MX2012002333A - Metodo para el diagnostico y/o pronostico de daño renal agudo. - Google Patents
Metodo para el diagnostico y/o pronostico de daño renal agudo.Info
- Publication number
- MX2012002333A MX2012002333A MX2012002333A MX2012002333A MX2012002333A MX 2012002333 A MX2012002333 A MX 2012002333A MX 2012002333 A MX2012002333 A MX 2012002333A MX 2012002333 A MX2012002333 A MX 2012002333A MX 2012002333 A MX2012002333 A MX 2012002333A
- Authority
- MX
- Mexico
- Prior art keywords
- expression
- mir
- acute renal
- renal damage
- cells
- Prior art date
Links
- 230000006378 damage Effects 0.000 title claims abstract description 62
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 title claims abstract description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 claims abstract description 66
- 108091028076 Mir-127 Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 108091048308 miR-210 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 108091028066 Mir-126 Proteins 0.000 claims abstract description 24
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 claims description 68
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 43
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 22
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 14
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 13
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 7
- 230000004075 alteration Effects 0.000 claims description 5
- 238000002493 microarray Methods 0.000 claims description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 claims description 3
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 72
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 62
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 56
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 56
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 56
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 36
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 36
- 208000009304 Acute Kidney Injury Diseases 0.000 description 23
- 208000033626 Renal failure acute Diseases 0.000 description 23
- 201000011040 acute kidney failure Diseases 0.000 description 23
- 208000012998 acute renal failure Diseases 0.000 description 22
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 20
- 230000007959 normoxia Effects 0.000 description 17
- 235000021232 nutrient availability Nutrition 0.000 description 15
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 13
- 206010063897 Renal ischaemia Diseases 0.000 description 11
- 208000022638 pyogenic arthritis-pyoderma gangrenosum-acne syndrome Diseases 0.000 description 10
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 9
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 9
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 9
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 6
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 5
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 5
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 4
- 208000003918 Acute Kidney Tubular Necrosis Diseases 0.000 description 3
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 3
- 206010038540 Renal tubular necrosis Diseases 0.000 description 3
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 3
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 3
- 230000008378 epithelial damage Effects 0.000 description 3
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 208000010496 Heart Arrest Diseases 0.000 description 2
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 102000003661 Ribonuclease III Human genes 0.000 description 2
- 108010057163 Ribonuclease III Proteins 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 2
- 238000007675 cardiac surgery Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000003831 deregulation Effects 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 201000006474 Brain Ischemia Diseases 0.000 description 1
- 208000007204 Brain death Diseases 0.000 description 1
- 102100025248 C-X-C motif chemokine 10 Human genes 0.000 description 1
- 206010008120 Cerebral ischaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000002330 Congenital Heart Defects Diseases 0.000 description 1
- 102000012192 Cystatin C Human genes 0.000 description 1
- 108010061642 Cystatin C Proteins 0.000 description 1
- 208000021709 Delayed Graft Function Diseases 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 244000187656 Eucalyptus cornuta Species 0.000 description 1
- 102000047351 Exportin-5 Human genes 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 206010056328 Hepatic ischaemia Diseases 0.000 description 1
- 101000858088 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 10 Proteins 0.000 description 1
- 101000847058 Homo sapiens Exportin-5 Proteins 0.000 description 1
- 206010021137 Hypovolaemia Diseases 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 102000003810 Interleukin-18 Human genes 0.000 description 1
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 description 1
- 102000013519 Lipocalin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010051335 Lipocalin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108091007773 MIR100 Proteins 0.000 description 1
- 108091060568 Mir-133 microRNA precursor family Proteins 0.000 description 1
- 108091028684 Mir-145 Proteins 0.000 description 1
- 108091062140 Mir-223 Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009572 RNA Polymerase II Human genes 0.000 description 1
- 108010009460 RNA Polymerase II Proteins 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 241000269435 Rana <genus> Species 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000003872 anastomosis Effects 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 238000013475 authorization Methods 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 230000006931 brain damage Effects 0.000 description 1
- 231100000874 brain damage Toxicity 0.000 description 1
- 208000029028 brain injury Diseases 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000003683 cardiac damage Effects 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 210000002583 cell-derived microparticle Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 208000028831 congenital heart disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 1
- 230000024924 glomerular filtration Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000011862 kidney biopsy Methods 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000007403 mPCR Methods 0.000 description 1
- 108091023685 miR-133 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 210000004910 pleural fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002947 procoagulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 230000015909 regulation of biological process Effects 0.000 description 1
- 230000029865 regulation of blood pressure Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000003938 response to stress Effects 0.000 description 1
- 230000000250 revascularization Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 210000004926 tubular epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000003966 vascular damage Effects 0.000 description 1
- 230000006439 vascular pathology Effects 0.000 description 1
- 230000008728 vascular permeability Effects 0.000 description 1
- 230000002227 vasoactive effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/118—Prognosis of disease development
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/178—Oligonucleotides characterized by their use miRNA, siRNA or ncRNA
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pathology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
La presente invención se refiere a un método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo mediante el análisis del nivel de expresión de al menos un micro-RNA seleccionado de entre miR-127, miR-126, miR-210 y miR-101.
Description
MÉTODO PARA EL DIAGNOSTICO Y/O PRONÓSTICO DE DAÑO RENAL AGUDO
CAMPO DE LA INVENCIÓN
La presente invención se encuadra en general dentro del campo de la biomedicina y en particular se refiere a un método para el diagnóstico y/o pronóstico del daño renal agudo.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
En el trasplante renal, la Necrosis Tubular Aguda (NTA) es la causa fundamental del retraso en la función post-transplante del injerto. Además, la NTA contribuye a una mayor incidencia del rechazo agudo, al desarrollo de rechazo crónico y a la disminución de la supervivencia del injerto (Pannu et al., 2008). El incremento en la demanda de órganos en los últimos años conlleva el uso de órganos procedentes de donantes sub-óptimos, incluyendo donantes en asistolia y donantes añosos, lo cual incrementa muy significativamente el porcentaje de desarrollo de NTA pos-transplante, la morbilidad del injerto y el retraso en su recuperación funcional. Todo ello dispara el coste económico total de un transplante renal a la sanidad pública. Destacar que las últimas estadísticas de la ONT indican la realización en España de unos 2.200 transplantes renales/año y más de 4.000 pacientes aún en lista de espera (Dominguez-Gil y Pascual. 2008). Por otro lado, la NTA es la manifestación morfológica más frecuente del Fracaso Renal Agudo (FRA), incluyendo el de origen isquémico (Kellum et al., 2008). El FRA representa uno de los problemas más graves dentro de las enfermedades renales en el mundo desarrollado por la elevada mortalidad que conlleva, alrededor del 50%. En torno al 30% de todos los episodios de FRA ocurren en los enfermos ingresados en las UCIs, como consecuencia de un fallo
multiorgánico. En este último contexto, la mortalidad se eleva al 80% (Chertow et al., 2005). El desarrollo de FRA es además una de las complicaciones más habituales tras una intervención cardiaca, de las que se realizan unas 30.000/año en España y más de un 1 % de ellas en nuestro Hospital. Prácticamente la totalidad de los pacientes intervenidos desarrollan cierto grado de FRA (Yates and Stafford-Schmit, 2006). De la gravedad de este FRA post-operatorio depende la evolución a largo plazo de los pacientes, resultando en una mortalidad cercana al 60% en aquellos casos que requieran diálisis tras la intervención cardiaca (Takar et al., 2005; Candela-Toha et al., 2008). Tanto la cirugía cardiaca como el trasplante renal son dos situaciones "cuasi" experimentales de estudio para la NTA en humanos, ya que se conoce el momento y la duración del estímulo isquémico y además se pueden monitorizar. Todas estas estadísticas de morbi-mortalidad no han variado significativamente en las últimas décadas y hasta el momento, no existe una terapéutica eficaz para la prevención y/o reducción de la NTA en todas estas situaciones. A ello ha contribuido en gran medida la falta de marcadores de daño renal más precisos que la determinación de creatinina y urea en suero, utilizados hasta el momento. Estos marcadores clásicos no reflejan directamente el daño celular ni en que compartimento del tejido renal (túbulo o endotelio) se está produciendo el mismo, tan sólo son parámetros indicativos de una función renal alterada consecuencia del daño (Vaidya et al., 2008). De hecho, es posible que pacientes con un daño renal subclínico no sean identificados como tales porque no se haya producido una alteración significativa en los niveles séricos de creatinina y urea. Así, en los últimos años se están desarrollado numerosos estudios tratando de identificar y validar nuevos marcadores del FRA como NGAL, IL18, KIM, Cistatina C, VEGF o CXCL10, que parecen funcionar como buenos marcadores en poblaciones infantiles sin patologías añadidas significativas pero no en población adulta (Vaidya et al., 2008).
La isquemia renal, la hipovolemia y los tóxicos son las causas más frecuentes de desarrollo de NTA. La reducción en el flujo de sangre y como consecuencia la hipoxia tisular causan daño a nivel del epitelio proximal tubular, provocan un rápido descenso del filtrado glomerular, alteran la permeabilidad vascular y desencadenan una respuesta inflamatoria que amplifica el daño tisular (Thurman et al., 2007). El grado y la extensión del daño isquémico son dependientes de la severidad y la duración de la isquemia. En isquemias subletales, se observa el desprendimiento de las células del epitelio proximal, muchas de ellas viables, al lumen tubular. En isquemias más prolongadas, la persistente hipoxia tisular y la respuesta inflamatoria, entre otros, incrementan el daño epitelial y vascular, con muerte celular en la zona cortico-medular del riñon. Por otro lado, el compartimento vascular también se daña tras isquemia. De hecho, el daño endotelial contribuye muy significativamente al daño renal agudo y también al mantenimiento del mismo en el tiempo. Alteraciones tempranas en el flujo peritubular durante la isquemia y temprana reperfusión se asocian a la pérdida de la morfología y función endoteliales contribuyendo a la pérdida de función de barrera, la inflamación y la actividad procoagulante. A medio-largo plazo, se ha descrito pérdida de la densidad microvascular que favorece la progresión del daño renal crónico como consecuencia directa de la isquemia inicial (Basile 2007). Para resolver la NTA, se ponen en marcha mecanismos que facilitan la reparación tisular: división y diferenciación celulares a partir de las células epiteliales tubulares no dañadas. En los últimos años varios trabajos han demostrado que a la reparación del daño tubular tras la isquemia pueden contribuir no sólo las propias células epiteliales no dañadas que se des-diferencian y proliferan, sino células pluripotenciales renales e incluso células pluripotenciales extrarrenales como las procedentes de médula ósea (Lin 2008). Sin embargo, la contribución de células progenitores a la reparación del daño isquémico está puesta en duda, aunque sí se acepta que a ésta contribuirían fundamentalmente las células tubulares proximales no dañadas y la re-vascularización
del parénquima. En este último proceso, se ha propuesto que también participarían progenitores endoteliales movilizados tras isquemia (Becherucci et al., 2009).
Los miRNAs son RNAs de pequeño tamaño (22-25 nucleótidos) codificados endógenamente capaces de reconocer RNAs mensajeros y así regular negativamente la expresión de proteínas, dentro de complejos de silenciamiento inducido (RISC) por complementaridad total o parcial con su mRNA diana (Chang and Mendell, 2007). En humanos se han clonado ya más de 700 y predicciones bioinformáticas indican que todos ellos pueden controlar la expresión de más del 30% del total de proteínas (Filipowicz et al., 2008). La mayoría son transcritos por la RNA Pol II desde genes individuales o desde transcritos policistrónicos para varios de ellos a la vez. Se generan como pre-miRs más largos que se procesan en el núcleo por una Ribonucleasa III (Drosha), salen a citoplasma vía mecanismos dependientes de Exportina-5 y Ran-GTP y allí son finalmente procesados por otra Ribonucleasa III (Dicer) a su forma madura (Rana 2007). Su función es esencial en una amplia variedad de procesos incluidos el desarrollo embrionario, la respuesta a estrés o la regulación estricta de procesos fisiológicos y por tanto, el mantenimiento de la homeostasis de los organismos. Es importante destacar que el perfil de expresión de miRNAs es específico de tipo celular y puede cambiar dependiendo del estímulo, de tal forma que el contexto celular particular de un mismo miRNA determinará su función en un tipo celular específico (Bartel 2009). Por ello, la desregulación de algunos miRNAs se ha señalado entre los mecanismos responsables del desarrollo de patologías como el cáncer (Bartels and Tsongalis, 2009), la autoinmunidad (Sonkoly and Pivarcsi 2008), la diabetes (Zhou et al., 2008) o patologías vasculares (Urbich et al., 2008) y se están constituyendo como biomarcadores precisos de la evolución de muchas de ellas. Muy recientemente se ha demostrando que además los miRNAs son reguladores clave en la respuesta celular rápida y precisa ante cualquier tipo de estímulo incluyendo la falta de nutrientes o la hipoxia (Ivan et al., 2008). Por otro lado, se ha demostrado además, que estos miRNAs junto a mRNAs pueden ser secretados o intercambiados por las células en forma de micropartículas (microvesículas de plaquetas; exosomas de células tumorales; ectosomas de neutrófilos (Valadi et al., 2007). Así podrían ser detectados en fluidos corporales como sangre, orina o líquido pleural. De hecho, se estima que la sangre periférica de individuos sanos puede contener una concentración entre 5-50 mg/ml de micropartículas, que incrementaría en caso de pacientes con diversas patologías (Hunter et al., 2008). Esto permitiría hacer un seguimiento muy fiable de la evolución de estas patologías utilizando muestras obtenidas mediante métodos mínimamente invasivos (extracción de sangre y recolección de orina (Gilad 2008). En orina, los miRNAs detectados, entre los que se encuentra el miR-127, han demostrado gran estabilidad, aún en condiciones muy agresivas (Melkonyan et al., 2008). Dado que la desregulación de miRNAs puede causar diversas patologías, éstos están empezando a ser considerados como nuevas dianas de actuación terapéutica. De hecho, se han desarrollado herramientas para modular su expresión: pre-mirs para sobrexpresarlos y antagomirs (anti-mirs) para inhibirlos, con resultados muy esperanzadores en diversos modelos experimentales in vitro e in vivo (Krutzfeld et al., 2006; Care et al., 2007; Van Rooij et al., 2008), si bien está todavía por determinar su validez como estrategia terapéutica en humanos.
En cuanto al papel de los miRNAs en respuesta a isquemia, se ha determinado su expresión en isquemia cerebral focal en rata, estableciéndose asociación entre la expresión de miR-145 y el daño cerebral (Dharap et al., 2009). En isquemia cardiaca en humanos el miR-100 y el miR-133 parecen participar en el mecanismo de daño cardiaco (Sucharov C, et al., 2008). En isquemia hepática también en humanos, se ha establecido miR-223 como mediador de daño (Yu et al., 2008). Por el contrario, miR-126 y miR-210 se han descrito como promotores fundamentales de angiogénesis,
neovascularización y reparación tisular en respuesta a varios estímulos, incluida la hipoxia (Suarez and Sessa, 2009; Fasanaro et al., 2008; van Solingen et al., 2008). Hasta el momento no se han descrito en la literatura miRNAs modulados en l/R renal, pero sí se comienza a especular con su potencial como biomarcadores en patologías renales, incluidas aquellas que conllevan alteraciones en la regulación de la tensión arterial (Liang M et al., 2009). En otro contexto, se han identificado algunos miRNAs relacionados con el rechazo inmunológico en el trasplante renal (Sui et al., 2008). Todo lo expuesto anteriormente justifica la necesidad de identificar y validar nuevos biomarcadores de evolución de daño renal más precisos e indicativos de qué compartimento tisular y en qué grado se está dañando y/o recuperando, cuya determinación además sea rápida, sencilla y sin necesidad de biopsiar al paciente.
DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
Así pues, en un primer aspecto, la presente invención proporciona un método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo que comprende analizar una muestra obtenida de un paciente, para determinar el nivel de expresión de al menos un micro-RNA seleccionado de entre miR-127, miR-126, miR-210 y miR-101 y comparar dicho nivel de expresión con un valor control, donde la alteración de dicho nivel es indicativo de daño renal.
En un aspecto más en particular de la presente invención, la muestra del paciente a analizar es sangre. En otro aspecto en particular de la presente invención, la muestra es suero. En otro aspecto de la presente invención, la muestra es orina. En un aspecto más en particular, el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo se lleva a cabo determinando el nivel de expresión del miR-127 únicamente o en
combinación con al menos un micro-RNA seleccionado de entre miR-126, miR-210 y miR-101.
En un aspecto más en particular, la disminución del nivel de expresión de miR-127 en suero con respecto al valor control es indicativo de daño renal agudo.
En un aspecto más en particular, el aumento del nivel de expresión de miR-127 en orina con respecto al valor control es indicativo de daño renal agudo.
En un aspecto más en particular, el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo se lleva a cabo determinando el nivel de expresión del miR-126 únicamente o en combinación con al menos un micro-RNA seleccionado de entre miR-127, miR-210 y miR-101.
En un aspecto más en particular, la disminución del nivel de expresión de miR-126 en suero con respecto al valor control es indicativo de daño renal agudo.
En un aspecto más en particular, el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo se lleva a cabo determinando el nivel de expresión del miR-210 únicamente o en combinación con al menos un micro-RNA seleccionado de entre miR-127, miR-126 y miR-101.
En un aspecto más en particular, el aumento del nivel de expresión de miR-210 en suero con respecto al valor control es indicativo de daño renal agudo.
En un aspecto más en particular, la disminución del nivel de expresión de miR-210 en orina con respecto al valor control es indicativo de daño renal agudo.
En un aspecto más en particular, el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo se lleva a cabo determinando el nivel de expresión del miR-101 únicamente o en combinación con al menos un micro-RNA seleccionado de entre miR-127, miR-126 y miR-210.
En un aspecto más en particular, el aumento del nivel de expresión de miR-101 en suero con respecto al valor control es indicativo de daño renal agudo.
En la presente invención por daño renal agudo se refiere al daño renal que tenga etiología isquémica ya sea primaria o secundaria, como es el caso del daño renal por tóxicos o por medios de radiocontraste, y en cualquier caso, excluyendo el daño renal crónico.
En un aspecto más en particular de la presente invención, la expresión del micro-RNA se determina mediante PCR. En un aspecto más en particular, la expresión del micro-RNA se determina mediante PCR cuantitativa. En un aspecto más en particular, la expresión de micro-RNA se determina mediante PCR multiplex.
En otro aspecto más en particular de la presente invención, la expresión del micro-RNA se determina mediante micromatrices de RNA total.
En un segundo aspecto, la presente invención se refiere a un kit para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo que comprende las sondas y cebadores necesarios para llevar a cabo el método de la presente invención.
En un aspecto más en particular de la presente invención, el kit comprende las sondas y cebadores necesarios para determinar el nivel de expresión de al menos un micro-RNA seleccionado de entre miR-127, miR-126, miR-210 y miR-101.
En otro aspecto más en particular de la presente invención, el kit comprende una micromatriz de ARN.
DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
La figura 1 muestra la expresión de miR-126 en células proximales tubulares humanas HK-2 sometidas al protocolo de Hipoxia/Reoxigenación: NX: células en condiciones normales en cuanto a disponibilidad de oxígeno (normoxia, 21%) y a disponibilidad de nutrientes (medio completo 10% FBS) CC: células control que han sufrido restricción de nutrientes (están en medio sin nutrientes). Hyp: células que han sufrido restricción de nutrientes y oxígeno durante 6h (1% de oxígeno en medio sin nutrientes); R-3, R-6, R-24h: células que tras 6h de hipoxia vuelven a estar en condiciones normales de disponibilidad de oxígeno y nutrientes.
La figura 2 muestra la expresión de miR-210 en células proximales tubulares humanas HK-2 sometidas al protocolo de Hipoxia/Reoxigenación. NX: células en condiciones normales en cuanto a disponibilidad de oxígeno (normoxia, 21%) y a disponibilidad de nutrientes (medio completo 10% FBS) CC: células control que han sufrido restricción de nutrientes (están en medio sin nutrientes). Hyp: células que han sufrido restricción de nutrientes y oxígeno (1% de oxígeno en medio sin nutrientes); R-3, R-6, R-24h: células que vuelven a estar en condiciones normales de disponibilidad de oxígeno y nutrientes.
La figura 3 muestra la expresión de miR-101 en células proximales tubulares humanas HK-2 sometidas al protocolo de Hipoxia/Reoxigenación. NX: células en condiciones normales en cuanto a disponibilidad de oxígeno (normoxia, 21%) y a disponibilidad de nutrientes (medio completo 10% FBS) CC: células control que han sufrido restricción de nutrientes (están en medio sin nutrientes). Hyp: células que han sufrido restricción de nutrientes y oxígeno (1% de oxígeno en medio sin nutrientes); R- 3, R-6, R-24h: células que vuelven a estar en condiciones normales de disponibilidad de oxígeno y nutrientes.
La figura 4 muestra la expresión de miR-127 en células proximales tubulares humanas HK-2 sometidas al protocolo de Hipoxia/Reoxigenación. NX: células en condiciones normales en cuanto a disponibilidad de oxígeno (normoxia, 21 %) y a disponibilidad de nutrientes (medio completo 10% FBS) CC: células control que han sufrido restricción de nutrientes (están en medio sin nutrientes). Hyp: células que han sufrido restricción de nutrientes y oxígeno (1 % de oxígeno en medio sin nutrientes); R-3, R-6, R-24h: células que vuelven a estar en condiciones normales de disponibilidad de oxígeno y nutrientes.
La figura 5 muestra la expresión de miR-101 en células proximales tubulares de rata NRK-52E sometidas al protocolo de Hipoxia/Reoxigenación. NX: células en condiciones normales en cuanto a disponibilidad de oxígeno (normoxia, 21%) y a disponibilidad de nutrientes (medio completo 10% FBS) CC: células control que han sufrido restricción de nutrientes (están en medio sin nutrientes). Hyp: células que han sufrido restricción de nutrientes y oxígeno (1% de oxígeno en medio sin nutrientes); R-15 min, R-30 min, R-1h, R-3h, R-6h, R-24h: células que vuelven a estar en condiciones normales de disponibilidad de oxígeno y nutrientes.
La figura 6 muestra la expresión de miR-127 en células proximales tubulares de rata NRK-52E sometidas al protocolo de Hipoxia/Reoxigenación. NX: células en condiciones normales en cuanto a disponibilidad de oxígeno (normoxia, 21 %) y a disponibilidad de nutrientes (medio completo 10% FBS) CC: células control que han sufrido restricción de nutrientes (están en medio sin nutrientes). Hyp: células que han sufrido restricción de nutrientes y oxígeno (1% de oxígeno en medio sin nutrientes); R- 15 min, R-30 min, R-1 h, R-3h, R-6h, R-24h: células que vuelven a estar en condiciones normales de disponibilidad de oxígeno y nutrientes.
La figura 7 muestra la expresión de miR-101 en células endoteliales humanas HMEC sometidas al protocolo de Hipoxia/Reoxigenación. NX: células en condiciones normales en cuanto a disponibilidad de oxígeno (normoxia, 21 %) y a disponibilidad de nutrientes (medio completo 10% FBS) CC: células control que han sufrido restricción de nutrientes (están en medio sin nutrientes). Hyp: células que han sufrido restricción de nutrientes y oxígeno (1% de oxígeno en medio sin nutrientes); R-15 min, R-30 min, R-1 h, R-3h, R-24h: células que vuelven a estar en condiciones normales de disponibilidad de oxígeno y nutrientes.
La figura 8 muestra la expresión de miR-127 en células endoteliales humanas HMEC sometidas al protocolo de Hipoxia/Reoxigenación. NX: células en condiciones normales en cuanto a disponibilidad de oxígeno (normoxia, 21 %) y a disponibilidad de nutrientes (medio completo 10% FBS) CC: células control que han sufrido restricción de nutrientes (están en medio sin nutrientes). Hyp: células que han sufrido restricción de nutrientes y oxígeno (1% de oxígeno en medio sin nutrientes); R-15 min, R-30 min, R-1 h, R-3h, R-24h: células que vuelven a estar en condiciones normales de disponibilidad de oxígeno y nutrientes.
La figura 9 muestra la expresión de miR-210 en células endoteliales humanas HMEC sometidas al protocolo de Hipoxia/Reoxigenación. NX: células en condiciones normales en cuanto a disponibilidad de oxígeno (normoxia, 21%) y a disponibilidad de nutrientes (medio completo 10% FBS) CC: células control que han sufrido restricción de nutrientes (están en medio sin nutrientes). Hyp: células que han sufrido restricción de nutrientes y oxígeno (1% de oxígeno en medio sin nutrientes); R-15 min, R-30 min, R-1h, R-3h, R-24h: células que vuelven a estar en condiciones normales de disponibilidad de oxígeno y nutrientes.
La figura 10 muestra la expresión de miR-126 en células endoteliales humanas H EC sometidas al protocolo de Hipoxia/Reoxigenación. NX: células en condiciones normales en cuanto a disponibilidad de oxígeno (normoxia, 21%) y a disponibilidad de nutrientes (medio completo 10% FBS) CC: células control que han sufrido restricción de nutrientes (están en medio sin nutrientes). Hyp: células que han sufrido restricción de nutrientes y oxígeno (1% de oxígeno en medio sin nutrientes); R-15 min, R-30 min, R-1h, R-3h, R-24h: células que vuelven a estar en condiciones normales de disponibilidad de oxígeno y nutrientes.
La figura 11 muestra la expresión de miR-127 en suero de pacientes diagnosticados de Fracaso Renal Agudo (FRA) de etiología isquémica. Control: expresión de miRNA en control sano igualado a 1. Los datos de expresión en el paciente están relativizados a este dato. Oh, y 3 días: tiempos en los que se ha tomado muestra del paciente, al ingresar por FRA (Oh) y más tarde en su evolución (3 días).
La figura 12 muestra la expresión de miR-127 en orina de pacientes diagnosticados de Fracaso Renal Agudo (FRA) de etiología isquémica. Control: expresión de miRNA en control sano igualado a 1. Los datos de expresión en el paciente están relativizados a este dato. Oh, y 3 días: tiempos en los que se ha tomado muestra del paciente, al ingresar por FRA (Oh) y más tarde en su evolución (3 días).
La figura 13 muestra la expresión de miR-126 en suero de pacientes diagnosticados de Fracaso Renal Agudo (FRA) de etiología isquémica. Control: expresión de miRNA en control sano igualado a 1. Los datos de expresión en el paciente están relativizados a este dato. Oh, y 3 días: tiempos en los que se ha tomado muestra del paciente, al ingresar por FRA (Oh) y más tarde en su evolución (3 días).
La figura 14 muestra la expresión de miR-210 en suero de pacientes diagnosticados de Fracaso Renal Agudo (FRA) de etiología isquémica. Control: expresión de miRNA en control sano igualado a 1. Los datos de expresión en el paciente están relativizados a este dato. Día 0, Día 1 , Día 2, Día 3, Día 7: tiempos en los que se ha tomado muestra del paciente, al ingresar por FRA (día 0) y más tarde en su evolución.
La figura 15 muestra la expresión de miR-210 en orina de pacientes diagnosticados de Fracaso Renal Agudo (FRA) de etiología isquémica. Control: expresión de miRNA en control sano igualado a 1. Los datos de expresión en el paciente están relativizados a este dato. Día 0, Día 1 , Día 2, Día 3, Día 7: tiempos en los que se ha tomado muestra del paciente, al ingresar por FRA (día 0) y más tarde en su evolución.
La figura 16 muestra la expresión de miR-101 en suero de pacientes diagnosticados de Fracaso Renal Agudo (FRA) de etiología isquémica. Control: expresión de miRNA en control sano igualado a 1. Los datos de expresión en el paciente están relativizados a este dato. O días, 1 día, 2 días, 3 días, 7 días: tiempos en los que se ha tomado muestra del paciente, al ingresar por FRA (Od) y más tarde en su evolución.
La figura 17A muestra la expresión de miR-101 en muestras de suero en pacientes pertenecientes al grupo IA, la figura 17B muestra la expresión de miR-101 en muestras de suero en pacientes pertenecientes al grupo IB y la figura 17C muestra la expresión de miR-101 en muestras de suero en pacientes pertenecientes al grupo II.
La figura 18A muestra la expresión de miR-127 en muestras de suero en pacientes pertenecientes al grupo IA, la figura 18B muestra la expresión de miR-127 en muestras de suero en pacientes pertenecientes al grupo IB y la figura 18C muestra la expresión de miR-127 en muestras de suero en pacientes pertenecientes al grupo II.
La figura 19A muestra la expresión de miR-126 en muestras de suero en pacientes pertenecientes al grupo IA, la figura 19B muestra la expresión de miR-126 en muestras de suero en pacientes pertenecientes al grupo IB y la figura 19C muestra la expresión de miR-126 en muestras de suero en pacientes pertenecientes al grupo II.
La figura 20A muestra la expresión de miR-210 en muestras de suero en pacientes pertenecientes al grupo IA, la figura 20B muestra la expresión de miR-210 en muestras de suero en pacientes pertenecientes al grupo IB y la figura 20C muestra la expresión de miR-210 en muestras de suero en pacientes pertenecientes al grupo II.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
Se identificaron mediante el uso de arrays que los micro-RNAs: miR-127, miR-126, miR-210 y miR-101 en un modelo de H/R que mimetiza l/R, se expresaban de forma diferencial de tal forma que cada uno de estos micro-RNAs solo o en conjunto sirven como biomarcadores del daño renal.
EJEMPLO 1 : Expresión de miRNAs en líneas celulares sometidas a hipoxia/reoxiqenación.
Se procedió al cultivo de las siguientes células (HK2: células tubulares proximales humanas, NRK-52E: células tubulares proximales de rata y HMEC: células endoteliales de microvasculatura humana) en medios apropiados conteniendo suero, antibióticos y factores de crecimiento específicos. Se mantuvieron a 37°C, en atmósfera húmeda y con un 5% de C02.
Las líneas celulares descritas anteriormente fueron sometidas a un protocolo de hipoxia/reoxigenación. Es decir, las líneas celulares son sometidas a cambios en las tensiones de oxígeno y en la disponibilidad de nutrientes. Para ello se utilizaron dos incubadores diferentes: la hipoxia en un incubador hermético a 37°C, perfundido con una mezcla de 5% C02, 1 % 02, 94% N2; la reoxigenación, en un incubador estándar a 37°C, con 5% C02. Las células fueron crecidas hasta confluencia y deprivadas de suero 24 horas antes de la hipoxia. Durante la hipoxia, se mantuvieron en medio mínimo (HBSS) sin suero, con baja concentración de glucosa o derivados. Durante la reoxigenación se utilizó un medio completo (Sáenz-Morales et al., 2006). El tiempo de hipoxia para todas las muestras fue de 6h, y los tiempos de reoxigenación variables (15 min-72h). Todos los experimentos in vitro se repitieron al menos 3 veces. A continuación se determinó la expresión de los distintos micro-RNAs en las líneas celulares mediante PCR, para ello y tras la extracción del RNA total de las muestras de fluidos (suero u orina) y valorarlo, se utilizó 50 nanogramos de cada una de ellas para la reacción de retrotranscripción (RT) en 15 microlitros. Para este paso se utilizaron cebadores comerciales especiales (stem loop primers). Estos cebadores fueron específicos para cada miRNA. Tras la RT, se procedió a la reacción de amplificación de forma cuantitativa (qPCR). En esta reacción que fue llevada a cabo en un volumen total de 10 microlitros, se utilizó I microlitro de la reacción total de RT y cebadores específicos para cada miRNA y además sonda Taqman con atrapadores de fluorescencia. Todos los reactivos, tanto cebadores como mezclas de reacción con enzimas y nucleótidos para RT y PCR se utilizaron de Applied Biosystems. Los resultados fueron los siguientes:
Como se muestra en la figura 1 los niveles de expresión de miR-126, fueron muy dependientes de la disponibilidad de nutrientes y oxígeno, ya que la restricción de ambos, disminuyó su expresión muy significativamente respecto a la condición de normalidad. La expresión del miRNA se fue recuperando en el tiempo de reoxigenación, donde las células volvieron a disponer de oxígeno y nutrientes. Así pues la disminución en la expresión del miR-126 indicó falta de nutrientes y oxigeno en las células proximales tubulares siendo indicativo de isquemia renal. Por otro lado, y dado que a 3h de reoxigenación se registró un importante daño del epitelio in vitro, la baja expresión de este miRNA indicó daño del epitelio proximal tubular tras la isquemia.
Como muestra la figura 2, los niveles de expresión de miR-210, al igual que el miR-126, fueron muy dependientes de la disponibilidad de nutrientes y oxígeno, ya que la restricción de ambos, disminuyó su expresión muy significativamente respecto a la condición de normalidad. La expresión del miRNA se fue recuperando en el tiempo de reoxigenación, donde las células volvieron a disponer de oxígeno y nutrientes. La disminución del miR-210 indicó falta de nutrientes y oxígeno en células proximales tubulares, siendo indicativo, al igual que en el caso de miR-126, de isquemia renal. Por otro lado, y dado que a 3h de reoxigenación se registró daño del epitelio in vitro, la baja expresión del miR-210 indicó daño del epitelio proximal tubular tras la isquemia.
Como muestra la figura 3, el miR-101 aumentó su expresión en la condición de hipoxia, en comparación con la condición de normoxia. La expresión de este miRNA se fue normalizando de nuevo en reoxigenación donde se volvió a normalizar la disponibilidad de oxígeno y nutrientes. El aumento de expresión de este miRNA en células proximales durante la condición de hipoxia fue indicativo de isquemia renal.
Como muestra la figura 4, el miR-127 aumentó su expresión en la condición de hipoxia en comparación con la condición de normoxia. La expresión de este miRNA disminuyó de forma significativa en reoxigenación, volviendo a aumentar a las 24h de reoxigenación cuando la monocapa epitelial se está recuperando. Así, el aumento de expresión de miR-127 en células proximales durante la condición de hipoxia fue indicativo de isquemia renal. La disminución de su expresión tempranamente en reoxigenación, indicó daño isquémico y su incremento posterior indicó recuperación endotelial.
Como muestra la figura 5, la expresión de miR-101 se fue normalizando rápidamente en reoxigenación donde se volvió a normalizar la disponibilidad de oxígeno y nutrientes, si bien permaneció con niveles de expresión más elevados que en condición de normoxia en estas células de rata. El aumento de expresión de este miRNA en células proximales durante la condición de hipoxia fue indicativo de isquemia renal. Su nuevo aumento a 24h de reoxigenación indicó recuperación de la monocapa epitelial.
Como muestra la figura 6 y al igual que sucedió en células Hk-2 (tubulares humanas) miR-127 aumentó su expresión en la condición de hipoxia en la que está restringida la disponibilidad de nutrientes y de oxígeno, en comparación con la condición de normoxia. La expresión de este miRNA se fue normalizando rápidamente en reoxigenación donde volvieron a estar disponibles el oxígeno y los nutrientes. El aumento de expresión de este miRNA en células proximales durante la condición de hipoxia fue indicativo de isquemia renal.
Como muestra la figura 7 y al igual que sucedía en células proximales tubulares miR-101 aumentó su expresión en la condición de hipoxia en comparación con la condición de normoxia. La expresión de este miRNA se mantuvo elevado en reoxigenación donde se volvieron a normalizar la disponibilidad de oxígeno y nutrientes, y comenzó a normalizarse a 24h de reoxigenación. El aumento de expresión de este miRNA en células endoteliales durante la condición de hipoxia fue indicativo de isquemia renal. Su elevada expresión en reoxigenación se asoció a un estado de activación endotelial (pro-inflamatorio), el cual comenzó a normalizarse a las 24h.
Como muestra la figura 8 y al igual que sucedía en células proximales tubulares miR-127 aumentó su expresión en la condición de hipoxia en la que estaba restringida la disponibilidad de nutrientes y de oxígeno, en comparación con la condición de normoxia. La expresión de este miRNA se mantuvo elevada en reoxigenación donde se dispuso de oxígeno y nutrientes, y comienzo a normalizarse a 24h de reoxigenación. El aumento de expresión de este miRNA en células endoteliales durante la condición de hipoxia fue indicativo de isquemia renal. Su elevada expresión en reoxigenación se asoció a un estado de activación endotelial (pro-inflamatorio), el cual comenzaría a normalizarse a las 24h.
Como se muestra en la figura 9 y a diferencia de lo que sucedía con este miRNA en células proximales tubulares, el miR-210 aumentó su expresión discretamente en la condición de hipoxia en comparación con la condición de
normoxia. La expresión de este miRNA se mantuvo elevada en reoxigenación y disminuyó bruscamente su expresión a 24h de reoxigenación. El aumento de expresión de este miRNA en células endoteliales durante la condición de hipoxia fue indicativo de isquemia renal. Al igual que el miR-127 y el miR-101 , su expresión en reoxigenación se asoció a un estado de activación endotelial (pro-inflamatorio), el cual comenzó a normalizarse a las 24h.
Como muestra la figura 10, el miR-126 aumentó su expresión discretamente en la condición de hipoxia en la que está restringida la disponibilidad de nutrientes y de oxígeno, en comparación con la condición de normoxia. Y aumentó de forma muy significativa a 1 h de reoxigenación, donde se disponía de oxígeno y nutrientes. Tras ello, la expresión de este miRNA se normalizó. El aumento de expresión de este miRNA en células endoteliales durante la condición de hipoxia fue indicativo de isquemia renal. El aumento tan significativo a 1 h de reoxigenación, se asoció de forma inequívoca a un estado máximo de activación endotelial (pro-inflamatorio).
EJEMPLO 2: Expresión de miRNAs en pacientes que han sido diagnosticados de fracaso renal agudo.
El estudio con muestras de pacientes se hizo de forma prospectiva. Tras autorización por parte de los pacientes o sus representantes legales mediante el pertinente consentimiento informado y previa aprobación del estudio por el Comité Ético de Investigación Clínica de nuestro Hospital, se extrajeron muestras de sangre y orina y biopsias renales en caso de trasplante de los grupos de pacientes que se describen a continuación.
MUESTRAS DE PACIENTES DE TRASPLANTE RENAL
Se analizaron muestras procedentes de 50 trasplantados (enfermos con trasplante renal de novo y con diferentes regímenes de inmunosupresión), organizados en dos grupos:
I. 25 enfermos con función inmediata del injerto
II. 25 enfermos con función retrasada del injerto
Se recogieron muestras de sangre y orina los días 1 , 7, 15, 30 pos-trasplante renal y en ellos se determinó la expresión de los miRNAs a estudiar por qRT-PCR.
En caso de no función del injerto se realizó una biopsia al séptimo día, que se repitió cada 7-10 días hasta que se resolvió la fase de NTA. En caso de sospecha de rechazo y tras su confirmación por biopsia, estos pacientes fueron excluidos.
En el caso de los pacientes trasplantados, se recogió y dispuso de la siguiente información:
- Características del receptor: edad, sexo, tiempo en diálisis.
- Características del donante: tipo de donante (muerte encefálica, asistolia), edad, sexo, necesidad de drogas vasoactivas y última creatinina.
- Características del injerto: tiempos de isquemia caliente, fría y de anastomosis. Compatibilidad HLA e inmunosupresión.
- Función del injerto a 2, 4 y 12 semanas.
Las muestras de sangre se recogieron en tubos VACUETTE (z serum sep clot activator) de 8ml, que fueron centrifugados a 2.500 rpm 10 minutos.
Se recogió el suero separado por centrifugación y se alicuotaron y almacenaron conforme a los criterios del Biobanco del Hospital Ramón y Cajal (en tubos anonimizados, con código único y a -80C).
Las muestras de orina se recogieron en viales de orina Standard o extrajeron del depósito de la sonda, se centrifugaron a 2.800 rpm 10 min para eliminar sedimentos y otros restos, y se alicuotaron y almacenaron conforme a los criterios del Biobanco del Hospital Ramón y Cajal (en tubos anonimizados, con código único y a -80C).
De todas ellas se solicitó su cesión por parte del Biobanco mediante acuerdos de cesión. Se solicitaron un máximo de 500 microlitros, ya que hemos optimizado la técnica para amplificar miRNAs en muestras de 100- 200 microlitros de ambos fluidos, mediante PCR cuantitativa, para ello y tras la extracción del RNA total de las muestras de fluidos (suero u orina) y valorarlo, se utilizó 50 nanogramos de cada una de ellas para la reacción de retrotranscripción (RT) en 15 microlitros. Para este paso se utilizaron cebadores comerciales especiales (stem loop primers). Estos cebadores fueron específicos para cada miRNA. Tras la RT, se procedió a la reacción de amplificación de forma cuantitativa (qPCR). En esta reacción que fue llevada a cabo en un volumen total de 10 microlitros, se utilizó 1 microlitro de la reacción total de RT y cebadores específicos para cada miRNA y además sonda Taqman con atrapadores de
fluorescencia. Todos los reactivos, tanto cebadores como mezclas de reacción con enzimas y nucleótidos para RT y PCR se utilizaron de Applied Biosystems.
El procesamiento de las muestras de suero y orina de pacientes anterior a la extracción de RNA total fue el siguiente: una alícuota de 100-200 microlitros de suero u orina, se digirieron con Proteinasa K (0,65 miligramos/mililitro) incubando a 56C, 1 h. Tras ello se realizó una primera extracción con fenol/cloroformo (5:1 ) y la fase acuosa se procesó utilizando el kit High Puré miRNA isolation Kit (Roche), siguiendo las indicaciones del fabricante.
MUESTRAS DE PACIENTES TRAS CIRUGÍA CARDIACA:
Se analizaron muestras procedentes de 50 pacientes, organizados en los siguientes grupos:
- IA: 10 pacientes adultos operados de forma programada con circulación extracorpórea (CEC) y con bajo riesgo para el desarrollo de FRA, es decir, pacientes con una puntuación de 0 a 2 en el sistema de Thakar5 o de 0 a 1 en el simplificado SRI6.
- IB: 10 pacientes pediátricos con cardiopatías congénitas intervenidos por primera vez con CEC.
- II: 15 pacientes adultos operados de forma programada con CEC, con función renal basal alterada y puntuaciones > 5 en el sistema de ThakarS o= 3 en el SRI6.
- III: 15 pacientes adultos operados de forma programada con CEC, con función renal basal normal y con las mismas puntuaciones que en el apartado anterior. Para cada paciente se hicieron determinaciones de los miRNAs citados en los siguientes momentos:
- Basal preoperatorio
- A las 2h del ingreso en UCI
- A las 24h, 48h y 72h de la cirugía
- En el día +7 (opcional para los grupos IA y IB)
Como se muestra en la figura 11 , la expresión del miR-127 estuvo muy disminuida respecto al control sano. Indicando que la disminución en la expresión de este miRNA en el suero de pacientes fue indicador de daño renal isquémico o FRA. Estos datos se correlacionan con los datos mostrados en la figura 18.
Como muestra la figura 12, y en correlación con la disminución en suero, la expresión del miR-127 aumentó significativamente respecto al control sano. La disminución en la expresión de este miRNA en el suero de pacientes y su correspondiente aumento en orina fue indicador de diagnóstico temprano de daño renal isquémico o FRA.
Como muestra la figura 13, los niveles del miR-126 en suero disminuyeron de forma muy significativa su expresión en el momento de inicio del daño renal isquémico y aumentaron mucho su expresión a las 24h, para normalizarse posteriormente. Ello indicó que la disminución en la expresión de este miRNA en el suero de pacientes, fue indicador de diagnóstico muy temprano de daño renal isquémico o FRA. Su aumento a las 24h indicó una activación endotelial tras la isquemia asociada a una reacción inflamatoria posterior, tal y como se ha comentado en el modelo in vitro. Estos datos se correlacionan con los datos mostrados en la figura 19.
Como muestra la figura 14, el miR-210 en suero aumentó de forma muy significativa su expresión en el momento de inicio del daño renal isquémico, se mantuvo en las primeras 24h, para normalizarse posteriormente. Estos datos indicaron que el aumento en la expresión de este miRNA en el suero de pacientes, fue marcador diagnóstico muy temprano de daño renal isquémico o FRA.
Como se observa en la figura 15, el miR-210 en orina aumentó de forma muy significativa su expresión a las 48h, normalizándose posteriormente. Teniendo en cuenta que este miRNA incrementó su expresión en células HK-2 a tiempos en los que empezó a observarse recuperación epitelial en el modelo experimental, ello indicó que el aumento en la expresión de este miRNA a las 48h en orina de pacientes, fue indicativo del inicio de la recuperación renal tras el daño isquémico. Estos datos se correlacionan con los datos mostrados en la figura 20.
Como muestra la figura 16, la expresión del miR-101 aumentó muy significativamente respecto al control sano muy tempranamente, en el momento del ingreso, y no volvió a detectarse expresión significativa respecto al sujeto sano en el tiempo de evolución. Ello indicó que un aumento en la expresión de este miRNA en el suero de pacientes fue marcador de diagnóstico muy temprano de daño renal isquémico. Estos datos se correlacionan con los datos mostrados en la figura 17.
Claims (12)
1. Método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo que comprende analizar una muestra obtenida de un paciente, para determinar el nivel de expresión de al menos un micro-RNA seleccionado de entre miR-127, miR-126, miR-210 y miR-101 y comparar dicho nivel de expresión con un valor control, donde la alteración de dicho nivel es indicativo de daño renal agudo.
2. Método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo según la reivindicación 1 , donde la muestra a analizar es seleccionada entre sangre, suero u orina.
3. Método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo según cualquiera de las reivindicaciones 1-2, donde la disminución del nivel de expresión de miR-127 en suero con respecto al valor control es indicativo de daño renal agudo.
4. Método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo según cualquiera de las reivindicaciones 1 -2, donde el aumento del nivel de expresión de miR-127 en orina con respecto al valor control es indicativo de daño renal agudo.
5. Método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo según cualquiera de las reivindicaciones 1 -2, donde la disminución del nivel de expresión de miR-126 en suero con respecto al valor control es indicativo de daño renal agudo.
6. Método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo según cualquiera de las reivindicaciones 1 -2, donde el aumento del nivel de expresión de miR-210 en suero con respecto al valor control es indicativo de daño renal agudo.
7. Método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo según cualquiera de las reivindicaciones 1 -2, donde la disminución del nivel de expresión de miR-210 en orina con respecto al valor control es indicativo de daño renal agudo.
8. Método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo según cualquiera de las reivindicaciones 1 -2, donde el aumento del nivel de expresión de miR-101 en suero con respecto al valor control es indicativo de daño renal agudo.
9. Método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la expresión del micro-RNA se determina mediante PCR.
10. Método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la expresión del micro-RNA se determina mediante PCR cuantitativa.
11. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-8, donde el nivel de expresión del micro-RNA se determina mediante micromatrices de RNA.
12. Kit para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo que comprende las sondas y cebadores necesarios para llevar a cabo el método según cualquiera de las reivindicaciones 1 -11.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
ES200901825A ES2363661B2 (es) | 2009-09-04 | 2009-09-04 | Método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo. |
PCT/ES2010/070579 WO2011027019A2 (es) | 2009-09-04 | 2010-09-03 | Metodo para el diagnostico y/o pronostico de daño renal agudo |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
MX2012002333A true MX2012002333A (es) | 2012-06-12 |
Family
ID=43649710
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
MX2012002333A MX2012002333A (es) | 2009-09-04 | 2010-09-03 | Metodo para el diagnostico y/o pronostico de daño renal agudo. |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20120172248A1 (es) |
EP (2) | EP3029156B1 (es) |
JP (1) | JP5801809B2 (es) |
CN (1) | CN102575294B (es) |
AU (1) | AU2010291137A1 (es) |
CA (1) | CA2773054A1 (es) |
ES (2) | ES2363661B2 (es) |
IN (1) | IN2012DN01910A (es) |
MX (1) | MX2012002333A (es) |
PT (1) | PT3029156T (es) |
RU (1) | RU2629591C2 (es) |
WO (1) | WO2011027019A2 (es) |
Families Citing this family (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2484779A1 (en) * | 2011-02-03 | 2012-08-08 | Medizinische Hochschule Hannover | Device and method for analysis of kidney failure |
ES2414290B1 (es) * | 2011-12-15 | 2014-04-16 | Fundación Para La Investigación Biomédica Del Hospital Universitario Ramón Y Cajal | Metodo para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo |
RU2587012C1 (ru) * | 2014-10-31 | 2016-06-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ульяновский государственный университет" | Способ прогнозирования острого повреждения почек у больных острым коронарным синдромом |
RU2583950C1 (ru) * | 2015-05-13 | 2016-05-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский онкологический институт" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ прогнозирования развития острого повреждения почки в условиях тепловой ишемии в эксперименте в зависимости от возраста и пола животных |
RU2639465C2 (ru) * | 2016-02-24 | 2017-12-21 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ульяновский государственный университет" | Способ прогнозирования острого повреждения почек у больных острым коронарным синдромом |
WO2018033454A1 (en) * | 2016-08-19 | 2018-02-22 | Fundación Para La Investigación Biomédica Del Hospital Universitario Ramón Y Cajal | Mir-127 agents for use in the treatment of renal fibrosis |
WO2018065390A1 (en) | 2016-10-04 | 2018-04-12 | Vib Vzw | Means and methods to treat inflammatory diseases |
RU2666911C2 (ru) * | 2016-11-24 | 2018-09-13 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии" (ФГБНУ "НИИОПП") | Способ для прогнозирования метастазирования рака яичников на основе группы генов микроРНК |
TWI646199B (zh) * | 2017-10-23 | 2019-01-01 | 長庚醫療財團法人林口長庚紀念醫院 | 用於預測一帶有急性心肌梗塞的人類個體發展出急性腎損傷之風險的方法 |
RU2702023C1 (ru) * | 2018-08-17 | 2019-10-04 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский онкологический институт" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ диагностики острого повреждения почек после органосохраняющего хирургического лечения локализованного рака почки |
WO2020071518A1 (ja) * | 2018-10-04 | 2020-04-09 | 学校法人自治医科大学 | 急性腎障害特異的バイオマーカー、急性腎障害の診断方法、急性腎障害の検査用キット、動物治療方法、及び急性腎障害用医薬 |
RU2703399C1 (ru) * | 2018-11-02 | 2019-10-16 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии" (ФГБНУ "НИИОПП") | Способ для диагностики рака яичников на основе группы генов микроРНК |
RU2724017C1 (ru) * | 2019-05-17 | 2020-06-18 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ульяновский государственный университет" | Способ прогнозирования острого повреждения почек у больных острым коронарным синдромом с использованием шкалы риска |
EP3929308A1 (en) | 2020-06-23 | 2021-12-29 | Heinrich-Heine-Universität Düsseldorf | Diagnostic methods on renal recovery in individuals suffering from acute kidney injury and suitable biomarkers therefor |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7575863B2 (en) * | 2004-05-28 | 2009-08-18 | Applied Biosystems, Llc | Methods, compositions, and kits comprising linker probes for quantifying polynucleotides |
RU2270605C1 (ru) * | 2004-06-18 | 2006-02-27 | Государственное учреждение научный центр здоровья детей РАМН (ГУ НЦЗД РАМН) | Способ оценки жизнеспособности почечной паренхимы |
EP1915614A4 (en) * | 2005-07-21 | 2009-03-25 | Univ Johns Hopkins | ACUTE RENAL FAILURE |
WO2009038742A2 (en) * | 2007-09-20 | 2009-03-26 | Caritas St. Elizabeth's Medical Center Of Boston, Inc. | Method for estimating risk of acute kidney injury |
-
2009
- 2009-09-04 ES ES200901825A patent/ES2363661B2/es active Active
-
2010
- 2010-09-03 IN IN1910DEN2012 patent/IN2012DN01910A/en unknown
- 2010-09-03 RU RU2012106742A patent/RU2629591C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2010-09-03 CA CA2773054A patent/CA2773054A1/en not_active Abandoned
- 2010-09-03 JP JP2012527360A patent/JP5801809B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2010-09-03 WO PCT/ES2010/070579 patent/WO2011027019A2/es active Application Filing
- 2010-09-03 MX MX2012002333A patent/MX2012002333A/es active IP Right Grant
- 2010-09-03 ES ES16150622T patent/ES2710332T3/es active Active
- 2010-09-03 EP EP16150622.5A patent/EP3029156B1/en active Active
- 2010-09-03 AU AU2010291137A patent/AU2010291137A1/en not_active Abandoned
- 2010-09-03 PT PT16150622T patent/PT3029156T/pt unknown
- 2010-09-03 CN CN201080044847.XA patent/CN102575294B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2010-09-03 US US13/394,084 patent/US20120172248A1/en not_active Abandoned
- 2010-09-03 EP EP10813383A patent/EP2474622A4/en not_active Withdrawn
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN102575294A (zh) | 2012-07-11 |
EP3029156A2 (en) | 2016-06-08 |
EP2474622A1 (en) | 2012-07-11 |
EP3029156B1 (en) | 2018-11-07 |
WO2011027019A3 (es) | 2011-04-28 |
EP3029156A3 (en) | 2016-09-14 |
US20120172248A1 (en) | 2012-07-05 |
PT3029156T (pt) | 2019-02-11 |
EP2474622A4 (en) | 2013-03-06 |
JP2013503617A (ja) | 2013-02-04 |
ES2710332T3 (es) | 2019-04-24 |
RU2012106742A (ru) | 2013-10-10 |
RU2629591C2 (ru) | 2017-08-30 |
WO2011027019A2 (es) | 2011-03-10 |
ES2363661A1 (es) | 2011-08-11 |
CA2773054A1 (en) | 2011-03-10 |
IN2012DN01910A (es) | 2015-07-24 |
AU2010291137A1 (en) | 2012-03-15 |
CN102575294B (zh) | 2015-07-01 |
ES2363661B2 (es) | 2012-05-30 |
JP5801809B2 (ja) | 2015-10-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
MX2012002333A (es) | Metodo para el diagnostico y/o pronostico de daño renal agudo. | |
Stylli et al. | miRNA expression profiling of cerebrospinal fluid in patients with aneurysmal subarachnoid hemorrhage | |
Vahed et al. | Dysregulation of urinary miR-21 and miR-200b associated with interstitial fibrosis and tubular atrophy (IFTA) in renal transplant recipients | |
Li et al. | Plasma exosomal miRNA-122-5p and miR-300-3p as potential markers for transient ischaemic attack in rats | |
US8574838B2 (en) | Methods and kits for miRNA isolation and quantitation | |
EP2904118B1 (en) | Urine exosome mrnas and methods of using same to detect diabetic nephropathy | |
CA2982486C (en) | Nucleic acid markers for rapid diagnosis of kawasaki disease and kit for detection of the nucleic acid markers | |
CN107385035B (zh) | 与2型糖尿病视网膜病变相关的血清/血浆miRNA标志物及其应用 | |
KR20120041168A (ko) | 심부전 또는 심부전 위험성을 방지, 예방 및/또는 측정하기 위한 수단 및 방법 | |
WO2010105275A2 (en) | Method to assess human allograft status from microrna expression levels | |
WO2013056002A1 (en) | Use of microrna for assessing embryos grown in vitro and improving culture media | |
WO2020088704A1 (en) | Postpartum epigenetic profile of cardiovascular micrornas in women exposed to pregnancy-related complications | |
US20170175191A1 (en) | Method for the diagnosis and/or prognosis of acute renal damage | |
Milhoransa et al. | Micro RNA 146a-5p expression in Kidney transplant recipients with delayed graft function | |
US20170240969A1 (en) | A circulating non-coding rna as predictor of mortality in patients with acute kidney injury | |
CN111893165A (zh) | 一种心肌缺血再灌注相关的tsRNA的筛选方法 | |
CN113718028A (zh) | 基于微小rna的子痫前期诊断用途及组合物 | |
ES2374890B1 (es) | Método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo. | |
ES2381401B1 (es) | Método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo. | |
Dziedzic et al. | Role of circulating microRNA in hemodialyzed patients | |
Bezeljak et al. | Tissue miRNA profile is associated with acute tubular necrosis, rejection phenotypes and BK polyomavirus-associated nephropathy in human kidney allografts | |
M Lorenzen et al. | Detection and transport mechanisms of circulating microRNAs in neurological, cardiac and kidney diseases | |
EP4183888A1 (en) | Mirna signature for identification of the receptive endometrium | |
CN107557474B (zh) | 胶质瘤诊断标志物circ15:98707562|98708107及应用 | |
ALSHAWADFI et al. | MICRORNA UTILITY FOR DIAGNOSING ISCHEMIC STROKE IN EGYPTIAN PATIENTS |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
FG | Grant or registration |