MX2012008815A

MX2012008815A - Compuestos para uso en el tratamiento de enfermedades.

Info

Publication number: MX2012008815A
Application number: MX2012008815A
Authority: MX
Inventors: Andreas Kubin; Paul Furtmueller; Gerhard Wolber; Daniela Schuster
Original assignee: Inoxia Lifesciences Gmbh
Priority date: 2010-01-29
Filing date: 2011-01-28
Publication date: 2012-11-23
Also published as: AU2011208939A1; BR112012018772A2; WO2011091461A1; CN104958286A; EP2528595B1; EP2528595A1; EP2965755A1; CN104958286B; CN102858329B; AT509045A4; JP2013518061A; SG182786A1; AT509045B1; CA2788326A1; AU2011208939B2; CN102858329A; JP5788907B2; KR20120128644A; US20130065962A1

Abstract

La presente invención se refiere a un compuesto de la fórmula general (III): (Ver Formula) para uso en el tratamiento y/o prevención de enfermedades, en particular enfermedades inflamatorias, las cuales están relacionadas con eosinófilo peroxidasa, en donde R1 es CH2, NH, O, S o un enlace único, R2, R3, R4, R5 y R6 independientemente de entre sí son H, OH, F, Cl, Br, I o un grupo alquilo C1 a C5, y R7 es H, OH, NH2, NH-NH2 o CH3.

Description

COMPUESTOS PARA USO EN EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES Campo de la Invención La presente invención se refiere a compuestos para el tratamiento de enfermedades inflamatorias relacionadas con eosinóf iloperoxidasa .

Antecedentes de la Invención Las enzimas humanas de la clase de peroxidasas son parte de la defensa inmune no específica. Son liberadas en altas concentraciones en la defensa de microorganismos patogénicos y catalizan diversas reacciones de oxidación de bio-moléculas , de este modo intrusos, como bacterias y virus, son inactivados. En que, sin embargo, debido a una sobreproducción de estas proteínas, también existe frecuentemente daño oxidativo de los tejidos propios del cuerpo, y las inflamaciones son la consecuencia.

Por lo tanto, estas enzimas están asociadas con muchas enfermedades, las cuales juegan un papel significante en nuestra área cultural. Estas así llamadas enfermedades "auto inducidas por la enzima", en donde en particular proteínas MPO (mieloperoxidasa) y EPO (eosinofilo peroxidasa; número EC : 1.11.1.7) propias del cuerpo están asociadas con la patogénesis de muchas enfermedades inflamatorias (véase Tabla 1) . Además, la leche contiene lactoperoxidasa (LPO) , la cual tiene propiedades antimicrobianas y antioxidantes.

REF.: 233371 Tabla 1: Ejemplos para enfermedades "auto inducidas por la enzima", en el curo de la cual las peroxidasas están involucradas por sobre producción (véase también, Davies, MJ. et al. Antioxidants & Redox Signaling 10 (2008) 1199 - 1234) .

Enfermedad Enzima Asma (crónica) EPO Pulmón de fumador (COPD) MPO Alzheimer MPO Esclerosis Múltiple (MS) MPO, EPO Arteriosclerosis MPO Fibrosis quística EPO Colitis ulcerativa EPO Mastitis (med. vet . ) LPO Cáncer (después de EPO infecciones) Hipertensión (SIN signos) EPO Por lo tanto, es ventajoso desarrollar inhibidores específicos contra MPO y EPO, los más prominentes y más agresivos representativos de esta clase de enzimas, en los cuales los inhibidores subsecuentemente sirven como las bases para nueva medicación y terapias para enfermedades inflamatorias .

La EPO es considerada la causa principal para muchas enfermedades, en particular el curso crónico de asma bronquial. Con un inhibidor bien tolerable, por primera vez, podría proporcionarse un procedimiento de curación real para asma bronquial crónico. Algo similar aplica a esclerosis múltiple, colitis ulcerativa, fibrosis quística y otros procesos inflamatorios, en los cuales la EPO está involucrada como la causa principal. Estas enfermedades serias y en el mundo occidental altamente crecientes muestran principalmente un curso crónico y hasta ahora solo podrían ser tratadas con muy poco éxito.

La proteína eosinófilo peroxidasa propia del cuerpo (EPO, por sus siglas en inglés) es liberada, tan pronto como los eosinófilos (células blancas de la sangre, es decir, leucocitos) son estimulados (por ejemplo, después de la penetración de sustancias patogénicas o parásitos, es decir, infecciones) . De manera simultánea, existe una absorción incrementada de oxígeno en el fagosoma ("estallido respiratorio") en el complejo de oxidasa NADHP unido a la membrana, de este modo un número de especies de oxígeno reactivo (sobre todo superóxido) son liberadas. Subsecuentemente, estas son dismutadas en peróxido de hidrógeno (H202) y reducidas a agua por eosinófilo peroxidasa (Mitra, SN. et al. Redox Report 5 (2000) 215-224).

Con este sistema EPO/H202, por un lado, el papel fisiológico de la enzima toma efecto (defensa contra patógenos) , y por el otro lado, causa daño celular específico y no específico.

El daño al tejido no específico incluye la destrucción de células/paredes celulares, puesto que la EPO, debido a la carga positiva muy alta (pl>ll) , es capaz de penetrar la membrana lípida de las células. Por lo tanto, en su propio camino a las ubicaciones objetivo de la infección, la EPO destruye células así como también tejidos y de este modo causa inflamaciones.

Además, los eosinófilos contribuyen a la patogénesis de enfermedad controlada por alérgenos, como asma bronquial. El asma bronquial es una inflamación o sensibilidad incrementada, respectivamente, de las membranas mucosas de los bronquios, lo cual resulta en estrechamiento de las vías respiratorias. Esta fotografía clínica se basa en la estimulación de ciertas células de defensa, así llamadas células mástil, vía citocinas, como interleucina 5 (IL 5) . En el caso de asma, células mástil y granulocitos eosinofílieos son atraídos en el área bronquial. Estas células liberan sustancia (sobre todo histamina) , la cual, entre otras cosas, contrae los músculos de las vías respiratorias y estimula la producción de moco en los pulmones. Esta reacción principalmente toma lugar de manera muy rápida, dentro de .15 o 30 minutos después del contacto con la sustancia activadora y/o estrés. Después (dentro de dos a cuatro horas), las células inflamatorias (granulocitos eosinofílicos) entonces migran en las paredes de los bronquios y ahí causan la forma crónica (inflamación). Si estas células son estimuladas, liberan proteínas citotóxicas, las cuales promueven muchas de las características patológicas de asma: desnaturalización del epitelio pulmonar, destrucción de la morfología del epitelio, permeabilidad microvascular incrementada y edemas. Durante la formación de inflamación crónica, sin embargo, las moléculas son del mismo modo liberadas, las cuales están involucradas en la "remodelación" (regeneración) del tejido. Con ello, el tejido destruido es reproducido y la acumulación de tejido conectivo "inelástico" se previene.

El daño celular específico es causado por un número de productos de oxidación agresivos de EPO y radicales libres difusibles, los cuales son producidos en el sistema de reacción enzimático EPO/H202. Debido al extraordinario potencial rédox de un intermediario enzimático (Compuesto) , la EPO es capaz de oxidar diversas moléculas pequeñas . Estos sustratos enzimáticos fisiológicamente relevantes incluyen nitrito (N02~) , bromuro (Br~) así como también el pseudohaluro tiocianato (SCN~) . Subsecuentemente, se forman sustancias altamente reactivas, como radicales de dióxido de nitrógeno (?02·) , hipobromito (~OBr) así como también hipotiocianatao ("OSCN) o cianato (~OCN) , respectivamente. Además, se ha indicado que las consecuencias biológicas del sistema EPO/H202 son altamente específicas del sustrato. De este modo, la concentración de suero fisiológico del SCN" es sustancialmente superior (o puede ser favorablemente influenciada nutricionalmente , respectivamente) que aquella de Br" o N02". De este modo, por ejemplo, el producto de oxidación "OSCN activa el factor de transcripción NF-KB sustancialmente más fuerte que ?02· y por lo tanto tiene un efecto más pro-inflamatorio en el sistema de cinasa MAP (Wang, J. et al. Arch Biochem Biophys 445 (2006) 256-260). Ahora, estos productos de reacción altamente activos, por un lado, actúan como parte de la defensa inmune pasiva y atacan grandes parásitos penetrados en el cuerpo, de este modo cubren completamente el papel fisiológico de la EPO.

Por el otro lado, estas sustancias pueden atacar bio-moléculas grandes (por ejemplo, lípidos, proteínas, ADN, AR ) en reacciones no enzimáticas, con ello estas son modificadas en su estructura y/o funcionalidad. Los grupos nitro o bromo son integrados, especialmente en los grupos hidroxi y amino (bromo- y nitrotirosinas, bromohidrinas , bromoaldehídos , bromonucleótidos , peróxidos lípidos) . De este modo, por ejemplo, en el esputo de pacientes con asma, podrían ser detectadas 3 -bromotirosinas (biomarcadores) (Aldridge, CJ. et al. Free Radical Biology & Medicine 33 (2002) 6, 847-856) .

En otros casos, una conformidad significante de inflamaciones/infecciones crónicas y la patogénesis de cáncer pueden ser detectadas, las cuales pueden ser adscritas a daño oxidativo en el ADN (por ejemplo, Schistosoma haematobium y cáncer de la vejiga, u Opisthorcis vicerrini y colangiocarcinoma (cáncer del ducto biliar) (Mitra, SN. et al. Redox Report 5 (2000) 215-224).

Además, la EPO está involucrada en la bioquímica del vasoactivo, es decir, vasodilatación, sustancia de monóxido de nitrógeno (NO) , la cual juega un papel sustancial en la angiogénesis , regulación de la presión sanguínea, dilatación de los bronquios (es decir, en recién nacidos) así como también otros fenómenos fisiológicos. Se asume que el NO oxidado por el Compuesto I y Compuesto II de la EPO es liberado como NO+ y reacciona con superóxido a peroxinitrito (0N00") . A su vez, este compuesto altamente reactivo (un marcador para estrés oxidativo) ataca lípidos y proteínas, de este modo se forman nitrotirosinas y peróxidos lípidos. Por el otro lado, capturando NO, esta molécula de señal diatómica reguladora importante no está más disponible, de este modo funciones biológicas importantes (por ejemplo, como transmisor) no pueden ser más cubiertas completamente o solamente parcialmente completamente purificadas (Abu-Soud, HM. et al. Biochem 40 (2001) 11866-11875).

La incidencia de tales síntomas verifica que el plasma o concentración de tejido, respectivamente, de eosinófilo peroxidasa o su "huella", respectivamente, en productos de reacción (por ejemplo, lípidos bromados y proteínas) se correlaciona con el grado de la enfermedad. Los eosinófilos así como también eosinófilo peroxidasa se pueden encontrar en sangre, esputo, tejido bronquial y el lavado broncoalveolar de asmáticos, y hoy día sirve de medicina como un marcador cuantificable , directo, de asma así como también indicador indirecto de una inflamación y la respuesta de un paciente a terapias asmáticas.

El documento WO 2008/121670 describe pirimidinilhidrazidas y su uso en el tratamiento de asma bronquial .

El documento WO 00/073280 describe hidrazonas sustituidas con catequina y su uso en el tratamiento de asma bronquial .

El documento WO 2009/145360 se refiere a derivados de fenilo o tiofeno, respectivamente, los cuales del mismo modo pueden ser usados para el tratamiento de asma bronqui l .

El documento WO 2004/080377 describe fenilhidrazidas , las cuales son adecuadas para modular los canales de potasio en las células, con ello, entre otras cosas, pueden ser tratadas enfermedades como asma bronquial.

Los documentos US 2003/0225102 y WO 2002/006224 describen hidrazidas sustituidas con un sustituyente heterocíclico . Estos compuestos pueden ser usados para el-tratamiento de asma bronquial.

Los documentos WO 2007/026215, WO 2005/123688, DE 10 2006 005 179, US 5,571,846, EP 0 323 590, WO 01/032156, WO 2005/085185 y US 4,082,846 describen compuestos con una estructura de hidrazina, las cuales son adecuadas para uso en el tratamiento de muchas enfermedades diferentes.

Descripción Detallada de la Invención Es un objeto de la presente invención proporcionar compuestos, los cuales sean capaces de inhibir significantemente o completamente la actividad de eosinófilo peroxidasa.

De manera sorprendente, se encontró que ciertos compuestos como hidrazidas son capaces de inhibir la actividad de eosinófilo peroxidasa. Por lo tanto, la presente invención se refiere a compuestos de la fórmula general (III) : para uso en el tratamiento y/o prevención de enfermedades, en particular enfermedades inflamatorias, las cuales están relacionadas con eosinófilo peroxidasa, en donde Rx es CH2/ NH, 0, S o un enlace único, R2, R3, R , R5 y R6 independientemente de entre sí son H, OH, F, Cl , Br, l o un grupo alquilo Cx a C5 , y R7 es H, OH, NH2, NH-NH2 O CH3.

Un aspecto adicional de la presente invención se refiere a hidrazidas de la fórmula general (I) : para el tratamiento y/o prevención de enfermedades, en particular enfermedades inflamatorias, las cuales están relacionadas con eosinófilo peroxidasa, en donde, de conformidad con la invención, Rx es un compuesto heterocíclico (residuo heterocíclico) , como piridina, indol, pirazol o pirimidina, o un compuesto aromático (residuo aromático), como naftol, benceno o fenilaminoetano .

Para la actividad inhibidora de los compuestos de conformidad con la invención, el grupo amino terminal libre es ventajoso, el cual actúa como aceptor de electrón.

Además, sin embargo, propiedades estéricas y/o electroquímicas de este compuesto también son responsables del enlace y/o reacción enzimática de estos compuestos con EPO. Un modelo farmacof rico mostró que las sustancias de conformidad con la invención deben tener varias porciones (por ejemplo, donadores de enlace de hidrógeno, donadores de enlace de hidrógeno, áreas/anillos aromáticos, áreas hidrofóbicas) . A partir de esto resulta la siguiente estructura ejemplo, la cual también considera longitudes de enlace y dominio (II) : Anillo aromático/ Área hidrofóbica Distancia 1-4 A (A=Angstrom) Los compuestos de conformidad con la invención, en particular las fenilaminoetano hidrazidas (PAEHs) , las cuales son particularmente preferidas, y sus derivados corresponden a este modelo, en donde en este caso la distancia entre el anillo benceno y el grupo hidrazida de ácido es 2 . 65 Á El sustituyente Ri es CH2/ NH, O, S o un enlace único, y los sustituyentes R2, R3, R4, R5 y R6 son independientemente de entre sí H, F, Cl , Br, I o un grupo alquilo Cx a C5, R7 es H, OH, NH2, NH-NH2 o CH3.

Un papel clave central en la producción de las sustancias agresivas que dañan la célula -como ya se discutió inicialmente- lo juega la eosinófilo peroxidasa, EPO. Estos procesos, en particular procesos inflamatorios, en los cuales la EPO está involucrada, pueden ser inhibidos usando las sustancias de conformidad con la invención, de manera que pueden ser tratadas enfermedades, las cuales están relacionadas con eosinófilo peroxidasa.

Los compuestos de conformidad con la invención son selectivos para eosinófilo peroxidasa (presencia en células blancas de la sangre) y lactoperoxidasa homologa (presencia en leche materna y en saliva) . Estos compuestos, sin embargo, no son capaces de inhibir la mieloperoxidasa, en particular mieloperoxidasa humana, en la misma magnitud, lo cual permite el uso dirigido de estos compuestos como medicamentos específicos, selectivos contra EPO.

Debido al fuerte efecto inhibidor de las sustancias de conformidad con la invención, es en efecto posible desarrollar aplicaciones terapéuticas con dosificaciones muy bajas. En que, las concentraciones locales o sistémicas de aproximadamente 0.001 hasta 10 µ? pueden ser suficientes.

Los compuestos de conformidad con la invención son suficientemente conocidos por la persona experta y son manufacturados de conformidad con métodos conocidos (véase, por ejemplo, Finger, GC. et al . J Am Chem Soc 81 (1959) 94-101) . La mayoría de las N-arilglicinas son solo como sus ésteres, hidrazidas y otros derivados manufacturados por examinación biológica de su potencial tuberculostásico . Las p-alquilanilinas y p-ciclohexilanilinas son manufacturadas por medio de reacomodo Beckmann de oximas de las acetofenonas p-sus ituidas correspondientes. Las p-alcoxianilinas son manufacturadas por medio de alquilación de p-benzalaminofenol con haluros de alquilo y NaOH en etanol acuoso con hidrólisis subsecuente de las aldiminas con HC1 (Tien, NB . et al. Org Chem 23 (1958) 186-8) .

El término "enfermedades, en particular enfermedades inflamatorias, las cuales están relacionadas con eosinófilo peroxidasa" se refiere a enfermedades y condiciones, las cuales pueden ser atribuidas a una actividad incrementada de EPO en un individuo (véase, por ejemplo, Davies, MJ . et al. Antioxidants & Redox Signaling 10 (2008) 1199 - 1234; Wang, J. et al. Arch Biochem Biophys 445 (2006) 256-260; Mitra, SN. et al. Redox Report 5 (2000) 215-224). Tales enfermedades son por todos los medios conocidos por la persona experta, ya que esta fue también discutida inicialmente . La conexión entre la actividad de EPO y enfermedades, las cuales son una consecuencia de la actividad de EPO, es del mismo modo- suficientemente conocida por la persona experta. Por ejemplo, en el esputo de pacientes que sufren de asma bronquial, pueden ser detectadas 3-bromotirosinas (biomarcadores) usando GC- S (espectroscopia de masas por cromatografía de gas) , las cuales se formaron por modificación de proteínas por medio de ~OBr, un producto de oxidación de EPO (Aldridge, CJ. et al. Free Radical Biology & Medicine 33 (2002) 847-856) .

El hipotiocianato (~0SCN) o ?02·, respectivamente, productos de reacción de EPO, activan el factor de transcripción NF-?? y por lo tanto tienen un efecto pro-inflamatorio en el sistema de cinasa MAP. Ratones transgénicos (agénicos EPO) mostraron daño sustancialmente inferior por colitis ulcerativa. Esto también aplica a otras inflamaciones crónicas como enfermedad de Crohn o fibrosis quística (Wang, J. et al. Arch Biochem Biophys 445 (2006) 256-260) .

Enfermedades tumorales, también, pueden ser una consecuencia de la actividad de EPO incrementada, puesto que esto resulta en daño oxidativo del ADN, lo cual es causado por especies de oxígeno reactivas (por ejemplo, bromonucleótidos , oxígeno singlete) después de infecciones (por ejemplo Schistosoma haematobium y cáncer de la vejiga, u Opisthorcis vicerrini y colangiocarcinoma (cáncer del ducto biliar) (Mitra et al.' Redox Report 5 (2000) 215-224). Una designación alternativa para "enfermedades, en particular enfermedades inflamatorias, las cuales están relacionadas con eosinófilo peroxidasa" son enfermedades basadas en una actividad incrementada de EPO en el cuerpo, en donde la actividad incrementada se refiere a un individuo promedio que no sufre de algunas enfermedades que representan una consecuencia de actividad EPO incrementada.

Por migración de EPO o sus productos de oxidación reactivos ("OBr o ?02·, respectivamente), respectivamente, capas dobles lípidas así como también proteínas de la membrana y paredes celulares son modificadas (bromo y nitrotirosinas, peróxidos lípidos) , desintegradas y finalmente destruidas (Wang, J. et al. Arch Biochem Biophys 445 (2006) 256-260) . De este modo resulta en daño al tejido y necrosis. Usando los inhibidores selectivos, el efecto de tejido dañado de la EPO es prevenido y simultáneamente, sin embargo, la función que forma el tejido de los granulocitos eosinofílieos se mantiene. De este modo, por ejemplo, el curso así irreversible y crónico de asma bronquial (inhibidor de EPO) puede ser detenido, y aún un procedimiento de curación puede ser dado dentro de este nuevo grupo de fármaco.

Los compuestos de conformidad con la invención comprenden, entre otros, sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables, por las cuales de conformidad con la invención tales sales deben ser entendidas, las cuales son seleccionadas de las sales de ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido metansulfónico, ácido acético, ácido fumárico ácido succínico, ácido láctico, ácido cítrico, ácido tartárico y ácido maleico, en donde las sales de ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico y ácido acético son particularmente preferidas. encontró que es ventajoso, si el R7 tiene un grupo amino libre, preferiblemente un grupo hidrazida. Los grupos amino de tales compuestos de las fórmulas generales (I) o (Illa) , respectivamente, y (IV) son ventajosos por su efecto como inhibidor EPO. Es decir, los compuestos de conformidad con la invención deben tener el grupo amino libre en el sitio de acción. Si es posible, sin embargo, para incrementar la tolerabilidad de los compuestos de conformidad con la invención, proporcionar el grupo amino con un grupo protector, el cual es removido en el sitio de acción, si es necesario (concepto de profármaco) . Por su puesto, el R7 de los compuestos de la fórmula general (III) puede también ser residuos H, OH o CH3. Tales compuestos, también, son capaces de inhibir la eosinófilo peroxidasa con alta efectividad. conformidad con una modalidad particularmente preferida de la presente invención, Rx es NH, en donde la hidrazida tiene la fórmula general (IV) : De conformidad con una modalidad preferida de presente invención, el grupo alquilo Ci a C5 se selecciona a partir del grupo que consiste de CH3 y CH2CH3.

De conformidad con una modalidad preferida de la presente invención, Rx es CH2, NH, 0 u S, particularmente preferido NH u O, R2 es F o H, R3 es Cl , Br o H, R4 es Cl, F, CH3 o H, R5 y R6 son H, y R7 es OH o NH-NH2.

De conformidad con una modalidad particularmente preferida de la presente invención, el compuesto (III) de conformidad con la invención tiene los siguientes sust ituyentes (véase la Tabla A) : Tabla A: ?? ?? 61 De conformidad con una modalidad preferida de la presente invención, el compuesto se selecciona a partir del grupo que consiste de 2-fluoro-fenilaminoetan-hidraz ida , 4-fluoro- feni lami oetan-hidrazida, 2 , 4 -di - f luoro- feni laminoetan-hidraz ida , 4-c loro - feni laminoetan- hidraz ida , 3-cloro-4-f luoro-feni laminoetan-hidraz ida , 3 -bromo -4-fluoro-fenilaminoetan-hidrazida, 4 -met il - feni laminoetan-hidrazida, feni laminoetan-hidraz ida , 2-[(4-c lorofeni 1 ) sul fani 1 ] acetohidraz ida , 2- (4-f luorofenoxi ) acetohidraz ida , 2- (2-bromofenoxi ) acetohidrazida, - (2-fluorofenil)glicina, ácido 2- [ (4-clorofenil) amino] acético y 3-(2-hidro if enil ) ropanohidrazida .

Con los compuestos de conformidad con la invención, pueden ser tratadas en particular enfermedades inflamatorias, la causa de la cual se puede encontrar en actividad de EPO excesiva. Los granulocitos eosinofí lieos y EPO son componentes de la defensa inmune no específica. Particularmente en el caso de procesos inflamatorios existen acumulaciones de estas células blancas de la sangre, las cuales también pueden causar inflamaciones crónicas. La enfermedad inflamatoria preferiblemente se selecciona a partir del grupo que consiste de asma bronquial, esclerosis múltiple, fibrosis quística, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, rinitis, endometriosis , sinusitis, esofagitis eos inof í 1 ica , síndrome de Shulman (fascitis eosinofí lica) , endocarditis, síndrome de Churg-Strauss , dermatosis, preferiblemente herpes gestacional o dermatosis eos inof íl ica , enfermedad Hand- Schül 1 er -Christian (ASCD, por sus siglas en inglés) , enfermedades cardiovasculares preferiblemente endocarditis e hipertensión debido a procesos inflamato ios de las paredes vasculares.

La revisión sobre enfermedades ejemplares causadas por eosinóf ilo peroxidasa (EPO) , o en el curso del cual la EPO está involucrada, respectivamente: (1) Davies MJ, et al . Antioxidants & Redox Signaling. 10, 2008:1199-1234. (2) Wozel G . Hautarzt 58, 2007:347-359. (3) Blumenthal RD . et al . , Ex . Rev. Mol. Med. 3, 2001:1-12. (4) Mitra SN, et al . Redox Re . 5, 2000:215-224. (5) Wang J, et al . Arch Biochem Biophys 445, 2006:256-260. (6) Forbes E, et al . J Immunology 172, 2004:5664-5675. (7) Heinecke J . J Clin Invest. 105, 2000:1331- 1332. (8) Corry DB, et al . Immunol Res. 33, 2005:35-52. (9) Bernardes JF, et al . Otolaryngol Head Neck Surg. 131, 2004:69-703. (10) Bachert C, et al . Acta Otorhinolaryngol Belg. 51, 1997:209-217. (11) Straumann A, et al . Schweiz Med Forum 8, 2008 :724-728. (12) Akanay-Diesel S, et al. Der Hautarzt 60, 2009 :278-281. (13) Slungaard A, et al . J Exp Med. 173, 1991:117- 126. (14) Eustace JA, et al . J Am Soc Nephrol 10, 1999:2048-2055. (15) Janeway's Immunobiology, ISBN 0-8153-4123-7, Garland Science, Taylor & Francis Group, 2008, 7th Edition: 566-583. (16) Nielsen LP, et al. Allergy 64, 2009:733-337. En varios órganos y tejidos inflamados así como también secreciones obtenidas a partir de estos, la EPO y/o sus productos de reacción (por ejemplo, nitrados, lípidos bromados, proteínas, ADN) podrían ser detectados. De este modo, por un lado, verifica la respuesta inmune pasiva por EPO dentro del ámbito de la fagocitosis, por el otro lado, también muestra masivamente el efecto que destruye el tejido de EPO y sus productos de reacción. Por ejemplo, en el esputo de pacientes con asma, la EPO podría ser detectada radio-inmunológicamente , así como también 3 -bromotirosina por medio de espectroscopia de ' masa por cromatografía de gas (GC-MS) (Aldridge et al. Free Radical Biology & Medicine 33 (2002) 847-856) .

En un modelo animal (rata) , se demostró que, en la presencia de bromuro, la EPO es una causa de endocarditis (Slungaard, A. et al. J Exp Med. 173 (1991) 117-26). La endocarditis es una inflamación de la membrana interna del corazón que reviste las cavidades cardiacas y la porción de las arterias y cierra venas al corazón y también forma la estructura de los velos de las válvulas cardiacas. En principio, cada ser humano puede venirse abajo con endocarditis, y no tratada, el curso de la enfermedad es mayormente fatal. Los antibióticos pueden ser usados para el tratamiento de endocarditis.

Además, la colitis ulcerativa es una enfermedad causada por la EPO. Wang et al. observa que ratones libres de EPO (línea de ratón agénico por EPO) comparados con el tipo nativo a penas se vienen abajo con colitis ulcerativa. La enfermedad de Crohn, también, es una enfermedad inflamatoria crónica del área intestinal, la cual está asociada con la defensa inmune no específica y la EPO (Wang, J. et al. Arch Biochem Biophys 445 (2006) 256-260) .

En enfermedades alérgicas como rinitis (inflamación de la mucosa nasal) , también, la EPO está decisivamente involucrada (Hrdlickova, B. et al. Int Arch Allergy Immunol. 150 (2009) 184-91) .

Además, la EPO está involucrada en el desarrollo de enfermedades de la piel (dermatosis) , como herpes gestacional, una enfermedad autoinmune de ampollas en desarrollo dentro del ámbito del embarazo. La dermatosis eosinofílica frecuentemente también ocurre en otros mamíferos (perros, gatos) (Scheman, AJ. et al. Arch Dermatol . 125 (1989) 1079-83) .

El linfoma de Hodgkin (sinónimo: enfermedad de Hodgkin o linfogranulomatosis , abreviada HD) es un tumor maligno del sistema linfático. En examinaciones con anticuerpos monoclonales radioactivamente etiquetados contra la EPO directamente en el sitio del tumor, se mostró que la EPO está involucrada en la apoptosis (Samoszuk, MK. et al. J Nucí ed. 34 (1993) 1246-53) .

La enfermedad Hand-Schüller-Christian (HSCD) afecta principalmente a niños de 2 a 5 años, adolescentes y adultos de edad media. Esta forma constituye aproximadamente 15-40% de histiocitosis de células langerhans. En aproximadamente 30% de las personas afectadas, existe infestación sistémica que afecta el hígado, bazo, pulmones, piel y nodos linfáticos. La tríada clásica Hand-Schüller-Christian con lesiones óseas, exoftalmos y diabetes insípida ocurre preferentemente rara vez. Con infestaciones sistémicas de órganos múltiples, existe un mal pronóstico y la necesidad de una quimioterapia agresiva y posiblemente transplante de células troncales. De otro modo, la enfermedad puede retroceder en sí misma, si es necesario con quimioterapia. En estudios, se determinó una liberación masiva de EPO. Finalmente, la EPO es la causa del daño masivo al tejido causado dentro del ámbito de esta enfermedad (Zabucchi, G. et al. J Pathol. 163 (1991) 225-31).

Los compuestos de conformidad con la invención pueden ser administrados en una manera diferente. Dependiendo de la enfermedad, los compuestos pueden ser administrados sistémicamente o localmente. Los compuestos de conformidad con la invención, en particular fenilaminoetan-hidrazida (PAEH) o sus derivados, respectivamente, por lo tanto preferiblemente son formulados en una forma de dosificación intravenosa, intracavitaria, oral, intraperitoneal , inhalación y tópica.

De conformidad con el tipo de administración, el compuesto de conformidad con la invención, en particular fenilaminoetan-hidrazida o sus derivados, respectivamente, están preferiblemente presentes en la forma de una infusión, tableta, cápsula, crema, gel, emulsión o parche.

Dependiendo de la forma de dosificación, la composición farmacéutica de conformidad con la invención comprende, además de los compuestos de conformidad con la invención, excipientes, como, por ejemplo, agentes desintegrantes y estabilizadores, portadores y diluyentes.

Ejemplos para excipientes comunes, portadores y diluyentes son gelatina, azúcares naturales (como sacarosa o lactosa, lecitina, pectina, almidón (por ejemplo, almidón de maíz) así como también derivados de almidón, ciclodextrinas y derivados de ciclodextrinas, polivinilpirrolidona, gelatina, goma arábiga, ácido algínico, tilosa, talco, licopodio, ácido salicílico (por ejemplo, coloidal) , fructuosa, tragacanto, cloruro de sodio, estearatos, sales de magnesio y calcio de ácidos grasos con 12 a 22 átomos de C, en particular de los saturados (por ejemplo, estearatos) , polietilenglicol con un peso molecular medio entre 200 y 20,000, preferiblemente entre 200 y 5,000, en particular entre 200 y 1,000, o sus mezclas, y/o polimerizados de vinilpirrolidona y/o polimerizados mezclados de vinilpirrolidona y vinilacetato . Esteres de ácidos grasos alifáticos saturados o insaturados (2 a 22 átomos de C, en particular 10 a 18 átomos de C) con alcoholes alifáticos monovalentes (1 a 20 átomos de C) o alcoholes mult ivalentes como glicoles, gliceroles, dietilenglicol , pentaeritritol , sorbitol, manitol, etc., los cuales también pueden ser eterificados, si es necesario, bencilbenzoato, dioxolanos, glicerol formales, tetrahidrofurfurilalcohol , poliglicoléter con alcoholes de Ci a C12, dimetilacetamida, lactamidas, lactatos, etilcarbonatos , siliconas (en particular polidimetilsiloxanos viscosos medios) , carbonato de calcio, carbonato de sodio, fosfato de calcio, fosfato de sodio, carbonato de magnesio, goma arábiga, ácido algínico, estearatos, grasas y sustancias con un efecto similar. Para soluciones, como por ejemplo, infusiones, pueden ser usados varios sistemas amortiguadores.

Un aspecto adicional de la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto similar al descrito en la presente para el tratamiento y/o prevención de enfermedades, en particular enfermedades inflamatorias, las cuales están relacionadas con eosinófilo peroxidasa.

La composición farmacéutica de conformidad con la invención está preferiblemente presente en la forma de una infusión, tableta, cápsula, crema, gel, emulsión o parche.

Un aspecto todavía adicional de- la presente invención se refiere al uso de los compuestos de conformidad con la presente invención para la manufactura de medicamento para el tratamiento y/o prevención de enfermedades, en particular enfermedades inflamatorias, las cuales están relacionadas con eosinófilo peroxidasa.

Un aspecto adicional de la presente invención se refiere a un método para el tratamiento y/o prevención de enfermedades, en particular enfermedades inflamatorias, las cuales están relacionadas con eosinófilo peroxidasa, por administración de uno o varios de los compuestos de conformidad con la invención.

La presente invención se explica en más detalle con base en los siguientes ejemplos, sin embargo, sin ser restringidos a estos.

EJEMPLOS : Ejemplo 1: Para probar en que extensión las sustancias de conformidad con la invención son capaces de inhibir la EPO, las sustancias se probaron por su potencial inhibidor. En que, el valor IC50 se determinó como un parámetro comparable. En que, el IC5o es tal concentración inhibidora, la cual se requiere para inhibir una enzima, aquí EPO, por 50%. Esta concentración se determina UV/Vis espectrofotométricamente a 290 nm en el estado listo con un ensayo monoclorodimedon (MCD) .

Determinación del efecto inhibidor Determinación del valor IC50 La eosinófilo peroxidasa forma una multiplicidad de diferentes intermediarios enzimáticos y es capaz de catalizar un alto número de reacciones rédox. El papel fisiológico de la EPO es la oxidación de bromuro o tiocianato, respectivamente, a ácido hipobromoso o hipotiocianato , respec ivamente (también llamado ciclo de halogenación) . Y es exactamente esta reacción que tiene que ser inhibida. En la presencia de sustancias fenólicas, sin embargo, la enzima puede sufrir el así llamado ciclo peroxidasa.

Para determinar las propiedades de las sustancias de conformidad con la invención a ser ¿nhibidas, se usó un método, en el cual se examina la actividad de bromación.

Actividad de Bromación La extensión de inhibición de la oxidación de bromuro fisiológico fue fotométricamente determinada usando monoclorodimedon. La velocidad de halogenación (inclinación inicial de la curva a 290 nm) con inhibidor se relaciona a un valor blindado (sin inhibidor) , y a partir de este se determina la tasa de inactivación (en %) . Este se ingresó en un diagrama (eje y) opuesto a la concent ación inhibidora (eje x) , y a partir del ajuste hiperbólico de la curva. Se determinó el valor IC50 para cada inhibidor. 100 raM de amortiguador de fosfato, pH 7.0 100 µ? de monoclorodimedon 100 mM de bromuro 20 nM de EPO 100 µ? de HOOH 0.001 - 500 µ? de inhibidor Feni laminoetan-hidrazidas En la examinación de varios grupos de sustancias, las cuales debido a su estructura presumiblemente se ajustan el centro catalítico de la EPO (y el LPO homólogo) , y también inhiben la actividad, resultó que el grupo de sustancia de las fenilaminoetan-hidrazidas (III) , pero en particular de sus derivados y derivados halogenados de los mismos, son inhibidores selectivos muy buenos de la EPO. Ejemplos para derivados respectivos, pero sobre todo derivados halogenados, tienen que ser declarados como sigue: con base a varios ejemplos, la Tabla 2 muestra la selectividad de las fenilaminoetan-hidrazidas para EPO (y también para la LPO homólogo) , pero o para MPO Tabla 2: Ejemplo para derivados de fenilaminoetan-hidrazida y el inhibidor potencial (IC50: concentración a la cual se inhiben 50% de la actividad enzimática) El compuesto (3) 2 - f luorofeni 1 -NH-etanhidraz ida tiene un valor IC50 para la EPO de 0.009 µ?, pero para MPO un valor IC50 sustancialmente superior de 1.900 u 8.800 µ?, respectivamente. Es decir, esta sustancia representa un inhibidor muy bueno para EPO, pero no para MPO de la misma familia enzimática de peroxidasas humanas.

Además, se puede recuperar de la Tabla 2 que los derivados de fenilaminoetan-hidrazida halogenados tiene un efecto inhibidor más fuerte que los no halogenados.

El compuesto (6) fenilaminoetan-hidrazida muestra un valor IC50 de 2.290 µ? . Este potencial puede ya resultar en aplicación terapéutica como inhibidor, con buena tolerabilidad. Sin embargo el número de ejemplo (3) 2 - f luorofenil -NH-etanhidrazida muestra más de 200 veces el potencial con un valor IC50 de 0.009 µ . Con ello, son posibles concentraciones terapéuticas muy bajas, los cuales de este modo también minimizan efectos secundarios indeseados que se originan posiblemente.

Ejemplo 2: En una serie de pruebas adicionales, se examinó en qué medida sustancias adicionales de la fórmula general (I) son capaces de inhibir la actividad de la EPO. Como un ejemplo, se usó isoniazida (piridin-4 -carbohidrazida) , en la cual Rx en la fórmula general (I) representa un residuo piridina. Las pruebas se realizaron como se representa en Isoniazida Isoproniazida Se determinó que la isoniazida tiene un valor IC50 de 6.04 µ?.

Para examinar la influencia del grupo amino libre en el residuo hidrazida de la fórmula general (I) en las propiedades inhibidoras de las sustancias de conformidad con la invención se examinó una EPO, un derivado de isoniazida, es decir N' - isopropilisonicotinohidrazida ( iproniazida) . En que, se determinó de manera sorprendente que la iproniazida tiene un valor IC50 de más de 500 µ? .

Esto verifica que para la fuerte inhibición de la actividad de la EPO, además de otras propiedades (II), el grupo amino libre de las sustancias de conformidad con la fórmula general (I) es decisivo en cualquier caso. Esto podría ser demostrado de manera imprecisa en el Ejemplo de las sustancias estructuralmente relacionadas isoniazida e iproniazida. La derivatización de los grupos amino libre resulta en una pérdida de la intensidad inhibidora.

Ej emplo 3 : En una serie de pruebas adicionales, las cuales se realizaron de conformidad con el mismo protocolo como se declara en el Ejemplo 1, compuestos adicionales de conformidad con la invención se examinaron por sus capacidades para inhibir la eosinófilo peroxidasa. Los resultados de estas pruebas y los compuestos usados aquí pueden ser recuperados de la siguiente tabla.

Ejemplo 4: Para mostrar el efecto farmacológico de los compuestos de conformidad con la invención, pueden ser usados modelos animales. Usando modelos animales, es posible verificar por medio de experimentos, en qué medida tienen efectos respectivos los agentes farmacológicamente activos. 1. Asma bronquial Varios aspectos son responsables para manifestación y progreso del asma bronquial (1) : alérgenos estrés emocional, ejercicio físico, aire frío y todas las combinaciones de estos factores. La respuesta patofisiológica es muy compleja, pero existe un "hilo rojo" a nuestro objetivo EPO. Las células T-auxiliadoras 2 (Th2) resultan en liberación de interleucina , en particular IL-5, la cual causa la liberación de eotaxinas . Esto resulta en la migración de granulocitos eosinofílieos al sitio de acción del pulmón. Los niveles IgE incrementados y receptores IgE en los eosinófilos con la alergia resultan en desgranulación y liberación de proteínas con una porción al 60% de EPO. La EPO cataliza la oxidación de haluros y tiocianato, en donde se forman productos de oxidación altamente reactivos, los cuales son liberados para la defensa contra parásitos y microorganismos, pero (en caso de asma y otras enfermedades crónicas) , también tienen un efecto destructor del tejido.

Por lo tanto se requiere un "modelo crónico" , en donde debe ser verificado si este mecanismo también toma lugar y es aproximado a los cursos humanos. Con este modelo, el efecto de los inhibidores de la EPO puede también ser probado .

Para verificación del efecto, se usan modelos animales respectivos los cuales, sin embargo especialmente en conexión con el asma y EPO son complejos.

Procedímiento : Ratones Balb/c con un peso corporal de 18-21 g se mantuvieron en una fase de aclimatación de una semana.

Se conoce la irrelevancia de ovalbúmina e inducción de asma (inflamación alérgica de las vías respiratorias), por lo tanto la estimulación toma lugar con ácaros del polvo domésticos o polen de césped. Durante 7 semanas, el alérgeno es aplicado transnasalmente todos los días. Esta estimulación resulta directamente en síntomas de asma con AHR (hipersensibilidad aguda de las vías respiratorias) e inflamación eosinofílica de las vías respiratorias (Johnson et al. 2004, Am J Respir Crit Care Med 169:378-385; Johnson et al. 2008, Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 295:L780-L788) .

Usando ELISA, parámetros de inflamación granulocitos eosinofílieos y EPO son finalmente medidos en el sobrenadante BALB (líquido broncoalveolar) . Donde la EPO está activa, estos individuos son divididos en grupos de terapia y control . Los grupos de terapia recibieron los compuestos de conformidad con la invención (1-10 mg/kg KG diariamente) , mientras el grupo de control recibió un placebo. Como parámetros para el desarrollo de alergia e inflamación crónica de las vías respiratorias y pulmón, entre otras cosas, se usa el número de exacerbaciones (ataque severo) y la extensión de la AHR. Un tercer grupo puede ser tratado con dexaraetasona (entre otros) en una manera convencional. 2. Rinitis y sinusitis Los efectos de los compuestos de conformidad con la invención con enfermedades de los senos paranasales y huesos etmoides pueden ser determinados con el mismo modelo animal como asma bronquial . 3. Endometriosis Modelos .animales para la prueba de efectividad de fármacos candidatos para endometriosis son bien establecidos y fácilmente de realizar. Rata (Neto JN, Coelho TM, Aguiar GC, Carvalho LR, de Araújo AG, Girao MJ, Schor E. Experimental endometriosis reduction in rats treated with Uncaria tomentosa (cat's claw) extract. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol . 2010 Oct 26.) y ratón (Lu Y, et al. Hum Reprod. 25 (2010) : 1014-25) son los animales de prueba más comunes. En que, fragmentos humanos de tejidos de endometriosis son transplantados en los animales de prueba. Después de un periodo de adaptación de tres a cuatro semanas, los compuestos de conformidad con la invención pueden ser "simplemente" probados y comparados con un grupo de placebo o con un grupo tratado con una terapia convencional, respectivamente. 4. Endocarditis Es una enfermedad infecciosa de la membrana interna del corazón y puede ser bien simulada en el modelo de rata (Singh KV, et al. PLoS Pathog. 2010 Jan 8 ; 6 ( 1) : el000716 ) . 5. Enfermedades intestinales inflamatorias crónicas (enfermedades inflamatorias del intestino, por ejemplo: enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa) En que, células del colón se tomaron de ratones y prepararon para examinaciones adicionales. (Weigmann B, et al. Nat Protoc 2 (2007) : 2307-11.) . En que, la actividad de peroxidasa puede ser probada usando un ensayo de MCD enzimático (monoclorodimedon) , o siguiendo la separación electroforética como teñido activo en el gal. 6. Fibrosis quística Pruebas fácilmente realizables con ratones. Puesto que la fibrosis quística está también asociada con la infección, los animales de prueba son infectados y tratados después del brote de la enfermedad (fármaco candidato placebo - convencional) (Wang Y, et al. Respir Res. 2010 Nov 30;11:166; Guilbault C, et al. Lab Anim. 2005 Jul ; 39 (3) :336-52) .

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Un compuesto de la fórmula general (III) : para usarse en el tratamiento y/o prevención de enfermedades, en particular enfermedades inflamatorias, las cuales están relacionadas con eosinófilo peroxidasa, en donde Rx es CH2 , NH , O, S o un enlace único, R2 , R3 , 4 , R5 y R6 independientemente de entre sí son H, OH, F, Cl, Br, I o un grupo alquilo Cx a C5, y R7 es H, OH, NH2, NH-NH2 o CH3.

2. Compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque Rx es NH y R7 es NH-NH2 y el compuesto tiene la fórmula general (IV)

3. Compuesto de conformidad con las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque el grupo alquilo Ci a C5 se selecciona a partir del grupo que consiste de CH3 y CH2CH3.

4. Compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque Ri es CH2, NH, 0 u S, R2 es F o H, R3 es Cl, Br o H, R4 es Cl, F, CH3 o H, R5 y R6 son H, y R7 es OH o NH-NH2.

5. Compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque el compuesto se selecciona a partir del grupo que consiste de 2-fluoro-fenilaminoetan-hidrazida, 4 -fluoro-fenilaminoetan-hidrazida, 2 , 4 -di-fluoro-fenilaminoetan-hidrazida, 4-cloro-fenilaminoetan-hidrazida, 3 -cloro-4 - fluoro- fenilaminoetan-hidrazida, 3-bromo-4-fluoro-fenilaminoetan-hidrazida, 4-metil-fenilaminoetan-hidrazida, fenilaminoetan-hidrazida , 2- [ (4-clorofenil) sulfanxl] acetohidrazida, 2- (4-fluorofenoxi) acetohidrazida, 2- (2 -bromofenoxi ) acetohidrazida, N- (2-fluorofenil) glicina, ácido 2-[(4-clorofenil) amino] acético, y 3- (2-hidroxifenil ) propanohidrazida .

6. Compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque la enfermedad inflamatoria se selecciona a partir del grupo que consiste de asma bronquial, esclerosis múltiple, fibrosis quística, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, rinitis, endometriosis , sinusitis, esofagitis eosinofílica, síndrome de Shulman (fascitis eosinofílica) , endocarditis, síndrome de Churg-Strauss , dermatosis, preferiblemente herpes gestacional o dermatosis eosinofílica, enfermedad Hand-Schüller-Christian (ASCD) , enfermedades cardiovasculares preferiblemente endocarditis e hipertensión debido a procesos inflamatorios de las paredes vasculares.

7. Compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque el compuesto se proporciona en una forma de dosificación intravenosa, intracavitaria , oral, intraperitoneal , inhalación y tópica.

8. Compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque el compuesto está presente en la forma de una infusión, tableta, cápsula, crema, gel, emulsión o parche.

9. Compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque el compuesto se administra a una cantidad de 0.01 a 2,000 mg/kg de peso corporal, preferiblemente 0.1 a 1,000 mg/kg de peso corporal, todavía más preferido 0.1 a 500 mg/kg de peso corporal.

10. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende al menos un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para el tratamiento de enfermedades, en particular enfermedades inflamatorias, las cuales están relacionadas con eosinófilo peroxidasa.

11. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada porque la enfermedad inflamatoria se selecciona a partir del grupo que consiste de asma bronquial, esclerosis múltiple, fibrosis quística, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, rinitis, endometriosis , sinusitis, esofagitis eosinofílica, síndrome de Shulman (fascitis eosinofílica) , endocarditis, síndrome de Churg-Strauss , dermatosis, preferiblemente herpes gestacional o dermatosis eosinofílica, enfermedad Hand-Schüller-Christian (ASCD) , enfermedades cardiovasculares preferiblemente endocarditis e hipertensión debido a procesos inflamatorios de las paredes vasculares.

12. Composición farmacéutica de conformidad con las reivindicaciones 10 u 11, caracterizada porque el compuesto es proporcionado en una forma de dosificación intravenosa intracavitaria , oral, intraperitoneal , inhalación y tópica.

13. Composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12, caracterizada porque el compuesto está presente en la forma de una infusión, tableta, cápsula, crema, gel, emulsión o parche.

14. Uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para la manufactura de medicamento para el tratamiento y/o prevención de enfermedades, en particular enfermedades inflamatorias, las cuales están relacionadas con eosinofilo peroxidasa.

15. Uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para inhibición de la eosinofilo peroxidasa.