TW201406377A

TW201406377A - 抗癌劑之抗性克服劑

Info

Publication number: TW201406377A
Application number: TW102131531A
Authority: TW
Inventors: Masuharu Hirano; Tomio Yamakawa; Toshihisa Ishikawa; Hikaru Saito
Original assignee: Nippon Chemiphar Co
Priority date: 2007-12-19
Filing date: 2007-12-19
Publication date: 2014-02-16

Abstract

一種抗癌劑之抗性克服劑，其特徵為使用含有2-〔3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基〕-4-羥基噻唑〔5,4-d〕嘧啶鉀鹽、2-〔3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基〕噻唑〔5,4-d〕嘧啶、2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羥基噻唑〔5,4-d〕嘧啶、2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羥基噻唑〔5,4-d〕嘧啶鉀鹽、2-〔3-氰基-4-苯氧基苯基)噻唑〔5,4-d〕嘧啶、TMX-67及FYX-051等之黃嘌呤氧化酵素抑制劑(Xanthine Oxidase inhibitor)作為有效成份的藥劑。

Description

抗癌劑之抗性克服劑

本發明係關於一種含有黃嘌呤氧化酵素抑制劑作為有效成份之抗癌劑之抗性克服劑。

癌症之化學治療法係於癌症治療中為不可欠缺者，但是亦產生不少抗性。獲得抗性之癌細胞顯示對於非使用抗癌劑於治療中或是作用機轉與構造相異的多種之藥劑的抗性，往往顯示所謂的多種藥物抗性(Multiple drug resistance)。抗性係治療上之大的問題，但是其中多種藥物抗性為嚴重，故其克服藥之開發可被期望。該多種藥物抗性之機制的一種具有存在於細胞膜之P-糖蛋白(ABCBI)及MRP1(ABCC1)等之ABC-transporter的過量表現。此等之ABC-transporter係因ATP依存性之各種構造之基質(藥理、生理活性物質等)由細胞內排出於細胞外，故該過量表現使細胞內藥物濃度減少，對於抗癌劑等之各種藥物產生抗性。

乳腺癌耐藥蛋白(Breast Cancer Resistance Protein)(BCRP/ABCG2)係比較最近被鑑定之ABC-transporter。(非專利文獻1：Doyloe LA et al.：Proc Natl Acad Sci USA.,95：15665-15670(1998)、非專利文獻2：Allikmets R et al：Cancer Res.,58：5337-5339(1998)及非專利文獻3：Miyake K et al.：Cancer Res.,59：8-13(1999))

BCRP係將irinotecan(商品名Campto；抗癌妥)之活性代謝物之SN-38、雙羥蒽醌注射液(mitoxantrone)及topotecan(商品名Hycamtin；癌康定)等之抗癌劑排出於細胞外，故作為對於此等之抗癌劑之抗性克服性之分子標的被注目。(專利文獻1：特開2003-63989)

另一方面，已知具有一般式(I)或是(II)所表示之二環性之雜縮合環之化合物為具有黃嘌呤氧化酵素(XOD)抑制作用。(專利文獻2：WO2005/121153、專利文獻3：WO 03/042185、專利文獻4：WO 2007/4688)

又，非布索坦(febuxostat(TMX-67)、4-〔5-吡啶-4-基-1H-〔1,2,4〕三唑-3-基〕吡啶-2-甲腈(FYX-051)具有黃嘌呤氧化酵素(XOD)抑制作用，有益於作為高尿酸血症治療劑。

又，後述一般式(I)或是(II)所表示之化合物及TMX-67等對於BCRP顯示抑制作用為未知。

本發明之目的係提供藥劑之抗性克服劑及抗癌劑之抗性克服劑。

本發明者們發現具有後述一般式(I)或是(II)記載之化合物及TMX-67等之黃嘌呤氧化酵素抑制作用之化合物對於BCRP顯示抑制作用，以完成本發明。

即，本發明係關於一種藥劑之抗性克服劑，其特徵為含有以下之一般式(I)

(式中、R¹係表示可具有碳數2~8之鏈烯基或是作為取代基之碳數1~8之烷基、被碳數1~8之鹵原子取代之烷基、碳數1~8之烷氧基、被碳數1~8之鹵原子取代之烷氧基、碳數2~8之烷氧基羰基、甲醯基、羧基、鹵原子、氫基、硝基、氰基、胺基、碳數6~10之芳基或是碳數6~10之芳氧基中所選出之基或是原子之碳數6~10之芳基或是雜芳基、R²係表示氰基、硝基、甲醯基、羧基、胺甲醯基或是碳數2~8之烷氧基羰基、X係表示氧原子、-N(R³)或是-S(O)_n-，於此，R³係表示氫原子或是碳數1~8之烷基或是R¹與R³結合表示嗎啉基、硫代嗎啉基(thiomorpholinyl)、哌嗪基或是表示與前述R¹相同者，n係表示0~2之整數，而，Y係表示氧原子、硫原子或是NH)

所表示之化合物或是其鹽作為有效成份。

又，本發明係關於一種藥劑之抗性克服劑，其特徵為含有以下之一般式(II)

(式中、R¹係表示可具有作為取代基之碳數1~8之烷基、被碳數1~8之鹵原子取代之烷基、碳數1~8之烷氧基、被碳數1~8之烷氧基取代之碳數1~8之烷氧基、碳數2~8之烷氧基羰基、甲醯基、羧基、鹵原子、氫基、硝基、氰基、胺基、碳數6~10之芳基或是碳數6~10之芳氧基中所選出之基或是原子之碳數6~10之芳基或是雜芳基，R²係表示氰基、硝基、甲醯基、羧基、胺甲醯基或是碳數2~8之烷氧基羰基，R³係表示氫基、胺基、羧基、巰基、OR⁴或是NHR⁵，於此，R⁴及R⁵係可具有作為取代基之鹵原子、氫基、硝基、氰基、胺基、碳數6~10之芳基或是碳數6~10之芳氧基中所選出之基或是原子之碳數1~8之烷基、X係表示氧原子、-N(R⁶)-或是-S(O)_n-，於此，R⁶係表示氫原子、碳數1~8之烷基或是表示與前述之R¹相同者，n係表示0~2之整數，而，Y係表示氧原子或是硫原子)

所表示之化合物或是其鹽作為有效成份。

又，一種藥劑之抗性克服劑，其特徵為含有非布索坦(febuxostat)或是4-〔5-吡啶-4-基-1H-〔1,2,4〕三唑-3-基〕吡啶-2-甲腈作為有效成份。

又，本發明係關於一種含有上述一般式(I)所表示之化合物或是其鹽作為有效成份之抗癌劑之抗性克服劑。

又，本發明係關於一種含有上述一般式(II)所表示之化合物或是其鹽作為有效成份之抗癌劑之抗性克服劑。

又，本發明係關於一種抗癌劑之抗性克服劑，其特徵為含有非布索坦(febuxostat)或是4-〔5-吡啶-4-基-1H-〔1,2,4〕三唑-3-基〕吡啶-2-甲腈作為有效成份。

再者，又，本發明係關於一種對癌細胞之治療用藥劑，其特徵為顯示2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)噻唑〔5,4-d〕嘧啶、2-〔3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基〕噻唑〔5,4-d〕嘧啶、2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羥基噻唑〔5,4-d〕嘧啶、2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羥基噻唑〔5,4-d〕嘧啶鉀鹽及2-〔3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基〕-4-羥基噻唑〔5,4-d〕嘧啶鉀鹽、非布索坦(febuxostat)或是4-〔5-吡啶-4-基-1H-〔1,2,4〕三唑-3-基〕吡啶-2-甲腈所選出之化合物與抗癌劑所組成之多種藥物抗性。

用以實施本發明之最佳形態

又，詳細地說明本發明。

上述一般式(I)記載之化合物係可使用專利文獻2~4及後述之參考例被記載之方法合成。

上述一般式(I)記載之化合物中，以下表示之化合物或是其鹽為佳。

(1-1)

R¹係可具有作為取代基之碳數1~8之烷基、被碳數1~8之鹵原子取代之烷基、碳數1~8之烷氧基、被碳數1~8之鹵原子取代之烷氧基、碳數2~8之烷氧基羰基、甲醯基、羧基、鹵原子、氫基、硝基、氰基、胺基、碳數6~10之芳基或是碳數6~10之芳氧基中所選出之基或是原子之苯基、萘基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、哌嗪基、嘧啶基、吡喃基、吡啶基、噻唑基、咪唑基、吲哚基、喹啉基之上述一般式(I)所表示之化合物或是其鹽。

(1-2)

R¹係可具有作為取代基之碳數1~8之烷基、被碳數1~8之鹵原子取代之烷基、碳數1~8之烷氧基、被碳數1~8之鹵原子取代之烷氧基、碳數2~8之烷氧基羰基、甲醯基、羧基、鹵原子、氫基、硝基、氰基、胺基、碳數6~10之芳基或是碳數6~10之芳氧基中選出之基或是原子之苯基或是吡啶基之上述一般式(I)所表示之化合物或是鹽。

(1-3)

R¹係可具有作為取代基之碳數1~8之烷基、被碳數1~8之鹵原子取代之烷基、碳數1~8之烷氧基、羧基、鹵原子、氫基、硝基、氰基或是胺基中選出之基或是原子之苯基或是吡啶基之上述一般式(I)所表示之化合物或是鹽。

(1-4)

R²係氰基或是硝基之上述一般式(I)所表示之化合物或是上述(1-1)~(1-3)中任一者記載之化合物或是其鹽。

(1-5)

R²係氰基上述一般式(I)所表示之化合物或是上述(1-1)~(1-3)中任一者記載之化合物或是其鹽。

(1-6)

X係氧原子、NH或是硫原子之上述一般式(I)所表示之化合物或是上述(1-1)~(1-5)中任一者記載之化合物或是其鹽。

(1-7)

X係氧原子或是硫原子之上述一般式(I)所表示之化合物或是上述(1-1)~(1-5)中任一者記載之化合物或是其鹽。

(1-8)

Y係硫原子或是NH之上述一般式(I)所表示之化合物或是上述(1-1)~(1-7)中任一者記載之化合物或是其鹽。

(1-9)

Y係硫原子之上述一般式(I)所表示之化合物或是上述(1-1)~(1-7)中任一者記載之化合物或是其鹽。

(1-10)

R¹係可具有作為取代基之碳數1~8之烷基、被碳數1~8之鹵原子取代之烷基、碳數1~8之烷氧基、羧基、鹵原子、氫基、硝基、氰基、胺基中選出之基或是原子之苯基或是吡啶基、R²係氰基或是硝基、X係氧原子或是硫原子、Y係硫原子或是NH之上述一般式(I)所表示之化合物或是其鹽。

(1-11)

R¹係可具有作為取代基之碳數1~8之烷基、被碳數1~8之鹵原子取代之烷基、碳數1~8之烷氧基、羧基、鹵原子、氫基、硝基、氰基、胺基中選出之基或是原子之苯基或是吡啶基、R²係氰基或是硝基、X係氧原子或是硫原子、Y係硫原子之上述一般式(I)所表示之化合物或是其鹽。

(1-12)

R¹係可具有作為取代基之碳數1~8之烷基、被碳數1~8之鹵原子取代之烷基、碳數1~8之烷氧基、羧基、鹵原子、氫基、硝基、氰基、胺基中選出之基或是原子之苯基或是吡啶基、R²係氰基或是硝基、X係氧原子、Y係硫原子之上述一般式(I)所表示之化合物或是其鹽。

(1-13)

特別是最佳可例如為2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)噻唑〔5,4-d〕嘧啶及2-〔3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基〕噻唑〔5,4-d〕嘧啶。

上述一般式(II)記載之化合物之合成方法係記載於專利文獻2中。

上述一般式(II)記載之化合物中，以下所表示之化合物或是其鹽為佳。

(2-1)

R¹係可具有作為取代基之碳數1~8之烷基、被碳數1~8之鹵原子取代之烷基、碳數1~8之烷氧基、碳數2~8之烷氧基羰基、甲醯基、羧基、鹵原子、氫基、硝基、氰基、胺基、碳數6~10之芳基或是碳數6~10之芳氧基中選出之基或是原子之苯基、萘基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、咪唑基、嘧啶基、噻唑基、吡啶基、吲哚基或是喹啉基之上述一般式(II)所表示之化合物或是其鹽。

(2-2)

R¹係可具有作為取代基之碳數1~8之烷基、被碳數1~8之鹵原子取代之烷基、碳數為1~8之烷氧基、碳數 2~8之烷氧基羰基、甲醯基、羧基、鹵原子、氫基、硝基、氰基、胺基、碳數為6~10之芳基或是碳數6~10之芳氧基中選出之基或是原子之苯基之上述一般式(II)所表示之化合物或是其鹽。

(2-3)

R¹係可具有作為取代基之碳數1~8之烷基、被碳數為1~8之鹵原子取代之烷基、碳數為1~8之烷氧基、碳數為2~8之烷氧基羰基、甲醯基、羧基、鹵原子、苯基或是苯氧基中選出之基或是原子之苯基之上述一般式(II)所表示之化合物或是其鹽。

(2-4)

R²係氰基或是硝基之上述一般式(II)記載之化合物或是其鹽或是上述(2-1)~(2-3)中任一者記載之化合物或是其鹽。

(2-5)

R²係氰基之上述一般式(II)記載之化合物或是其鹽或是上述(2-1)~(2~3)中任一者記載之化合物或是其鹽。

(2-6)

R³係氫基之上述一般式(II)記載之化合物或是其鹽或是上述(2-1)~(2-5)中任一者記載之化合物或是其鹽。

(2-7)

R³之取代位置係(二環性之)雜縮合環之4位之上述一般式(II)記載之化合物或是其鹽或是上述(2-1)~(2-6)中任一者記載之化合物或是其鹽。

(2-8)

X係氧原子、NH或是硫原子之上述一般式(II)記載之化合物或是其鹽或是上述(2-1)~(2-7)中任一者記載之化合物或是其鹽。

(2-9)

X係氧原子之上述一般式(II)記載之化合物或是其鹽或是上述(2-1)~(2-7)中任一者記載之化合物或是其鹽。

(2-10)

Y係硫原子之上述一般式(II)記載之化合物或是其鹽或是上述(2-1)~(2-9)中任一者記載之化合物或是其鹽。

(2-12)

特別佳之有效成份係例如2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羥基噻唑〔5,4-d〕嘧啶、2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羥基噻唑〔5,4-d〕嘧啶鉀鹽及2-〔3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基〕-4-羥基噻唑〔5,4-d〕嘧啶鉀鹽。

本發明之抗癌劑之抗性克服劑作為對象之抗癌劑例如irinotecan(商品名Campto；抗癌妥)、irinotecan(商品名Campto；抗癌妥)之活性代謝物之SN-38、雙羥蒽醌注射液(mitoxantrone)、topotecan(商品名Hycamtin；癌康定)、Methotrexate(滅殺除癌錠)、Doxorubicin(杜薩魯比辛)、daunorubicin(道諾魯比辛)、etoposides、gefitinib、依麥替尼布(IMATINIB)等。

本發明之抗癌劑之抗性克服劑作為對象之癌症的種類係BCRP過量表現但是並不特別限制，例如獲得抗性之血癌(造血器官腫瘤)、肝癌、大腸癌、肺癌、乳癌、卵巢癌、子宮頸癌、骨肉瘤、腦腫瘤、胰臟癌、前列腺癌等。

以下係關於本發明之藥理效果的描述。

後述實施例1係確認對藉由BCRP之甲胺蝶呤(methotrexate)輸送之作用的試驗。

由表1可清楚得知，可確認化合物1(2-〔3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基〕-4-羥基噻唑〔5,4-d〕嘧啶鉀鹽、化合物2(2-〔3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基〕噻唑〔5,4-d〕嘧啶、化合物3(2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羥基噻唑〔5,4-d〕嘧啶鉀鹽)、化合物4(2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)噻唑〔5,4-d〕嘧啶)、TMX-67及FYX-051中皆可藉由BCRP強力地抑制之甲胺蝶呤之(methotrexate)輸送。

又，後述實施例2係確認藉由BCRP過量表現細胞(Flp-In-293/BCRP)對於抗癌劑之抗性之影響的試驗。

化合物1及化合物2皆可對Flp-In-293/ABCG2細胞之SN-38解除濃度依賴之抗性、於5μmol/L中化合物1係解除約96%、化合物2係解除約90%之抗性。又，兩化合物係於已檢討之10μmol/L為止之範圍中，不會影響Flp-In-293/ABCG2細胞之生存率。即，確認化合物1及化合物2不顯示細胞毒性，對於BCRP過量表現細胞中抗癌劑之抗性顯示克服作用。又，與實施例2相同的試驗中，化合物5(2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羥基噻唑〔5,4-d〕嘧啶、TMX-67及FYX-051係於10μmol/L下不顯示細胞毒性，於5μmol/L下、化合物5係解除96%、TMX-67係解除82%、FYX-051係解除39%抗性。

另一方面，具有公知之黃嘌呤氧化酵素抑制劑(XOD)抑制作用之藥物中，別嘌呤醇(Allopurinol)、異黃嘌呤(oxipurinol)係藉由BCRP無抑制甲氨蝶呤(methotrexate)之輸送的作用，且無法顯示對於SN-38之抗性之克服作用。又，Y-700(1-〔3-氰基-4-(2,2-二甲基丙氧基)苯基〕-1H-吡唑-4-羧酸)亦對於SN-38無法顯示抗性之克服作用。(比較例1,2)

因此，具有黃嘌呤氧化酵素抑制劑(XOD)抑制作用之藥物，特別是上述一般式(I)或是(II)記載之化合物、TMX-67、FYX-051係藥劑之抗性克服劑，特別是有益於作為抗癌劑之抗性克服劑的有效成份。

本發明之藥劑之抗性克服藥及抗癌劑之抗性克服劑係對於人類而言，可藉由一般的經口投予或是非經口投予之該等適當的投予方法投予。

欲製劑化係使用於製劑之技術領域中一般方法，可製造錠劑、顆粒劑、散劑、膠囊劑、懸濁劑、注射劑、塞劑等之劑型。

此等之調製係可使用一般之賦形劑、崩散劑、黏結劑、滑澤劑、色素、稀釋劑等。於此，賦形劑係乳糖、D-甘露醇、結晶纖維、葡萄糖等，崩散劑係澱粉、羧甲基纖維-鈣(CMC-Ca)等、滑澤劑係硬脂酸鎂、滑石等，黏結劑係羥丙基纖維素(HPC)、吉利丁(Gelatin)、聚乙烯必喀烷酮(Poly Vinyl Pyrrolidone)(PVP)等。

投予量係於一般成人中，使用注射劑之有效成份的本發明化合物1天約為0.1mg~100mg，使用經口投予，1天為1mg~2000mg，但是可依據年齡、症狀等增減。

抗癌劑之抗性克服藥與公知之抗癌劑所組成之藥劑(配合劑)係亦可藉由一般之配合劑之製造方法得到，但是將各自被製造之藥劑亦可同時或是間隔一段時間對於患者投予。

具有血液腫瘤及全身性之轉移脂固形腫瘤等中，使用抗癌劑投予腫瘤激烈地壞死與腫瘤細胞內之成份大量地被放出於血中，產生高尿酸血症、高K血症、低Ca血症等，引起腎衰竭、心臟停止(腫瘤崩壞症候群)。

本發明之有效成份係加入抗癌劑之抗性克服，具有黃嘌呤氧化酵素抑制作用，故即使對於伴隨腫瘤崩壞之高尿酸血症之治療的方面亦為有益。

以下，舉出實施例更進一步詳細說明本發明，但是本發明並不特別限制於此等者。

參考例1

(1)4-氯-N-(4-氯-5-嘧啶基)-3-氰基苯甲醯胺(cyanobenzamide)

將4-氯-3-氰基安息香酸(7.01g,38.6mmol)懸濁於苯(70mL)中，加入亞硫醯氯(3.6mL,49.6mol)，加熱迴流4小時。將該反應液減壓下濃縮，於製得之醯氯化合物中，加入5-氰基-4-氯代嘧啶(5.00g,38.6mol)、二氯甲烷(70mol)及吡啶(3.6mL,44.5mmol)，於室溫攪拌7小時。於反應液中加入氯仿(50mL)及水(50mL)，濾取結晶。將製得之結晶使用氯仿(20mL)及水(20mL)洗淨後，風乾，製得作為7.35(產率65%)之標題化合物的白色結晶。又，由母液及洗淨液之混合物，製得作為第2次結晶之0.62g(產率8%)的標題化合物之淡茶色結晶。(合計產率73%)

mp：189-190℃

¹H-NMR(CDCl₃,400MHz)：δ=7.74(1H,d,J=8Hz),8.07(1H,dd,J=2Hz,8Hz),8.13(1H,s),8.23(1H,d,J=2Hz),8.83(1H,s),9.79(1H,s).

(2)2-(4-氯-3-氰苯基)噻唑〔5,4-d〕嘧啶

使用上述之方法製得之4-氯-N-(4-氯-5-嘧啶基)-3-氰基苯甲醯胺(7.98g,27.2mmol)、lawson試藥(8.25g,20.4mmol)及甲苯(150mL)之懸濁液加熱迴流8小時後，冷卻至室溫，濾取已析出之結晶。使用氯仿(75×2)洗淨後，風乾，製得作為7.25g(產率98%)之標題化合物的淡黃色結晶。

mp：278-280℃(分解)

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δ=7.99(1H,d,J=9Hz),8.47(1H,dd,J=2Hz,9Hz),8.70(1H,d,J=2Hz),9.20(1H,s),9.54(1H,s).

(3)2-〔3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基〕噻唑〔5,4-d〕嘧啶

於55%氫化鈉(150mg,3.44mmol)與乾燥DMSO(7mL)之懸濁液中，加入4-氟苯酚(383mg,3.42mmol)，於50℃加熱攪拌30分鐘。於該反應液中，加入上述2-(4-氯-3-氰苯基)噻唑〔5,4-d〕嘧啶(776mg,2.85mmol)，於50℃攪拌4小時。冷卻至室溫後，於反應液中加入水(35mL)，濾取已析出之結晶，使用水(20mL)洗淨。風乾後，將製得之結晶使用矽膠管柱層析(silica gel column chromatography)(氯仿)純化，使用酯(15mL)洗淨後，乾燥，製得701mg(產率71%)之標題化合物的淡黃色結晶。

mp：175-177℃

¹H-NMR(CDCl₃,400MHz)：δ=6.94(1H,d,J=9Hz),7.1-7.2(4H,m),8.18(1H,dd,J=2Hz,9Hz),8.44(1H,d,J=2Hz),9.13(1H,s),9.35(1H,s).

IR(KBr)cm^-1：2233,1606,1564,1419,1300,1119,1011,916,893,847,829,777,760,758,723,702,700,650,648,597,526,496,490

FAB-MS(m/e)：349(M+1)

參考例2

2-〔3-氰基-4-苯氧基苯基〕噻唑〔5,4-d〕嘧啶

於55%氫化鈉(23mg,0.53mmol)與乾燥DMSO(1mL)之懸濁液中，加入4-氟苯酚(45mg,0.48mmol)，於室溫加熱攪拌30分鐘。於該反應液中，加入上述2-(4-氯-3-氰苯基)噻唑〔5,4-d〕嘧啶(120mg,0.44mmol)，於60℃攪拌4小時。冷卻至室溫後，於反應液中加入水(5mL)，濾取已析出之結晶，使用水(5mL)、乙醇(1mL)及醚(2mL)依序洗淨後，減壓於室溫下乾燥。將製得作為100mg(產率69%)之標題化合物的淡茶色結晶。

mp：154-156℃

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz)：δ=7.08(1H,d,J=9Hz),7.2-7.4(3H,m),7.5-7.6(2H,m),8.42(1H,dd,J=2Hz,9Hz),8.69(1H,d,J=2Hz),9.18(1H,s),9.52(1H,s).

IR(KBr)cm^-1：3037,2227,1605,1587,1560,1525,1504,1470,1369,1365,1257,1238,1190,1171.

FAB-MS(m/e)：331(M+1)

實施例1

對藉由BCRP之甲胺蝶呤(methotrexate)輸送之作用

(試驗方法)

實驗中係由使BCR表現P之Sf9昆蟲細胞，調製形質膜，使用該膜囊泡(Ishikawa et al：Methods of Enzymol.,400：485-500(2005))。

甲胺蝶呤(methotrexate)輸送之測定係藉由使用96孔盤，藉由以下方法進行。

反應溶液之調製與組成：

50μL 250mmol/L蔗糖．10mmol/L Tris/Hepes(pH7.4)溶液

30μL 3.33mmol/L ATP．33.3mmol/L磷酸肌酸．33.3mmol/L MgCl₂溶液

(或33.3mmol/L磷酸肌酸．33.3mmol/L MgCl₂溶液)

5μL 2mg/mL肌酸激酶(creatine kinase)

2μL 10mmol/L〔³H〕滅殺除癌錠(Methotrexate)(最終濃度200μmol/L)

3μL 試驗化合物

10μL ABCG2表現Sf9細胞膜樣本(合計50μg蛋白質)

計100μL

將反應溶液之細胞培養(incubation)於37℃進行20分鐘。之後，將冰冷之250mmol/L蔗糖．2mmol/L EDTA．10mmol/L Tris/Hepes(pH7.4)溶液1mL加速地加入於反應溶液中，使反應停止。將其混合液分別注入270μL millipore公司製作MultiScreen^TM之各孔再吸引。因此，使用冰冷之250mmol/L蔗糖．10mmol/L Tris/Hepes(pH7.4)溶液200μL將各孔洗淨4次。測定於各孔之過濾器中被捕捉之放射活性。基於其放射活性值，算出細胞膜囊泡攝入之滅殺除癌錠(Methotrexate)之輸送量。

又，使用以上之方法，求得抑制試驗化合物之IC₅₀值〔滅殺除癌錠(Methotrexate)之輸送50%之濃度、抑菌濃度(inhibitory concentration)(μmol/L)〕。

(結果)

如表1所示，確認化合物1~4、TMX-67及FYX-051係皆可藉由BCRP強力地抑制滅殺除癌錠(Methotrexate)之輸送。

確認對藉由BCRP之滅殺除癌錠(Methotrexate)之輸送的作用。

化合物1：2-〔3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基〕-4-羥基噻唑〔5,4-d〕嘧啶鉀鹽

化合物2：2-〔3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基〕噻唑〔5,4-d〕嘧啶

化合物3：2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羥基噻唑〔5,4-d〕嘧啶鉀鹽

化合物4：2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)噻唑〔5,4-d〕嘧啶

比較例1

對藉由BCRP之滅殺除癌錠(Methotrexate)之輸送的作用

(試驗方法)

使用與實施例1相同之方法，試驗對藉由Allopurinol(別嘌呤醇)、異黃嘌呤(oxipurinol)、BCRP之滅殺除癌錠(Methotrexate)之輸送的作用。

(結果)

Allopurinol(別嘌呤醇)、異黃嘌呤(oxipurinol)係即使於100μmol/L無法顯示抑制作用。

實施例2

對BCRP過量表現細胞(Flp-In-293/BCRP)中抗癌劑抗性之影響

(試驗方法)

實驗中，使用Flp-In-293/ABCG2細胞及Flp-In-293/Mock細胞(Wakabayashi et al.：J.Exp.Ther.Oncol.,5：205-222(2006))。

細胞係使用含有10% FCs、100U/mL青黴素、100μg/mL鏈黴素、250ng/mL節絲菌素B、100μg/mL潮黴素B、2mmol/L左旋麩醯胺酸之DMEM，於5% CO₂中培養。

Flp-In-293細胞之藥劑抗性之數據圖表係藉由MTTassay經由測定生存細胞進行。即，將細胞於2×10³ cells/well之濃度下，播種於96孔培養盤中，培養24小時。之後，添加SN-38與化合物1(2-〔3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基〕-4-羥基噻唑〔5,4-d〕嘧啶鉀鹽或是化合物2(2-〔3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基〕噻唑〔5,4-d〕嘧啶，培養72小時後，再加入500μg/mL MTT，再培養4小時。因此，加入100μL之10% SDS後，隔夜培養，以570nm與630nm測定已生成之MTT-formazan(使用MTT之代謝物藉由生存細胞所生成)。

(結果)

化合物1及化合物2係皆可對Flp-In-293/ABCG2細胞之SN-38，解除濃度依存之抗性，5μmol/L中化合物1係解除約96%，化合物2係解除約90%之抗性。又，兩化合物係於已檢討之10μmol/L為止之範圍中，無法對Flp-In-293/ABCG2細胞之生存率產生影響。

因此，確認化合物1及化合物2無法表示細胞毒性，對於BCRP過量表現細胞中抗癌劑之抗性，表示克服作用。

(實施例3及比較2)

對BCRP過量表現細胞(Flp-In-293/BCRP)中抗癌劑抗性之影響

(試驗方法)

使用與實施例2相同方法，試驗對於2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羥基噻唑〔5,4-d〕嘧啶(化合物5)、TMX-67、FYX-051、Allopurinol(別嘌呤醇)、異黃嘌呤(oxipurinol)、Y-700、BCRP過剩表現細胞(Flp-In-293/BCRP)中抗癌劑之抗性之影響。

(結果)

(i)對於SN-38之抗性克服度

於5μmol/L、化合物5係解除96%、TMX-67解除82%、FYX-051解除39%之抗性，但是Allopurinol(別嘌呤醇)、異黃嘌呤(oxipurinol)中無法顯示克服作用。又，Y-700係無法顯示細胞毒性之濃度為無法顯示克服作用。

(ii)細胞毒性作用

化合物5、TMX-67、FYX-051、Allopurinol(別嘌呤醇)、異黃嘌呤(oxipurinol)，係於10μmol/L之濃度範圍中無法顯示毒性作用。Y-700係藉由5μmol/L顯示細胞毒性。

Claims

一種藥劑之抗性克服劑，其特徵為含有非布索坦(febuxostat)或是4-〔5-吡啶-4-基-1H-〔1,2,4〕三唑-3-基〕吡啶-2-甲腈作為有效成份。
一種抗癌劑之抗性克服劑，其特徵為含有非布索坦(febuxostat)或是4-〔5-吡啶-4-基-1H-〔1,2,4〕三唑-3-基〕吡啶-2-甲腈作為有效成份。
一種對癌細胞之治療用藥劑，其特徵為顯示2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)噻唑〔5,4-d〕嘧啶、2-〔3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基〕噻唑〔5,4-d〕嘧啶、2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羥基噻唑〔5,4-d〕嘧啶、2-(3-氰基-4-苯氧基苯基)-4-羥基噻唑〔5,4-d〕嘧啶鉀鹽及2-〔3-氰基-4-(4-氟苯氧基)苯基〕-4-羥基噻唑〔5,4-d〕嘧啶鉀鹽、非布索坦(febuxostat)或是4-〔5-吡啶-4-基-1H-〔1,2,4〕三唑-3-基〕吡啶-2-甲腈所選出之化合物與抗癌劑所組成之多種藥物抗性。