MX2013014244A

MX2013014244A - PROTEINAS DE ENLACE A ANTIGENOS HUMANAS QUE ENLAZAN AUN COMPLEJO QUE COMPRENDE ß-KLOTHO Y UN RECEPTOR FGF.

Info

Publication number: MX2013014244A
Application number: MX2013014244A
Authority: MX
Inventors: Yang Li; Jennitte Stevens; Terence King Chadwick; Foltz Ian; Kannan Gunasekaran; Yie Junming; Sylvia Hu Shaw-Fen
Original assignee: Amgen Inc
Priority date: 2011-06-06
Filing date: 2012-06-05
Publication date: 2014-02-27
Also published as: JP2014518640A; US11248052B2; US9574002B2; US20190248906A1; EP3447074A2; US20120328616A1; CA2837473A1; WO2012170438A3; US20170183412A1; EP3447074A3; EP2718323B1; WO2012170438A2; EP2718323A2; UY34118A; AR086693A1; TW201315741A

Abstract

La presente invención proporciona composiciones y métodos relacionados con o derivados de proteínas de enlace a antígenos capaces de inducir ß-Klotho y/o la señalización mediada por FGF21. En modalidades, las proteínas de enlace a antígenos enlazan específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFR1c, (ii) EGFR2c, y (iii) FGFR3c. En algunas modalidades las proteínas de enlace a antígenos inducen la señalización del tipo FGF21 En algunas modalidades, una proteína de enlace a antígenos es un anticuerpo completamente humano, humanizado, o quimérico, fragmentos de enlace y derivados de tales anticuerpos, y polipéptidos que enlazan específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFR1c, (ii) FGFR2c, y (iii)FGFR3c. Otras modalidades proporcionan ácidos nucleicos que codifican tales proteínas de enlace a antígenos, y fragmentos y derivados de las mismas, y polipéptidos, células que comprenden tales polinucleótidos, métodos de elaboración de tales proteínas de enlace a antígenos, y fragmentos y derivados de las mismas, y polipéptidos, y métodos de uso de tales proteínas de enlace a antígenos, fragmentos y derivados de las mismas, y polipéptidos, que incluyen métodos de tratamiento o diagnóstico de sujetos que padecen de diabetes tipo 2, obesidad, NASH, síndrome metabólico y trastornos o afecciones relacionadas.

Description

PROTEÍNAS DE ENLACE A ANTÍGENOS HUMANAS QUE ENLAZAN A UN COMPLEJO QUE COMPRENDE ß-KLOTHO Y UN RECEPTOR FGF CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente descripción se refiere a moléculas de. ácido nucleico que codifican proteínas, de enlace a antígenos. que enlazan a un complejo 'que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii). FGFR2c, y (iii) FGFR3-C incluyendo proteínas de enlace a .antigenos que inducen la señalización del tipo FGF21, así como composiciones: farmacéuticas que comprenden proteínas de enlace a antigenos que enlazan a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (!)¦ FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, y FGFR4,. incluyendo proteínas de enlace a antígenos que inducen la. señalización del tipo FGF21, y métodos para el tratamiento de trastornos metabólicos al usar, tales ácidos nucleicos, polipéptidos , o composiciones farmacéuticas. También se proporcionan métodos •de diagnóstico. al usar . las proteínas de enlace a antígenos. .

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El Factor 21 de Crecimiento de . Fibroblastos (FGF21) es un polipéptido secretado que pertenece a una .subfamilia de Factores de Crecimiento de Fibroblastos : (FGFs) que incluye FGF19, FGF21, y . FGF23 (Itoh et al.,. (2004 ) '. Trend¦ Genet . 20:563-69). FGF21 es. un FGF atípico en que es independiente de la heparina y funciona como una hormona en¦ la regulación de. la glucosa, lípidos, y metabolismo de energía.

Es. altamente expresado en el hígado ; y el páncreas y es el único miembro . de la familia. FGF . que. se expresa principalmente en el hígado. Los , ratones transgénicos que sobreexpresan FGF21 muestran fenotipos metabólicoS' de baja tasa de crecimiento, bajos niveles de glucosa en . plasma , y triglicéridos, y una ausencia de diabetes tipo 2 asociada con •la edad, hiperplasia de isletas, y obesidad. .'·¦ La administración farmacológica de proteína recombinante FGF21 en modelos de. roedores y de primates resulta en niveles normalizados de glucosa en plasma, niveles ·. reducidos de colesterol y triglicéridos y tolerancia mejorada a la glucosa y sensibilidad a la insulina. Además,, el FGF21 reduce el peso corporal y la grasa corporal por incremento eh el" gasto de energía, actividad física, y tasa metabólica; La investigación experimental proporciona apoyo para . la administración farmacológica de FGF21, para el tratamiento de diabetes tipo 2, obesidad, dislipidemia, y otras afecciones o trastornos metabólicos en humanos.

FGF21 es una hormona endocrina derivada del hígado que estimula la absorción de la glucosa en los adipocitos y la homeostasis de lípidos a través de la activación de su receptor. De manera interesante, además del receptor canónico FGF, el receptor FGF21 también comprende la ß-Klotho asociada a membranas como un cofactor esencial. La activación del receptor FGF21. lleva a efectos múltiples . en una variedad de parámetros metabólicos.

En los mamíferos, ·' los FGFs median su acción por medio de un conjunto de cuatro receptores FGF, FGFR1-4, que a su vez se expresan en múltiples variantes empalmadas, por ejemplo, FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c y FGFR4. Cada receptor FGF contiene un dominio . intracelular de tirosina cinasa que se activa con l enlace a ligandos, lo que conduce a trayectorias de señalización cadena abajo que involucran MAPKs (Erkl/2) , RAF1, AKT1 y STATs . (Kharitonenkov et al., (2008) BioDrugs 22_: 37-44). Diversos informes sugirieron que las variantes de empalme del reportero "c" de. FGFR1-3 muestran' afinidad específica a ß-Klotho y podrían actuar como receptor endógeno para FGF21 (Kurosu, et al. , (2007) J. Biol. Chem. 282:26687-26695); Ogawa et al., (2007) Proc. Nati. Acad. - Sci. USA 104 : 7432-7437.) ; Kharitonenkov et al., (2008) J.. Cell Physiol. 215 : Í-7 ) . En el hígado, que expresa abundantemente tanto ß-Klotho y FGFR4, FGF21 no induce la fosforilación de MAPK si bien es cierto el fuerte enlace de FGF21 al complejo -Klotho-FGFR . .En- las células 3T3-L1 y. el tejido adiposo blanco, FGFR1 es por , mucho el receptor más abundante, y es por lo tanto más probable que los receptores funcionales principales de FGF21 en este tejido sean los. complejos de ß-Klotho/FGFRlc. .

La presente descripción proporciona una proteina de enlace a antigenos humana (o humanizada), . tal. como un anticuerpo monoclonal, que induce la señalización, del tipo FGF21, por ejemplo, un anticuerpo agonista '.que ' imita la función de FGF21. Tal anticuerpo es una molécula con actividad y selectividad del . tipo FGF21 pero con características . terapéuticamente deseables añadidas típicas de un anticuerpo, tal Como estabilidad de proteínas, carencia de inmunogenicidád, facilidad de producción .y vida, media prolongada in vivo.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN La descripción actual proporciona proteínas de enlace . a antígenos que ertlázan un complejo, qué comprende ß-Klotho y al menos uno de - (i) FGFRlc, ? (ii) FGFR2c , y (iii) FGFR3c, incluyendo proteínas de enlace a antígenos que inducen '-.la señalización' mediada por FGF21, así como.: composiciones farmacéuticas que comprenden proteínas de enlace a antígenos que se enlazan a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno . de (i). FGFRlc, (ii) FGFR2c y (iii) FGFR3.C, incluyendo proteínas de enlace a antígenos que inducen la señalización del tipo FGF21. En otro aspecto, se proporcionan también ' vectores de expresión y . células hospederas transformadas o transfectadas con vectores de 'expresión que comprenden las moléculas de ácidos nucleicos aisladas., antes mencionadas, que codifican las proteínas de enlace a antígenos aquí descritas. Las cadenas- ligera y pesada representativas se proporcionan en las Tablas. 1A y IB; las secuencias representativas, de cadena ligera y cadena pesada de región variable se proporcionan en las Tablas 2ft y 2B; las secuencias de codificación para la región variable de .cadenas pesada y ligera se proporcionan en las Tablas.' 2C y 2D; las Tablas 3A y 3B proporcionan regiones CDR de las cadenas ligera y pesada variables descritas,, y las Tablas 3C y 3D proporcionan secuencias de codificación para las CDRs descritas.

En otro aspecto, se proporcionan . también métodos^ . de preparación . de proteínas de enlace a antígenos que enlazan específicamente o selectivamente a un complejo , que ; comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c y (iii) FGFR3c y comprende la etapa de preparar la prot ína de enlace a antígenos a partir de una célula hospedera que secrete .la proteína de enlace . a antígenos.

Otras modalidades proporcionan un. método para la prevención o tratamiento de una afección en un sujeto que necesita de tal ¦ tratamiento que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva, de una., composición farmacéutica aquí .proporcionada a. un sujeto, en donde la afección es tratable para, disminuir los niveles¦ de glucosa en la sangre, insulina o lipidos en suero. En modalidades, la afección es diabetes tipo 2 , obesidad, dislipidemia, NASH, enfermedad cardiovascular o síndrome metabólico..

Estos y otros aspectos se describen .en mayor detalle¦ en la presente. Cada uno de los aspectos proporcionados, puede abarcar diversas modalidades aquí proporcionadas.. Por lo tanto se anticipa que cada una de ' las modalidades que involucran un elemento o combinaciones de elementos puede incluirse en cada aspecto descrito, y '· todas esas combinaciones de los aspectos anteriores y modalidades se consideran expresamente. Otras características, objetos, y ventajas dé las proteínas de enlace a antígenos descritas y métodos y composiciones asociados son evidentes en la descripción detallada que sigue. . .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Las Figuras la-lb son una alineación que muestra homología de secuencias entre FGFRlc humano (No Acceso al Genbank P11362; SEQ ID NO: 4) y FGFRlc mürino (No . Acceso al Genbank NP_034336; SEQ ID NO: 1832); se resaltan diversos aspectos, incluyendo el.' péptido de señal, secuencia de transmembrana, región de enlace a heparina, y se proporciona una secuencia de consenso (SEQ ID NO: 1833).

... Las Figuras. 2a-2c es . una alineación que muestra la homología de secuencias entre ß-Klotho humana (No Acceso al Genbank NP_783864; SEQ ID NO: 7) y ß-Klotho murino¦ .(No Acceso al Genbank NP_112457; SEQ ID NO:. 10); diversos aspectos se resaltan, incluyendo la secuencia de transmembrana y dos dominios de glicosil hidrolasa, y se proporciona una secuencia de consenso. (SEQ ID NO: 1834)..

La Figura 3 es . una gráfica que muestra los datos representativos a partir de cribados de actividad del repórter de ' Luciferasa de los anticuerpos descritos en la presente con FGF2.1, y un anticuerpo .de referencia 16H7.1 como controles positivos (inserto) ; estos hibridomas se generaron por inmunización con el receptor enlazado a células de 293T transfectantes que expresan ß-Klotho humano de longitud completa y una forma truncada en N-terminal de FGFRlc humano que . abarca el polipéptido con residuo de aminoácidos #141 a #822 de SEQ ID NO: 4. Los ejes X- e Y- en . la gráfica son el. % de actividad FGF21 a partir de dos ensayos independientes (n=l y n=2) del " mismo conjunto de muestras ; de hibridoma (círculos grises) que muestran la consistencia de los ensayos; se incluyeron también varias muestras de hibridoma como controles negativos (círculos negros); La Figura 4 muestra una representación esquemática de las quimeras construidas' con relación a la presente invención.

La Figura 5 muestra la capacidad. de las proteínas de enlace a antígenos, así como' FGF21 humano, para activar las quimeras en células L6.

Las Figuras 6a-6e muestran la alineación de aminoácidos de cadenas ligera y pesada de los anticuerpos en comparación con la secuencia del gen V de la línea germinal correspondiente.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Los encabezados de sección usados en la", presente son solamente para propósitos de organización y no se. constituyen como limitantes de . la materia objeto descrita. .

A menos que se defina de otra manera en la .presente, los términos científicos y técnicos usados en conjunto con la solicitud actual tendrán los significados que se entienden comúnmente por aquellos expertos en la técnica. Además, a menos que se . requiera de otra manera por el contexto, los términos en singular incluirán pluralidades y los términos en plural incluirán el singular.

Generalmente, las nomenclaturas usadas en conjunto con, y las técnicas de..cultivo de células y tejidos, biología molecular, inmunología, microbiología, genética' y química de proteínas y ácidos nucleicos e h'ibridización descritas en la presente, son aquellas bien conocidas y , comúnmente usadas en la técnica.' Los métodos y técnicas de la presente ' solicitud se efectúan generalmente de acuerdo con. métodos ¦convencionales bien conocidos en . la . técnica y' ;como s.e describen en diversas referencias generales y más específicas qué se citan y discuten a lo largo de la especificación actual a menos que se indique de otra manera. Ver, por ejemplo, Sambrook et al., Molecular Cloning:. A Laboratory Manual, 3rd d. , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2001), Ausubel: et al., Current Protocpls in Molecular Biology, Greene Publish.ing . Associates (1992), - y Harlow y Lañe' Antibodies: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor .Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (.1990), las •cuales están incorporadas en la presente como referencia. Las reacciones enzimáticas y técnicas de purificación . se efectúan de acuerdo con las especificaciones del fabricante, como se consigue comúnmente en la técnica o como se describe en la presente. Tal terminología usada en conjunto con, y los procedimientos y técnicas de laboratorio de química analítica, química orgánica sintética, y química farmacéutica y. medicinal descritas' en la presente son aquellas bien conocidas y comúnmente usadas en la técnica ... Las técnicas estándar pueden ser usadas para síntesis química, análisis químicos, preparación, formulación y administración farmacéutica, y tratamiento de pacientes.

Se entenderá que . la descripción actual no . se limita a la metodología, protocolos y reactivos, etc., en particular descritos en la presente y como tal pueden variar. La terminología usada en la presente, es para el' propósito de describir modalidades en particular solamente, y no sé pretende que limite el 'alcance de la presente descripción.

Excepto en los ejemplos de operación, o donde se indique de otra manera, todos los números que expresan cantidades de ingredientes o condiciones de reacción usados en la presente se deben entender como modificados en todos los casos por el término "alrededor dé. ". El término "alrededor de" . cuando se usa en conjuntó con los porcentajes puede significar ±5%, por ejemplo, 1%, 2%, 3%, o 4%. ' ..

I. DEFINICIONES Como se usa en la presente, los. términos' "un" y "uno" significan "uno o más" a menos que se establezca específicamente de otra manera.

Como se usa en la presente, una "proteína de enlace a antigenos" es una proteína que comprende una porción que enlaza a un antigéno u. objetivo y ópcionalmente, una porción de andamiaje o estructura que permite a la porción de enlace a antigéno adoptar una conformación que promueve el. enlace de la proteína de enlace a antígenos al antigéno. Ejemplos de proteínas de enlace a antígenos incluyen un anticuerpo humano, un anticuerpo humanizado;, un anticuerpo' quimérico; un anticuerpo recombinante; un anticuerpo de cadena sencilla; un diacuerpo; un triacuerpo; un tetracüerpo; un fragmento Fab; un fragmento F(ab')2; un anticuerpo IgD; un anticuerpo IgE; un anticuerpo Ig ; un anticuerpo IgGl; un . anticuerpo IgG2; un anticuerpo IgG3; o un anticuerpo IgG4, y fragmentos de los mismos.. La proteina de enlace a antígenos puede comprender, por ejemplo, un andamiaje de proteína alternativo o andamiaje artificial con CDRs injertadas o derivados de CDR. Tales andamiajes incluyen, pero no se limitan a, andamiajes derivados de anticuerpos que comprenden mutaciones introducidas para, por ejemplo, estabilizar la estructura tridimensional, de la proteína de enlace a antígenos así como andamiajes completamente sintéticos que comprenden, por ejemplo, un polímero biocompatible . Ver, por. ejemplo, Kórndorfer et al., 2003, Proteins: Structure, . Function , and Bioinformatics, 53 (Í-) : 121-129 (2003); Roqüe et al., Biotechnol. Prog. 20 : 639-654 (2004). Además, las imitaciones de anticuerpos de péptidos ("PAMs") pueden ser usadas, asi como andamiajes con base en la imitación de anticuerpos que utilizan componentes de fibronectina como un andamiaje.

Una proteina, de .enlace a antigenos puede tener, . por ejemplo, la estructura de una inmunoglobulina que se presenta naturalmente. Una "inmunoglobulina" es una molécula tetramérica. En una inmunoglobulina que . se presenta naturalmente, cada tetrámero está compuesto de dos pares idénticos de cadenas de polipéptidos, cada par que tiene una cadena "ligera" (alrededor de 25 kDa) y una cadena "pesada" (alrededor dé 50-70 kDa) . La porción en el terminal amino de cada cadena incluye una región variable de alrededor de 100 a. 110 . o más aminoácidos principalmente responsables del reconocimiento de; antigenos. La. porción en. el' terminal carboxi de cada . .cadena define una región . · Constante principalmente responsable de la función del. efector. Las cadenas ligeras humanas se clasifican como cadenas ligeras kappa y lambda. Las cadenas pesadas se clasifican como mu, delta, gamma, alpha, o epsilon, y definen el isotipo del anticuerpo como IgM, IgD IgG, IgA, y Ig.E, respectivamente. Dentro de las cadenas ligera y pesada, las regiones variables y constantes se unen por una región "J" de alrededor de 12- o más. aminoácidos, con la cadena pesada que también incluye una región "D" de alrededor de 10 más aminoácidos. Ver generalmente, Fundamental Immunology Ch. .7 (Paul, W. , - ed., 2nd ed. Raven Press, ?.?. (1989)) (incorporada por referencia -en su totalidad para' todos los propósitos). Las. regiones variables de cada par de cadena ligera/cadena forman el sitio de enlace a anticuerpos tal que la inmunoglobulina intacta tiene dos sitios de enlace.

Las cadenas de inmunoglobulina que se presentan naturalmente muestran la misma estructura general de regiones de. andamiaje (FR) relativamente conservadas unidas por tres regiones . hipervariables, también llamadas regiones ¦determinantes de . la complementariedad . o CDRs. ' ' Desde la terminación N a. la terminación C, tanto las cadenas ligeras como pesadas comprenden los dominios FR1, CDR1, FR2, CDR2 , FR3, CDR3 y FR4. La asignación de. los aminoácidos a cada dominio se puede hacer de acuerdo con las definiciones de Kabat et al. (1991) "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 5th Ed. ,. US Dept . of Health and Human Services, PHS, NIH, NIH Publicación no. 91-3242. Aunque se presenta aquí usando el sistema de nomenclatura de Kabat, como se desee, las CDRs también pueden redefinirse de acuerdo con un esquema de nomenclatura alternativo, tal como aquel de Chothia (ver Chothia' & Lesk, 1987, J. -Mol: Biol. 196:901-917; Chothia et al., 1989, Nature 342:87.8-883 o Honegger . · y Pluckthun, 2001, J. Mol. Biol. 309:657-670).

En el contexto de la descripción actual una proteina de enlace a antigenos se dice que se "enlaza, específicamente" o "enlaza selectivamente" a su antígeno objetivo, cuando la constante de disociación (KD) es 10~8 M. El' antígeno que enlaza específicamente al anticuerpo con "alta . afinidad" cuando la KD es = 5x l0" M, y con "muy alta afinidad" cuando la KD es =5x ¦ l.CT10 M. En una modalidad, los anticuerpos enlazarán, a un complejo que comprende ß-Klotho y un FGFR, incluyendo un complejo que comprende tanto FGFRlc humano y ß-Klotho humana, con una KD de entre alrededor de 10~7 M y 1012 M, y en todavía . otra modalidad los anticuerpos se enlazarán con una KD =5x 10"9.

Un "anticuerpo" se refiere a uña inmunoglobulina intacta o a una porción de enlace a antígenos de la misma que compite con el anticuerpo intacto para enlace específico, a menos que sé especifique de¦ otra manera. Las porciones de enlace a antígenos pueden., ser' producidas por técnicas- de. ADN recombinante o por escisión enzimática o' química de anticuerpos intactos. Las porciones de enlace a antígenos incluyen, ínter alia, Fab, Fab' , F(ab'.)2, Fv, anticuerpos de dominio (dAbs),. fragmentos . que ' incluyen regiones determinantes de la complementariedad. (CDRs) , anticuerpos de cadena., sencilla (scFv) , anticuerpos quiméricos, diacuerpos, triacuerpos, tetracuerpos, y . polipéptidos que¦··. contienen al menos una porción de una inmunoglobulina que es suficiente para conferir enlacé especifico de antigenos al polipéptido.

Un fragmento Fab' es un fragmento monovalente que tiene los dominios VL, VH, CL y CH1; un fragmento F(ab')2 es un fragmento divalente que tiene dos fragmentos Fab ligados por un puente bisulfuro á la región de articulación'; un fragmento Fd tiene los dominios VH y CH1; un fragmento: Fv 'tiene los dominios VL y VH de un brazo sencillo de un anticuerpo; y .un fragmento dAb tiene ún dominio VH, un dominio VL, o un fragmento de enlacé a antigenos de un dominio VH. o VL (patentes de E.U.A. Nos. 6,846,634, 6,696,245, Pub. de solicitud de E.U.A. Nos. 05/0202512, 04/0202995, 04/0038291, 04/0009507, 03/0039958, Ward et al., Nature 341:544-546 (1989) ) .

Un anticuerpo de cadena sencilla (scFv) es un anticuerpo en el cual una región VL y una VH se unen por, medio de una ligadura (por ejemplo, una secuencia sintética de residuos de aminoácidos) para, formar una cadena continua de proteínas .en donde la ligadura es ío suficientemente larga para permitir que la cadena de proteína se pliegue sobre sí misma y, forme una sitio de enlace, a antígenos monovalente (ver, por ejemplo, Bird et al. , Science 242 : 23-26 ( 1988) y . Huston et al., 1988, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 85:5879-83 (.1988)).

Los diacuerpos son anticuerpos divalentes que comprenden dos cadenas de polipéptidos , en donde cada una de la cadena de polipéptidos comprende dominios VH y VL unidos.' por una ligadura que es demasiado corta para permitir el apareamiento entre dos dominios en. la misma cadena, ' permitiendo asi que cada dominio se. aparee con un dominio complementario en otra cadena de polipéptidos (Ver, por ejemplo, Holliger e.t al.., 1993, Proc. Nati., Acad. Sci. USA 90:6444-48 (1993), y Poljak et al., Structure 2:1121-23 (1994)). Si las dos cadenas de polipéptidos de un diacuerpo son idénticas, ., entonces un diacuerpo que resulta de su apareamiento tendrá dos sitios de enlace a antigenos idénticos. Cadenas de polipéptidos que tienen diferentes secuencias pueden ser usadas · para hacer un diacuerpo con dos diferentes sitios de enlace a antigenos. Similarmente, tricuerpos . o tetracuerpos son anticuerpos que comprenden tres y' cuatro cadenas . de polipéptidos, respectivamente, y que forman tres y cuatro sitios de enlace a ántigenos, respectivamente, los cuales. pueden' ser iguales o diferentes . ' Regiones determinantes de la complementariedad (CDRs) y regiones de andamiaje (FR) de un anticuerpo dado pueden ser identificadas al usar el sistema descrito. por Kabat et" al. en Sequences of Pro.teins¦ of Immunological Interest, 5th Ed., US Dept. of Health and Human Services, . PHS, NIH, ÑIH Publicación no. 91-3242, 1.991..· Como, sea deseado, las CDRs también pueden ser redefinidas de' acuerdo con una esquema alternativo de nomenclatura, tal ¦ como aquel de Chothia (Ver Chothia & Lesk, 1987, J. Mol. Biol.. 196:901-917; Chothia et al., 1989, Na ture 342:878-883 o Honegger &. Pluckthun, 2001,·. J. Mol. Biol. .309 : .657-67.0. Una o más CDRs pueden estar incorporadas en una molécula ya. sea de forma covalente o no covalente para hacer una proteina de enlace a antigenos. Una. proteina de enlace : a antígenos . puede incorporar la(s) CDR (s) como parte de una cadena' de polipéptidos más grandes, puede- ligar de forma covalente la CDR(s) con otra cadena de polipéptidos, . o puede incorporar la CDR(s) de forma no covalente. Las CDRs permiten que la proteina de enlace a antigenos se enlace específicamente a un antígeno de interés en particular.

Una proteína de enlace a antígenos puede,, pero .no necesita, tener uno o más sitios de enlace. Si ; hay más de un sitio de enlace, los sitios de enlacé pueden ser idénticos uno con el otro o pueden ser diferentes. Por ejemplo, una inmunoglobulina humana que se presenta naturalmente típicamente tiene dos sitios de enlace idénticos, mientras que un anticuerpo . "biespecífico" ó "bifuncional" tiene dos diferentes sitios de enlace. Las proteínas de enlace . a antígenos de esta forma biespecífica. (por ejemplo,, aquellas que . comprenden diversas CDRs de cadena ligera o pesada aquí proporcionadas), comprenden aspectos de la descripción actual.

El término "anticuerpo humarlo"¦ incluye todos los anticuerpos que tengan una o más regiones variable y constante derivadas de. secuencias de inmunoglobulina humana. En una modalidad, todos los dominios variable y constante se derivan de secuencias de inmunoglobulina-. humana (ün anticuerpo humano completo) . Estos anticuerpos pueden ser preparados por diversas formas,, ejemplos de las cuales se describen a continuación, incluyendo a través, de la inmunización con un antigeno de interés de un ratón que está genéticamente modificado para expresar anticuerpos derivados de genes que codifican cadena pesada y/o. ligera, tales como un ratón derivado ' de un sistema XENOMOUSE®, ULTIMAB™, HUMAB-MOUSE®, VELOCIMOUSE®, ·VELOCIM UNE®, ' KYMOUSE, o ALIVAMAB, o derivados de ratón transgénico de cadena pesada humana, repertorio de anticuerpo humano de rata transgénica, repertorio de . anticuerpo humano de conejo transgénico ' o repertorio de anticuerpo humano de vaca o tecnología HUTARG™. También pueden emplearse los métodos basados en. fagos.

Un anticuerpo humanizado tiene una secuencia que difiere de la secuencia de un anticuerpo derivado de una especie no humana por una o más sustituciones, eliminaciones, y/o adiciones de aminoácidos, tal que el anticuerpo humanizado es menos propenso a inducir una respuesta inmunitaria, y/o induce una respuesta inmunitaria menos severa, en comparación con el anticuerpo' de especies no humanas, cuando se administra a un sujeto humano. En una modalidad, determinados aminoácidos en los dominios de estructura y constantes de las .cadenas pesadas y/o ligeras del anticuerpo de especies no humanas están . mutados " para; producir el anticuerpo humanizado. En otra modalidad, el o los dominios constantes, de un. anticuerpo humano se .fusionan¦ al o los dominios variables dé una especie no humana. En otra modalidad, uno o más residuos de aminoácidos en una o más secuencias CDR de un anticuerpo no humano son cambiados para reducir la inmunogeñicidad probable del anticuerpo no humano cuando se administra, a un sujeto humano, en donde los residuos de aminoácidos cambiados son ya sea no críticos para el enlace inmunoespecífico del anticuerpo a su antígeno, . o los cambios a . la secuencia de aminoácidos que se ..hacen son cambios conservadores, tal que el enlace del anticuerpo humanizado al antígeno no es significativamente peor que el enlace del anticuerpo ' no humano al antígeno . Ejemplos de cómo hacer anticuerpos humanizados se. pueden encontrar en las patentes de E.U.A.. Nos. 6, 054,297, 5,886,152 y 5, 877,293. · El. término "anticuerpo quimérico" se refiere a. un anticuerpo que contiene una o más regiones de un anticuerpo y una o más regiones de uno o más de otros anticuerpos . En una modalidad, una o. más de las CDRs se derivan de'- -un anticuerpo humano, que enlaza a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii)' FGFR3c, . En otra modalidad, todas las CDRs se derivan de - un anticuerpo humano que enlaza aun complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno¦ de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c. En otra modalidad, las CDRs de más de ün anticuerpo' humano que enlaza un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii); FGFR2c, y (iii) FGFR3c, se mezclan y coinciden en un anticuerpo quimérico. Por' ejemplo, un anticuerpo quimérico puede comprender una CDR1 de la cadena ligera de un primer, anticuerpo humano que enlaza a un complejo que comprende ß-Klotho y uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, , una CDR2 y una. CDR3 - de la cadena ligera de un segundo anticuerpo humano, que enlaza a un complejo que comprende ß-Klotho y uno de (i)- FGFRlc, (ii) FGFR2C, y (iii.) FGFR3c , y la CDRs de la cadena pesada de un tercer anticuerpo .que enlaza a un complejo que comprende ß-Klotho y uno de ; (i) FGFRlc, (ii) _ FGFR2c, y (iii) FGFR3C. Además, .las regiones de andamiaje pueden ser derivadas ' de uno de los mismos anticuerpos que enlazan a un - complejo que comprende ß-Klotho . y uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, , de uno o más anticuerpos diferentes, tal como un anticuerpo humano, . o de un' anticuerpo humanizado. En un ejemplo de un anticuerpo quimérico, una porción de ' la cadena pesada. y/o ligera es idéntica con, homologa a, o derivada, de un anticuerpo de una, especie en particular o que pertenece a una clase- o subclase de anticuerpo en particular, mientras que el resto de la(s) cadena (s) es/son idéntica (s) con, homologas a, o derivadas de un anticuerpo o anticuerpos .'de otra especie o que pertenecen a otra, clase o subclase de anticuerpos. También se incluyen ' fragmentos de' tales anticuerpos que muestran la actividad biológica deseada (por ejemplo, la capacidad de enlazar específicamente aun complejo que comprende ß-Klbtho y uno de (i) FGFRlc, (ii). FGFR2c, y (iii) FGFR3c, ) . · El término "cadena ligera" incluye una cadena¦ ligera de longitud completa y fragmentos de la misma que tienen una secuencia de región variable suficiente para conferir especificidad de enlace. Una cadena ligera de longitud completa, incluye un dominio de región variable., . VL, y un dominio, de región, constante, CL. El .dominio de región variable de la cadena ligera está en la terminación amino del polipéptido. Las cadenas ligeras incluyen cadenas., kappa ("K") y cadenas . lambda ("?") .

El término "cadena pesada" incluye, una cadena pesada de longitud completa; y fragmentos de la misma que tienen una secuencia de región variable suficiente para conferir especificidad de. enlace. Una cadena pesada de- Longitud completa incluye un dominio de región variable, VH, y tres dominios de región constante, CH1, CH2, y CH3. . El dominio ·:.?? está en la terminación amino del polipéptido, y los dominios CH están en la terminación carboxi, con el CH3 que está más cercano a la terminación carboxi del polipéptido. Las cadenas pesadas pueden ser de cualquier isotipo, incluyendo IgG (incluyendo subtipos¦ IgGl, IgG2, IgG3 y. IgG4) , . IgA (incluyendo subtipos IgAl e IgA2), IgM e IgE.

El término "fragmento inmunológicamente funcional" (o simplemente "fragmento") de una, proteína de enlace a antígenos, por ' ejemplo, un anticuerpo o cadena de inmuno.globulina (cadena ligera o pesada) ,' como . se usa en La presente, es una proteína de enlace a antígenos, que comprende una porción (independientemente de cómo se obtiene o sintetiza esa porción) de un anticuerpo que carece de al menos algunos de los aminoácidos presentes en una cadena de longitud completa . pero que es capaz de enlazar específicamente a un antígeno. Tales fragmentos. son biológicamente activos en que se enlazan específicamente al antígeno objetivo y pueden competir con otras proteínas de enlace a antígenos, incluyendo anticuerpos intactos, para enlace, específico . a un epítopo dado. En un-, aspecto, tal fragmento retendrá, al menos una CDR. presente en la cadena ligera o pesada de longitud completa, y en algunas modalidades comprenderán una cadena pesada y/o cadena ligera sencilla o porción . de la misma. Estos fragmentos biológicamente activos pueden ser producidos por técnicas de ADN , recombinante, o pueden ' ser producidos por escisión enzimática o química : de proteínas de enlace a antígenos, incluyendo anticuerpos intactos. Los fragmentos de inmunoglobulina inmunológicamente funcional incluyen, pero no se limitan a, Fab, Fab', F(ab')2/ Fv, anticuerpos de dominio y anticuerpos de cadena sencilla, y pueden ser derivados de cualquier fuente de mamífero, incluyendo pero no. limitado . a humano, ratón, rata, camélido o conejo. Se contempla además que una porción ^ funcional de las proteínas ' de enlace .a antígenos descritas en la presente, por ejemplo, una o más CDRs, se pueden, enlazar de forma covalente a una segunda proteína o a una molécula pequeña para crear un agente terapéutico dirigido a un objetivo particular . en el cuerpo, al poseer propiedades terapéuticas bifuncionales , o tener una vida media en suero prolongada.

Una región "Fe"' contiene dos fragmentos de cadena pesada que comprenden los dominios CH2 y CH3 de un anticuerpo. Los dos fragmentos de cadena pesada se mantienen juntos por dos o más enlaces bisulfuro y . por interacciones hidrofóbicas de los dominios CH3.

Un "fragmento Fab' " contiene una. cadena- ligera y una porción de una cadena pesada que contiene el dominio VH y él dominio CH1 y también la región entré los dominios CH1 y CH2, tal que el enlace . bisulfuro entre cadenas se. puede formar entre las dos cadenas pesadas de dos fragmentos Fab' para formar, una molécula ' F (ab' ) 2· ' Un "fragmento F(ab')2" contiene dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas que contienen una 'porcion' de la ..región constante entre los dominios CH1 y CH2, tal que un enlace bisulfuro entre cadenas se forma entré las. dos cadenas pesadas. Un fragmento F(ab')2 asi está compuesto de dos fragmentos Fab'; .que se mantienen juntos por un enlace bisulfuro entre las .dos cadenas pesadas.

La "región Fv" comprende las regiones variables tanto para cadenas pesadas como ligeras, pero carece de las regiones constantes. . . ·; Un "anticuerpo . de dominio" es un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional que contiene solamente la región variable de una cadena pesada o la. región variable de una cadena ligera. -En algunos casos, dos o más regiones VH . se unen de forma covalente con una ligadura de péptido. para crear un anticuerpo de dominio divalente. Las dos regiones VH de un anticuerpo de dominio divalente pueden dirigirse a antigenos iguales o diferentes.

Un "hemicuerpo" es un constructo de inmunoglobulina inmunológicamente funcional que comprende una cadena pesada completa, una' cadena ligera completa y una segunda .región ' de cadena pesada Fe apareada con la región Fe de la cadena pesada completa. Una ligadura puede, pero- no necesita, emplearse para unir la región de cadena pesada . Fe y la segunda región de cadena pesada Fe. En modalidades particulares un . hemicuerpo es una forma monovalente de una pro.teina de enlace, a antigenos descrita en la presente. En otras modalidades,' pares de residuos cargados pueden emplearse para asociar una región Fe con la segunda región Fe.

Una "proteína de enlace · a ¦ antígenos . divalente" yo "anticuerpo divalente" comprende dos sitios , de enlace : a antígenos. En algunos casos, los. dos sitios de enlace tienen las mismas especificidades de antígenos . Las proteínas de enlace, a antígenos divalentes y anticuerpos divaléntes pueden ser biespecí ieos,, como se describe en la presente,, y forman aspectos de la descripción actual.

Una "protéina multiespecífica de enlace a' antígenos" , o "anticuerpo multiespecí fico" es uno que ataca a más de ún antíge o o epítopo> y forma otro aspecto, de la descripción actual .

Una proteína de enlace a ' antígenos ,o anticuerpo "biespecífico", "específico doble" o : "bifuncional" es una proteína híbrida de enlace a · antígenos o anticuerpo, respectivamente, qué tiene dos diferentes . sitios de enlace a antígenos. Las proteínas biespecificas.de enlace a antígenos , y anticuerpos son. una especie de proteínas raultiespecíficás de enlace a antígenos o anticuerpo, multiespecífico y. pueden ser producidas . por una diversidad, de métodos incluyendo, pero no limitado a, fusión de . hibridomas o ligadura, de fragmentos Fab' . Ver, por ejemplo, Songsivilai y Lachmann, 1990, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321; Kostelny et ai., 1992, J. Immúnol. 148:1547-15.53. Los dos sitios de enlace de un proteína biespecífica de enlace a antígenos o anticuerpo se enlazará: a dos epítopos diferentes, que pueden residir en los mismos (por ejemplo, ß-Klotho, FGFRlc, FGFR2c, o FGFR3c) .o diferentes objetivos de proteínas (por ejemplo, ß-Klotho, y uno de (i) FGFRlc, . (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c) .

Los términos "señalización . tipo FGF21" e "induce la señalización del tipo FGF21 , " cuando se aplican .a una próteína de enlace a antígenos de la presente descripción, significa que . la¦ prot'eína de enlace a antígenos imita, o modula, un efecto biológico in vivo inducido por el enlace de un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc,. (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, e . induce . una . respuesta biológica que resultaría de otra manera del enlace de FGF21 a un complejo que .comprende ß-Klotho y uno de (i) FGFRlc, . (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, in vivo. Al . evaluar el, enlace, y especificidad de una proteína de enlace a antígenos, por ejemplo, un anticuerpo o fragmento inmunológicamente funcional del mismo, .un. anticuerpo o fragmento se considera que induce una respuesta biológica cuando la respuesta es igual a o mayor que 5%, y preferiblemente igual a o. mayor que 10%, 15%, 20%, 25%, ,30%, 35%, 40%, 45%, .50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% o 95%, de la actividad de un estándar de tipo natural de FGF21 que comprende la. forma, madura de SEQ ID- NO:.2 (es decir, la. forma madura de la secuencia humana FGF21) y tiene las siguientes propiedades: mostrar un nivel de eficacia igual a o mayor que 5% de un estándar FGF21, con una EC50 de igual a .o menor que lOOnM, por ejemplo, 90 nM, 80 nM, 70nM, 60nM, 50nM, 40nM, 30nM,' 20nM o 10 nM en (1) el ensayo de células de reportero de.. luciferasa mediado por él receptor FGF21 recombinante del Ejemplo.4; (2) fosforilación ERK en el ensayo de células mediado por el receptor FGF21 recombinante de Ejemplo 4; y (3) fosforilación ERK en adipocitos humanos . como se describe en el Ejemplo 4. La "potencia" de una. proteína de enlace a antígenos se define como que muestra ' un EC50 igual a o . menor que lOOnM, por ejemplo, 90nM, 80nM, 70nM, 60nM, 50nM, 40n , 30n , 20nM, 10 nM y preferiblemente menor de ??? de la proteína de enlace a antigeríos en los siguientes ensayos: (1) el ensayo de células de reportero de luciferasa mediado por '. el receptor FGF21 recomb'inante del Ejemplo 4; (2) la fosforilación ERK en el ensayo de células mediado por el receptor FGF21 recombinante del Ejemplo 4; y (3) fosforilación ERK en adipocitos h manos como se describe en el Ejemplo 4.

Se observa que no todas las proteínas, de enlace a antígenos de la presente descripción inducen la señalización mediada por FGF21 (por ejemplo, que induce la actividad agonista), ni. es ¦ esta propiedad deseable en todas las circunstancias. No obstante, las proteínas . de ' enlace ' a antígenos que no inducen señalización mediada por FGF21 forman aspectos de la presente descripción y puede ser útiles como reactivos de diagnóstico u otras aplicaciones.

Como se usa en. la presente, el término "FGF21R" 'significa un complejo de receptor- multimérico. que FGF21 se sabe o sospecha que forma in vivo. En. diversas modalidades, FGF21R comprende ,( i) un FGFR, por ejemplo, FGFRlc, . FGFR2c, FGFR3c o FGFR4,-' y (ii) ß-Klotho. . · ' . ' ¦' . ¦ ·.

El término "pólinucleótido" o "ácido nucleico" incluye tanto polímeros dé nucleótidos de hebra sencilla como de hebra doble. Los nucleótidos que comprende el polinucleótido pueden ser ribonucleótidos o desoxiribonucleótidos o una forma modificada de cualquier tipo de nucleótido. ..Dichas modificaciones, incluyen modificaciones a las bases' tales como bromouridina y derivados de inosina, modificaciones de ribosa tales como 2', 3' -didesoxiribosa, y modificaciones ligadura internucleótidos tales como fosforotioato, fosforoditioato, fósforoselenoato, fosfo'rodisélenoato, fosforoanilotioato,. fosforaniladato y fosforoamidato.

El término "oligonucleótido" significa un polinucleótido que comprende .200 o menos nucleótidos. En algunas modalidades, los oligonucleótidos tienen de 10 a 60, bases de longitud. En otras modalidades, los oligonucleótidos , tienen 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, o 20 a 40 nucleótidos de longitud. Los oligonucleótidos pueden ser de hebra sencilla o de hebra doble, por ejemplo, para. uso en la construcción de un gen murante . Los oligonucleótidos .' pueden ser oligonucleótidos de sentido o antisentido. Un oligonucleótido puede incluir una . etiqueta, incluyendo una radioetiqueta, una etiqueta fluorescente, un hapteno o una etiqueta antigénicá, para ensayos de . detección. Los oligonucleótidos pueden ser usados, por ejemplo, como cebadores PCR, cebadores de clonación o sondas de hibr.idización . ¦ Una "molécula aislada de ácido nucleico" significa un ADN o ARN de origen genómico, mRNA, cDNA, o sintético . o alguna combinación . de . lo mismo que. no se asocia con todo o una porción de un ..polinucleótido en el cual el polinucleótido aislado se encuentra en la naturaleza, o se liga a un polinucleótido. al cual . no se liga en la naturaleza. Para los propósitos de esta descripción, se entiende gue "una molécula de ácido nucleico gue comprende" una secuencia particular de nucleótido no abarca cromosomas intactos. . Moléculas aisladas de ácido nucleico, "gue' comprenden" secuencias especificas de ácidos nucleicos -pueden incluir, además, de las secuencias especificadas, secuencias de codificación por hasta diez o incluso hasta veinte diferentes proteínas . o porciones de. las mismas, o pueden incluir secuencias, reguladoras ligadas operativamente que controlan la expresión de la región de codificación de .las secuencias . mencionadas de ácidos nucleicos, y/o . pueden incluir secuencias de vectores.

A menos gue. se éspecifigue de otra manera, el extremo del lado izquierdo de cualquier secuencia de polinucleótido de hebra sencilla aguí discutida es el extremo 5'; la dirección del lado izguierdo de las secuencias de polinucleótido de hebra doble se refiere como la dirección 5'. La dirección de adición 5' a 3' de transcritos de . ARN nacientes se refiere a la dirección de la transcripción-; las regiones de secuencias en la hebra de ADN gue tienen la · misma secuencia como el transcrito de ARN gue están en 5' hasta el extremo 5' del transcrito de ARN se refieren como "secuencias cadena arriba" éñ la hebra de ADN que tiene la misma secuencia como el transcrito de ARN que está 3'.'. al extremo 3' del transcrito de ARN se refieren como "secuencias cadena abajo . " El término, "secuencia de control" . se refiere a una secuencia de polinucleótidos que puede afectar la expresión, y procesamiento de las secuencias de codificación, a las cuales se liga.. La naturaleza dé tales secuencias de control puede depender del organismo hospedero. En, modalidades particulares, las : secuencias de control para procariotas pueden incluir un promotor, un sitio de enlace a ribosomas, ,y uná secuencia de terminación dé la transcripción. Por ejemplo, las secuencias de control para eucariotas pueden incluir promotores que comprenden uno o una pluralidad de sitios de reconocimiento para factores, de transcripción, secuencias potenciadoras de la transcripción, y secuencia de terminación de la; transcripción. Las^ "secuencias de control" pueden . incluir , secuencias líder y/o secuencias ' del compañero de fusión.

El término "vector" significa' cualquier molécula ¦. o entidad (por ejemplo, ácido nucleico, plásmido, bacteriófago o virus) usado para transferir información de codificación de proteínas dentro de una célula hospedera.

El término '"vector de expresión" '.. o "constructo de expresión" se. refiere- a un vector que. es adecuado para transformación de una célula hospedera y contiene secuencias de ácidos nucleicos' que dirigen y/o controlan (en conj nto con la célula hospedera) la expresión de una o más regiones de codificación heterólogas ligadas operativamente a ello. Un constructo de expresión puede, incluir, pero no se limita a, secuencias que; afectan o controlan la transcripción, traducción, y, si están presentes intrones, afecta él empalme del ARN de una región de codificación ligada operativamente ' a ello .

Como se usa¦ en la presente, "ligado operativamente" significa que los componentes a los cuales se aplica el término están en una relación que les permite llevar a cabo sus funciones inherentes bajo condiciones adecuadas.. . Por ejemplo, una secuencia de control en', un vector, que está "ligado operativamente" a una secuencia de codificación, de la proteina se liga . á ello de manera que la expresión de la secuencia de codificación de la proteina se alcanza bajo condiciones ' que son . compatibles .. con ..la actividad transcripcionai de' las secuencias de control.

El término "célula hospedera" significa una célula que se ha transformado, o es capaz de transformarse, con una secuencia de ácido nucleico y por ello expresa un gen de interés. ..El término incluye la progenie de la . célula precursora, si la,, progenie es o no idéntica en morfología .o en composición genética para la célula precursora original,' siempre que el gen.de interés se presente.

El término "transducción" significa la transferencia de genes de una bacteria a otra, usualmente por bacteriófago. "Transducción" también se refiere a . la adquisición y transferencia de secuencias celulares eucarióticas por retrovirus defectuosos en la replicación.

El término "transíección" significa la absorción de ADN externo o exógeno . por una célula., y una célula ha si-do "transfectada" cuando el ADN exógeno ha sido introducido dentro de la membrana celular. Diversas técnicas de transfección son bien conocidas en la técnica y son descritas en la presente. Ver, por ejemplo, Graham et al., (1973) Virology 52:456; Sambrook et al., (2001), supra; Davis et al.,. (1986) Basic Methods in Molecular Biology, Elsevier; Chu et al., (1981) Gene.13: 197.. Tales técnicas pueden ser. usadas para introducir una o más porciones de ADN exógenos dentro células hospederas adecuadas.

El término "transformación" se refiere a. un cambio las características genéticas de la célula, y una célula ha transformado cuando se ha modificado para contener nuevo ADN o ARN. Por ejemplo, una célula se transforma donde se modifica genéticamente de su estado nativo al introducir nuevo material . .. genético por medió de transfección, transduc'ción, u otras técnicas. Después de la; transfección o transducción, el ADN transformado puede, recomb'inarsé con el de lá célula al integrarse físicamente en un cromosoma., de ;la célula, o pueden mantenerse transitoriamente como un elemento episomal sin replicarse, . o pueden. replicarse independientemente como un plásmido. Una célula se considera que se ha "transformado establemente" cuando · el . ADN transformado se . replica con la división de la célula.

Los términos "polipéptido" o . "proteína" . se- usan de manera intercambiable en la presente para referirse', a ..un polímero de residuos de aminoácidos . Los términos también aplican a polímeros, de aminoácidos en los cuales uno o más residuos de aminoácidos es un análogo o imitación de :un aminoácido que se presenta naturalmente correspondiente, así como a polímeros de aminoácidos que se presentan naturalmente. Los términos también pueden abarcar' polímeros de aminoácido que se han modificado, por ejemplo, por- la adición de residuos . de carbohidrato para formar glicoproteínas, o . fosforilados . Los polipéptidos y proteínas pueden producirse por una' célula qué se presenta naturalmente y rio recombinante., . o los polipéptidos y proteínas pueden producirse por una célula recombinante o genéticamente preparada por ingeniería. Los polipéptidos y proteínas .pueden comprender moléculas que tienen la secuencia de aminoácidos de una proteína nativa, o moléculas que tienen eliminaciones de, adiciones. a, ;y/o sustituciones de uno o más aminoácidos de la secuencia nativa. Los términos "pólipéptido" y "proteína" abarcan proteínas de enlace a ántígenos que enlazan específica o selectivamente aun complejo que comprende ß-Klotho y un FGFR (por ejemplo, FGFRlc, FGFR2c, y FGFR3c, o secuencias que tienen eliminaciones de, adiciones a, y/o sustituciones' de uno o más aminoácidos de una proteína de enlace a. antígénos que enlaza específica o selectivamente aun complejo que comprende ß-Klotho y uno de (i) FGFRlc, (i'i) FGFR2c, y (iii )'·.,:¦ FGFR3c, . El término "fragmento de pólipéptido" se refiere a un pólipéptido que tiene uha eliminación de. terminal aminó, una eliminación de terminal carboxilo, y/o una eliminación interna. como se compara con la proteína de longitud completa . Tales fragmentos también pueden contener aminoácidos modificados como se compara con la proteína de longitud ' completa. ¦ En determinadas modalidades, los fragmentos están alrededor de cinco hasta '500 aminoácidos dé longitud. Por ejemplo, los. fragmentos pueden ser al menos 5,· 6, 8, 10, 14, .20, 50, 70, 100, 11Ó, 150, 200, 250, 300, 350, 400, ó 450 aminoácidos de. longitud. Los fragmentos útiles- de polipéptidos incluyen fragmentos inmunológicamente funcionales de anticuerpos, incluyendo dominios de enlace . En el caso de una proteíría de nlace a antigenos que enlaza a un complejo, que comprende ß-Klotho . y uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) , FGFR3c,. , los fragmentos útiles incluyen pero no se limitan; a una . región CDR, un dominio variable de- una cadena ligera o pesada,- una porción de una. cadena de anticuerpo o justo su región variable que incluye dos CDRs, y los similares. ' El término "proteína aislada" referido significa que una proteína sujeto- (1)' está libre de al menos algunas otras proteínas con las cuales debe normalmente encontrarse, (2) está esencialmente, libre de otras proteínas de la misma fuente, por ejemplo, de la misma . especie, (3) se expresa por una célula de una especie diferente, (4) se ha separado de al menos alrededor de 50 por ciento de los polinucleótidos , lípidos, carbohidratos, u otros materiales con los cuales .se asocia en naturaleza, (5) se asocia, operablemente (por interacción covalente o no covalente) con un pólipéptido con el cual no se asocia .en naturaleza, o. (6) no ocurre .en la naturaleza. Típicamente, una "proteína aislada" constituye al menos alrededor de .5%, al menos alrededor de. 10%, al . menos alrededor de 25%, o al menos alrededor de. 50% de una muestra dada. El ADN genómico, cADN, . mARN .u otro ARN, de origen sintético, o cualquier combinación de los mismos, puede codificar tal proteína aislada. Preferiblemente, la pr'oteína aislada está, sustanci.almente libre de .. proteínas. ¦ o polipéptidos u otros contaminantes que. se encuentran en su ambiente natural que deben interferir con su uso terapéutico, de diagnostico, profiláctico,, de búsqueda u otro uso.

Una "variante", de un polipéptido (por ejemplo, una proteína de enlace a .antígenos, o un anticuerpo) comprende una secuencia de aminoácidos en donde uno o más residuos de aminoácidos se insertan en, eliminan de y/o sustituyen dentro de la secuencia de aminoácidos con relación a otra . secuencia de polipéptidos. Las variantes incluyen proteínas de fusión.

Un "derivado" , de, un polipéptido es un polipéptido (por ejemplo, una proteína de enlace a antígenos, o un anticuerpo) que ha sido modificado químicamente en alguna manera diferente a las variantes- de inserción, eliminación o sustitución, por ejemplo, por conjugación con otra porción química .

El término "que se presenta naturalmente" como se usa, a lo largo de la especificación en conexión con materiales biológicos tales como polipéptidos, ácidos nucleicos, células hospederas, y los .similares, se refiere a materiales .que. se encuentran en la naturaleza.

"Región de enlace a antígenos" significa una proteína,, o una porción de una proteína, qüe enlaza específicamente un antígeno específico, por ejemplo, un complejo que comprende ß-Klotho y un ß-Klothó y al menos uno de (i): FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c. Por ejemplo, tal porción de una proteína de enlace . a antígenos que contiene los residuos de aminoácidos que interactúan con un antígeno y otorga a la proteína de enlace, a antígenos su especificidad y la afinidad para el antígeno se refiere como "región de enlace a antígenos." Una región de enlace a antígenos típicamente incluye, una o más "regiones de enlace complementarias" ("CDR", por sus siglas en inglés) . Ciertas regiones de enlace a antígenos también incluyen una o más regiones de "estructura". Una "CDR" es una secuencia de aminoácidos que contribuye a la especificidad y. afinidad de enlace a antígenos.' Las regiones de "estructura" pueden ayudar a mantener la conformación adecuada, de las CDRs, para promover el enlace entre la región de enlace a antígenos y un antígeno.

En ciertos aspectos, las proteinas.de enlace . a. ' antígenos recombinantes que enlazan a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos .uno de (i) FGFRlc, ,( ii ) FGFR2c, y (iii) FGFR3c,', se proporcionan. En este contexto, .una. "pr.oteína recombinante" es una proteína hecha usando técnicas recombinantes, ésto es,- a través de. la expresión de un ácido nucleico recombinante como se describe en la presente.. Los métodos y técnicas para la producción de proteínas recombinantes son bien conocidos en la técnica.

El término "competir" cuando se usa en el contexto de proteínas de enlace a antígenos (por ejemplo, . proteínas '.de enlace a antígenos neutralizantes, anticuerpos neutralizantes, proteínas agonistas de enlace a antígenos, anticuerpos, agonistas y proteínas de enlace que se enlazan: a un complejo que comprende ß-Klotho y uno de (i) FGFRlc, (ii)-FGFR2c, y (iii) FGFR3c, ) que compiten por el mismo epítopo o sitio de enlace en un objetivo significa competencia . entre proteínas de enlace a antígenos como se determina por un ensayo en el cual, la proteína de enlace a antígenos (por ejemplo, anticuerpo o. fragmento inmunológicamente funcional del mismo) bajo estudio evita, o inhibe el enlace específico de una molécula de. referencia (por ejemplo, ün ligando de referencia, o proteína de enlace a antígenos de referencia, tal como un anticuerpo de referencia) para un antígeno común (por ejemplo, FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c, · FGFR4 , ß-Klotho o un fragmento de los mismos, o un complejo gue comprende ß-Klotho y uno de . (i) FGFRlc,, (ii) FGFR2c, y (iii) F.GFR3c) . Los numerosos tipos, de ensayos de enlace competitivos pueden usarse para determinar si una molécula de prueba cómpite con una ' molécula de referencia para enlace. Los ej.emplos :de ensayos que pueden emplearse incluyen radioinmunoensayo indirecto o. directo: en fase sólida (RIA, por sus . siglas en inglés)., inmunoensayo' de enzima indirecta o directa en fase sólida (EIA, por' sus siglas en inglés) ,' ensayo de competencia intercalado (Ver , por . ejemplo, Stahli et al., (1983) Methods in .Enzymology 9:242-253); EIA de biotina-avidina directo en fase sólida (Ver, por- ejemplo, Kirkland et al., '(1986) J. Immunol. 137 : 3614-3619) ensayo etiquetado directo en 'fase sólida, ensayo intercalado etiquetado directo en fase sólida (Ver, por ejemplo, . Harlow y Lañe,' (.1988) supra) ; RIA etiquetado directo en fase sólida usando etiqueta 1-125 (Ver, por ejemplo, Morel et al., (1988 ) Moloc. Immunol. 25: 7-15.) ; EIA' de biótina-ayidina directo en fase sólida (Ver, por ejemplo, Cheung, '.et al. , (1990) Virology 176: 546-552) ; y RIA etiquetado directo (Moldenhauer et al., (1990) Scand. J. Immunol . 32 : 77-82.) . Típicamente, tal ensayo involucra el. uso de un antigeno purificado enlazado a üna superficie sólida o células que portan cualquiera de una ; proteína, de' enlace., a antígenos de prueba no etiquetada o una proteína, de enlace, a antígenos de referencia etiquetada. La inhibición competitiva se mide al determinar la cantidad de la etiqueta enlazada a la superficie sólida o células, en la presencia de la proteína de enlace . a antigenos.de prueba. Usualmente la proteína de enlace a antígenos de prueba está presente en exceso. Las proteínas de enlace a antígenos identificadas por ensayo de competencia (proteínas de enlace a . antígenos competentes) ' incluyen' proteínas de enlace a antígenos enlazadas al mismo epitopo como las. proteínas de enlace ..a antígenos de referencia y proteínas de enlace a antígenos enlazadas a un epitopo adyacente suficientemente próximo al enlace de epitopo. por la proteína de enlace a- antígenos de referencia para, que ocurra el obstáculo estérico. Los detalles adicionales : con respecto a los métodos para determinar enlace competitivo se proporcionan en los ejemplos aquí. Usualmente, cuando una proteína competente de enlace ' a antígenos está presente en exceso, inhibirá el enlace específico dé una proteína de referencia de enlace . a antígenos. a un antígeno común por- al menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% o 75%. En algún, caso, el enlace se inhibe por al menos 80%, .85%, 90%, 95%, o 97% o más.

El término "antígeno" se refiere a una molécula o una porción de una molécula capaz de enlazarse por un agente selectivo de enlace, : tal como una proteína de enlace, a antígenos (incluyendo, por ejemplo, ün anticuerpo o fragmento inmunológico funcional del mismo) , y también puede ser capaz de usarse en un animal para producir anticuerpos capaces de enlazar a tal antígeno. Un antígeno puede poseer uno o más epítopos que son capaces, de interactuar con proteínas de enlace a antígenos diferentes, por ejemplo, anticuerpos.

El término "epitopo" significa los aminoácidos de una molécula objetivo que :se ponen en contacto por' Una proteína de enlace a antígenos (por ejemplo, un anticuerpo) cuando la proteína de enlace a antígenos se enlaza a la- molécula objetivo. El-' término incluye cualquier- subconjunto - de la lista completa de aminoácidos de la molécula objetivo que se ponen en contacto cuando -una proteína de enlacé a antígenos, tal¦ como un anticuerpo, se enlaza a la molécula objetivo, -un epítopo puede ser contiguo o no contiguo, (por ejemplo, (i) en un polipéptido de cadena sencilla, los residuos de aminoácidos que no son contiguos uno con el otro en la secuencia de polipéptidos pero que dentro del contexto de la molécula objetivo se enlazan por la proteína de enlace a antígenos, o (ii), en un receptor multimérico que- comprende dos o más componentes individuales,- por ejemplo., un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno ' de (i)¦ , FGE'Rlc, (ii) FGFR2c, y (lii) FGFR3c, los residuos de aminoácidos que. están presentes en uno o más de los componentes individuales, pero que están todavía enlazados por la proteína¦ de enlace a antígenos). En determinadas modalidades, los epítopos .pueden imitarse en que comprenden una estructura tridimensional que es similar a un epítopo antigénico usado para generar la proteína de enlace a. antígenos, aún comprenden ninguno -o solamente algunos ce los residuos de aminoácidos encontrados en tal epítopo usados para generar la proteína de enlace;,a antígenos. Más á menudo, los epítopos residen :en las proteínas, pero en algunos casos pueden residir en otros tipos de moléculas, tales ' como . ácidos nucleicos. Los determinantes de epítopos pueden incluir agrupamientos de superficie químicamente activos de .moléculas .tales como aminoácidos, cadenas laterales de- azúcares, grupos fosforilo o sulfonilo, y pueden tener características ' estructurales tridimensionales, . y/o características de carga- específicas. Generalmente, las proteínas de' enlace a antígenos específicas para una molécula objetivo particular reconocerán preferencialmente un epítopo en la molécula objetivo en una mezcla de complejo de proteínas y/o macromoléculas.

El término "identidad" se refiere a una relación entre las secuencias de dos o más moléculas de polipéptidos o ríos o más moléculas de ácido nucleico, cuando se .determina por alineación y comparación de las secuencias. "Porcentaje de identidad" significa el porcentaje de residuos .idénticos entre los , aminoácidos o nucleótidos en las moléculas comparadas y se., calcula con base en el tamaño de la más pequeña de las moléculas que se. comparan. '' Para estos cálculos, los espacios en las alineaciones (si fuera necesario) deben direccionarse por un modelo matemático particular o programa de computadora (esto es, un "algoritmo") . Los métodos que pueden usarse para calcular la identidad de los ácidos nucleicos o polipéptidos alineados incluyen aquellos. descritos en Computational 'Molecular Blology, (Lesk, A. M . , ed.), (1988) New York: Oxford University Press;.' Biocomputing Informatics and Genome Projects, (Smith, D .1 W., ed.), 1993, New York: Academic Press; Computer Analysis of .Sequence Data, Parte I, , (Griffiri, A. . , y Griffin,. H.. G. , eds . ) , .1994, New Jersey: Humana Press; von Heinj.e, G.,. (1987) Sequence Analysis in Molecular Biology, New York: Academic Press; .Sequence Analysis Primer, (Gribskov, M. y Devereux, J. , eds .), 1.991 , .New . York: M. Stockton Press; . y Carillo et al., (1988) SIAM . Applied Math. 48: 1073.

Al calcular el porcentaje de identidad, las secuencias que se comparan se' alinean en una forma que da lá mayor coincidencia entre las secuencias.. El .. programa de computadora usado para determinar el porcentaje de identidad es el paquete de programa GCG, que. incluye GAP (Devereux .et al., (1984) Nucí. Acid Res. 12:387; Genetics Computer Group, University de isconsin, .. Madison,. I). El GAP de algoritmo de computadora se usa para alinear los dos polipéptidos, o polinucleótidos para lós cuales el porcentaje de identidad de secuencia es a determinarse. Las secuencias .se-, alinean para 'coincidencia óptima de su aminoácido o nucleótido respectivo (el "espacio en coincidencia", como se. determina por. el algoritmo). Una penalización por abertura de espacio (que se calcula . como 3x la diagonal promedio, en donde la "diagonal promedio" es el promedio de la diagonal de la matriz de comparación que se usa; la "diagonal" es el registro o número asignado a cada coincidencia de aminoácido perfecta por la matriz de comparación particular) y un penalización por extensión de espacio (que es · usualmen.te 1/10 veces la penalización . por abertura de espacio), asi como una matriz de comparación tal como PAM 250 o BLOSUM 62 se usan en conjunto con el algoritmo. :'.'En determinadas modalidades, una. matriz de comparación estándar (Ver, Dayhoff et al., (1978) Atlas of Proteín - Sequence. and Structure 5_:345-352 para la matriz de comparación PAM ¦ 250; -'" Henikoff et .al., (1992)· Proc. Nati. Acad. ¦ Sci. E. U.A. 89:10915-10919 para la matriz -de comparación' BLOSUM 62) también se usa por el algoritmo.

Los parámetros recomendados para determinar él porcentaje de identidad para polipéptidos o secuencias de nucleótidos -al usar . el programa GAP son los siguientes:/ Algoritmo: Needlemán et al., .1970,. J.. Mol . Biol . 48:443- 453; Matriz de comparación: BLOSUM. 62 de Henikoff . et al., 1992, supra; .

Penalización por espacio: .12 (pero ' sin ¦ ninguna penalización por huecos finales) Penalización por Longitud de Espacio: 4 Umbral de Similitud: . O Ciertos esquemas de alineación para- alinear . dos secuencias, de aminoácidos pueden resultar en igualado de solamente una región corta de las dos secuencias, y esta región alineada pequeña puede tener identidad de secuencia muy alta aunque no', existe relación importante entre las dos secuencias de longitud completa. En consecuencia, el método . de alineación seleccionado (por ejemplo, el programa- GAP) puede ajustarse si se desea para resultar en una alineación que se extiende al menos 50 aminoácidos contiguos del polipéptido objetivo. .

Como se usa en la presente, "sustancialmente pura" - significa que la especie descrita de la molécula es la especie predominante presente, esto es, en una-base molar es más abundante que cualquier otra especie individual en la misma mezcla. En' determinadas modalidades, una molécula sustancialmente pura es una composición en donde la especie . objetivo comprende al menos 50% (en una base molar) de · todas las especies macromoleculares. presentes. En otras modalidades, una^ composición sustancialmente pura comprenderá al menos 80%, 85%/ 90%,· 95%, o 99% de todas; las especies macromoleculares presentes en la composición. · En otras modalidades,- la . especie objetivo ..se purifica para homogeneidad esencial en donde las especies contaminantes no pueden detectarse en la composición por métodos de detección convencionales y de esta manera la composición consiste de una especie macromolecular detectable sencilla.

Los términos ."tratar" y "tratamiento" se refieren " a cualquier indicación de éxito en el tratamiento o- alivio de una lesión, patología o afección, incluyendo ¦' cualquier parámetro objetivo o subjetivo tal como' reducción; remisión; disminución de síntomas o hacer, la lesión, patología .-o afección más tolerable para el .paciente;, disminución en la velocidad. de degeneración o descenso; . hacer el punto final de degeneración menos debilitante; mejorando el bienestar mental o físico del paciente. El tratamiento o aminoramiento de los síntomas se puede basar en parámetros objetivos o subjetivos; incluyendo los resultados del examen físico, exámenes neuropsiquiátricos, y/o una evaluación psiquiátrica. Por ejemplo, ciertos métodos aquí presentados pueden emplearse para tratar Diabetes tipo 2, obesidad y/o dislipidemia, ya sea profilácticamente o como un. tratamiento agudo, para disminuir niveles de glucosa .en, plasma, para disminuir niveles de . triglicéridos en circulación, para ' disminuir niveles de colesterol en circulación y/o aminorar un síntoma asociado con diabetes tipo 2, obesidad y dislipidemia.

Una "cantidad, efectiva" es generalmente una' cantidad suficiente para reducir la severidad y/o frecuencia 'de los síntomas, eliminar los síntomas y/o ; causa subyacente, prevenir la presencia de los síntomas y/o su causa subyacente, y/o mejorar o remediar el daño que resulta de o se asocia con diabetes, obesidad y¦ dislipidemia.. En algunas modalidades, la cantidad efectiva. es una cantidad terapéuticamente efectiva o una cantidad profilácticamente efectiva. Una "cantidad terapéuticamente efectiva" es una cantidad suficiente para remediar un estado de enfermedad . (por ejemplo, diabetes, obesidad o dislipidemia') o síntomas, particularmente un estado o síntomas asociados con el estado de enfermedad, o evitar, obstaculizar, retardar- o invertir de otra manera el avance del estado de enfermedad o cualquier otro síntoma indeseado asociado con la enfermedad de ninguna manera. Una "cantidad profilácticamente efectiva" es una cantidad de una composición farmacéutica que, cuando se administra a un sujetó, tendrá el efecto profiláctico pretendido, por ejemplo, prevenir ó retardar el comienzo (o reaparición) de diabetes, obesidad o dislipidemia, o reduce •la probabilidad del comienzo (o reaparición) de diabetes, obesidad o dislipidemia o síntomas asociados. El efecto profiláctico o. terapéutico completo no . ocurre necesariamente por administración de una dosis, y puede ocurrir solamente después de la administración de una serie de dosis.: Así, una cantidad efectiva terapéutica o profilácticamente puede ser administrada en una o más administraciones.

"Aminoácido" toma su significado normal en la técnica. Los veinte aminoácidos que se presentan naturalmente' y sus abreviaturas siguen el uso convencional. Ver', Immunology-A Synthesis, 2a Edición, (E. S. Golub y¦¦ D. R. Green, eds..), Sinauer Associates : -Sunderland, Mass. (1991), incorporada en la presente como referencia para cualquier propósito... Los estereoisómeros (por ejemplo, aminoácidos D) de los veinte aminoácidos convencionales, aminoácidos no naturales o que no se presentan naturalmente tales como aminoácido ?-,a^-disustituidos , aminoácidos N-alquilo, y otros aminoácidos no convencionales también pueden ser componentes adecuados para pblipéptidos y s incluyen en la frase "aminoácido."- Los ejemplos de aminoácidos no naturales (que pueden . sustituirse por cualquie aminoácido que se presenta' naturalmente encontrado en cualquier secuencia descrita en la presente, como ' se desea) incluyen: . 4-hidroxiprol'ina, ?-carboxiglutamato, e-?, N, N-trimetilisina, e-?-acetilisina, .0-fosfoserina, N-acet'ilserina, N-formilmetionina , ' 3-metilhistidina, 5-hidroxilisina, o-N-metilarginina> y otros aminoácidos similares, y ácidos imino (por ejemplo, 4-hidroxiprolina) . En la notación del polipéptido usada en la presente, la dirección a la izquierda es la dirección de terminal amino y la dirección á la derecha es la dirección de terminal carboxilo, de. acuerdo con uso y convención estándar. Las listas no limitantes de ejemplos, de aminoácidos qu no se presentan naturalmente que pueden insertarse en una secuencia de proteina de enlace a antigenos o sustituirse por un residuos de tipo natural en una secuencia: de .enlace., a antigeno incluye aminoácidos ß, homoamirioácidos , aminoácidos cíclicos y aminoácidos . con cadenas laterales derivadas. Los ejemplos incluyen (en la forma L o forma D; abreviados como en los paréntesis) : citrulina (Cit) ,. homocitrulina (hCit ). , Noí-metilcitrulina ¦¦ . (NMeCit) , · Na-metilhomocitrulina , (?a- eHoCit) , omitiría. (Orn) , Na-Metilornitina ¦¦[. (? -MeOrn o N eOrn)., sarcosina (Sar) , homolisina (hLys . o hK),_ homoarginina (hArg o hR) , homoglutamina (hQ) , ?a-metilarginina (NMeR) , Na-metileucina (?a-MeL o NMeL) , N-metilhomolisina (NMeHoK) , ? -metilglutamina (NMeQ) , norleucina (Nl-e) , norvalina ' (Nva) ,\- . 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina . (Tic), ácido , octáhidroindol-2-carboxílico (Oic) , 3- ( 1-naftil ) alanina (1-Nal) , ' 3-(2-naftil) alanina. (2-Nal), 1, 2, 3, 4-tetrahidroisoquinolina (Tic)., 2-indanilglicina ( Igl ) , p'ara-yodofenilalanina (pl-Phe) , párá-aminofenilalanina . ·. (4'AmP o 4-Amino-Phe) , 4-guanidino fenilalanina (Guf ) , glicilisina (abreviado "K (?e-glicilo) " o "K(glicilo)" o "K(gly)"), nitrofenilalanina (nitrophej , aminofenilalanina (aminophe o Amino-Phe) , bencilfenilalanina (bencil e) , ácido ?-carboxiglutámi.co (y-carboxiglu) , hidroxiprolina . (h.idroxipro) , p-carboxil-fenilalaniná (Cpa) , ácido oí-aminoadípico . (Aad) , ?a-metil valina (N eVal) , N-OÍ-metil leucina (NMeLeu) , ?a-metilnorleucina (N eNle) , ciclopentilglicina (Cpg) , ciclohexilglic.ina . (Chg) , acetilarginina (acetilarg) , ácido a,· ß-diaminopropionoico (Dpr) , ácido a, ?-diaminobutirico (Dab)-, ácido diaminopropiónico (Dap) , ciclohexi'lalanina (Cha)., 4-metil-fenilalaniná ( ePhe) , ß, ß-difenil-alanina (BiPhA),-; ácido aminobutirico (Abu) , 4-fénil-fenilalaniná (o bifenilalaniria; 4Bip) ,. ácido a-amino-isobutirico (Aib) , beta-alanina , ácido beta-aminopropióhieo, ácido piperidinico, ácido aminocaprioico, ácido aminoheptanoico, ácido aminopimélico, desmosina, . ácido diaminopimélico, N-etilglicina, N-etilaspargina, hidroxilisina, allo-hidroxilisina, isodesmosina, . allo-isoleucina, N-metilglicina, N-metilisoleucina, N-metiivalina, 4-hidroxiprol.ina . (Hyp) , ?-carboxiglutamato e-?, N, -trimetilisina, e-?-acetilisina, .0- fosfoserina, , N-acetilserina, N-formilmetionina, 3-metilhistidina, : 5-hidroxilisina, ?-metilarginina,: ácido 4-Amino-O-ftálico (4APA) , y otros aminoácidos ' similares, , y 'formas , derivadas, de : cualquiera de. aquellos enlistados específicamente.

II . PANORAMA GENERAL Se proporcionan en la presente proteínas de ' enlace- . a antígenos que enlazan . un complej que comprende ß-Kiotho y uno de (i) FGFRl.c, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c . Una propiedad única de las proteínas . de enlace, a . antígenos descritas en la presente es la naturaleza antagónica de estas proteínas, específicamente la. capacidad para imitar el efecto in vivo de FGF21 y para inducir la señalización, del tipo FGF21. De forma más remarcable y específ camente, algunas de las proteínas de enlace a antígenos descritas en la presente inducen señalización del tipo FGF21 n . arios ensayos con ¦base en célula in vitro, incluyendo' el ensayo reportero -de ELK-luciférasa del Ejemplo 4 bajo las siguientes condiciones: (1) el enlace a y actividad del receptor FGF21 es dependiente de ß-Klotho; (2) la actividad es selectiva para el complejo FGFRlc/ Klotho; (3) el enlace a la FGFRlc/pKlotho dispara trayectorias de . señalización del tipo. FGF21; y (4) ' la potencia (EC50) es comparable con un estándar FGF21 de tipo natural que. comprende la forma madura.de la SEQ ID N0:2, como se mide en los siguientes ensayos con base en células: (1) él ensayo de células de reportero de luciferasa mediado por el receptor FGF21 recombinante del Ejemplo ¦ 4 ; . (2) la fosforilación ERK ' en el ensayo de células mediado por el receptor FGF21.. recombinante . del Ejemplo 4 y (3) fosforilación ERK en adipocitos humanos como se describe en más detalle en el. Ejemplo 6. Las proteínas de enlace a antígenos descritas, por lo tanto, se , esperan para mostrar actividades ín vivo que son consistentes con la ; función biológica natural de. FGF21. Esta propiedad hace . las proteínas de enlace a antígenos descritas, viables terapéuticos para él tratamiento de enfermedades metabólicas tales, como diabetes tipo 2, obesidad, dislipidemia, NASH, enfermedad cardiovascular, síndrome metabólico y ampliamente cualquier enfermedad o afección en la cual es deseable imitar o aumentar los efectos in vivo de FGF2".. ¦ En algunas modalidades de la presente descripción las proteínas de enlace a antígenos proporcionadas . pueden comprender polipéptidos en los cuales una o más regiones determinantes de la complementariedad (CDRs) pueden' alojarse y/o unirse. En tales proteínas de enlace a antígenos, las CDRs pueden alojarse en una región de "estructura", que orienta las CDRs de manera que las propiedades de enlace a antígeno propias de las CDRs se alcanzan. En géneral,- ales proteínas de enlace a antígenos que se proporcionan pueden facilitar o potencial lá interacción entre un FGFR (por ejemplo FGFRlc, FGFR2c o FGFR3c) y ß-Klotho, y pueden sustancialmente inducir la señalización del. tipo ..FGF21. Consecuentemente, las proteínas de enlace a antigeno aquí proporcionadas imitan el rol in vivo¦ de FGF21 y son así "agonistas" y ofrecen beneficio potencial "terapéutico para el intervalo de afecciones que se benefician dé la terapia FGF21, incluyendo diabetes tipo 2, obesidad, dislipidemia, NASH, enfermedad cardiovascular, síndrome . metabólico y en general, cualquier enfermedad' o afección en la cual ' sea deseable imitar o aumentar los efectos in vivo de FGF21.

Ciertas proteínas de enlace a antígenos descritas en la presente son anticuerpos o se derivan de anticuerpos. En determinadas modalidades, la \ estructura '.de polipéptido de' la proteína de enlace a antígenos es con base. en los anticuerpos, incluyendo, pero no limitado a, anticuerpos monoclonales , anticuerpos biespecíficos, minicuerpos, anticuerpos de dominio, anticuerpos sintéticos (algunas veces referidos en la presente como "imitaciones de anticuerpos"), anticuerpos quiméricos,, anticuerpos humanizados, anticuerpos humanos, fusiones de anticuerpo (algunas veces referido en la presente como "conjugados de anticuerpo"), hemicuerpos y fragmentos de los mismos. Las varias estructuras se describen además en la presente a continuación.

Las proteínas, de enlace a antígenos proporcionadas en la presente se . han demostrado para enlazar a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c , , . y . particularmente a un complejo que comprende ß-Klotho. humana y un FGFR humano (por ejemplo, un FGFRlc humano, FGFR2c humano, o FGFR3c humano) . . Como se describe y muestra en los Ejemplos presentados en ía presente, con . base . en' los resultados Western blot, anticuerpos anti- -Klotho o ánti-FGFRlc comercialmente disponibles enlazados a ' ß-Klotho ,o FGFRlc desnaturalizado mientras que la proteína de enlace a antígenos (que son anticuerpos agonistas ) 'no. En cambio, las proteínas de enlace a antígenos proporcionadas reconocen la estructura nativa del FGFRlc y ß-Klotho en la superficie celular mientras que lós anticuerpos, comerciales no. Las proteínas de enlace a antígenos que sé proporcionan por lo tanto imitan la actividad biológica in vivo natural de FGF21. . Como una consecuencia, las proteínas de enlace a antígenos proporcionadas en la : presente son capaces de activar la actividad de señalización, del tipo FGF21. En particular, las proteínas de enlace- a antígenos descritas pueden tener una o más dé las siguientes actividades in vivo: ¦ inducción · de trayectorias de tr.ansducción de señal tipo FGF21, niveles de glucosa en la sangre disminuidos, niveles de lípidos circulantes disminuidos, parámetros metabólicos mejorados y otros efectos fisiológicos inducidos in vivo por la formación del complejo ternario de un FGFR (por ej emplo, . FGFRlc, FGFR2c FGFR3c) , ß-Klotho y FGF21, por ejemplo en afecciones tales como diabetes tipo 2, obesidad, dislipidemia, NASH, enfermedad cardiovascular, y síndrome metabólico.

Las · proteínas de enlace a antígenos que enlazan específicamente a un complejo que comprende ß-Klothó y uno e (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, que están descritas en la presente tienen una variedad, de. usos. Algunas de las proteínas de enlace a antígenos, por ejemplo, son útiles en ensayos específicos de enlace, en la purificación por afinidad de . un. complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de^ (i) FGFRlc,.' (ii) FGFR2c, y (iü) FGFR3c, , incluyendo las formas humanas de estas proteínas descritas, y en ensayos dé selección para identificar agonistas de la actividad de señalización del . tipo FGF21.

¦ Las proteínas de enlace ¦ a antígenos qué enlazan específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y- uno de (i) FGFRlc, ¦( ii ) '¦ . FGFR2c, y (iii) FGFR3c, que se describen en la. presente pueden usarse en una variedad de aplicaciones de tratamiento, como se explica en la présente. ' Por ejemplo., ciertas proteínas, de enlace a antígenos son útiles .para tratar afecciones asociadas con procesos de señalización del tipo FGF21 en un paciente, tales como reducir, aliviar, . o tratar diabetes tipo 2, obesidad, . dislipidemia, NASH, enfermedad cardiovascular, y síndrome metabólico. Otros usos para las proteínas de enlace a. antígenos incluyen, por ejemplo, diagnostico de enfermedades o afecciones asociadas con ß-Klotho, FGFRlc., FGFR2c, FGFR3c, FGFR4 o FGF21 , y ensayos de cribado para determinar la presencia o ausencia de estas moléculas. ' Algunas de las proteínas, de . enlace a antígenos descritas, en la presente pueden ser útiles en el tratamiento de afecciones , síntomas y/o la patología asociada con la actividad disminuida de señalización del tipo FGF21. Las condiciones ejemplares incluyen, pero no se limitan a, diabetes, obesidad,. NASH y dislipidemia .

FGF21 Las proteínas de enlace a antígenos descritas en la presente inducen señalización mediada por FGF21-, como se define en la presente. In vivo, la forma madura de FGF21 es la forma activa de la molécula. La secuencia de nucleótidos que codifica FGF21. de longitud completa se proporciona; los nucleótidos que' codifican la secuencia . de', señal están subrayados .

ATG GAC TCG' GAC GAG ACC GGG TTC GAG CAC TCA GGA CTG. i . TGG GTT . TCT GTG CTG GCT GGT CTT CTG CTG GGA GCC TGC CAG GCA CAC C.CC ATC CCT GAC TCC AGT CCT CTC CTG CAA TTC GGG GGC . CAA GTC CGG CAG CGG TAC CTC TAC ACA GAT GAT GCC CAG CAG ACA GAA GCC CAC CTG GAG ATC AGG GAG ! GAT GGG. ACG GTG' GGG GGC GCT GCT GAC CAG AGC CCC GAA AGT CTC CTG CAG CTG AAA GCC TTG AAG CCG GGA GTT ATT CAA ATC TTG GGA GTC AAG . ACA TCC AGG TTC CTG TGC CAG CGG CCA GAT . GGG GCC CTG TAT GGA TCG CTC CAC TTT GAC CCT GAG GCC TGC AGC TTC CGG GAG CTG CTT CTT GAG GAC GGA TAC AAT GTT TAC CAG TCC GAA GCC CAC GGC CTC CCG CTG CAC CTG CCA GGG AAC AAG TCC. CCA CAC CGG GAC CCT GCA CCC CGA GGA CCA GCT CGC TTC CTG CCA CTA CCA GGC CTG CCC CCC GCA CCC CCG GAG CCA CCC GGA ATC CTG GCC CCC CAG CCC ¦ CCC GAT GTG GGC TCC TCG GAC CCT CTG AGC ATG GTG GGA CCT TCC CAG GGC CGA AGC CCC AGC TAC GCT TCG TGA (SEQ ID NO: 1) La secuencia de aminoácidos de FGF21 de longitud completa se proporciona; los aminoácidos que constituyen la secuencia de señal. están subrayados: M D S D E T G : F E ? S G L W V S V L A G L L L G. A C Q A H P I P D S S P L L Q F G G Q V R Q R Y L Y T D D A Q Q T E A H L E I R E- D G T V G . G A A D Q S P E S L L Q L K A L K P G V I Q I L G V K T S R F L C Q R P D G LY G S L H F D P E A C S F R E L L L E D G Y N V Y Q S E A H G L P L H L P G N K S P H R D P P R G P A ' R F L P L ' P G L P P A P P E P P. G I L A P Q P P D V G S S D P L S ? V G P S Q G R S P S Y A S (SEQ ID NO: 2) FGFRlc Las proteínas de enlace a ahtígenos descritas en la presente se enlazan a FGFRlc, en particular FGFRlc humanó, cuando se asocia con ß-Klotho. La secuencia de nucleótidos que codifica FGFRlc humano (Número de Acceso al GenBank NM_023110) se proporciona: ATGTGGAGCTGGAAGTGCCTCCTCTTCTGGGCTGTGCTGGTCACAGCCACA ¦ CTCTGCACCGCTAGGCCGTCCCCGACCTTGCCTGAACAAGCCCAGC.GCTGG · GGAGCCCCTGTGGAAGTGGAGTCCTTCCTGGTCCACCCCGGTGACCTGCTG CAGCTTCGCTGTCGGCTGCGGGACGATGTGCAGAGCATCAACTGGCTGCGG GACGGGGTGCAGCTGGCGGAAAGCAACCGCÁCCCGCATCACAGGGGAGGAG.

GTGGAGGTGCAGGACTCCGTGCCCGCAGACTCCGGCCTCTATGCTTGCGTA ACCAGCAGCCCCTCGGGCAGTGACACCACCTACTTCTCCGTCAAT'GTTTeA GATGCTCTCCCCTCCTCGGAGGATGATGATGATGATGATGACTCCTCTTCA GAGGAGAAAGAAACAGATAACACCAAACCAAACCGTATGCCCGTAGCTCCA ... TAT.TGGACATCACCAGAAAAGATGGAAAAGAAATTGCATGCAGTGCCGGCT GCCAAGACAGTGAAGTTGAAATGCCCTTCCAGTGGGACACCAAACCCAACA . CTGCGCTGGTTGAAAAATGGCAAAGAATTCAAACCTGACCACAGAATTGGA GGCTACAAGGTCCGTTATGCCACCT.GGAGCATCATAATGGACTCTGTGGTG CCCTCTGACAAGGGCAACTACACCTGCATTGTGGAGAATGAGTACGGCAGC ATCAACCACACATACCAGCTGGATGTCGTGGAGCGGTCCCCTCACCGGCCC ATCCTGCAAGCAGGGTTGCCCGCCAACAAAACAGTGGCCCTGGGTAGCAAC GTGGAGTTCATGTGTAAGGTG'TACAGTGACCCGCAGCCGCACATCCAGTGG.

CTAAAGCACATCGAGGTGAATGGGAGCAAGATTGGCCCAGACAACCTGCCT TATGTCCAGATCTTGAAGACTGCTGGAGTTAATACCACCGACAAAGAGATG GAGGTGCTTCACTTAAGAAATGTCTCCTTTGAGGACGCAGGGGAGTATACG TGCTTGGCGGGTAACTCTATCGGACTCTCCCATCACTCTGCATGGTTGACC GTTCTGGAAGCCCTGGAAGAGAGGCCGGCAGTGATGACCTCGCCGCTGTAG CTGGAGATCATCATCTATTGCACAGGGGCCTTCCTCATCTCCTGCATGGTG GGGTCGGTCATCGTCTACAAGATGAAGAGTGGTACCAAGAAGAGTGACTTC CACAGCCAGATGGCTGTGCACAAGCTGGCCAAGAGCATCCCTGTGCGCAGA CAGGTAACAGTGTCTGCTGACTCCAGTGCATCCATGAACTCTGGGGTTCTT CTGGTTCGGCCATCACGGCTCTCCTCCAGTGGGACTCCCATGCTAGCAGGG GTCTCTGAGTATGAGCTTCCCGAAGACCCTCGGTGGGAGCTGCCTCGGGAC AGACTGGTCTTAGGCAAACCCCTGGGAGAGGGCTGCTTTGGGCAGGTGGTG TTGGCAGAGGCTATCGGGCTGGACAAGGACAAACCCAACCGTGTGACCAAA GTGGCTGTGAAGATGTTGAAGTCGGACGCAACAGAGAAAGACTTGTCAGAC CTGATCTCAGAAATGGAGATGATGAAGATGATCGGGAAGCATAAGAATATC ATCAACCTGCTGGGGGCCTGCACGCAGGATGGTCCCTTGTATGTCAT.CGTG GAGTATGCCTCCAAGGGCAACCTGCGGGAGTACGTGCAGGCCCGGAGGCCC CCAGGGCTGGAATACTGCTACAACCCCAGCCACAACCCAGAGGAGCAGCTC TCCTCCAAGGACCTGGTGTCCTGCGCCTACCAGGTGGCCCGAGGCATGGAG TATCTGGCCTCCAAGAAGTGCATACACCGAGACCTGGCAGCCAGGAATGTC CTGGTGACAGAGGACAATGTGATGAAGATAGCAGACTTTGGCCTCGCACGG GACATTCACCACATCGACTACTATAAAAAGACAACCAACGGCCGACTGCGT GTGAAGTGGATGGCACCCGAGGCATTATTTGACCGGATCTACACCCACCAG AGTGATGTGTGGTCTTTCGGGGTGCTCC.TGTGGGAGATCTTCACTCTGGGC GGCTCCCCATACCCCGGTGTGCCTGTGGAGGAACTTÍ CAAGCTGCTGAAG GAGGGTCACCGCATGGACAAGCCCAGTAACTGCACCAACGAGCTGTACATG ATGATGCGGGACTGCTGGCATGCAGTGCCCTCACAGAGACCCACCTTCAAG CAGCTGGTGGAAGACCTGGACCGCATCGTGGCCTTGACCTCGAACCAGGAG TACCTGGACCTGTCCATGCCCCTGGACCAGTACTCCCCCAGCTTTCCCGAC . ACCCGGAGCTCTACGTGCTCCTCAGGGGAGGATTCCGTCTTCTCTCATGAG CCGCTGCCCGAGGAGCCCTGC'CTGCCCCGACACCCAGCCCAGCTTGCCAAT.

GGCGGACTCAAACGCCGCTGA (SEQ ID NO:. 3) .

La secuencia de aminoácidos de FGFRlc humano (ÍSIúmero de Acceso al GenBank '??_075598) se proporciona: MWS KCLLFWAVLVTATLCTARPSPTLPEQAQPWGAPVEVESFLVHPGDLLQLRCRLRDDV QSINWLRDGVQLAESNRTRITGEEVEVQDSVPADSGLYACVTSSPSGSDTTYFSVNVSDAL PSSEDDDDDDDSSSEEKETDNTKPNRMPVAPY TSPEKMEKKLHAVPAAKTV FKCPSSGT PNPTLRWLKNGKEFKPDHRIGGYKVRYATWSIIMDSVVPS.DKGNYTCIVEÑEYGSINHTYQ LDVVERSPHRPILQAGLPANKTVALGSNVEFMCKVYSDPQPHIQWL HIEVNGSKIGPD L :PYVQILKTAGVNTTDKEMEVLHLRNVSFEDAGEYTCLAGNSIGLSHHSA LTVLEALEERP AVMTSPLYLEIIIYCTGAFLISCMVGSVIVYKMKSGTKKSDFHSQMAVHKLAKSIPLRRQV TVSADSSASMNSGVLLVRPSRLSSSGTPMLAGVSEYELPEDPR ELPRDRLVLGKPLGEGC FGQVVLAEAIGLDKDKP RVTKVAVK LKSDATEKDLSDLISEMEMMKMIGKHKNIINLLG ACTQDGPLYVI.VEYASKGNLREYLQARRPPGLEYCYNPSHNPEEQLSSKDLVSCAYQVARG MEYLASKKCIHRDLAARNVLVTEDNVMKIADFGLARDIHHIDYYKKTTNGRLPVK MAPEA LFDRIYTHQSDV SFGVLLWEIFTLGGSPYPGVPVEELFKLLKEGHRMDKPSNCTNELYMM RDGWHAVPSQRPTFKQLVEDL'DRIVALTSNQEYLDLSMPLDQYSPSFPDTRSSTCSSGED SVFSHEPLPEEPCLPRHPAQLANGGLKRR · (SEQ ID NO: A) .

Las proteínas, de enlace a antígenos descritas en la presente se enlazan a la porción extracelular de FGFRlc. Un ejemplo.de una región extracelular de FGFRlc es: MWS KCLLF AVLVTATLGTARPSPTLPEQAQPWGAPVEVESFLVHPGDLLQLRCRLRDDV QSINWLRDGVQLAESNRTRITGEEVEVQDSVPADSGLYACVTSSPSGSDTTYFSVNVSDAL PSSEDDDDDDDSSSEEKETDNTKPNRMPVAPY TSPEKMEKKLHAVPAAKTVKFKCPSSGT PNPTLR LKNGKEFKPDHRIGGYKVRYAT SIIMDSVVPSDKGNYTCIVENEYGSiNHTYQ LDVVERSPHRPILQAGLPANKTVALGSNVEFMCKVYSDPQPHIQWLKHIEVNGSKIGPDNL PYVQILKTAGVNTTDKEMÉVLHLRNVSFEDAGEYTCLAGNSIGLSHHSAWL'TVLEALEERP 'AVMTSPLY (SEQ ID NO:' 5).

Como se describe en la pre.sente, las proteínas FGFRlc también pueden incluir fragmentos. Como se usa en la presente, los términos¦ se usan de manera intercambiable para significar un receptor, en particular .y a menos que se especifique de otra manera, un receptor humano, que en asociación con ß-Klotho y ' FGF21 induce actividad de señalización del. tipo FGF21.

El término FGFRlc también incluye modificaciones post- traduccionales de la secuencia de aminoácido FGFRlc, por ejemplo, sitios de glicosilación ligados a N posibles. De esta manera, las proteínas de enlace a antigenos pueden enlazar a o generarse de proteínas glicosiladas en una o más de las posiciones. ß-Klotho Las proteínas de enlace a antígenos aquí descritas se enlazan a ß-Klotho, en particular ß-Klotho. ' humana.. La secuencia dé nucleotidos que codifica ß-Klotho humana (Número de Acceso al GenBank' NM_175737) se proporciona: ATGAAGCGAGGCTGTGCGGCAGGATCTCCAGGGAATGAATGGATTTTCTTCAG ¦ CACTGATGAAATAACGACACGCTATAGGAATACAATGTCCAACGGGGGATTGC . AAAGATCTGTCATCCTGTCAGCACTTATTCTGCTACGAGCTGTTACTGGATTC' TCTGGAGATGGAAGAGCTATATGGTCTAAAAÁTCCTAATTTTACTCCGGTAAA TGAAAGTCAGCTGTTTCTCTATGACACTTTCCCTAAAAACTTTTTCTGGGGTA TTGGGACTGGAGCATTGCAAGTGGAAGGGAGTTGGAAGAAGGATGGAAAAGGA CCTTCTATATGGGATCATTTCATCCACACACACCTTAAAAATGTCAGCAGCAC • ' GAATGGTTCCAGTGACAGTTATATTTTTCTGGAAAAAGACTTATCAGGCCTGG ATTTTATAGGAGTTTCTTTTTATCAATTTTCAATTTCCTGGCCAAGGCTTTTC CCCGATGGAATAGTAACAGTTGCCAACGCAAAAGGTGTGCAGTACTACAGTAC TCTTCTGGACGCTCTAGTGCTTAGAAACATTGAACCTATAGTTACTTTATACC . ¦ ACTGGGATTTGCCTTTGGCACTACAAGAAAAATATGGGGGGTGGAAAAATGAT . ACCATAATAGATATCTTCA7ATGACTATGCCACATACTGTTTCCAGATGTTTGG GGACCGTGTCAAATATTGGATTACAATTCACAACCCATATCTAGTGGCTTGGC ATGGGTATGGGACAGGTATGCATGCCCCTGGAGAGAAGGGAAATTTAGCAGCT GTCTACACTGTGGGACACAACTTGATCAAGGCTCACTCGAAAGTTTGGCATAA CTACAACACACATTTCCGCCCACATCAGAAGGGTTGGTTATCGÁTCAGGTTGG GAT-CTCATTGGATCGAGCCAAACCGGTCGGAAAACACGATGGATATATTCAAA TGTCAACAATCCATGGTTTCTGTGCTTGGATGGTTTGCCAACCCTATCCATGG GGATGGCGACTATCCAGAGGGGATGAGAAAGAAGTTGTTCTCCGTTCTACCCA TTTTCTCTGAAGCAGAGAAGCATGAGATGAGAGGCACAGCTGATTTCTTTGCC TTTTCTTTTGGACCCAACAACTTCAAGCCCCTAAACACCATGGCTAAAATGGG ACAAAATGTTTCACTTAATTTAAGAGAAGCGCTGAACTGGATTAAACTGGAAT ACAACAACCCTCGAATCTTGATTGCTGAGAATGGCTGGTTCACAGACAGTCGT GTGAAAACAGAAGACACCACGGCCATCTACATGATGAAGAATTTCCTCAGCCA GGTGCTTCAAGCAATAAGGTTAGATGAAATACGAGTGTTTGGTTATACTGCCT GGTCTCTCCTGGATGGCTTTGAATGGCAGGATGCTTACACCATCCGCCGAGGA TTATTTTATGT.GGATTTTAACAGTAAACAGAAAGAGCGGAAACCTAAGTCTTC AGCACACTACTACAAACAGATCATACGAGAAAATGGTTTTTCTTTAAAAGAGT CCACGCCAGATGTGCAGGGCCAGTTTCCCTGTGACTTCTCCTGGGGTGTCACT GAATCTGTTCTTAAGCCCGAGTCTGTGGCTTCGTCCCCACAGTTCAGCGATCC TCATCTGTACGTGTGGAACGCCACTGGCAACAGACTGTTGCACCGAGTGGAAG GGGTGAGGCTGAAAACACGACCCGCTCAA.TGCACAGATTTTGTAAACATCAAA AAACAACTTGAGATGTTGGCAAGAATGAAAGTCACCCACTACCGGTTTGCTCT GGATTGGGCCTCGGTCCTTCCCACTGGCAACCTGTCCGCGGTGAACCGACAGG CCCTGAGGTACTACAGGTGCGTGGTCAGTGAGGGGCTGAAGCTTGGCATCTCC GCGATGGTCACCGTGTATTATCCGACCCACGCCCACCTAGGCCTCCCCGAGCC TCTGTTGCATGCCGACGGGTGGCTGAACCCATCGACGGCCGAGGCCTTCCAGG CCTACGCTGGGCTGTGCTTCCAGGAGCTGGGGGACCTGGTGAAGCTCTGGATC ACCATCAACGAGCCTAACCGGCTAAGTGACATCTACAACCGCTCTGGCAACGA CACCTACGGGGCGGCGCACAACCTGCTGGTGGCCCAGGCCCTGGCCTGGCGCC TCTACGACCGGCAGTTCAGGCCCTCACAGCGCGGGGCCGTGTCGCTGTCGCTG CACGCGGACTGGGCGGAACCCGCCAACCCCTATGCTGACTCGCACTGGAGGGC GGGCGAGCGGTTGGTGCAGTTCGAGATCGCCTGGTTCGCCGAGCCGCTCTTCA AGACCGGGGACTACCCCGCGGCCATGAGGGAATACATTGCCTCCAAGCACCGA CGGGGGCTTTCCAGCTCGGCCCTGCCGCGCCTCACCGAGGCCGAAAGGAGGCT GCTCAAGGGCACGGTCGACTTCTGCGCGCTCAACCACTTCACCACTAGGTTCG TGATGCACGAGCAGCTGGCGGGCAGCCGCTACGACTCGGACAGGGACATCCAG TTTCTGCAGGACATCACGCGCCTGAGCTCCCCCACGCGCCTGGCTGTGATTGC CTGGGGGGTGCGCAAGCTGCTGCGGTGGGTCCGGAGGAACTACGGCGACATGG ACATTTACATCACCGCCAGTGGCATCGACGACCAGGCTCTGGAGGATGACCGG CTCCGGAAGTACTACCTAGGGAAGTACCTTCAGGAGGTGCTGAAAGCATACCT GATTGATAAAGTCAGAATCAAAGGCTATTATGCATTCAAACTGGCTGAAGAGA AATCTAAACCCAGATTTGGATTCTTCACATCTGATTTTAAAGCTAAATCCTCA ATACAATTTTACAAGAAAGTGATCAGCAGCAGGGGCTTCCCTTTTGAGAACAG TAGTTCTAGATGCAGTCAGACCCAAGAAAATACAGAGTGCACTGTCTGCTTAT TCCTTGTGCAGAAGAAACCACTGATATTCCTGGGTTGTTGCTTCTTCTCCACC CTGGTTCTACTCTTATCAATTGCCATTTTTCAAAGGCAGAAGAGAAGAAAGTT TTGGAAAGCAAAAAACTTAGAACACATACCATTAAAGAAAGGCAAGAGAGTTG TTAGCTAA (SEQ ID NO: 6) .

La secuencia de aminoácidos' de ß-Klotho humana ngitud completa (Número dé Acceso al GenBank NP_783864) es oporcionada: MKPGCAAGSPGNEWIFFSTDEITTRYRNTMSNGGLQRSVILSALTLLRAVTGF SGDGRAI SKNPNFTPVNESQLFLYDTFPKNFF GIGTGALQVEGS KKDGKG PSIWDHFIHTHLKNVSSTNGSSDSYIFLEKDLSALDFIGVSFYQFSISWPRLF PDGIVTVANAKGLQYYSTLL.DALVLRNIEPIVTLYHWDLPLALQEKYGGWKND TIIDIFNDYAT.YCFQ FGDRVKYWITIHNPYLVA HGYGTGMHAPGEKGNLAA VYTVGHNLIKAHSKVWHNYNTHFRPHQKGWLSITLGSHWIEPNRSENTMDIFK CQQS VSVLGWFANPIHGDGDYPEGMRKKLFSVLPIFSEAEKHEMRGTADFFA FSFGPNNFKPLNTMAKMGQNVSLNLREALNWIKLEYNNPRILIAENG FTDSR VKTEDTTAIYMMK FLSQVLQAIRLDEIRVFGYTAWSLLDGFEWQDAYTIRRG LFYVDFNSKQKERKPKSSAHYYKQIIRENGFSLKESTPDVQGQFPCDF.SWGVT ESVLKPESVASSPQFSDPHLYV NATGNRLLHRVEGVRLKTRPAQCTDFVNIK KQLEMLARMKVTHYRFALD ASVLPTGNLSAVNRQALRYYRCVVSEGLKLGIS AMVTLYYPTHAHLGLPEPLLHADG LNPSTAEAFQAYAGLCFQELGDLVKLWI TINEPNRLSDIYNRS.GNDTYGAAHNLLVAHALA RLYDRQFRPSQRGAVSLSL HADWAEPANPYADSHWRAAERFLQFEIAWFAEPLFKTGDYPAAMREYIASKHR ' RGLSSSALPRLTEAERRLLKGTVDFCALNHFTTRFVMHEQLAGSRYDSDRDIQ FLQDITRLSSPTRLAVIPWGVRKLLRWVRRNYGD DIYITASGIDDQALEDDR LRKYYLG YLQEVLKAYLIDKVRIKGYYAFKLAEEKSKPRFGFFTSDFKAKSS IQFYNKVISSRGFP.FENSSSRCSQTQENTECTVCLFLVQKKPLIFLGCCFFST LVLLLSIAIFQRQKRRKFWKAKNLQHI PLKKGKRVVS (SEQ ID NO: 7).

Las proteínas, de enlace a. antígenos aquí descritas enlazan la porción extracelular de ß-Klotho. Un ejemplo una región extracelular de ß-Klotho es: . MKPGCAAGSPGNE IFFSTDEITTRYRNTMSNGGLQRSVILSALILLRAVTGF SGDGRAI SKNPNFT.PVNESQLFLYDTFPKNFFWGIGTGALQVEGSWKKDGKG PSIWDHFIHTHLKNVSSTNGSSDSYIFLEKDLSALDFIGVSFYQFSISWPRLF PDGIVTVANAKGLQYYSTLLDALVLRNIEPIVTLYHWDLPLALQEKYGGWKND I ÍDIFNDYATYCFQMFGDRVKYWITIHNPYLVAWHGYGTGMHAPGEKGNLAA VYTVGHNLIKAHSKVWHNYNTHFRPHQKGWLSITLGSHWIEPNRSENTMDIFK' CQQSMVSVLGWFANPIHGDGDYPEG RKKLFSVLPIFSEAEKHEMRGTADFFA FSFGPNNFKPLNTMAKMGQNVSLNLREALNWIKLEYNNPRILIAENGWFTDSR VKTEDTTAIYMMKNFLSQVLQAIRLDEIRVFGYTAWSLLDGFEWQDAYTIRRG LFYVDFNSKQKERKPKSSAHYYKQIIRENGFSLKESTPDVQGQFPCDFSWGVT . ESVLKPESVASSPQFSDPHLYVWNATGNRLLHRVEGVRLKTRPAQCTDFVNIK QLEMLARMKVTHYRFALDWASVLPTGNLSAVNRQALRYYRCVVSEGLKLGIS AMVTLYYPTHAHLGLPEPLLHADGWLNPSTAEAFQAYAGLCFQELGDLVKLWI TINEPNRLSDIYNRSGNDTYGAAHNLLVAHALAWRLYDRQFRPSQRGAVSLSL .HADWAEPANPYADSHWRAAERFLQFEIAWFAEPLFKTGDYPAAMREYIASKHR RGLSSSALPRLTEAERRLLKGTVDFCALNHFTTRFVMHEQLAGSRYDSDRDIQ-, · FLQDITRLSSPTRLAVIPWGVRKLLRWVRRNYGDMDIYITASGlDDQALEDDR' LRKYYLGKYLQEVLKAYLIDKVRIKGYYAFKLAEEKSKPRFGFFTSDFKAKSS IQFYNKVISSRGFPFENSSSRCSQTQENTECTVCLFLVQKKP . (SEQ ID NO: 8. ) . La forma muriná de ß-Klotho, y fragmentos subsecuencias de la misma, pueden ser de uso en el estud y/o construcción, de las moléculas aquí proporcionadas. La secuencia de nucleótidos que codifica ß-Klotho muri'no (Número de Acceso al GenBank NM_031180) se proporciona:' ATGAAGACAGGCTGTGCAGCAGGGTCTCCGGGGAATGAATGGATT TTCTTCAGCTCTGATGAAAGAAACACACGCTCTAGGAAAACAATG TCCAACAGGGCACT.GCAAAGATCTGCCGTGCTGTCTGCGTTTGTT CTGCTGCGAGCTGTTACCGGCTTCTCCGGAGACGGGAAAGCAAT TGGGATAAAAAACAGTACGTGAGTCCGGTAAACCCAAGTCAGCT'G TTCCTCTATGACACTTTCCCTAAAAACTTTTCCTGGGGCGT-TGGG AGCGGAGCATTTGAAGTGGAAGGGAGTTGGAAGACAGATGGAAGA GGACCCTCGATCTGGGATCGGTACGTCTACTCACACCTGAGAGGT GTCAACGGCACAGACAGATCCACTGACAGTTACATCTT CTGGAA AAAGACTTGTTGGCTCTGGATTTTTTAGGAGTTTCTTTTTATCAG TTCTCAATGTCCTGGCCACGG'TTGTTTCCCAATGGAACAGTAGCA GCAGTGAATGCGCAAGGTCTCCGGTACTACCG GCACTTCTGGAC TCGCTGGTACTTAGGAATATCGAGCCGATTGTTACCTTGTACCAT TGGGATTTGCCTCTGACGCTCCAGGAAGAATATGGGGGCTGGAAA AATGCAACTATGAT AGATCTCTTCAACGACTATGCCACATA.CTGC TTCCAGACCTTTGGAGACCGTGTCAAA.TATTGGATTACAATTCAC AACCCTTAGC.TTGT GCTTGGCATGGGTTTGGCACAGGTAT.GCA GCACCAGGAGAGAAGGGAAATTTAACAGCTGTCTACACTGTGGGA . CACAACCTGATCAAGGCACAT TCGAAAGfGTGGCATAACTACGAC AAAAACTTCCGCCCTCATCAGAAGGGTTGGCTCTCCATCACCTTG GGGTCCCATTGGATAGAGCCAAACAGAACAGAGAACATGGAGGAC GTGATCAACTGCCAGCACTCCATGT.CCTCTGTGCTTGGATGGTTC GCCAACCCCATCCACGGGGACGGCGACTACCCTGAGTTCATGAAG ACGGGCGCCATGATCCCCGAGTTCTCTGAGGCAGAGAAGGAGGAG GTGAGGGGCACGGCTGATTTCTTTGCCTTTTCCTTCGGGCCCAAC AACTTCAGGCCGTCAAACACCGTGGTGAAAATGGGACAAAATGTA TCACTCAACTTAAGGCAGGTGCTGAACTGGATTAAACTGGAATAC' GATGACCCTCAAATCTTGATTTCGGAGAACGGCTGGTTCACAGAT AGCTATATAAAGACAGAGGACACCACGGCCAT C ACATGATGAAG AATTTCCTAAÁCGAGGTTCTTCAAGCAATAAAATTTGATGAAATC CGCGTGT TGGTTATACGGCCTGGACTCTCCTGGATGGCTTTGAG TGGCAGGATGCCTATACGACCCGACGAGGGCTGTTTTÁTGTGGAC TTTAACAGTGAGCAGAAAGAGAGGAAACCCAAGTCCTCGGCTCAT TACTACAAGCAGATCATACAAGACAACGGCTTCCCTTTGAAAGAG CCACGCCAGACATGAAGGGTCGGTTCCCCTGTGATTTCTCTTGG GGAGTCACTGAGTCTGTTCTTAAGCCCGAGTTTACGGTCTCCTCC CCGCAGTTTACCGATCCTCACCTGTATGTGTGGAATGTCACTGGC AAGAGATTGCTCTAGCGAGTGGAAGGGGTAAGGCTGAAAACAAGA CCATCCCAGTGCACAGATTATGTGAGCATCAAAAAACGAGTTGAA ATGTTGGCAAAAATGAAAGTCACCCACTACCAGTTTGCTCTGGAC TGGACCTCTATCCTTCCCACTGGCAATCTGTCCAAAGTTAACAGA CAAGTGTTAAGGTACTATAGGTGTGTGGTGAGCGAAGGACTGAAG CTGGGCGTCTTCCCCÁTGGTGACGTTGTACCACCCAACCCACTCC CATCTCGGCCTGCCCCTGCCACTTCTGAGCAGTGGGGGGTGGCTA AACATGAACACAGCCAAGGCCTTCCAGGACTACGCTGAGCTGTGC TTCCGGGAGTTGGGGGACTTGGTGAAGCTCTGGATCACCATCAAT GAGCCTAACAGGCTGAGTGACATGTACAACCGCACGAG.TAATGAC ACCT ACCGTGCAGCCCACAACCTGATGATCGCCCATGCCCAGGTC TGGCACCTCTATGATAGGCAGTATAGGCCGGTCCAGCATGGGGCT GTGTCGCTGTCCTT ACATTGCGACTGGGCAGAACCTGCCAACCCC TTTGTGGATTCACACTGGAAGGCAGCCGAGCGCTTCCTCCAGTTT GAGATCGCCTGGTTTGCAGATCCGCTCTTCAAGACTGGCGACTAT CCATCGGTTATGAAGGAATACATCGCCTCCAAGAACCAGCGAGGG CTGTCTAGCTCAGTCCTGCCGCGCTTCACCGCGAAGGAGAGCAGG CTGGTGAAGGGT ACCGTCGACTTCTACGCACTGAACCACTT.C ACT ACGAGGTTCGTGATACACAAGCAGCTGAACACCAACCGCTCAGTT GCAGACAGGGACGTCCAGTTCCTGCAGGACATCACCCGCC AAGC TCGCCCAGCCGCGTGGCTGTAACACCGTGGGGAGTGCGCAAGCTC CTTGCGTGGATCGGGAGGAACTACAGAGACAGGGATATCTACATC AGAGCCAATGGCATCGATGACCTGGCTCTAGAGGATGATCAGATC CGAAAGTACTACTTGGAGAAGTATGTCCAGGAGGCTCTGAAAGCA TATCTCATTGACAAGGTCAAAATCAAAGGCTACTATGGATTCAAA CTGACTGAAGAGAAATCTAAGCCT AGATTTGGAT TTTCACCTCT GACTTCAGAGCTAAGTCCTC GTCCAGTTTTAGAGCAAGCTGATC AGCAGCAGTGGCCTCCCCGCTGAGAACAGAAGTCCTGCGTGTGGT CAGCCTGCGGAAGACACAGACTGCACCATTTGCTCATTTCTCGTG GAGAAGAAACCACTCATCTTCTTCGGTTGCTGCTTCATCTCCACT CTGGCTGTACTGGTATCCATCACCGTTTTTCATCATCAAAAGAGA AGAAAATTCCAGAAAGCAAGGAACTTACAAAATATACCATTGAAG AAAGGCCACAGCAGAGTTTTCAGC AA ( SEQ ID NO : 9 ) ..

La secuencia de aminoácidos, de ß-Klotho murino de longitud completa (Número de Acceso al GenBank ??_1G2457.) se proporciona: ' .

M TGCAAGSPGNEWIFFSSDER TRSRKTMSNRALQRSAVLSAFVL LRAVTGFSGDGKAIWDKKQYVSPVNPSQLFLYDTFPKNFSWGVGTG AFQVEGSWKTDGRGPSIWDRYVYSHLRGVNGTDRSTDSYIFLEKDL LALDFLGVSFYQFSISWPRLFPNGTVAAVNAQGLRYYRALLDSLVLR NIEPIVTLYHWDLPLTLQEEYGGWKNATMIDLFNDYATYCFQTFGD RV YWITIHNPYLVAWHGFGTGMHAPGEKGNLTAVYTVGHNLIKA HSKVWHNYDKNFRPHQKGWLSITLGSHWIEPNRTDNMEDVI CQH SMSSVLGWFANPIHGDGDYPEFMKTGAMIPEFSEAEKEEVRGTADF FAFSFGPN FRPSNTVVKMGQNVSLNLRQVLNWIKLEYDDPQILISE NGWFTDSYIKTEDTTAIYMMKNFLNQVLQAIKFDEIRVFGYTAWTL LDGFEWQDAYTTRRGLFYVDFNSEQKERKPKSSAHYYKQIIQDNGF PLKESTPDMKGRFPCDFSWGVTESVLKPEFTYSSPQFTDPHLYVWN VTGNRLLYRVEGVRL TRPSQCTDYVSIKKRVEMLAKMKVTHYQF ALDWTSILPTGNLSKVNRQVLRYYRCVVSEGLKLGVFPMVTLYHPT HSHLGLPLPLLSSGGWLNMNTAKAFQDYAELCFRELGDLVKLWITI NEPNRLSDMYNRTSNDTYRAAHNLMIAHAQVWHLYDRQYRPVQH GAVSLSLHCDWAEPANPFyDSHWKAAERFLQFEIAWFADPLFKTGD ; YPSVMKEYIASKNQRGLSSSVLPRFTAÍCESRLVKGTVDFYALNHFTT RFVIHKQLNTNRSVADRDVQFLQDITRLSSPSRLAVTPWGVRKLLA ' WIRRNYRDRDIYITANGIDDLALEDDQIRKYYLE YVQEAL AYLID KVKIKG YYAFKLTEÉKSKPRFGFFTSDFRAKS S VQF YSKLIS S SGLP A ENRSPACGQPAEDTDGTICSFLVEKKPLIFFGCCFISTLAVLLSITVFH HQKRRKFQ ARNLQNIPLKKGHSRVFS (SEQ ID NO: 10).

Como se describe en la presente, las proteínas ß-Klotho también pueden, incluir fragmentos. . Como se usa en la presente, los términos se usan de manera intercambiable para significar un co-receptor, en particular y a menos que se especifique de otra, manera, un có-.receptor humano , qué /en asociación con FGFRlc y FGF21 induce actividad de señalización del tipo FGF21.

El término ß-Klotho también incluye modificaciones post-traduccionales de la secuencia de aminoácido ' ß-Kloth'o, por ejemplo, sitios de. glicosilación ligados a N posibles. De esta manera, las proteínas de enlace a antígenqs pueden enlazar a o generarse de proteínas glicosiladas en una o más de las posiciones. .

Proteínas de enlace a antígenos que enlazan específicamente, a un complejo que comprende ß-Klotho, y un FGFR (por ejemplo, FGFRlc, . FGFR2c , o FGFR3c) Una variedad de agentes selectivos de enlace útiles para modular la señalización del tipo FGF21 se' proporcionan. Estos agentes incluyen,, por ejemplo, proteínas de enlace a antígenos que contienen un dominio de enlace a. antí.geno (por ejemplo, .anticuerpos de cadena sencilla, anticuerpos de dominio, hemicuerpós, inmunoadhesiones, y polipéptidos con una región de enlace a antígenos) y enlazan específicamente 'a un complejo que comprende ß-Klotho y al. menos, uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c y (iii) FGFR3c, en particular un complejo que comprende ß-Klotho humana y una FGFR humano, (por ejemplo, FGFRlc humano, FGFR2c humano o FGFR3c. humano) . Algunos de los agentes, por ejemplo, son útiles en imitar el efecto de señalización generado in vivo por la asociación de un FGFR (por ejemplo, FGFRlc, FGFR2c o FGFR3c.) con ß-Klotho y con FGF21, y pueden de esta manera' usarse para potenciar o modular una o .más actividades asociadas con la señalización del tipo FGF21.

En general, las proteínas de enlace a antígenos que se proporcionan típicamente comprenden uno. o más CDRs como .se describe en la presente' (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ó 6 CDRs) . En algunas modalidades las proteínas de enlacé a antígenos naturalmente se expresan por clones, mientras que en otras modalidades, la proteína de enlace a antígenos puede comprender (a) una estructura de armazón del polipéptido y. (b) uno . o más CDRs que se insertan en y/o unen a la estructura de armazón del polipéptido. En algunas de estas modalidades una CDR forma un componente de las cadenas pesadas o ligeras expresadas por los clones descritos en la presente; en otras modalidades una CDR puede insertarse en un armazón en el cual la CDR no se expresa naturalmente. Una. estructura de armazón, del polipéptido puede tomar una variedad de diferentes formas. Por ejemplo, una estructura de armazón del polipéptido puede ser, o comprender, el armazón de un anticuerpo que se presenta naturalmente, o fragmento o variante de la misma, o puede estar completamente ¦ sintético en la naturaleza.. Los ejemplos de varias' estructuras de proteína de enlace a antígenos se describen además a continuación.

En algunas modalidades en las cuales la proteína de enlace a antígenos comprende (a) una estructura de armazón del polipéptido y . (b) una o más CDR que se insertan en y/o unen a la estructura de armazón del polipéptido, la estructura de armazón del polipéptido de una proteína de enlace a antigenos es un anticuerpo ó se deriva¦ de un anticuerpo, incluyendo, pero no limitado a, anticuerpos monoclonales , anticuerpos · biespecíficos, ' ¦ minicuerpos, anticuerpos de dominio., anticuerpos sintéticos (algunas veces referidos en la . presente como "imitaciones de anticuerpos"), anticuerpos quiméricos, anticuerpos humanizados, fusiones de anticuerpo (algunas veces -referidos como "conjugados, de anticuerpo") , y porciones o fragmentos de cada uno, respectivamente. En algunos casos, la proteína de. enlace a antígenos es un fragmento inmunológico de un anticuerpo (por ejemplo, un Fab, un .Fab', un F(ab' ) 2> o un scFv) .

Ciertas de las proteínas de enlace a antígenos como · se proporcionan en la. ¦ presente enlazan específicamente a ¦ un complejo que comprende ß-Klotho y uño de (i) .· FGFRlc, (ii) FGFR2c,. y (iii). FGFR3c, , incluyendo las formas humanas de estas proteínas. En una modalidad, una proteína de enlace a antígenos enlaza específicamente a tanto FGFRlc humano que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4, y ß-Klotho humana que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 7., y en otra modalidad una proteina de enlace a antigenos enlaza específicamente a tanto FGFRlc humano que comprende la secuencia de aminoácidos de la .SEQ ID NO: 4 y ß-Klotho humana que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 7 e induce la señalización del . tipo FGF21. De esta manera, una proteina de enlace a antígenos puede, pero no necesariamente, inducir señalización del tipo. FGF21.

Estructura de Proteínas de enlace a antígenos · Algunas de las proteínas de. enlace a antígenos que enlazan específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) ' FGFR3c, , incluyendo las formas humanas, de estas proteínas que se proporcionan en la presente tienen una estructura típicamente asociada con anticuerpos que. se presentan naturalmente. Las' unidades estructurales de . estos anticuerpos típicamente comprenden uno o más tetrámeros, cada uno compuesto de dos pares idénticos de cadenas de polipéptidos , aunque algunas especies de,' mamíferos también producen anticuerpos que tienen solamente una cadena pesada sencilla. En un anticuerpo típico, cada par o couplet incluye una cadena "ligera" de longitud , completa : (en determinadas modalidades, alrededor de 25 kDa) y una cadena "pesada" de. longitud completa (en determinadas modalidades, alrededor de 50-70 k.Da) . Cada' cadena de inmunoglobulina individual está , compuesta . de diversos "dominios .'.de inmunoglobulina, " · cada uno consiste de aproximadamente 90 hasta 110 aminoácidos y que expresan un patrón de pliegue característico. Estos dominios son las unidades básicas de las cuales los polipéptidos -de anticuerpo se .componen. La porción de terminal ¦ amino de cada cadena típicamente incluye un dominio variable que es responsable del reconocimiento de antígenos. La porción de terminal carboxi se conserva más evolutivamente ' que el otro extremo de la cadena y se refiere como la "región constante" o "región C". Las cadenas ligeras humanas generalmente' se clasifican como cadenas · ligeras kappa ("K") y lambda ("?") , y cada una de estas contiene un dominio 'variable y un dominio constante. Las cadenas pesadas típicamente se clasifican como cadenas mu, delta, gamma,- alfa, o epsilon, y estas definen el isotipo del anticuerpo como IgM, IgD, IgG, IgA, y IgE, respectivamente. El IgG tiene diversos subtipos, incluyendo, pero no limitado a, .IgGl, IgG2, IgG3,..e IgG4. Los subtipos IgM incluyen IgM, y IgM2. Los subtipos IgA incluyen IgAl y IgA2.. En humanos, los isotipos IgA e IgD contienen cuatro cadenas pesadas y cuatro cadenas ligeras; los isotipos IgG e IgE¦ contienen dos cadenas pesadas' y dos cadenas ligeras; y el isotipo: IgM contiene cinco cadenas pesadas y cinco cadenas ligeras. La región C de cadena "pesada típicamente comprende . uno o más dominios que pueden ser responsables para la función del . efector. El número de dominios de región constante de cadena pesada dependerá, del isotipó. Las cadenas' pesadas IgG, por ejemplo, cada una contiene tres dominios de región C conocidos como-CHl, CH2. y CH3. Los anticuerpos que se proporcionan' pueden tener cualquiera de estos isotipos y subtipos. En determinadas modalidades, una protéína de enlace a antígenos que enlaza específicamente uno ó más de un complejo que comprende ß-Klotho y uno de (i). FGFRlc, (ii) FGFR2c, y. (iii). FGFR3c, es un anticuerpo del subtipo IgGl, IgG2, o IgG4.

En cadenas pesadas y ligeras de longitud completa, las regiones variables y- constantes se unen por una región "J" de alrededor de doce o más aminoácidos, con la cadena pesada también incluyendo una región "D" de alrededor de más de diez aminoácidos. Ver, por ejemplo, Fundamental Immunology, 2a ed., Capítulo 7 (Paul, W., ed. ) 1989, New York: Raven Press (incorporada en la presente por referencia en su totalidad para todos los propósitos). Las regiones variables, de cada par de cadena pesada/ligera típicamente forman el sitio de enlace a antígeno .

Un ejemplo de un dominio constante pesado IgG2 de un anticuerpo monoclonal ejemplar que enlaza específicamente.- a un complejo que.' comprende ß-Klotho y ;al menos uno de- (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, tiene la. secuencia de aminoácido : ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVS NSGALTSGVHTF PAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVEC PPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVD .'¦ GVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQD LNGKEYKCKVSNKGLPAPIE KTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVE ESNGQ PENNY TTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQK ' SLSLSPGK (SEQ ID NO: 11) .

Un ejemplo dé un. dominio constante ligero kappa de un anticuerpo .monoclonal .ejemplar que enlaza aun complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, tiene la secuencia de aminoácido: .

¦ TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQE SVTEQDSKDSTYSLS.STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 12) .

Un ejemplo de un dominio constante ligero lambda de un anticuerpo monoclonal ejemplar que enlaza a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, tiene la secuencia de aminoácidos: QPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVE TT PSKQSNNKYAASSYLSLTPEQ KSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS (SEQ ID NO: 13) .

Las regiones: . variables de cadenas de irimurioglobulina generalmente muestran la misma estructura general, que comprende regiones de estructura relativamente conservadas (FR) unidas por tres regiones hipervariables, ' más a menudo nombradas "regiones determinantes de la complementariedad" ..o CDRs. Las CDR de. las dos cadenas de cada .par de cadena pesada/cadena ligera ' mencionadas arriba típicamente se alinean por las regiones de estructura para formar una estructura que se enlaza específicamente con un . epítopo específico en la.- proteína objetivo ' (por ejemplo,, un, complejo que comprende ß-KÍotho y al menos uno de (i) FGFRlc, . (ii) FGFR2c, y ( iii ) FGFR3c . De la terminal N hasta la terminal C, las regiones variables de cadena pesada y ligera que se presentan naturalmente ambas típicamente conformadas . en el siguiente orden de estos elementos: . FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 y. FR4. Un sistema de numeración se ha creado para asignar números a los' aminoácidos que ocupan posiciones en cada uno de estos dominios. Este sistema de numeración se define en Kabat et al., (1991) "Sequences of Proteins of Immuno.iogicaL Interest", 5a. Edición, US Dept. of Health and Human Services, PHS, NIH, NIH Publication no. 91-3242. Aunque se- presentan usando el sistema de nomenclatura de Kabat, como se desea, las CDRs. aquí descritas también pueden redefinirse de acuerdo a un esquema .de nomenclatura alternativa, tal como aquella de Chothia '. (Ver Chothia & Lesk, 1987,.: J. Mol. Biol. 196: 901-917;· Chothia . et al., 1989, Nature 342 : 878-883 o Honegger & Pluckthun, .2001, J. Mol. Biol . 309 : 657-670. ..

Las diversas regiones variables de cadena ligera . y cadena pesada de proteínas de enlace . a . antígenos proporcionadas en la presente se describen en la Tabla 2. Cada una de estas, regiones variables puede unirse 'a- las regiones constantes de cadena ligera y pesada de arriba para formar una cadena ligera y pesada de anticuerpo completo, respectivamente. Además, cada una de las secuencias de cadéna ligera y pesada así generadas pueden combinarse para formar una' estructura de anticuerpo completo. Debe entenderse que las regiones variables de cadéna pesada, y cadena ligera proporcionadas en la presente también pueden enlazarse a otros dominios constantes qué tienen secuencias diferentes que las secuencias ejemplares enlistadas arriba.

Los ejemplos específicos de algunas dé. las cadenas pesadas y ligeras de longitud completa de los anticuerpos que se proporcionan y sus secuencias de aminoácidos correspondientes se resumen en las Tablas 1A y IB. La Tabla 1A muestra secuencias de cadena ligera ejemplares, y la Tabla IB muestra secuencias de cadena pesada ejemplares.

Tabla 1A - Secuencias de Cadena Ligera de Anticuerpo Ejemplares Tabla IB - Secuencias de Cadena Pesada de Anticuerpos Ejemplares 20 ¦ Cada una de las cadénas pesadas ejemplares (Hl, H2, H3 etc.) listadas en la Tabla IB, infra, puede .combinarse con cualquiera de las- cadenas ligeras ejemplares que se muestran en la Tabla 1A, infra,- . para formar un anticuerpo. Ejemplos de tales combinaciones incluyen Hl combinado con cualquiera de Ll . hasta L100;' H2 combinado con cualquiera de Ll hasta L100; H3 combinado con cualquiera de Ll hasta ¦ L100, . y. asi sucesivamente. En algunos casos, los anticuerpos incluyen al menos una cadenas pesada y una cadena ligera de aquellas enlistadas en las .Tablas 1A y. IB, infr'a; ejemplos ¦ particulares de apareamientos de cadenas ligeras y cadenas pesadas incluyen Ll con Hl, L2 con Hl, L3 "con H2 o H3, L · con H4, L5 con H5, L6 con H6, L7 con H6, L8 con H7 o H8, L'9 con • H9, LIO. con H9, Lll con H10, L12 con Hll, L13. con ?12, L13 con H14, L14 con H13, L15 con H14, L16 con H15,'. L.17 con H16, ' L18 con H17, L19 "con H18, L20 con H19,. L21 con H20, L22 con H21, L23 con H22, L24 con H23, L25 con H24, L26 con H25, L27 con H26, L28 con ?27, L29 con.H28, L30 con H29, L3l con ?30, L32 con H31, L33 con H32, L34 con H33,. L35 con- H34, L36 con ?35, L37 con H36, L38 con H37, L39 con H38, L40' con H39, L41 con H40, L42 con H41, L43 con H42, L44 con H43, L45 con H4.4, L46 con H45, L47 con H46, L4.8 con H47, L49 con H48, L50¦ con H49, L51 con H50, L52 con H51, L53 con H52, L54 con H53, L55 !con H54, y L56 con H54, L57 con H54, L58 con. H55, L59 con H56, L60 con H57, L61 con H58, L62 con H59, L63- con H60, L.64 con Hl, L65 con H62, L66 con H63, L67 con H64,.- L68 con H65, L69 con H66, L70 con H67, L71 con H68, L72 con H69, L73 con H70, L74 con H70, , y L75 con H70, L76 con H71, ' L77 con H72, L78 con H73, L79 con H74, L80 con H75,. L81 con H76, L82 con H77, L83 con H78, L84 con H79, L85 con H80, L86" con H81, L87 con H82', L88 con H86, L89 con H83, L90 con H84, L91 con H85, ¦·'¦ . 163 L92 con H87, L93. con ?88., L94 con H88, L95 con H89, L96 con H90 , L97 con H91, L98 con H92, L99 con H33, y .L100 con H94. ; Además, de las proteínas de enlace a antigenos que comprenden una cadena pesada . una ligera a partir, del mismo clon, una , cadena pesada de un primer clon puede formar pares con una , cadena ligera de un segundo clon (por ejemplo, una cadena 1 pesada de un primer clon formando pares con una cedan ligera i de un segundo clon o una cadena ' pesada de un primer clon formando pares con una cedan ligera de un segundo clon). .En ¡general, tales . formaciones de pares pueden incluir VL con 90% o mayor homología ' que puede formar pares con la.' cadena . pesada < del clon que se presenta naturalmente. . . .

• ".- En algunos' casos, los anticuerpos comprenden dos cadenas .pesadas diferentes y dos cadenas ligeras diferentes listadas 'en las Tablas 1A y IB, infra. En otros casos, los anticuerpos ¡contienen dos cadenas ligeras idénticas y dos cadenas pesadas idénticas. Como un ejemplo, un . anticuerpo o fragmento ¦ linmunológicamente funcional puede incluir dos cadenas ligeras ¡Ll con dos cadenas pesadas Hl, dos cadenas ligeras L2 con dos ,cadenas pesadas Hl, dos L3 cadenas ligeras con dos cadenas pesadas H2 o dos cadenas- pesadas H3, dos cadenas ligeras L4 con dos cadenas pesadas H4, dos cadenas ligeras L5 con dos cadenas pesadas H5, dos cadenas ligeras L6 con dos' cadenas pesadas H6,. dos cadenas ligeras L7 con dos cadenas pesadas H6, dos. cadenas ligeras L8 con dos cadenas pesadas H7 o dos cadenas pesadas H8 , dos cadenas ligeras L9 con dos cadenas pesadas . H9, dos cadenas ligeras LIO coh dos cadenas pesadas I H9, dos¦ cadenas ligeras Lll con dos cadenas pesadas. HlO, dos j cadenas ligeras L12 con dos cadenas pesadas Hll, dos cadenas ligeras L13 con dos cadenas pesadas H12, dos cadenas ligeras L13 con dos cadenas pesadas H14, dos cadenas ligeras L14 con ¡dos cadenas pesadas H13, dos cadenas ligeras L15 con dos I cadenas pesadas H14, dos cadenas' ligeras L16 con dos cadenas pesadas H15, dos cadenas ligeras L17 con dos cadenas pesadas ?16, dos cadenas ligeras L18 con dos cadenas pesadas H17, dos cadenas ligeras L19 con dos cadenas pesadas H18, dos cadenas ligeras . L20 con dos cadenas pesadas H19, dos cadenas, ligeras !L21 con dos cadenas pesadas H20, dos cadenas ligeras L22 con idos cadenas pesadas H21, dos cadenas ligeras L23 con. dos ¡cadenas- pesadas H22, dos cadenas ligeras L24 con dos cadenas pesadas H23, dos cadenas ligeras L25 con dos cadenas pesadas H24, dos cadenas ligeras. L26 con dos cadenas pesadas H25, dos 'cadenas ligeras L27 con dos cadenas pesadas H26, dos cadenas ligeras . L28 con dos cadenas pesadas H27, dos cadenas ligeras L29 con dos cadenas pesadas H28, dos cadenas ligeras L30 con dos cadenas pesadas H29, dos cadenas . ligeras L31 con dos cadenas pesadas H30, dos cadenas ligeras L32 con dos; cadenas pesadas H31, dos cadenas ligeras L33 con dos cadenas pesadas H32, dos cadenas ligeras L34 con dos cadenas pesadas ?33, dos cadenas L35 con dos' cadenas pesadas H34, dos cadenas L36 con dos cadenas pesadas H35, dos cadenas ligeras L37 con dos cadenas pesadas H36, dos cadenas ligeras L38 con dos cadenas pesadas H37, dos cadenas ligeras L39 con dos cadenas pesadas H38, dos cadenas ligeras L40 con dos cadenas pesadas H39, dos cadenas ligeras L41 con dos cadenas . pesadas H40, dos cadenas ligeras L42 con dos cadenas pesadas H41, dos cadenas ligeras L43 con dos cadenas pesadas H42, dos cadenas ligeras L44 con dos cadenas pesadas H43, dos cadenas ligeras L45 con dos cadenas' pesadas H44, dos cadenas ligeras L46 con dos cadenas ¦ pesadas H45., dos. cadenas ligeras L47 con dos cadenas pesadas H46, dos cadenas ligeras L48 con dos cadenas pesadas H'47, dos cadenas ligeras L49 con dos cadenas pesadas H48., .dos cadenas ligeras. L50 con dos cadenas pesadas H49, dos cadenas ligeras L51 con dos cadenas pesadas H50, dos cadenas ligeras L52 con dos cadenas pesadas ?51, dos cadenas ligeras. L53 con dos cadenas pesadas H52, dos cadenas ligeras L54 con dos cadenas pesadas H53, dos cadenas ligeras L55 con dos cadenas pesadas H54, y dos cadenas ligeras L56 con dos cadenas pesadas H54, dos cadenas ligeras L57 con dos cadenas pesadas' H54, dos cadenas ligeras L58 con dos cadenas pesadas H55, dos cadenas ligeras L59 con dos cadenas pesadas H56, dos cadenas igeras L60 con dos cadenas pesadas H57, dos cadenas ligeras L61 con ¡ dos cadenas pesadas H58, dos cadenas ligeras L62 con dos , cadenas pesadas H59, dos cadenas ligeras L63 con dos cadenas pesadas H60, dos cadenas ligeras L64 con .dos. cadenas pesadas j Hl, dos cadenas ligeras L65 con dos cadenas pesadas H62, dos ; cadenas ligeras L66 con dos cadenas pesadas .H63, dos cadenas ¡ ligeras L67 con dos cadenas pesadas H6 , dos cadenas ligeras ¡ L68 con dos cadenas pesadas H65, dos cadenas ligeras- L69 con ! |dos . cadenas pesadas H66, dos cadenas .ligeras L70 con dos i ¦ •cadenas pesadas H67, dos cadenas ligeras L71 con dos cadenas ¡pesadas H68, dos cadenas ligeras L72 con dos cadenas pesadas |H69, dos cadenas, ligeras L73 con dos cadenas pesadas H70, dos ¡cadenas ligeras 1,74 con dos cadenas pesadas H70, y dos ¡cadenas ligeras L75 con dos cadenas pesadas H70, dos cadenas , ¡ligeras L76 con dos cadenas pesadas H71, dos cadenas ligeras ¡L77 con dos cadenas pesadas H72, dos cadenas ligeras L78 con |dos- ' cadenas¦ pesadas H73, dos cadenas ligeras L79 con dos ¡cadenas pesadas H74, . dos cadenas ligeras. L80 con dos cadenas ¡pesadas H75, dos cadenas ligeras L81 con dos cadenas pesadas ?76, dos cadenas ligeras L82 con dos cadenas pesadas H77, dos. ¡cadenas, ligeras L83 con dos cadenas pesadas H78, dos cadenas ligeras L84 con dos cadenas pesadas H79, dos cadenas .ligeras L85 con dos cadenas pesadas H80, dos cadenas ligeras. L86 con dos cadenas pesadas H81, dos cadenas ligeras- L87 con dos cadenas pesadas H82 dos cadenas ligeras L88 con dos cadenas pesadas H86, dos cadenas ligeras L89 con dos cadenas pesadas H83, dos cadenas ligeras L90 con dos cadenas pesadas H84, dos cadenas ligeras L91 con dos cadenas pesadas H85, dos cadenas ligeras L92 con dos cadenas pesadas H87, dos cadenas ligeras L93 con dos cadenas pesadas H88, dos cadenas ligeras L94 con dos cadenas pesadas H88, dos cadenas ligeras L95 con dos cadenas pesadas H89, dos cadenas ligeras L96 con dos cadenas pesadas H90, dos. cadenas ligeras L97 con dos cadenas pesadas H91, dos cadenas ligeras L98 con dos cadenas pesadas H92, dos cadenas ligeras L99 con dos cadenas pesadas H93, y dos cadenas ligeras L100 con dos cadenas pesadas H94, asi como otras - combinaciones similares de pares que comprenden las cadenas ligeras y pares de cadenas .pesadas como se listan en las Tablas 1A y IB, infra.

En otro . aspecto de la descripción actual, se proporcionan los "hemicuerpos" . Un hemicuerpo es una proteina de enlace a antigenos monovalente que comprende (i) una cadena ligera -intacta, y (ii) una cadena pesada fusionada a una región Fe .{por ejemplo, una región Fe IgG2. de SEQ ID NO: 11), opcionalménte por medio de una ligadura. La ligadura puede ser una ligadura (G S)X donde "x" es un entero distinto de cero {por ejemplo, (G4S)2, (G4S)3, (G4S)4, (648)5, (G4S)6, (G4S)7, , (G4S)8, - (G4S-)9,. (G4S)'io, SEQ ID NOs:208-216 'respectivamente). . . Los hemicuerpos pueden construirse usando los componentes¦¦ de: cadena ligera pesada proporcionados. Otras proteínas de enlace a antigenos que se proporcionan ¡ son variantes de , anticuerpos ·. formados por combinación de . las ¡cadenas ligeras y pesadas mostradas en las Tablas 1A y IB y 6A, \ ínfra y ' comprenden cadenas pesadas . y/o ligeras .. que . cada una ' tiene al menos 70%, .75%,. 80%, 85%, 90%, 95%,. 96%, 97%, 98% o 99% : de identidad a la secuencias de aminoácidos de estas cadenas, i En algunos' casos, . tales . anticuerpos incluyen al menos una cadena pesada y una cadena ligera, mientras que en otros casos las formas' variantes contienen dos cadenas ligeras idénticas y dos i cadenas pesadas, idénticas. i ¦ i · ¦ ¦'. ' ¡Dominios Variables de Proteínas de enlace a antigenos : También se proporcionan proteínas de. enlace a . antígenos ¡que contienen una región variable de ., cadena pesada de ¡anticuerpos seleccionada del grupo que consiste en. VH1, VH2, 'vH3, VH4, VH5, VH6, VK7, VH8, VH9, VH10, VH11, VH12, VH13", VH14, ;VH15, VH16, VH17, . VH18, V„19, VH20, VH21 VH22, VH23,. yH24, VH25, ¡VH26, VH27, VH28., VRT29, VH30, VH31, VH32, VH33, VH34, VH35, VH36, VH37, VH38, VH39, VH40, VH41, VH42, VH43,. VH44, VH45, VH46, VH47, VH48, VH49, VH50,. VH51, VH52, VH53, VH54, VH55, VH56, VH57, VH58, VH59, VH60, VH61, VH62, VH63, VH64, VH65, VH66, VH67, VH68, VH69, VK70, VK71, VH72, VH73, VH74, VH75, VH76, VH77, VH78, VH79, VH80, 81, VH82, VH83, VH84, VH85, VH 86, VH 87, VH88, VH89, VH90, i ¦ .... - · .¦' VH91, VH92, VH93, y VH94 como se muestra en la! Tabla 2B y/o una región variable. de cadena ligera de anticuerpos seleccionada del grupo que consiste en VL1, VL2, VL3, VL4, VL5, ! vL6, VL7, VL8, V L9, VL 10, VL 11, V L12, VL13> VL14, VLI 5, V-L.16, VL17, VL18, VLI 9, VL20, VL21, VL22, VL23, VL24, VL25, VL26,. VL27, ¦i VL28, VL29, VL30, VL31, VL32., VL33, VL34 , VL35, VL36, VL37, VL38, ¡VL39, VL'40, VL 1, VL4,2, VL43, VL44, VL45, VL46, VL4.7, VL VL49, 1 48,.

'|VL50, VL51, VL52, VL53, VL54, VL55, VL56, VL57, VL58, VL59, VL60, VL61-, VL62, VL63, VL64, VL6-5, VL66, VL67, VL68, VL69, VL70, V,71, ; vL72, VL73, VL74, VL75, VL 6, VL77, VL78, VL79, VL80, VL81, VL82, VL83, VL84, VL85, VL8.6,. VL87, VL88, VL'89, VL90, VL91, VL92, VL93, ! vL94, VL95, VL96, VL97, VL98, VL99 y VL100 como se muestra en ¡la Tabla 2A, y fragmentos inmunológicamente funcionales, ¡derivados, muteinas y variantes de estas regiones variables 'de. cadena pesada y cadena ligera.

¡Tabla 2A - Cadenas Ligeras Variables (VL) de Anticuerpo i '·.·¦ ¦ - ¦ Ejemplares Tabla 2B | i Cadenas Pesadas Variables de Anticuerpo Ejemplares (VH) ¡ í I I I ¡ Tabla 2C Secuencia de codificación para Cadenas Ligeras Variables (VL) de Anticuerpos i. ? I 1 ; Tabla 2D - Secuencia de codificación para Cadenas Pesadas Variables (VH) de Anticuerpo i 4 I I I Cada una de las regiones variables de cadena pesada enlistadas en la Tabla 2B pueden combinarse con cualquiera de las regiones variables de cadena ligera mostradas en la Tabla 2A para formar una proteina de enlace a antigenos. Los ejemplos de tales combinaciones incluyen VH1 combinado con cualquiera de VL 1,. VL2, VL3, VL4, VL5,. V L6, VL 7, VL8, VL9, VL10, |vLn, VL12, VL13, VL1 , VL15, VL16, VL17, VL18, VL19, VL20, VL21, VL22, VL23, VL24, VL25,. VL26, VL27, VL28, VL29, VL30, VL31, VL32, VL33, VL34, VL35, VL36, VL37, VL38, VL39, VL40, VL-41, VL42, VL43-, VL44, VL45, VL46, V,, 7, VL48, VL49, VL50, VL51, VL52, VL53, VL54 , VL55, VL56, V¿57, VL58, VL59, VL60, VL61, VL62, VL63, vL64, VL65, VL66, VL67, VL68, VL69, VL70, VL71, VL72, VL73, VL74 , VL75, VL7.6, yL77, VL78, VL79, VL80, VL81, VL82, VL83, VL8 , VL85, VL86, VL87, VL88, VL89, VL90, VL91, VL92, VL93, VL94, VL95, VL96, VL97, VL98, VL99 y VL.1'00; VH 2 combinado con cualquiera de VL1, VL2, VL3, : L4 , VL5, VL6, VL7,. VL8, ' VL9, VL10, vLn, VL12, VL13, VL14, VL15, ! VL16, VL17, VL18, VL19, VL20, VL21, VL22, VL23, VL24, VL25, VL26, ! VL27, VL28, VL29, VL30, VL31, VL32, VL33, VL34, VL35, VL36, VL37, VL38, VL39, VL40, VL41, VL42, VL43, VL44, VL4;5, VL46, VL47, VL48, ; VL49, VL50, VL51, V'L52, ' VL53, VL54, VL55, VL56, VL57, VL58, VL59, . VL60, VL61, VL62, VL63, VL64 , VL65, VL66, VL67, VB68, VL69, VL70, VL71, VL72, VL73, VL74, VL75, VL76, VL77, VL78, VL79, VL80., VL81, 1 VL82, VL83, VL84, VL85, VL86, VL87, . VL88., VL89, VL90, VL91, VL92, VL94, VL95, VL96, VL97, VL98 , VL99 y VL100;. VH 3: combinado 1 con cualquiera de. VL1, VL2, VL3, VL4, V L'5, . VL 6, VL7 VL8, VL9, ¡ vLio, VL11,. VL12.,. VL13, VL1 , VL15, VL16, VL17, VL18, VL19, VL20, 1 VL21, VL22, VL23, VL24, VL25, VL26, VL27., VL28, VL29, VL30, VL31, VL32, VL33, VL34, VL35, VL36, VL37, VL38, VL39, VL40., VL41, VL42, ; VL43, VL44, VL45, VL46, VL47, VL48, VL49, VL5.0, VL 1, VL52, VL53, VL54, VL55, VL56, VLS7, VL58, VL59, VL60, VL61, VL62, VL63,. VL64, 1 ;VL65, VL66, VL67, VL68, VL69, VL70, VL71, VL72, VL73 VL74, VL7-5, VL76, VL77, VL78, VT79, VL80, VL81, VL82, VL83, VL84, VL85, ¦ VL86, :VL87, VL88, VL89, VL90, VL91, VL92, VL93., VL94, VL95, VL 6, VL97, >VL98., VL99 y VL100; y asi sucesivamente.

En algunos casos, la proteina de enlace a antigenos ,incluyé al menos una · región variable de cadena pesada y/o una ¡región variable de cadena ligera de aquellas enlistadas en las Tablas 2A y 2B. En algunos casos, la proteina de enlace a antígenos incluye al menos dos diferentes regiones variables de cadena pesada y/o regiones variables de cadena ligera de aquellas enlistadas en la Tabla 2B. Un ejemplo de tal proteína de enlace a antígenos. comprende (a) ¦ un VH1, y (b) uno de VH2, VH3, VH4, VH5, VH6, VH7, VH8, VH9, VH10, VH11, V„12, VH13, VH14, VH15, VH16, VH17, .VH18, V„19, VH20, VH21 VH22, VH23, VH24, VH25, VH26, VH27, VH28, VH29, VH30, VH31, VH32, VH33, VH34, VH35, VH36, VH37, VH38, VH39, VH40, VH41, VH42, VH43, VH44, VH45, VH4.6, VH47,; VH48, VH49, VH50 vH51, VH52, VH53,. VH54,. VH55, VH'5.6, Vh57, Vh58,. Vh59, Vh60, VH61, Vh62, VH63, VH64, VH65, . VH6.6, VH67, VH68, VH69, ; VH70, VH71, VH72, VH73, VH74, VH75, VH76, VH77, VH78, VH79, VH80, .81, VH82, VH83, VH84, VH85, VH 8'6, VH 87, VH88, VH89, VH90, VH91, VH92, VH93, y VH94. Otro ejemplo comprende (a) un VH2, -y (b) uno de VH1, VH3, VH4, VH5, VH6, VH7, VH8, VH9, VH1.0, Vh11, Vh12, Vh13, Vh1 ,. Vh15, Vh16, Vh17, VH18, VH19, VH20, VH21 VH22, VH23, VH24, ?„25, VH26, V„27, VH28, VH29, Vh30, VH31, VH32, VH33, VH34, VH35, VH36, VH37, V„38, VH39, VH4Q, VH41, VH42, VH43, VH44, VH45, VH46, VH47, VH48, VH49, VH50, VH51, VH5-2, VH53, VH54, VH55, VH56, VH57, VH58, VH59r VH60, VH61, VH62, Vh63, VH64, VH65, VH66, VH67, VH68, VH69, VH70, VH71, VH72, VH73, Vh74, VH75, .VH76, . VH77, VH78, VH79, VH80, 81, VH82, VH83, VH84, VH85, VH 86, Vh 87, VH88, VH89, VH90, VH91, VH92, VH93,.. y VH9 . Todavía otro ejemplo comprende (a) un VH3, y (b) uno de ¦ VK1, VK2, V„4, VK5, VH6/ VH7, VH8, VH9, VH10, VH11, VK12, V:,13, VH14, VH15, VH16, VH17, VH18, VH19, VH20, VH21 VH22, VH23, VH24, VH25, VH26, VH27, VH28, VH29, VH30, VH31, V„32, VH33, VH34, VH35, VH36, VH37, VH38, VH39, VH40, VH41, VH42, ¦VH43, VH44, VH45, . VH46, VH 7, VH48, VH49, VH50, VH51, VH52, VH53, VH5 , VH55, VH56, VH57, VH58, VH'59, VH60, VH61, VH62, VH63, VH64, VH65, VH66, VH67, VH68, VH69, VH70, VH71, VH72, VH73, VH74, VH75, VH76, VH77, VH78, VH79, VH80., 81, VH82, VH83, VH84, , VH85, VH 86, VH 87, VH88, VH89, VH-90, VH91, VH92, VH93, y. VH94, etc. Aún. otro .ejemplo de-, tal proteina de enlace a antígenos comprende (a) un VL1, y (b) una de VL2, VL3, VL4, VL5, VL6, VL7, VL8 ,: VL9, VL10, VL11, VL12, VL13, VL1 , VL15, VL16,. VL17, VL18,. VL19, VL20, VL21-, VL22,. VL23, VL24, VL25, VL26, VL27, VL28, VL29, VL30, VL31, VL32, VL33, V-L34, VL35, VL36, VL37, VL38, VL39, VL40, VL41, VL42, VL43, VL44, VL45, VL46, VL47, VL48, VL49, ,VL50, VL51, VL52, VL53, VL5 , VL55, VL56, VL5'7, VL58, VL59,. Vt'6.0 , VL61, VL62, VL63, VL64, ¦VL6.5, VL66,- VL67, VL68, VL69, VL7Q, VL71, VL72, VL73, · VL74, VL75, VL76, VL77, VL78, VL797 VL80, VL81, VL82, VL83, VL84, VL85, VL86, VL87, VL88, VL89, VL90, V,.91, V:92, VL93, VL94, VL95, . VL96, VL97, VL98 , VL99 y VL100. Nuevamente, otro ejemplo de tal proteina de enlace a antigenos comprende (a) una VL2, y (b) una de VL1, VL3, VL4, VL5, VL6, VL7, VL8, VL9, VL10,. VL11, VL12, VL13, VL1 , VL15, VL16, VL17, VL18, VL19, VL20, VL21, VL22, VL23, VL24, VL25, VL26, VL27, VL28, VL29, VL30, ' vL31, VL32, VL33, VL34, VL35, VL3.6, VL37, VL38, VL39, VL40, VL41, VL42, VL43, VL44, VL45, VL46, VL47, VL48, VL49, VL50, VL51,' VL52, ' VL53, VL54, VL55, VL56, VL5 , . VL58 , VL59, VL60, VL61, ,VL62, VL63, VL64, VL65, VL66,,:VL67, VL68, VL69, VL70, VL71, VL72, VL73, VL74, VL75, VL76, VL77, VL78, VL79, VL80, VL81, VL82, VL83, VL84, VL85, VL86, VL87, VL88, VL89, VL90, VL91, VL92, VL93, VL94, VL95, VL96, VL97, VL98, VL99. y VL100.. Nuevamente, otro ejemplo de tal proteina de enlace a antigenos. comprende (a), iana VL3, y (b) una de vLi, VL2., VL4 , . Vj,5, VL6 , VL7, VL8, VL9, VLI'O, VL11, VLÍ2, VL13, VL14, VL15, VL16, VL17, VL18, VL19, VL20, VL21, VL22, VL23, VL2.4 , VL25, VT26, VL27, VL28, VL29, VL30, VL31, VL32„ VL33, VL34, VL35F VL36, VL37, . VL3.8, VL3 , VL40, VL41, V¿42, V'L43, ¦VL44.; VL45, VL46, VL47, VL48, VL49, VL50, VL51, VL52 , VL53, VL5 , VL55, VL56, . VL57, VL58, VL59, VL60, VL61, VL62, VL63, VL64, VL65, VL66, VL67, VL68, VL69, VL70, VL71, VL7Z, VL73, VL74, VL75, VL76, VL 7, VL78, VL79, VL80, VL81, VL82, VL'83, VL8 , VL85, VL86, VL87, VL88, VL89, ¦ VL90, VL91, VL92, VL93, VL9 , VL95, VL96, V,.97, VL98, VL99 y VL100, etc.

Las varias combinaciones de regiones variables de cadena pesada pueden, combinarse con .cualquiera de las varias combinaciones de regiones- variables de cadena ligera.

¦ En otras modalidades, una proteina de enlace a antigenos comprende dos regiones variables dé cadena ligera idénticas y/o dos regiones variables de cadena pesada idénticas. Como un ejemplo, la proteina de enlace a antigenos puede ser un anticuerpo o fragmento inmunológicamente funcional . del mismo que incluye dos regiones variables de cadena ligera y dos regiones variables de cadena pesada en combinaciones de pares de regiones variables .de cadena ligera y pares de regiones variables de cadena pesada como se enlista en las Tablas 2A y 2B.

Algunas proteínas de enlace a antígenos que se proporcionan comprenden un dominio ' variable de cadena - pesada que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de. un. dominio variable de cadena pesada seleccionada de VH1, VH2, VH3, VH4 , VH5, VH6, VH7, . VH8, VH9, V„10, VH11, VH12, VH13,. VH14, VH15, VH16, VH17, VH18, VH19, VH20", VH21 VH22, VH23, VH24, VH25, VH26, VH27, Vh28, VH29, VH30, VH31, V„32, VH33, V„3 , VK35, VH36, VH37, VH38, VH39, VH40, VH41, VH42, VH43, VH44, VH45, VH46, VH47, VH48, VH49, .VH50, VH51, VH52, VH53, VH54, VH55, VH56, VH57, VH58, VH59, VH60, VH61, VH.62, VH63, VH64, VH65, VH66, VH67, VH68, Vh69, VH70, VH71, VH72, VH73, VH74, VH75, VH76, VH77, VH78, VH79,- VH80, 81, VH82, VH83, VH8 , VH85 , ¦ VH 86, VH 87, VH88, VH89, VH90, VH91, VH92,¦'. VH93, y VH94 en. solamente 1, 2, 3, 4, 5,. 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 residuos de aminoácidos, en donde cada diferencia de secuencia es independientemente ya sea una eliminación, . inserción o sustitución . de un aminoácido, con las eliminaciones, inserciones . y/o sustituciones que resultan en no más de 15 cambios de aminoácido con relación a las secuencias de dominio variable anteriores. La región variable de cadena pesada en algunas proteínas de enlace . a antígenos comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% o 99% de identidad de secuencia a las secuencias de aminoácidos de la región variable de cadena pesada de VH1 VH2, VH3, VH4, VH5, . VH6, VH7, VH8, ,VH9, VH10, VH11, VH12, VH13, VH14, VH15, VH16, VH17, VH18, VH19, VH20, VH21 VH22, VH23, VH24, VH25, VH26, VH27, VH28, VH29, VH30, VH31, VH32, VH33, VH34, VH35, VH36,, VH37, VH38, VH39, VH40, VH41, VH42, VH43, VR44, VH45, VH46, VH47, VH48, VH49,- VH50, VH51, VH52,.VH53, V„54, VH55, VH56, VH57, VH58, VH59, VH60, VH61, VH62, VH63, VH64, VH65, V«66, 'VH67, Vh68, VH69, VH70, VH71, VH72 , VH7.3 , VH74, VH75, VH76, VH77, VH78, VH79, VH80, 81, VH82, VH83, VH84, VH85, VH 86, VH .87, V„88, VH89, VH90, VH91, V„92, VH93, y VH9 .

Ciertas proteínas, de enlace a antígenos comprenden un dominio variable de cadena ligera que comprende una, secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de un dominio variable de cadena ligera seleccionado.de VL1, VL2,. VL3, VL4 , VL5, VL6, VL7, VL8, VL9,. VL10, VL.ll, VL12, VL13, VL14 ,.. VLl-5, VL16, . VL17, VL18, VL19, VL20, VL21,' VL22, VL23, VL24, . VL25, VL25, VL27, VL28, VL29, VL30, VL31, VL32, VL33, VL34, VL35, VL36, VL37, VL38, VL39, VL40, ' .VL 1, VL42, VL43, VL44 , VL45 , VL46, VL47, VL48, VL49, VL50, VL51, VL52, VL53, VL54, VL55, VL56, VL57, yL58, VL59, VL60, VL61, VL62, VL63, VL64, VL65, VL66, VL67, VL-68, VL69, VL70., VL71, Vl72, Vl73, VL74, yL75, VL76, VL77,. VL78, VL79, VL80, VL81 , VL82, VL83, VL84, VL85, VL86, VL87,. VL88, VL89, VL90, VL91, VL92, VL93, VL94, VL95, VL96,' VL97, VL98, VL99 y VL100. en solamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 residuos de aminoácidos, en donde cada diferencia de secuencia es independientemente ya. sea una eliminación, '¦ . inserción .o sustitución de un aminoácido, con las eliminaciones, inserciones y/o sustituciones que resultan en no más de 15 cambios de aminoácido con relación a . las secuencias de dominio variable anteriores. La región variable de cadena ligera en algunas proteínas de enlace a antígenos comprende una secuencia dé aminoácidos que tiene al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% o 99% de identidad de secuencia a la secuencias de aminoácidos de la región variable de cadena ligera de VL1, VL2, VL3, VL4, VL5, VL6, VL7, VL8, VL9, VL10, VL11, VL12, VL13, VL14., VL15, VL16, VL1 , VL18, VL19, VL20, VL21, VL22, VL23, VL24, Vi.25, VL26, VL27, VL28, VL29, VL30, VL31, VL32 , VL33, VL34, VL35, VL36, :VL37, VL38, VL39,. VL40, VL41, VL 2, VL43, VL44, VL45, VL46,. VL47, VL48, VL49, VL50, VL51, VL52, VL53, VL54, VL55, VL56, VL57, VL58, VL59, VL60, VL61, VL62, VL63, VL64, VL65, VL66, VL67, VL68, VL69, VL70, VL71, VL72, VL73, VL74, VL75, VL76, VL77, VL78, VL79, VL80, VL81, VL82,. VL83, VL84, VL.85, VL86, VL87, VL88, VL89, VL90, VL91, VL92', VL93, VL94,. VL95, VL96,. VL97, VL98, and VL100.

En casos adicionales, las proteínas de enlace antígenos comprenden los siguientes emparejamientos de dominios variables de cadena ligera y cadena, pesadas: VL1 con VH1, VL2 con VH1, VL3 con VH2 or VH3, VL4 con VH4, VL5 con VH5, VL6 con VH6, VL7 con VH6, VL8 con VH7 O Vh8, Vl9 con VH9, VL10 con VH9, VL11 con VH 10, VL12 con VH11, VL13 con VH12, VL13 cón VH14, VL14 con VH13, VL15 con VH14, VL16 con VH15, VL17 con VH16, VL18 con VHÍ7, VL19 con VH18, VL20 con VH19, VL21 con VH20, VL22 .con . VU21, VL23 con VH22, VL24 con VK23, VL25. con VH24, ;VL26 con VK25, VL27 con VH26, VL28 con VH27, : VL29. con VH28, VL30 con VH29, VL31 con VH30, VT32 con VH31 VL33 con VH32, VL34 con VH33, VL35 con VH34 , VL36 con VH35, VL37 con VH36, VL38 con VH37 , VL39 con VH38, VL40 ,. con VH39, VL41 con VH Q, VL42 con VH41, VL43 con VH42, VL44 con VH 3,. VL45 con VH44 , ' VL46 con VH45, VL47 con VH46- VL48 . con VH47,, VL49 con VH48, VL50 con . VH49, V L51 con VH50, 52 con VH51, ¦ VL53 con V H52, VL54 con VH53, VL55 con 54, and VL56 con VH54, VL57 con V H54, VL58 con VH55, VL59 con VH56, VL60 con VH57, VL61 -con: VH58, VL62 con. VH59-, VL'63 con VH60, VL64 con VH1, Vl65 con- Vh62, Vl66. con VH63, Vl67 con. VH64, VL68 con VH65, VL69 con V¡¡66, VL70 con VH67, VL71 con. VH6.8, VL72 con VH69, VL73. con VH70>' VL74; con VH70, y VL75 con VH70, VL76 con VH71, VL77 con VH72, VL78 con VH73, VL79 con- VH74, VL80 con VH75, VL81.,con VH76, VL82 con VH77, VL83 con VH78, VL84 con VH79, VL85 con VH80, VL86 con VH81,' VL87 con. VH82, VL88 con VH86, VL89 ' con .VH83, VL90 con VH84, VL91 con VH85V VL 92 con VH 87, VL 93 con VH. 88, VL 94 con VH 88, VL 95 con VH 89, . VL 96 con VH 90, VL 97 con VH. 91, VL 98 con VH 92, VL 99 con VH 93, y. VL 100 con VH 94.

En algunos casos, las proteínas de enlace a antigenos en los apareamientos de arriba pueden comprender secuencias de aminoácidos, que tienen 70%, 75%, . 80% , 85% , 90%, .95%, 96%, 97%, 98% ó 99% de identidad de secuencia con los dominios variable específicos.

Todavía otras proteínas de enlace a antígenos, por ejemplo, 'anticuerpos o fragmentos inmunológicamente funcionales, incluyen formas variantes de una. cadena pesada variante y una cadena ligera variante como justo se. : describe .

CDRs de Proteína de enlace a antígenos En diversas modalidades, las proteínas de . enlace a antígenos descritas en la presente pueden comprender polipéptidos en. los cuales uno o más CDRs se injertan, insertan y/o unen. Una proteína de enlace a antigenos puede tener 1, 2, 3, 4, . 5 ó 6 CDRs. Una proteína de enlace a antígenos de esta manera puede tener,' por ejemplo., una CDR1 de cadena pesada ."· ("CDRH1") , y/o una CDR2 de¦ cadena pesada ( "CDRH2" ) , y/o una GDR3 de cadena pesada ("CDRH3")., y/o una CDR1 de cadena ligera ("CDRL1") , y/o una CDR2 de cadena ligera: ( "CDRL2" ) , y/o una CDR3 de cadena ligera ( "CDRL3" ) .

Algunas proteínas de enlace a antigenos incluyen tanto una CDRH3 como una CDRL3. Las CDRs de cadena ligera y pesada específicas se identifican en las Tablas 3A y 3B, respectivamente' y en las Tablas 3A y 3B, respectivamente, infra .

Las regiones determinantes de la complementariedad (CDRs) y regiones de estructura (FR) de un anticuerpo dado pueden identificarse usando el sistema descrito por Kabat et al., in ' Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Ed., US Dept.; of Health y Human Services, PHS, NIH, NIH Publicación no. 91-3242, 1991. Aunque se presentan en el esquema de nomenclatura de Kabat, como se desea,' las CDRs aquí descritas también pueden ' redefinirse de acuerdo a un esquema de nomenclatura alternativa, tal como aquel de Chothia (Ver Chothia & Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-917; Chothia et al., 1989, Nature 342 : 878-883 o Honegger & Pluckthun, 2001, J. Mol. Biol. 309:657-670). Ciertos anticuerpos que se describen en la presente comprenden una o más secuencias de aminoácidos que so idénticos o tienen identidad de secuencia sustancial . a las secuencias de aminoácidos de Uno o más de la CDRs presentados en la Tabla 3A (CDRHs) y Tabla 3B (CDRLs), infra- Tabla 3A Secuencias CDRH Ejemplares Tabla 3B Secuencias CDRL Ejemplares Tabla 3C Secuencias de Codificación para CDRHs Tabla 3D Secuencias de Codificación para CDRLs La estructura y propiedades de las CDRs. dentro de un anticuerpo que. se presenta naturalmente se han descrito, supra. Brevemente, en un anticuerpo tradicional, las CDRs se entierran dentro de una estructura eri la región variable de cadena ligera y pesada donde se constituyen las regiones •responsables para enlace y reconocimiento de antigeno. Una región variable comprende al menos tres CDRs de- cadena ligera y pesada, ver, supra (Kabat et al., 1991, ..Sequences of Proteins of Immunological Interest, Public Health Service N.I.H., Bethesda,. MD; ver también Chothia y L sk," 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-917; Chothia et ' al.,. 1989', Nature 342: 877-883),· dentro de una región de estructura (designada regiones de estructura 1-4, FR1, FR2, FR3, y FR4, por Kabat et al.,. 1991; ver también Chothia y.Lesk,. 1987,. supra) . Las CDRs proporcionadas en la presente, sin embargo, no pueden solamente usarse para defini el dominio de enlace a antigeno de una estructura de anticuerpo tradicional, pero pueden alojarse en una variedad de otras estructuras de polipéptido, como se describ . en la .presente.

En un aspecto, las CDRs proporcionadas son (a) una CDRH seleccionada del grupo que consiste, en (i) . una CDRH1 seleccionada del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 603-655; (ii) una CDRH2 seleccionada del grupo' que consiste, en la SEQ ID NO: 656-732; (iii) una CDRH3 seleccionada del .grupo que consiste en la SEQ. ID NO: 733-813; y (iv) una CDRH de (i)-, (ii) y (iii) que contiene una o . más sustituciones, eliminaciones o inserciones de aminoácido de no' más de cinco, cuatro, tres, dos, - o un aminoácidos; (B) una CDRL seleccionada del. grupo que consiste en (i) una CDRL1 seleccionada del grupo que consiste en la SEQ ID NO:814-893; (ii) una CDRL2 seleccionada del grupo que , consiste en la SEQ ID NO:894-946; (iii) una CDRL3 seleccionada del grupo que consiste en la SEQ ID NO : 947-1020 ; y (iv) una CDRL de (1) , (ii) y (iü) que contiene una o más, sustituciones, eliminaciones o inserciones de aminoácidos de no más de 1, 2, 3, 4, ó 5 aminoácidos.

En otro aspecto, una proteína de enlace a. antigenos comprende 1, 2, 3, 4,' 5, ó 6 formas variantes de las CDRs enlistadas en las . Tablas 3A y 3B, infra,. cada una tiene al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, o 99% de identidad de secuencia a una secuencia CDR enlistada, en las Tablas 3A y 3B, infra. Algunas proteínas de enlace a ¦ antígenos comprenden 1, 2, .3, 4, .5/ o 6 de las' GDRs enlistádas en las Tablas 3A y 3B, infra,: cada una difiere por . no. más de 1, 2, 3, 4 o 5 aminoácidos de las CDRs enlistadas en estas tablas.

Todavía en otro aspecto, una proteína de enlace .. a antígenos incluye, las siguientes asociaciones de CDRL1, CDRL2 i y CDRL'3, presentadas p'or conveniencia en forma tabular y en referencia a la fuente del clon de la asociación: Tabla 4 Asociaciones CDRL En un aspecto adicional, una proteína . de . enlace ., a antígenos incluye las siguientes asociaciones de CDRHl, CDRH2 y CDRH3, presentadas por conveniencia en ' forma . tabular y en referencia a la fuente del clon de la .asociación : Tabla 5 Asociaciones CORH En un aspecto adicional, una proteina de enlace a antigenos incluye las siguientes asociaciones de CDRHl, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 y- CDRL3, presentadas por conveniencia .'en forma tabular y en referencia a la fuente del clon de la asociación: Tabla 6 Secuencias de consenso Aún en otro aspecto, las CDRs descritas en la presente •incluyen secuencias de consenso derivadas dé grupos de anticuerpos monoclonales relacionadas. Como se describe en la presente, una "secuencia de consenso" se refiere a secuencias de aminoácidos que tienen aminoácidos conservados comunes entre un número de secuencias y aminoácidos variables que varían dentro de las secuencias de aminoácidos dadas. Las secuencias de consenso de CDR proporcionadas incluyen CDRs correspondiente a cada uno de CDRH1, CDRH2', CDRH3, CDRL1 , CDRL2 y CDRL3.

La s secuencias. de consenso se determinaron usando análisis estándares de las CDRs correspondientes a la VH y VL de las proteínas, de enlace a antígenos descritas, algunos de los cuales específicamente enlazan un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c , y (iii) FGFR3c, . .Las secuencias de consenso se determinaron al mantener las CDRs contiguas dentro de la misma secuencia correspondiente a una VH o VL.

CDR3 de Cadena Ligera Grupo 1 QQFGSSLT (SEQ ID NO: 1439) Grupo 2 QQS Y S T S LT (SEQ ID NO: 1440) .

QQS Y S S P LT (SEQ ID NO: 1441) QQS. F S T P LT (SEQ ID NO: 1442) QQS Xi S . X2 X3 LT (SEQ. ID NO: 1443) en donde Xi es Y p F; X2 es T o S; y X3 es P o S Grupo 3 LQ R. N SYP L T (SEQ ID NO: 14.44) LQ H N SYP R .T (SEQ ID NO:' 1445) LQ H. ¦ . S . SYP L T (SEQ ID NO: 1446) LQ X4 X5 ¦ SYP X6 T (SEQ ID NO: 1447) en donde X4 es H o R; X5 es o S; y Xs es L o R Grupo 4 ¦ MQR I EFP L T (SEQ ID NO: 1448) QR I EFP I . T (SEQ ID NO: 1449) MQR L EFP . I . T (SEQ ID NO: 1450) MQR X7 EFP Xa T (SEQ ID NO:.' 1451) en donde X7 es I o L; y X8 us I o L.

Grupo ,5 Q V- . DS N P VV (SEQ ID. NO: 1452) Q L WDS S T VV (SEQ. ID NO: 1453) Q V WDS S ' S VV (SEQ ID NO: 145.4) Q V WDS S P VV (SEQ ID NO: 1455) Q V WDS S T VV (SEQ ID NO: 1456) Q X9 WDS Xio Xu W (SEQ'ID NO: 1457) en donde X9 es V o L Xi0 es S o N; y Xn es T, P o S. Grupo 6.

QQYN N WP L T (SEQ ID NO : 1458) QQYN N WP W T (SEQ ID NO: 1459) QQYN T WP W T (SEQ ID NO: 1460) QQYN X12 WP X13 T (SEQ ID NO: 1461) en donde Xi2 es N o T; y Xi3 es W o L.

Grupo 7 QVWDSS S , D H V V (SEQ ID NO: 1462) QVWDSS S D V V (SEQ ID NO: 1463) QVWDSS C D G V (SEQ ID NO: 1464) QVWDSS -S D G V (SEQ ID NO: 1465) QVWDSS Xn D Xi5 V (SEQ ID NO: 1466) en donde Xi4 es S o C; X15 es H, V o G; . y Xi6 es V o ausente .

Grupo QQSS S IPWT (SEQ ID NO: 1467) QQSS T IPWT (SEQ ID NO: 1468) QQSS X17 IPWT (SEQ ID NO: 1469) en donde X17 es S o T.

Grupo 9 QQTNSFPPWT (SEQ ID NO: 1470) Grupo 10 GTWDSSLS A V V (SEQ ID NO: 1471) GTWDSSLS V V V (SEQ ID NO: 1472) GTWDSSLS A M V (SEQ ID NO: 1473) GTWDSSLS Xi8 Xi9 V (SEQ ID NO: 1474) en donde Xx8. es A o V; y ??9 es V o M..

Grupo 11 QQYDNLP L T (SEQ ID NO: 1475) QQYDNLP F T (SEQ ID NO: 1476) QQYDNLP X20 T (SEQ ID NO: 1477 ) en donde X2o es L o F.

Grupo 12 QQYGSS P PWT (SEQ ID NO: 1478).

QQYGSS PWT (SEQ ID NO: 1479) , QQYGSS X2i PWT .(SEQ ID NO: .1480) en donde X2r es P o ausente.

Grupo 13 ' QQYG R S L FT (SEQ ID NO: 1481) QQYG T S P F (SEQ ID NO: 1482) QQYG X22 S X23 FT (SEQ ID NO: 1483) en donde X22 es R o T; y X23 es L o P.

Grupo 1-4 QQYGSS ( SEQ ID NO: 1484) QQYGSS (SEQ ID NO: 1485) QQYGSS (SEQ ID NO: 1486) QQYGSS C S (SEQ ID. NO: 1487) QQYGSS X24 25 26 (SEQ ID NO: 14.88) en donde X24 es P o ausente; X25 es R o C y X2s es Grupo 15.- QADWSS T T . W V (SEQ ID NO: 1489.) QADWSS T A V (SEQ ID NO: 1490) QADWSS T W V (SEQ ID NO: 1491) QAWDSS X27 T ' X28 V (SEQ ID NO: 1492) en donde X27. es T o ausente; y X28 es W o A.

Grupo 16 QADWS TV V (SEQ ID NO: 1493) .

QAD S TV V (SEQ ID NO: 1494) QAWDS TV I (SEQ ID NO: 1495) QAWDS TV X30 (SEQ ID. NO: 14.96) en¦ donde X29 es G, T, A o ausente; y X30 es V o I. Grupo 17 QQ S YSA T FT (SEQ ID NO: 1497) QQ T YSA P . FT (SEQ ID NO: 1498) QQ X31 ' YSA X32 FT (SEQ ID NO: 1499) en donde X3i es S o T; y X32 es T o:P.

Grupo 18 QQYN I YPRT (SEQ ID NO: 1500) QQYN T YPRT (SEQ ID NO: 1501) QQYN X33 . YPRT (SEQ ID NO: 1502) en donde X33 es I o T.

Grupo 19 HQ S S DLPLT (SEQ ID NO: 1503) HQ Y D DLPLT (SEQ . ID NO: 1504) HQ X34 X35 DLPLT (SEQ ID NO: ...1505) en donde X3 es S o Y;, y X35 es S o D.

Grupo 20 MQALQT P . F T (SEQ ID NO: 1506) MQALQT . L I . T (SEQ ID NO: 1507) MQALQT X36 . X37 T (SEQ ID NO: 1508) en donde X36 es P o L; y X37 es F o I .

Grupo 21 QQFGRSFT (SEQ ID NO: 1509) Grupo 22 YSTDSS V NHVV (SEQ ID NO:. 1510) .

YSTDSS G NHVV (SEQ ID NO: 1511).

YSTDSS X38 . ¦ NHW (SEQ. ID NO: 1512) en donde X38 es V o G.

Cadena Ligera CDR2 Grupo 1 .' A ASSL Q S (SEQ ID NO: 1513) S ASSL Q S (SEQ ID NO: ,15.14) A ASSL Q F (SEQ ID NO: .1515) A ASSL K S (SEQ ID NO: 1516) X39 ASSL X40 1 (SEQ ID NO: 1517) . en donde X39 es A ó S; X40 es Q o K; y X4X es S o F.

Grupo 2 G A S S R A T (SEQ ID NO: 1518) G; ?· S S R D T (SEQ ID NO: 1519) R A T (SEQ ID NO: 1520) G A •S' T R A (SEQ. ID NO: 1521).

G A S A R A . T. (SEQ ID NO: 1522) G A S R R A . T (SEQ ID NO:, 1523) G A S N R A T (SEQ ID NO:,' 1524) 6 X43 X44 T- (SEQ. ID NO:".1525) en donde X42 es A ? T; X43 es S,' T, A,. R o N; y X44 es A o D.

Grupo 3 GAFSRA S (SEQ ID NO: 1526) ¦ GAFSRA T (SEQ ID' O: 1527) GAFSRA X4S.. (SEQ ID NO: 1528) en donde X45 es S o T.

Grupo ,4 Q D KRPS (SEQ ID NO: 1529) D S KRPS (SEQ · ID NO: 1530) D S KRPS (SEQ ID NO:. 1531.),, D S KRPS (SEQ ID NO: 1532) D 47 KRPS (SEQ ID NO:. 1533) en donde X46 es Q, R o E; y X47 isT o S.

Grupo 5 TLS Y . RAS. (SEQ ID NO: 1534) TLS F RAS (SEQ ID NO: 1535).

TLS X8 RAS (SEQ ID NO: 1536) ' en donde X48 es Y o F.

Grupo 6 AASNLQ R (SEQ ID NO: 1537) AASNLQ S (SEQ ID NO: 1538) AASNLQ X49 (SEQ ID NO: 1539) ¦ en donde X49 es R o S.

Grupo 7.

G. A . SNRA I (SEQ ID NO: 1540)· G S SNRA I (SEQ ID NO: 1541) G S SNRA T (SEQ ID NO: 1542) G X50 SNRA X51 (SEQ ID NO: 1543) en donde X50 es A, o S; y X51 es I o T. Grupo 8 D A S S LQS (SEQ ID NO: 1544) D A S . T LQS (SEQ ID NO: 1545) G A S S LQS (SEQ.ID NO: 1546) G A S N LQS (SEQ ID NO: 1547) X52 A . S X53 LQS (SEQ ID NO : 1548) en donde X52 es D o G; y X53 es S, T o. N. Grupo 9 DN N KRPS (SEQ ID NO: 1549) DN . D KRPS (SEQ ID NO: 1550).

DN X53 KRPS . (SEQ ID NO: 1551) en donde X53 es N o D.

Grupo 10 D A SNLET (SEQ ID NO: 1552) D V SNLET (SEQ ID NO: 1553) D X54 SNLE (SEQ ID NO: 1554) en donde X54 es A o V.

Grupo 11 L G SNRAS (SEQ ID NO: 1555) ¦ L D SNRAS (SEQ ID NO: 1556) L X55 SNRAS (SEQ. ID NO: 1557.) ¦ en donde X55 es G o D.

Grupo 12 Q D. N K RPS (SEQ ID NO: 1558) Q N N K RPS .(SEQ ID NO:. 1559) Q D N . E RPS (SEQ ID NO: 1560) Q X56 N .. X57. RPS (SEQ ID NO: 1561) en donde X56 es D o N; y X57 es K o Grupo 13 RDRNRPS (SEQ. ID NO: 1562) Grupo 14 ' S .. DSNRPS. (SEQ- ID NO: 1563) - ¦ C DSNRPS (SEQ ID NO: 1564) X58 DSNRPS (SEQ ID NO: 1565) en donde X5s es S o C.

Grupo 15 DDSDRPS (SEQ ID NO: 1566) Grupo 16 A V SSLQS (SEQ ID NO: 1567) A S , SSLQS- (SEQ ID NO: 1568) A X59 SSLQS (SEQ ID NO: 1569) en donde X55 es S o V.

Grupo 17 A¦ SSLQS (SEQ ID NO: 1570) T T SSLQS (SEQ. ID NO: 1571) . T X60 SSLQS. (SEQ ID NO: 157'2) en donde X6q. es A o T .

Grupo 18 K V SNWDS (SEQ ID NO: 1573) K G. SNWDS- (SEQ ID NO: 1574) K X6i SNWDS (SEQ ID NO: 1575) en donde ?e? es V o G.

Cadena Ligera CDRl Grupo 1 RAS Q S V S D I L A (SEQ ID NO 1576) RAS P s V s S S Y L A ( SEQ ID O 1577) RAS Q S F s S S Y L A (SEQ ID NO 1578).

RAS Q s V s . R S . H L A (SEQ ID NO • .1579) RAS Q s V s R D Y L A (SEQ ID NO •1580)· RAS Q s V s R N • Y L A (SEQ ID NO 1581) RAS Q s V · s S M Y L A (SEQ ID NO 1582)· RAS Q s V S S Q L A ( SEQ ID NO 1583),' RAS Q s I' . S ' S N . L- A (SEQ ID NO 1584) RAS Q s V S S N' L •A (SEQ ID NO ' 1585) RAS Q .s V S S . N V A (SEQ ID NO 1586) RAS Q. s v ¦ N S N L A (SEQ ID NO. 1587) RAS Q s V . R S S S L A SEQ D NO 1588).

RAS Q s V s N S S L A (SEQ ID NO 1589) RAS Q s V R N S s L A (SEQ . ID NO 1590).

RAS ?ß2 s ?ß3 x65 X66 ?ß7 ß8 A SEQ ID NO 1591). en donde d2 es P o Q; es V, I o F; X64 es S, ' RV, ausente ; Ke5 es s' R o N ' ^66 es D, S, N o M; ?d7_ es I, Y, H Q, N o S; y Xes es L o V.

Grupo 2 R A SQ I I s R YL (SEQ; ID NO: 1592).

R T. SQ . s I S S YLN (SEQ ID NO: 1593)' R A SQ s . I s N YLN (SEQ ID NO: 1594) R T SQ S I s S YLN (SEQ ID NO: 1595) R A SQ T I S I YLN ( SEQ . ID NO : - .1596 ) R A SQ R I S 3 YLN (SEQ: ID NO: 1597) R. A SQ S I S S YLN (SEQ. ID NO: 1593) R A SQ N ... I R T YLN (SEQ .ID NO: 1599) R A SQ N I R S YLN (SEQ ID NO: 1603) R A SQ N I N N YLN (SEQ ID NO: 1601), R X6gSQ X70 I X71 X72 YLN (SEQ ID NO: .1602) en donde ?¾9 es A o T; X70 es I, S, . T. o N; X7i es R, · S o . N; y X72 es. R, S, N, o í.

Grupo 3 GGN N IG.S Y N V H (SEQ ID NO: 1603) GGN N IGS I N V H (SEQ ID NO: 1604) GGN N IGS K S V Q (SEQ ID NO: 1605) GGN D IGS K S V H (SEQ. ID NO: 1606).

GGN N IGS.¦ K S V H (SEQ ID NO: 1607) GGN N IGS K T V H (SEQ ID NO: 1608) . GGN N IGS K A V H (SEQ ID NO:. 1609) GG N IGS K N V H (SEQ ID NO: 1610) GGN D IGS K ' N V H (SEQ. ID NO: 1611) GGN X73IGS X74 X75 V X76 ( SEQ ID NO: 1612).. en donde X73 es N, o D; X7 es Y, l o K; X7 es N, S, T o A; y X76 es H o Q.

Grupo¦ RASQ D . · IRNDL G (SEQ ID NO: 1613) - RASQ D IRNDL A (SEQ ID NO: 1614) RASQ G IRNDL G (SEQ ID NO: 1615) . RASQ X77 IRNDL X78 (SEQ ID NO: 1616) en donde X77 es D ó G; y X78 es G o A.

¦ Grupo 5 . RSSQSL L N S D A G T TYLD (SEQ ID NO: 1617) RSSQSL F D N D D G D TYLD (SEQ ID NO: 1618) RSSQSL L N S D D G N TYLD (SEQ ID NO; 1619) RSSQSL L D S D D G D TYLD (SEQ ID NO: 1620) ; RSSQSL L D D D N TYLD (SEQ ID NO: 1 62 1 ) RSSQSL X79 Xeo Xei D ¾2 G Xe3 TYLD (SEQ ID NO 1 622 ) en donde X79 es L o F; X8o es N o D; X8i es S o. N; X82 es o D; y X83 es T, D o N.

Grupo 6 SG N K LGDKY V C (SEQ ID NO: 1623) ' SG D K LGDKY V C (SEQ ID NO:. 1624) SG D K LGDKY A C (SEQ ID NO: 1625) SG D E LGDKY A C (SEQ ID NO: 1626).

SG D N, LGDKY A F . (SEQ' ID NO: 1627) SG D N LGDKY A C (SEQ ID NO: 1628) SG X84 Xas LGDKY . X86 X87 (SEQ ID NO: 1 62 9 ) en donde. Xs4- es -N o D; X85 es K, E o. N; X86 es V o A; y ,X87 es C o F. .

Grupo 7 QASQ G I S N Y LN (SEQ ID NO: 1630) QASQ D. I K K F LN (SEQ ,ID NO: 1631) QASQ D I N · I Y LN (SEQ ID NO: ' 1632) ¦ QASQ D I S I Y LN (SEQ ID NO: 1633) QASQ D I T ? Y L (SEQ.- ID NO: 1634) .

QASQ X88 I ?ß9 90 X91 LN (SEQ ID NO: 1635) en donde X88 es G o P; X89 es S,. K N o T; X?0 es. N, y X9i es Y o F.

Grupo 8 RASQ D I .. D S WL- V (SEQ ID NO:..1636) RASQ G I S R WL A (SEQ ID NO: 1637) RASQ D I ' S S WL A (SEQ ID NO: 1638) RASQ G I S ¦ S WL ¦ A (SEQ ID NO: 1639) RASQ X92 I X93 X94 WL X95 (SEQ ID NO: 1640) . . en donde X92 e.s D o G; X93 isD o S; X94 es R o S; y X95 es V o A.

Grupo 9 SGSSSNIG N NYV A (SEQ ID NO: 1641) SGSSSNIG' I . NYV S (SEQ ID NO: 1642) SGSSSNIG D . NYV S (SEQ ID NO: 1643) SGSSSNIG N NYV S (SEQ ID NO: 1644) SGSSSNIG X96 NYV X97 (SEQ ID NO: 1645) en donde X96 es N, I o D; y Xg7 es A o S.

Grupo 10 RAS Q DISNYLA : (SEQ ID NO: 1646) RAS H DISNYLA (SEQ ID NO: 1647) RAS X98 DISNYLA (SEQ ID NO: 1648)' en donde X98 es' Q o H.

Grupo 11 RASQ R V ? SSY I V (SEQ ID NO: 1649) [ RASQ R V ¦ E SSY L V (SEQ ID NO: 1650) RASQ S V A SSY L V (SEQ ID NO: 1651) RASQ X99 V X100 SSY X101 V (SEQ ID NO: 1652) ¦'¦ en . donde X99. es R o S; X100 es P o A; y X101 es l o L.

Grupo 12 RSSQSL L HSNG Y NYLD (SEQ ID NO: 1653) RSSQSL L HSNG F NYLD (SEQ ID NO: 1654) RSSQSL Q HSNG '¦ Y . NYLD (SEQ ID NO: 165.5) RSSQSL X102 HSNG . X103 NYLD (SEQ ID NO: 1656) en donde X102 es L o Q; y X-.33 es Y .0 F.

Grupo 13 RASQT V RN N YLA (SEQ ID* NO: 1657)' RASQT I RN S YLA (SEQ ID NO: 1658) RASQT X104 RN Xi05 YLA (SEQ ID NO: 1659) en donde X104 es V o I; y X105 es N o S.

Grupo 14 RSS Q R LVYSDGNTYLN (SEQ ID NO: 1660) RSS P , . S LVYSDGNTYLN (SEQ ID NO: 1661) RSS X106 i07 LVYSDGNTYLN (SEQ ID NO: 1662) en donde ???e es. Q o P; "y X107 es R o S.

Grupo 15 SGDA L PK YA Y ( SEQ ID NO: 1663) SGDA V . PKKYA N (SEQ ID NO:: 1664) SGDA Xioe PKKYA X109 (SEQ ID NO: 1665) en donde X108 es L o V; y Xi09 es Y o N.

Cadena Pesada CDR3 Grupo 1 MT T PY YF D L (SEQ ID NO: 1666) MT S PYWYF . D L (SEQ ID NO:. 1667) MT T PYWYF ' G L (SEQ ID NO: 1668) MT X110 PYWYF m L (SEQ ID NO: 1669) en donde Xn0 es T o S; y Xm es D o G .

Grupo 2 D R Y Y DFW S GY P Y R YYG L DV (SEQ ID NO: 1670.) D Q Y :F · DFW S GYP F. F .¦ Y YYG M DV (SEQ ID NO: 1671) D Q D Y DFW S GY P Y F Y YYG M DV (SEQ ID NO: 1672) D. Q N Y DFW N GY P Y Y F YYG M DV (SEQ ID NO:. 1673) D Q Y Y DFW S GYP Y Y H YYG M DV (SEQ ID NO: 1674) ; . .

D X112 X113 X114 DFW X115 GYP Xiie Xu, X118 YYG X119 DV (SEQ ID NO: 167.5) en donde X 2 es R o Q; Xn3 es Y, D o N; X114 es Y o F; X115 es S o N; Xn6 es Y o F; Xn7 es F o Y; Xn8 es R, Y, F o H; y X119 es L o M.

Grupo 3 VTGTDAFDF (SEQ ID NO: 1676) . . .

Grupo 4 TVTKEDYYYYGMDV (SEQ ID NO: 1677.) Grupo 5 DSSGSYYVEDYFDY (SEQ ID NO: 1678) Grupo 6 D . W S ; IAVAG T ¦ FDY (SEQ ID NO: 1679) . D L R IAVAG S FDY (SEQ ID NO: 1680) D 119 X120 IAVAG X121 FDY (SEQ ID O: 1681) en donde X 9 es o L; X'120 es S o R; y X121 es T o S.

Grupo 7 . · EYYYGSGSYYP (SEQ ID NO: 1682) .

Grupo 8 ELGDYPFFDY (SEQ ID NO: 1683) Grupo 9 EYVAEAGFDY (SEQ ID NO: 1684) Grupo 10 VAAVYWYFDL (SEQ ID NO: 1685).

Grupo 11 YNWNYGAFDF (SEQ ID NO: 1686) Grupo 12 RASRGYR F GLAFAI (SEQ ID NO: 1687) RASRGYR Y GLAFAI (SEQ ID NO: 1688) RASRGYR X122 GLAFAI (SEQ ID NO: 1689) en donde X122 es' F o Y.

Grupo 13 DGITMVRGVTHYYGMDV (SEQ ID NO: 169.0)..

Grupo 14 DH S SGWYYYGMDV (SEQ ID NO: 1691) DH T SCWYYYGMDV- (SEQ ID NO: 1692) OH X123 SCWYYYGMDV (SEQ ID NO: 1693) en donde X123 es S o T.

Grupo 15 Y S T WDYYYG V DV' (SEQ ID NO: 1694). .

Y R D WDYYYG M . DV (SEQ ID NO.: 1695) Y X124 X125 WDYYYG X126 DV (SEQ ID NO: 1696). en donde Xí24 es S o R; X125 es T o D y Xi2é es V o M.

Grupo 16 VLHY S DS R GYSYY S D F (SEQ ID NO 1697) VLHY Y DS S GYSYY F D Y (SEQ ID NO 1698.) · . ' ' .-.

VLHY i27 DS Xi28 GYSYY Xi29 D Xi30 (SEQ ID Np: 1-699) en donde Xi27 es S o Y; Xi28 es R o S; Xi2g es S o F; y Xi30 es F o Y.

Cadena Pesada CDR2 Grupo 1 N I Y Y 'S G T T Y F NPSLKS (SÉQ ID NO: .1700) F I Y Y S G G T N Y NPSLKS (SEQ ID NO: .1701) . . .

Y I Y Y S G G T H .'. Y NPSLKS (SEQ ID NO: 1702) Y I Y H S G S A Y Y . NPSLKS (SEQ ID NO: 1703) .

Y I .Y D S G S T Y Y NPSLKS , (SEQ ID NO: 1704) S I Y Y . S G T T Y Y NPSLKS (SEQ ID NO: 1705) M I Y Y S G T T Y Y NPSLKS (SEQ ID NO: 1706) ¦ · Y I Y. Y S G T T Y Y NPSLKS (SEQ ID NO: .1707) Y I Y Y S G . S A Y Y NPSLKS (SEQ ID NO: 1708) Y I F Y S G S T Y Y NPSLKS. (SEQ ID NO: 1709) Y L Y Y S G S T Y Y NPSLKS (SEQ ID NO:. 1-710) Y I Y Y S G S T Y Y · NPSLKS (SEQ ' ID NO: 1711) Y I Y Y. T G S T Y Y NPSLKS' (SEQ ID NO: 1712) Y I Y ' Y T G .S T N ' Y NPSLKS "(SEQ ID NO: 1713) . .

Y I Y Y S G N T N Y .. NPSLKS. (SEQ ID NO: 1714) Y I Y Y S G S T N Y .. NPSLKS (SEQ ID NO:. 1715) Xl31 Xl32 Xl33 Xl34 ¾.35 S X136 Xl37 Xl38 ¾39 ' NPSLKS (SEQ ID NO: 1716) en donde X131 es N, F, Y, S o M;. X132 es I o L; 133 es Y. o F; X134 es Y, H o D; X135 es S o T; Xi36 es T, G, S o T; X137 és T o A; Xi38 es Y, N o H; y Xi39-. es F o Y. .

ADSVKG (SEQ ID NO: 1717) G I S Y DG S N K N Y ADSVKG (SEQ ID NO: 1718) I' I . W Y DG S N ' K N Y ADSVKG ( SEQ ID NO: 1719) L I W Y DG S N K N Y ADSVKG (SEQ ID NO: 1720) L .. I W Y ' DG S N K D Y ADSVKG (SEQ ID NO: .1721) V I ' W Y DG S N K D Y ... ADSVKG (SEQ ID NO: 1722) L I S Y . DG S N K Y Y ADSVKG (SEQ N ' K H Y ADSVKG (SEQ N K Y Y ADSVKG (SEQ N K Y Y ADSVKG (SEQ N -Y Y , ADSVKG (SEQ ID NO: 1727) V I: W. Y DG S N K Y ... H ADSVKG (SEQ ID NO: 1728) V I . Y DG S N K Y Y .' ADSVKG. (SEQ ID NO: 1729) V I . W N. DG N N K .. Y . Y ADSVKG (SEQ ID NO: 1730) V I W N DG S N K N Y ADSVKG ( SEQ ID NO: 1731) Xl40 I Xlíl Xl42 DG i43 N Xi44 X145 Xl46 ADSVKG (SEQ ID NO: 1732) en donde X140.es L, G, I o V; X'm es o S; Xi42 es" Y, D o N; Xi43 es S o D;. X144 es K o N; X145 es Y, N, D, ; o H; y ??46 es Y o H .

Grupo 3 I NP P SG A T N YAQKF G (SEQ ID NO: 1733) W I NP N SG G T N YAQKF R G (SEQ ID NO: 1734) I NP N SG A T N YAQKF H G (SEQ ID NO: 1735) W I NP S . SG D T K YAQKF Q G (SEQ ID NO: 1736) W M NP N SG A T K YAQKF Q G (SEQ ID. O: 1737) W I NP N SG A T K YAQKF . Q G (SEQ ID NO: 1738) W ' I NP D SG G ? N YAQKF ¦ Q G (SEQ ID NO: 1739) . . .

W . I NP. N . SG · G T D YAQKF · Q " G (SEQ ID NO: 1740) W X1 7 NP Xi48 SG X149 T Xi5o YAQKF X151 G (SEQ ID NO: 1741) en donde X147 es I o M; Xi48 es P, N, S o D;. Xi49 es A, G o D; Xiso isN, K, o D; X151.es R, H o Q.

Grupo 4 EINHS ¦ E . . . N . TNYNPSLKS (SEQ ID NO: 1742) EINHS G T TNYNPSLKS (SEQ ID NO: 1743)' EINHS X152 is3 TNYNPSLKS (SEQ ID NO: 1744). en donde Xi52 es E o G; y Xi53 es N o T.

Grupo 5 IIYPGDS D TRYSPSFQG (SEQ ID NO: 1745) IIYPGDS E TRYSPSFQG (SEQ ID NO: 1746) . IIYPGDS X154 TRYSPSFQG (SEQ ID NO: 1747) en donde X154 es D o E.

Grupo 6 SISSSS T , Y -I YY A DS V KG (SEQ ID NO: 1748) SISSSS . YY A . DS L. . KG (SEQ ID NO: SISSSS YY V DS V KG (SEQ ID NO: SISSSS X155 Y i56 ?? X157 DS X158 KG (SEQ ID NO: 1751) . en donde Xi55 es' T o S; Xi56 es I o E; Xi57 es A o V; y ??58 es V o L.

Grupo 7 RI K S KTDGGTT D YAAPVKG (SEQ I D NO: 1752) RI K S KTDGGTT ' E YAAPVKG - (SEQ I D NO: 1753). RI I G KTDGGTT D . YAAPVKG (SEQ I D NO: 1754) RI Xi59 Xi6o KTDGGTT Xi6i YAAPVKG (SEQ I D . NO: 1755):, en donde X159 es K o I; ??60 es S o G; y i6i es .D o E.

Grupo 8 G'ISGSSAGTYYADS.VGK (SEQ ID NO: 1756) Grupo 9.

VIS D SGG ¦ S TYYADSVKG (SEQ ID NO: 1757) .

VIS G SGG . D TYYADSVKG (SEQ ID NO: 1758): VIS Xi62 SGG Xi63 TYYADSVKG (SEQ ID NO: 1759) en donde Xi62 es D o G; y Xi63 es S o D.

Grupo 10 RTYYRSKWYNDYAVSVKS (SEQ ID NO: 1760) · Grupo 11 RIY SGSTNYNPSL N. (SEQ ID NO: 1761) RIY SGSTNYNPSL S (SEQ ID NO:. 1762) RIY Xi64 SGSTNYNPSL Xi66 (SEQ ID NO: 1763 ¡ en donde Xi6-, es I o T; X:65 es E o K; y X166 es N o S. Grupo 12 WMNPYSGSTG Y AQ N F.Q G (SEQ ID NO: 1764) WMNPYSGSTG. . L AQ R FQ D (SEQ ID NO: 1765.) WMNPYSGSTG X167' AQ X168 FQ X169 (SEQ ID NO: 1766) en donde Xi67 es Y o L; Xi68 es N o R; y X169.-es G o D.

Cadena Pesada CDRl Grupo 1 SG ¦ V Y YW . N (SEQ ID NO: 1767) SG Y YW .¦ S (SEQ ID NO: 1768) SG Y (SEQ ID. NO: 1769) SG Y YW S (SEQ ID NO: 1770) SG N TW S (SEQ ID NO: 1771) SG Y TW ' S (SEQ ID NO: 1772) SG Y TW T (SEQ ID NO: 17.73) SG Y TW S (SEQ ID NO: 1774) SG X170 Xi7i TW X172 (SEQ ID NO: 1775) en donde Xi70 es V, G, N o D; Xi7i es Y o N; y Xi72 es N, ,S o T, Grupo 2 T YYW S (SEQ ID NO: .1776) Y YY S (SEQ ID NO: 1777) ·¦ s YYW S (SEQ ID NO: 1778) G YYW S (SEQ ID NO: .1779) G ' YYW T (SEQ ID NO: 1780) Xi73 YY X174- (SEQ ID NO- 1781) . en donde Xi73 isT, S o G; y Xi74 es S o T. Grupo 3 S ¦ Y GMH (SEQ ID NO: 1782) S F GMH (SEQ ID NO: 1783) T Y GMH . (SÉQ ID NO: 1784 ) F Y GMH (SEQ ID NO: 1785) Xi75 i76 GMH (SEQ ID NO: 1786) en donde Xi75 es S, T o F; y X176 es Y o F Grupo 4 SY A M S (SEQ ID NO: 1787) SY S M N (SEQ ID NO: 1788) SY S M S (SEQ ID NO: 1789) SY X177 M Xi78 ( SEQ ID NO: 1790) en donde Xn7 és A o S; y Xi78 es S, N o M Grupo 5 Y YY I H (SEQ ID NO: 1791) G YY L H (SEQ ID'NO: 1792) G YY K H (SEQ ID NO :¦ 1793) G YY T H (SEQ. ID NO: 1794) G YY I II (SEQ ID NO: 1795).

Xi79 YY Xieo H (SEQ ID NO: 1796) en donde Xi7g es Y o G; y Xi8o es I, L, . K o T, Grupo 6 SYG ' I H (SEQ ID NO: 1797) SYG L H (SEQ ID NO: 1798) · SYG X181 H (SEQ ID NO: 1799) . en donde X-l8i es L o .1.

Grupo 7 NY G M H (SEQ ID NO: 1800) NY G K R (SEQ ID NO: 1801) NY N M H (SEQ ID NO: 1802) NY Xi82 M Xi83 (SEQ ID NO: 1803) . en donde Xi82 es G o N; y Xi33 es H, R o M. Grupo 8 S YWIG (SEQ ID NO: 1804) G YWIG (SEQ ID NO: 18.05) . ??ß4 YWIG. (SEQ ID NO: 1806) en donde i84 es S o G.

Grupo 9 GY Y H (SEQ ID NO: 1807) GY F MH (SEQ . ID NO: 1808) GY. X185 MH (SEQ ID NO: 1809) en donde Xi85 es Y o F.

Grupo 10 S Y DI N (SEQ ID NO: 1810) S H DI N (SEQ ID NO: 1811) S Y DI D ( SEQ ID NO: 1812) S Xi86 DI. i87 (SEQ ID NO: 1813) . en donde Xi86 es Y o H; y Xi87' es N o D. Grupo 11 N YAMS. (SEQ ID NO: 1814) ¦ H YAMS (SEQ ID NO: 1815) Xi88 YAMS (SEQ ID NO: 1816) en donde Xiss es N o H.

Grupo 12 NAWMS (SEQ ID NO: 1817) Grupo 13 SSSYYWG (SEQ ID NO:. 1818) Grupo 14 D YYWN (SEQ ID NO: 1819) S YYWN (SEQ ID NO: 1820) i89 YYWN (SEQ ID NO: 1821) . . en donde Xi89 es D o S.

Grupo 15 . . .

SNSA T WN (SEQ ID NO: 1822) SNSA A WN (SEQ ID NO: 1823) SNSA i9o W (SEQ ID NO: 1824) en donde Xigo es T o A.

Grupo 16 S' YDMH (SEQ ID NO: 1825) .

T YDMH. (SEQ ID NO: 1826).

X191 YDMH (SEQ ID NO: 1827) en donde X191 es S o T.

En algunos .casos una proteína, de enlace a antigenos comprende al menos una CDR1, CDR2, o CDR3 de cadena pesada que tiene una de las secuencias de consenso de arriba. En algunos casos, una proteína de enlace a antígenos comprende al menos una CDR1, CDR2, ' o CDR3 de cadena ligera que tiene una de las secuencias de consenso de arriba. En otros casos, la proteína de enlacé a antígenos comprende al menos dos CDRs •de cadena pesada, de acuerdo a las secuencias de consenso de arriba, y/o al menos dos CDRs de cadena ligera de acuerdo a las secuencias de consenso . de arriba. Todavía en otros casos, la proteína de enlace a antígenos comprende al menos tres CDRs de cadena pesada de acuerdo a las secuencias de consenso de arriba, y/o al menos tres CDRs de cadena ligera de acuerdo a las secuencias de consenso de arriba.

Proteínas de enlace a antígenos ejemplares . De acuerdo a un aspecto, una proteína . de enlace. , a antígenos aislada, que comprende (a) una o .; más regiones •determinantes de la complementariedad de (CDRHs) seleccionadas del grupo que consiste en: (i) una CDRH1 seleccionada del grupo que .consiste en SEQ ID NO: 603-655; (ii) una CDRH2 seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 656-732; .(iii).. una CDRH3 seleccionada del grupo que consiste en SEQ I D NO : 733-813 ; y (iv) una CDRH de (i)', (ii) y (iii) que comprende diez, nueve, ocho, siete, seis, cinco, cuatro, tres, dos o una sustituciones, eliminaciones o inserciones de aminoácidos y combinaciones, de las mismas; (b) una o más regiones determinantes de la complementariedad de cadena ligera (CDRLs) que- comprenden una o más de: (i) una CDRL1 seleccionada, del' grupo que . consiste en SEQ ID NO:814-893; (ii) una CDRL2 que consiste en una o más de SEQ ID NO: 894-946; (iii) una CDRL3 que consiste en una o más de SEQ ID- NO: 947-1020 y (iv) .una CDRL de (i), (ii) y (iii.) que que comprende diez, nueve, ocho, siete, seis, cinco, cuatro, tres, dos o una sustituciones, eliminaciones o inserciones de aminoácidos y combinaciones de las mismas; o (c) uno o más CDRHs de cadena pesada (a) y uno o más CDRLs de eadena ligera de (b) .

En otra' modalidad, las CDRHs tienen al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% de identidad de secuencia con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste, en la SEQ ID NO:603-813, y/o las CDRLs tienen al menos 70%', 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% de identidad de secuencia con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 814-1020. En una modalidad adicional, la VH--.se selecciona del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 316-409, y/o, la VL se selecciona del grupo' que consiste en SEQ ID NO: 217-315.

De acuerdo a, un aspecto, una proteina de enlace a antigenos aislada que comprende (a) una o más cadenas pesadas variables (VHs) que comprende una o más de: (i) SEQ ID NO: 316-409; y (ii) una VH de (i) que comprende diez, nueve, ocho, siete, seis, cinco, cuatro, tres, dos o una sustituciones, eliminaciones o inserciones de aminoácidos y combinaciones de las mismas; (b) una. o más cadenas ligeras variables (VLs) seleccionadas del grupo, que consiste en: (i) SEQ - ID NO:217-315, y (ii) una VL de. (i) que comprende diez, nueve, - ocho, siete, seis, cinco, cuatro, tres, dos o', una sustituciones, eliminaciones o inserciones de aminoácidos y combinaciones de. las mismas; o (c) una o más cadenas pesadas variables de (a) y una o más cadenas ligeras variables de (b) .

En otra modalidad, la cadena pesada variable (VH) tiene al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% de identidad de secuencia con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 36-409, y/o la cadena ligera variable (VL) tiene al menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%-, 95%, -96%, 97%. 98%. o 99% de. identidad de secuencia con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste" en la SEQ ID NO: 217-315.

En un aspecto, también se proporciona una proteina de enlace a antígenos' que enlaza específicamente a un epítopo lineal o tridimensional que comprende uno o más residuos de aminoácidos de .FGFRlc, FGRF2c, ' y FGFR3c.

En un aspecto, también se proporciona una proteína de enlace a antígenos que enlaza específicamente a un epítopo lineal o tridimensional que comprende uno o más residuos de aminoácidos de ß-Klotho.

En otro aspecto, también se. proporciona una proteína de enlace a antígenos aislada que enlaza específicamente a un epítopo lineal o tridimensional que comprende uno o más residuos de aminoácidos de tanto ß-Klotho como uno ' o más residuos de aminoácidos de FGFRlc, FGFR2c, y FGFR3c.

Aún en otra, modalidad, la proteína aislada de enlacé a antígenos descrita en la presente arriba comprende una primera secuencia de aminoácidos que comprende al menos una de las secuencias de consenso CDRH descritas en la presente, y una segunda secuencia de aminoácidos que comprende al menos una . de las secuencias de consenso CDRL descritas -en la presente . · .

En¦ un aspecto, la primera secuencia de aminoácidos comprende al menos dos de las secuencias de consenso CDRH, y/o la segunda secuencia de aminoácidos comprende al menos dos de las secuencias de consenso CDRL. En determinadas modalidades, la primera y la segunda secuencia de aminoácidos se enlazan covalentemente una con la otra.

En una modalidad adicional, la primera secuencia de aminoácidos de la proteina aislada, de enlace a antigenos comprende los pares de CDRH3, CDRH2, y CDRH1 que se muestran en la Tabla 5 pa a cada clon, y/o la segunda, secuencia de aminoácidos de la proteina aislada de enlace a antigenos comprende los pares de. CDRL3, CDRL2, y CDRL1 que se muestran en . la Tabla 4 para cada clon.

En una modalidad adicional, la proteina. de enlace a antigenos comprises al menos dos secuencias CDRH de secuencias de cadena pesada Hl, H2, H3, H4, ' H5, H6, H7, H8, H9, H10, Hll, H12, H13, H14, H15, H16, H17 o H18, H19, H20, H21, H22, H23, H24, H25, ' H26, H27, H28, H29, H30, H31, H32, H33, H34, H35, H36, ; H37, . H38, H39, H40, H41, H42, H43, H44, H45, H146, H46, H48, H49, H50, H51, H52, H53, H54, H55, H56, H57, H58, H59, H60, H61, H62, H63, H64, H65, H66, H67, H68, H69, H70, H71, H72, H73, H74, H75, H76, H77, H78, H79, H80, H81, H82, H83, H84, ' H85, H86, H87, H88., H89, H90, H91, H92, H93 .y H94, como se muestra en las Tablas 3A y 4?.

De. nuevo en una modalidad adicional, la proteina de enlace a antigenos comprende al menos, dos secuencias CDRL de secuencias de cadena ligera Ll, L2, L3, L4 , L5, L6, L7, L8, L9, LIO, Lll, L12, L13, L14, L15, L16, L17, L18, L19., L20, L21, L22, L23, L24,. L25, L26, L27, L28, L29, L30, . L31, L32, L33, L34, L35, L36, L37, L38, L39, .L40, L41, L42, L43, L44, L45, L46, L47, L48, L49, L50, L51, L52, L53, L54, L55, L56, L57, L58, L59, L60, L61, L62, L63, L64', L65, L66, L67, L68, L69, L70, L71-, L72, L73, L74, L75, LT6-, Lll, L18, L79, L80, L81, L82, L83, L84, L85, L86, L87, L88, L89, L90, L91, L92, L93, L94, L95, L.96, L97, L98, L99. y LlOO,. como se muestra en las Tablas 3B y 4B.

Todavía en. una modalidad adicional, la prdteína de enlace a antígenos comprende al menos dos secuencias CDRH de secuencias de cadena pesada Hl, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, Hll, H12., H13, H14, H15, H16, H17 o H18, H19, H20, H21, H22, H23, H24, H25, H26, H27, H28, H29, H30, H31, H32, H33, H34, H35, H36, H37, H38\, H39, H40,. H41, H42, H43, H44, H45, H146, H46, H48, H49, H50, H51, H52, H53, H54 , . H55 , H56, H57, H58, H59, H6'0, H61, H62, H63, H64, H65, H66, H67, H68, H69, H70, H71, H72, H7.3, H74, H75, H76, H77, H78, H79, H80, H81, H82, H83, H84 H85, ?8ß, H87, H88, H89, H90, H91, H92, H93 y H94, como se muestra en las Tablas 3A y 4A, y al menos dos' CDRLs de secuencias de cadena ligera Ll, L2, L3, L4, L5, L6, L7, L8, L9, LIO, Lll, L12, L13, L14, L15, L16, L17, L18, L19, L20, L21,- L22, L23, L24, L25, L26, L27, L28, L29, L30, L31, L32, L33, L34, L35, L36, L37, L38, L39, L40, L41, L42, L43, L44, L45, L46, L47, L48, L49,. L50, L51, L52, L53, L54, L55, L56, L57, L58, L59, L60, L61, L62, L63, L64, L65, L66, L67, L68, L69, L70, L7-1, L72, L73, L74, L75, L76, L77, L78, L79, L80,'.L81,. L8.2, L83, L84, L85, L86 L87, L88, L89, "L90, L91, L92, L93, L94, L95, L96, L97., L98, L99 y' L100, como se muestra en las. Tablas 3B y 4B.

De nuevo en otra modalidad, la proteína de. enlace a antigenos comprende las secuencias¦ CDRH1 , CDRH2 ,¦ y CDRH3 de secuencias de cadena pesada Hl, H2, H3, H4, . H5, H6, H7, H8, H9, H10, Hll, . HÍ2, ¦ H13, H14, H15, H16, H17 o H18, H19, H20, H21, H22, H23, H24, H25/.H26, H27,. H28, H29, H30,.H31, H32, H33, H34, H35, H36, .H37, H38, H39, , H40, H41, H42,. -H43, .H44; H45, H146, H46, H48, H49, H50, H51, H52-, H53, H54, H55, H56, H57, H58, H59, H60., H61, H62, H63, H64, H65, H66, 'H67, H68, H69, H70, H71, H72, H73, H74, H75, H76, H77, H78, H79, H80, H81, H82, H83,. H84, H85, H86, H87, H88, H89, H90, H91, H92, H93 y H94, como se muestra en las Tablas 3A y 4A.

Todavía en otra modalidad, la proteína de . enlace .'a antígenos comprende las secuencias . GDRL1, CDRL2, y CDRL3 de secuencias de cadena ligera Ll, L2, L3, L4, L5, L6, L7, L8, L9, LIO, Lll, L12, L13, ,L14, L15, L16, L17, L18, L19, L20, L21, L22, L23, L24, L25, L26, L27, L28, L29, L30, L31, L32, ¦ L33, L34, L35, L36, L3'7 , L38, L39, L40, L41, L42, L43, L44, L45, L46, L47, L48, L49, L50, L51, L52,. L53, L54, L55, L56, L57, L58, L59, L60, L61, L62, L63, L64, L65, ' L66, L67 , L68, L69, L70, L71, L72, L73, L74, L75, L76, L77, L78, L79, L80, L81, L82, L83, L84, L85, L86, L87, .L88, L89, L90, L91, L92, L93, L94, L95, L96, L97, L98, L99 y LlOO, como se muestra en las Tablas 3B y 4B.

Todavía en otra modalidad, la proteínas de' enlace- a antigenos comprendé todas las seis CDRs de una proteína de enlace a antígenos que comprende los siguientes pares VH y VL: VL1 con VH1; VL2 con VH1; VL3 con VH2 o VH3; VL4 con VH4; v¿5 con VH5; VL6 con VH6; VL7 .con VH6; VL8 con VH7 o VH8; VL9 con VH9; VL10 con VH9 VL11 con VH 10; VL12 con VH11; VL13 con VH12; VL13 con VH14; VL14 con VH13; VL15 con VH14; VL16 con VH15; VL17 con VH16; VL18 con VH17; VL19 con VH18; VL20 con.'VH19,- VL21 con VH20; VL22 con YH21; VL23 con VH22; VL24 con VH23; . VL25 con VH2 ; VL26 con VH25; VL27 con VH26; VL28 con VH27; VL29 con VH28; VL30 con VH29; VL31 con VH30;' VL32 con VH31; VL33 con VH32; , VL3 con VH33; VL35 con VH34; VL36 con VH35; VL37 con VH36; . VL38 con ¦VH37; VL39 con VH.38; VL40 con VH39; VL41 con VH40 ; VL42 con VH41; . VL43 con VH42; VL44 con VH43; VL45 con VH44 ; VL46 con VH45; VL47 ¦ con VH46; VL48 con VH4 ; VL49 con VH48 ; VL50 con VH49; VL51 con VH50; VT52 con VH51; VL53 . con VH52; VL54 con VH53; VL55 con VH54; VL56 con VH54; VL57 con VH54; VL58 con VH55; VL59 con VH56; ' VL60 con VH57 ; VL61 con VH58; VL62 con VH59; VL6.3 con VH 60; VL( 54 con VH1; VL65 con V H62; ¦ VL66 con: VH63; VL67 con VH64; VL68 con VH65 VL69 con VH66; VL70 con VH67; VL71 con VH68; VL72 con VH69;. VL73 con VH70; VL74 con VH70; VL75 con - V„70; VL76 con VH71;. VL77 con VH72; VL78 con VH73-; VL79 con VH74; VL80 con VH75; . VL81 con VH76; . Vt82 con VH77; VL83 con VH78; VL84 con VH79; VL85 con VH80; VL86.con VH81; VL87 con. VH82; VL88 con VH86; VL89 con VH83; VL90 con VH84; VL91 con VH85; VL.92 con VH 87; VL 93 con VH'88; VL 94 con - VH 88; VL 95 con VH 89; VL 96 con VH 90; VL 97 con VH 91; VL 98 con VH 92; VL 99 con VH 93; and VL 100 con VH 94-; corao. se muestra en las Tablas 2A y 2B y las Tablas 4A y.4B.

Tabla 7A Secuencias de Cadena Pesada ??> o (,p en o Oí Cn O Cn O OI Ln ??> o [ i o n O NO O en tv> o en En un aspecto, las proteínas de enlace a antígenos aisladas que enlazan específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (i'i) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, proporcionados en la presente, pueden ser .un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo policlonal, un anticuerpo recombinante, un anticuerpo humano, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo quimérico, un anticuerpo multies.pecífico, o un . fragmento de anticuerpo del mismo.

En otra, modalidad, el fragmento de. anticuerpo, de las proteínas que enlazan .a antígeno aisladas proporcionadas . en la presente pueden ser un fragmento Fab, un fragmento Fab' , un fragmento F(ab' )2, un fragmento Fv, un diacuerpo, o una molécula de anticuerpo de cadena sencilla.

En una modalidad adicional, una proteína de enlace a antígenos aislada que enlaza específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y · al menos uno.de (i) FGFRle, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, proporcionados en la presente es un anticuerpo humano . y puede ser del tipo IgGl, , IgG2, IgG3- o IgG4.

E otra modalidad, una proteína de enlace a antígenos aislada que enlaza específicamente aun complejo. que. Comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRle, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, comprende un polipéptido de cadena pesada" o ligera como se establece en las Tablas 1A-1B. En algunas modalidades, una proteína de enlace a. antígenos. que enlaza específicamente . a un complejo que comprende ß-Klothó . y al menos uno de (i), FGFRle, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, comprende un dominio ligero variable o pesado, variable tal como, aquellos enlistados en. las Tablas 2A-2B. Todavía en otras modalidades, una proteína de enlace a . antígenos . que enlaza específicamente a un complejo que comprende . ß-Klotho y al menos uno de (i) .FGFRlc, (ii) ' FGFR2c, y .'(iii) FGFR3c, comprende uno, dos . o tres CDRHs o uno, dos o tres CDRLs como se establece en, las Tablas 3A-3B, 4A-4B, infra.- Tales proteínas de enlace a antígenos, y es más cualquiera de las proteínas de enlace a antígenos descritas en, la . presente, pueden . PEGilarse con una o más moléculas PEG, por ejemplo moléculas PEG que tienen un peso molecular seleccionado del grupo que consiste en 5K, 10K, 20K, 40K, 50K, 60K, 80K, 100K o mayor que 100K.

Aún en otro aspecto, cualquier proteína .. de enlace a antígenos que enlaza . específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, proporcionados en . la presente pueden acoplarse a un grupo etiquetado y pueden competir para enlazar a la porción '¦extracelular de los componentes de la proteína individual de un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, con una proteína de enlace a antígenos de una de las proteínas de enlace a antígenos aisladas proporcionadas en la presente. En una modalidad, la proteína aislada de enlace a antígenos proporcionada en la presente puede reducir niveles de glucosa en la sangre, disminuir triglicéridos y niveles de colesterol o mejorar otros parámetros glicémicos y factores de riesgo cardiovasculares cuando se administran a un paciente.

Como se apreciará, para cualquier . pfoteíria de enlace a antígenos que comprende más de una CDR proporcionada en las Tablas 3A-3B, y 4A-4B, cualquier combinación de CDRs independientemente seleccionada de las secuencias .' descritas puede utilizarse. De esta manera, las proteínas de enlace a antígenos con uno, dos, tres, cuatro, cinco o' seis de ¦independientemente CDRs seleccionados pueden generarse. Sin embargo, como se apreciará por aquellos en la técnica, las modalidades específicas generalmente utilizan combinaciones de CDRs que no son repetitivas, por ejemplo, las proteínas de enlace a antígenos generalmente no se hacen con dos regiones CDRH2, etc.

Algunas de las proteínas de enlace a antígenos que enlazan específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, que se proporcionan en 'la presente se discuten en más detalle a continuación.

Proteínas, de enlace a antígenos y Epitopos de Enlace y Dominios de Enlace Cuando una proteína de enlace a antígenos se dice que va a. enlazar un epítopo en un complejo que comprende ß-Klotho. y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, , o el dominio extracelular de tal complejo, lo que significa es que la proteína de enlace a 'antigenos enlaza específicamente a una porción específica del complejo que. comprende ß-Klot o y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, o al dominio . extracelular de tal complejo.. En algunas modalidades, por ejemplo, en ciertos casos donde la proteína de enlace a antígenos enlaza solamente ß-Klotho, la proteína de enlace a antígenos puede enlazar específicamente a un polipéptido que consiste de residuos específicos (por ejemplo, un segmento, específico de ß-Kiotho) . En otras modalidades, por ejemplo, en ciertos casos donde una proteína de enlace a antígenos interactúa con tanto ß- lotho como al menos uno de (i)FGFRlc, (ii)FGFR2c, y. (iii) FGFR3c, la proteína de. enlace, a antígenos puede enlazar residuos, secuencias de residuos, o regiones en tanto ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii)FGFR2c, y (iii)FGFR3c, dependiendo de cuál receptor reconoce la proteína de enlace a antígenos. Todavía en otras modalidades la proteína de enlace a antígenos enlazará residuos, secuencia' o residuos o regiones de un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y ( iii ) FGFR3c, , por ejemplo FGFRlc.

En cualquiera de las modalidades anteriores, tal proteína de enlace a antígenos no necesita tener contacto con cada residuo de ß-Klotho o un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, , . o el dominio extracelular de las proteínas o complejos mencionados. Tampoco cada sustitución o eliminación de aminoácido sencilla dentro de ß-Klotho o un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc,- (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, , o el dominio extracelular de las proteínas o complejos mencionados, necesariamente de manera significativa afecta, la afinidad de enlace.

La especificidad del epítopo y los dominios de enlace de una proteína de enlace a antígenos puede determinarse por una variedad de métodos. Algunos métodos,, por ejemplo, pueden usar porciones, truncadas de un antígeno. Otros métodos utilizan antígeno mutados en uno o más residuos específicos, tal como al emplear un enfoque tipo barrido de. arginina o barrido de alaniná o por la generación y estudio de proteínas quiméricas en las cuales varios dominios,, regiones o aminoácidos se intercambian entre dos proteínas (por ejemplo, formas . de ratón y. humanas de . uno o más de los antígenos o proteínas objetivo), o por ensayos de protección de proteasa.

Proteínas de enlace a antigenos competentes En otro aspecto, las proteínas de enlace a antígenos se proporcionan que compiten con uno de los anticuerpos ejemplificados o fragmentos funcionales para enlazar a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c. Tales proteínas de enlace a antígenos también pueden enlazar al mismo epitopo como una de las proteínas dé enlace a antígenos ejemplificadas en la presente, o un epitopo traslapado . Las . proteínas . de enlace. a antígenos y fragmentos que compiten, con o enlazan al mismo epitopo como las proteínas de enlace a antígenos ejemplificadas se espera que muestren propiedades funcionales similares. Las proteínas de enlace a .. antígenos ejemplificadas y'; fragmentos incluyen aquellas con las cadenas ligeras y pesadas H1-H94 y L1-L100, . dominios de región variable VL1-VL100 y VH1-VH94, y .CDRs proporcionados en la presente, incluyendo aquellos en las Tablas 1, 2, 3, y 4. De esta manera, como un ejemplo específico, las proteínas de enlace a antígenos que se proporcionan incluyen aquellas que compiten con un anticuerpo' que comprende: (a) 1, 2, .3, 4, .5 o todas las 6 de las CDRs enlistadas para una proteína de enlace a antígenos en las Tablas 3A y 3B, y 4A y 4B, infra; (b) una VH y una VL seleccionada de VL1-VL100 y VH1-VH94 y enlistada por una¦: proteína de enlace a¦ antígenos. enlistada en las Tablas 2A y 2B; o (c) dos cadenas ligeras y dos cadena pesadas como se especifica por una proteína de enlace a antígenos enlistada en las Tablas 1A y 13, infra.

De esta manera, en una modalidad, la ·¦ presente descripción proporciona proteínas de enlace a antígenos, incluyendo anticuerpos, humanos, que . compiten para enlace a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, con un anticuerpo de referencia, en donde el anticuerpo de referencia comprende una combinación de secuencias de dominio variable de cadena ligera y cadena pesada seleccionada del grupo que consiste en VL1 con VH1, VL2 con VH1, VL3 con VH2 or VH3, VL4 con VH4, VL5 con VH5, VL6 con VH6, VL7 con VH5, VL8 con VH7 or VH8 , VL9 con V„9, VL10 con VH9, VL11 con VH 10, VL12 con VH11, VL13 con VH12, VL13 con VH14, VL14 con VH13, VL15 con VH14, VL16 con VH15, VL17 con VH16, VL18 con .VHl7, VL19 con VH18, VL20 con VH19, VL21. con VH20, VL22 con VH21, VL23 con VH22, VL24 con VH23, VL25 con •VH24, VL26 coa VH25, VL27 con VH26, VL28 con VH27, VL29 con • VH28, VL30 con VH29, VL31 con VH30, VL32 con VH31, VL33 con VH32, VL34 con VH33, VL35 con VH34, VL36 con VH35, VL37 con VH36, VL38 con VH37, VL39 con VH38, VL40 con VH39, VL41 con VH40, VL42 con VH41, VL43 con VH42, VL44 con VK43, VL45 con VH44,. VL46 con VH45, VL47 con VH46, VL48 ' con VH47, VL49 con VH48, VL50 con VH49,. VL51 con VH50, 52 con VH51, VL53 con VH52, VL5 con- VH53, VL55 con 54, and VL56 con VH54, VL57 con VH54, VL58 con VH55, VL59, con VH56, VL60 con VH57, V:,61 con VM58, VL62 con VH59, VL63 con VH60, VL64 con' VH1, ¦ VL65 con VH62., VL66 con VH63, VL67 con VH64, VL68 ' con VH65, . VL69. con VH66, VL70 con VH67, VL71 con VH68, VL72 con VH69, VL73 con VH70, VL74 con VH70, and VL75 con'VH70, VL76 con VH71, VL77 con .VH72; VL78 con VH73, VL79 con VH74., VL80 con VH75, . VL81 con VH76,. VL82 con V«77, VL83 con VH78, VL84 con VH79, VL85 con VH80, ' .VL86- con VH81, VL87 con VH82,. VL88 con VH86, VL89 con VH83 . VL90 con VH84, VL91 con VH85, VL 92 con VH 87, VL 93 con VH 88, VL 94 con VH 88, VL 95 con VH. 89, VL 96 con VH 90, VL.97 con VH' 91, VL 98 con VH 92, VL 99 con VH 93, y VL 100 con VH 94.

En otra modalidad, la presente descripción proporciona proteínas de enlace a 'antigenos, incluyendo anticuerpos humanos, que compiten para enlazar a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c y (iii) . FGFR3c con un anticuerpo de referencia, en donde el anticuerpo de referencia es 63G8, 64A8, 67B4', 68D3, 64E6, 65E8, 65F11, 67G7, 63B6, 64D4, 65C3, 68D5, 63E6., 66F7, 64H5, 65G4, 67G10vl, 67G10v2, 66B4., 66G2, 68G5, 63F5, 66F6, 65C1, 64A7, 66D4, 65B1, 67A4, 65B4, 63A10, 65?11, 64C8, 65E3, 65D4, 65D1, 67G8, 65B7, 64A6, 65F9, 67F5, 64B10,' 68C8, 67A5, 67C10, 64H6, 63F9, 67F6, .48H11, 52A8, 52F8 49H12, 54A1, 55G9, 49C8, 52H1, 60G5.2, 49G3, 59A10, 48F8, 53B9, 56B4, 57E7, 57F11, 59C9, 58A5, 57A4,. 57F9,, 51G2, 56A7, 56E4, 54H10, 55D1, 48H3, ' 53C11, 59G10.3, 51C10.1, ,59D10vl, 59D10v2, 60F9, 48?4,· 52D6, 61G5, 59G10.2, 5.1A8, 53H5.2 , ¦ 53F6, .56C11 , 49A10 ,. 48D4, 49(3.2, 50C12, 55G11, 52C1, 55?9, 60D7 , .51C10.2, 55D3, 57B12, 52C5, 60G5.1, 55?4., 49B11,. 50H10, 53C1, 56G1, 48F3, 48C9, 49A12, 51E2, 51E5, 53?5..3, 56G3.3, 55B10, 52?8, 55G5, 52?2, 56G3.2, 6?7, 57D9, 61H5, . 48G4, 50G1, 58C2, 50D4, 50G5vl, 50G5v2, 51C1, 53C3.2, .54H10.3> . 55?7, 55?6., 61E1, 53C3.1, 49?4, y 51E2.

En una modalidad adicional, una proteína aislada de enlace a antígenos, tal como un anticuerpo humano, se proporciona que enlaza a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de. (i) FGFRlc, ( ii ) FGFR2c y (iii) FGFR3c con sustancialmente la misma Kd como un anticuerpo de referencia; inicia la señalización de.l tipo FGF21 en un ensayo de ELK-Luciferasa in vítro al mismo grado como un anticuerpo de referencia; disminuye la glucosa en la sangre; disminuye los niveles de lípidos. en suero; y/o compite por el enlace con dicho anticuerpo de referencia a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, . (ii) FGFR2c y (iii) FGFR3c, en donde el anticuerpo de referencia se selecciona del grupo que consiste en 63G8, 64A8, 67B4, 68D3, 64E6, 65E8, 65F11, 67G7, 63B6, 64D4, 65C3, 68D5, 63E6, 66F7,. 64H5, 65G4, 67G10vl, 67G10V2, 66B4, 66G2, 68G5, 63F5, 66F6, 65C1, 64A7, 66D4, 65B1, .-67A4, 6.5B4, 63A10, 65H11, 64C8, 65E3, 65D4, 65D1, 67G8, 65B7, 64A6, 65F9, 67F5, 64B10, 68C8, 67A5, 67C10, 64H6, 63F9, 67F6, 48H11, 52A8, 52F8, 49H12, 54A1, 55G9, 49C8, 52H1, 60G5.2,. 49G3, 59A10, 48F8, 53B9,. 5ß?4, ·57?7, 57F11, 59C9, 58?5, 57?4, .57F9, 51G2, 56?7, 56?4, 54H10, 55DI., 48?3, 53C11, 59G10.3/ 51C10.1, . 59D10vl, 59D10v2, 60F9, 48B4, 52D6, 61G5, 59G10.2, 51A8, 53H5.2, 53F6, 56C11, 49A10, 48D4, 49G2, 50C12, 55G11, 52C1, 55E9, 60D7, 51C10.2, 55D3,. 57B12, 52C5, .60G5.1, 55E4, 49B11, 50H10, 5.3C1, 56G1, 48F3, 48C9, 49A12, 51E2, 51E5, 53H5.3, 56G3.3, 55B10, 52B8 , 55G5 , '¦ 52?2 , 56G3.2, 6?7, 57D9, 61H5, 48G4, 50G1, 58C2, 50D , . 50G5vl , ' 50G5v2 , 51C1, 53C3.2, 54H10.3, .55?7, , 55?6, 61E1, 53G3.1, 49?4, y '51E2.

La capacidad de competir, con un anticuerpo puede determinarse al usar cualquier ensayo adecuado, tales como aquellos aquí descritos, en los cuales las . proteínas de enlace a antigénos 63G8, 64A8, 67B4, 68D3, 64E6, 65E8, 65F11, 67G7, 63B6, 64D4, . 65C3, 68D5, 63E6, 66F7, - 64H5, - 65G4, 67G10v.l, 67G10v2, 66B4', 66G2, 68G5, 63F5, 66F6, 65C1, 64A7, 66D4, 65.B1, 67A4, 65B4, 63A10, 65H11, 64C8, 65E3, 6'5D4, 65D1, 67G8, 65B7, 64A6, 65.F9, 67F5, 64B10, 68C8, 67A5, 67C10, 64H6, 63F9, 67F6, 48H11,..52A8 , 52F8, 49H12, 54A1, 55G.9, 49C8, 52H1, 60G5.2, 49G3, 59A10, . 48F8, 53B9, 56B4, 57E7, 57F1I, 59C9, 58A5, 57A4, 57F9, 51G2, 56A7, 56E4, 54H10, 55D1, 48H3, 53C11, 59G10.3, 51C10.1, 59D10vl, 5.9D10v2, 60F9, 48B4, 52D6, 61G5, 59G10.2, 51A8, 53H5.2, 53F6, 56C11, 49A10, 48D4, 49G2, 50C12, 55G11, 52C1, .55E9, 60D7, 51C10.2, 55D3, 57B12, 52C5, 60G5.1, 305 55E4, 49B11, 50H10,. 53C1, 56G1, 48F3, 48C9, . 49A12, 51E2, 51E5, 53H5.3, 56G3.3, 55B10, 52B8, 55G5, 52H2, 56G3.2, 6E.7, 57D9, 61H5, 48G4,. 50G1, 58C2, 50D4, 50G5vl, ..50G5v2, 51C1, 53C3.2-, 54H10.3, 55A7, 55E6, 61E1, 53C3.1, 49H4, y. 51?2 pueden usarse como el anticuerpo de referencia.

Anticuerpos monoclonales Las proteínas de enlace a antígenos que se proporcionan incluyen anticuerpos monoclonales que enlazan a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos . uno. de (i) . FGFRlc, .(ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3.C , e inducen señalización del tipo FGF21 a varios grados. Los anticuerpos monoclonales pueden producirse usando cualquier técnica conocida en la técnica, por ejemplo, al inmortalizar células de bazo cosechadas del animal transgénico después de la terminación del programa de inmunización. . Las células de bazo pueden inmortalizarse usando cualquier técnica conocida en el arte, por ejemplo, al fusionarlas con células de mieloma para producir hibridomas. Las. células de mieloma para uso en procedimientos.. de fusión que producen hibridoma preferiblemente que se. producen, sin anticuerpo, tienen eficiencia de fusión alta, y deficiencias de la enzima que las vuelve incapaces de crecer en cierto medio selectivo que- soporta el crecimiento de^ solamente las células fusionadas deseadas (hibridomas). Los ejemplos de líneas . celulares adecuadas para uso en fusiones de ratón incluyen Sp-20, P3-X63/Ag8, P3-X63-Ag8.653, NSl/l.Ag 4 1, Sp210-Agl4, FO, NSO/ü, MPC-11, MPC11-X45-GTG 1.7 y S194/5XXO Bul; los ejemplos de las líneas celulares usadas en fusiones de rata incluyen R210.RCY3, Y3-Ag 1.2,3, IR983F y 4B210. Otras líneas celulares ' útiles para las fusiones, celulares son U-266, GM1500-GRG2, LIGR-L0N-HMy2 y UC729-6.

En algunos casos, una línea celular de hibridoma se produce al inmunizar un animal (por ejemplo, un animal transgénico que tiene secuencias de' inmunoglobulina humana) con un, inmunógeno qué comprende (1) receptor' de enlace a células de los transíectantes CHO que expresan .FGFRlc humano de longitud completa, y ß-Klotho en la superficie celular, obtenido al transfectar células CHO con cDNA que codifica un polipéptido FGFRlc de longitud completa de SEQ ID NO: 4 y cDNA qué codifica un polipéptido ß-Klotho humano de SEQ ID NO;,7 con células incubadas con FGF21 previo a congelación (como se muestra en el Ejemplo 2); o (2) receptor enlazado a células de transíectantes . 293T que expresan ß-Klotho humano de longitud completa y una forma truncada en N-terminal de FGFRlc humano que abarca el residuo de aminoácido #141 hasta el, polipéptido#822. de: SEQ ID NO: 4 (como se muestra en el Ejemplo 2); cosechar las células de. bazo del animal inmunizado; fusionar las células de bazo cosechadas a una linea celular de . mieloma, por ello generan células de hibridoma; estableciendo lineas celulares de hibridoma de las células de hibridoma, ·ß identificando una linea celular de hibridoma que produce un anticuerpo que enlaza a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, y puede inducir señalización del tipo FGF21 (por ejemplo, como se describe en el Ejemplo 4). Tales lineas celulares de hibridoma, y los anticuerpos monoclonales producidos por ellas, forman aspectos de la presente descripción.

Los anticuerpos monoclonales .secretados por .una linea celular de hibridoma pueden purificarse usando, cualquier técnica conocida, en el arte. Los hibridomas o mAbs pueden cribarse adicionalmente para identificar mAbs con propiedades particulares, tal como la capacidad para inducir . señalización del tipo FGF21. Los ejemplos de tales cribados se proporcionan en la presente.

Anticuerpos humanizados y quiméricos Los anticuerpos humanizados y quiméricos con base en las secuencias anteriores pueden fácilmente generarse. Un ejemplo es un anticuerpo quimérico, el cual es un · anticuerpo compuesto de segmentos ' de proteina de anticuerpos diferentes que se unen de forma covalente para producir cadenas pesadas o ligera . de . inmunoglobulina funcional o porciones inmunológicamente , funcionales de . los mismos. . Generalmente, una porción de la cadena pesada y/o cadena ligera.es idéntica con, u homologa. a. una secuencia correspondiente en anticuerpos derivada de una especie particular o que pertenece a una. clase o subclase de. anticuerpo particular, mientras que el resto de las cadenas son idénticas con ,.u homologas a una secuencia correspondiente en anticuerpos derivados de otra . especie o que pertenece a otra clase . o subclase de anticuerpo. Para los métodos relacionados con anticuerpos quiméricos,, ver, por ejemplo, Patente^ de E.U.A. No. 4, 816, 567; y. Morrison et al., 1985, Proc. Nati Acad. Scí. USA 8_1: 6851-6855, que se incorporan en la presente como referencia. El injerto CDR se describe, por ejemplo, en la Patente de E.U.A. No. 6, 180, 370, No. 5, 693,762, No. 5,693,761, No. 5,585,089, y No. 5, 530, 101.

Generalmente, . el objetivo de hacer un anticuerpo quimérico es crear una quimera en la cual .el número, de aminoácidos de la especie del paciente/receptor pretendida se maximiza. Un ejemplo es el anticuerpo "injertado con CDR", en el cual el. anticuerpo comprende una o más regiones determinantes de la. complementariedad (CDRs) de una especie particular o . que pertenece a una clase o . subclase de anticuerpo particular, mientras que el resto de las cadenas de anticuerpo son idénticas con u homologas a una secuencia correspondiente en anticuerpos derivados de otra especie¦¦ o que pertenece a otra clase o subclase de anticuerpo. Para uso en humanos, la región variable o CDRs seleccionados de un anticuerpo de roedor a menudo se injertan en . un anticuerpo humano, reemplazando las regiones variables que se presentan naturalmente o CDRs del anticuerpo humano.

Un tipo útil de anticuerpo quimérico es un anticuerpo "humanizado". Generalmente, un anticuerpo humanizado se produce de un anticuerpo monoclonal formulado inicialmente en un animal no humano. Ciertos residuos de aminoácidos en este anticuerpo monoclonal,. típicamente de porciones que no reconocen al antígeno del anticuerpo, se modifican para ser homologas a. residuos correspondientes en un anticuerpo humano de isotipo ¦ correspondientes. Las. humanización puede realizarse, por .ejemplo, usando varios métodos al sustituir al ' menos una porción de una región variable de roedor para las regiones correspondientes de un anticuerpo humano (Ver, por ejemplo, Patente de E.U.A. No. 5,585,089, y No. 5,693,762; Jones et ai., 1986, Nature .321:522-525; Riechmann et al., 1988, Nature 332:323-27; Verhoéyen et al., 1988, Science.239:1534-1536) .

En un aspecto, . las CDRs de- regiones variables cadena pesada y ligera de los anticuerpos proporcionados en la presente (por ejemplo, en las Tablas 3-4 y 21-23) se injertan a regiones de estructura (FRs) de anticuerpos de la misma, o una diferente, especie filogenética . Por ejemplo,; las CDRs de las regiones variables de cadena ligera y pesada VH1, VH2, VH3, VH4, VH5, VH6, VH7, VH8, VH9, VH10, VH11, VH12, VH13, VH14, VH15> VH16, VH17, VH18, VH19, VH20, VH21 VH22, VH23, VH24, VH25, VH26, VH27, VH28, VH29, VH30, VH31, VH32, VH33, VH34, VH35, VH36, VH37, VH38 VH39, VH40, VH41, VH42, VH43, VH44, VH45, VH46, VH47, VH48, VH49, VH50, VH51, VH52, VH53, VH5 , VH55, VH56, VH57, VH58, VH59, VH60, VH61, VH62, VH63, VH64, VH65, VH66, VH67, VH68, VH6.9, VH7 , VH71, VH72, VH73, VH74, VH75, VH76, VH11 , VH78, VH79, VH80, 81, VH82, VH83, VH84, VH85, VH 86, VH 87, VH88, VH89, VH90, VH91, VH92, VH93, y VH94 y/o VL1, VL2, VL3,; VL4 . VL5, VL6, VL7 , VL8, VL9, VL10, VL11, VL12, VL13, VL14, VL15, VL16, . VL17 , VL18 , VL19, VL20, VL21, VL22, VL23, VL24, VL25, . VL26, VL27, VL28, VL29, VL30,. VL31, VL32, VL33, VL34, VL35, VL36, VL37, VL38, VL39, VL40, VL4Í, V,.42, VL43, VL44, VL45, VL46, VL47, VL48, VL49, VL50, VL51, VL52, VL53, VL54, VL55, . VL56, VL57, VL58, .VL59, VL60, VL61, VL62, VL63, VL64, VL65,,VL66,- VL67, VL68, VL69, VL70, VL71, VL72, VL73, VL74, VL75, NL76, VL77, VL78, VL79, VL80, VL81, VL82, VL83, VL84, VL85, VL86, VL87, VL88, VL89, VL90, VL91, VL92, VL93, VL94, VL95, VL96 VL97, VL98, . VL99 y VL100 pueden injertarse; a FRs humanas de consenso. Para, crear FRs humanas de consenso, las FRs de varias secuencias de aminoácidos de cadena ligera o cadena pesada humanas pueden alinearse para identificar una secuencia de aminoácido de consenso. En otras, modalidades, las FRs de una cadena pesada o cadena ligera descritas en la presente se reemplazan con las FRs de una cadena pesada, o cadena ligera diferente. En un aspecto, los aminoácidos raros en las FRs de las cadenas pesadas y ligeras de. una proteína de enlace a antígenos (por ejemplo, un anticuerpo) que enlazan específicamente aun complejo que comprende ß- Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, no se' reemplazan, mientras que el resto de los aminoácidos FR se - reemplazan . Un "aminoácido raro" es un aminoácido específico que está en una posición en la cual este aminoácido particular no se encuentra usualmente en un FR; Alternativamente., las regiones variables injertadas de la cadena ligera o pesada pueden usarse con una región constante que. es . diferente de la región constante de. tal cadena ligera o pesada particular como se describen en la presente. En otras' modalidades, las. regiones variables injertadas son parte, de un anticuerpo Fv de cadena sencilla.

En determinadas modalidades, las regiones constantes de especies diferentes a humano pueden usarse junto con las regiones variables humanas para producir anticuerpos híbridos. · ' ¦ ¦.-.

Anticuerpos Completamente Humanos Los anticuerpos completamente humanos también se proporcionan por la descripción actual. Los métodos están disponibles para hacer anticuerpos , completamente humanos específicos para un antígeno dado sin. exponer a los seres humanos al antígeno ("anticuerpos completamente humanos''). Un ' medio específico proporcionado para implémentar la producción de anticuerpos completamente humanos es la "humanización" del sistema inmunitario humoral de ratón. La introducción de la ubicación de . inmunoglobulina- humana (Ig) en ratones en la cual los genes Ig endógenos se han inactivado es un medio para producir anticuerpos monoclonales completamente humanos (mAbs) en ratones, un animal que ' puede inmunizarse con cualquier antígeno deseado. Usando anticuerpos completamente humanos pueden minimizarse las respuestas inmunogénicas y alérgicas que pueden, algunas veces provocarse al administrar. mAbs de ratón o · derivados de ratón a humanos como agentes terapéuticos.

Los anticuerpos completamente humanos pueden producirse al inmunizar animales transgénicos (típicamente ratones) que son capaces de producir un repertorio de anticuerpos humanos en la ausencia de .producción de inmunoglobulina endógena. Los antígenos para este propósito típicamente tienen seis o más aminoácidos contiguos, y opciohalmente se conjugan para un portador, 'tal-' como un haptenó. Ver, por ejemplo, Jakobovits et al., (1993) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90:2551-2555; Jakobovits .. et al., (1993) Nature J62: 255-258 ; y Bruggermann et al., (1993) Year in Immunol . 7_:33. En un ejemplo de tal método, los animales transgénicos se producen al incapacitar la ubicación de. inmunoglobulina de ratón endógena que codifica las cadenas de inmunoglobulina ligeras ,y'. pesadas de ratón en ellos, e' insertar en lós fragmentos grandes' del genoma de ratón de ADN de genoma humano que contiene la ubicación que codifica las proteínas de cadena ligera ' y pesada humanas. Los animales parcialmente modificados, que tienen menos que el complemento completo de ubicación de inmunoglobulina humana, luego se cruzan para obtener un animal .que -tiene todas .de las- modificaciones del sistema inmunitario deseadas. Cuando se administra un inmunógeno, estos animales transgénicos producen anticuerpos que son inmunoespecíficos para el inmunógeno pero tienen secuencias de aminoácidos humanas en vez de. secuencias de aminoácidos de murino, incluyendo las regiones variables. Para detalles adicionales de tales métodos, ver, por ejemplo, W096/33735 y WO94/02602. Los métodos adicionales con relación a los ratones transgénicos para hacer anticuerpos humanos se describen en. la Patente de.E.U.A. o. 5,545,807; No. 6,713,610; No . 6 , 6 3 , 986 ; Nó .. ;6, 162, 963; No. 5, 545, 807; No. 6, 300, 129; .¦No-. 6, 255, 458; No. 5, 877,.3.97; No. 5, 874, 299 y No. 5, 545, 806; en publicaciones PCT WO91/10741, WO90/04036, y en EP 546073 y EP 546073.

De acuerdo con ciertas modalidades., los anticuerpos de la. invención pueden prepararse a través del uso de un ratón transgénico que tiene una porción sustancial del genoma productor del anticuerpo humano insertado, , pero que resulta deficiente en la producción de anticuerpos . murinos, endógenos.. Tales ratones,- entonces pueden producir moléculas de inmuhoglobulina humana y anticuerpos y son deficientes en la producción dé moléculas y anticuerpos de inmunoglobulina murina. Las tecnologías utilizadas para alcanzar este resultado se describen en las patentes, solicitudes y referencias descritas en la especificación en la presente. En determinadas, modalidades, se pueden emplear métodos tales como aquellos descritos en la Solicitud PCT publicada No. WO 98/24893 o en Méndez et al., (1997) Nature . Genetics, 15:146-156, las cuales se incorporan en la presente como referencia para cualquier propósito.' Generalmente, los . anticuerpos monoclonales humanos completos específicos para un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) .FGFRlc, (ii) FGFR2c y (iii) FGFRlc se pueden producir como sigue. Los ratones transgénicos que contienen genes de imunoglobulina humana se inmunizan con, el antigeno de interés, por ejemplo aquellos descritos en la presente, se obtienen, células linfáticas (tales .como, las células B) a partir de los ratones que expresan anticuerpos. Tales células recuperadas se fusionan a una linea celular de tipo mieloide para, preparar lineas celulares inmortales de hibridoma, y tales lineas celulares de hibridoma se criban y seleccionan para identificar lineas celulares de hibridoma que producen anticuerpos- específicos para el antígeno de interés. En determinadas modalidades, se contempla la producción de una línea cellular de hibridoma que produce anticuerpos específicos para un complejo que comprende ß-Klotho. y al menos uno. de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c y (iii) FGFRlc.

En determinadas modalidades, los anticuerpos completamente humanos pueden producirse al. exponer los esplenocitos humanos (células B o. T) a un antígeno in vitro, y luego reconstituir las células expuestas en un ratón inmunocomprometido, por ejemplo SCID o nod/SCID. . Ver, por ejemplo, Brams et' .al.', J.Immunol. 160: 2051-2058 (1998); Carballido et al.., Nat . Med., 6: 103-106 (2000). En ciertos de tales métodos, el injerto del tejido humano fetal dentro de los ratones SCID (SClD-hu) resulta en hematopoiesis de largo plazo y desarrollo de células T humanas.. Ver, por ejemplo, McCune ét al., Science, 241:1532-1639 (1988); Ifversen et al., Sem. Immunol., 8:2-43-248. (1996). En ciertos casos, la respuesta inmunitaria humoral en tales ratones quiméricos depende .del . có-desarrollo de células T humanas en los animales. Ver,. por ejemplo, arte sson et al., Immunol., 83:1271-179 (1994). En ciertas de. tales metodologías, los linfocitos sanguíneos periféricos humanos se transplantan en ratones SCID. Ver, por ejemplo, Mosier et al., Nature, 335:256-259 (1988). En ciertas modalidades,- cuando tales células transplantadas se tratan, ya sea con un agente cebador, tal como Enterotoxina A. de ' estafilococos (SEA) , o con anticuerpos monoclonales anti-humanos CD40, se detectan niveles superiores de la producción de. células B. Ver, por ejemplo, Martensson et al., Immunol., 84: 224-230 (1995); Murphy et al., Blood, 86:1946-1953 (1995).

Así, en ciertas modalidades, los. anticuerpos completamente humanos pueden producirse por la expresión de ADN recombinante en células hospederas o por la expresión en células de hibridoma. En otras modalidades, se pueden producir los anticuerpos al usar las técnicas de despliegue de fagos aquí descritas.

Los anticuerpos aquí descritos se prepararon mediante el uso de la tecnología XENOMOUSE®, como se describe en la presente. Tales ratones, entonces, pueden producir moléculas y . anticuerpos de inmurioglobulina- humana y son deficientes en la producción de. moléculas de inmunoglobulina murina y anticuerpos. Las tecnologías utilizadas para, alcanzar las mismas se describen en las patentes, solicitudes, . y referencias descritas en la sección de antecedentes en .la presente. En particular, sin embargo, una modalidad preferida de la producción transgénica de ratones y anticuerpos a partir de ellas se describe en la solicitud de patente de E.U.A. No. 08/759,620, presentada el 3 de diciembre de 1996 y solicitud internacional de patente . Nos. WO 98/24893, publicada el 11 de. junio de 1998 y WO 00/76310, publicada el 21 de diciembre de 2000, las descripciones de las cuales se incorporan en la presente como referencia. Ver también Méndez et al., Nature Genetics, 15:146-156 (1997), la descripción de la cual se incorpora en la presente como referencia.

Mediante el uso de tal tecnología, se han producido anticuerpos monóclonales completamente humanos.

Esencialmente, las líneas XENOMOUSE® de ratones se inmunizan con un antígeno de interés (por ejemplo un antigen aquí proporcionado), células linfáticas (tales como . células B) se recuperan de los ratones hiper-inmunizados, y los linfocitos recuperados se fusionan con una línea celular de tipo mieloide para preparar líneas . celulares de hibridoma inmortales. Estas líneas ' célulares de hibridoma se criban: y seleccionan para identificar líneas, celulares, de hibridoma que producen anticuerpos específicos para el antígeno de interés. Se proporcionan' en la presente métodos para la producción de líneas celulares múltiples de hibridoma que producen anticuerpos específicos para un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2.C y (iii) FGFRlc. Además, se proporcionan en la presente la caracterización de los anticuerpos producidos por tales líneas celulares, incluyendo análisis de las secuencias de aminoácidos y nucleótidos de las cadenas ligeras y. esadas de tales anticuerpos. , La producción de las cepas de; XENOMOUSE® de ratones se discute, además y se delinea en la solicitud de patente de E.U.A. Nos. 07/466,008, presentada el 12 de enero, 1990, 07/610,.515, presentada el 8 de noviembre, 1990, 07/919,29.7, presentada el 24 de julio, 1992, 07/922,649, presentada el 30 de julio, 1992, .08/031, 801, presentada el 15 de marzo, 1993, 08/112,848, presentada el 27 de agosto, 1993, 08/234, 14.5, presentada el 28 de abril, 1994, 08/376,279, presentada el 20 de enero, 1995, 08/430, 938, presentada el. 27 de abril, 1995, 08/464,584, presentada el 5 de junio, 1995, 08/464,582, presentada el 5 de junio, 1995, 0.8/463, 191, presentada el 5 de junio, 1995, 0.8/462, 837, presentada el 5 de junio, 1995, 08/486,853, presentada el 5 de junio, 1995, 08/486,857, presentada el 5 de. junio, 1995, 08/486, 859, presentada el. '5 de junio, 1995, 08/462,513, presentada el 5 de junio, 1995, 08/724,752, presentada el 2 de octubre, 1996, 08/759,620, presentada, el 3 de diciembre, 1996., publicación ' de E.U.A. 2003/0093820, presentada el 30 de noviembre, 2001 y las patentes de E.U.A, Nos. 6,162,963, 6,150,584, 6,114,598, 6,075,181, y 5,939,598 y patente japonesa Nos . : 3 068 180 B2 , 3 068 :506 B2, y 3 .068 507 B2. Ver también patente europea No., EP 0 463 151 Bl, otorgada publicada el .12 de junio, 1996, solicitud . internacional de patente No., WO 94/02602, publicada el 3 de febrero, 1994, solicitud internacional de patente No., WO 96/34096, publicada October 31, 1996, WO 98/24893, publicada el 11 de junio,' 1998, WO .00/76310, publicada el 21 dé diciembre, 2000. Las ' descripciones de cada una de las patentes" antes citadas, solicitudes y referencias se incorporan por. ello como referencia en su totalidad.

'. Usando tecnología de hibridoma, los mAbs . humanos de antígerio específicos con la especificidad deseada .pueden producirse y seleccionarse de los ratones transgénicos tales como aquellos descritos arriba. Tales anticuerpos pueden clonarse y expresarse usando un vector adecuado y célula hospedera, o los anticuerpos¦ pueden cosecharse ..de células de hibridoma cultivadas.

Los anticuerpos -completamente humanos también pueden derivarse de bibliotecas de despliegue dé fagos (como se describe en Hoogenboom et al., (1991) J. Mol. Biol. 227:381; y arks et al., (1991) J. Afol . Biol. 222:581) . Las técnicas de despliegue de fagos imitan la selección' inmunitaria; a través del despliegue de repertorios de anticuerpos en la superficie de bacteriófago filamentoso, y selección posterior de fago por su enlace a un antigeno de elección. Una técnica se describe ¦ en \ la Publicación PCT No. . WO ; 99/10494 (incorporada en la presente como referencia) , que describe el aislamiento, de . anticuerpos agonistas funcionales y. de -alta afinidad para receptores MPL y msk usando tal enfoque'.

Proteínas de enlace, a antigenos biespecificas o bi uncionales También se proporcionan anticuerpos biespecificos y bifuncionales que incluyen una o más. CDRs ó una o más regiones variables como .se describe ' arriba . Un anticuerpo biespecifico o bifuncional en algunos casos puede ser un anticuerpo híbrido artificial que tiene dos diferentes pares de cadena pesada/ligera y dos diferentes sitios de enlace . Los anticuerpos biespecificos pueden producirse por una variedad de los métodos incluyendo, pero no limitados a, fusión de hibridomas o ligación de fragmentos Fab' . Ver, por ejemplo, Songsivilai y Lachmann, 1990, Clin. Exp. Immunol. 79: 315-321; Kóstelny et al., 1992, J. Immunol. L48: 1547-1553. Cuando una proteína., de enlace .a. antígenos de la descripción actual enlaza a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, . (ii) FGFR2.C, y (iii) FGFR3c, , . el enlace puede llevar a la activación de actividad tipo FGF21 como se mide por los ensayos de señalización y funcionales tipo FGF21 descritos en los Ejemplos 4-6; cuando una proteina de enlace a antígenos es un anticuerpo se refiere como un anticuerpo agonista..

Varias Otras Formas Algunas de . las proteínas de enlace a antígenos que enlazan específicamente á un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno dé'-, .(i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y - -(iii) FGFR3c, que se proporcionan ' en la presente descripción incluyen formas variantes de las ' proteínas de" enlace a antígenos descritas en la presente (por ejemplo, aquellas que tienen las secuencias como se enlista en las Tablas 1-4 y .6-23) .

En diversas modalidades, las proteínas de enlace a antígenos descritas en. la presente pueden comprender uno o más aminoácidos que no se presentan/codifican naturalmente. Por ejemplo, algunas de las proteínas de. enlace a antígenos tienen . una o . más . sustituciones de aminoácido que no se presentan/codifican naturalmente . en una o más de las cadenas ligeras o pesadas, regiones variables ó CDRs enlistadas en las Tablas 1-23. Los ejemplos de aminoácidos que- no se presentan/codifican naturalmente (que pueden sustituirse de cualquier aminoácido que se presenta naturalmente encontrado en cualquier secuencia descrita, en la presente, como se desea) incluyen: 4-hidroxiprolina, ?-cárboxiglutamato, e-N, N, N-trimetilisina, e-?-acetilisina, 0-fosfoserina , N-acetilserina, N-formilmetionina, 3-metilhistidina, 5-hidroxílisina, o-N-metilarginina, y otros aminoácidos similares e imino ácidos (por ejemplo, 4-hidroxiprolina). En la anotación de polipéptidos usada en la presente, la dirección a la izquierda es la dirección de terminal amino y la . dirección a la derecha es' la dirección de terminal carboxilo, de acuerdo con uso y convención estándar. Las listas no limitantes de ejemplos de aminoácidos que no se presentan naturalmente que pueden insertarse en una secuencia de proteina de enlace a antigenos o sustituidos por un residuo de tipo natural en la secuencia de enlace a: antigeno incluyen aminoácidos, ß, homoaminoácidos , aminoácidos cíclicos y aminoácidos con cadenas laterales derivadas. Los ejemplos incluyen (en la forma L o forma D; abreviados como en el paréntesis): citrulina (Cit) , homocitrulina '(hCit)-, a-metilcitrulina (NMeCit) , . Na-metilhomocitrulina (?a-MeHoCit) , ornitina (Orn) , a-Metilornitina . (? -MeOrn o NMeOrn) , sarcosina (Sar) , homolisina (hLys o hK) , homoarginina (hArg. o hR) , homoglutamina (hQ) , ?a-metilarginina . (NMeR) , Na-metileucina. (?a-MeL o NMeL) , N-metilhomolisina. (NMeHoK) , Na- metilglutamina (NMeQ) , norleucina (Nle), norvalina (Nva) , 1 , 2 , 3 , 4 -tetrahidroisoquinolina (Tic), ácido octahidroindol-2-carboxilico (Oic) , 3- ( 1-naftil) alanina (1-Nal), 3- (2-naftil) alanina (2-Nal) , 1,2,3, 4-tetrahidroisoquinolina (Tic) , 2-indanilglicina (Igl), para-yodofenilalanina (pI-Fe) , para-aminofenilalanina . (4AmP o 4-Amino-Fe) , " ·.' 4-guanidino fenilalanina (Guf ) , glicilisina (abreviado "K (?.e-glicilo) " o "K (glicilo) " o- "K(gly)"), nitrofenilalanina (nitrofe.) , aminofenilalanina (aminofe o Amino-Fe) , bencilfenilalanina (bencilfe) , ácido ?-carboxiglutámico (y-carboxiglu) , hidroxiprolina (hidroxipro) , p-carboxil-fenilalanina (Cpa). , ácido a-aminoadípico (Aad) , ?a-metil valina (NMeVal) , N-a-metil leucina (NMeLeu) , Na-metilnorleucina .'. (NMeNle) , ciclopentilglicina . . (Cpg) , ciclohexilglicina (Chg)., acetilarginina (acetilarg) , ácido , ß-diaminopropionoico (Dpr), '¦·. ácido . a, ?-diaminobutirico (Dab),, ácido diaminopropiónico . (Dap) , ciclohexilalanina (Cha) , 4-metil-fenilalanina (i ePhe) , ß, ß-difenil-alanina (BiPhA) , ácido aminobutirico (Abu) , 4 -fenil-fenilalanina (o bifenilalanina ; 4Bip) , ácido a-amino-isobutirico (Aib) , beta-a'Lanina , ácido beta-aminopropionico, ácido · piperidinico,. ácido aminocaprioico, ácido aminoheptanoico, ácido áminopimélico, desmosina,. ácido diaminopimélico, N-etilglicina , N-etilaspargina, hidroxilisina, alo-hidroxilisiná, isodesmosina , alo-isoleucina, N-metilglicina, N-metilisoleucina, N-metilvalina, 4-hidroxiprolina (Hyp) , ?-carboxiglutamato, e-?, N,N-trimetilisina, e-?-acetilisina, O-fosfoserina, N-acetilserina, N-formilmetionina, 3-metilhistidina , 5-hidroxilisina , ?-metilarginina, ácido 4-Amino-O-ftálico (4APA), y otros aminoácidos similares, y formas derivadas de cualquiera de aquellos especificamerite enlistados .

Adicionalmente , las proteínas de enlace a antígenos pueden tener una o más sustituciones conservadoras de aminoácidos en una o más de- las cadenas ligeras o pesadas, regiones variables o CDRs enlistadas en las Tablas 1-4 y .6-23. Los aminoácidos que se presentan naturalmente pueden dividirse en clases con base en las' propiedades de cadena lateral comunes: 1) hidrofóbicas : norleucina, Met, Ala, Val, Leu, lie; ¦ 2) hidrofílicas neutras: Gys, Ser, Thr, Asn, Gln; 3) ácidas: Asp, Glu 4) básicas: His, Lys, Arg; 5) residuos que influyen en la orientación de la cadena: Gly, Pro; y 6) aromáticas:. Trp, Tyr, Phe .

Las sustituciones conservadoras de aminoácidos pueden involucrar el intercambio de un miembro de una de estas clases con otro miembro de la misma clase. Las sustituciones conservadoras de aminoácidos pueden . abarcar residuos de aminoácidos que no se presentan naturalmente, que se incorporan típicamente por síntesis de péptido química en vez de por. síntesis en sistemas biológicos . Ver Tabla .8 ,. infra . Estas incluyen péptidoimitadores y otras formas invertidas o inversas de porciones de aminoácido.

Las sustituciones no conservadoras; pueden, involucrar el intercambio de un -miemb.ro de una de las clases de arriba, para un miembro de otra clase. Tales residuos sustituidos pueden introducirse en regiones del anticuerpo que son' homologas con anticuerpos humanos, o en las regiones no homologas de la molécula. ¦¦ , Al hacer tales cambios, de acuerdo a determinadas modalidades, . el índice hidropático de' aminoácidos, puede considerarse. ?1 perfil hidropático de una proteína se calcula al asignar a cada aminoácido un valor; numérico ("índice de hidropatía") y luego repetitivamente promediar estos valores a lo largo de la cadena de péptido. A cada aminoácido se le ' ha asignado un índice hidropático en la base de su hidrofobicidad y características de carga. Estas son: isoleucina (+4.5); valina (+4.2); leucina (+3.8); fenilalanina (+2.8); cisteína/eistina (+2.5); metionina (+1.9); alanina ( +1.8) ; glicina (-0.4); treonina; (-0.7); serina (-0.8).; triptofano (-0.9); tirosina (-1.3); prolina (-1.6); histidina (-3.2);. glutamato (^3.5); glutamina (-3.5).; aspartato (-3.5)/; asparagina (-3.5); lisina (-3.9); y arginina (-4.5).

La importancia del perfil hidropático al conferir. ' la función biológica interactiva en una proteina se entiende en el arte (Ver, por ejemplo, Kyte et. al., 1982, J. Mol.. Biol. 157:105-131) . Se conoce que ciertos aminoácidos pueden sustituirse para .otros aminoácidos que tienen un índice hidropático similar o registro y '¦ todavía mantienen una actividad biológica similar. Al hacer los cambios' con base en el' índice hidropático, en determinadas modalidades, la sustitución de aminoácidos cuyos índices hidrppáticos están dentro de ±2 se incluye. En algunos aspectos, aquellos que están dentro de ±1 se incluyen, y en otros aspectos, aqellos dentro de +0.5 se incluyen.

También se entiende en la técnica que la sustitución de aminoácidos similares puede hacerse efectivamente ' en la base de hidrofilicidad, particularmente donde la proteína o péptido biológicamente funcional por ello creada se pretende para uso en modalidades inmunológicas , como en el caso presente. En determinadas modalidades, la hidrofilicidad promedio local mayor de una proteína, como se gobierna por la hidrofilicidad de sus aminoácidos adyacéntes, se correlaciona con su inmúnogenicidad ' y enlace al antígeno · o inmunogenicidad, esto es, con una propiedad biológica de la proteína .

Los siguientes valores de hidrofilicidad se han asignado para estos residuos de aminoácidos: arginina ( +3.0); lisina ( +3.0); aspartato (+.3.0±1); glutamato (+3.0+1); serina (+0.3); asparagina (+0.2); glutamina ( +0.2); glicina (0); treonina (-0.4).; prolina .( -0.5±1 ) ; alanina (-0..5);.. histidina (-0.5); cisteína (-1.0); metionina (-1.3); valina (-1.5 ) ; leucina (-1.8); isoleucina ( - 1.8); tirosina. (-2.3) ;. fenilalanina (-2.5) y triptofano (-3.4). Al hacer los cambios con. base en los valores .de hidrofilicidad similares, en determinadas modalidades/ la sustitución de aminoácidos cuyos valores de hidrofilicidad están dentro de ±2 se incluye, en otras modalidades, aquellos que están dentro de ±1 se incluyen, y todavía en otras, modalidades, aquellos dentro de ±0.5 se incluyen. En algunos casos, alguien también puede identificar epítopos de secuencias de aminoácidos primarias en la base de hidrofilicidad . Estas regiones también se refieren como "regiones de núcleo epitópicas." Las sustituciones conservadoras - de . aminoácidos ejemplares se establecen en la Tabla 5. ;. .

Tabla 5 Sustituciones conservadoras de aminoácidos Un experto en la materia será capaz de determinar variantes de polipeptidos adecuados como se establece en la presente usando técnicas bien conocidas acopladas con la información proporcionada en la presente. Un experto- en la técnica puede identificar áreas adecuadas de, la molécula que se pueden cambiar sin destruir actividad . por regiones objetivo que no se cree que sean importantes para actividad. El técnico experto también será capaz, de identificar residuos y porciones de las moléculas que se conservan entre pplipéptidos similares. En modalidades adicionales, incluso áreas que pueden ser importantes para actividad biológica o para estructura ¦ pueden ser objeto de sustituciones conservadoras de aminoácidos sin destruir la actividad biológica o sin afectar negativamente la estructura 'de polipéptido.

Adicionalmente, un experto en la técnica puede revisar estudios de función de estructura que identifican residuos en polipéptidos similares que son importantes para, actividad o estructura. En vista de tal comparación, se puede predecir la importancia de residuos de aminoácidos en una proteína que corresponde a residuos de aminoácidos importantes para actividad o estructura en proteínas similares. Un experto en la técnica puede optar por sustituciones de aminoácido químicamente similares para tales residuos de aminoácidos •importantes previstos.

Un experto en. la técnica también puede analizar la estructura tri-dimensional y secuencia . de aminoácidos en relación a esa estructura en polipéptidos similares.. E vista de tal. información, un experto en la técnica ..puede predecir la alineación de residuos de aminoácidos de un anticuerpo con respecto a su estructura tri-dimensional. Un éxperto en la técnica puede elegir no hacer cambios radicales, a residuos de aminoácidos previstos para estar en la- superficie de-, la proteína, ya que tales residuos .se- pueden, implicar en importantes interacciones con otras moléculas. Por otra parte, un experto en la técnica puede generar, variantes de prueba que contienen una sustitución de aminoácido sencillo en cada residuo de aminoácido deseado. Estas, variantes se pueden -luego cribar usando ensayos para señalización del tipo FGF21, (incluyendo aquellos descritos en los Ejemplos proporcionados en la presente) proporcionando así información con respecto a cuales aminoácidos se pueden cambiar y cuáles no se debe cambiar. En . otras palabras, con base- en información recolectada de tales experimentos de rutina, un experto en la técnica puede fácilmente determinar las posiciones de aminoácido donde las sustituciones .adicionales se deben evitar ya sea solas o e combinación con; otras mutaciones .

Un número de publicaciones científicas se han dedicado a la estructura secundaria de predicción. Ver, Mo.ült, (1996) Curr, Op. in Biotech. 7:422-427; Chou et al.,. (1974) Biochem. 13:222-245; Chou .. et al., (1974) Biochemistry 113:211-222; Chou et al., (1978). Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol..'Biol. 47: 45-148; Chou'et. al.,. (1979) Ann. Rev. Biochem.. 47 : 251-276; ; y Chou et al ., ' (1979) Biophys. J. 26:367-384. Por otra parte, programas de computadora están actualmente disponibles para ayudar con la estructura secundaria de predicción.- Un método de estructura secundaria de predicción se basa en modelado de homología. Por ejemplo., dos polipéptidos o proteínas que tienen una identidad de. secuencia mayor que 30%, o. similitud mayor que 4.0% .pueden tener topologías estructurales similares. El crecimiento de la base de datos estructural de proteína (PDB) ha proporcionado una mayor previsibilidad de estructura secundaria, incluyendo el número potencial dé pliegues dentro de una' estructura de polipéptido o proteína. Ver, Holm et al .,'.."¦( 1999) Nucí. Acid. Res. 27:244-247.- Se ha sugerido (Brenner et al., (1997) Curr. Op. Struct. Biol .1_: 369-376) que hay un número limitado: de pliegues en una proteína o polipéptido dado y que una vez que un número crítico ·· de estructuras se ha resuelto, .la predicción estructural se ha convertido drásticamente más precisa.

Los métodos adicionales de predicción de la estructura secundaria incluyen "reconocimiento del plegamiento" (Jones, (1997) Curr. Opin. Struct: Biol. 7:377-387; Sippl et al., (1996) Structure A: 15-19) , "análisis. de perfiles" (Bowie et al., (1991) Science 253:164-170; Gribskov et al., (1990) Meth. Enzym. 183: 146-159; Gribskov et al., (1987) Proc. Nat. Acad. Sel. 84/4355-4358), y "ligadura evolutiva" (Ver, Holm, (1999) supra; y Brenner, (1997) supra) . . .

En, algunas modalidades, las sustituciones de aminoácido hacen que: (1) se reduce la susceptibilidad a la proteolisis, (2) se reduce la susceptibilidad a oxidación, (3) : se altera la afinidad de enlace para formar complejos de proteina, (4) se alteran afinidades de enlace de ligando o .antigeno, y/o (4) confieren o modifican otras propiedades fisicoquímicas o funcionales en tales polipéptidos . Por ejemplo, sustituciones de aminoácido sencillas o múltiples (en determinadas modalidades, sustituciones conservadoras de aminoácidos) se pueden hacer en la secuencia que se presenta naturalmente. Las sustituciones' se . pueden hacer en esa porción del anticuerpo que se encuentra fuera de los dominios que forman contactos intramoleculares) . En tales modalidades, las sustituciones conservadoras de aminoácidos se pueden usar que no cambian sustancialmente las características estructurales de la secuencia precursora .(por ejemplo, uno o más aminoácidos de reemplazo que no interrumpen la estructura secundaria que caracteriza la proteína de enlace a'antígenos precursora o nativa). Los · ejemplos de estructuras secundarias y terciarias de polipéptido reconocidas : en la técnica se describen en Proteins, Structures . y¦ Molecular Principies (Creighton, Ed. ) , 1984 , W. H. New York: ; Freeman' y Company; Introduction to Protein Structure (Branden y Tooze, eds . ) , 1991, New York: Garland Publishing; y Thornton et al.,. (1991) Nature 354:105, que cada uno se incorpora en la presente como referencia . . . .

Las variantes de anticuerpo adicionales preferidas incluyen variantes de .cisteina en donde uno o más residuos de cisteina en la secuencia de aminoácidos precursora o nativa se eliminan de o sustituyen con otro aminoácido (por ejemplo, serina) . Las varaintes de cisteina son útiles, Ínter alia cuando los anticuerpos se deben replegar en una conformación biológicamente activa. Las variantes de . cisteina pueden tener menos ¦ residuos de cisteina que el anticuerpo nativo, y típicamente tienen un número par para minimizar interacciones que resultan de cisteínas- desapareadas .

Las cadenas pesadas y ligeras, .dominios de regiones variables y CDRs que se describen se pueden usar para preparar polipéptidos que contienen una región de enlace . a antígenos que puede específicamente enlazar un complejo que comprende ß-Klotho y. al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii.) FGFR3c, y puede inducir señalización del tipo FGF21. Por ejemplo, una o más de las CDRs enlistadas en las Tablas 3-4 y 21-23 se pueden incorporar en una molécula (por ejemplo, un polipéptido) covalentemente o no covalentemente para hacer una inmunoadhesión.. Una inmunoadhesión. puede incorporar las CDR.(s) como parte de una cadena de polipéptidos más larga,, puede covalentemente ligar la CDR(s) a otra cadena de polipéptidos, o puede incorporar las CDR(s) no¦ covalentemente . Las CDR(s) permiten la inmunoadhesión para enlazar específicamente a un antige.no particular de. interés (por ejemplo, un complejo que comprende ß-Klotho y. al menos uno de (i) FGFRlc/ (ii) FGFR2c, y ( iii ). FGFR3c, . o un epitopo al respecto) .

Las cadenas pesadas y ligeras, dominios de regiones variables y CDRs que se describen se pueden usar para preparar polipéptidos que contienen una región de enlace a antígenos que^ puede específicamente enlazar a un complejo que comprende ß-Klotho y. al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii). FGFR3c, y. puede inducir señalización del tipo FGF21. Por ejemplo, uno o .más de los CDRs enlistados en las Tablas 3.-4 y . 21-23 se pueden incorporar en una .'molécula (por ejemplo, un polipéptido) que es estructuralmente similar a un anticuerpo "medio" que comprende la cadena pesada, la cadena ligera de una proteína de enlace a antígenos emparejada con un fragmento Fe de manera que la región de enlace a antigenos es monovalente' (tipo un fragmento Fab)' pero con una porción Fe dimérica .

Los mimétieos : (por ejemplo, "miméticos de péptido" o "péptidomiméticos" ) . basados en los dominios de región variable y CDRs que se describen en la presente también se proporcionan. Estos análogos pueden ser péptidos, no péptidos o combinaciones de regiones de péptido y no . péptido. Fauchere, 1986, ñdv. Drug Res. 15^:29 Veber y Freidinger, 1985, ¦ TINS p. 392; y Evans efc. al., 1987, J. Medí- Chem. 3_0:1229, que se incorpora en la presente como referencia para cualquier propósito. Los miméticos de péptido que son estructuralmente similares a péptidos terapéuticamente útiles se pueden usar para producir un efecto terapéutico o profiláctico similar. Tales compuestos se desarrollan frecuentemente con la ayuda de . modelado molecular computarizado ¿ Generalmente, los péptidomiméticos son proteínas que son estructuralmente similares a un anticuerpo que exhibe una actividad biológica deseada, tal como aquí la capacidad para enlazar específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i). FGFRlc,. (ii) FGFR2c, y (iii).. FGFR3c, , pero tiene una o. más ligaduras de péptido opcionalmente reemplazadas por una ligadura seleccionada de: -CH2NH-, -CH2S-, , ' -CH2-CH2-, -CH-CH-(cis y.trans), -COCH2-, .- CH(0H)CH2-, y -CH2SO-, por métodos bien conocidos en la técnica. La sustitución sistemática de uno o más aminoácidos de una secuencia de consenso con ün D-aminoácido del mismo tipo (por ejemplo, D-ldsina en lugar de L-lis,ina) se pueden usar en determinadas modalidades para generar .proteínas más estables. Además, los péptidos restringidos que comprenden una secuencia de. consenso o una variación de secuencia de consenso sustancialmente idéntica se puede generar, por métodos conocidos en la técnica (Rizo y Gierasch,. 1992, Ann . Rev. Biochem.. (51:387) , incorporada en . la presente como referencia), por ejemplo, al agregar residuos de cisteína internos capaces de formar puentes de .·' bisulfuro intramoleculares que ciclizan el péptido.

•Los derivados' de las proteínas de enlace a antígenos. que enlazan específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y. (iii) FGFR3c, que se describen en · la presente también se proporcionan. Las proteínas de enlace a antígenos derivadas pueden comprender cualquier molécula o sustancia que imparte una propiedad deseada- al anticuerpo o' fragmento, tal como vida media incrementada en un . uso particular. La proteína de enlace a antígenos derivada puede comprender, por ejemplo, una porción detectable (o. etiqueta) (por ejemplo, .'una., molécula radioactiva, colorimétrica, antigénica o enzimática, una perla dete.ctable (tal como una perla magnética o electrodensa (por ejemplo, de oro)), o una molécula que enlaza a otra molécula (por ejemplo, biotina o . estreptavidiria) )., una porción terapéutica o de diagnóstico (por ejemplo, una porción radioactiva, citotóxica, o farmacéuticamente activa), o una molécula que. incrementa la conveniencia de la proteina de enlace a antigenos para un uso .particular (por ejemplo, administración a un sujeto, tal como un sujeto humano, ,.u otros usos in vivo o in vítro) . Los ejemplos de moléculas ' que se pueden usar para derivar una' proteina de enlace a antigenos incluye albúmina (por ejemplo, albúmina de suero humano) y polietilenglicol (PEG). Derivados ligados ' a albúmina y PEGilados de proteínas de enlace a antigenos se pueden preparar usando técnicas bien, conocidas en el arte. Ciertas proteínas, de enlace a antígenos incluyen un polipéptido de cadena . sencilla PEGilada como se describe en la presente. En una modalidad, la proteína de. enlace a antígenos se conjuga o de otra manera liga a transtiretina (TTR) o una variante TTR. El TTR o variante. TTR se puede modificar químicamente con, por ejemplo, . un. químico seleccionado del grupo que consiste. en dextrano, poli(n-vinil pirrolidona) , . pdlietilenglicoles , homopolímeros de propilenglicol , óxido de polipropileho/cq-polímeros de óxido de etileno, polioles polioxietilados y alcoholes de polivinilo .

Otros derivados incluyen conjugados covalente o de agregaciones de las proteínas de. enlace a antígenos que enlazan específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y ; (iii) FGFR3c, que se describen en la presente con otras proteínas . o polipéptidos , tales como por expresión de proteínas de fusión recombinante que comprenden polipéptidos heterólogos fusionados a la terminal N o terminal C de una proteína de enlace a antígenos que induce señalización del tipo FGF21. Por ejemplo, el péptido conjugado puede ser un polipéptido de señal heteróloga (o líder) , por ejemplo, el líder de factor alfa de levadura, o un péptido tal. como una etiqueta de epítopo. Una proteína de fusión que contiene: proteína de enlace a antígenos de la presente descripción . puede comprender péptidos agregados para facilitar la purificación O; identificación de una proteína de enlace a antígenos que enlaza específicamente a un complejo que comprende : ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, (por ejemplo, una' etiqueta poli-His) y : que puede inducir señalización del tipo FGF21. Una proteína . de enlace a antígenos que enlaza específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc,. (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, también se puede ligar al péptido ¦ FLAG como se describé en Hopp et al., 1988, Bio/Technology 6:1204; y patente de Estados Unidos No. 5,011,912. El péptido FLAG es altamente antigénico' y proporciona un epitopo reversiblemente enlazado por. un anticuerpo monoclonal especifico. (mAb) , que permite análisis rápido y purificación fácil de proteina recombinante expresada. Los reactivos útiles para, preparar proteínas de fusión en las cuales el péptido FLAG se fusiona a un polipéptido dado están comercialmente disponibles (Sigma,. St. Louis, MO) .

Los multímeros que comprenden una o más. proteínas de enlace a antigenos que enlazan específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y al' menos uno de (i) FG.FRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, forma otro aspecto de la presente descripción .. Los multímeros pueden tomar la forma.de dimeros, trímeros, o multímeros ' superiores ligados covalentemente o no ligados covalentemente. Los multímeros que comprenden dos . o más proteínas de enlace a antigenos . que enlazan a un compléjo que comprende ß-K.lotho y al menos uno de (i). FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, y que pueden inducir señalización del tipo FGF21 se contemplan para usar como · terapéuticos, diagnósticos y para otros usos también, con un ejemplo de tal multímero que es un homodímero. Otros multímeros ejemplares incluyen heterodímeros , homotrímeros, heterotrimeros , homotetrámeros , heterotetrámeros, etc.

Una modalidad se dirige a mul'tímeros que comprenden múltiples proteínas de enlace a antígenos que enlazan específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y¦ al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, ligado por medio de interacciones covalentes ó' no covalentes entre porciones de péptido fusionadas a una proteína de enlace .a antígenos que enlaza específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de ; (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii.) FGFR3c. Tales péptidos pueden ser ligaduras" de péptido (espaciadores ) , o péptidos que tienen la propiedad de promover la multimerización . Cremalleras de leucina. y ciertos polipéptidos derivados de anticuerpos están entre los péptidos que pueden promover · multimerización de proteínas de enlace a antígenos enlazadas a ello, como se describe en más detalle en la presente.

En modalidades particulares,, los multímeros comprenden desde dos hasta cuatro proteínas de enlace a antígenos que enlazan a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) 'FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c. Las porciones de proteína de enlace, a antígenos del multímero pueden ser en cualquiera de. las formas descritas arriba, por ejemplo, variantes o fragmentos. Preferiblemente, los multímeros comprenden proteínas de enlace a antígenos que tienen la capacidad para enlazar específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c. ' En una modalidad, un oligómero se prepara usando polipéptidos derivados de inmunoglobulinas . La preparación de proteínas de fusión ' que comprenden . ciertos polipéptidos . heterólogos fusionados a varias porciones de polipéptidos derivados de anticuerpo (incluyendo el dominio Fe) - se ha descrito, por ejemplo, por Ashkenazi eü al., (19.91) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 8¡3: 10535; Byrn et al., (1990) .Nature 34 : 677;· y Hollertbaugh et al., 1992. "Construction .of Immunoglobulin Fusión ' Proteins", in Current' ; Protocols in I munology, Suppl. 4, páginas 10.19.1-10.19.11.· Una modalidad comprende un dímero que comprende dos proteínas de fusión creadas al fusionar una pr.oteína de enlace a antígenos que enlaza específicamente , a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc,' (ií) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, a la región ' Fe de un anticuerpo. El dímero se puede hacer por, por ejemplo, insertar una fusión de gen que codifica la proteína de fusión en.' un vector de expresión apropiado, que expresa la fusión de ,.gen en células ¦hospederas- transformadas con el vector de expresión recombinante, y permitir que la proteína de fusión expresada se ensamble como las. moléculas de anticuerpo, con lo cual enlaces de bisulfuro de intercadena se forman entre las porciones Fe para proporcionar el dímero.

El . término "polipéptido Fe" como se usa en la presente incluye formas nativas y de muteina de polipéptidos' derivados de la región Fe de un anticuerpo. Las formas truncadas de tales polipéptidos que contienen la región de articulación que promueve la dimerización también se incluyen. Las proteínas de fusión que comprenden porciones Fe (y oligómeros formados de ello) ofrecen la ventaja de purificación fácil por cromatografía de afinidad sobre, las columnas de Proteína A o Proteína G.

Un polipéptido Fe. adecuado, descrito en la solicitud PCT WO 93/10151 y patente de Estados Unidos. No. 5,426,048 y No. 5,262,522, es un polipéptido de cadena sencilla, que se extiende desde la región de articulación de terminal N hasta la terminal C nativa de la región Fe de un anticuerpo IgGl humano. Otro polipéptido Fe útil es la muteina Fe descrita en la Patente de Estados Unidos No. -5, 457, 035, y en B.aüm et al.., (1994 ) EMBO, J. 13 : 3992-40.01. La secuencia de amino cidos de esta muteina es., idéntica a la de la secuencia Fe nativa presentada en la WO 93/10151, excepto que el aminoácido 19 se ha cambiado de Leu a Ala, el aminoácido 20 se ha cambiado de Leu a Glu, y .el aminoácido 22 se ha cambiado de Gly a Ala. La muteina exhibe afinidad reducida para receptores Fe.

En otras modalidades, la porción variable de las cadenas pesadas y/o ligeras de una proteina de enlace a antigenos tal como la. descrita en la presente se puede sustituir por la porción¦ variable de cadena' pesada y/o ligera de" anticuerpo .

Alternativamente, el oligómero es una proteína de fusión que comprende múltiples proteínas de enlace a .antigenos que enlazan específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos .uno d (i)¦ FGFRlc, (ii) FGFR2c, y .(iii). FGFR3c, con o sin ligaduras de péptido (péptidos de. espaciador). Entre las ligaduras de péptido adecuadas se describen aquellas en . la Patente de Estados Unidos. No. 4,751,180 y No. 4, 935, 233.

Otro método, para preparar derivados oligoméricos que comprenden esas proteínas de enlace a antígenos que enlazan específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno . de (i) FGFRlc, (ii). FGFR2c, y (iii) FGFR3c, implican el uso.de una cremallera de leucina. Los dominios de cremallera de leucina son péptidos. que promueven la oligomerización de las proteínas en las cuales se encuentran. Las cremalleras de leucina se identificaron originalmente én diversas proteínas que enlazan ADN (Landschulz et al., (1988) Science 240:1759) , y desde entonces se han encontrado en una variedad de diferentes, proteínas. Entre las cremalleras de leucina conocidas están péptidos que . se presentan naturalmente y . dérivados de las mismas que dimerizan o trimerizan. Los ejemplos de dominios de cremallera de leucina adecuados para producir proteínas oligpméricas solubles se describen en la solicitud PCT WO 94/10308, y la cremallera de leucina derivada de proteína D de tensóactivo pulmonar (SPD) descrita en Hoppe et. al., (1994) FEBS Letters 34 : 191, incorporada por la presente como referencia. El uso de una cremallera de leucina modificada que permite la trimerizacion estable de una proteína heteróloga fusionada al mismo se describe en Fanslow et al., (1994) Semin. Immunol. .6:267-278. En un enfoque, las proteínas de fusión recombinantes que comprenden un fragmento o derivado de proteína de enlace a antígenos que. enlaza específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y un FGFR (por ejemplo, FGFRlc, FGFR2c, y FGFR3c) , se fusiona a un péptido de cremallera de leucina, se expresan en células hospederas adecuadas,, y los' fragmentos o derivados de proteína que enlaza a antígenos oligoméricos solubles que forman se recubren del sobrenadante de cultivo.

En. determinadas modalidades, la proteína de enlace a antígenos tiene un. KD (afinidad de enlace de equilibrio) de menos de 1 p , · 10 pM, .100 p , 1 nM, 2 nM, 5 nM, 10' nM, 25 nM o 50 nM.

En otro aspecto la . descripción actual proporciona una proteína de enlace a antígenos que tiene una vida media de al menos un día in vitro o in vivo (por .ejemplo, cuando se administra a un sujeto humano) . En una modalidad, la proteína de enlace a antígenos tiene una vida media de al menos tres días. En otra modalidad, el anticuerpo. ó: porción del mismo tiene una vida media de cuatro días o más tiempo. En otra modalidad, el anticuerpo o porción del mismo tiene una vida media de ocho días o más tiempo. En otra modalidad, el anticuerpo o porción del mismo tiene una- vida media de diez días o más tiempo. En otra modalidad, el anticuerpo o porción del mismo tiene una .vida media de once días o más tiempo. En otra modalidad, el- anticuerpo o porción del mismo tiene una vida media de quince días o más tiempo.' En otra' modalidad, el anticuerpo o porción que enlaza antígeno del mismo se deriva o modifica de tal manera que tiene una : vida media de más tiempo como, se compara con el anticuerpo no derivado o no modificado. En otra modalidad, una proteína, de enlace Va antígenos que enlaza específicamente á un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) -FGFR2c, y (iii) FGFR3c, contiene mutaciones de punto para incrementar vida media de suero, tal como se describe en, O .00/09560, publicado el 24 de febrero 2000, incorporado como referencia.

Glicosilación Una proteína de enlace a antígenos que enlaza específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de . (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, puede tener un patrón de glicosilación que es, diferente p alterado del que se encontró en las especies nativas. Como' se conoce en la técnica, los patrones de glicosilación pueden dependér tanto de la scuencia de la proteína (por ejemplo, la presencia o ausencia de residuos de aminoácidos de glicosilación particular, descritos abajo), o el organismo o célula hospedera, en la cual la. proteína se produce. Los sistemas de expresión particular se discuten abajo.

La . glicosilación de polipéptidos es . típicamente ya sea ligada a N o ligada a .0. El ligado' a N se refiere al enlace de la porción de carbohidrato a la cadena lateral de un residuo de asparagina. Las secuencias de tri-péptido asparagina-X-serina y asparagina-X-treonina, donde X es cualquier aminoácido excepto prolina, son las secuencias de reconocimiento para ..enlace enz'imático de la porción de carbohidrato a la cadena lateral de asparagina. Así, la presencia de cualquiera de estas secuencias de tri-péptido en un polípéptido crea un sitio de glicosilación potencial. La glicosilación ligada a 0 se refiere al ' enlace, de uno de los azúcares N-acetilgalac.tosamina, galactosa, o xilosa, a un ácido hidroxiamino, más comúnmente serina o treonina, a través de 5-hidroxiprolina o 5-hidroxilisina se' puede también usar .

La adición de sitios de glicosilación a la protéína .de enlace . a antigenos, se realiza . convenientemente .al alterar, .la secuencia de aminoácidos tal que esto contiene.. una o más de las secuencias de tri-péptido descritas arriba (para sitios de glicosilación ligados a N) . La alteración también se puede hacer por la adición de, o sustitución por, uno o más residuos de serina o treonina a la secuencia de. partida (para sitios de glicosilación ligados a O). Para mayor facilidad, la secuencia de aminoácidos de proteína que enlaza a antígenos se puede alterar a través de . cambios en el nivel de ADN, particularmente por la mutación del ADN que codifica el polipéptido objetivo en bases preseleccionadas tal que ios codones se generan que se traducirán en los aminoácidos deseados .

Otro medio para incrementar, el número de porciones de carbohidrato en la proteína- de enlace a antígenos es por acoplamiento químico o enzimático de glucósidos a la proteína. Estos procedimientos tienen la ventaja de que no requieren producción de la proteína en una célula hospedera que tiene capacidades de glicosilación para glicosilación ligada a N y 0. Dependiendo del modo de acoplamiento usado, los azúcares se pueden enlazar a (a) arginina e histidina, (b) grupos de carboxilo. libre, (c) grupos de s.ulfhidrilo libre tales como aquellos de cisteína, (d) grupos de hidroxilo libre tales, como aquellos de serina, treonina, o hidroxiprolina, (e) residuos aromáticos tales como aquellos de fenilalanina, tirosina, o triptofano, o. (f) el grupo amida de glutamina. Estos métodos se describen en WO 87/05330 'y en Aplin y Wriston, (1981) CRC Crit. Rev. Siochem .,, pp : 259-306.' La remoción de porciones de carbohidrato presentes en la proteina de. enlace a antígenos de partida se puede realizar químicamente o enzimáticamente . La deglicosilación química requiere exposición ' de la proteína al . ácido trifluorometansulfónico de compuesto, . o un compuesto equivalente. Este tratamiento resulta en la escisión de la mayoría o todos los azúcares excepto el azúcar de ligado (N-acetilglucosamina o N-acetilgalac.tosamina ). , mientras se deja el polipéptido intacto. La desglicosilación química se describe por Hakimuddin et al., .(1987) Aren.' Biochem. Biophys. 259 : 52 y por Edge et al., (1981) Anal. Biochem. 118:131. La escisión enzimática de porciones de carbohidrato en polípéptidos se puéde alcanzar por el uso de una variedad de endo- y exo-glicosidasas como sé describe por Thotakura et al., (1987)' Meth. -Enzymol. 138 : 350. La 'glicosilación en los sitios de glicosilación potencial se pueden prevenir por el uso del compuesto tunicamicina como se describe.' por' Duskin et al., (1982) J. Biol. Chem. 257:3105. La . tunicamicina bloquea la formación de ligaduras de proteírta-N-glicósido .

Por lo tanto, los aspectos de la presente descripción incluyen variantes de glicosilación de. proteínas de enlace ' a antigenos que enlazan específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c,. en donde el número y/o tipo de sitios de glicosilación se ha alterado comparado con las secuencias de aminoácidos del polipéptido precursor. En determinadas modalidades, variantes de proteína de . anticuerpo comprenden un mayor o menor, número de sitios de glicosilación ligados a N que el anticuerpo nativo. Un sitio de glicosilación ligado a N. se caracteriza por la secuencia: Asn-X-Ser o Ásn-X-Thr, en donde el residuo de' aminoácido, designado como X puede ser cualquier residuo de aminoácido excepto prolina. La sustitución de residuos de aminoácidos . para crear esta secuencia proporciona , un nuevo sitio potencial . para la adición de una ; cadena de carbohidratos ligada a N. Alternativamente, las sustituciones que eliminan o alteran esta secuencia prevendrán la adición de una cadena de carbohidrato ligado a N presente, en el polipéptido nativo. Por ejemplo, la glicosilación se .puede reducir por la eliminación de un Asn o al sustituir el Asn con un aminoácido diferente. En otras modalidades, uno o más sitios ligados a N nuevos se crean. Los anticuerpos típicamente tienen un sitio de glicosilación ligado a N en la región Fe.

Etiquetas y Grupos Electores En algunas modalidades, una , proteína de enlace a ántígenos que enlaza específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho .y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (üi) FGFR3c, comprende una o más etiquetas. El término "grupo : de etiquetado" o "etiqueta"' significa cualquier etiqueta detectabl.e . Los ejemplos de grupos de etiquetado adecuados incluyen, pero no se limitan a, lo siguiente: radioisótopos o radionüclidos (por ejemplo, 3H, 1 C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, inIn, 125I, 131I), grupos fluorescentes: (por ejemplo, FITC, rodamina, fósforos de lantánido) , grupos enzimáticos (por ejemplo, peróxidasa de raíz de rábano, ß-galactosidasa, luciferasa, fosf.atasa alcalina), grupos quimioluminiscentes , grupos de biotinilo, o epítopos de polipéptido predeterminado reconocidos por un reportero secundario (por ejemplo, secuencias pares de cremallera de leucina, sitios de enlace para anticuerpos secundarios,' dominios que enlazan metal, etiquetas de epítopo) . En algunas modalidades,, el grupo de etiquetado se acopla a la proteína de enlace a ántígenos por medio de articulaciones del espaciador de diversas longitudes para reducir el obstáculo esférico · potencial.. Diversos métodos para etiquetar proteínas se conocen en. la .técnica · y se pueden usar como se .ve en el ajuste. '.

El término "grupo efector" significa cualquier grupo acoplado a una proteina de enlace a antigenos que enlaza específicamente a un · complejo que comprende ß-Klotho . y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, que actúa como un. agente citotóxico. Los ejemplos para grupos efectores adecuados son radioisótopos o radionúclidos (por ejemplo, 3H, UC, 15N, 35S, 0Y, 99Tc, i In, 125I., 131I). Otros grupos adecuados incluyen toxinas,, grupos terapéuticos, o grupos quimioterapéutieos. Los ejemplos de grupos adecuados incluyen caliqueamicina, auristátinas, geldanamicina y cantansina. En algunas modalidades, el grupo efector se acopla a la proteína de enlace a antígenos por ' medio de articulaciones del espaciador de diversas longitudes para reducir obstáculo estérico potencial.

En general, ¦ las etiquetas caen en una variedad de clases, dependiendo del ensayo en el cual han de detectarse: a) etiquetas isotópicas, que pueden ser radioactivas o isótopos, pesados; b) etiquetas magnéticas (por. ejemplo, partículas magnéticas); c) porciones, activas rédox; ¦ d) pigmentos ópticos; grupos enzimáticos (por ejemplo peroxidasa de raíz de rábano, ß-galactosidasa, luciferasa, fosfatasa alcalina) ; . e) grupos biotinilados ; y., f ) epítopos de polipéptido predéterminado reconocidos por . un . reportero secundario (po ejemplo, secuencias pares de. cremallera de leucina, sitios, de enlace para anticuerpos', secundarios, dominios que enlazan metal, etiquetas de epitopo, etc.)- En algunas modalidades, el grupo de etiquetado se acopla a la proteina de enlace a antigenos por medio de articulaciones del espaciador de diversas longitudes para reducir obstáculo estérico potencial. Los diversos métodos para etiquetar proteínas se conocen en la técnica.

Las etiquetas específicas incluyen pigmentos ópticos, que incluyen, pero no se limitan a, cromóforos, fósforos: y fluoróforos, con este último' siendo específico en muchos casos. Los fluoróforos pueden ser ya sea fluorescencia de "molécula pequeña" ,: o · fluorescencia proteínica.

Por "etiqueta fluorescente" · se entiende cualquier molécula que se puede detectar por medio de sus propiedades fluorescentes inherentes. Las etiquetas . fluorescentes adecuadas incluyen, pero no se limitan a, fluoresceina , rodamina, tetrametilrodamina, eosina, eritrosiha, cumarina, metil-cumarinas, pireno, verde de alacite, estilbeno, Amarillo' Lucifer, Azul Cascada, Rojo Texas, IAEDANS, EDANS, BODIPY . FL, LC Red 640, Cy 5, Cy 5.5, LC Red 705, verde Oregón, los pigmentos Alexa-Fluor (Alexa Fluor 350, Alexa Fluor 430, Alexa Fluor 488, Alexa Fluor 546, Alexa Fluor 568, Alexa Fluor 594, Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647, Alexa Fluor 660, Alexa Fluor 680), Azul Cascada, Amarillo Cascada y R-ficoeritrina (PE) ' (Molecular Probes, Eugene, OR) , FITC, Rodamina, y Rojo Texas (Pierce, Rockford, I ) , Cy5, Cy5.5, Cy7 (Amersham Life Science, Pittsburgh, PA) . Pigmentos ópticos adecuados, incluyendo fluoróforos, se describen en Molecular Probes Handbook por Richard P. Haugland, y en ediciones posteriores expresamente incorporada en la presente como referencia.

Las etiquetas de proteina . fluorescentes adecuadas también incluyen, pero.no se limitan a, proteina fluorescente verde, incluyendo una e.specie de. Renilla, Ptilosarcus, ;. o Aequorea de GFP . (Chalfie et al., ( 199 ) Science 263 : 802-8.05) , EGFP (Clontech. Labs.,' Inc., Número de Acceso al GenBank U55762), proteina fluorescente azul (BFP, Quantum Biotechnologies , Inc., Quebec, Canadá; Stauber, (1998) Biotechniques 2A: 462-471 ; Heim et al., .;(1996) Curr. Biol . _6:178-182), proteina fluorescente amarilla mejorada (EYFP, Clontech- Labs.. , Inc.)-, luciferasa (Ichiki et al. , (1993) ¡J. Immunol. 150 : 5408-5417) , ß galactosidasa (Nolan et al., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S. A. 85:2603-2607) y Renilla (W092/15673, WO95/07463, ..WO98/14605, W098/26277, WO99/49019, Patentes de ' Estados Unidos No. .5292658,. No. 5418155, No. 5683888, No. 5741668, No. 5777079, No. 5804387, No. 5874304, No. 5876995, No. 5925558).

Preparación de Proteínas de Enlace a Antígenos Los anticuerpos' no humanos que se proporcionan pueden ser, por ejemplo, derivados de cualquier animal que produce anticuerpos, tal como ratón, rata, conejo, cabra, burro, o primate no humano (tal como mono (por ejemplo, mono cynomolgus o rhesus) o simio (por . ejemplo, chimpancé)). Los anticuerpos no humanos se pueden usar, por ejemplo, en cultivo celular in vitro.y aplicaciones basadas, en cultivo celular, o cualquier otra aplicación donde una respuesta inmunitaria al anticuerpo no ocurre o es. insignificante, se puede prevenir, no es un problema, o se desea. En determinadas modalidades, los anticuerpos se pueden, producir al inmunizar con el receptor de enlace celular, de los transíectantes CHO que expresan ß-Klotho y FGFRlc de longitud completa humano en la superficie celular incubado con FGF2Í; o con el receptor de. enlace celular de transíectantes 293T que expresan ß-Klotho humana de. longitud completa y una versión truncada en N-tefminal de FGFRlc. humano que abarca los residuos de aminoácidos 141 a 822 del polipéptido de SEQ ID NO: 4 o con ß-Klotho de longitud completa , FGFRlc, FGFR2c, o FGFR3c, o con el dominio extracelular.de ß-Klotho, FGFRlc, FGFR2c, o FGFR3c, . o con dos de ß-Klotho, FGFRlc, FGFR2c, y FGFR3c, o con células completas que expresan FGFRlc, ß-Klotho o tanto FGFRlc como ß-Klotho, o con membranas preparadas de células que expresan FGFRlc, ß-Klotho o tanto FGFRlc como ß-Klotho, . o con proteínas de fusión,' por ejemplo, fusiones' Fe que comprenden FGFRlc, ß-Klotho o FGFRlc y ß-Klotho (o dominios extracelulares de los mismos) fusionadas a Fe, - . y otros métodos conocidos en la técnica,, por ejemplo, como se describe en los Ejemplos presentados , en la presente. Alternativamente, ciertos anticuerpos no humanos, se pueden formular al inmunizar con aminoácidos que son . segmentos de uno o más de ß-Klotho, FGFRlc, FGFR2c, o FGFR3c que forman parte del epítopo. al cual ciertos anticuerpos proporcionados en . la presente enlazan. Los anticuerpos pueden ser policlonales , monoclonales, o se pueden sintetizar en células hospederas por expresión de ADN recombinante.

Los anticuerpos completamente humanos se pueden preparar como se describe arriba al inmunizar animales transgénicos que contienen, lugares de inmunoglobulina humana o al seleccionar una biblioteca de despliegue de fagos , que expresa un repertorio de anticuerpos humanos..

Los anticuerpos monoclonales (mAbs) se pueden producir por una variedad de técnicas, incluyendo metodología de anticuerpo monoclonal convencional, por ejemplo, la técnica de hibridizació celular somática estándar.. de ohler y 44? Milstein, (1975) Nature ' 256: 495. Alternativamente, , otras técnicas para producir anticuerpos monoclonales se pueden emplear, por ejemplo, lá transformación viral u¦ oncogénica¦ de B-linfocitos . Un, sistema animal adecuado para preparar hibridomas es el' sistema murino, que es un procedimiento muy bien establecido. Los protocolos de inmunización y técnicas para el aislamiento de esplenocitos inmunizados para fusión se conocen en la técnica. Para tales procedimientos, las células B de ratones inmunizados se fusionan con un compañero de fusión inmortalizado, adecuado, tal como linea celular de mieloma de murino.. Si se desea, las ratas u. otros mamíferos además se pueden, inmunizar en lugar de ratones y células B de tales animales se puede . fusionar . con la línea celular de mieloma de murino para formar hibridomas. Alternativamente, una línea celular, de mieloma de una fuente diferente a ratón se puede usar. Los procedimientos de fusión para¦ hacer hibridomas también son bien conocidos. La tecnología SLAM también se puede emplear en la producción de anticuerpos.

Los anticuerpos de cadena sencilla que se proporcionan se pueden formar al ligar fragmentos (región Fv) de. dominio variable de cadena, pesada y ligera .por medio de un puente de aminoácido (ligadura de péptido corto), que resulta en una cadena de polipéptido sencillo. Tales Fvs de cadena sencilla .(scFvs) se pueden, preparar al fusionar .ADN que. codifica una ligadura de péptido entre los ADN que codifican los dos polipéptidos de dominio variable (VL. y VH) . Los polipéptidos resultantes pueden . plegarse de nuevo en ellos mismos para formar monómeros que enlazan antigenos, o pueden formar multimeros (por ejemplo, dimeros, trímeros, o tetrámeros), dependiendo de la longitud de una ligadura flexible entre los dos dominios variables (Kortt et al., (1997) Prot . -Eng: 10:423; Kortt et al., (2001) Biomol. Eng. Í8_: 95-108). Al combinar diferente polipéptidos que comprenden VL y VH, se pueden formar scFvs multiméricos que enlazan a diferentes epítopos (Kriangkum et al., (2001) Biomol. Eng. .18 : 31-40) . Las técnicas desarrolladas para la producción de anticuerpos de cadena sencilla incluyen aquellas descritas en la patente de E.U.A. No. 4,946,778; Bird," (1988) Science 242 : 423 ; Huston et al., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S. A. 85:5879-83; Ward et al., (1989) . Nature- 334:544-46, de Graaf et al., (2002) Methods Mol Biol.. 178 : 379-387. Los anticuerpos de cadena sencilla derivados de anticuerpos proporcionados en la presente incluyen,, pero no se limitan a scFvs que comprende las combinaciones de dominio variable de las regiones variables de cadena pesada y ligera descritas en la Tabla 2, o combinaciones de dominios variables de cadena pesada y ligera que incluyen CDRs descritos en las Tablas 3-4 y 6-23.

Los anticuerpos proporcionados en la presente que son de una subclase se pueden cambiar a anticuerpos de . una diferente subclase usando métodos de conmutación de subclase. Asi, los anticuerpos IgG se pueden derivar de un anticuerpo IgM, por ejemplo, y vice versa. Tales técnicas permiten la preparación de nuevos anticuerpos que poseen las propiedades de .enlace de antigeno de un anticuerpo dado (el anticuerpo precursor), pero también exhiben propiedades biológicas asociadas con un anticuerpo isotipo o: subclase diferente del anticuerpo precursor. Las técnicas de ADN recombinante se pueden emplear. El ADN clonado que codifica polipéptidos de anticuerpo particular se' puede ' emplea en tales procedimientos, por' ejemplo, ADN que ' codifica el dominio constante de un anticuerpo del isotipo deseado. Ver, por ejemplo, Lantto et al,, (2002) Methods Mol. Biol. 178 : 303-316.

En consecuencia,, los anticuerpos que se proporcionan incluyen aquellos que comprenden, por ejemplo/ las combinaciones de dominio variable descritas, supra., que tienen un isotipo . : deseado (por ejemplo, IgA, IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgE, y IgD) asi como fragmentos Fab o F(ab')? del mismo. Por otra parte, si un' IgG4 se desea, se puede también desear introducir una mutación de punto (CPSCP a CPPCP (SEQ ID NOS 1828 y 1829, respectivamente, en orden de aparición) ) en la región de articulación como . se describe en Bloom et al., (1997) Protein Science 6:407, incorporado como referencia en la presente) para aliviar ;una tendencia para formar enlaces bisulfuro de cadena. intra-H que pueden conducir a heterogeneidad en los anticuerpos IgG4. ..

Por otra parte, las técnicas . para derivar anticuerpos que tienen diferentes propiedades (esto .es, diversas afinidades para el antigeno al cual se unen) también se conocen. Una de estas técnicas, denominadas como mezclado .de cadenas, implica desplegar repertorios de gen de dominio variable de inmunoglobulina en la superficie de bacteriófago filamentoso, frecuentemente denominados como despliegue de fago. El mezclado de cadenas se ha usado para preparar anticuerpos de alta afinidad al 2-feniloxazol-5-oria de hapteno, como se describe por Marks et al.', (1992) BioTechnology 10:779-83.

Las modificaciones conservadoras se pueden hacer a las regiones variables de cadena pesada y ligera descritas' en la Tabla 2, o las CDRs descritas en las Tablas 3A y 3B, '4A y 4B, y. Tablas 6-23, (y modificaciones correspondientes a los ácidos nucleicos de codificación) para produci una proteina de enlace a antigenos que tienen características funcionales y bioquímicas. Los métodos para alcanzar, tales modificaciones se describen arriba.

Las proteínas de enlace a an'tígenos que enlazan específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, se pueden además modificar en diferentes formas. Por ejemplo, si se van a usar para propósitos terapéuticos, se pueden conjugar, con polietilenglicol (PEGilado) para prolongar la vida media del . suero o' para aumentar el 'suministro de proteína. El PEG se. puede unir directamente a la proteína de enlace a antígenos o se puede unir por medio de . una. ligadura, tal como una. ligadura de glicósido. ¦ Alternativamente, 'la región V de los anticuerpos objeto o. fragmentos del mismo se puede fusionar con la. región Fe de una molécula de anticuerpo diferente. La región Fe usada para este propósito se puede modificar de modo que no se enlaza el complemento, reduciendo así la probabilidad de. inducir lisis celular en el paciente cuando la proteína de. fusión se usa como un agente terapéutico. Además, los anticuerpos objeto o fragmentos funcionales del mismo se pueden conjugar con albúmina- de suero humano para aumentar la vida media del suero del anticuerpo, o fragmento del mismo. Otro compañero de fusión útil para las' proteínas de enlace a antígenos' o fragmentos del mismo es transtiretina (TTR) . La, TTR tiene la capacidad para formar un tetrámero, así una . proteína de fusión anticuerpo-T.TR puede formar un anticuerpo multivalente que. puede incrementar su avidez de enlace.

Alternativamente, modificaciones sustanciales en las características funcionales y/o químicas de las proteínas de enlace a antígenos descritas en la presente se pueden alcanzar al crear sustituciones en la secuencia de aminoácidos de las cadenas pesadas y ligeras que difieren significativamente en su efecto sobre el mantenimiento (a) la estructura del armazón molecular en el área de la sustitución, por ejemplo, como üna hoja o conformación helicoidal, (b) la. carga o hidrofobicidad de la molécula en el sitio objetivo,, o (c) el volumen de la cadena lateral. Una "sustitución de aminoácido conservadora" puede' implicar una sustitución de un residuo de aminoácido nativo con un residuo no nativo que tiene poco o ningún efecto en la polaridad o carga del residuo de aminoácido en esa posición. Ver, Tabla 8, supra. Por otra parte, cualquier residuo . nativo en el polipéptido se puede también sustituir. con alanina, como se ha descrito previamente para mutagénésis de . barrido de alanina.

Las sustituciones de aminoácido (ya sea conservadoras , o no conservadoras) de los anticuerpos objeto, se pueden impleméntar por aquellos expertos en la técnica al aplicar técnicas de rutina. Las sustituciones dé aminoácido se pueden usar para identificar importantes residuos de los anticuerpos proporcionados en la presente, o para incrementar o disminuir la afinidad de estos anticuerpos para un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i). FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, o. para modificar la afinidad ' de enlace de otras proteínas que enlazan antígeno descritas en la presente.

Métodos para Expresar Proteínas de Enlace a Antígenós Los. sistemas de expresión y constructos en la forma de plásmidos, vectores de expresión,, transcripción, o casetes de expresión que comprenden al menos un polinucleótido como se describe arriba también' se proporcionan en la presente, también células hospederas que comprenden tales sistemas de expresión o constructos.

Las proteínas de .enlace a antígenós proporcionadas en .la presente se pueden . preparar por cualquiera de, un número de técnicas convencionales. Por ejemplo, proteínas de enlace a antígenós que enlazan específicamente a un'-, complejo que comprende ß-Klotho..y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, se puede producir por sistemas de expresión recombinantes , usando cualquier técnica conocida en el arte. Ver, por ejemplo, Monoclonal Antibodies, Hybridomas: A New Dimensión in Biological Analyses, Kennet et al.. (eds.) Plenum Press, New York (1980); y Antibodies: A' Laborator Manual, Harlow y Lañe (eds.),- Cold Spring . Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1988).

Las proteínas de enlace a antígenos se pueden expresar en líneas celulares de hibridoma (por ejemplo, en particular los anticuerpos se pueden expresar en hibridomas ) o en líneas celulares diferentes a hibridomas.. Los cónstructos de expresión que codifican los anticuerpos se pueden usar para transformar un mamífero, insecto o célula hospedera microbiana. La transformación se puede realizar usando cualquier método conocido para introducir . polinucleótidos ' en una célula hospedera, incluyendo, por ejemplo empacar el polinucleótido en . un virus o bacteriófago y traducir una célula hospedera Con el constructo por. procedimientos de transfección conocidos en la. técnica, como se ejemplifica por Patente de Estados' Unidos No.' 4,399,216; No. 4,912,040; No. 4,740,461; No. 4,959,455. El procedimiento de transformación óptimo usado dependerá de que tipo de célula hospedera se transforma. Los métodos para introducción de polinucleótidos heterólogos en' células de mamífero son bien conocidos en la técnica e incluyen, pero no se limitan a, transfección mediada por dextrano, precipitación de fosfato de calcio, transfección mediada por polibreno-, fusión de protoplasto, electroporación, encapsulación de los polinucleótidos en liposomas, mezcla de ácido nucleico con lípidos positivamente cargados, y microi.nyección directa del ADN en núcleos.

Los constructos de expresión recorabinantes típicamente comprenden una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que comprende uno o más de lo siguiente: uno o más CDRs proporcionados en la presente;, una región. ' constante de cadena ligera; una región variable de cadena ligera; una región constante de cadena pesada (por ejemplo, CH1, CH2 y/o CH3) ; y/u otra porción de andamio de una proteína de enlace a antígeno.s. Estas secuencias de ácido nucleico se insertan en un^ vector de expresión' apropiado usando, técnicas de' ligadura estándar. En una: modalidad, la región constante :de cadena pesada o ligera se agrega a la. terminal C de la región variable de cadena' pesada o ligera específica de anti-ß-Klotho/FGFR (por ejemplo, FGFRlc, FGFR2c, o FGFR3c) y se liga en un vector de expresión. El vector se selecciona típicamente para.', ser funcional en la célula hospedera particular empleada (esto es, el vector es compatible con la maquinaria de célula ¦ hospedera, permitiendo que la amplificación y/o expresión del gen . pueda · ocurrir) . En algunas modalidades, lós vectores usados que emplean ensayos de complementación de fragmento de proteína usando reporteros de proteína, tal como reductasa. de dihidrofolato (Ver, por ejemplo, Patente de' E.U.A. No. 6,270,964, qu se incorpora por la presente como referencia) . Los '.vectores de expresión adecuados se pueden adquirir, por ejemplo, de Invitrogen Life Technologies o BD Biosciences (anteriormente "Clontech") . Otros vectores útiles para clonación y expresión de los anticuerpos y fragmentos incluyen aquellos descritos en Bianchi y McGrew, (2003) Biotech. Biotechnol . Bioeng. 84 : 439-44, que se incorpora por la presente como referencia. Los vectores de expresión adecuados adicionales se discuten, por ejemplo, en Methods Enzymol., vol.. 185 (D. V. Goeddel, ed. ) , 1990, New York: Academic Press.

Típicamente, vectores de expresión usados en cualquiera de las células , hospederas contendrán secuencias para mantenimiento de plásmidó y para clonación y expresión .de secuencias de nucleótidos exógenas. Tales secuencias, colectivamente denominadas como. "secuencias de acompañamiento" . en determinadas · modalidades típicamente incluirán uno o más de las ' siguientes secuencias de nucleótidos: un promotor, una o más secuencias de aumentador, un origen de replicáción, una - secuencia de terminación transcripcional, una secuencia de intrón completa que contiene un sitio¦ de empalme de donador y .receptor, una secuencia que codifica . una secuencia líder para secreción de polipéptido, un sitio que enlaza ribosoma, una secuencia de poliadénilación, una región de poliligador para insertar el ácido nucleico que codifica el polipéptido a expresarse, y un elemento marcador seleccionable. Cada una de estas secuencias se discute abajo. .

Opcionalmente, el vector puede contener una secuencia que codifica "etiqueta", ' esto es, una molécula de oligonucleótido ubicada en el . extremo 5' o 3' de una secuencia que codifica una proteina de enlace a antigenos ,\ la secuencia de oligonucleótido codifica polyHis (tal como hexaHis HHHHHH ( SEQ ID NO:1830)), u otra "etiqueta" tal como FLAG, HA (virus, de . influenza hemaglutinina) , o. myc, para el cual existen los anticuerpos comercialmente disponibles. Esta etiqueta se fusiona típicamente al polipéptido ' sobre la expresión, del polipéptido, y puede servir como un medio para purificación de afinidad o detección de la proteína de enlace a antígenos de la célula hospedera. La purificación de afinidad se puede realizar, por ejemplo,, por cromatografía de columna' usando anticuerpos contra -la etiqueta como una matriz de afinidad. Opcionalmente, la etiqueta se puede remover posteriormente de . la proteína de enlace a antígenos purificada por varios medios tales como usar ciertas peptidasas para escisión.

• Las. secuencias de acompañamiento pueden ser homologas (esto es, de la. misma ¦ especie y/o cepa como la célula hospedera), heterólogas {esto es, de una especie diferente a la especie o cepa de célula hospedera) , híbridas . (esto es, una combinación de secuencias de acompañamiento de más de una fuente)-, sintéticas o nativas. Como tal, la fuente de una secuencia de acompañamiento puede ser cualquier organismo procariótico o eucariótico, cualquier organismo vertebrado o invertebrado, o cualquier planta, siempre que la secuencia de acompañamiento sea funcional en, y se pueda activar por, la maquinaria de célula hospedera.

Las secuencias de acompañamiento útiles en los vectores se pueden obtener por cualquiera de diversos métodos, bien conocidos en la técnica. Típicamente, las secuencias de acompañamiento útiles, en la presente se identificarán previamente al trazar y/o por digestión de endonucleasa de restricción y pueden así aislarse de la fuente, de tejido adecuada usando /.las endonucleasas de restricción apropiadas. En algunos casos, : la secuencia de nucleótido completa de una secuencia de acompañamiento puede ser conocida. En este caso, la secuencia de acompañamiento se puede sintetizar usando los métodos descritos en la presente para síntesis . de ácido nucleico o clonación.

Si toda o solamente una porción de la secuencia de acompañamiento se conoce, se puede obtener usando reacción de cadena de polimerasa (PCR) y/o por. cribado de una biblioteca genómica con una sonda adecuada tal como un oligonucleótido y/o fragmento de. secuencia de acompañamiento del mismo u otra especie. Cuando la secuencia de acompañamiento no se conoce, 4b8 un fragmento de ADN que contiene una secuencia de acompañamiento se puede aislar de un pedazo más grande de ADN que puede contener,. por ejemplo, . una secuencia de codificación o aún otro gene o genes. El aislamiento se puede realizar por digestión de endonucleasá de restricción para producir el fragmento de ADN adecuado seguido por el aislamiento usando purificación de gel de agarosa, cromatografía de columna, u otros, métodos conocidos por el técnico experto. La selección .de enzimas adecuadas para realizar este propósito será fácilmente evidente a uno de experiencia ordinaria en la técnica.

Un origen de .. replicación es típicamente una parte de aquellos vectores de . expresión proearióticos adquiridos comercialmente,. y el origen ayuda en la aplicación del vector en una célula hospedera. Si el vector de elección no .contiene un origen de sitio de replicación, se puede químicamente sintetizar con base en una secuencia conocida, y ligar en el vector. Por ejemplo, el origen de. replicación del plasmido pBR322 (Acceso GenBank # J01749, New, England . Biolabs, Beverly, MA) es adecuado para la mayoría de las bacterias gram negativas, y diversos orígenes virales {por ejemplo, SV40, polioma, adenovirus, virus de estomatitis . vesicular (VSV) , o virus de . papiloma tal como HPV o BPV) son útiles para vectores , de clonación en células de mamífero .

Generalmente, el origen de componente de replicación no es necesario para vectores de expresión de mamífero (por ejemplo, el origen de SV40 se usa f ecuentemente .. solamente debido a que también contiene el promotor temprano de virus) .

Una secuencia de terminación de transcripción se ubica típicamente 3 '..en. el extremo de una región de codificación' de polipéptido y sirve para . terminar la transcripción. Usualmente, una secuencia de terminación de transcripción en células procarióticas es un fragmento enriquecido con . G-C seguido por una secuencia poli-T. Mientras que la secuencia se clona' fácilmente de una biblioteca o aún comercialmente se adquiere como parte de un vector, . también se -puede sintetizar fácilmente usando métodos para síntesis de ácido nucleico tal como aquellas descritas en la presente.

Un gen marcador selecciona-ble codifica una proteína necesaria para la sobrevivencia y crecimiento de una célula hospedera que crece en un medio de cultivo selectivo. Los genes ' marcadores de selección típicos codifican proteínas que (a) confieren resistencia a antibióticos u otras toxinas, , por ejemplo, ampicilina, tetraciclina, o canamicina para células hospederas procarióticas; . (b) deficiencias auxotróficas de complemento de la célula; o (c) suministro de nutrientes críticos no disponibles de complejo o medio definido. Los Marcadores seleccionables específicos son . el', gen de resistencia de . canamicina, el gen de , resistencia a la ampicilina, y el gen de resistencia a la. tetraciclina . Ventajosamente, un gen de . resistencia a neomicina también se puede usar para selección en . ambas células hospederas procarióticas y eucarioticas.

Otros genes seleccionables se pueden usar, para amplificar el gen. que se expresará. La amplificación es el proceso en donde los genes que se. requieren para la producción de una proteina critica para el crecimiento .o supervivencia celular se reiteran en . tándem dentro de los cromosomas de generaciones sucesivas de células recombinantes . Los ejemplos de marcadores seleccionables adecuados para células de mamífero incluyen . reductasa de dihidrofolato (DHFR) y genes .de timidina quinasa sin promotor. Los Transformantes de célula de mamífero se colocan bajo presión de. selección en donde solamente los transformantes se adaptan únicamente para sobrevivir en virtud del gen .seleccionable presente en el v.ector. La presión de selección se impone al cultivar las células transformadas bajo condiciones en las cuales la concentración de agente de selección en el medio sé- incrementa sucesivamente, llevando por lo tanto a la aplicación de tanto el gen¦ seleccionable y el ADN que codifica otro gen, tal como una proteína de enlace a antigenos que enlaza a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc,' (ii) FGFR2c, y (ü'i), FGFR3c. Como un resultado, cantidades incrementadas de un polipéptido tal como una proteína .de enlace a antígenos se sintetizan del ADN amplificado..

Un sitio que enlaza ribosomas es usualmente ¦ necesario para la iniciación .de traducción de mARN y se caracteriza por una secuencia Shine-Dalgarno (procariotas) o una secuencia Kozak (eucariotas) . El elemento se ubica típicamente. 3 al promotor y 5' a la. secuencia de codificación del polipéptido a expresarse.

En algunos casos, tal como donde la glicosilación se desea en un sistema de expresión de célula hospedera eucariótica, se puede manipular las diversas: pre- o prosecuencias para mejorar la glicosilación o rendimiento. Por ejemplo, se puede alterar el sitio de escisión de peptidasa de un péptido de señal particular, o agregar prosecuencias, que también pueden afectar la glicosilación. El .producto ."de proteína final puede tener, en la . posición -1- (relativo al primer aminoácido de la proteína madura) , uno o más aminoácidos adicionales incidentes a la expresión, . que no se hayan podido remover totalmente. Por ejemplo, el producto de proteína final puede tener uno o dos residuos de aminoácidos encontrados en el sitio de escisión de peptidasa, enlazada .a terminal amino. Alternativamente, el uso de algunos sitios de escisión de enzima, puede resultar en una forma ligeramente truncada del polipéptido deseado, si la enzima recorta en tal área dentro del polipéptido maduro.

La expresión y clonación típicamente contendrán un promotor que se reconoce por el organismo hospedero y liga operativamente a la molécula que codifica una proteína de enlace a antígenos . que enlaza específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i). FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) F.GFR3c, . Los promotores son . secuencias no transcritas ubicadas cadena arriba (esto es, 5') al codón de partida de un gen estructural (generalmente dentro de alrededor de 100 hasta 1000 bp) que controla la transcripción del gen estructural. Los promotores se agrupan convencionalmente en una de dos clases: promotores inducibles y promotores constitutivos. Los promotores inducibles inician el incremento de los niveles de transcripción de ADN bajo su control en respuesta, a algún cambio en condiciones de cultivo, tal como la presencia o ausencia de un nutriente, o un cambio en la temperatura. Los promotores constitutivos', por otro lado, transcriben uniformemente un gen al cual ' se liga operativamente, es decir, con poco, o sin control sobre la expresión de gen. Un gran número de . promotores, reconocidos por una variedad de células. hospederas potenciales, son bien conocidos. Un promotor adecuado se liga operativamente al ADN que codifica cadena pesada . o cadena ligera que comprende una proteina de enlace a antigenos al remover el promotor desde el ADN de la fuente por digestión de enzima de restricción e insertar la secuencia de promotor deseada en el vector.

Los promotores adecuados para usar con hospederos de levadura también son conocidos en ¦ la- técnica. Los aumentadores de levadura se usan ventajosamente con promotores de levadura. Los promotores adecuados para usar con células hospederas de mamíferos son bien conocidos.: e incluyen, pero no se limitan a, aquellos obtendidos de los genomas de virus tales como virus polioma, virus de. viruela aviar, adenovirus (tal como Adenovirus 2), virus de papiloma de bovino, virus de sarcoma- aviar, citomegalovirus , retrovirus, virus de hepatitis B, y virus 40 de simios (SV40) . Otros promotores de mamífero adecuados incluyen promotores, de mamífero heterólogos, por ejemplo, promotores de choque de calor y el promotor de actina.

Los promotores adicionales que pueden ser de interés incluyen, pero no se limitan a: promotor temprano SV40 (Benoist y Chambón, (1981) Nature 2_90: 304-310) ; promotor' CMV (Thornsen et al., (1984) Proc. Nati Acad. U.S. A. 81:659-663); el promotor contenido en la . repetición de terminal larga 3' de virus de sarcoma Rous (Yamamoto et al., .(1980) Cell 22:787-797); promotor de herpes de timidiha , cinasa (Wagner et al., (1981) Proc. Nati. Acad. Sci. U.S. A. 78:1444-1445); secuencias promotoras y reguladoras, del . gen de metalotionina (Prinster et al., (1982) Nature 296:39-42); y promotores procarióticos tal como, el promotor beta-lactamasa (Villa-Kamaroff et. al., (1978) Proc. Nati, Acad. Sci. U.S. A. 75:3727-3731); o el promotor tac (DeBoer et al., (1983) Proc. Nati. Acad. Sci. UrS.A. 80 : 21-25 )'.. -También" de interés son las siguientes regiones de control transcripcional de animal, que exhiben especificidades de tejido y se han utilizado en animales transgénicos : la región de control de gen de elastasa I que está activa .en células acinares pancreáticas (Swift- et al., .(1984) Cell 38:639-646; Ornitz et al.., (1986) Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. -50: 399-40.9; MacDonald, (1987) Hepatology :425-515); la región de control de gen de insulina que está - activa en células beta pancreáticas (Hanahan, ( 1985 ) Nature . 15:115-122) ; la región de control-de gen de inmunoglobulina que está activa en células linfoides (Grosschedl et al., (1984) Cell 38:647-658;. Adames et. al:., (1985) Nature 313:533-538; Alexander et al., (1987) Mol. Cell. Biol. 1_: 1436-1444 ) ; la región de control de virus de mama de ratón que está activo en células testiculares , de pecho, linfoides. y células madre (Leder et al., (1986) Cell 4_5: 485-495) ; la región de control de gen de albúmina que está activa en el hígado (Pinkert et al., (1987) Genes y Devel. 1: 268-2 6) ; la región de control de gen de alfa-feto-proteína que está activa en el hígado (Krumla.uf et al.., (1985) Mol. Cell. -Biol. 5:1639-1648; Hammer et al., (1987)· Science 253:53-58) ; la región de control de gen-', de. alfa 1- ' antitripsina que está activa en el hígado (Kelse.y et al,., (1987) Genes y Devel. 1: 161-171) ; la región de control.de gen de beta-globina que está activa en células mieloides (Mogram et al., (1985) Nature 315:338-340; Kollias et al., (1986) Cell 4_6: 89-94); la región de control de gen de. proteína básica de mielin'a . que está activa en células de oligodendrocitos en el cerebro (Readhead et al. , (1987) Cell 4_8: 703-712 ) ; la región de control de gen .de cadena' 2 ligera de mio.sina que está activa ¦ en músculo esqueletal (Sani, (1985) Nature 314:283-286); y la región de control.de gen de hormona de liberación gonadotrópica que está activa en el hipotálamo (Masón et al., (1986) Science 234 : 1372-1378) .

Una secuencia potenciadora se puede insertar en el vector para incrementar la transcripción de ADN que codifica cadena ligera o cadena pesada que ..comprende una proteína de enlace a antígenos . que enlaza específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de. (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c , y (iii). FGFR3C, por eucario.tas mayores, por ejemplo, ¦una proteína de. enlace a antígenos humana que enlaza específicamente a un complejo que comprende ß-Kiotho . y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y . (iii) FGFR3c. Los aumentadores son elementos de acción cis de ADN, usualmente alrededor de 10-300 bp de. longitud, que actúan en el promotor para incrementar la transcripción. . Los aumentadores relativamente son independientes de la orientación y posición, que se ha encontrado en las posiciones tanto 5' como 3' a la unidad de transcripción. Diversas secuencias de aumentador disponibles de genes de mamífero se conocen (por ejemplo, globina, elastasa, albúmina, proteína de alfa-feto.,e insulina) . Típicamente, sin embargo, se usa un aumentador de un virus. El aumentador SV40, el aumentador de promotor temprano de citomegalovirus , el. aumentador de polioma, y aumentadores de adenovirus conocidos en la técnica son elementos de mejora ejemplares para la activación .de promotores eucarióticos . Mientras que un aumentador se puede colocar en el vector ya sea. 5' o 3' a una secuencia de codificación, se ubica típicamente en un sitio 5' del promotor. Una secuencia que codifica una secuencia de señal nativa o heterologa apropiada (secuencia líder o péptido de señal) se puede incorporar en un vector de expresión, paira promover la secreción extracelular del anticuerpo. La elección de péptido de señal o . líder depende, del tipo de células hospederas en las cuales el anticuerpo está para producirse, y una secuencia de señal heteróloga puede reemplazar la secuencia de señal nativa. Los ejemplos de péptidos de señal que son funcionales en células hospederas de mamífero incluyen lo siguiente: la secuencia, de señal para interleucina-7 (IL-7) descrita en Patente de E.U.A. No. 4, 965, 195; la secuencia de señal . para receptor de intérleucina-2 descrito en Cosman et al., (1984) Nature 312:768.; el péptido de señal de receptor de interleucina-4 descrito en la Patente EP No. 0367 566; el péptido de señal de receptor de interleucina-1 tipo I descrito en la Patente de E.U.A. No. 4,968,607; el péptido de señal de receptor de interleucina-1 tipo II descrito .en la Patente- EP No. 0 460 846.

Los vectores de expresión se pueden construir de un vector de partida tal como un vector comercialmente disponible. Tales vectores pueden pero no necesitan contener todas las secuencias de acompañamiento deseadas . Donde una.' o más de las secuencias de acompañamiento descritas en la presente no están ya presente en el vector, se pueden obtener de forma individual y ligar en el vector. Los métodos usados para obtener cada una de las secuencias de acompañamiento son bien conocidos por un experto en la técnica.

Después·. de que el vector se ha construido y una molécula de ácido nucleico codifica cadena ligera, una cadena pesada, o una cadena ligera y una cadena pesada que comprende una proteína de enlace a antigenos que enlaza específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRl'c, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, . se . ha insertado en él sitio adecuado del vector, el vector completado se puede insertar en una célula hospedera . adecuada para . amplificación y/o expresión de polipéptido. La transformación de un . vector de expresión para, una proteína de enlace a antígenos en una célula hospedera seleccionada se puede realizar por métodos bien conocidos incluyendo transfección, infección, co-precipítación de fosfato de. calcio, electroporación , microinyección, lipofección, transfección mediada por dextrano DEAE, u . otras técnicas conocidas. El . método seleccionado será, en parte una función, del tipo de célula hospedera a usarse. Estos métodos otros métodos adecuados son. bien conocidos ' por el técnico experto, y .se establecen por ejemplo, en Sambrook et al., (200.1), supra ..' Una célula hospedera, cuando se cultiva bajo condiciones apropiadas, sintetiza una proteína de enlace a antígenos' que se puede colectar posteriormente del medio de cultivo (si la célula hospedera secreta esto en el medio) o directamente de la. célula hospedera que produce esto (si. esto no se. secreta) . La, selección de una célula hospedera apropiada dependerá de varios factores,, tales como los niveles de expresión deseados, modificaeiones de polipéptido que son deseables o necesarias para actividad (tal como glicosilación o fosforilación) y facilidad de plegar en una molécula biológicamente activa.

Las lineas celulares de . mamífero, disponibles como hospederos para expresión son bien conocidas en la técnica . e incluyen, pero no · se limitan a, líneas celulares inmortalizadas disponibles de la Colección de' Cultivo Tipo Americano (ATCC por sus siglas en ingles), qué incluye . pero no se limitan a células HeLa, células 293 de riñon embriónico humano (células HEK293) , células de Ovario de hámster chino (CHO) , células de . riñon de hámster bebe (BHK) , células de riñon de mono (COS), células de carcinoma hepatocelular humano (por ejemplo, Hep G2), y un número de otras líneas celulares. En determinadas modalidades, las líneas¦ celulares se pueden seleccionar a . través de determinar que líneas celulares tienen altos niveles de 'expresión y constitutivamente producen proteínas de enlace a . antígenós con propiedades de enlace deseables (por. ejemplo, la capacidad para enlazar .a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de ( i ) FGFRl'c, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, ) . En otra modalidad, una línea celular del linaje de célula B que no hace su propio . anticuerpo pero tiene una capacidad para hacer y secretar un anticuerpo heterólogo se puede seleccionar.' La capacidad para inducir señalización del tipo FGF21 también puede formar un criterio, de selección.

Usos de Proteínas de enlace a antigenos para Propósitos de Diagnóstico y Terapéutico Las proteínas de. enlace a antígenos descritas en la presenté son útiles para detectar un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, . (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, en muestras biológicas e identificación de células o. tejidos que producen uno o más de ß-Klotho y al menos uno.de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c . Por ejemplo, las proteínas de enlace a antígenos descritas en la presente se pueden usar en ensayos diagnósticos, por ejemplo, ensayos de enlace para detectar y/o cuantificar un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, expresado en un tejido o célula.

Las proteínas . de enlace a antígenos que' enlazan específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, se pueden usar. en el tratamiento de enfermedades . relacionadas a señalización del tipo FGF21 en un paciente que necesita del mismo, tal como : diabetes tipo 2, obesidad, dislipidemia, NASH, enfermedad cardiovascular, y síndrome metabólico. Al formar un complejo de señalización que comprende una proteiha de enlace a antigenos',¦ y un complejo que comprende ß-Klotho . y a.l menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FG.FR2c, y (iii) FGFR3c, , la actividad in vivo natural de FGF21, que se asocia con un complejo que comprende ß-Klotho y, al menos uno. de (i)FGFRlc, (ii)FGFR2c, y (iii)FGFR3c in vivo para iniciar la señalización, se puede imitar y/o mejorar, llevando, a efectos terapéuticos.

Indicaciones Una enfermedad o afección asociada con FGF21 humano incluye 'cualquier, enfermedad o afección' cuya aparición en un paciente se causa por,' al menos en parte, la falta · de o la inducción terapéuticamente insuficiente, de señalización del tipo FGF21, que se inicia in vivo por la formación de un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii)FGFR2c, y ' (iii). FGFR3c . La severidad de la enfermedad o afección también se puede disminuir por la inducción de señalización del tipo -FGF21. Los. ejemplos de enfermedades' y afecciones que se pueden tratar con las proteínas de enlace a antígenos incluyen diabetes tipo 2,. obesidad, . dislipidemia, NASH, enfermedad cardiovascular, y síndrome metabólico.

Las proteínas, de enlace a antígenos descritas en la presente se pueden usar para tratar diabetes' tipo 2, obesidad, dislipidemia, . NASH, enfermedad cardiovascular, ' y síndrome metabólico, o se pueden emplear como un tratamiento profiláctico administrado, por ejemplo, diariamente, semanalmente, bi-semanalmente, . mensualmehte, bi-mensualmente/ bi-anualmente, etc . para prevenir o reducir la frecuencia y/o severidad de síntomas, por ejemplo, elevados niveles de glucosa en plasma, niveles elevados ¦ de triglicéridos y colesterol, proporcionando de tal modo un perfil de factor de riesgo glicémico y cardiovascular mejorado.

Métodos de Diagnóstico Las proteínas de enlace a antígenos descritas . en la presente se pueden usar para propósitos de diagnóstico para detectar, diagnosticar, o · monitorear enfermedades y/o afecciones asociadas con FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c, FGFR4, ß-Klotho, FGF21 y/o complejos que comprenden combinaciones de los mismos. También se proporcionan métodos para la detección de la presencia de un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (.iii) FGFR3c, en una muestra usando métodos inmunohistológicos clásicos conocidos por aquellos d experiencia en la técnica (por ejemplo, Tijssen, 1993, Practice and Theory of Enzyme Immunoassays, en Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology 15 (Burdon y van. Knippenberg, Elsevier Biomedical ) ; Zola, (1987) Monoclonales Antibodies: A Manual . of Techniques, pp . 147-158 (CRC Press, Inc.) ; Jalkanen¦ et al.,. (1985) J.. Cell. Biol. 101 : 976-985;"¦. Jalkanen et al., (1987). J. Cell Biol. 105:3087-3096) . La detección de un complejo que comprende '.ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, se puede realizar in vivo o in vitro.

Las aplicaciones diagnósticas proporcionadas en la presente incluyen el . uso de las proteínas de enlace . a antígenos para detectar la expresión/formación de un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) . FGFR3c, y/o enlazar a un . complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2e, y (iii) FGFR3C. Los ejemplos de métodos útiles en la detección de la presencia de un complejo que comprende ß-Klotho y al menos 'uno . de (i)- FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c,. incluye . inmunoensayos, tales como el ; ensayo inmunosorbente ·' ligado a enzimas (ELISA) y el radioinmunoensayo (RIA) .

Para aplicaciones de diagnóstico, la. proteína de enlace a antígenos típicamente se etiquetará , con un grupo de etiquetado detectable. Los grupos de etiquetado adecuados incluyen, pero.no se limitan a, lo siguiente: radioisótopos o radionuclidos (por ejemplo, 3H, 14C, 1N, 3 S, 90Y, 99Tc, luIn, 125 131 I, I), grupos fluorescentes (por ejemplo, FITC, rodamina, fósforos de lantánido) , grupos' enzimáticos (por ejemplo, peroxidasa de raíz de rábano, ß-ga.lactosidasa, luciferasa, fosfatasa alcalina), grupos quimioluminiscentes , grupos de biotinilo, o epítopos de polipéptido predeterminado reconocidos por un reportero secundario (por ejemplo, secuencias de pares de cremallera de leuciña, sitios de enlace para anticuerpos secundarios, .dominios que enlazan metal, etiquetas de epítopo) . En algunas modalidades, el grupo de etiquetado se acopla a la proteína de enlace a antígenos por medio ¦ de articulaciones del espaciador de diversas longitudes para reducir obstáculo . esférico potencial. Los. diversos métodos para etiquetar proteínas se conocen en la técnica y se pueden usar.

En otro aspecto; una proteína de enlace a antígenos se pueden usar ' para identificar una célula o células que expresan un .complejo que comprende ß-Klotho y al menos uño de (i) FGFRlc, (ii) ,.FGFR2c, y (iii) FGFR3c . En una modalidad específica, la proteína de enlace a antígenos se etiqueta con un grupo de etiquetado y el enlace de la proteína de enlace a antígenos etiquetada a un complejo que. comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, se detecta. En una modalidad específica adicional, el enlace de la proteína de enlace a antígenos a un complejo .que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc,. (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, se detecta in vivo. En una modalidad especifica adicional, la proteina de enlace a antígenos s aisla y mide usando técnicas conocidas en el arte.. Ver,, por ejemplo, Harlow y Lañe, (1988) supra;. Current Protocole In Immunology John E. Coligan, , ed. , (ed. 1993 y suplementos . y/o actualizaciones) John Wiley & Sons.

Otro aspecto proporciona detectar la presencia de una molécula de prueba que compite para, enlazar a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, con las proteínas de enlace a antigenos proporcionadas, como se describe en la presente. Un ejemplo de un ensayo podría implicar detectar la cantidad de proteína de enlace a antígenos libre en una solución que contiene una cantidad de un complejo que comprende ß- lotho y al menos uno de' (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, en la presencia ;.o ausencia de la molécula de prueba. Un incremento en la cantidad de proteína de enlace a antígenos libre (esto es, la proteína de enlace a antígenos no enlazada. a un complejo que comprende ß-Klotho .y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y ( iii ) ¦ FGFR3.C ,- ). indicaría que la molécula de prueba, es capaz de ' competir para enlazar a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y '(iii) FGFR3c, con la proteína de enlace a antigenos. En una modalidad, la proteína de enlace a antígenos se etiqueta con un grupo de etiquetado. Alternativamente, la molécula de prueba se etiqueta y la cantidad de molécula de prueba libre.se vigila én la presencia y ausencia de una proteína de enlace . a antígenos . ..

Métodos de Tratamiento: Formulaciones farmacéuticas y Vías de Administración Los métodos para usar las proteínas ' de enlace a antígenos también se proporcionan. En algunos métodos, una proteína de enlace a antígenos se proporciona a un paciente., lo que . induce la . señalización del tipo FGF21.

Las composiciones farmacéuticas . que comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva de una o una pluralidad de proteínas de enlace a antígenos y un diluyente, portador, solubilizador , emulsificador, conservador, y/o adyuvante farmacéuticamente aceptable también se proporcionan. Además, los métodos de tratamiento de un paciente al administrar tal composición farmacéutica se incluyen. El- término "paciente" incluye pacientes humanos .

Los materiales de formulación aceptables son no tóxicos para los receptores en. las dosis y concentraciones empleadas. En modalidades específicas, las composiciones . farmacéuticas que comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva de proteínas de enlace a antígenos , humanas . qué enlazan específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, se proporcionan.

En determinadas modalidades, materiales de formulación aceptables preferiblemente son no tóxicos para los receptores en las dosis y concentraciones empleadas. En determinadas modalidades, la composición farmacéutica puede contener materiales de formulación para modificar, '¦· mantener o conservar, por ejemplo, el pH, osmolaridad, viscosidad, claridad, color, isotonicidad, ' olor, esterilidad, estabilidad, velocidad de disociación o . liberación, adsorción o penetración de la composición. En tales modalidades, los materiales de formulación adecuados incluyen,- pero no se limitan a, aminoácidos (tales como glicina, glutamina, asparagina, arginina o lisina) ; antimicrobianos; antioxidantes (tal como ácido ascórbico, .sulfito de sodio o sulfito ácido de sodio); soluciones amortiguadoras (tales como borato, bicarbonato, Tris-HCl, citratos, fosfatos u otros ácidos orgánicos)-; agentes de carga (tales como manitol o glicina); agentes quelantes (tal como ácido etilendiamina tetraacético (EDTA) ) .; agentes formadores de complejo (tal cómo cafeína, polivinilpirrólidona, beta-ciclodextrina o hidroxipropil-beta-ciclodextrina)¦; re.llenadores ; monosacáridos ; disacáridos; y otros carbohidratos (tal como glucosa, mañosa o dextrinas) ; proteínas (tales como albúmina de suero, gelatina o inmunoglobulinas ) ; agentes colorantes, saborizantes , y de dilución; agentes emulsificantes; polímeros hidrofílicos (tal como .polivinilpirrolidona) ; polipéptidos de bajo peso molecular; contraiones que forman sal (tal como sodio) ; conservadores (tales como cloruro de benzalconio, ácido benzoico, ácido salicíclico, timerosal, alcohol de fenetilo, metilparabeno,. propilparabeno, clorhexidina,. ácido sórbico o peróxido . de hidrógeno); solventes (tal como glicerina, propilenglicol¦ o polietilenglicol) ; . alcoholes de azúcar (tales como manitol o ¦ sorbitol); agentes de suspensión; tensoactivos o agentes humectantes (tales como Pluronics, PEG, esteres de sorbitan, polisorbatos tales como p lisorbato 20, . polisorbato, tritón, trometamina, lecitina, colesterol, tiloxapal) ; agentes que aumentan la estabilidad (tal como sacarosa o sorbitol); agentes aumeritadores de la tonicidad (tal como halogenuros de metal alcalino, preferiblemente cloruro de sodio . o potasio, manitol sorbitol); vehiculos .de suministro; diluyentes; excipientes y/o adyuvantes farmacéuticos. Ver, Remington's Pharmaceutic l Sciences, 18a. Edición, (A.R.- Gennaro, ed. )., 1990, Mack Publishing Company, y ediciones posteriores.

En determinadas modalidades, la composición farmacéutica óptima . se ' determinará por un experto en la técnica dependiendo, por ejemplo, de la vía pretendida de administración, formato de suministro y dosis deseada. Ver, por ejemplo, Remington, s Pharmaceutical Sciences, supra . En determinadas modalidades, tales composiciones pueden influir en el estado físico, estabilidad, velocidad de liberación¦ in vivo y velocidad de depuración in vivo de las proteínas de enlace a antígenos descritas. En determinadas modalidades, el vehículo primario o portador en una composición farmacéutica puede ser ya sea acuoso ' o no acuoso en naturaleza. Por ejemplo, un vehículo o portador adecuado puede ser agua para inyección, solución salina fisiológica o líquido cerebroespinal artificial, posiblemente complementado con otros materiales comunes en composiciones para administración parenteral. La solución salina amortiguada neutra o solución salina mezclada con albúmina de suero son además vehículos ejemplares. En modalidades específicas, las composiciones farmacéuticas comprenden solución amortiguadora Tris de alrededor de pH 7.0-8.5, o solución amortiguadora de acetato de alrededor de pH 4.0-5.5, y puede, además incluir sorbitol o un sustituto adecuado. En determinadas, modalidades, las composiciones que comprenden proteínas de enlace a antígenos que enlazan específicamente a un complejo que comprende ß- Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, se pueden preparar para almacenamiento' al mezclar la composición seleccionada que tiene el grado deseado de pureza con agentes de formulación '. opcionales (Remington' s Pharmaceutical . Sciences, supra para ejemplos de agentes .de formulación adecuados) en la forma de una torta liofilizada' o una solución acuosa. Además, en determinadas modalidades, la proteina de enlace a antígenos que enlaza a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i): FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, se puede formular como un liofilizado usando excipientes apropriados tal como sacarosa.

Las composiciones farmacéuticas se pueden seleccionar para suministro parenteral. .Alternativamente,' las composiciones se pueden seleccionar para la inhalación o para suministrar a través del tracto digestivo, .tal como oralmente. La preparación de tales composiciones farmacéuticamente aceptables está dentro de la habilidad ;de la técnica .

Los componentes . de formulación están presentes preferiblemente en concentraciones que son aceptables para el sitio de administración. En determinadas modalidades, las soluciones amortiguadoras . se . usan . para · mantener . la composición en pH fisiológico o en un pH ligeramente menor, típicamente dentro de un intervalo de pH desde alrededor de.5 hasta alrededor de 8.

Cuando la administración parenteral se contempla, las composiciones terapéuticas se pueden proporcionar en la forma de una solución acuosa parenteralmente aceptable libre de pirógenos que comprende la proteína de .enlace a antígenos deseada en un vehículo farmacéuticamente aceptable. Un vehículo particularmente adecuado para inyección parenteral es agua destilada estéril en la cual la proteína de enlace. a antígenos se formula como una solución estéril, ísotónicá, conservada adecuadamente. En' determinadas modalidades, la preparación puede implicar la formulación de la .molécula deseada con un ' agente, tal como microesferas inyectables, partículas bio-erosionables, compuestos poliméricos (tal como ácido poliláctico o ácido poliglicólico) , perlas. o liposomas, que pueden proporcionar liberación controlada o sostenida del producto que. se puede suministrar por. medio de inyección de depósito. En determinadas modalidades, ácido hialurónico también se puede usar, el cual puede tener el efecto de promover duración sostenida en la circulación. En determinadas . modalidades, dispositivos de suministro de fármaco implantables ' se pueden usar para introducir la proteíria de enlace a antígenos deseada.

Ciertas composiciones farmacéuticas se formulan para inhalation. En algunas modalidades, proteínas de enlace a antigenos que enlazan a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2e, y (iii) FGFR3c, se formulan como un polvo inhalable, seco. En modalidades especificas, soluciones de inhalación de proteina de enlace a antigenos también se pueden formular con un propulsor para suministro en aerosol. En determinadas modalidades, las soluciones se pueden nebulizar. La administración pulmonar ' y métodos de formulación por lo tanto se describen además en la solicitud de patente internacional No. PCT/US94/001875, que se incorpora como referencia y describe suministro pulmonar de proteínas químicamente modificadas. Algunas . formulaciones se pueden administrar oralmente. Las proteínas de enlace a antígenos que enlazan específicamente, a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, que se administran en esta forma se pueden formular con o sin portadores habitualmente usados en la composición de formas de dosificación : sólidas tal como comprimidos y cápsulas. En determinadas modalidades, una cápsula se puede diseñar para liberar la porción activa de la formulación en el punto en el tracto gastrointestinal cuando la ¦ biodisponibilidad se' maximiza. y la degradación pre-sistémica se minimiza. Los agentes adicionales se pueden incluir para facilitar absorción de una proteína de . enlace a antígenos. Los diluyentes, saborizantes, ceras de punto de fusión bajo, aceites vegetales, lubricantes, agentes de suspensión, . agentes desintegrantes ; de comprimido, y aglutinantes también se pueden emplear.

Algunas composiciones farmacéuticas comprenden , una cantidad efectiva de una o una pluralidad de proteínas de enlace a antigenos .' humanas que enlazan específicamente a un complejo que comprende ß-Klotho y. al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, en una. mezcla con excipientes no tóxicos que son adecuados para la fabricación de comprimidos. Al disolver los comprimidos en agua' estéril, u otro vehículo adecuado, las soluciones se pueden preparar en forma de dosis unitaria. Los excipientes adecuados incluyen, pero no se limitan a, diluyentes inertes, tal como carbonato de calcio, carbonato o bicarbonato de sodio, lactosa, o fosfato de calcio; o agentes de enlace, tal. como almidón, gelatina, o acacia; o agentes ¦ de lubricación tal como estearato de magnesio, ácido esteárico, o talco.

Las. composiciones armacéuticas adicionales serán evidentes par.a aquellos éxpertos en la- técnica, incluyendo las formulaciones' que implican proteínas de enlace a antígenos que enlazan específicamente a un . complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de- (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, . en formulaciones de liberación; controlada o sostenida. Las técnicas para formular una variedad de otros medios de liberación, controlada o' sostenida, tal como portadores de liposoma, microparticulas micro-erosionables . o perlas porosas e inyección de depósitos, . también se conocen por aquellos expertos en la técnica.' Ver, por" ejemplo, Solicitud de Patente' Internacional No. PCT/US93/00829, que se incorpora como . referencia y describe microparticulas poliméricas porosas de " liberación controlada para suministrar composiciones farmacéuticas. Las preparaciones de liberación sostenida pueden incluir matrices de polimero semi-permeables en la forma de artículos formados, . por ejemplo, películas, o microcápsulas . Las. matrices de liberación sostenida pueden incluir poliésteres, hidrogeles, polilactidos (como se describe en la Patente, de E.U.A. No. 3,773, 919¦ y Publicación de Solicitud de Patente Europea No.' EP 058481, cada una de las cuales se incorpora como referencia), copolímeros de ácido L-glutámic'o y gama etil-L-glutamato (Sidman et al., 1983, Biopolymers 2:547-556), poli (2-hidroxietil-metacrilato) (Langer et al., 1981, . J. Biomed. Mater. Res. 15:167-277 y Langer, 1982, Chem. Tech . .12 : 98-105 ) , etilen vinil acetato (Langer ét al., 1981,¦ supraj o ácido poli-D(-)-3-hidroxibutírico (Publicación de solicitud de patente europea No. EP 133,988). Las composiciones de liberación sostenida pueden : también incluir liposomas que se pueden preparar por cualquiera de diversos métodos conocidos en la . técnica.¦¦ Ver, por ejemplo, Eppsteiri' et al., 1985, Proc. Nati. Acad. Sci. U. S. A. 82:3688-3692; Publicaciones de Solicitud .de Patente Europea Nos. EP 036, 676;' EP 088, 046 y EP 143,949, incorporadas como referencia.

Las composiciones farmacéuticas usadas para administración in vivo típicamente se proporcionan cómo preparaciones estériles. La esterilización se puede realizar por filtración a través de membranas de filtración estéril. Cuando. la composición se liofiliza, la esterilización que. usa este método se puede llevar a cabo ya sea antes o después de la liofilización o reconstitución. Las composiciones para administración parenteral se pueden almacenar en forma de liofilización o en una solución. Las composiciones parenterales generalmente se colocan en un recipiente que tiene un puerto de acceso estéril, por. ejemplo,, una bolsa .de solución intravenosa o 'vial que tiene un . tapón perforable por una aguja de inyección hipodérmica.

En determinadas modalidades, las células que expresan una proteína de enlace a antígenos reeombinante como se describe en la presente se encapsula para suministrar (Ver, • Invest. Ophthalmol Vis Sci (2002) 43: 329.2-3298 y Proc. ¦ Nati . Acad. Sciences: USA (2006) 103 : 3896-3901) .

En ciertas formulaciones, una proteína ce enlace a antígenos tiene uña concentración de entre 10 mg/ml y 150 mg/ml. Algunas formulaciones contienen una solución amortiguadora, sacarosa y polisorbato .. Un ejemplo de u a formulación es una que contiene 50-100 mg/ml dé proteína de enlace a antígenos, 5-20 mM de acetato de sodio, 5-10% p/v sacarosa, y 0.002 - 0.008% p/v polisorbato. ¦ Ciertas, formulaciones, por ejemplo, contienen 1-100...mg/ml. de una proteína de enlace a antígenos en solución amortiguadora de acetato de sodio 9-11 mM, 8-10% p/v sacarosa, y 0.005-0.006% p/v polisorbato. El pH de ciertas formulaciones está en el intervalo de 4.5-6. Otras formulaciones tienen un pH de 5.0-5.5 (por ejemplo, pH de 5.0, 5.2 o 5.4 ) . .

Una vez que la composición farmacéutica se ha. formulado, esta se puede almacenar en viales estériles' como una solución, suspensión, gel, emulsión, sólido, cristal, o como un polvo deshidratado o liofilizado. Tales formulaciones se pueden almacenar ya sea en una forma fácil de usar o en una forma (por ejemplo, lio'filizada) que se reconstituye, antes de la administración. Los kits para producir una unidad de administración de dosis sencilla también se proporcionan. Ciertos kits contienen un primer recipiente que tiene una proteína seca un segundo recipiente que tiene una formulación acuosa. En determinadas, modalidades, los kits que contienen jeringas pre-llenadas sencillas y .multi-cámaras {por ejemplo, jeringas de líquido y liojeringas) se proporcionan. La cantidad terapéuticamente efectiva de una composición farmacéutica que. contiene proteína de enlace a antigenos a emplearse dependerá, por ejemplo, del contexto terapéutico y objetivos. Un experto en la técnica apreciará que los niveles de dosificación apropiados, para el tratamiento variarán dependiendo, en parte, de la molécula liberada, la indicación para la cual la proteína de enlac a antígenos se está usando, la vía de administración, y el tamaño (peso corporal, superficie del cuerpo, o tamaño de órgano) y/o afección (la edad y salud general) del paciente. En determinadas modalidades, el médico puede titular la dosificación y modificar la vía de administración para obtener el efecto terapéutico óptimo.

Una dosificación típica pueden variar desde alrededor de 1 g/kg hasta alrededor de 30 mg/kg o más, dependiendo de los factores mencionados arriba. En modalidades específicas, la dosificación puede variar desde 10 g/kg hasta alrededor de 35 mg/kg, opcionalmente desde 0.1 mg/kg hasta alrededor de. '35 mg/kg, alternativamente desde 0.3 mg/kg hasta alrededor de 20 mg/kg. En algunas solicitudes, la dosificación es desde 0.5 mg/kg hasta 20 mg/kg y en otras aplicaciones la dosificación es desde 21-100 mg/kg. En algunos casos, una proteína de enlace a antígenos. se dosifica en 0.3-20 mg/kg. El programa de dosificación en algunos regímenes de tratamiento está en una dosis de 0.3 mg/kg qW-20 mg/kg qW.

La frecuencia de dosis dependerá, de los parámetros farmacocinéticos de la proteína de enlace a antígenos particular en la formulación usada. Típicamente, un médico administra la composición hasta que una dosificación se llega a ' que logre el efecto deseado. La composición se puede por lo tanto administrar como una dosis sencilla, o como dos . o más dosis (que pueden pero no deben contener . la. misma cantidad de la molécula deseada) durante el tiempo, o como una infusión continua por medio, de un dispositivo de implantación o catéter. Las dosificaciones adecuadas se pueden determinar a través del uso de datos de respuesta de dosis apropiada. En. determinadas modalidades, las proteínas de enlace a antígenos se pueden administrar a pacientes a través de un periodo- de tiempo extendido. La administración crónica, de una proteína de enlace .a antígenos minimiza la respuesta inmunitar.ia o alérgica adversa comúnmente asociada con las proteínas de enlace a antígenos . que no son completamente humanas, por ejemplo un anticuerpo . formulado contra un antígeno humano en un animal no humano, por ejemplo, un anticuerpo no completamente humano o anticuerpo no humano producido en una especie, no humana.

La vía de. administración de la composición farmacéutica es de acuerdo con métodos conocidos, por ejemplo, oralmente, a través de inyección por vías intravenosa, intraperitoneal , intracerebral (intra-parénquima) , intracerebroventricular , intramuscular, intra-ocular, intraarterial, intraportal, o intralesional ; por. sistemas de liberación sostenida o por dispositivos de implantación. En determinadas modalidades, las composiciones se pueden administrar por inyección de' bolo o continuamente por. infusión, o por dispositivo de implantación.

La composición también se puede administrar localmente por medio de implantación de una membrana, esponja u otro material apropiado sobre el cual la molécula deseada se ha absorbido o encaps.Ulado . En determinadas modalidades, donde un dispositivo de implantación se usa, el dispositivo se puede implantar en cualquier tejido adecuado u órgano, y el suministro de la molécula deseada puede ser por medio de difusión, bolo de liberación por tiempo, o administración continua.

También puede ser deseable para usar composiciones farmacéuticas de proteína de enlace a ántígenos ex vivo. En tales casos, las células, tejidos u órganos que se han removido del , paciente se exponen a ' composiciones farmacéuticas de proteína de enlace a ántígenos después de que las células, tejidos y/u órganos se implantan posteriormente nuevamente en el paciente.

En particular, las proteínas de enlace a .antígenos que. enlazan específicamente a un complejo qué comprende ß-Klothó y al menos uno' de (i) FGFRlc , (ii) FGFR2c, y (iii) FGFR3c, se pueden suministrar por: ciertas- células de implantación que se han fabricado por ingeniería genéticamente, usando métodos tales como aquellos descritos en la présente, para expresar y. secretar el polipéptido. En determinadas modalidades, tales . células pueden ser células animales o .humanas, y pueden ser autólogas, heterólogas, o xenogénicas. En .. determinadas modalidades, las células se pueden inmortalizar. En otras modalidades, con objeto de disminuir la oportunidad de una respuesta inmunológicá , las células se, pueden encapsular para evitar la infiltración de tejidos circundantes. En modalidades adicionales, los materiales de encapsulación son típicamente recintos poliméricos semi-permeables biocompatibles , o membranas que permiten la liberación de los productos de proteína pero previenen la destrucción de las células por¦ el sistema inmunitário del paciente o por otros factores perjudiciales de los tejidos circundantes.

Terapias de Combinación En otro aspecto, la presente descripción proporciona un método para tratar un sujeto para diabetes con una proteína de enlace a antígenos terapéutica de la . presente descripción, tal como los anticuerpos terapéuticos completamente humanos descritos en la presente, junto con uno o más de otros tratamientos. En Una modalidad, tal terapia de combinación alcanza un efecto aditivo o sinérgico. Las proteínas de enlace a antigenos, se pueden administrar en combinación con uno o más de los tratamientos de diabetes tipo 2 u obesidad actualmente disponibles. Estos tratamientos para diabetes incluyen biguánida (metaformina)¦, y sulfonilureas (tal cómo gliburida, glipizida).. Los tratamientos adicionales dirigidos a mantener homeostasis de glucosa incluyen agonistas gamma PPAR (pioglitazona, rosiglitazona ) ; glinidas (meglitinida , repaglinida, y nateglinida) ; inhibidores DPP-4 (Januvia® y Onglyza®) e inhibidores de glucosidasa alfa (acarbosá, voglibosa) .

Los tratamientos de combinación adicionales para diabetes incluyen tratamientos inyectables tal como insulina y miméticos de incretina (Byetta®, Exenatide®) , . otros GLP.-l (péptido tipo glucagón) análogos . tales., como liraglutida, otros agonistas GLP-1R y S.ymlin® (pramlintida) .

Los tratamientos de combinación adicional dirigidos a la pérdida de peso incluyen Meridia® y Xenical®.

EJEMPLOS Los siguientes ejemplos, incluyendo los experimentos conducidos y los resultados alcanzados, se proporcionan para propósitos ilustrativos solamente y no son para construirse como limitantes.

EJEMPLO 1 PREPARACION DE CELULAS FGFRlC Y ft-KLOTHO SOBRE EXPRESADAS PARA USO COMO UN A TIGENO Las secuencias de ácido nucleico que codifican .el polipéptido FGFRlc humano de longitud completa (SEQ ID NO: 4 ; Figuras 1A-1B) y una secuencia separada ¦ que' codifica el polipéptido ß-Klotho humano de longitud completa (SEQ' ID NO: 7; Figuras 2A-2C) se subclonaron en vectores de expresión de célula de mamífero' adecuados' (por ejemplo, pcDNA3.1 Zeo, pcDNA3.1 Hyg (Invitrogen, Carlsbad, CA) o pDSRa24. El vector pDSRa24 contiene el promotor/potenciador temprano¦ SV40 para expresar el gen de interés y un cásete ' de expresión DHFR de ratón para selección en células hospederas CHO DHFR (-) tales como AM1 CHO (un derivado de DG44., CHO DHFR (-)) .

Las células ' CHO AM-l/D se transfectaron con ADNs linealizados de huFGFRlc y hup-Koltho en . vectores de expresión celular mamífera estándar, por ejemplo, pcDNA3.1 puro y pcDNA3.1 Hyg con Lipofectamina 2000 (Invitrogen, Carlsbad CA) . Las células transfectadas se tripsinizaron 2 días después de la transfección y- sembraron en un medio que contiene los ¦ fármacos de selección "correspondientes, es decirm puromicina e higromicina. ' Después de 2 semanas, las colonias transfectadas . resultantes se tripsinizaron y agruparon. Los clones de células sencillas de los grupos se aislaron y cribaron con anticuerpos para huFGFRlc y ??ß?????? en FACS y el Clon 16 se seleccionó debido al , alto nivel y expresión balanceada de los dos componentes del receptor. 2xl0e9. células frescas del Clon 16 se cosecharon de botellas cilindricas en un volumen más pequeño en PBS y se incubaron con 10µg/ml de FGF21 recombinante (Amgen, Thousarid Oaks CA) a 4C durante 1 hora para formar complejo con los receptores de superficie celular. " Las. células se lavaron dos veces con PBS frío> se peletizaron por centrifugación y se congelaron en viales individuales a 2xl0e8 células para inmunización.

Células HEK 293T se transfectaron con ADN qúe expresa una versión truncada de huFGFRlc .(un péptido de señal VH21 se unió al FGFRlc restante a partir del residuo de aminoácidos #141 a #822 (en SEQ ID NO: 4 ) con una eliminación que retiró tanto el dominio, DI y el recuadro ácido (AB) y ADN que expresa la hu :-Klótho en la serie pcDNA3.1 o pT'T5 (un vector de. expresión desarrollado por Durocher, NRCC, con vector basado en el promotor CMV y EBV orí) para expresión transitoria. La remoción del Dl-AB sobre FGFRlc se diseñó para exponer los epitopos sobre FGFRlc (por ejemplo, en los dominios D2 y D3) que pueden oculatrse por este dominio autoinhibidor (ver Mohammadi et al., (2005) Cytokine Growth Factor Reviews, 16, 107-137; Gupte et ai., (2011.) J. Mol. Biol. 408: 491-502) .

La expresión de . ß-Klotho y FGFRlc truncado en las células 293T transíectadas se verificó por los anticuerpos específicos respectivos en FACS y las células se cosecharon en el día 3 posterior a la transfección y se congelaron como peletizado celular en alícuotas para inmunización.

Las células HEK 293T transfectadas transitoriamente o CHO estables que expresan FGFRlc y ß-Klotho individualmente o en conjunto se generaron también y usaron para concentrar sueros de ratón por FACS después de inmunización y para cribados de enlace de los sobrenadantes de hibridoma por (ver E emplo 3 ) .

EJEMPLO 2 PREPARACION DE ANTICUERPOS MONOCLONALES Las inmunizaciones se condujeron usando una o más formas adecuadas del antígeno de receptor FGF21, incluyendo: (1) receptor de enlace de célula de . transfectantes CHO que expresan FGFRlc humano de longitud completa y ß-Klotho en la superficie celular, obtenido por células CHO transíectadas con cADN que codifican un -polipéptido FGFRlc de longitud completa humana de- SEQ ID N0:4 (Ver también Figuras la-b) -y cADN . que codifica un polipéptido ß-Klotho humano de SEQ ID N0:7 (Ver también Figuras 2a-c) en una relación balanceada con células e incubados con FGF21 previo a . congelación; (2) receptor enlazado , a células de . transfectantes 293T que expresan ß-Klotho humana de longitud completa y una forma truncada en el N-terminal de FGFRlc humano que abarca los residuos de aminoácidos 141-822 del polipéptido de SEQ ID NO: (dominio DI de FGFRlc eliminado).

Una cantidad adecuada de inmunógeno (esto es, 3-4 x 106 células/ratón' de células CHO establemente transfectadas'¦ o células 293T transitoriamente transfectadas mencionadas arriba, se usaron para inmunización, inicial en XenoMouse™ de acuerdo a los métodos descritos en la Solicitud de Patente de E.U.A.' No. de Serie 08/759,620, presentada el 3 de- diciembre de 1996 y Solicitud de Patente Internacional . Nos. WO 98/24893, y WO .00/76310, las descripciones de las ' cuales se incorporan en la presente como referencia. Después de la inmunización inicial, las inmunizaciones de estimulación posteriores de inmunógeno (i. x - 106 células transfectadas con . FGF21R/ratón) se administraron en un. programa y por la duración necesaria para inducir una titulación anti-FGF21R adecuada en los ratones.. Las titulaciones se determinaron por un método adecuado, por ejemplo, por inmunoensayo de enzima, clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS), o . por otros . métodos (incluyendo combinaciones de inmunoensayos de enzima y FACS) .

Los animales que muestran titulaciones adecuadas se identificaron, y¦ los linfocitos se . obtuvieron de ganglios linfáticos drenados y, si es necesario, agrupados para cada cohorte. Los linfocitos se disociaron del tejido linfoide al molerse e un medio adecuado (por ejemplo, medio Eagle Modificado de Dulbecco; DMEM; obtenido de Invitrogen, Carlsbad, CA) para liberar las células de los tejidos, ' y suspendieron en , DMEM. Las células B se seleccionaron y/o expandieron usando métodos estándares, y fusionaron con el compañero de fusión adecuado, por ejemplo, células P3X63Ag8.653 de mieloma no secretoras (American Type Culture Collection CRL 1580; Kearney et al, J. Immunol, 123, 1979, 1548-1550), usando técnicas que se conocieron en el arte.

En un método de fusión adecuado, los linfocitos se mezclaron ' con células compañeras de fusión en una relación de 1:4. La mezcla celular se peletizó suavemente por centrifugación a 400 x g durante 4, minutos, el- sobrenadante decantado, y la mezcla celular se mezclaron suavemente (por -ejemplo,-' al usar una pipeta de 1 mi). La fusión se indujo con P.EG/DMSO (polietilenglicol/sulfóxido de dimetilo; obtenido de Sigma-Aldrich, St . Louis MO; 1 mi por millón de linfocitos) . El PEG/DMSO se agregó lentamente con agitación, suave durante un minuto, seguido- por un minuto, de mezcla. IDMEM . (DMEM sin glutamina; 2 mi por millón de células B) , luego se agregó durante 2 minutos con agitación suave, seguido por IDMEM adicional (8 mi por millón de célula B) que se agregó durante 3 minutos .

Las células fusionadas se peletizaron (400 x g 6 minutos) y se volvieron a suspender . en 20 mi de medio de selección (por ejemplo, DMEM gue contiene Azaserina -e Hipoxantina [HA] y otros materiales complementarios como sea necesario) por millones- de células B. Las células se incubaron durante 20-30 minutos a 37°C y luego se volvieron a suspender en 200 mi de medio de selección . y cultivaron durante tres hasta cuatro días en matraces T175 antes de formar en placa de 96 pozos.

Las células se distribuyeron en placas, de 96 pozos usando técnicas estándar para maximizar la clonalidad de las colonias" resultantes . Se empleó también. un método alternativo y las células fusionadas se colocaron en- placas clonalmente de manera directa en placas de 384 pozos para, asegurara la monoclonalidad desde el -inicio. Después de varios días de cultivo, los sobrenadantes se recolectaron y sometieron, a ensayos de cribado como se detalla en los ejemplos -a continuación, incluyendo confirmación de enlace al receptor FGF21 humano, especificidad y/o . actividad de especies cruzada. Las células positivas se seleccionaron, además y sometieron a técnicas de clonación y subclonacion estándares. Las lineas clónales se expandieron in vitro, y los anticuerpos humanos secretados obtenidos para análisis.

De esta manera, los ratones sé inmunizaron con células que expresan células FGF21R de longitud completa mezcladas con FGF21, o células que expresan un FGFRlc truncado y ß-Klotho de longitud completa, con un intervalo de 11-17 inmunizaciones durante un periodo de aproximadamente uno hasta tres meses y medio. Diversos anticuerpos específicos FGF21R que secretan lineas celulares se obtuvieron, y los anticuerpos se caracterizaron además. Las secuencias de las mismas se presentan en la presente y en el listado de secuencias, y se . proporcionan los resultados de varias pruebas usando estos anticuerpos.

EJEMPLO 3 SELECCION DE ANTICUERPOS DE ENLACE POR FMAT Después de 14 días de cultivo, los sobrenadantes de hibridoma se separaron por exclusión para anticuerpos monoclonales FGF21R específicos por Tecnología de Ensayo de Microvolumen Fluorométrico (FMAT) por cribado contra ya . sea la línea celular CHO AMl/huFGF21R o células . HEK293 recombínantes que se transfectaron . con FGF21R humano y contra-cribado contra células CHO o HEK293 precursoras. Brevemente las células en medio Freestyle (Invitrogen) se sembraron en placas FMAT- de 384 pozos en un .volumen, de 50 µ]_?/???? a una densidad de 4, 000 células/pozo para los transfectantes estables, y a una densidad de 16,000 células/pozo para las células precursoras, y las células se incubaron durante la noche a 37 °C. 10 uL/pozo de sobrenadante luego se agregó, y las placas . se . incubaron durante aproximadamente una hora a 4 °C, después, de lo. cual 10 UL/pozo de anticuerpo secundario IgG-Cy5 anti-humano se agregó a una concentración de 2.8 g/ml . (400ng/ml concentración final). Las placas luego se incubaron durante una hora a 4°C, y fluorescencia se leyó usando. un Sistema' de Detección Celular FMAT (Applied Biosystems) .

En total, más de 1,500 sobrenadantes de hibridoma se identificaron como enlace a las células que expresan el receptor FGF21 pero no a células precursoras por el método FMAT. Estos sobrenadantes luego se probaron en los ensayos funcionales FGF21 como se describe a continuación.

EJEMPLO 4 SELECCION DE ANTICUERPOS QUE INDUCEN LA SEÑALIZACIÓN DEL TIPO FGF21 Los experimentos se '¦ realizaron para identificar anticuerpos funcionales que imitan la actividad FGF21 de tipo natural (por ejemplo, la capacidad para inducir señalización del tipo FGF21) usando un ensayo reportero FGF21 adecuado. El ensayo reportero. FGF21 descrito mide la activación de señalización FGFR. por- medio de una lectura de trayectoria MAPK. El ß-Klothd es un co-receptor para la señalización FGF21, y aunque se considera que no tiene ninguna, capacidad de señalización inherente debido a su dominio citoplásmico muy corto, se requiere por FGF21 para inducir señalización a través de los FGFRs.

Ejemplo 4.1 ENSAYO REPORTERO DE ELK-LUCIFERASA Los ensayos . de. ELK-luciferasa se realizaron usando un sistema celular CHO o célula de riñon 293T humano recombinante . Específicamente, las células . hospederas se procesaron por ingeniería para sobre-expresar construcfos reporteros de ß-Klotho y luciferasa. Los coristructos reporteros contienen secuencias .que codifican GAL4-ELK1 y 5xUAS-Luc, un reportero de luciferasa impulsado por un promotor que contiene cinco copias tándem del sitio, de enlace '5 O 1 Gal4. La activación del complejo receptor FGF21 en estas lineas celulares reporteras recombinantes induce transducción de señal intracelular , que a su vez lleva a fosforilación ERK y ELK. La actividad de luciferasa se regula por el nivel de ELK fosforilado, . y . se usa para monitorear y cuantificar indirectamente la actividad FGF21.

En un ejemplo, : las células CHO se transfectaron secuencialmente usando el reactivo de transfección Lipofectamine 2000 (Invitrogen) de acuerdo al protocolo del fabricante con los cpnstructos receptores que expresan ß- lotho, FGFRlc y los plásmidos reporteros: 5x Gal4-Luciferasa (promotor TK mínimo con 5xGal4 sitios de enlace cadena arriba de la luciferasa) y Gal4-ELK1. El Gal4-ELK1 enlaza a los sitios de enlace Gal4 y activa la transcripción cuando se fosforila por ERK. La transcripción dé luciferasa, y por ello la ;actividad ' enzimática correspondiente en . este Contexto se regula por el nivel de ELKl fosforilado, y ' .se usa para monitorear y cuantificar indirectamente la actividad FGF21.

El clon 16 se seleccionó como la línea celular . reportera FGF21 luciferasa con base en la ventana de ensayo óptima de 10-20 veces con FGF21 nativo que muestra un EC50 en él intervalo nM sencillo.

Para el ensayó, las células reporteras ELK-luciferasa se colocaron en placa en placas de ensayo de 96 pozos, y suero en ayuno durante la¦ noche . El FGF21 o muestras de prueba se aigregaron durante 6 horas a 37 grados. Las placas luego se permitieron enfriar a temperatura ambiente y la actividad de luciferasa en los Usados' celulares se midió con Bright-Glo ( Promega ) .

Ejemplo 4.2 ENSAYO DE ERK-FOSFORILACIÓN Las lineas de célula hospedera alternativas específicamente L6. (una línea celular mioblástica de rata) sé desarrolló y aplicó para identificar anticuerpos con actividad de señalización del tipo FGF21. La línea celular L6 de rata es una linea de célula hospedera deseable para el ensayo de actividad debido a que se conoce, para expresar niveles mínimos "de receptores FGF endógenos. Las células L6 no responden a FGF21 aún cuando se transfectan con el vector de expresión ß-Klotho y por lo tanto proporcionan un respaldo más limpio. (Kurosu et al., (2007) J. Biol. Chem. 282, 26687-26695) : Los preadipocitos humanos primarios aislados de tejidos adiposos subcutáneos de múltiples donadores no diabéticos sanos se adquirieron de Zen-Bio, Inc. Los preadipocitos se colocaron en placas de.24 pozos y se diferenciaron durante 18 días, en adipocitos maduros. Después. . de un periodo de inanición de 3 horas, los adipocitos se trataron con concentraciones diferentes de moléculas de prueba durante 10 minutos. Después del tratamiento, se aspiraron los medios vy las células se congelaron por fijación en nitrógeno liquido. Se prepararon los lisados celulares y se midió la fosforilación ERK al usar ¦ . Fosfó- ERK1/2 (Thr202/Tyr20.4;Thrl85/Tyrl87) /Kit de Lisados de Células Enteras de Ensayo ERKl/2 Total de Meso Scale Discoveryj .

Las células. L6 se mantuvieron en medio Eagle modificado de Dulbecco complementado con suero de bovino fetal al 10% y penicilina/estreptomicina. Las células se transíectaron con plásmidos que expresan ß-Klotho y FGFR individual usando el reactivo de transfección de Lipofectamine 2000 (Invitrogen) de acuerdo con el protocolo del fabricante.

El análisis de señalización .FGF en células L6 se realizó como .se describe en la literatura (Kurosu et al.., (2007) J. Biol. Chem. 282, 26687-26695). Los cultivos celulares se recolectaron 10 min después del tratamiento de FGF21 .o moléculas de prueba y congelaron rápido en nitrógeno liquido, homogenizaron en. la solución amortiguadora dé lisis y la fosforilación ERK . : se midió al Usar Fosfo-ERK1/2 (Thr202/Tyr204;Thrl85/Tyrl87) /Kit de Lisados de Células Enteras de Ensayo ERKl/2 Total de Meso Scale Discovery) .

Además, el ensayo de proliferación con base en célula BaF3 de ratón dependiente del factor usado frecuentemente para receptores de citbquina -también puede. desarrollarse y aplicarse.

Entre los sobrenadantes de hibridoma probados en el ensayo reportero dé ELK-luciferasa FGF21 humano con base en célula CHO (clon. -16), sobre 140 se identificaron como positivos (> 20% de la actividad de FGF21)' cuando se comparan con FGF21 20nM como el control positivo. (Figuras 3 y 4) . Los anticuerpos luego, se purificaron del medio acondicionado de los cultivos de hibridoma de estos positivos y probaron de nuevo en el ensayo reportero con base en el ensayo reportero de célula CHO de ELK-luciferasa, para evaluar la potencia de los anticuerpos representativos en el ensayo de respuesta a la dosis y determinar la EC50. Las actividades y potencia pueden confirmarse en el ensayo de fosforilación ERK1/2 con base en la célula. L-6. El EC50 se espera que sea consistente para el ensayo de ELK-luciferasa en la linea celular estable CHO Clon.16.

EJEMPLO 5 DETERMINACIÓN DE QUE LA INDUCCION DE SEÑALIZACIÓN DEL TIPO FGF21 ES ESPECIFICA PARA EL COMPLEJO FGFR/PKLOTHO El FGF21 se ha reportado para señalizar a través de complejos receptores múltiples incluyendo FGFRlc, 2c, 3c y 4 cuando se empareja con ß-Klotho. La selectividad de los anticuerpos agonistas FGF21 se . puede, determinar en las células L6 mioblásticas de rata transíectadas. con vectores que expresan los FGFRs y PKlotho respectivos como se describe en . el Ejemplo 4.2.

La selectividad observada seria fuertemente sugerente de que la acción de estos anticuerpos es dependiente de ß-Klotho aunque también debe involucrar el componente de FGFR del complejo de señalización. Los resultados se establecen en la Tabla 6 a continuación.

TABLA 9 Selectividad FGFR EJEMPLO 5.1 ESPECIFICIDAD DE ENLACE ES EXCLUSIVAMENTE DEPENDIENTE DE 6 KLOTHO La especificidad de enlace . de los anticuerpos positivos del ensayo reportero en los sobrenadantes del hibirdoma se determinó por FACS al usar células 293T transíectadas transitoriamente para expresar FGFRlc solo de longitud completa, ß-Klotho solo o FGFRlc y ß-Klotho juntos. Más del 98% (141 de 143 hibridomas) enlazan a ß-Klotho . solos mientras que ninguno enlaza a FGFRlc solo., EJEMPLO 6 ACTIVIDAD EN ADIPOCITOS HUMANOS PRIMARIOS El FGF21 estimula 'la absorción de glucosa y lipólisis en adipocitos cultivados, y los adipocitos se consideran para ser fisiológicamente más relevantes que el sistema de célula reportero recombina'nte .

Un panel de los anticuerpos se probó en. el ensayo de adipocitos humanos para la actividad ERK de. fosforilación similar como se describe en el Ejemplo 4.2 y se comparó con FGF21 para su EC50. Los resultados se establecen a continuación en la Tabla 10.

TABLA 10 Actividad de Anticuerpos sobre el Ensayo de Adipocitos Humanos pERK EJEMPLO 7 ENLACE DE COMPETENCIA Y PRE-CLASIFICACION DE EPITOPOS Para comparar la similitud de los sitios de enlace de los anticuerpos en- el receptor FGF21, una serie de experimentos de enlace de competencia se realizaron y midieron por Biacore. En un ejemplo, anticuerpos receptores . FGF21 . agonistas representativos (y algunos controles) se pueden inmovilizar en la superficie del chip de sensor. El complejo FGFRle/ -Klotho ECD-Fc humano soluble . o ß-Klotho luego se capturó en las superficies de anticuerpo inmovilizadas. Finalmente, varios de. los anticuerpos del receptor ' FGF21. de · prueba se inyectaron individualmente sobre el receptor FGF21 humano soluble capturado o ß-Klotho. .Si el anticuerpo inyectado reconoce ' un sitio de. . enlace distinto relativo a aquellos reconocidos por el- anticuerpo inmovilizado, un segundo evento de enlace se observará. Si los anticuerpos reconocen el sitio, de enlace muy similar, no se observará más enlace. . .

Alt'ernative, o adicionalmente, un análisis Biacore se puede llevar a cabo con FGF21 biotin.ilad.o ¦ inmovilizado en el chip de sensor. El ß-Klotho soluble 10. nM luego se pasó sobre el chip solo o mezclado con los anticuerpos de prueba individuales en ?????. La Tabla 11 resume' los resultados.

TABLA 11 Resumen de Pre-Clasificación de Epítopos |Grupo 1: 2a. Campaña 24H11, 17C3, 16H7, 20D4, 21B4, 22H5, 23F8, 21H2, 18B11; 3a. Campaña , - 40D2, 46D11 Actual - 49H12, 51A8, 54A1, 60D7, 49C8, 49G3, 56E7, 63A10, 64B10 (64B10.1), 67C8, 68C8.1 [Grupo 2: 2a. Campaña · 17D8, 12C11, 26H11, 12E4, 18G1; 3a. Campaña - 37D3 Grupo 3: 3a. Campaña - 39F7, 38F2, 39F11, 39G5 Grupo 4: 3a. Campaña - 20E8 Grupo 5: actual · 51?5 Grupo 6: actual S2M (52A8.1), 67F5 (67F5.1), 67C10 (67C10.1), 65C3.1, 66G2.1 Las muestras en negritas son mAbs recombinantes Las muestras en cursivas son de sobrenadantes de hibridoma EJEMPLO 8 RECONOCIMIENTO DE ESTRUCTURAS NATIVAS Y DESNATURALIZADAS La capacidad de proteínas de enlace a . antigenos descritas para reconocer estructuras desnaturalizadas y nativas se investigó. .El procedimiento y los resultados fueron como sigue...

Ejemplo 8.1 ANTICUERPOS ANTAGONISTAS DEL RECEPTOR FGF21 QUE NO RECONOCEN ESTRUCTURAS DESNATURALIZADAS Los lisados celulares de células¦ CHO que establemente expresan el receptor . FGF21 (FGFRlc y ß-Klotho) o células precursoras CHO se diluyeron con solución amortiguadora de ¦muestra sin beta-mercaptoetanol . (sin condiciones de reducción) . 20µ1 de lisado celular se cargó por pista en pistas adyacentes separadas con una pista marcadora ¦ de peso molecular en geles SDS-PAGE al 4-20%. Después de . la electroforesis , los geles se tiñeron en filtros de nitrocelulosa de 0.2µ. Las tinciones se trataron con solución amortiguadora salina Tris/Triton-X (TBST) más leche . sin grasa al 5% (solución amortiguadora de bloqueo) durante 30 minutos. Las tinciones luego se cortaron a lo largo de las pistas, marcadoras de peso molecular. Las tiras luego se pasaron por sonda con PKlotho anti-murino de cabra comercial o anti-huFGFRl de ratón (R&D Diagnostics) en TBST/leche'. al .5%. Las tinciones se incubaron, con los anticuerpos durante una · hora :.a temperatura, ambiente, seguido por tres lavados con TBST '.' + leche al 1%. Las tinciones luego se pasaron por sonda con anticuerpos secundarios IgG-HRP- anti-humanos o anti-cabr.a durante 20 min. A las tinciones se dieron tres lavados de 15 min- con TBST seguidos por tratamiento con reactivo de desarrollo Pierce Supersignal West Dura (1 min.) y exposición a película de rayos X Kodak Biomax.

Los anticuerpos anti-p-Klotho y anti-FGFRl comerciales detectaron las proteínas del receptor correspondientes en el SDS-PAGE indicando . que enlazan a las proteínas del receptor desnaturali ado.

Ejemplo 9.2 Anticuerpos agonistas del receptor FGF21 enlazan a la estructura del receptor nativo Un ensayo de enlace FACS se- realizó con diversos anticuerpos FGFRlc y ß-Klotho comercialmente disponibles, y diversos de los anticuerpos agonistas del receptor FGF21 descritos. Los experimentos se realizaron como sigue.

Las células CHO que expresan establemente el receptor FGF21 se trataron . con anti-huFGFRl de ratón R&D Systems., anti-mu ß-Klothó de cabra, (l g por IxlO6 células en ???µ? PBS/BSA al 0.5%) . Las células se incubaron ·. con los anticuerpos a 4°C seguido por dos lavados con PBS/BSA. Las células luego. se trataron con anticuerpos secundarios etiquetados FITC á 4°G seguido por dos lavados. Las células se volvieron a suspender en Iml de PBS/BSA y el enlace de anticuerpo se analizó usando un instrumento FACS Calibur™.

Ninguno de los los anticuerpos ant?-ß-Klotho o anti-FGFR1 comerciales probaron un buen enlace al receptor FGF21 de superficie celular, como se determina por FACS. Esta observación confirma a'demás que los anticuerpos comerciales para los componentes del receptor se enlazan a la estructura desnaturalizada y no .nativa mientras /que los anticuerpos agonistas aquí descritos se enlazan a los receptores sobre la superficie celular como se muestra por FACS o FMAT que fueron los cribados iniciales.

EJEMPLO 9 BARRIDO DE ARGININA Como se describe arriba, las proteínas de enlace a antígenos que enlazan' un complejo que comprende ß-Klotho y uno de FGFRlc, FGFR2c y FGFR3c pueden crearse y caracterizarse. Para determinar los. determinantes neutralizantes en FGFRlc humano y/o ß-Klotho que estas varias proteínas . de enlace a¦¦ antígenos enlazan, un número de proteínas 'FGFRlc y/o ß-Klotho mutantes pueden construirse que tienen sustituciones de arginina en residuos de aminoácidos seleccionados de- FGFRlc y/o ß-Klotho humano. El barrido de arginina es un método reconocido en la técnica de evaluación donde los anticuerpos, u otras proteínas, enlazan a otra próteína, ver, por ejemplo, Nanevicz et al., (1995) J. Biol. Chem., 270:37, 21619-21625 y Zupnick et al., (2006) J. Biol. Chem., 281:29, 20464-2Q473. En general, la ' cadena lateral de arginina se carga positivamente y está relativamente voluminosa como se compara con otros aminoácidos, que pueden interrumpir el enlace, de anticuerpos a una región ' del antigeno donde la mutación se introduce. El barrido de arginina es un método que determina si un residuo es parte de un determinante neutralizante y/o. un epitopo.

. Varios aminoácidos ¦ distribuidos a lo largo de los dominios extracelulares . FGFRlc humano y/o ß.-Klotho pueden seleccionarse para mutación de arginina. La selección puede ser parcial hacia los aminoácidos cargados o polares para maximizar la posibilidad del residuo que . está en la superficie y reducir la probabilidad, de la mutación que resulta en . proteína mal plegada. Usando técnicas estándares conocidas en la técnica, oligonucleótidos^ de sentido y antisentido que contienen los residuos' mutados pueden . diseñarse con base en los criterios proporcionados por el -ki de protocolo Stratagene Qüickchange® II ( Stratagene/Agilent , Santa Clara, CA).. Las mutagé.nesis de las secuencias FGFRlc y/o ß-Klothp de tipo natural (TN) pueden realizarse usando un kit Qüickchange®. II ; (Stratagene). Los constructos quiméricos pueden prepararse por ingeniería para codificar una etiqueta FLAG-histidina (seis histidinas (SEQ ID NO: .1830)) en. la terminal carboxi del dominio extracelular para facilitar la purificación por medio de la etiqueta poly-His. .

El análisis, múltiple usando el software y estación de trabajo Bio-Plex (BioRad, Hercules, CA) puede realizarse para determinar determinantes neutralizantes en FGFRlc humano y/o ß-Klothó al analizar inAbs- FGFRlc y/o ß-Klotho humanas ejemplares enlazadas diferenciales a mutantes de arginina contra proteínas FGFRlc y/o ß-Klotho de tipo natural. Cualquier número de códigos de perla de perlas recubiertas con pentaHis ("penta-His" descrito como la SEQ ID NO: 1831) (Qiageh, Valencia, CA; ver wwwl.qiagen.com) se puede usar para capturar la .proteína etiquetada con histidina. Los códigos de perla pueden permitir el multiplexado de mutantes de arginina FGFRlc y/o ß-Klotho y FGFRlc y/o ß-Klotho humana de tipo natural.

Para preparar las perlas, lOOul de FGFRlc y/o ß-Klotho de tipo natural y sobrenadantes de..imitante de arginina FGFRlc y/o ß-Klotho de cultivo d expresión . transitorio se enlazan a perlas recubiertas con penta-His ("penta-His" descritas como SEQ ID NO: 1831) durante la noche a 4°C o 2 horas . a temperatura ambiente con agitación vigorosa.. Las perlas luego se lavan como por el protocolo del fabricante y el conjunto de perla, se agrupa y se forma en alícuota en 2 o 3 columnas de un placa de filtro de 96 pozos (Millipore, Bellerica, MA, producto #MSBVN1250) para puntos de ensayo' en duplicado o triplicado, respectivamente. ,???µ? de anticuerpos anti-FGFRlc y/o anti^-Klotho en diluciones de 4 veces se agregan a los pozos, incuban durante 1 hora¦ a temperatura ambiente, y lavan. ???µ? de una dilución 1:100 de IgG Fe- anti-humano conjugado PE (Jackson Labs., Bar Harbor, ME, producto #109-116-170) se .agrega , a cada pozo, incuba durante 1 hora a temperatura ambiente y lava. Las perlas se vuelven a suspender en BSA al 1%, agitan¦ durante 3 minutos, y leen en la estación de trabajo Bio-Plex. El anticuerpo enlazado a la proteina mutante de arginina FGFRlc y/o p-Klotho se compara con el anticuerpo enlazado al FGFRlc y/o ß-Klotho humana de tipo natural del mismo grupo: . Una titulación de anticuerpo durante aproximadamente una escala 5 log puede realizarse. La intensidad de fluorescencia mediana (MFI) de proteínas mutantes de arginina FGFRlc y/o ß-Klotho pueden graficarsé como un porcentaje de señal FGFRlc y/o ß-Klotho humana de tipo natural máxima. Aquellos mutantes para la cual - la señal- de todos los anticuerpos, están debajo de un valor de corte, por ejemplo, 30% de FGFRlc y/o ß-Klotho de tipo natural puede considerarse para ser cualquiera . de la concentración- de proteína demasiado baja, en la perla debido a la expresión p.óbre en el cultivo transitorio o posiblemente mal plegada y puede excluirse del análisis. Las mutaciones (esto es, sustituciones de arginina) que incrementan el EC50 para el mAb FGFRlc y/o ß-Klotho por un valor de corte, por ejemplo, 3 veces, o mayor (como se calcula por> por ejemplo, GraphPad Prism®) , puede considerarse para tener. enlace de mAb FGFRlc y/o ß-Klot o negativamente afectado. A través de éstos, métodos, se elucidan los determinantes neutralizantes-..' y epitopos para varios, anticuerpos FGFRlc y/o ß-Klotho.

EJEMPLO 10 ANALISIS DE PROTECCION DE PROTEASA Las regiones del receptor FGF21 humano enlazado por las proteínas de enlace, a antígenos que enlazan el receptor. FGF21 humano, por ejemplo,. FGFRlc, ß-Klotho o FGFRlc y complejo de ß-Klotho puede- identificarse por fragmentación: del receptor FGF21 humano en ' péptidos con proteasas específicas, por ejemplo, AspN, Lys-C, quimiotripsina o tripsina.. La secuencia de los péptidos del receptor . FGF21 humano resultante (esto es, . fragmentos de péptido .que contienen tanto disulfuro como sin disulfuro de porciones FGFRlc y ß-Klotho) luego pueden determinarse. ' En un ejemplo,, las formas solubles de Un receptor FGF21 humano, por. ejemplo, un complejo que comprende el heterodímero FGFRlc ECD-Fc y ß-Klotho . ECD-Fc descrito, én la- presente puede digerirse con AspN (que se desdobla . después del ácido aspárt.ico.y algunos residuos de ácido glutámico en el extremo amino) al incubar alrededor de 100 µ?: de receptor FGF21 soluble en 1.0 mg/ml en fosfato de sodio 0.1M (pH 6.5) durante 20 hrs a 37 °C con 2 ' µ? de AspN.

Un perfil de. péptido de las digestiones AspN luego pueden generarse en cromatografía HPLC mientras que una digestión de. control con una cantidad similar de anticuerpo se espera para ser esencialmente resistente a endoproteasa AspN. Un ensayo de protección de proteasa luego puede realizarse para determinar la digestión proteolítica del receptor FGF21 humano en la presencia de las proteínas de enlace, a antígenos. El principio general de este ensayo es que el enlace de una proteína' de enlace a antígenos al receptor FGF21 puede resultar en protección de ciertos sitios de escisión de proteasa específicos y esta información se puede usar para determinar la región o porción del receptor FGF21 donde la proteína de enlace a antígenos enlaza..

Brevemente, . las digestiones de péptido pueden someterse a mapeo de péptido HPLC; los picos individuales se recolectan, y los péptidos se identifican y mapean por análisis CL-MS de ionización de electrorocío en línea (ESI-CL-EM). y/o por procesamiento por secuencia de terminal N. Los análisis. HPLC para estos estudios pueden realizarse usando una columna C18. de fase inversa, de agujero estrecho (Agilent Technologies) para análisis fuera de línea y usando una columna C18 de fase inversa capilar (El . Grupo de Separación) para CL-EM. El mapeo de péptido HPLC puede realizarse con un .. gradiente lineal de ácido trifluoroacético al 0.05% (fase móvil A) hasta acetonitrilo al 90%'- en ácido trifluoroacético al 0.05%.. Las columnas pueden desarrollarse a la relación de flujo' deseada, para HPLC de agujero estrecho para análisis CL-EM en línea y fuera de línea, y .para HPLC capilar para análisis CL-EM en línea.

Los análisis de secuencias pueden conducirse en CL-EM/EM en línea y por procesamiento en secuencia Edmarí en' los picos de péptido recuperados de HPLC. Los análisis CL-EM ESI en línea de la digestión de péptido pueden realizarse para determinar la masa precisa y secuencia de los péptidos.que se separan por HPLC. Las identidades de péptidos seleccionados presentes en los picos de .péptido de la digestión de proteasa pueden de esta manera determinarse.

EJEMPLO 11 CONSTRUCCION DE RECEPTORES QUIMERICOS Un método adicional para determinar los determinantes de activación sobre los cuales estas varias proteínas de enlace a antígenos enlazan, es como sigue. Las proteínas FGFRlc y/o ß-Klotho quiméricas específicas entre especies humanas y de ratón, pueden construirse, expresarse en células 293 o CHO transitorias o. estables (como se describe en la presente) ; y probarse. Por ejemplo, un receptor FGF21 quimérico puede construirse que comprende receptores' FGFRlc, FG.FR2C, FGFR3c o FGFR4 humanos nativos. A manera de ejemplo, el FGFRlc puede formar pares con ß-Klotho humana/de ratón quimérico en el cual las regiones o secuencias seleccionadas en el ß-Klotho humana se reemplazan sistemáticamente por los residuos específicos de ratón correspondientes (Ver, por ejemplo, Figura 2A-2C) . De manera similar, la ß-Klotho . humana . nativa puede formar pares, con FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c. o FGFR4 humano/de ratón quimérico. Aquí, las regiones o secuencias seleccionadas en el FGFRlc humano se. reemplazan sistemáticamente por los residuos específicos de ratón correspondientes (Ver, por ejemplo, las alineaciones de las Figuras 1A-1B).. Las secuencias críticas involucradas en el enlace y/o actividad dé las proteínas de enlace a antígenos pueden derivarse, a través' del ensayo de enlace o mediciones de la actividad descritas en los Ejemplos previos 4, 5, 6 y 7 con base en los receptores FGF21 quiméricos.

Ejemplo 11.1 Construcción de Quimeras Especificas Las quimeras ß-Klotho humanas-ratón se construyeron usando la metodología descrita anteriormente. Un esquema de las quimeras construidas se presenta en la Figura 4.. En resumen, las quimeras generadas comprenden (de la terminal . N hasta C) una. fusión de una secuencia ß-Kloth'o humana fusionada a una secuencia ß-Klotho de murino fusionada a una secuencia ß-Klotho humana. La ß-Klotho humana (SEQ ID NO: 8) se usó como una estructura en la cual las regiones de ß-Klotho murino (secuencia de longitud completa se muestra en la SEQ ID NO:468) sé insertaron. ' Las regiones de ß-Klotho murina que se insertaron fueron como sigue': Residuos Murinos 82P-520P- PKNFSWGVGTGAFQVEGSWKTDGRGPSIWDRYVYSHLRGVNGTDRSTDSYIFLEKDLLALD FLGVSFYQFSISWPRLFPNGTVÁAVNAQGLRYYRALLDSLVLRNIEPIVTLYH DLPLTLQ EEYGG KNATMIDLFNDYATYCFQTFGDRVKYWITIHNPYLVA HGFGTGMHAPGEKGNLT AVYTVGHNLIKAHSKVWHNYDKNFRPHQKGWLSITLGSH IEPNRTDNMEDVINCQHSMSS VLGWFANPIHGDGDYPEFMKTGAMIPEFSEAEKEEVRGTADFFAFSFGPNNFRPSNTVVKM GQNVSLNLRQVLNWIKLEYDDPQILI SENGWFTDSYIKTEDTTAIYMMK FLNQVLQAIKF DEIRVFGYTA TLLDGFEWQDAYTTRRGLFYVDFNSEQKERKPKSSAHYYKQIIQDNGFPL KESTPDMKGRFP (SEQ ID NO: 470) Residuos Murinos 506F-1043S FPLKESTPDMKGRFPCDFS GVTESVLKPEFTVSSPQFTDPHLYV NVTGNRLLYRVEGVR L TRPSQCTDYVSIKKRVEMLAKMKVTHYQFALD TSILPTGNLSKVNRQVLRYYRCVVSE GLKLGVFPMVTLYHPTHSHLGLPLPLLSSGG LNMNTAKAFQDYAELCFRELGDLyKL IT INEPNRLSDMYNRTSNDTYR HNLMIAHAQVWHLYDRQYRPVQHGAVSLSLHCDWAEPÁN PFVDSH KAAERFLQFEIA FADPLFKTGDYPSVMKEYIASKNQRGLSSSVLPRFTAKESR LVKGTVDFYALNHFTTRFVIHKQLNTNRSVADRDVQFLQDITRLSSPSRLAVTP GVRKLL A IRRNYRDRDIYITANGIDDLALEDDQIRKYYLEKYVQEALKAYLI DKVKIKGYYAFKLIT EEKS PRFGFFTSDFRAKSSVQFYSKLISSSGLPAENR!SPACGQPAEDTDCTICSFLVEKK PLIFFGCCFISTLAVLLSITVFHHQKRRKFQKARNLQNIPLKKGHSRVFS " (SEQ ' ?D NO: 71) Residuos Murinos 1M-193L MKTGCAAGSPGNEWIFFSSDERNTRSRKTMSNRALQRSAVLSAFVLLRAVTGFSGDGKAIW DKKQYVSPVNPSQLFLYDTFPKNFSWGVGTGAFQVEGSWKTDGRGPSIWDRYVYSHLRGVN GTDRSTDSYI FLEKDLLALDFLGVSFYQFSISWPRLFPNGTVAAVNAQGLRYYRALLDSLV LRNIEPIVTL (SEQ ID NO: 472) Residuos Murinos 82P-302S P FS GVGTGAFQVEGS TDGRGPSI DRYVYSHLRGVNGTDRSTDSYI FLEKDLLALD FLGVSFYQFSISWPRLFPNGTVAAVNAQGLRYYRALLDSLVLRNIEPIVTLYHWDLPLTLQ EEYGG KNATMIDLFNDYATYCFQTFGDRVKYWITIHNPYLVAWHGFGTGMHAPGEKGNLT AVYTVGHNLIKAHSKVWHNYDKNFRPHQKGWLSITLGS. (SEQ ID NO: 473) Residuos Murinos .194Y- 16G YH DLPLTLQEEYGGWKNATMI DLFNDYATYCFQTFGDRVKYWITIHNPYLVA HGFGTGM HAPGEKGNLTAVYTVGHNLIKAHSKVWHNYDKNFRPHQKGWLSITLGSH IEPNRTDNMED VI CQHSMSSVLGWFANP.IHGDGDYPEFMKTGAMIPEFSEAEKEEVRGTADFFAFSFGPNN FRPSNTVVKMGQNVSLNLRQVLNWIKLEYDDPQILISENG (SEQ ID NO: 474) Residuos Murinos 302S-506F SHWIEPNRTDNMEDVINCQHSMSSVLGWFANPIHGDGDYPEFMKTGAMIPEFSEAEKEEVR GTADFFAFSFGPNNFRPSN.TVVKMGQNVSLNLRQVLNWIKLEYDDPQILISENGWFTDSYI KTEDTTAIY MKNFLNQVLQAIKFDEIRVFGYTAWTLLDGFEWQDAYTTRRGLFYVDFNSE QKERKPKSSAHYYKQIIQDNGF (SEQ ID NO:475) .

Residuos Murinos 416G-519P GWFTDSYIKTEDTTAIYMMKNFLNQVLQÁIKFDEIRVFGYTAWTLLDGFEWQDAYTTRRGL FYVDFNSEQKERKPKSSAHYYKQI IQDNGFPLKES PDMKGRF (SEQ ID NO: 76) .

Residuos Murinos .507P-632G PLKESTPDM GRFPCDFSWGVTESVLKPEFTVSSPQFTDPHLYV NVTGNRLLYR'VEGVRL KTRPSQCTDYVSIKKRVEMLAKMKVTHYQFALDWTSILPTGNLSKVNRQVLRYYRCVVSEG LKLG (SEQ ID NO: 77) Residuos Murinos 520P-735A PCDFSWGVTESVLKPEFTVSSPQFTDPHLYV NVTGNRLLYRVEGVRLKTRPSQCTDYVSI K RVEMLAKMKVTHYQFALDWTSILPTGNLSKVNRQVLRYYRCVVSEGLKLGVFPMVTLYH PTHSHLGLPLPLLSSGG LNMNTAKAFQDYAELCFRELGDLVKLWITINEPNRLSDMYNRT SNDTYRAAHNLMIAHAQVWHLYDRQYRPVQHGA ( SEQ ID NO : 478 ) Residuos Murinos 632G-849Q GVFPMVTLYHPTHSHLGLPLPLLSSGG L'NMNTAKAFQDYAELCFRELGDLVKLWITINEP NRLSDMYNRTSNDTYRAAHNLMIAHAQVWHLYDRQYRPVQHGAVSLSLHCDWAEPANPFyD SH KAAERFLQFEIAWFÁDPLFKTGDYPSV KEYIASKNQRGLSSSVLPRFTAKESRLVKG TVDFYALNHFTTRFVIHKQLNTNRSVADRDVQFLQ (SEQ ID NO: 479) Residuos Murinos 735A-963S AVSLSLHCDWAEPANPFVDSHWKAAERFLQFEIAWFADPLFKTGDYPSVMKEYIASKNQRG LSSSVLPRFTAKESRLVKGTVDFYALNHFTTRFVIHKQLNTNRSVADRDVQFLQDITRLSS PSRLAVTPWGVRKLLAWIRRNYRDRDIYITANGIDDLALEDDQIRKYYLEKYVQEALKAYL IDKVKIKGYYAFKLTEEKSKPRFGFFTSDFRAKSSVQFYSKLISSS (SEQ ID NO: 480) Residuos Murinos 1M-81F MKTGCAAGSPGNEWIFFSSDERNTRSRKTMSNRALQRSAVLSAFVLLRAVTGFSGDGKAI DKKQYVSPVNPSQLFLYDTF (SEQ ID NO:481) Residuos Murinos.82P-193L PKNFS GVGTGAFQVEGSWKTDGRGPSIWDRYVYSHLRGVNGTDRSTDSYIFLEKDLLALD FLGVSFYQFSIS PRLFPNGTVAAVNAQGLRYYRALLDSLVLRNIEPIVTL (SEQ ID NO: 482) Las quimeras generadas usando las secuencias ß-Klotho de murino comprenden .los siguientes componentes: TABLA 12 Las quimeras generadas comprenden las siguí secuencias de aminoácidos: (i) huBeta Klotho(l-81, 523-1044 ) (muBetaKLOTHQ 82-520 ) TGFSGDGRAIWSKNPNFTPVNESQLFLYDTFPKNFS GVGTGAFQVEGSW KTDGRGPSIWDRYVYSHLRGVNGTDRSTDSYIFLEKDLLALDFLGVSFYQ FSIS PRLFPNGTVAAVNAQGLRYY.RALLDSLVLRN IEPIVTLYHWDLPL . TLQEEYGG KNATMIDLFNDYATYCFQTFGDRVKY I.TIHNPYLVA HGF . GTG HAPGEKGNLTAVYTVGHNLIKAHSKVWHNYDKNFRPHQKG LSITL GSH IEPNRTDN EDVINCQHSMSSVLGWFANPIHGDGDYPEFMKTGAMI. .. PEFSEAEKEEVRGTAPFFAFSFGPNNFRPSNTVVKMGQNVSLNLRQVLNW IKLEYDDPQILISENGWFTDSYIKTEDTTAIYMMKNFLNQVLQAIKFDEI RVFGYTA TLLDGFEWQDAYTTRRGLFYVDFNSEQKERKPKSSAHYY QI IQDNGFPL ESTPDMKGRFPC.DFSWGVTESVLKPESVASSPQFSD.PHLYy WNATGNRLLHRVEGVRLKTRPAQCTDFVNIKKQLEMLARMKVTHYRFALD WASVLPTGNLSAVNRQALRYYRCVVSEGLKLGISAMVTLYYPTHAHLGLP EPLLHADGWLNPSTAEAFQAYAGLCFQELGDLVKL ITINEPNRLSDIYN RSGNDTYGAAHNLLVAHALAWRLYDQQFRPSQRGAVSLSLHAD AEPANP YADSHWRAAERFLQFEIAWFAEPLFKTGDYPAAMREYIASKHRRGLSSSA LPRLTEAERRLLKGTVDFCALNHFTTRFVMHEQLAGSRYDSDRDIQFLQD ITRLSSPTRLAVI PWGVRKLLRWVRRNYGD DIYITASGIDDQALEDDRL RKYYLGKYLQEVLKAYLIDKVRIKGYYAFKLAEEKSKPRFGFFTSDFKAK SSIQFYNKVISSRGFPFENSSSRCSQTQENTECTVCLFLVQKKPLIFLGC CFFSTLVLLLSIAIFQRQKRRKFWKAKNLQHIPLKKGKRVVS '. (SEQ NO:455) ) . huBeta Klotho ( 1-507) (muBetaKLOTHO 506F-1045S) MKPGCAAGSPGNE I FFSTDEITTRYRNTMSNGGLQRSVILSALILLRAV TGFSGDGRAIWSKNPNFTPVNESQLFLYDTFPKNFF GIGTGALQVEGS KKDGKGPSI DHFIHTHLKNVSSTNGSSDSYIFLEKDLSALDFIGVSFYQ FSIS PRLFPDGIVTVANAKGLQYYSTLLDALVLRNIEPIVTLYH DLPL ALQEKYGGWKNDT.IIDIFNDYATYCFQMFGDRVKYWITIHNPYLVAWHGY GTG HAPGEKGNLAAVYTVGHNLIKAHSKV HNYNTHFRPHQKGWLSITL GSH IEPNRSENTMDIFKCQQ.SMVSVLGWFANPIHGDGDYPEGMRKKLFS VLPIFSEAEKHEMRGTADFFAFSFGPNNFKPLNTMAKMGQNVSLNLREAL NWIKLEYN PRILIAENGWFTDSRVKTEDTTAIYMMK FLSQVLQAIRLD EIRVFGYTAWSLLDGFEWQDAYTIRRGLFYVDFNSKQKERKPKSSAHYYK QIIRENGFPLKESTPDMKGRFPCDFSWGVTESVLKPEFTVSSPQFTDPHL YVWNVTGNRLLYRVEGVRLKTRPSQCTDYVSIKKRVEMLAKMKVTHYQFA LD TSILPTGNLSKVNRQVLRYYRCVVSEGLKLGVFPMVTLYHPTHSHLG LPLPLLSSGG LNMNTA AFQDYAELCF ELGDLVKL ITINEPNRLSDM YNRTSNDTYRAAHNLMIAHAQV HLYDRQYRPVQHGAVSLSLHCD AEPA NPFVDSHWKAAERFLQFEIAWFADPLFKTGDYPSVMKEYIASKNQRGLSS SVLPRFTAKESRLVKGTVDFYALNHFTTRFVIHKQLNTNRSVADRDVQFL QDITRLSSPSRLAVTPWGVRKLLAWIRRNYRDRDIYITANGIDDLALEDD QIRKYYLEKYVQEALKAYLIDKVKIKGYYAFKLTEEKSKPRFGFFTSDFR AKSSVQFYSKLISSSGLPAENRSPACGQPAEDTDCTICSFLVEKKPLIFF GCCFISTLAVLLSITVFHHQKRRKFQKARNLQ I PLKKGHSRVFS (SEQ ID NO: 56) . i) huBeta Klotho (194-1044) (muBetaKLOTHO 1-L193) KTGCAAGSPGNEWIFFSSDERNTRSRKTMSNRALQRSAVLSAFVLLRAV TGFSGDGKAIWDKKQYVSPVNPSQLFLYDTFPKNFSWGVGTGAFQVEGSW KTDGRGPSIWDRYVYSHLRGVNGTDRSTDSYIFLEKDLLALDFLGVSFYQ FSISWPRLFPNGTVAAVNAQGLRYYRAELDSLVLRNIEPIVTLYHWDLPL ALQEKYGG K DTI IDIFNDYATYCFQMFGDRVKY ITIHNPYLVAWHGY GTGMHAPGE GNLAAVYTVGHNLIKAHSKVWHNYNTHFRPHQKGWLSITL GSHWIEPNRSENT DIFKCQQS VSVLGWFANPIHGDGDYPEGMRKKLFS VLPIFSEAEKHEMRGTADFFAFSFGPNN'FKPLNTMAKMGQNVSLNLREAL N IKLEYNNPRILIAENG FTDSRVKTEDTTAIYMMKNFLSQVLQAIRLD EIRVFGYTAWSLLDGFEWQDAYTIRRGLFYVDFNSKQKERKPKSSAHYYK QIIRENGFSLKESTPDVQGQFPCDFSWGVTESVLKPESVASSPQFSDPHL YV NATGNRLLHRVEGVRLKTRPAQCTDFVNIKKQLEMLARMKVTHYRF LDWASVLPTGNLSAVNRQALRYYRCVVSEGLKLGISAMVTLYYPTHAHLG LPEPLLHADGWLNPSTAEAFQAYAGLCFQELGDLVKLWITINEPNRLSDI YNRSGNDTYGAAHNLLVAHALA RLYDQQFRPSQRGAVSLSLHADWAEPA NPYADSHWRAAERFLQFEIAWFAEPLFKTGDYPAAMREYIASKHRRGLSS SALPRLTEAERRLLKGTVDFCALNHFTTRFVMHEQLAGSRYDSDRDIQFL QDITRLSSPTRLAVIPWGVRKLLRWVRRNYGDMDIYITASGIDDQALEDD RLRKYYLGKYLQEVLKAYLIDKVRIKGYYAFKLAEEKSKPRFGFFTSDFK AKSSIQFYNKVISSRGFPFENSSSRCSQTQENTECTVCLFLVQKKPLIFL GCCFFSTLVLLLSIAIFQRQKRRKFWKA NLQHIPL KGKRVVS (SEQ ID NO:457) (iv) huBeta Klotho(l-81, 3.03-1044 ) (muBetaKLOTHO 82P- 2S) MKPGCAAGSPGNEWI FFSTDEITTRYRNTMSNGGLQRSVILSALILLRAV TGFSGDGRAI SKNPNFTPVNESQLFLYDTFPKNFSWGVGTGAFQVEGSW KTDGRGPSIWDRYVYSHLRGVNGTDRSTDSYIFLEKDLLALDFLGVSFYQ FSISWPRLFPNGTVAAVNAQGLRYYRALLDSLVLRNIEPIVTLYH DLPL TLQEEYGGWKNATMIDLFNDYATY.CFQTFGDRVKY ITIHNPYLVAWHGF . GTGMHAPGEKGNLTAVYTVGHNLIKAHSKVWHNYDKNFRPHQKGWLSITL GSHWIEPNRSENTMDIFKCQQSMVSVLGWFANPIHGDGDYPEGMRKKLFS VLPI FSEAEKHEMRGTADFFAFSFGPNNFKPLNT AKMGQNVSLNLREAL N IKLEYNNPRILIÁENGWFTDSRVKTEDTTAIYMMKNFLSQVLQAIRLD' EIRVFGYTAWSLLDGFEWQDAYTIRRGLFYVDFNSKQKERKPKSSAHYYK QIIRENGFSLKEST.PDVQGQFPCDFSWGVTESVLKPESVASSPQFSDPHL YV NATGNRLLHRVEGVRLKTRPAQCTDFVNIK QLEMLARMKVTHYRFA LDWASVLPTGNLSAVNRQALRYYRCVVSEGLKLGISA VTLYYPTHAHLG LPEPLLHADG LNPSTAEAFQAYAGLCFQELGDLV LWITINEPNRLSDI YNRSGNDTYGAAHNLLVAHALAWRLYDQQFRPSQRGAVSLSLHADWAEPA ·''.

NPYADSH RAAERFLQFEIA FAEPLFKTGDYPAAMREYIASKHRRGLSS SALPRLTEAERRLLKGTVDFCALNHFTTRFVMHEQLAGSRYDSDRDIQFL QDITRLSSPTRLAVIP GVRKLLRWVRRNYGDMDIYITASGIDDQALEDD RLRKYYLGKYLQEVLKAYLIDKVRIKGYYAFKLAEEKSKPRFGFFTSDF AKSSIQFYNKVISSRGFPFENSSSRCSQTQENTECTVCLFLVQKKPLIFL GCCFFSTLVLLLSIAIFQRQKRRKFWKAKNLQHIPLKKGKRVVS (SEQ ID NO:458) huBeta Klo.tho(l-193, 419-1044) (muBetaKLOTHO Y194-416G).

MKPGCAAGSPGNEWIFFSTDEITTRYRNTMSNGGLQRSVILSALILLRAV · . TGFSGDGRAIWSKNPNFTPVNESQLFLYDTFPKNFF GIGTGALQVEGSW KKDGKGPSIWDHFIHTHLKNVSSTNGSSDSYIFLEKDLSALDFIGVSFY FSIS PRLFPDGIVTVANAKGLQYYSTLLDALVLRNIEPIVTLYHWDLPL.

TLQEEYGGWKNATMIDLFNDYATYCFQTFGDRVKYWITIHNPYLVAWHGF' GTGMHAPGE GNLTAVYTVGHNLIKAHSKV HNYDKNFRPHQKGWLSITL GSHWIEPNRT'D MEDVI CQHSMSSVLGWFANP.-IHGDGDYPEFMKTGAMI PEFSEAEKEEVRGTADFFAFSFGPNNFRPSNTVVKMGQNVSLNLRQVLNW IKLEYDDPQILISE GWFTDSRVKTEDTTAIYMMKNFLSQVLQAIRLDEI RVFGYTAWSLLDGFEWQDAYTIRRGLFYVDFNSKQKERKPKSSAHYYKQI IRENGFSLKESTPDVQGQFPCDFSWGVTESVLKPESVASSPQFSDPHLY NATGNRLLHRVEGVRL TRPAQCTDFVNIKKQLEMLARMKVTHYRFALD WASVLPTGNLSAVNRQALRYYRCVVSEGLKLGISA VTLYYPTHAHLGLP EPLLHADGWLNPSTAEAFQAYAGLCFQELGDLVKLWITINEPNRLSDIYN.

RSGNDTYGAAHNLLVAHALAWRLYDQQFRPSQRGAVSLSLHADWAEPANP YADSHWRAAERFLQFEIAWFAEPLFKTGDYPAAMREYIASKHRRGLSSSA ¦ LPRLTEAERRLLKGTVDFCALNHFTTRFVMHEQLAGSRYDSDRDIQFLQD ' · ITRLSSPTRLAVIPWGVRKLLR VRRNYGDMDIYITASGIDDQALEDDRL ' RKYYLGKYLQEVLKAYLIDKVRIKGYYAFKLAEEKSKPRFGFFTSDFKAK SSIQFYNKVISSRGFPFENSSSRCSQTQENTECTVCLFLVQKKPLIFLGC . CFFSTLVLLLSIAIFQRQKRRKFWKAKNLQHIPLKKGKRVVS (SEQ ID NO: 59) . . ¦(vi) huBeta Klotho (1-301, 509-1044) (muBetaKLOTHO S302- F506) MKPGCAAGSPGNEWIFFSTDEITTRYRNT SNGGLQRSVILSALILLRAV TGFSGDGRAI SKNPNFTPVNESQLFLYDTFPKNFF GIGTGALQVEGSW .

KKDG GPSIWDHFIHTHLKNVSSTNGSSDSYIFLEKDLSALDFIGVSFYQ FSISWPRLFPDGIVTVANAKGLQYYSTLLDALVLRNIEPIVTLYHWDLPL .

ALQEKYGG KNDTI IDIFNDYATYCFQMFGDRVKY ITIHNPYLVAWHGY . GTGMHAPGEKGNLAAVYTVGHNLIKAHSKVWHNYNTHFRPHQKGWLSITL GSH IEPNRTDNMEDVINCQHS SSVLG FANPIHGDGDYPEF KTGAMI PEFSEAEKEEVRGTADFFAFSFGPNNFRPSNTVVKMGQNVSLNLRQVLNW IKLEYDDPQILISENGWFTDSYIKTEDTTAIYMMKNFLNQVLQAIKFDEI RVFGYTAWTLLDGFE QDAYTTRRGLFYVDFNSEQKERKPKSSAHYYKQI IQDNGFSLKESTPDVQGQFPCDFSWGVTESVLKPESVASSPQFSDPHLYV . WNATGNRLLHRVEGVRLKTRPAQCTDFVNIKKQLEMLARMKVTHYRFALD WASVLPTGNLSAVNRQALRYYRCVVSEGL LGISAMVTLYYPTHAHLGLP EPLLHADGWLNPSTAEAFQAYAGLCFQELGDLVKLWITINEPNRLSDIYN RSGNDTYGAAHNLLVAHALAWRLYDQQFRPSQRGAVSLSLHAD AEPANP.

YADSHWRAAERFLQFEIAWFAEPLFKTGDYPAA REYIASKHRRGLSSSA .

LPRLTEAERRLLKGTVDFCALNHFTTRFVMHEQLAGSRYDSDRDIQFLQD ITRLSSPTRLAVI PWGVRKLLR VRRNYGDMDIYITASGIDDQALEDDRL RKYYLGKYLQEVLKAYLIDKVRIKGYYAFKLAEEKS PRFGFFTSDFKAK SSIQFYNKVISSRGFPFENSSSRCSQTQENTECTVCLFLVQKKPLIFLGC CFFSTLVLLLSIAI FQRQKRRKFWíAKNLQHIPLKKGKRVVS (SEQ ID NO:460) ( vii) huBeta : Klotho' ( 1-417 , 522-1044 ). (muBetaKLOTHQ G416- 19) KPGCAAGSPGNE IFFSTDEITTRYRNTMSNGGLQRSVILSALILLRAV .

TGFSGDGRAI SKNPNFTPVNESQLFLYDTFPKNFF GIGTGALQVEGS KKDGKGPSI DHFIHTHLKNVSSTNGSSDSYIFLEKDLSALDFIGVSFYQ .

FSISWPRLFPDGIVTVANAKGLQYYSTLLDÁLVLRNIEPIVTLYH DLPL ALQEKYGGWKNDTI I DI FNDYATYCFQMFGDRVKYWTTIH PYLVAWHGY GTGMHAPGEKGNLAAVYTVGHNLIKAHSKVWHNYNTHFRPHQKGWLSITL GSH IEPNRSENTMDIFKCQQSMVSVLGW ANPIHGDGDYPEGMRKKLFS .

VLPI FSEAEKHEMRGTADFFAFSFGPN FKPLNTMAKMGQNVSLNLREAL NWIKLEYNNPRILIAENGWFTDSYIKTEDTTAIY MKNFLNQVLQAIKFD .

EIRVFGYTAWTLLDGFEWQDAYTTRRGLFYVDFNSEQKERKPKSSAHYY QIIQDNGFPLKESTPDMKGRFPCDFSWGVTESVLKPESVASSPQFSDPHL .

YVWNATGNRLLHRVEGVRLKTRPAQCTDFVNIKKQLEMLARMKVTHYRFA . LDWASVLPTGNLSAVNRQALRYYRC VSEGLKLGISAMVTLYYPTHAHLG ' ¦ ¦ '" LPEPLLHADGWLNPSTAEAFQAYAGLCFQELGDLVKLWITINEPNRLSDI YNRSGNDTYGAAHNLLVÁHALA RLYDQQFRPSQRGAVSLSLHADWAEPA NPYADSHWRAAERFLQFEIAWFAEPLFKTGDYPAAMREYIASKHRRGLSS.

SALPRLTEAERRLLKGTVDFCALNHFTTRFVMHEQLAGSRYDSDRDIQFL .

QDITRLSSPTRLAVIPWGVRKLLR VRRNYGDMDIYITASGIDDQALEDD RLRKYYLGKYLQEVLKAYLID VRIKGYYAFKLAEEKSKPRFGFFTSDFK AKSSIQFYNKVISSRGFPFENSSSRCSQTQENTECTVCLFLVQKKPLIFL GCCFFSTLVLLLSIAIFQRQKRRKFWKAKNLQHIPLKKGKRVVS (SEQ ID NO: 61) (viii). ¦ huBeta Klotho ( 1-507 , 635-1044) (muBeta KLOTHO F06-G632) MKPGCAAGSPGNEWI FFSTDEITTRYRNTMSNGGLQRSVILSALILLRAV.

TGFSGDGRAIWSKNPNFTPVNESQLFLYDTFPKNFF GIGTGALQVEGSW KKDGKGPSIWDHFIHTHLKNVSSTNGSSDSYIFLEKDLSALDFIGVSFYQ . ·. FSISWPRLFPDGIVTVANAKGLQYYSTLLDALVLRNIEPIVTLYHWDLPL ALQEKYGG KNDTIIDIFMDYATYCFQMFGDRVKYWrTIHNPYLVAWHGY GTG HAPGEKGÑL-AAVY VGHNLIKAHSKVWHNYNTHFRPHQKGWLSITL GSHWIEPNRSENTMDI FKCQQSMVSVLGWFANPIHGDGDYPEGMRK LFS VLPIFSEAEKHEMRGTADFFAFSFGPNNFKPLNT AKMGQNVSLNLREAL NWI LEYNNPRILIAENG FTDSRVKTEDTTAIYMMKNFLSQVLQAIRLD EIRVFGYTA SLLDGFEWQDAYTIRRGLFYVDFNSKQKERKPJSSAHYYK QIIRENGFPLKESTPDMKGRFPCDFSWGVTESVLKPEFTVSSPQFTDPHL .

YV NVTGNRLLYRVEGVRLKTRPSQCTDYVSIKKRVEMLAKMKVTHYQFA LDWTSILPTGNLSKVNRQVLRYYRCVVSEGLKLGISAMVTLYYPTHAHLG LPEPLLHADGWLNPSTAEAFQAYAGLCFQELGDLVKLWITINEPNRLSDI . YNRSGNDTYGAAHNLLVAHALAWRLYDQQFRPSQRGAVSLSLHADWAEPA NPYADSHWRAAERFLQFEIAWFAEPLFKTGDYPAAMREYIASKHRRGLSS ¦ SALPRLTEAERRLLKGTVDFCALNHFTTRFVMHEQLAGSRYDSDRDIQFL QDITRLSSPTRLAVI PWGVRKLLRWVRRNYGDMDIYITASGIDDQALEDD RLRKYYLGKYLQEVLKAYLIDKVRIKGYYAFKLAEEKSKPRFGFFTSDFK AKSSIQFYNKVISSRGFPFENSSSRCSQTQENTECTVCLFLVQKKPLIFL GCCFFSTLVLLLSIAIFQRQKRRKFWKAKNLQHIPLKKGKRVVS . (SEQ ID NO: 462) (ix) huBeta Klotho ( 1-521 , 738-1044) (muBeta- KLOTHO 520P-735A) KPGCAAGSPGNEWIFFSTDEITTRYRNTMSNGGLQRSVILSALILLRAV TGFSGDGRAIWSKNPNFTPVNESQLFLYDTFPKNFFWGIGTGALQVEGSW KKDGKGPSIWDHFIHTHLKNVSSTNGSSDSYIFLEKDLSALDFIGVSFYQ FSISWPRLFPDGIVTVANAKGLQYYSTLLDALVLRNIEPIVTLYH DLPL ALQEKYGGWKNDTIIDIFNDYATYCFQMFGDRVKYWITIHNPYLVA HGY GTG HAPGEKGNLAAVYTVGHNLIKAHSKVWHNYNTHFRPHQKGWLSITL GSHWIEPNRSENTMDIFKCQQSMVSVLG FANPIHGDGDYPEGMRKKLFS . VLPIFSEAEKHE RGTADFFAFSFGPNNFKPLNTMA MGQNVSLNLREAL N IKLEYNNPRILIAENG FTDSRVKTEDTTAIYMMKNFLSQVLQAIRLD EIRVFGYTAWSLLDGFEWQDAYTIRRGLFYVDFNSKQKERKPKSSAHYYK QIIRENGFSL ESTPDVQGQFPCDFS GVTESVLKPEFTVSSPQFTDPHL YVW VTGNRLLYRVEGyRLKTRPSQCTDYVSIKK VEMLAKMKVTHYQFA . LDWTSILPTGNLSKVNRQVLRYYRCVVSEGLKLGVFP VTLYHPTHSHLG LPLPLLSSGG LNMNTAKAFQDYAELCFRELGDLVKLWITINEPNRLSDM YNRTSNDTYRAAHNL IAHAQVWHLYDRQYRPVQHGAVSLSLHADWAEPA NPYADSHWRAAÉRFLQFEIA FAEPLFKTGDYPAAMREYIASKHRRGLSS SALPRLTEAERRLLKGTVDFCALNHFTTRFV HEQLAGSRYDSDRDIQFL . QDITRLSSPTRLAVIPWGVRKLLR VRRNYGDMDIYITASGIDDQALEDD RLRKYYLGKYLQEVLKAYLIDKVRIKGYYAFKLAEEKSKPRFGFFTSDFK A SSIQFYNKVISSRGFPFENSSSRCSQTQENTECTVCLFLVQKKPLIFL GCCFFSTLVLLLSIAIFQRQKRRKFWKAKNLQHIPLKKGKRVVS (SEQ ID NO: 463) (x) huBeta Klotho (1-633, 852-1044) (muBeta KLOTHO 632G-849Q).

M PGCAAGSPGNE IFFSTDEITTRYRNT SNGGLQRSVILSALILERAV TGFSGDGRAIWSKNPNFTPVNESQLFLYDTFPKNFFWGIGTGALQVEGSW K DGKGPSIWDHFIHTHLKNVSSTNGSSDSYIFLEKDLSALDFIGVSFYQ . FSISWPRLFPDGIVTVANAKGLQYYSTLLDALVLRNIEPIVTLYHWDLPL 535 .

ALQEKYGGWKNDTIIDIFNDYATYCFQMFGDRVKYWITIHNPYLVAWHGY GTGMHAPGEKGNLAAVYTVGHNLIKAHSKVWHNYNTHFRPHQKGWLSITL GSHWIEPNRSENTMDIFKCQQSMVSVLGWFANPIHGDGDYPEGMRKKLFS' VLPI FSEAEKHEMRGTADF.FAFS FGPNNFKPLNTMAKMGQNVSLNLREAL N IKLEYNNPRILIAENGWFTDSRVKTEDTTAIYMMKNFLSQVLQAIRLD EIRVFGYTAWSLLDGFEWQDAYTIRRGLFYVDFNSKQKERKPKSSAHYYK QIIRENGFSLKESTPDVQGQFPCDFSWGVTESVLKPESVASSPQFSDPHL YVWNATGNRLLHRVEGVRLKTRPAQCTDFVNIKKQLEMLARMKVTHYRFA LD ASVLPTGNLSAVNRQALRYYRCVVSEGLKLGVFPMVTLYHPTHSHLG , , LPLPLLSSGG LNMNTAKAFQDYAELCFRELGDLVKL ITINEPNRLSDM YNRTSNDTYRAAHNLMIAHAQVWHLYDRQYRPVQHGAVSLSLHCDWAEPA NPFVDSH KAAERFLQFEIAWFADPLFKTGDYPSVMKEYIASKNQRGLSS SVLPRFTAKESRLVKGTVDFYALNHFTTRFVIHKQLNTNRSVADRDVQFL QDITRLSSPTRLAVI PWGVRKLLR VRRNYGDMDI YITASGIDDQALEDD RLRKYYLGKYLQEVLKAYLIDKVRIKGYYAFKLAEEKSKPRFGFFT.SDFK AKSSIQFYNKVISSRGFPFENSSSRCSQTQENTECTVCLFLVQKKPLIFL GCCFFSTLVLLLSIAIFQRQKRRKFWKAKNLQHIPLKKGKRVVS (SEQ ID NO: 64) (xi) huBeta Klotho.( 1-736, 967-1044) (muBeta KLOTHO 735A- 3S) MKPGCAAGSPGNEWIFFSTDEITTRYRNTMSNGGLQRSVILSALILLRAV TGFSGDGRAIWSKNPNFTPVNESQLFLYDTFPKNFFWGIGTGALQVEGSW KKDGKGPSI DHFIHTHLKNVSSTNGSSDSYI FLEKDLSALD.FIGVS YQ FSISWPRLFPDGIVTVANAKGLQYYSTLLDALVLRNIEPIVTLYHWDLPL ALQEKYGGWKNDTIIDIFNDYATYCFQMFGDRVKY ITIHNPYLVA HGY , GTGMHAPGEKGNLAAVYTVGHNLIKAHSKVWHNYNTHFRPHQKGWLSITL GSHWIEPNRSENTMDIFKCQQSMVSVLGWFANPIHGDGDYPEGMRKKLFS . VLPIFSEAEKHEMRGTADFFAFSFGPNNFKPLNTMAKMGQNVSLNLREAL N I LEYNNPRILIAENGWFTDSRVKTEDTTAIYMMKNFLSQVLQAÍRLD EIRVFGYTAWSLLDGFEWQDAYTIRRGLFYVDFNSKQKERKPKSSAHYYK QIIRENGFSLKESTPDVQGQFPCDFS GVTESVLKPESVASSPQFSDPHL YVWNATGNRLLHRVEGVRLKTRPAQCTDFVNIKKQLEMLARMKVTHYRFA LD ASVLPTGNLSAVNRQALRYYRCVVSEGLKLGISAMVTLYYPTHAHLG . LPEPLLHADGWLNPSTAEAFQAYAGLCFQELGDLVKLWITINEPNRLSDI YNRSGNDTYGAAHNLLVAHALAWRLYDQQFRPSQRGAVSLSLHCDWAEPA NPFVDSH KAAERFLQFEIA FADPLFKTGDYPSVM EYIASKNQRGLSS ¦ SVLPRFTAKESRLVKGTVDFYALNHFTTRFVIHKQLNTNRSVADRDVQFL QDITRLSSPSRLAVTP GVRKLLAWIRRNYRDRDIYITANGIDDLALEDD ¦ QIRKYYLEKYVQEALKAYLIDKVKIKGYYAFKLTEEKSKPRFGFFTSDFR AKSSVQFYSKLISSSGFPFENSSSRCSQTQENTECTVCLFLVQKKPLIFL GCCFFSTLVLLLSIAIFQRQKRRKFWKAKNLQHIPLKKGKRVVS (SEQ I NO:465) i) huBeta Klotho (82-1044 ) (muBeta KLQTHQ 1-81F) MKTGCAAGSPGNEWI FFSSDERNTRSRKTMSNRALQRSAVLSAFVLLRAV TGFSGDGKAIWDKKQYVSPVNPSQLFLYDTFPKNFF GIGTGALQVÉGSW KKDGKGPSI DHFIHTHLKNVSSTNGSSDSYIFLEKDLSALDFIGVSFYQ FSISWPRLFPDGIVTVANAKGLQYYSTLLDALVLRNIEPIVTLYHWDLPL ALQEKYGGWKNDTIIDIFNDYATYCFQMFGDRVKYWITIHNPYLVAWHGY.

GTGMHAPGEKGNLAAVYTVGHNLIKAHSKVWHNYNTHFRPHQKGWLSITL GSHWIEPNRSENTMDIFKCQQSMVSVLGWFANPIHGDGDYPEGMRKKLFS VLPIFSEAEKHEMRGTADFFAFSFGPNNFKPLNTMAKMGQNVSLNLREAL N IKLEYNNPRILIAENGWFTDSRVKTEDTTAIYMMKNFLSQVLQAIRLD EIRVFGYTAWSLLDGFEWQDAYTIRRGLFYVDFNSKQKERKPKSSAHYYK QIIRENGFSLKESTPDVQGQFPCDFSWGVTESVLKPESVASSPQFSDPHL YV NATGNRLLHRVEGVRLKTRPAQCTDFVNIKKQLEMLARMKVTHYRFA LDWASVLPTGNLSAVNRQALRYYRCVVSEGLKLGISAMVTLYYPTHAHLG LPEPLLHADGWLNPSTAEAFQAYAGLCFQELGDLVKLWITINEPNRLSDI YNRSGNDTYGAAHNLLVAHALAWRLYDQQFRPSQRGAVSLSLHADWAEPA NPYADSH RAAERFLQFEIA FAEPLFKTGDYPAAMREYIASKHRRGLSS SALPRLTEAERRLLKGTVDFCALNHFTTRFVMHEQLAGSRYDSDRDIQFL QDITRLSSPTRLAVIP GVRKLLR VRRNYGDMDIYITASGIDDQALEDD RLRKYYLGKYLQEVLKAYLIDKVR KGYYAFKLAEEKSKPRFGFFTSDFK AKSSIQFYNKVISSRGFPFENSSSRCSQTQENTECTVCLFLVQKKPLIFL GCCFFSTLVLLLSIAIFQRQKRR F KAKNLQHIPLKKGKRVVS (SEQ ID NO: 466) (xiii) huBeta Klotho (1-81, 194-1044). (muBeta . KLOTHO 82P- 3L) MKPGCAAGSPGNEWIFFSTDEITTRYRNTMSNGGLQRSVILSALILLRAV TGFSGDGRAI SKNPNFTPVNESQLFLYDTFPKNFSWGVGTGAFQVEGS KTDGRGPSI DRYVYSHLRGVNGTDRSTDSYIFLEKDLLALDFLGVSFYQ FSISWPRLFPNGTVAAVNAQGLRYYRALLDSLVLRNIEPIVTLYHWDLPL ALQEKYGGWKNDTIIDIFNDYATYCFQMFGDRVKYWITIHNPYLVA HGY GTGMHAPGEKGNLAAVYTVGHNLIKAHSKVWHNYNTHFRPHQKG LSITL •5. GSHWIEPNRSENTMDIFKCQQSMVSVLGWFANPIHGDGDYPEGMRKKLFS ¦ VLPIFSEAEKHEMRGTADFFAFSFGPNNFKPLNTMAKMGQNVSLNLREAL NWIKLEYNNPRILIAENGWFTDSRVKTEDTTAIYMMKN FLSQVLQAIRLD EIRVFGYTAWSLLDGFEWQDAYTIRRGLFYVDFNSKQ ERKPKSSAHYYK QIIRENGFSLKESTPDVQGQFPCDFSWGVTESVLKPESVASSPQFSDPHL . 0 YVWNATGNRLLHRVEGVR'LKTRPAQCTD'FVNIKKQLEMLAR VTHYRFA LDWASVLPTGNLSAVNRQALRYYRCVVSEGLKLGISAMVTLYYPTHAHLG LPEPLLHADGWLNPSTAEAFQAYAGLCFQEEGDLVKLWITINEPNRLSDI YNRSGNDTYGAAHNLLVAHALAWRLYDQQFRPSQRGAVSLSLHADWAEPA NPYADSHWRAAERFLQFEIA FAEPLFKTGDYPAA REYIASKHRRGLSS 5 SALPRLTEAERRLLKGTVDFCALNHFTTRFVMHEQLAGSRYDSDRDIQFL ¦ QDITRLSSPTRLAVIPWGVRKLLRWVRRNYGD DIYITASGIDDQALEDD RLRKYYLGKYLQEVLKAYLIDKVRIKGYYAFKLAEEKSKPRFGFFTSDFK AKSSIQFYNKVISSRGFPFENSSSRCSQTQENTECTVCLFLVQKKPLTFL GCCFFSTLVLLLSIAIFQRQKRRKF KAKNLQHIPLK GKRVVS (SEQ TD 0 NO:467) (xiv) huBeta Klotho (1-301, 509-743, 967-104 (muBetaKLOTHO 302-506, 742-96.4) ... MKPGCAAGSPGNEWI FFSTDEITTRYRNTMSNGGLQRSVILSALILLRAV ¦TGFSGDGRAÍWSKNPNFTPVNESQLFLYpTFPKNFFWGIGTGALQVEGSW . . KKDGKGPSI DHFIHTHLKNVSSTNGSS'DSYIFLEKDLSALDFIGySFYQ FSISWPRLFPDGIVTVANAKGLQYYSTLLDALVLRNIEPIVTLYHWDLPL' ALQEKYGGWK DTIIDI FNDYATYCFQMFGDRVKYWITIHNPYLVAWHGY GTGMHAPGEKGNLAAVYTVGHNLIKAHSKV HNYNTHFRPHQKG LSITL GSHWIEPNRTDNMEDVINCQHSMSSVLGWFANPIHGDGDYPE.FMKTGAMI PEFSEAEKEEVRGTADFFAFSFGPNNFRPSNTVVKMGQNVSLNLRQVLNW IKLEYDDPQILISENG FTDSYIKTEDTTAIY MKNFLNQVLQAIKFDEI RVFGYTAWTLLDGFE QDAYTTRRGLFYVDFNSEQKERKPKSSAHYYKQI IQDNGFSLKESTPDVQGQFPCDFSWGVTESVLKPESVASSPQFSDPHLYV WNATGNRLLHRVEGVRLKTRPAQCTDFVNIKKQLE LARMKVTHYRFALD WASVLPTGNLSAVNRQALRYYRCVVSEGLKLGI.SA VTLYYPTHAHLGLP . EPLLHADGWLNPSTAEAFQAYAGLCFQELGDLVKLWITINEP RLSDIYN RSGNDTYGAAHNLLVAHALA RLYDQQFRPSQRGAVSLSLHCD AEPANP FVDSH AAERFLQFEIA FADPLFKTGDYPSVMKEYIASKNQRGLSSSV LPRFTAKESRLVKG.TVDFYALNHFTTRFVIHKQLNTNRSVADRDVQFLQD I?RLSSPSRLAVTPWGVRKLLAWIRRNYRDRDIYITANGIDDLALEDDQI RKYYLEKYVQEALKAYLIDKVKIKGYYAFKLTEEKSKPRFGFFTSDFRAK SSVQFYSKLISSSGFPFENSSSRCSQTQENTECTVCLFLVQKKPLIFLGC CFFSTLVLLLSIAIFQRQKRRKFWKAKNLQHIPLKKG RVVS^ Varias proteínas, de enlace a ..antigenos proporcionas en la presente, así como FGF21 humano, . se probaron por la capacidad para activar las quimeras en células L6. La Figura 5 muestra los . resultados observados . con cada molécula probada.

Estos datos indican que . mientras FGF21 humano fue capaz de' activar FGFRlc . combinado con todas de las quimeras . ß-Klotho humanas/de ratón (el signo "+" indica actividad en el receptor),- las sustituciones de secuencias de ratón en ß-Klotho humana afectan las actividad de 16?7,· 37D3, y 39F7. (Ver Figura 5). Estos resultados sugieren que las secuencias ß-Klotho 1-81, 302-522, y 849-1044 son importantes. , para las actividades de proteínas' de enlace a antígenos agonistas y pueden representar un epítopo importante para su función.

Además, diversas proteínas de enlace a antígenos también se probaron para, enlace a diversas quimeras humanas/ratón ·ß-Klotho expresadas transitoriamente sobre la superficie de las células HEK-293T por citometría de flujo. La transfección . y citometría de flujo se fecetuaron como se describe en el Ejemplo 12. Se apreciará que los anticuerpos que no tienen la capacidad de hacer enlace cruzado con los ß-Klotho murinos de longitud completa no pueden enlazarse a quimeras de. ß-Klotho humanas/ratón si la quimera abarca, una. región del sitio de enlace del anticuerpo. De esta manera, el perfil de enlace de cada anticuerpo en el panel de las quimeras revela información de epítopos para el. anticuerpo. Los datos se muestran á continuación en la Tabla 10. El anticuerpo anti^ -Klothó 2G10 (el cual se enlaza tanto a ß-Klotho humano y. de ratón) se usó como el control positivo para la, expresión de cada quimera humana/ratón. Al usar este control positivo se determinó el nivel de expresión de las quimeras 7 y 8 que no era lo suficientemente alto para proporcionar datos sólidos y por lo tanto se eliminaron del análisis. Un anticuerpo, 26H11, se encontró que se enlaza al ß-Klotho de . ratón de longitud completa y por lo tanto no podría . asignarse un epítopo en este análisis. Otros anticuerpos que no tienen enlace- cruzado con el ß-Klotho de ratón podrían agruparse en grupos de epítopos. El primer grupo incluye los anticuerpos 16H7, 46D11, y 49G3.3, cuyos anticuerpos no se enlazaron a la quimera #3 y la quimera #12, lo que indica que el epítopo incluye la región 1-81. Adicionalmente, este grupo de anticuerpos también carece- del enlace observado a las quimeras 1, 5> 6 y 14, lo que indica que el epítopo también incluye la región 294-506. Al tomarse en conjunto, estos datos sugieren que estos anticuerpos tienen un tipo de epítopo no lineal complejo.

Un Segundo grupo incluyó solamente al anticuerpo 65C3.1.

Este anticuerpo careció del enlace a las quimeras #2, #11, y #14, lo que indica, un epítopo en la región de 849-936. Un tercer grupo, que incluye los anticuerpos 49H12.1, 54A1.1, 49C8.1, 51A8.1, 63A10.1, 64B10.Í, 68C8.1 y 39F7, careció del enlace a la quimera #1, #5, y #6, lo que indica que su epítopo está en la región 302-416. El cuarto grupo incluyó los anticuerpos 67C10.1, 51E5.1 , 52A8.1,, 66G2, 167F5.1, los cuales carecían del enlace en las quimeras #2, #8, #9, #10, #11, y #14 lo que indica, que el epítopo para estos anticuerpos se encuentra dentro de la región 506-1045. Un símbolo "+" o "-" eri la tabla a continuación indica el enlace del anticuerpo respectivo ("+"), o carencia de enlace .("-") a la quimera y/o el ortólogo respectivo de ß-Klotho,. o. células de estirpe simulada (control negativo) .

Tabla 13 Enlace de Quimeras EJEMPLO 12 Selectividad de Enlace de Anticuerpos Agonistas del Receptor FGF21 Un panel de' anticuerpos agonistas del receptor FGF21 se ensayarob al usar citometria de flujo para el enlace a células HEK293T transitoriamente co-transfectadas con. FGFR1 humano/ß-klotho humana, células HEK293T transfectadas transitoriamente con FGFRlc humano y células. HEK293T · transfectadas transitoriamente con ß.-klotho. Además, también se probó el enlace en las células HEK-293T transfectadas transitoriamente con ortólogos del mono cynomologous de FGFRlc y ß-klotho. Se transfectaron las células al preparar 10ug.de ADN de plásmido en 500ul de medios OptiMEM™ ( Invitrogen™) y mezclar este con 10'ul de 293fectin™ en 500ul de medios OptiMEM™, y luego incubar la solución durante 5 minutos a temperatura ambiente. Esta solución luego se agregó gota a gota a 10 millones de células HEK293T en 10ml de medios ..24. horas después de la transfección, las células se lavaron y 50,000' células se tiñeron con cada anticuerpo primario, 50ul del sobrenadante de hibridoma no purificado se diluyó 1:2 y se usó para teñir células. Después de una hora de incubación a 4°C, las células se lavaron y . se agregó un anticuerpo especifico de Fe anti-Humano.. :Las células teñidas luego se analizaron en un citómetro de flujo. El panel de los sobrenadantes del hibridoma probaron que se enlazaban todos específicamente a las células cotransfectadas d . ß-.Klotho humana/FGFRlc humano así. como ß-Klotho humana transfectada solamente. Los datos se muestran a continuación en la Tabla 11. No se detectó tinción para ninguno de los anticuerpos en las células transfectadas con FGFRlc solamente. Todos los anticuerpos excepto 64B10.1 y 68C8.1 detectaron específicamente células c -transfectadas de ß-Klotho de cynomologous /cynoFGFRlc .

TABLA 14 Selectividad de Anticuerpos FGFR EJEMPLO 13 Mutantes de Loci Preferentes/Covariantes Se analizaron un total de 17 anticuerpos para violaciones potenciales de loci preferentes y de covarianza. Las variantes diseñadas (que se muestran a continuación) detallan las sustituciones . de aminoácidos capaces dé reducir y/o evitar la isomérización, desamidación, oxidación, violaciones de covarianza y los similares. En los datos a continuación, "02 49C8.1_VK: [F21I]" se refiere a' una variante del anticuerpo precursor 49C8.1 que tiene una mutación en .la posición 21, a partir de. F (Phe) a. I .( Isoleucina) . Observar que un esquema de . numeración basado en la estructura se sigue por la designación de posiciones de aminoácidos. Se apreciará que estas mutaciones de punto sencillo pueden combinarse en cualquier forma combinatorial con objetó de llegar a una molécula final deseada. Los datos se muestran a continuación en la Tabla 15 y Tabla.16.

TABLA. 15 Anticuerpo 56E7.3 Anticuerpo 60D7.1 N30T 01 60D7. 1 N30T VK [D33E] 02 60D7. 1 N30T K [D36E]- 03 60D7. 1 N30T VH [R17G] 04 60D7. 1 N30T VH [D61E] 05 60D7. 1 N30T VH [.D72E] 06 60D7. 1 N30T VH [W115Y] Anticuerpo 63A10.1 C58S 01 63A10. 1 C58S VL [H9L] 02 63A10. 1 C58S VL [H9P] 03. 63A10. 1 C58S VL [T15L] .04. 63A1Q. .1 C58S VL . [T15P] 05 63A10. 1 C58S VL [A16G] 06 63A10. 1 C58S VL [M18T] 07 63A10. 1 C58S VL [D51A] 08 63A10. 1 C58S VL [D51S] 09 63A10. 1 C58S VL . [D51F] 10 63A10. 1 C58S VL [D67E] 11 63A10. 1 C58S VL [P83S] 12 63A10. 1 C58S VL [E97Q] 13 63A10. 1 C58S VL [D110E] 14 63A10. 1 C58S VL [D136E] 15 63A10. 1 C58S. VH [D11G] 16 63A10. 1 .C58S VH [K14Q] TABLE 16 Sustituciones Ejemplares >49C8.1 VK DIQMTQ.SPSSLSASVGDR'VTFTCQAS.QDINIYLNWYQQKPGKAPKLLIYDVSNLETGVPSR FSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYFCQQYDNLPFTFGPGTKVDLKR >49C8.1 VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYDIDWVRQATGQGLEWMGWMNPNGGNTGYA Q FQGRVTMTRDTSINTAYMELSSLRSEDTAIYYCARGKEFSRAEFDYWGQGTLVTVSS. >49H12 N83D VK DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDITKYLN YQQKPGKAPKLLIYDTFILETGVPSR FSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYDNLPLTFGQGTRLEIKR. >49H12 N83D VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCMASGYI TSYDINWVRQATGQGPEWMGWMNPYSGSTGYA QNFQGRVT TRDTSINTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKYN NYGAFDF GQGTMVTVSS >49G3.3 VK DIQMTQSPSSLSASIGDRVTITCQASQGISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSR FSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCHQYDDLPLTFGGGTKVEIRR >49G3.3 VH QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSNPRMGVS IRQPPGKALE LTHIFSNDEKSY STSLKSRLTIS DTSKSQVVLSMTNMDPVDTATYYCVRVDTLNYHYYGMDVWGQGTTVTVS s >51A8.1 VL FILTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSIASDYVQ YQQRPGSSPTTVIYEDKERSSGVPD RFSGSIDSSSNSASLTISGLKIEDEADYYCQSYDRNNHVVFGGGTKLTVLG >51A8.1 VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMH VRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYA DSVKGRFTISRDNS NTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARADGDYPYYYYYYGMDV GQGTTVT vss >63A10.3 N20R C4-2S VH .

EVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCAVSGITFSNAWMS VRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTD YAAPVKGRFTVSRDGSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTDSSGSYYVEDYFDYWGQGTLVT VSS >64B10.1 VL .

QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVAWYQQLPGTAPKLLIYD DKRPSGIPD RFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGT DSSLSAVVFGGGTKLTVLG >64B10.1 VH QIQLLESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSVSSGDYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYSGGT Y NPSLKSRVTISI DTSKNQFSLKLNSVTAADTAVYYCARYSSTWDYYYGVDVWGQGTTVTVS S >66G2 VK DIQ TQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGrRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASNLQSGVPSR FSGSGSGTKFTLTINSLQPEDFATYYCLQLNGY.PLTFGGGTKVEIKR >66G2 VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAGISYDGSNKNYA DSVKGRITISRDNPKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATTVTKEDYYYYGMDVWGQGTTVTVS s >67F5 VK EIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSVSSNLA YQQKPGQAPRLLIHGSSNRAIGIPAR FSGSGSGTEFTLTISSLQSADFAVYNCQQYEI P TFGQGT VEIKR >67F5 VH QVQLKESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWS IRQPPGKGLEWIGYIYYSGNTNYNP SLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREYYYGSGSYYPWGQGTLVTVSS >49C8.1 VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYDIDWVRQATGQGLEWMGWMNPNGGNTGYA QKFQGRVTMTRDTS INTAYMELSSLRSEDTAIYYCARGKEFSRAEFDYWGQGTLVTVSS >49C8.1 VK.04 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTFTCQASQDINIYLNWYQQKPGKAPKLLIYDVSNLETGVPSR FSGSGSGTDFTFTISSLQPEDFATYFCQQYDNLPFTFGPGTKVDLKR >49C8.1 VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYDIDWVRQATGQGLEWMGWMNPNGGNTGYA QKFQGRVTMTRDTSINTAYMELSSLRSEDTAIYYCARGKEFSRAEFDYWGQGTLVTVSS. >49C8.1 VK.05 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTFTCQASQDI IYLNWYQQKPGKAPKLLIYDVSNLETGVPSR FSGSGSGTDFTFTISSLQPEDVATYFCQQYDNLPFTFGPGT VDLKR >49C8.1 VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSGKASGYTFTSYDID VRQATGQGLEW GWMNPNGGNTGYA QKFQGRVTMTRDTSINTAYMELSSLRSEDTAIYYCARGKEFSRAEFDYWGQGTLVTVSS >49C8.1 VK.06 DIQMTQSPSSLSASVGDRV FTCQASQDINIYLN YQQKPGKAPKLLIYDVSNLETGVPSR FSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYFCQQYDNLPFTFGQGTKVDLKR >49C8.1 VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYDIDWVRQATGQGLE MG MNPNGGNTGYA QKFQGRVTMTRDTSINTAYMELSSLRSEDTAIYYCARGKEFSRAEFDYWGQGTLVTVSS >49H12 N83D VK.01 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDITKYLNWYQQKPGKAPKLLIYDTFILETGVPSR FSGSGSGTDFTL ISSLQPEDIATYYCQQYDNLPLTFGQGTRLEIKR >49H12 N83D VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCMASGYIFTSYDINWVRQATGQGPE MGWMNPYSGSTGYA QNFQGRVTMTRDTSINTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKYNWNYGAFDFWGQGTMVTVSS >49H12 N83D VK.02 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDITKYLNWYQQKPG APKLLIYDTFILETGVPSR FSGSGSGTDFTFTISSLQPEDFATYYCQQYDNLPLTFGQGTRLEIKR. >49H12 N83D VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSC ASGYIFTSYDINWVRQATGQGPEWMGWMNPYSGSTGYA QNFQGRVTMTRDTSINTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKYNWNYGAFDF GQGTMVTVSS >49H12 N83D VK.03 .

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDITKYLNWYQQKPGKAPKLLIYDTFILETGVPSR FSGSGSGTDFTFTISSLQPEDVATYYCQQYDNLPLTFGQGTRLEIKR >49H12 N83D VH ¦ QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCMASGYIFTSYDIN VRQATGQGPEWMGW NPYSGSTGYA QNFQGRVT TRDTSINTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKYNWNYGAFDFWGQGTMVTVSS >49H12 N83D VK DIQ TQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDITKYLN YQQKPGKAPKLLIYDTFILETGVPSR FSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYDNLPLTFGQGTRLEIKR >49H12 N83D VH.04 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFTSYDIN VRQATGQGPEWMGW NPYSGSTGYA QNFQGRVTMTRDTSINTAYMELS.SLRSEDTAVYYCAKYN NYGAFDFWGQGTMVTVSS >49G3.3 VH QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSNPRMGVS IRQPPGKALEWLTHIFSNDEKSY STSLKSRLTISKDTSKSQVVLSMTNMDPVDTATYYCVRVDTLNYHYYGMDV GQGTTVTVS S >49G3.3 VK DIQMTQSPSSLSASIGDRVTITCQASQGISNYLN YQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSR FSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCHQYDDLPLTFGGGTKVEIRR >49G3.3 VH.05 QVTLKESGPVLVKPTQTLTLTCTVSGFSLSNPRMGVSWIRQPPGKALEWLTHIFSNDEKSY STSLKSRLTISKDTSKSQVVLSMTNMDPVDTATYYCVRVDTLNYHYYGMDV GQGTTVTVS S >49G3.3 VK DIQMTQSPSSLSASIGDRVTITCQASQGISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSR FSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIA YYCHQYDDLPLTFGGGTKVEIRR. >49G3.3 VH.06 QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTFSGFSLSNPRMGVS IRQPPGKALE LTHI FSNDEKSY STSLKSRLTISKDTSKSQVVLS TN DPVDTATYYCVRVDTLNYHYYGMDVWGQGTTVTVS S >49G3.3 VK ' DIQMTQSPSSLSASIGDRVTITCQAS.QGISNYLN YQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSR FSGSGSGTDFTF ISSLQPEDIATYYCHQYDDLPLTFGGGTKVEIRR >51A8.1_VH.03 QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYA DSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARADGDYPYYYYYYGMDVWGQGTTVT VSS >51A8.1_VL.

NFILTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSIASDYVQWYQQRPGSSPTTVIYEDKERSSGVPD RFSGSIDSSSNSASLTISGLKIEDEADYYCQSYDRNNHVVFGGGTKLTVLG >51A8.1_VH.04 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYEGSNKYYA ' . DSV GRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARADGDYPYYYYYYGMDV GQGTTVT VSS >51A8.1_VL ¦ NFILTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSIASDYVQWYQQRPGSSPTTVIYEDKERSSGVPD RFSGSIDSSSNSASLTISGLKIEDEADYYCQSYDRNNHVVFGGGTKL .VLG >51A8.1 VH.05 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLE VAVISYDGSNKYYA ESVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARADGDYPYYYYYYGMDVWGQGTTVT VSS >51A8.1_VL NFILTQPHSVSESPGKTYT.ISCTRSSGSIASDYVQWYQQRPGSSPT IYEDKERSSGVPD RFSGSIDSSSNSASLTISGLKIEDEADYYCQSYDRNNHVVFGGGTKLTVLG >52A8.1_VK.02 DIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQTISSYLNWYQQKPG APKLLIYAASSLQSGVPSR FSGSGSGTDFSLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTFGGGTKVEIKR >52A8.1_VH • 5 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYLH VRQAPGQGLEWMGWINPNSAATNYA PKFQGRVTVTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAREGGTYNWFDPWGQGTLVTVSS >52A8.1_VK.03 DIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQTISSYLNWFQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSR FSGSGSGTDFSLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTFGGGTKVEIKR 10 >52A8.1_VH ' QVQLVQSGAEYKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYLH VRQAPGQGLEW G .INPNSAATNYA PKFQGRVTVTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAREGGTYNWFDPWGQGTLVTVSS >52A8.1_VK.04 DIQMTQSPSFLSASVGDRVTI GRASQTISSYLNWHQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSR 15 FSGSGSGTDFSLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTFGQGTKVEIKR. >52A8.1_VH QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYLHWVRQAPGQGLEWMG INPNSAATNYA PKFQGRVTVTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAREGGTYNWFDPWGQGTLVTVSS ' >52A8.1_VK 20 DIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQTISSYLNWHQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSR FSGSGSGTDFSLTISSLQPEDFATYY.CQQSYSTPLTFGGGTKVEIKR, >52A8.1_VH.05 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYLH VRQAPGQGLEWMGYINPNSAATNYA PKFQGRVTVTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAREGGTYNWFDPWGQGTLVTVSS FSGGGSGTDFTFTISSLQPEDFATYYCQQYDNLPLTFGPGTKVDIKR >54A1.1_N83D_VH QVQLV.QSGAEVKKPGASVKVSGKASGYTFTSYDIN VRQATGQGLEWMGWMNPHSGNTGYA QKFQGRVT TRDTSINTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKYNWNYGAFDFWGQGTMVTVSS ; >54A1.1_N83D_VK.06 DIQMAQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISIYLNWYQLKPGKAPKLLIYDVSNLETGVPSR FSGGGSGTDFTFTISSLQPEDVATYYCQQYDNLPLTFGPGTKVDIKR >54A1.1_N83D_VH .

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYDINWVRQATGQGLE MG MNPHSGNTGYA QKFQGRVTMTRDTSINTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKYNWNYGAFDFWGQGTMVTVSS : >54A1.1_N83D_VH.10 : QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYDINWVRQATGQGLEW GYMNPHSGNTGYA QKFQGRVTMTRDTSINTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKYNWNY.GAFDFWGQGTMVTVSS . >54A1.1_N83D_VK DIQMAQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISIYLN YQLKPGKAPKLLIYDVSNLE GVPSR FSGGGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYDNLPLTFGPGTKVDIKR. >54A1.1_N83D_VH.11 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYDIN VRQATGQGLEWMGWMNPHSGNTGYA QKFQGRVTMTRDTSINTAYMELSSLRSEDTAVYYCÁKYNYNYGAFDFWGQGTMVTVSS >58C2.1_VK.01 EIVMTQTPLSLPVTPGÉPASISCRSSQSLFDNDEGDTYLDWYLQKPGQSPQLLIYTLSYRA SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQRLEFPITFGQGTRLEIKR >58C2.1_VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYGMH VRQAPGKGLEWVAVI DGNNKYYA DSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQNYDF NGYPYYFYYG DVWGQG TVTVSS >58C2.1_VK EIVMTQTPLSLPVTPGEPASISGRSSQSLFDNDDGDTYLDWYLQKPGQSPQLLIYTLSYRA SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQRLEFPITFGQGTRLEIKR >58C2.1_VH.02 QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYG HWVRQAPGKGLEWVAVI NDGNNKYYA DSVKGRFTISRDNS NTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQNYDFWNGYPYYFYYGMDV GQG TTVTVSS >56E7.3_VH EVQLVQSGPEVKKPGESLKISC GSGYSLTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYS PSFQGQVTISADTSISTAYLQWSRLKASDTAVYYCARAQLGIFDYWGQGTLVTVSS >56E7.3_VK.02.

DLQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDIKKFLNWYQQKPGKAPNLLIYDASNLETGVPSR FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDIATYYCQQYAILPFTFGPGTTVDIKR >56E7.3_VH EYQL.VQSGPEVKKPGESLKISCKGSGYSLTSYWIGWVRQMPGKGLE GIIYPGDSDTRY.S PSFQGQVTISADTSISTAYLQ SRLKASDTAVYYCARAQLGIFDYWGQGTLVTVSS >56E7.3_VK.03 · DLQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDIKKFLNWYQQKPGKAPNLLIYDASNLETGVPSR FSGSGSGTDFTFTISSLQPEDFATYYCQQYAILPFTFGPGTTVDIKR >56E7.3_VH EVQLVQSGPEVKKPGESLKISCKGSGYSLTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYS PSFQGQVTISADTSISTAYLQWSRLKASDTAVYYCARAQLGIFDYWGQGTLVTVSS >56E7.3_VK.04 ' '¦ DLQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDIKKFLNWYQQKPGKAPNLLIYDASNLETGVPSR FSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYAILPFTFGGGTTVDIKR >56E7.3_VH EVQLVQSGPEVKKPGESLKISCKGSGYSLTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYS PSFQGQVTISADTSISTAYLQWSRLKASDTAVYYCARAQLGI FDYWGQGTLVTVSS >56E7.3_VK.05 DLQ TQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDIKKFLNWYQQKPGKAPNLLIYDASNLETGVPSR FSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYAILPFTFGQGTTVDIKR >56E7.3_VH EVQLVQSGPEVKKPGESLKISCKGSGYSLTSY IGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYS PSFQGQVTISADTSISTAYLQWSRLKASDTAVYYCARAQLGIFDYWGQGTLVTVSS >56E7.3_VK.06 DLQMTQSPSSLSASVGDRVTI CQASQDIKKFLNWYQQKPGKAPNLLIYDASNLETGVPSR FSGSGSGTDFTFTISSLQPÉDIATYYCQQYAILPFTFGPGTKVDIKR >56E7.3_VH EVQLVQSGPEVKKPGESLKISCKGSGYSLTSYWIGWVRQMPGKGLEW GIIYPGDSDTRYS PSFQGQVTISADTSISTAYLQWSRLKASDTAVYYCARAQLGIFDYWGQGTLVTVSS >56E7.3_VK.07 DLQ TQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDIKKFLNWYQQKPGKAPNLLIYDASNLETGVPSR FSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYAILPFTFGPGTRVDIKR >56E7.3_VH EVQLVQSGPEVKKPGESLKISCKGSGYSLTSYWIG VRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYS PSFQGQVTISADTSISTAYLQWSRLKASDTAVYYCARAQLGIFDYWGQGTLVTVSS >56E7.3 VK DLQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDIKKFLNWYQQKPGKAPNLLIYDASNLETGVPSR FSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYAILPFTFGPGTTVDIKR >56E7.3_VH.08 ¦' · ' ¦' . ¦ EVQLVQSGPEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYS PSFQGQVTISADTSISTAYLQWSRLKASDTAVYYCARAQLGIFDYWGQGTLVTVSS >56E7.3_VK DLQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDIKKFLNWYQQKPGKAPNLLIYDASNLETGVPSR FSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYAILPFTFGPGTTVDIKR >56E7.3_VH.09 EVQLVQSGPEVKKPGESLKISC GSGYSLTSYWIG VRQMPGKGLEWMGIIYPGESDTRYS PSFQGQVTISADTSISTAYLQWSRLKASDTAVYYCARAQLGIFDYWGQGTLV VSS >56E7.3_VK DLQMTQSPSSLSASVGDRVTIT.CQASQDIKKFLNWYQQKPGKAPNLLIYDASNLETGVPSR FSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYAILPFTFGPGTTVDIKR >56E7.3_VH.10 EVQLVQSGPEVKKPGESLKISCKGSGYSLTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYS PSFQGQVTISADKSISTAYLQWSRLKASDTAVYYCARAQLGIFDYWGQGTLVTVSS >56E7.3_VK DLQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDIKKFLN YQQKPGKAPNLLIYDASNLE.TGVPSR FSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYAILPFTFGPGTTVDIKR >56E7.3_VH.11 EVQLVQSGPEVKKPGESLKTSCKGSGYSLTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYS ¦ PSFQGQVTISADTSIS.TAYLQWSSLKASDTAVYYCARAQLGIFDYWGQGTLVTVSS >60D7.1_N30T_VK.01 DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLESDDGDTYLDWYLQKPGQSPQLLIYTLSYRA SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQRIEFPLTFGGGTKVEIKR >63A10.1_C58S_VH.22 . EVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCAVSGITFSNAWMS VRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTD YAAPVKGRFTVSRDGSKNTLYLQ NSLKAEDTAVYYCTTDSSGSYYVEDYFDY GQGTLVT vss ¦ >63A10.1 C58S VL SYELTQPHSVSVATAQMARITCGGNNIGS AVHWYQQKPGQDPVLVIYSDSNRPSGIPERF ¦ SGSNPGÑTATLTISRIÉAGDEADYYCQV DSSSDGVFGGGTKLTVLG . >63A10.1_C58S_VH.23 EVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCAVSGITFSNAWMS VRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTD YAAPVKGRFTVSRDGSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCATDSSGSYYVEDYFPY GQGTLVT VSS >63A10.1_C58S_VL SYELTQPHSVSVATAQ ARITCGGNNIGSKAVHWYQQKPGQDPVLVIYSDSNRPSGIPERF SGSNPGNTATLTISRIEAGDEADYYCQVWDSSSDGVFGGGTKLTVLG >63A10.1_C58S_VH.24 EVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCAVSGITFSNA MS VRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTD YAAPVKGRFTVSRDGSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTRDSSGSYYVEDYFDY GQGTLVT VSS >63A1C.I C58S VL SYELTQPHSVSVATAQ ARITCGGNNIGSKAVHWYQQKPGQDPVLVIYSDSNRPSGIPERF SGSNPGNTATLTISRIEAGDEADYYCQVWDSSSDGVFGGGTKLTVLG-, >63A10.1_C58S_VH.25.

EVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCAVSGITFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTD YAAPVKGRFTVSRDGSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTESSGSYYVEDYFDYWGQGTLVT VSS >63A10.1_C58S_VL.26 SYELTQPHSVSVATAQMARITCGGNNIGSKAVHWYQQKPGQDPVLVIYSDSNRPSGIPERF SGSNPGNTATLTISRIEAGDEADYYCQVYDSSSDGVFGGGTKLTVLG >63AI0.1_C58S_VH EVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCAVSGITFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTD YAAPVKGRFTVSRDGSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTDSSGSYYVEDYFDY GQGTLVT VSS >63A10.3_N20R_C42S_VL.01 SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDKLGNRYTSWYQQKPGQSPVLVIYQDSERPSGIPERF SGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSTTVVFGGGTKLTVLG >63A10.3_N20R_C42S_VH .

EVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCAVSGITFSNAWMS VRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTD YAAPVKGRFTVSRDGSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTDSSGSYYVEDYFDYWGQGTLV VSS >63A10.3_N20R_C42S_VL.02 .

SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDKLGNRYTSWYQQKSGQSPVLVIYQESERPSGIPERF SGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQA DSTTVVFGGGTKLTVLG >63A10.3_N20R_C42S_VH EVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCAVSGITFSNAWMSWVRQAPGKGLE VGRIKSKTDGGTTD YAAPVKGRFTVSRDGSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTDSSGSYYVEDYFDYWGQGTLVT VSS >63A10.3 N20R C42S VL.03 SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDKLGNRYTSWYQQKSGQSPVLVIYQDSERPSGIPERF SGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWESTTVVFGGGTKLTVLG >63A10.3_N20R_C42S_VH EVQLVESG.GDLVKPGGSLRLSGAVSGITFSNAWMS VRQAPGKGLE VGRIKSKTDGGTTD YAAPVKGRFTVSRDGSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTDSSGSYYVEDYFDY GQGTLVT VSS ·', . . ' >64B10.1 VL.01 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTLSCSGSSSNIGNNYVAWYQQLPGTAPKLLIYDNDKRPSGIPD RFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSAVVFGGGTKLTVLG >64B10.1_VH QIQLLESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSVSSGDYY SWIRQPPGKGLEWIGFIYYSGGT Y NPSLKSRVTISIDTSK QFSLKLNSVTAADTAVYYCARYSST DYYYGVDV GQGTTVTVS S >64B10.1_VL.02 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVAWYQQLPGTAPKLLIYDNDKRPSGIPD RFSGSKSGTSATLGITGLQTEDEADYYCGT DSSLSAVVFGGGTKLTVLG ' >64B10.1_VH QIQLLESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSVSSGDYYWSWIRQPPGKGLE IGFIYYSGGTNY NPSLKSRVTISIDTSKNQFSLKLNSVTAADTAVYYCARYSSTWDYYYGVDVWGQGTTVTVS S >64B10.1_VL.03 QSVLTQPPSVSAAPGQ VTISCSGSSSNIGNNYVAWYQQLPGTAPKLLIYDNDKRPSGIPD • RFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWESSLSAVVFGGGTKLTVLG . >64B10.1_VH QIQLLESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSVSSGDYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYSGGTNY NPSL SRVTISIDTSKNQFSLKLNSVTAADTAVYYCARYSST DYYYGVDVWGQGTTVTVS S " >64B10.1_VL .' '· ·. ' QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVAWYQQLPGTAPKLLIYDNDKRPSGIPD RFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGT DSSLSAVVFGGGTKLTVLG >64B10.1_VH.04 QIQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSVSSGDYY S IRQPPGKGLEWIGFIYYSGGTNY NPSL SRVTISIDTSKNQFSLKLNSVTAADTAVYYCARYSST DYYYGVDV GQGTTVTVS s · ¦ ' . . ¦ · ¦. . ¦ >64B10.1_VL QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVA YQQLPGTAPKLLIYDNDKRPSGI.PD RFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGT DSSLSAVVFGGGTKLTVLG >64B10.1_VH.05 QIQLLESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSVSSGDYY SWIRQPPGKGLEWIGFIYYSGGTNY NPSLKSRVTISIDTSKNQFSLKLNSVTAADTAVYYCARYSSTWDYYYGVDVWGQGTLVTVS S . >64B10.1_VL QSVLTQPPSVSAAPGQ VTISCSGSSSNIGNNYVA YQQLPGTAPKLLIYDND RPSGIPD RFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCG WDSSLSAVVFGGGTKLTVLG >64B10.1_VH.06 QIQLLESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSVSSGDYYWSWIRQPPGKGLE I.GFIYYSGGTNY NPSLKSRVTISI DTSKNQFSLKLNSVTAADTAVYYCARYSSTWDYYYGVDV GQGTMVTVS s '¦ >64B10.1_VL.07 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVAWYQQLPGTAPKLLIYDNDKRPSGIPD RFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTYDSSLSAVVFGGGTKLTVLG >64B10.1_VH QIQLLESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSVSSGDYY SWIRQPPGKGLE IGFIYYSGGTNY NPSL SRVTISIDTSKNQFSL LNSVTAADTAVYYCARYSSTWDYYYGYDV GQGTTVTVS S , >64B10.1_VL QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVA YQQLPGTAPKLLIYDNDKRPSGIPD RFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGT DSSLSAVVFGGGTKLTVLG. . ' ' 591 ' ..' >64B10.1_VH.08 QIQLLESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSVSSGDYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYSGGTNY NPSLKSRVTISIDTSKNQFSLKLNSVTAADTAVYYCARYSSTYDYYYGVDV GQGTTVTVS S¦ >66G2_VK.01 · DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKLLIYAASNLQSGVPSR FSGSGSGTKFTLTINSLQPEDFATYYCLQLNGYPLTFGGGTKVEIKR. >66G2_VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAGISYDGSNKNYA DSVKGRITISRDNPKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATTVTKEDYYYYGMPV GQGTTVTVS S ' · >66G2_VK.02 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLG YQQKPGKAPKRLIYAASNLQSGVPSR FSGSGSGTEFTLTINSLQPEDFATYYCLQLNGYPLTFGGGT VEIKR 66G2 VH QVQLVESGGGVVQPGRSEJRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAGISYDGSNKNYA DSVKGRITISRDNPKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATTVTKEDYYYYGMDVWGQGTTVTVS S >66G2 VK.03 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASNLQSGVPSR FSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYYCLQLNGYPLTFGGGTKVEIKR >66G2_VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAGI'S.YDGSNKNYA DSVKGRITISRDNPKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATTVTKEDYYYYG DV GQGTTVTVS S >66G2_VK.04 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASNLQSGVPSR FSGSGSGTKFTLTINSLQPEDFATYYCLQLQGYPLTFGGGTKVEIKR >66G2_VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMH VRQAPGKGLEWVAGISYDGSNKNYA DSVKGRITISRDNPKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATTVTKEDYYYYGMDVWGQGTTVTVS S >66G2_VK · DIQ TQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASNLQSGVPSR FSGSGSGTKFTLTINSLQPEDFATYYCLQLNGYPLTFGGGTKVEIKR >66G2 VH.05 QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMH VRQAPGKGLE VAGISYDGSNKNYA DSVKGRITISRDNPKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATTVTKEDYYYYGMDVWGQGTTVTVS S >66G2_VK DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLG YQQKPGKAPKRLIYAASNLQSGVPSR FSGSGSGTKFTLTI NSLQPEDFATYYCLQLNGYPLTFGGGT VEI R >66G2_VH.06 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAA.SGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLE VAGISYEGSNKNYA DSVKGRITISRDNPKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATTVTKEDYYYYGMDV GQGTTVTVS S >66G2_VK DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASNLQSGVPSR FSGSGSGTKFTLTINSLQPEDFATYYCLQLNGYPLTFGGGTKVEIKR. >66G2_VH.07 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYG H VRQAPGKGLEWVAGISYDGSNKNYA ESVKGRITISRDNPKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATTVTKEDYYYYGMDV GQGTTVTVS S >66G2_VK DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASNLQSGVPSR FSGSGSGTKFTLTINSLQPEDFATYYCLQLNGYPLTFGGGTKVEIKR¦ >66G2_VH.38 QVQLVES.GGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYG HWVRQAPGKGLEWVAGISYDGSNKNYA DSVKGRFTISRD PKNTLYLQ NSLRAEDTAVYYCATTVTKEDYYYYGMDV GQGTTVTVS s.. · ' ¦·¦ ¦¦ ' .' ¦ ' ·. . · >66G2_VK DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASNLQSGVPSR FSGSGSGTKFTLTINSLQPEDFATYYCLQLNGYPLTFGGGTKVEIKR >66G2_VH.09 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAGISYDGSNKNYA DSVKGRITISRDNPKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKTVTKEDYYYYGMDVWGQGTTVTVS S . >66G2_VK DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGRAPKRLIYAASNLQSGVPSR FSGSGSGTKFTLTINSLQPEDFATYYCLQLNGYPLTFGGGTKVEIKR >66G2_VH.10 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMH VRQAPGKGLEWVAGISYDGSNKNYA DSVKGRITISRDNPKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTVTKEDYYYYGMDV GQGTTVTVS S >67F5_VK.01 EIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSVSSNLA YQQKPGQAPRLLI YGSSNRAIGI PAR FSGSGSGTEFTLTISSLQSADFAVYNCQQYEIWPWTFGQGTKVEI R->67F5_VH QVQLKESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLE IGYIYYSGNTNYNP SLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREYYYGSGSYYP GQGTLVTVSS >67F5_VK.02 EIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIHGSSNRAIGI PAR FSGSGSGTEFTLTISSLESADFAVYNCQQYEIWP TFGQGTKVEIKR : >67F5_VH QVQLKESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYY S IRQPPGKGLE IGYIYYSGNTNYNP SLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREYYYGSGSYYP GQGTLVTVSS .

EIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSVSSNLA YQQKPGQAPRLLIHGSSNRAIGIPAR FSGSGSGTEFTLTISSLQSADFAVYYCQQYEI PWTFGQGTKVEIKR'. >67F'5_VH QVQLKESGPGLYKPSETLSLTCTVSGGSISSYY SWIRQPPGKGLE IGYIYYSGNTNYNP SLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREYYYGSGSYYPWGQGTLVTVSS >67F5_VK EIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIHGSSNRAIGIPAR FSGSGSGTEFTLTISSLQSADFAVYNCQQYEIWPWTFGQGTKVEIKR; >67F5_VH.06 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLE IGYIYYSGNTNYNP SLKSRVTrSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREYYYGSGSYYPWGQGTLVTVSS >67F5_VK.07 EIVM QSPATLSVSPGERVTLSCRASQSVSSNLA YQQKPGQAPRLLTHGSSNRAIGIPAR FSGSGSGTEFTLTISSLQSADFAVYNCQQYEIYPWTFGQGTKVEIKR >67F5_VH QVQLKESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGNTNY P SL SRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREYYYGS.GSYYPWGQGTLVTVSS >67F5 VK.08 EIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSVSSNLA YQQKPGQAPRLLIHGSSNRAIGIPAR FSGSGSGTEFTLTISSLQSADFAVYNCQQYEIWPYTFGQGTKVEIKR . >67F5_VH QVQLKESGPGLVKPSETLSLTGTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGNTNYNP SLKSRV ISVDTSKNQFSL LSSVTAADTAVYYCAREYYYGSGSYYPWGQGTLVTVSS >67C10_VK.01 '¦ ' DIV TQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLNSDDGNTYLDWYLQKPGQSPQLLIY.TLSYRA SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQRIEFPITFGQGTRLEIKR >67C10_VH EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCQGSGYSFSSY IG VRQMPGKGLEW GIIYPGDSDTRYS PSFQGQVTISADKSINTAYLQ SSLKASDTAIYYCARRASRGYRYGLAFAIWGQGTMVTYS S >67C10_VK.02 DFVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLNSDEGNTYLDWYLQKPGQSPQLLIYTLSYRA SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQRIEFPITFGQGTRLEI R' >67C10_VH • EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCQGSGYSFSSY IGWVRQMPGKGLE MGI IYPGDSDTRYS PSFQGQVTISADKSINTAYLQWSSLKASDTAIYYCARRASRGYRYGLAFAI GQGTMVTVS S ". ' >67C10_VK DFV TQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLNSDDGNTYLD YLQKPGQSPQLLIYTLSYRA ¦ SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQRIEFPITFGQGTRLEIKR >67C10_VH.03 EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSSY IGWVRQMPGKGLEW GIIYPGDSDTRYS ' PSFQGQV ISADKSINTAYLQ SSLKASDTAIYYCARRASRGYRYGLAFAI GQGTMVTVS • >67C10_VK DFVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLNSDDGNTYLD YLQKPGQSPQLLIYTLSYRA SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQRIEFPITFGQGTRLEIKR >67C10_VH.04 •¦ EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCQGSGYSFSSY IGWVRQMPG GLEW GI IYPGESDTRYS PSFQGQVTISADKSINTAYLQ SSLKASDTAIYYCARRASRGYRYGLAFAIWGQGTMVTVS S >68C8_VL.01 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVS YQQLPGTAPKLLIYDN KRPSGIPD RFSGSKSGTSATLAlTGLQTGDEADYYCGT DSSLSAVVFGGGTKLTVLG >68C8_VH.04.

QVQLQESGPGLV PSETLSLTCTVSGGSVSSGDNYWSWIRQPPGKGLEWIGFMFYSGSTNY , NPSLKSRVTISLHTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCGRYRSDWDYYYGMDV GQGTTVTVS S >68C8_VL QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVS YQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPD RFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSAVVFGGGTKLTVLG . >68C8_VH.05 ' QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGDSVSSGDNY SWIRQPPGKGLE IGFMFYSGSTNY NPSLKSRVTISLDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCGRYRSDWDYYYGMDVWGQGTTVTVS S >68C8_VL . QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVS YQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPD RFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGT DSSLSAVVFGGGTKLTVLG >68C8_VH.06 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGDSVSSGDNYWSWIRQPPGKGLEWIGFMFYSGSTNY NPSLKSRVTISLHTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYGARYRSD DYYYGMDV GQGTTVTyS S". ' >68C8_VL QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVS YQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPD RFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSAVVFGGGTKLTVLG . >68C8_VH.07 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGDSVSSGDNYWSWIRQPPGKGLEWIGF FY-SGSTNY NPSLKSRVTISLHTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCGRYRSDWDYYYG DVWGQGTLVTYS S >68C8_VL QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVS YQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPD RFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSAVVFGGGTKLTVLG >60C8_VH.08 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGDSVSSGDNY SWIRQPPGKGLE IGF FYSGSTNY NPSLKSRVTISLHTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCGRYRSDWDYYYGMDVWGQGTMVTVS s >68C8_VL.09 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNI'GNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPD RFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTYDS.SLSAVVFGGGTKLTVLG >68C8_VH QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGDSVSSGDNYWSWIRQPPGKGLEWIGFMFYSGSTNY NPSLKSRVTISLHTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCGRYRSD DYYYG DV GQGTTVTVS S >68C8_VL QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPD RFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSAVVFGGGTKLTVLG ¦ · >68C8_VH.10 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGDSVSSGDNY S IRQPPGKGLE IGFMFYSGSTNY NPSLKSRVTISLHTSKÑQFSLRLSSVTAADTAVYYGGRYRSDYDYYYGMDVWGQGTTVTVS S .

EJEMPLO 14 Predicción de Imnunogenicidad Las respuestas inmunitarias en contra de las proteínas se potencian por- el procesamiento de antígenos y la presentación en el sitio de enlace de clase II. del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) . Esta interacción se require. para la ayuda de las células T en la maduración de anticuerpos que reconozcan la proteína. Ya qué se han caracterizado los sitios de enlace de las moléculas1 de clase II, es posible predecir si las proteínas tienen secuencias específicas que puedan enlazar a una serie de alelos humanos comunes. Se han creado algoritmos de computadora con base en referencias en la¦ literature y estructuras de cristal MHC de clase II, para, determinar si las secuencias de péptidos lineales de 9 aminoácidos · tienen el potencial para romper la tolerancia inmunitaria. Usamos el programa TEPITOPE™ llamado para determinar si las mutaciones de punto, de FGF21 se predicen para incrementar las células T específicas de antígenos en una- mayoría de humanos. Con base en la secuencia i— o en en co (ü Cada referencia citada en la presente se incorpora como referencia en su totalidad para todo lo que enseñe y para todos los propósitos.

La. presente descripción no se limita, en alcance por las modalidades específicas descritas en la presente, las cuales se pretenden como ilustraciones de aspectos individuales de la descripción, ...y métodos y componentes funcionalmente equivalentes y aspectos de forma de componentes de la descripción. De hecho, diversas modificaciones de la descripción, además de aquellas mostradas y descritas en la presente se volverán evidentes para aquellos expertos en la técnica a partir de la descripción anterior y los dibujos anexos. Tales modificaciones' se pretende que caigan dentro del alcance de las reivindicacion.es anexas...

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiendo descrito la presente invención, se considera como novedad, y · por lo tanto se. reclama como propiedad lo contenido en las siguientes: ; REIVINDICACIONES 1. Una proteína aislada de enlace a , antígenos caracterizada porque induce la señalización mediada por FGF21..,' 2. Una proteína aislada de . enlace a .antigenos caracterizada porque enlaza específicamente a un complejo que comprende ß- lotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c y (ii.i) FGFR3c. 3. La proteína de enlace' a., antígenos de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la proteína de enlace a antígenos comprende una o más de: (a) una CDR3 de cadena ligera que comprende una o más de: (i) una: secuencia CDR3. de cadena ligera^ que difiere por tres, dos o una adiciones, substituciones, eliminaciones de aminoácidos y combinaciones de los mismos a partir de una CDR3 de una o más de CDRL3-1 a CDRL3-75 de la Tabla 3B (SÉQ.¦ ID NOs 947-1020, respectivamente, en orden, de aparición) ii) QQFGSSLT (SEQ ID NO: 988); iii) QQSX1SX2X3 LT (SEQ ID. O: 1443); iv) LQX4X5SYPX6T (SEQ ID NO: 1447.) ; y) MQRX7EFPX8T (SEQ ID NO: 1451) ; vi) QX9WDSX10 X11VV (SEQ ID NO: 1457) ; vii) ·' QQYNX12WP X13T (SEQ ID NO: 1461) ; viil) QVWDSSX14 DXi5VXi6 (SEQ. ID NO: 1466) ix) QQSS Xi7IPWT (SEQ ID NO: 1469); x) ' QQTNSFPPWT ( SEQ ID NO : 1470.) ; xi) . GTWDSSLSXisXigV (SEQ ID NO: 1474); xii) QQYDNLPX20 ¦ (SEQ ID NO: 1477) ; xiii) QQYGSSX21PWT (SEQ ID NO: 1480) ; xiv) QQYGX22SX23FT (SEQ ID NO: 1483); . XV) QQYGS SX24X25X26 (SEQ ID NO: 1488); xvi) . QA DSSX27TX28V (SEQ ID NO: 1492) ;' xvii) QA DSX29TVX30 (SEQ ID NO: .1496) ; xviii) QQX31YSAX32 FT (SEQ ID. NO: 1499); xix) QQYNX33YPRT (SEQ ID NO: 1502)'; xx) HQX34X35 DL PLT (SEQ. ID. NO: 1505); xxi). .. MQALQTX36X37T (SEQ ID NO: 1508); xxii) , " QQFGRSFT (SEQ ID NO: .1509); ' ' xxiii) . YSTDSSX38NHVV (SEQ ID NO: 1512 ); una secuencia CDR3 de cadena pesada que comprende una o más de : (i) una CDR3 de cadena pesada que' difiere por ocho, siete, seis, cinco, cuatro, tres, dos o una adiciones, sustituciones, eliminaciones de aminoácidos y combinaciones de las mismas a partir de una CDR3 de una o más de CDRH3-1 a CDRH3-81 de la Tabla 3A (SEQ ID NOs 733-813, respectivamente, en orden de aparición) ; ii) MTXi10PYWYFXm L (SEQ ID NO: 1669) ; iii) . DXnsXiisXi^DFWXnsGYPXueXinXiisYYGXngDV (SEQ D NO: 1675) ; , . ' iv) ' VTGTDAFDF (SEQ ID NO: 1676);' V) TVTKEDYYYYGMDV (SEQ ID NO: 1677); vi) DSSGSYYVEDYFDY (SEQ. ID NO: 1678); vii) . . DXii9X12oIAVAGXi2iFDY (SEQ ID NO.: 1681) ; viii) . EYYYGSGSYYP (SEQ ID NO: 1682); ix) ELGDYPFFDY (SEQ ' ID NO: 1683) ; X) EYVAEAGFDY (SEQ ID NO: .1684); xi) VAAVY YFDL (SEQ ID NO:- 1685); xii) YNWNYGAFDF (SEQ ID NO: 1686).; xiii) . . RASRGYRX122GLAFAI (SEQ ID NO: 1689); xiv) ¦ : ' DGITMVRGVTHYYGMDV (SEQ ID NO: 16.90); .. xv) ¦ DHX123SC YYYGMDV (SEQ ID NO: 1693) ; (xvi) YXi2 Xi25WDYYYGX126DV (SEQ ID O: 1.696); (xvii) VLHY i27 DSXi28GYSYYX129DXi3o ,(SEQ ID 0: 1699) ; o (c) la secuencia' CDR3 de cadena ligera . de (a) y la secuencia CDR3 de cadena pesada de (b) ; en donde, Xi es Y o F; X2 es T o S; X3 es P o S; X4 es H o R; X5 es N o S; . ?e es L o R; X- es I o L; X8 es I o L; Xc es V o L; Xio es 3 o N; Xr. es T, P c £; Xi2 es N o T; Xi3 es W o L; . Xi4 es S o C;¦¦ XIG es V o ausente; X:7 es S o ?; ·: X18 es A o V; Xi9 es V o M; X2o es L ó F; X21 es P o ausente; X22 es R o T; X23 es L o P; ¦ X2 es P o ausente; X25 es R o C; X26 es S o T; X27 es T o ausente; X28 es ' W o A; X29 es G, T, A' o ausente; X30 es V o I; X31 es S o T; X32 es T o P; X33 es I o T; X34 es S o Y; X35 es S o D; . X36 es P o L; X37 es F o I ; X38 es V o G; X110 es T o S X111 es D o G X112 es R o Q; ^113 es Y, D o N Xii4 es Y o F; X115 es S o N; Xii6 es Y o F; X117 es F o Y; Xiis es R, Y, F o H ; X119 es L o M; X119 es W o L; X120 es S o R; .. X121 es T o S; X122 es F o Y; X123 es S o T; X12 es S o R; X125 es T o D; X126 es V o ; ¦ X127 es S o Y; ¦ X128 es R o S; X.129 es S o F; y X130 es F o Y. . La proteína de enlace a antígenos de. conformidad con la, reivindicación 1, caracterizada porque comprende una o más de : (a) una secuencia CDR1 de cadena ligera que¦ comprende una o más de : (i) una CDR1 de cadena ligera qué difiere por siete, seis, cinco, cuatro, tres, dos o una adiciones, sustituciones, eliminaciones de aminoácidos y combinaciones de / las . mismas, a partir de una secuencia CDR1 de . una o más de CDRL1-1 .a CDRL1-81 de la Tabla 3B (SEQ ID NOs 814-893, respectivamente, en orden de aparición) ; (ii) RASX62SX63 64 65 66X67X6BA (SEQ ID NO: 1591);. (iii) RX69SQX70 IX71X72YLN (SEQ ID NO:, 1602) ; (iv) . GGNX73 I GSX74X75VX76 (SEQ ID NO: .1612) ; (v) :RAS'QX77IRNDLX78 ( SEQ ID NO: 1616); (vi) . RSSQSLX79 80 81 DX82GX83 YLD (SEQ ID NO: 1622) ; (vii) SGX84 X85LGDKYX86X87 (SEQ ID NO: 1629); viii) . QASQX88IX.89X90X91LN (SEQ ID NO: 163.5) ; (ix) RASQX92 IX93 X94WL X95 (SEQ, ID NO: 1640) ; (x) . , SGS.SSNIGX96NYVX97 (SEQ I D NO :' .1645 ) ; (xi) RASXgsDISNYLA (SEQ ID NO: 1648); (xii) . RASQXggVXiooSSYXioiV (SEQ ID NO: 1652); (xiii) ' RSSQSLX102HSNGXio3NYLD (SEQ ID NO: .1656); (xiv) RASQTX104RNX105YLA (SEQ ID NO: 1659); (xv) . RS SX106X107LVYS DGNTYLN . (SEQ ID. NO: 1662) '; y (xvi) SGDAXiosP KYAXiog (SEQ ID NO: 1665); (b) una secuencia CDR2 de cadena ligera que comprende una o más de: (i) una CDR2 de cadena ligera que difiere por tres, dos o una ..adiciones, sustituciones, eliminaciones de aminoácidos y combinaciones de las mismas a partir de una secuencia CDR2 de /una o más de CDRL2-1 a CDRL2-53 de la Tabla 3B (.SEQ ID NOs 894-946, respectivamente, en orden de aparición) ; (Ü) X39AS SLX40X41 (SEQ ID. O: 1517); (iii) GX42S X43RX44T (SEQ ID NO: 1525);· (iv) GAFSRAX45 (SEQ ID NO: 1528); (v) .' X46DX47KRPS (SEQ ID NO: 1533); (vi) TLSX48RAS (SEQ 10 NO: 1536); (vi i). . AASNLQX49 (SEQ ID NO: 1539) ; (viii) . GX50SNRAX51 (SEQ ID NO: 1543); (ix) . X52ASX53LQS (SEQ ID NO: 1548); (x) DNX53KRPS (SEQ ID.NO: 1551);- (xi) . . DX54SNLET (SEQ ID NO:. 1554);.. (xii) : LX55SNRAS (SEQ ID NO.: 1557); . (xiii) QX56NX57RPS ( SEQ ID NO: 1561)'; (xiv) . RDRNRPS (SEQ ID NO: 1562); (xv) X58DSNRPS (SEQ ID NO-: 1565); (xvi) DDSDRPS (SEQ ID NO: 1566); (xvii) AX59SSLQS (SEQ ID NO: 1.569); (xviii) TX60SSLQS (SEQ ID NO: 1572); y (xix) KX6iSNWDS (SEQ ID NO : 1575) ;' (c) una secuencia CDR1 de cadena pesada que comprende una o más de : (i) una CDR1 de cadena pesada que difiere por tres, dos o una adiciones, sustituciones, eliminaciones de aminoácidos y combinaciones de las mismas a partir de una secuencia CDR1 de una o más de CDRH1-1 a CDRH1-53 de la Tabla ..3A . ( SEQ ID NOs 603-655,. respectivamente, en orden de aparición) ; (li) SGXi7o n i Xi72 ( SEQ ID NO: 1775) ; (iü) X173YYWX174 (SEQ ID NO: 1781);. (i ) X175X176GMS (SEQ ID NO: 1786); (v) ' SYX1 7MX178 (SEQ ID NO:. 1790) ; (vi) X179YYX180H (SEQ ID NO: 1796); (vii) SYGXisiH (SEQ ID NO: 1799); ( iii) NYX182MXi83 (SEQ ID NO: 1803); (ix) X184YWI G (SEQ ID NO: 1806); .. (x) GYX185MH (SEQ ID NO: 1809); (xi) SXi86DIXi87 (SEQ ID NO: 1813) ; ¦ (xü) X188YAMS (SEQ ID NO: 1816); (xiii) NAWMS (SEQ ID NO: 1817); (xiv) . SSSYYWG (SEQ ID NO: 1818); (xv) . X189YYWN (SEQ ID NO: 1821); " - (xvi) SNSAX190WN (SEQ ID NO: 1824) ; y ¦ (xvii) X191YDMH (SEQ ID NO: 1827); (d) una secuencia CDR2 ' de cadena pesada que comprende una o más de (i) una CDR2 de cadena pesada que difiere por nueve, ocho, siete, seis, cinco, cuatro, tres, dos. o una adiciones, sustituciones, eliminaciones de aminoácidos y combinaciones de las mismas á partir de una secuencia CDR2 de una o más de CDRH2-1 a CDRH2-77 de la Tabla 3A (SEQ ID NOs 656-732, respectivamente, en orden de aparición) ; (ü) . X131X132X133X134X135GX136X137X138X139N PSLKS (SEQ ID NO: 1716) ; (Üi) X.i4o IXi4 iXi42 DGXi43NXi44Xi45Xi46ADSVKG (SEQ ID NO: 1732); (iv) ¦ WX147N PX148SGX149TX150YAQKFX151G (SEQ ID NO: 1741) ; (v) E INHSX152X153TNYN PSLKS (SEQ ID NO: 1744) ; (vi) IIYPGDSX154TRYSPSFQG (SEQ ID NO: 1747) ; ( ii) SISSSSXi55YXi56YYXi57DSXi58KG (SEQ ID NO 1751) ; (viii) RIXi59Xi60 TDGGTTXi6iYAAPVKG (SEQ; ID NO 1755) ; (ix) GISGSSAGTYYADSVGK (SEQ. ID NO 1756); (x) VISX162SGGXi63TYYADSVKG (SEQ ID NO: 1759); ( i) RTYYRSKWYNDYAVSVKS (SEQ ID NO: 1760); (xii) RIYX164SGSTNYNPSLXi65 ?166·. (SEQ. ID NO: 1763) y . (xiii) WMN PYSGSTGXi 67 AQXi68FQXi69 (SEQ 1766) ; en donde X3.9 es A o S;- X40 es Q o K; .. X41 es S o F; X42 es A o T; X43 es S, T, A, R o N ; X44 es A o' D; 45 es S o T; . i6 es Q, R o E; X47 es T o S; X48 es Y o F; X49 es R o S; X5o es A o S; X51 es I o T ¦ X52 es D o G; X53 es S, T o N; X53 es N o D; X54 es A o V; X55 es G o D; X56 es D o N; Xs? es K o E; X58 es S o C; X59 es S o V; X60 es A o T; X61 es V o G; X62 es P o Q; . X63 es V, l o F; X6 . es S, R p ausente; X¿5 es S, R o N; \ X6e es D, S, o M; X67 es I, Y, H, Q, N o X68 es L o V; X6g es A o T; X70 es I, S, T o . N; X71 es R, S o N; X72 es R, S, N, o I; X73 es , o D; X74 es Y, l o K; X76 es H o Q; . X77 es D o. G; X78 es G o A; X7.9 es L o F; X8o es N o D; Xsi es S o N; X82 es A o D; X83 es T, D o N; X94 es N o D; X85 es K, E o N; X86 es V c A; X87 es C o F; X88 es G o D; X89 es S, K o T X90 es N, K o. I; X9i es Y o F; X92 es D o G; X93 es D o S; X94 es R o S; X95 es V o . A; X96 es N, I ó D; Xg7 es A o S; X98 es Q o H. ; X99 es R o S; X100 es P o A; X101 es I o L; X102 es L o Q; X103 es Y o F. X10 es V o I ; - X105 es N o S ; . X107 es R o S ; . X108 es L o V; X109 es Y Q N; X131 es N, F, Y, . S o M; X132 es I o L/ X133 es Y o F ¦ X134 es Y, H o . D; . X135 es S o T; X136 es · T, G, S o T; X137 es T o A; Xi38 es Y, N o H; X139 es. F o Y; Xi40 es L, G, l o V; X141 es W o S; . X.142 es Y, D o N; . i 3 es S o D; Xi44 es K o N; X145 es Y, N, D,. o Xi46 es Y o H; X147 es I o M; Xi 8 es P, N, S o D X1 9 es A, G o D; Xi5o es N, K, o D; X151 es R, H o Q; -152 es E o G; X153 es N o T; . X154 es D o E; X155 es T o S; . X157 es A o V; X.158 es V o L. X159 es K o I; , ¦ Xi6o es S o G; Xiei es D o E; . Xi62 es D o G;: Xi63 es S o D; Xi64 es I o T; Xi65 es E o K; .. i66 es N o S; i67 es Y o L; i68 es N o R; Xi69 es. G o D; i7o es V, G, N o Xi7i es Y o N; i72 es , S o T; i 3 es , S o G; Xi7 es S o T; i75 es S, T o F; Xi76 es Y o F Xi77 es A o S; Xi78 es S, N o M;. Xi79 es Y o G; Xi80 es I, L, K o Xi8i es L o I ; Xi82 es G o N; Xi83 es H, R o M; Xi84 es S o G; Xi85 es Y o F; Xi86 es Y o H; Xi87 es N o D; Xi88 es N o H; Xi89 es D o S; Xi9o es T o A; Xi9i es S o T; Ce) la CDRl de cadena ligera de (a) y la CDR2.de cadeha ligera de (b) ; (f) la CDRl de cadena ligera de (a) y la CDRl de cadena pesada de (c) ; . (g) la CDRl de cadena ligera de (a) y la CDR2 de cadena pesada de (d) ; (h) la CDRl de cadena ligera (a) y. la CDRl de cadena pesada de (c) ; (i) la CDRl de cadena pesada de (c) y la CDR2 de cadena pesada de (d) ; (j) la CDR2 de cadena ligera de (b) y la CDR2 de cadena pesada de (d) ; (k) la CDRl de cadena ligera de (a), la CDR2 de cadena ligera de (b) , y la CDRl de cadena pesada de (c) ; (1) la CDR2 de cadena ligera de (b) , la CDRl .pesada de (c) , y la CDR2 de cadena pesada de (d) ; (m) la CDRl de cadena ligera de (a), la cadena pesada CDRl de (c) , y la CDR2 de cadena pesada de (d) ; y (n) la CDRl. de cadena ligera de (a) , la CDR2 de cadena ligera de (b) , la CDR2 de cadena pesada de (c) , y la CDR2 de cadena . pesada de (d) . 5. La .proteína .de enlace a antígenos de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende una o más de : (a) un dominio variable de cadena ligera que . comprende una o más de; ' (i) una secuencia CDR1 de cadena ligera seleccionada de CDRLl-1 a CDRL1-81 de la Tabla 3B (SEQ ID - NOs 814-893, respectivamente, en orden de aparición); (ii) una secuencia CDR2 de cadena ligera seleccionada de CDRL2-1. a CDRL2-53 de la Tabla .3B (SEQ ID. NOs 894-946, respectivamente, en orden de aparición); (iii) una secuencia CDR3 de cadena ligera seleccionada de CDRL3-1 a CDRL3-75 de la .Tabla 3.B (SEQ ID NOs 94.7-1020, respectivamente, en orden de aparición);. (b) un dominio variable de cadena pesada . que comprende una o más de : (i) una secuencia CDRl de cadena pesada seleccionada de CDRH1-1 a CDRH1-53 de la Tabla 3A (SEQ ID ' NOs 603-655, respectivamente, en orden de aparición) ; (ii) una secuencia CDR2 de . cadena pesada seleccionada de. CDRH2-1 a CDRH2-77- de la Tabla 3A (SEQ ID NOs 656-732, respectivamente, en orden de aparición); (iii) una secuencia CDR3 de . ' cadena pesada seleccionada de CDRH3-1 a CDRH3-81 de la' Tabla 3A (SEQ- ID NOs 733-813,, respectivamente, en orden de aparición); y' (c) una combinación que comprende un dominio variable de cadena ligera de (a) y un dominio .variable de cadena pesada de (b) . 6. La proteína de enlace a antígenos de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la proteína de enlace a antígenos comprende uno o más de:.. (a) una secuencia de dominio variable de cadena ligera que comprende una o más de: (i) aminoácidos que tienen . una secuencia al menos 80% idéntica a una secuencia de dominio variable de cadena ligera que comprende una o más dé VL1-VL100 de la Tabla 2A (SEQ ID NOs 217-315, respectivamente, en orden de aparición) ; (ii) una secuencia de . aminoácidos codificada' por una secuencia de p.olinucleótidos que es al menos 80% idéntica a una secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de dominio variable de . cadena ligera que comprende una o más de VL1-VL100 de la Tabla 2A(SEQ ID NOs 217-315, respectivamente, en orden de aparición); (b) una secuencia de dominio variable de cadena pesada que comprende una o' más de:. (i)., una secuencia de aminoácidos que es al menos 80%. idéntica a una .secuencia de. dominio variable de cadena pesada que comprende una o más de VH1-VH94 de la Tabla 2B (SEQ ID NOs 315- 409, respectivamente, en. orden de aparición) ;' (ii) una secuencia de aminoácidos codificada por una secuencia de ' polinucleótidos. que es al menos 80%· idéntica a una . secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de dominio variable de cadena pesada de VH1-VH94 de la Tabla 2B (SEQ ID .NOs ,316-409., respectivamente, en orden de aparición); y (c) una combinación que comprende un dominio variable de cadena ligera de (a) y un dominio variable de cadena pesada de (b) . 7.. La proteina de enlace a antigenos de conformidad con la reivindicación. 6, caracterizada porque comprende una .o más · de : (a) una secuencia de dominio variable de cadena ligera que comprende una o más de: VL1-VL100 de la Tabla ,2A (SEQ ID NOs 217-315, respectivamente, en orden de aparición) ; . (b) una secuencia de dominio variable de cadena pesada que comprende una o más de: VH1-VH94 de la Tabla 2B 524 (SEQ ID NOs -316-409, respectivamente, en orden de aparición) ; y (c) una combinación que comprende un dominio variable de cadena ligera de (a) y un. dominio variable de cadena pesada de (b) . 8. La proteina de enlace a antigenos de conformidad con la deivindicación 7, caracterizada porque el dominio variable de cadena ligera y el dominio variable de cadena pesada comprende uno o más de: VL1 y VH1; VL2 y VH1.; VL3 y VH2 o VH3; VL4 y VH4 ; VL5 y VH5; VL6 y VH6; VL7 y VH6; VL8 y VH7 o VH8; VL9 y VH9; VL10 y VH9; VL11 y VH 10; VL12 y VH11; VL13 y VH12; VL13 y VH14;. VL1 y VH13; VL15 y V„14; VL16 y Vri15; VL17 y VH16; VL18 - y VH17;- VL19 y VH18; VL20 y VH19; VL21 y VH20; VL22 y V„21; VL23 y VH22; VL24 y VH23; VL25 y VH24; VL26 y VH25; VL27 y VH26; VL28 y VH27; VL29 y VH28; VL30 y V„29; VL31 y VH30; VL32 y V„31; VL33 y VH32; VL34 y VH33; VL35 y VH34; VL36 y VH35; VL37 y VH36; VL38 y VH37; VL39 y VH38; VL40 y VH39; VL41 y VH40; VL42 y VH41; VL43 y VH42; VL44 y VH43; VL45 y -VH44; VL46 y VH45; VL47 y VH46; VL48 y VH47; VL49 y VH48; VL50 y VH49; VL51 y VH50; VL 52 y VH51; VL53 y VH52; VL54 y VH53;- VL55 y VH54; VL56 y VH54; VL57 y VH54; VL58' y VH55; VL59 y VH56; VL60 y VH57; VL61 y VH58; VL62. y VH59; VL63 y VH60; VL64 y VH1; VL65 y VH62'; VL66 y VH63; VL67 y VH64; VL68 y VH65; VL69 y VH66; VL70 y VH67; VL71 y vH68; VL72 y VH69; VL73 y VH70'; VL74 y VH70; VL75 y VH7Q; VL76 y VH71; VL77 y VH72; .VL78 y VH73; VL79 y VH74; VL80 y VH75; VL81 y VH76; VL82 y VH77; VL83 y VH7&; VL84 y VH79; VL85 y VH80; VL86 y VH81; VL87 y VH82; VL88 y VH86; VL89 y VH83; VL90 y VH84; VL91 y VH85.; VL92 y VH87; VL93 y VH88; VL94 y VH88; VL95 y VH89; VL96 y VH90; VL97 y VH91; VL98.y VH92; VL99 y VH93; y VL100 y VK9 . 9.. La proteína de enlace a antígenos de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque comprende además: (a) la secuencia constante de cadena ligera kappa de SEQ ID NO:' 12 (b) la. secuencia constante de cadena ligera lambda de SEQ ID; NO: 13 (c) la secuencia constante de cadena pesada de SEQ ID NO:. 11; o. (d) (i) la. secuencia constante de cadena ligera kappa de SEQ ID NO: 12 o la secuencia constante de cadena ligera lambda de SÉQ ID NO: 13, y (ii) la secuencia constante, de cadena' pesada de SEQ ID NO: 11.' 10. La proteina de .enlace a antígenos de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada . porque la proteína de enlace a antígenos es un anticuerpo humano, un anticuerpo humanizado, anticuerpo, quimérico, un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo policlonal, un anticuerpo recombinante, un fragmento de anticuerpo, de enlace a antigenos,, un anticuerpo de cadena sencilla, un diacuerpo, un . triacuerp , un tetracuerpo, un. fragmento Fab, un fragmento F(fab')2/ un anticuerpo de dominio, un anticuerpo IgD, un anticuerpo IgE, un anticuerpo Ig , un anticuerpo IgGl, un anticuerpo IgG2, un anticuerpo IgG3, un anticuerpo IgG4, o un anticuerpo IgG4 que tiene al menos una. mutación en la regió de articulación. 11. La proteina de enlace a antigenos de. conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque, cuando se enlaza a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos uno de (i) FGFRlc, (ii) FGFR2c.y (iii) FGFR3c: (a) se enlaza, a. (i) ß-Klotho; (ii) . FGFRlc, FGFR2. C , FGFR3c o FGFR4; o (iii) un complejo que comprende ß-Klotho y uno .de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c^ y FGFR4, con sustancialmente la misma Kd. como un anticuerpo de referencia; (b) induce la señalización del tipo FGF21 de 10% o mayor que la señalización inducida por. un estándar FGF21 de tipo natural que comprende la forma madura de SEQ ID NO: 2 cuando sé mide en un ensayo reportero de ELK-luciferasa; (c) muestra una EC50 de ????. o. menos de señalización del tipo.FGF21 en un ensayo . que comprende uno .de :. (i) un ensayo basado en células recombiñantes mediado por FGFRlc/ ß-Klotho in vi tro; y (ii). un ensayo funcional de adipocitos humanos .in vi tro; muestra una EC50 de menos de ???? de actividad agonista sobre FGFRlc en la presencia de ß-Klotho en un ensayo de reportero mediado por el ensayo de reportero ¦ mediado por el receptor . FGFRlc recombinante in vitro; muestra una EC50 mayor de ?µ? de actividad agonista sobre FGFRlc en la ausencia de ß-Klotho en un ensayo de reportero mediado por el receptor FGFRlc recombinante in vitro; compite ¦ para enlazarse con un anticuerpo de referencia para (i) ß-Klotho (ii) FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c o FGFR4 ; o (iii) un complejo, que comprende ß-Klotho y uno de FGFRlc, FGFR2c, FGFR3c, y FGFR4, en donde- el anticuerpo de referencia comprende una combinación de secuencias de dominio variable de cadena pesada y cadena ligera, seleccionadas del grupo que. consiste de VL1 y VH1; VL2 y VH1; VL3 y VH2 o VH3 ; VL4 y VH4 ; VL5 y VH5; VL6'. y VH6; 'VL7 y VH6 VL8 y VH7 o VH8; VL9 y VH9; VL10 y VH9; VL11 y VH 10'; VL12 y VH11; VL13.y VH12; VL13 y VH14; VL14 y VH13; .VL15 y VH14; VL16 ¦y ¦VH15; VL17 y VH16; VL18 y vHi7; Vt19 y VH18; VL20 y VH19; VL21 y VH20; VL22 y VH21; VL23 ¦ y VH22;. VL24 ¦ y VH23; VL25 y VH24; VL26 y VH25; VL27 y VH26; VL28 y VH27; VL29 ¦y VH28; VL30 y VH29; ¦ VL31 y VH30; VL32 y VH31; VL33 y VH32; VL34 y VH33; VL35. .y VH34; VL36 y VH35; VL37 y VH36; . VL38 y VH37; VL39 : y VH38; VL40 y VH39; VL41 y VH40; VL42 y VH41; VL43 y VH42; VL44 y VH43; VL45 y VH44; VL46 y VH.5 VL4 y VH'4'6; VL48 . y VH47; VL49 y VH48; VL50 y VH49; VL51 y Vh50;' VL.52 y ¦VH51; VL53 y •VH52.; VL54 ¦y VH53; VL-55 y VH54; VL56 y VH54; VL57 y VH54; VL58 y VH55; VL59 y VH56; VL60 y VH57; VL61 y VH58; VL62 y VH59; VL63 y VH60;. VL64 y vHl; VL65 y VH62; VL66 y VH63; VL67 y VH6 ;. VL68 y V„65; VL69 y VH66; VL70 y VH67; VL71 y VH68; VL72 y VH69; VL73' y VH70; VL74 y VH70; VL75. y VH70;; VL76 y .VH7'1; VL77 y VH72; VL78 y VH 3; VL79. y VH74; VL80 y VH75; VL81 y VH76; VL82 y VH77; VL83 y VH78; VL84 y VH.79; VL85 y VH80; VL86 y VH81; •VL87;. y VH82; VL88 y VH86; VL89 y VH83; VL90 y VH84; VL91. y VH85; VL92 y 'VH87; VL93 y VH88:; VL94 y VH88; VL95 y VH89; VL:96 y VH90; VL97 y VH9;1; VL98 y VH92; VL99 y VH93; y VL100 y VH94; y dos o más de (a) - (f) . proteina de enlace a antigenos de conformidad con la reivindicación 11, caracterizada porque cuando se enlaza a un complejo que comprende ß-Klotho y al menos, uno de (i) .FGFRlc, (ii) FGFR2c y- (iii) FGFR3.C y: (a) disminuye glucosa en sangre en un modelo animal; (b) disminuye los niveles de lipidos en suero en un modelo animal; (c) disminuye los niveles de insulina en un modelo animal; o (d) dos o más de (a) y (b) y (c) . 13. La proteina de enlace a ' antigenos de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la proteina de enlace, a antigenos comprende una o más de: .¦ (a) una cadena pesada que comprende uno de H1-H94; (b) una cadena ligera que comprende uno de L1-L100; y- (c) una combinación que comprende una cadena pesada de (a) y una cadena ligera de (b) . 14. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende una o más proteínas de. enlace a antígenos de las reivindicaciones 1-13 en mezcla con un portador farmacéuticamente aceptable de la misma. 15. Un ácido, nucleico aislado caracterizado porque comprende una secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de aminoácidos de dominio variable de cadena ligera, la secuencia .de aminoácidos, de- dominio variable de cadena pesada, o ambas secuencias de aminoácidos, ' de una proteína de enlace a antígenos de las reivindicaciones .1-13." 16. El ácido nucleico aislado de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque la secuencia codificada de aminoácidos comprende una o más de: (c) una combinación que comprende una o más secuencias de (a) y una o más secuencias de (b) . 17. Un vector de expresión caracterizado porque comprende el ácido nucleico de la. reivindicación 16.¦ ' .18. Una célula aislada caracterizada porque comprende el ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 17. 19. Una célula aislada caracterizada porque comprende el vector de expresión de la reivindicación 18. 20.. Un método para producir una proteína de enlace a antígenos caracterizado porque comprende incubar la célula hospedera de la reivindicación 19 bajo condiciones que le permitan expresar la proteína de enlace a antígenos. 21. Un método para prevenir o. tratar una afección en un sujeto que necesita ' de tal tratamiento, caracterizado porque comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de la composición de la reivindicación 14 al sujeto, en donde la afección es tratable al disminuir uno -o. más- 'de glucosa en sangre, insulina o niveles de lipidos en suero. 22. El método de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque la afección' es diabetes de tipo .2, obesidad, dislipidemia, NASH, enfermedad cardiovascular .' o síndrome metabólico. , 23. La proteína de. enlace a. antígenos de conformidad cón la reivindicación 1, caracterizada porque la proteína de enlace a . antígenos ' comprende uno o más- aminoácidos codificados o que no se presentan naturalmente...