MX2010012113A - Grupos protectores de indolsulfonilo para proteccion de grupos guanidino y amino. - Google Patents

Abstract

La invención se relaciona con indolsulfonil halogenoides que son útiles para la protección de compuestos orgánicos que comprenden por lo menos un grupo funcional guanidino y/o por lo menos un grupo amino. La invención se relaciona adicionalmente con un proceso para su preparación y su uso como reactivos de protección. La invención también se relaciona con el proceso para la reacción de protección y para los compuestos protegidos de de la misma.

Description

GRUPOS PROTECTORES DE INDOLSÜLFONILO PARA PROTECCIÓN DE GRUPOS GUANIDINO Y AMIÑO CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con compuestos que son útiles para la protección de compuestos orgánicos que comprenden por lo menos un grupo funcional guanidino y/o por lo menos un grupo amino. La invención se relaciona adicionalmente con un proceso para la preparación de estos compuestos y con su uso como reactivos de protección. La invención también se relaciona c.on el proceso para la reacción de protección y con los compuestos protegidos de los mismos .

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La protección adecuada del grupo funcional guanidino es todavía un problema no resuelto en la química debido a la dificultad para remover los grupos de protección. Esto aplica particularmente a la química de péptido como el aminoácido natural arginina, que lleva un grupo funcional guanidino, es de mayor importancia para la preparación de numerosas sustancias de fármaco. Durante la reacción de acoplamiento, la protección de guanidino de la arginina es necesaria para evitar potencialmente acilación seguida por desguanidación, produciendo así formación de ornitina y d-lactama no deseada.

Dependiendo de la estrategia de acoplamiento, los grupos de protección más comúnmente utilizados para la arginina son p-toluenosulfonilo (Tos), 2,2,5,7,8- pentametilcroman -6-sulfonilo (Pmc) y 2,2,4,6,7- pentametildihidrobenzofurano-5-sulfonilo (Pbf ) . Sin embargo, estos grupos de protección son demasiado estables a los ácidos, requiriendo asi condiciones de remoción más duras y un mayor tiempo de remoción. Por lo tanto, los grupos de protección guanidino conocidos son propensos a formar subproductos en su remoción. Particularmente problemático es su división en péptidos con múltiples residuos de arginina o en péptidos que contienen triptofano. Carpino et al. (Tetrahedron Letters 1993, Vol. 34, No. 49, 7829-7832) compara el grupo de protección Pbf con el grupo de protección Pmc cuando se utiliza para la protección de la cadena lateral de arginina.

La WO 01/57045 describe sulfamas tricíclicas obtenidas a través de intermedios de benzofurano, benzotiofeno e indol.

Lowe et al. describe la síntesis de sulfonilureas heterocíclicas , que por ejemplo comprenden un grupo funcional indol (J. Heterocyclic Chem. , 1996, 33, 763-766).

SUMARIO DE LA INVENCIÓN Es un objeto de la presente invención proporcionar un compuesto que proteja fácilmente el grupo funcional guanidino de un compuesto orgánico y que se puede remover fácilmente.

El objeto descrito anteriormente se alcanza mediante los compuestos de la reivindicación 1, que se pueden preparar mediante el proceso de la reivindicación 5 y que se utilizan de acuerdo con la reivindicación 9 en el proceso de protección de la reivindicación 12 que ofrece compuestos de la reivindicación 16.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN En un aspecto, la presente invención se relaciona con un compuesto de la fórmula en donde R1 es hidrógeno, alquilo Ci-6, alcoxi Ci-S o alquiltio Ci-6; R2 es alquilo Ci-6, alcoxi C1-6 o alquiltio Ci-6; o R1 y R2 juntos forman un grupo funcional de la fórmula -(CH2)n-, en donde n es un entero de 3 a 5; R3 es hidrógeno, halógeno, alquilo Ci-6, alcoxi Ci-S, alquiltio Ci-6, fenilo o bencilo; y X es cloro o bromo.

Aquí y en adelante, el término "alquilo Ci-n" se debe entender que significa cualquier grupo alquilo lineal o ramificado que contiene 1 a n átomos de carbono. Por ejemplo el término "alquilo Ci-6" comprende grupos tales como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, tere- butilo, pentilo, isopentilo (3-metilbutilo) , neopentilo (2 , 2 -dimetilpropilo) , hexilo, isohexilo (4-metilpentilo) y similares.

De acuerdo con lo anterior, el término "alcoxi Ci-n" significa un grupo compuesto de un grupo alquilo a Ci-n como se definió anteriormente y un átomo de oxígeno ligado mediante un enlace covalente sencillo. En la misma forma, el término "alquiltio Ci-6" significa un grupo compuesto de un grupo alquilo C1-6 como se definió anteriormente y un átomo de azufre ligado mediante un enlace covalente sencillo.

Aquí y en adelante el término "halógeno" significa flúor, cloro, bromo y yodo.

Favorablemente, la presente invención se relaciona con un compuesto de la fórmula (II) , en donde R1, R2, R3 y X son como se definió anteriormente con la excepción de cloruro de 1-metilindol -3 -sulfonilo .

En una realización preferida, R1 y R2 son independientemente alquilo Ci-4, alcoxi Ci-4 o alquiltio Ci-4 ; R3 es hidrógeno o halógeno; y X es cloro o bromo.

En una realización particular, el R1 y R2 son metilo; R3 es hidrógeno; y X es cloro que es cloruro de 1 , 2 -dimetilindol -3-sulfonilo. En aras de la conveniencia, este compuesto se abreviará como MIS-CI.

En un aspecto adicional de l presente invención, el compuesto de la fórmula (II) se prepara mediante un proceso que comprenden la etapa de hacer reaccionar un compuesto de la fórmula en donde R1, R2 y R3 son como se definió anteriormente, o una sal del mismo, con cloruro de oxalilo o bromuro de oxalilo .

En una realización preferida, R1 y R2 son independientemente alquilo Ci-4, alcoxi Ci-4 o alquiltio Ci-4, y R3 es hidrógeno o halógeno.

En una realización más preferida, el R1 y R2 son metilo y R3 es hidrógeno.

En el proceso para la preparación del compuesto de la fórmula (II) se puede utilizar la forma acídica y la forma de sal del compuesto de la fórmula (I) como reactivo. Se puede aplicar cualquier forma de sal del- compuesto de la fórmula (I) . Las sales adecuadas sales son por ejemplo la sal de sodio, la sal de potasio, la sal de calcio y la sal de piridinio .

En una realización preferida, la reacción se desarrolla con la sal de piridinio del compuesto de la fórmula (I) .

Preferiblemente, se aplica el cloruro de oxalilo para la reacción .

Para el proceso de preparación, se puede aplicar cualquier disolvente adecuado o mezclas de disolventes adecuados. Los disolventes adecuados son disolventes que no reaccionan con los reactivos o con el producto y que disuelven los reactivos a un grado suficiente. Ejemplos de disolventes adecuados son dianticuerpoometano, cloroformos, tetracloruro de carbono, tetrahidrofurano y 1,4-dioxano. Preferiblemente, se utiliza diclorometano como disolvente. También se puede desarrollar la reacción sin un disolvente.

Convenientemente, la reacción se desarrolla en la presencia de N,N- dimetilformamida .

En un aspecto adicional de la presente invención, el compuesto de la fórmula en donde R1 es hidrógeno, alquilo C1-6, alcoxi Ci-6 o alquiltio Ci-6; R2 es alquilo Ci-6, alcoxi Ci-6 o alquiltio Ci-6; o R1 y R2 juntos forman un grupo funcional de la fórmula -(CH2)n-, en donde n es un entero de 3 a 5 ; R3 es hidrógeno, halógeno, alquilo Ci-6, alcoxi Ci-6, alquiltio Ci-6, fenilo o bencilo; y X es cloro o bromo, se utiliza para la protección de un compuesto orgánico que comprende por lo menos un grupo funcional guanidino y/o por lo menos un grupo amino.

En una realización preferida, el compuesto orgánico es un compuesto peptídico opcionalmente unido a resina que es opcionalmente protegido en la cadena lateral o protegido en un terminal libre; R1 y R2 son independientemente alquilo Ci-4, alcoxi Ci-4 o alquiltio Ci-4, y R3 es hidrógeno o halógeno.

Aquí y en lo siguiente, el término "compuesto peptídico" es para ser interpretado en una amplia manera como se define aquí adelante. Por lo tanto, el término "compuesto peptídico" se debe entender que significa cualquier compuesto de una de las siguientes categorías (a) a (d) : (a) Un péptido, es decir un compuesto producido por la formación de un enlace amida entre un grupo carboxilo de un aminoácido y un grupo amino de otro. El enlace amida está típicamente formado entre C-l de un aminoácido y N-2 de otro (enlace eupéptido) , pero un compuesto con residuos ligados por otros enlaces amida (enlaces isopéptidos) también significa que se cubre por el término "compuesto peptídico" . Los oligopéptidos que consisten de dos a quince residuos de aminoácido y los polipéptidos que consisten de dieciséis a cincuenta residuos de aminoácido son péptidos típicos de esta categoría. Los residuos de aminoácido pueden ser cualesquier aminoácidos naturales o no naturales. Un ejemplo para un péptido es H-Arg-Val-OH . (b) Un aminoácido, que puede no ser solo un aminoácido encontrado comúnmente en proteínas ( -aminoácido natural) sino también cualquier aminoácido no natural. Ejemplos son H-Ala-OH (aminoácido natural) y homoarginina (aminoácido no natural) . (c) Un derivado de un péptido, significa un péptido en el que uno o más de los residuos de aminoácido se han modificado químicamente, por ejemplo mediante acilación, alquilación, formación de éster o formación de amida. Ejemplos son Ac-Phe-Arg-Gly-Ala-Val-OH (SEQ ID NO 5), H-Phe-Arg-Gly-Ala-Val-NH2 (SEQ ID NO 6) y H-Arg-Gly-Ala-Gly- Gly-Lys (?e-tetradecanoil) -Ala-Gly-Gly-OH (SEQ ID NO 7) . (d) Un derivado de un aminoácido, significa un aminoácido que se ha modificado químicamente, por ejemplo mediante acilación, alquilación, formación de éster o formación de amida. Un ejemplo es H-Ala-OMe.

En otra realización preferida, el compuesto peptídico comprende por lo menos un grupo funcional guanidino y opcionalmente por lo menos un grupo amino, el grupo funcional guanidino es parte de un residuo de arginina, homoarginina o norarginina. Más preferiblemente, dicho grupo funcional guanidino es parte de un residuo de arginina o homoarginina. Aún más preferiblemente, grupo metileno adicional en la cadena de carbono.

En contraste, el prefijo "ñor" al nombre de un aminoácido común (como norarginina) denota remoción de un grupo metileno en la cadena de carbono.

En otra realización preferida, el compuesto peptídico comprende por lo menos un grupo amino y opcionalmente por lo menos un grupo funcional guanidino, dicho por lo menos un grupo amino (s) es el grupo amino de terminal N o parte de la cadena lateral de un residuo de aminoácido.

Más preferiblemente, el grupo amino a ser protegido es el grupo amino del terminal N de dicho compuesto peptídico. Más preferiblemente, el compuesto peptídico es H-Ala-OMe.

También más preferiblemente, el grupo amino a ser protegido es parte de la cadena lateral de un residuo de aminoácido de dicho compuesto peptídico. Aún más preferiblemente, dicho grupo amino es parte de un residuo de lisina, homolisina o norlisina. Más preferiblemente, dicho compuesto peptídico es Z-Lys-OH.

En otro aspecto, la presente invención se relaciona con un proceso para la protección de un compuesto orgánico, que comprende por lo menos un grupo funcional guanidino y/o un grupo amino, dicho proceso comprende la reacción de dicho compuesto con el compuesto de la fórmula en donde R1 es hidrógeno, alquilo Ci-6, alcoxi Ci-6 o alquiltio Ci-6; R2 es alquilo Ci-6, alcoxi Ci_6 o alquiltio Ci-6; o R1 y R2 juntos forman un grupo funcional de la fórmula -(CH2)n- en donde n es un entero de 3 a 5; R3 es hidrógeno, halógeno, alquilo Ci-6, alcoxi Ci-S, alquiltio Ci-6, fenilo o bencilo; y X es cloro o bromo, proporcionando así un compuesto, que comprende por lo menos un grupo funcional de la fórmula (III), en donde R1, R2 y R3 son como se definió anteriormente m es 0 o 1.

En una realización, m es 1, proporcionando así compuesto, que comprende por lo menos un grupo funcional la fórmula en donde R1, R2 y R3 son como se definió anteriormente.

En otra realización, m es 0, proporcionando así un compuesto, que comprende por lo menos un grupo funcional de la fórmula en donde R1, R2 y R3 son como se definió anteriormente.

En una realización preferida, R1 y R2 son independientemente alquilo Ci- , alcoxi Ci-4 o alquiltio Ci-4, R3 es hidrógeno o halógeno. En una realización, m es 1 y en otra realización, m es 0.

En una realización más preferida, R1 y R2 son metilo, R3 es hidrógeno y X es cloro. En una realización, m es 1; y en otra realización, m es 0.

En otra realización preferida, el compuesto orgánico es un compuesto peptídico opcionalmente unido a resina que opcionalmente se protege en dicha cadena- y/o se protege en un terminal libre, proporcionando así dicho compuesto peptídico, que comprende por lo menos un grupo funcional de la fórmula en donde R1 es hidrógeno, alquilo Ci-6, alcoxi Ci-6 o alquiltio Ci-6; R2 es alquilo Ci-6, alcoxi Ci-6 o alquiltio Ci-S; o R1 y R2 juntos forman un grupo funcional de la fórmula -(CH2)n-, en donde n es un entero de 3 a 5; y R3 es hidrógeno, halógeno, alquilo Ci-S, alcoxi Ci-6, alquiltio Ci-6, fenilo o bencilo; y m es 0 o 1.

Preferiblemente, R1 y R2 son independientemente alquilo Ci-4, alcoxi Ci-4 o alquiltio Ci-4 y R3 es hidrógeno o halógeno. Más preferiblemente, R1 y R2 son metilo y R3 es hidrógeno.

En una realización preferida, dicho compuesto peptídico comprende por lo menos un grupo funcional guanidino que es parte de un residuo arginina, homoarginina o norarginina, preferiblemente que es parte de un residuo arginina o homoarginina , proporcionando así dicho compuesto peptídico, que comprende por lo menos un grupo funcional de la fórmula (III) , en donde R1 es hidrógeno, alquilo Ci-6, alcoxi Ci-6 o alquiltio Ci-6; R2 es alquilo Ci-6, alcoxi Ci-6 o alquiltio Ci-6; o R1 y R2 juntos forman un grupo funcional de la fórmula -(CH2)n-, en donde n es un entero de 3 a 5; y R3 es hidrógeno, halógeno, alquilo Ci-6, alcoxi Ci-6, alquiltio Ci-6, fenilo o bencilo; y m es 1 ; preferiblemente, en donde R1 y R2 son independientemente alquilo Ci-4, alcoxi Ci- o alquiltio Ci-4 y R3 es hidrógeno o halógeno; y más preferiblemente, en donde R1 y R2 son metilo y R3 es hidrógeno .

Más preferiblemente, dicho compuesto peptídico a ser reaccionado solo comprende un grupo funcional guanidino .

En una realización preferida, dicho compuesto peptídico a ser reaccionado es ?-a-benciloxi- carbonil-L-arginina (Z-Arg-OH) .

En aún una realización más preferida, el compuesto peptídico a ser reaccionado es Z-Arg-OH; R1 y R2 del compuesto de la fórmula (II) son metilo, R3 del compuesto de la fórmula (II) es hidrógeno y X del compuesto de la fórmula (II) es cloro, proporcionando así N- -benciloxicarbonil-?-?- (1, 2- dimetilindol -3-sulfonil) -L-arginina. En aras de la conveniencia este compuesto se abrevia como Z-Arg (MIS) -OH en lo siguiente.

En otra realización preferida, dicho compuesto peptídico comprende por lo menos un grupo amino, dicho por lo menos un grupo amino (s) es el grupo amino del terminal N o es parte de la cadena lateral de un residuo de aminoácido, proporcionando así dicho compuesto peptídico, que comprende por lo menos un grupo funcional de la fórmula (III) , en donde R1 es hidrógeno, alquilo -e, alcoxi Ci-6 o alquiltio Ci-6; R2 es alquilo Ci.s, alcoxi Ci-6 o alquiltio Ci-G; o R1 y R2 juntos forman un grupo funcional de la fórmula -(CH2)n-, en donde n es un entero de 3 a 5; y R3 es hidrógeno, halógeno, alquilo Ci_6, alcoxi Ci-6, alquiltio Ci-6, fenilo o bencilo; y m es 0; preferiblemente, en donde R1 y R2 son independientemente alquilo Ci-4, alcoxi Ci- o alquiltio Ci- y R3 es hidrógeno o halógeno; y más preferiblemente, en donde R1 y R2 son metilo y R3 es hidrógeno.

Más preferiblemente, dicho compuesto peptídico a ser reaccionado solo comprende un grupo amino que es el grupo amino del terminal N o que es parte de la cadena lateral de un residuo de aminoácido.

Aún más preferiblemente, el grupo amino de dicho compuesto peptídico a ser reaccionado es el grupo amino del terminal N.

En una realización preferida, dicho compuesto peptídico a ser reaccionado es L-alanina metil' éster (H-Ala-OMe) .

En aún una realización más preferida, el compuesto peptídico es H-Ala-OMe ; R1 y R2 del compuesto de la fórmula (II) son metilo, R3 del compuesto de la fórmula (II) es hidrógeno y X del compuesto de la fórmula (II) es cloro, proporcionando así N-a- ( 1 , 2 -dimetilindol -3-sulfonil) -L-alanina metil éster. En aras de la conveniencia este compuesto se abrevia como MlS-Ala-OMe en lo siguiente.

También aún más preferiblemente, el grupo amino de dicho compuesto peptídico a se reaccionado es parte de la cadena lateral de un residuo de aminoácido. Más preferiblemente, dicho grupo amino es parte de un residuo lisina, homolisina o norlisina.

Como disolvente para el proceso de protección, se puede utilizar cualquier disolvente líquido inerte que puede disolver los reactivos. Los disolventes aplicables incluyen hidrocarburos halogenados tales como diclorometano, tetracloruro de carbono y dicloroetano ; éteres tales como éter de dietilo, tetrahidrofurano , 2 -metiltetrahidrofurano ; ésteres carboxílicos y lactonas tales como acetato de etilo, acetato de metilo y valerolactona; y disolventes orgánicos que contienen heteroátomos tales como acetona, acetonitrilo, dimetilformamida y sulfóxido de dimetilo. Los disolventes se pueden utilizar solos o como mezclas. Opcionalmente , el disolvente o mezcla de disolvente puede contener agua si la solubilidad de los reactivos requiere la presencia de agua. Los disolventes preferidos son diclorometano y acetona, solos o en la presencia de agua.

Opcionalmente, la mezcla de reacción puede contener bases inorgánicas u orgánicas.. Ejemplos para bases inorgánicas son hidróxido de sodio, hidróxido de potasio, hidróxido de litio y carbonato de sodio. Ejemplos para bases orgánicas son diisopropiletilamina, piridina y trietilamina. Las bases preferidas son hidróxido de sodio y diisopropiletilamina.

La cantidad del compuesto de la fórmula (II) varía con el volumen del reactor y puede estar en una relación molar de 0.9:1 a 4:1, preferiblemente de 1:1 a 3:1, con relación al compuesto orgánico, que comprende por lo menos un grupo funcional guanidino y/o un grupo amino . El compuesto de la fórmula (II) se puede agregar en porciones a la mezcla de reacción .

Se puede llevar a cabo el proceso de protección a temperaturas bajas o levemente elevadas. Por ejemplo, un rango de temperatura adecuado es de -10°C a 30° C, preferiblemente de 0° C a temperatura ambiente.

El tiempo de reacción depende de diferentes factores como la temperatura o la relación molar del compuesto de la fórmula (II) y el compuesto orgánico, que comprende por lo menos un grupo funcional guanidino y/o un grupo amino. Por lo tanto, la reacción se puede complementar dentro de unos pocos minutos a varias horas .

En un aspecto adicional, la presente invención se relaciona con un compuesto orgánico que comprende por lo menos un grupo funcional de la fórmula (lil), en donde R1 es hidrógeno, alquilo Ci-6, alcoxi Ci-6 o alquiltio Ci_6; R2 es alquilo C1-6, alcoxi d-6 o alquiltio Ci-6; o R1 y R2 juntos forman un grupo funcional de la fórmula - (CH2)n-/ en donde n es un entero de 3 a 5; R3 es hidrógeno, halógeno, alquilo Ci-6, alcoxi Ci-6, alquiltio Ci-6, fenilo o bencilo; y m es 0 o 1.

En una realización, m es 1, de tal manera que el compuesto orgánico comprende por lo menos un grupo funcional de la fórmula en donde R1, R2 y R3 son como se definió anteriormente.

En otra realización, m es 0, de tal manera que el compuesto orgánico comprende por lo menos un grupo funcional de la fórmula en donde R1, R2 y R3 son como se definió anteriormente En una realización preferida, R1 y R son independientemente alquilo C1-4, alcoxi Ci-4 o alquiltio Ci-4 y R3 es hidrógeno o halógeno. En una realización, m es 1 y en otra realización, m es 0.

En una realización más preferida, R1 y R2 son metilo, R3 es hidrógeno y X es cloro. En una realización, m es 1 y en otra realización, m es 0.

En otra realización preferida, el compuesto orgánico es un compuesto peptídico opcionalmente unido a resina que opcionalmente se protege en dicha cadena y/o se protege en un terminal libre y que comprende por lo menos un grupo funcional de la fórmula (III), en donde R1 es hidrógeno, alquilo Ci-6, alcoxi Ci-6 o alquiltio Ci-6; R2 es alquilo Ci-6( alcoxi Ci-6 o alquiltio Ci-6; o R1 y R2 juntos forman un grupo funcional de la fórmula - (CH2)n-/ en donde n es un entero de 3 a 5; R3 es hidrógeno, halógeno, alquilo Ci-6/ alcoxi Ci-6, alquiltio Ci-6, fenilo o bencilo; y m es 0 o 1, preferiblemente m es 1.

Preferiblemente, R1 y R2 son independientemente alquilo Ci- , alcoxi Ci-4 o alquiltio Ci-4 y R3 es hidrógeno o halógeno.

Más preferiblemente, R1 y R2 son metilo y R3 es hidrógeno.

En una realización preferida, dicho compuesto peptídico comprende por lo menos un grupo funcional guanidino que es parte de un residuo arginina, homoarginina o norarginina, preferiblemente que es parte de un residuo arginina o homoarginina, que comprende por lo menos un grupo funcional de la fórmula (III), en donde R1 es hidrógeno, alquilo Ci-6, alcoxi Ci-6 o alquiltio Ci_6; R2 es alquilo Ci-6, alcoxi Ci-6 o alquiltio Ci-6; o R1 y R2 juntos forman un grupo funcional de la fórmula - (CH2)n-, en donde n es un entero de 3 a 5 ; y R3 es hidrógeno, halógeno, alquilo Ci- 6 , alcoxi Ci-6 , alquiltio Ci- 6 , fenilo o bencilo; y m es 1 ; preferiblemente, en donde R1 y R2 son independientemente alquilo Ci-4 , alcoxi Ci- 4 o alquiltio Ci_4 y R3 es hidrógeno o halógeno; y más preferiblemente, en donde R1 y R2 son metilo y R3 es hidrógeno .

Más preferiblemente, dicho compuesto peptídico comprende solo un grupo funcional guanidino.

Aún más preferiblemente, dicho compuesto peptídico es Z- Arg(MIS)-0H.

En otra realización preferida, dicho compuesto peptídico comprende por lo menos un grupo amino, dicho por lo menos un grupo amino (s) es el grupo amino del terminal N o es parte de la cadena lateral de un residuo de aminoácido, que comprende por lo menos un grupo funcional de la fórmula (III) , en donde R1 es hidrógeno, alquilo Ci- 6 , alcoxi Ci- 6 o alquiltio Ci- 6 ; R2 es alquilo Ci- 6 , alcoxi Ci- S o alquiltio Ci- 6 ; o R1 y R2 juntos forman un grupo funcional de la fórmula -(CH2)n-, en donde n es un entero de 3 a 5; y R3 es- hidrógeno, halógeno, alquilo Ci-6, alcoxi Ci- S , alquiltio Ci- S , fenilo o bencilo; y m es 0; preferiblemente, en donde R1 y R2 son independientemente alquilo Ci_4 , alcoxi Ci- 4 o alquiltio y R3 es hidrógeno o halógeno; y más preferiblemente, en donde R1 y R2 son metilo y R3 es hidrógeno.

También más preferiblemente, dicho compuesto peptídico comprende solo un grupo amino que es el grupo amino del terminal N o que es parte de la cadena lateral de un residuo de aminoácido.

Aún más preferiblemente, el grupo amino de dicho compuesto peptídico es el grupo amino del terminal N.

Más preferiblemente, dicho compuesto peptídico es MIS-Ala-OMe.

También aún más preferiblemente, el grupo amino de dicho compuesto peptídico es parte de la cadena lateral de un residuo de aminoácido. Más preferiblemente, dicho grupo amino es parte de un residuo lisina, homolisina o norlisina.

Un aspecto adicional de la invención es modificar y/o acoplar en la siguiente etapa (s) el compuesto orgánico obtenido de acuerdo con la presente invención.

Como los compuestos orgánicos obtenidos de acuerdo con la presente invención son elementos fundamentales, ellos se pueden aplicar para formar los compuestos orgánicos que son útiles como por ejemplo sustancias de fármaco.

De acuerdo con la presente invención, el compuesto orgánico que comprende por lo menos un grupo funcional de la fórmula en donde R1 es hidrógeno, alquilo Ci-6, alcoxi Ci-6 o alquiltio Ci-6; R2 es alquilo Ci-6, alcoxi Ci-e o alquiltio Ci-6; o R1 y R2 juntos forman un grupo funcional de la fórmula -(CH2)n-/ en donde n es un entero de 3 a 5; R3 es hidrógeno, halógeno, alquilo Ci-S, alcoxi Ci-6, alquiltio C1-6, fenilo o bencilo; y m es 0 o 1, se modifica químicamente en una siguiente etapa.

En una realización preferida, el compuesto orgánico a ser modificado en una siguiente etapa es un compuesto peptídico opcionalmente unido a resina que opcionalmente se protege en dicha cadena y/o se protege en un terminal libre y que comprende por lo menos un grupo funcional de la fórmula (III) , en donde R1, R2, R3 y m son como se definió anteriormente .

Preferiblemente, dicho compuesto peptídico comprende por lo menos un grupo funcional guanidino que es parte de un residuo arginina, homoarginina o norarginina, preferiblemente que es parte de un residuo arginina o homoarginina, que comprende por lo menos un grupo funcional de la fórmula (III), en donde R1, R2, R3 y m son como se definió anteriormente ; preferiblemente, en donde R1 y R2 son independientemente alquilo Ci-4, aclxoxi Ci_4 o alquiltio Ci-4 y R3 es hidrógeno o halógeno; y más preferiblemente, en donde R1 y R2 son metilo y R3 es hidrógeno.

Más preferiblemente, dicho compuesto peptídico comprende solo un grupo funcional guanidino.

Aún más preferiblemente, dicho compuesto peptídico es Z-Arg(MIS)-OH.

La modificación comprende cualquier reacción orgánica que cumple con el grupo de protección de la presente invención. Como un ejemplo, Z-Arg (MIS) -OH se puede modificar mediante la desprotección del grupo Z, formando así H-Arg(MIS) -OH.

Opcionalmente, el compuesto modificado así obtenido se modifica por lo menos una vez. Como un ejemplo, H-Arg (MIS) -OH cuando se obtienen mediante una primera modificación se puede modificar adicionalmente mediante protección de su terminal N, formando así por ejemplo Fmoc-Arg (MIS) -OH .

Se pueden llevar a cabo las etapas de desprotección y protección utilizando condiciones de reacción conocidas en la técnica de la síntesis de péptido.

También de acuerdo con la presente invención, el compuesto orgánico que comprende por lo menos un grupo funcional de la fórmula (III), en donde R1 es hidrógeno, alquilo Ci_6, alcoxi Ci-6 o alquiltio Ci_6; R2 es alquilo Ci-S, alcoxi Ci-6 o alquiltio Ci-6; o R1 y R2 juntos forman un grupo funcional de la fórmula -(CH2)n-, en donde n es un entero de 3 a 5 ; R3 es hidrógeno, halógeno, alquilo C1-6, alcoxi Ci-6, alquiltio Ci-6, fenilo o bencilo; y m es 0 o 1, se acopla a un compuesto orgánico Q en una siguiente etapa .

Opcionalmente , se puede repetir dicha etapa de acoplamiento por lo menos una vez y/o se puede desarrollar por lo menos un acoplamiento adicional con un compuesto de acoplamiento adecuado. El compuesto así obtenido se puede modificar químicamente y en el caso en que dicho compuesto se una a resina, puede seguir la división de la resina.

En una realización preferida, el compuesto orgánico a ser acoplado en una siguiente etapa al compuesto orgánico Q es un compuesto peptídico opcionalmente unido a resina que opcionalmente se protege en dicha cadena y/o se protege en un terminal libre y que comprende por lo menos un grupo funcional de la fórmula (III) , en donde R1, R2, R3 y m son como se definió anteriormente.

Preferiblemente, dicho compuesto peptídico comprende por lo menos un grupo funcional guanidino que es parte de un residuo arginina, homoarginina o norarginina, preferiblemente que es parte de un residuo arginina o homoarginina, que comprende por lo menos un grupo funcional de la fórmula (III) , en donde R1, R2, R3 y m son como se definió anteriormente; preferiblemente, en donde R1 y R2 son independientemente Cl-A alquilo, alcoxi Ci-4 o alquiltio Ci-4 y R3 es hidrógeno o halógeno; y más preferiblemente, en donde R1 y R2 son metilo y R3 es hidrógeno .

Más preferiblemente, dicho compuesto peptídico comprende solo un grupo funcional guanidino.

Aún más preferiblemente, dicho compuesto peptídico es Fmoc -Arg (MIS ) -OH o Z-Arg (MIS) -OH .

El compuesto orgánico Q es preferiblemente un compuesto peptídico opcionalmente unido a resina que opcionalmente se protege en dicha cadena y/o se protege en un terminal libre.

Más preferiblemente, el compuesto orgánico Q es un compuesto peptídico que opcionalmente se protege en dicha cadena y que se une opcionalmente a resina.

En una realización preferida, dicho compuesto peptídico es H-Val-resina o H-Trp (Boc) -Ala- Gly-resina, preferiblemente la resina se origina de la resina amida Sieber ( 9-Fmoc-amino-xanten-3-iloxi-resina Merrifield) .

En aún una realización más preferida, el compuesto peptídico a ser acoplado es Fmoc- Arg(MIS)-OH y el compuesto peptídico al que se acopla dicho compuesto peptídico es H-Val-NH-xanten-3-iloxi-resina Merrifield, proporcionando así Fmoc-Arg (MIS) -Val-NH- xanten-3-iloxi-resina Merrifield.

Preferiblemente, se repite dicha reacción de acoplamiento tres veces proporcionando así Fmoc- Arg (MIS) -Arg (MIS) -Arg (MIS) -Arg (MIS) -Val-NH-xanten-3 -iloxi-resina Merrifield (SEQ ID NO 8) . también preferiblemente, Fmoc-Phe-OH se acopla después de la desprotección del terminal N de dicho péptido unido a resina, proporcionando así Fmoc-Phe-Arg(MIS) -Arg (MIS) -Arg (MIS) - Arg (MIS) -Val-NH-xanten-3 -iloxi-resina Merrifield (SEQ ID NO 1) . Más preferiblemente, el terminal N se desprotege y se acetila, proporcionando así Ac-Phe-Arg(MIS) -Arg (MIS) - Arg (MIS) -Arg (MIS) -Val-NH-xanten-3 -iloxi-resina Merrifield (SEQ ID NO 1) . Más preferiblemente dicho péptido unido a resina se divide de la resina, proporcionando así Ac-Phe- Arg (MIS) -Arg (MIS) -Arg (MIS) -Arg (MIS) -Val-NH2 (SEQ ID NO 2).

En también aún una realización preferida, el compuesto peptídico a ser acoplado es Z-Arg (MIS) -OH y el compuesto peptídico al que dicho compuesto se acopla es H-Trp (Boc) -Ala-Gly-NH-xanten-3-iloxi-resina de Merrifield, proporcionando así Z-Arg (MIS)- Trp (Boc) -Ala-Gly-NH-xanten-3-iloxi-resina Merrifield (SEQ ID NO 3) . Preferiblemente, dicho péptido unido a resina se divide de la resina, proporcionando así Z-Arg (MIS) -Tr (Boc) -Ala- GIy-NH2 (SEQ ID NO 3).

El procedimiento de acoplamiento al compuesto orgánico Q puede seguir de acuerdo con cualquier método de acoplamiento conocido por la persona experta en la técnica. En el caso en que el compuesto orgánico a ser acoplado es un compuesto peptídico, el , acoplamiento se desarrolla preferiblemente en fase sólida o líquida. Más preferiblemente, opcionalmente las etapas de acoplamiento que preceden y opcionalmente las siguientes también se desarrollan en fase sólida y/o líquida.

El término "fase sólida" se debe entender que significa síntesis de péptido de fase sólida (SPPS) . En el SPPS un grupo aminoácido o péptido, opcionalmente protegido, se une a una resina de soporte sólido. Luego, los aminoácidos sucesivos o grupos péptido, opcionalmente protegidos, se adhieren al péptido unido al soporte hasta que se forma el material de péptido de interés. El péptido unido a soporte luego se divide típicamente del soporte y se somete a procesamiento adicional y/o purificación. En algunos casos, la síntesis de fase sólida produce un producto de péptido maduro; en otros casos el péptido dividido del soporte, es decir un "fragmento de péptido intermedio", se utiliza en la preparación de un producto peptídico maduro, más grande.

El término "fase de solución" se debe entender que significa síntesis de péptido de fase de solución. En la síntesis de péptido de fase de solución, dos fragmentos intermedios de péptido, opcionalmente protegidos, o un fragmento intermedio de péptido y un aminoácido reactivo, ambos se protegen opcionalmente, se acoplan en un disolvente apropiado, usualmente en la presencia de reactivos adicionales que promueven la eficiencia y calidad de la reacción de acoplamiento. Los fragmentos intermedios de péptido se disponen reactivamente de tal manera que el terminal N de un fragmento se llegas a acoplar al terminal C del otro fragmento, o viceversa. Adicionalmente, los grupos que protegen la cadena lateral, que están presentes durante la síntesis de fase sólida, se retienen comúnmente en los fragmentos durante el acoplamiento de la fase de solución para asegurar la reactividad específica de los extremos terminales de los fragmentos. Estos grupos que protegen la cadena lateral no se remueven típicamente hasta que se ha formado un compuesto peptídico maduro.

Un aspecto adicional de la invención es la división de un compuesto orgánico, que comprende por lo menos un grupo funcional de la fórmula (\\\). en donde R1 es hidrógeno, alquilo Ci-6, alcoxi Ci-S o alquiltio Ci-6; R2 es alquilo Ci-6, alcoxi Ci-6 o alquiltio Ci-6; o R1 y R2 juntos forman un grupo funcional de la fórmula -(CH2)n-# en donde n es un entero de 3 a 5 ; R3 es hidrógeno, halógeno, alquilo Ci-6, alcoxi Ci-G, ' alquiltio Ci-6, fenilo o bencilo; y m es 0 o 1, dicha división tiene lugar opcionalmente en la presencia de por lo menos un secuestrante.

En una realización preferida, el procedimiento de división se desarrolla mediante el uso de un ácido, preferiblemente mediante el uso de ácido trifluoroacético (TFA) . Él ácido se aplica neto o como mezcla con un disolvente inerte.

Un ejemplo para un disolvente inerte adecuado es diclorometano (DCM) . Preferiblemente, la relación molar de ácido y disolvente está en el rango de 1:0 y 1:2, preferiblemente de 1 : 0 y 1 : 1.

Después de división, el compuesto de sulfonilio formado se _ puede atrapar mediante cualquier secuestrante adecuado. Ejemplos para secuestrantes son triisopropilsilano (TIS) , agua, sulfuro de dimetilo, alcoxibencenos Ci- tales como 1, 3 , 5-trimetoxibenceno (TMB) y alcoxi Ci-4- fenoles tales como 3 , 4 -dimetoxifenol y 3 , 5-dimetoxifenol . Se puede utilizar el secuestrante solo o como una mezcla tal como agua/TIS.

Preferiblemente, los alcoxibencenos Ci-4 y alcoxifenoles Ci-4 se utilizan como secuestrantes yá que ellos son nucleófilos menos polares comparados con por ejemplo agua. Como una consecuencia, los aductos así obtenidos son más fáciles de separar del compuesto objetivo en el siguiente procedimiento de trabajo.

En una realización preferida, dicho compuesto orgánico a ser dividido es un compuesto peptídico opcionalmente unido a resina que opcionalmente se protege en dicha cadena y/o se protege en un terminal libre. Preferiblemente, R1 y R2 son independientemente alquilo Ci-4, alcoxi Ci-4 o alquiltio Ci-4 y R3 es hidrógeno o halógeno, más preferiblemente, R1 y R2 son metilo y R3 es hidrógeno.

En una realización más preferida, dicho compuesto peptídico a ser dividido es Ac-Phe- Arg (MIS) -Arg (MIS) -Arg (MIS) -Arg (MIS) -Val-NH-xanten-3 -iloxi-resina Merrifield (SEQ ID NO 1) , proporcionando así Ac-Phe-Arg-Arg-Arg-Arg-Val-NH2 (SEQ ID NO 2) . Preferiblemente, se aplica TFA/DCM/TIS/agua como solución de división, más preferiblemente en una relación molar de 50:45:2.5:2.5. También preferiblemente, se aplica TFA/DCM/3 , 4 -dimetoxifenol como solución de división, más preferiblemente en una relación molar de 50:40:10. También preferiblemente, se aplica TFA/DCM/3, 5- dimetoxifenol como solución de división, más preferiblemente en una relación molar de 50:40:10. También preferiblemente, se aplica TFA/DCM/TMB como solución de división, más preferiblemente en una relación molar de 50:40:10.

En una realización también más preferida, dicho compuesto peptídico a ser dividido es Z-Arg (MIS) -Trp (Boc) -Ala-Gly-NH-xanten-3-iloxi-resina Merrifield (SEQ ID NO 3), proporcionando así Z-Arg-Trp-Ala-Gly-NH2 (SEQ ID NO 4) . Preferiblemente, se aplica TFA/DCM/TMB como solución de división, más preferiblemente en una relación molar de 50:40:10.

En una realización también más preferida, dicho compuesto peptídico a ser dividido es MIS-Ala-OMe, proporcionando así H-Ala-OMe. Preferiblemente, se aplica TFA/sulfuro de dimetilo como solución de división, más preferiblemente en una relación molar de 90:10.

Ej emplos Los siguientes ejemplos ilustran adicionalmente esta invención pero no se destinan a limitar en ninguna forma. Los Ejemplos 1 a 8 se refieren a procedimientos de preparación y los Ejemplos 9 a 20 se refieren a ensayos de remoción.

Si no se indica de otra forma, el L-enantiómero del residuo de aminoácido se utiliza y todos los reactivos se obtienen comercialmente .

Abreviaturas : Boc = tere- butoxicarbonilo DIC = diisopropilcarbodiimida DIPEA = diisopropiletilamina ESMS = espectrometría de masa por electrorrociado Fmoc = fluoren-9-ilmetoxicarbonilo HOAt = N-hidroxi-7-azabenzotriazol HOBt = N-hidroxibenzotriazol HRMS (Cl) = espectrometría de' masa de alta resolución (ionización química) MALDI-TOF = tiempo de vuelo y desorción/ionización de láser asistido por matriz MIS = 1, 2-dimetilindol-3-sulfonilo PyBOP = hexafluorofosfato de benzotriazol-l-iloxi-tripirrolidinofosfonio TFA = ácido trifluoroacético TIS = triisopropilsilano TMB = 1,3,5 -trimetoxibenceno Z-OSu = N- (benciloxicarboniloxi) succinimida Ejemplo 1: Preparación de 1, 2-dimetilindol -3-sulfonato de piridinio Se disuelven 1 , 2 -Dimetilindol . (19.7 g, 135.9 mmol) y complejo de piridina trióxido de azufre (20.4 g, 128.3 mmol) en piridina (100 mL) bajo atmósfera de argón. La mezcla de reacción se somete a reflujo durante 40 horas y luego se enfria a temperatura ambiente . Después de adición de agua (400 mL) , la solución resultante se lava cuatro veces con éter de dietilo (cada una 250 mL) . La fase acuosa se evapora hasta secado y se seca en el desecador de vacío para hacer 1, 2-dimetilindol -3-sulfonato de piridinio como un aceite rojo (37.6 g, 96% de rendimiento) . 1H.RMN(400 MHz , D20) : d = 8.44 (d, 2H, J = 5.8 Hz), 8.31 (m, 1 H) , 7.75 (m, 2H) , 7.67 (d, 1 H, J = 7.7 Hz) , 7.14 (d, 1 H, J = 7.4 Hz) , 7.05 (m, 2H) , 3.38 (s, 3H) , 2.41 (s, 3H) . 13C R N (100 MHz , D20) : d = 147.0, 140.9, 139.2, 135.6, 127.3, 124.1, 122.0, 121.0, 119.2, 112.8, 109.9, 29.2, 10.4.

HRMS (Cl) : m/z calculado para Ci0Hi0NO3S [M - H] + 224.0386, encontrado 224.0388.

Ejemplo 2: Preparación de cloruro de 1 , 2 -dimetilindol -3-sulfonilo (MIS-CI) Se suspende 1 , 2 -dimetilindol -3-sulfonato de piridinio del Ejemplo 1 (16.4 g, 53.7 mmol) en diclorometano seco (120 mL) bajo atmósfera de nitrógeno. La solución se enfría en un baño de hielo y se agrega' lentamente cloruro de oxalilo (14 mL, 161 mmol) . Luego, se agrega muy lentamente N,N-dimetilformamida (0.5 mL) bajo agitación. La mezcla de reacción se agita durante 30 minutos adicionales en el baño de hielo y luego a temperatura ambiente. Después de 6 horas, la solución se enfría en un baño de hielo. Se agregan cloruro de oxalilo extra (4 mL, 46 mmol) y N,N- dimetilformamida (0.4 mL) y la mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante unas 15 horas adicionales. Después de adición de cloruro de oxalilo (2 mL, 23 mmol) y agitación adicional durante 4 horas, se completa la reacción (se mide mediante HPLC; antes de medición, tratamiento de una pequeña alícuota con metanol durante 20 minutos) .

La mezcla de reacción se evapora hasta secado a temperatura ambiente. Se agrega N,N- dimetil- formamida (200 mL) , seguida por agua (100 mL) . La mezcla se agita durante 5 minutos para remover el cloruro de oxalilo. Luego, las fases se separan y la fase orgánica se lava tres veces con agua (cada 100 mL) . La fase orgánica se seca sobre sulfato de magnesio anhidro y se evapora hasta secado proporcionando cloruro de 1, 2-dimetilindol -3-sulfonilo (MIS-CI) como sólido púrpura (10.2 g, 78% de rendimiento) .

?? RMN(400 MHz, DMSO) : d = 7.82 (d, 1 H, J = 7.8 Hz), 7.36 (d, 1 H, J = 8.0 Hz), 7.08 (m, 2H) , 7.00 (m, 2H) , 3.63 (s, 3H) , 2.56 (s, 3H) . 13C RMN (100 MHZ, DMSO) : d = 137.2, 135.9, 125.5, 121.4, 120.8, 120.1, 109.7, 30.0, 11.3.

HRMS (Cl) : m/z calculado para Ci0H10NO2S [M - Cl] + 208.0426, encontrado 208.0427.

Ejemplo 3: Preparación de Z-Arg (MIS) -OH Se disuelve Z-Arg-OH (2 g, 6.5 mmol) en acetona (65 mL) y solución de hidróxido de sodio acuosa 3 N (18 mL, 54 mmol) . La reacción se enfría en un baño de- hielo y se agrega MIS-C1 del Ejemplo 2 (1.59 g, 6.5 mmol) , disuelto en acetona (50 mL) , durante 10 minutos. La mezcla de reacción se agita durante 1 hora a 0o C. Luego, se agrega MIS-C1 adicional (0.95 g, 3.9 mmol) en acetona (20 mL) , seguido por agitación durante 90 minutos a 0o C. Finalmente, se agrega una última porción de IS-C1 (0.95 g. 3.9 mmol) en acetona (15 mL) . La mezcla de reacción se agita durante 30 minutos adicionales a 0o C y 3 horas adicionales a temperatura ambiente, hasta que no se detecta MIS-C1 mediante TLC (hexano: acetato de etilo 1:1) . El pH de la reacción se neutraliza con 10% de ácido cítrico acuoso. Después de evaporación de la acetona in vacuo, se agrega agua (100. mL) y el pH se acidifica a pH 3 con 10% de ácido cítrico acuoso. Luego, la solución se extrae tres veces con acetato de etilo (cada 100 mL) . Las fases orgánicas se colocan juntas, se lavan tres veces con agua (cada 75 mL) , se secan sobre sulfato de magnesio y finalmente se evaporan hasta secado. El crudo obtenido se purifica dos veces mediante cromatografía de columna (diclorometano, metanol, ácido acético) . Las fracciones puras se combinan y el disolvente se remueve in vacuo produciendo un aceite. Para precipitación, la cantidad mínima de una mezcla de acetato de etilo, diclorometano y metanol se agrega seguida por adición de hexano hasta que no se observa precipitación adicional. El disolvente se decanta y el sólido se lava cuatro veces con una mezcla de diclorometano y hexano y finalmente se seca sobre sulfato de magnesio produciendo 18% (0.61 g) de Z-Arg (MIS) -OH . ti RMN(400 MHz, DMSO) : d = 7.85 (d, 1 H, J = 7.6 Hz), 7.52 (d, 1 H, J = 8.0 Hz), 7.43 (d, 1 H, J = 8.0 Hz) , 7.30 (m, 5H) , 7.10 (m, 2H) , 5.01 (s, 2H) , 3.87 (m, 1 H) , 3.66 (s, 3H) , 3.0 (m, 2H) , 2.60 (s, 3H) , 1.64 (m, 1 H) , 1.49 (m, 1 H) , 1.41 (m, 2H) . 13C RMN (100 MHZ, DMSO): d = 174.4, 157.0, 156.8, 139.4, 137.7, 135.9, 129.0, 128.5, 128.4, 125.2, 122.1, 121.1, 120.1, 110.4, 66.1, 54.3, 40.0, 30.2, 28.9, 26.4, 11.4.

HRMS (CI) : m/z calculado para C24H30N5O6S [M + H] + 516.1911, encontrado 516.1911.

Ejemplo 4: Preparación de Fmoc-Arg (MIS) -OH 1. Preparación de H-Arg (MIS) -OH Una mezcla de Z-Arg (MIS) -OH como se obtiene del Ejemplo 3 (486 mg, 0.94 mmol) y 10% Pd/C (110 mg) en metanol (60 mL) se hidrogena durante la noche a presión atmosférica. Cuando la reacción está aún incompleta (se mide mediante TLC; diclorometano : ácido metanoacético, 90:9:1), se agrega 10% de Pd/C (100 mg) y la reacción se hidrogena durante 24 horas adicionales hasta que se completa (se mide mediante TLC) .

La mezcla de reacción se filtra sobre celita y se evapora hasta secado produciendo 98% (352 mg) de H-Arg (MIS ) -OH.

XH RMN(400 MHz, DMSO) : d = 7.83 (d, 1 H, J = 7.6 Hz), 7.47 (d, 1 H, J = 8.1 Hz) , 7.42 (d, 1 H, J = 8.1 Hz) , 7.11 (m, 2H) , 3.65 (s, 3H) , 3.17 (m, 1 H) , 3.00 (m, 2H) , 2.60 (s, 3H) , 1.65 (m, 1 H) , 1.54 (m, 1 H) , 1.42 (m, 2H) . 2. Preparación de Fmoc-Arg (MIS) -OH Se disuelve Fmoc-Cl (84 mg, 0.32 mmol) en 1,4-dioxano (0.5 mL) . Se agrega azida de sodio (25 mg, 0.39 mmol) en agua (0.4 mL) y la emulsión resultante se agita durante 2 horas a temperatura ambiente. Luego, se agrega lentamente la emulsión a una solución de H-Arg (MIS) -OH como se obtiene en la etapa previa (136 mg, 0.36 mmol) en una mezcla 1:1 de agua y dioxano a pH 9, que se controla mediante adición de 10% de carbonato de sodio acuoso. La mezcla de reacción se agita mientras que el pH se mantiene a 9. Una vez el pH se estabiliza, la mezcla se agita durante la noche. Luego, se agrega agua (30 mL) y la mezcla se lava tres veces con terc-butil metil éter (cada 20 mL) .La fase acuosa se acidifica con HC1 1 N a un pH de 2 a 3 y luego se extrae rápidamente tres veces con acetato de etilo (30 mL) . Las fases orgánicas se combinan y se secan sobre sulfato de magnesio. Después de la evaporación hasta secado, se obtiene un aceite (115 mg) , que se disuelve en un mínimo de acetona. Luego, se agrega carbonato de sodio acuoso (20 mL) a pH 9 y la solución acuosa se lava tres veces con tere- butil metil éter (cada 30 mL) . La solución acuosa así obtenida se acidifica con HC1 1 N a un pH de 2 a 3 , luego se extrae tres veces con acetato de etilo (cada 20 mL) , se seca sobre sulfato de magnesio y finalmente se evapora hasta secado produciendo 34.3% (67.4 mg) de Fmoc-Arg(MIS)-OH.

½ RMN(400 MHz , DMSO) : d = 7.86 (m, 3H) , 7.70 (d, 2H, J = 7.4 Hz) , 7.59 (d, 1 H, J = 7.9 Hz) , 7.42 (d, 1 H, J = 8.1 Hz) , 7.39 (m, 2H) , 7.30 (ra, 2H) , 7.10 (m, 2H) , 4.27 (m, 2H) , 4.20 (m, 1 H) , 3.86 (m, 1 H) , 3.66 (s, 3H) , . 3.01 (ra, 2H) , 2.61 (s, 3H) , 1.65 (m, 1 H) , 1.52 (m. 1 H) , 1.38 (m, 2H) . 13C RMN (100 MHZ, DMSO): d = 174.4, 157.0, 156.8, 144.5, 141.4, 139.4, 135.9, 128.3, 127.8, 126.0, 125.2, 122.1, 121.1, 120.8, 120.1, 110.4, 66.3, 55.6, 47.3, 40.0, 30.2, 28.8, 26.5, 11.4.

HRMS (Cl) : m/z calculado para C31H34N5OSS [M + H] + 604.2224, encontrado 604.2222.

Ejemplo 5: Preparación de AC-Phe-Arg (MiS) -Arg (MIS) - Arg (MIS) -Arg (MIS) -Val-NH2 (SEQ ID NO 2) La resina amida de Sieber (25 mg, 0.42 mmol/g, 9-Fmoc- aminoxanten-3-iloxi-resina de Merrifield) se coloca en una jeringa de 2 mL de polipropileno provista con un disco de filtro de polietileno. La resina se hincha con diclorometano . Posteriormente, los lavados con diclorometano y N,N- dimetilformamida se llevan a cabo y el grupo Fmoc se remueve mediante tratamiento con una mezcla 2:8 de piperidina y N,N- dimetilformamida (una vez durante 1 minuto, y dos veces durante 10 minutos). Se acopla Fmoc-Val-OH (14.3 mg, 42.1 · µp???) utilizando HOBt (5.7 mg, 42.1 µp???) y DIC (6.7 L, 42.1 pmol) en N,N- dimetilformamida durante 1.5 horas. El grupo Fmoc se remueve en la forma usual, y Fmoc -Arg (MIS) -OH como se obtiene del Ejemplo 4 (15.8 mg, 26.3 pmol) se acopla utilizando PyBOP (13.7 mg, 26.3 µ????), HOAt (3.6 mg, 26.3 ymol) y DI PEA (13.4 yL, 78.9 µ????) en N,N- dimetilformamida durante 90 minutos. La resina se acetila mediante tratamiento con anhídrido acético (50 eq) y DIPEA (50 eq) en DMF durante 25 min con el fin de hacer el taponamiento de las aminas no reactivas, el grupo Fmoc se remueve y el mismo procedimiento se repite tres o más veces que incluyen la acetilación de la resina antes de remoción de Fmoc . Después de la última remoción Fmoc, el Fmoc-Phe-OH (13.6 mg, 35 µ????) se acopla utilizando PyBOP (18.3 mg, 35 ymol), HOAt (4.8 mg, 35 pmol) y DIPEA (17.9 pL, 105.2 ymol) en N,N- dimetilformamida durante 90 min. El grupo Fmoc se remueve, y el grupo amino libre resultante se acetila en la misma forma como se describió anteriormente. El péptido unido a resina Ac-Phe-Arg (MIS) -Arg(MIS) -Arg(MIS) -Arg(MIS) -Val -NH-xanten- 3 -iloxi- resina Merrif ield, protegido así obtenido se lava con N,N-dimetilformamida, diclorometano y éter de dietilo, se seca en vacío y luego se divide en cinco alícuotas.

Una alícuota se utiliza para la preparación del compuesto objetivo de este ejemplo y se utilizan las otras alícuotas como material de partida para los ensayos de remoción de ensayos por ejemplo, el Ejemplo 9.

Así, una alícuota se hincha con diclorometano y se trata con 1.5 mL de una mezcla de TFA, diclorometano, TIS y agua (2:93:2.5:2.5) durante 20 minutos con el fin de dividir el péptido protegido de la resina. La resina se filtra y la solución recolectada se diluye con diclorometano y se neutraliza al agregar DIPEA (80 \iL, 1.2 eq por eq de TFA) . El disolvente se remueve in vacuo. Después de adición de agua y acetonitrilo, la solución se liofiliza obteniendo Ac-Phe- Arg(MIS) -Arg(MIS) - Arg (MIS) -Arg (MIS) -Val-NH (SEQ ID NO 2).

El producto se caracteriza por LC-MS y HRMS (Cl) : m/z calculado para C8oHio7 23015S [M + Na] + 1780.7092, encontrado 1780.7152.

Ejemplo 6: Preparación de Z-Arg (MiS) -Trp (Boc) -Ala-Gly-NH2 (SEQ ID NO 4) Se coloca resina amida de Sieber (70 mg, 0.40 mmol/g) en una jeringa de 2 mL de polipropileno provista con un disco de filtro de polietileno. La resina se hincha con diclorometano, se llevan a cabo lavados con diclorometano y N,N-dimetilformamida y se remueve el grupo Fmoc. Se acoplan secuencialmente Fmoc-Gly-OH (33.3 mg, 112 ymol), Fmoc-Ala-OH (34.9 mg, 112 pmol) y Fmoc-Trp (Boc) -OH (59.0 mg, 112 pmol) utilizando PyBOP (58.3 mg, 112 pmol) HOAt (15.2 mg, 112 pmol) y DIPEA (57.4 L, 336 pmol) en N,N- dimetilformamida durante 1.5 horas. La resina se divide en dos partes iguales. Una parte se utiliza para la preparación del compuesto objetivo de este ejemplo y la otra parte para la preparación de Z-Arg (Pbf ) -Trp (Boc) -Ala-Gly-NH2 (ver Ejemplo 8.2).

Así, se acopla Z-Arg (MIS) -OH (28.9 mg, 56 ymol) con una parte de resina utilizando PyBOP (29.2 mg, 56 µp???) , HOAt (7.6 mg, 56 pmol) y DIPEA (28.7 pL, 168 mol) en N,N-dimetilformamida durante 1.5 horas. El péptido unido a resina Z-Arg (MIS) - Trp (Boc) -Ala-Gly-NH-xanten-3-iloxi-resina Merrifield, protegido así obtenido se lava con N,N-dimetilformamida, diclorometano y éter de dietilo, se seca en vacío y luego se divide en alícuotas de 4 mg. Una alícuota se utiliza para la preparación del compuesto objetivo de este ejemplo y se utilizan las otras alícuotas como material de partida para los ensayos de remoción de por ejemplo el Ejemplo 19. Así, una alícuota se hincha con diclorometano y se trata con 1.5 mL de una mezcla de TFA, diclorometano, TIS y agua (2:93:2.5:2.5) durante 20 minutos con el fin de dividir el péptido protegido de la resina. La resina se filtra y la solución recolectada se diluye con diclorometano y se neutraliza al agregar DIPEA (80 pL, 1.2 eq por eq of TFA) . El disolvente se remueve in vacuo. Después de adición de agua y acetonitrilo, la solución se liofiliza obteniendo Z-Arg (MIS) -Trp (Boc) -Ala-Gly-NH2 con 95% de pureza (mediante HPLC) . El producto obtenido se caracteriza por LC-MS.

Ejemplo 7: Preparación de MIS-Ala-OMe H-Ala-OMe (95 mg, 0.68 mmol, 1 eq) se disuelve en diclorometano seco y se agrega DIPEA (3 eq) . Se agrega una solución de MIS-C1 (200 mg, 1.2 eq) , como se obtiene del Ejemplo 2, en diclorometano seco, y la mezcla de reacción se agita durante 1.5 horas a temperatura ambiente. El trabajo en la forma usual produce 85.4 mg (40%) de MIS-Ala-OMe.

Ejemplo 8: Preparación de los compuestos de comparación protegidos Pbf 8.1 Preparación de Ac-Phe-Arg (Pbf ) -Arg (Pbf ) -Arg (Pbf ) -Arg (Pbf ) -Val-NH2 (SEQ ID NO 2) El mismo procedimiento como para la preparación de Ac-Phe-Arg(MIS) -Arg (MIS) -Arg (MIS) - Arg (MIS) -Val-NH2 se aplica' (ver Ejemplo 5) excepto para reemplazar Fmoc-Arg (MIS) - OH by Fmoc-Arg (Pbf ) -OH (17.1 mg, 26.3 ymol). El producto obtenido se caracteriza por LC-MS y HRMS (Cl) : m/z calculado para 92Hi36Ni90i9S4 [M + H]+ 1938.9137, encontrado 1938.9202. 8.2 Preparación de Z-Arg (Pbf ) -Trp (Boc) -Ala-Gly-NH2 (SEQ ID NO 4) Fmoc-Arg (Pbf ) -OH (36.3 mg, 56 ymol) se acopla con la otra parte de resina del Ejemplo 6 utilizando PyBOP (29.2 mg, 56 ymol), HOAt (7.6 mg, 56 ymol) y DIPEA (28.7 yL, 168 µ?t???) en N,N- dimetilformamida durante 1.5 horas. El grupo Fmoc se remueve y se protege la amina libre se protege con el grupo Z mediante tratamiento con Z-OSu (14.0 mg, 56 pmol) y DIPEA (35.9 L, 210 ymol). El péptido unido a resina Z-Arg(Pbf)-Trp(Boc) -Ala-Gly-NH-xanten-3-iloxi-resina Merrifield, protegido así obtenido se lava con N,N- dimetilformamida, diclorometano y éter de dietilo, se seca en vacío, y luego se divide en alícuotas de 4 mg.

Una alícuota se utiliza para la preparación del compuesto objetivo de este ejemplo y las otras alícuotas se utilizan como material de partida para el ensayo de remoción de por ejemplo, el Ejemplo 20.

Así, se divide una alícuota en la misma forma como se describe en el Ejemplo 5. Se obtiene Z-Arg (Pbf) -Trp (Boc) -Ala-Gly-NH2 con 96% de pureza (mediante HPLC) . El producto se caracteriza por LC-MS. 8.3 Preparación de Pbf-Ala-OMe Se desarrolla la preparación análoga al Ejemplo 7 excepto para Pbf-Cl (1.2 eq) en lugar de MIS-CI. Rendimiento: 209 mg (82%) de Pbf-Ala-OMe.

Ejemplos 9 a 12 : Ensayos de remoción de MIS contra Pbf protegidos, péptido unido a resinas Procedimiento General El péptido unido a resina, se protege (3 mg) se trata con solución de división (50 L) . Después del tiempo de división, la solución se vierte en agua (4 mL) . Luego, se evaporan TFA y diclorometano . La solución acuosa resultante se lava seis veces con diclorometano (cada 1 mL) y se liofiliza. Se analiza el sólido resultante mediante HPLC (? = 220 nm) y ESMS o MALDI-TOF.

Tabla 1: los Ejemplos 9 a 12 con solución de división TFA/DCM/TIS/agua (50:45:2.5:2.5) (agua y TIS como secuestrantes ) Ej emplo Péptido Tiempo de Ac - Phe -Arg-Arg-Arg- unido a división Arg-Val-NH2 (SEQ ID NO resina, 2) 100% protegido 9 a 30 min 100% 10 a 60 min 100% 11 b 30 min 4% 12 b 60 min 38% a= Ac- Phe -Arg (MIS) -Arg (MIS) -Arg (MIS) -Arg (MIS) - Val-NH-xanten-3-iloxi- resina Merrifield (SEQ ID NO 1) como se obtiene del Ejemplo 5. b= Ac - Phe -Arg ( Pbf ) -Arg ( Pbf ) -Arg ( Pbf ) -Arg ( Pbf ) - Val-NH-xanten-3-iloxi- resina Merrifield (SEQ ID NO 1) como se obtiene del Ejemplo 8.1 (ejemplo de comparación) .

DCM= Diclorometano .

Ejemplos 13 a 15: Los ensayos de remoción de péptidos unidos a resinas, MIS protegidos, con secuestrantes diferentes Se sigue el procedimiento general como se describe en los Ejemplos 9 a 12. Se utiliza como péptido unido a resina Ac- Phe -Arg (MIS) -Arg (MIS) -Arg (MIS) -Arg (MIS) -Val-NH-xanten-3-iloxi-resina Merrifield, protegido (SEQ ID NO 1) , como se obtiene del Ejemplo 5. El tiempo de división es de 60 minutos. Se utiliza una mezcla de TFA, diclorometano y secuestrante (50:40:10) como solución de división.

Los secuestrantes probados son 3 , 4-dimetoxifenol (Ejemplo 13), 1 , 3 , 5-trimetoxi- benceno (TMB) (Ejemplo 14) y 3 , 5-dimetoxifenol (Ejemplo 15).

Como un resultado, se reduce la cantidad de MIS-OH por más de 10 veces comparado con el Ejemplo 9, en el que el agua (2.5%) y TIS (2.5%) se utilizan como secuestrantes. En el caso de Tmb, aún se observa una reducción de más de 40 veces.

Ejemplos 16 y 17: Ensayos de remoción de MIS contra péptidos que contienen Trp, unidos a resina, protegidos Pbf Se sigue el procedimiento general como se describe en los Ejemplos 9 a 12. Los crudos resultantes se caracterizan mediante LC-MS y se analiza su pureza mediante HPLC (? = 220 nm) .

La pureza del crudo resultante es mayor para el material de partida protegido MIS comparado con el material protegido de Pbf. Para ambos péptidos c y d protegidos, no se observa alquilación Trp deseada ni sulfonación en el producto formado .

Tabla 2: Ejemplos 16 y 17; con solución de división TFA/DCM/TMB (50:40:10) (TMB como secuestrante) Ej emplo Péptido Tiempo de unido a división Z-Arg-Trp-Ala- resina, Gly-NH2 (SEQ ID protegido NO 4) 17 c 60 min 83.4%* 17 d 60 min 63.4%* c= Z-Arg(MIS) -Trp (Boc) -Ala-Gly-NH-xanten-3-iloxi- resina Merrifield (SEQ ID NO 3) como se obtiene del Ejemplo 6. d= Z-Arg (Pbf ) -Trp (Boc) -Ala-Gly-NH-xanten-3 -iloxi- resina Merrifield (SEQ ID NO 3) como se obtiene del Ejemplo 8.2 (ejemplo de comparación) .

DCM = Diclorometano - TMB = 1 , 3 , 5 - trimetoxibenceno - * Z-Arg (MIS) -Trp- Ala-GIy-NH2 (SEQ ID NO 4) no se , detecta en el crudo resultante (mediante LC-MS) - *20.4% de Z-Arg (Pbf ) -Trp-Ala-Gly-NH2 (SEQ ID NO 4) se detecta en el crudo resultante (mediante HPLC) .

Ejemplos 18 a 20: Ensayos de remoción de MIS contra Pbf como grupos de protección Na-amino Los aminoácidos protegidos se tratan con la solución de división a temperatura ambiente y la desprotección es seguida por TLC.

La remoción MIS es ligeramente más rápida, que presenta una prueba Kaiser positiva (que indica la presencia de aminas libres) después de 5 min, mientras que para el caso de Pbf la prueba Kaiser positiva está en el siguiente control (10 min) .

Tabla 3: Ejemplos 18 a 20;con solución de división TFA/sulfuro de dimetilo (90:10) (sulfuro de dimetilo como secuestrante) e= IS-Ala-OMe como se obtiene del Ejemplo 7. f= Pbf-Ala-OMe como se obtiene del Ejemplo 8.3 (ejemplo de comparación) .

* Se detecta la presencia o ausencia de H-Ala- OMe mediante la prueba de Kaiser.

Claims (1)

1. NOVEDAD DE LA INVENCION Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes: REIVINDICACIONES Un proceso para la preparación del compuesto de la fórmula (II) , caracterizado porque R1 es hidrógeno, alquilo Ci-S, alcoxi Ci-6 o alquiltio Ci-6; R2 es alquilo C1-6, alcoxi Ci- 6 o alquiltio Ci-6; o R1 y R2 juntos forman un grupo funcional de la fórmula -(CH2)n-, en donde n es un entero de 3 a 5; R3 es hidrógeno, halógeno, alquilo Ci-5, alcoxi Ci-6, alquiltio Ci-6, fenilo o bencilo; y X es cloro o bromo ; que comprende la etapa de hacer reaccionar un compuesto de la fórmula en donde R1, R2 y R3 son como se definió anteriormente, o una sal del mismo, con cloruro de oxalilo o bromuro de oxalilo . El proceso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R1 y R2 son independientemente alquilo Ci-4, alcoxi Ci-4 o alquiltio Ci-4, y R3 es hidrógeno o halógeno. El proceso de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque R1 y R2 son metilo y R3 es hidrógeno y X es cloro. El proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la reacción se desarrolla con la sal de piridinio del compuesto de la fórmula ( I) . Uso del compuesto de la fórmula (II) , con el compuesto de la fórmula (II) que es como se define en la reivindicación 1, como un reactivo protector para la protección de un compuesto peptídico que comprende por lo menos un grupo funcional guanidino y/o por lo menos un grupo amino . El uso de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el compuesto peptídico es un compuesto peptídico unido a resina; R1 y R2 son independientemente alquilo Ci-4, alcoxi Ci-4 o alquiltio Ci- , y R3 es hidrógeno o halógeno. El uso de conformidad con. la reivindicación 5, caracterizado porque el compuesto peptídico se protege en la cadena lateral y/o se protege en un terminal libre; R1 y R2 son independientemente alquilo Ci-4, alcoxi Ci-4 o alquiltio Ci-4, y R3 es hidrógeno o Halógeno. El uso de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el grupo funcional guanidino es parte de un residuo arginina u homoarginin . Un proceso para la protección de un compuesto peptídico,'. caracterizado porque el compuesto peptídico es como se define en la reivindicación 5, que comprende la etapa de hacer reaccionar dicho compuesto peptídico con el compuesto de la fórmula (II) , con el compuesto de la fórmula (II) que es como se define en la reivindicación 1, proporcionando así un compuesto, que comprende por lo menos un grupo funcional de la fórmula en donde R1, R2 y R3 son como se define en la reivindicación 1, y m es 0 o 1. El proceso de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque R1 y R2 son independientemente alquilo Ci-4, alcoxi Ci_4 o alquiltio Ci-4 y R3 es hidrógeno o halógeno . El proceso de conformidad con la reivindicación 9 ó 10, caracterizado porque R1 y R2 son metilo, R3 es hidrógeno y X es cloro. El proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, caracterizado porque el compuesto peptídico es un compuesto peptídico unido a resina . El proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 9 a 12, caracterizado porque el compuesto peptídico se protege en su cadena protegida y/o se protege en una terminal libre. Un compuesto peptídico caracterizado porque comprende por lo menos un grupo funcional de la fórmula (III) , con el grupo funcional de la fórmula (III) que es como se define en la reivindicación 9. El compuesto de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el compuesto peptídico es un compuesto peptídico unido a resina. El compuesto de conformidad con la reivindicación 14 ó 15, caracterizado porque el compuesto peptídico se protege en la cadena lateral y/o se protege en una terminal libre. 17. N-alfa-benciloxicarbonil- N-omega- ( 1 , 2 -dimetilindol -3- sulfonil) -L-arginina. 18. N-alfa- Fmoc-N-omega- (1, 2 -dimetilindol -3-sulfonil) -L- arginina .