ES2662822T3

ES2662822T3 - Derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina para uso como inhibidores de la BCRP en tratamientos terapéuticos

Info

Publication number: ES2662822T3
Application number: ES15157648.5T
Authority: ES
Inventors: Steffen Dr. Rump; Henning Dr. Weigt
Original assignee: Scandion Oncology AS
Current assignee: Scandion Oncology AS
Priority date: 2015-03-04
Filing date: 2015-03-04
Publication date: 2018-04-09
Anticipated expiration: 2035-03-04
Also published as: WO2016139093A1; US20180044341A1; JP6737443B2; JP2018510211A; AU2016227883B2; AU2016227883A1; US10975079B2; EP3064207A1; EP3064207B1; BR112017018858A2

Abstract

Los derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina de la fórmula general I de la fórmula general I **(Ver fórmula)** O una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos para uso en el tratamiento o profilaxis del cáncer o la infección por VIH, donde al menos un átomo de hidrógeno en al menos uno de los grupos fenilo A y B es sustituido por un sustituyente RH que tiene una constante de Hammett RH mayor de 0,23 donde cada átomo de hidrógeno adicional en cada uno de los grupos fenilo A y B puede sustituirse independientemente del otro por un residuo R1, donde cada R1 independientemente puede ser un halógeno, un radical alifático lineal o ramificado, saturado o insaturado con miembros de la cadena 1-7, un radical alcanol lineal o ramificado, saturado o insaturado con miembros de la cadena 1-8, NO2, CN, CONR22, COR2, COOR2, OR2, SR2, NR22, SO2NR22, CX3, CR2X2, OCX3, OCR2X2, o fenilo; cada R2 independientemente es hidrógeno, un radical alifático lineal o ramificado, halogenado o no halogenado, saturado o insaturado con miembros de la cadena 1-7, un mono o poliheterociclo saturado o insaturado, naftilo o fenilo, bencilo con heteroátomos N, S u O, donde cada uno de los grupos mencionados anteriormente puede sustituirse independientemente con flúor, cloro, bromo, trifluorometilo, alquilo, alcoxi, ciano, nitro, amino, aminoalquilo, C(O)-alquilo, C(O)O-alquilo, bencilo, fenilo o naftilo; y X es independientemente F, Cl, Br, o I.

Description

Derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina para uso como inhibidores de la BCRP en tratamientos terapéuticos

5

La presente invención se refiere a derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina para uso como inhibidores de la BCRP en tratamientos terapéuticos para el tratamiento del cáncer y el VIH. Los inhibidores inventivos de la BCRP son especialmente efectivos cuando se usan en combinación con un segundo agente farmacéuticamente activo, que supone por sí mismo un sustrato potencial para la BCRP.

10 El transportador de la BCRP (Proteína de resistencia de cáncer de mama), también denominada como ABCG2, juega un importante papel en la disposición y distribución de los xenobióticos, similar al transportador P-gp y a la MRP1 (Cf.R.W. Robey et al., Cancer Metastasis Rev. (2007) 26, S. 39-57). La BCRP es un transportador de salida que impide que dichas sustancias penetren en tejidos como los del cerebro, intestino, o con tumores y también está implicado en la excreción biliar y, en cierta medida, en la excreción renal. 15

El transportador BCRP se expresa marcadamente en barreras de tejido como la del colon, el intestino delgado, la barrera hemotoencefálica (BHE), la placenta y la membrana canalicular del hígado, lo que indica un papel en la función de barrera. En las células polarizadas del intestino, riñones y epitelio del hígado, la BCRP se encuentra en la membrana apical donde media el transporte unidireccional de sustratos al lado luminal del órgano que actúa como 20 una bomba de salida.

Tabla 1: Papel fisiológico de la BCRP en varios tejidos:

Tejido: Papel fisiológico

Placenta: protección del feto contra toxinas

Tracto biliar y hepático: excreción hepatobiliar, excreción biliar de fármacos, conjugados de compuestos endógenos o xenobióticos

Células madre: Fenotipo de población lateral y protección contra hipoxia

Intestino: reducción de absorción de fármacos

Cerebro: protección contra xenobióticos

Mama: secreción de vitamina B necesaria para el metabolismo lipídico

Riñón: excreción renal

La BCRP (ABCG2) es un transportador celular que transporta una variedad de moléculas estructuralmente 25 diferentes y con actividad farmacéutica fuera de las células, un mecanismo comparable con la actividad fisiológica. Esto incluye, aunque no exclusivamente, agentes citotóxicos como Mitoxantrona, Camptotecina (Topotecan, Irinotecan, SN-38), Flavopiridol y Metrotexato.

Los efectos de la inhibición de la BCRP (ABCG2) son particularmente interesantes para su aplicación en 30 quimioterapia. Primero, la inhibición de la BCRP dentro de las células cancerígenas aumenta la concentración intracelular del fármaco citostático y, por ello, favorece la actividad farmacológica, especialmente si las células cancerígenas muestran un aumento en la expresión de las proteínas del transportador BCRP como mecanismo de resistencia. Segundo, la inhibición de la BCRP en el tracto gastrointestinal produce un aumento en la biodisponibilidad y absorción de fármacos aplicados oralmente y, de ese modo, un aumento en la concentración de 35 los mismos dentro del plasma sanguíneo. Se puede esperar que un aumento en la concentración en plasma y/o concentraciones más elevadas del fármaco local en las células cancerosas permita una disminución de los requisitos generales de la dosificación del fármaco en el tratamiento y, de este modo, provocar una reducción de los efectos secundarios.

40 Una superposición en la especificidad del sustrato entre la BCRP y la P-gp (por ejemplo, para gliburida, imatinib, metrotexato, mitoxantrona y prazosina) aumenta la función de barrera de los transportadores de salida. Mientras que la P-gp transporta generalmente compuestos hidrofóbicos, la BCRP transporta además aniones orgánicos conjugados hidrofílicos, en particular sulfatos, con una alta afinidad.

45 La BCRP transporta activamente xenobióticos que incluyen fármacos contra el cáncer, y restringe la captación de sustratos desde la luz intestinal y a través de la BHE. La expresión de la BCRP en las células cancerígenas les confiere resistencia a fármacos en la leucemia; además, se han mostrado niveles más altos en los tumores sólidos del tracto digestivo, endometrio, pulmón y melanoma, aunque, contrariamente, la expresión es generalmente baja en los tumores cancerígenos de mama. Existe una asociación significativa entre la expresión de la BCRP y la respuesta 50 del tumor a la quimioterapia y a la supervivencia libre de progresión. La BCRP está implicada en la salida de Mitoxantrona en un 70 % de los pacientes estudiados, a pesar de los muy bajos niveles de ARNm. La placenta tiene altos niveles de expresión de BCRP y se cree que esto protege al feto. Por ejemplo, el fármaco antidiabético Gliburida posee una entrada limitada en el feto debido a la salida realizada por la BCRP. En ratonas en estado de gestación con deficiencia de ABCG2 a las que se administró de forma concomitante Topotecan (sustrato) y GF120918 (inhibidor), se halló que el plasma del feto contenía el doble de nivel de Topotecan que el de sus madres. 5 En el hígado, la BCRP juega un papel principal dentro de la excreción biliar, aunque un papel menor dentro del transporte intestinal del sulfato de Troglitazona.

Los moduladores o inhibidores resistentes a múltiples fármacos de las P-gp (ABCB1), MRP1 (ABCC1) y BCRP (ABCG2) se clasifican en tres generaciones. Los compuestos ya utilizados clínicamente para otras aplicaciones 10 terapéuticas pertenecen a la primera generación (como el verapamilo, la ciclosporina A y la quinidina). Estos mostraron una alta toxicidad al aplicarlos en la dosis necesaria para la inversión de la resistencia a múltiples fármacos. La búsqueda intensiva de compuestos más específicos y menos tóxicos llevó al desarrollo de la siguiente generación de inhibidores de la resistencia a multifármacos. La tercera generación de moduladores de resistencia a multifármacos representa moléculas novedosas compuestas de características estructurales preseleccionadas en las 15 relaciones estructura-actividad y después presentadas en la investigación farmacológica. En contraste con los moduladores con RMF de segunda generación, estos inhibidores no son sustratos de citocromo P450 3A4, y además no influyen significativamente en el perfil farmacocinético de los fármacos administrados de forma concomitante. No obstante, ninguno de estos inhibidores ha llegado a comercializarse todavía.

20 Se ha mostrado que la BCRP (ABCG2) juega un papel vital en el desarrollo de la resistencia a multifármacos en diferentes formas de tratamientos contra el cáncer. De este modo, la identificación de moduladores para la resistencia de fármacos mediados por BCRP es de gran interés. Incluso aunque solo se han identificado un número pequeño de compuestos específicos como inhibidores de BCRP hasta el momento.

25 Además, todavía no se han iniciado ensayos clínicos en los cuales se estudie la efectividad de un inhibidor específico de la BCRP junto con un agente citostático en el tratamiento tumoral. Hasta ahora, únicamente se ha investigado clínicamente un inhibidor de amplio espectro (GF120918). El Elacridar (GF120918), un inhibidor dual de P-gp/BCRP, ha sido ampliamente investigado en estudios clínicos y preclínicos.

30 En relación con los inhibidores específicos de BCRP, la micotoxina Fumitremorgin C, aislada de Aspergillus fumigatus, fue descubierta como uno de los primeros y más altamente potentes inhibidores específicos de la BCRP.

Sin embargo, su pronunciada neurotoxicidad limitó su uso in vivo. Gracias a la síntesis en fase sólida para crear una colección de derivados de Fumitremorgin C, los compuestos Ko132 y Ko143 fueron identificados como siendo 35 sustancias altamente activas con baja citotoxicidad en comparación con el Fumitremorgin C.X. WANG, MOLECULAR PHARMACOLOGY, vol. 63, no. 1, 2003, páginas 65-72; Aivars Krauze ET AL, Bioorganic & Medicinal Chemistry, vol. 22, no. 21, 2014, páginas 5860-5870 y X. WANG, MOLECULAR PHARMACOLOGY, vol. 63, no. 1, 2003, las páginas 65-72 divulgan más inhibidores de la BCRP. A pesar de estos avances en tecnología, permanece una necesidad de inhibidores específicos y efectivos de la BCRP que muestren bajas citotoxicidad y neurotoxicidad 40 y preferentemente tampoco afecten al transportador de la P-gp.

Se ha descubierto recientemente que os derivados de Pyrazolo[3,4-d]pirimidina resultan agentes terapéuticos potentes para el tratamiento de las infecciones virales, tales como en infecciones de picornavirus particulares. P.ej.: la EP 2 049 540 A divulga derivados de 4-amino-3-arilamino-6-arilpirazol[3,4-d]pirimidina y su uso como agentes 45 antivirales. En la WO 2013/053942, que es un seguimiento a EP 2 049 540, se identificó un grupo altamente potente de 4-amino-3-arilamino-6-arilpirazol[3,4-d]pirimidina, que muestra una alta actividad antiviral contra una gran variedad de rinovirus y cepas CVB3. Estas aplicaciones no sugieren, sin embargo, que estos compuestos pudieran tener actividad inhibitoria sobre las proteínas en el cuerpo de mamíferos sanos.

50 El objeto de la invención es identificar los inhibidores de la BCRP y en particular los inhibidores BCRP que poseen una alta especificidad para BCRP con el fin de que el transportador de P-gp no se vea preferentemente afectado para su uso en el tratamiento de profilaxis del cáncer y las infecciones por VIH. Este objetivo se cumple por derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina específicamente sustituidos de la fórmula general I, que incluye sus compuestos de sales tolerados farmacéuticamente, para uso en el tratamiento o profilaxis del cáncer 55 y las infecciones por VIH,

donde al menos un átomo de hidrógeno en al menos uno de los grupos fenilo A y B es sustituido por un sustituyente RH, que tiene una constante de Hammett σp mayor que 0,23, 5

donde cada átomo de hidrógeno adicional en cada uno de los grupos fenilo A y B puede reemplazarse independientemente de cada uno por un residuo R1, donde

cada R1 independientemente puede ser un halógeno, un radical alifático lineal o ramificado, saturado o insaturado con miembros de la cadena 1-7, un radical alcanol lineal o ramificado, saturado o insaturado con miembros de la cadena 1-8, NO2, CN, CONR22, COR2, COOR2, OR2, SR2, NR22, SO2NR22, CX3, CR2X2, OCX3, OCR2X2, o fenilo; 10

cada R2 independientemente es hidrógeno, un radical alifático lineal o ramificado, halogenado o no halogenado, saturado o insaturado con miembros de la cadena 1-7, un mono o poliheterociclo saturado o insaturado, naftilo o fenilo, bencilo con heteroátomos N, S u O, donde cada uno de los grupos mencionados anteriormente puede sustituirse independientemente con flúor, cloro, bromo, trifluorometilo, alquilo, alcoxi, ciano, nitro, amino, 15 aminoalquilo, C(O)-alquilo, C(O)O-alquilo, bencilo, fenilo o naftilo; y

X es independientemente F, Cl, Br, o I. En las subreivindicaciones la ventaja de los derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina es que 20 son explicados también como aplicaciones más específicas, sin limitar la invención en modo alguno.

Los derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina de la fórmula general I son ventajosos, donde al menos un átomo de hidrógeno en, al menos, uno de los grupos fenilo A y B es reemplazado por un sustituyente RH, seleccionado de NO2, CN, CF3, CCl3, CBr3, OCF3, OCCl3, OCBr3, CHF2, CHCl2, CHBr2, OCHCl2, CHO, 25 COOH, COMe, COEt, COOMe o COOEt, preferentemente CF3 o OCF3. Resulta una ventaja que en uno o ambos grupos fenilo A y B, uno, dos o tres átomos de hidrógeno sean reemplazados por un sustituyente RH. En una realización especial precisamente un átomo de hidrógeno en uno de los grupos fenilo A y B es reemplazado por un sustituyente RH. El sustituyente RH puede estar en una posición para del anillo de fenilo A o B.

30 Además del RH cada uno de los grupos fenilo A y B puede independientemente del otro llevar residuos adicionales R1. Es una ventaja que los grupos fenilo A y B independientemente de que el otro lleve ninguno, uno, dos o tres de los residuos adicionales R1, prefieran ninguno o un residuo adicional R1.

Como alquilos es importante considerar y en conexión con la invención en particular alquilos-C1-7 lineales o 35 ramificados, como por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo y butilo. Lo mismo se aplica a los alcanoles, alquilaminas y alquilamidas en conexión con la invención.

Los derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina de la fórmula general I son preferentemente derivados de la fórmula general II, 40

donde cada sustituyente RA, RB independientemente puede ser hidrógeno, un halógeno, un radical alifático lineal o ramificado, saturado o insaturado con miembros de la cadena 1-7, un radical alcanol lineal o ramificado, saturado o insaturado con miembros de la cadena 1-8, NO2, CN, CONR22, COR2, COOR2, OR2, SR2, NR22, SO2NR22, CX3, 5 CR2X2, OCX3, OCR2X2, o fenilo; y R2 y X como se definió anteriormente; donde al menos uno de los sustituyentes RA, RB posee una constante de Hammett σp mayor que 0,23.

Además se prefiere que los derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina entren en el ámbito de la fórmula general IIa 10

o IIb 15

donde RH es seleccionado de NO2, CN, CF3, CCl3, CBr3, OCF3, OCCl3, OCBr3, CHF2, CHCl2, CHBr2, OCHCl2, CHO, COOH, COMe, COEt, COOMe o COOEt, preferentemente CF3 o OCF3.

20 Como la efectividad de los inhibidores de BCRP de la actividad inventiva se basan principalmente en la supresión de la actividad BCRP, que inhibe el transporte de sustancias activas fuera de la célula, el uso de los inhibidores de BCRP de la actividad inventiva es la más efectiva en combinación con un segundo agente farmacéuticamente activo, que en ausencia de los inhibidores de BCRP estaría disponible en la célula únicamente en cantidades inferiores. Se prefiere, por lo tanto, que el inhibidor de BCRP de la actividad inventiva se use en combinación con un segundo 25 agente farmacéuticamente activo, que supone por sí mismo un sustrato potencial para la BCRP.

Si un compuesto dado representa un sustrato para la BCRP puede determinarse en base a la tasa de salida del compuesto en un ensayo con células Caco-2, donde la tasa de salida se determina tanto en presencia como en ausencia de 10 µM de Fumitremorgin C (FTC) (cf. p. ej.The International Transporter Consortium (2010) Membrane 30 transporters in drug development. Nat Rev Drug Disc 9; páginas 215-236). Este ensayo utiliza estudios de transporte bidireccional desde el lado apical hasta el lado basolateral y viceversa. La línea de células Caco-2 es habitualmente usada en modelos in vitro para identificar sustratos de BCRP. Las células se siembran en una placa Multiscreen™ (Millipore, MA, USA) y forman una monocapa confluente durante los 20 días anteriores al experimento. La sustancia del test se añade entonces o bien al lado apical o al basolateral de una monocapa confluente de las células y se mide la permeabilidad mediante la monitorización de su aspecto sobre el lado opuesto de la membrana usando LC-MS/MS después de 120 min. 5

El coeficiente de permeabilidad (Papp) se calcula a partir de la siguiente ecuación:

10

donde dQ/dt es la tasa de permeabilización del fármaco a través de las células, C0es la concentración del compartimento del donante en el momento cero y A es el área de la monocapa celular.

La tasa de salida se calcula a partir de los datos medios de apical a basolateral (A-B) Papp y los datos medios de basolateral a apical (B-A) Papp. 15

La permeabilidad se evalúa en presencia y ausencia del FTC (inhibidor de BCRP) para confirmar que la sustancia del test es un sustrato de la BCRP. La sustancia de un test se considera un sustrato para BCRP, si la tasa de salida 20 neta es ≥ 2 y la salida es significativamente inhibida por el Fumitremorgin C (es decir, inhibido hasta el 50 % o menos de la tasa de salida sin FTC).

En una realización preferida, el segundo agente farmacéuticamente activo en el test anterior muestra una diferencia en la tasa de salida, entre las muestras que no contienen FTC y las que contienen FTC, de 5 o más, en particular 10 25 o más y con la máxima preferencia 20 o más. Los sustratos habituales de BCRP incluyen, aunque no exclusivamente, agentes citostáticos como antraquinonas (p. ej. Mitoxantrona, Bisantreno, Aza-antrapirazol), antraciclinos citostáticos (p.ej. Daunorubicina, Doxorubicina, Epirubicina,Flavopiridolo Mitoxantrona), antimetabolitos citostáticos (p.ej. Metotrexato), camptotecinas citostáticas [p. ej. 9-Aminocamptotecina (Rubitecan), Homocamptotecina, Irinotecan, SN-38 (metabolito activo del Irinotecan), SN-38-glucurónido, Topotecan o 30 Diflomotecan] y epipodofilotoxinas citostáticas (p.ej.:Etoposido o Teniposido). Otros sustratos de BCRP incluyen antibióticos como Ciprofloxacina, Ofloxacina, Norfoxcacina, Eritromicina y Nitrofurantoina, inhibidores del canal de calcio como Dipiridamol, Nifedipina y Nitrendipina, conjugados de sulfato y glucuronida como Benzo[a]pireno-3-sulfato, Benzo[a]pireno-3-glucuronida, Estrona-3-sulfato, Dehidroepiandrosterona sulfato y 17β-Estradiolsulfato, inhibidores de la HMG-CoA reductasa como Rosuvastatina, Pitavastatina y Cerivastatina, Porfirinas como Heme, 35 Feoforbida A, Pirofoforbida A-Metiléster, Protoporfirina IX, Pitoporfirina, fármacos antivirales, en particular inhibidores de trancriptasa inversa de nucleósidos, como Zidovudina, Lamivudina, Abacavir y combinaciones de los mismos, y sustancias como Cimetidina, Ácido fólico, Metotrexato, Riboflavina, Sulfasalazina, Pantoprazol, Imatinib mesilato (STI571), Indocarbazol y Prazosina. Particularmente preferidos son los segundos agentes farmacéuticamente activos como Topotecan y Trizivir, que es una combinación de Abacavir, Lamivudina y Zidovudina. 40

Otra posible aplicación de las propiedades inhibitorias de los derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina anteriormente mencionados es la implementación de los compuestos en un procedimiento para comprobar la actividad del transportador de BCRP. La presente aplicación, de este modo, también desvela el uso de derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina, tal y como se describió anteriormente en un 45 procedimiento para evaluar la actividad del transportador BCRP.

También se incluyen las composiciones farmacéuticas, que contienen un derivado de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina de acuerdo con las fórmulas generales I, II, IIa o IIb para uso en el tratamiento o profilaxis del cáncer y las infecciones por VIH. Dichas composiciones farmacéuticas pueden contener además sustancias, 50 como por ejemplo, vehículos y excipientes aceptables farmacéuticamente. En un aspecto particular las composiciones farmacéuticas incluyen ingredientes activos adicionales, como aquellos listados en el anterior párrafo, como sustratos potenciales para BCRP. En particular, se prefiere que las composiciones farmacéuticas sean una combinación de un derivado de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina como se mencionó anteriormente y uno o más agentes citostáticos, agentes antibióticos, inhibidores del canal de calcio, conjugados de sulfato y glucuronida, en particular de Benzo(a)pireno, Estrona, Dehidroepiandrosterona y Estradiol, inhibidores de reductasa HMG-CoA, porfirinas y/o fármacos antivirales, en particular los inhibidores de transcriptasa inversa de nucleósidos. Además de entre estos agentes activos, también los agentes citostáticos además de los fármacos antivirales, en 5 particular se prefieren especialmente en la forma de inhibidores de transcriptasa inversa de nucleósidos.

Sorprendentemente, se ha descubierto que los compuestos descritos anteriormente son apropiados para su uso en el tratamiento conjunto de condiciones donde el fármaco específico es transportado fuera de la célula diana a través de la molécula del transportador de BCRP. Esto tiene particular relevancia para la quimioterapia a la hora de superar 10 la resistencia mediada por el fármaco de BCRP y para mejorar la biodisponibilidad y eficacia del fármaco específico. Además, la especificidad del BCRP de los compuestos de la actividad inventiva proporciona beneficios en la seguridad y tolerabilidad de la medicación concomitante dentro del tratamiento contra el cáncer en comparación con la aplicación de inhibidores de amplio espectro (inhibidores de amplio espectro P-gp/MRP1/BCRP o P-gp/BCRP). La inhibición específica de la BCRP de los compuestos de la actividad inventiva, que no afecta al transportador de P-gp, 15 es beneficiosa para el perfil de interacción potencial fármaco-fármaco de la medicación concomitante en comparación con los inhibidores de amplio espectro.

Además, para algunos de los compuestos de la actividad inventiva, también se ha mostrado mediante análisis del DMPK in vitro que los compuestos investigados no exhibían inducción o inhibición de las proteínas CYP 450 -no 20 especialmente de CYP3A4- por lo que se espera que tengan un uso como un modulador de resistencia a multifármacos de 3ª generación.

Por estas razones, las preparaciones farmacéuticas, que contienen un compuesto de las fórmulas I, II, IIa o IIb, son particularmente adecuadas para el tratamiento del cáncer y las infecciones por VIH. Los derivados de 4-amino-3-25 fenilamino-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina se caracterizan por el hecho de que pueden portar al menos un sustituyente RH en uno o en ambos grupos fenilo, que tiene una constante de Hammett σp mayor que 0,23. Este valor de 0,23 corresponde a la constante de Hammett σp del bromo, que muestra la constante de Hammett más alta para la posición para entre los halógenos. La determinación de las constantes de Hammett para diferentes sustituyentes se basa en las constantes de ionización del ácido benzoico de acuerdo con la ecuación de Hammett 30

donde KH es la constante de ionización para el ácido benzoico en agua a 25 °C y KX es la constante correspondiente para un ácido benzoico sustituido para o meta. Un procedimiento para determinar la constante de Hammett para 35 sustituyentes diferentes en posición meta (σm) y para (σp) además de los valores ya determinados de una variedad de sustituyentes pueden extraerse de la publicación de Hansch et al., quot;A Survey of Hammett Substituent Constants and Resonance and Field Parametersquot;, in Chem. Rev. 1991. 97, 165-195, que se ha incorporado en su totalidad a la presente invención para referencia. De significancia para esta invención es, en efecto, exclusivamente el valor σ respectivamente para la posición para (σp), independientemente de la posición donde al menos un sustituyente RH 40 es finalmente localizado.

Ejemplos de la invención son los compuestos en la Tabla 2 que incluyen sus compuestos de sales tolerados farmacéuticamente para su uso en tratamiento o profilaxis del cáncer y las infecciones por VIH.

Tabla 2

Compuesto: Fórmula Disolvente para cristalización Punto de fusión en ºC Fórmula molecular MS EI (m / z) (M+) % de análisis calculado (B) % hallado (G) 1H NMR (DMSO-d6) δ, ppm

OBR-5-340: THF(tetrahidrofurano), Tolueno - C18H13F3N6 370,3312 B: C 58,3; H 3,54; N 22,69 -

MS-112: EtOH - C18H3F3N6O 386,3306 B: C 55,96; H 3,39; N 21,75 -

Los compuestos anteriormente indicados para los usos referenciados pueden prepararse a través de procedimientos de síntesis que serán descritos brevemente a continuación:

El esquema general siguiente muestra la síntesis de pirazol[3,4-d]pirimidina (1) e incluye en el primer paso la condensación de [bis(metiltio)metilen]malononitril (2) con fenilaminas (3) en alcohol a derivados de fenilo (4). El 5 último puede aislarse respectivamente y purificarse para reacciones adicionales o usarse directamente sin purificación o subsiguientes reacciones (reacción «única»). El paso subsiguiente continúa la interacción del derivado fenilo (4) con hidracina o los derivados de hidracina. La reacción tiene lugar mediante ebullición durante 1 a 4 horas y lleva a una alta producción de pirazol (5). El paso final de la síntesis de pirazol [3,4-d]pirimidina (1) es la condensación del pirazol (5) con fenilamidina (6) en la presencia de ácido acético, ácido trifluoroacético o acetato de 10 sodio.

Los compuestos pueden, por lo tanto, obtenerse de forma ventajosa mediante la transformación del pirazol (5) en el 15 último paso de la síntesis con el correspondiente hidrocloruro de benzamidina en la presencia de un exceso de acetato de sodio a 200-220 ºC en la ausencia de disolventes.

Alternativamente, los compuestos pueden obtenerse mediante la transformación del pirazol (5) en el último paso de la síntesis con el correspondiente benzonitrilo (un excedente importante) con irradiación de microondas y en la 20 presencia de terc-butilato de potasio.

Un procedimiento de síntesis alternativo es la reacción «única» del malononitrilo con aril isotiocianatos en la presencia de hibridado de sodio y un tratamiento posterior de la mezcla de reacción con yoduro de metilo o dimetilsulfato. En el proceso se producen grandes cantidades de enamina. Aquí también, la condensación del pirazol 25

con arilaminidas (6) en presencia de ácido, como el ácido acético o el ácido trifluoroacético, o sus sales (acetato) es, nuevamente, el paso de la síntesis final para producir pirazol[3,4-d]pirimidina (1).

Se ha demostrado que la conversión del pirazol (5) en pirazol[3,4-d]primidina con producciones particularmente altas puede realizarse mediante el uso de componentes de benzamidina como una base libre y la reacción llevada a cabo 5 en disolventes polares. Una ventaja de este procedimiento es también que se puede minimizar la proporción de subproductos que son difíciles de separar. Esta reacción también puede efectuarse, en base a 5-amino-4-ciano-3-fenilamino-pirazol sustituido (5) con benzamidinas opcionales sustituidas como una base libre (6) para 4-amino-3-(fenilamino)-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina (1) de acuerdo con el siguiente esquema de reacción. 10

Los residuos RA y RB son sustituyentes, como se definió anteriormente para R1.

Mientras la conversión descrita anteriormente es particularmente adecuada para la fabricación de derivados de 4-15 amino-3-fenilamino-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina de la fórmula general anterior (I), donde al menos un átomo hidrógeno en al menos uno de los grupos fenilo A y B es reemplazado por un sustituyente RH, que tiene la constante de Hammett σpgt; 0,23, el procedimiento también puede usarse para la fabricación de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina que no tenga dichos sustituyentes, es decir, en el cual este residuo represente hidrógeno o un residuo R1, como se definió anteriormente en conexión con la fórmula I. 20

La reacción mostrada en el esquema de reacción anterior se efectúa en disolventes orgánicos polares e inertes. Los disolventes polares e inertes son, por ejemplo, éter como éter etílico, metil tert-butil éter, 1,2-dimetoxietano, dietilenglicol dimetil éter, éter cíclico, como dioxano, tetrahidrofurano, hidrocarburos, como etilbenceno, xileno, tolueno o alcoholes, como etanol, propanol, butanol, isobutanol e isopropanol. Se obtienen productos 25 particularmente puros mediante el uso de n-butanol como un disolvente. El n-butanol debe usarse en una relación molar de 1 a 10 en particular preferentemente de 1,5 a 3 en relación con el valor inicial del derivado de pirazol.

Dentro del ámbito de la presente invención, surgió como particularmente útil si la benzamidina (6) se preparaba recientemente en su forma básica (como base libre). La síntesis se ve afectada con el uso de procedimientos 30 habituales a partir de la sal consecuentemente disponible. Es mejor usar benzamidina (6) en una relación molar de 1 a 1,5 en función de los derivados de pirazol (5).

La reacción llevada a cabo a una temperatura de entre 60 a 110ºC, preferentemente de 85 a 95ºC durante 10-30 horas, preferentemente durante 18-20 horas. 35

El amino-3-(fenilamino)-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina (1) obtenido de esta forma es limpiado por recristalización. Para este preferentemente se usa tetrahidrofurano o una mezcla de tetrahidrofurano con agua o un disolvente orgánico, en particular preferentemente con tolueno. Alternativamente a ese amino-3-(fenilamino)-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina también puede limpiarse por precipitación a partir de una solución caliente en tetrahidrofurano con agua 40 o un disolvente orgánico, preferentemente con tolueno.

En los siguientes ejemplos, se detallan compuestos especiales de la fórmula general (I), que son adecuados para uso en el tratamiento del cáncer y la infección por VIH. Estos compuestos pueden prepararse en una solución o una suspensión en un medio acuoso-orgánico, orgánico o acuoso para la aplicación parenteral o local mediante 45 inyección intravenosa, subcutánea o intramuscular o para administración nasal, o desarrollarse en la forma de un comprimido, cápsula o suspensión acuosa con un vehículo convencional para la administración oral o como un supositorio.

Los compuestos presentados en la fórmula (I) pueden, de este modo, usarse en dosis de 0,1 a 1000 mg/kg por peso 50 corporal.

Fabricación y análisis de los derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina La clarificación estructural de los compuestos de la invención es afectada por el tipo de síntesis, análisis 55

elementales, espectroscopia de RMN y espectrometría de masas

Materiales fuente: Los 5-amino-4-ciano-3-fenilaminopirazoles fueron sintetizados de acuerdo con el procedimiento mostrado en la Fig. 5 1 además de según la descripción de Tominaga Y et al. (J. Heterocycl. Chem., 1990, 27, 775-779). Las arilamidinas son sintetizadas de acuerdo con la técnica anterior a partir de los correspondientes compuestos fuente de cianógeno (Boere, RT et al.: J. Organomet. Chem., 1987, 331, 161-167; Garigipati RS: Tetrahedron Lett., 1990, 31, 1969-1978; Dann O et al.: Justus Liebigs Ann. Chem., 1982, 1836-1839).

10

Ejemplo 1: 4-amino-3-(4-trifluorometil-fenil)amino-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina (OBR-5-340)

(6-feenil-3-N-[4-(trifluorometil)fenil]-2H-pirazol[3,4-d]pirimidina-3,4-diamina) 3,0 g (17,24 mmol) de hidrato de clorhidrato de benzamidina y 2,2 g (23,0 mmol) de acetato de sodio son añadidos a 15 2,3 g (11,5 mmol) de 5-amino-4-ciano-3-(4-trifluorometilfenil)aminopirazol mientras se remueven. La mezcla de la reacción se calienta durante 30 min a 220 °C. El material resultante se trata con 50 ml de agua, se filtra y lava con 20 ml de metanol frío y 20 ml de éster frío. El producto es limpiado por medio de cristalización a partir de DMF/agua.

20

Ejemplo 2: 4-amino-3-fenilamino-6-[4-(trifluorometoxi)-fenil]pirazol[3,4-d]pirimidina (MS-112)

(3-N-fenil-6-[4-(trifluorometoxi)fenil]-2H-pirazol[3,4-d]pirimidina-3,4-diamina) 25 La fabricación se logró tal como se describió en el ejemplo 1 con el uso de los compuestos precursores sustituidos correspondientemente.

30

Estudios ADME-Tox sobre absorción In Vitro del OBR 5-340 y el MS 112 El valor IC-50 del OBR 5-340 y el MS 112 fue determinado de acuerdo con el procedimiento descrito por Paturi D.K, et al in Int. J. Pharm. (2010), 384: 32 - 38. La fuente usada para la determinación fueron células CHO-K1 recombinantes humanas, mientras que se utilizó Hoechst 33342 (5 µm) como el sustrato. Las células se incubaron 35 durante 20 min a 37 ºC y la detección se logró por medio de fluorimetría.

Ensayo de inhibición fluorimétrica: El porcentaje de control se calculó usando la siguiente ecuación.

5

En esta fórmula, «compuesto» es la lectura individual en la presencia del compuesto del test. «T1» es la lectura de media en la ausencia del compuesto del test. «Fondo» es la lectura de media en la presencia de la concentración efectiva más alta del inhibidor de referencia.

10 El porcentaje de inhibición se calcula mediante la sustracción del porcentaje de control a partir de 100. El valor IC50 (concentración que provoca una inhibición media-máxima del valor de control) se determinó mediante un análisis de regresión no lineal de la curva de concentración/respuesta usando la ecuación de Hill.

Los resultados de las mediciones de IC50 se indican en la Tabla 3 a continuación. 15

Tabla 3

Compuesto: IC50

OBR-5-340: 1,7 µm

MS-112: ∼ 100 µM

Investigaciones similares sobre el efecto inhibitorio de los compuestos OBR-5-340 y MS-112 sobre el transportador de la P-pg no mostraron ningún vínculo (las curvas de concentración/respuesta fueron inferiores al efecto del 25 % 20 con la concentración del test validada en su máximo).

En un conjunto de test adicional se evaluó mediante estudios de DPMK si el OBR-5-340 podría exhibir interacciones desfavorables con el citocromo P450. En estas investigaciones pudo demostrarse que el OBR-5-340 no inhibe los CYP1A, CYP2B6, CYP2C8, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6, o CYP3A. Tampoco se encontró inducción alguna de los 25 CYP1A2, CYP2B6, o CYP3A4. Estos datos implican que OBR-5-340 no influye significativamente en el perfil farmacocinético de los fármacos administrados de forma concomitante. En base a estos resultados, el OBR-5-340 pudo describirse como un inhibidor altamente potente de la resistencia a multifármacos de tercera generación para la BCRP.

30

Claims

REIVINDICACIONES

1. Los derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina de la fórmula general I de la fórmula general I 5

O una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos para uso en el tratamiento o profilaxis del cáncer o la infección por VIH, donde al menos un átomo de hidrógeno en al menos uno de los grupos fenilo A y B es sustituido por un sustituyente RH que tiene una constante de Hammett RH mayor de 0,23 donde cada átomo de hidrógeno 10 adicional en cada uno de los grupos fenilo A y B puede sustituirse independientemente del otro por un residuo R1, donde

cada R1 independientemente puede ser un halógeno, un radical alifático lineal o ramificado, saturado o insaturado con miembros de la cadena 1-7, un radical alcanol lineal o ramificado, saturado o insaturado con miembros de la cadena 1-8, NO2, CN, CONR22, COR2, COOR2, OR2, SR2, NR22, SO2NR22, CX3, CR2X2, OCX3, OCR2X2, o fenilo; 15

cada R2 independientemente es hidrógeno, un radical alifático lineal o ramificado, halogenado o no halogenado, saturado o insaturado con miembros de la cadena 1-7, un mono o poliheterociclo saturado o insaturado, naftilo o fenilo, bencilo con heteroátomos N, S u O, donde cada uno de los grupos mencionados anteriormente puede sustituirse independientemente con flúor, cloro, bromo, trifluorometilo, alquilo, alcoxi, ciano, nitro, amino, aminoalquilo, C(O)-alquilo, C(O)O-alquilo, bencilo, fenilo o naftilo; y 20

X es independientemente F, Cl, Br, o I. 2. Los derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina para uso de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizada por el hecho de que al menos un sustituyente RH es independientemente NO2, CN, 25 CF3, CCl3, CBr3, OCF3, OCCl3, OCBr3, CHF2, CHCl2, CHBr2, OCHCl2, CHO, COOH, COMe, COEt, COOMe o COOEt, preferentemente CF3 o OCF3.
3. Los derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina para uso de acuerdo con la reivindicación 1 de la fórmula general II 30

donde cada sustituyente RA, RB independientemente puede ser hidrógeno, un halógeno, un radical alifático lineal o ramificado, saturado o insaturado con miembros de la cadena 1-7, un radical alcanol lineal o ramificado, saturado o 35 insaturado con miembros de la cadena 1-8, NO2, CN, CONR22, COR2, COOR2, OR2, SR2, NR22, SO2NR22, CX3, CR2X2, OCX3, OCR2X2, o fenilo;

donde R2 y X se definen como en la reivindicación 1; caracterizada por el hecho de que al menos uno de los sustituyentes RA, RB tiene una constante de Hammett σp mayor que 0,23. 40
4. Los derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina para uso de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 o 2 de la fórmula general IIa

5

o IIb

caracterizada por el hecho de que RH es NO2, CN, CF3, CCl3, CBr3, OCF3, OCCl3, OCBr3, CHF2, CHCl2, CHBr2, 10 OCHCl2, CHO, COOH, COMe, COEt, COOMe o COOEt, preferentemente CF3 o OCF3.
5. Los derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina para uso de acuerdo con la reivindicación 4 de la fórmula 15

o
6. Los derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazol[1-d]pirimidina como de la fórmula I para uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 en combinación con uno o más agentes citostáticos, agentes antibióticos, inhibidores del canal de calcio, conjugados de sulfato y glucuronida, en particular de Benzo(a)pireno, Estrona, Dehidroepiandrosterona y Estradiol, inhibidores de reductasa HMG-CoA, porfirinas y/o fármacos antivirales, en particular los inhibidores de transcriptasa inversa de nucleósidos. 5
7. Composición farmacéutica que comprende un derivado de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidina como se definió en una de las reivindicaciones 1 a 5 para uso en el tratamiento o profilaxis del cáncer y las infecciones por VIH. 10
8. Composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 7, que también comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable.
9. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 7 u 8 que también comprende uno o varios ingredientes activos. 15
10. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 9, donde el único o varios otros ingredientes activos son agentes citostáticos o agentes antivirales, preferentemente agentes antivirales contra el VIH.