MX2008011263A - Tratamientos para cancer. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a liposomas que comprenden oxaliplatina encapsulada y a métodos para elaborar oxaliplatina encapsulada. La invención también se refiere a liposomas que comprenden oxaliplatina y otros fármacos anti-cáncer. Los liposomas de la invención son útiles en los tratamientos para cáncer.

Description

TRATAMIENTOS PARA CÁNCER CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a liposomas que comprenden oxaliplatina encapsulada y a métodos para la elaboración de oxaliplatina encapsulada. El liposoma de oxaliplatina puede utilizarse para eliminar células cancerosas en una variedad de malignidades humanas y animales. La invención también se refiere a liposomas que comprenden oxaliplatina y otro fármaco anticáncer. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La inmunoterapia , vacunas, inhibidores de angiogénesis , inhibidores de telomerasa, inductores de apoptosis, terapias de transducción de señal, terapia genética y un número de terapias dirigidas al cáncer son prometedores arsenales en la lucha contra el cáncer pero no han demostrado sus virtudes en un entorno clínico. La investigación del cáncer experimenta extensas inversiones; aún, la relativa supervivencia de cinco años de los cuatro cánceres principales (mama, pulmón, colorrectal y de próstata) no ha cambiado mucho en los últimos 25 años. La heterogeneidad tumoral dentro del mismo individuo es parcialmente responsable de la falla de las terapias dirigidas (Miklos, 2005) . Por consiguiente, la quimioterapia y las terapias hormonales clásicas (para cánceres de mama y de próstata) junto con radiación e intervención quirúrgica permanecen siendo los soportes principales para tratamientos para la vasta mayoría de los pacientes de cáncer. Sin embargo, la mejora en el suministro y dirección al tumor de los fármacos de quimioterapia pre-existentes con nanotecnología proporciona un tratamiento alternativo. La oxaliplatina es un agente anti-neoplásico con la fórmula molecular C8Hi4N204Pt y el nombre químico de cis-[(lR, 2R)-1,2- ciclohexanodiamina-N, N] [oxalato ( 2- ) -0, 0] platino . Su estructura química se muestra a continuación.

La estructura de oxaliplatina El uso de oxaliplatina en terapia de cáncer ha hecho avanzar el manejo de cáncer, en particular de cáncer colorrectal. El éxito de la oxaliplatina se encuentra en su capacidad para inducir daño al ADN, dando como resultado voluminosos aductos así como reticulaciones intra- e inter- filamento (Takahara et al., 1995), pero también en su capacidad para inducir apoptosis (Boulikas y Vougiouka, 2003) . El átomo de platino de oxaliplatina forma reticulaciones 1 , 2-intrafilamento entre dos residuos adyacentes de guanosina, doblando la doble hélice por aproximadamente 30 grados hacia la ranura principal. La oxaliplatina tiene un ligando de vehículo de diaminociclohexano no hidrolizable (DACH) que se mantiene en los metabolitos citotóxicos finales del fármaco. Su reacción con ADN y otras macromoléculas procede mediante hidrólisis de uno o ambos grupos carboxiléster de oxalato que dejan un monoaducto de platino DACH o una reticulación bifuncional de platino-DACH . El químico intrínseco y las características estéricas de los aductos de platino-DACH parecen contribuir a la falta de resistencia cruzada con la cisplatina (revisado en Di Francesco et al., 2002). La hidrólisis alcalina de oxaliplatina da el complejo monodentado de oxalato (pKa 7.23) y el complejo de oxaliplatina dihidratado en dos etapas consecutivas. El compuesto intermedio monodentado se supone que reacciona rápidamente con compuestos endógenos (Jerremalm et al., 2003). Se han reportado las estructuras cristalinas de la oxaliplatina enlazadas a un dodecámero dúplex de ADN con la secuencia 5' -d (CCTCTGGTCTCC) ; el átomo de platino forma una reticulación 1 , 2-intrafilamento entre dos residuos adyacentes de guanosina que curvan la doble hélice en aproximadamente 30 grados hacia la ranura principal. La cristalografía proporcionó evidencia estructural para la importancia de la quiralidad en la mediación de la interacción entre oxaliplatina y ADN dúplex (Spingler et al.. 2001) . Sin embargo, a pesar de sus ventajas, el uso de oxaliplatina se asocia con un patrón único de efectos secundarios que incluyen neurotoxicidad, toxicidad hematológica y toxicidad del tracto gastrointestinal. Existe un riesgo significativo de neutropenia de grado 3/4 en pacientes. La náusea y el vómito son normalmente de medio a moderados. La nefrotoxicidad es moderada permitiendo la administración de oxaliplatina sin hidratación. Algunas veces, pueden observarse severos efectos secundarios tales como necrosis tubular. Además, se ha observado resistencia celular a oxaliplatina libre, evitando la eficacia potencial de la oxaliplatina libre. La resistencia se desarrolla por expansión clonal de una célula tumoral que tiene una ventaja y puede crecer en presencia de oxaliplatina. Se han propuesto varios mecanismos para explicar el desarrollo de la resistencia a oxaliplatina en tumores de pacientes: 1. Las células resistentes han desarrollado un mecanismo para limitar el transporte de oxaliplatina a través de su membrana celular y limitan asi los niveles intracelulares del fármaco. Este es el mecanismo más importante para la adquisición de resistencia a la oxaliplatina por células tumorales. La encapsulación liposomal de oxaliplatina aquí descrita evita este mecanismo de resistencia a oxaliplatina debido a DPPG lipido fusogénico en la formulación de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal y debido al tamaño de las nanoparticulas del fármaco (promedio 100 nm) que se fagocitan ávidamente por el tumor, en comparación a células normales. 2. Las células resistentes tienen mayores niveles de glutatión, metalotioneinas u otros compuestos que neutralizan la oxaliplatina. 3. Las células resistentes han desarrollado una reparación más rápida en lesiones de ADN después de daño por oxaliplatina . 4. Se han propuesto otros mecanismos de resistencia que se conectan a la señalización de trayectorias mitocondriales o apoptóticas nucleares, responsables de la decisión de la célula dañada de experimentar apoptosis o de reparar el daño; la decisión es reparar el daño, lo cual dará como resultado la acumulación de mutaciones a nivel de ADN que pueden cambiar aún más el fenotipo del clón de tumor (puntos de fractura cromosómica que dan como resultado translocaciones y otras aberraciones cromosómicas ) . Por consiguiente, el desarrollo de alternativas menos tóxicas y más eficientes para la administración de la oxaliplatina de fármaco libre es un reto importante. El desarrollo de tales alternativas podría resolver varios de los problemas de la terapia de cáncer.

Los liposomas son vesículas microscópicas compuestas de una bicapa fosfolípida, que son capaces de encapsular fármacos activos. Los fármacos liposomales son prometedores nanovehículos para el suministro de fármacos. La cisplatina encapsulada de manera liposomal (vendida bajo la MR Lipoplatin® por Regulon Inc., Mountain View, CA, US 6,511,676) ha demostrado reducir la nefrotoxicidad y neurotoxicidad de cisplatina, mientras se dirige a tumores después del suministro sistémico en pacientes. La oxaliplatina es un fármaco que tiene un espectro de actividad, mecanismos de acción y resistencia diferentes de los de la cisplatina. Las lesiones por aducto de oxaliplatina se reparan por el sistema de reparación por excisión de nucleótido. La oxaliplatina se elimina por enzimas relacionadas con (GSH) glutatión. La expresión ERCC1 Y XPA fue predictiva de la sensibilidad a la oxaliplatina en seis líneas celulares de colon in vitro (Arnould et al., 2003) . Se ha reportado que la oxaliplatina tiene una mejor eficacia que la cisplatina para cánceres colorrectales. La cisplatina y oxaliplatina tienen sustanciales diferencias estructurales que conducen a diferentes efectos secundarios durante la quimioterapia.

La estructura de cisplatina. Por ejemplo, los efectos secundarios de la cisplatina son nefrotoxicidad, neuropatía periférica, ototoxicidad y severa toxicidad gastrointestinal (para referencia ver McKeage MJ: Perfiles de efectos adversos comparativos de fármacos de platino. Drug Saf 13: 228-44, 1995, Hanigan MH y Devarajan P: Nefrotoxicidad de cisplatina: mecanismos moleculares. Cáncer Ther 1, 47-61, 2003). Existe una necesidad de reducir las dificultades en la administración de oxaliplatina a fin de reducir la elevada toxicidad de oxaliplatina libre cuando se utiliza en terapia y de dirigirse a tumores y proporcionar tratamiento eficiente a pacientes con tumores resistentes a quimioterapia. Además, a medida que los diferentes fármacos parecen tener mejor eficacia en la lucha contra diferentes células cancerosas y con respecto a la posición y la etapa y anatomía de la malignidad, existe la necesidad de ser capaz de administrar en una manera eficaz, de manera simultánea, más de un fármaco o genes en terapia de combinación. La presente invención se propone resolver o al menos mitigar estos problemas mediante encapsulación de oxaliplatina y, en otro aspecto, oxaliplatina y otro fármaco anticáncer en un liposoma. Esto incrementa la eficacia del fármaco .

SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona liposomas que comprenden oxaliplatina encapsulada y que tienen una composición diferente de lipidos en su membrana externa e interna y métodos para la elaboración de tales liposomas. Los liposomas comprenden una molécula lipida con un grupo principal (aniónico) cargado de manera negativa. La invención también proporciona liposomas que tienen oxaliplatina encapsulada y otro fármaco y métodos para la elaboración de tales liposomas. Se proporciona además el uso de tales liposomas en el tratamiento de cáncer. En un primer aspecto, la invención se refiere a un método para formar un micelo que comprende oxaliplatina, comprendiendo el método combinar una cantidad efectiva de oxaliplatina y un lipido de fosfatidil glicerol cargado de manera negativa con un solvente. En un segundo aspecto, la invención se refiere a un método para encapsular oxaliplatina en un liposoma que comprende combinar un micelo de oxaliplatina de acuerdo con la invención, con un liposoma preformado o lipidos. En un tercer aspecto, la invención se refiere a un método para encapsular oxaliplatina en un liposoma, que comprenden las siguientes etapas: a) formar un micelo que comprende oxaliplatina al combinar una cantidad efectiva de oxaliplatina y un lipido de fosfatidil glicerol, cargado de manera negativa, con solvente; y b) combinar dicho micelo de oxaliplatina con un liposoma preformado o lipidos. En un cuarto aspecto, la invención se refiere a un micelo que comprende una cantidad efectiva de oxaliplatina y lipido de fosfatidil glicerol, cargado de manera negativa. En un quinto aspecto, la invención se refiere a un liposoma que comprende una cantidad efectiva de oxaliplatina en donde la capa interna y externa del liposoma comprende diferentes lipidos. Otros aspectos de la invención se refieren al uso del liposoma en el tratamiento de cáncer y a un método para el tratamiento de cáncer mediante administración del liposoma. En otro aspecto, la invención se refiere a un liposoma que comprende una cantidad efectiva de oxaliplatina y otro fármaco anticáncer. En un aspecto adicional, la invención se refiere a un liposoma que comprende una cantidad efectiva de oxaliplatina y un gen anticáncer. La invención también proporciona programas de administración para las formulaciones farmacéuticas, i.e., los liposomas de la invención. En un aspecto adicional relacionado, la invención se refiere a una terapia de combinación que comprende administrar una cantidad efectiva de gemcitabina y un liposoma que encapsula una cantidad efectiva de cisplatina. También se proporciona el uso de un liposoma que tiene cisplatina encapsulada en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un paciente humano afectado por cáncer y un método para el tratamiento de cáncer, mediante terapia de combinación que involucra la administración de dicho liposoma y gemcitabina. DESCRIPCIÓN DETALLADA La presente invención se describirá ahora de manera adicional. En lo sucesivo se definen con mayor detalle diferentes aspectos de la invención. Cada aspecto asi definido puede combinarse con cualquier otro aspecto o aspectos, a menos que se indique claramente lo contrario. En particular, cualquier característica indicada como preferida o ventajosa puede combinarse con cualquier otra característica o características indicadas como preferidas o ventaj osas . La invención se refiere a un método para la encapsulación de oxaliplatina en liposomas que tienen una composición lípida diferente en su interior de su bicapa de membrana externa. En un primer aspecto, la invención se refiere a un método para la formación de un micelo que comprende oxaliplatina, comprendiendo el método la combinación de una cantidad efectiva de oxaliplatina y una cargada de manera negativa con una solución de solvente. El lipido se caracteriza por que comprende un grupo principal cargado de manera negativa (aniónico) . Preferentemente, el lipido es lipido de fosfatidil glicerol. Preferentemente, el solvente es etanol. Sin embargo, también pueden utilizarse otros solventes conocidos por las personas expertas, tales como solvente de carbohidratos. El metanol puede ser otro solvente adecuado. El término oxaliplatina, según se utiliza en la presente, se refiere a oxaliplatina y cualquier análogo o derivado de oxaliplatina. La oxaliplatina encapsulada de manera liposomal de la invención también es referida en la presente por su nombre comercial LIPOXAL®. El término lipido de fosfatidil glicerol cargado de manera negativa, de acuerdo con la invención, se refiere a un lipido de fosfatidil glicerol cargado de manera negativa o un derivado del mismo. Estos lipidos se caracterizan porque comprenden un grupo principal cargado de manera negativa ' (aniónico) . De este modo, el término se utiliza para describir cualquier lipido que tiene la capacidad de formar micelos y que tiene un grupo principal neto, cargado de manera negativa. El lipido de fosfatidil glicerol, cargado de manera negativa, de acuerdo con los diferentes aspectos de la invención, puede seleccionarse a partir de dipalmitoil fosfatidil glicerol (DPPG), dimiristol fosfatidil glicerol (DMPG), diaproil fosfatidil glicerol (DCPG), diestearoil fosfatidil glicerol (DSPG) o dioleil fosfatidil glicerol (DOPG) . En una modalidad preferida, el lipido de fosfatidil glicerol cargado de manera negativa es DPPG. La solución de etanol de acuerdo con la invención se encuentra preferentemente a 20 hasta 40%, preferentemente a aproximadamente 30% de etanol. La proporción molar de oxaliplatina a lipido de fosfatidil glicerol cargado de manera negativa se encuentra en un rango de 1:1 hasta 1:2. Preferentemente, la proporción es de 1:1. Por lo tanto, de acuerdo con una modalidad del primer aspecto de la invención, la oxaliplatina se mezcla con DPPG, a una proporción molar de 1:1 hasta 1:2 en 20-40% etanol, en presencia de un regulador tal como sulfato de amonio (10-200 mM) o regulador Tris (10-100 mM) o regulador de fosfato de sodio (10-200 mM) a un pH de 6.5-8.0 a fin de lograr aproximadamente 5 mg/ml de concentración final de oxaliplatina. La mezcla se calienta a 30-60 grados Celsius y se incuba durante 20 min hasta 3 h. Bajo estas condiciones, los grupos imino cargados de manera positiva en la molécula de oxaliplatina se conducen en interacción con los grupos cargados de manera negativa en la molécula de DPPG, formando micelos inversos en soluciones etanólicas. En un segundo aspecto, la invención se refiere a un método para encapsular oxaliplatina en un liposoma que comprende la combinación de un micelo de oxaliplatina de acuerdo con la invención con un liposoma . o lipidos preformados . En un tercer aspecto, la invención se refiere a un método para encapsular oxaliplatina en un liposoma, que comprende las siguientes etapas: c) formar un micelo que comprende oxaliplatina al combinar una cantidad efectiva de oxaliplatina y un lipido de fosfatidil glicerol cargado de manera negativa con un solvente y d) combinar dicho micelo de oxaliplatina con un liposoma o lipidos preformados. En una modalidad de los métodos, el micelo se mezcla con un liposoma preformado. El liposoma o lipidos preformados, usados en los métodos de la invención y, por lo tanto, el liposoma de la invención, pueden comprender lipidos cargados de manera negativa y/o positiva, tal como fosfolipidos . Muchos fosfolipidos pueden utilizarse en la presente invención. Por ejemplo, fosfatidilcolinas, fosfatidiletanolaminas , diestearoilfosfatidil-etanolamina, fosfatidilserinas, fosfatidilinositoles, lisofosfatidilcolinas , fosfatidilgliceroles, esfingomielinas o ácido fosfatidico, todos encuentran uso en la presente invención. También puede utilizarse ceramida u otros derivados lipidos. Para el propósito de modificar la estabilidad o permeabilidad de la membrana lipida, puede agregarse un componente lipofilico adicional tal como, por ejemplo, colesterol u otro esteroide, estearilamina, ácido fosfatidico, dicetil fosfato, tocoferol o extractos de lanolina. Los lipidos pueden seleccionarse a partir de, pero sin limitarse, DDAB, bromuro de dimetildioctadecil amonio; DMRIE: bromuro de N- [1- (2, 3-dimiristiloxi ) propil] -N, N-dimetil-N- ( 2-hidroxietil ) amonio; DMTAP: 1 , 2-dimiritoil-3-trimetilamonio propano; DOGS : Dioctadecilamidoglicilespermina; DOTAP: cloruro de N-(l-(2,3-dioleoiloxi) propil) -N, , -trimetilamonio; DOTMA: cloruro de N- [ 1- (2 , 3-dioleiloxi ) propil] -n, n, n-trimetilamonio; DTAP: 1,2-dipalmitoil-3-trimetilamonio propano; DSTAP: 1 , 2-diesteroil-3-trimetilamonio propano. En una modalidad de la invención, los liposomas de oxaliplatina comprenden DPPG, colesterol y HSPC ( fosfatidilcolina de soya hidrogenada). Dicha encapsulación intenta reducir las reacciones adversas de los agentes citotóxicos sin reducir eficacia. La preparación liposomal de la invención también puede comprender una sal de amonio, tal como cloruro de amonio; sulfato de amonio o cualquier otra sal de amonio. Los lipidos de fosfatidil glicerol cargados de manera negativa de acuerdo con la invención, los cuales se usan para formar el micelo y que son parte de la membrana de liposoma, proporcionan la ventaja de que mejoran la permeabilidad de la membrana celular para suministro de fármaco en el citosol. El liposoma puede fusionarse asi con la membrana de la célula y liberar su contenido en el interior de la célula. Estas propiedades se llaman fusogénicas. De este modo, debido a estas propiedades fusogénicas y al mecanismo de fagocitosis, las formulaciones liposomales de oxaliplatina de acuerdo con la invención son capaces de pasar a través de la membrana celular de la célula tumoral y de este modo tiene aplicación en el tratamiento de tumores resistentes a oxaliplatina o resistentes a fármacos. De acuerdo con otra modalidad, el acomplej amiento en el mismo liposoma de oxaliplatina con lipidos de fosfatidil glicerol cargados de manera negativa da como resultado una eficiencia de encapsulación muye elevada (50-100%), reduciendo la pérdida de fármaco durante la elaboración del producto. El método de encapsulación de acuerdo con la invención se basa en la formación de micelos inversos entre oxaliplatina con una molécula lipida carga de manera negativa, según se describe en la presente. Los micelos inversos se mantienen mediante interacción electroestática entre grupos amino de oxaliplatina cargados de manera positiva y un grupo fosfato cargado de manera negativa del lipido de fosfatidil glicerol, por ejemplo DPPG, y dirigen sus cadenas hidrofóbicas del lipido de fosfatidil glicerol hacia la solución etanólica, absorbiendo asi las moléculas de oxaliplatina . Los micelos inversos de lipido de oxaliplatina-fosfatidil glicerol se convierten en liposomas mediante su mezcla con liposomas o lipidos pre-elaborados, esto puede seguirse por diálisis y extrusión a través de membranas, a fin de retirar el etanol, o dilución con agua, extrusión a través de filtros, con o sin concentración con filtración a presión elevada. Esto da como resultado la captura y encapsulación de oxaliplatina a un rendimiento muy elevado. La composición lipida de los liposomas durante el método de preparación determina en un grado elevado la composición lipida de la superficie externa de la nanoparticula . En una modalidad de los diferentes aspectos de la invención, puede agregarse una cubierta que permite que el liposoma de la invención evada supervivencia inmune. Preferentemente, la cubierta es un polímero. La cubierta puede agregarse ya sea en la etapa de liposoma o después de la inserción en el nanovehículo formado. De este modo, los liposomas de la invención pueden comprender tal cubierta. Los polímeros que pueden utilizarse de acuerdo con la invención incluyen glicol de polietileno (PEG) , glicol de polimetiletileno, glicol de polihidroxipropileno, glicol de polipropileno, glicol de polimetilpropileno, óxido de polihidroxipropileno, polioxialquilenos , polieteraminas . Los polímeros adicionales incluyen polivinilipirrolidona, polivinilmetiléter , polimetiloxazolina , polietiloxazolina, polihidroxipropiloxazolina, polihidroxipropilmetacrilamida, polimetacrilamida, . polidimetilacrilamida, polihidroxipropilmetacrilato, polihidroxietilacrilato, hidroximetilcelulosa, hidroxietilcelulosa, polietilenoglicol y poliaspartamida, ácido hialurónico. Un polímero preferido es PEG. Por ejemplo, la diestearoilfosfatidiletanolamina puede derivarse con PEG hasta conducir a diestearoilfosfatidiletanolamina derivada (PEG-DSPE) . Los polímeros pueden emplearse como homopolímeros o como copolímeros en bloque o aleatorios. Los nanovehículos de oxaliplatina liposomal, expuestos en la presente invención, pueden evadir la supervivencia inmune debido a la cubierta de polímero, pueden circular durante periodos prolongados en fluidos corporales, pueden redistribuirse a partir de depósitos de tejido en tumores y pueden concentrarse preferentemente en tumores sólidos y metástasis después de inyección intravenosa en animales y humanos mediante extravasación a través de la vasculatura comprometida que tiene imperfecciones en su endotelio durante el proceso de neoangiogénesis .

Una ventaja del método de encapsulación descrito en la presente invención es que el fármaco en el vehículo de liposoma alcanzará tumores primarios y metástasis mediante extravasación preferencial a través de la vasculatura de tumor con fugas y de este modo tienen una actividad anticáncer mejorada. El lípido fusogénico DPPG mejora la fusión de las nanopartículas con la membrana celular del tumor mientras que al mismo tiempo también se mejora una mayor captura de la oxaliplatina liposomal mediante la avidez de las células tumorales respecto de fagocitosis. Además, un ligando puede conjugarse con la cubierta de polímero de los liposomas de la invención. Por ejemplo, el ligando puede ser un péptido, por ejemplo, un anticuerpo. Los péptidos pueden insertarse de manera post-inserción, por ejemplo, como conjugados Péptido-PEG-DSPE. Los péptidos de acuerdo con la invención incluyen, pero sin limitarse, aquellos que se derivan de la endostatina, anti-trombina, anastelin, angiostatin, PEX, factor derivado de epitelio de pigmento, estructuras primarias de tromboespondin (TSP) -1 y -2 y aquellos que son capaces de ejercer una actividad anticáncer doble: la de restringir la angiogénesis del tumor a través de, por ejemplo, un péptido de 27 amino ácidos correspondiente al dominio de terminal NH2 de endostatina anexa a PEG-DSPE (Figura 17) y la ejercer también la actividad anti-tumor de las moléculas de oxiplatina encapsuladas en el mismo liposoma portador de péptido de anti-angiogénesis . Un péptido preferido es endostatina. La endostatina, el fragmento proteolitico de terminal C de 20 kDa del dominio sin colágeno 1(NC1) del colágeno de proteina de membrana de basamento XVIII, inhibe la proliferación celular y migración y es un inhibidor endógeno de angiogénesis de tumor y crecimiento de tumor. Un problema importante en la reconciliación de los muchos efectos in vitro reportados de la endostatina es la falta de un receptor de alta afinidad. La exposición crónica a endostatina bloquea la proliferación de células endoteliales y migración e induce apoptosis de célula endotelial, inhibiendo asi la angiogénesis; la endostatina estimuló la fosforilación aguda de sintasa de óxido nítrico endotelial (Enos) EN Serll6, Ser617, Ser635 y Serll79 y defosforilación en Thr497 en células endoteliales aórticas bovinas, cultivadas, eventos asociados con activación de eNOS . No obstante, el óxido nítrico (NO) es promotor de angiogénesis. La exposición a corto plazo de la células endotelial a endostatina, por consiguiente, a diferencia de la exposición. a largo plazo que es anti-angiogénica, puede ser pro-angiogénica (li et al., 2005) . Un péptido de 27 amino ácidos correspondiente al dominio de terminal NH2 de endostatina produjo su actividad anti-angiogénica completa y tuvo fuerte actividad anti-tumor; tres histidinas que son responsables del enlace de cinc fueron esenciales para las propiedades anticáncer del péptido (Tjin Tham Sjin et al., 2005, Tjin Tham Sjin RM, Satchi-Fainaro R, Birsner AE, Ramanujam VM, Folkman J, Javaherian K. Un péptido sintético de 27 amino ácidos correspondiente al dominio de endostatina de enlace a cinc de terminal NH2, es responsable de su actividad anti-tumor (Cáncer Res. Mayo 1, 2005; 65 (9) :3656-63. Li C, Harris MB, Venema VJ, Venema RC . La endostatina induce liberación de prostaciclina y óxido nítrico endotelial agudo. Biochem Biophys Res Commun, Abril 15, 2005;329(3) :873-8) . Los ligandos de péptido se derivan fácilmente por aquellos expertos en la materia mediante selección de bibliotecas de péptidos para ligandos capaces de interactuar específicamente con epítopes péptidos derivados de antígenos específicos de tumor, sobre-expresados en la superficie de la célula de tumor. La sujeción de estos péptidos al extremo de PEG con la química mostrada en la Figura 17 da liposomas que encapsulan oxaliplatina capaces de dirigirse a tumores específicos. La tabla 1 ilustra esquemáticamente los antígenos de tumor a partir de los cuales pueden derivarse, sintetizarse y utilizarse los péptidos expuestos a la superficie celular externa para derivar los ligandos péptidos de bibliotecas de péptidos aleatorias con elevada afinidad al antígeno de tumor. Tales ligandos péptidos se unen después de manera covalente a la molécula de lipido-polimero, por ejemplo, una molécula de PEG-DSPE, que se inserta en la partícula de liposoma. Pueden seleccionarse otros ligandos a partir del grupo que consiste en transferrina, ácido fólico, ácido hialurónico, una cadena de azúcar tal como galactosa o mañosa, un anticuerpo monoclonal, fosfato de piridoxal, vitamina B12, sialilo Lewis X, factor de crecimiento epidérmico, factor de crecimiento de fibroblasto básico, factor de crecimiento endotelial vascular, molécula de adhesión celular vascular (VCAM-1), molécula de adhesión intercelular (ICAM-1), molécula de adhesión endotelial a plaquetas (PECAM-1), un péptido de Arg-Gly-Asp (RGD) o un péptido Asp-Gly-Arg (NGR) y un fragmento Fab' de un anticuerpo monoclonal. En una modalidad, las partículas de oxaliplatina liposomales se modifican en su superficie con conjugados de PEG-DSPE-folato, insertados después de la formación de la partícula de liposoma para dirigir las partículas a tumores que sobre-expresan receptores de folato.

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Las formulaciones liposomales de oxaliplatina de acuerdo con la invención evitan el problema de resistencia de la oxaliplatina libre, originado por la captura reducida del fármaco en tumores resistentes. De este modo, las formulaciones tienen aplicaciones en el tratamiento de tumores resistentes a oxaliplatina. Las formulaciones liposomales de oxaliplatina de acuerdo con la invención también exhiben un perfil de menor toxicidad que la oxaliplatina de fármaco libre (oxaliplatina libre) en ensayos clínicos humanos contra una variedad de malignidades sólidas. Además, debido a que el espectro de efectos secundarios de estas formulaciones liposomales de oxaliplatina es diferente de aquellos de oxaliplatina libre y el mecanismo de entrada en células tumorales también es diferente, las formulaciones liposomales de la oxaliplatina de acuerdo con la invención pueden tener aplicaciones clínicas ventajosas en cáncer de pulmón de célula no pequeña, en cáncer de mama, en cáncer de ovario, en cáncer de cabeza y cuello, en cáncer de próstata metastásico y en varios otros tumores sólidos, además de cánceres colorrectal y gástrico. En una modalidad, la oxaliplatina encapsulada de manera liposomal de la invención, es capaz de disminuir los niveles de bilirrubina (Figura 2) o la metástasis ósea (Figura 3) en pacientes tratados. En otra modalidad, las preparaciones liposomales descritas en la presente pueden utilizarse después de la infusión intravenosa para disminuir los efectos secundarios de oxaliplatina, especialmente toxicidad gastrointestinal y de los otros fármacos co-encapsulados . Las preparaciones liposomales de acuerdo con la invención pueden dirigirse preferentemente a tumores humanos y sus metástasis. Por lo tanto, en un aspecto adicional, la invención se refiere a un liposoma que comprende oxaliplatina como se describe en la presente, para uso como un medicamento. En otro aspecto, la invención se refiere al uso de un liposoma que tiene oxaliplatina encapsulada, en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de cáncer. La invención también se refiere a un método para el tratamiento de cáncer que comprende la administración de un liposoma que tiene oxaliplatina encapsulada, de acuerdo con la invención, a un paciente. Pueden tratarse diferentes tipos de cáncer, incluyendo cáncer colorrectal, cáncer gástrico, pancreático, cáncer de mama, cáncer de pulmón de célula no pequeña, en cáncer de ovario, cáncer de cuello y cabeza, cáncer de próstata, testicular, cáncer intestinal, cáncer esofágico o urotelial. Preferentemente, el tratamiento es para cáncer colorrectal, gástrico o pancreático. El liposoma se administra semanalmente mediante infusión intravenosa a una dosis de 100 hasta 350 mg/m2. Preferentemente, la administración es a una dosis de 300 mg/m2, pero otras dosis posibles son 100 mg/m2, 150 mg/m2, 200 mg/m2 o 250 mg/m2. En una modalidad, la administración se encuentra en 2 a 5 ciclos. Cada ciclo es de 8 a 12 semanas y es seguido por una o dos semanas de reposo. Preferentemente, la infusión semanal intravenosa es durante 3 horas. En otra modalidad, la administración es cada dos semanas . Estos programas de administración arriba descritos también pueden utilizarse cuando la oxaliplatina se administra como una terapia de combinación, según se describe en la presente. En otro aspecto, la invención se refiere a un método para la elaboración de micelos y/o liposomas que comprenden dos fármacos anticáncer, oxaliplatina y otro fármaco. El método es según se describe en la presente, con relación a la elaboración de liposomas de oxaliplatina, pero incluye la etapa de incluir otro fármaco anticáncer en el micelo o liposoma. De este modo, en un aspecto adicional, la invención se refiere a liposomas que comprenden oxaliplatina encapsulada y otro fármaco anticáncer. Los fármacos se encapsulan asi dentro del mismo liposoma. Esto tiene la ventaja de que pueden suministrarse en conjunto al objetivo. También es posible y se encuentra dentro del alcance de la invención el incluir más de un fármaco anticáncer en el liposoma . En una modalidad, al menos dos fármacos anticáncer con diferentes mecanismos de acción se incluyen en el mismo liposoma, de acuerdo con la invención. Por consiguiente, la célula tumoral puede ser dirigida con dos mecanismos independientes, conduciendo a un mejor éxito clínico. El otro fármaco anticáncer puede seleccionarse a partir de compuestos tales como compuestos de platino (tales como cisplatina, carboplatina) , fármacos anti-metabolitos (tales como 5-fluorouracilo, citarabina, gemcitabina, pentostatina y metotrexato) , fármaco de antraciclina que se dirige a ADN (tal como doxorubicina y epirubicina) , fármacos que se dirigen a ADN o fármacos que se dirigen a topoisomerasas u otros fármacos de quimioterapia. En una modalidad preferida, el otro fármaco se selecciona a partir de cisplatina, docetaxel, paclitaxel, gemcitabina, navelbina, doxorubicina, irrinotecan, SN-38, gemcitabina o 5-fluorodeoxiuridina . Al incluir los dos fármacos en el mismo liposoma, es posible usar una dosis inferior de cada fármaco en comparación cuando cada fármaco se administra solo. Los dos fármacos pueden actuar en una manera sinérgica, incurriendo asi en mayor daño a la célula tumoral con menores efectos secundarios. En otra modalidad preferida, la cisplatina y oxaliplatina se co-encapsulan en la misma nanoparticula de liposoma. De este modo, la misma célula tumoral puede anexarse de manera simultánea por ambos, cisplatina y oxaliplatina. Los efectos secundarios de oxaliplatina también son diferentes de los efectos secundarios de la oxaliplatina liposomal (neuropatía) . Por lo tanto, la misma célula tumoral puede ser tratada con al menos dos mecanismos independientes, aunque de otro modo (si no se administrara encapsulada en el mismo liposoma) , los dos fármacos ( oxaliplatina y cisplatina) se enfocarían cada uno más a una célula diferente. Aparte, la administración de una combinación de diferentes fármacos encapsulados en el mismo liposoma, hace posible usar menores dosis para lograr eficacia, evitando o reduciendo así la toxicidad de los fármacos. Más particularmente, al disminuir la dosis de oxaliplatina, los inventores han encontrado que el efecto secundario de la neurotoxicidad puede limitarse mientras que al disminuir la dosis de cisplatina puede limitarse el efecto secundario de la mielotoxicidad. Como resultado, hay una mejora del perfil de la neurotoxicidad y mielotoxicidad de la oxaliplatina liposomal y cisplatina liposomal respectivamente administradas, mientras que al mismo tiempo es posible incurrir en un daño igual o mayor a los tumores después de la administración sistémica. De este modo, la combinación de cisplatina y oxaliplatina en el mismo liposoma permite la administración de cada uno de dichos fármacos a menores-dosis, bajo condiciones donde los efectos secundarios de los fármacos liposomales se reducen incluso más. En otra modalidad, la oxaliplatina encapsulada de manera liposomal de la invención se combina con la doxorubicina de fármaco (DOX) que se encapsula en la misma partícula de oxaliplatina liposomal como oxaliplatina, según se describe en los métodos de la invención. Sorprendentemente, los inventores han encontrado que esto puede disminuir la dosis de oxaliplatina y en consecuencia la neurotoxicidad de la oxaliplatina liposomal administrada, mientras se reduce también la dosis de DOX. Esto reduce la cardiotoxicidad y otros efectos secundarios de DOX mientras se infligen un daño igual o mayor a los tumores. En otra modalidad, el liposoma comprende oxaliplatina y 5-fluorouracilo . La oxaliplatina en combinación con 5-fluorouracilo se ha aprobado recientemente para el tratamiento de cáncer colorrectal metastásico. Sin embargo, existen serios problemas en la administración de dichos fármacos, principalmente debido a los importantes efectos secundarios de cualquier fármaco, los cuales se reducen con su encapsulación liposomal, según se describe en la invención. Además, al combinar los fármacos según se describe en la presente, se incrementa la eficacia del tratamiento . La invención también se refiere a la encapsulación de oxaliplatina y un gen anticáncer en el mismo liposoma. De este modo, los liposomas de acuerdo con la invención pueden comprender oxaliplatina y un gen anticáncer. Los genes anticáncer usados incluyen, pero sin limitarse, p53, IL-2, IL-12, angiostatina y oncostatina. En otro aspecto, la invención se refiere a una terapia de combinación en donde la oxaliplatina se administra junto con otro fármaco o gen, según se especifica en la presente, en donde ambos fármacos se encapsulan en el mismo liposoma. De este modo, los liposomas que comprenden oxaliplatina y otro fármaco anticáncer o gen pueden utilizarse en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de cáncer o en un método para el tratamiento de cáncer. Además, la invención se refiere a un primer uso médico de los liposomas en combinación. Una persona experta apreciará que los programas de administración y la dosis de los componentes pueden variar de acuerdo con el otro fármaco presente. Como para la oxaliplatina, puede utilizarse una dosis y rango de dosis según se describe en la presente. Además, el esquema de administración del liposoma de combinación puede ser según se describe en la presente para oxaliplatina. En una modalidad, la oxaliplatina encapsulada de manera liposomal de la invención se administra a pacientes de cáncer 150-300 mg/m2 por semana (Días 1, 8, 15) durante 12 semanas como monoterapia o en combinación con 1 g/m2 de gemcitabina los días 1, 8 en un ciclo de 21 días o en combinación con docetaxel, paclitaxel, irrinotecan. En un aspecto relacionado, la invención se dirige a cisplatina encapsulada de manera liposomal en donde la cisplatina se encapsula en combinación con otros fármacos anticáncer como se define en la presente. La cisplatina puede combinarse asi en la misma partícula de liposoma con cualquiera de los fármacos anticáncer de paclitaxel, docetaxel, irrinotecan, SN-38, gemcitabina, 5-fluorodeoxiuridina . La ventaja es que la misma célula tumoral es atacada simultáneamente por cisplatina y otro fármaco, logrando asi una eliminación más eficaz debido a los dos mecanismos moleculares independientes, involucrados. Por ejemplo, la cisplatina producirá señalización mitocondrial y nuclear para apoptosis asi como reticulaciones de ADN que detienen la reproducción mientras que docetaxel actuará en la polimerización de tubulina. Ventajosamente, la cisplatina encapsulada de manera liposomal se encapsula en el mismo liposoma en combinación con gemcitabina, usando los métodos según se describe en la presente . En otro aspecto, la oxaliplatina que comprende el liposoma de la invención puede administrarse en conjunto con otro fármaco anticáncer, pero el otro fármaco no forma parte del mismo liposoma. El otro fármaco es según se describe en la presente y se selecciona preferentemente a partir de cisplatina, docetaxel, paclitaxel, gemcitabina, navelbina, doxorubicina, irrinotecan, SN-38, gemcitabina o 5-fluorodeoxiuridina . Además, en un aspecto separado, la invención se refiere a la administración de Lipoplatin® en combinación con gemcitabina. De este modo, una terapia de combinación de Lipoplatin® y gemcitabina es un objeto de la invención. También se proporciona el uso de Lipoplatin® en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un paciente humano afectado por cáncer, mediante terapia de combinación que involucra la administración de Lipoplatin® y otro fármaco que no se encapsula en el mismo liposoma. El otro fármaco puede administrarse al mismo tiempo que Lipoplatin® o en un momento diferente. Preferentemente, el otro fármaco es gemcitabina y la administración conduce a mejora clínica. Preferentemente, el cáncer tratado es cáncer pancreático, pero también pueden tratarse otros cánceres tales como cáncer colorrectal, cáncer gástrico, cáncer de mamá, cáncer de pulmón de célula no pequeña, cáncer de ovario, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de próstata, testicular, cáncer intestinal, vejiga, cáncer de esófago o urotelial. La dosis usada para gemcitabina es de 800 a 1000 mg/m2, preferentemente 1000 mg/m2. La dosis de lipoplatin es de 100 hasta 125 mg/m2, preferentemente 100 mg/m2. La administración de Lipoplatin® y gemcitabina es intravenosa. Lipoplatin® se administra preferentemente como una infusión de 8 horas IV cada dos semanas (día 1 y día 15) . La gemcitabina se administra preferentemente como una infusión de 60 min iv cada dos semanas. La administración de los compuestos puede ser en ciclos de 4 semanas.

La invención se ilustra además con relación a las siguientes figuras y ejemplos. Los ejemplos muestran que la administración de liposomas de oxaliplatina conduce a mejoras clínicas, es decir, tiene un efecto clínico en el tratamiento de cáncer. El Ejemplo II muestra que la administración de Lipoplatin® y gemcitabina proporciona beneficios clínicos, conduciendo así a mejora clínica.

DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Figura 1: Representación esquemática de la oxaliplatina liposomal mostrada como rectángulos amarillos. Las moléculas de lípidos se ilustran con encabezados hidrofílicos esféricos. Las cadenas aleatorias rojas en la superficie de la partícula representan las moléculas de PEG que dan a la partícula su capacidad de escapar a la destrucción de macrófagos en el hígado, opsonización (interacción con proteínas de suero y otras macromoléculas ) en la sangre y la capacidad de extravasar en tumores sólidos y metástasis después del suministro sistémico (también su pequeño tamaño de 100 nm) . Figura 2: Reducción en los niveles de bilirrubina en un paciente (TK) con cáncer colorrectal y metástasis de hígado. El paciente se dirigía a coma hepático a partir de los muy elevados niveles de bilirrubina en la sangre (50 mg/100 mi). La inyección de oxaliplatina Liposomal a dosis de 200 mg/m2 el día 1, día 8, día 15 y día 22 dio como resultado la reducción progresiva de la bilirrubina total desde 50 hasta 12 mg/m2. Más probablemente, esto resultó de la reducción en la metástasis de hígado que obstruyó el tracto biliar. Los tratamientos ulteriores en los días 31 y 37 no detuvieron el progreso de la enfermedad según se deduce a partir de los niveles de bilirrubina. Figura 3: Reducción en metástasis ósea después de monoterapia con oxaliplatina liposomal. Un paciente (EK) que sufre de cáncer gástrico y metástasis ósea se trató con 150 mg/m2 cada 7 días durante 10 semanas. Hubo una mejora significativa en la calidad de vida, mucho menos dolor, menor uso de analgésicos y los pacientes fueron capaces de llevar a cabo su trabajo sobre una base diaria. Figura 4: Con-encapsulación de cisplatina y oxaliplatina en la misma partícula de liposoma y modificación post-inserción ulterior de las partículas con conjugados de péptido-PEG-LÍ PIDO a fin de dirigirse a estos tipos celulares específicos con receptores superficiales, reconocidos por los péptidos o ligandos. El esquema también ilustra cadenas de péptido (color tojo) agregadas al final de moléculas PEG para el multifuncionamiento de las partículas de liposoma y su dirección preferencial a tumores específicos. En este caso, los antígenos de tumor específicos se reconocen por el elemento péptido en la superficie del liposoma. Por ejemplo, los epítopes péptidos de factor de crecimiento epidérmico capaces de enlazarse a la parte del EGFR expuesto a la superficie externa dirigen dichos liposomas a tumores que sobre-expresan EGFR. Figura 5A: muestra niveles máximos de ~14 mg de platino total /mi plasma después de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal en comparación a ~8 mg platino total /mi plasma después de oxaliplatina y estos se alcanzaron a 20 min para oxaliplatina encapsulada de manera liposomal y a 10 min para oxaliplatina. Figura 5B: muestra que los niveles totales de platino en plasma de rata alcanzaron cero a ~100 h después de la inyección para oxaliplatina libre. Figura 6A: muestra los niveles totales de platino en plasma de rata en animales tratados también con Lipoplatin®. Figura 7A: muestra los niveles totales de Platino en tejido de riñon en animales tratados durante 5 hrs y Figura 7B: muestra lo mismo tratado durante 190 hrs. Figura 8A: muestra los niveles totales de Platino en tejido de hígado en animales tratados durante 5 hrs y Figura 8B: muestra los mismos tratados durante 190 hrs . Figuras 9A y 9B: muestran los niveles totales de Platino en tejido de bazo en animales tratados durante 190 hrs . Figura 10A: muestra la distribución total de Platino en tejido de rata en animales tratados tanto con oxaliplatina libre como con oxaliplatina encapsulada de manera liposomal durante 5 hrs y la Figura 10B, Figuras 11A y 11B son diagramas de ratas tratadas de manera repetida (11 veces) con oxaliplatina encapsulada de manera liposomal. La Figura 12 es un diagrama de ratas tratadas de manera repetida (6 veces) con oxaliplatina encapsulada de manera liposomal. Figura 13: Lipoxal puede inducir desaparición completa de cánceres de mama humanos en ratones, después de 6 inyecciones intravenosas con intervalos de 4 dias a dosis de 16 mg/kg. La oxaliplatina a su MTD (Dosis máxima tolerada) puede solo causar encogimiento, no la desaparición de tumores de mama humanos en ratones. Figura 14: La dosis de 16 mg/kg de oxaliplatina liposomal (Lipoxal) es la más eficaz en la erradicación de cáncer de mama en xenoinjertos de ratón. La oxaliplatina a su máxima dosis tolerada de 4 mg/Kg tiene una eficacia anticáncer inferior en este modelo de ratón seguido por una dosis de 5 mg/kg Lipoxal. Figuras 15 y 16 muestran los resultados de los ensayos clínicos de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal . Figura 17: Procedimiento químico para acoplar péptidos a PEG-DSPE. Ejemplos EJEMPLO I Elaboración de liposomas La oxaliplatina se mezcla con DPPG (dipalmitoil fosfatidil glicerol) u otras moléculas de lipidos cargadas de manera negativa a una proporción molar de 1:1 en 30% etanol, 0.1 M Tris HC1, pH 7.5 a 5 mg/ml oxaliplatina final en presencia de soluciones de etanol a una concentración de 20-40% y bajo condiciones de temperatura de 30-60 grados Celsius en presencia de sulfato de amonio (10-200 mM) , o regulador Tris (10-100 mM) o regulador de Fosfato de sodio (10-200 mM) a un pH de 6.5-8.0 se incuba durante 20 min-3h. Bajo estas condiciones, los grupos imino cargados de manera positiva en la molécula de oxaliplatina se conducen en interacción con los grupos cargados de manera negativa en la molécula de DPPG que forma micelos inversos en soluciones etanólicas (ver también la patente de Lipoplatin de EU 6, 511,676) . Los micelos inversos resultantes de oxaliplatina-DPPG se convierten entonces en liposomas que encapsulan la nanocapa de oxaliplatina-DPPG mediante mezcla rápida con liposomas pre-formados, compuestos de colesterol, fosfatidil colina, mPEG-DSPE (polietileno glicol - diestearoil fosfatidil etanolamina) , seguida por diálisis contra solución salina y extrusión a través de membranas para disminuir el tamaño de las partículas hasta 80-120 nm de diámetro. La composición lípida de liposomas agregados es la que determina la composición de la superficie externa de la formulación final de oxaliplatina (Figura 1). EJEMPLO II A. Experiencia Clínica Preliminar con Oxaliplatina Encapsulada de Manera Liposomal I.A. Estudios animales Los estudios animales llevados a cabo desde Mayo de 2003 hasta Diciembre de 2004 en EUA, Francia, Suiza y Helias (Instituto Pasteur, Atenas) en xenoinjertos de ratón por laboratorios independientes han demostrado una mejor eficacia terapéutica de la oxaliplatina encapsulada de manera liposomal en comparación a la mera oxaliplatina, así como un perfil de menor toxicidad y se demostró tolerarse mejor en ratones y ratas en comparación a la oxaliplatina de fármaco libre. Además, la oxaliplatina encapsulada de manera liposomal podría inducir la completa desaparición o encogimiento de una variedad de cánceres humanos en ratones después de 6-8 inyecciones intravenosas en un tratamiento más eficaz y menos tóxico que la oxaliplatina. La oxaliplatina encapsulada de manera liposomal ha demostrado inducir la completa desaparición de cánceres de mama humanos en ratones, después de 6 inyecciones intravenosas con intervalos de 4 días a dosis de 16 mg/kg. Por otro lado, la oxaliplatina de fármaco libre a su MTD (Dosis máxima tolerada) puede causar solo encogimiento, no desaparición de tumores. Los ratones inyectados con 5 mg/kg de oxaliplatina libre murieron de toxicidad y la dosis se disminuyó hasta 4 mg/kg. La dosis de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal fue de 16 mg/kg i.v. y la toxicidad se disminuyó hasta 4 mg/kg de oxaliplatina libre. La eficacia anticáncer de 4 mg/kg de oxaliplatina libre fue menor de 16 mg/kg de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal en animales con tumores humanos. En dicho estudio, se reportaron estudios animales de una oxaliplatina encapsulada de manera liposomal. La inyección intra-peritoneal (i.p.) de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal o la oxaliplatina libre como un control para ratas se utilizó para estudiar biodistribución de tejido de 10 minutos hasta 7 días después de la inyección. Los niveles máximos de platino total (Pt) en plasma a una dosis de 15 mg/kg fueron de 14.0 mg/ml plasma después de la inyección de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal en comparación a 7.5 mg/ml plasma después de tratamiento con oxaliplatina libre; estos niveles se lograron a 10-15 min de la inyección. Se observó un comportamiento fármaco-cinético similar en plasma para tejido de riñon; el plasma y el riñon tuvieron los niveles más elevados de platino entre todos los tejidos examinados durante los primeros 20 min a partir de la inyección. El tejido de bazo exhibió niveles de platino más de 2 veces mayores después de tratamiento con oxaliplatina libre en comparación a oxaliplatina encapsulada de manera liposomal al mismo nivel de dosis durante un periodo prolongado de 40-190 h después de la inyección. Después de 11 administraciones repetitivas de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal en ratas, el bazo logró niveles sorprendentemente elevados de Pt total entre todos los tejidos examinados (80 mg/g tejido). El hígado exhibió farmacocinética similar de acumulación de Pt como una función de tiempo después de la oxaliplatina libre versus el tratamiento de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal. En comparación, Lipoplatin® exhibió un comportamiento farmacocinético similar a la oxaliplatina encapsulada de manera liposomal en riñon de rata a partir de 10 minutos hasta 7 días, pero la farmacocinética del hígado fue similar entre los dos grupos hasta 4 h y hubo una mayor acumulación de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal en comparación a Lipoplatin® durante periodos de 7 días. Los conteos completos de células sanguíneas y bioquímicos en ratas han establecido que la oxaliplatina encapsulada de manera liposomal exhibió una menor mielotoxicidad en comparación a oxaliplatina libre. Los niveles de transaminasa SGOT, fosfatasa alcalina, bilirrubina, creatinina, urea sanguínea y ácido úrico en sangre fueron normales, consistentes con nula toxicidad hepática o nefrotoxicidad proveniente de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal en ratas. Los datos muestran una retención más prolongada de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal en tejidos de rata consistentes con su formulación PEGilada liposomal y un menor perfil de toxicidad. Inyecciones de ratas con oxaliplatina encapsulada de manera liposomal para estudios farmacocinéticos Para estudios farmacocinéticos , se usaron 20 ratas hembra Wistar de 2-3 meses de edad de un peso corporal promedio de 150 g. Las ratas se inyectaron en la cavidad intraperitoneal con una suspensión de 3 mg/ml de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal, dando una dosis final de 15 mg/kg. Se usaron dos animales por punto de tiempo. Las ratas se sacrificaron a ~7 min, 20 min, 1.5 h, 3.75 h, 24 h, 40 h, 90 h y 170-180 h después de la inyección. La sangre se recolectó en tubos Eppendorf heparinizados y se centrifugó. Los niveles de platino totales en plasma se determinaron usando horno de Absorción Atómica (AA700 Perkin Elmer) . Inyecciones repetidas de ratas con oxaliplatina encapsulada de manera liposomal para estudios de histología Estábamos interesados en determinar el daño a diversos tejidos después de la inyección repetida de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal a su máxima dosis tolerada en ratas. Análisis bioquímico y hematológico en ratas para toxicidad proveniente de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal Las ratas se inyectaron en la cavidad intraperitoneal con una suspensión de 3 mg/ml de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal, dando una dosis final de 15 ó 30 mg/kg. La sangre de ratas usada para los estudios farmacocinéticos en plasma también se analizó (7 días después de la inyección) para médula ósea, funciones renal, hepática y gastrointestinal, por un laboratorio de microbiología independiente. Los parámetros examinados fueron hemoglobina, hematocritos , leucocitos, granulocitos , plaquetas, transaminasa SGOT, transaminasa SGPT, fosfatasa alcalina, bilirrubina total, urea, ácido úrico y creatinina. Resultados Toxicología de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal en ratas Las ratas se inyectaron hasta una dosis final de 15 ó 30 mg/kg de Oxaliplatina libre u oxaliplatina encapsulada de manera liposomal. El grupo de 30 mg/kg de oxaliplatina perdió severamente el apetito y exhibió severa pérdida de peso; hubo 33% de pérdida de peso en el grupo de 30 mg/kg de oxaliplatina a 7 días después del tratamiento; el peso promedio de los animales cayó desde 150 g hasta un promedio de 100 g después de 7 días. Por el contrario, los animales inyectados con la misma dosis de 30 mg/kg de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal, mostraron solo una reducción del 10% en peso (desde un promedio de 150 g hasta el final de 135 g el día 7 ) . A 7 días después de la inyección, la sangre fue arrastrada hacia tubos con o sin heparina de los animales tratados con 15 mg/kg y fue dada a un laboratorio clínico independiente para análisis bioquímico y hematológico completo. Se usaron dos animales por grupo. La Tabla 1 muestra el promedio de dos mediciones. El grupo de 15 mg/kg de oxaliplatina muestra una caída en leucocitos hasta 800,000 /mm3 (Toxicidad grado 4 de acuerdo con WHO) en comparación a 3,400,000 /mm3 (Toxicidad Grado 1) para el grupo tratado con oxaliplatina encapsulada de manera liposomal. Por consiguiente, la oxaliplatina encapsulada de manera liposomal no originó reducción extensa en conteos de leucocitos en comparación a oxaliplatina libre. Los niveles de plaquetas también se redujeron en una mayor extensión por la oxaliplatina en comparación a oxaliplatina encapsulada de manera liposomal. Los niveles de hemoglobina fueron cercanos a lo normal para ambos tratamientos. Por consiguiente, la mielotoxicidad de cualquier fármaco parece dirigirse más a los leucocitos y plaquetas en vez de a programas de eritropoyesis . La transaminasa SGOT se elevó por cualquier fármaco consistente con toxicidad hepática Grado 2; sin embargo, los niveles de transaminasa SGPT y fosfatasa alcalina no se afectaron; los niveles de bilirrubina, urea sanguínea y creatinina no se afectaron (aunque cayeron los niveles de ácido úrico en sangre) consistente con la ausencia de nefrotoxicidad originada ya sea por oxaliplatina libre u oxaliplatina encapsulada de manera liposomal en ratas después de administración i.p.

Tabla 2. Cambios en médula ósea, funciones hepáticas y de riñon en ratas después de inyección i.p. de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal u oxaliplatina libre.

Farmacocinética en ratas Las ratas se inyectaron en la cavidad intraperitoneal directamente a partir de una solución depósito de 3 mg/ml de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal ó 3 mg/ml de oxaliplatina libre en 5% Dextrosa hasta una dosis final de 15 mg/kg i.p. de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal u oxaliplatina. En diversos puntos de tiempo después de la inyección se extrajo sangre, se aisló plasma y se midieron los niveles totales de platino para estudios farmacocinéticos . La Figura 5A muestra niveles máximos de ~14 mg de platino total /mi plasma después de la oxaliplatina encapsulada de manera liposomal en comparación a ~8 mg de platino total /mi plasma después de oxaliplatina libre y estos se alcanzaron a 20 min para oxaliplatina encapsulada de manera liposomal y a 10 min para oxaliplatina libre. A aproximadamente 45 min, ambos grupos exhibieron niveles similares de platino total (~5 mg de platino total /mi plasma) mientras que a 4-5 h después de la inyección se obtuvieron niveles debajo de 1 mg de platino total/ml plasma para oxaliplatina encapsulada de manera liposomal en comparación a ~2 mg de platino total /mi plasma para oxaliplatina libre. A 40 h, los niveles de platino total en plasma de rata cayeron hasta cero para oxaliplatina encapsulada de manera liposomal y hasta ~1 mg de platino total /mi en plasma para oxaliplatina libre; los niveles de platino totales en plasma de rata alcanzaron cero a ~100 h después de la inyección para oxaliplatina libre (Figura 5B) .

Lipoxal® AUC Cmax Cl Kel ti/2 (15 (h (µ?/ml) (ml/gh) (1/h) (h) (ml/g) mg/kg) µg/ml) Riñon Plasma Dosis AUC Cmax Cl Kel tl/2 Vss (mg/kg) (h* ( g/ml) (ml/g»h) d/h) (h) (ml/g) g/ml) 15 74.4 76 0.20 N/A N/A N/A Riñon Dosis AUC Cmax Cl (1/h) Kel tl/2 Vss (mg/kg) (h* ( g/g) d/h) (h) g/g) 15 ###### 10.5 0.01 0.002 346.50 7.18 Tabla 3 En la Tabla 2 se muestran los parámetros farmacocinéticos promedio para platino total, calculados para la dosis de 15 mg/kg de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal (Lipoxal®) u oxaliplatina libre. El AUC, determinado usando el método trapezoidal lineal con extrapolación a infinidad (Gibaldi et al., 1982, Gibaldi M, Perrier D: Análisis sin compartimentos en base a teoría de momento estadístico. En Pharmacokinetics , Gibaldi M . , Perrier D (eds) , pp 409-417, 2a ed. Marcel Dekker: Nueva York, 1982), fue de 53.7 mg.h/ml para oxaliplatina encapsulada de manera liposomal en comparación a 74.4 mg.h/ml para oxaliplatina. La concentración máxima de platino total en plasma alcanzada (Cmax) fue de 14.0 mg/ml para oxaliplatina encapsulada de manera liposomal en comparación a 7.6 mg/ml para oxaliplatina libre. La eliminación corporal total (Cl) fue de 0.28 ml/g.h para oxaliplatina encapsulada de manera liposomal en comparación a 0.20 ml/g.h para oxaliplatina libre. Esto se calculó a partir de Cl=Di . v. /AUC, donde Di.v. es la dosis i.p. de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal u oxaliplatina libre y AUC el área relativa bajo la curva para esta dosis especifica. La constante del índice de eliminación (Kel) fue de 0.07 h-1 para oxaliplatina encapsulada de manera liposomal. Esto se calculó por análisis de regresión lineal de la curva de tiempo-concentración en plasma logarítmica por la fórmula Kel= [Ln (Cpl) -Ln (Cp2) ] / (t2-tl) , donde ti y t2 son los puntos de tiempo de inicio y de final de las medidas y Cpl y Cp2 las concentraciones, inicial y final, de platino total en plasma para ti y t2, respectivamente. La vida promedio de eliminación (tl/2) fue de 10.2 h para la oxaliplatina encapsulada de manera liposomal. Esto se calculó por la fórmula: t 1/2=0.693 ( 1/kel ) . 1/kel es el tiempo de residencia promedio ( RT) , la analogía de momento estadístico con la vida promedio tl/2 (Gibaldi et al., 1982). Los niveles totales de platino en plasma de rata también se determinaron en animales tratados con Lipoplatin®, un fármaco de platino liposomal diferente actualmente en evaluación de Fase III ( Stathopoulos et al., 2005). Lipoplatin®, una cisplatina liposomal, se dio a 30 mg/kg i.p. Los niveles máximos fueron de ~17 mg platino total /mi plasma después de 30 mg/kg Lipoplatin y estos se alcanzaron a 20 min de la inyección en una estructura de tiempo similar a la oxaliplatina encapsulada de manera liposomal (Figura 6A) . La cisplatina como un control también se administró i.p. a ratas a su máxima dosis tolerada de 5 mg/kg; los niveles máximos fueron de ~7.5 mg de platino total /mi plasma después de cisplatina y estos se alcanzaron a 10 min de la inyección en una estructura de tiempo similar a la oxaliplatina. Los cuatro fármacos dieron comportamiento farmacocinético paralelo después de ~1.5 h posterior a la inyección; sin embargo, a 5h la inyección de Lipoplatin® dio como resultado ~2.5 mg platino total /mi plasma, seguido por oxaliplatina a 2.0 mg platino total /mi plasma, cisplatina a -1.5 mg de platino total /mi plasma y oxaliplatina encapsulada de manera liposomal a ~1.0 mg platino total /mi plasma. Biodistribución de platino total en tejidos de rata después de infusión i.p. de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal u oxaliplatina libre Es útil estudiar la distribución del fármaco de platino en tejido de ratón o rata debido a la exactitud de los resultados y la relativa facilidad de ensayo del platino con absorción atómica. Niveles de platino en riñon: La cantidad máxima de platino total en el riñon fue de 13.7 mg/g tejido después de 15 mg/kg de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal en comparación a ~10.5 mg/g de tejido después de 15 mg/kg oxaliplatina y se alcanzó en 7-20 min a partir de la inyección (Figura 7A) . Sin embargo, después de aproximadamente 4 h, los niveles de Pt en el riñon alcanzaron un mínimo de 4.8 mg/g de tejido después de oxaliplatina y se incrementaron ligeramente a 6.9 mg/g tejido a 167 h después de la inyección. Después del tratamiento de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal, también hay un mínimo de ~1 mg/g Pt total en tejido en el riñon alcanzado a ~20 h después de la inyección que se incrementó ligeramente a 2.5 mg/g de tejido a 188 h. Por lo tanto, los ríñones exhiben aproximadamente niveles 3 veces mayores de Pt después de la oxaliplatina en comparación a la misma dosis de tratamiento con oxaliplatina encapsulada de manera liposomal a ~7 días después de la inyección (Figura 7B) . Para comparación, Lipoplatin® a 30 mg/kg alcanzó niveles máximos en el riñon de 34 mg/g de tejido en comparación a 10 mg/g de tejido después de 5 mg/Kg cisplatina . La farmacocinética en el riñon exhibió un comportamiento similar entre Lipoplatin® y oxaliplatina encapsulada de manera liposomal. El máximo son 34 y 14 mg/g tejido para 30 mg/kg Lipoplatin® y 15 mg/kg oxaliplatina encapsulada de manera liposomal, respectivamente. Esto apoya la similitud en biodistribución de riñon de los dos fármacos que comparten cubierta común pero difieren en el fármaco que confinan en su interior y en los tumores a los que se dirigen. A 120 h, los niveles de platino total en riñon son de 5 mg/g tejido para 30 mg/kg Lipoplatin® en comparación a ~2.5 mg/g tejido para 15 mg/kg de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal (Figura 3B) . A ~140 h después de la inyección, el platino total es de ~7 mg/g tejido después de 15 mg/kg de oxaliplatina libre en comparación a ~4 mg/g tejido después de 5 mg/kg de cisplatina (Figura 3B) . Conclusión : Los niveles de Pt en ríñones fueron los más elevados entre todos los tejidos de rata a 7 días, seguidos por hígado y bazo. Niveles de platino en hígado El platino total en hígado después de 15 mg/kg de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal fue de 3.5 mg/g tejido logrado a ~7-10 min a partir de infusión i.p. con una caída abrupta hasta 2.5 a 20 min y que posteriormente se mantuvo durante 5 h (Figura 8A) . Por el contrario, la infusión de la cavidad intraperitoneal en ratas con oxaliplatina libre a la misma dosis dio como resultado niveles similares de platino en total en el hígado (3.0-3.5 mg/g tejido) que se lograron a aproximadamente 30 min a partir de la infusión, mantenido durante 2h y después disminuyó gradualmente hasta 1.5 mg/g tejido a 5h (Figura 4A) . A diferencia del plasma, cuyos niveles de platino cayeron hasta cero después de aproximadamente 40 h, hubo una acumulación de platino en hígado de ~2 mg/g tejido a 170-190 h después de ambos tratamientos con oxaliplatina encapsulada de manera liposomal y oxaliplatina libre (Figura 8B) . Platino total en el bazo: La cantidad máxima de platino total en el bazo fue de 3.2 mg/g de tejido después de la administración de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal a 15 mg/kg en comparación a ~5.2 mg/g tejido después de 15 mg/kg oxaliplatina y se alcanzó en 15-20 min a partir de la inyección (figura 9A) . Hasta ~5 h después de la inyección, hay una ligera disminución de ~2 y ~4 mg/g tejido después de la administración de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal vs . oxaliplatina, respectivamente. Después de esto, hubo un incremento en los niveles de platino total en bazo después de la oxaliplatina encapsulada de manera liposomal hasta ~45h a -4.5 mg/g tejido seguido por una disminución hasta ~2 mg/g tejido a 190 h. Por el contrario, existe una acumulación continua de platino total en el bazo después de la infusión de oxaliplatina libre que alcanza 18.5 mg/g tejido a 168 h (Figura 9B) . Esto se acompaña por tremenda pérdida en el peso del bazo a 7 días, presumiblemente como resultado de muerte apoptótica de esplenocitos , proveniente de la toxicidad a oxaliplatina libre. De hecho, para un ratón de peso corporal promedio de 150 g antes del estudio, el peso corporal final a 7 días fue de 109 g y el peso del bazo fue de 0.188 g. Hubo congestión (acumulación de sangre) en el bazo de animales tratados con oxaliplatina encapsulada de manera liposomal . Sin embargo, después de aproximadamente 1 h, los niveles de Pt en el riñon fueron mayores a partir de oxaliplatina libre que de tratamiento con oxaliplatina encapsulada de manera liposomal; alcanzaron un mínimo a 12-24 h (5 mg/g tejido después de oxaliplatina, 1 mg/g tejido después de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal) y comenzó el incremento de nuevo; a 170 h después de la inyección, el tejido de riñon exhibió 7 mg de Pt/g tejido después de la oxaliplatina y 2.5 mg Pt/g tejido después de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal (Figura 5B) . Las mediciones comparativas de platino total en todos los tejidos de rata examinados después de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal y oxaliplatina libre se resumen en la Figura 10. Los niveles en plasma después de 15 mg/kg oxaliplatina a 20 min de la inyección obtuvieron el nivel más elevado de platino total (14.2 mg/ml) entre todos los tejidos; el tejido de riñon tuvo un nivel elevado comparable a ~10 min después de inyección i.p. de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal (13.8 mg/ml) (Figura 10A) . Los siguientes niveles incluyen platino en riñon después de oxaliplatina y plasma después de oxaliplatina. El bazo parece ser el siguiente nivel mayor (5 mg/g tejido después de 15 mg/kg oxaliplatina) un nivel que se incrementa continuamente y se vuelve el más elevado después de 24 h e incluso mayor a 170 h (18.5 mg/g tejido) . Por consiguiente, el bazo en general finalmente acumula el máximo nivel de platino después de la oxaliplatina. En este aspecto, es obvia la diferencia entre acumulación de platino en bazo después de la oxaliplatina libre u oxaliplatina encapsulada de manera liposomal (Figura 10B) . Niveles máximos de platino (en mg Pt/ml plasma o por g de tejido) en tejidos de rata (logrados a 7-20 min) después de inyección i.p. de 4 fármacos. (ND, no determinado) .

Fármaco Oxaliplatina Oxaliplatina Lipoplatin® Cisplatina y dosis encapsulada 15 mg/kg 30 mg/kg 5 mg/kg de manera liposomal 15 mg/kg Riñon 13.7 10.5 33.2 10.2 Plasma 14.0 7.6 16.6 7.5 Hígado 3.5 3.1 6.9 2.7 Bazo 3.1 5.1 3.5 1.1 Pulmón 3.7 3.2 7.5 2.0 Corazón 1.8 1.1 4.5 0.8 Cerebro ND ND 1.7 0.3 5h Fármaco Oxaliplatina Oxaliplatina Lipoplatin® Cisplatina y dosis encapsulada 15 mg/kg 30 mg/kg 5 mg/kg de manera liposomal 15 mg/kg Riñon 2.0 5 4 6.8 Plasma 0.9 1 2 1.1 Hígado 2.4 1 6 2 Bazo 1.8 3.8 2 1 Pulmón 0.8 1.7 0 0 Corazón 0.3 0.8 0 0 Cerebro ND ND 0 o -7 días Fármaco Oxaliplatina Oxaliplat Lipoplatin® Cisplatina y dosis encapsulada 15 mg/kg 30 mg/kg 5 mg/kg de manera liposomal 15 mg/kg Riñon 2.5 6:9 5 4 Plasma 0 0 0 0 Hígado 2.2 1.8 3 1 Bazo 2.3 18.5 4 1 Pulmón 0.4 2.4 0 0 Corazón 0.6 0.5 0 0 Cerebro ND ND 0 0 Tabla 4. Comparación de niveles totales de platino en diversos tejidos de rata después de Oxaliplatina Liposomal, Oxaliplatina libre, Cisplatina Liposomal y Cisplatina libre a 7-20 min, 5 h y 5-7 días después de la inyección.

El riñon, bazo e hígado tienen niveles significativos de Pt a 5-7 días después del tratamiento con oxaliplatina encapsulada de manera liposomal. El bazo, riñon, pulmón e hígado tienen niveles significativos de Pt a 5-7 días después del tratamiento con Oxaliplatina libre. El riñon, bazo e hígado tienen niveles significativos de Pt a 5-7 días después del tratamiento con Lipoplatin®. El riñon, bazo e hígado tienen niveles significativos de Pt a 5-7 días después del tratamiento con Cisplatina . Los datos muestran que después de 15 mg/kg i.p. de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal en comparación a 15 mg/kg i.p. de Oxaliplatina libre: 1. Los niveles de plasma en platino total son de 14 mg/ml plasma después de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal, los niveles de plasma en platino total son de 7.6 mg/ml plasma después de Oxaliplatina. Se alcanza el máximo en aproximadamente 7-20 min a partir de inyección i.p. Esto demuestra mayor circulación de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal en comparación a Oxaliplatina . 2. Los niveles en riñon son mayores con oxaliplatina encapsulada de manera liposomal (14 mg/g tejido) en comparación a Oxaliplatina libre (11 mg/g en los 15 min iniciales a partir de inyección, pero a 1.5 h y posteriormente los niveles en el riñon se vuelven mayores con Oxaliplatina libre (6.7 mg/g tejido) en comparación a oxaliplatina encapsulada de manera liposomal (2.3 mg/g a 1.5 h) . 3. Los niveles en el bazo son mayores con Oxaliplatina libre (3.8 mg/g tejido) en comparación a oxaliplatina encapsulada de manera liposomal (1.8 mg/g) a 1.5 h después de la inyección. 4. Los niveles en el corazón son comparables y bajos entre los dos fármacos. Niveles de platino en plasma: La máxima cantidad de platino total en el plasma es de 14 mg/ml después de 15 mg/kg i.p. de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal en comparación a ~1.5 mg/ml tejido después de 15 mg/kg Oxaliplatina y se alcanza en 7-20 min a partir de la inyección (Figura 10A) . Sin embargo, después de aproximadamente 1 h, los niveles de Pt en el plasma se vuelven mayores a partir de oxaliplatina libre que a partir de tratamiento con oxaliplatina encapsulada de manera liposomal y esto se mantiene a través de todo el resto de la curva hasta 50 h, donde los niveles para oxaliplatina encapsulada de manera liposomal se vuelven cero y hasta ~100 h, donde los niveles para Oxaliplatina libre se vuelven cero. Niveles de platino en riñon: La cantidad máxima de platino total en el riñon es de 13.5 mg/g tejido después de 15 mg/kg de Lipoxal en comparación a ~10.5 mg/g tejido después de 15 mg/kg Oxaliplatina y se alcanza en 15-20 min a partir de la inyección (Figura 10A) . Sin embargo, después de aproximadamente 4 h, los niveles de Pt en el riñon alcanzan un mínimo de 4.8 mg/g tejido después de oxaliplatina libre y ligeramente se incrementan hasta 6.9 g/g tejido a 167 h después de la inyección. Después del tratamiento con oxaliplatina encapsulada de manera liposomal, también hubo un mínimo de ~1 mg/g tejido, Pt total en el riñon se alcanzó a ~20 h después de la inyección con incrementos ligeros hasta 2.5 mg/g tejido a 188 h. Por lo tanto, los ríñones exhiben niveles aproximadamente 3 veces mayores de Pt después de oxaliplatina libre en comparación a la misma dosis de tratamiento con oxaliplatina encapsulada de manera liposomal a ~7 días después de la inyección. Los niveles de Pt en ríñones son los mayores entre todos los tejidos de rata a 7 días seguidos por el hígado y bazo.

Niveles de platino en bazo: La máxima cantidad de platino total en el bazo es de 14 mg/g tejido después de 15 mg/kg de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal en comparación a ~7 mg/g tejido después de 15 mg/kg Oxaliplatina libre y se alcanza en 15-20 min a partir de la inyección (Figura 10A) . Sin embargo, después de aproximadamente 1 h, los niveles de Pt en el riñon son mayores a partir de oxaliplatina libre que de tratamiento con oxaliplatina encapsulada de manera liposomal, muestran un mínimo a aproximadamente 12-24 h (5 mg/g tejido después de oxaliplatina, 1 mg/g tejido después de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal) y comienzan a incrementarse nuevamente; a 170 h después de la inyección, el tejido de riñon exhibe 7 mg Pt/g tejido después de oxaliplatina libre y 2.5 mg Pt/g tejido después de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal (Figura 10A) . Tratamiento de Fármaco que Da Como Resultado Diferencias de Peso y Reducción en Tamaño de Tejido Los animales que se trataron con oxaliplatina encapsulada de manera liposomal (15 mg/kg) y Oxaliplatina libre (15 mg/kg) y se sacrificaron 7.8 y 7 días después de inyección i.p. del fármaco, exhiben ciertas grandes diferencias tanto en pérdida de peso total como en peso de órganos individuales.

Fármaco Oxaliplatina Oxaliplatina Liposomal 15 mg/kg 15 mg/kg Tiempo 7.8 días 7 días transcurrido después de administración i.p. Peso animal 167 gr 106 gr Organo Peso de órgano animal total (g) Pulmón 1.059 0.934 Corazón 0.604 0.523 Riñon 0.645 0.475 Bazo 0.617 0.188 Tabla 5. Reducción en peso corporal como resultado de caquexia después de tratamiento con oxaliplatina. Los animales tratados con dosis comparables de oxaliplatina liposomal exhiben menos peso total o reducción de peso órganos. El bazo parece ser el tejido más afectado por oxaliplatina libre.

Los animales tratados con Oxaliplatina libre exhiben una gran pérdida de peso durante los 7 días después de la administración del fármaco, lo cual se estima sobre 40 gr de peso corporal total al momento del tratamiento. Además, existe una reducción significativa en el tamaño del tejido del bazo, lo cual se refleja en un valor extremadamente elevado de concentración de Pt (18.5 mg Pt/g de tej ido) . La pérdida de apetito después de la administración de Oxaliplatina y toxicidad del fármaco, dieron como resultado la pérdida de peso y reducción del tamaño del bazo; observados aquellos fenómenos en animales sacrificados 7 dias después de la administración del fármaco y por consiguiente exhibieron valores de concentración de Pt elevados en diagramas de tejido de Oxaliplatina libre a 7 dias después de inyección I.P. El mismo impacto podría considerarse con respecto a otro tejido, siempre y cuando los valores de concentración de Pt en todos los diagramas de tejido de Oxaliplatina libre (Hígado, Pulmón, Corazón, Bazo, Riñon) en el punto de tiempo: 7 días, exhiban un incremento. Los ratones inyectados con 5 mg/kg de Oxaliplatina murieron de toxicidad y la dosis se disminuyó a 4 mg/kg. La dosis de Lipoxal fue de 16 mg/kg i.v. y la toxicidad fue menor de 4 mg/kg oxaliplatina. La eficacia anticáncer de 4 mg/kg oxaliplatina fue menor que la de 16 mg/kg Lipoxal en animales con tumores humanos. EJEMPLO 2B Un Estudio Clínico de Fase I El propósito del estudio fue a) estimar las reacciones adversas y detectar la toxicidad limitante de dosis (DLT) así como la dosis máxima tolerada (MTD) de la oxaliplatina encapsulada de manera liposomal. Pacientes y métodos: En total, se incluyeron 27 pacientes con enfermedad avanzada en el estudio. Todos los pacientes se pre-trataron con la quimioterapia estándar de acuerdo con los lineamientos establecidos. Al entrar al presente ensayo, todos se encontraban en enfermedad progresiva o recurrente. Todos los pacientes tenían cánceres gastrointestinales de etapa IV (cánceres colorrectal, gástrico y pancreático) . Establecimos seis niveles diferentes de dosis de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal y en cada nivel se incluyeron al menos 3 pacientes. Los niveles de dosis fueron: 1) 100 mg/m2 2) 150 mg/m2 3) 200 mg/m2 4) 250 mg/m2 5) 300 mg/m2 6) 350 mg/m2. Se trataron ocho pacientes adicionales a 300 mg/m2 como un MTD. El tratamiento se dio una vez a la semana durante tres semanas consecutivas, repetidas cada 4 semanas. Resultados: No se observó ningún efecto secundario serio en los primeros cuatro niveles de dosis (100-250 mg/m2). En los niveles 5 y 6 se observaron mielotoxicidad y náusea ligeras. La reacción adversa más común fue la neuropatía periférica de grado II y se observó en los 4 pacientes tratados a 350 mg/m2. Por consiguiente, consideramos DLT el nivel de 350 mg/m2 y MTD el nivel de 300 mg/m2. De los 27 pacientes, tres mostraron respuesta parcial y 18 pacientes tuvieron enfermedad estable durante 4 meses, rango mediano (2-9) . Conclusión: En el presente estudio de Fase I, encontramos que la toxicidad más común es la neuropatía periférica a los niveles de dosis de 300 y 350 mg/m2. La oxaliplatina encapsulada de manera liposomal se tolera bien y reduce significativamente todos los otros efectos secundarios de la oxaliplatina libre, especialmente la mielotoxicidad y toxicidades del tracto G.I. Estos resultados preliminares mostraron eficacia adecuada en pacientes pre-tratados. Dicho estudio fue un ensayo clínico con oxaliplatina encapsulada de manera liposomal (Lipoxal®) con los siguientes objetivos primarios: a) definir la toxicidad limitante de dosis (DLT) y dosis máxima tolerada (MTD) de dosis en escala de una administración semanal de Lipoxal, b) detectar el perfil de toxicidad y farmacocinética de monoterapia de lipoxal en pacientes de cáncer de tracto G.I. avanzado, pre-tratados. Los objetivos secundarios fueron la eficacia y supervivencia. Pacientes y métodos El estudio fue un ensayo de elevación de dosis, cohorte de fase I, de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal. El protocolo del estudio se revisó y aprobó por nuestro Panel de Revisión Institucional. Un documento de consentimiento informado que satisface todos los requisitos institucionales se lee por los pacientes y se firma como una condición de su registro. Criterios de Elección Se requirió que todos los pacientes cumplieran los siguientes criterios: diagnóstico histológico o citológico confirmado de cáncer, al menos una enfermedad bidimensionalmente medible o evaluable, estado de desempeño WHO 0-2, una expectativa de vida mayor de 3 meses, tratamiento previo por quimioterapia estándar o de primera linea y al momento de la entrada haber sido refractario a cualquier tratamiento citotóxico previo. Los pacientes eran elegibles si habían tenido dos o tres procedimientos previos, considerando que se encontraban sin tratamiento durante al menos 3 semanas. Determinación Los pacientes elegibles sobre 18 años de edad se requirió que tuvieran funciones hematológicas , renales y hepáticas adecuadas, como se define por conteo WBC 3.5x10.9/1, conteo neutrófilo absoluto 1.5x109/1, conteo de plaquetas 100x109/1, nivel de hemoglobina 9 g/dl, nivel de bilirrubina total 1.5 mg/dl, ALT y AST dos veces el límite normal superior en ausencia de metástasis de hígado o cinco veces el límite normal superior en caso de metástasis de hígado documentada y nivel de creatinina 1.5 mg/dl. La historia médica, examen físico, determinación de signos vitales, electrocardiograma, tomografía computada de pecho y abdominal (o ultrasonido) se llevaron a cabo antes del tratamiento. Durante el tratamiento (1 día antes de cada procedimiento) se realizó conteo sanguíneo, urea y azúcar en sangre, pruebas de creatinina y ácido úrico en suero y ECG.

Las determinaciones por explorador CT se realizaron después de infusiones de fármaco de al menos ocho semanas o con anterioridad en el progreso de la enfermedad. Tratamiento Características del fármaco: Se proporcionaron en 3 mg/ml, 50 mi por frasco de vidrio, 150 mg de oxaliplatina por frasco de vidrio. Se almacena oxaliplatina encapsulada de manera liposomal a 4 grados Celsius, apariencia opaca. Características de un fármaco Liposomal: la oxaliplatina encapsulada de manera liposomal se diluye en 1 lt de dextrosa al 5% y se da en infusión intravenosa a 3 horas, una vez a la semana durante 8 semanas consecutivas. En caso de efectos secundarios y en particular de mielotoxicidad o neurotoxicidad el retraso de la administración del tratamiento tomaría lugar por una semana. No fue necesaria pre- o post-hidratación . No planeó darse ningún otro fármaco, tal como anti-hemético o anti-alérgico . En caso de náusea o vómito, se dio soporte por antieméticos (Ondasetron) o antialérgico ( Dexametasona ) . En estudios animales que precedieron, 400 mg/m2 a 600 mg/m2 se definieron como el MTD. En humanos, decidimos comenzar a una dosis de 100 mg/m2 para el nivel uno. El incremento de dosis se decidió en 50 mg/m2 por nivel. En la tabla 1, se presenta la elevación de dosis de la oxaliplatina encapsulada de manera liposomal por grupo de pacientes.

Las toxicidades relacionadas con fármaco se evaluaron durante cada ciclo de terapia y se calificaron de acuerdo con criterios WHO. Se definió un DLT como cualquier toxicidad de Grado 3 ó 4, con conteo neutrófilo de <500 mm2 asociado con fiebre persistente más de 72 horas, en 50% de los pacientes. Otra toxicidad de Grado III y en particular neurotoxicidad también se consideró DLT si se observaba en al menos 50% de los pacientes. Un nivel de dosis menor del DLT se definió como MTD. Los cohortes de tres pacientes por lo menos se programaron para entrar en cada nivel de dosis. El aumento de la dosis al siguiente nivel mayor procedía después de que tres pacientes habían recibido el primer ciclo de terapia con la dosis precedente y cada uno se observaba durante al menos 3 semanas sin evidencia de un DLT. Se inscribían dos pacientes adicionales a un nivel de dosis dado si el primer paciente de ese nivel experimentaba un DLT, en el primer periodo de 3 semanas de tratamiento. El tratamiento se interrumpía con la ocurrencia de un DLT y el paciente continuaba en el nivel anterior. Farmacocinética Para el estudio de farmacocinética, los pacientes se sangraban en las siguientes horas. 0 (antes de la infusión del fármaco y después de iniciar la infusión 2, 4, 8, 24, 48, 72, 120 (5 días) y 168 (7 días) horas. Se extrajeron 3 mi de sangre en EDTA o tubos que contienen heparina, después se centrifugó y refrigeró a 2°C y eventualmente se envió al laboratorio para analizarse respecto a niveles de platino. Se usó una muestra de 5 pacientes. Los niveles de platino (ultrafiltrados en suero y totales) se midieron con absorción atómica (Perkin Elmer AA 700 Espectrómetro de Absorción Atómica de Horno de Grafito Perkin Elmer AA 700 en Regulon A.E.). Se encontró a ciertos niveles de dosis ... (200 mg y 300 mg/m2): el área bajo la curva de tiempo-concentración de plasma (AUC) , la Cmax (concentración máxima de platino total en suero) . La eliminación corporal total (Cl) se calculó a partir de CL=Div/AUC, donde Div es la dosis intravenosa de Lipoplatin® y AUC el área relativa bajo la curva para una dosis especifica. La Kel (constante de índice de eliminación) se calculó por análisis de regresión lineal de la curva de tiempo-concentración de plasma logarítmica a partir de la fórmula Kel= [Ln (Cpl ) -Ln (Cp2 ) ] / ( t2-tl ) donde ti y t2 son los puntos de tiempo de inicio y final de mediciones y Cpl y Cp2 las concentraciones, inicial y final, del platino total en suero para ti y t2, respectivamente. El tl/2 (tiempo promedio de eliminación se calculó a partir de la fórmula tl/2=0.693 (1/kel). 1/kel es el MRT (Tiempo de Residencia Promedio) , la analogía del momento estadístico respecto a tl/2 promedio (Gibaldi et al., 1982). En efecto, MRT representa el tiempo para que se elimine 63.2% dé la dosis administrada. Resultados Pacientes Las características de los pacientes se muestran en la tabla 5. Se inscribieron en total 27 pacientes. Edad 32-78, dad promedio 62, hombres 18, mujeres 9. P.S. 0-2. Todos los pacientes se habían tratado previamente por quimioterapia. Tratamientos previos por tumor. Toxicidad La toxicidad del tracto G.I. por oxaliplatina encapsulada de manera liposomal fue insignificante. Sin antieméticos (Ondosetron) , no se observaron náusea ni vómito moderado. Pero con ondosetron no se observó ni vómito ni náusea. Tampoco diarrea. Solo se observó mielotoxicidad moderada de grado 1 (neutropenia) en 2 pacientes (%) con la dosis más elevada dada (350 mg/m2). No se observó hepatotoxicidad, ni toxicidad renal, ni cardiotoxicidad, ni alopecia. Se observó astenia moderada en 3 pacientes. El principal efecto secundario fue la neurotoxicidad, la cual se observó después de al menos 3 infusiones de los agentes y fue de grado 1 en el 3er y 4o niveles y de grado 2 en el 5o nivel y de grado 2 en 100% de los pacientes en el 6o nivel. Sobre la base de estos resultados, la neurotoxicidad de grado III se consideró como la toxicidad limitante de dosis observada en 100% de los pacientes tratados con 350 mg/m2 de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal. La dosis bajo 300 mg/m2 se definió como la máxima dosis tolerada (MTD) . En la tabla 5, se presentan el aumento de dosis de oxaliplatina encapsulada de manera liposomal y el número de pacientes tratados en cada uno de los seis niveles. Farmacocinética : Los resultados se representan en la Tabla 7 y en las Figuras 15 y 16. Se encontró que la vida promedio de la oxaliplatina en concentración de plasma fue de 24 horas y la secreción de orina se integra en 7 días. Cumplimiento del tratamiento Se administró un número total de 104 infusiones (ciclos) con una media de 4 ciclos por paciente (variando de 2-15). El intervalo promedio entre ciclos fue de 7 días. La intensidad de la dosis fue de 100% lo planeado. Ningún paciente tuvo un retraso en el tratamiento ya que nos e detectó toxicidad hematológica de grado III ó IV. Solo los pacientes con dosis de 350 mg/m2 después de la mayoría de 4 ó 5 infusiones (ciclos) tuvieron un intervalo de dos semanas antes de clasificarse en la dosis inferior de 300 mg/m2. Algunos pacientes detuvieron el tratamiento debido al progreso de la enfermedad después de 4-6 ciclos. Esto se aplicó en 17 pacientes (62.9%). Doce pacientes aún vivían al final del estudio (44.4%). Las causas de muerte fueron el progreso de la enfermedad.

Respuestas al tratamiento Las respuestas se analizaron sobre una base de intención-a-tratar. No hubo respuestas completas. 3 pacientes de 27 (11.1%) mostraron respuesta parcial. Estos pacientes fueron 2 con cáncer gástrico, uno con efusión pleural y el otro con metástasis de hueso; el tercero fue un paciente con metástasis de hígado proveniente de carcinoma de colon. La detección de la respuesta parcial se basó en explorador CT para el primer paciente, con exploración ósea en el segundo paciente y para el tercer paciente con exploración CT y nivel en suero de bilirrubina. Se presentan dos figuras: exploración ósea de la fig. 1 antes y después del tratamiento para el segundo paciente y curva de nivel en suero de bilirrubina en el tercer paciente. Excepcionalmente, tratamos al tercer paciente mientras el nivel de bilirrubina en suero era de 51 mg/dl, lo cual después de 2 tratamientos disminuyó el nivel hasta 8 mg/dl y duró 5 semanas. La duración de la respuesta fue de , 7, 2 meses para cada paciente, respectivamente. 18 pacientes mostraron enfermedad estable (66.66%) con una duración promedio de 4 meses (rango 2-9 meses) . 5 de los pacientes pudieron clasificarse, de acuerdo con una clasificación ya no válida a respuestas menores. 6 pacientes mostraron progreso de la enfermedad. En los 3 grupos que respondieron al tratamiento, también hubo una reducción del 50& o más del marcador CA-19-9. También, el nivel de estado del desempeño se mejoró de 2 a 1 en los 3 grupos que respondieron al tratamiento. Conclusión La oxaliplatina encapsulada de manera liposomal se ha examinado en el presente ensayo (ejemplo) como una monoterapia (tratamiento individual) en pacientes con cáncer avanzado del sistema gastrointestinal. Todos los pacientes se pre-trataron por un tratamiento estándar y todos los pacientes colorrectales incluidos también se habían tratado con oxaliplatina libre. Este tratamiento con oxaliplatina encapsulada de manera liposomal solo se había examinado antes en estudios pre-clínicos . No se había llevado a cabo ningún otro ensayo clínico. El presente ensayo se basa en los datos de los estudios pre-clínicos y en la experiencia y datos de la oxaliplatina no liposomal (libre) . Lo último ayudó principalmente en enfocar nuestro presente ensayo a estimar las similitudes o diferencias de la oxaliplatina encapsulada de manera liposomal versus la oxaliplatina pura (libre) . Los efectos secundarios hematológicos y en tracto G.I. se mostró que se reducen en gran medida. El único efecto secundario que permaneció sin diferencia alguna - cualquier reducción, fue la neurotoxicidad. Eso se observó con frecuencia, incrementado de manera más o menos análoga con el incremento de la dosis del agente y actuó como el único o principal criterio para definir la toxicidad limitante de dosis. La dosis definida por MTD fue de 300 mg/m2 administrada semanalmente . También hubo una neurotoxicidad aditiva como sucede también con la oxaliplatina liposomal (ref.). Con respecto a la eficacia de 11% de índice de respuesta observado en pacientes pre-tratados refractarios a tumores establecidos, previos, podría tener cierto significado para futuros ensayos en una modalidad de quimioterapia combinada. También es importante señalar que los tipos de cáncer seleccionados para este ensayo no son de los más sensibles a quimioterapia . Este estudio ha establecido una MTD y se necesita investigación adicional en particular con otros agentes en combinación . Como resultado, este ejemplo muestra que la oxaliplatina liposomal es un agente bien tolerado. La dosis de 300 mg/m2 se definió como MTD. Las toxicidades en médula ósea y tracto G.I. son mucho muy reducidas en comparación a la forma pura de la oxaliplatina. La única reacción adversa que permanece es la neurotoxicidad que es la que define la DLT.

Nivel de dosis Número de Lipoxal® (mg/m2 pacientes por semana) I 3 100 II 3 150 III 5 200 IV 4 250 V 4+4 300 VI 4 350 Lipoxal Aumento de dosis de Lipoxal Nivel de dosis Número de Lipoxal pacientes (mg/m2 por semana) I 3 100 II 3 150 III 5 200 IV 4 250 V 4+4 300 VI 4 350 Tabla 6. Aumento de dosis de oxaliplatina encapsulada manera liposomal (Lipoxal®) N (%) Pacientes en 27 (100) total Edad, años Mediana 62 Rango 32-78 Hombre 18 (66.66) Muj er 9 (33.33) PS 0 2 (7.40) 1 14 (51.85) 2 11 (40.74) Etapa IV 27 (100) Tumor primario Colo-rectal 12 (44.44) Páncreas 8 (29.62) Estómago 4 (14.81) Biliar 2 (7.41) Hígado 1 (3.70) Histología Adenocarcinoma 27 (100) ? Etapa de la enfermedad IV 27 (100) ? Tumor primario Colo-rectal 12 (44.44) Páncreas 8 (29.62) Estómago 4 (14.81) Biliar 2 (7.41) Hígado 1 (3.70) ? Histología Adenocarcinoma 27 (100) ?' Quimioterapia previa Tabla 7. Características de los pacientes de línea de base Dosis Cmax AUC Cl Kei i/2 Vss (mg/m2) (pg (ug (L/h*m2) (1/ ) (h) (L/m2) Pt/ml) Pt*h/ml) 250 9.175 424.4 0.289 0.028 24.3 9.7 350 12.087 782.3 0.219 0.020 35.5 10.9 Tabla 8. Estimados del parámetro farmacocinético de plasma para Lipoxal en pacientes (ver texto para definiciones de parámetros) Lipoxal Respuesta a tratamiento ? No se observó CR. ? 3 de 27 pacientes mostraron PR (11.1%) ? Dos de 3 fueron pacientes con cáncer gástrico avanzado ( ) · ? Uno fue paciente con cáncer colorrectal - metástasis de Hígado - (ictericia) .

? Duración de la respuesta 4, 7, 2 meses. 18 pacientes de enfermedad estable (66.66%) duración promedio de 4 meses (rango 2-9) 5 pacientes con enfermedad en progreso Referencias 1. De Gramont A, Vignond J, Tournigand C, et al: Oxaliplatina con leucovorin a dosis elevada e infusión de 5-fluorouracilo 48 h continuas en cáncer colorrectal metastásico pre-tratado. Eur Cáncer 33: 214-219, 1997. 2. Giaccheti S, Perpoint B, Zidani R, et al.: Ensayo aleatorizado, multicentral de fase III de oxaliplatina agregada a fluorouracilo-leucovorin cronomodulado como tratamiento de primera linea de cáncer colorrectal metastásico. J Clin Oncol 18: 136-147, 2000. 3. De Gramont A, Figer A, Seymour M, et al.: Leucovorin y fluorouracilo con o sin oxaliplatina como tratamiento de primera linea en cáncer colorrectal avanzado. J Clin Oncol 18: 2938-2947, 2000. 4. Giacchetti S, Perpoint B, Zidani R, et al: Ensayo aleatorizado multicentral de Fase III de oxaliplatina agregada a fluorouracilo-leucovorin cronomodulado como tratamiento de primera linea de cáncer colorrectal metastásico. J Clin Oncol 18: 136-147, 2000.

. Souglakos J, Mavroudis D, Kakolyris S, et al . : Combinación triple con irrinotecan más oxaliplatina más fluorouracilo de infusión continua y leucovorin como tratamiento de primera linea en cáncer colorrectal metastásico: un ensayo multicentral de fase II. J Clin Oncol 20: 2651-2657, 2002. 6. Schethauer W, Kornek GV, Raderer M, et al.: Ensayo aleatorizado multicentral de fase II de dos diferentes esquemas de capecitabina más oxaliplatina como tratamiento de primera linea en cáncer colorrectal avanzado. J Clin Oncol 21: 1307-1312, 2003. 7. Goldberg RM, Sargent DJ, Morton RF, et al.: Un ensayo controlado aleatorizado de fluorouracilo más combinaciones de leucovorin, irinotecan y oxaliplatina en pacientes con cáncer colorrectal metastásico previamente no tratado, J. Clin Oncol 22: 23-30, 2004. 8. Sorbye H, Glimelius B, Berglund A, et al.: Estudio multicentral de fase II de programa de bolo de fluorouracilo nórdico y ácido folinico combinado con oxaliplatina como tratamiento de primera linea de cáncer colorrectal metastásico. J Clin Oncol 22: 31-38, 2004. 9. Cassidy J, Misset JL: Efectos secundarios relacionados con oxaliplatina: características y manejo. Semin Oncol 29 (Suppl 15), 11-20, 2002. 10. Cassidy J, Misset JL: Efectos secundarios relacionados con oxaliplatina : características y manejo. Semin Oncol 29 (Suppl 15), 11-20, 2002. 11. Jerremalm E., Eksborg S, Ehrsson H: Hidrólisis de evaluación de oxaliplatina de la constante de disociación ácida para el complejo monodentado de oxalato. J Pharm Sci 92: 436-8, 2003. 12. Spingler B, Whittington Da, Lippard SJ: estructura de cristal 2.4 de un intra-filamento 1,2-d de oxaliplatina (GpG) degradado en dodecámero dúplex de ADN. Inong Chem 40: 5596-602, 2001. 13. Arnould S, Hennebelle I, Canal P, Bugat R, Guichard S: Determinantes celulares de sensibilidad a oxaliplatina en líneas celulares de cáncer de colon. Eur J Cáncer 39: 112-9, 2003. 14. De Vita F, Orditura M, Matano E, Bianco R, Carlomagno C, Infusino S, Damiano V, Simeone E, Diadema MR, Lieto E, Castellano P, Pepe S, De Placido S, Galizia G, Di Martino N, Ciardiello F, Catalano G, Bianco AR. Un estudio de fase II de oxaliplatina dos veces a la semana más 5-fluorouracilo infusional y ácido folínico (FOLFOX-4) como tratamiento de primera línea de pacientes con cáncer gástrico avanzado. Br J Cáncer Mayo 9, 92 (9): 1644-1649, 2005. 15. Lersch C, Schmeiz R, Eckel F, Erdmann J, Mayr M, Schuite-Frohlinde E, Quasthoff S, Grosskreutz J, Adelsberger H: Prevención de neuropatía sensorial periférica inducida por oxaliplatina mediante carbamazepina en pacientes con cáncer colorrectal avanzado. Clin Colorectal Cáncer 2: 54-8, 2002.

CRF Lipoxal 200 mg/m2 semanal Nombre (o código) de Participante: --Psa.Ath. Tipo de cáncer: estómago, Etapa: IV Antes de Tratamiento de Lipoxal FUNCIÓN DE LA MÉDULA ÓSEA HEMOGLOBINA (gr/dl) 13.0 LEUCOCITOS (1,000/mm3) 3.7 PLAQUETAS (1,000/mm3) 207 FUNCIÓN RENAL UREA EN SANGRE (mg%) 22 CREATININA (mg%) 0.4 ÁCIDO ÚRICO (mg%) 4.3 7 Dias después de 4a Infusión de Lipoxal FECHA la sangre se extrajo para examinación bioquímica 2/11/2004 UNA FUNCIÓN DE MÉDULA HEMOGLOBINA (gr/dl) 12.3 LEUCOCITOS (1,000/mm3) 7.1 PLAQUETAS (1,000/mm3) 315 FUNCIÓN RENAL UREA EN SANGRE {mg%) 15 CREATININA (mg%) 0.5 ÁCIDO ÚRICO {mg%) 4.1 7 Dias después de 9a Infusión de Lipoxal UNA FUNCIÓN DE MÉDULA HEMOGLOBINA {gr/dl) 9.8 LEUCOCITOS (1,000/mm3) 2.6 PLAQUETAS (1,000/mm3) 277 FUNCIÓN RENAL UREA EN SANGRE (mg%) 17 CREATININA {mg%) 0.40 ÁCIDO ÚRICO (mg%) 3.5 7 Dias después de 12a Infusión de Lipoxal FUNCIÓN DE MÉDULA ÓSEA HEMOGLOBINA {gr/dl) 11.1 LEUCOCITOS (1,000/mm3) 6.1 PLAQUETAS (1,000/mm3) 263 FUNCIÓN RENAL UREA EN SANGRE {mg%) 29 CREATININA (mg%) 0.51 ÁCIDO ÚRICO (mg%) 4.8 EJEMPLO III CISPLATINA LIPOSOMAL COMBINADA CON GEMCITABINA EN PACIENTES DE CÁNCER PANCREÁTICO AVANZADO, PRE-TRATADOS : UN ESTUDIO DE FASE I-II Propósito: El ensayo actualmente descrito es un estudio de fase I-II en base a nueva cisplatina encapsulada de manera liposomal (producida bajo la marca Lipoplatin® por Regulon Inc. de Mountain View, CA) . Los datos preclinicos y clínicos previos ( farmacocinética de Fase I) conducen a la investigación de una modalidad de tratamiento combinado que involucra Lipoplatin® y gemcitabina. Pacientes y Métodos: La dosis de gemcitabina se mantuvo estándar a 1000 mg/m2 y la dosis de lipoplatina se aumentó desde 25 mg/m2 hasta 125 mg/m2. El tratamiento se administró a pacientes de cáncer pancreático pre-tratado, avanzado, quienes fueron refractarios a quimioterapia previa que incluyeron gemcitabina. Resultados: Lipoplatin® a 125 mg/m2 se definió como toxicidad limitante de dosis (DLT) y 100 mg/m2 como la máxima dosis tolerada (MTD) en combinación con 1000 mg/m2 de gemcitabina. Los datos de índice de respuesta objetiva preliminar mostraron una respuesta parcial en 2/24 pacientes (8.3%), estabilidad de enfermedad en 14 pacientes (58.3%) para una duración promedio de 3 meses (rango de 2-7 meses) y beneficio clínico en 8 pacientes (33.3%). Conclusión: La cisplatina encapsulada de manera liposoma es un agente alternativo no tóxico para cisplatina pura. En combinación con gemcitabina, tuvo una MTD de 100 mg/m2 y muestra eficacia prometedora en cáncer pancreático refractario . Cisplatina, ( cis-PtC12 (NH3 ) 2 ) se utiliza a nivel mundial para el tratamiento de cáncer testicular y' de ovarios asi como para tumores de vejiga, cabeza, cuello, pulmón y gastrointestinales y muchos otros. 1-7 Aunque muy eficaces contra estos tumores, la cisplatina se ha asociado con severos efectos secundarios que incluyen nefrotoxicidád, 8 ototoxicidad, neurotoxicidad, náusea y vómito. 7-9 Carboplatina, un análogo de cisplatina, es notablemente menos tóxico para los ríñones y sistema nervioso que la cisplatina y origina menos náusea y vómito, aunque en general (y ciertamente para cáncer de ovario y cáncer de pulmón de célula pequeña) retiene actividad anti-tumor equivalente. Sin embargo, los efectos adversos hematológicos son más frecuentes con carboplatina que con cisplatina (10, 11). Gemcitabina (bajo la marca Gemzar®, Eli Lily, Indianápolis , IN) , un análogo nucleósido, se administra en combinación con cisplatina como tratamiento de primera línea de pacientes con cáncer de pulmón de célula no pequeña localmente avanzado (etapa IIIA o IIIB) o metastásico (etapa IV) y como tratamiento de línea frontal para pacientes con adenocarcinoma del páncreas localmente avanzado (etapa III no operable) o metastásico (etapa IIIB, IV) . 12-14 La principal reacción adversa es mielotoxicidad. La ventaja de usar combinaciones de gemcitabina con platino se ha atribuido a la inhibición de las trayectorias sintéticas de ADN involucradas en la reparación de aductos de platino-ADN. La gemcitabina y cisplatina actúan de manera sinérgica, incrementando la formación de aductos de platino-ADN e induciendo la concentración y cambios dependientes de combinación en depósitos ribonucleótidos y deoxiribonucleótidos en lineas celulares de cáncer de ovario (15). Los estudios previos sobre Lipoplatin® (Regulon Inc, Mountain View, CA) mostró: un perfil de baja toxicidad, una capacidad para concentrarse en tumores y escapar a células inmunes y macrófagos, un índice de eliminación lenta de los ríñones, propiedades de larga circulación en fluidos corporales, una vida promedio de 36 h en la sangre y eficacia terapéutica prometedora. 16 h En el presente estudio de Fase I-II se intentó explorar la eficacia terapéutica y perfil de toxicidad de la combinación de lipoplatin-gemcitabina, dado cada 14 días en pacientes de cáncer pancreático, pretratados, de etapa avanzada. Nuestros objetivos primarios fueron determinar la toxicidad y la máxima dosis tolerada (MTD) y nuestro propósito secundario determinar el índice de respuesta y beneficio clínico. PACIENTES Y MÉTODOS Los pacientes >18 años de edad con adenocarcinoma confirmado de manera histológica o citológica del páncreas y enfermedad bidimensionalmente medible, que habían experimentado pre-tratamiento de quimioterapia y tenían enfermedad recurrente o sin respuesta, se inscribieron en el estudio. Otros criterios de elegibilidad incluyeron un estado de desempeño (PS)de la Organización Mundial de la Salud (WHO) de 0-2, expectativa de vida de al menos 3 meses, reservas adecuadas de médula ósea (conteo de granulocitos >l,500/dl, conteo de plaquetas >120 , 000/dl ) , pruebas normales de función renal y de hígado (concentración de creatinina en suero < 1.2 mg/dl) (concentración total de bilirrubina en suero, <3 mg/dl, tomando en cuenta que las transaminasas en suero y las proteínas en suero eran normales), función cardiaca normal sin historia de angina de pecho clínicamente inestable o infarto al miocardio o falla cardiaca congestiva dentro de los 6 meses previos y sin involucrar el sistema nervioso central. Se permitió cirugía previa tomando en cuenta que tomara lugar al menos 3 semanas antes. Los pacientes con infección activa, desnutrición o un segundo tumor primario (excepto para un epitelioma dérmico de no melanoma o carcinoma de cérvix in situ) se excluyeron del estudio. Todos los pacientes dieron su consentimiento informado por escrito para participar en el estudio. PLAN DEL TRATAMIENTO El plan fue combinar Lipoplatin® con gemcitabina. Lipoplatin®, suministrado por Regulon Inc., de administró como una infusión i.v. de 8 h los días 1 y 15; se eligieron 8 horas con objeto de ser capaces de controlar posibles efectos adversos sobre la base de nuestra experiencia en el ensayo de fase I. La gemcitabina se dio como una infusión i.v. de 60 min en 500 mi de solución salina normal los días 1 y 15 a una dosis de 1000 mg/m2 y se repitieron ciclos cada 4 semanas (28 días) . Las infusiones los días 1 y 15 se consideraron de 1 ciclo. Tomando en cuenta que los pacientes se habían recuperado lo suficiente de los efectos secundarios relacionados con fármacos, el tratamiento antiemético de ondansetron estándar estaba por administrarse a todos los pacientes. La administración profiláctica de factor estimulador de colonias de granulocitos humanos recombinantes (rhG-CSF) no se permitió. En casos de neutropenia de grado 3, estos pacientes recibirían infusiones posteriores de pegfilgrastim 6 mg, el día 6° o 7o y el tratamiento se pospondría por una semana. El tratamiento se administró durante al menos tres ciclos o hasta el progreso de la enfermedad. El estudio fue un ensayo de aumento de dosis, de cohorte fase I/II de Lipoplatin® y gemcitabina. Su propósito era determinar la toxicidad imitante de dosis (DLT) de la combinación y definir la máxima dosis tolerada (MTD) como una dosis recomendada para fase II y recolectar datos preliminares sobre la eficacia del fármaco en pacientes pre-tratados con cáncer pancreático. La mielotoxicidad con Lipoplatin® como un solo agente se consideró muy moderada en un estudio de fase I previa. 16 Iniciamos con una dosis baja de Lipoplatin®, combinada con gemcitabina que es un agente mielotóxico, principalmente para determinar el grado de reacción adversa de la médula ósea. La dosis de inicio de Lipoplatin® fue de 25 mg/m2 y se incrementó por 25 mg/m2 por nivel de dosis (Tabla 1) . El protocolo se aprobó por el Comité Ético y Científico del hospital. Los criterios de ajuste de dosis se basaron en parámetros hematológicos . En casos de neutropenia febril de grado 3 o 4, se repitieron ciclos posteriores con administración profiláctica de pegfilgrastim, como se describe arriba. En casos de neutropenia febril o neutropenia de grado 3 ó 4, a pesar de la administración de rhG-CSF, las dosis de gemcitabina y Lipoplatin se redujeron en 25% en la siguiente infusión de tratamiento. En casos de trombocitopenia de grado 3 ó 4 que duran >5 días, las dosis de ambos fármacos también se redujeron en 25%. Las toxicidades se calificaron de acuerdo con lineamientos de WHO. EVALUACIÓN DEL PACIENTE La evaluación de pre-tratamiento incluyó la historia médica completa y examen físico, conteo completo de células sanguíneas incluyendo los conteos diferenciales de leucocitos y plaquetas, un perfil bioquímico estándar (y eliminación de creatinina cuando sea necesario) , antígeno carcmoembrionico en suero (CEA) y determinaciones 19-9 CA, electrocardiograma, rayos-X de pecho, ultrasonido del abdomen superior y exploraciones de tomografía computarizada (CT) del torso, abdomen superior e inferior. Se llevaron a cabo estudios adicionales de formación de imágenes después de la indicación clínica. Se llevaron a cabo conteos sanguíneos completos con diferencial semanal; en caso de neutropenia de grado 3 ó 4 o trombocitopenia de grado 4, los conteos sanguíneos completos con diferencial se evaluaron diariamente hasta que el conteo absoluto de granulocitos fue >l,000/dl y el conteo de plaquetas >75,000/dl. Se completó un examen médico y físico detallado antes de cada procedimiento de tratamiento con objeto de documentar síntomas de la enfermedad y toxicidades del tratamiento. Los exámenes bioquímicos, ECG, CEA en suero y determinaciones 19-9 CA y los rayos-X de pecho se llevaron a cabo cada 6 semanas y se llevó a cabo una evaluación neurológica mediante examen clínico. Las lesiones se midieron después de cada ciclo si eran determinables por examen físico o por rayos-X en péchelas lesiones determinables por ultrasonido o exploraciones CT se evaluaron después de tres ciclos de quimioterapia. DEFINICIÓN DE RESPUESTA La respuesta completa (CR) se definió como la desaparición de todos los signos, síntoma, enfermedad medible o evaluable y cambios bioquímicos relacionados con el tumor durante al menos 4 semanas, durante cuyo tiempo no pueden aparecer nuevas lesiones. La respuesta parcial (PR) se definió como reducción >50% en la suma de los productos de los diámetros perpendiculares de todas las lesiones medibles en comparación a mediciones de pre-tratamiento, durando al menos 4 semanas, durante cuyo tiempo no pueden aparecer nuevas lesiones y no pueden agrandarse lesiones existentes. Para lesiones hepáticas, se requirió una reducción de >30% en la suma de las distancias medidas a partir del margen de costal en la linea media clavicular y en el proceso xifoide hasta la orilla del hígado. La enfermedad estable (SD) se definió como <50% reducción y un incremento de <25% en la suma de los productos de los dos diámetros perpendiculares de todas las lesiones medidas y la no aparición de nuevas lesiones durante 8 semanas. La enfermedad progresiva (PD) se definió como un incremento en el producto de los dos diámetros perpendiculares de cualquier lesión medible por >25% sobre el tamaño presente a la entrada en el estudio o, para pacientes que respondieron, el tamaño al momento de la máxima regresión y la aparición de nuevas áreas de enfermedad maligna. El incremento de bilirrubina sin recuperación después de colédoco-pancreatografía retrógrada endoscópica (ERCP) o colocación de micro-andamio se consideró como progreso de la enfermedad. Un deterioro de dos etapas en el estado de desempeño, una pérdida de >10% de peso en el pre-tratamiento o incremento de los síntomas no constituyen por sí solos progreso de la enfermedad; sin embargo, la aparición de estos padecimientos fue seguida de una nueva evaluación del grado de la enfermedad. Todas las respuestas tenían que mantenerse durante al menos 4 semanas y confirmarse por un panel independiente de radiólogos. RESULTADOS Demografía de pacientes A partir de Enero de 2003 hasta Diciembre de 2004, se inscribieron 24 pacientes (11 hombres, 13 mujeres; edad promedio 66 años, rango de 47-80 años) en el estudio. Las características de los pacientes se muestran en la Tabla 2. El estado de desempeño de WHO fue de 0 en 4.2% de los pacientes, 1 en 45.8% y 2 en 50%. La gran mayoría de los pacientes era etapa IV (79.2%). Todos los pacientes habían experimentado quimioterapia previa: once pacientes con gemcitabina como tratamiento de un solo agente y 13 con gemcitabina combinada con irrinotecan. Intensidad de la dosis Los pacientes recibieron 38 procedimientos (108 infusiones cada dos semanas) y el número promedio de procedimientos fue 2 (rango 1-5) . De los 24 pacientes, 10 pacientes completaron 3 procedimientos. No hubo reducción de dosis para fármaco alguno y los pacientes recibieron 99.5% de la intensidad de dosis planeada (rango 93-100%) de cada grupo hasta el cuarto nivel de dosis. Toxicidad No se observó neurotoxicidad o toxicidad renal. El dolor abdominal temporal que duró por 2-4 minutos y que se corrigió por si solo, se observó en 10/24 pacientes al inicio de la infusión de Lipoplatin®. La mielotoxicidad de grado 3 se observó en 2 de 4 pacientes en el quinto nivel de dosis. No se observó neutropenia febril. La toxicidad se muestra en las Tablas 3 y 4. La dosis de quinto nivel (125 mg/m2 de lipoplatina y 1000 mg/m2 de gemcitabina) se consideró como DLT y el nivel de dosis 4 como la MTD. Se trataron cuatro pacientes adicionales en el cuarto nivel de dosis. Respuesta al tratamiento La determinación de la respuesta medible sobre la tomografia computarizada se llevó a cabo por dos radiólogos independientes y dos oncólogos experimentados . No se detectaron respuestas completas. PR se logró en 2 pacientes (8.3%) con duraciones de 6 y 5 meses. La enfermedad estable se observó en 14 pacientes (58.3%) con una duración promedio de 3 meses (rango de 2-7 meses) . El beneficio clínico principalmente debido a reducción de dolor se observó en 8 pacientes (33.3%). Al final del estudio, 7 pacientes (29.2%) aún estaban vivos. La supervivencia promedio desde el inicio del tratamiento de segunda línea fue de 4 meses (rango 2-8+ meses) .

Conclusión Esta nueva cisplatina encapsulada de manera liposomal (Lipoplatin® se propone principalmente evitar la toxicidad renal, lo cual se observa con frecuencia en administración de cisplatina, mientras que al mismo tiempo produce eficacia similar. Los farmacocinéticos de Lipoplatin® son diferentes de la cisplatina, como se ha demostrado en estudios animales, asi como en un ensayo clínico en pacientes. 16 La falta de toxicidad es una importante ventaja, lo cual se demuestra cuando Lipoplatin® se administra como un solo agente. En el presente ensayo de fase I-II, la toxicidad y la eficacia se estudiaron mediante administración de Lipoplatin® en combinación con gemcitabina, un agente cuya toxicidad está bien definida, particularmente cuando se combina con otros agentes. 5 La combinación de cisplatina-gemcitabina se ha usado de manera similar como tratamiento en cáncer de pulmón de célula pequeña, cáncer urotelial y pancreático. 5, 7, 12 Parece que los datos del presente ensayo indican la ventaja de muy baja toxicidad. La administración cada dos semanas de la combinación es bien tolerada hasta la dosis de 100 mg/m2 de Lipoplatin® cuando la gemcitabina se mantiene a una dosis estándar de 1000 mg/m2. A la dosis de 125 mg/m2 de Lipoplatin®, la mielotoxicidad alcanzó grados 3 y 4 y por consiguiente esta dosis se consideró como DLT . Los 100 mg/m2 de Lipoplatin® y 1 gr/m2 de gemcitabina se consideraron como DLT . Los 100 mg/m2 de Lipoplatin® y 1 gr/m2 de gemcitabina se consideraron como la MTD. La combinación logró una respuesta objetivo en 8.33% de los pacientes, estabilidad de la enfermedad en 58.3% y alivio del dolor en 33.3%. Tomando en cuenta que todos los pacientes fueron refractarios o en progreso de la enfermedad aunque incluían gemcitabina en un tratamiento previo, , el índice de respuesta aquí producido debe atribuirse a la adición de Lipoplatin®. La cisplatina encapsulada de manera liposomal combinada con gemcitabina administrada cada dos semanas en pacientes de cáncer pancreático pre-tratados, avanzado, tiene una MTD de 100 mg/m2 y 1000 mg/m2, respectivamente. Es un tratamiento bien tolerado con signos de eficacia prometedores. REFERENCIAS 1. Rosenberg B: Complejos de platino para el tratamiento de cáncer: porqué continúa la búsqueda, In Lippert B (ed) : Cisplatina: Química y Bioquímica de un Fármaco Anticáncer Guía. Zurich, Verlag Helvética Chimica Acta, 1999, pág. 3 2. 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Sculier JP, Lafitte JJ, Lecomte J, et al.: Parte Trabajadora de Cáncer de Pulmón Europea: un ensayo aleatorizado de fase III de tres extremidades, que compara combinaciones de ifosfamida derivada de platino y/o gemcitabina en cáncer de pulmón de célula no pequeña de etapa IV. Ann Oncol 13: 874-882, 2002 11. Tognoni A, Pensa F, Vaira F, et al.: Un estudio para hallar la dosis de carboplatina y gemcitabina en cáncer de pulmón de célula no pequeña, avanzado. J Chemother 14: 296-300, 2002 12. Burris HA 3rd, Moore MJ, Anderson J, et al.: Mejoras en supervivencia y beneficio clínico con gemcitabina como terapia de primera línea para pacientes con cáncer de páncreas avanzado: Un ensayo aleatorizado. J Clin Oncol 15: 2403-2413, 1997 13. Heinemann V, Wilke H, Mergenthaler HG, et al.: Gemcitabina y cisplatina en el tratamiento de cáncer avanzado y metastásico pancreático. Ann Oncol 11: 1399-1403, 2000. 14. 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Cáncer, 47(1): 207-214, 1981 Nivel de No. de Lipoplatin Gemcitabina dosis pacientes (mg/m2 por (mg/m2 por semana) semana) Primero 4 25 1000 Segundo 4 50 1000 Tercero 4 75 1000 Cuarto 4+4 100 1000 Quinto 4 125 1000 Tabla 1. Lipoplatin® y Gemcitabina Aumento de Dosis Nivel de Dosis No. de Pacientes Lipoplatin® Gemcitabina (mg/m2 por semana) (mg/m2 por semana) Primero 4 25 1000, Segundo 1 50 1000, Tercero 4 75 1000, Cuarto 4+4 100 1000, Quinto 4 125 1000. No. o o No. de pacientes inscritos 24 100 Edad (años) Mediana 66 Rango 47-80 Género Masculino 11 45.8 Femenino 13 54.2 Desempeño Estado (WHO) 0 1 4.2 1 11 45.8 2 12 50.0 Etapa de la enfermedad 20.8 III 5 IV 19 79.2 Histología Bien diferenciado 3 12.5 Moderadamente diferenciado 12 50.0 Baja diferenciación 9 37.5 Tratamiento previo Días Gemcitabina 1 mg/m2 1, 8, 15/cada 4 sem 11 45.8 Gemcitabina Días 1,8 900 mg/m2+ cada 3 sem 13 54.2 Irinotecan Días 8/cada 300 mg/m2 3 sem Tabla 2. Características de los pacientes en la Línea Base No. % No. de pacientes inscritos 24 100 Edad (años) Mediana 66 Rango 47-80 Género Masculino 11 45.8 Femenino 13 54.5 Estado de Desempeño (WHO) 0 14.2 1 11 45.8 2 12 50.0 Etapa de la Enfermedad III 5 20.8 IV 19 79.2 Histología Bien diferenciada 3 12.5 Moderadamente diferenciada 12 50.0 Baja diferenciación 9 37.5 Tratamiento previo Gemcitabina 1 gr/m 2 días 1, 8, 15/cada 4 semanas 11 45.8 Gemcitabina 900 mg/m2+ días 1,8/cada 3 semanas + 13 54.2 Irinotecan 300 mg/m2 día 8/cada 3 semanas Nivel Lipopla- Gemcitabina Toxicidad Toxicidad Tipo de de tin Mg/m2 No. pts máxima toxicidad dosis Mg/m2 (grado) Primero 25 1000 - Segundo 50 1000 - Tercero 75 1000 - Cuarto 100 1000 2/4a 2-3 Neutropenia Quinto 125 1000 2/4 3-4 Neutropenia a Original 4 pacientes Tabla 3. Toxicidad Hematológica por Nivel de Dosis Lipoplatin® Toxicidad de Gemcitabina Toxicidad Máxima mg/m2 mg/m2 No. de Pts Toxicidad (grado) Tipo Primero 25 1000 Segundo 50 1000 Tercero 75 1000 Cuarto 100 1000 2/4* 2-3 Neutropenia Quinto 125 1000 2/4 3-4 Neutropenia* original 4 pacientes Grado 1 Grado 2 Grado 2 Grado 4 n(%) n(%) n(%) n(%) Episodios Náusea 5(20.8) - - - Vómito 2 (8.3) - - - Alopecia 14 (58.3) - - - Fatiga 8 (33.3) - - - Diarrea 2 (8.3) - - - Cardiotoxicidad - - - - Neurotoxicidad 3 (12.5) - - - Nefrotoxicidad - - - - Trombótica 4 (16.7) - - - Tabla 4. Dosis de Toxicidad No Hematológica Grado 1 Grado 2 Grado 3 Grado 4 Nivel n (%) n(%) n(%) n(%) Náusea 5 (20.8) Vómito 2 (8.3) Alopecia 14 (58.3) Fatiga 8 (33.3) Diarrea 2 (8.3) Cardiotoxicidad Neurotoxicidad 3 (12.5)- -- Nefrotoxicidad Episodios trombóticos 4 (16.7)

Claims (68)

1. REIVINDICACIONES 1. Un método para formar un micelo que comprende oxaliplatina, comprendiendo el método combinar una cantidad efectiva de oxaliplatina y un lipido de fosfatidil glicerol cargado de manera negativa con un solvente.
2. 2. Un método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el solvente es etanol y se presenta de 20 hasta 40%.
3. 3. Un método de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde el lipido de fosfatidil glicerol cargado de manera negativa es fosfatidil glicerol de dipalmitoilo (DPPG), fosfatidil glicerol de dimiristol (DMPG) , fosfatidil glicerol de diaproilo (DCPG), fosfatidil glicerol de diestearoilo (DSPG) o fosfatidil glicerol de dioleilo (DOPG) .
4. 4. Un método de acuerdo con la reivindicación 3, en donde el lipido de fosfatidil glicerol cargado de manera negativa es DPPG.
5. 5. Un método de acuerdo con una reivindicación precedente, en donde la proporción molar de oxaliplatina al lipido de fosfatidil glicerol cargado de manera negativa es 1:1 hasta 2:1.
6. 6. Un método para encapsular oxaliplatina en un liposoma que comprende combinar un micelo de oxaliplatina como se define en · cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 con un liposoma o lipidos preformados.
7. 7. Un método de acuerdo con la reivindicación 6, en donde el liposoma o lipidos preformados comprenden lipidos cargados de manera negativa y/o positiva.
8. 8. Un método de acuerdo con la reivindicación 7, en donde los lipidos son fosfolipidos o derivados de los mismos .
9. 9. Un método de acuerdo con la reivindicación 8, en donde el lipido es DDAB, bromuro de dimetildioctadecil amonio; DMRIE: bromuro de N- [ 1- ( 2 , 3-dimiristiloxi ) propil ] -N, -dimetil-N- (2-hidroxietil) amonio; D TAP: 1 , 2-dimiristoil-3-trimetilamonio propano; DOGS : Dioctadecilamidoglicilespermina ; DOTAP: cloruro de N-(l-(2,3-dioleoiloxi) propil) -N, , -trimetilamonio; DOTMA: cloruro de N- [1- (2, 3-dioleiloxi) propil] -n, n, n-trimetilamonio; DPTAP: 1 , 2-dipalmitoil-3-trimetilamonio propano o DSTAP: 1,2-diesteroil-3-trimetilamonio propano .
10. 10. Un método de acuerdo con la reivindicación 7, en donde el liposoma comprende uno o más de colesterol, fosfatidil colina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilcolina de soya hidrogenada o ceramida.
11. 11. Un método de acuerdo con la reivindicación 10, en donde el liposoma preformado comprende además una sal de amonio .
12. 12. Un método para encapsular oxaliplatina en un liposoma que comprende las siguientes etapas: e) formar un micelo que comprende oxaliplatina al combinar una cantidad efectiva de oxaliplatina y un lipido de fosfatidil glicerol cargado de manera negativa con un solvente y f) combinar dicho micelo de oxaliplatina con un liposoma o lipidos preformados.
13. 13. Un método de acuerdo con la reivindicación 12, en donde el solvente es etanol y se presenta de 20 hasta 40%.
14. 14. Un método de acuerdo con la reivindicación 12 ó 13, en donde el lipido dé fosfatidil glicerol cargado de manera negativa es DPPG, DMPG, DCPG, DSPG o DOPG.
15. 15. Un método de acuerdo con la reivindicación 14, en donde el lipido de fosfatidil glicerol cargado de manera negativa es DPPG.
16. 16. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 12 a 15, en donde la proporción molar de oxaliplatina al lipido de fosfatidil glicerol cargado de manera negativa es 1:1 a 1:2.
17. 17. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 6 a 16, que comprende además cubrir la superficie de la membrana de liposoma con un polímero.
18. 18. Un método de acuerdo con la reivindicación 17, en donde un ligando se conjuga con el polímero.
19. 19. Un método de acuerdo con la reivindicación 18, en donde el ligando es capaz de dirigir el liposoma a un tipo de célula específico con receptores superficiales reconocidos por el ligando.
20. 20. Un método de acuerdo con la reivindicación 18 ó 19, en donde el ligando es un péptido.
21. 21. Un método de acuerdo con la reivindicación 19, en donde el ligando se selecciona a partir de factor de crecimiento epidérmico o un epitope del mismo, endostatina, antitrombina, anastelina, angiostatina, PEX o factor derivado de epitelio de pigmento.
22. 22. Un método de acuerdo con una reivindicación precedente que comprende además incluir otro fármaco antitumor en el micelo o liposoma.
23. 23. Un método de acuerdo con la reivindicación 22, en donde el fármaco se selecciona a partir de cisplatina, paclitaxel, SN-38, docetaxel, irrinotecan, 5-fluorodesoxiuridina o doxorubicina .
24. 24. Un micelo obtenido por el método de las reivindicaciones 1 a 5.
25. 25. Un micelo que comprende una cantidad efectiva de oxaliplatina y un lipido de fosfatidil glicerol cargado de manera negativa.
26. 26. Un micelo de acuerdo con la reivindicación 25, en donde el lipido de fosfatidil glicerol es DPPG.
27. 27. Un micelo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 25 a 26, que además comprende otro fármaco anti-cáncer.
28. 28. Un micelo de acuerdo con la reivindicación 27, en donde el fármaco se selecciona a partir de cisplatina, paclitaxel, SN-38, docetaxel, irrinotecan, 5-fluorodesoxiuridina o doxorubicina .
29. 29. Un liposoma que comprende oxaliplatina obtenida por el método de cualquiera de las reivindicaciones 6 a 23.
30. 30. Un liposoma que comprende una cantidad efectiva de oxaliplatina en donde la capa interna y externa del liposoma comprende diferentes lipidos.
31. 31. Un liposoma de acuerdo con la reivindicación 30 que comprende un lipido de fosfatidil glicerol cargado de manera negativa.
32. 32. Un micelo de acuerdo con la reivindicación 31, en donde el lipido de fosfatidil glicerol es DPPG.
33. 33. Un liposoma de acuerdo con la reivindicación 32, que comprende además uno o más de colesterol, fosfatidil colina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilcolina de soya hidrogenada, ceramida.
34. 34. Un liposoma de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 30 a 33, en donde la superficie del liposoma se cubre con una cubierta que permite que el liposoma evada la supervivencia inmune.
35. 35. Un liposoma de acuerdo con la reivindicación 34, en donde la cubierta es un polímero.
36. 36. Un liposoma de acuerdo con la reivindicación 35, en donde el polímero es PEG.
37. 37. Un liposoma de acuerdo con la reivindicación 35 ó 36, en donde un ligando se conjuga con el polímero.
38. 38. Un liposoma de acuerdo con la reivindicación 37, en donde el ligando es capaz de dirigir el liposoma a un tipo de célula específico con receptores superficiales reconocidos por el ligando.
39. 39. Un liposoma de acuerdo con la reivindicación 37 ó la reivindicación 38, en donde el ligando es un péptido.
40. 40. Un liposoma de acuerdo con la reivindicación 37, en donde el ligando se selecciona a partir del factor de crecimiento epidérmico o un epítope del mismo, endostatina, antitrombina, anastelina, angiostatina, PEX o factor derivado de epitelio de pigmento.
41. 41. Un liposoma de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 28 a 40, en donde el liposoma tiene un tamaño de partícula de 80-120 nm.
42. 42. Un liposoma de acuerdo con las reivindicaciones 28 a 38, que comprende además una cantidad efectiva de otro fármaco anti-cáncer caracterizado en que la oxaliplatina y el otro fármaco se encapsulan en el mismo liposoma .
43. 43. Un liposoma de acuerdo con la reivindicación 39, en donde el fármaco anti-cáncer se selecciona a partir de cisplatina, docetaxel, paclitaxel, gemcitabina, navelbina, doxorubicina, irrinotecan, SN-38, gemcitabina o 5-fluorodesoxiuridina .
44. 44. Un liposoma de acuerdo con las reivindicaciones 28 a 38, que comprende además una cantidad efectiva de un gen anti-cáncer caracterizado en que la oxaliplatina y el otro fármaco se encapsulan en el mismo liposoma .
45. 45. Un liposoma de acuerdo con la reivindicación 44, en donde el gen anti-cáncer es p53, IL-2, IL-12, angiostatina y oncostatina.
46. 46. Un liposoma de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 27 a 45 para utilizarse como un medicamento para el cáncer.
47. 47. El uso de un liposoma de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 27 a 45 en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de cáncer.
48. 48. Un método para el tratamiento de cáncer que comprende administrar un liposoma como se define en cualquiera de las reivindicaciones 27 a 45.
49. 49. El uso o método de acuerdo con las reivindicaciones 46 ó 47, en donde el liposoma se administra cada semana o cada dos semanas por infusión intravenosa 3 horas y la oxaliplatina se presenta en una dosis de 100 hasta 350 mg/m2.
50. 50. El uso o método de acuerdo con la reivindicación 48, en donde la dosis es de 100, 150, 200, 250 ó 300 mg/m2.
51. 51. El uso o método de acuerdo con la reivindicación 49, en donde la dosis es de 300 mg/m2.
52. 52. El uso o método de acuerdo con las reivindicaciones 48 a 50, en donde la infusión es durante 3 horas de infusión una vez a la semana.
53. 53. El uso o método de acuerdo con las reivindicaciones 48 a 51, en donde la administración es en 2 a 4 ciclos, durando cada ciclo aproximadamente 8 semanas y seguido por una semana de reposo entre ciclos.
54. 54. El uso o método de acuerdo con las reivindicaciones 48 a 51, en donde el cáncer se selecciona a partir de cáncer colorrectal, gástrico, pancreático, de vejiga, cáncer de mama, colorrectal, gástrico, esofágico, pancreático, urotelial, de pulmón de célula no pequeña, de mama, próstata, cabeza y cuello, melanoma, testicular o de ovario .
55. 55. El uso o método de acuerdo con la reivindicación 53, en donde el cáncer es cáncer colorrectal, gástrico o pancreático.
56. 56. Un liposoma que comprende una cantidad efectiva de oxaliplatina y otro fármaco anti-cáncer o un fármaco de gen anti-cáncer y un lipido de fosfatidil glicerol cargado de manera negativa.
57. 57. Una terapia de combinación que comprende administrar un liposoma que encapsula una cantidad efectiva de oxaliplatina y encapsular otro fármaco anti-cáncer o un fármaco de gen anti-cáncer.
58. 58. Un liposoma de acuerdo con la reivindicación 55 ó 56, en donde el fármaco se selecciona a partir de cisplatina, paclitaxel, SN-38, docetaxel, irrinotecan, 5-fluorodesoxiuridina o doxorubicina .
59. 59. Una terapia de combinación que comprende administrar una cantidad efectiva de gemcitabina y un liposoma que encapsula una cantidad efectiva de cisplatina.
60. 60. Una terapia de combinación de acuerdo con la reivindicación 58, en donde la gemcitabina no forma parte del liposoma de cisplatina.
61. 61. Una terapia de combinación de acuerdo con la reivindicación 58 ó 60, en donde la gemcitabina se administra al mismo tiempo que el liposoma de cisplatina.
62. 62. Una terapia de combinación de acuerdo con la reivindicación 58 ó 60, en donde la gemcitabina se administra en un momento diferente del liposoma de cisplatina.
63. 63. Una terapia de combinación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 58 a 62, en donde el cáncer es cáncer pancreático, cáncer colorrectal, cáncer gástrico, cáncer de mama, cáncer de pulmón de célula no pequeña, cáncer de ovario, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de próstata, testicular, cáncer intestinal, de vejiga, esofágico o cáncer urotelial.
64. 64. Una terapia de combinación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 58 a 63, en donde la gemcitabina se administra en una dosis de 800 hasta 1000 mg/m2.
65. 65. Una terapia de combinación de acuerdo con la reivindicación 64, en donde la gemcitabina se administra por infusión intravenosa a una dosis de 1000 mg/m2.
66. 66. Una terapia de combinación de acuerdo con la reivindicación 64 ó 65, en donde la gemcitabina se administra como una infusión IV (intravenosa) de 60 min cada dos semanas .
67. 67. Una terapia de combinación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 58 a 66, en donde el liposoma de cisplatina se administra por infusión intravenosa a una dosis de 100 hasta 125 mg/m2.
68. 68. Una terapia de combinación de acuerdo con la reivindicación 67, en donde el liposoma de cisplatina se administra como una infusión IV (intravenosa) de 8 horas cada dos semanas.