MX2015001088A - Formulación líquida de un cunjugado de péptido insulinotropico de acción prolongada. - Google Patents

Formulación líquida de un cunjugado de péptido insulinotropico de acción prolongada.

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Abstract

La presente invención se relaciona con una formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada, que comprende una cantidad farmacéuticamente eficaz del conjugado péptido insulinotrópico de acción prolongada que consiste en un péptido fisiológicamente activo, péptido insulinotrópico, y una región Fc de inmunoglobulina; y un estabilizador libre de albúmina, en donde el estabilizador comprende una solución amortiguadora, un alcohol de azúcar, un tensioactivo no iónico, y un agente isotónico, y un método para preparar la formulación. Para el propósito de prevenir la contaminación microbiana, se puede agregar un conservante. La formulación líquida de la presente invención está libre de albúmina sérica humana y otros factores potencialmente peligrosos para el cuerpo, sin tener riesgo de contaminación viral, y por consiguiente puede proveer una excelente estabilidad de almacenamiento para los conjugados de péptido insulinotrópico a alta concentración.

Description

FORMULACIÓN LÍQUIDA DE UN CONJUGADO DE PÉPTIDO INSULINOTRÓPICO DE ACCIÓN PROLONGADA CAMPO TÉCNICO La presente invención se relaciona con una formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada, que comprende una cantidad farmacéuticamente eficaz de un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada, en donde un péptido fisiológicamente activo que es un péptido insulinotrópico está unido a una región Fe de inmunoglobulina; y un estabilizante libre de albúmina, en donde el estabilizante comprende una solución amortiguadora, un alcohol de azúcar, un tensioactivo no iónico y un agente isotónico y un método para preparar la formulación.
ANTECEDENTES La diabetes es una enfermedad derivada de múltiples factores patogénicos y generalmente hay dos tipos de diabetes. Los pacientes con diabetes tipo I o diabetes mellitus dependiente de insulina (IDDM) producen muy poco o no pueden producir insulina la cual es una hormona que regula el uso de hidratos de carbono. Y los pacientes con diabetes tipo II o diabetes mellitus no dependiente de insulina (NIDDM) muestran el mismo nivel de insulina en plasma o aumentado en comparación con pacientes sin diabetes. Sin embargo, los pacientes con diabetes tipo II desarrollan resistencia a glucosa estimulada por insulina y metabolismo de lípidos en los principales tejidos sensibles a insulina, es decir músculo, hígado y tejido graso. A pesar de que el nivel de insulina en plasma puede estar aumentado, no es suficiente para superar la significativa resistencia a insulina, provocando de este modo una hiperglucemia. La hiperglucemia continuada o no regulada está asociada con tasa aumentada de morbilidad temprana y tasa de mortalidad. Muchas veces, un aumento anormal en el nivel de azúcar está directamente e indirectamente relacionado con los cambios metabólicos y hemodinámicos en las enfermedades asociadas con el metabolismo de lípidos, lipoproteínas, apolipoproteínas y otros. Por ejemplo, los pacientes con diabetes mellitus tipo II especialmente tienen un alto riesgo de desarrollar una enfermedad cardiovascular, ataque cerebrovascular, enfermedad vascular periferica, hipertensión, nefropatía y neuropatía así como también hemangioma gigante y complicaciones microvasculares.
Las terapias actualmente usadas para tratar la diabetes tipo II incluyen la administración de insulina exógena, administración oral de droga, terapia con dieta y terapia con ejercicios. En 2005, se aprobó la exenatida (Exendina-4: Byetta®) por la FDA como terapia suplementaria para los pacientes con diabetes tipo II que no pueden tener una regulación de glucosa apropiada incluso con la toma de metformina y/o sulfonilurea.
La exenatida (exendina-4) es un agonista fuerte del receptor de GLP-1 y es producida en la glándula salivar de lagarto. La exendina-4 muestra afinidad por insulina, suprime la ingesta de alimentos y el vaciamiento gástrico y muestra afinidad por las células b en roedores (Parks y col., Metabolism. 50: 583-589, 2001; Aziz y Anderson, J. Nutr. 132: 990-995, 2002; y Egan y col., J. Clin. Endocrinol. Metab. 87: 1282-1290, 2002). Además, dado que la glicina está presente en la posición 2 del extremo N terminal de la exidina-4, no es un sustrato para DPPIV a diferencia de GLP- I . La desventaja de usar exenatida es su corta vida media (t1/2) que solo es de entre 2 y 4 horas, y por lo tanto tiene que ser inyectada dos veces por día (Kolterman y col., J. Clin. Endocrinol. Metab. 88: 3082-3089, 2003 y Fineman y col., Diabetes Care. 26: 2370-2377, 2003).
Los péptidos como la exenatida descrita anteriormente son fácilmente desnaturalizados o degradados por proteasas en el cuerpo debido a la baja estabilidad y pierden su actividad. Además, el tamaño de las exenatidas es relativamente pequeño y por lo tanto son fácilmente eliminadas por el riñón. Por lo tanto, las drogas que contienen péptidos como principios farmacéuticamente activos tienen que ser administradas frecuentemente a los pacientes con el objetivo de mantener el nivel en suero deseado y el título de las mismas. En su mayoría, las drogas peptídicas se administran a los pacientes en la forma de inyección y a alta frecuencia para mantener el nivel en suero del péptido fisiológicamente activo, pero esto provoca mucho dolor en los pacientes.
Han habido muchos intentos para resolver estos problemas y uno de ellos fue la administración de una droga peptídica en el cuerpo a través de la inhalación oral o nasal por aumento de la permeabilidad de biomembranas de la droga peptídica. Sin embargo, este método tiene una eficacia significativamente baja para la administración del péptido en el cuerpo en comparación con las inyecciones. Por lo tanto, aún hay muchas limitaciones para mantener la actividad de la droga peptídica in vivo al nivel requerido.
A su vez, han habido continuos intentos por maximizar los efectos terapéuticos de la droga por mejora de la estabilidad de la droga peptídica en la sangre y mantenimiento de un alto nivel de droga en la sangre durante un período prolongado de tiempo. Estas formulaciones de acción prolongada de drogas peptídicas deberían promover una estabilidad aumentada de la droga peptídica y también mantener un título lo suficientemente alto de la droga en sí sin inducir respuestas inmunes en los pacientes.
Como método para estabilizar péptidos y prevenir la degradación de péptidos por proteasas, han habido muchos intentos por modificar una secuencia de aminoácidos específica sensible a proteasas. Por ejemplo, el GLP-1 (7-37 o 7-36 amida) que es eficaz para el tratamiento de la diabetes tipo II por reducción del nivel de glucosa en sangre tiene una vida media tan corta como por debajo de los 4 minutos (Krcymann y col., 1987). La vida media corta es debida a la pérdida del título de GLP-1 por el clivaje peptídico entre el aminoácido N° 8 (Ala) y el N° 9 (Asp) de GLP-1 por la dipeptidil peptidasa IV (DPP IV). Por lo tanto, han habido muchos estudios sobre el desarrollo de derivados de GLP-1 que tienen resistencia a DPP IV y en estos estudios, se sustituyó Ala8 por Gly (Deacon y col., 1998; Burcelin y col., 1999), o por Leu o D-Ala (Xiao y col., 2001) para aumentar la resistencia a DPP IV a la vez que se mantiene la actividad del péptido. Además, el aminoácido N terminal de GLP-1 , His7, es un aminoácido importante para la actividad de GLP-1 y también como blanco de DPP IV, y por lo tanto en US 5.545.618 se sustituyó el extremo N terminal por un grupo alquilo o grupo acilo. Del mismo modo, en Gallwitz y col., se N metilo o alfa metilo His7, o se sustituyó la His entera por imidazol para aumentar la resistencia del péptido a DPP IV a la vez que se mantiene la bioactividad (Baptist Gallwitz, y col., Regulatory Peptides 86, 103-111, 2000).
Aparte de estas variantes, la exenatida (exendina-4, US 5.424.686) que es un derivado de GLP-1 purificado de la glándula salivar del lagarto Monstruo de Gila, tiene una resistencia a DPP IV y una mayor bioactividad que GLP-1 , teniendo así una vida media prolongada de entre 2 y 4 horas en el cuerpo que es mucho más que la de GLP-1. Sin embargo, una duración in vivo suficiente de la bioactividad no se puede lograr solo por aumento de la resistencia del peptido a DPP IV. Por ejemplo, la exendina-4 (exenatida) actualmente disponible tiene que administrarse dos veces por día a pacientes por medio de inyecciones, lo que genera una carga excesiva para los pacientes.
Una limitación de estos péptido insulinotrópico es que el tamaño del péptido es muy pequeño para ser recolectado por el riñón y por lo tanto se pierde fácilmente del cuerpo. Por lo tanto, con el objetivo de prevenir la pérdida del péptido en el riñón, se ha unido una macromolécula altamente soluble tal como polietilenglicol (PEG) a la superficie del péptido.
El PEG se une a un sitio específico o a diferentes sitios de un péptido blanco inespecíficamente y aumenta el peso molecular del péptido, lo que luego previene la pérdida del péptido por el riñón y la hidrólisis del péptido, sin provocar efectos secundarios. Por ejemplo, W02006/076471 describe que por unión de PEG a un péptido natriurético tipo B (BNP), que activa la producción de GMPc por unión a NPR-A y reduce la presión sanguínea intraarterial, siendo de este modo eficaz como agente terapéutico para la insuficiencia cardíaca congestiva, se puede mantener la bioactividad del BNP. Del mismo modo, US 6.924.264 describe un método para aumentar la durabilidad in vivo de exedina-4 por unión de PEG al residuo lisina de una exedina-4. Sin embargo, si bien estos métodos pueden extender la durabilidad in vivo de una droga peptídica por aumento del peso molecular de PEG, el título de la droga peptídica se reduce marcadamente a medida que el peso molecular de PEG aumenta y también se reduce la reactividad de PEG con el péptido, reduciendo de este modo el rendimiento.
Como otro método para aumentar la estabilidad in vivo del péptido fisiológicamente activo, se ha desarrollado un método para producir una proteína de fusión, en el cual se unen los genes del péptido y de la proteína fisiológicamente activa por recombinación genetica y se cultivan las células transformadas con el gen recombinante. Por ejemplo, previamente se describió una proteína de fusión que produce exendina-4 que está fusionada a transferrina (Tf) por medio de un conector polipeptídico (Solicitud de Patente Coreana N° 10-2009-7003679). Además, como método para usar inmunoglobulina, también se describió antes una proteína de fusión de derivado de GLP-1 en donde el derivado de GLP-1 está fusionado a lgG4 Fe (Solicitud de Patente Coreana N° 10-2007-7014068).
Recientemente, como formulación de droga proteica y peptídica de acción prolongada que puede promover una reducción mínima en la actividad y una estabilidad aumentada, se describe un conjugado generado por combinación de una región Fe de inmunoglobulina, un polímero no peptídico y un polipéptido fisiológicamente activo en el Registro de Patente Coreana N° 10-0567902 (conjugado polipeptídico fisiológicamente activo que tiene durabilidad in vivo mejorada) y Registro de Patente Coreana N° 10-0725315 (complejo proteico que usa un fragmento de inmunoglobulina y método para su preparación).
Con el método anterior, se puede aplicar el péptido insulinotrópico como un polipéptido fisiológicamente activo para preparar un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada (Registro de Patente Coreana N° 10-2008-0001479). Para fabricar la droga que comprende un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada, es esencial prevenir cambios fisicoquímicos tales como desnaturalización inducida por calor, agregación, adsorción, o hidrólisis provocada por la luz, calor, o impurezas en aditivos durante el almacenamiento o procesos de administración a la vez que se mantiene la eficacia in vivo. En particular, un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada tiene mayor un volumen y peso molecular en comparación con el péptido insulinotrópico solo y por lo tanto es difícil de estabilizar.
Generalmente, las proteínas y péptidos tienen una vida media corta y pueden sufrir desnaturalización, tal como agregación de monómeros, precipitación por agregación y adsorción a la superficie del recipiente, cuando se exponen a temperaturas inadecuadas, a interface agua-aire, a alta presión, a estrés físico o mecánico, a solventes orgánicos y a contaminación microbiana. Las proteínas y peptidos desnaturalizados pierden sus propiedades fisicoquímicas inherentes y la actividad fisiológica. Dado que la desnaturalización de proteínas es irreversible en la mayoría de los casos, las proteínas y péptidos desnaturalizados no pueden recuperar sus propiedades inherentes. Además, es probable que las proteínas sean inestables y fácilmente afectadas por factores externos tales como la temperatura, la humedad, el oxígeno, los rayos ultravioleta y por lo tanto sufren cambios físicos o químicos que incluyen agregación, polimerización u oxidación, perdiendo así actividad.
Además, las proteínas y péptidos adsorbidos son aptos para agregarse a medida que se desnaturalizan y cuando las proteínas y péptidos agregados son introducidos en el cuerpo, pueden provocar la formación de anticuerpos. Por lo tanto se deben administrar proteínas y péptidos suficientemente estables. En este sentido, se han desarrollado diferentes métodos para prevenir la desnaturalización de proteínas y péptidos en solución (John Geigert, J. Parenteral Sci. Tech., 43, No5, 220-224, 1989, David Wong, Pharm. Tech. October, 34-48, 1997, Wei Wang., Int. J. Pharm., 185, 129-188, 1999, Willem Norde, Adv. Colloid Interface Sci., 25, 267-340, 1986, Michelle y col., Int. J. Pharm. 120, 179-188, 1995).
Para producir algunas de las drogas proteicas y peptídicas, se ha usado un proceso de secado por congelamiento para resolver el problema de la estabilidad. Sin embargo, este proceso es inconveniente ya que los productos secados por congelamiento tienen que ser disueltos en solventes para inyección nuevamente antes de su uso, y se requiere una inversión a gran escala tal como el uso de un gran número de secadores por congelamiento ya que el proceso de secado por congelamiento está involucrado en el proceso de fabricación. Como alternativa, también se ha usado un método de pulverización usando un secador por aspersión. Sin embargo este método tiene un bajo valor económico debido a un bajo rendimiento de producto y puede dar un efecto negativo en la estabilidad del producto ya que las proteínas son expuestas a alta temperatura.
Como estrategia alternativa para resolver estas limitaciones, otros estudios intentaron agregar estabilizantes a la proteína y péptido en solución para prevenir cambios fisicoqu ¡micos de la droga proteica a la vez que se mantiene la eficacia in vivo de la misma durante el almacenamiento durante un período prolongado. Un tipo de proteína, la albúmina serica humana, se ha usado ampliamente como estabilizante para diferentes drogas proteicas y se ha aprobado la eficacia de la misma (Edward Tarelli y col., Biologicals (1998) 26, 331-346).
La purificación de la albúmina sérica humana involucra la inactivación de contaminantes biológicos tales como micoplasma, priones, bacterias y virus, o tamizaje o inspección de uno o más contaminantes biológicos o patógenos, pero incluso con estos procesos, aquellos contaminantes pueden ser incompletamente eliminados o inactivados. Por lo tanto, los pacientes pueden ser expuestos a estos contaminantes biológicos o patógenos cuando son administrados con albúmina sérica humana. Por ejemplo, a pesar de que el proceso de tamizaje involucra la inspección de ciertos virus en la muestra de sangre del donante, el proceso de inspección no siempre es confiable y puede no detectar ciertos virus que están presentes en un pequeño número.
Debido a sus diferencias químicas, diferentes proteínas pueden ser inactivadas gradualmente a diferentes velocidades bajo diferentes condiciones de almacenamiento. Es decir, la extensión del tiempo de almacenamiento por un estabilizante no es la misma para las diferentes proteínas. Por esta razón, la relación, concentración y tipo de estabilizantes adecuados que se usan para mejorar la estabilidad de almacenamiento de las proteínas varía dependiendo de las propiedades fisicoquímicas de una proteína blanco. Además, cuando se usan en conjunto estabilizantes diferentes, estos pueden inducir efectos adversos diferentes de aquellos deseados, debido a la interacción competitiva y los efectos secundarios. Además, durante el almacenamiento, la propiedad de la proteína almacenada o concentración de la misma puede cambiar, provocando de este modo efectos diferentes.
Por lo tanto, la estabilización de proteínas en solución implica mucho esfuerzo y cuidados. Particularmente, un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada que tiene una mejor durabilidad in vivo y estabilidad tiene una forma de péptido insulinotrópico, combinado con la región Fe de inmunoglobulina y por lo tanto tiene un peso molecular y volumen significativamente diferentes en comparación con un péptido insulinotrópico general. Por lo tanto, se requiere una composición especial para estabilizar la proteína. Además, un péptido insulinotrópico y una región Fe de inmunoglobulina son péptidos o proteínas fisicoquímicamente diferentes y por lo tanto tienen que ser estabilizados concurrentemente. Sin embargo, como se describió anteriormente, los diferentes peptidos o proteínas pueden ser inactivados gradualmente a velocidades diferentes bajo condiciones diferentes durante el almacenamiento debido a las diferencias fisicoquímicas de los mismos. Además, cuando los estabilizantes que son adecuados para cada uno de los péptidos o proteínas se usan combinados, pueden inducir efectos adversos diferentes de los efectos deseados, debido a su interacción competitiva y efectos secundarios. Por lo tanto, como para un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada, es muy difícil encontrar una composición estabilizante que pueda estabilizar un péptido insulinotrópico y una región Fe de inmunoglobulina concurrentemente.
Recientemente, se ha desarrollado una formulación de proteína y péptido que se puede usar repetidamente para la conveniencia del paciente. Sin embargo, la formulación de uso múltiple debe contener un conservante para prevenir la contaminación microbiana luego de administraciones repetidas y antes del descarte. La formulación de uso múltiple que contiene conservante tiene algunas ventajas en comparación con una formulación de uso único. Por ejemplo, como para una formulación de uso único, se gasta una gran cantidad de droga dependiendo de la diferencia en la dosificación. Pero con el uso de una formulación de uso múltiple, puede reducirse la cantidad de producto gastado. Además, la formulación de uso múltiple se puede usar varias veces sin preocuparse por el crecimiento microbiano dentro de cierto período y dado que puede suministrarse en un recipiente único, puede minimizarse el empaquetado, generando beneficios económicos.
Sin embargo, el uso de conservantes puede afectar la estabilidad de proteínas. El problema mejor conocido en el uso de conservantes es un tema relacionado con la precipitación. La precipitación de proteínas puede reducir los efectos terapéuticos de la droga y cuando es administrada al cuerpo puede inducir una respuesta inmune inesperada. Por lo tanto, es crítico seleccionar un tipo de conservante y una concentración apropiada que mantenga la capacidad para prevenir la contaminación microbiana a la vez que no se afecta la estabilidad de la proteína.
PROBLEMA TÉCNICO En un esfuerzo por proveer una formulación líquida estable del conjugado de peptido insulinotrópico de acción prolongada que puede almacenar el conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada sin riesgo de contaminación viral durante un período prolongado de tiempo, la presente invención encontró que se podría proveer una formulación que mejora la estabilidad del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada por uso de un estabilizante que comprende una solución amortiguadora, un alcohol de azúcar, un tensioactivo no iónico y un agente isotónico, o adicionalmente metionina y que la formulación se puede usar múltiples veces cuando la formulación además comprende un conservante, completando de ese modo una formulación líquida económica y estable.
SOLUCIÓN TÉCNICA Un objeto de la presente invención es proveer una formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada, que comprende una cantidad farmacéuticamente eficaz de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada en donde el péptido fisiológicamente activo, es decir, el péptido insulinotrópico está unido a una región Fe de inmunoglobulina; y un estabilizante libre de albúmina, en donde el estabilizante comprende una solución amortiguadora, un alcohol de azúcar, un tensioactivo no iónico y un agente isotónico.
Otro objeto de la presente invención es proveer una formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada para administraciones múltiples, que además comprende un conservante además del péptido insulinotrópico conjugado y estabilizante libre de albúmina.
Otro objeto de la presente invención es proveer un método para preparar la formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada.
Efectos ventajosos Debido a que la formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de la presente invención comprende una solución amortiguadora, un agente isotónico, un alcohol de azúcar y un tensioactivo no iónico, o adicionalmente metionina, pero está libre de albúmina serica humana y otros factores potencialmente peligrosos para el cuerpo, por ello no hay riesgo de contaminación viral. Además, la misma puede proveer una excelente estabilidad de almacenamiento para un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada el cual comprende un péptido insulinotrópico y una región Fe de inmunoglobulina, teniendo de este modo mayor peso molecular y mejorada duración in vivo de la actividad fisiológica en comparación con la proteína de tipo salvaje. Dicha formulación líquida de la presente invención puede proveer excelente estabilidad de almacenamiento con formulación simple y proveer la droga peptídica en forma más económica en comparación con otro estabilizante y secado por congelamiento. Si se agrega un conservante a la formulación, la formulación se puede usar múltiples veces. Además, la presente formulación puede retener la actividad proteica en el cuerpo durante un período más prolongado en comparación con una formulación de péptido insulinotrópico convencional y por lo tanto se puede usar como una formulación de droga eficaz.
DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 es un gráfico que muestra el análisis por RP-HPLC de la estabilidad del péptido en la formulación líquida finalmente seleccionada a un pH de 5,2 (Formulación líquida #1), la formulación líquida preparada por aplicación de un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada a una composición estabilizante de formulación líquida de droga péptido insulinotrópico disponible comercialmente, exenatida, es decir, exendina-4 (Byetta) (Formulación líquida #2), la formulación líquida preparada por aplicación de un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada a una composición estabilizante de formulación líquida de droga proteica de fusión inmunoglobulina, etanercept (proteína de fusión TNFR-Fc, ENBREL) (Formulación líquida #3) y un grupo control (Formulación líquida #4) que se almacenaron todas a 25±2°C durante 8 semanas.
La Figura 2 es un gráfico que muestra el análisis por RP-HPLC de la proporción de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada oxidado en la formulación líquida finalmente seleccionada a un pH de 5,2 que carece de metionina (Formulación líquida #1) y en la formulación líquida a un pH de 5,2 que comprende metionina (Formulación líquida #2) durante el almacenamiento de las mismas a 25±2°C y a 40±2°C durante 4 semanas.
La Figura 3 muestra los resultados del monitoreo de la ocurrencia de precipitación en las composiciones del conjugado de peptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la Tabla 18 a ojo desnudo a 40°C durante 48 horas. La duración de la ausencia de precipitación indica el tiempo durante el cual la precipitación de proteínas no ocurrió luego de almacenar el péptido.
La Figura 4 muestra los resultados del monitoreo de la ocurrencia de precipitación en las composiciones de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la Tabla 19 a ojo desnudo a 40°C durante 7 días. La duración de la ausencia de precipitación indica el tiempo durante el cual no ocurrió la precipitación de proteínas luego del almacenamiento del péptido.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCION Como un aspecto, la presente invención provee una formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada, que comprende una cantidad farmacéuticamente eficaz de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada en donde un péptido insulinotrópico está unido a una región Fe de inmunoglobulina; y un estabilizante libre de albúmina, en donde el estabilizante comprende una solución amortiguadora, un alcohol de azúcar, un tensioactivo no iónico y un agente isotónico.
Además, la presente invención provee una formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada para administraciones múltiples, que adicionalmente comprende un conservante además del péptido insulinotrópico conjugado y estabilizante libre de albúmina.
Tal como se usa en la presente, “conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada” se refiere a un conjugado en donde se unen un péptido insulinotrópico fisiológicamente activo que comprende un derivado, variante, precursor y fragmento y una región Fe de inmunoglobulina, y además puede referirse a un conjugado que tiene una duración in vivo aumentada de actividad fisiológica en comparación con un péptido insulinotrópico de tipo salvaje.
Tal como se usa en la presente, el termino “de acción prolongada”, se refiere a un potenciamiento de la duración de actividad fisiológica en comparación con la de tipo salvaje. El término “conjugado” se refiere a la forma en donde un péptido insulinotrópico y una región Fe de inmunoglobulina están combinados.
El péptido insulinotrópico usado en la presente invención tiene la función de secretar insulina y estimula la síntesis y expresión de insulina en células b pancreáticas. El tipo de péptido insulinotrópico incluye precursor, agonista, derivados, fragmentos y variantes. Preferentemente, el péptido insulinotrópico puede ser un péptido similar a glucagón-1 (GLP-1), un péptido similar a glucagón-2 (GLP-2), exendina-3, exendina-4 e imidazoacetil (CA) exendina-4 y más preferentemente, imidazoacetil (CA) exendina-4. Cualquier péptido insulinotrópico, nativo o recombinante, se puede usar y preferentemente es un péptido insulinotrópico recombinante generado con el uso de E.coli como células huésped. En la medida que su actividad biológica no se afecte significativamente, cualquier derivado del mismo, que sea generado por sustitución, eliminación, o inserción de aminoácidos, se puede usar en la presente invención.
La secuencia del péptido insulinotrópico se puede obtener a partir de bases de datos tales como GenBank de NCBI y puede tener 70% o más, preferentemente 80% o más, más preferentemente 90% o más y aún más preferentemente 95% o más y más preferentemente 98% o más de homología de secuencia con una proteína de tipo salvaje, en la medida que demuestre la actividad de un péptido insulinotrópico.
Además, la Fe de inmunoglobulina útil de la presente invención puede ser una Fe de inmunoglobulina humana o su análogo cercanamente relacionado o Fe de inmunoglobulina derivado de animales tales como vacas, cabras, cerdos, ratones, conejos, hámsteres, ratas y conejillos de las indias. Además, la región Fe de inmunoglobulina puede derivar de IgG, IgA, IgD, IgE, IgM, o una combinación o híbrido de las mismas. Preferentemente, la Fe de inmunoglobulina deriva de IgG o IgM que son las más abundantes en la sangre humana y más preferentemente, deriva de IgG que se sabe que mejora la vida media de la unión a ligando de la proteína. Además, la región Fe de inmunoglobulina puede ser un dímero o multímero de inmunoglobulinas de cadena simple que tiene dominios del mismo origen. La Fe de Inmunoglobulina se puede generar por tratamiento de una IgG nativa con cierta proteasa, o por celulas transformadas usando una téenica de recombinación genética. Preferentemente, la Fe de inmunoglobulina es una Fe de inmunoglobulina humano recombinante producido en E.coli.
A su vez, la IgG puede ser dividida en las subclases lgG1, lgG2, lgG3 e lgG4 y en la presente invención se puede usar una combinación o híbrido de las mismas. Se prefieren las subclases lgG2 e lgG4 y la más preferida es la región Fe de lgG4 que raramente tiene una función efectora tal como citotoxicidad dependiente de complemento (CDC). Es decir, la región Fe de inmunoglobulina más preferida como un transportador de droga de la presente invención es una región Fe aglicosilada derivada de lgG4 humana. Una región Fe derivada de humano es más preferida respecto a una región Fe derivada de no humano, que puede actuar como un antígeno en el cuerpo humano y provocar respuestas inmunes no deseadas tales como la producción de un anticuerpo nuevo.
El conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada usado en la presente invención se prepara por combinación del péptido insulinotrópico sintetizado y una región Fe de inmunoglobulina. El método para combinar a los dos puede ser entrecruzamiento de un péptido insulinotrópico y una región Fe de inmunoglobulina a través de un polímero no peptídico o la producción de una proteína de fusión en la cual el péptido insulinotrópico y una región Fe de inmunoglobulina se unen unidos por recombinación genética.
El polímero no peptídico que se usa para el entrecruzamiento puede ser uno que se elige del grupo que consiste en polietilenglicol, polipropilenglicol, copolímeros de etilenglicol y propilenglicol, polioles polioxietilados, polivinilacohol, polisacáridos, dextrano, poliviniletiléter, polímeros biodegradables tales como PLA (poli(ácido láctico) y PLGA (poli(ácido láctico-glicólico), polímeros de lípidos, quitinas, ácido hialurónico o una combinación de los mismos. Preferentemente, se puede usar polietilenglicol pero no se limita al mismo. Sus derivados bien conocidos en el arte y derivados que pueden prepararse fácilmente usando un método conocido en el arte también se encuentran dentro del alcance de la presente invención.
Para preparar un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada usado en la presente invención, uno puede referirse al Registro de Patente Coreana N° 10-0725315, Publicación de Patente Coreana N° 10-2009-0008151 y Registro de Patente Coreana N° 10-1058290. Aquellos con experiencia en el arte pueden producir el conjugado de peptido insulinotrópico de acción prolongada de la presente invención por referencia a estas referencias.
La formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de la presente invención comprende un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada en una cantidad terapéuticamente eficaz. En general, la cantidad terapéuticamente eficaz del péptido insulinotrópico, especialmente exendina-4 (Byetta), se refiere a 250 mcg en un bolígrafo inyector. La concentración de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada usada en la presente invención varía en un rango entre 0,1 mg/ml y 200 mg/ml y preferentemente entre 0,5 mg/ml y 150 mg/ml. El péptido insulinotrópico puede ser preferentemente un conjugado de CA exendina-4 de acción prolongada. La formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de la presente invención puede almacenar establemente el conjugado sin precipitación, no sólo cuando el péptido insulinotrópico conjugado está presente en baja concentración, sino también cuando está presente en alta concentración. Por lo tanto, la presente formulación puede proveer establemente el péptido insulinotrópico en alta concentración en el cuerpo.
Tal como se usa en la presente, el término “estabilizante” se refiere una sustancia que permite el almacenaje estable del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada. El término “estabilización” se refiere al estado en donde la pérdida de un ingrediente activo es menor que una cierta cantidad, típicamente menos de 10% durante un cierto período y bajo condiciones de almacenamiento específicas. Una formulación se considera como una formulación estable cuando la pureza residual del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada es 90% o más y más preferentemente entre 92 y 95% después del almacenamiento a 5±3°C durante 2 años, a 25±2°C durante 6 meses, o a 40±2°C durante entre 1 y 2 semanas. Como para las proteínas como los conjugados de péptido insulinotrópico de acción prolongada, la estabilidad de almacenamiento de los mismos es importante para proveer una dosificación precisa así como para suprimir la formación potencial de sustancias antigenicas contra el conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada. Durante el almacenamiento, 10% de pérdida del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada es aceptable para una administración sustancial a menos que provoque la formación de agregados o fragmentos en la composición llevando a la formación de compuestos antigénicos.
El estabilizante de la presente invención preferentemente comprende una solución amortiguadora, un alcohol de azúcar, un agente isotónico tal como cloruro de sodio y un tensioactivo no iónico y más preferentemente además comprende metionina, para estabilizar el conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada.
La solución amortiguadora se encarga de mantener el pH de la solución para prevenir un cambio abrupto de pH en la formulación líquida para estabilizar el conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada. La solución amortiguadora puede incluir una sal alcalina (fosfato de sodio o potasio o sales ácidas o diácidas de los mismos), citrato de sodio/ácido cítrico, acetato de sodio/ácido acético, histidina/clorhidrato de histidina, cualquier otra solución amortiguadora de pH farmacéuticamente aceptable conocida en el arte y una combinación de los mismos. El ejemplo preferido de dicha solución amortiguadora incluye una solución amortiguadora de citrato, una solución amortiguadora de acetato y una solución amortiguadora de histidina. La concentración de buffer preferentemente es entre 5 mM y 100 mM, más preferentemente entre 10 mM y 50 mM. El pH de la solución amortiguadora preferentemente es entre 4,0 y 7,0, más preferentemente entre 5,0 y 7,0, incluso más preferentemente entre 5,2 y 7,0 e incluso mucho más preferentemente entre 5,2 y 6,0.
El alcohol de azúcar actúa incrementando la estabilidad del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada. La concentración del alcohol de azúcar usada en la presente invención preferentemente es entre 1 y 20 % de peso en volumen en base al volumen total de solución, más preferentemente entre 3 y 10% de peso en volumen en base al volumen total de solución. Un alcohol de azúcar puede ser uno o más que se eligen del grupo que consiste en manitol, sorbitol y sacarosa, pero no se limita a los mismos.
Un agente isotónico actúa para mantener una presión osmótica apropiada cuando el conjugado de peptido insulinotrópico de acción prolongada en solución se administra en el cuerpo y también actúa para estabilizar el conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada en solución. La presión osmótica de la formulación se ajusta para ser isotónica con la sangre. Estas formulaciones líquidas isotónicas tienen presión osmótica de aproximadamente 300 mOsm/kg en general. Un ejemplo representativo de agente isotónico incluye un alcohol de azúcar, sal inorgánica soluble en agua y aminoácidos y un ejemplo preferido es una sal inorgánica soluble en agua, es decir cloruro de sodio. La concentración de cloruro de sodio como agente isotónico preferentemente es entre 0 y 150 mM y puede ser ajustada dependiendo del tipo y cantidad de componentes incluidos en la formulación tal que la formulación líquida que incluye toda la mezcla se vuelva isotónica.
El tensioactivo no iónico reduce la tensión superficial de la solución de proteína para prevenir la adsorción o agregación de proteínas a una superficie hidrofóbica. Los ejemplos del tensioactivo no iónico útiles en la presente invención incluyen a polisorbatos, poloxámeros y combinaciones de los mismos, con preferencia por los polisorbatos. Entre los tensioactivos no iónicos de polisorbatos están el polisorbato 20, polisorbato 40, polisorbato 60, y polisorbato 80. El tensioactivo no iónico más preferido es el polisorbato 20.
Es inapropiado usar un tensioactivo no iónico a alta concentración en una formulación líquida, y esto se debe al hecho de que el tensioactivo no iónico a alta concentración induce efectos de interferencia cuando se mide la concentración proteica y se determina la estabilidad proteica a través de métodos analíticos tales como espectroscopia UV o isoelectroenfoque, causando por lo tanto una dificultad para examinar de forma precisa la estabilidad proteica. Por lo tanto, la formulación líquida de la presente invención comprende el tensioactivo no iónico preferentemente a una concentración baja no más de 0,2% de peso en volumen, más preferentemente entre 0,001% y 0,05% de peso en volumen.
De acuerdo a un ejemplo de la presente invención, se demostró que cuando se agregó cloruro de sodio como agente isotónico en presencia de una solución amortiguadora, alcohol de azúcar, y tensioactivo no iónico, la estabilidad de almacenamiento del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada a baja concentración se incrementó de forma significativa. Esto indica que el uso de cloruro de sodio como agente isotónico en simultáneo con la solución amortiguadora, alcohol de azúcar, y tensioactivo no iónico induce efectos sinérgicos, permitiendo de esa forma que el conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada tenga una estabilidad alta. Sin embargo, como para un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada a alta concentración, cuando se excluyó al cloruro de sodio, se previno la existencia de precipitación y mejoró la solubilidad de la proteína. Esto resultados sugieren que cuando se usa cloruro de sodio como agente isotónico, se puede ajustar el contenido del mismo de acuerdo a la concentración del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada.
Además, se confirmó que un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada a baja concentración es más estable en una solución amortiguadora a un pH de 5,2, mientras que un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada a alta concentración es más estable en una solución amortiguadora a un pH de 5,4 o 5,6. Por consiguiente, se determinó que el pH de la solución amortiguadora se puede ajustar apropiadamente dependiendo de la concentración del conjugado.
La metionina comprendida en el estabilizante de la presente invención suprime la formación de impurezas que pueden existir por la oxidación proteica en solución, estabilizando de esa forma aún más a la proteína blanco. La concentración de metionina es entre 0,005 y 0,1% de peso en volumen en base al volumen total de la solución, preferentemente entre 0,01 y 0,1% (p/v).
Se prefiere que el estabilizante de la presente invención no contenga albúmina. Debido a que la albúmina sérica humana disponible como estabilizante de proteínas se produce a partir de suero humano, siempre existe la posibilidad de que la misma esté contaminada con virus patógenos de origen humano. La gelatina o la albúmina sérica bovina pueden causar enfermedades o pueden ser capaces de inducir una respuesta alérgica en algunos pacientes. Libre de proteínas heterólogas tales como albúminas séricas de origen humano o animal o de gelatina purificada, el estabilizante de la presente invención no tiene posibilidad de causar contaminación viral.
Además, el estabilizante de la presente invención puede comprender azúcares, polialcohol, o aminoácidos. Los ejemplos preferidos de azúcares, que además se pueden agregar para incrementar la estabilidad de almacenamiento del conjugado de peptido insulinotrópico de acción prolongada, incluyen a monosacáridos tales como mañosa, glucosa, fucosa y xilosa, y polisacáridos tales como lactosa, maltosa, sacarosa, rafinosa y dextrano. Los ejemplos preferidos de polialcohol incluyen a propilenglicol, polietilenglicol de bajo peso molecular, glicerol, polipropilenglicol de bajo peso molecular, y una combinación de los mismos.
La formulación líquida de la presente invención además puede comprender un conservante además de los previamente descritos conjugado, solución amortiguadora, agente isotónico, alcohol de azúcar, y tensioactivo no iónico, o adicionalmente metionina, con el propósito de prevenir la contaminación microbiana en una formulación de usos múltiples.
Tal como se usa en la presente, “conservante” se refiere a un compuesto que se agrega a una formulación farmacéutica para actuar como antimicrobiano. Los ejemplos de conservante incluye bencetonio, clorohexidina, fenol, m-cresol, alcohol bencílico, metilparabeno, propilparabeno, clorobutanol, o-cresol, p-cresol, clorocresol, cloruro de benzalconio, nitrato fenilmercúrico, timerosal, y ácido benzoico, a título enunciativo no taxativo. Se puede usar un tipo individual de conservante, o se puede usar una combinación al azar de dos o más tipos de conservantes. Preferentemente, la formulación líquida de la presente invención puede comprender uno o más de m-cresol, fenol, y alcohol bencílico como conservante.
La formulación líquida de la presente invención puede comprender entre 0,001% y 1% de peso en volumen de conservante, y preferentemente entre 0,001% y 0,5% de peso en volumen de conservante, y más preferentemente entre 0,001 y 0,25% de peso en volumen de conservante.
En un ejemplo de la presente invención, se agregó 0,22% de peso en volumen de m-cresol como conservante en la formulación líquida de la presente invención, y se evaluó el efecto del cresol sobre la estabilidad del conjugado de péptido insulinotrópico. Como resultado, se confirmó que el conjugado permaneció estable en la formulación con agregado con conservante, sin precipitación. Por lo tanto, la formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de la presente invención, la cual comprende conservante además del estabilizante, se puede usar para administraciones múltiples.
La formulación líquida de la presente invención además puede comprender otras sustancias y materiales conocidos en el arte selectivamente además de los previamente descritos solución amortiguadora, agente isotónico, alcohol de azúcar, y tensioactivo no iónico, o adicionalmente metionina y conservante, con la condición de que el efecto de la presente invención no se vea afectado.
La formulación líquida libre de albúmina de conjugado de peptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la presente invención que provee estabilidad al conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada no tiene un riesgo de contaminación viral, a la vez que provee una excelente estabilidad de almacenamiento con una formulación individual, y por consiguiente la presente formulación se puede proveer de forma más eficaz desde el punto de vista de los costos en comparación con otro estabilizante o formulación seca libre.
También, debido a que la formulación líquida de la presente invención comprende el conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada que tiene una mejor duración de actividad fisiológica en comparación con uno de tipo salvaje, la misma se puede usar como una formulación de droga eficaz reteniendo la actividad proteica en el cuerpo durante un periodo más largo en comparación con la formulación de péptido insulinotrópico convencional. También, la presente formulación líquida provee una excelente estabilidad para almacenar un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada a alta concentración así como también a baja concentración.
Como otro aspecto, la presente invención provee un método para preparar la formulación líquida de la presente invención.
Se puede preparar una formulación líquida estable de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada a través de la generación de un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada, y mezclando el conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada que se generó con un estabilizante que comprende una solución amortiguadora, alcohol de azúcar, tensioactivo no iónico, y agente isotónico. También, para usos múltiples, una formulación líquida estable de conjugado de peptido insulinotrópico de acción prolongada se puede generar por mezclado adicional con un conservante además de los estabilizantes.
Modo para la Invención De aquí en adelante, la presente invención se describirá en más detalle con referencia a los Ejemplos. Sin embargo, estos Ejemplos tienen solo un propósito ilustrativo, y la invención no pretende estar limitada por estos Ejemplos.
Ejemplo 1: Evaluación de la Estabilidad de Conjugado de Péptido Insulinotrópico de Acción Prolongada en Presencia o Ausencia de Agente ¡sotónico Tal como una Sal La estabilidad del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada (15,41 mg/rriL CA exendina-4, Conc. Nominal) se evaluó en presencia o ausencia de cloruro de sodio como agente isotónico en la formulación que comprende una solución amortiguadora, un alcohol de azúcar, y un tensioactivo no iónico como estabilizante; y en la formulación que comprende una solución amortiguadora, un alcohol de azúcar, un tensioactivo no iónico, y metionina como estabilizante. Para este propósito, el conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada se almacenó a 25°C y 40°C entre 0 y 4 semanas en las siguientes composiciones de la Tabla 1 , y luego se analizó la estabilidad del conjugado por cromatografía líquida de alto rendimiento de fase reversa (RP-HPLC) y cromatografía líquida de alto rendimiento-exclusión por tamaño (SE-HPLC). Se usó solución amortiguadora de citrato como solución amortiguadora, se usó manitol como alcohol de azúcar, y se usó polisorbato 20 como tensioactivo no iónico. En las Tablas 2 y 3, RP-HPLC (%) y SE-HPLC (%) representan el valor de‘% de área/% de área inicial’, lo que muestra la pureza residual del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada en comparación con la pureza inicial. La Tabla 2 muestra la pureza residual del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada después de almacenamiento a 25°C, y la Tabla 3 muestra la pureza residual del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada después de almacenamiento a 40°C.
Tabla 1 Tabla 2 Tabla 3 En base a la comparación entre los Grupos de prueba #1 y #2, y entre #3 y #4 en las Tablas 2 y 3, es evidente que cuando la formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada se almacenó a entre 25°C y 40°C, en especial a 40°C durante 4 semanas, y en presencia de NaCI como agente isotónico, en particular NaCI 150 mM, la estabilidad del conjugado de peptido insulinotrópico de acción prolongada se mantuvo remarcablemente alta (Tablas 2 y 3).
Ejemplo 2: Evaluación de la Estabilidad de Conjugado de Péptido Insulinotrópico de Acción Prolongada a Diferentes pH de Solución amortiguadora Mientras que el rango de pH de la droga proteica líquida general es entre 5 y 7, el pH de formulación líquida de exendina-4 (Byetta), una droga de péptido insulinotrópico, es de 4,5, el cual es menor que el rango general de pH. Por lo tanto, en este Ejemplo, se examinó el efecto del pH de la solución amortiguadora sobre la estabilidad de conjugado para un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada que comprende péptido insulinotrópico y proteína Fe de inmunoglobulina, preferentemente conjugado de acción prolongada de imidazoacetil (CA) exendina-4.
Se usó una solución amortiguadora de citrato como solución amortiguadora, se usó manitol como alcohol de azúcar, se usó cloruro de sodio como agente isotónico, y se usó polisorbato 80 como tensioactivo no iónico. Se usaron las siguientes composiciones que se muestran en la Tabla 4 como estabilizante para el conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada. Luego, las composiciones de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada se almacenaron a 25±2°C durante 4 semanas y se analizó la estabilidad de las mismas por cromatografía de exclusión por tamaño (SE-HPLC) y cromatografía de fase reversa (RP-HPLC). RP-HPLC (%) y SE-HPLC (%) en la Tabla 5 representan‘% de área / % de área inicial’, que demuestra la pureza residual del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada en comparación con la pureza inicial.
Tabla 4 Tabla 5 Como se mostró previamente, cuando el pH fue de 5,2 en la formulación líquida previa, el conjugado de peptido insulinotrópico de acción prolongada fue más estable (Tabla 5).
Ejemplo 3: Evaluación de la Estabilidad de Conjugado de Péptido Insulinotrópico de Acción Prolongada En Función del Tipo v de la Concentración de Tensioactivo No Iónico La estabilidad del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada se examinó usando diferentes tipos y concentraciones de polisorbato el cual es un tensioactivo no iónico en el estabilizante de la presente invención.
Los tensioactivos no iónicos, o sea, el polisorbato 80 y el polisorbato 20, se examinaron a ambas concentraciones de 0,005% y 0,01%. La composición de estabilizante comprende una solución amortiguadora, un alcohol de azúcar, y un agente isotónico así como tambien tensioactivo, como se usó en el ejemplo previo para proveer estabilidad al conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada. Se usó solución amortiguadora de citrato a un pH de 5,2, la cual mostró una alta estabilidad en el Ejemplo 2, como solución amortiguadora, se usó manitol como alcohol de azúcar, y se usó cloruro de sodio como agente isotónico.
Se usaron las siguientes composiciones que se muestran en la Tabla 6 como estabilizante para el conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada, preferentemente para conjugado de CA exendina-4 de acción prolongada. Luego se almacenaron las composiciones a 25±2°C durante 8 semanas y se analizó la estabilidad de las mismas por RP-HPLC y SE-HPLC. RP-HPLC (%) y SE-HPLC (%) en la Tabla 7 representan la pureza residual del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada en comparación con la pureza inicial.
Tabla 6 Tabla 7 Como se mostró previamente, en base a los resultados del análisis por SE-HPLC, la estabilidad del conjugado de peptido insulinotrópico de acción prolongada fue casi la misma incluso cuando se usaron diferentes tipos y concentraciones de polisorbatos. Sin embargo, en base a los resultados del análisis por RP-HPLC, se observó que cuando se usó polisorbato 20, la estabilidad del péptido conjugado fue similar o mayor que cuando se usó la misma concentración de polisorbato 80. También, la estabilidad del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada fue mayor en la formulación líquida que comprende 0,005% de polisorbato 20, en comparación con la que comprende 0,01% de polisorbato 20 (Tabla 7).
Ejemplo 4: Comparación de Estabilidad entre la Formulación Líquida Finalmente Seleccionada de Conjugado de Péptido Insulinotrópico de Acción Prolongada v la Formulación Líquida Comercialmente Disponible de Péptido o Droga Proteica que Comprende al Mismo En el presente Ejemplo, se evaluó la estabilidad de la formulación que se seleccionó a través de las pruebas de estabilidad en los Ejemplos 1 a 3. La formulación finalmente seleccionada de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada comprende solución amortiguadora de citrato a un pH de 5,2, cloruro de sodio, manitol, y polisorbato 20. Para este propósito, se comparó la estabilidad de las formulaciones de droga entre las formulaciones líquidas que se generan por aplicación del conjugado de peptido insulinotrópico de acción prolongada a una formulación líquida de comercialmente disponible de droga de péptido insulinotrópico, exendina-4 (Byetta); y a una formulación líquida de droga proteica de fusión con inmunoglobulina, Etanercept (proteína de fusión TNFR-Fc, ENBREL).
Usando las siguientes composiciones que se muestran en la Tabla 8, se prepararon las siguientes formulaciones: una formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada, más preferentemente conjugado de CA exendina-4 de acción prolongada (Formulación Líquida #1); una formulación líquida que se preparó por aplicación del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada a la composición de estabilizante de la formulación líquida de droga de péptido insulinotrópico, exendina-4 (Byetta) (Formulación Líquida #2); y una formulación líquida que se preparó por aplicación del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada a la composición de estabilizante de la formulación líquida de droga proteica de fusión con inmunoglobulina, Etanercept (proteína de fusión TNFR-Fc, ENBREL) (Formulación Líquida #3). Como grupo control, se preparó una formulación líquida por aplicación del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada a una composición de estabilizante que comprende PBS solo (Formulación Líquida #4). Subsiguientemente, se almacenaron las formulaciones a 25±2°C durante 8 semanas, y se analizó la estabilidad de las mismas por RP-HPLC y SE-HPLC. Los valores de RP-HPLC (%) y SE-HPLC (%) en la Tabla 9 muestran la pureza residual del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada en comparación con la pureza inicial.
Tabla 8 Tabla 9 Como resultado de la prueba de estabilidad, se observó que la formulación líquida de conjugado de peptido insulinotrópico de acción prolongada de la presente invención mostró una mayor estabilidad que las formulaciones líquidas preparadas por aplicación del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada a las formulaciones líquidas de una droga de péptido insulinotrópico comercialmente disponible, exendina-4 (Byetta), y una droga proteica de fusión con inmunoglobulina, Etanercept (proteína de fusión TNFR-Fc, ENBREL), como se muestra en la Figura 1 y la Tabla 9.
Ejemplo 5: Evaluación de la Estabilidad de Conjugado de Peptido Insulinotrópico de Acción Prolongada En Función del Agregado de Metionina Con el objetivo de determinar el efecto de la metionina sobre la estabilidad del conjugado, se preparó la formulación líquida mediante el agregado de metionina, para prevenir la oxidación, a la composición que comprende solución amortiguadora de citrato a un pH de 5,2, cloruro de sodio, manitol, y polisorbato 20, la cual se seleccionó en los Ejemplos previos. Las formulaciones se almacenaron a 25±2°C durante 4 semanas y a 40±2°C durante 4 semanas, y luego se analizó la estabilidad de las mismas.
La formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada, más preferentemente el conjugado de CA exendina-4 de acción prolongada se preparó en las siguientes composiciones que se muestran en la Tabla 10 y se analizó la estabilidad de las mismas. Los valores de RP-HPLC (%) y SE-HPLC (%) en las Tablas 11 a 14 representan las proporciones de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada y las impurezas a cada punto de tiempo. La Tabla 11 muestra los resultados de la prueba de estabilidad acelerada por RP-HPLC (25±2°C) y la Tabla 12 muestra los resultados de la prueba de estabilidad acelerada por SE-HPLC (25±2°C). La Tabla 13 muestra los resultados de la prueba severidad de inestabilidad por RP-HPLC (40±2°C) y la Tabla 14 muestra los resultados de la prueba de severidad de inestabilidad por SE-HPLC (40±2°C). La impureza #3 representa la forma oxidada del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada. Sin embargo, debido a que la SE-HPLC separa la muestra por peso molecular y a que la diferencia de peso molecular entre la forma oxidada y la forma no oxidad es mínima, fue difícil aislar la forma oxidada del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada por SE-HPLC.
Tabla 10 Tabla 11 Tabla 12 Tabla 13 Tabla 14 Como en los resultados de la prueba de estabilidad acelerada y la prueba de severidad de inestabilidad y como se muestra en la Figura 2, se observó que la proporción de conjugado oxidado de peptido insulinotrópico de acción prolongada (Impureza #3 en el análisis por RP-HPLC) se incrementó en la formulación líquida sin metionina, pero no se incrementó en la formulación líquida que comprende 0,01% de metionina (Figura 2). Por lo tanto, se confirmó que la formulación líquida que contiene metionina puede proveer estabilidad al conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada más eficazmente.
Ejemplo 6: Evaluación de Estabilidad de Almacenamiento a Largo Plazo de la Formulación Líquida Finalmente Seleccionada de Conjugado de Péptido Insulinotrópico de Acción Prolongada En el presente Ejemplo, se evaluó la formulación liquida que se seleccionó finalmente en los ejemplos previos para estabilidad de almacenamiento a largo plazo y estabilidad acelerada. La formulación líquida finalmente seleccionada comprende solución amortiguadora de citrato a un pH de 5,2, cloruro de sodio, manitol, polisorbato 20, y metionina. Para este propósito, las formulaciones se almacenaron a 5±3°C durante 6 meses y a 25±2°C durante 6 meses y se analizó la estabilidad de las mismas. Los resultados se muestran en las Tablas 15 y 16, y los valores de RP-HPLC (%), SE-HPLC (%), contenido proteico (%), y prueba de actividad específica (%) representan la pureza residual del conjugado en comparación con la pureza inicial. La Tabla 15 muestra los resultados de la prueba de estabilidad de almacenamiento a largo plazo de la formulación después de almacenar la misma a 5±3°C, y la Tabla 16 muestra los resultados de la prueba de estabilidad acelerada después de almacenar la misma a 25±2°C.
Tabla 15 i l , , , i i , , i i i , , , i i l , , , Tabla 16 i i i i i l , , , , i l , i l l , , , , i , i l l , , , , , i i l l , , l , , Como resultado de la prueba de estabilidad de almacenamiento a largo plazo, el conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada fue estable por más de 6 meses en la formulación líquida de la presente invención. También, incluso cuando se almacenó en la condición acelerada durante 6 meses, los resultados del análisis por RP-HPLC mostraron que el 95,4% o más del conjugado de péptido permaneció intacto en la formulación, confirmando de esa forma que la presente formulación líquida provee una excelente estabilidad de almacenamiento al conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada.
Ejemplo 7: Evaluación de la Estabilidad de Conjugado de Peptido Insulinotrópico de Acción Prolongada en Función de la Concentración de Proteína Se examinó el efecto de la alta concentración de conjugado para la formulación líquida finalmente seleccionada, que comprende solución amortiguadora de citrato a un pH de 5,2, cloruro de sodio, manitol, polisorbato 20, y metionina para prevenir la oxidación. Para este propósito, se monitoreó la precipitación en la formulación a ojo desnudo a 40 °C y a las diferentes concentraciones de conjugado que se muestran en la Tabla 17. Después de 72 horas de monitoreo, ocurrió precipitación en todas las presentes formulaciones a alta concentración (4 mg/ml o más). También, a medida que se incrementó la concentración, se incrementó también la existencia de precipitación.
Tabla 17 Ejemplo 8: Evaluación de la estabilidad del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada a alta concentración en función de la concentración de una sal v un alcohol de azúcar, v la presencia de metionina Se examinó el efecto de la concentración de NaCI y manitol como alcohol de azúcar sobre la prevención de la precipitación para la formulación líquida finalmente seleccionada de conjugado de peptido insulinotrópico de acción prolongada a alta concentración. Las formulaciones se prepararon en las siguientes composiciones que se muestran en la Tabla 18 y se monitorearon para existencia de precipitación a ojo desnudo a 40°C durante 48 horas. La duración de ausencia de precipitación que se muestra en la Figura 3 muestra el tiempo durante el cual no ocurrió precipitación proteica después del almacenamiento.
Tabla 18 Como se muestra en los resultados previos, se confirmó que la concentración de NaCI no afectó de forma significativa la existencia de precipitación y la estabilidad del conjugado de péptido insulinotrópico a alta concentración, en base a la observación a ojo desnudo. Sin embargo, cuando la concentración de manitol como alcohol de azúcar se incrementó a entre 5% y 10%, se pudo suprimir la precipitación de forma significativa (Figura 3). También, cuando no se agregó metionina a la formulación, también se pudo suprimir la precipitación.
Ejemplo 9: Evaluación de Estabilidad del conjugado de peptido insulinotrópico de acción prolongada a alta concentración en función de la presencia de una sal y a diferentes pH Habiendo seleccionado 10% de manitol en el Ejemplo 8, se examinó el efecto de pH sobre la supresión de precipitación y la promoción de estabilidad del conjugado insulinotrópico de acción prolongada a alta concentración. Se usó solución amortiguadora de citrato como solución amortiguadora, y se usó polisorbato 20 como tensioactivo no iónico. De acuerdo al Ejemplo 8, se pudo suprimir la precipitación mediante la exclusión de metionina de la formulación. Sin embargo se agregó igual metionina a la formulación con el propósito de prevenir la oxidación de la proteína. Más aún, con el objetivo de confirmar el efecto sinérgico del NaCI y el pH, se agregó o se excluyó de la formulación NaCI 150 mM. Se preparó el conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada a alta concentración en las siguientes composiciones que se muestran en la Tabla 19 y se monitorearon para la existencia de precipitación a 40°C durante 7 días. Después de 7 días de almacenamiento, se analizaron las muestras por RP-HPLC y SE-HPLC.
La duración de la ausencia de precipitación que se muestra en la Figura 4 indica el tiempo durante el cual no ocurrió precipitación proteica después del almacenamiento. Los valores de RP-HPLC (%) de la Tabla 20 y de SE-HPLC (%) de la Tabla 21 indican la pureza residual del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada en comparación con la pureza inicial.
Tabla 19 Tabla 20 Tabla 21 Como se mostró previamente, se suprimió la precipitación mejor al alto pH de entre 5,4 y 5,6 que al pH de 5,2. Despues de 7 días de almacenamiento, se observó precipitación en todas las formulaciones. Sin embargo, en la composición que comprende 10% de manitol y NaCI 150 mM a un pH de 5,6 (Composición N° 6), la cantidad de pureza generada fue la menor. Al pH de entre 5,4 y 5,6, la presencia de NaCI no tuvo un efecto significativo sobre la estabilidad del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada a alta concentración, excepto por la precipitación (Tablas 20 y 21 , y Figura 4).
Ejemplo 10: Evaluación de Estabilidad del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada a alta concentración en función de la concentración de alcohol de azúcar v a diferentes pH En base a los Ejemplos previos, se examinó el efecto de concentración de alcohol de azúcar y pH sobre la estabilidad del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada a alta concentración. Se usó solución amortiguadora de citrato como solución amortiguadora, y se usó polisorbato 20 como tensioactivo no iónico. También, se agregó metionina a la formulación con el propósito de prevenir la oxidación. Además, en base a los resultados que se observaron en el Ejemplo 9, se excluyó al NaCI de la formulación de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada a alta concentración. Se formuló el conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada a alta concentración en las siguientes composiciones como se muestra en la Tabla 22 y se almacenaron a 40°C durante 5 días y se llevaron a la temperatura de 25°C y se almacenaron durante 4 semanas más. Cada semana, se analizó la estabilidad de la proteína por SE-HPLC, IE-HPLC, y RP-HPLC. Los valores de SE-HPLC (%) de la Tabla 23, IE-HPLC (%) de la Tabla 24, y RP-HPLC (%) de la Tabla 25 representan la pureza residual del conjugado de peptido insulinotrópico de acción Tabla 22 Tabla 23 Tabla 24 Tabla 25 Como se mostró previamente, cuando el pH fue bajo, también se redujo la estabilidad, en comparación con cuando el pH era alto. La estabilidad del conjugado fue la mayor a 10% de manitol, mientras que 2% y 5% de manitol no afectó a la estabilidad del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada a alta concentración.
Ejemplo 11 : Evaluación de la estabilidad del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada a alta concentración en función del tipo v concentración de alcohol de azúcar Para desarrollar una formulación líquida isotónica, se examinó el efecto del tipo y la concentración de un alcohol de azúcar, lo que afecta la presión osmótica de la formulación de la forma más significativa, sobre la estabilidad del conjugado de péptido insulinotrópico bajo la misma condición como en los Ejemplos previos. Se cambió el tipo de alcohol de azúcar a sacarosa. En base a la Formulación N°1 del Ejemplo 10, se reemplazó el 10% de manitol por 5% y 7% de sacarosa (Tabla 26). Se almacenaron las formulaciones a 25°C durante 4 semanas y se analizó la estabilidad de las mismas cada semana por SE-HPLC, IE-HPLC, y RP-HPLC. Los valores de SE-HPLC (%) de la Tabla 27, IE-HPLC (%) de la Tabla 28, y RP-HPLC (%) de la Tabla 29 representan la pureza residual del conjugado de peptido insulinotrópico de acción prolongada.
Tabla 26 Tabla 27 Tabla 28 Tabla 29 Como se mostró previamente, cuando se usó sacarosa en lugar de manitol, se mantuvo la estabilidad del conjugado, y la estabilidad del conjugado se incrementó levemente en 7% de sacarosa más que en 5% de sacarosa, pero no hubo diferencia significativa.
Ejemplo 12: Evaluación de la Estabilidad del conjugado de peptido insulinotrópico de acción prolongada a alta concentración en función del tipo de solución amortiguadora, del ajuste de la presión osmótica, v del agregado de conservante Con el objetivo de desarrollar una formulación líquida isotónica, se ajustó la concentración de alcohol de azúcar, que tiene el mayor efecto sobre la presión osmótica, y se probaron diferentes tipos de soluciones amortiguadoras para su capacidad para proveer estabilidad al conjugado bajo las condiciones de los Ejemplos previos. También, bajo la misma condición, se agregó 0,22% de m-cresol como conservante, y tambien se probó el efecto del mismo sobre la estabilidad del conjugado. Se formuló el conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada en las siguientes composiciones que se muestran en la Tabla 30 y se almacenaron a 25°C durante 2 semanas. Luego, cada semana, se analizó la estabilidad de las muestras por SE-HPLC, IE-HPLC, y RP-HPLC. Los valores de SE-HPLC (%) de la Tabla 31, IE-HPLC (%) de la Tabla 32, y RP-HPLC (%) de la Tabla 33 representan la pureza residual del conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada.
Tabla 30 Tabla 31 Tabla 32 Tabla 33 Como se mostró previamente, cuando se usaron diferentes tipos de soluciones amortiguadoras, el conjugado de peptido de cada formulación fue estable. También, el agregado de m-cresol no afectó la estabilidad del péptido.
Esto resultados apoyan la conclusión de que la composición de la formulación líquida de la presente invención puede mantener una alta estabilidad del conjugado de péptido insulinotrópico a alta concentración.
En base a la descripción previa, será evidente para las personas con experiencia en el arte que se pueden hacer diversas modificaciones y cambios sin alejarse del alcance y espíritu de la invención. Por lo tanto, se comprenderá que la forma de realización previa no es limitante, sino más bien ilustrativa en todos sus aspectos. El alcance de la invención está definido por las reivindicaciones adjuntas más que por la descripción que las precede, y por lo tanto todos los cambios y modificaciones que caen dentro de las metas y límites de las reivindicaciones, o equivalentes de dichas metas y límites, se pretende que queden abarcadas por las reivindicaciones.

Claims (30)

REIVINDICACIONES
1. Una formulación líquida de conjugado de peptido insulinotrópico de acción prolongada, CARACTERIZADA PORQUE comprende una cantidad farmacéuticamente eficaz de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada en donde un péptido insulinotrópico, que es un péptido fisiológicamente activo, se conecta a una región Fe de inmunoglobulina; y un estabilizante libre de albúmina, en donde el estabilizante comprende una solución amortiguadora, un alcohol de azúcar, un tensioactivo no iónico, y un agente isotónico.
2. La formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la reivindicación 1 , CARACTERIZADA PORQUE el péptido insulinotrópico se elige del grupo que consiste en péptido similar a glucagón-1 (GLP-1), péptido similar a glucagón-2 (GLP-2), exendina-3, exendina-4, los precursores, agonistas, derivados, fragmentos y variantes de los mismos, y una combinación de los mismos.
3. La formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la reivindicación 2, CARACTERIZADA PORQUE la variante del péptido insulinotrópico es imidazo-acetil exendina-4.
4. La formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADA PORQUE la región Fe de inmunoglobulina es una región Fe que deriva de IgG, IgA, IgD, IgE, o IgM.
5. La formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la reivindicación 4, CARACTERIZADA PORQUE la región Fe de inmunoglobulina es un híbrido de dominios de diferentes orígenes derivados de ¡nmunoglobulinas que se eligen del grupo que consiste en IgG, IgA, IgD, IgE, e IgM.
6. La formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la reivindicación 4, CARACTERIZADA PORQUE la región Fe de inmunoglobulina es un dímero o multímero que consiste en inmunoglobulinas de cadena individual compuestas de dominios del mismo origen.
7. La formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la reivindicación 4, CARACTERIZADA PORQUE la región Fe de inmunoglobulina es una región Fe de lgG4.
8. La formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la reivindicación 7, CARACTERIZADA PORQUE la región Fe de inmunoglobulina es una región Fe de lgG4 humana aglicosilada.
9. La formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADA PORQUE el conjugado se genera mediante el uso de un polímero no peptidilo o una téenica de recombinación.
10. La formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la reivindicación 9, CARACTERIZADA PORQUE el polímero no peptidilo es un polietilenglicol.
11. La formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la reivindicación 10, CARACTERIZADA PORQUE el polímero no peptidilo se elige del grupo que consiste en un polímero bíodegradable tal como un polipropilenglicol, un copolímero de etilenglicol y propilenglicol, un poliol polioxietilado, alcohol polivinílico, polisacárido, dextrano, polivinil etil éter, ácido poliláctico (PLA), y ácido poliláctico-glicólico (PLGA); un polímero lipídico; quitinas; un ácido hialurónico; y una combinación de los mismos.
12. La formulación líquida de conjugado de peptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADA PORQUE la cantidad farmacéuticamente eficaz de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada tiene una concentración de entre 0,5 mg/ml y 150 mg/ml.
13. La formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la reivindicación 1 , CARACTERIZADA PORQUE el alcohol de azúcar es uno o más que se eligen del grupo que consiste en manitol, sorbitol, y sacarosa.
14. La formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la reivindicación 13, CARACTERIZADA PORQUE la concentración del alcohol de azúcar es entre 3% de peso en volumen y 15% de peso en volumen en base al volumen total de la solución.
15. La formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADA PORQUE la solución amortiguadora es una solución amortiguadora de citrato, una solución amortiguadora de acetato, o una solución amortiguadora de histidina.
16. La formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADA PORQUE el rango de pH de la solución amortiguadora es entre 4 y 7.
17. La formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la reivindicación 16, CARACTERIZADA PORQUE el rango de pH de la solución amortiguadora es entre 5 y 7.
18. La formulación líquida de conjugado de peptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la reivindicación 1 , CARACTERIZADA PORQUE el agente isotónico es cloruro de sodio que tiene una concentración entre 0 mM y 200 mM.
19. La formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADA PORQUE el tensioactivo no iónico es polisorbato 80 o polisorbato 20.
20. La formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la reivindicación 19, CARACTERIZADA PORQUE el tensioactivo no iónico tiene una concentración de entre 0,001% de peso en volumen y 0,05% de peso en volumen.
21. La formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADA PORQUE el estabilizante además comprende metionina.
22. La formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la reivindicación 21, CARACTERIZADA PORQUE la concentración de la metionina es entre 0,005% de peso en volumen y 0,1% de peso en volumen en base al volumen total de la solución.
23. La formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADA PORQUE el estabilizante además comprende una o más sustancias que se eligen del grupo que consiste en azúcares, polialcoholes, y aminoácidos.
24. Una formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada que comprende un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada, CARACTERIZADA PORQUE un péptido insulinotrópico y una región Fe de inmunoglobulina se conectan por medio de polietilenglicol; y un estabilizante libre de albúmina, en donde el estabilizante comprende solución amortiguadora de citrato, manitol, polisorbato 20, y cloruro de sodio.
25. La formulación líquida de conjugado de peptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la reivindicación 1, CARACTERIZADA PORQUE además comprende uno o más conservantes que se eligen del grupo que consiste en m-cresol, fenol, y alcohol bencílico.
26. La formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la reivindicación 25, CARACTERIZADA PORQUE la concentración del conservante es entre 0,001% y 1% de peso en volumen en base al volumen total de la solución.
27. La formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la reivindicación 25, CARACTERIZADA PORQUE el conservante es m-cresol.
28. La formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de acuerdo a la reivindicación 25, CARACTERIZADA PORQUE es para usos múltiples.
29. Un método para preparar la formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 24, CARACTERIZADO PORQUE comprende (a) preparar un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada; y (b) mezclar el conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada que se preparó en el paso (a) con un estabilizante que comprende solución amortiguadora, alcohol de azúcar, tensioactivo no iónico, cloruro de sodio como agente isotónico, y metionina.
30. Un metodo para preparar la formulación líquida de conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada de cualquiera de las reivindicaciones 27 a 30, CARACTERIZADO PORQUE comprende (a) preparar un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada; y (b) mezclar el conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada que se preparó en el paso (a) con un estabilizante que comprende solución amortiguadora, alcohol de azúcar, tensioactivo no iónico, cloruro de sodio como agente isotónico, y metionina, y un conservante.
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Families Citing this family (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9180261B2 (en) 2010-01-12 2015-11-10 Dance Biopharm Inc. Preservative free insulin formulations and systems and methods for aerosolizing
US10842951B2 (en) 2010-01-12 2020-11-24 Aerami Therapeutics, Inc. Liquid insulin formulations and methods relating thereto
US20160243199A1 (en) 2015-02-25 2016-08-25 Dance Biopharm, Inc. Liquid insulin formulations and methods relating thereto
KR20130049671A (ko) 2011-11-04 2013-05-14 한미사이언스 주식회사 생리활성 폴리펩타이드 결합체 제조 방법
AR090281A1 (es) 2012-03-08 2014-10-29 Hanmi Science Co Ltd Proceso mejorado para la preparacion de un complejo polipeptidico fisiologicamente activo
UA116217C2 (uk) 2012-10-09 2018-02-26 Санофі Пептидна сполука як подвійний агоніст рецепторів glp1-1 та глюкагону
ES2688367T3 (es) 2012-12-21 2018-11-02 Sanofi Derivados de exendina-4 como agonistas duales de GLP1/GIP o trigonales de GLP1/GIP/glucagón
EP3080154B1 (en) 2013-12-13 2018-02-07 Sanofi Dual glp-1/gip receptor agonists
EP3080152A1 (en) 2013-12-13 2016-10-19 Sanofi Non-acylated exendin-4 peptide analogues
TW201609795A (zh) 2013-12-13 2016-03-16 賽諾菲公司 作為雙重ｇｌｐ－１／ｇｉｐ受體促效劑的艾塞那肽－４（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）胜肽類似物
WO2015086733A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Dual glp-1/glucagon receptor agonists
MA46146A1 (fr) 2014-01-20 2020-12-31 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Insuline a action prolongée et utilisation associée
SG10202107752PA (en) * 2014-03-31 2021-09-29 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd Method for improving solubility of protein and peptide by using immunoglobulin fc fragment linkage
TW201625670A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自ｅｘｅｎｄｉｎ－４之雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑
TW201625668A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 作為胜肽性雙重ｇｌｐ－１／昇糖素受體激動劑之艾塞那肽－４衍生物
TW201625669A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自艾塞那肽－４（Ｅｘｅｎｄｉｎ－４）之肽類雙重ＧＬＰ－１／升糖素受體促效劑
AR100639A1 (es) 2014-05-29 2016-10-19 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Composición para tratar diabetes que comprende conjugados de análogos de insulina de acción prolongada y conjugados de péptidos insulinotrópicos de acción prolongada
AR100695A1 (es) 2014-05-30 2016-10-26 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Composición para el tratamiento de diabetes mellitus que comprende insulina y un agonista dual glp-1 / glucagón
US9932381B2 (en) 2014-06-18 2018-04-03 Sanofi Exendin-4 derivatives as selective glucagon receptor agonists
KR102472312B1 (ko) * 2014-10-21 2022-11-29 헥시마 리미티드 치료 방법
US20160151511A1 (en) 2014-12-02 2016-06-02 Antriabio, Inc. Proteins and protein conjugates with increased hydrophobicity
MY185334A (en) 2014-12-30 2021-05-06 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Glucagon derivatives with improved stability
MX2017014586A (es) 2015-06-04 2018-03-09 Antriabio Inc Pegilacion de aminas para la preparacion de conjugados de proteinas especificos de un sitio.
AR105319A1 (es) 2015-06-05 2017-09-27 Sanofi Sa Profármacos que comprenden un conjugado agonista dual de glp-1 / glucagón conector ácido hialurónico
BR112017028517A2 (pt) 2015-06-30 2018-08-28 Hanmi Pharm. Co., Ltd. ?composição farmacêutica, vetor, peptídeo, polinucleotídeo e conjugado isolado e composição?
TW201706291A (zh) 2015-07-10 2017-02-16 賽諾菲公司 作為選擇性肽雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑之新毒蜥外泌肽（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）衍生物
UY36870A (es) 2015-08-28 2017-03-31 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Análogos de insulina novedosos
AU2015416589B2 (en) * 2015-12-10 2021-04-01 Menicon Co., Ltd. Peptide composition
AU2016382394B2 (en) 2015-12-31 2019-07-04 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Long-acting conjugate of triple glucagon/GLP-1/GIP receptor agonist
TWI757305B (zh) 2016-06-29 2022-03-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 升糖素衍生物、其接合物、及包含其之組成物、及其醫療用途
JP7158378B2 (ja) 2016-09-23 2022-10-21 ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド インスリン受容体との結合力が減少された、インスリンアナログ及びその用途
GB201621987D0 (en) * 2016-12-22 2017-02-08 Archer Virgil L See Archer Sheri A Arecor Ltd Novel composition
US11752216B2 (en) 2017-03-23 2023-09-12 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Insulin analog complex with reduced affinity for insulin receptor and use thereof
CA3088763A1 (en) * 2018-01-26 2019-08-01 Genentech, Inc. Compositions and methods of use
CN108841007B (zh) * 2018-06-14 2020-12-29 江南大学 带有羟胺基的艾塞那肽类似物及其应用
KR20210144609A (ko) * 2020-05-22 2021-11-30 한미약품 주식회사 글루카곤, glp-1 및 gip 삼중 활성체의 지속형 결합체의 액상 제제
CN114053217B (zh) * 2020-08-03 2023-04-18 华兰生物工程股份有限公司 一种Exendin-4-Fc融合蛋白注射制剂及其制备方法
KR20230000682A (ko) 2021-06-25 2023-01-03 한미약품 주식회사 심혈관 질환 또는 신장 기능장애 발생의 위험을 감소시키기 위한 에페글레나타이드

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5545618A (en) 1990-01-24 1996-08-13 Buckley; Douglas I. GLP-1 analogs useful for diabetes treatment
US7399489B2 (en) * 1999-01-14 2008-07-15 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Exendin analog formulations
US6924264B1 (en) 1999-04-30 2005-08-02 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Modified exendins and exendin agonists
WO2001087329A1 (en) * 2000-05-15 2001-11-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Liquid pharmaceutical composition containing an erythropoietin derivate
WO2002046227A2 (en) * 2000-12-07 2002-06-13 Eli Lilly And Company Glp-1 fusion proteins
US20050176108A1 (en) 2003-03-13 2005-08-11 Young-Min Kim Physiologically active polypeptide conjugate having prolonged in vivo half-life
WO2004105790A1 (en) * 2003-06-03 2004-12-09 Novo Nordisk A/S Stabilized pharmaceutical peptide compositions
KR101135244B1 (ko) * 2007-11-29 2012-04-24 한미사이언스 주식회사 인슐린 분비 펩타이드 결합체를 포함하는 비만 관련질환 치료용 조성물
BRPI0406605B8 (pt) 2003-11-13 2021-05-25 Hanmi Holdings Co Ltd conjugado de proteína, método para a preparação do mesmo e composição farmacêutica para intensificar a duração e estabilidade in vivo de um polipeptídeo fisiologicamente ativo
US20090238838A1 (en) * 2003-11-13 2009-09-24 Hanmi Pharm. Ind. Co. Ltd. Insulinotropic peptide conjugate using an immunoglobulin fc
US20060210614A1 (en) * 2003-12-26 2006-09-21 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Method of treatment of a metabolic disease using intranasal administration of exendin peptide
AU2005319432A1 (en) 2004-12-22 2006-06-29 Eli Lilly And Company GLP-1 analog fusion protein formulations
WO2006076471A2 (en) 2005-01-12 2006-07-20 Nobex Corporation Bnp conjugates and methods of use
EP1920061A4 (en) 2005-07-27 2009-05-13 Wang Qinghua GLP / 1 / EXENDIN 4 IGG FC FUSION CONSTRUCTS FOR THE TREATMENT OF DIABETES
EP2046826B1 (en) 2006-07-24 2011-09-14 Biorexis Pharmaceutical Corporation Exendin fusion proteins
JP2008169195A (ja) 2007-01-05 2008-07-24 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd キャリア物質を用いたインスリン分泌ペプチド薬物結合体
US20100260766A1 (en) * 2007-03-22 2010-10-14 Arvind Srivastava Stable antibody formulations
WO2009009562A2 (en) * 2007-07-10 2009-01-15 Eli Lilly And Company Glp-1-fc fusion protein formulation
JP2009019027A (ja) 2007-07-16 2009-01-29 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd アミノ末端のアミノ酸が変異したインスリン分泌ペプチド誘導体
US20090181037A1 (en) * 2007-11-02 2009-07-16 George Heavner Semi-Synthetic GLP-1 Peptide-FC Fusion Constructs, Methods and Uses
HUE030499T2 (hu) * 2009-07-06 2017-05-29 Sanofi Aventis Deutschland Metionint tartalmazó vizes készítmények
RU2682720C2 (ru) * 2010-01-19 2019-03-21 Ханми Сайенс Ко., Лтд. Жидкие составы для конъюгата эритропоэтина длительного действия
AR081066A1 (es) * 2010-04-02 2012-06-06 Hanmi Holdings Co Ltd Conjugado de insulina donde se usa un fragmento de inmunoglobulina
KR101330868B1 (ko) * 2010-06-08 2013-11-18 한미사이언스 주식회사 면역글로불린 단편을 이용한 인슐린 유도체 약물 결합체
KR101303388B1 (ko) * 2010-10-26 2013-09-03 한미사이언스 주식회사 지속형 인터페론 알파 결합체의 액상 제제

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