MX2014003987A - Derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazolo[3,4-d] pirimidina, su manufactura y uso como agentes antivirales. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazolo[3,4-d]pirimidina de la fórmula general I o sales o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde por lo menos un átomo de hidrógeno está sustituido en por lo menos uno de los grupos fenilo A y B por un sustituyente RH, que tiene una constante de Hammett sp, mayor que 0.23. La presente invención también se refiere al método de su manufactura. Los compuestos correspondientes se ha encontrado que tienen sorprendentemente una actividad particularmente alta contra virus, particularmente, rinovirus y picornavirus. Además, los compuestos se toleran muy bien. Por estas razones los compuestos son apropiados para el tratamiento de infecciones virales y como medicamentos.

Description

DERIVADOS DE 4 -AMINO-3 -FENILAMINO-6 -FENILPIRAZOLO [3 , 4 - D] PIRIMIDINA, SU MANUFACTURA Y USO COMO AGENTES ANTIVIRALES Campo de la Invención La invención se refiere a nuevos tipos de derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazolo [3 , 4-d] pirimidina y su uso como agentes antivirales, preferiblemente para el tratamiento de infecciones por picornavirus .

Antecedentes de la Invención Los picornavirus, especialmente enterovirus y rinovirus, son responsables de un amplio espectro de enfermedades en los seres humanos. Los enterovirus son más de 60 serotipos de patógenos humanos diferentes ( elnick J in: Fields B et al., editors . Virology. Philadephia: Lippincott -Raven Publishers; 1996,655-712) .

Infecciones por enterovirus, echovirus, coxsackievirus A y B frecuentemente toman un curso de fiebre no específica y causan enfermedades de las vías respiratorias altas que frecuentemente no pueden ser distinguidas de las infecciones por rinovirus Más cuadros clínicos graves, que también pueden ocurrir como epidemias, incluyen conjuntivitis hemorrágica, herpangina, enfermedades de mano-pie-boca, meningitis aséptica, encefalitis y miocarditis aguda. Así, los diferentes tipos de virus pueden causar los mismos síntomas o un tipo de virus pueden causar cuadros clínicos bastante diferentes. Con Ref. 247713 la introducción de métodos modernos y sensibles en el diagnóstico de virus de ARN de enterovirus persistente, así como las proteínas del virus podrían ser identificadas en relación con enfermedades crónicas tales como diabetes tipo 2, poliomiositis y especialmente miocarditis crónica. Infecciones por enterovirus persistentes también se producen en pacientes con agammaglobulinemia y presentes como meningoencefalitis por enterovirus persistentes. La dermatomiositis o polimiositis ocurrieron frecuentemente como síntomas concomitantes. Los rinovirus incluyen aproximadamente 100 serotipos. Las infecciones por rinovirus causan más de la mitad de todas las enfermedades respiratorias del tracto respiratorio superior en seres humanos (Couch RB en: Campos BM et al., editors : Fields Virology, 3a edición Lippincott-Raven Philadelfia, 1996, 713-35) . En una duración promedio de la enfermedad de aproximadamente 10 días estos resfriados que tienen una ventaja de curso en su mayoría inofensivas para millones de visitas al GP y tiempo de la escuela y trabajo cada año. Las posibles complicaciones incluyen otitis media, sinusitis, exacerbación de asma y fibrosis quística, así como infecciones de las vías respiratorias bajas especialmente en niños pequeños, los pacientes de edad avanzada y en pacientes inmunosuprimidos . Debido a la variedad de tipos de vacunación profiláctica actualmente no es posible. Como resultado de los días de trabajo perdidos, visitas al GP y medicamentos asociados a estas enfermedades de rinovirus y enterovirus significan costos importantes al año. El tratamiento de estas infecciones virales hasta la fecha ha dependido de los síntomas ya que no existen agentes terapéuticos específicos del virus disponibles (Rotbart HA: Antiviral Res. 2002, 53(2), 83-98). Además, los antibióticos se prescriben frecuentemente innecesariamente. Por tanto, el desarrollo de nuevos agentes viruestáticos es absolutamente esencial .

Los resultados de la intensa búsqueda de posibles tratamientos para las infecciones por enterovirus y rinovirus fueron resumidos por Rotbart en 2002 en un artículo de síntesis (Rotbart HA: Antiviral Res. 2002, 53(2), 83-98). Por ejemplo, la ribavirina inhibe una enzima de la célula huésped, la deshidrogenasa 5 ' -monofosfato inosina (IMP) . Mediante la desactivación de esta enzima clave para la síntesis de nucleótidos de purina, la replicación de los picornavirus se inhibe in vitro e in vivo. Además, la ribavirina debe ser insertada directamente en el genoma del virus de la polio y de ese modo también actuar como un mutágeno para los virus de ARN (Crotty S et al.: Nat . Med. , 2000, 6(12), 1375-9). Debido a los efectos secundarios graves estos compuestos no se utilizan para tratar infecciones por rinovirus y enterovirus. Los objetivos específicos para prevenir la síntesis del ARN viral son el genoma en sí, la polimerasa de ARN dependiente de ARN viral, así como otras proteínas víricas necesarias para el complejo de replicación. Guanidinas tiosemicarbazonas, bencimidazoles , dipiridamoles y flavonas se conocen desde hace mucho tiempo como los inhibidores de las polimerasas de diferentes picornavirus en el cultivo celular. Diversos grados de éxito se lograron de este modo in vivo. Derivados de enviroxima se consideran que son el candidato más prometedor con amplia actividad de anti-enterovirus y anti-rinovirus . La enviroxima impide la síntesis de la cadena de ARN adicional mediante la unión a la proteína del virus 3A, que es necesaria para la formación de intermediarios de ARN en la reproducción del virus (Heinz BA and Vanee LM : J Virol, 1995, 69(7), 4189-97). En estudios clínicos moderados no se observaron ningunos efectos terapéuticos, una pobre farmacocinética y efectos secundarios indeseables (Miller FD et al: Antimicrob Agents Chemother, 1985, 27(1), 102-6). Hasta la fecha no hay datos clínicos disponibles para los nuevos derivados con mejor biodisponibilidad y tolerancia.

Basándose en el conocimiento de la estructura fina y la función de la proteasa viral 2C se desarrolló el inhibidor de proteasa AG 7088. AG 7088 actúa en el cultivo de células en el intervalo de concentración nanomolar contra 48 tipos de rinovirus, así como el virus Coxsackie A21, B3 , 70 enterovirus y 11 ecovirus (Pattick AK et al. Antimicrobila Agents Chemoter, 1999, 43(10), 2444-50). Los datos finales de los estudios clínicos no se conocen hasta la fecha.

Con la aclaración de la estructura molecular de los cápsidos virales los prerrequisitos para un diseño específico de los bloqueadores de cápsidos, las "sustancias WIN" fueron creadas (Diana DG: Curr Med Chem 2003, 2, 1-12). Ellas impiden la adsorción y/o el desprendimiento de los rinovirus y enterovirus. Algunas de las sustancias WIN sólo actúan muy específicamente contra los tipos de género individuales o tipos de virus de los picornavirus . Otros derivados inhiben la replicación del rinovirus así como enterovirus. Las sustancias WIN incluyen, por ejemplo arildona, disoxaril y pirodavir. Estos compuestos mostraron muy buenos efectos antivirales en el cultivo celular. Pobre solubilidad (arildona), baja biodisponibilidad (arildona y disoxarilo) , metabolización y excreción rápida (disoxaril y WIN 54954), así como los efectos secundarios, por ejemplo salpullido cutáneo (WIN 54954) , hizo una aplicación clínica imposible. Se pusieron grandes esperanzas en pleconarilo, otro inhibidor de cápsido. Pleconarilo tiene una muy buena biodisponibilidad oral y después de la unión a la bolsa hidrófobica en el cápsido del virus inhibe la penetración de los rinovirus, ecovirus y coxsackie virus (Pevear DC et al.: Antimicrob Agents Chemother 1999, 43(9), 21 09-15; McKinlay MA et al . : Annu Rev Microbiol 1992, 46, 635-54). Por lo tanto, es potencialmente eficaz contra un amplio espectro de enfermedades virales, desde el resfriado común hasta la meningitis viral o miocarditis. Se observó resistencia en el caso de rinovirus, enterovirus 71 y coxsackie virus B3 (Ledford R et al.: J Virol 2004, 78(7), 3663-74; Groarke JM et al.: J Infect Dis 1 999, 179 (6), 1538-41) . Los estudios clínicos de niños y adultos con meningitis por enterovirus (Abzug MJ et al.: Pediatr Infect Dis J, 2003, 22, 335-41), así como las infecciones respiratorias causadas por el rinovirus (Hayden FG et al.: Antivir Ther, 2002, 7, 53-65; Hayden FG et al.: Clin Infect Dis, 2003, 36, 1 523-32) fueron bien. El efecto terapéutico probado sin embargo no es suficiente para la concesión de licencia de pleconarilo (Picovir, Viropharma, USA) para el tratamiento de las infecciones por rinovirus en los EE.UU. En marzo de 2002 una solicitud correspondiente fue rechazada por la Administración de Alimentos y Medicamentos: FDA sobre la base de una evaluación de riesgo-beneficio desfavorable.

Pirazolopirimidinas también se han descrito como antagonistas de CRF (antagonistas del factor de liberación de corticotropina (por ejemplo, EP 674 642 y EP 691 128) , que, por ejemplo, inhiben la adenosina quinasa (EP 496 617 o US 4904666), xantina oxigenasa (J. Heterocyc Chem. 19, 1565, 1982) u otros sistemas de enzimas (US 2,965,643 y US 3,600,389) .

Por lo tanto, sigue siendo una parte crucial de la investigación antiviral desarrollar agentes antivirales altamente eficaces para el tratamiento de enfermedades por rinovirus y enterovirus. Los nuevos compuestos deben ser bien tolerados y superar la resistencia existente, por ejemplo, en el caso de pleconarilo.

WO 00/43394 A describe derivados de pirazolo [3 , 4 -d] pirimidina sustituida y su uso como agentes anti-virales .

EP 2 049 540 también describe derivados de 4-amino-3-arilamino-6-arilpirazolo [3 , 4-d] pirimidina y su uso como agentes antivirales.

Breve Descripción de la Invención El propósito de la invención es especificar otros derivados de pirazolo [3 , 4-d] irimidina, así como su manufactura y uso que se pueden utilizar como agentes antivirales contra los enterovirus y rinovirus, así como evitar los inconvenientes citados en el arte previo, por ejemplo, con respecto a la estabilidad y biodisponibilidad de las sustancias.

Este propósito se cumple específicamente mediante derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazolo [3 , 4-d] pirimidina sustituidos de la fórmula general I, incluyendo sus compuestos de sal farmacéuticamente tolerables y sus profármacos, en donde por lo menos un átomo de hidrógeno en por lo menos uno de los grupos fenilo A y B se sustituye por un sustituyente RH, que tiene una constante de Hammett s? mayor que 0.23, en donde cada átomo de hidrógeno adicional en cada uno de los grupos fenilo A y B puede ser sustituido de forma independiente uno de otro por un residuo R1, en donde cada R1 independientemente puede ser un halógeno, un radical alifático saturado o insaturado, lineal o ramificado, con 1-7 miembros de cadena, un radical alcanol saturado o insaturado, lineal o ramificado con 1-8 miembros de cadena, N02, CN, CONR22, COR2, COOR2, OR2 , SR , NR22, S02NR22, CX3, CR2X2, OCX3, OCR2X2, o fenilo; cada R2 es independientemente hidrógeno, un radical alifático lineal o ramificado, saturado o insaturado, halogenado o no halogenado, con 1-7 miembros en la cadena, bencilo, fenilo o naftilo, un mono- o poliheterociclo saturado o insaturado, con los heteroátomos N , S u O, en donde cada uno de los grupos mencionados anteriormente pueden estar sustituidos independientemente con fluoro, cloro, bromo, trifluorometilo, alquilo, alcoxi, ciano, nitro, amino, aminoalquilo, C (0) -alquilo, C (0) 0-alquilo, bencilo, fenilo o naftilo; y X independientemente es F, Cl , Br, o I.

En las subreivindicaciones se explica la ventaja de los derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazolo [3 , 4-d]pirimidina específicamente sustituida, así como las potenciales aplicaciones, sin limitar la invención en modo alguno .

Derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazolo [3 , 4-d]pirimidina de la fórmula general I son ventajosos, en donde por lo menos un átomo de hidrógeno en por lo menos uno de los grupos fenilo A y B se sustituye por un sustituyente RH, seleccionado de N02, CN, CF3, CC13, CBR3, 0CF3, 0CC13, 0CBr3, CHF2, CHC12, CHBr2, 0CHC12, CHO, C00H, CO e, COEt, COOMe o COOEt, preferiblemente CF3 o 0CF3. Esta es una ventaja que en uno o ambos grupos fenilo A y B uno, dos o tres átomos de hidrógeno son reemplazados por un sustituyente de RH en una modalidad especial, precisamente, un átomo de hidrógeno en uno de los grupos fenilo A y B se sustituye por un sustituyente de RH. El sustituyente RH puede estar en posición para del anillo de fenilo A o B.

Además de RH cada uno de los grupos fenilo A y B de forma independiente uno de otro puede llevar otros restos R1. Es una ventaja que los grupos fenilo A y B independientemente uno de otro lleven ninguno, uno, dos o tres residuos adicionales R1, prefiriendo ninguno o un residuo adicional R1.

Como alquilos vale la pena considerar en relación con la invención, en particular, alquilos-C1-7 lineales o ramificados, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo y butilo. Lo mismo aplica a alcanoles, alquilaminas y alquilamidas en relación con la invención Cubiertos por la invención son, en particular, los derivados 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazolo [3,4-dlpirimidina de la fórmula general II en donde cada sustituyente RA, RB independientemente puede ser hidrógeno, un halógeno, un radical alifático lineal o ramificado, saturado o insaturado, con 1-7 miembros en la cadena, un radical alcanol saturado o insaturado, lineal o ramificado con 1-8 miembros en la cadena, N02, CN, C0NR22, COR2, COOR2, OR2, SR2, NR22, S02NR22, CX3 , CRX2, 0CX3 , OCR2X2, o fenilo, y R2 y X es como se definió anteriormente; en donde por lo menos uno de los sustituyentes RA, RB tiene una constante de Hammett s?, mayor que 0.23.

La invención incluye, en particular, derivados de 4- amino-3-fenilamino-6-fenilpirazolo [3 , 4-d] pirimidina de la fórmula general lia en donde RH es seleccionado de N02, CN, CF3, CC13, CBR3, 0CF3, 0CC13, OCBr3, CHF2, CHC12, CHBr2, OCHCl2, CHO, COOH, COMe, COEt , COOMe o COOEt, preferiblemente CF3 o OCF3.

También se incluyen composiciones farmacéuticas, que contienen un derivado de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazolo [3 , 4 -d] irimidina de acuerdo con las fórmulas generales I, II, lia o Ilb. Tales composiciones farmacéuticas pueden contener sustancias adicionales, por ejemplo, excipientes y portadores farmacéuticamente aceptables. En un aspecto particular, las composiciones farmacéuticas pueden incluir ingredientes activos adicionales, en particular agentes antivirales, agentes especialmente activos contra picornavirus .

Sorprendentemente, se ha mostrado que los derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazolo [3 , 4-d] pirimidina en la invención tienen una estabilidad significativamente mejor en microsomas de hígado en comparación con las sustancias del estado del arte previo. Además investigaciones sobre la farmacocinética en ratones mostraron que los derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazolo [3 , 4-d] pirimidina en la invención tienen significativamente una mejor biodisponibilidad de las sustancias del estado del arte previo. Al mismo tiempo, los compuestos de la presente invención muestran una fuerte actividad antiviral contra picornavirus, especialmente enterovirus y rinovirus en el intervalo de concentración nano o micromolar.

Por lo tanto las preparaciones farmacéuticas que contienen un compuesto de las fórmulas I, II, lia o Ilb, son particularmente apropiadas para el tratamiento de infecciones respiratorias, meningitis aséptica, encefalitis, etc. herpangina en seres humanos y animales, que pueden ser causados por picornavirus especialmente enterovirus y rinovirus.

Los derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazolo [3 , 4 -d] irimidina se caracterizan por el hecho de que llevan por lo menos un sustituyente RH en uno o en ambos grupos fenilo, que tiene una constante de Hammett s?, mayores de 0.23. Este valor de 0.23 corresponde a la constante de Hammett s? del bromo, que muestra la más alta constante de Hammett para la posición entre los halógenos.

La determinación de las constantes de Hammett para diferentes sustituyentes se basa en las constantes de ionización del ácido benzoico de acuerdo a la ecuación de Hammett s? = log Kx - log KH en donde KH es la constante de ionización para ácido benzoico en agua a 25 °C y Kx es la constante correspondiente para un ácido benzoico meta o para sustituido. Un método para determinar la constante de Hammett para diferentes sustituyentes en la posición meta (om) y para (s?) , así como los valores ya comprobados de una variedad de sustituyentes pueden ser tomados de la publicación de Hansch et al. "A Survey of Hammett Substituent Constants and Resonance and Field Parameters", in Chem. Rev. 1 991. 97, 1 65-1 95, que se incorpora aquí en su totalidad. De importancia para esta invención es por lo tanto exclusivamente el valor s, respectivamente para la posición para (s?) , independientemente de la posición en la que finalmente se encuentra por lo menos un sustituyente RH.

Descripción Detallada de la Invención Ejemplos de la invención son compuestos en la Tabla 1, incluyendo sus compuestos de sal farmacéuticamente tolerables.

También se incluyen profármacos de los compuestos, especialmente los que se caracterizan por un sustituyente en el heteroátomo de pirazol en la posición 1. Se ha mostrado que tales tipos de compuestos se convierten in vivo en el compuesto de pirazol 1H. Como ejemplo, se han mencionado los compuestos en los que el heteroátomo de pirazol en la posición 1 está sustituido por un sustituyente imino (fenil) metilo, tal como, por ejemplo, 1- [imino (fenil) metil] -4-amino-3- (4-trifluorometil-fenil) amino-6-fenilpirazolo [3 , 4-d] pirimidina, designada también por el nombre IUPAC l-bencilcarboximidoil-6-fenil-3 -N- [4- (trifluorometil ) fenil] -lH-pirazolo [3 , 4-d] -pirimidina-3 , 4 -diamina. Aquí, esta se refiere a un subproducto de la manufactura del compuesto descrito anteriormente, CRCV-340, resultante de la reacción del compuesto CRCV-340 con un exceso de benzamidina en la mezcla de reacción y que tiene la siguiente fórmula: Profármaco CRV-340 Se encontró que estos compuestos (por ejemplo, profármaco CRCV-340) in vivo son muy fácilmente convertidos en el compuesto objetivo en una forma tal que en el suero sólo el ingrediente activo final (por ejemplo CRCV-340) principalmente puede ser probado. También se incluyen sales, solvatos o solvatos de las sales producidas por los compuestos anteriores. Dentro del alcance de esta invención las sales preferidas son sales fisiológicamente inocuas de los compuestos relacionados con la invención. Las sales fisiológicamente inocuoas del compuesto en relación con la invención incluyen sales de adición de ácidos minerales, ácidos carboxílicos y ácidos sulfónicos, por ejemplo sales de ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfaico, ácido metano sulfónico, ácido acético sulfónico, ácido tolueno sulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido naftaleno-sulfónico, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido propiónico, ácido láctico, ácido tartárico, ácido málico, ácido cítrico, ácido fumárico, ácido maleico y ácido benzoico .

La invención se explicará a continuación con más detalle utilizando métodos de síntesis, derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazolo [3 , 4-d] pirimidina de la fórmula general (I) , así como su efecto y su uso contra infecciones de picornavi us .

El esquema de reacción 1 muestra un diagrama general sobre la síntesis de pirazolo [3 , 4 -d] pirimidina 1 e incluye en el primer paso la condensación de [bis (metiltio) metileno] malononitril 2 con fenilaminas 3 en alcohol para derivados de fenilo 4. Este último puede ser aislado y purificado, respectivamente, para otras reacciones o se utiliza directamente sin purificación para reacciones posteriores (reacción "en un solo paso"). El paso subsiguiente constituye la interacción del derivado de fenil 4 con hidrazina o derivados de hidrazina. La reacción se lleva a cabo por ebullición durante 1 a 4 horas y conduce a un alto rendimiento de pirazol 5. El paso final de la síntesis de pirazolo [3 , 4 -d] pirimidina 1 es la condensación del pirazol 5 con fenilamidina 6 en la presencia de ácido acético, ácido trifluoroacético o acetato de sodio.

Esquema de reacción 1 compuestos pueden ser obtenidos de este modo ventajosamente mediante la transformación de pirazol (5) en el último paso de síntesis con el hidrocloruro de benzamidina correspondiente en la presencia de un exceso de acetato de sodio a 200-220°C en la ausencia de solventes.

Alternativamente, los compuestos se pueden obtener mediante la conversión del pirazol (5) en el último paso de síntesis con benzonitrilo correspondiente (un excedente grande) con irradiación de microondas y en la presencia de ter-butilato de potasio.

Un método de síntesis alternativo es la reacción "de un solo paso" de malononitrilo con isotiocianatos de arilo en la presencia de hidruro de sodio y un tratamiento posterior de la mezcla de reacción con yoduro de metilo o sulfato de dimetilo. En el proceso se producen grandes cantidades de enamina. Aquí también la condensación de pirazol 5 con arilamidinas 6 en la presencia de ácido, tal como ácido acético o ácido trifluoroacético, o sus sales (acetato) es de nuevo el paso de síntesis final para producir pirazolo- [3 , 4 -d] irimidina 1.

Se ha mostrado que la conversión del pirazol (5) a pirazolo [3 , -d] irimidina con rendimientos particularmente altos se puede hacer mediante el uso de los componentes de benzamidina como una base libre y la reacción se lleva a cabo en solventes polares. Una ventaja de este método es también que la proporción de subproductos que son difíciles de separar se puede minimizar. Esta reacción se puede efectuar, sobre la base de 5-amino-4-ciano-3-fenilamino-pirazoles sustituidos con benzaminas sustituidas opcionales como una base libre de 4-amino-3 - (fenilamino) -6-fenilpirazolo [3 , 4-d] pirimidina de acuerdo con el diagrama de reacción siguiente.

Esquema de reacción 2 Los residuos RA y RB son sustituyentes , como se definió anteriormente para R1.

Mientras que la conversión descrita anteriormente es particularmente apropiada para la manufactura de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazolo [3 , 4-d] pirimidina de la fórmula general anterior (I) , en donde por lo menos un átomo de hidrógeno en por lo menos uno de los grupos fenilo A y B está sustituido por un sustituyente RH, que tiene una constante de Hammett s? > 0.23, el método también puede ser utilizado para la manufactura de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazolo [3 , -d] pirimidinas , que no tienen tales sustituyentes, en este caso, en el que este residuo representa hidrógeno o un residuo de R1 como se definió anteriormente en conexión con la fórmula I .

Preferiblemente, la presente invención también se refiere a las reacciones, como se describió anteriormente, en las que los residuos RA y RB independientemente uno de otro pueden ser seleccionados de N02, CN, CONR32, COOR3, CHO, CHONH2, un halógeno, un radical alifático lineal o ramificado insaturado o saturado (llamado grupo alquilo) con 1 a 6 miembros de la cadena, radical alcanol lineal o ramificado, saturado o insaturado (también llamado grupo alcoxi) con 1 a 6 miembros de cadena, OR3, SR3, NR32, S02NR3, di-o trifluorometilo y el residuo R3 puede consistir de H, grupos metil-, etil-, propil-o butil-. La medida en que pueden existir los compuestos de la invención en formas tautoméricas , la presente invención comprende todas las formas tautoméricas Los sustituyentes en el párrafo anterior tienen el siguiente significado en caso de que no se especifique lo contrario : Alquilo así como las partes alquilo en alcoxi soporta alquilos de cadena lineal o ramificada y comprende, si no se indica lo contrario, alquilo- (C1-C6) , especialmente alquilo- (C1-C4) , por ejemplo, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo. Ventajosamente alcoxi representa un residuo alcoxi de cadena lineal o ramificada, especialmente con 1 a 6, en particular preferiblemente de 1 a 4 y sobre todo preferiblemente de 1 a 3 átomos de carbono. Como un ejemplo y como preferencia se mencionan metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, t-butoxi, n-pentoxi y n-hexoxi. Arilo representa un mono- a tricíclico aromático, residuo carbocíclico generalmente con 6 a 14 átomos de carbono. A modo de ejemplo y como un arilo de preferencia es seleccionado del fenilo, naftilo y fenantrenilo, en particular se prefiere fenilo. Halógeno representa flúor, cloro, bromo y yodo, preferiblemente flúor y cloro.

También es posible con este método para la manufactura de derivados de arilpirazolo [3 , 4d] pirimidina general, en donde en este caso la fenilamidina 6 será sustituida por un arilamidina correspondiente. En particular, en lugar de anillos de fenilo A y B también naftilo, piridilo, quinolilo, pirazinilo, pirimidilo, pirazolilo, triazinilo, imidazolilo, furanilo, tienilo puede estar contenido en el producto final, en donde cada átomo de hidrógeno en cada uno del grupo mencionado anteriormente de forma independiente uno de otro puede ser sustituido por un residuo R1, tal como se definió anteriormente en conexión con la fórmula 1. Tal método es también el objeto de esta invención .

La reacción mostrada en el esquema de reacción 2 es efectuada en solventes orgánicos inertes, polares. Solventes orgánicos polares inertes son, por ejemplo, éter tal como dietiléter, metil- ter-butiléter, 1,2-dimetoxietano, glicol dietil éter o dietilen glicol dimetil éter, éter cíclico, tal como dioxano, tetrahidro- furano, hidrocarburos, tal como etil benceno, xileno, tolueno o alcoholes, tales como etanol, propanol, butanol, isobutanol e isopropanol. Particularmente productos puros se obtienen mediante el uso de n-butanol como solvente. N-butanol debe ser utilizado en una proporción molar de 1 a 10, en particular preferiblemente de 1.5 a 3, en relación con el valor inicial del derivado de pirazol.

Dentro del alcance de la presente invención esto surgió como particularmente útil si la benzamidina (6) se prepara en forma básica (como base libre) . La síntesis se lleva a cabo utilizando los métodos habituales de la sal disponible correspondientemente. Lo mejor es usar benzamidina (6) en una proporción molar de 1 a 1.5, sobre la base de los derivados de pirazol (5) .

La reacción se lleva a cabo a una temperatura desde 60 hasta 110°C, preferiblemente de 85 a 95°C, durante 10-30 horas, preferiblemente 18-20 horas.

La amino-3- (fenilamino) -6 -fenilpirazólo [3,4-djpirimidina (1) obtenida de esta manera se limpia por recristalización. Para esto preferiblemente tetrahidrofurano o una mezcla de tetrahidrofurano se utiliza con agua o un disolvente orgánico, en particular, preferiblemente con tolueno. Alternativamente a que la amino-3- (fenilamino) - 6 - fenilpirazolo [3 , 4 -d] pirimidina también puede ser limpiada por precipitación de una solución en tetrahidrofurano caliente con agua o un solvente orgánico, preferiblemente con tolueno.

En los siguientes compuestos especiales ejemplares de la fórmula general (I) se enumeran, los que son apropiados preferiblemente para aplicaciones contra infecciones por picornavirus , en donde los compuestos se pueden preparar en una solución o una suspensión en un medio acuoso, orgánico o acuoso- orgánico farmacéuticamente aceptable, para la aplicación local o parenteral por inyección intravenosa, subcutánea o intramuscular o para la administración intranasal, o desarrollado en la forma de un comprimido, cápsula o suspensión acuosa con un portador convencional para administración oral o como un supositorio.

Los compuestos presentados en la fórmula (I) por lo tanto se pueden utilizar en dosis de 0.1 a 1000 mg/kg de peso corporal .

Manufactura y análisis de los derivados de 4-amino-3-fenilamino- 6 - fenilpirazolo [3 , 4 -d] pirimidina La clarificación estructural de los compuestos de la invención se efectúa por el tipo de síntesis, análisis elemental, espectroscopia de NMR y spectrometetría de masa. Materiales de origen: Los 5-amino-4-ciano-3-fenilaminopirazoles se sintetizaron de acuerdo con el método mostrado en la figura 1, así como de acuerdo con la descripción de Tominaga Y et al. (J.

Heterocycl. Chem. , 1990, 27,775-779). Las arilamidinas se sintetizan de acuerdo con el arte previo conocido de los compuestos de fuente de cianógeno correspondientes (Boere, RT et al: J. Organomet Chem., 1987, 331, 161-167; Garigipati RS:.... Tetrahedron Lett . , 1990,31 ,1969-1978; Dann O et al.: Justus Liebigs Ann Chem., 1982, 1836-1839).

Ejemplo de referencia 1: 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazolo [3 , 4 -d] pirimidina . (3-N, 6-difenil-2H-pirazolo [3 , 4-d] pirimidina-3 , 4 -diamina) 3.0 g (17.24 mmol) de hidrocloruro de benzamidina hidratada y 2.2 g (23.0 mmol) de acetato de sodio se agregaron a 2.3 g (11.5 mmol) de 5-amino-4-ciano-3-fenilaminopirazol mientras se agitaban. La mezcla de reacción se calentó durante 30 min a 220°C. El material resultante se trató con 50 mi de agua, se filtró y se lavó con 20 mi de metanol frío y 20 mi de éster frío. El producto se limpió por medio de cristalización de DMF/agua Material cristalino sólido, amarillo claro, rendimiento de 57%. pf 253-5°C. Rf (cloroformo - metanol; 10/1) - 0.8 (gel de sílice 60) MS m/z 302 (M+) .

Ejemplo de referencia 2: 4-amino-3- (fenilamino) -6-fenilpirazolo [3 , 4-d] pirimidina (manufactura alternativa) 5.22 g de hidrocloruro de benzamidina, previamente secado durante 2.5 horas a 115°C, se agrega lentamente a una solución de 1.74 g de metilato de sodio en 100 mi de metanol y se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Después de filtrar la precipitación blanca inorgánica se agregaron 3.5 mi de n-butanol y el volumen se redujo en vacío a 3 mi . El residuo es un aceite de color blanquecino, y corresponde a 4.0 g de benzamidina, que se usó inmediatamente en el siguiente paso de reacción . 5 -amino-4 -ciano-3 - (fenilamino) -pirazol (6.0 g; polvo de Ref.-l) se disuelve en 10 mi de n-butanol y 4.0 g de benzamidina en 3 mi de n-butanol a temperatura ambiente . La reacción ocurre durante 20 horas a 85 °C. Por último, la solución es enfriada, la precipitación amarilla es filtrada y lavada con 5 mi de n-butanol y 5 mi de tolueno.

Rendimiento: 68% Propiedades: Punto de fusión: 265-267°C (tetrahidrofurano) , MS (m/z) 302 ( +) ; B. N R (DMSO-d6) : 12.38 (1H, s, NH) , 8.30-8.36 (2H, q, 2 CH) , 8.23 (1H, br. s., NH) , 7.67 (2H, d, 2 CH) , 7.48 (2H, br. s., NH2) , 7.42 (3H, m, 3 CH) , 7.12 (2H, d, 2CH) y 6.98 (1 H, m, CH) ppm; Análisis elemental Ci7H14N6 : % calculado: C, 67.54, H, 4.67, N 27.80 % Encontrado: C, 67.49, H, 4.53; N, 27.74.

Ejemplo de referencia 3: 4-amino-3- (4-clorofenil) amino-6-fenilpirazolo [3 , 4-d] pirimidina (3-N- (4-clorfenil) -6-fenil-2H-pirazolo [3 , 4-d] pirimidina-3 , 4 -diamina) Ejemplo de referencia 4: 4-amino-3 - (3 , 4-difluorfenil) amino-6- fenilpirazolo [3 , 4-d] pirimidina (3-N- (3,4-difluorfenil) -6-fenil -2H-pirazolo [3 , 4-d] pirimidina-3 , 4-diamina) Ejemplo de referencia 5: 4-amino-3- [ (4-fluorofenil) amino] -6-fenilpirazolo [3, 4-d] pirimidina compuesto de Ref-5 es manufacturado de la misma manera como se muestra en el ejemplo de referencia 2, en donde sin embargo 5-amino-4-ciano-3- [ (4-fluorofenil) amino) -pirazol se utilizó como material de origen, formando de este modo una precipitación cristalina amarillo claro.

Rendimiento: 70 % Propiedades: Punto de fusión : 262-263°C (THF/tolueno); MS (m/z) : 320 (M' ) ; XH NMR (DMSO - d6) : d 12.69 (1H , S, NH) , 8.33-8.41 (4H, m, 4 CH) , 8.18 (1H, br s., NH) , 7.58-7.65 (5H, m, H2, 3 CH) , 7.27-7.31 (2H, n, 2CH) ppm. Análisis elemental Ci7H14FN6 : % Calculado: C, 63.74, H, 4.09, N 26.24 % Encontrado: C, 63.81, H, 4.11, N, 26.27.

Ejemplo de referencia 6: 4-amino-3- [ (3-fluorofenil) amino] -6-fenilpirazolo [3, -d] pirimidina El compuesto de Ref-6 es manufacturado de la misma manera tal como se obtuvo en el ejemplo de referencia 2, en donde sin embargo 5-amino-4-ciano-3- [ (3-fluorofenil) amino] -pirazol se utilizó como componente de origen, formando de ese modo una precipitación cristalina amarillo claro.

Rendimiento: 76 % Propiedades: Punto de fusión: 278-279°C (THF/tolueno); M/S (m/z) : 320 (M+) ; XH NMR (DMSO-d6) ; d 12.61 (1 H, S, H) , 8.34-8.42 (2H, q, 2CH) , 8.14 (1H, br . s., NH) , 7.48 (2H, br . s.f NH2) , 7.3-7.43 (6H, m, 6CH) , 6.60 (1H, s. CH) ppm; análisis elemental para Ci7H14FN6: % Calculado: C, 63.74, H, 4.09, N, 26.24 % Encontrado: C, 63.81, H, 4.11, N, 26.27.

Ejemplo 1: 4-amino-3- (4-trifluorometil-fenil) amino-6-fenilpirazolo [3 , 4 -d] pirimidina (CRCV - 340) (6-fenil-3-N- [4- (trifluormetil) fenil] -2H-pirazolo [3,4-d] irimidina-3 , 4 -diamina) La manufactura se llevó a cabo como se describe en el ejemplo de referencia 1, utilizando los correspondientes compuestos precursores sustituidos.

Ejemplo 2: 4-amino-6-fenil-3- [ (4- (trifluorometil) -fenil] amino-pirazolo [3, 4-d] irimidina El compuesto CRCV - 340 también fue manufacturado de manera análoga a la fórmula de reacción mostrada en el ejemplo de referencia 2, formando de este modo una precipitación cristalina de color amarillo claro.

Rendimiento: 58 % Propiedades: Punto de fusión: 313-314°C (THF/tolueno) , S (m/z) : 370 (M+) XH NMR (DMSO - d6) : d 12.77 (1H, s, H) , 8.91 (1H, s, NH) , 8.47 (2H, s, NH2 ) , 7.81, 7.79, 7.63, 7.58 y 7.47 (9H , m, C6H y C6H5) ppm; análisis elemental Ci8Hi3F3N6: % Calculado: C, 58.38, H, 3.54, N, 22.69; % Encontrado: C, 58.41, H, 3.58, N, 22.74; HPLC : 99.30 % (S ule Luna C18 (2), Acetonitrilo/agua - 90:10, flujo de 0.6 ml/min, UV 254 nm; tR = 5.3 min) Ejemplo 3: 4-amino-3-fenilamino-6- [4- (trifInorómetoxi) -fenil] irazolo [3 , -d] pirimidina (MS-112) (3-N-fenil-6- (4- (trifluorometoxi) fenil] -2H-pirazol (3,4-d] pirimidina-3 , 4 -diamina) La manufactura se llevó a cabo como se describe en el Ejemplo de Referencia 1 utilizando los compuestos precursores correspondientemente sustituidos.

Ejemplo 4: 4 -amino-6 -fenil -3 -[ (4- (trifluorometoxi) -fenilamino] -pirazolo [3 , 4-d] pirimidina Este compuesto también se fabricó de manera análoga a la fórmula de reacción mostrada en el ejemplo de referencia 2, en donde se utilizó 5 -amino-4 -ciano-3 - ( (4 - trifluormetoxifenil) amino] irazol a partir del compuesto de origen, formando de este modo una precipitación cristalina blanca .

Rendimiento: 68 % Propiedades: Punto de fusión: 260-262°C (tetrahidrofurano/DMF) , MS (m/z) : 386 (M' ) ; H NMR (DMSO-d6) : d 12.56 (1H, s, NH) , 8.82 (2H, q, 2CH) , 8.16 (1H, br . s., NH) , 7.48 (2H, br. s., NH2) , 7.3 a 7.43 (4H, m, C6Hs) , 07.05 a 07.11 (2H, 2s 2CH) , 6.98 (1H, m, CH) ppm ; análisis elemental C18Hi3F3N60: % Calculado: C, 55.96, H, 3.39, N, 21.75 % Encontrado: C, 56.07, H, 3.36, N, 21.61.

Ejemplo 5: Limpieza de 4 -amino-6 -fenil-3- [ (4- (trifluorometil) -fenil] amino-pirazolo [3 , 4-d] pirimidina 50 g de 4 -amino-6 -fenil - 3 -[ (4 -trif luorometil ) -fenil] amino -pirazolo [3 , 4 -d] pirimidina seca, sintetizada de acuerdo con el método descrito en el ejemplo de referencia 2, se disuelve mientras se calienta en 300 mi de THF . Esta solución se trata con 300 mi de tolueno frío. La solución resultante se mantiene en un congelador a una temperatura inferior a 0°C durante un período de 6 horas. 36 g de 4-amino-3- (4 -trif luorofenil ) amino-6 -fenilpirazolo [3, 4-d] irimidina en cristales de color amarillo se obtuvieron por filtración .

Punto de fusión: 313 -314 °C (THF/DMF) HPLC: 99.16 % (Saule Luna C18 (2), acetonitrilo/agua - 90:10, flujo de 0.6 ml/min, UV 254 nm; tR = 5.3 min) Estudios de ADMET sobre el metabolismo de OBR 5-340 in vitro Objetivo: investigar la Absorción, Distribución, Metabolismo, Excreción y Toxicidad (abreviado como: ADMET) de OBR 5-340 in vitro, así como las pruebas in vitro sobre la unión a proteínas plasmáticas y la estabilidad en el plasma y en los microsomas hepát icos .

Pruebas: Las pruebas in vitro realizadas con CRCV-340, así como los datos obtenidos se resumen en la Tabla 2, en comparación con la Ref. 2.

Tabla 2 : Resumen de los resultados de los estudios de ADMET para CRCV-340 en comparación con la Ref. 2.

Resumen: La sustancia CRCV-340 se caracteriza por una mejor estabilidad en microsomas hepáticos, así como un aumento de la liberación de proteína de plasma en comparación con la Ref. 2.

Examinación de la farmacocinética de CRCV-340 en ratones Objetivo: Reunir datos farmacocinéticos sobre CRCV-340. Pruebas: La sustancia y sustancia de referencia se aplicaron, respectivamente, una vez en una concentración de 100 mg/kg, en 0.5 mi de una solución de Cremophor 10 % por vía oral a los ratones. Después de 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6 y 7 horas se tomó suero y por medio de análisis HPLC las concentraciones de CRCV-340, Ref . 2 y Ref .3 se determinaron en el plasma de los ratones.

Usando las concentraciones de la sustancia en el plasma sanguíneo se determinadas por HPLC los parámetros farmacocinéticos de las sustancias se calcularon usando el programa de computadora ESTRIP (Tabla 3) .

Tabla 3: Datos farmacocinéticos después de una sola aplicación intragástrica de 100 mg/kg de CRCV-340, Ref. 2 y Ref. 3 en ratones.

Cmax concentración máxima en la sangre Tmax Tiempo para alcanzar la concentración máxima en la sangre MRT Tiempo de residencia promedio Tl/2 vida promedio el constante del índice de eliminación CL Espacio libre Vd Volumen de distribución AUC Área bajo la curva Cmax/AUC velocidad de absorción del estómago a la sangre Resultado: Las pruebas sobre la farmacocinética en ratones para CRCV-340 dieron una biodisponibilidad significativamente mejor que para Ref-2 y Ref-3.

Pruebas de toxicidad aguda de CRCV-340 en ratones Objetivo: Determinar el 50 % de la dosis letal de CRCV-340 Pruebas: La toxicidad aguda de la sustancia CRCV-340 se probó en ratones de 19.5-20.5 g en peso, que se administró por vía oral 40, 60, 80 o 120 mg de sustancia/ratón (por 5 ratones por sustancia y concentración) . Esto corresponde a dosis de aprox. 2g, 3g, 4g o 6 g por kilogramo de peso corporal. Los efectos tóxicos observados en el resultado correlacionado con la dosis de sustancia administrada. En dosis de 40 y 60 mg/ratón hasta 3 horas después de que la sustancia se administró, trastornos de coordinación e hiperact ividad se observaron como efectos secundarios . Después de la administración de las dos dosis más altas también había dificultades de respiración, comportamiento agresivo e hiperquinesia . Para CRCV-340 se determinó un LD50 de 3120 mg/kg (Tabla 4) .

Tabla 4 : Resultados de las pruebas sobre toxicidad aguda de la sustancia CRCV-340 después de una sola administración por vía oral en ratones LD '5.0 78.6 mg/ratón (3930 mg/kg) 62.4 mg/ratón (3120 mg/kg) Resultado: Los datos obtenidos en el índice de supervivencia demuestran una muy buena tolerancia de ambas sustancias de prueba.

Estudios a largo plazo sobre la toxicidad en ratones Objetivo: determinar la toxicidad subaguda en ratones con el fin de revelar posibles efectos secundarios por ejemplo en la condición general, peso, órganos y metabolismo, lo que podría producirse con la administración subaguda de CRCV-340 durante 28 días.

Pruebas: Así ratones machos y hembras que pesan aprox. 20 g recibieron 12.5, 50 o 200 mg/kg de la sustancia CRCV-340 en una formulación de Cremophor o el grupo de control recibió Cremophor una vez al día durante 28 días por vía intragástrica administrado a través de un tubo. Durante el periodo total del experimento se evaluaron la condición de pelaje y las membranas mucosas, los excrementos y la condición general. El registro del peso tuvo lugar en los días 7, 14, 21 y 28. Aprox. 24 hrs . después de la dosis de la última sustancia se examinó el sentido de la orientación de los animales. Se analizaron los siguientes parámetros bioquímicos en el suero: contenido de proteínas, urea, creatinina, actividad del suero de aspartato aminotransferasa, alanina aminotransferasa y fosfatasa alcalina. La concentración de hemoglobina, hematocrito, el número de células de sangre roja y blanca, así como las plaquetas se determinó en el frotis de sangre. Al final del experimento, los ratones fueron sacrificados bajo anestesia y se diseccionaron, la condición de los órganos internos se evaluó macroscópicamente, se determinó el peso de los órganos y muestras para pruebas histológicas subsiguientes se pusieron en formalina.

Resumen de Resultados: Los resultados demuestran muy buena tolerancia de las concentraciones de la sustancia examinadas. Ni la condición general de los animales, pelajes, los excrementos ni su sentido de dirección o cambios en la movilidad como consecuencia de la sustancia suministrada. También en relación con el peso corporal la dinámica los animales tratados con CRCV -340 no difieren de los del grupo de control. No hubo diferencias entre los grupos de prueba tratados con la sustancia y los grupos tratados con el vehículo en el frotis de sangre en términos de los parámetros sanguíneos bioquímicos. Lo mismo se aplica a la evaluación macroscópica de los órganos internos (hígado , riñon, corazón, pulmón, bazo, páncreas y testículos), el peso de los órganos, así como los resultados de las pruebas de histología del corazón, pulmón, hígado, bazo, timo, páncreas, ríñones, glándulas, testículos, muestras de tejido del estómago e intestino (resultados no mostrados) Determinación del espectro antiviral contra el rinovirus Objetivo: Determinar el espectro antiviral eficaz de CRCV -340 en relación con 50 diferentes serotipos de rinovirus humano y aislados de pacientes CVB3.

Pruebas: Los 50 serotipos de HVR y 20 aislados CVB3 clínicos se reprodujeron en células HeLa, HeLa Wis y/o LF, su valoración fue determinada y el serotipo verificado utilizando secuenciación . En consecuencia se establecieron pruebas de inhibición de ZPE (efecto citopático) con las pruebas de reducción de placas o HVR con los aislados de CVB3. En las pruebas antivirales correspondientes se llevaron a cabo investigaciones del efecto de la dosis con Ref. 3 y CRCV-340. Las Tablas 5 y 6 dan una visión general de las concentraciones de inhibición de 50 % promedio.

Tabla 5: Descripción general del espectro eficaz de Ref-3 y CRCV-340 con respecto de HVR. Los valores promedio y las desviaciones estándar para los 50 serotipos examinados y para los 45 sensibles a pleconarilo y 5 serotipos resistentes a pleconarilo se resumieron por separado.

Tabla 6: Descripción general del espectro eficaz de Ref-3 y CRCV-340 con respecto a los aislados CVB3 -clínicos . Los valores promedio y las desviaciones estándar para los 20 aislados examinados y para los 19 aislados sensibles a pleconarilo y un serotipo resistente a pleconarilo se resumieron por separado.

Concentración máxima probada 13.5 µ? Resumen de los resultados: El espectro eficaz de CRCV- en relación con HRV fue significativamente mayor en comparación con la Ref-3.

Examinación del efecto antiviral in vivo en el modelo de ratón de miocarditis crónica inducida por CVB3 Objetivo: Confirmar el efecto antiviral de CRCV-340 en el modelo de ratón Investigaciones: El efecto de CRCV-340 se investigó en el modelo de miocarditis inducida en CVB3 en ratones MRI machos de 8 semanas de edad. Además en CVB3 31-1-93 o CVB3 animales H3 infectados recibieron una o dos veces al día 100 mg/kg de la sustancia en un 50% o 20 % de PEG-400 en CMC al 1 % en agua (placebo) administrada durante 7 días. Los parámetros para evaluar el efecto terapéutico incluyeron cambios en el peso corporal, condición general, título de virus en el corazón y tejido del páncreas, así como sus cambios histopatológicos en el corazón y páncreas. Animales tratados con CRCV-340, tratados con placebo, Pseudo-Infectados , o sirvieron como control negativo y animales tratados con pleconarilo o placebo infectados como un control positivo sobre el curso de la infección.

Resumen de los resultados: En contraste con el placebo y el pleconaril CRCV-340 era eficaz en el modelo de la miocarditis crónica inducida con CVB3 31-1-93 en ratones NMRI. En el proceso efectos clínicamente y estadísticamente significativos para todos los parámetros examinados (peso corporal, condición general, el título de virus en el corazón y el tejido de páncreas en el día 7 p.i. la histopatología en el corazón y el páncreas en el día 7 y 21 p.i.) fueron observados .

Estudios sobre la efectividad in vivo de CRCV-340 en el modelo de ratón letal en comparación con la sustancia de referencia pleconarilo Objetivo: Verificar el efecto antiviral de CRCV-340 en el modelo de ratón letal Investigaciones: El efecto del candidato de desarrollo CRCV-340 se examinó después de la prueba de la dosis de infección en el modelo de miocarditis inducida por CV3 - en ratones BALB/c macho de 6 - 7 semanas de edad. Además en animales infectados con CVB3 31-1-93 o CVB3 H3 recibieron dos veces al día 100 mg/kg de la sustancia en el 20 % de PEG-400 en 1 % de CMC en agua (placebo) administrada durante 7 días. Los cambios en el peso corporal, la condición general y la letalidad definida a través del marcador indirecto de 25% de pérdida de peso corporal sirvieron como parámetros para evaluar el efecto terapéutico. Animales tratados con CRCV-340 tratados con placebo, Pseudo- infectados, representaron el control negativo y animales tratados con pleconarilo o se placebo, infectados representaron el control positivo sobre el curso de la infección.

Resumen de los resultados: En contraste con el placebo y pleconarilo, CRCV - 340 fue eficaz en el modelo de ratón BALB/c letal después de la infección con CVB3 31-1-93. En el proceso se observaron efectos clínicamente y estadísticamente significativos para todos los parámetros examinados (peso corporal, condición general, así como letalidad).

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (15)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Derivados de 4 -amino-3 -fenilamino-6-fenilpirazolo [3 , 4 -d] pirimidina de la fórmula general I, o una sal farmacéuticamente aceptable o profármacos de los mismos, caracterizados porque por lo menos un átomo de hidrógeno en por lo menos uno de los grupos fenilo A y B se sustituye por un sustituyente RH, que tiene una constante de Hammett s? mayor que 0.23, en donde cada átomo de hidrógeno adicional en cada uno de los grupos fenilo A y B puede ser sustituido de forma independiente uno de otro por un residuo R1, en donde cada R1 independientemente puede ser un halógeno, un radical alifático saturado o insaturado, lineal o ramificado, con 1-7 miembros de cadena, un radical alcanol saturado o insaturado, lineal o ramificado con 1-8 miembros de cadena, N02, CN, CONR22, COR2, COOR2, OR2, SR2, NR22, S02NR2, CX3 , CR2X2, OCX3, OCR2X2/ o fenilo; cada R2 es independientemente hidrógeno, un radical alifático lineal o ramificado, saturado o insaturado, halogenado o no halogenado, con 1-7 miembros en la cadena, bencilo, fenilo o naftilo, un mono- o poliheterociclo saturado o insaturado, con los heteroátomos N , S u O, en donde cada uno de los grupos mencionados anteriormente pueden estar sustituidos independientemente con fluoro, cloro, bromo, trifluorometilo, alquilo, alcoxi, ciano, nitro, amino, aminoalquilo, C(0)-alquilo, C (O) 0-alquilo, bencilo, fenilo o naftilo; y X independientemente es F, Cl, Br, o I.

2. Los derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazolo [3 , 4-d] pirimidina de conformidad con la reivindicación 1, caracterizados porque por lo menos un sustituyente RH independientemente es N02, CN, CF3, CC13, CBR3, 0CF3, 0CC13, 0CBr3, CHF2, CHC12, CHBr2 , 0CHC12, CHO, COOH, COMe, COEt, COOMe o COOEt, preferiblemente CF3 o 0CF3.

3. Los derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazolo [3 , 4-d] pirimidina de conformidad con la reivindicación 1, de la fórmula general II caracterizados porque cada sustituyent independientemente puede ser hidrógeno, un halógeno, un radical alifático lineal o ramificado, saturado o insaturado, con 1-7 miembros en la cadena, un radical alcanol saturado o insaturado, lineal o ramificado con 1-8 miembros en la cadena, N02, CN, CONR22/ COR2, COOR2 , OR2, SR2 , NR22 , S02NR22 , CX3 , CR2X2, OCX3, OCR2X2, o fenilo, en donde R2 y X son de conformidad con la reivindicación 1; caracterizado porque por lo menos uno de los sustituyentes RA, RB tiene una constante de Hammett s?, mayor que 0.23.

4. Los derivados de 4-amino-3-fenilamino-6 -fenilpirazolo [3 , 4-d] pirimidina de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, de la fórmula general lia caracterizados porque R es seleccionado de N02, CN, CF3, CC13 CBR3, OCF3, OCCI3, OCBr3, CHF2, CHCl2, CHBr2, 0CHC12, CHO, COOH, COMe, COEt, COOMe o COOEt, preferiblemente CF3 o OCF3.

5. Los derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazolo [3, 4-d] pirimidina de conformidad con la reivindicación 4, caracterizados porque son de la fórmula O

6. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende un derivado de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazolo [3 , 4 -d] pirimidina de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores.

7. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 6, caracterizada porque comprende también un portador farmacéuticamente aceptable.

8. La composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 6 ó 7, caracterizada porque comprende también uno o varios otros ingredientes activos .

9. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque uno o varios otros ingredientes activos son agentes antivirales, preferiblemente agentes activos contra picornavirus .

10. El método para la manufactura de una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende la formulación de un derivado de 4 -amino-3 -fenilamino-6 - fenilpirazolo [3 , -d] pirimidina de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones reivindicaciones 1-5 con un portador farmacéuticamente aceptable.

11. Los derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazolo [3 , 4 -d] pirimidina de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, para usarse como un medicamento.

12. Los derivados de 4 -amino-3 -fenilamino-6-fenilpirazolo [3 , 4 -d] irimidina de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, para usarse en el tratamiento profiláctico o terapéutico de infecciones virales.

13. Los derivados de 4 -amino-3 -fenilamino-6 -fenilpirazolo [3 , 4 -d] irimidina de conformidad con la reivindicación 12, caracterizados porque las infecciones virales son infecciones por picornavirus.

14. El método para la manufactura de un derivado de 4- amino-3 -fenilamino-6-fenilpirazolo [3 , 4-d] pirimidina de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones reivindicaciones 1-5, de conformidad con la fórmula I en la reivindicación 1, caracterizado porque cada átomo de hidrógeno en cada uno de los grupos fenilo A y B independientemente uno de otro pueden estar sustituidos con un residuo R1, de conformidad con la reivindicación 1, que comprende la conversión de un 5-amino-4-ciano-3 -fenilaminopirazol con la base libre de un benzamidina en un solvente polar orgánico, preferiblemente en n-butanol .

15. El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el derivado de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazolo [3 , 4 -d] irimidina es purificado a continuación por recristalización usando tetrahidrofurano o una mezcla de los mismos con agua o un solvente orgánico o por precipitación utilizando una solución caliente en tetrahidrofurano con agua o un solvente orgánico, en donde el solvente orgánico preferido es tolueno .