MX2012009606A

MX2012009606A - Compuestos deuterados de pirrolo-pirimidina como inhibidores de cdk4/6.

Info

Publication number: MX2012009606A
Application number: MX2012009606A
Authority: MX
Inventors: Lawrence Blas Perez; Christopher Thomas Brain
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 2010-02-19
Filing date: 2011-02-17
Publication date: 2012-09-12
Also published as: BR112012020704A2; EA201201159A1; AU2011217199B2; AR080197A1; GT201200242A; CA2790641A1; KR20130008557A; UY33226A; JP2013519708A; EP2536727A1; AU2011217199A1; EP2536727B1; CN103003280A; US20130203765A1; WO2011101417A1; TW201136934A

Abstract

La invención se refiere a novedosos compuestos deuterados de pirrolo-pirimidina de la fórmula (I): en donde R1 y R2 se definen más adelante, y a las sales, incluyendo las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Los compuestos de la presente invención, son inhibidores de CDK4/6 y podrían ser útiles en el tratamiento de las enfermedades y los trastornos mediados por CDK4/6, tales como cáncer, incluyendo linfoma de células de manto, liposarcoma, cáncer pulmonar no microcelular, melanoma, cáncer esofágico de células escamosas, y cáncer de mama. La invención se refiere además a las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la invención. La invención se refiere todavía adicionalmente a los métodos para inhibir la actividad de CDK4/6 y al tratamiento de los trastornos asociados con la misma, utilizando un compuesto de la invención o una composición farmacéutica que comprenda un compuesto de la invención.

Description

COMPUESTOS DEUTERADOS DE PIRROLO-PIRIMIDINA COMO INHIBIDORES DE CDK4/6 CAMPO DE LA INVENCIÓN La invención se refiere a nuevos compuestos deuterados de pirrolo-pirimidina y a composiciones farmacéuticas de los mismos, específicamente a compuestos deuterados de pirrolo-pirimidina y a composiciones farmacéuticas de los mismos que son inhibidores de CDK4/6. La invención también se refiere al uso de estos compuestos y composiciones en el tratamiento de trastornos hiperproliferatívos, tales como cáncer.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El progreso del ciclo celular de mamífero es un proceso estrechamente controlado en donde las transiciones a través de diferentes fases se conducen de una manera altamente ordenada y guardada por múltiples puntos de verificación. La proteína de retinoblastoma (pRb) es la proteína de punto de verificación para la transición de fase desde G1 hasta S. La proteína de retinoblastoma (pRb) se asocia con una familia de factores de transcripción E2F para impedir su actividad en ausencia de los estímulos de crecimiento apropiados (Véase Ortega y colaboradores, Biochimica et Biophysica Acta-Reviews on Cáncer 2002; 1602 (1):73-87; Shapiro, Journal of Clinical Oncotogy 2006; 24 (11 ):1770-1783). Después de la estimulación del mitógeno, las células quiescentes inician su entrada en la fase S mediante la nueva síntesis de D-ciclinas, que son las activadoras de las cinasas dependientes de ciclina 4 y 6 (CDK4/6). Una vez enlazadas con las ciclinas, las CDK4/6 desactivan la proteína de retinoblastoma (pRb) por medio de la fosforilación. La fosforilación de la proteína de retinoblastoma (pRb) libera el E2F para dirigir la transcripción de los genes requeridos para la fase S. Una desactivación total de la proteína de retinoblastoma (pRb) requiere de fosforilaciones mediante tanto la ciclina D-CDK4/6 como la ciclina E-CDK2. Se ha demostrado que las fosforilaciones mediante CDK4/6 en sitios específicos de la proteína de retinoblastoma (pRb) (Ser780, Ser795) son un requisito previo para la fosforilación de la ciclina E-CDK2. (Véase Lundberg y colaboradores, Molecular and Cellular Biology 1998; 18 (2): 753-761) En adición a las D-ciclinas, la actividad de CDK4/6 es regulada por p 6, codificada por el gen INK4a, el cual inhibe la actividad de cinasa. (Véase Kamb y colaboradores, Science 1994; 264 (5157): 436-440) Las proteínas CIP/KIP, que son las inhibidoras de la ciclina E-CDK2, también se enlazan al complejo de ciclina D-CDK4/6, y esto da como resultado la activación adicional de CDK2 mediante el secuestro de las proteínas CIP/KIP alejándolas de su objetivo. (Véase Sherr y colaboradores, Genes & Development 1999; 13 (12): 1501-1512), y por consiguiente, la ciclina D-CDK4/6 es un complejo enzimático clave que regula la fase G1 a S.

La senda de D-ciclina-CDK4/6-INK4a-pRb es universalmente alterada para favorecer la proliferación celular en el cáncer. En la mayoría de los casos (aproximadamente el 80 por ciento), los cánceres mantienen una proteína de retinoblastoma (pRb) funcional, y utilizan diferentes mecanismos para aumentar la actividad de las cinasas CDK4/6. (Véase Ortega y colaboradores, Biochimica et Biophysica Acta-Reviews on Cáncer 2002; 1602 (1): 73-87; Shapiro, Journal of Clinical Oncology 2006; 24 (11): 1770-1783)) En el linfoma de células de manto (MCL), la ciclina D1 se translocaliza en el promotor de IgH (t11:14), lo cual da como resultado la expresión constitutiva de la proteína, conduciendo a la activación de CDK4/6 (Véase Amin y colaboradores, Archives of Pathology & Laboratory Medicine 2003; 127 (4): 424-431; Oudat y colaboradores, Modern Pathology 2001; 14 (1):175A) Esta translocalización se observa en >90 por ciento de los casos de linfoma de células de manto (MCL), y se considera patogenómica para la enfermedad. La D-ciclina también se translocaliza en el 20 por ciento de los mielomas múltiples. (Véase Bergsagel y colaboradores, Immunological Reviews 2003; 194 (1): 96-104) En adición a la translocalización, también se puede incrementar la abundancia de D-ciclina mediante amplificación o sobre-expresión, y los ejemplos de éstas se pueden encontrar en el cáncer esofágico de células escamosas, en donde una porción significativa exhibe amplificación de la ciclina D1 (Véase Jiang y colaboradores, Cáncer Research 1992; 52 (10): 2980-2983), y en el cáncer de mama, en donde es frecuente la sobre-expresión de la ciclina D1 (Véase Arnold y colaboradores, Journal of Clinical Oncology 2005) . La actividad de la cinasa CDK4/6 también se puede incrementar mediante la amplificación del gen CDK4 mismo, y se obse rvan las co-amplificaciones de los genes CDK4 y M DM2 en casi todos los casos de liposarcomas desdiferenciados. (Véase Si rvent y colaboradores, American Journal oí Surgical Pathology 2007; 31 (10): 1476- 1489) . El i nhibidor genético de CDK4/6 también se i nactiva con frecuencia en el cáncer para log rar la activación de CDK4/6, y los ejemplos de esto incluyen el cáncer pulmonar no microcelular, el melanoma, y el cáncer pancreático (Brambilla y colaboradores, Journal of Pathology 1999; 188 (4): 351 -360; Cowgi ll y colaboradores, American Journal of Surgery 2003; 186 (3): 279-286; Gazze ri y colaboradores, Oncogene 1998; 16 (4): 497-504; Kamb y colaboradores, Science 1994; 264 (5157): 436-440; Ortega y colaboradores, Biochimica et Biophysica Acta-Reviews on Cáncer 2002; 1602 (1): 73-87) .

En adición a estos defectos genéticos directamente relacionados con la senda de D-ciclina-CDK4/6-I N K4a-p Rb , la actividad de las cinasas CDK4/6 también se puede mejorar mediante aberraciones oncogénicas de las sendas de mitógeno que aumentan la expresión de la D-ciclina. Los ejemplos aqu í incluyen las amplificaciones de los receptores del factor de creci miento epidé rmico (EG FR) en el cáncer pulmonar no microcelular (NSC LC), la activación de las mutaciones de K- Ras en el cáncer pancreático, La mutación de B- Raf V600E en el melanoma, y la inactivación de PTEN en el cáncer de colon (Véase Dailey y colaboradores, Cytokine & Growth Factor Reviews 2005; 16 (2): 233-247; Engelman, Nature Reviews Cáncer 2009; 9 (8): 550-562; Garcia-Echeverria, Purinergic Signalling 2009; 5 (1): 117-125, Gray-Schopfer y colaboradores, Cáncer and Metástasis Reviews 2005; 24 (1): 165-183, John y colaboradores, Oncogene 2009; 28: S14-S23, Sharma y colaboradores, Nature Reviews Cáncer 2007; 7 (3): 169-181).

Tomados juntos, un gran número de neoplasmas humanos alcanzan una mayor proliferación celular mediante el incremento de la actividad de CDK4/6, y un inhibidor de molécula pequeña de estas cinasas podría proporcionar un medio efectivo para tratar estas enfermedades.

Los inhibidores de las CD s son conocidos, y se han presentado solicitudes de patente sobre estos inhibidores. (Véanse, por ejemplo, las Publicaciones Internacionales Números WO2007/ 140222 y WO2010/020675) Por consiguiente, se han hecho intentos para preparar compuestos que inhiban la actividad de CDK4/6, y se han dado a conocer en este campo un número de estos compuestos. Sin embargo, en vista del número de respuestas patológicas que son mediadas por CDK4/6, sigue existiendo una necesidad continua de inhibidores de CDK4/6 que se puedan utilizar en el tratamiento de una variedad de condiciones, incluyendo cáncer.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La invención se refiere a novedosos compuestos deuterados de pirrolo-pirimidina de la fórmula (I): en donde R1 y R2 se definen más adelante, y a las sales, incluyendo las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Los compuestos de la presente invención son inhibidores de CDK4/6 y podrían ser útiles en el tratamiento de las enfermedades y los trastornos mediados por CDK4/6, tales como cáncer, incluyendo linfoma de células de manto, liposarcoma, cáncer pulmonar no microcelular, melanoma, cáncer esofágico de células escamosas, y cáncer de mama. La invención se refiere además a las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la invención. La invención se refiere todavía adicionalmente a los métodos para inhibir la actividad de CDK4/6, y al tratamiento de los trastornos asociados con la misma, utilizando un compuesto de la invención o una composición farmacéutica que comprenda un compuesto de la invención.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Un compuesto de acuerdo con la fórmula (I): en donde: R1 es hidrógeno, metilo, CH2D, CHD2, o CD3; y R2 es CH2D, CHD2, o CD3.

En una modalidad de la presente invención, R es hidrógeno, metilo, o CD3; y R2 es CD3.

Los compuestos específicos de la fórmula (I) incluyen: dimetil-amida-de del ácido 7-ciclopentil-2-(5-piperazin-1 -il-piridin-2-il-amino)-7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-6-carboxílico; metil-amida-d3 del ácido 7-ciclopentil-2-(5-piperazin-1 -il-piridin-2-il-amino)-7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-6-carboxílico; y metil-(metil-d3)-amida del ácido 7-ciclopentil-2-(5-piperazin-1 -il-piridin-2-il-amino)-7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-6-carboxílico.

Términos y Definiciones "Deuterio", o "D", o "d", se refiere a un isótopo de hidrógeno cuyo núcleo contiene un protón y un neutrón. Cuando se designa una posición particular por tener deuterio, se entiende que la abundancia de deuterio en esa posición es mayor que la abundancia natural de deuterio (típicamente el 0.015 por ciento). A menos que se informe de otra manera, cuando una posición se designa específicamente como "D" o "deuterio", se entiende que la posición tiene deuterio en una abundancia que es mayor que la abundancia natural de deuterio.

El término "compuestos de la presente invención" (a menos que se identifiquen específicamente de otra manera) se refiere a los compuestos de la fórmula (I), y a las sales de los mismos, incluyendo, de preferencia, las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos.

Como se utiliza en la presente, los símbolos y las convenciones utilizadas en estos procesos, esquemas, y ejemplos, son consistentes con aquéllas empleadas en la literatura científica contemporánea, por ejemplo, el Journal of the American Chemical Society o el Journal of Biológica! Chemistry. A menos que se observe de otra manera, todos los materiales de partida se obtuvieron con los proveedores comerciales, y se utilizan sin mayor purificación. Específicamente, se pueden utilizar las siguientes abreviaturas en los Ejemplos y a través de toda la memoria descriptiva. boc terbutoxi-carbonilo C Celsius DMF /V,/V-dimetil-formamida DCE dicloro-etano DCM dicloro-metano DIPEA di-isopropil-etil-amina DMSO sulfóxido de dimetilo EtOAc acetato de etilo EtOH etanol g gramos h horas HCI ácido clorhídrico LC cromatografía de líquidos LC/MS cromatografía de líquidos / espectro de masas M molar eCN acetonitrilo MeOH metanol Hz megahertz Min. minutos m/z masa a carga N normal RMN resonancia magnética nuclear PEG(750) 0-(2-amino-etil)-0'-metilo polietilenglicol 750; NH2(CH2CH2 0)nCH3; CAS# [80506-64-5]; Fluka 07964; MW Promedio = 750 MS espectro de masas RMN resonancia magnética nuclear El experto apreciará que se pueden preparar sales, incluyendo las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la fórmula (I). Como se utilizan en la presente, los términos "sal" o "sales" se refiere a una sal de adición de ácido o a una sal de adición de base de un compuesto de la invención. El término "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a las sales que conservan la efectividad biológica y las propiedades de los compuestos de esta invención, y que típicamente no son biológicamente o de otra manera indeseables. De conformidad con lo anterior, la invención se refiere además a las sales, de preferencia a las sales farmacéuticamente aceptables, de los compuestos de la fórmula (I).

Las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables se pueden formar con ácidos inorgánicos y ácidos orgánicos, por ejemplo, las sales de acetato, aspartato, benzoato, besilato, bromuro/bromhidrato, bicarbonato/carbonato, bisulfato/sulfato, canforsulfonato, cloruro/clorhidrato, clorteofilonato, citrato, etandisulfonato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, hipurato, yodhidrato/yoduro, isetionato, lactato, lactobionato, lauril-sulfato, malato, maleato, malonato, mandelato, mesilato, metil-sulfato, naftoato, napsilato, nicotinato, nitrato, octadecanoato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfato/fosfato ácido/fosfato diácido, poligalacturonato, propionato, estearato, succinato, sulfosalicilato, tartrato, tosilato, y trifluoro-acetato.

Los ácidos inorgánicos a partir de los cuales se pueden derivar las sales incluyen, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, y similares.

Los ácidos orgánicos a partir de los cuales se pueden derivar las sales incluyen, por ejemplo, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malónico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido mandélico, ácido metan-sulfónico, ácido etan-sulfónico, ácido toluen-sulfónico, ácido sulfosalicílico, y similares.

Las sales de adición de base farmacéuticamente aceptables se pueden formar con bases inorgánicas y orgánicas.

Las bases inorgánicas a partir de las cuales se pueden derivar las sales incluyen, por ejemplo, las sales de amonio y de los metales a partir de las columnas I a XII de la Tabla Periódica. En ciertas modalidades, las sales se derivan a partir de sodio, potasio, amonio, calcio, magnesio, hierro, plata, zinc, y cobre; las sales particularmente adecuadas incluyen las sales de amonio, potasio, sodio, calcio y magnesio.

Las bases orgánicas a partir de las cuales se pueden derivar las sales incluyen, por ejemplo, aminas primarias, secundarias, y terciarias, aminas sustituidas, incluyendo las aminas sustituidas que se presentan naturalmente, aminas cíclicas, resinas básicas de intercambio de iones, y similares. Ciertas aminas orgánicas incluyen isopropil-amina, benzatina, colinato, dietanolamina, dietil-amina, Usina, meglumina, piperazina, y trometamina.

Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención se pueden sintetizar a partir de un compuesto progenitor, una fracción básica o ácida, mediante los métodos químicos convencionales. En términos generales, estas sales se pueden preparar mediante la reacción de las formas de ácido libre de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base apropiada (tales como hidróxido, carbonato, o bicarbonato de Na, Ca, Mg, o K, o similares), o mediante la reacción de las formas de base libre de estos compuestos con una cantidad estequiométrica del ácido apropiado. Estas reacciones típicamente se llevan a cabo en agua o en un solvente orgánico, o en una mezcla de los dos. En términos generales, es recomendable el uso de un medio no acuoso como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol, o acetonitrilo, cuando sea practicable. Las listas de las sales adecuadas adicionales se pueden encontrar, por ejemplo, en "Remington's Pharmaceutical Sciences", 20a Edición, Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); y en "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" por Stahl y Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Alemania, 2002).

La sustitución con isótopos más pesados, en particular deuterio (es decir, 2H o D), puede proporcionar ciertas ventajas terapéuticas resultantes de la mayor estabilidad metabólica, por ejemplo un aumento de la vida media in vivo o requerimientos de dosificación reducida o una mejora en el índice terapéutico. Se entiende que el deuterio en este contexto se considera como un sustituyente de los compuestos de la presente invención. La concentración de este isótopo más pesado, específicamente deuterio, se puede defini r por el factor de enriquecimiento isotópico. El término "factor de en riquecimiento isotópico" , como se util iza en la presente, significa la proporción entre la abundancia isotópica y la abundancia natural de un isótopo especificado. Si un sustituyente en un compuesto de esta invención es denotado como deuterio, este compuesto tiene un factor de enriquecimiento isotópico para cada átomo de deuterio designado de cuando menos 3500 (52.5 por ciento de incorporación de deuterio en cada átomo de deuterio designado) , cuando menos 4000 (60 por ciento de i ncorporación de deuterio) , cuando menos 4500 (67.5 por ciento de incorporación de deuterio) , cuando menos 5000 (75 por ciento de incorporación de deuterio) , cuando menos 5500 (82.5 por ciento de incorporación de deuterio) , cuando menos 6000 (90 por ciento de incorporación de deuterio) , cuando menos 6333.3 (95 por ciento de incorporación de deuterio) , cuando menos 6466.7 (97 por ciento de incorporación de deuterio) , cuando menos 6600 (99 por ciento de incorporación de deuterio) , o cuando menos 6633.3 (99.5 por ciento de i ncorporación de deuterio) .

Adicionalmente, los compuestos de la presente invención , i ncluyendo sus sales , también se puede obtener en la forma de su hidratos , o pueden incluir otros solventes uti lizados para su cristalización . Los compuestos de la presente invención , inherentemente o por diseño , pueden formar solvatos con solventes farmacéuticamente aceptable (incluyendo agua); por consiguiente, se pretende que la i nvención abarque las formas tanto solvatadas como no solvatadas. El término "solvato" se refiere a un complejo molecular de un compuesto de la presente invención (incluyendo las sales farmacéuticamente aceptables del mismo), con una o más moléculas de solvente. Estas moléculas de solvente son aquéllas comúnmente utilizadas en la técnica farmacéutica, que son conocidas como inocuas para el receptor, por ejemplo, agua, etanol, y similares. El término "hidrato" se refiere al complejo en donde la molécula de solvente es agua. Más aún, los solvatos farmacéuticamente aceptables de acuerdo con la invención incluyen aquéllos en donde el solvente de cristalización puede ser isotópicamente sustituido, por ejemplo, D20, d6-acetona, d6-DMSO.

La presente invención también proporciona pro-fármacos de los compuestos de la presente invención, que se convierten in vivo hasta los compuestos de la presente invención. Un pro-fármaco es un compuesto activo o inactivo que se modifica químicamente a través de la acción fisiológica in vivo, tal como hidrólisis, el metabolismo, y similares, en un compuesto de esta invención en seguida de la administración del pro-fármaco a un sujeto. La idoneidad y las técnicas involucradas en la elaboración y utilización de pro-fármacos son bien conocidas por los expertos en la materia. Los pro-fármacos se pueden dividir conceptualmente en dos categorías no exclusivas: pro-fármacos bioprecursores y pro-fármacos portadores. Véase The Practice oí Medicinal Chemistry, Capítulos 31-32 (Ed. Wermuth, Academic Press, San Diego, Calif., 2001). En general, los pro-fármacos bioprecursores son compuestos que son inactivos o que tienen una baja actividad , comparándose con el compuesto de fármaco activo correspondiente, que contienen uno o más grupos protectores , y se convierten hasta la forma activa mediante el metabolismo o solvólisis. Tanto la forma del fármaco activo como cualesq uiera productos metabólicos l iberados deben tener una toxicidad aceptablemente baja.

Los pro-fármacos portadores son compuestos de fármaco que contienen una fracción de transporte , por ejemplo que mejoran la absorción y/o el suministro localizado a los sitios de acción . Deseablemente , para este pro-fármaco portador, el enlace entre la fracción de fármaco y la fracción de transporte es un enlace covalente, el pro-fármaco es inactivo o menos activo que el compuesto de fármaco, y cualq uier fracción de transporte l iberada es aceptablemente no tóxica. Para los pro-fármacos en donde la fracción de transporte se pretenda para mejorar la absorción , típicamente la liberación de la fracción de transporte debe ser rápida. En otros casos, es deseable utilizar una fracción que proporcione una liberación lenta, por ejemplo ciertos pol ímeros u otras f racciones, tales como ciclodextrinas. Los pro-fármacos portadores , por ejemplo, se pueden utilizar para mejorar una o más de las siguientes propiedades : mayor lipofilicidad , mayor duración de los efectos farmacológicos, mayor especificidad del sitio, menor toxicidad y reacciones adversas, y/o mejora en la formulación del fármaco (por ejemplo, estabil idad , solubi l idad en agua , supresión de una propiedad organoléptica o fisicoqu ímica indeseable) . Por ejemplo, se puede aumentar la lipofilicidad mediante la esterificación de: (a) los grupos hidroxilo con ácidos carboxílicos lipofílicos (por ejemplo, un ácido carboxílico que tenga cuando menos una fracción lipofílica), o (b) los grupos de ácido carboxílico con alcoholes lipofílicos (por ejemplo, un alcohol que tenga cuando menos una fracción lipofílica, por ejemplo, alcoholes alifáticos).

Los pro-fármacos de ejemplo son, por ejemplo, los ésteres de ácidos carboxílicos y los derivados S-acílicos de tioles y los derivados O-acílicos de alcoholes o fenoles, en donde el acilo tiene el significado como se define en la presente. Se prefieren los derivados de éster farmacéuticamente aceptables que se pueden convertir mediante solvólisis bajo condiciones fisiológicas hasta el ácido carboxílico progenitor, por ejemplo los ésteres de alquilo inferior, ésteres de cicloalquilo, ésteres de alquenilo inferior, ésteres de bencilo, ésteres de alquilo inferior mono- o di-sustituidos, tales como los ésteres de (o-(amino, mono- o d i - a I q u i I o inferior-amino, carboxilo, alcoxilo inferior-carbonilo)-alquilo inferior, los ésteres de a-(alcanoiloxilo inferior, alcoxilo inferior-carbonilo, o di-alquilo inferior-amino-carbonilo)-alquilo inferior, tales como el pivaloiloxi-metil-éster y similares, convencionalmente utilizados en la técnica. En adición, las aminas se han enmascarado como derivados sustituidos por aril-carboniloxi-metilo que -se disocian mediante las esterasas in vivo, liberando el fármaco libre y formaldehído (Bundgaard, J. Med. Chem.2503 (1989)). Más aún, los fármacos que contienen un grupo NH ácido, tal como imidazol, imida, indol, y similares, se han enmascarado con grupos N-aciloxi-metilo (Bundgaard, Design of Prodrugs, Elsevier (1985)). Los grupos hidroxilo se han enmascarado como ásteres y éteres. La Patente Europea Número EP 039,051 (Sloan y Little) da a conocer pro-fármacos de ácido hidroxámico de base de Mannich, su preparación, y su uso.

Esquemas Generales El Esquema 1 ilustra la preparación del Intermediario II, el cual se puede utilizar en la preparación de los compuestos de la presente invención.

Esquema General 1 Para formar un compuesto de la fórmula ll-A, se agrega la 5-bromo-2,4-dicloro-pirimidina a un solvente, tal como EtOH, en un tubo sellado grande. A la solución se le agregan una cicloalquil-amina apropiada, tal como ciclopentil-amina, y una base, tal como di-isopropil-etil-amina, a temperatura ambiente. La solución se agita entonces a temperatura ambiente durante la noche. El producto se puede purificar mediante los métodos conocidos, para dar un compuesto de la fórmula ll-A como se muestra anteriormente.

En el paso 1 del Esquema 1, un compuesto de la fórmula ll-A y dietil-acetal de propiolaldehído se combinan mediante los métodos conocidos en la técnica, por ejemplo, un acoplamiento cruzado de Sonogashira. Véase, por ejemplo, Sonogashira, K. y colaboradores, Tetra Let, 16(50), 4467-4470 (1975). El compuesto de la fórmula ll-A y dietil-acetal de propiolaldehído se combinan en condiciones básicas (por ejemplo, con una base comúnmente utilizada, tal como trietil-amina), con un catalizador de paladio, tal como PdCI2(PPh3)2, y un catalizador de cobre, tal como Cul, en un solvente, tal como N,N-dimetil-formamida (DMF) (DMF), se desgasifica y se calienta, por ejemplo, hasta una temperatura tal como de 100°C. Después de un período de tiempo, tal como de 13 horas, el producto de reacción se purificó mediante los métodos conocidos, para proporcionar un compuesto de la fórmula ll-B.

En el paso 2 del Esquema 1, a una mezcla de un compuesto de la fórmula ll-B en un solvente, tal como tetrahidrofurano (THF), se le agrega fluoruro de tetra-n-butilamonio 1 M (TBAF) en tetrahidrofurano (THF), y se calienta hasta una temperatura tal como de 65°C durante un tiempo, tal como de 2 horas. El producto de reacción se purifica entonces, para proporcionar un compuesto de la fórmula ll-C.

En el paso 3 del Esquema 1, a una mezcla de un compuesto de la fórmula ll-C en dioxano, se le agrega un ácido, tal como HCI concentrado. Después de que se completa la reacción dentro de 10 minutos, se le agrega agua, y entonces se extrae con acetato de etilo. El producto de la reacción se purifica entonces para dar un aldehido de la fórmula ll-D.

En el paso 4 del Esquema 1 , a una mezcla de un compuesto de la fórmula ll-D en ?,?-dimetil-formamida, se le agrega oxona, y se agita durante 6 horas. Después de que se completa la reacción, se le agrega agua, y se precipita un sólido amarillo, y se recolecta mediante filtración, para dar un ácido carboxílico de la fórmula II. Composiciones En otro aspecto, la presente invención proporciona una composición farmacéutica, la cual comprende un compuesto de la fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica se puede formular para vías de administración particulares, tales como administración oral, administración parenteral, y administración rectal, etc. En adición, las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden configurar en una forma sólida (incluyendo, sin limitación, cápsulas, tabletas, pildoras, gránulos, polvos o supositorios), o en una forma líquida (incluyendo, sin limitación, soluciones, suspensiones o emulsiones). Las composiciones farmacéuticas se pueden someter a las operaciones farmacéuticas convencionales, tales como esterilización y/o pueden contener diluyentes inertes, agentes lubricantes, o agentes reguladores convencionales, así como adyuvantes, tales como conservadores, estabilizantes, agentes humectantes, emulsionantes y reguladores del pH, etc.

Típicamente, las composiciones farmacéuticas son tabletas o cápsulas de gelatina, las cuales comprenden al ingrediente activo junto con: a) diluyentes, por ejemplo, lactosa, dextrosa, sacarosa, manitol, sorbitol, celulosa y/o glicina; b) lubricantes, por ejemplo, sílice, talco, ácido esteárico, su sal de magnesio o de calcio y/o polieti lenglicol ; para tabletas también c) aglutinantes, por ejemplo, silicato de magnesio y aluminio, pasta de almidón, gelatina, tragacanto, metil-celulosa, carboxi-metil-celulosa de sodio y/o polivinil-pirrolidona; si se desea, d) desintegrantes, por ejemplo, almidones, agar, ácido algínico o su sal sódica, o mezclas efervescentes; y/o e) absorbentes, colorantes, saborizantes y edulcorantes.

Las tabletas se pueden recubrir con película o se pueden recubrir entéricamente de acuerdo con los métodos conocidos en la técnica. Las composiciones adecuadas para administración oral incluyen una cantidad efectiva de un compuesto de la invención en la forma de tabletas, grageas, suspensiones acuosas u oleosos, polvos o gránulos dispersables, emulsiones, cápsulas duras o blandas, o jarabes o elíxires. Las composiciones pretendidas para uso oral se preparan de acuerdo con cualquier método conocido en la materia para la elaboración de composiciones farmacéuticas, y estas composiciones pueden contener uno o más agentes seleccionados a partir del grupo que consiste en agentes edulcorantes, agentes saborizantes, agentes colorantes, y agentes conservadores, con el objeto de proporcionar preparaciones farmacéuticamente elegantes y sabrosas. Las tabletas pueden contener al ingrediente activo mezclado con excipientes farmacéuticamente aceptables no tóxicos que sean adecuados para la elaboración de tabletas. Estos excipientes son, por ejemplo, diluyentes inertes, tales como carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, fosfato de calcio, o fosfato de sodio; agentes de granulación y desintegrantes, por ejemplo almidón de maíz, o ácido algínico; agentes aglutinantes, por ejemplo almidón, gelatina, o acacia; y agentes lubricantes, por ejemplo estearato de magnesio, ácido esteárico, o talco. Las tabletas son no recubiertas o son recubiertas mediante técnicas conocidas para demorar la desintegración y absorción en el tracto gastrointestinal y de esta manera proporcionar una acción sostenida durante un período más largo. Por ejemplo, se puede emplear un material de demora de tiempo, tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo. Las formulaciones para uso oral se pueden presentar como cápsulas de gelatina dura, en donde el ingrediente activo se mezcla con un diluyente sólido inerte, por ejemplo carbonato de calcio, fosfato de calcio, o caolín, o como cápsulas de gelatina blanda, en donde el ingrediente activo se mezcla con agua o un medio oleoso, por ejemplo aceite de cacahuate, parafina líquida, o aceite de oliva.

Ciertas composiciones inyectables son soluciones o suspensiones isotónicas acuosas, y los supositorios convenientemente se preparan a partir de emulsiones o suspensiones grasas. Estas composiciones se pueden esterilizar y/o pueden contener adyuvantes, tales como agentes conservadores, estabilizantes, humectantes, o emulsionantes, promotores de solución, sales para regular la presión osmótica, y/o reguladores del pH. En adición, también pueden contener otras sustancias terapéuticamente valiosas. Estas composiciones se preparan de acuerdo con los métodos convencionales de mezcla, granulación, o recubrimiento, respectivamente, y contienen de aproximadamente el 0.1 al 75 por ciento, o contienen de aproximadamente el 1 al 50 por ciento del ingrediente activo.

Las composiciones adecuadas para aplicación transdérmica incluyen una cantidad efectiva de un compuesto de la invención con un vehículo adecuado. Los vehículos adecuados para suministro transdérmico incluyen solventes farmacéuticamente aceptables absorbibles para ayudar al paso a través de la piel del huésped. Por ejemplo, los dispositivos transdérmicos están en la forma de un parche que comprende un miembro de respaldo, un depósito que contiene al compuesto opcionalmente con vehículos, opcionalmente una barrera de control de velocidad para suministrar el compuesto de la piel del huésped a una velocidad controlada y previamente determinada durante un período de tiempo prolongado, y elementos para asegurar el dispositivo a la piel.

Las composiciones adecuadas para aplicación tópica, por ejemplo, a la piel y a los ojos, incluyen soluciones acuosas, suspensiones, ungüentos, cremas, geles, o formulaciones rociables, por ejemplo para el suministro mediante aerosol o similar. Estos sistemas de suministro tópico serán particularmente apropiados para aplicación dérmica, por ejemplo, para el tratamiento de cáncer de piel, por ejemplo, para el uso profiláctico use en cremas solares, lociones, aspersiones, y similares. Por consiguiente, son adecuados en particular para utilizarse en formulaciones tópicas, incluyendo cosméticas, bien conocidas en este campo. Pueden contener solubilizantes , estabilizantes , agentes mejoradores de la tonicidad , reguladores del p H , y conservadores .

Como se utiliza en la presente , una aplicación tópica también puede pertenecer a una inhalación o a una aplicación intranasal . De una manera conveniente se pueden sumi nistrar en la forma de un polvo seco (ya sea solo, como una mezcla, por ejemplo una mezcla seca con lactosa, o bien como una partícula componente mezclada, por ejemplo con fosfol ípidos) a parti r de un i nhalador de polvo seco, o como una presentación de aspersión en aerosol a parti r de un recipiente presu rizado, bomba, aspersor, atomizador o nebulizador, con o sin el uso de un propelente adecuado.

La presente invención proporciona además composiciones farmacéuticas y formas de dosificación anhidras , las cuales comprenden los compuestos de la presente invención como ingredientes activos, debido a que el agua puede faci litar la deg radación de ciertos compuestos . Las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación anhidras de la invención se pueden preparar utilizando ingredientes anhidros o que contengan una baja humedad, y condiciones de baja humedad . Una composición farmacéutica an hidra se puede preparar y al macenar de tal manera que se mantenga su natu raleza anhidra. De conformidad con lo anterior, las composiciones an hid ras de preferencia se empacan uti l izando materiales que se sepa que impiden la exposición al agua, de tal modo que se puedan incluir en kits de formulación adecuados . Los ejemplos del empaq ue adecuado incluyen , pero no se l i mitan a, láminas herméticamente sel ladas, plásticos , recipientes de dosis unitaria (por ejemplo, f rascos) , paquetes de bu rbujas, y paquetes de ti ras .

La i nvención proporciona además composiciones farmacéuticas y formas de dosificación que comprenden uno o más agentes que reducen la velocidad a la cual se descompondrá el compuesto de la presente invención como un ingrediente activo. Estos agentes, que son refe ridos en la presente como "estabilizantes", incl uyen , pero no se limitan a, antioxidantes , tales como ácido ascórbico, reguladores del p H, o reguladores de sales, etc.

Métodos de Uso Los compuestos de la presente invención son inhibidores de CDK4/6 y, por consiguiente, pueden ser capaces de tratar las enfermedades en donde la patología subyacente sea mediada (cuando menos en parte) por C DK4/6. Estas enfermedades incluyen cáncer y otras enfermedades en donde haya un trastorno de proliferación , apoptosis , o diferenciación celular.

Por consiguiente , los compuestos de la presente invención, pueden ser útiles en el tratamiento de tumores RB+ve (positivos para la prote ína de retinoblastoma) , incluyendo los tumores que alojan mutaciones en Ras , Raf , Receptores de Factores de Crecimiento , o sobre-expresión de Receptores de Factores de Crecim iento . Los compuestos de la presente i nvención también pueden ser útiles en el tratamiento de tumores con amplificaciones de los genes C DK4 y CDK6 , así como de los tumores que sobre-expresan los componentes de ciclina de las cinasas dependientes de cicli na. Los compuestos de la presente invención también pueden ser útiles en el tratamiento de tumores RB-ve .

Los compuestos de la presente invención también pueden ser útiles en el tratamiento de tumores con aberraciones genéticas que activan la actividad de cinasa de C DK4/6. Éstos incluyen , pero no se limitan a, cánceres con translocalizaciones de D-ciclina, tales como linfoma de células de manto y mieloma múltiple, amplificaciones de D-ciclina , tales como cáncer de mama y cáncer esofágico de células escamosas , amplificaciones de CDK4, tales como liposarcoma , ampl ificaciones o sobre-expresiones de CDK6, tales como li nfoma de células-T, e inactivación de p 1 6 , tal como melanoma, cáncer pulmonar no microcelular y cáncer pancreático.

Los compuestos de la presente invención pueden ser útiles en el tratamiento de los cánceres que tengan aberraciones genéticas en los reguladores corriente arriba de las D-ciclinas, en donde el defecto dé como resultado u n au mento de la abundancia de las D-ciclinas , y también se pueden considerar para el tratamiento . Éstos incluyen , pero no se limitan a, leucemia mieloide aguda con activación de FLT3, cánceres de mama con sobre-expresión de Her2/neu , fenotipo triple negativo o dependiente del retículo endoplásmico (ER) , cánceres de colon con mutaciones activadoras de la senda de MAPK, PI3K o WNT, melanomas con mutaciones activadoras de la senda de MAP K, cánceres pul monares no microcel ulares con aberraciones activadoras de la senda del EG FR y cánceres pancreáticos con aberraciones activadoras de la senda de APK, incluyendo las mutaciones K-ras.

Los ejemplos de los cánceres que se pueden tratar con un compuesto de la presente invención incluyen, pero no se limitan a, carcinoma, por ejemplo un carcinoma de la vejiga, mama, colon (por ejemplo, carcinomas colo-rectales, tales como adenocarcinoma de colon y adenoma de colon), riñon, epidermis, hígado, pulmón (por ejemplo, adenocarcinoma, cáncer pulmonar microcelular y carcinomas pulmonares no microcelulares), esófago, vesícula biliar, ovario, páncreas (por ejemplo, carcinoma pancreático exocrino), estómago, cérvix, tiroides, nariz, cabeza y cuello, próstata, y piel (por ejemplo, carcinoma de células escamosas). Otros ejemplos de los cánceres que se pueden tratar con un compuesto de la presente invención incluyen tumores hematopoiéticos de linaje linfoide (por ejemplo, leucemia, leucemia linfocítica aguda, linfoma de células de manto, leucemia linfocítica crónica, linfoma de células-B, (tal como linfoma de células-B grande difuso), linfoma de células-T, mieloma múltiple, linfoma de Hodgkin, linfoma no de Hodgkin, linfoma de células pilosas, y linfoma de Burkett; tumores hematopoiéticos de linaje mieloide, por ejemplo, leucemias mielógenas agudas y crónicas, síndrome mielodisplásico, y leucemia promielocítica. Otros cánceres incluyen cáncer folicular de tiroides; un tumor de origen mesenquimal, por ejemplo, fibrosarcoma o habdomiosarcoma; un tumor del sistema nervioso central o periférico, por ejemplo, astrocitoma, neuroblastoma, glioma o schwannoma; melanoma; seminoma; teratocarcinoma; osteosarcoma; xeroderma pigmentoso; retinoblastoma; queratoacantoma; cáncer folicular de tiroides; y sarcoma de Kaposi.

Un grupo de cánceres incluye cánceres humanos de mama (por ejemplo, tumores de mama primarios, cáncer de mama de nodos negativos, adenocarcinomas de conductos invasivos de la mama, cánceres de mama no endometroides); y cánceres endometriales.

Otro sub-conjunto de cánceres en donde los compuestos que tienen una actividad inhibidora de CDK4/6 pueden ser de un beneficio terapéutico particular comprende glioblastoma multiforme, leucemia linfocítica aguda (ALL) de células-T, sarcomas, melanoma familiar y melanoma.

Los inhibidores de CDK4/6 también podrían ser útiles en el tratamiento de infecciones virales, por ejemplo, virus de herpes, poxvirus, virus Epstein-Barr, virus Sindbis, adenovirus, VIH, HPV, HCV y HCMV; prevención del desarrollo de SIDA en los individuos infectados por VIH; enfermedades inflamatorias crónicas, por ejemplo, lupus eritematoso sistémico, glomerulonefritis auto-inmunológicamente mediada, artritis reumatoide, soriasis, enfermedad inflamatoria del intestino, y diabetes mellitus autoinmune; enfermedades cardiovasculares, por ejemplo, hipertrofia cardíaca, restenosis, ateroesclerosis; trastornos neurodegenerativos, por ejemplo, enfermedad de Alzheimer, demencia relacionada con SIDA, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrópica, retinitis pigmentosa, atrofia muscular espinal y degeneración cerebelar; glomerulonefritis ; síndromes mielodisplásicos , lesión isquémica asociada con i nfartos de miocardio, embolia y lesión por reperfusión , arritmia, ateroesclerosis, enfermedades hepáticas inducidas por toxinas o relacionadas con alcohol , enfermedades hematológicas, por ejemplo, anemia crónica y anemia aplásica; enfermedades degenerativas del sistema musculoesquelético, por ejemplo, osteoporosis y artritis, rinosinusitis sensible a la aspi ri na, fibrosis qu ística, esclerosis múltiple, enfermedades renales , enfermedades oftálmicas, i ncluyendo degene ración macular relacionada con la edad , uve ítis , y dolor por cáncer.

Los métodos de tratamiento de la invención comprenden administrar una cantidad efectiva de un compuesto de acuerdo con la fórmula (I ) , o de u na sal farmacéuticamente aceptable del mismo, a un sujeto que lo necesite . Las modalidades individuales de la invención incluyen los métodos para el tratamiento de cualquiera de los trastornos o de las enfermedades mencionadas anteriormente , mediante la administración de una cantidad efectiva de un compuesto de acuerdo con la fórmula (I ) , o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, a un sujeto que lo necesite .

El térmi no " una cantidad terapéuticamente efectiva" de un compuesto de la presente invención , se refiere a una cantidad del compuesto de la presente invención , que provocará la respuesta biológica o médica de un sujeto, por ejemplo, la reducción o inhibición de la actividad de una enzi ma o de u na prote ína, o la mitigación de los s íntomas , el al ivio de las condiciones , la ralentización o el retardo del progreso de la enfermedad, o la prevención de una enfermedad, etc. En una modalidad no limitante, el término "una cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a la cantidad del compuesto de la presente invención que, cuando se administra a un sujeto, es efectiva para (1) aliviar, inhibir, prevenir y/o mitigar cuando menos parcialmente una condición o un trastorno o una enfermedad (i) mediada por CDK4/6, o (ii) asociada con la actividad de CDK4/6, o (Mi) caracterizada por una actividad (normal o anormal) de CDK4/6; o (2) reducir o inhibir la actividad de CDK4/6; o (3) reducir o inhibir la expresión de CDK4/6. En otra modalidad no limitante, el término "una cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a la cantidad del compuesto de la presente invención que, cuando se administra a una célula, o a un tejido, o a un material biológico no celular, o a un medio, es efectiva para reducir o inhibir cuando menos parcialmente la actividad de CDK4/6; o para reducir o inhibir cuando menos parcialmente la expresión de CDK4/6. El significado del término "una cantidad terapéuticamente efectiva", como se ilustra en la modalidad anterior para CDK4/6, también se aplica por el mismo medio a cualesquiera otras proteínas/péptidos/ enzimas relevantes.

Como se utiliza en la presente, el término "sujeto" se refiere a un animal. Típicamente el animal es un mamífero. Un sujeto también se refiere, por ejemplo, a primates (por ejemplo, a seres humanos, masculinos o femeninos), reses, ovejas, cabras, caballos, perros, gatos, conejos, ratas, ratones, peces, aves y similares. En ciertas modalidades, el sujeto es un primate. En todavía otras modalidades, el sujeto es un ser humano.

Como se utiliza en la presente, el término "tratar", "tratando" o "tratamiento" de cualquier enfermedad o trastorno se refiere, en una modalidad, a mitigar la enfermedad o el trastorno (es decir, hacer más lento o detener o reducir el desarrollo de la enfermedad o de cuando menos uno de los síntomas clínicos de la misma). En otra modalidad, "tratar", "tratando" o "tratamiento" se refiere a aliviar o mitigar cuando menos un parámetro físico, incluyendo aquéllos que puedan no ser discernibles por parte del paciente. En todavía otra modalidad, "tratar", "tratando" o "tratamiento" se refiere a modular la enfermedad o el trastorno, ya sea físicamente (por ejemplo, la estabilización de un síntoma discernible), fisiológicamente (por ejemplo, la estabilización de un parámetro físico), o ambos. En todavía otra modalidad, "tratar", "tratando" o "tratamiento" se refiere a prevenir o retardar el establecimiento o el desarrollo o progreso de la enfermedad o del trastorno.

Como se utiliza en la presente, un sujeto está "en necesidad de" tratamiento si este sujeto se beneficiaría biológicamente, médicamente, o en su calidad de vida, a partir de ese tratamiento.

La composición o combinación farmacéutica de la presente invención puede estar en una dosificación unitaria de aproximadamente 1 a 1,000 miligramos de ingrediente(s) activo(s) para un sujeto de aproximadamente 50 a 70 kilogramos, o de aproximadamente 1 a 500 miligramos, o de aproximadamente 1 a 250 miligramos, o de aproximadamente 1 a 150 miligramos, o de aproximadamente 0.5 a 100 miligramos, o de aproximadamente 1 a 50 miligramos de los ingredientes activos. La dosificación terapéuticamente efectiva de un compuesto, de la composición farmacéutica, o de las combinaciones de los mismos, depende de la especie del sujeto, del peso corporal, de la edad y condición individual, del trastorno o enfermedad que se esté tratando, o de la gravedad de la misma. Un médico, clínico, o veterinario de una experiencia ordinaria puede determinar fácilmente la cantidad efectiva de cada uno de los ingredientes activos necesaria para prevenir, tratar, o inhibir el progreso del trastorno o de la enfermedad.

Las propiedades de dosificación anteriormente citadas se pueden demostrar en pruebas in vitro e in vivo utilizando convenientemente mamíferos, por ejemplo, ratones, ratas, perros, monos u órganos aislados, tejidos y preparaciones de los mismos. Los compuestos de la presente invención se pueden aplicar in vitro en la forma de soluciones, por ejemplo, soluciones acuosas, e in vivo, ya sea enteralmente, parenteralmente, de una manera conveniente intravenosamente, por ejemplo, como una suspensión o en solución acuosa. La dosificación in vitro puede estar en el intervalo de concentraciones de entre aproximadamente 1 O'3 molar y 10"9 molar. Una cantidad terapéuticamente efectiva in vivo, dependiendo de la vía de administración, puede estar en el intervalo de entre aproximadamente 0.1 y 500 miligramos/kilogramo, o de entre aproximadamente 1 y 1 00 miligramos/kilogramo.

Una modalidad de la presente i nvención incluye un método para modular la actividad de C DK4/6 en un sujeto, el cual comprende administrar al sujeto, una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con la fórmula (I ) , o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Otra modalidad de la presente invención es un método para el tratamiento de un trastorno o de una enfermedad mediada por C DK4/6 en un sujeto que lo necesite, el cual comprende administrar al sujeto, u na cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de la fórmula (I) , o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Otra modalidad de la presente i nvención es un método para el tratamiento de un trastorno o de una enfermedad mediada por CDK4/6, en un sujeto que necesite el tratamiento , el cual comprende la admi nistración de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con la fórmula ( I ) , o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el trastorno o la enfermedad se selecciona a parti r del grupo que consiste en li nfoma de cél ulas de manto, mieloma múltiple, cáncer de mama, cáncer esofágico de células escamosas, liposarcoma, linfoma de células-T, melanoma, cáncer pulmonar no microcelular, y cánce r pancreático.

Otra modalidad de la presente invención es el uso de u n compuesto de la fórmula (I ) , o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para el tratamiento de un trastorno o de una enfermedad mediada por CD K4/6.

Otra modalidad de la presente invención es el uso de un compuesto de la fórmula (I), o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para el tratamiento de un trastorno o de una enfermedad mediada por CDK4/6 en un sujeto, en donde el trastorno o la enfermedad se selecciona a partir del grupo que consiste en linfoma de células de manto, mieloma múltiple, cáncer de mama, cáncer esofágico de células escamosas, liposarcoma, linfoma de células-T, melanoma, cáncer pulmonar no microcelular, y cáncer pancreático.

Otra modalidad de la presente invención es un compuesto de acuerdo con la fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para utilizarse como un medicamento.

Otra modalidad de la presente invención es el uso de un compuesto de la fórmula (I), o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de un trastorno o de una enfermedad mediada por CD 4/6, en donde el trastorno o la enfermedad se selecciona a partir del grupo que consiste en linfoma de células de manto, mieloma múltiple, cáncer de mama, cáncer esofágico de células escamosas, liposarcoma, linfoma de células-T, melanoma, cáncer pulmonar no microcelular, y cáncer pancreático.

Combinaciones Los compuestos de la presente invención se pueden administrar ya sea simultáneamente con, o antes o después de,, uno o más agentes terapéuticos diferentes. Los compuestos de la presente i nvención se pueden administrar por separado, por la misma o diferente vía de administración , o j untos en la misma composición farmacéutica que los otros agentes.

En una modalidad , la invención proporciona un producto que comprende un compuesto de la fórmula ( I ) , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y cuando menos otro agente terapéutico, como una preparación combinada para su uso simultáneo , separado, o en secuencia, en terapia. En una modalidad , la terapia es el tratamiento de una enfermedad o condición mediada por la i nhibición de CDK4/6. Los productos proporcionados como una preparación combinada incluyen una composición que comprende el compuesto de la presente invención y los otros agentes terapéuticos juntos en la misma composición farmacéutica, o el compuesto de la presente invención y los otros agentes terapéuticos en una forma separada, por ejemplo, en la forma de un kit.

En u na modalidad , la invención proporciona una composición farmacéutica, la cual comprende un compuesto de la fórmula ( I) , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y otro(s) agente(s) terapéutico(s) . Opcionalmente, la composición farmacéutica puede comprender un excipiente farmacéuticamente aceptable , como se describe anteriormente .

En una modalidad , la invención proporciona un kit, el cual comprende dos o más composiciones farmacéuticas separadas , cuando menos una de las cuales contiene un compuesto de la fórmula (I ) , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En una modal idad , el kit comprende medios para conservar por separado estas composiciones , tales como un recipiente , un frasco dividido, o un paquete de lámina dividido. Un ejemplo de este kit es un paquete de bu rbuja, como se utiliza típicamente para el empaque de tabletas, cápsulas y simi lares.

El kit de la invención se puede utilizar para administrar diferentes formas de dosificación, por ejemplo , oral y parenteral , para administrar las composiciones separadas en diferentes intervalos de dosificación , o para titular las composiciones separadas una contra la otra. Con el objeto de ayudar al cumplimiento, el kit de la i nvención típicamente comprende instrucciones para su administración .

En las terapias de combinación de la i nvención , el compuesto de la invención y el otro agente terapéutico pueden ser elaborados y/o formulados por el mismo o por diferentes fabricantes . Más aú n , el compuesto de la invención y el otro agente terapéutico, se pueden reunir en una terapia de combinación : (i) antes de expedir el producto de combinación a los médicos (por ejemplo, en el caso de un kit, el cual comprende el compuesto de la invención y el otro agente terapéutico) ; (i i ) por los médicos mismos (o bajo la gu ía del médico) poco antes de su administración; (iii) por los pacientes mismos, por ejemplo, du rante la admi nistración en secuencia del compuesto de la invención y el otro agente terapéutico.

De conformidad con lo anterior, la i nvención proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (I) , o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para el tratamiento de una enfermedad o condición mediada por la inhibición de CDK4/6, en donde el medicamento se prepara para su administración con otro agente terapéutico . La invención también proporciona el uso de otro agente terapéutico para el tratamiento de una enfermedad o condición mediada por la i nhibición de CDK4/6, en donde el medicamento se administra con un compuesto de la presente invención .

La invención también proporciona un compuesto de la fórmula ( I ) , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para utilizarse en u n método para el tratamiento de una enfermedad o condición mediada por la inhi bición de C DK4/6, en donde el compuesto de la fórmula (I ) se prepara para su administración con otro agente terapéutico. La invención también proporciona otro agente terapéutico para utilizarse en un método para el tratamiento de u na enfermedad o condición mediada por la inhibición de CDK4/6, en donde el otro agente terapéutico se prepara para su administración con un compuesto de la fórmula (I ) , o con una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. La i nvención también proporciona un compuesto de la fórmula (I ) , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uti lizarse en un método para el tratamiento de una enfermedad o condición mediada por la inhibición de CDK4/6, en donde el compuesto de la fórmula (I ) , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se admi nistra con otro agente terapéutico. La invención también proporciona otro agente terapéutico para utilizarse en u n método para el tratamiento de una enfermedad o condición mediada por la inhibición de CDK4/6, en donde el otro agente terapéutico se administra con un compuesto de la fórmula (I).

La invención también proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (I), o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para el tratamiento de una enfermedad o condición mediada por CDK4/6, en donde el paciente ha sido tratado previamente (por ejemplo, dentro de 24 horas) con otro agente terapéutico. La invención también proporciona el uso de otro agente terapéutico para el tratamiento de una enfermedad o condición mediada por CDK4/6, en donde el paciente ha sido tratado previamente (por ejemplo, dentro de 24 horas) con un compuesto de la fórmula (I), o con una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una modalidad, el otro agente terapéutico se selecciona a partir de un agente anti-inflamatorio, anti-proliferativo, quimio-terapéutico, inmunosupresor, contra el cáncer, o citotóxico, o con un inhibidor de cinasa diferente de un compuesto de la presente invención, o de una sal del mismo. Otros ejemplos de los agentes que se pueden administrar en combinación con los compuestos de la invención incluyen, pero no se limitan a, un inhibidor de PTK, ciclosporina A, CTLA4-lg, anticuerpos seleccionados a partir de anti-ICAM-3, anti-receptor de IL-2, anti-CD45RB, anti-CD2, anti-CD3, anti-CD4, anti-CD80, anti-CD86, y anticuerpo monoclonal OKT3, agentes que bloquean la interacción entre CD40 y gp39, proteínas de fusión construidas a partir de CD40 y gp39, inhibidores de la función de NF-kappa B, fármacos anti-inflamatorios no esteroideos, esteroides, compuestos de oro, agentes anti-proliferativos, FK506, micofenolato mofetil, fármacos citotóxicos, inhibidores de TNF-a, anticuerpos anti-TNF o receptor de TNF soluble, rapamicina, inhibidores de mTor, leflunimida, inhibidores de ciclo-oxigenasa-2, paclitaxel, cisplatina, carboplatina, doxorrubicina, carminomicina, daunorrubicina, aminopterina, metotrexato, metopterina, mitomicina C, ecteinascidina 743, porfiromicina, 5-fluoro-uracilo, 6-mercapto-purina, gemcitabina, citosina-arabinosida, podofilotoxina, etoposida, fosfato de etoposida, teniposida, melfalano, vinblastina, vlncristina, leurosidina, epotilona, vindesina, leurosina, inhibidor de B-Raf, inhibidor de MEK, inhibidor de PI3K, inhibidor de HSP90, inhibidor de CDK1, inhibidor de CDK2, inhibidor de CDK5, inhibidor de CDK7, inhibidor de CDK8, inhibidor de CDK9, inhibidor de EGFR, inhibidor de FGFR, inhibidor de PDGFR, inhibidor de Her2/neu, inhibidor de FLT3, antagonistas de los receptores de andrógenos, glucocorticoides y progesterona, inhibidor de SMO, inhibidor de WNT, inhibidor de Bel, inhibidor de IAP, inhibidor de Mcl, inhibidor de MDM2, inhibidor de p52, inhibidores de proteasoma (Velcade), o derivados de los mismos.

Las combinaciones individuales específicas que pueden proporcionar beneficios de tratamiento particulares incluyen el co-tratamiento de los pacientes con linfoma de células de manto o con cáncer pancreático mediante los inhibidores de mTOR, tales como Everolímus.

Un compuesto de la presente invención también se puede utilizar en combinación con otros agentes, por ejemplo, un inhibidor de cinasa de proteína adicional que sea o no un compuesto de la invención, para el tratamiento de un trastorno asociado con una cinasa de proteína en un sujeto. El término "combinación" significa ya sea una combinación fija en una forma unitaria de dosificación, o bien un kit de partes para la administración combinada, en donde un compuesto de la presente invención y un componente de combinación se pueden administrar independientemente al mismo tiempo o por separado dentro de intervalos de tiempo que permitan en especial que los componentes de la combinación muestren un efecto cooperativo, por ejemplo, sinérgico, o cualquier combinación de los mismos.

Los compuestos de la invención se pueden administrar de una manera simultánea o en secuencia, con un agente anti-inflamatorio, anti-proliferativo, quimioterapéutico, inmunosupresor, contra el cáncer, citotóxico o con un inhibidor de cinasa diferente de un compuesto de la fórmula I o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Los ejemplos adicionales de los agentes que se pueden administrar en combinación con los compuestos de la invención incluyen, pero no se limitan a, un inhibidor de PTK, ciclosporina A, CTLA4-lg, anticuerpos seleccionados a partir de anti-ICAM-3, antireceptor de IL-2, anti-CD45RB, anti-CD2, anti-CD3, anti-CD4, anti-CD80, anti-CD86, y anticuerpo monoclonal OKT3, agentes que bloqueen la interacción entre CD40 y gp39, proteínas de fusión construidas a partir de CD40 y gp39, inhibidores de la función de NF- kappa B, fármacos anti-inflamatorios no esteroideos, esferoides, compuestos de oro, agentes antiproliferativos, FK506, micofenolato mofetil, fármacos citotóxicos, inhibidores de TNF-a, anticuerpos anti-TNF o receptor de TNF soluble, rapamicina, leflunimida, inhibidores de ciclo-oxigenasa-2, paclitaxel, cisplatina, carboplatina, doxorrubicina, carminomicina, daunorrubicina, aminopterina, metotrexato, metopterina, mitomicina C, ecteinascidina 743, porfiromicina, 5-fluoro-uracilo, 6-mercapto-purina, gemcitabina, citosina-arabinosida, podofilotoxina, etoposida, fosfato de etoposida, teniposida, melfalano, vinblastina, vincristina, leurosidina, epotilona, vindesina, leurosina, o derivados de los mismos.

Un compuesto de la invención y cualquier agente adicional se pueden formular en formas de dosificación separadas. De una manera alternativa, con el fin de reducir el número de formas de dosificación administradas a un paciente, el compuesto de la invención y cualquier agente adicional se pueden formular juntos en cualquier combinación. Por ejemplo, el compuesto inhibidor de la invención se puede formular en una forma de dosificación, y el agente adicional se puede formular junto en otra forma de dosificación. Cualesquiera formas de dosificación separadas se pueden administrar al mismo tiempo o en diferentes tiempos.

De una manera alternativa, una composición de esta invención comprende un agente adicional como se describe en la presente. Cada componente puede estar presente en composiciones individua-les, en composiciones en combinación, o en una sola composición.

EJEMPLOS Ejemplo 1: Síntesis de dimetil-amida-d6 del ácido 7-ciclopentil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-il-amino)-7H-p¡rrolo-[2,3-d]-pirimidin-6-carboxílico.

Paso 1 : Síntesis de dimetil-amida-d6 del ácido 2-cloro-7-ciclo-pentil-7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-6-carboxílico.

A una solución de 50 milimoles (13.3 gramos) del ácido 2-cloro-7-c¡clopentil-7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-6-carboxílico en 250 mililitros de ?,?-dimetil-formamida (DMF), se le agregaron 75 milimoles (6.6 gramos) de clorhidrato de dimetil-d6-amina, 55 milimoles (20.9 gramos) de hexafluoro-fosfato de 2-(1 H-7-azabenzotriazol-1 -il)-1 ,1 ,3, 3-tetrametil-uronio, y 150 milimoles (26.2 mililitros) de ?/,/V-di-isopropil-etil-amina. Después de agitar durante la noche a 25°C, la reacción se diluyó con EtOAc, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04, se filtró, y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice utilizando un gradiente de EtOAc/heptano, para proporcionar 30.6 milimoles (9.7 gramos) del compuesto del título como un sólido color rosado claro. MS m/z 299.5 (M + H)+.

Paso 2: Síntesis de terbutil-éster del ácido 4-[6-(7-ciclopentil-6- dimetil-d6-carbamoil-7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-2-il-amino)-piridin-3- il]-piperazin-1 -carboxílico.

En un matraz seco de 250 mililitros se agregaron 11.4 milimoles (3.4 gramos) de la d¡metil-amida-d6 del ácido 2-cloro-7- ciclopentil-7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-6-carboxílico, 12.0 milimoles (3.3 gramos) del terbutil-éster del ácido 4-(6-amino-piridin-3-il)- piperazin-1 -carboxílico, 17.1 milimoles (5.6 gramos) de carbonato de cesio, 0.57 milimoles (0.35 gramos) de 2,2'-bis-(difenil-fosfino)-1 ,1 '- binaftaleno, y 0.57 milimoles (0.13 gramos) de acetato de paladio. El matraz se selló, se evacuó, y se purgó con nitrógeno seco tres veces antes de agregar 60 mililitros de 1,4-dioxano. La mezcla de reacción se calentó a 95°C durante 4 horas en un baño de aceite. Después del enfriamiento de la reacción, se diluyó con 100 mililitros de heptano, se agitó durante 30 minutos, y se filtró. El sólido recuperado se suspendió en agua con agitación vigorosa, se sónico durante 5 minutos, y se volvió a aislar mediante filtración, para dar un sólido color café después del secado. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice utilizando un gradiente de MeOH/EtOAc, para dar un sólido color café claro. El sólido se disolvió en 40 mililitros de dicloro-metano, y se agitó durante 16 horas con 1 gramo de eliminador de Pd, MP-TMT. Después del filtrado y de la concentración, se recuperaron 9.5 milimoles (5.1 gramos) del compuesto del título como un sólido color café claro. MS m/z 521.7 (M + H) + .

Paso 3: Síntesis del compuesto del título.

A una suspensión de 9.5 milimoles (5.1 gramos) del terbutil-éster del ácido 4-[6-(7-ciclopentil-6-dimetil-d6-carbamoil-7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-2-il-amino)-p¡ridin-3-il]-p¡perazin-1 -carboxílico en 10 mililitros de tolueno, se le agregó lentamente 1 mililitro de HCI 6 N. Después de agitar a 25°C durante 1 hora, se agregaron 16 mililitros adicionales de HCI 1N, y se agitó durante 15 minutos. La mezcla de reacción se filtró a través de un cojín de Celite, y las dos fases se separaron. La fase acuosa se ajustó lentamente a un pH 9 con NaOH concentrado al 50 por ciento, y la suspensión resultante se agitó a 25°C durante 3 horas. El sólido que se recuperó mediante filtración, se lavó con agua varias veces, y se trituró con 2-propanol. El sólido resultante se secó al vacío a 60°C durante 16 horas, para dar 3.8 milimoles (1.67 gramos) del compuesto del título como un sólido color bronceado. 1H RMN (400 MHz, DMSO): d 9.55 (s, 1 H), 8.79 (s, 1 H), 8.20 (d, J = 8 Hz, 1 H), 8.06 (d, J = 4 Hz, 1 H), 7.48 (dd, J = 8 Hz, 4 Hz, 1 H), 6.61 (s, 1 H), 4.79-4.70 (m, 1 H), 3.25-3.23 (m, 4 H), 3.12-3.09 (m, 4 H), 2.47-2.42 (m, 2 H), 1.99 (br s, 4 H), 1.65 (br s, 2 H). 13C RMN (400 MHz, DMSO): d 162.84, 154.67, 152.10, 151.11, 146.35, 142.19, 135.80, 131.80, 125.52, 112.52, 111.75, 100.60, 56.88, 48.31, 44.27, 29.66, 24.16; HRMS calculado para C23H24D6N80.H+ (M + H) + 441.2997, encontrado 441.3008.

Ejemplo 2: Síntesis de metil-amida-d3 del ácido 7-ciclopentil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-il-amino)-7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-6-carboxílico.

Paso 1: Síntesis de metil-amida-d3 del ácido 2-cloro-7-ciclopentil- 7H-pirrolo-[2,3-d]-pir¡midin-6-carboxílico.

A una solución de 10 milimoles (2.7 gramos) del ácido 2-cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-6-carboxílico en 5 mililitros de CH2CI2> se le agregaron 15 milimoles (1.3 mililitros) de cloruro de oxalilo, seguidos por unas cuantas gotas de N,N-dimetil-formamida. La reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente, y entonces se concentró bajo presión reducida. El aceite crudo se volvió a disolver en 100 mililitros de CH2CI2 en un matraz de un solo cuello, de 250 mililitros. Después de la adición de 5 milimoles de di-isopropil-etil-amina (0.87 mililitros), el matraz se selló con un globo de hule. Se liberó la metil-amina-d5 (50 milimoles) como un gas dentro del matraz sellado, mientras que se enfriaba hasta -40°C. Después de que se introdujo todo el gas, la reacción se calentó a temperatura ambiente. Después de agitar durante la noche a 25°C, la reacción se diluyó con CH2CI2, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04, se filtró, y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice utilizando un gradiente de EtOAc/heptano del 15 al 100 por ciento, para proporcionar 5.4 milimoles (1.5 gramos) del compuesto del título como un sólido color naranja. MS m/z 282.4 (M + H)+.

Paso 2: Síntesis de terbutil-éster del ácido 4-[6-(7-ciclopentil-6-rnetil-d3-carbamoil-7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-2-il-amino)-piridin-3-il]-piperazin-1 -carbo ílico.

En un tubo de microondas seco de 20 mililitros se agregaron 5.4 milimoles (1.5 gramos) de la metil-amida-d3 del ácido 2-cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-6-carboxílico, 5.4 milimoles (1.5 gramos) del terbutil-éster del ácido 4-(6-amino-piridin-3-il)-piperazin-1 -carboxílico, 8.0 milimoles (2.6 gramos) de carbonato de cesio, 0.27 milimoles (0.17 gramos) de 2,2'-bis-(difenil-fosfino)-1 , 1 '-binaftaleno, y 1,4-dioxano (20 mililitros). La suspensión se desgasificó mediante burbujeo de N2 durante 3 minutos antes de agregar 0.57 milimoles (0.06 gramos) de acetato de paladio. El tubo sellado se calentó a 120°C durante 20 minutos en un reactor de microondas. Después del enfriamiento, la reacción se diluyó con 100 mililitros de heptano, se agitó durante 30 minutos, y se filtró. El sólido recuperado se suspendió en agua con agitación vigorosa, se sónico durante 5 minutos, y se volvió a aislar mediante filtración, para dar 3.1 milimoles (1.6 gramos) del compuesto del título como un sólido amarillo. MS m/z 524.7 (M+H)+.

Paso 3: Síntesis del compuesto del título.

Empleando el procedimiento general descrito en el Ejemplo 1, Paso 3, utilizando los materiales de partida apropiados, se aislaron 1.94 milimoles (0.82 gramos) del compuesto del título como un sólido de color gris. H RMN (400 MHz, DMSO): d 9.46 (s, 1 H), 8.83 (s, 1 H), 8.51 (s, 1 H), 8.13 (d, J= 8 Hz, 1 H), 8.00 (d, J = 4 Hz, 1 H), 7.41 (dd, J= 8 Hz, 4 Hz, 1 H), 6.89 (s, 1 H), 5.58-5.49 (m, 1 H), 3.04-3.01 (m, 4 H), 2.86-2.83 (m, 4 H), 2.51-2.44 (m, 2 H), 2.04-1.88 (m, 4 H), 1.68-1.63 (m, 2 H). 13C RMN (400 MHz, DMSO): d 162.06, 154.98, 152.85, 151.88, 145.73, 143.02, 135.43, 131.75, 125.02, 112.75, 111.18, 102.79, 55.96, 49.87, 45.48, 29.42, 24.21; HRMS calculado para C22H25D3N80. H+ (M+H)+ 424.2652, encontrado 424.2650.

Ejemplo 3: Síntesis de metil-(metil-d3)-am¡da del ácido 7-ciclopentil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-il-amino)-7H-pirrolo-[2,3- d]-pirimidin-6-carboxílico.

Paso 1: Síntesis de metil-(metil-d3)amida del ácido 2-cloro-7-ciclopentil-7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-6-carboxílico.

Empleando el procedimiento general descrito en el Ejemplo 1, Paso 1 , utilizando los materiales de partida apropiados, se aislaron 1.25 milimoles (0.39 gramos) del compuesto del título, como un sólido color rosado claro. MS m/z 296.4 (M + H) + .

Paso 2: Síntesis de terbutil-éster del ácido 4-[6-(7-ciclopentil-6-meti I- (metí l-d3)-carbamoil -7H -pirrólo- [2 ,3-d]-pirimi di ?-2-il-ami no) -piridin-3-il]-piperazin-1 -carboxílico.

Empleando el procedimiento general descrito en el Ejemplo 1, Paso 2, utilizando los materiales de partida apropiados, se aislaron 0.30 milimoles (0.16 gramos) del compuesto del título como un sólido amarillo claro. MS m/z 538.7 (M+H) + .

Paso 3: Síntesis del compuesto del título: Metil-(metil-d3)-amida del ácido 7-ciclopentil-2-(5-piperazin-1 - il-piridin-2-il-amino)-7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-6-carboxílico.

Empleando el procedimiento general descrito en el Ejemplo 1, Paso 3, utilizando los materiales de partida apropiados, se aislaron 0.17 milimoles (0.08 gramos) del compuesto del título como un sólido color bronceado. 1H RMN (400 MHz, DMSO): d 9.43 (s, 1 H), 8.77 (s, 1 H), 8.15 (d, J = 8 Hz, 1 H), 8.00 (s, 1 H), 7.41 (d, J = 8 Hz, 1 H), 6.60 (s, 1 H), 4.73 (br s, 1 H), 3.03 (br s, 7 H), 2.85 (br s, 4 H), 2.44 (br s, 2 H), 1.98 (br s, 4 H), 1.64 (br s, 2 ti). 13C RMN (400 MHz, DMSO): d 162.85, 154.73, 152.08, 151.18, 145.90, 142.93, 135.46, 131.72, 125.11, 112.58, 111.68, 100.59, 56.87, 49.89, 45.48, 29.66, 24.16; HRMS calculado para C23H27D3N8O.H+ (M + H)+ 438.2809, encontrado 438.2813.

DATOS BIOLÓGICOS Ensayo de la Actividad Enzimática de CDK4/ciclina D1 y CDK6/ ciclina D3 Se utilizó un ensayo de punto final de microtitulación de 384 pozos Lance TR-FRET (transferencia de energía de fluorescencia resuelta en el tiempo) para las mediciones de la actividad de cinasa de CDK4/ciclina D1 y CDK6/ciclina D3. Se utilizó el mismo ensayo para la determinación de la IC50 de los inhibidores de moléculas pequeñas. En general, las reacciones de cinasa se llevaron a cabo en volúmenes de 30 microlitros en la solución de la reacción que contenía los siguientes: 2 microlitros del compuesto (en sulfóxido de dimetilo (DMSO) al 20 por ciento), 18 microlitros de CDK4/ciclina D1 en regulador de ensayo (HEPES 50 mM, pH de 7.5, MgCI2 5 mM, MnCI22 mM, DTT 1 mM, albúmina de suero bovino (BSA) al 0.05 por ciento, Tween-20 al 0.02 por ciento), 10 microlitros de la mezcla de pRb152 y ATP. La mezcla de reacción final contuvo el compuesto (inhibidor), variando la concentración de 0.005 a 10 µ?, sulfóxido de dimetilo (DMSO) al 2 por ciento, CDK4/ciclina D1 o CDK6/ciclina D3 0.3 nM, pRb152 175 nM, y ATP 3 µ? (Amersham Pharmacia, Cat. No. 27-2056-01). Todas las reacciones se ejecutaron a temperatura ambiente en OptiPlates blancas de fondo plano de 384 pozos (Perkin Elmer, Cat. No. 6007290) durante 60 minutos, y entonces se apagaron mediante la adición de 10 microlitros de EDTA 120 mM. Las señales se capturaron mediante la adición de 40 microlitros de la Solución de Detección que contenía los siguientes: Regulador de Detección (HEPES 50 mM, pH de 7.5, EDTA 30 rriM, Tritón X-100 al 0.1 por ciento, albúmina de suero bovino (BSA) al 0.05 por ciento), 70 nanogramos/mililitro de anti-fosfo-pRb(S780) (Cell Signaling Technology, Cat. No. 9307S), Lance Eu-W1024-Conejo anti-lgG 1 nM (Perkin Elmer, Cat. No. AD0082), y Aloficocianina-Estreptavidina SureLightMR 20 nM (Perkin Elmer, Cat. No. CR130-100). Las soluciones resultantes se incubaron a temperatura ambiente durante 2 horas antes de leerse en el lector Envision Multilabel Reader (Perkin Elmer, Envision 2102-0010). Nota: IC50 < 0.005 nM o IC50 > 10 µ? indica que la verdadera IC50 está fuera del intervalo de detección.

La proteína recombinante de CDK4/ciclina D1 utilizada en el ensayo de actividad enzimática se preparó mediante la co-expresión de los virus pDEST10-CDK4 (His6 N-terminal) y pFastBacDual-GST-hCiclinaDI en células Sf21. La proteína sobre-expresada se purificó mediante afinidad de Ni-NTA >80 por ciento pura mediante HPLC de tamaños. El complejo enzimático de CDK6/ciclina D3 se adquirió en una fuente comercial (CarnaBiosciences, Cat. No. 04-107) Ensayo de Actividad Enzimática de CDK1/ciclina B Se utilizó un ensayo de punto final I M AP-FP R de microtitulación de 384 pozos (Molecular Devices Trade Mark Technology) para las mediciones de actividad de cinasa de CDK1/ciclina B. Se utilizó el mismo ensayo para la determinación de la IC50 de los inhibidores de moléculas pequeñas. En general, las reacciones de cinasa se llevaron a cabo en volúmenes de 20 microlitros en la solución de la reacción, la cual estaba compuesta de 2 microlitros del compuesto (en sulfóxido de dimetilo al 20 por ciento), 8 microlitros de CDK1/ciclina B en el Regulador de Reacción 1x (Molecular Devices, Cat. No. R8139), 10 microlitros de mezcla de sustrato Tamra de Histona-péptido H1 (Molecular Devices, Cat. No. R7384), y ATP (Amersham Pharmacia, Cat. No. 27-2056-01) en el Regulador de Reacción 1X con DTT 1 mM recién agregado. La mezcla de reacción final contiene el compuesto (inhibidor) variando la concentración desde 0.005 hasta 10 µ?, sulfóxido de dimetilo (DMSO) al 2 por ciento, CDK1/ciclina B 0.25 nM, Tamra Histona-péptido H1 100 nM, y ATP 20 µ?.

Todas las reacciones se ejecutaron a temperatura ambiente en placas Costar negras de fondo plano de 384 pozos (Corning, Cat. No. 3710) durante 120 minutos, y entonces se apagaron mediante la adición de 60 microlitros de Regulador A de Enlace Progresivo 1x diluido 400 veces (Molecular Devices, Cat. No. R8139). Las señales de polarización fluorescentes se leyeron en el Envision Multilabel Reader (Perkin Elmer, Envision 2102-0010) después de una incubación de 2 horas a temperatura ambiente. Nota: IC50 < 0.005 nM o IC50 > 10 µ? indica que la IC50 verdadera está fuera del intervalo de detección.

TABLA 1. ACTIVIDAD BIOLÓGICA Comparadores La presente invención incluye los compuestos deuterados de los compuestos descritos en la Publicación Internacional del TCP Número PCT/EP09/060793 (fecha de presentación internacional del 20 de agosto de 2009) (posteriormente en la presente, la solicitud '793), y reproducidos más adelante. El Comparador A, el cual se describe en la solicitud '793, es la dimetil-amida del ácido 7-ciclopentil-2-(5-piperazin-1 - il-piridin-2-il-amino)-7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-6-carboxílico, y es la versión no deuterada del Ejemplo 1. El Comparador B, el cual se describe en la solicitud '793, es la metil-amida del ácido 7-ciclopentil-2-(5-piperazin-1 -il-piridin-2-il-amino)-7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-6-carboxílico, y es la versión no deuterada del Ejemplo 2.

Estudios de Farmacología Empezando ya sea con el Ejemplo 1 o bien con el Comparador A, las ratas Sprague Dawley se dosificaron ya sea mediante inyección intravenosa (1 miligramo/kilogramo, n = 2) o bien mediante intubación oral (5 miligramos/kilogramo, n = 3), y se recolectaron muestras de sang re de hasta 7 horas. El plasma se separó, se congeló, y posteriormente se analizó . En el caso del Ejemplo 1 , el plasma se analizó para el Ejemplo 1 , y su metabolito de mono-meti lo, el Ejemplo 2. En el caso del Comparador A, el plasma se anal izó para el Comparador A, y su metabolito de mono-metilo, el Comparador B. La cuantificación de cada metabolito y su compuesto progenitor se hizo mediante LC-MS/MS con cu rves estándares utilizando estándares auténticos de cada compuesto . El anál isis permitió hacer la caracterización del perfil del tiempo-concentración y el cálculo de los parámetros farmacocinéticos (PK) por medio de los métodos no compartimentales. El l ímite más bajo de la cuantificación estuvo en general al rededor de 2 nM para estos compuestos .

Con el fin de comparar adecuadamente el metabolismo del Ejemplo 1 y del Comparador A, estos dos compuestos se dosificaron lado a lado en ratas a 1 miligramo/kilogramo intravenosamente (iv) , y a 5 miligramos/kilogramo oralmente (po) . La eli minación observada en la dosis de 1 mi ligramo/kilogramo intravenosamente (iv) para el Ejemplo 1 fue si milar a la del Comparador A, mientras q ue la VDss del Ejemplo 1 es aproximadamente 1 .6 veces más alta que la VDss del Comparador A, lo cual da como resultado vidas medias comparables de 3.2 horas y 2.3 horas , respectivamente. Con la dosis oral (po) de 5 miligramos/kilogramo, la biodisponibi lidad oral absoluta fue 1 .8 veces más alta para el Ejemplo 1 que para el Comparador A.

TABLA 2 PERFILES FARMACOCINETICOS (IV, 1 mg/kg, n = 2) TABLA 3 PERFILES FARMACOCINETICOS (PO, 5 mg/kg, n = 3) A partir del análisis de datos en la Tabla 4, la proporción de la exposición al plasma oral de AUC0-7h del Ejemplo 1 a su metabolito, Ejemplo 2, en una dosis de 5 miligramos/kilogramo es aproximadamente 4 veces más baja comparándose con sus versiones no deuteradas, Comparadores A y B, respectivamente. Esta diferencia significativa en las proporciones metabólicas indica una velocidad de conversión más lenta para el Ejemplo 1 hasta su metabolito comparándose con el Comparador A y su metabolito. Debido a que el sitio de deuteración también es el sitio del metabolismo in vivo, los grupos metilo de la funcionalidad de C6-amida, se puede concluir que el reemplazo de los hidrógenos con deuterios sobre la funcionalidad de dimetil-amida conduce a una reducción en el metabolismo in vivo, y un aumento en la exposición oral del compuesto progenitor.

TABLA 4 PROPORCIONES DEL METABOLISMO (PO, 5 mg/kg, n = 3)

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de acuerdo con la fórmula (I): en donde: R1 es hidrógeno, metilo, CH2D, CHD2, o CD3; y R2 es CH2D, CHD2, o CD3; o una sal del mismo.

2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde R1 es hidrógeno, metilo, o CD3; y R2 es CD3; o una sal del mismo.

3. El compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2, en donde la sal es una sal farmacéuticamente aceptable.

4. Una composición que comprende un compuesto de acuerdo con la reivindicación 3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.

5. Un método para el tratamiento de un trastorno o de una enfermedad mediada por CDK4/6, en un sujeto que necesite el tratamiento, el cual comprende la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 3, o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el trastorno o la enfermedad se selecciona a partir del grupo que consiste en linfoma de células de manto, mieloma múltiple, cáncer de mama, cáncer esofágico de células escamosas, liposarcoma, linfoma de células-T, melanoma, cáncer pulmonar no microcelular, y cáncer pancreático.

6. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, el cual es la dimetil-amida-d6 del ácido 7-ciclopentil-2-(5-piperazin-1 -il-piridin-2-il-amino)-7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-6-carboxílico, o una sal de la misma.

7. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, el cual es la metil-amida-d3 del ácido 7-ciclopentil-2-(5-piperazin-1 -il-piridin-2-il-amino)-7H-pirrolo-[2,3-d]-p¡rim¡din-6-carboxílico, o una sal de la misma.

8. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, el cual es la metil-(met¡l-d3)-amida del ácido 7-ciclopentil-2-(5-piperazin-1 -il-piridin-2-il-amino)-7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-6-carboxílico; o una sal de la misma.

9. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 6, 7, u 8, en donde la sal es una sal farmacéuticamente aceptable.

10. Una composición farmacéutica, la cual comprende un compuesto de acuerdo con la reivindicación 9, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable. 1 1 . U n método para el tratamiento de un trastorno o de una enfermedad mediada por C DK4/6, en un sujeto que necesite el tratamiento, el cual comprende la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 9, o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el trastorno o la enfermedad se selecciona a parti r del g rupo q ue consiste en l i nfoma de células de manto, mieloma múltiple, cáncer de mama, cáncer esofágico de células escamosas , liposarcoma, linfoma de células-T , melanoma, cáncer pulmonar no microcel ular, y cáncer pancreático.