-1,3,4-oxad?azol?l]carbon?l]-4- (guan?d?no)-but?l]-L-leuc?lam?da Una mitad del producto crudo del paso B se disolvió en una solución preformada de 2 ml de TFA y 100 uL de tioanisol La reacción se agitó bajo nitrógeno durante 4 horas El solvente se removió bajo vacío y el producto se precipitó con éter seco El precipitado se recogió en metanol y se concentró bajo vacío, el residuo se trituró con éter seco y se secó bajo vacío para producir 22 mg del compuesto del título como un polvo incoloro Se obtuvieron muestras de pruebas biológicas por cromatografía de C 18 de fase inversa (5-80% CH3CN, 0 1 % TFA, durante 40 minutos) EM m/z (M+H)-571 (CQ-0002) EJEMPLO lll Síntesis de acetil-L-leucil-N-ri-r3-r5-metin-1.2.4-oxadiazolincarbonill-etil-L- leucilamida (CQ-OOO 4.
A N°-benc?lox?carbon?l-L-alan?na (N- et?l-N-metox?)am?da Cbz-L-alanina (1 0 g) se disolvió en 10 ml de DMF seco con 1 55 ml de DIEA Se añadió HBTU (1 78 g) y la reacción se agitó durante 30 minutos Se añadió clorhidrato de dimetilhidroxilamina (0 87 g) seguido de 1 55 ml de DIEA adicional La reacción se agitó aproximadamente 15 horas a temperatura ambiente El tratamiento de acuerdo con el método general A, secado sobre sulfato de sodio anhidro, evaporación giratoria y secado bajo alto vacío produjo 0 96 g de un sólido incoloro B. N°-bßnciloxicarbonil-L-alanina: Una solución de 6 ml de hidruro de litio-aluminio en THF se enfrió bajo nitrógeno a 0°C y se añadió gota a gota una solución de compuesto A (0.68 g) en 4 ml de DMF. Después de agitarse f durante 15 minutos a 0°C, la reacción se extinguió cuidadosamente con 20 ml de EtOAc y 10 ml de una solución de KHS04 al 10%. La capa orgánica se lavó HCl 1 N y una solución de NaHC03 al 10%. Secando sobre sulfato de sodio, remoción de solvente por evaporación giratoria y secando bajo alto vacío se obtuvo 0.38 g de un aceite incoloro.
C. 2-(R, S)-3-(S)-[(benciloxicarbonil)amino]-2-hidroxi-butanonitrilo: El compuesto B (1.2 g) trietilamina (0.532 ml) y cianohidrina de acetona (1.56 ml) se disolvió en 10 ml de CH2CI2 y se agitó a temperatura ambiente durante aproximadamente 15 horas. El solvente se removió bajo vacío y el residuo se recogió en Et2? y se lavó con una solución saturada de cloruro de sodio. 15 Secando sobre sulfato de sodio anhidro, evaporación giratoria y bombeando bajo alto vacío se obtuvo 1.3 g de la cianohidrina. t D. 2-(R,S)-3-(S)-[(benciloxicarbonil)amino]-2-acetoxi-butanonitrilo: El compuesto C (1.3 g) se disolvió en 2 ml de piridina seca y se trató con 3.17 ml 20 de anhídrido acético. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas y después se diluyó con acetato de etilo y se lavó con agua. Secando con sulfato de sodio, evaporación giratoria y bombeando bajo alto vacío se obtuvo 1.34 g del compuesto del título como un aceite.
E. 1-(R,S)-2-(S)-1-[(N-hidroxi)carboximideamido]-1-acetoxi-2- [benciloxicarbonil)-amino]propano: El compuesto D (1.34 g) se disolvió en 21 ml de EtOH y 4.2 ml de agua y se trató con clorhidrato de hidroxilamina (0.422 g) y '?k acetato de sodio (0.991 g) y se calentó a 40°C durante 3 horas. El solvente se removió bajo vacío y el residuo se suspendió en EtOAc y se lavó con agua. Secando sobre sulfato de sodio y por evaporación del solvente se obtuvo 1.1 g de material crudo que se uso sin purificación adicional.
F. 1-(R,S)-2-(S)-1-[3-[5-(metil)-1,2,4-oxadiazolil]-1-acetoxi-fo 2(benciloxicarbonil)-amino]]-propano: El compuesto E (0.45 g) se suspendió en 5 ml de tolueno y se trató con 185 uL de anhídrido acético. La reacción se pudo a reflujo durante aproximadamente 15 horas después de lo cual el solvente se removió por evaporación giratoria y se purificó por cromatografía instantánea sobre gel de sílice eluyendo con 1 :1 de hexano:EtOAc para dar 0.36 g del 15 compuesto del título.
I G. 1-(R,S)-2-(S)-1-[3-[5-(metil)-1,2,4-oxadiazolil]-2-[(benciloxicarbo- nil)-amino]-propan-1-ol: Se disolvió acetato F (180 mg) en 3 ml de MeOH y se trató con una solución de 90 mg de K2CO3 en 1 ml de agua. Después de 20 aproximadamente 20 minutos, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con agua. Secando sobre MgS04, por evaporación giratoria y secando bajo alto vacío se obtuvo 0.160 g del compuesto del título.
H Sal de TFA de 1-(R,S)-2-(S)-1-[3-[5-(met?l)-1,2,4-oxad?azol?l]-2- am?no]-propan-1-ol El compuesto G se recogió en 2 ml de acido tpfluoroacético y se enfrió a 0°C Se añadió tioanisol (100 uL) y la reacción se dejo calentar a *4fc temperatura ambiente y se agito durante aproximadamente 15 horas más El solvente se removió bajo vacío y se removieron trazas de TFA restantes por evaporación giratoria del diclorometano y metanol El producto crudo se purificó parcialmente por elusión a través de una minicolumna de C18 preempacada (Waters Sep-Pak) con acetonitplo en agua La liofi zacion de fracciones apropiadas dio el compuesto del título (0 14 g), que se uso sin purificación ffeo adicional / 1-(R,S)-2-(S)-(benc?lox?carbon?l)-L-leuc?l-N-[1-[(3-[5-(met?l)-1,2,4- oxad?azol?l]-h?drox?met?l]-et?l-]-L-leuc?nam?da El compuesto H (0 14 g) y acetil- Leu-Leu-OH se disolvieron en DMF (3 ml) y se trataron con DIEA (90 uL) y HBTU (234 mg) La reacción se dejó agitar durante aproximadamente 15 horas a temperatura ambiente La mezcla de reacción se diluyo con EtOAc y se lavo con agua El baño de agua se extrajo con diclorometano Todas las capas orgánicas • se combinaron y se concentraron bajo vacío El residuo se purificó por cromatografía de fase inversa de C18 preparativa (CH3CN al 5-60%, TFA al 0 1 %) para dar O 110 g del compuesto del título bajo liofilización J Acet?l-L-leuc?l-N-[1-[3-[5-met?l-1,2,4-oxad?azol?l]carbon?l]-et?l]-L- leucilamida N-clorosuccinimida (75 4 mg) se suspendió en tolueno seco y se enfrió a 0°C. Se añadió sulfuro de dimetilo (60 uL) y la suspensión se agitó superficie 30 minutos a 0°C y después se enfrió a -25°C. El compuesto I (60 mg) se añadió en 2 ml de diclorometano y la reacción se agitó durante 2.5 horas a - - Jfc 25°C. Se añadió trietilamina (84 uL) y la reacción se calentó a temperatura ambiente. Después de agitarse durante 1 hora, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con agua. Secando sobre sulfato de sodio anhidro y removiendo solvente por evaporación giratoria se obtuvo 60 mg de producto crudo. La cromatografía instantánea sobre gel de sílice dio 30 mg del compuesto del título como un sólido incoloro. EM 424 (M+H). fo 1H-RMN d 0.89-0-94 (m, 12H), 1.50 (d, J=9.6, 3H), 1.53-1.69 (m, 6H), 2.01 (s, 3H), 2.70 (s, 3H), 4.50-4.51 (m, 2H), 5.34-5.39 (m, 1 H) 6.23 (d, J=11 , 1 H), 6.81 (d, J=10.9, 1 H), 7.07 (d, J=8.8, 1 H), 13C-RMN d 12.4, 17.6, 22.1 , 22.1 , 22.8 (2 carbonos), 23.1 , 24.7, 24.8, 40.8, 41.1 , 52.7, 164.1 , 170.3, 171.3, 172.3, 178.3, 190. 15 EJEMPLO IV fc AcTtil-L-leucil-N-H -í3-í5-metil-1 ,2,4-oxadiazolil1carbonil1-4-(quanidino)- butill-L-leucilamida (CQ-0007) 2o A. N°-t-butoxicarbonil-L-Arg(Mtr)-(N-metil-N-metoxi)amida: Boc-L- Arg(Mtr)-OH 5.00 g (10.3 mmoles) se suspendió en DMF (10 ml) seco, seguido de clorhidrato de N.O-dimetilhidroxilamina (1.25 g) y DIEA (5.4 ml). Se añadió HBTU (4.28 g) y la reacción se agitó superficie aproximadamente 15 horas a temperatura ambiente. La reacción se trató de acuerdo con en método general A, y la solución de EtOAc se secó sobre Na2S04 y se concentró a 5.23 g de una espuma incolora. i 5 B. N°-t-butoxicarbonil-L-(Mtr)-argin¡na: Se disolvió el compuesto A (2.00 g) en 20 ml de THF seco y se enfrió a 0°C. A esta solución se añadieron 4.72 ml de una solución 1 M de L¡AIH4 en THF gota a gota durante 30 minutos a 0°C. La reacción se enfrió a 0°C mediante la adición lenta de 50 ml de EtOAc, seguido de 15 ml de una solución de KHS04 al 10%. La mezcla se dividió entre feo 100 ml de EtOAc y 50 ml de una solución de HCl 1 N. La capa orgánica se lavó con una solución de HCl 1 N y una solución saturada de cloruro de sodio. La mezcla se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró por evaporación giratoria. Secando bajo alto vacío se obtuvo 1.74 g de un sólido blanco.
C. 2-(R,S)-3-(S)-[(t-butoxicarbonil)amino]-6-[(4-metoxi-2,3,6-trimetil- bencensulfonil)-guanidino]-2-hidroxi-hexanonitrilo: El compuesto B (1.70 g) se i disolvió en 25 ml de metanol y se trató con 0.941 g de cianuro de potasio. La reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante aproximadamente 15 horas. La mezcla de reacción después se dividió entre 150 ml de EtOAc y 25 ml de HCl 1 N. La capa orgánica se lavó con HCl 1 N y se secó sobre una solución de sulfato de sodio anhidra. La evaporación giratoria y el secado adicional bajo alto vacío dieron 1.62 g del compuesto del título.
D. 2-(R,S)-3-(S)-[(t-butoxicarbonil)amino]-6-[(4-metoxi-2,3,6-trimetil- bencensulfonil)-guanidino]-2-acetoxi-hexanonitrilo: El compuesto C (1.62 g) se disolvió en 10 ml de piridina seca y se trató gota a gota con 0.62 ml de anhídrido 'f acético. La reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 3 horas. La 5 solución se diluyó con 100 ml de EtOAc y se lavó tres veces con volúmenes iguales de HCl 1 N después de secarse sobre sulfato de sodio anhidro se concentró por evaporación giratoria a un aceite y se purificó por cromatografía instantánea sobre gel de sílice (50-75% EtOAc en hexanos, gradiente escalonado) para proveer 0.79 g del compuesto del título y 0.64 g de fracciones ?ko mixtas que contenían trazas del compuesto B.
E. 1-(R,S)-2-(S)-1-[(N-hidroxi)carboxiimideamido]-1-acetoxi-2-[(t- butoxicarbonil)amino]-5-[(4-metoxi-2,3,6-trimetil-bencensulfonil)-guanidino]- pentano: El compuesto D (0.79 g) se disolvió en 45 ml de EtOAc y 3.9 ml de agua y se trató con 0.174 g de acetato de sodio y 0.129 g de clorhidrato de hidroxilamina. De una manera análoga, las fracciones mixtas que contenían el j compuesto D (0.64 g) se disolvieron en 36.5 ml de etanol y 3.2 ml de agua y se trataron 0.141 g de acetato de sodio y 0.105 g de clorhidrato de hidroxilamina.
Las reacciones se calentaron a 45°C durante 4 horas con agitación. El análisis de CLAR mostró perfleles muy similares para ambas reacciones. Las reacciones se diluyeron con EtOAc, se lavaron con agua y solución saturada de cloruro de sodio y después se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron por evaporación giratoria. Los productos combinados se purificaron por cromatografía instantánea (1-4% MeOH en EtOAc, gradiente escalonado) para dar 0.77 g del compuesto del título.
F. Sal de trifl uoroacetato de 1-(R,S)-2-(S)-1-[3-[5-(metil)-1,2,4- 5 oxadiazolil]-2-amino-5-[(4-metoxi-2,3,6-trimetil-bencensulfon¡l)-guanidino]- pentan-1-ol: El compuesto E (0.74 g) se disolvió en 6.5 ml de cloroformo seco y se trató con 0.27 ml de trietilamina y 0.153 ml de anhídrido acético y se dejó agitar durante 4 horas a temperatura ambiente. La reacción se diluyó con 50 ml de tolueno y se puso a reflujo durante aproximadamente 15 horas en un baño de o aceite a 120°C. Los solventes volátiles se removieron por evaporación giratoria y el residuo se trató de acuerdo con el método A. Secando sobre sulfato de sodio, por concentración bajo evaporación giratoria y cromatografía instantánea sobre gel de sílice eluyendo con EtOAc se obtuvo 0.34 g de un aceite incoloro. Una porción de este material, 0.17 g, se disolvió en 4 ml de MeOH y se enfrió a 0°C. 5 A esta solución se añadieron 90 uL de una solución 4N de K2CO3. La reacción se agitó durante 2 horas y después se dividió entre 40 ml de EtOAc y 5 ml de agua, la capa orgánica se lavó con solución saturada de cloruro de sodio y se secó sobre sulfato de sodio. El acetato de etilo se removió por evaporación giratoria y se removieron trazas de acetato de etilo por evaporación giratoria de 0 diclorometano. El residuo resultante se diluyó en 1.33 ml de diclorometano y se enfrió a 0°C. Se añadió ácido trifluoroacético (0.57 ml) y la reacción se agitó durante 1.5 horas a 0°C. El solvente se removió rápidamente bajo vacío y el producto se disolvió en diclorometano y se concentró a sequedad por evaporación giratoria. " f G. 1-(R,S)-2-(S)-L-leucil-N-[1-[(3-[5-(metil)-1,2,4-oxadiazolil]- 5 hidroximetil]-4-[(4-metoxi-2, 3, 6-trimetil-bencensulfonil)-guanidino)]-butil]-L- leucinamida: El compuesto F (146 mg) y acetil-Leu-Leu-OH (82 mg) se disolvieron en 5 ml de DMF seco y se trataron con 200 uL de DIEA, seguido de 30 mg de HBTU. Después de 5 minutos, se añadieron 100 uL adicionales de DIEA y la reacción se agitó aproximadamente durante 15 horas a temperatura fo ambiente. La reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con una solución saturada de NaHC03 y solución saturada de cloruro de sodio, después de remover el solvente por evaporación giratoria el producto se purificó por cromatografía de fase inversa de C18 preparativa ( CH3CN al 5-60%, TFA al 0.1%) para proveer 122 mg del compuesto del título.
H. Acetil-L-leucil-N-[1-[3-[(5-metil)-1,2,4-oxadiazolil]carbonil]-4-[(4-f metoxi-2, 3, 6-trímetil-bencensulfonil)-guanidini]-butil]-L-leucilamida: N- clorosuccinamida (45 mg y sulfuro de dimetilo (61 uL) en 2.5 ml de tolueno se enfriaron a 0°C con agitación. Se agitó a 0°C durante 30 minutos. La mezcla 20 después se enfrió a ~-25°C en un baño de hielo seco/tetracloruro de carbono, después el compuesto G (100 mg) se añadió mediante adición gota a gota en una mezcla de 2.5 ml de diclorometano y 1.5 ml de tolueno. La reacción se agitó a -25°C durante 3 horas y después se añadió 100 uL de trietilamina. Después de minutos se removió el baño de enfriamiento y la reacción se agitó durante 1 hora. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc, y se lavó con solución saturada de bicarbonato de sodio y solución saturada de cloruro de sodio. La rf solución se secó sobre solución de sulfato de sodio anhidro y se concentró a un aceite.
/. Acetil-L-leucil-N-[1-[3-[(5-metil)-1,2,4-oxadia-zolil]carbonil-4- (guanidino)-butil-L-leucilamida: El compuesto H se recogió en 1.75 ml de TFA y se enfrió a 0°C. Se añadió tioanisol (90 uL) y la reacción se agitó durante 1 hora fo a 0°C, y 4 horas a temperatura ambiente. Los solventes volátiles se removieron por evaporación giratoria y se removió TFA residual añadiendo diclorometano y concentrando a sequedad en el evaporador giratorio. La cromatografía preparativa de C18 de fase inversa sio el compuesto del título. FAB EM m/z [M+H]- 509 (CQ-0008).
EJEMPLO V • Síntesis de Acetil-L-tirosinil-L-valil-N-M -.2-r(5-fenilH, 3,4- oxadiazolillcarbonill-2-carboxi-etill -L-alaninamida (CQ-0010) 20 A. N0-bencilox¡carbonil-L-aspart¡l(0-t-butil) N-metil-N-metoxi amida: ácido Cbz-L-aspártico (O-t-butil) (1.0 g, 2.93 mmoles), clorhidrato de N.O- dimetilhidroxilamina (0.357 g, 3.66 mmoles), se suspendió en 15 ml de DMF y se trató con 1.53 ml (8.79 mmoles) de DIEA bajo atmósfera de 2. Se añadió HBTU (1.22 g, 3.22 mmoles) y la reacción se agitó durante aproximadamente 15 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se trató de acuerdo con el ' f método de tratamiento extractivo general A: Secando sobre Na2S04, evaporación giratoria del solvente y secado adicional bajo alto vacío dio 1.1 g de un sólido vitreo incoloro.
S. L-aspartil-(O-t-butil) N-metil-N-metoxiamida: El compuesto A (1 g) se disolvió en 20 ml de metanol que contenía ácido fórmico al 5% (v/v). La fo solución se desoxigenó con burbujeo de nitrógeno y después se trató con aproximadamente 200 mg de negro de paladio. La reacción se agitó bajo nitrógeno durante 3 horas, y después se filtró a través de celite. El celite se lavó bien con metanol y los productos filtrados se combinaron y se concentraron por evaporación giratoria. El metanol y ácido fórmico residuales se desecharon 15 mediante la adición de evaporación giratoria de CH2CI2 y 50:50 CH. 2Cl2:pexano- El secado bajo alto vacío dio 790 mg de un aceite. • C. Acetil-L-tirosinil-L-valil-L-alanil-L-aspartil-(O-t-butil) N-metil-N- metoxiamida: El compuesto B (150 mg) y acetil-Tyr-Val-Ala-OH (230 mg, 20 preparado usando síntesis de péptido convencional) se combinaron y se suspendieron en 10 ml de DMF. Se añadió DIEA (305 uL) seguido de HBTU. El producto del tratamiento extractivo normal y los lavados con HCl 1 N se combinaron después de evaporación y se purificaron por cromatografía de CLAR preparativa (5-60% CH3CN 0.1 % TFA, durante 30 minutos) para proveer una fracción liofilizada de 85 mg de material puro al 94%, que se llevó a la reacción de copulación de aniones.
D. Acetil-L-tirosinil-L-valil-N-[1-[2-[(5-fenil)-1,3,4-oxadiazolil]carbo-nil]-2-(carboxi-t-butil)-etil]-L-alaninamida: Se disolvió 2-fenil-1 ,3,4-oxadiazol (169 mg, 1.16 mmoles) en 2 ml de THF seca, y se enfrió a -78°C. Se añadió n-butil litio (510 uL, solución 2.5 M en hexano) a través de una jeringa, después de 20 minutos el compuesto C (88 mg, 0.145 mmoles) se añadió a través de una jeringa en 3 ml de THF secoy la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente. Después de 15 minutos, 20 ml de solución saturada de NH CI se añadieron cuidadosamente bajo nitrógeno y la solución se agitó rápidamente durante varios minutos. La solución resultante se extrajo con EtOAc, se secó sobre Na2S04 y se concentró. El producto resultante se disolvió en H2O/CH3CN y se concentró mediante secado por congelamiento. La cromatografia de CLAR preparativa de fase inversa 5-60% CH3CN, 0.1 % TFA, gradiente de 30 minutos) dio 25.8 mg de polvo incoloro bajo liofilización.
E. Acetil-L-tirosinil-L-valil-N-[1-[2-[(5-fenil)-1,3,4-oxadiazolil]carbo-nil]-2-carboxi-etil]-L-alaninamida: El compuesto D (25 mg) se trató con 2 ml de TFA y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La TFA se removió bajo evaporación giratoria, y el solvente entrante que queso se removió mediante adición de CH2CI2 y CH3CN y evaporando. El producto crudo se purificó por cromatografía de CLAR de fase inversa (5-60% CH3CN, 0.1% TFA, gradiente de minutos). La liofilización de fracciones apropiadas dio 15.7 mg de un liofilato incoloro. Maldi EM M+Na 659 se observó. EM FAB (M+H)- 637. ' 1 H-RMN: d 0.77 (m, 6H), 1.1-1.2 (m, 3H), 1.74 (s, 3H) 1.9 (m,1 H), - 5 2.57-2.8 (m, 2H), 2.75-3.34 (m, 2H) 4.14 (m, 1 H), 4.3 (m, 1 H), 4.44 (m, 1 H) 5.3 (m, 1 H), 6.61 (m, 2H), 7.01 (m, 2H), 7.70 (m, 3H) 7.73 (m, 2H) 7.74-8.00 (m, 2H) 8.1 (m, 2H) 8.78 (m, 1 H), 9.13 (bs, 1 H) 12.65 (bs, 1 H). 13C-RMN d 17.8, 17.9, 19.0, 22.3, 30.6, 34.9, 36.3, 47.5, 52.7, 54.0, 57.0, 114.6, 122.3, 127.2, 129.5, 129.9, 132.9, 155.6, 159.6, 164.9, 169.0, 170.2, 171.1 , 171.3, 172.2, 172.3, EJEMPLO VI AcTtil-L-aspartil-valil-N-ri -r2-f(5-fenil)-1,3,4-oxad¡azol¡llcarbon¡ll-2-(carboxi)- etill-L-qlutamilamida (CQ-0011) 15 A. Acßtil-L-aspartil(Ot-bu)-L-valil-L-glutamil (O-t-Bu)-L-aspartil-(O-t- butil) N-metil-N-metoxiamida: Acetil-Asp(0-t-Bu)-Val-Glu-(0-t-Bu)-OH (0.302 g, 0.586 mmoles, preparado por síntesis de péptido convencionales) y H-Asp-(0-t- Bu)-N-(CH3)-OCH3 (0.150 g, 0.645 mmoles, preparado como en el ejemplo VIII) 20 se combinaron en 5 ml de DMF y DIEA (305 uL) se añadió. Se añadió HBTU (277 mg). Después de 2 horas se añadió 200 uL adicionales de DIEA y la reacción se dejó agitar durante aproximadamente 15 horas a temperatura ambiente. La reacción se trató de acuerdo con el método A, se secó sobre Na2S0 y se concentro a un aceite La cromatografía de fase inversa preparativa (C18, 5-60% CH3CN, 0 1% TFA, gradiente de 30 minutos) y hofilizacion de fracciones apropiadas dio 0 231 g de un hofilato incoloro ß Acet?l-L-aspart?l(0-t-Bu)-val?l-N-[1-[2-[(5-fen?l)-1,3,4-oxad?azol?l]-carbon?l]-2-carbox?-0-t-but?l)-et?l]-L-glutam?l(0-t-Bu) amida 2-fen?l-1 ,3,4-oxad?azol (161 mg, 1 1 mmoles) se disolvió en 2 ml de THF seca, y se enfrio a -78°C Se añadió n-butil litio (485 uL, una solución 2 5 M en hexano) a través de una jeringa, después de 20 minutos el compuesto A (100 mg, 0 138 mmoles) se añadió a través una jeringa en 3 ml de THF seca y la reacción se dejo calentar a temperatura ambiente Después de 60 minutos se añadieron cuidadosamente 20 ml de solución saturada de NH4CI bajo nitrógeno, y la solución se agito rápidamente durante algunos minutos la solución resultante se extrajo con EtOAc, se seco sobre Na2S04 y se concentro El producto resultante se disolvió en H2?/CH3CN y se concentro mediante secado por congelamiento La cromatografía de CLAR preparativa de fase inversa (5-60% CH3CN, 0 1 % TFA, gradiente de 30 minutos) dio 34 mg de un polvo incoloro bajo liofihzacion C Acet?l-L-aspart?l-val?l-N-[1-[2-[(5-fen?l)-1,3,4-oxad?azol?l]carbon?l]-2-(carbox?)-et?l]-L-glutam?lam?da El compuesto B (25 mg) se trato con 2 ml de TFA y se agito a temperatura ambiente durante 5 75 horas La TFA se removió en el evaporador giratorio y el solvente entrante que quedo se removió mediante adición de CH2Cl2y CH3CN y evaporando El producto crudo se purificó por cromatografía de CLAR de fase inversa (5-60% CH3CN, 0.1 % TFA, gradiente de 30 minutos). La liofilización de fracciones apropiadas dio 15.1 mg de un liofilato incoloro. Maldi EM M+Na 669 se observó. MS FAB (M+H)"647. "f 1 H-RMN d 0.73 (m, 6H), 1.75-1.95 (m, 2H), 182 (s, 3H), 1.88 (m, • 5 2H), 2.40-2.70 (m, 2H), 2.75-3.05 /m, 2H), 4.14 (m, 1 H), 4.30 (m, 1 H), 4.58 (m, 1 H), 5.33 (m, 1 H), 7.55 (m, 1 H), 7.61-7.73 (m, 3H), 8.02 (m, 1 H), 8.10 (m, 2H), 8.25 (m, 1 H), 8.72-8.82 (m, 1 H), 12.3 (bs, 3H). 13CRMN d 17.5, 18.9, 22.3, 27.2, 29.8, 30.6, 34.8, 35.5, 49.3, 51.2, 52.7, 57.0, 122.3, 127.2, 129.5, 132.9, 159.6, 164.9, 169.4, 170.4, 170.5, 171.2, 171 3, 173.7, 183.8. F EJEMPLO Vil Método A de tratamiento extractivo general La mezcla de reacción se diluyó con 5-10 volúmenes de EtOAc y 15 se lavó tres veces cada una con volúmenes equivalentes de una solución de HCl 1 N, después con solución de NaHC03 saturada y finalmente con solución de fe NaCI saturada.
EJEMPLO VIII Actividad inhibidora contra catepsina B y L, papína y qinqipaína *f La enzima catepsina B (E.C. 3.4.22.01) se obtuvo de Calbiochem (san Diego, CA); catepsina L (E.C. 3.4.22.15) de Athens Research and Technology Inc. (Athens, GA); y papaípa (E.C. 3.4.22.02) de Sigma (St. Louis, MO). Cbz-Phe-Arg-NHMec (-NHMec: 7-(4-metil)cournarilamida) se obtuvo de Bachem California, Inc. (Torrance, CA). Todos los demás reactivos se 'fo obtuvieron de Sigma. Las enzimas usadas en pruebas de enzima con metilcournarilamidas se activaron como se describe en otros artículos (Barret, et al., Methods Enzymol. 80:535-561 (1981 ): Brómme, et al., Biochem. J., 264: 475- 481 (1989). La catepsina L se probó en regulador de pH de acetato de sodio 0.34 M, pH 5.5., que contenía Brij 35 al 0.1 % (v/v), dltiotreitol (DTT) 2.5 mM y Na2-EDTA 5 mM. La catepsina B se probó bajo las mismas condiciones, ák excepto que el regulador de pH se ajuste a un pH de 6. Se probó la papaína en regulador de pH de fosfato de sodio 50 mM, pH 6.8, que contenía cloruro de sodio 0.2 M, DTT 2mM, Na2-EDTA 1 mM y Brij 35 al 0.025% (v/v). 20 Las velocidades iniciales de reacciones enzimáticas se midieron por espectrofluorometría (?ex = 370 NM, ?em 460 nm) con un Quanta Master QM1 (Photon Technologies International, South Brunswick, NJ). Las soluciones de abastecimiento de las enzimas de se diluyeron en regulador de pH, se equilibraron a temperatura ambiente y se preincubaron sin o con concentraciones cada vez mayores de los inhibidores. Las reacciones se empezaron mediante adición de sustrato. Un total de 4 a 8 concentraciones de 'f inhibidor se usaron para "detemrinar valores de Clgo- En todos los casos las 5 concentraciones de sustratos fueron mucho más pequeñas que el valor de K , y los valores de Clgo medidos se aproximaron a la K, directamente (Cheng, et al., Biochemical Pharmacology, 22:3099-3108 (1973)). Prueba de gingipaína- Todas las pruebas se llevaron a carbo en un lector de placas de microtitulación de 96 cavidades y el corte de BAPNA fo (clorhidrato de Na-benzoil-DL-arginlna-p-nitroanilida) se detectó a 450 nm. Todas las pruebas se realizaron de la siguiente manera: 180 µl de regulador de pH de prueba (50 mM tris, 5 nM CaCl2 y 10 nM cisteína, a un pH de 7.6) y se mezcló con 10 µl de gingipaína R (RGP). La mezcla se incubó durante 5 minutos a temperatura ambiente para reducir el RGP activado. 10 µl de cada inhibidor se añadieron a varias concentraciones. Estas mezclas se incubaron durante 10 minutos a temperatura ambiente para permitir que los f inhibidores formaran complejo con RGP. 50 µl de sustrato de BAPNA a 10 mM se añadieron. Se realizó una prueba de dos minutos con un volumen final de 250 µl y una concentración final de BAPNA de 2 mM. 20 BAPNA a 2 mM fue suficiente exceso de sustrato de tal manera que el agotamiento del sustrato no ocurrió dentro de un tiempo de prueba de 10 minutos. Por esta razón, se realizaron pruebas de dos minutos por lo que se uso vYnax en cambio en absorbancia de mDO a 405 nm como la ectura de velocidad inicial. Para titular RGP contra leupeptina ípara determinar el % de actividad, estas lecturas de velocidad se transformaron en una escala de por ciento en donde el 100% de control no contenía inhibidor. Los valores de velocidad inicial ' f también se introdujeron en un programa de regresión Graphpad Prism junto con 5 las diversas concentraciones inhibidoras para obtener los valores de Clgo- Todos los datos representan el mínimo de duplicados y a veces series de triplicados. Los resultados de prueba se presentan en el Cuadro 3. Como se muestra, CM-0019B es un inhibidor de papaína y catepsina L y más selectivo flo contra catepsina B que la leupeptina. El compuesto CQ-0002, que comparte la misma secuencia de reconocimiento (Leu -Leu-Arg) con el inhibidor de espectro amplio leupeptina, es casi tan potente como la leupeptina contra la catepsina B, pero sorprendentemente tiene un grado de especificidad mucho mayor. Además, el compuesto CQ-0002 inhibe gingipaína R con una potencia equivalente a la de 15 leupeptina. Los compuestos CQ-004 y CQ-0008 también son inhibidores de catepsina L potentes y selectivos.
CUADRO 3 Valores de K. (uM) para inhibidores de catepsina proteasa a Enzima humana D "B" denota reelaboración de grandes cantidades del número de CQ correspondiente EJEMPLO IX Actividad inhibidora contra caspasas Prueba contra inhibición de ICE Para examinar la capacidad de los inhibidores de la familia caspasa, CQ-0010 y CQ-0011 , para inhibir la producción de IL-lß humano, se emplearon dos pruebas diferentes En la primera, la línea celular de monocitos humanos THP-1, se estimuló con Iipopolisacápdos de E coli (serotipo LPS 0127-88, Sigma Chemical Co , St Louis, MO) en presencia y ausencia de los inhibidores Esta línea celular sintetiza y secreta IL-IB y TNFa así como otras cltosinas para estimulación de LPS. La segunda prueba uso sangre entera humana recién aislada y estimulada con LPS. Prueba de THP-1: Dos x1?d células THP-1 se añadieron a placas ' f de 24 cavidades en 1 ml de RPMI complementado con FCS al 1 %, glutamina y 5 x 10"5 M de mercaptoetanol. Diluciones en serie duplicadas de los inhibidores CQ-0010, CQ-0011 y Ac-YVAD-CHO comercialmente disponibles (Biomol Research Laboratories Inc., Plymouth Meetipg, PA), se prelncubaron con las células durante 15 minutos a 37°C. Después se añadió LPS a una concentración final de 1 ug/ml y las placas se incubaron durante 4 horas a 37°C. Todas las fo incubaciones se llevaron a cabo en una incubadora humidificada con 5% de CO2 en aire. Los sobrenadantes se cosecharon después de 4 horas y se probaron por ELISA para la presencia de TNFa y ll_-lfi usando equipos cmercialmente disponibles (PerSeptive Biosystems, Framingham, MA y R&D 15 Systems, Minneapolis, MN, respectivamente). Prueba de sangre entera humana: sangre entera heparinizada f (19.7 U de heparina por ml) de voluntarios sanos se recogieron y se suministraron en tubos de poliestireno de 12 x 75 mm (0.25 ml por tubo). Los inhibidores CQ-0010, CQ-0011 y AC-YVAD-CHO se disolvieron en DMSO, 20 después se diluyeron y se añadieron a los tubos en 0.25 ml y se preincubaron con la sangre durante 15 minutos a 37°C. Después se añadió LPS a una concentración final de 10 a 100 ug/ml.
Los tubos se taparon de manera suelta y se incubaron en un baño de agua durante 4 horas a 37°C, después de lo cual se sumergieron brevemente en un baño de hielo-agua. Los sobrenadantes se cosecharon por centrifugación ' f y se almacenaron a -70°C. La presencia de TNFa y IL-lß se detectó por equipo de ELISA comercialmente disponibles.
Prueba para inhibición de otras caspasas v qranzima B Se midieron constantes de inhibición fotométricamente para YAMA (caspasa 3), Lap3 (caspasa 7), FLICE /caspasa 8), Mch2 (caspasa 6) y granzima f? B. El regulador de pH usado para todas las enzimas consistió de Hepes 50 mM, cloruro de sodio 100 mM, ssacarosa al 10% (v/v), CHAPS al 0.1% (v/v) y ditiotreitol (DTT) 10 mM. En el caso de granzima B, sólo se uso DTT 1 mM. Las enzimas se incubaron a 37°C durante 10 minutos en placas de cavidades de 100 µl y se añadió sustrato intético e inhibidor en forma simultánea. La concentración de sustrato final fue de 20 µM en todos los casos.
El sustrato sintético Ac-DEVD-pNA se uso para todas las caspasas y se uso f Succ-AAPD-pNA para granzima B. La apariencia de producto se monitoreó durante 10 minutos a 410 nM usando Spectromax 340 y se calcularon curvas de Clgo a partir de las pendientes iniciales a concentraciones de inhibidor variables 2o y se calcularon las constantes de Inhibición. Los resultados se muestran en el Cuadro 4.
CUADRO 4 Inhibición de caspasas- Comparación con Ac-YVAD-CHO '# a Los valores dados son K-| en µM, a menos que se indique otra cosa. 15 b Los valores de Clgo (µM) de reducción de liberación de IL-lß de la línea celular THP-1. f c Los valores de Clgo (µM) de reducción de liberación de IL-lß en prueba de sangre entera.
Los resultados indican que IC-0010 es un inhibidor extremadamente potente y específico de la producción de IL-lß, capaz de inhibir casi por completo la producción de la citosina a 5 µM (figura 1 ) mientras que no tiene efecto dependiente de la dosis a niveles de TNFa producido (no se muestran los resultados). El ClgQ de CQ-0010 se estimó a partir de estas curvas de dosis que era de 0.3 µM. CQ-0011 también inhibió la producción de IL-lß pero con una potencia aproximadamente 10 veces menor (figura 1 ; cuadro 4). ' f En la prueba de sangre entera, CQ-0010 nuevamente fue . 5 equipotente para Ac-YVAD-CHO con Clgg de 0.3-0.5 µM (figuras 2a y b). Se debe notar que CQ-0010 fue equipotente al equivalente de aldehido (Ac-YVAD-CHO) en la inhibición de ICE, pero mostró inhibición mejorada contra FLICE con Ki de µ 20 nM. El compuesto CQ-0011 es un inhibidor potente de Lap3 y FLICE. <fo Los compuestos son inhibidores de caspasa selectivos y potentes como se muestra por su inactividad con respecto a la granzima B.
F Las siguientes referencias se icorporan aquí: 1. Appleyard G„ et al., J. Virol., 66:363-366 (1985). 2. Alessio M., et al., Eur. J. Haematol., 45:78-81 (1990). ' f 3. Barr P., et al., Bio/Tech, 12:487-493 (Mayo 1994). . 5 3a. Barrett A., et al., ICOP Newsletter, 1-2 (Dic. 1996). 4. Dinarello C, et al., New Eng. J. ofMed., 328:106-113 (1993). 5. Discipio R., et al., Immunology, 87:660-667 (1996). 6. Dolle R., et al., J. Med. Chem., 39:2438-2440 (1996). 7. Elliott E., et al., Per. in Drug Disc. and Des , 6:12-32 (1996). fo 8. Gorbalenya A., et al., Per. in Drug Disc. and Des., 6:64-86 (1996). 9. Gordon S„ Meth. in Enz., 244:568-581 (1994). 10. Gordon S., Sem in Thromb. and Hemo., 18,4:424-433 (1992). 1 1. Grakoui A., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:10583-10587 (1993). 12. Hewitt, C, J. Exp. Med., 182:1537-1544 (1995). | 14. Jewell D., et al., Biochem., 31 ,34:7862-7869 (1992). 15. Kalsheker N., et al., Biochem. and Biophys. Res. Comm., 221 :59-61 (1996). 20 16. Karlsson. J., et al., Neurobio. ofAging., 16,6:901-906 (1995). 17. Muller-Ladner U, et al., Pers. in Drug. Disc. and Des., 6:87-98 (1996). 18. Li Z., et al., J. Med. Chem., 39:4089-4098 (1996). 19. Malcolm B,. et al., Biochem., 34:8172-8179 (1995). 20. Tushar P., et al., FASEB, 10:587-597 (1996). 21. Figuereido-Pereira M., et al., J. of Neurochem., 62:1989-1994 (1994). 22. Rasnick D., Pers. in Drug Disc. and Des., 6:47-63 (1996). 23. Robertson C, et al., Pers. in Drug Disc. and Des., 6:99-118 (1996). 23a. Rockett, K., et al., FEBS, 259,2:257-259 (1990). 24. Jean D., et al., Biochem. J., 312:961 (1995). 25. Storer, A., Pers. in Drug Disc. and Des., 6:33-46 (1996). 26. Squier M, et al., J of Cell. Phys., 159:229-237 (1994). 27. Takeda A., et al., FEBS, 359:78-80 (1995). 28. Tchoupe J., et al., BBA, 1076:149-151 (1991 ). 29. Yoshida K., et al., Jap. Cir. J., 59:40 (1995). 30. Wingrove, J., J. Bio. Chem., 267,26:18902-18907 (1992). 31. WO 96/16080 32. U.S. 5,498,616 33. WO 95/26958 34. WO 96/30396 35. Krausslich et al., Ann. Rev. Biochem., 57:701-54 (1988). 36. Livingston, J. Cell. Biochem., 64:19-26 (1997). 37. Matsumura et al., J. Cardio. Pharm. 22:135-142 (1993). 38. Iqbal M., et al., Bioorg. & Med. Chem. Lett., 7:539-544 (1997). 39. Tao. M., et al., Bioorg. & Med. Chem. Lrtt., 5:3009-3012 (1996). 40. Miller, J. Cell. Biochem., 64:2-10 (1997). 41. Alnemri, J. Cell. Biochem., 64:33-42 (1997). 42. Broemme et al., JBC, 269:30238-30242 (1994). 43. Broemme et al., Biochem. J., 264:475-481 (1989). 44. Bossard et al., J. Biol. Chem., 271 :12517-12524 (1996). 45. Dolle et al., J. Med. Chem., 39:2438-2440 (1996). 46. Molla et al., J. Virology, (Aug. 1993). 47. Scott et al., JBC 268, 7935-7942 (1993). 48. Talanian et al., J.B.C., 272:9677-9682 (1997).

Claims (2)

  1. NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES 1 - Un inhibidor de cisterna proteasa de la formula (I) en donde Z es una porción de enlace de cisterna proteasa, R-| es alquilo o alquenilo opcionalmente sustituido con 1-3 halógeno o hidroxi, alquilamino, dialquilamino, alquildialquilamino, o cicloalquilo, alquilcicloalquilo, alquenilcicloalquilo, aplo (Cg-C-12) aplalquilo (Cg-C-12) ° aplalquenilo (Cg-C-12) que comprende opcionalmente 1-4 heteroatomos seleccionados de N, O y S, y opcionalmente sustituidos con halógeno , ciano, nitro, halogenoalquilo, amino, aminoalquilo, dialquilamino, alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, halogenoalcoxi, carboxilo, carboalcoxi, alquilcarboxamida, aplo (Cg-Cg), -O-aplo (Cg-Cg), aplcarboxamida, alquiltio o halogenoalquiltio, y X y Y son independientemente O, S o N, en donde N es sustituido opcionalmente con alquilo o alquenilo opcionalmente sustituido con 1-3 átomos de halógeno, aplo (Cg-Cg), aplalquilo o aplalquenilo opcionalmente que comprende 1-3 heteroatomos seleccionados de N, O y S, y opcionalmente sustituido con halógeno, ciano, nitro, halogenoalquilo, amipo, aminoalquilo, dialquilamino, alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, halogenoalcoxi, carboxilo, carboalcoxi, alquilcarboxamida, aplcarboxamida, alquiltio o halogenoalquiltio; en donde por lo menos por lo menos uno de Y o X es N; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. 2.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 1 , ' f caracterizado además porque Z es de la fórmula (II): 5 R4\ ? (ll) en donde AA-j , AA2, AA3, AA4 y AAg son independientemente un residuo fo aminoácido o un mimético de residuo de aminoácido; un enlace directo o ausente; y R4 y R ' son independientemente -C(0)Rg, -C(0)NHRg, -S(0)-2Rg,- C(0)ORg, -CRg O Rg, en donde Rg es H, alquilo, alquenilo o alquinilo opcionalmente sustituido con halógeno, ciano, nitro, halogenoalquilo, amlno, aminoalquilo, dialquilamino, halogenoalcoxi, carboxilo, carboalcoxi o 15 alquilcarboxamida; cicloalquilo, alquilcicloalquilo, arilo (Cg-C-12) ° arilalquilo (Cg- C-12) opcionalmente comprendiendo 1-4 heteroátomos seleccionados de N, O y f S, y opcionalmente sustituidos con halógeno, ciano, nitro, halogenoalquilo, amino, aminoalquilo, dialquilamino, halogenoalcoxi, carboxilo, carboalcoxi, alquilcarboxamida, alquilo, alquenilo, alquinilo o arilo (C -Ci2); o ausente; o 20 juntos R4. y R ' forman un anillo que comprende 5-7 átomos seleccionados de C, N, S y O. 3 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque Z comprende una porción de enlace pentapeptidílico 4 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque Z comprende una porción de enlace tetrapeptidí co 5 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque Z comprende una porción de enlace tppeptidílico 6 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque Z comprende una porción de enlace dipeptidí co 7 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque los ammacidos se seleccionan de arginina o un mimético de arginina, prolina, acido aspartico y glutámico y esteres arí co y alquihco de los mismos, alanina y glicina opcionalmente sustituida con a-carbono o a-nitrógeno con alquilo, cicloalquilo o aplo, leucina, isoleucina, cisteína opcionalmente sustituida en el átomo de azufre con alquilo, alquenilo o fenilo opcionalmente sustituido con halógeno, ciano, itro, halogenoalquilo, ammo, aminoalquilo, dialquilamino, alquilo, alcoxi, halogenoalcoxi, carboxilo, carboalcoxi, alquilcarboxamida, aplcarboxamida, alquiltio o halogenoalquiltio, fenilalanina, homo-fenilalanina, dehidro-fenilalanina, acido ?ndol?n-2-carboxíl?co, acido tetrah?dro?soqu?nol?n-2-carbox?l?co opcionalmepte sustituido con halógeno, ciano, nitro, halogenoalquilo, amino, aminoalquilo, dialquilammo, alquilo, alcoxi, halogenoalcoxi, carboxilo, carboalcoxi, alquilcarboxamida, aplcarboxamida, alquiltio o halogenoalquiltio, tirosma, sepna o treonina opcionalmente sustituido con alquilo o aplo, tpptofano, histidina, metionina, valina, norvalina, norleucma, acido octah?dro?ndol?n-2-carbox?l?co, asparagma, glutamina y hsina ' f opcionalmente sustituida en el átomo de nitrógeno con alquilo, alquenilo, 5 alquinilo, alcoxialquilo, alquiltioalquilo, alquilaminoalquilo, dialquilaminoalquilo, carboxialquilo, alcoxicarbonilalquilo o cicloalquilo, bicicloalquilo, cicloalquilalquilo, bicicloalquilalquilo o anl-cicloalquilalquilo fusionados opcionalmente comprendiendo 1 o mas heteroatomos seleccionados de N, O y S 8 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 2, fo caracterizado además porque AA^j es de la formula (Illa) (Illa) 15 en donde X' es CR2' o N, y R2, R2' y R2" son independientemente H, alquilo o f alquenilo opcionalmente sustituido con 1-3 halógeno, hidroxi, tío, alquiltio, amino, alquilamino, dialquilamino, alquilguamdinilo, dialquilguanidinilo, guanidinilo, - RCOR', -RCOOR', -RNR'R"R° o -RC(0)NR'R" en donde R es alquilo o 20 alquenilo, y R', R" y R° son independientemente H, alquilo, alquenilo, cicloalquilo o aplo (Cg-Cg), o cicloalquilo, alquilcicloalquilo, alquenilcicloalquilo, alquil- oxiaplo, alquil-tioanlo, aplo (Cg-C-12), aplalquilo (Cg-C^) o aplalquenilo (Cg- C-12) que comprende opcionalmente 1-4 heteroatomos seleccionados de N, O y S, y opcionalmente sustituido con hidroxi, halógeno, ciano, nitro, halogenoalquilo, amino, aminoalquilo, dialquilamino, amidina, alquilamidma, dialquilamidina, alquilo, alquenilo, alqumilo, alcoxi, halogenoalcoxi, carboxilo, carboalcoxi, alquilcarboxamida, aplo (Cg-Cg), -O-aplo (Cg-Cg), aplcarboxamida, alquiltio o halogenoalquiltio, o R2 y R2' junto con X' forman un anillo que comprende 4-7 átomos seleccionados de C, N, S y O, dicho anillo opcionalmente sustituido con hidroxi, halógeno, ciano, nitro, halogenoalquilo, amino, aminoalquilo, dialquilamino, amidma, alquilamidina, dialquilamidina, alquilo, alquenilo, alqumilo, alcoxi, halogenoalcoxi, carboxilo, carboalcoxi, alquilcarboxamida, aplo (Cg-Cg), -0-ar?lo (Cg-Cg), aplcarboxamida, alquiltio o halogenoalquiltio 9 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado ademas porque AA2 puede ser un residuo de la formula (lllb) R3 R"3 O (lllb) o seleccionado de un mimetico de residuo de las formulas IV a XXIV en donde X" es CR'3 o N, R3, R'3 y R"3 son independientemente H, alquilo o alquenilo opcionalmente sustituido con 1-3 halógeno, hidroxi, tío, alquiltio, ammo, alquilamino, dialquilamino, alquilguanidinilo, dialquilguanidinilo, guanidmilo, - " f RCOR', -RCOOR' o -RC(0)NR'R" en donde R es alquilo o alquenilo, y R' y R" 5 son independientemente H, alquilo, alquenilo, cicloalquilo o anlo (Cg-Cg), o cicloalquilo, alquilcicloalquilo, alquenilcicloalquilo, alquil-oxiaplo, alquil-tioanlo, aplo (Cg-C-12), aplalquilo (Cg-C-|2) ° anlalquenilo (Cg-C-12) opcionalmente comprendiendo 1-4 heteroatomos seleccionados de N, O y S y opcionalmente sustituidos con hidroxi, halógeno, ciano, nitro, halogenoalquilo, amino, flo aminoalquilo, dialquilamino, amidina, alquilamidina, dialquilamidina, alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, halogenoalcoxi, carboxilo, carboalcoxi, alquilcarboxamida, aplo (Cg-Cg) -O-aplo (Cg-Cg), aplcarboxamida, alquiltio o halogenoalquiltio, m es 0, 1 o 2, n es 0, 1 o 2, G es -C(O)-, -NHC(O)-, -s(0)2-, - OC(O)-, -C- o un enlace directo, Rg, R , R'g, R' son independientemente H, 15 alquilo, alquenilo, halógeno, alcoxi, carboxilo, carboalcoxi, amino, ammoalquilo, dialquilamino, cicloalquilo, aplo (Cg-Cg) o aplalquilo (Cg-Cg) opcionalmente fe comprendiendo 1-3 heteroatomos seleccionados de N, O y S, y opcionalmente sustituido con alquilo, alquenilo, alquimlo, halógeno, ciano, nitro, halogenoalquilo, halogenoalcoxi, ammo, alquilamino, dialquilamino, alcoxi, halogenoalcoxi, 20 carboxilo, carboalcoxi, alquilcarboxamida, alquiltio, guanidina, alquilguanidina, dialquilguanidina, amidina, alquilamidina o dialquilamidina, y U, V, W y Y' son independientemente o juntos N, C, C(O), N(Rg) en donde Rg es H, alquilo, halógeno, alcoxi, carboalcoxi, cicloalcoxi, carboxilo, alquiltio, amino, alquilamino, dialquilammo o aplo, aplo fusionado o cicloalquilo opcionalmente comprendiendo 1 o mas heteroátomos seleccionados de O, S y N, y opcionalmente sustituido con halógeno o alquilo, N(R-|Q) en donde R-|Q es H, alquilo, alquenilo o ' f cicloalquilo, aplo, aplalquilo o aplo-cicloalquilo fusionados opcionalmente 5 comprendiendo 1-4 heteroátomos seleccionados de N, O y S y opcionalmente sustituido con alquilo, alquenilo, alquinilo, halógeno, ciano, nitro, halogenoalquilo, halogenoalcoxi, ammo, alquilamino, dialquilamino, alcoxi, halogenoalcoxi, carboxilo, carboalcoxi, alquilcarboxamida, alquiltio, guanidina, alquilguanidina, dialquilguanidina, amidina, alquilamidma o dialquilamidma, o C(R-j •) )(R-| 2) en fo donde R-| -| y R-|2 son independientemente o juntos H, alquilo, alquiltio, alquiltioalquilo o cicloalquilo, alquilcicloalquilo, fenilo o fenilalquilo opcionalmente sustituido con guanidina, carboalcoxi, hidroxi, halogenoalquilo, alquiltio, alquilguanidina, dialquilguanidina, amidina, alquilamidina o dialquilamidma 10 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 9, 15 caracterizado ademas porque AA3, AA4 y AAg son enlaces directos o están ausentes, o un aminoácido seleccionado de arginma o un mimético de arginina, ^ prolina, ácido aspártico y glutamico y esteres arílico y alquilico de los mismos, alanina y glicina opcionalmente sustituida con a-carbono o a-nitrógeno con alquilo, cicloalquilo o aplo, leucina, isoleucma, cistema opcionalmente sustituida 20 en el átomo de azufre con alquilo, alquenilo o fenilo opcionalmente sustituido con halógeno, ciano, itro, halogenoalquilo, amino, aminoalquilo, dialquilammo, alquilo, alcoxi, halogenoalcoxi, carboxilo, carboalcoxi, alquilcarboxamida, aplcarboxamida, alquiltio o halogenoalquiltio, fenilalanina, homo-fenilalanina, dehidro-fenilalanina, ácido ?ndol?n-2-carboxíl?co, ácido tetrah?dro?soqu?nol?n-2- carboxíhco opcionalmente sustituido con halógeno, ciapo, nitro, halogenoalquilo, amino, ammoalquilo, dialquilamino, alquilo, alcoxi, halogenoalcoxi, carboxilo, ' f carboalcoxi, alquilcarboxamida, aplcarboxamida, alquiltio o halogenoalquiltio, 5 tirosina, sepna o treonina opcionalmente sustituido con alquilo o aplo, tpptofano, histidma, metionina, valina, norvalma, norleucma, acido octah?dro?ndol?n-2- carboxíhco, asparagina, glutamina y lisipa opcionalmente sustituida en el átomo de nitrógeno con alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxialquilo, alquiltioalquilo, alquilaminoalquilo, dialquilammoalquilo, carboxialquilo, alcoxicarbonilalquilo o 'fo cicloalquilo, bicicloalquilo, cicloalquilalquilo, bicicloalquilalquilo o apl- cicloalquilalquilo fusionados opcionalmente comprendiendo 1 o mas heteroatomos seleccionados de N, O y S 11 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado ademas porque X' es N 15 12 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado ademas porque X" es N ? 13 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado ademas porque X es CR'2 y R'2 es H 14 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 9, 20 caracterizado ademas porque X' es CR'3 y R'3 es H 15 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado además porque Z es una porción de enlace de calpaína 16 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado ademas porque R2 es CH3SCH2CH2-, HOOC(CH2)2CH2-, c?clohex?lo-CH2-, ?m?dazol?lo-CH2, (CH3)2CHCH2-, (CH3)2CH-, CH3CH2CH2- o * f CH3(CH2>2CH2-, y R3 es -CH2-benc?lo opcionalmente sustituido con OH o -O- , 5 bencilo, H2NC(=-NH2)NHCH2CH2CH2-, -R'-C(=-NH2)NH2, -R'-NHC(=- NR")NR°, o -R'-NR"R° en donde R' es cicloalquilo, aplo o anlalquilo opcionalmente sustituido con uno o mas heteroatomos seleccionados de N, S o O, y R" y R° son alquilo o cicloalquilo 17 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 16, :fo caracterizado ademas porque R3 es -CH2-benc?lo, bencilo, (CH3)3C-, (CH3)3CCH2-, (CH-3)2CH-, CH3(CH2)2CH2-, CH3CH2CH(CH3)- o (CH3)2CHCH2- 18 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado ademas porque Rg es bencilo, isoqumolinilo, quino nilo, naftilo o 15 HOOCCH2C(CH2CH(CH3)2)- 19 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 17, A caracterizado ademas porque R4 es Cbz en donde el fenilo es opcionalmente sustituido con nitro 20 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 17, 20 caracterizado ademas porque R4 es toluensulfonilo, metansulfonilo, FMOC o (+)- metilo-oxi-CO- 21 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado ademas porque AA3 es leucma, AA4 y AAg son enlaces directos o están ausentes y Rg es alquilo 22 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 7, • 5 caracterizado ademas porque Z es R4-Leu-Leu-Leu-, R4-Leu-Leu-, R4-Leu-Leu- Phe-, R4-Leu-Abu-, R -Val-Phe-, R4-Leu-Leu-Nle-, R4-Ala-t-BuGly-Val-, R4-t- BuGly-Val-, R4-Leu-Leu-Met-, o R4-Leu-Nle- 23 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado ademas porque Z es Cbz-Leu-Nle-, o Cbz-Leu-Val-feo 24 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado ademas porque Z es una porción de enlace de cisteina-catepsma 25 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado ademas porque R2 es -CH3-, (CH3)2CH-, (CH3)2CHCH2-, CH3(CH2)2CH2-, CH3CH(-0-benc?lo)- o benc?lo-S-CH2-, bencilo o -CH2-benc?lo 15 opcionalmente sustituido con OH o -OR' en donde R' es alquilo o aplo, H2NC(=" NH2)NHCH2CH2CH2-, -R'- C(=-NH2)NH2, -R'-NHC(=-NR")NR°, o -R'-NR"R° en i donde R' es cicloalquilo, aplo o aplalquilo opcionalmente sustituido con uno o mas heteroatomos seleccionados de N, S o O, y R" y R° son alquilo o cicloalquilo 20 26 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado ademas porque R3 es H (CH3)2CH-, (CH3)2CHCH2-, CH3(CH2)2CH2-, H2N(CH2)3CH2-, bencilo sustituido con hidroxi y halógeno, o (naft?lo)-CH2-, H2N(CH2)3CH2-, H2N(CH2)2CH2-, H2NC(=" NH2) HCH2CH2CH2-; -R'- C(="NH2) H2; -R'-NHC(=-NR")NR°; o -R'-NR"R° en donde R' es cicloalquilo, arilo o* ilalquilo opcionalmente sustituido con uno o más heteroátomos seleccionados de N, S o O; y R" y R° son alquilo o f cicloalquilo. 5 27.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado además porque Z es una porción de enlace de catepsina B. 28.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado además porque R2 y R3 son independientemente bencilo, -CH2- bepcilo, H2NC(=-NH2)NHCH2CH2CH2-; -R'-C(=-NH2)NH2; -R'-NHC(=" fo NR")NR°; o -R'-NR"R° en donde R' es cicloalquilo, arilo o arilalquilo opcionaimente sustituido con uno o más heteroátomos seleccionados de N, S o O; y R" y R° son alquilo o cicloalquilo. 29.- Un Inhibidor de conformidad con la reivindicación 27 ó 28, caracterizado además porque AA3 es lie o Leu. 15 30.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado además porque -AA2-AA-1- son: -Phe-hPhe-; -Arg-hPhe-; - mimético de Arg-hPhe-; -Leu-hPhe-; o -Orn-hPhe. 31.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado además porque Z es una porción de enlace de catepsina L, O, K o H. 32.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 31 , caracterizado además porque Z es una porción de enlace de catepsina L. 33 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado ademas porque R3 es bencilo o (CH3)2CHCH2- 34 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 32 o 33, ? caracterizado ademas porque R2 es -CH2-benc?lo 5 35 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado ademas porque Z es una porción de enlace de catepsma S 36 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado ademas porque R2 y R3 son alquilo 37 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 36, feo caracterizado ademas porque R2 y R3 son independientemente (CH3)2CH-, (CH3)2CHCH2- o CH3(CH2)2CH2- 38 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado ademas porque R3 es bencilo, (CH3)2CHCH2- o (CH-3)2CH- 39 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 35 o 38, 15 caracterizado ademas porque R2 es -CH2-benc?lo 40 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 39, k caracterizado ademas porque AA3, AA y AAg son enlaces directos o están ausentes 41 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 40, 20 caracterizado ademas porque Rg es bencilo, isoquinolmilo, quinohnilo, naftilo o HOOCCH2C(CH2CH(CH3)2)- 42 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 41 , caracterizado ademas porque R4 es Cbz 43 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 31 , caracterizado ademas porque Z es una porción de enlace de catepsina H 44 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 43, ' fc caracterizado ademas porque Z es R4-l.PI.e-, o HCI-hPhe- 5 45 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 31 , caracterizado ademas porque Z es una porción de enlace de catepsina K 46 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado ademas porque R3 es bencilo, (CH3)2CHCH2- o (CH3)2CH- 47 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 45 o 46, "ßfco caracterizado ademas porque AA3 es Gly, y A^ es Val o D-Val 48 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado ademas porque Z es una porción de enlace de catepsina K, y AA-j es Arg, mimetico de Arf o hPhe, AA2 es Pro, AA3 es Gly, y AA4 es Val o D-Val 49 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 7, 15 caracterizado ademas porque Z es una porción de enlace de catepsina K, y R4- Pro-AA-|-, R4-Gly-Pro-AA?-, R4-Val-Gly-Pro-AA-]-, D-Val-Gly-Pro-AA-i-, o R4-D-A Val-Gly-Pro-AA-| , en donde AA-|es Apa, Arg o mimetico de Arg, o hPhe 50 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado ademas porque Z es R4-AA3-Leu-hPhe-, R4-AA3-Phe-hPhe-, o 20 R4-AA3-Val-hPhe-, en donde AA3 es Gly, Val, D-Val, un enlace directo o ausente 51 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado ademas porque Z es Mu-Val-hPhe 52.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado además porque Z es una porción de enlace de caspasa. 53.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 52, ' fc caracterizado además porque R2 es -RCOOR'. 5 54.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 53, caracterizado además porque R es -CH2- y R' es H. 55.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 53, caracterizado además porque AA3 y AA son residuos de aminoácidos y AAg es un enlace directo. *f o 56.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 55, caracterizado además porque Z es una porción de enlace de enzima convertidora de interleucina-1 ß. 57.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 56, caracterizado además porque AA-4 puede ser opcionalmente tirosina sustituida 15 o leucina. 58.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 57, ?±\ caracterizado además porque AA3 puede ser valina, glutamato o un éster del mismo. 59.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 58, 20 caracterizado además porque R3 es -CH3 o (CH3)2CH-. 60.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 56, caracterizado además porque R3 es -CH3 o imidazolilo-CH2; AA3 es valina o glutamato; y Rg es -CH3. 61.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado además porque Z es una porción de enlace de enzima convertidora de interleucina-1 ß, y es R-|-AAg-AA4-AA3-Pro-AA-| ; en donde AA-j ' ^B es Asp o éster de Asp. 5 62.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 61 , caracterizado además porque -AAg-AA4-AA3- es -Ala-; -Glu-; -Val-; -Tyr-Ala-; - Tyr-Glu-; -Tyr-Val-; -Leu-Ala-; -Leu-Glu-; o -Leu-Val-. 63.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado además porque Z es una porción de enlace de enzima "Ifo convertidora de interleucina-1 ß, AA2 es de la fórmula (VI); en donde X" es CR'3; R2 es -RCOOR' en donde R es alquilo o alquenilo, y R' es H, alquilo, alquenilo, cicloalquilo o arilo (Cg-Cg). 64.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado además porque R3 y R'3 son H. 15 65.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado además porque AA3, AA4 y AAg son enlaces directos o están áfc ausentes, y R2 es -RCOOR' en donde R es -CH2-. 66.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 65, caracterizado además porque Rg es fenilo o bencilo sustituido con halógeno. 20 67.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 66, caracterizado además porque Rg es bencilo, isoquinolinilo, quinolinilo, naftilo o HOOCCH2C(CH2CH(CH3)2)-. 68.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 53, caracterizado además porque Z es una porción de enlace de YAMA, en donde R es -CH2- y AA4 es Asp o un éster del mismo. 69.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 68, 5 caracterizado además porque AA3 es opcionalmente glutamina sustituida o ácido glutámico o un éster del mismo. 70.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 69, caracterizado además porque R2 es (CH3)2CH- o CH.3SCH2CH.2-. 71.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 53, o caracterizado además porque Z es una porción de enlace de FLICE, en donde R2 es -CH2- y AA es opcionalmente lisina sustituida. 72.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 71 , caracterizado además porque AA3 es ácido glutámico. 73.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 72, 5 caracterizado además porque R3 es (CH3)2CH-. 74.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado además porque Z es una porción de enlace de cisteína proteasa viral o microbiana. 75.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 74, 0 caracterizado además porque Z es una porción de enlace de gingipaína. 76.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 75, caracterizado además porque Z es una porción de enlace de gingipaína K. 77 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 76, caracterizado ademas porque R2 es RNR'R"R° en donde R' es H, R" y R° son H o alquilo 78 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 75, caracterizado además porque Z es una porción de enlace de gingipaína R 79 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 78, caracterizado además porque R2 es H2NC(=-NH2)NHCH2CH2CH2-, -R'-C(=" NH2)NH2, -R'-NHC(=-NR")NR?, o -R'-NR"R° en donde R' es cicloalquilo, aplo o aplalquilo opcionalmente sustituido con uno o mas heteroatomos seleccionados de N, S o O, y R" y R° son alquilo o cicloalquilo 80 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado ademas porque Z es una porción de enlace de gmgipaína y AA2 es prohna 81 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 80, caracterizado ademas porque Z es R^Leu-pro-AA-i-, en donde AA-| es arginma o un mimético de arginina 82 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 74, caracterizado además porque Z también puede ser una porción de enlace de proteasa de coronavirus humano y R2 es H2NC(=-NH2)NHCH2CH2CH2-; R'-C(="NH2)NH2, -R'-NHC(=-NR")NR°, o R'-NR"R0 en donde R' es cicloalquilo, aplo o aplalquilo opcionalmente sustituido con uno o más heteroátomos seleccionados de N, S o O, y R" y R° son alquilo o cicloalquilo 83 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 82, caracterizado ademas porque R3 es (CH3)2CH-, (CH3)2CHCH2- o CH3(CH2)2CH2-, AA3 es Asp o ester del mismo, Leu, Arg o un mimetico de Arg, ' f o un enlace directo, AA4 y AAg son enlaces directos o están ausentes, y Rg es 5 alquilo 84 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 74, caracterizado ademas porque Z es una porción de enlace de proteinasa de virus 3C de hepatitis A y R2 es preferiblemente -RC(0)NR'R" en donde R' y R" son H o -CH3, o RCOOR' en donde R' es CH3, y AA3 y AA4 son residuos de ' o aminoácidos 85 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 84, caracterizado ademas porque A ^ es Leu 86 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 85, caracterizado ademas porque R3 es -CH3 y AA3 es Ala 15 87 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado ademas porque Z es una porción de enlace de proteinasa de virus f 3C de hepatitis A y Z es R4-Leu-AA3-Thr-Gln-, R4-Trp-AA3-Thr-Gln-, R4-Val- AA3-Thr-Gln-, R4-lle-AA3-Thr-Gln-, o R4-D-Leu-AA3-Thr-Gln-, en donde AA3 es Arg o un mimetico de Arg 20 88 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 74, caracterizado ademas porque Z es una porción de enlace de proteasa Ad2 23K y R2 y R3 son H, AA3 es alanma, AA¿?, es leucipa, AAg es un enlace directo, y R esta ausente 89 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 74, caracterizado ademas porque Z es una porción de enlace de proteasa de pnovirus 3C humano, y R2 es RCOOR' en donde R es -CH2-, R3 es bencilo, y ' f AA3 es leucina o un enlace directo 5 90 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 74, caracterizado además porque Z es una porción de enlace de proteasa de pnovirus 3C humano, y R2 es -RC(0)NR'R" en donde R' y R" son H, -CH3 o - CH2CH3, o RCOOR' en donde R' es -CH3 o -CH2CH3 91 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 74, 'flo caracterizado además porque Z es una proteasa de picomaina 2A humana 92 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 81 , caracterizado ademas porque R3 es -CH(OR')CH3 en donde R' es H, alquilo o aplo 93 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 92, 15 caracterizado además porque R2 es una cadena lateral hidrofóbica 94 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 7, f caracterizado además porque Z es una proteasa de picomaína 2A humana, y Z es R4-Ala-Ala-Pro-Val, o R4-Ala-Ala-Pro-Ala- 95 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 10, 20 caracterizado además porque Z es una porción de enlace de proteasa de protozoapo 96.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 95, caracterizado además porque Z es una porción de enlace de proteasa de Trypanosoma, Leishmania o Schistosoma. ' f 97.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 96, 5 caracterizado además porque R2 es bencilo opcionalmente sustituido con OH; H2NC(=-NH2)NHCH2CH2CH2-; -R'-C(=-NH )NH2; -R'-NHC(=-NR")NR°; o -R'- NR"R° en donde R' es cicloalquilo, arilo o aplalquilo opcionalmente sustituido con uno o más heteroátomos seleccionados de N, S o O; y R" y R° son alquilo o cicloaqluilo. fo 98.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 97, caracterizado además porque R3 es bencilo, (CH3)2CHCH2- o (CH3)2CH-; y AA3 es Phe, Leu, Pro o un enlace directo. 99.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 98, caracterizado además porque R4 es Boc o Suc. 15 100.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 95, caracterizado además porque Z es una porción de enlace de proteasas de fc Plasmodium. 101.- Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 100, caracterizado además porque R2 es (CH3)2CH-, -CH2-bencilo, bencilo o fenilo 20 opcionalmente sustituido con hidroxilo; H2NC(=-NH2)NHCH2CH2CH2-; -R'-C(=- NH2/NH2; -R'-NHC(=-NR")NR°; o -R'-NR"R° en donde R' es cicloalquilo, arilo o arilalquilo opcionalmente sustituido con uno o más heteroátomos seleccionados de N, S o O; y R" y R° son alquilo o cicloalquilo. 102 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 101 , caracterizado además porque R3 es bencilo, (CH3)2CHCH2-, (CH3)2CH-, HOCH2- o -CH3OR' ' á^ 103 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 100, 5 caracterizado además porque Z es R4-Phe-Arg-, R4-Phe-(m?met?co de argmina)- , R4-Val-Leu-(m?mét?co de Arg)-, R4-Phe-Lys-, R4-Leu-hPhe-, R4-Val-Leu-Arg-, R4-Phe(e-Z)-Lys-, R4-Phe-Val-, o R4-Phe-Ser(OBzl)- 104 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 100, caracterizado además porque Z es R4-Phe-AA-|-, o R4-Leu-AA-j-, en donde AA-| 'fo es lisina opcionalmente sustituida 105 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 104, caracterizado ademas porque R4 puede ser morfolino 106 - Un inhibidor de conformidad con la reivindicación 104, caracterizado además porque R4 es Cbz 15 107 - Un método para inhibir la actividad enzimática de una o mas cisteína proteasas que consiste en poner en contacto una proteasa con una A cantidad inhibidora de un compuesto de la reivindicación 1 108 - Un método para inhibir la actividad enzimática de una o más cisteína proteasas que consiste en poner en contacto una proteasa con una 20 cantidad inhibidora de un compuesto de la reivindicación 10 109 - Un método para inhibir la actividad enzimática de una calpaina cisteína proteasa que consiste en poner en contacto una proteasa con una cantidad inhibidora de un compuesto de la reivindicación 15 110 - Un método para inhibir la actividad enzimatica de una cisterna catepsina proteasa que consiste en poner en contacto una proteasa con una cantidad inhibidora de un compuesto de la reivindicación 24 ' f 111 - Un método para inhibir la actividad enzimatica de una 5 caspasa que consiste en poner en contacto una proteasa con una cantidad inhibidora de un compuesto de la reivindicación 52 112 - El método de conformidad con la reivindicación 111 , caracterizado ademas porque la caspasa es una enzima convertidora de interleucina ß humana efo 113 - Un método para inhibir la actividad enzimatica de una cisterna proteasa viral o microbiana que consiste en poner en contacto una proteasa con una cantidad inhibidora de un compuesto de la reivindicación 74 114 - El método de conformidad con la reivindicación 113, caracterizado ademas porque la cisterna proteasa es coronavirus humano 15 115 - El método de conformidad con la reivindicación 113, caracterizado ademas porque la cisterna proteasa microbiana es gingipaina f 116 - Un método para inhibir la actividad enzimatica de una cisterna proteasa de protozoapos que consiste en poner en contacto la proteasa con una cantidad inhibidora de un compuesto de la reivindicación 95 20 1 17 - El método de conformidad con la reivindicación 1 16, caracterizado ademas porque la proteaza de protozoapos es proteasa de Trypanosoma, Schistosoma o Leishmama 118 - El método de conformidad con la reivindicación 116, caracterizado ademas porque la proteaza de protozoapos es proteasa de Plasmodium tk 119 - Un método para inhibir la actividad enzimatica de 5 procoagulante de cáncer que consiste en poner en contacto la proteasa con una cantidad inhibidora de un compuesto de la reivindicación 1 120 - Un método para inhibir la actividad enzimatica de cisterna proteasas asociadas con apoptosis en estados patológicos que consiste en poner en contacto las proteasas con una cantidad inhibidora de un compuesto o de la reivindicación 1 121 - El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 1 o 2, para la fabricación de un medicamento para inhibir el crecimiento de células cancerosas o la progresión de tumnores o metástasis o invasión de tumores, inhibiendo la actividad enzimatica de cisterna proteasas 15 asociadas con dicho crecimiento o progresión 122 - El uso de un compuesto como el que se reclama en la I reivindicación 121 , en donde dicha proteasa es catepsina B o catepsina L 123 - El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 1 o 2, para la fabricación de un medicamento para inhibir el 20 crecimiento de células microbianas o viral inhibiendo la actividad enzimatica de cisterna proteasas asociadas con dicho crecimiento o reproducción 124.- El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 123, en donde dicha cisteína proteasa es proteinasa de virus 3C de hepatitis A. ' f 125.- El uso de un compuesto como el que se reclama en la 5 reivindicación 123, en donde dicha cisteína proteasa es endopeptidasa de virus de hepatitis C. 126.- El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 123, en donde dicha cisteína proteasa es proteasa de rhinovirus de picornaína 3C. fo 127.- El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 123, en donde dicha cisteína proteasa es proteinasa de virus L de enfermedad de los pies y de la boca. 128.- El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 123, en donde dicha cisteína proteasa es endopeptidasa 2 de 15 virus de encefalomielitis. 129.- El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 123, en donde dicha cisteína proteasa es proteasa de picornaína • 2A. 130.- El uso de un compuesto como el que se reclama en la 20 reivindicación 1 ó 2, para la fabricación de un medicamento para tratar los síntomas asociados con respuesta alérgica inhibiendo la actividad enzimática de cisteína proteasas asociadas con dicha enfermedad. 131.- El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 130, en donde la proteasa es Derpi. 132.- El uso de un compuesto como el que se reclama en la f reivindicación 1 ó 2, para la fabricación de un medicamento para tratar los 5 síntomas asociados con un trastorno neurodegenerativo inhibiendo la actividad enzimática de cisteína proteasas asociadas con dicha enfermedad. 133.- El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 132, en donde el trastorno degenerativo es enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson o esclerosis múltiple. Po 134.- El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 133, en donde dicho trastorno es un resultado de daño isquémico- por reperfusión. 135.- El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 134, en donde el daño isquémico-por reperfusión es accidente 15 cerebral vascular. 136.- El uso de un compuesto como el que se reclama en la | reivindicación 134, en donde el daño isquémico-por reperfusión es infarto de miocardio, trasplante, daño vascular o colapso o choque cardiovascular. 137.- El uso de un compuesto como el que se reclama en la 20 reivindicación 1 ó 2, para la fabricación de un medicamento para tratar los síntomas asociados con enfermedades inflamatorias y degenerativas inhibiendo la actividad enzimática de cisteína proteasas asociadas con dichas enfermedades. 138 - El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 137, en donde la enfermedad inflamatoria es una artpditis 139 - El uso de un compuesto como el que se reclama en la f reivindicación 138, en donde la artpditis es artritis reumatoide u osteoartptis 5 140 - El uso de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 137, en donde la enfermedad inflamatoria es enfermedad pepodontal 141 - El método de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 107, en donde el compuesto es Acido [2-[5-(3-met?lbenc?l)-1 ,3,4- o oxad?azol?l]carbon?l]-2-(S)-met?lprop?l]-L-fen?lalanam?do-(3R)-(?sobut?l)succín?co 142 - El método de un compuesto como el que se reclama en la l reivindicación 107, en donde el compuesto es acet?l-L-leuc?l-N-[1-[2-[5-fen?l]- 1 ,3,4-oxad?azol?l]carbon?l]-4-(guan?d?po)-but?l-L-leuc?lam?da, acet?l-L-leuc?l-N-[1 -[3- [5-met?l]-1 ,2,4-oxad?azol?l]carbon?l]-et?l-L-leuc?lam?da, acet?l-L-leuc?l-N-[1-[3-[5- 15 met?l]-1 ,2,4-oxad?azol?l]carbon?l]-4-(guan?d?no)-but?l-L-leuc?lam?da, acetil-L- t?roa?n?l-L-val?l-N-[1-[2-[(5-fen?l]-1 ,3,4-oxad?azol?l]carbon?l]-2-carbox?-et?l]-L-| alamnoamida, o acet?l-L-aspart?l-val?l-N-[1-[2-[(5-fen?l]-1 ,3,4-oxad?azol?l]carbon?l]- 2-(carbox?)-et?l]-L-glutam?lam?da 143 - El método de un compuesto como el que se reclama en la 20 reivindicación 107, en donde el compuesto es (t-butox?succ?n?l)-L-val?l-N-[1-[3-[5- (3-tpfluoromet?lbenc?l)-1 ,2,4-oxad?azol?l]carbon?l)-2-benz?l?dona]-L-prol?nam?da, o (carbox?succ?n?l)-L-val?l-N-[1-[3-[5-(3-tpfluoromet?lbenc?l)-1 ,2,4- oxad?azol?l]carbon?l)-2-benz?l?dona]-L-prol?nam?da 144.- El método de un compuesto como el que se reclama en la reivindicación 107, en donde el compuesto es (Benziloxicarbonil)-L-valil-N-[1-(2- [5-(3-metilbencil)-1 ,3,4-oxadiazolil]carbonil)-2-(S)-metilpropil]-L-prolinamida. ' f; 145.- Un método para detectar o cuantificar la actividad de una 5 cisteína proteasa en una muestra pura, mezcla o un fluido o tejido biológico, que consiste en poner en contacto dicha proteasa con un compuesto de la reivindicación 1 ó 2. 146.- Un método para purificar una cisteína proteasa en una muestra, que consiste en poner en contacto dicha proteasa con un compuesto fo de la reivindicación 1 ó 2.
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