MX2008010434A - Moduladores de molecula pequeña de actividad trp-p8. - Google Patents

Moduladores de molecula pequeña de actividad trp-p8.

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Abstract

Se proporcionan moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña, en los que se incluyen agonistas de Trp-p8 y antagonistas de Trp-p8 y composiciones que comprenden agonistas de Trp-p8 de molécula pequeña, también como métodos para identificar y caracterizar nuevos moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña y métodos para disminuir la viabilidad y/o inhibir el crecimiento de células que expresan Trp-p8, métodos para activar la afluencia de cationes Trp-p8-moderados, métodos para estimular apoptosis y/o necrosis y métodos relacionados para el tratamiento de enfermedades, en los se incluyen cánceres tales como cánceres de pulmón, de pecho, colon y/o próstata, también como otras enfermedades, tales como hiperplasia prostática benigna, que están asociadas con la expresión de Trp-p8.

Description

MODULADORES DE MOLECULA PEQUEÑA DE ACTIVIDAD DE TRP-P8 CAMPO DE LA INVENCION La presente invención es concerniente en general con los campos de biología celular, bioquímica y química orgánica. Más específicamente, la presente invención proporciona moduladores de molécula pequeña de la activo de Trp-p8 que incluyen agonistas de Trp-p8 y antagonistas de Trp-p8, también como composiciones que comprenden moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña. También se proporcionan métodos para identificar y caracterizar nuevos moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña también como métodos para modular la afluencia de cationes moderada por Trp-p8 y/o apoptosis en una célula y métodos relacionados para el tratamiento de enfermedad asociadas con la expresión, activación y/o señalización de Trp-p8. enfermedades ejemplares tratadas apropiadamente por las composiciones y métodos de la presente invención, incluyen cánceres, tales como cánceres de pulmón, pecho, colon y/o próstata.
ANTECEDENTES DE LA INVENCION El carcinoma de próstata es el cáncer más común diagnosticado en hombres en los Estados Unidos de América y tiene la segunda proporción de muerte por cáncer más alta cediendo solamente a adenocarcinoma de pulmón. Parker et al., CA Cáncer J. Clin. 46:5-27 (1996). Aunque es posible tratar efectivamente cánceres de próstata confinados al órgano, hay opciones de tratamiento muy limitadas para la enfermedad metastática. Asi, es de mayor importancia encontrar nuevas maneras para diagnosticar la enfermedad de etapa prematura y monitorear estrechamente tanto el avance como el tratamiento de la enfermedad, también como desarrollar nuevos procedimientos terapéuticos. Para obtener esto, es importante entender los mecanismos moleculares del desarrollo de cáncer de próstata e identificar nuevos marcadores biológicos para la diagnosis y avance de la enfermedad. A la fecha, hay muy pocos marcadores próstata-específicos disponibles. Los marcadores mejor conocidos y bien caracterizados de valor de diagnóstico de cáncer de próstata probado son las proteínas fosfatasa ácida prostética (PAP), antígeno específico de próstata (PSA), y antígeno de membrana próstata-específico (PSMA). Cada una de estas proteínas también se ha convertido en el objetivo para nuevos procedimientos de inmunoterapia al tratamiento de enfermedad. Horoszewics et al., Anticáncer Res. 7:927-935 (1987); Barren et al., Prostate 30:65-68 (1997); Murphy et al., Prostate 33:281-285 (1997); Murphy et al., Prostate 26:164-168 (1995); Rochon et al., Prostate 25:219-223 (1995); Corréale et al., J. Immunol. 161:3186-3194 (1998); y Murphy et al., Prostate 38:73-78 (1999) . Se ha reportado que una proteína de canal de catión, designada de manera variada Trp-p8 (receptor transitorio potencial-p8 ) , TRPM8, y CMR1 (receptor 1 de resfriado y mentol) , es expresado preferiblemente en próstata. La clonación del cADN de Trp-p8 humano de plena longitud reveló un trascripto correspondiente a un polipéptido de 1104 aminoácidos que comparte homología con la familia de trp de canales de calcio. Clapham et al., Nature Reviews 2:387-396 (2001) y Clapham et al., IUPHAR Compendium, TRP Channels (2002) . Trp-p8 muestra homología particularmente alta con el gen TRPC7 humano - una proteína de canal de Ca2+ supuesto de la familia de trp que es altamente expresado en tejido de cerebro. Nagamine et al., Genomics 54:124-131 (1998) . Trp-p8 también muestra homología significativa a melastatina humana, otra proteína relacionada con la familia Trp expresada en melanocitos y se cree que es un gen supresor de tumor. Duncan et al., Cáncer Res. 58:1515-1520 (1998) y Hunter et al. Genomics 54:116-123 (1998) . Quizás de mayor interés es la observación de que el gen Trp-p8 parece ser expresado en un gran espectro de lesiones no prostéticas, además de lesiones prostéticas neoplásicas. Tsavaler et al., Cáncer Res . 61(9) :3760-9 (2001) . La superfamilia de Trp comprende más de 20 proteínas de canal de catión relacionadas que han estado implicadas en procesos en los que se incluyen fisiología sensorial a vasorelaj ación y fertilidad masculina. Defectos en canales de Trp han estado asociados con cambios en control de crecimiento y supresión de tumor. En tanto que todas las proteínas de Trp son canales de calcio, varían significativamente en su selectividad y modo de acción. Los miembros de la superfamilia de Trp comparten homología de secuencia significativa y similaridades estructurales predichas, tal como el tamaño de segmento de transmembrana predichos. Trp-p8 es sobreexpresado en un intervalo de cánceres en los que se incluyen cáncer de próstata, pecho, pulmón y colon, en tanto que dentro de tejidos normales, es expresado predominantemente en próstata humana [Tsavaler et al., supra] y ganglios de raíz dorsal (DRG), (Dendreon, unpublished observation) . Fuessel et al., reportaron que Trp-p8 es altamente próstata-específico y un gen carcinoma de próstata-asociado calificando así como objetivo potencial para terapias específicas. International J. o Oncology 23:221-228 (2003). Entre otras especies, se dice que los ortólogos de Trp-p8 son expresados en un subconjunto de DRG y neuronas de ganglios trigerminales (TG) en rata [McKerny et al., Nature 416 (6876) : 52-8 (2002) y ratón [Peier et al., Cell 108 (5) : 705-15 (2002)] también. Así, Trp-p8 es un marcador pan-tumor-expresado con uso potencial significativo en diagnosis de enfermedad y monitoreo de avance de enfermedad durante el tratamiento, también como un objetivo viable para terapia de cáncer. La asociación de Trp-p8 con cáncer de próstata, pulmón, pecho y colon y el papel importante que varios canales de ion juegan en funciones celulares vitales sugieren que el canal de Trp-p8 puede tener una función significativa en la señalización y/o proliferación de células de cáncer. La modulación de la actividad de Trp-p8, ya sea mediante activación via un agonista o inhibición vía un antagonista, a una temperatura fisiológica puede ser valiosa como terapéutico para manipular las células que expresan Trp-p8 de una manera especifica. Véase por ejemplo solicitud de patente estadounidense 10/923,413. Asi, hay necesidad en el arte por moduladores de molécula pequeña de la actividad de Trp-p8, composiciones que comprenden uno o más moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña y métodos para la identificación y uso de moléculas pequeñas para modular la actividad de Trp-p8 en una célula y para el tratamiento de enfermedad asociada con la expresión aberrante de Trp-p8.
BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION La presente invención satisface estas y otras necesidades relacionadas al proporcionar moduladores de molécula pequeña de la actividad de Trp-p8, en los que se incluyen agonistas de Trp-p8 y antagonistas de Trp-p8, también como composiciones que comprenden tales moduladores de Trp-p8 y métodos para identificar y usar moduladores de Trp-p8. En ciertas modalidades, los compuestos de la presente invención se enlazan a y activan Trp-p8 y/o estimulan la afluencia de cationes, en los que se incluyen pero no limitados a afluencia de calcio, en una célula, en donde la afluencia de cationes está correlacionada con la toxicidad inducida por el modulador de Trp-p8. Asi, en estas y otras modalidades, los agonistas de Trp-p8 de la presente invención son efectivos para inhibir el crecimiento de y/o inducir apoptosis y/o necrosis en una célula que expresa Trp-p8. En modalidades alternativas se proporcionan antagonistas de Trp-p8 que son efectivos para reducir la actividad basal de Trp-p8 en una célula, reduciendo mediante esto la viabilidad de células que expresan Trp-p8. Ventajosamente, por consiguiente, los agonistas y antagonistas de la presente invención pueden ser usados para tratar enfermedades en las que se incluyen pero no limitadas a cánceres de pecho, pulmón, colon y/o próstata, que están asociadas con la expresión de Trp-p8. Uno o más moduladores de Trp-08 pueden ser formulados en composiciones, en las que se incluyen composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más portadores o excipientes aceptables farmacéuticamente y/o uno o más compuestos terapéuticos adicionales. Tales composiciones encontrarán utilidad en los métodos para el tratamiento de una o más enfermedades asociadas con la expresión de Trp-p8. Asi, en una modalidad, la presente invención proporciona moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña y derivados de los mismos, en donde las moléculas pequeñas incluyen compuestos de la siguiente Fórmula I: en donde Ri es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo, arilalquilo y arilo o, Ri y R2 junto con el grupo nitrógeno forman un grupo cíclico o heterocíclico de hasta 25 átomos; R2 es seleccionado de arilo y arilalquilo; R3 es seleccionado de alquilo, heteroalquilo y arilalquilo ; R4 es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo y arilalquilo; y R3 y R junto con el grupo nitrógeno forman una amina alifática . En modalidades relacionadas, la presente invención proporciona moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña y derivados de los mismos, en donde las moléculas pequeñas incluyen compuestos de la siguiente Fórmula I-A: en donde A, B, C y D son seleccionados independientemente de CR2 y N; en donde por lo menos uno de A, B, C y D es CR2; en donde R2 es un miembro seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo , arilo, halógeno y arilalquilo, ReO- y ReS-, en donde R6 es alquilo; en donde, cuando dos adyacentes de A, B, C y D son CR2, los dos R2 se pueden combinar para formar un solo grupo arilo, cicloalquilo o heterocicloalquilo; y Ri es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo, arilo y arilalquilo; R3 es seleccionado de alquilo, heteroalquilo, arilo, arilalquilo, -NR7C(0)-, C(0)NR7-, -0-, -S-, -S(0)-, -S(0)2-, Y ~ NR7-, en donde R7 es un miembro seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo, arilo y arilalquilo; R4 es seleccionado de -C(0)R8-, alquilo, arilalquilo y heteroalquilo, en donde Re es seleccionado de alquilo y heteroalquilo; R5 es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo y arilalquilo; y R4 y R5 junto con el grupo nitrógeno forman una amina alifática . En ciertos compuestos ejemplares de Fórmula I-A, Rj. es H; R7 es H; R8 comprende 2, 3 ó 4 átomos de carbono; R4 es seleccionado de propionilo, etilo, butirilo, hidroxipropionilo y 3-hidroxibutirilo; R5 es seleccionado de H y metilo; R6 comprende 1, 2, 3, 4, 5 ó 6 átomos de carbono; y/o R2 es seleccionado de metoxi, metilsufañilo, fenilo y H. Ejemplificados en la presente están los compuestos de Fórmula I-A que comprenden un grupo seleccionado de 2-(2-amino-pripionilamino) -4-metoxi-fenilo, N- ( 2-amino-etil ) -2-amino-5-metilsulfanil-fenilo, 1- (2-amino-etoxi) -naftalen-2-ilo, 2- (2-amino-etilamino) -4-metilsufanil-fenilo, N- (2-amino-etil) -5-metoxi-benzamida , 2- (2-amino-butirilamino) -4-metoxi-fenilo, 2-(2-amino-3-hidroxi-propionilamino) -4-metoxi-fenilo, 3- (2-amino-etilamino) -naftalen-2-ilo, N- (2-amino-etil) -2-amino-benzamida , 2- (2-amino-3-hidroxi-propionilamino) -4 -metoxi-fenilo, 2- (2-amino-acetilamino) -fenilo, 2- (2-amino-3-hidroxi-butirilamino) -4-metoxi-fenilamida, y 2- (2-amino-acetilamino) -4-metoxi-fenilo . En modalidades alternativas relacionadas, la presente invención proporciona moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña y derivados de los mismos, en donde las moléculas pequeñas incluyen compuestos de la siguiente Fórmula I-B: en donde Ri es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo, arilo y arilalquilo; R2 es seleccionado de arilo, alquilo, heteroalquilo y arilalquilo; R3 es seleccionado de alquilo, heteroalquilo y arilalquilo ; R4 es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo y arilalquilo; y R3 y R junto con el grupo nitrógeno forman una amina alifática . En ciertos compuestos ejemplares de Fórmula I-B, Ri es H; R3 es seleccionado de metileno, etileno, propileno y butileno; R4 es seleccionado de H y metilo; y/o R2 es seleccionado de fenilo, furano, metilpirrol, metilbenzoato, aminofenilo, hidroxifenilo, cianofenilo y metoxifenilo . Ejemplificados en la presente están los compuestos de Fórmula I-B que comprenden un grupo seleccionado de 2-(2-amino-etil ) -5-furan-2-il-2H-pirazol-3-ilo, 2- ( 2-amino-propil ) -5- fenil-2H-pirazol-3-ilo, 2- ( 2-amino-etil ) -5-fenil-2H-pirazol-3-ilo, 2- (2-amino-etil) -5- ( 1-metil-lH-pirrol-2-il ) -2H-pirazol-3-ilo, 2- (2-amino-propil) -5-fenil-2H-pirazol-3-ilo, 2- (2-amino-etil) -5- (4-amino-fenil) -2H-pirazol-3-ilo, 2- ( 2-amino-etil ) -5- (4-hidroxi-fenil) -2H-pirazol—3-ilo, 2- (2-metilamino-etil) -5-fenil-2H-pirazol-3-ilo, 2- ( 2-amino-propil ) -5-fenil-2H-pirazol-3-ilo, 2- ( 2-amino-etil ) -5- (3-ciano-fenil) -2H-pirazol-3-ilo, 2- (2-amino-etil ) -5- ( 3-metoxi-fenil ) -2H-pirazol-3-ilo, metil éster del ácido 4- { 1- (2-amino-etil) -lH-pirazol-3-il } -benzoico, 2-(2-amino-etil ) -5- ( 3-amino-fenil ) -2H-pirazol-3-ilo, y 2- (2-amino-etil) -5- ( 3-hidroxi-fenil ) -2H-pirazol-3-ilo . En todavía modalidades relacionadas adicionales, la presente invención proporciona moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña y derivado de los mismos, en donde las moléculas pequeñas incluyen compuestos de la siguiente fórmula I-C en donde Ri es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo, arilo y arilalquilo; R2 es seleccionado de arilo y arilalquilo; R3 es seleccionado de alquilo, heteroalquilo, arilalquilo, -NHC (0) R5- , -0R5-, y -NHR5- , en donde R5 es alquilo o heteroalquilo; R4 es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo y arilalquilo; y R3 y R4 junto con el grupo nitrógeno forman una amina alifática . En ciertos compuestos ejemplares de fórmula I-C, Ri es H; R2 es fenilo; R5 es seleccionado de metileno, etileno, propileno y butileno; R3 es seleccionado de propionilamino, etoxi, propoxi y etilamino; y/o R4 es seleccionado de H y metilo. Ejemplificados en la presente están los compuestos de Fórmula I-C que comprende un grupo seleccionado de 2-(2-amino-propionilamino) -2-fenil-etilo, 2- ( 2-amino-etoxi ) -2-fenil-etilo, 2- (2-amino-etoxi) 2-fenil-etilo, 2- ( 3-amino-propoxi ) -2-fenil-etilo, 2- ( 2-dimetilamino-etoxi ) -2-fenil-etilo y 2-(2-amino-etilamino) -2-fenil-etilo . En todavía modalidades relacionadas adicionales, la presente invención proporciona moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña y derivados de los mismos, en donde las moléculas pequeñas incluyen compuestos de la siguiente Fórmula en donde Ri es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo, arilo y arilalquilo; R2 es seleccionado de arilo y arilalquilo; R3 es seleccionado de alquilo, heteroalquilo y arilalquilo; R4 es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo, y arilalquilo; y R3 y R junto con el grupo nitrógeno forman una amina alifática . En ciertos compuestos ejemplares de Fórmula I-D, Ri es H; R2 es seleccionado de fenilo y fenilamino; R3 es seleccionado de metileno, etileno, propileno, butileno, metilamino, etilamino, propilamino, butilamino y acetilo; y R4 es seleccionado de H y metilo. Ejemplificados en la presente están los compuestos de Fórmula I-D, que comprenden un grupo seleccionado de 2- [2- (2-amino-etilamino) fenil ] -etilo, 2- ( 2-aminometil-fenil ) -etilo, y 2- [ (2-amino-acetil) -fenil-amino] -etilo. En todavía otras modalidades relacionadas, la presente invención proporciona moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña y derivados de los mismos, en donde las moléculas pequeñas incluyen compuestos de la siguiente Fórmula en donde A, B, C, y D son seleccionados independientemente de CRi y N; en donde por lo menos uno de A, B, C y D es CRj.; en donde Ri es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo, arilo, arilalquilo y halógeno; en donde, cuando dos adyacentes de A, B, C y D son CRi, los dos Ri se pueden combinar para formar un solo grupo arilo, cicloalquilo o heterocicloalquilo : R2 es seleccionado de alquilo, heteroalquilo y arilalquilo; R3 es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo y arilalquilo; R2 y R3 junto con el grupo nitrógeno forman una amina alifática . En ciertos compuestos ejemplares de Fórmula I-E, (i) Ri es H o -0R1 y R1 es seleccionado de metilo, hidroximetilo, etilo, hidroxietilo, propilo, hidroxipropilo, butilo, hidroxibutilo, acetonitrilo, fenilo, fenilmetoxi, feniletoxi, fenilpropoxi , fenilbutoxi y bencilo; (ii) Ri es -SR11 y en donde R11 es seleccionado de metilo, hidroximetilo, etilo, hidroxietilo, propilo, hidroxipropilo, butilo, hidroxibutilo, acetonitrilo, fenilo, fenilmetoxi, feniletoxi, fenilpropoxi , fenilbutoxi y bencilo; (iii) Ri es -S(0)R1;L1 y en donde R111 es seleccionado de metilo, hidroximetilo, etilo, hidroxietilo, propilo, hidroxipropilo, butilo, hidroxibutilo, acetonitrilo, fenilo, fenilmetoxi, feniletoxi, fenilpropoxi , fenilbutoxi y bencilo; (iv) Ri es -S(0)2Riv y en donde Rv y Rvi es seleccionado de metilo, hidroximetilo, etilo, hidroxietil, propilo, hidroxipropilo, butilo, hidroxibutilo, acetonitrilo, fenilo, fenilmetoxi, feniletoxi, fenilpropoxi, fenilbutoxi y bencilo; (v) Ri es -C(0)NRvRvi, en donde Rv y Rvi son seleccionados independientemente de H, metilo, hidroximetilo, etilo, hidroxietilo, propilo, hidroxipropilo, butilo, hidroxibutilo, dietilaminoetilo, fenilo, piridinilo, metoxietilo, hidroxietoxietilo, bencilo, metilfenilo, feniletilo, hidroxihidroximetilfeniletilo, carbamoilmetilo y hidroximetil hidroxietilo; (vi) Rx es -C(0)NRvRvi, en donde Rv y Rvi forman conjuntamente morfolina, piperazina, etil éster de piperazina; (vii) R2 es seleccionado de metileno, etileno, propileno y butileno; (viii) R2 es etileno y R3 es H; y (ix) Ri es CF3 o halógeno. Ejemplificados en la presente están los compuestos de Fórmula I-E que comprenden un grupo seleccionado de 3-(2-amino-etil) -5-metoxi-l, 3-dihidro-benzoimidazo-2-ona, 3-(2-amino-etil) -5- ( 3-hidroxi-propoxi) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3-(2-amino-etil) -5-etoxi-l, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3- (2-amino-etil) -5-metansulfonil-1 , 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona , 3-( 2-amino-etil ) -5- ( 2-hidroxi-etoxi ) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, amida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, 3- (2-amino-etil) -5-metilsulfanil-1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3- (2-amino-etil) -5-metansulfinil-1 , 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, ( 2-dietilamino-etil) -amida del ácido 3- ( 2-amino-etil ) -2-oxo-2 , 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxílico, 3- (2-amino-propil) -2, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, [3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-iloxi] -acetonitrilo, etil amida del ácido 3-(2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, piridin-3-ilamida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, ( 2-metoxi-etil ) -amida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-bencimidazol-5-carboxílico, 1- (2-amino-etil ) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 1- (2-amino-etil) -1, 3-dihidro-nafto [2, 3-d] imidazol-2-ona, (2-hidroxil-etil ) -amida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, 3- (2-amino-etil ) -5-propoxi-1, 3-dihidro-benzoimidazo-2-ona, 3- (2-amino-etil) -1, 3-dihidro-imidazo [4 , 5-c] piridin-2-ona, ( 2-dietilamino-etil ) -amida del ácido 3- ( 2-amino-etil ) -2-oxo-2 , 3-dihidro-lH-benzoimidazol- 4-carboxílico, piridin-4-ilamida del ácido 3- ( 2-amino-etil ) -2-oxo-2 , 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, 3- (2-amino-etil) -1 , 3-dihidro-imidazo [ 4 , 5-b] piridin-2-ona , 1- ( 3-amino-propil ) -1 , 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, fenilamida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, [2- (2-hidroxi-etoxi) -etil] -amida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, 1- (2-amino-etil) -5-triflurometil-1 , 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona , 1- (2-amino-etil ) -1 , 3-dihidro-imidazo [ 4 , 5-c] piridin-2-ona, bencilamida de ácido 3- ( 2-amino-etil ) -2-oxo-2 , 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, 3- (2-amino-etil) -5-morfolin-4-carbonil) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona , 3- (2-amino-etil) -5- (2-oxo-2-fenil-etoxi) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3- (2-metilamino-etil) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3- (2-amino-etil) -5-butoxi-l, 3-dihidro-benzoimidazo-2-ona, metil-fenil-amida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-l, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, etil éster el ácido 4- [3- (2-amino- etil) -2-OXO-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carbonil ] -piperazin-1-carboxílico, dietilamida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2 , 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, fenetilamida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, 2-hidroxi-l-hidroximetil-2-fenil-etil ) -amida de ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, carbamoilmetil-amida del ácido 3- (2-amino-etil ) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, ( 2-hidroxi-l-hidroximetil-etil ) -amida del ácido 3- (2-amino-etil ) -2-oxo-2 , 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxílico, N- { 2- [ 2-oxo-2 , 3-dihidro-benzoimidazol-l-il ] -etil}-guanidina, 3- (2-amino-etil ) -5-benciloxi-l , 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, y l-(4-amino-butil ) -1 , 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona . En una de tales modalidades, se proporciona el compuesto 3- ( 2-amino-etil ) -1- ( 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarbonil ) -5-metoxi-l , 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona . Otros aspectos de la presente invención proporcionan composiciones en las que se incluyen composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y Fórmula I-E en combinación con un excipiente, portador y/o diluyente aceptable farmacéuticamente. Ejemplificados en la presente en los ejemplos están agonistas y antagonistas de TRP-V8 específicos de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y Fórmula I-E; métodos para sintetizar agonistas y antagonistas de Trp-p8 ejemplares de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y Fórmula I-E y datos de EC50 que demuestran la eficacia y actividad especifica in Vitro de cada uno de los agonistas y antagonistas de TRP-V8 revelados de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y Fórmula I-E. En todavía aspectos adicionales, las composiciones de la presente invención comprenden uno o más compuestos de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y/o Fórmula I-E formulados junto con uno o más agentes terapéuticos para cáncer. Alternativamente, las composiciones de la presente invención comprenden un compuesto de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y/o Fórmula I-E formulados independientemente con uno o más agentes terapéuticos de cáncer. Esto es, uno o más compuestos de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y/o Fórmula I-E y el agente terapéutico de cáncer son formulados separadamente. Agentes terapéuticos apropiados de cáncer incluyen pero no están limitados a agentes antimitóticos en los que se incluyen pero no limitados a paclitaxel, vincristina y etoposide agentes alquilantes en los que se incluyen pero no limitados a mecloretamina , ciclofosfamida y carmustina; antimetabolitos en los que se incluyen pero no limitados a metotrexato, lometrexol, 5-fluorouracilo y 6-mercaptopurina ; antibióticos citotóxicos en los que se incluyen pero no limitados a doxorubicina, daunorubicina, bleomicina, mitomicina C y estreptozocina ; agentes de platino en los que se incluye pero no limitados a cisplatino y carboplatino; agentes hormonales en los que se incluyen pero no limitados a anti-estrógenos tales como tamoxifen y dietilstilbestrol también como anti-andrógenos tales como flutamida; agentes antiangiogénesis e inhibidores de farnesil transferasa. En ciertos aspectos, los compuestos de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y/o Fórmula I-E son administrados en combinación con agentes terapéuticos de cáncer que son por si mismos no efectivos para modular la actividad de Trp-p8 en una célula que expresa Trp-p8. Sorprendentemente, estos tipos de terapias de combinación dan como resultado eficacia mejorada en relación con el uso de un solo compuesto de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y/o Fórmula I-E solos. En otros aspectos, los compuestos de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y/o Fórmula I-E son administrados en combinación con uno o más modulador (es) de Trp-p8 adicional (es ) en los que se incluyen pero no limitados a un compuesto de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y/o Fórmula I-E. En ciertas de estas modalidades que proporcionan antagonistas de molécula pequeña de los agonistas de Trp-p8 de molécula pequeña presentados en la presente. Asi, en ciertas modalidades se proporcionan antagonistas de Trp-p8 de molécula pequeña de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y/o Fórmula I-E y derivados de los mismos, de uno o más agonistas de Trp-p8 de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y Fórmula I-E. Modalidades adicionales de la presente invención proporcionan métodos para disminuir la viabilidad celular y/o inhibir el crecimiento celular, métodos para estimular la afluencia de cationes y métodos para producir apoptosis y/o necrosis en una célula que expresa Trp-p8. Ejemplares de tales métodos comprenden la etapa de poner en contacto una célula con un compuesto de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y/o Fórmula I-E en una concentración y por un tiempo requerido para disminuir la viabilidad celular y/o inhibir el crecimiento celular, para elevar el calcio intracelular y/o inducir apoptosus y/o necrosis de la célula. En todavía modalidades adicionales, la presente invención proporciona métodos para el tratamiento de una enfermedad en un mamífero, más comúnmente un humano, al administrar uno o más compuestos y/o composiciones de la presente invención. En ciertos aspectos, los métodos incluyen la administración de una composición que comprende una combinación del compuesto Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y/o Fórmula I-E con uno o más agentes terapéuticos de cáncer administrados de manera simultánea, tal como en una sola formulación. En ciertos otros aspectos, los métodos de la presente invención incluyen terapia de combinación en donde el compuesto de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y/o Fórmula I-E es administrado primero en una formulación, seguido por el agente terapéutico de cáncer en una formulación separada. Los métodos también incluyen un agente terapéutico de cáncer siendo administrado primero en una formulación, seguida por un compuesto de Fórmula I,· Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y/o Fórmula I-E en una formulación separada. Los métodos terapéuticos de la presente invención son particularmente efectivos en el tratamiento de cánceres asociados con la expresión de Trp-p8 en los que se incluyen pero no limitados a ciertos cánceres de colon, pulmón, pecho y próstata . Los elementos mencionados anteriormente y elementos adicionales de la presente invención y la manera de obtenerlos se harán evidentes y la invención se comprenderá mejor con referencia a la siguiente descripción más detallada, leída en conjunción con las Figuras adjuntas.
BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS Las Figuras 1A-1B son gráficas que ilustran un análisis de viabilidad de ATP ejemplar apropiado para probar y caracterizar moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña de la presente invención. En un análisis preliminar (Figura 1A) , los compuestos fueron probados a 1 µ? y el exterminio específico de células de CHO que expresan Trp-p8 (CH0/Trp-p8) medido a 37°C. En un análisis de seguimiento (Figura IB) , los compuestos fueron probados a varias concentraciones y el exterminio de células de CHO que expresan Trp-p8 (CHO/Trp-p8) fue medido a 37°C. Se derivó un valor de EC50 a partir de una gráfica de viabilidad celular como función de la concentración. Las Figuras 2A-2C son gráficas que ilustran incrementos inducidos por el modulador de Trp-p8 en calcio intracelular tal como se determina mediante un análisis de flujo de calcio efectuado a 37°C. La Figura 2A es un control positivo que demuestra que las células de CHO y CH0/Trp-p8 responden similarmente a Ionomicina 2 µ? a 37°C en el análisis de flujo de calcio. La Figura 2B es un control negativo que demuestra que células CHO parentales que no expresan Trp-p8 endógeno o exógeno no responden al antagonista de Trp-p8 a una concentración de 10 µ?. La Figura 2C demuestra que el agonista de Trp-p8 induce una respuesta dependiente de la concentración específica en células CHO/Trp-p8 a 37°C. La figura 3 son gráficas de datos de citometría de flujo que demuestran que un agonista de Trp-p8 es capaz de inducir específicamente apoptosis en células de CHO que expresan Trp-p8 a 37°C de manera dependiente de la dosis.
La Figura 4 es una gráfica que ilustra resultados ejemplares de una selección primaria en cuanto a antagonistas de Trp-p8 utilizando el análisis de viabilidad de ATP, descrito en la presente, con células CH0/Trp-p8 a 37°C. Las células CH0/Trp-p8 fueron expuestas a compuestos a diferentes concentraciones, en DMSO al 1% o DMSO al 1% en combinación con una concentración tóxica de un agonista de Trp-p8. La viabilidad de las células fue medida después de 24-26 horas a 37°C utilizando el análisis de ATP. Los compuestos que protegieron las células del efecto tóxico del agonista de Trp-p8 son clasificados como antagonistas de Trp-p8 (Compuestos A-B) . Un compuesto inactivo (Compuesto C) no tuvo ningún efecto protector y es mostrado en la presente por el propósito de ilustración del análisis. La Figura 5 es una gráfica que ilustra la selección y caracterización de antagonistas de Trp-p8 mediante el análisis de flujo de calcio efectuado a 37°C. Células CH0/Trp-p8 fueron cargadas con el tinte indicador de calcio Fura-2 y el incremento en calcio intracelular en respuesta a compuestos fue determinado por el incremento en fluorescencia. Células CH0/Trp-p8 cargadas con tinte Fura-2 fueron expuestas a DMSO al 1% o un antagonista, a diferentes concentraciones, en DMSO al 1% a 37°C. Tres minutos más tarde, un agonista fue agregado a las células. Cuando las células fueron expuestas a concentraciones efectivas del antagonista, su habilidad para responder al agonista fue reducida significativamente o eliminada por completo. Las Figuras 6A-6B son gráficas que ilustran resultados de un modelo de animal ejemplar apropiado para probar y caracterizar moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña de la presente invención. Los ratones fueron inyectados subcutáneamente con células CH0/Trp-p8 dando como resultado la formación de tumores sólidos. La longitud (dimensión más larga) y ancho (dimensión perpendicular a y en el mismo plano como la longitud) de cada tumor fue medido con calibradores Vernier y el volumen de tumor fue aproximado con una fórmula para el volumen de un elipsoide: 0.52*L*W2. Cuando el volumen promedio de tumor llegó a aproximadamente 100 mm3, los ratones fueron aleatorizados en grupos. En la Figura 6A, los ratones fueron administrados con una sola dosis ya sea con un compuesto de estudio como una formulación acuosa o vehículo solo, mediante alimentación por sonda oral. En la Figura 6B, los ratones fueron dosificados repetidamente ya sea con un compuesto de estudio como una formulación acuosa o vehículo solo, mediante alimentación por sonda oral. Los tumores fueron luego subsecuentemente medidos en los días indicados. Los datos son presentados como volúmenes de tumor promedio + error estándar de la media. La Figura 7 es una gráfica que ilustra las concentraciones en el plasma de varios compuestos como función del tiempo y dosis, en ratones después de la administración vía una sola inyección intraperitoneal . Los compuestos fueron todos disueltos en una formulación acuosa y administrados a niveles de dosis comparables. La sangre fue recolectada a los puntos en el tiempo indicados y analizada en cuanto a niveles de fármacos . Las Figuras 8A-8B son gráficas que ilustran la eficacia demostrada por varios compuestos en un modelo de xenoinjerto de tumor murino que expresa Trp-p8. Los ratones fueron inyectados subcutáneamente con células CH0/Trp-p8 dando como resultado la formación de tumores sólidos. La longitud (L; dimensión más larga) y ancho (W; dimensión perpendicular a y en el mismo plano como la longitud) de cada tumor fue medida con calibradores Vernier y el volumen de tumor fue aproximado por una fórmula para el volumen de un elipsoide: 0.52*L*W2. Cuando el volumen de tumor promedio llegó a aproximadamente 100 mm3, los ratones fueron aleatorizados en grupos y administrados ya sea con un compuesto como una formulación acuosa o vehículo solo, mediante inyección intraperitoneal, en los días indicados. Todos los compuestos fueron administrados a niveles de dosis comparables. Los tumores fueron subsecuentemente medidos en los días indicados. Los datos son resultados como volúmenes de tumor promedio + estándar de la media. La Figura 9A y 9B son gráficas que ilustran las concentraciones en el plasma de varios compuestos, como función del tiempo y la dosis, en ratas (Figura 9A) y perros (Figura 9B) después de una sola dosis oral. Los compuestos fueron todos disueltos en una formulación acuosa y administrados a niveles de dosis comparables mediante alimentación por sonda oral. La sangre fue recolectad a los puntos en el tiempo indicados y analizada en cuanto a niveles de fármacos. Las Figuras 10A y 10B son gráficas que ilustran la eficacia demostrada por varios compuestos en un modelo de xenoinjerto de tumor murino que expresa Trp-p8. Los ratones fueron inyectados subcutáneamente con células CH0/Trp-p8, dando como resultado la formación de tumores sólidos. La longitud (L; dimensión más larga) y ancho (W; dimensión perpendicular a y en el mismo plano como la longitud) de cada tumor fue medida con calibradores Vernier y el volumen del tumor fue aproximado con una fórmula para el volumen de un elipsoide: 0.52/L/W2. Cuando el volumen del tumor promedio llegó a aproximadamente 100 mm3, los ratones fueron aleatorizados en grupos y administrados con una sola dosis ya sea de un contexto como una formulación acuosa o vehículo solo mediante alimentación por sonda oral. Los tumores fueron luego medidos subsecuentemente en los días indicados. Los datos son presentados como volúmenes de tumor promedio + error estándar de la media. La Figura 11 es una gráfica que ilustra la carencia de eficacia demostrada por un compuesto ejemplar en un modelo de xenoinjerto de tumor murino que carece de expresión de Trp- p8. Los ratones fueron inyectados subcutáneamente con células CH0-K1 que carecen de Trp-p8, dando como resultado la formación de tumores sólidos. La longitud (L; dimensión más larga) y ancho (W; dimensión perpendicular y en el mismo plano como la longitud) de cada tumor fue medida con calibradores Vernier y el volumen de tumor fue aproximado por una fórmula para el volumen de un elipsoide: 0.52*L*W2. Cuando el volumen de tumor promedio llegó a aproximadamente 50 mm3, los ratones fueron aleatorizados en grupos y administrados ya sea con una sola dosis del compuesto como una formulación acuosa o vehículo, mediante alimentación por sonda oral. Los tumores fueron luego medidos subsecuentemente en los días indicados. Los datos son presentados como volúmenes de tumor promedio + error estándar de la media. La Figura 12 es una gráfica que ilustra la eficacia demostrada por un compuesto ejemplar en un modelo de xenoinjerto de tumor murino · que expresa Trp-p8. El modelo de tumor LuCaP fue obtenido de Rober L. Vassella, Ph.D., Profesor de Urología en la Universidad de Washington, Escuela de Medicina. La longitud (L; dimensión más larga) y ancho (W; dimensión perpendicular a y en el mismo plano como la longitud) de cada tumor fue medida con calibradores Vernier y el volumen de tumor fue aproximado por una fórmula para el volumen de un elipsoide: 0.52*L*W2. Cuando el volumen de tumor promedio llegó a aproximadamente 150 mm3, los ratones fueron administrados con el compuesto, como una formulación acuosa o vehículo solo mediante inyección intraperitoneal , una vez al día por 5 días. Los tumores fueron luego subsecuentemente medidos en los días indicados. Los datos son presentados como volúmenes de tumor promedio + error estándar de la media. SEQ ID NO: 1 es la secuencia de nucleótidos de un cADN de Trp-p8 humano (No. de acceso GenBank AY090109) . SEQ ID NO: 2 es la secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia de nucleótido de SEQ ID NO: 1 (No. de acceso GenBank NP 076985) .
DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION La presente invención está basada en el descubrimiento de que ciertos moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña, en los que se incluyen agonistas de actividad de Trp-p8, son capaces de inhibir el crecimiento de y/o inducir apoptosis y/o necrosis en células que expresan Trp-p8. Sin desear estar limitados a algún modo de acción específico, se cree que la activación moderada por agonistas de Trp-p8 del receptor de Trp-p8 incrementa la afluencia de cationes, que es correlativa de la toxicidad celular. Se cree además que los antagonistas de Trp-p8 pueden inhibir la actividad inducida por ligando a nivel basal y/o natural de la activación de Trp-p8 endógeno que, consecuentemente, conduce a crecimiento reducido o muerte de células que expresan esta proteína de canal de catión . Así, la presente invención proporciona moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña, en los que se incluyen agonistas y antagonistas de la actividad de Trp-p8 también como composiciones, en las que se incluyen composiciones farmacéuticas, que comprenden uno o más moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña en combinación con uno o más portadores y/o excipientes aceptables farmacéuticamente. La presente invención también proporciona composiciones combinadas que comprenden uno o más moduladores de Trp-p8 y uno o más compuestos terapéuticos adicionales, tales como por ejemplo, un agente terapéutico de cáncer. Los moduladores de Trp-p8 y composiciones que comprenden moduladores de Trp-p8 encontrarán utilidad en métodos para activar la afluencia de cationes moderadas por Trp-p8 en una célula, métodos para inducir apoptosis y/o necrosis en una célula, también como métodos para el tratamiento de enfermedades asociadas con la expresión de Trp-p8 en los que se incluyen pero no limitados a cánceres, tales como cánceres de pecho, colon, pulmón y próstata.
Definiciones El término "moduladores de Trp-p8" se refiere colectivamente a compuestos que son agonistas y antagonistas de molécula pequeña que se enlazan a e incrementan o disminuyen, respectivamente, la actividad de Trp-p8 en una célula. Los agonistas de Trp-p8 incluyen compuestos de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y Fórmula I-E y derivados químicos de los mismos. Los agonistas de Trp-p8 de I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y Fórmula I-E pueden ser sintetizados fácilmente y caracterizados por aquel experimentado en el arte al emplear la metodología proporcionada expresamente en la presente y/o cuando está disponible fácilmente en el arte. La frase "activar Trp-p8" significa la activación moderada por agonista de Trp-p8 expresada sobre la superficie de una célula. Por ejemplo, en ciertas modalidades, los agonistas de la presente invención, cuando son puestos en contacto con una célula y/o administrados in vivo a un sujeto mamífero, activan Trp-p8, facilitando mediante esto la afluencia de cationes, tales como iones de calcio a tal nivel intracelular y/o tal duración que es suficiente para provocar toxicidad a la célula, como se hace evidente por la disminución de crecimiento de célula y/o inicio de muerte celular necrótica y/o apoptótica. El término "amina alifática" significa un átomo de nitrógeno sustituido, en donde cualquiera de los sustituyentes , diferentes a H, está sujeto al nitrógeno mediante un átomo de carbono saturado. El término "alquilo" por sí mismo o como parte de otro sustituyente , significa a no ser que se afirme de otra manera, una cadena recta o ramificada o cadena de hidrocarburo cíclica o combinación de las mismas, que puede estar plenamente saturada, mono- o poli-insaturada y puede incluir grupos di- y multi-valentes que tiene el número de átomos de carbono designado (esto es, C1 -C10 significa uno a diez átomos de carbono) . Ejemplos de grupos hidrocarburo saturados incluyen grupos tales como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, sec-butilo, ciclohexilo, ( ciclohexil ) etilo , ciclpropilmetil , homólogos e isómeros de por ejemplo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo, y los semejantes. Un grupo alquilo insaturado es uno que tiene uno o más dobles enlaces o triples enlaces. Ejemplos de grupos alquilo insaturados incluyen vinilo, 2-propenilo, crotilo, 2-isopentenilo, 2- (butadienilo) , 2 , 4-pentadienilo, 3- (1,4-pentadienilo) , etinilo, 1- y 3-propinilo, 3-butinilo y los homólogos e isómeros superiores. El término "alquenilo" denota cadenas de hidrocarburo ramificadas o sin ramificar que contienen uno o más dobles enlaces de carbono-carbono. El término "alquinilo" se refiere a cadenas de hidrocarburo ramificadas o sin ramificar que contienen uno o más triples enlaces carbono-carbono. El término "alquileno" por sí mismo o como parte de otro sustituyente significa un grupo divalente derivado de un alcano, como se ejemplifica por -CH2CH2CH2CH2 - - . Comúnmente, un grupo alquileno tendrá de 1 a 24 átomos de carbono, con aquellos grupos que contienen 10 o menos átomos de carbono siendo preferidos en la presente invención. Un "alquilo inferior" o "alquileno inferior" es un grupo alquilo o alquileno de cadena más corta, que tiene en general 8 o menos átomos de carbono. El término "cicloalquileno" por si mismo o como parte de otro sustituyente significa un grupo divalente derivado de un cicloalcano, tal como se ejemplifica por ciclohexileno . Comúnmente, un grupo cicloalquileno tendrá de 5-8 átomos de carbono, aquellos grupos que tienen 6 átomos de carbono son preferidos en la presente invención. El término "alquenileno" por si mismo o como parte de otro sustituyente significa un grupo divalente derivado de un alquenilo, como se simplifica por -CH=CHCH2CH2-- . Comúnmente, los grupos alquenileno tendrán de 2 a 24 átomos de carbono, aquellos grupos que tienen 10 o menos átomos de carbono son preferidos en la presente invención. Los términos "alcoxi", "alquilamino" y "alquiltio" se refieren a aquellos grupos que tienen un grupo alquilo anexado al resto de la molécula por medio de un átomo de oxigeno, nitrógeno o azufre, respectivamente. Similarmente, el término "dialquilamino" es usado en un sentido convencional para referirse a -NR'R", en donde los grupos R pueden ser los mismos o diferentes grupos alquilo.
El término "heteroalquilo", por si mismo o en combinación con otro término, significa, a no ser que se afirme de otra manera, una cadena recta o ramificada estable o hidrocarburo cíclico o combinaciones de los mismos plenamente saturado o que contiene de 1 a 3 grados de instauración, que consiste del número afirmado de átomos de carbono y de 1 a 3 heteroátomos seleccionados del grupo que consiste de 0, N, Si y S y en donde los átomos de nitrógeno y azufre pueden opcionalmente estar oxidados y el heteroátomo de nitrógeno puede opcionalmente ser cuaternario. El (los) heteroátomo ( s ) 0, N y S pueden estar colocados en cualquier posición interior del grupo heteroalquilo. El heteroátomo Si puede estar colocado en cualquier posición del grupo heteroalquilo, en los que se incluye la posición en la cual el grupo alquilo está anexado al resto de la molécula. Ejemplos incluyen —CH2—CH2—0—CH3— , — CH2—CH2—NH—CH3— , —CH2—CH2—N(CH3-) —CH3— , —CH2—S—CH2— CH3--, —CH2—CH2—S(0) —CH3— , —CH2—CH2—S(0)2—CH3— , CH=CH—0-CH3—, —Si(CH3)3, —CH2-CH=N—0CH3- y —CH=CH—N(CH3)-CH3. Hasta dos heteroátomos pueden ser consecutivos, tales como por ejemplo, —CH2—NH—0CH3 y —CH2—0-Si(CH3)3. También incluidos en el término "heteroalquilo" están aquellos grupos descritos en más detalle posteriormente en la presente como "heterocicloalquilo" . El término "heteroalquileno" por sí mismo o como parte de otro sustituyente significa un grupo divalente derivado de heteroalquilo, como se ejemplifica por —CH2--CH2— S-CH2CH2- y —CH2—S--CH2CH2—NH—CH2. Para grupos heteroalquileno, los heteroátomos pueden también ocupar ya sea uno u otro o ambos de los términos de la cadena. Todavía además, para grupos enlazantes alquileno y heteroalquileno, no se implica ninguna orientación del grupo enlazante. El término "acilo" se refiere a aquellos grupos derivados de un ácido orgánico mediante remoción de la porción hidroxi del ácido. Así, acilo se propone incluir por ejemplo, acetilo, propionilo, butinilo, decanoilo, pivaloilo, benzoilo y los semejantes. Un grupo "carbonilo activado" es un grupo carbonilo cuya electrofilicidad es mejorada como resultado de los grupos anexados ya sea a un lado u otro del carbonilo. Ejemplos de tales grupos carbonilo activados son (polifluoroalquil) cetonas, (poligluoroalquil ) aldehidos , alfa-cetoésteres , alfa-cetoácidos , alfa-cetoamidas , 1 , 2-dicetonas , 2-aciltiazoles , 2-acilimidazoles y los semejantes. Los términos "cicloalquilo" y "heterocicloalquilo", por sí mismos o en combinación con otros términos representan, a no ser que se afirme de otra manera, versiones cíclicas de "alquilo" y "heteroalquilo" repectivamente . Adicionalmente, para heterocicloalquilo, un heteroátomo puede ocupar la posición en la cual el heterociclo está anexado al resto de la molécula. Ejemplos de cicloalquilo incluyen ciclopentilo, ciclohexilo, 1-ciclohexenilo, 3-ciclohexenilo, cicloheptilo y los semejantes. Ejemplos de heterocicloalquilo incluyen 1-(1, 2, 5, 6-tetrahidropiridilo) , 1-piperidinilo, 2-piperidinilo, 3-piperidinilo, 4 -morfolinilo, 3-morfolinilo, tetrahidrofuran-2-ilo, tetrahidrofuran-3-ilo, tetrahidrotien-2-ilo, tetrahidrotien-3-ilo, 1-piperazinilo, 2-piperazinilo y los semej antes . Los términos "halo" o "halógeno", por si mismos o como parte de otro sustituyente significan, a no ser que se afirme de otra manera, un átomo de flúor, cloro, bromo o yodo. Adicionalmente, términos tales como " fluoroalquilo" , se proponen incluir monofluoroalquilo y polifluoroalquilo . El término "arilo" usado solo o en combinación con otros términos (por ejemplo), ariloxi, ariltioxi, arilalquilo) significa, a no ser que se afirme de otra manera, un sustituyente aromático que puede ser de un solo anillo o múltiples anillos (hasta 3 anillos) que están fusionados conjuntamente o enlazados covalentemente . El término "heteroarilo" se propone incluir aquellos anillos de arilo que contienen de 0 a 4 heteroátomos seleccionados de N, 0 y S, en donde los átomos de nitrógeno y azufre están opcionalmente oxidados y el (los) átomo (s) de nitrógeno son opcionalmente cuaternarios. Los grupos "heteroarilo" pueden estar anexados al resto de la molécula por medio de un heteroátomo. Ejemplos no limitantes de grupos arilo y heteroarilo incluyen fenilo, 1-naftilo, 2-naftilo, 4-bifenilo, 1-pirrolilo, 2-pirrolilo, 3- pirrolilo, 3-pirazolilo, 2-imidazolilo, 4-imidazolilo, pirazinilo, 2-oxazolilo, 4-oxazolilo, 2-fenil-4-oxazolilo, 5-oxazolilo, 3-isoxazolilo, 4-isoxazolilo, 5-isoxazolilo, 2-tiazolilo, 4-tiazolilo, 5-tiazolilo, 2-furilo, 3-furilo, 2-tienilo, 3-tienilo, 2-piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo, 2-pirimidilo, 4-pirimidilo, 5-benzotiazolilo, purinilo, 2-benzimidazolilo, 5-indolilo, 1-isoquinolilo, 5-isoquinolilo, 2-quinoxalinilo, 5-quinoxalinilo, 3-quinolilo y 6-quinolilo. Los sustituyentes para cada uno de los sistemas de anillo de arilo indicados anteriormente son seleccionados del grupo de sustituyentes aceptables descritos posteriormente en la presente. El término "arilalquilo" se propone incluir aquellos grupos en los cuales un grupo arilo o heteroarilo está anexado a un grupo alquilo (por ejemplo, bencilo, fenetilo, piridilmetilo y los semejantes) o un grupo heteroalquilo (por ejemplo, fenoximetilo, 2-piridiloximetilo, 3-(l-naftiloxi ) propilo y los semejantes). Cada uno de los términos anteriores (por ejemplo, "alquilo", "heteroalquilo" y "arilo") se propone incluir tanto las formas sustituidas como sin sustituir de los grupos indicados. Sustituciones preferidas para cada tipo de grupo son proporcionadas posteriormente en la presente. Los sustituyentes para los grupos alquilo y heteroalquilo (en los , que se incluyen aquellos grupos denominados frecuentemente como alquileno, alquenilo, heteroalquileno, heteroalquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, cicloalquenilo y heterocicloalquenilo) pueden ser una variedad de grupos seleccionados de: --0R' , =0, =NR' , =N-0R' , — R'R", —SR' , -halógeno, —SiR'R"R"', 0C(0)R', —C(0)R', ~C02R' , CONR'R", --0C (0) NR' R" , --NR"C(0)R'. —NR'-C (0)NR"R"', —NR'-C (0) 2NR"R' , —NH-C (NH2 ) =NH, NR'C(NH2)=NH, —NH--C (NH2) =NR' , —S (0) R' , —S(0)2R', S(0)2NR'R", --CN y -N02 en un número que fluctúa de cero a (2N + 1), en donde N es el número total de átomos de carbono en tal grupo. R' , R" y R"' se refieren cada uno independientemente a hidrógeno, (Ci-Cs) alquilo y heteroalquilo sin sustituir, arilo sin sustituir, arilo sustituido con 1-3 halógenos, alquilo sin sustituir, grupos alcoxi o tioalcoxi o grupos aril(Ci-C4) alquilo. En donde R' y R" están anexados al mismo átomo de nitrógeno, pueden ser combinados con el átomo de nitrógeno para formar un anillo de 5-, 6- o 7 miembros. Por ejemplo, --NR'R" se propone incluir 1-pirrolidinilo y 4-morfolinilo . A partir de la discusión anterior de sustituyentes , aquel de habilidad en el arte entenderá que el término "alquilo" se propone incluir grupos tales como haloalquilo (por ejemplo, --CF3 y -CH2F3) y acilo (por ejemplo, —C(0)CH3, —C(0)CF3, —C(0)CH2OCH3 y los semej antes ) . Similarmente, sustituyentes para los grupos arilo son variados y son seleccionados de: -halógeno, —0R' , —0C(0)R', --NR'R", —SR' , —R' , --CN, -N02, -SiR'R"R"', —C02R' , CONR'R", C(0)R' , — OC(0)NR'R", — NR"C(0)R' , ~NR"C (0) 2R' , — NR"--C(0)NR"R"', — NH-C (NH2) =NH, --NR' C (NH2 ) =NH, — H--C (NH2) -NR' , — S(0)R' , --S(0)2R' , — S(0)2NR'R", — NR"-S (0) 2-R' , — 3, CH(Ph)2, perfluoro (C1-C4) alcoxi y perfluoro (C1-C4 ) alquilo, en un número que fluctúa de cero al número total de valencias abiertas sobre el sistema de anillo aromático y en donde R' , R" y R"' son seleccionados independientemente de hidrógeno, (Ci-Ce) alquilo y heteroalquilo, arilo sin sustituir, (aril sin sustituir)- (C1-C4 ) alquilo y (aril sin sustituir) oxi- (Ci-C4) alquilo. Dos de los sustituyentes sobre átomos adyacentes del anillo de arilo pueden opcionalmente estar reemplazados con un sustituyente de fórmula -T-C(O) — (CH2)q—U— , en donde T y U son independientemente -NH--, --0--, --CH2— o un solo enlace y el subíndice q es un número entero de 0 a 2. Alternativamente, dos de los sustituyentes sobre átomos adyacentes del anillo de arilo pueden opcionalmente estar reemplazados con un sustituyente de fórmula —A— (CH2)r—B--, en donde A y B son independientemente —CH2—, --0— , --NH--, —S— , —S (0) — , — S(0)2--, --S(0)2NR'— o un solo enlace y r es un número entero de 1 a 3. Uno de los enlaces simples del nuevo anillo así formado puede opcionalmente ser reemplazado con un doble enlace. Alternativamente, dos de los sustituyentes sobre átomos adyacentes del anillo de arilo pueden opcionalmente estar reemplazados con un sustituyente de fórmula — (CH2)S—X--(CH2)t— -, en donde s y t son independientemente números enteros de 0 a 3 y X es —O—, —R' --, --S— , —S (O) — , ~S(0)2~ ,o — S(0)2NR'--. El sustituyente R' en —NR' —y —S(0)2NR' — es seleccionado de hidrógeno o (C1-C4) alquilo sin sustituir. Como se usa en la presente, el término "heteroátomo" se propone incluir oxigeno (O), nitrógeno (N) y azufre (S). El término "sales farmacéuticamente aceptables" se propone incluir sales de los compuestos activos de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y Fórmula I-E que son preparados con ácidos o bases relativamente no tóxicos, dependiendo de los sustituyentes particulares encontrados en los compuestos descritos en la presente. Ejemplos de sales de adición de base aceptables farmacéuticamente incluyen pero no están limitadas a sales de sodio, potasio, calcio, amonio, amino orgánico, magnesio u otra sal similar. Ejemplos de sales de adición de ácido aceptable farmacéuticamente incluyen pero no están limitadas a aquellas derivadas de ácidos inorgánicos como clorhídrico, bromhídrico, nítrico, carbónico, monohidrogenocarbónico, fosfórico, monohidrogenofosfórico, dihidrofosfórico, sulfúrico, monohidrogenosulfúrico o, yodhídrico o fosforoso y los semejantes, también como las sales derivadas de ácidos orgánicos relativamente no tóxicos como acético, propiónico isobutírico, oxálico, maleico, malónico, benzoico, succínico, subérico, fumárico, mandélico, itálico, bencensulfónico, p- tolilsulfónico, cítrico, tartárico, metansulfónico y los semejantes .
Moduladores de molécula pequeña de actividad de Trp-p8 Los moduladores de molécula pequeña de Trp-p8 que son usados apropiadamente en las composiciones y métodos de la presente invención son e emplificados en la presente por compuestos de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y Fórmula I-E revelados en la presente y derivados de los mismos. Así, en una modalidad, la presente invención proporciona moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña y derivados de los mismos, en donde las moléculas pequeñas incluyen compuestos de la siguiente Fórmula I: en donde Ri es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo, arilalquilo y arilo o Ri y R2 junto con el grupo nitrógeno pueden formar un grupo cíclico o heterocíclico de hasta 25 átomos; R2 es seleccionado de arilo y arilalquilo; R3 es seleccionado de alquilo, heteroalquilo y arilalquilo; R4 es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo y arilalquilo y R3 y R4 junto con el grupo nitrógeno forman una amina alifática . En modalidades relacionadas, la presente invención proporciona moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña y derivados de los mismos, en donde las moléculas pequeñas incluyen compuestos de la siguiente Fórmula I-A: en seleccionados independientemente de CR2 y N; en donde por lo menos uno de A, B, C y D es CR2; en donde R2 es un miembro seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo, arilo, halógeno, arilalquilo, ReO- y R6S-, en donde R6 es alquilo; en donde, cuando dos adyacentes de A, B, C y D son CR2,los dos R2' se pueden combinar para formar un solo grupo arilo, cicloalquilo o heterocicloalquilo y Ri es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo, arilo y arilalquilo; R3 es seleccionado de alquilo, heteroalquilo, arilo, arilalquilo, -NR7C(0)-, -C(0)NR7-, -0-, -S-, -S(0)-, -S(0)2- y -NR7-, en donde R7 es un miembro seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo, arilo y arilalquilo. R4 es seleccionado de -C(0)R8-, alquilo, arilalquilo y heteroalquilo, en donde Re es seleccionado de alquilo y heteroalquilo; R5 es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo y arilalquilo y R4 y R5 junto con el grupo nitrógeno forman una amina alifática . En ciertos compuestos ejemplares de Fórmula I-A, Ri es H; R7 es H; Re comprende 2, 3 o 4 átomos de carbono; R4 es seleccionado de propionilo, etilo, butirilo, hidroxipropionilo y 3-hidroxibutirilo; R5 es seleccionado de H y metilo; R6 comprende 1, 2, 3, 4, 5 o 6 átomos de carbono y/o R2 es seleccionado de metoxi, metilsulfañilo, fenilo y H. Ejemplificados en la presente están compuestos de Fórmula I-A que comprenden un grupo seleccionado de 2-(2-amino-propionilamino) -4-metoxi-fenilo, N- ( 2-amino-etil ) -2-amino-5-metilsulfanil-fenilo, 1- (2-amino-etoxi) -naftalen-2-ilo, 2- (2-amino-etilamino) -4-metilsulfanil-fenilo, N- (2-amino-etil) -5-metoxi-benzamida , 2- (2-amino-butirilamino) -4-metoxi-fenilo, 2-(2-amino-3-hidroxi-propionilamino) -4-metoxi-fenilo, 3- (2-amino-etilamino) -naftalen-2-ilo, N- (2-amino-etil) -2-amino-benzamida, 2- (2-amino-3-hidroxi-propionilamino) -4-metoxi-fenilo, 2- (2-amino-acetilamino) -fenilo, 2- (2-amino-3-hidroxi-vutirilamino) -4-metoxi-fenilamida y 2- (2-amino-acetilamino) -4-metoxi-fenilo. En modalidades relacionadas alternativas, la presente invención proporciona modularores de Trp-p8 de molécula pequeña y derivados de los mismos, en donde las moléculas pequeñas incluyen compuestos de la Fórmula I-B: en donde Ri es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo, arilo y arilalquilo; R2 es seleccionado de arilo, alquilo, heteroalquilo y arilalquilo . R3 es seleccionado de alquilo, heteroalquilo y arilalquilo; R4 es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo y arilalquilo y 3 y 4 junto con el grupo nitrógeno forman una amina alifática .
En ciertos compuestos ejemplares de Fórmula I-B, Ri es H; R3 es seleccionado de metileno, etileno, propileno y butileno; R4 es seleccionado de H y metilo y/o R2 es seleccionado de fenilo, furano, metilpirrol, metilbenzoato, aminofenilo, hidroxifenilo, cianofenilo y metoxifenilo . Ejemplificados en la presente están compuestos de Fórmula I-B que comprenden un grupo seleccionado de 2-(2-amino-etil) -5-furan-2-il-2H-pirazol-3-ilo, 2- ( 2-amino-propil ) -5-fenil-2H-pirazol-3-ilo, 2- ( 2-amino-et il ) -5-fenil-2H-pirazol-3-ilo, 2- (2-amino-etil) -5- ( 1-met il-lH-pirrol-2-il ) -2H-pirazol-3-ilo, 2- (2-amino-propil) -5-fenil-2H-pirazol-3-ilo, 2- (2-amino-etil) -5- ( 4-amino-fenil ) -2H-2-pirazol-3-ilo, 2- (2-amino-etil) -5-(4-hidroxi-fenil) -2H-pirazol-3-ilo, 2- (2-metilamino-etil) -5-fenil-2H-pirazol-3-ilo, 2- (2-amino-propil) -5-fenil-2H-pirazol-3-ilo, 2- (2-amino-etil) -5- (3-ciano-fenil) -2H-pirazol-3-ilo, 2-(2-amino-etil) -5- ( 3-metoxi-fenil ) -2H-pirazol-3-ilo, metiléster fdel ácido 4-{l- (2-amino-etil) -lH-pirazol-3-il}-benzoico, e-(2-amino-etil ) -5- ( 3-amino-fenil ) -2H-pirazol-3-ilo y 2- (2-amino-etil) -5- ( 3-hidroxi-fenil ) -2H-pirazol-3-ilo . En todavía modalidades relacionadas adicionales, la presente invención proporciona moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña y derivados de los mismos, en donde las moléculas pequeñas incluyen compuestos de la siguiente Fórmula 1-C: en donde Ri es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo, arilo y arilalquilo; R2 es seleccionado de arilo y arilalquilo; R3 es seleccionado de alquilo, heteroalquilo, arilalquilo, -NHC(0)R5-, -OR5- y -NHR5- , en donde R5 es alquilo o heteroalquilo; R4 es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo y arilalquilo y R3 y R4 junto con el grupo nitrógeno forman una amina alifática . En ciertos compuestos ejemplares de Fórmula I-C, Ri es H; R2 es fenilo, R5 es seleccionado de metileno, etileno, propileno y butileno; R3 es seleccionado de propionilamino, etoxi, propoxi y etilamino y/o R4 es seleccionado de H y metilo . Ejemplificados en la presente están compuestos de Fórmula I-C que comprenden un grupo seleccionado de 2-82-amino-propionilamino) -2-fenil-etilo, 2- (2-amino-etoxi ) -2-fenil-etilo, 2- (2-amino-etoxi) -2-fenil-etilo, 2- ( 3-amino-propoxi ) -2-fenil- etilo, 2- ( 2-dimetilamino-etoxi ) -2-fenil-etilo y 2-(2-amino-etilamino) -2-fenil-etilo . En todavía modalidades relacionadas adicionales, la presente invención proporciona moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña y derivados de los mismos en donde las moléculas pequeñas incluyen compuestos de la siguiente Fórmula en donde Ri es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo, arilo y arilalquilo; R2 es seleccionado de arilo y arilalquilo; R3 es seleccionado de alquilo, heteroalquilo y arilalquilo; R4 es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo y arilalquilo y R3 y R4 junto con el grupo nitrógeno forman una amina alifática . En ciertos compuestos ejemplares de Fórmula I-D, Ri es H; R2 es seleccionado de fenilo y fenilamino, R3 es seleccionado de metileno, etileno, propileno, butileno, metilamino, etilamina, propilamino, butilamino y acetilo y/o R es seleccionado de H y metilo. Ejemplificados en la presente están los compuestos de Fórmila I-D que comprenden un grupo seleccionado de 2- [2- (2-amino-etilamino) -fenil] -etilo, 2- ( 3-aminometil-fenil ) -etilo y 2- [ ( 2-amino-acetil ) -fenil-amino] -etilo. Dentro de todavía otras modalidades relacionadas, la presente invención proporciona moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña y derivados de los mismos, en donde las moléculas pequeñas incluyen compuestos de la siguiente Fórmula en donde A, B, C y D son seleccionados independientemente de CRi y N; en donde por lo menos uno de A, B, C y D es CRi; en donde Ri es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo, arilo, arilalquilo y halógeno; en donde cuando dos adyacentes de A, B, C y D son CRi, los dos Ri se pueden combinar para formar un solo grupo arilo, cicloalquilo o heterocicloalquilo; R2. es seleccionado de alquilo, heteroalquilo y arilalquilo; R3 es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo y arilalquilo y R2 y R3 junto con el grupo nitrógeno forman una amina alifática . En ciertos compuestos ejemplares de Fórmula I-E, (i) Ri es H u -0R1 y R1 es seleccionado de metilo, hidroximetilo, etilo, hidroxietilo, propilo, hidroxipropilo, butilo, hiidroxibutilo, acetonitrilo, fenilo, fenilmetoxi, feniletoxi, fenilpropoxi , fenilbutoxi y bencilo; (ii) Ri es -SR11 y en donde R11 es seleccionado de metilo, hidroximetilo, etilo, hidroxietilo, propilo, hidroxipropilo, butilo, hidroxibutilo, acetonitrilo, fenilo, fenilmetoxi, feniletoxi, fenilpropoxi , fenilbutoxi y bencilo; (iii) Ri es -S(0)R1:L1 y en donde R111 es seleccionado de metilo, hidroximetilo, etilo, hidroxietilo, propilo, hidroxipropilo, butilo, hidroxibutilo, acetonitrilo, fenilo, fenilmetoxi, feniletoxi, fenilpropoxi , fenilbutoxi y bencilo; (iv) Ri es -S(0)2R1V y en donde R1V es seleccionado de metilo, hidroximetilo, etilo, hidroxietilo, propilo, hidroxipropilo, butilo, hidroxibutilo, acetonitrilo, fenilo, fenilmetoxi, feniletoxi, fenilpropoxi , fenilbutoxi y bencilo; (v) Ri es -C(0)NRvRvi, en donde Rv y Rvi son seleccionados independientemente de H, metilo, hidroximetilo, etilo, hidroxietilo, propilo, hidroxipropilo, butilo, hidroxibutilo, dietilaminoetilo, fenilo, piridinilo, metoxietilo, hidroxietoxietilo, bencilo, metilfenilo, feniletilo, hidroxihidroximetilfeniletilo, carbamoilmetilo e hidroximetilhidroxietilo . (vi) Ri es -C(0)NRvRvi, en donde Rv y Rvi conjuntamente forman morfolina, piperazina, piperazina metil éster; (vii) R2 es seleccionado de metileno, etileno, propileno y butileno; (viii) R2 es etileno y R3 es H; (ix) Ri es CF3 o halógeno. Ejemplificados en la presente están compuestos de Fórmulas I-E que comprende un grupo seleccionado de 3-(2-amino-etil) -5-metoxi-l , 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3-(2-amino-etil) -5- ( 3-hidroxi-propoxi , 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3- ( 2-amino-etil ) -5-etoxi-l, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3- (2-amino-etil) -5-metansulfonil-1 , 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona , 3- ( 2-amino-etil ) -5- (2-hidroxi-etoxi) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, amida del ácido 3- ( 2-amino-etil ) -2-oxi-2 , 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, 3- (2-amino-etil) -5-metilsulfanil-1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona , 3- (2-amino-etil) -5-metan-sulfinil-1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, ( 2-dietilamino-etil ) -amida del ácido 3- (2-amino-etil ) -2-oxo-2 , 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, 3- (2-amino-propil) -2, 3-dihidro- benzoimidazol-2-ona , [3- ( 2-amino-etil ) -2-???-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-iloxi] -acetonitrilo, etilamida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, piridin-3-il amida del ácido 3- ( 2-amino-etil ) -2-oxo-2 , 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, ( 2-metoxi-etil ) -amida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, 1- (2-amino-etil) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 1- (2-amino-etil) -1, 3-dihidro-nafto [2 , 3-d] imidazol-2-ona, (2-hidroxi-etil) -amida del ácido 3- ( 2-amino-etil ) -2-oxo-2 , 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5- carboxilico, 3- ( 2-amino-etil ) -5-propoxi-1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3- (2-amino-etil) -1, 3-dihidro-imidazo [ 4 , 5-c] piridin-2-ona , ( 2-dietiiamino-etil ) -amida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-4-carboxilico, piridin-4-ilamida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2 , 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, 3- (2-amino-etil ) -1 , 3-dihidro-imidazo [ , 5-b] piridin-2-uno, 1- ( 3-amino-propil ) -1 , 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, fenilamida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carbo-xilico, [ 2- ( 2-hidroxi-etoxi ) -etil ] -amida del ácido 3-(2-amino-etil) -2-OXO-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, 1- (2-amino-etil) -5-trifluorometil-1 , 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 1- (2-Amino-etil) -1, 3-dihidro-imidazo [4, 5-c] piridin-2-ona, bencilamida del ácido 3- (2-amino-etil ) -2-oxo-2 , 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxílico, 3- (2-amino-etil) -5- (morfolin-4-carbonil) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3- (2-amino-etil) -5- (2-oxo-2-fenil-etoxi) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3- (2-metilamino-etil ) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3- (2-amino-etil) -5-butoxi-l, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, metil-fenil-amida del ácido 3- (2-amino-etil ) -2-oxo-2 , 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, etil éster del ácido 4- [3- (2-amino-et il ) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carbonil ] -piperazin-l-carboxilico, dietilamida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-???-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, fenetil-amida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, ( 2-hidroxi-l-hidroximetil-2-fenil-etil) -amida del ácido 3- ( 2-amino-etil ) -2-oxo-2 , 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxí lico, carbamoilmet il-amida del ácido 3-(2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, (2-hidroxi-l-hidroximetil-etil) -amida de ácido 3-(2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, N-{2- [2-oxo-2, 3-dihidro-benzoimidazol-l-il ] -etil}-guanidina, 3- (2-amino-etil) -5-benciloxi-l , 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona y 1- (4-amino-butil) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona . En tal modalidad, se proporciona el compuesto 3- ( 2-amino-etil ) -1- ( 1-isopropil-S-met il-ciclohexancarbonil-5-metoxi-l , 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona .
Síntesis de Moduladores de Trp-p8 de Molécula Pequeña Como se indica anteriormente, los compuestos de presente invención incluyen compuestos de Fórmula I, Fórmula A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y Fórmula I-E. En ciertos aspectos, los compuestos pueden ser elaborados utilizando materiales de partida disponibles comercialmente al usar metodología de síntesis fácilmente disponible en el arte. Los compuestos de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y Fórmula I-E pueden ser aislados utilizando técnicas de aislamiento y purificación típicas conocidas en el arte, en los que se incluye, por ejemplo, métodos cromatográficos y de recristalización. Aquellos de habilidad en el arte reconocerán fácilmente que los compuestos incluidos apropiadamente en las composiciones y métodos de la presente invención pueden existir en una diversidad de isómeros cis y trans, formas E/Z, diastereómeros , también como isómeros ópticos. Así, los compuestos usados en las composiciones y métodos de la presente invención incluyen todas de tales combinaciones y variaciones. En los compuestos de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula 1-D y Fórmula I-E, los átomos de carbono a los cuales cuatro sustituyentes no idénticos son enlazados son asimétricos. Así, los compuestos de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y Fórmula I-E pueden existir como enantiómeros , diastereómeros o una mezcla de los mismos. Los enantiómeros y diastereómeros pueden ser separados mediante métodos cromatográficos o de cristalización o mediante otros métodos conocidos en el arte. Los átomos de carbono asimétricos pueden estar en una de dos configuraciones, R o S, ambos de los cuales están dentro del alcance de la presente invención. La presencia de cantidades pequeñas del enantiómero o diastereómero opuesto en el producto purificado final no afecta la aplicación terapéutica de tales compuestos. Los compuestos de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I- B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y Fórmula I-E pueden ser tratados adicionalmente para formar sales aceptables farmacéuticamente. El tratamiento de un compuesto de la invención con un ácido o base puede formar respectivamente, una sal de adición de ácido aceptable farmacéuticamente y una sal de adición de base aceptable farmacéuticamente, cada una definida anteriormente. Varios ácidos y bases inorgánicos y orgánicos conocidos en el arte, en los que se incluyen aquellos descritos en la presente anteriormente, pueden ser usados para efectuar la conversión a la sal. La presente invención también es concerniente con isómeros, hidratos y solvatos aceptable farmacéuticamente de compuestos de Fórmula I, Fórmula I- A, Fórmula I-B, Fórmula I- C, Fórmula I-D y Fórmula I-E. Los compuestos de estas fórmulas pueden también existir en varias formas isoméricas y tautoméricas en las que se incluyen sales aceptables farmacéuticamente, hidratos y solvatos de tales isómeros y tautómeros .
La presente invención también abarca derivados de profármaco de los compuestos de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y Fórmula I-E. El término "profármaco" se refiere a un derivado de una molécula de fármaco original que requiere biotransformación, ya sea espontánea o enzimática, dentro del organismo para liberar el fármaco original. Los profármacos son variaciones o derivados de los compuestos de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y Fórmula I-E de la presente invención que tienen grupos escindibles bajo condiciones metabólicas. Los profármacos se convierten en los compuestos de la invención que son farmacéuticamente activos in vivo cuando sufren solvólisis bajo condiciones fisiológicas o sufren degradación enzimática. Una tecnología de profármaco ejemplar que puede ser usada apropiadamente con los compuestos de la presente invención es la tecnología de terapia de cáncer activada por proteasa (PACT) descrita en detalle en la solicitud de patente estadounidense No. 10/156,214 y publicación de solicitud de PCT No. O 02/095007, ambas de las cuales son incorporadas en la presente por referencia. La síntesis de compuestos de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y Fórmula I-E puede ser obtenida al hacer reaccionar un cloruro de ácido, obtenido al hacer reaccionar el ácido p-mentan-3-carboxílico con cloruro de tionilo, con la amina apropiada. Como se indica posteriormente en la presente, comúnmente, la reacción se lleva a cabo en solución a temperatura ambiente en presencia de un receptor de cloruro de hidrógeno {por ejemplo, hidróxido de sodio) . La estructura básica de p-mentano es una molécula en forma de silla que puede existir en forma cis o trans. La sustitución del grupo carboxilo o amida a la posición 3 da surgimiento a cuatro isómeros configuracionales o geométricos dependiendo de si la sustitución es axial o ecuatorialmente al isómero cis o trans. Los cuatro isómeros son relacionados con mentol como es neomentol, isomentol y neoisomentol . En modalidades ejemplares, los compuestos de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y Fórmula I-E son sintetizados con una estereoquímica particular en donde la estereoquímica relativa alrededor del anillo de mentano anillo es aquella de mentol y/o en donde la estereoquímica absoluta alrededor del anillo de mentano es aquella de (-)-mentol . Métodos de síntesis para la preparación de moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y Fórmula I-E de la presente invención son presentados en la presente en los Ejemplos 1-9.
Composiciones que comprenden moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña Como se discute anteriormente, la presente invención es concerniente con moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña, en los que se incluyen agonistas de Trp-p8 y antagonistas de Trp-p8 que se enlazan a y alteran la actividad de Trp-p8. En ciertas modalidades, los moduladores de Trp-p8 son agonistas que en ciertas instancias, son capaces de estimular la afluencia de cationes en y toxicidad de una célula que expresa la proteina de canal de Trp-p8. En modalidades alternativas, los moduladores de Trp-p8 son antagonistas de la actividad de Trp-p8 que son capaces de reducir la actividad de Trp-p8 expresado en una célula. Asi, los moduladores de Trp-p8 de la presente invención encontrarán utilidad en composiciones, en las que se incluyen composiciones farmacéuticas, que son útiles en el tratamiento de enfermedades asociadas con la expresión de Trp-p8. Composiciones apropiadas, de acuerdo con la presente invención, comprenden uno o más agonista de Trp-p8 de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y Fórmula I-E y/o uno o más antagonistas de Trp-p8 de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y Fórmula I-E, como se describe anteriormente, en combinación con uno o más portadores o excipientes aceptables farmacéuticamente. En una modalidad, la presente invención proporciona moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña en combinación con un excipiente aceptable farmacéuticamente tal como solución salina estéril u otro medio, agua, gelatina, aceite, etc., para formar composiciones aceptables farmacéuticamente. Las composiciones y/o agonistas pueden ser administrados solo o en combinación con cualquier portador, diluyente conveniente, etc. y tal administración puede ser provista en una sola dosis o múltiples dosificaciones. Portadores útiles incluyen, pero no están limitados a, un medio sólido, semi-sólido o liquido en los que se incluyen agua y solventes orgánicos no tóxicos. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden ser preparadas al mezclar uno o más agonistas de Trp-p8 de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y/o Fórmula I-E con un portador o agente aceptable farmacéuticamente. Alternativamente, las composiciones farmacéuticas pueden ser preparadas al mezclar uno o más antagonistas de Trp-p8 de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y/o Fórmula I-E con un portador o agente aceptable farmacéuticamente. Además,' las composiciones farmacéuticas pueden incluir además excipientes, estabilizadores, diluyentes y los semejantes y pueden ser provistos en formulaciones de liberación sostenida o formulaciones de liberación temporizada. Portadores, agentes, excipientes, estabilizadores, diluyentes y los semejantes aceptables para uso terapéutico son bien conocidos en el campo farmacéutico y son descritos, por ejemplo en "Remington' s Pharmaceutical Sciences", (Mack Publishing Co . , ed. A.R. Gennaro, 1985), incorporada en la presente por referencia. Tales materiales son no tóxicos a los receptores a las dosificaciones y concentraciones empleadas e incluyen soluciones reguladoras del pH tales como fosfato, citrato, acetato y otras sales de ácidos orgánicos, antioxidantes tales como ácido ascórbico, péptidos de bajo peso molecular tales como poliarginina , proteínas, tales como albúmina de suero, gelatina o inmunoglobulina, polímeros hidrofílicos tales como albúmina de suero, gelatina o inmunoglobulina, polímeros hidrofílicos tales como polivinilpirrolidinona , aminoácidos tales como glicina, ácido glutámico, ácido aspártico o arginina, monosacáridos , disacáridos y otro carbohidratos en los que se incluyen celulosa o sus derivados, glucosa, mañosa o dextrinas, agentes quelantes tal como EDTA, alcoholes de azúcar tales como manitol o sorbitol, contraiones tales como sodio y/o surfactantes no iónicos tales como TWEEN o polietilenglicol . Todavía dentro de aspectos adicionales, las composiciones de la presente invención comprenden un compuesto de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D, y/o Fórmula I-E formulados conjuntamente con uno o más agentes terapéuticos de cáncer. Alternativamente, las composiciones de la presente invención comprenden un compuesto de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y/o Fórmula I-E formulado independientemente con uno o más agentes terapéuticos de cáncer. Esto es, el compuesto de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y/o Fórmula I-E y el agente terapéutico de cáncer son formulados separadamente. Agentes terapéuticos de cáncer apropiados incluyen pero no están limitados a, agentes antimitóticos, en los que se incluyen pero no limitados a, paclitaxel, vincristina y etoposide; agentes alquilantes en los que se incluyen pero no limitados a, mecloretamina , ciclofosfamida y carmustina; antimetabolitos en los que se incluyen pero no limitados a, metotrexato, gemcitabina, lometrexol, 5-fluorouracilo y 6-mercaptopurina ; antibióticos citotóxicos en los que se incluyen pero no limitados a, doxorubicina, daunorubicina, bleomicina, mitomicina C y estreptozocina; agentes de platino en los que se incluyen pero no limitados a, cisplatina y carboplatina ; agentes hormonales en los que se incluyen pero no limitados a, anti-estrógenos tales como tamoxifeno y dietilestilbestrol también como anti-andrógenos tales como flutamida; agentes antiangiogénesis ; e inhibidores de farnesil transferasa. En ciertos aspectos, los compuestos de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y/o Fórmula I-E son administrados en combinación con un agente terapéutico de cáncer que no es efectivo para estimular la afluencia de cationes moderada por Trp-p8.
En otros aspectos, los compuestos de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y/o Fórmula I-E son administrados en combinación con uno o más moduladores de Trp-p8 adicionales, en los que se incluyen pero no limitados a un compuesto de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y/o Fórmula I-E. Dependiendo del régimen de tratamiento particular contemplado, las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden ser administrada parenteral, tópica, oral o localmente. En ciertos aspectos, las composiciones farmacéuticas son administradas parenteralmente, por ejemplo, intravenosamente, subcutánea, intradérmica o intramuscularmente . En una modalidad, la presente invención proporciona composiciones para la administración parenteral que comprende un compuesto de la presente invención, disuelto o suspendido en un portador tal como un portador acuoso. Para formulaciones sólidas, los compuestos pueden ser mezclados con portadores sólidos no tóxicos convencionales tales como, por ejemplo, grados farmacéuticos de manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina de sodio, talco, celulosa, glucosa, sacarosa, carbonato de magnesio y los semej antes . Para la administración en aerosol, los compuestos de la presente invención pueden ser suministrados en forma finamente dividida junto con un surfactante no tóxico y propelente. Tales agentes ejemplares son los ésteres o ásteres parciales de ácidos grasos que contienen de 6 a 22 átomos de carbono, tales como ácido caproico, actanoico, láurico, palmitico, esteárico, linoleico, olesterico y oleico. Las composiciones de la presente invención pueden ser administradas mediante inyección, por ejemplo intravenosa, intramuscular, intracutánea , subcutánea, intraduodenal o intraperitonealmente . Alternativamente, las composiciones pueden ser administrada mediante inhalación, tal como intranasalmente o pueden ser administradas transdérmicamente , tal como por medio de un parche o los semejantes. Se comprenderá que la formulación preferida real de composiciones, en las que se incluyen composiciones farmacéuticas, variará de acuerdo con el modo de administración también como la enfermedad particular que es tratada. Las formulaciones y modos óptimos de administración serán determinados sistemáticamente en una base de enfermedad en enfermedad y de paciente en paciente por aquellos experimentados en el arte.
Métodos para la Identificación y Caracterización de la Eficacia In Vitro e In Vivo de Moduladores de Molécula Pequeña de Trp-p8 Como se discute anteriormente, la presente invención es concerniente con moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña, en los que se incluyen agonistas y antagonistas de actividad de Trp-p8. Revelados en la presente están los moduladores de Trp-p8 ejemplificados por los compuestos de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y/o Fórmula I-E descritos anteriormente. La presente invención contempla además que moduladores de Trp-p8 adicionales pueden también ser usados apropiadamente en las composiciones y métodos de la presente invención . Agonistas y antagonistas de Trp-p8 adicionales o alternativos pueden ser identificados por la metodología revelada en los ejemplos adjuntos. Por ejemplo, agonistas de Trp-p8 que tienen eficacia en el tratamiento de enfermedad ( es ) asociada (s) con la expresión de Trp-p8 incluyen moléculas pequeñas que dan como resultado uno o más de los siguientes: (1) inhiben el crecimiento o disminuyen la viabilidad de una célula que expresa Trp-p8; (2) estimulan la afluencia de catión calcio y/u otro catión en una célula que expresa Trp-p8; (3) inducción de apóptosis y/o necrosis en una célula que expresa Trp-p8; y/o ' (4) eficacia en uno o más sistemas de modelo de animal de enfermedad humana. Los antagonistas Trp-p8 tienen eficacia en el tratamiento de enfermedad (es) asociada (s) con la expresión de Trp-p8 incluyen moléculas pequeñas que dan como resultado uno de los siguientes: (1) protegen células que expresan Trp-p8 del efecto tóxico de agonistas en un sistema de modelo in vitro, (2) inhiben el crecimiento de y/o exterminan la línea de célula de cáncer con la expresión de Trp-p8 endógena y (3) son eficaces en uno o más sistemas de modelo de animal de enfermedad humana. Asi, en ciertas modalidades, la presente invención proporciona métodos para identificar agonistas de Trp-p8 que comprende la etapa de poner en contacto una célula que expresa Trp-p8 con un agonista de Trp-p8 candidato para un tiempo y en una cantidad suficiente para inhibir el crecimiento y/o disminuir la viabilidad de una célula que expresa Trp-p8, en donde el crecimiento inhibido y/o viabilidad reducida indican que el agonista de Trp-p8 candidato es capaz de activar Trp-p8 expresado por la célula. Otras modalidades proporcionan métodos para identificar agonistas de Trp-p8, que comprenden la etapa de poner en contacto una célula que expresa Trp-p8 con un agonista de Trp-p8 candidato para un tiempo y en una cantidad suficiente para inducir la afluencia de cationes de calcio y/u otros cationes en la célula, en donde la afluencia de catión incrementada está correlacionada con la toxicidad celular incrementada . Todavía modalidades adicionales proporcionan métodos para identificar agonistas de Trp-p8 que comprenden la etapa de administrar un agonista de Trp-p8 candidato a un animal que tiene una o más célula neoplásicas que expresan Trp-p8 para un tiempo y en una cantidad suficiente para inhibir el crecimiento de y/o inducir apóptosis y/o necrosis en la célula, incrementando mediante esto la sobrevivencia del animal, en donde cualquiera de uno o más de inhibición de crecimiento de célula, inducción de apóptosis, inducción de necrosis y/o supervivencia incrementada del animal indican eficacia del agonista de Trp-p8. La presente invención proporciona métodos para la identificación de antagonistas de Trp-p8 además de los antagonistas de Trp-p8 revelados en la presente. Tal método incluyen (1) sistemas de análisis in vitro para detectar la protección de células que expresan Trp-p8 de la toxicidad inducida por agonistas de Trp-p8; (2) sistemas de análisis in vitro e in vivo para detectar la inhibición de crecimiento de una célula de cáncer y/o una linea de célula de cáncer que expresa endógenamente Trp-p8; (3) sistemas de modelo de animal in vivo mediante los cuales uno o más antagonistas de Trp-p8 candidato es administrado a un animal que tiene una o más células neoplásicas que expresan Trp-p8 por un tiempo y en una cantidad suficiente para inhibir el crecimiento de y/o inducir apóptosis y/o necrosis en la célula, incrementando mediante esto la supervivencia del animal.
Métodos para el uso de moduladores de Trp-p8 Los moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña de la presente invención pueden ser usados apropiadamente en métodos para modificar (esto es, activar o reducir) la afluencia de calcio moderada por Trp-p8 en una célula y métodos terapéuticos para el tratamiento de una o más enfermedades asociadas con la expresión de Trp-p8. Por ejemplo y como se indica anteriormente, se ha observado que la expresión anormal de Trp-p8 está asociada con un fenotipo neoplásico en una variedad de tejidos cancerosos en los que se incluyen tejidos de pecho, colon, pulmón y próstata. Tsavaler et al., Cáncer Resrarch, supra . Asi, en ciertas modalidades se proporcionan métodos para activar la afluencia de calcio moderada por Trp-p8 en una célula, tales métodos comprenden la etapa de poner en contacto la célula que expresa Trp-p8 con una cantidad de un agonista de Trp-p8 por un tiempo suficiente para inhibir el crecimiento de la célula y/o inducir necrosis y/o apoptosis en la célula. Métodos ejemplares para activar Trp-p8 son provistos en los ejemplos presentados en la presente. Otras modalidades de la presente invención proporcionan métodos terapéuticos para el tratamiento de enfermedades asociadas con la expresión de Trp-p8, tales métodos comprenden la etapa de administrar un mamífero, comúnmente un humano, una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición que comprende un agonista de Trp-p8 por un tiempo suficiente para inhibir el crecimiento de la célula y/o inducir necrosis y/o apoptosis en la célula. Como se usa en la presente, la frase "cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a la cantidad de un compuesto que, cuando es administrada a un mamífero para tratar a un gen de enfermedad, es suficiente para efectuar tal tratamiento por la enfermedad. La "cantidad terapéuticamente efectiva" variará dependiendo del compuesto, la enfermedad y su severidad y la edad, peso, etc., del mamífero a ser tratado. Como se usa en la presente, los términos "tratar", "que trata" y "tratamiento" incluye: (1) prevenir la enfermedad, esto es, provocar que los síntomas clínicos de la enfermedad no se desarrollen en un mamífero que puede estar predispuesto a la enfermedad pero que todavía no experimenta ninguno de los síntomas de la enfermedad; (2) inhibir la enfermedad, esto es, detener o reducir el desarrollo de la enfermedad o sus síntomas clínicos y (3) aliviar la enfermedad, esto es, provocar regresión de la enfermedad o sus síntomas clínicos . En tanto que la frecuencia y dosificación de los regímenes de tratamiento variarán dependiendo de factores tales como la enfermedad y el paciente tratado, las composiciones que comprenden uno o más compuestos de la Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y/o Fórmula I-E son administrados comúnmente en el intervalo de aproximadamente 0.001 mg de compuesto/Kg de masa corporal a aproximadamente 1000 mg/Kg. Comúnmente, el tratamiento es iniciado con dosificaciones más pequeñas que son menores que la dosis óptima del compuesto. Después de esto, la dosificación puede ser incrementada hasta que se obtiene efectividad óptima. En la mayoría de las instancias, la administración de una(s) composición (es) de la presente invención se obtiene mediante cualquier método que asegura la posición sistémica al compuesto de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y/o Fórmula I-E. Así, las composiciones pueden ser administradas oral, parenteral, introduodenal e intranasalmente . Comúnmente, tales composiciones comprenden uno o más metales compuestos en combinación con uno o más portadores o diluyentes aceptables farmacéuticamente, como se describe en detalle adicional anteriormente en la presente. Otras modalidades de la presente invención proporcionan terapias de combinación en donde uno o más compuestos de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y/o Fórmula I-E es administrado en conjunción con uno o más agentes terapéuticos de cáncer, como se describe en detalle adicional posteriormente en la presente, tales como un agente antimicótico, un agente alquilante, un antimetabolito, un antibiótico citotóxico, un agente de platino, un agente hormonal y/o un antiandrógeno . Todavía modalidades adicionales de la presente invención proporcionan terapias de combinación en donde dos o más compuestos de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y/o Fórmula I-E son administrados ya sea simultánea o secuencialmente para obtener el resultado terapéutico deseado. Así, como se usa en la presente, el término "combinación" significa que por lo menos dos compuestos pueden ser administrados de manera simultánea, en terapia de combinación en donde el primer compuesto es administrado primero, seguido por el segundo compuesto, también como en donde el segundo compuesto es administrado primero, seguido por el primer compuesto. El resultado deseado puede ser ya sea un alivio subjetivo del (los) síntoma (s) o una mejora identificable objetivamente en el receptor de las dosificaciones . Los siguientes ejemplos son ofrecidos a manera de ilustración y no a manera de limitación.
EJEMPLOS Ejemplo 1 Síntesis de compuestos de mentan-3-carboxamida Este ejemplo revela metodología para la síntesis de compuestos de mentan-3-carboxamida . Ácido mentan-3-catboxílico Agua (300 mi) fue colocada en un matraz Erlenmeyer de 2L con una barra de agitación grande. Se agregó cuidadosamente con agitación ácido sulfúrico (500 mi). Se permite que la solución se enfríe a 75°C y se agrega N-etil-p-mentan-3- carboxamida (62.5 g) . La temperatura fue mantenida a 75°C con una placa caliente y se agregó cuidadosamente nitrito de sodio (31 g) . Se agregaron dos porciones más de 31 g de NaN02 a intervalos de una hora y la mezcla fue agitada durante toda la noche a 75°C. La mezcla fue enfriada a temperatura ambiente, diluida con ~1L de agua helada y extraída con -500 mi de éter. La capa de éter fue separada, lavada con agua y extraída con 2 x 350 mi de NaOH 1 M. La capa acuosa se hizo ácida con HC1 concentrado y fue extraída con éter. La capa de éter fue secada con MgSC y evaporada para dar ácido mentan-3-carboxílico (33.2 g, 61%) como un sólido cristalino, 50.3 grados (c=l, CHC13, 25°C) .
Cloruro de mentan-3-carbonilo El ácido mentan-3-carboxílico (54.35 g) fue sometido a reflujo con 80 mi de cloruro de tionilo por 3 horas. El S0C12 fue removido mediante destilación y el cloruro de ácido fue destilado a 114-115°C (8 Torr) . (Literatura punto de ebullición 84-85°C a 3.5 Torr). Rendimiento: 50 g (84%).
Procedimiento general para la preparación de mentan-3-carboxamidas A una solución agitada de 0.2 mmoles de la amina en 1 mi de acetonitrilo o NMP y 0.4 mmoles de DIPEA se agregaron 0.022 mi de cloruro de mentan-3-carbonilo . La mezcla de reacción fue agitada durante 3 horas. Para las aminas menos reactivas, la mezcla fue calentada (60°C) y agitada durante 24 horas. El producto fue purificado de la mezcla de reacción cruda mediante HPLC (gradiente de 40-95% durante 10 minutos utilizando TFA al 0.05% en H20) y evaporado a sequedad.
Ejemplo 2 Síntesis de compuestos de dihidrobenzoimidazol de Fórmula I-E Este ejemplo revela metodología para la síntesis de moduladores de Trp-p8 de dihidrobenzoimidazol de la Fórmula 1- 4-metoxi-2-fluoro-l-nitrobenceno Un matraz de fondo redondo de 2L equipado con barra de agitación y condensador de flujo fue cargado con acetonitrilo (1L) , K2C03 (263 g, 1.9 mol) y 4-hidroxi-2-fluoro-l-nitrobenceno (100 g, 0.64 mol). Se agregó yoduro de metilo (271 g, 1.9 mol) a la mezcla de reacción y fue calentada a temperatura de reflujo con agitación vigorosa durante 5 horas. El acetonitrilo fue removido y se agregó acetato de etilo (1L) y H20 (700 mi) . La mezcla heterogénea fue transferida a un embudo de separación en donde la fase acuosa fue separada y re-extraída con acetato de etilo (2 X 200 mi) . Las fases orgánicas fueron combinadas y lavadas con H20 (2 X 500 mi), salmuera (500 mi), secadas sobre MgS04, filtradas y concentradas bajo presión reducida para dar el producto deseado como un sólido ligeramente amarillo (107g, 98%). ter-butiléster del ácido [2- ( 5-metoxi-2-nitrofenilamino) -etil ] -carbámico Un matraz de 2L equipado con barra agitadora fue cargado con DMSO (800 mi), K2C03 (161 g, 1.6 mol) y 4-metoxi-2-fluoro-l-nitrobenceno (100 g, 0.58 mol). Se agregó mono-N-Boc- 1 , 2-diaminoetano (94 g, 0.55 mol) a la mezcla de reacción y fue agitada durante 12 horas a 60°C. La mezcla de reacción fue triturada con agua helada (1.5 L) y el precipitado amarillo resultante fue recolectado mediante filtración al vacio. El precipitado fue lavado varias veces con agua (5x 1 L) y secada a alto vacio durante 48 horas para dar el producto deseado como un sólido amarillo brillante (178 g, 98%). ter-butiléster del ácido [2- ( 5-metoxi-2-amino-fenilamino) -etil] -carbámico Un matraz de fondo redondo de 2L equipado con barra agitadora fue cargado con una suspensión de Pd(OH)2 al 20% (5 g) y 1,4-diocano (800 mi). Se agregó ter-butiléster del ácido [2- (5-metoxi-2-nitrofenilamono) -etil] -carbámico (1°00 g, 0.32 mmol) a la suspensión. La mezcla de reacción fue hidrogenada (globo) durante 48 horas (hasta que el material de partida se había consumido) seguido por la adición de K2C03 (100 g) fue agregado a la mezcla y agitado por 12 horas adicionales para remover trazas de agua. La suspensión fue filtrada para remover Pd(OH)2 y K2C03. El filtrado fue usado en la siguiente etapa sin purificación adicional (rendimiento no determinado) . ter-butiléster del ácido [2- ( 6-metoxi-2-oxo-2 , 3-dihidrobenzoimidazol-l-il ) -etil] -carbámico La solución anterior fue tratada con un exceso de carbonildiimidazol (104 g, 0.64 mol) y calentada a 90°C durante 4 horas. El 1,4-dioxano fue removido y el residuo fue triturado con agua (1.5 L) . El precipitado resultante fue recolectado mediante filtración al vacio y lavado varias veces con agua (5 x 500 mi) . El producto crudo fue secado a 70°C a alto vacio durante 12 horas y usado sin purificación adicional (66 g, 67% rendimiento por 2 etapas) .
Ter-butiléster del ácido {2- [3- (2-isopropil-5-metilciclohexancarbonil) -6-metoxi-2-oxo-2 , 3-dihidrobenzoimidazol-l-il ] -etil} -carbámico Un matraz de 2L equipado con barra de agitación fue cargado con ter-butiléster del ácido [2- (2-oxo-2 , 3- dihidrobenzoimidazol-1-il) -etil] -carbámico (40 g, 0.20 mol), DMAP (48 g, 0.39 mol) y CH2C12 (500 mi). Se agregó cloruro de mentoilo (40 g, 0.20 mol) gota a gota durante un periodo de 15 minutos y fue agitado a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reacción fue enfriada con HC1 1 N por 20 minutos adicionales. La mezcla heterogénea fue transferida a un embudo de separación, en donde la fase acuosa fue separada y re-extraída con CH2CI2 (2 x 200 mi) . Las fases orgánicas fueron combinadas y lavadas con HC1 1 N (2 x 300 mi), H20 (300 mi), NaHC03 saturado (acuoso) (2 x 300 mi) , salmuera (300 mi) , secadas sobre gSC , filtradas y concentradas bajo presión reducida. El producto crudo fue disuelto en una cantidad mínima de CH2CI2 y eluído a través de un tapón de gel de sílice (hexano/acetato de etilo al 10% para elución) para proporcionar el producto deseado como un sólido incoloro (93 g, 96%).
Sal de TFA de 3- ( 2-aminoetil ) -1- ( 2-isopropil-5-metilciclohexancarbonil ) -5-metoxi-l , 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona (Compuesto #36) . Un matraz de fondo redondo de 500 mi fue cargado con ter-butiléster del ácido {2- [ 3- ( 2-isopropil-5- metilciclohexancarbonil ) -2-oxo-2, 3-dihidrobenzoimidazol-l-il ] -etil}-carbámico (90 g, 0.19 mol) y TFA/H20 a 95% (200 mi). La mezcla de reacción fue agitada durante 2 horas y el TFA fue removido bajo presión reducida para dar el producto crudo como un aceite espeso (que solidifica para formar espuma frágil en reposo bajo vacio) . El producto crudo fue disuelto en acetonitrilo/H20 al 30% y purificado mediante HPLC preparativa (Ultro 120 (10 um) C18Q) utilizando un gradiente de acetonitrilo/H20 de 40-60% (con TFA al 0.1%). Las fracciones puras fueron combinadas, concentradas y liofilizadas para dar un sólido incoloro esponjoso ligero (79 g, 94%). MS (ESI) m/z 374 (M+ + 1) .
Sal de TFA de 3- ( 2-aminoetil ) -5-etoxi-l- ( 2-isopropil-5-metilciclohexancarbonil ) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona (Compuesto # 38) En un procedimiento similar a la síntesis del Compuesto # 36, el Compuesto # 38 fue preparado a partir de 4-etoxi-1 , 2-fluoro-l-nitrobenceno (preparado a partir de bromuro de etilo y 4-hidroxi-2-fluoro-l-nitrobenceno . MS (ESI) m/z 387 (M+ + 1) .
Sal de TFA de 1- (2-aminoetil ) -3- ( 2-isopropil-5-metilciclohexancarbonil ) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona (Compuesto # 50) En un procedimiento similar a la síntesis del Compuesto # 36, el Compuesto # 50 fue preparado a partir de 2-fluoro-l-nitrobenceno. MS (ESI) m/z 344 (M+ 4 1) .
Sal de TFA de 3- ( 2-aminoetil ) -5- ( 3-hidroxipropoxi ) -1- ( 2-isopropil-5-metilciclohexancarbonil ) -1 , 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona (Compuesto # 37) En un procedimiento similar a la síntesis del Compuesto # 36, el Compuesto # 37 fue preparado a partir de 4- ( 2- er-butoxipropoxi ) -2-fluoro-l-nitrobenceno (preparado a partir de l-bromo-3- ter-butoxipropano y 4-hidroxi-2-fluoro-l-nitrobenceno) . MS (ESI) m/z 418 (M+ + 1).
Sal de TFA de 3- ( 2-aminoetil ) -5- ( 2-hidroxietoxi ) -1- ( 2-isopropil-5-metilciclohexancarbonil ) -1 , 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona (Compuesto # 40) En un procedimiento similar a la síntesis del Compuesto # 36, el Compuesto # 40 fue preparado a partir de 4-(2- er-butoxietoxi) -2-fluoro-l-nitrobenceno (preparado a partir de l-bromo-3- ter-butoxietano y 4-hidroxi-2-fluoro-l-nitrobenceno) . MS (ESI) m/z 404 (M+ + 1) .
Sal de TFA de 1- (2-amino-2- ( R) -metiletil) -3- (2-isopropil-5-metilciclohexancarbonil) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona (Compuesto # 45) En un procedimiento similar a la síntesis del Compuesto # 36, el Compuesto # 45 fue preparado a partir de 2-fluoro-l-nitrobenceno y ter-butiléster del ácido (2-amino-l-(R) -etil) carbámico. MS (ESI) m/z 358 (M+ + 1) .
Ejemplo 3 Síntesis de compuestos de dihídrobenzoimidazol adicionales de Fórmula I-E Este ejemplo revela metodología para la síntesis de moduladores de Trp-p8 de dihídrobenzoimidazol de Fórmula I-E. etiléster del ácido 3-fluoro-4-nitrobenzoico matraz de fondo redondo de 1L equipado con una barra de agitación y condensador de reflujo fue cargado con H2S04 (4 mi) , metanol (400 mi) y ácido 3-fluoro-4-nitrobenzoico (10 g) . La mezcla de reacción fue calentada a temperatura de reflujo con agitación vigorosa durante 18 horas. El metanol fue removido y el residuo crudo fue triturado con hexano y concentrado para dar un sólido incoloro (9.79 g) que fue usado sin purificación adicional. metiléster del ácido 3- (2- ter-butoxicarbonilaminoetilamino) -4-nitrobenzoico Un matraz de 2L equipado con barra de agitación fue cargado con 1,4-diocano (300 mi), DMF (40 mi), K2C03 (10 g) y ácido 3-fluoro-4-nitrobenzoico (9.7 g) . Se agregó mono-N-Boc-1 , 2-diaminoetano (8.6 g) a la mezcla de reacción y fue agitada durante 12 horas a 60°C. La mezcla de reacción fue concentrada y el residuo fue disuelto en CH2C12 (400 mi) y H20 (500 mi) . La mezcla heterogénea fue transferida a un embudo de separación en donde la fase acuosa fue separada y re-extraida con CH2CI2 (2 x 100 mi) . Las fases orgánicas fueron combinadas y lavadas con H20 (5 x 100 mi) , secadas sobre Na2S04, filtradas y concentradas bajo presión reducida para proporcionar el compuesto de titulo como un sólido anaranjado (14 g, 84%).
Metiléster del ácido -amino-3- ( 2- ter-butoxicarbonilamino-etilamino) -benzoico Un matraz de fondo redondo de 2L equipado con barra de agitación fue cargado con una suspensión de Pd(OH)2 al 20% y 1,4-dioxano (400 mi). Se agregó metiléster del ácido 4-amino-3-(2-ter-butoxicaronilamino-etilamino) benzoico (14 g) a la suspensión, la mezcla de reacción fue hidrogenada (globo) durante 48 horas (hasta que el material de partida se había consumido) seguido por la adición de K2CO3 (100 g) fue agregado o a la mezcla y agitado por 12 horas adicionales para remover trazas de agua. La suspensión fue filtrada para remover el Pd(OH)2 y K2C03. El filtrado fue usado en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Metiléster del ácido 3- (2- ter-butoxicarbonilaminoetil) -2-oxo-2 , 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxílico La solución anterior fue tratada con un exceso de carvonildiimidazol (26.8 g, 4 eq) y calentada a 90°C durante 4 horas. El 1,4-dioxano fue removido y el residuo fue triturado con agua (1.5 L) . El precipitado resultante fue recolectado mediante filtración de vacio y lavado varias veces con agua (5 x 500 mi) . El producto crudo fue disuelto en una cantidad mínima de CH2CI2 y purificado mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (metanol/CH2Cl2 al 10% para elución) para proporcionar el producto deseado como un sólido blanco decolorado (11.8 g, 85%). Ácido 3- ( 2- er-vutoxicarbonilaminoetil ) -2-oxo-2, 3-dihidro-lfl-benzoimidazol-5-carboxílico Un matraz de 2L equipado con barra de agitación fue cargado con 1,4-dioxano (70 mi), metiléster del ácido 3-(3-ter-butoxicarbonilaminoetil ) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-carboxílico (10.4 g) y LiOH (3.7 g) disuelto en H20 (300 mi). La solución de reacción fue agitada durante 6 horas a 65°C. La mezcla fue concentrada y el residuo crudo fue disuelto en H20. La solución fue neutralizada con HC1 concentrado (acuoso) y el precipitado resultante fue recolectado mediante filtración al vacio. El sólido fue lavado varias veces con H20 y secado a alto vacio durante toda la noche para proporcionar el producto deseado como un sólido blanco (8.66 g, 87%).
Sal de TFA del ácido 3- ( 2-amino-etil ) -1- ( 2-isopropil-5-metilciclohexancarbonil ) -2-oxo-2 , 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico En un recipiente de reacción de 100 mi equipado con barra de agitación se cargó con THF (20 mi), D AP (1.8 g) y ácido 3- ( 2- er-butoxicarbonilaminoetil ) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxílico (4 g) . La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y tratada con cloruro de mentoilo (2.9 g) . Se permite que la mezcla de reacción se caliente a temperatura ambiente y es concentrada. Se agregó HC1 acuoso 1 N y CH2C12 (50 mi). La mezcla heterogénea fue transferida a un embudo de separación en donde la fase acuosa fue separada y re-extraida con acetato de etilo (2 x 100 mi). Las fases orgánicas fueron combinadas y lavadas con HC1 1 N (2 x 50 mi), H20 (50 mi), salmuera (100 mi) , secadas sobre MgS04, filtradas y concentradas bajo presión reducida. El residuo fue purificado mediante cromatografía instantánes sobre gel de sílice (4:1 CH2CI2/THF para elución) proporcionando el compuesto de titulo como un sólido incoloro (3.2 g, 52%).
Sal de TFA de amida del ácido 3- (2-amino-etil ) -1- (2-isopropil-5-metil-ciclohexancarbonil ) -2-oxo-2 , 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxílico (Compuesto # 41) Un recipiente de reacción equipado con barra de agitación se cargaron DMF (5 mi), ácido 3- (2-amino-etil) -1- (2-isopropil-5-metilciclohexancarbonil ) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxílico (1.5 g, 3.9 mmol), EDC (824 mg, 4.3 mmol), HOBt (581 mg, 4.3 mmol), DIEA (1.11 g, 8.6 mmol) y NH4CI (230 mg, 4.3 mmol) . La mezcla de reacción fue calentada vía microondas a 60°C durante 10 minutos y fue vertida a una mezcla de acetato de etilo (50 mi) y HC1 1 N (50 mi) . La mezcla heterogénea fue transferida a un embudo de separación en donde la fase acuosa fue separada y re-extraida con acetato de etilo (2 x 50 mi) . Las gases orgánicas fueron combinadas y lavadas con HC1 1 N (100 mi), H20 (2 x 100 mi), NaHC03 saturado (3 x 100 mi), salmuera (100 mi), secadas sobre MgS04, filtradas y concentradas bajo presión reducida, El residuo fue disuelto en TFA/H20 al 95% y agitado durante 2 horas y concentrado El producto crudo fue disuelto en acetonitrilo/H20 al 30% y purificado mediante HPLC preparativa (Ultro 120 (10 um) C18Q) utilizando un gradiente de acetonitrilo/H20 al 10-60% (con TFA al 0.1%). Las fracciones puras fueron combinadas, concentradas y liofilizadas para proporcionar un sólido incoloro esponjoso claro (940 mg, 61%) . S (ESI) m/z 387 (M+ + 1) .
Sal TFA de ( 2-dietilamino . etil ) amida del ácido 3-(2-amino-etil) -1- (2-isopropil-5-metilciclohexancarbonil) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxílico (Compuesto # 44) En un procedimiento similar a la síntesis del Compuesto # 41, el Compuesto # 44 fue preparado a partir de N' ,_V'-dietiletan-l, 2-diamina. MS (ESI) m/z 486 (M+ + 1).
Sal de TFA de etilamida del ácido 3- (2-amino-etil) -1- (2-isopropil-5-metilciclohexancarbonil) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxílico (Compuesto # 47) En un procedimiento similar a la síntesis del Compuesto # 41, el Compuesto # 47 fue preparado a partir de etilamina. MS (ESI) m/z 415 (M+ + 1) .
Sal de TFA de piridin-3-ilamida del ácido 3- ( 2-amino-etil ) -1- ( 2-isopropil-5-metilciclohexancarbonil ) -2-oxo-2, 3-dihidro-lfí-benzoimidazol-5-carboxílico (Compuesto # 48) En un procedimiento similar a la síntesis del Compuesto # 41, el Compuesto # 48 fue preparado a partir de piridin-3-ilamina. MS (ESI) m/z 464 (M+ + 1).
Ejemplo 4 Síntesis de compuestos de dihidrobenzoimidazol adicionales de Fórmula I-E Este ejemplo revela metodología para la síntesis de moduladores de Trp-p8 de dihidrobenzoimidazol de Fórmula I-E. ter-butiléster del ácido [2- ( 5-metil-sulfanil-2-nitro-fenilamino) -etil] -carbámico En un matraz de fondo redondo de 1.litro equipado con barra de agitación fue cargado con DIVISO (200 mi), K2C03 (13 g, 0.10 mol) y 2 , 4-difluoro-l-nitrobenceno (5 g, 0.03 mol). La mezcla de reacción fue tratada con Mono-N-Boc-1, 2-diaminoetano (5 g, 0.32 mol) y agitada a temperatura ambiente durante 18 horas. Se agregó tiometoxido de sodio (2.44 g, 0.03 mol) a la mezcla de reacción y fue agitado durante 12 h adicionales a 60°C. La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y triturada con agua (800 mi) y el precipitado amarillo que se formó fue recolectado mediante filtración al vacio. El precipitado fue lavado varias veces con agua (5 x 500 mi) y secado a alto vacio durante 48 horas para dar el producto deseado como un sólido amarillo brillante (8.7 g, 71%). ter-butiléster del ácido [2- ( 2-amino-5-metil-sulfanil-fenilamino) -etil] -carbámico En un matraz de fondo redondo de 500 mi equipado con barra de agitación fue cargado con MeOH (200 mi), ter-butiléster del ácido [2- ( 5-metil-sulfanil-2-nit o-fenilamino) -etil] -carbámico (5 g, 0.02 mol) y NiCl2 (19 g, 0.05 mol) y enfriado a 0°C. Se agregó NaBH4 (1.7 g, 0.05 mol) (en cuatro porciones iguales) a la mezcla de reacción durante un periodo de una hora. Una vez que la adición estaba completa, la mezcla de reacción fue agitada por dos horas adicionales. Se agregaron salmuera (100 mi) y acetato de etilo (200 mi) a la mezcla de reacción. La mezcla heterogénea fue transferida a un embudo de separación en donde la fase acuosa fue separada y re-extraida con acetato de etilo (2 x 100 mi). Las fases orgánicas fueron combinadas y lavadas con H20 (3 x 100 mi), salmuera (100 mi), secadas sobre gS04, filtradas y concentradas bajo presión reducida para proporcionar un residuo negro. El producto crudo fue disuelto en 100 mi de CH2C12 y separado en dos matraces redondos de 100 mi (50 mi en cada uno) y ambos fueron concentrados bajo presión reducida y usados sin purificación adicional . 3- (2-amino-etil) -1- ( 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarbonil ) -5-metilsulfanil-1 , 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona (Compuesto # 42) En un procedimiento similar a la síntesis del Compuesto # 36, el Compuesto # 42 fue preparado a partir del ter-butiléster del ácido [2- ( 2-amino-5-metil-sulfanil-fenilamino) -etil] -carbámico crudo. MS (ESI) m/z 390.1 (M+ + 1). 3- (2-amino-etil) -1- ( 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarbonil ) -5- metilsulfinil-1 , 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona (Compuesto # 43) Un matraz de reacción de 10 mi fue cargado con 3- (2-amino-etil) -1- (2-isopropil-5-metil-ciclohexancarbonil) -5-metilsulfanil-1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona (Compuesto # 42, 300 mg) y TFA/D SO al 1% (1 mi) . Se burbujeó oxigeno a través de la mezcla de reacción durante 20 minutos y fue sellado. La mezcla de reacción fue agitada durante 18 horas y el producto crudo fue purificado mediante HPLC preparativa (Ultro 120 (10 um) C18Q) utilizando un gradiente de acetonitrilo/H20 al 40-60% (con TFA al 0.1%). Las fracciones puras fueron combinadas, concentradas y liofilizadas para dar un sólido incoloro esponjoso claro (296 mg, 94%) . MS (ESI) /z 406 (M+ + 1) . 3- ( 2-amino-etil ) -1- (2-isopropil-5-metil-ciclohexancarbonil) -5-metilsulfonil-1 , 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona (Compuesto # 39) En un matraz de reacción de 10 mi equipado con barra de agitación fue cargado con 3- (2-amino-etil) -1- (2-isopropil-5-metil-ciclohexancarbonil ) -5-metilsulfanil-1 , 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona (Compuesto # 42), Oxona (1 g) y metanol acuoso al 20% (5 mi) . La mezcla de reacción esa titulada con NaHC03 (acuoso) a un pH de ~ 5. La mezcla de reacción es agitada durante una hora. La mezcla de reacción es filtrada y concentrada. El producto crudo fue disuelto en acetonitrilo/H2<0 al 30% y purificado mediante HPLC preparativa (Ultro 120 (10 um) C18Q) utilizando un gradiente de acetonitrilo/H20 al 15-50% (con TFA al 0.1%). Las fracciones puras fueron combinadas, concentradas y liofilizadas para dar un sólido incoloro esponjoso (79 g, 94%). S (ESI) m/z 422 (M+ + 1).
Ejemplo 5 Síntesis de compuestos de Fórmula I-B Este ejemplo revela metodología para la síntesis de moduladores de Trp-p8 de dihidrobenzoimidazol de Fórmula I-A. ( -metoxi-2-nitrofenil ) amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarboxílico 4-metoxi-2-nitroanilina (5 g, 0.0018 mol) fue disuelta en piridina (50) y tratada con cloruro de benzoilo (3.57 g, 0.018 mol). La mezcla de reacción fue calentada a 50°C y agitada vigorosamente durante 6 horas. La mezcla de reacción fue enfriada a temperatura ambiente y vertida en una mezcla de CH2C12 (100 mi) y HC1 1 N (100 mi)). La mezcla heterogénea fue transferida a un emvudo de separación en donde la fase acuosa fue separada y re-extraida con CH2C12 (2 x 100 mi) . Las fases orgánicas fueron combinadas y lavadas con HC1 1 N (8 x 100 mi), H20 (1 x 100 mi), NaOH 1 N (2 x 100 mi), salmuera (100 mi), secadas sobre MgSC , filtradas y concentradas bajo presión reducida. El residuo fue purificado mediante cromatografía rápida sobre gel de sílice (acetato de etilo/hexano 20 a 50% para elución) proporcionando el compuesto de título como un sólido incoloro (4.9 g, 83%). (2-amino-4-metoxifenil) -amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarboxílico La ( 4-metoxi-2-nitrofenil ) -amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarboxílico (4.9 g) fue disuelta en una suspensión de Pd-C al 10% (5 g) y THF (150 mi) . La mezcla de reacción fue hidrogenada sobre Pd(OH)2 al 20% durante 48 horas con un globo. La mezcla de reacción fue filtrada y concentrada para dar el compuesto deseado en suficiente pureza para usar en la siguiente reacción sin purificación adicional. ter-butiléster del ácido (l-{2- [2-isopropil-5-metil-ciclohexancarbonil ) -amino] -5-metoxi-fenilcarbamoil}-etil ) carbámico La ( 2-amino-4-metoxifenil ) -amida del ácido 2-isopropil-5-met il-ciclohexancarboxilico (5 g, 0.016 mol), EDC (4.2 g, 0.022 mol), HOBt (2.97 g, 0.022 mol) y DIEA (8.53 g, 0.066 mol) fueron disueltos en DMF (50 mi) y agitados a 45°C durante 6 horas. La mezcla de reacción fue enfriada a temperatura ambiente y vertida en una mezcla de acetato de etilo y HC1 1 N (100 mi) . La mezcla heterogénea fue transferida a un embudo de separación y las fases fueron separadas. La fase acuosa fue re-extraida con acetato de etilo ( ) y las fases orgánicas fueron combinadas, lavadas con HC1 1 N (5 x 100 mi), H20 (100 mi), NaOH saturado 1 N (2 x 100 mi), salmuera (100 mi) , secadas (MgS04) , filtradas y concentradas para dar un sólido ligeramente amarillo (7.5 g) . Una porción del producto crudo (1.5 g) fue purificado mediante cromatografía instantánea con gel de sílice (Si02, acetato de etilo/hexano al 30% para elución) para dar el producto deseado como un sólido incoloro (1.6 g) .
Sal de TFA de [2- ( 2-aminopropionilamino ) -4-metoxifenil ] amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarboxílixo (Compuesto # 1) El ter-butiléster del ácido ( l-{2- [ 2-isopropil-5- metil-ciclohexancarbonil ) -amino] -5-metoxi-fenilcarbamoil}- etil ) carbámico (1 g) fue disuelto en TFA/H20 al 95% y agitado durante una hora. La mmezcla de reacción fue concentrada y el producto crudo fue disuelto en acetonitrilo/fi20 al 30% y purificado mediante HPLC preparativa (Ultro 120 (10 im) C18Q) utilizando un gradiente de acetonitrilo/H20 al 40-60% (con TFA al 0.1%). Las fracciones puras fueron combinadas, concentradas y liofilizadas para dar un sólido incoloro esponjoso claro (880 mg) S (ESI) m/z ( + + 1) .
Sal de TFA de [2- (2-amino-etilamino) -4-metilsulfanil-fenil] amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarboxílixo (Compuesto # 4) Un matraz de fondo redondo de 100 mi equipado con barra de .agitación que contiene el ter-butiléster del ácido [2-( 2-amino-5-metil-sulfanil-fenilamino ) -etil ] -carbámico crudo fue cargado con THF (50 g) y DMAP (1.8 g, 0.02 mol). La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y se agregó gota a gota cloruro de mentoilo (1.5 g, 0.008 mol) en un periodo de 5 minutos. Se permite que la mezcla de reacción se caliente a temperatura ambiente y es agitada por 30 minutos adicionales. EL producto crudo fue disuelto en una cantidad mínima de CH2C12 y purificado mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (hexano/acetato de etilo al 10% para elución) que da como resultado un sólido ligeramente amarillo (1.76 g, 61%). El material purificado fue disuelto en 20 mi de TFA/H20 al 95% y agitado durante una hora y concentrado. El producto crudo fue disuelto en acetonitrilo/H20 al 30% y purificado mediante HPLC preparativa (Ultro 120 (lOum) C18Q) utilizando acetonitrilo/H20 (con TFA al 0.1%). Las fracciones puras fueron combinadas, concentradas y liofilizadas para dar un sólido incoloro esponjoso claro (1.41 g) . MS (ESI) m/z 364 (M+ +1) ter-butil-éster del ácido [2- (4-fluoro-2-nitro-benzoilamino) -etil] -carbámico En un matraz de fondo redondo de 100 mi equipado con una barra de agitación fue cargado con acetonitrilo (40 mi) , EDC (1.12 g, 5.9 mmol), HOBt (0.796 g, 5.9 mmol) , DIEA (3.76 mi, 21.6 mmol) y Mono-N-Boc-1 , 2-diaminoetano (0.865 g, 5.4 mmol) . La mezcla de reacción fue agitada durante ~ 18 horas y concentrada. El residuo fue disuelto en una mezcla de acetato de etilo (50 mi) y HC1 1 N (50 mi) . La mezcla heterogénea fue transferida a un embudo de separación en donde la fase acuosa fue separada y re-extraida con acetato de etilo (2 x 100 mi). Las fases orgánicas fueron combinadas y lavadas con HCl 1 N (2 x 50 mi), H20 (1 x 50 mi), NaHC03 saturado (3 x 50 mi), salmuera (100 mi), secadas sobre gS04, filtradas y concentradas bajo presión reducida. El residuo fue purificado mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (acetato de tilo/hexano 30% a 50% para alución) proporcionando el compuesto de título como un sólido ligeramente morado (1.12 g, 63%) . ter-butiléster del ácido [2- ( 5-metil-sulfanil-2-nitro-fenilamino) -etil] -carbámico En un recipiente de reacción 10 equipado con una barra de agitación fue cargado con DMF (5 mi), NasMe (0.162 g, 2.3 mmol) y ter-butiléster del ácido [2- (4-fluoro-2-nitro-benzoilamino) -etil] -carbámico (0.757 g, 2.3 mmol). La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 2 horas y vertida a una mezcla de acetato de etilo (20 mi) y H20 (25 mi) . La mezcla heterogénea fue transferida a un embudo de separación, en donde la fase acuosa fue separada y re-extraída con acetato de etilo (2 x 10 mi) . Las fases orgánicas fueron combinadas y lavadas con HC1 1 N (2 x 10 mi), H20 (1 x 10 mi), NaHC03 saturado (2 x 10 mi), salmuera (10 mi), secadas sobre MgS04, filtradas y concentradas bajo presión reducida. El residuo fue purificado mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (acetato de etilo/hexano 30% a 50% para elución) proporcionando el compuesto de título como un sólido amarillo claro (500 mg, 61%) .
N- ( 2-amino-etil-2- [ ( 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarbonil ) -amino] -4-metilsulfanil-benzamida (compuesto # 2) En un procedimiento similar a la síntesis del Compuesto # 42, el Compuesto # 2 fue preparado a partir del ter-butiléster del ácido [2- ( 5-metil-sulfanil-2-nitro-fenilamino) -etil] -carbámico. MS (ESI) m/z 295 (M+ +1).
Ejemplo 6 Síntesis de compuestos de Fórmula I-B Este ejemplo revela metodología para la síntesis de moduladores Trp-p8 de dihidrobenzoimidazol de Fórmula I-B. 2- ( 5-amino-3-fenil-pirazol-l-il ) etanol El benzoilacetonitrilo (25 g, 0.17 mol) fue suspendido en una mezcla de 125 mi de alcohol anhidro grado reactivo y 20 mi de ácido acético glacial. La 2-hidroxietilhidrazina (14.4 g, 1.1 equivalentes) disuelta en 36 mi de alcohol fue agregada todo a la vez. La mezcla fue calentada a reflujo durante 4 horas, enfriada, se agregó agua para compensar 500 mi de volumen total y la solución fue enfriada en un refrigerador durante toda la noche. Los cristales fueron filtrados en frío en un embudo de Buchner, lavados con agua fría y secados al alto vacio para dar el producto deseado (27.2 g, 79%). [2- ( 2-hidroxi-etil ) -5-fenil-2fl-pirazol-3-] -amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarboxilico El 2- ( 5-amino-3-fenil-pirazol-l-il ) etanol (87.3 g, 0.43 mol) fue suspendido en una mezcla de diclorometano (500 mi) y piridina (40 mi) y enfriado en un baño de hielo. El cloruro de mentoilo (100 g, 1.15 equivalentes) fue disuelto en diclorometano (200 mi) y agregado gota a gota de un embudo de adición protegido por un tubo de secado de CaCl2. Después de los 45 minutos requeridos para la adición completa, el baño de hielo fue removido y la agitación fue proseguida durante 3 horas. Se agregó HC1 1 (acuoso, 200 mi) y las fases fueron separadas. Las fases orgánicas fueron re-extraidas con HC1 1 M (acuoso, 100 mi) . El HC1 1 M fue otra vez agregado y el diclorometano fue removido bajo presión reducida danfo como resultado una precipitación profusa. El precipitado fue recolectado mediante precipitación al vacio y el sólido fue lavado con agua varias veces. El residuo sólido gue titulado con éter/hexano 1:1 400 mi (agitación rápida durante 2 horas). El sólido fue filtrado sobre un embudo de Buchner y lavado con hexanos. Después del secado por aire durante toda la noche, el secado adicional fue efectuado al alto vacio durante 24 horas para dar un sólido incoloro (144.4 g) . 2-{5- [ 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarboil ) -amino) -3-fenil-pirazol-l-il}-etiléster del ácido metansulfónico La [2- ( 2-hidroxi-etil ) -5-fenil-2fí-pirazol-3- ] -amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarboxilico (140 g, 0.38 mol) fue suspendida en CH2C12 (500 mi) y piridina (47 mi, 1.5 equivalentes) fue agregada seguida por cloruro de metansulfonilo (44 mi, 4.5 equivalentes) a temperatura de baño de hielo. Se permite que la solución se caliente a temperatura ambiente y fue agitada durante 12 horas adicionales. Se agregó agua (500 mi) y la mezcla fue agitada durante 0.5 horas. El diclorometano fue removido mediante evaporación dejando un precipitado de un litro de grumos granulares amarillos. La decantación fue seguida por tratamiento con 500 mi de agua adicional y decantación otra vez. Una cantidad final de 500 mi de agua fue usada para transferir el sólido a un embudo de Buchner en donde gue secado por succión (rendimiento no determinado) . [2-azido-etil ) -5-fenil-2fí-pirazol-3-il ] -amida del ácido 2-isopropil-5-meti1-ciclohexancarboxilico El mesilato crudo (0.38 mol) fue disuelto en DMSO (500 mi) con azida de sodio (3.7 g, 1.5 equivalentes) . La mezcla fue calentada a 70°C durante 6 hotas. Después del enfriamiento, agua (1 L) y acetato de etilo (500 mi) fueron agregados y la mezcla fue agitada en un embudo de separación. Las capas fueron separadas y la capa orgánica fue lavada secuencialmente con cantidades de 200 mi de agua aHC03 saturado y salmuera. La capa orgánica fue secada con Na2SÜ , decantada y el solvente removido en el dispositivo rotovap. El rendimiento no fue determinado debido a que el producto no estaba completamente libre de solvente antes de moverse a la siguiente etapa. 2-amino-etil) -5-fenil-2H-pira2ol-3-il] -amida del ácido 2-isopropil-5-metil-cicohexan carboxilico . El compuesto azido crudo fue disuelto en 500 mi de alcohol absoluto grado reactivo y tratado con 5 gramos de carbón activado. Este fue agitado durante varias horas filtrado través de Celite. Aproximadamente 300 mi de solvente fueron removidos en el dispositivo rotovap y reemplazados con solvente nuevo. Se agregó Pd-C al 10% (4.8 g, -50% en peso H20) y una corriente estable de hidrógeno fue mantenida sobre la mezcla de reacción con agitación rápida durante 24 horas. El hidrógeno fue desconectado y se agregó lentamente HC1 conc. (32 mi). Después de filtración a través de Celite, el filtrado fue concentrado sobre el dispositivo rotovap dando como resultado pre-filtración profusa. Todavía húmedo, el diisopropil éter fue agregado al residuo y la suspensión fue agitada rápidamente durante 0.5 horas. El sólido fue filtrado a un embudo de Buchner y lavado con éter dietílico. Se produjo un polvo blanco secado por aire. Rendimiento: 108.6 g (71% en tres etapas).
Sal de TFA [ 2-amino-etil ) -5-fenil-2H-pirazol-3-il ] -amida de ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexan-carboxílico (Compuesto #16) La conversión a la sal de trifluoroacetato sal: el sólido fue neutralizado y repartido en un embudo de separación mediante agitación con 500 mi de éter y 150 mi de NaOH 2 N. Cuando el sólido estaba completamente disuelto, las capas fueron separadas y la fase orgánica fue secada con Na2C03. La Decantación y mezcla con 23 mi de ácido trifluoroacético fue seguida por evaporación de solvente y secado a alto vacio. La espuma fue molida y triturada con 300 mi de hexanos (agitación rápida durante 3 horas) que después de la filtración produjo un polvo blanco que contiene mucho menos éter. El solvente fue finalmente removido por completo mediante calentamiento en un matraz de fondo redondo a 80°C durante 6 horas.
Sal de TFA [ 2- ( 2-amino-etil ) -5-furan-2-il-2H-pirazol-3-il ] -amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexan carboxilico (Compuesto #14) En un procedimiento similar a la síntesis del Compuesto #16, el Compuesto #14 fue preparado a partir de 2-furoilacetonitrilo y 2-hidroxietilhidrazina . Este material fue purificado mediante HPLC preparativa (Ultro 120 (10 um) C18Q) utilizando un gradiente de acetonitrilo/H20 de 40-60% (con TFA al 0.1%). MS (ESI) m/z 344 (M++l).
Sal de [2- (2-amino-etil) -5- ( l-metil-lH-pirrol-2-il ) -2H-pirazol- 3-il ] -amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexan carboxilico (Compuesto #17) En un procedimiento similar a la síntesis de Compuesto #16, el Compuesto #17 fue preparado a partir de 1-metil-lH-pirrol-2-carbaldehído y 2-hidroxietilhidrazina. Este material fue purificado mediante HPLC preparativa (Ultra 120 (10 um) C18Q) utilizando un gradiente de acetonitrilo/H20 de 40-60% (con. TFA al 1%) gradiente. MS (ESI) m/z 372 (M++l) .
Sal de TFA de [ 2- ( 2-amino-etil ) -5- ( l-metil-lH-pirrol-2-il ) -2H- pirazol-3-il ] -amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexan carboxilico (Compuesto #15) En un procedimiento similar a la síntesis del Compuesto #16, el Compuesto #15 fue preparado a partir de 2- benzoilacetonitrilo y ter-butil éster del ácido (2-diazenil- etil ) -carbámico . Este material fue purificado mediante HPLC preparativa (Ultra 120 (10 um) C18Q) utilizando un gradiente de acetonitrilo/H20 de 40-60% (con TFA al 0.1%) . MS (ESI) m/z 383 (M++l) .
Sal de TFA de [ 2- ( 2-amino-etil ) -5- ( l-metil-lH-pirrol-2-il ) -2H- pirazol-3-il] -amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexan carboxilico (Compuesto #18) En un procedimiento similar a la síntesis del Compuesto #16, el Compuesto #18 fue preparado a partir del benzoilacetonitrilo y ter-butil éster del ácido (3-diazenil-propil) -carbámico. Este material fue purificado mediante HPLC preparativa (Ultra 120 (10 um) C18Q) utilizando un acetonitrilo/H20 de 40-60% (con TFA al 0.1%). MS (ESI) m/z 383 ( ++l) . Ejemplo 7 Síntesis de Compuestos de Fórmula I-C Este ejemplo revela metodología para la síntesis moduladores de Trp-p8 de dihidrobenzoimidazol de Fórmula I-C Esquema de reacción 6. ( 2-hidroxi-2-fenil-etil ) -amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexan carboxilico Un matraz de fondo redondo de 500 mi equipado con barra de agitación fue cargado con CH2C12 (200 mi), DIEA (28 g, 0.219 mol) y 2-amino-l-fenil-etanol (10 g, 0.073 mol) y enfriado a 0°C. Se agregó gota a gota cloruro de mentoilo (14.8 g, 0.073 mol) durante un periodo de 15 minutos. Una vez que la adición estaba consumada, se permitió que la reacción se calentara a temperatura ambiente y fue agitada durante 2 horas. Se agregó CH2C12 (100 mi) y HC1 1 N (100 mi) a la mezcla de reacción y fue agitada por 20 minutos adicionales. La mezcla heterogénea fue transferida a un embudo de separación en donde la fase acuosa fue separada y reextraida con CH2C12 (2 x 100 mi) . Las fases orgánicas fueron combinadas y lavadas con en HC1 (8 x 100 mi), H20 (1 x 100 mi), NaOH 1 N (2 x 100 mi), salmuera (100 mi), secada sobre MgS04, filtrada y concentrada bajo presión reducida. El residuo fue eluido a través de un tapón de gel de sílice (acetato de etilo/hexano al 50% para elución) proporcionado el compuesto del título como un sólido incoloro (18.8 g, 85%) .
Sal de TFA de [2- (2-amino-4-etoxi) -2-fenil-etil ] -amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarboxilico (Compuesto #30) Un matraz de fondo redondo de 500 mi equipado con barra de agitación fue cargado con THF anhidro (200 mi) y (2-hidroxi-2-fenil-etil) -amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarboxílico (10 g, 0.03 mol). Se agregó NaH (0.87 g, 0.04 mol) en una porción y fue agitada durante 10 minutos (hasta que el H2 se detuvo de ser producido) . Se agregaron bromuro de hidrógeno de l-bromoetil-2-amina (6.74 g, 0.033 mol) y NaH (0.87g, 0.036 mol) a la mezcla de reacción y se agitó durante 2 horas. Se agregó un equivalente adicional de NaH (0.87 g, 0.036 mol) y fue agitado por 2 horas adicionales. El NaH en exceso fue enfriado al vertir la mezcla de reacción sobre hielo. Se agregaron acetato de etilo (200 mi) y H20 y se agitó durante 20 minutos. La mezcla heterogénea fue transferida a un embudo de separación en donde la fase acuosa fue separada y reextraida con acetato de etilo (2 x 100 mi) . Las fases orgánicas fueron combinadas y lavadas con H20 (1 x 100 mi), salmuera (100 mi), secada sobre MgS04, filtradas y concentradas bajo presión reducida. El producto crudo fue disuelto en acetonitrilo/H20 al 30% y purificado mediante HPLC preparativa (Ultro 120 (10 um) C18Q) utilizando un gradiente de acetonitrilo/H20 de 30-60% (con TFA al 0.1%). Las fracciones puras fueron combinadas, concentradas y liofilizadas para dar un sólido incoloro esponjoso claro (9.4 g, 62%). MS (ESI) m/z 347 (M++l).
Sal de TFA de [2- ( 3-amino-4-propoxi ) -2-fenil-etil ] -amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarboxílico (Compuesto #31) En un procedimiento similar a la síntesis del Compuesto #30, el Compuesto #31 fue preparado a partir de (2-hidroxi-2-fenil-etil ) -amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarboxílico y bromuro de hidrógeno de 1-Bromopropil-3-amina. Este material fue purificado mediante HPLC preparativa (Ultro 120 (10 um) C18Q) utilizando un gradiente de acetonitrilo/H20 al 40-60% (con. TFA al 1%) . S (ESI) m/z 361 (M++l) .
Ejemplo 8 Síntesis de compuestos de dihidrobenzoimidazol adicionales de Fórmula I-D Este ejemplo revela metodología para la síntesis de moduladores de Trp-p8 de dihidrobenzoimidazol de Fórmula I-D NiCl, Na(CN)H3 Esquema de reacción 7 [2- (2-bromo-fenil) -etil] -amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarboxilico Un matraz de fondo redondo de 100 mi equipado con barra de agitación fue cargado con CH2CI2 (30 mi), 2-bromo-fenetilamina (1.0 g, 5.00 mmoles) y trietilamina (684 µ?, 5.05 inmoles) . La solución de reacción fue tratada con cloruro de mentoilo (1.02 g, 5.05 mmoles) en una porción y agitada a temperatura ambiente durante 30 minutos. La reacción fue diluida con CH2CI2 (50 mi) y lavado con agua (3 x 100 mi) . La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio anhidro y concentrada bajo presión reducida para dar un aceite espeso (1.8 g) . El producto fue usado para la siguiente etapa sin purificación .
Sal de TFA de { 2- [2- (2-amino-etilamino) -fenil] etil } -amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarboxilico (Compuesto #33) Un recipiente de reacción de microondas de 25 mi equipado con barra de agitación fue cargado con diaminoetano neto (10 mi), [ 2- ( 2-bromo-fenil ) -etil ] -amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarboxílico (1.5 g, 4.1 mmoles) y polvo de Cu (390 mg, 6.147 mmol, 1.5 eq.). El recipiente de reacción fue sometido a microondas a 180°C durante 40 minutos. La mezcla de reacción fue transferida a un matraz de fondo redondo y concentrada. El residuo fue disuelto en DMSO (1 mi) y purificado mediante HPLC preparativa (Ultro 120 (10 um) C18Q) utilizando un gradiente de acetonitrilo/H20 de 10-40% (con TFA al 0.1%). Las fracciones puras fueron combinadas, concentradas y liofilizadas para dar un sólido incoloro (1 g, 52%) (MS (ESI) m/z 346 (M++l) . [2- (2-ciano-fenil) -etil] -amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarboxílico Un recipiente de reacción de microondas de 20 mi equipado con barra de agitación fue cargado con [2-(2-bromo-fenil-etil] -amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarboxílico (1.54 g, 4.2 mmoles) , CuCN (0.60 g, 6.4 mmoles) y NMP (10 mi). El recipiente de reacción fue sometido a microondas a 180°C durante 40 minutos. La mezcla de reacción fue transferida a un matraz de fondo redondo y concentrada. El residuo fue purificado mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (acetato de etilo/hexano al 10% para elución) para dar un sólido incoloro (1.25 g, 81%) . [2- (2-aminometil-fenil) -etil] -amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarboxilico (Compuesto #34) Un matraz de fondo redondo de 100 mi equipado con barra de agitación fue cargado con [2- (2-ciano-fenil) -etil] -amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarboxílico (1.25 g, 4.0 mmoles) y metanol (50 mi). NiCl2 (1.14 g, 8.8 inmoles, ) y NaBH4 (0.64 g, 16.8 mmoles) . Se agregó NaBH4 en una porción pequeña en un periodo de 30 minutos y fue agitado durante 1 hora. Se agregó NaBH4 (0.20 g) y la mezcla de reacción fue agitada por 20 minutos adicionales. La mezcla de reacción se hizo pasar a través de una retorta de celite y fue concentrada bajo presión reducida. El residuo negro fue disuelto en una cantidad mínima de acetonitrilo y se hizo pasar a través de un cartucho de gel de sílice C18 y purificado mediante HPLC preparativa (Ultro 120 (10 um) C18Q) utilizando un gradiente de acetonitrilo/H20 de 10-40% (con TFA al 0.1%). Las fracciones puras fueron combinadas, concentradas y liofilizadas para dar un sólido incoloro (1.1 g) . MS (ESI) m/z 317 (M++l).
Ejemplo 9 Síntesis de Compuestos adicionales de Fórmula I-C Este ejemplo revela metodología para la síntesis de moduladores de Trp-p8 de Fórmula I-C Esquema de reacción 7 (2-oxo-2-fenil-etil) -amida del ácido 2-isopropilo-5-metil-ciclohexancarboxílico Un matraz de fondo redondo de 20 mi equipado con barra de agitación fue cargado con ( 2-hidroxi-2-fenil-et il ) -amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarboxí lico (100 mg, 0.33 mmoles) y ácido acético (1 mi) . Una solución de Cr03 (36 mg, 0.363 mmoles, 1.1 eq) en ácido acético (500 µ?) y agua (100 µ?) fue agregada lentamente a la mezcla de reacción. La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 15 minutos y diluida con acetato de etilo (30 mi) y NaHC03 (aq) saturada (30 mi) . La mezcla heterogénea fue transferida a un embudo de separación en donde la fase acuosa fue separada y re-extraída con acetato de etilo (2 x 10 mi) . Las fases orgánicas fueron combinadas y lavadas con NaHC03 saturado (3 x 10 mi), H2O (10 mi) , salmuera (10 mi), secada sobre a2SÜ4, filtrada y concentrada bajo reducida. El residuo fue purificado mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (acetato de etilo/hexano 30% a 50% para elución) proporcionando el compuesto del título como sólido blanco (92 mg, 93%). (2-amino-2-fenil-etilo) amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarboxílico Un recipiente de reacción de microondas de 25 mi fue agitado con una barra de agitación y cargado con (2-oxo-2- fenil-etil ) -amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarboxilico (80 mg) y amoniaco (1.5 mi, 7 M en metanol) . Una gota de ácido acético y NaCNBH3 (20 mg) fueron agregados a la mezcla de reacción y sometida a microondas a 80°C durante 80 min. El residuo fue tomado en acetato de etilo (30 mi) y NaHC03 (aq.) saturado (30 mi) . La mezcla heterogénea fue transferida a un embudo de separación en donde la fase acuosa fue separada y re-extraida con acetato de etilo (2 x 10 mi) . Las fases orgánicas fueron combinadas y lavadas con NaHC03 saturado (3 x 10 mi), H20 (10 mi), salmuera (10 mi), secada sobre Na2S04, filtrada y concentrada bajo presión reducida para dar un sólido (75 mg) .
Ter-butil éster del paciente ( 1- { 2- [ (2-isopropil-5-metil-ciclohexancarbonil) -amino] -1-fenil-etilcarbamoil } -etil) carbámico Un recipiente de reacción de 15 mi equipado con barra de agitación fue cargado con THF (15 mi), Boc- ( R ) -alanina (52 mg, 0.273 mmoles) , HOBt (37.87 mg, 0.273 mmoles) , EDCI (53 mg, 0.273 mmoles) y TEA (37 µ?, 0.273 mmoles) . La mezcla de reacción fue agitada durante 15 minutos, después de lo cual se agregó (2-amino-2-fenil-etil) -amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarboxílico (75 mg, 0.248 mmoles) y agitada por 3 horas adicionales. Se agregaron acetato de etilo (10 mi) y H20 (10 mi) a la mezcla de reacción. La mezcla heterogénea fue transferida a un embudo de separación en donde la fase acuosa fue separada y re-extraida con acetato de etilo (2 x 10 mi) . Las fases orgánicas fueron combinadas y lavadas con en HC1 (2 x 10 mi), H20 (1 x 10 mi), NaHC03 saturado (3 x 10 mi), salmuera (10 mi) , secada sobre MgS0 , filtrada y concentrada bajo presión reducida. El residuo fue purificado mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice (acetato de etilo/hexano al 20% para elución) proporcionado el compuesto del título como sólido incoloro (30 mg) .
Sal de TFA de [2- ( 2-amino-propionilamino ) 2-fenil-etil] -amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexancarboxílico (Compuesto #28) Un matraz de fondo redondo de 5 mi equipado con barra de agitación fue cargado con TFA/CH2CI2 al 10% y ter-butil éster del ácido l-{ 2- [ (2-isopropil-5-metil-ciclohexancarbonil) - amino] -1-fenil-etilcarbamoil } -etil ) -carbámico (30 mg) y agitado durante 1 hora. El TFA fue removido bajo presión reducida y el residuo fue disuelto en acetonitrilo/H20 al 30% (con TFA al 0.1%) y purificado mediante HPLC preparativa (Ultro 120 (10 um) C18Q) utilizando un gradiente de acetonitrilo/H20 de 10-40% (con TFA al 0.1%). Las fracciones puras fueron combinadas, concentradas y liofilizadas para dar un sólido incoloro (17.7 mg) (MS (ESI) m/z 374 (M++l).
Ejemplo 10 Expresión de Trp~p8 en células CHO Células CHO Trp-p8 transíectadas humanas (denominadas en la presente como CHO/Trp-p8) fueron generadas para uso en experimentos de la presente invención. La expresión del polipéptido de Trp-p8 en este transíectante y la ausencia de cualquier expresión endógena en el CHO no transfectado fue confirmada mediante western blot e inmunofluorescencia utilizando un anticuerpo Trp-p8 especifico (GS2.20) también como el análisis de flujo de calcio con Icilina (l-[2-hidroxifenil ] -4- [3-nitrofenil] -1,2,3, 6-tetrahidropirimidin-2-ona) y mentol (2-isopropil-5-metil-ciclohexanol ) . Células CHO no transfectadas fueron usadas para establecer la especificidad de los efectos de los compuestos observados con CH0/Trp-p8.
Ejemplo 11 Disminución moderada por Trp-p8 en viabilidad celular enseguida de la exposición de células de CHO/Trp-p8 con compuestos agonistas de Trp-p8 candidatos a 37 °C Este ejemplo revela un análisis de viabilidad de ATP apropiado para seleccionar agonistas de Trp-p8 efectivos. El análisis de viabilidad de ATP descrito en la presente emplea células de CHO que expresan un cADN de Trp-p8 exógeno. Este ejemplo establece además que los agonistas de Trp-p8 de la presente invención son efectivos para disminuir la viabilidad de células que expresan Trp-p8. La concentración de ATP intracelular declina muy rápidamente cuando células metabólicamente activas sufren necrosis y/o apóptosis. La concentración de ATP y consecuentemente, la viabilidad celular relativa puede ser medida mediante métodos establecidos utilizando reactivos disponibles comercialmente . En la metodología de selección de agonista revelada en la presente, un compuesto que disminuye específicamente la viabilidad de células CHO/Trp-p8 es denominado como agonista. Como una selección primaria en cuanto a la eficacia y especificidad por agonistas, tanto las células CHO sin transfectar como células CH0/Trp-p8 fueron expuestas a 1 ó 10 µ de los compuestos de prueba en dimetilsulfóxido al 1% (DMSO) o 1% DMSO (control) en una placa tratada de cultivo celular de fondo negro de paredes medias de 96-cavidades . D SO fue el solvente para todos los compuestos probados. Después de 24-26 horas a 37°C, las células fueron sometidas a lisis y la concentración de ATP fue determinada vía un análisis de quimioluminiscencia utilizando un equipo de reactivos disponible comercialmente — Cell Titer-Glo (Promega; Madison, WI) . La viabilidad relativa (%), expresada como el nivel de ATP en células tratadas con compuestos expresado como porcentaje de niveles de ATP en células tratadas con el DMSO solo, fue una medida de la actividad agonista del compuesto candidato mientras más bajo es el % de viabilidad, más potente es el agonista de Trp-p8. Valores de EC50 valores fueron determinados para la mayoría de los agonistas de Trp-p8 candidatos activos a 37°C al medir la viabilidad a 8-10 concentraciones de agonista. (EC50 es definida en la presente como la concentración de agonista a la cual hay una reducción del 50% en viabilidad celular relativa) . Agonistas de Trp-p8 ejemplares de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y Fórmula I-E, que fueron eficaces en el análisis de viabilidad de ATP son presentados en la presente en las Tablas 1-5. Los datos de EC50 son designados como sigue: A = < 0.020 uM; B = 0.021-0.050 uM; C = 0.051-0.10 uM. En las Tablas 1-5, las estructuras proporcionadas son de la forma: En donde los nombres químicos son proporcionados para X y/o Y. En donde los nombres son provistos para "X/Y", los nombres son inclusivos del grupo nitrógeno. La viabilidad de células de CHO/Trp-p8 enseguida del tratamiento con agonistas de Trp-p8 ejemplares es presentada en la Figura 1.
Tabla 1 Compuestos ejemplares de fórmula l-A Compuesto Estructura # ECSO X 1 A 2-(2-amino-propion ¡lamlno)-4-rnetoxi - fenilo 2 N-(2-Amino-etil)-2-am¡no-5-met¡l- A sulfanil-fenilo 3 ÍV A 1 •(2-amino-etox¡)-naftalen-2-ilo TÓO 4 A 2-(2-amino-etilamino)-4'metil- sulfanil-fenilo 5 5 A N-(2-amino-etil)-5-metoxi-benzamida 10 6 B 2-(2-amino-butirilamino)-4- metoxi-fenilo o 7 B 2-(2-amino-3-hidroxi-propionil- amino)-4-metoxi-fenilo 15 8 B 3-(2-amino-etilamino)-naftalen-2-ilo 20 9 B N-(2-amino-etil)-2-amino-benzamida 25 2-(2-amino-3-hidroxi-propionil- 10 ? amino)-4-metoxifenilo 11 c 2-(2-amino-acetilamino)-fenilo 12 c 2-(2-amino-3-hidroxi-butiril- amino)-4-metoxi-fenilamida 13 c 2-(2-amino-acetilamino)-4-metoxi- fenilo Tabla 2 Compuestos ejemplares de Formula I-B ID Objeto Estructura EC50 X 14 A 2-(2-am¡no-etil)-5-furan-2-il- 2H-p¡razol-3-¡lo 1 1 2 25 25 Tabla 3 Compuestos ejemplares de Formula 1-C Compuesto # Estructura EC50 X 28 A 2-(2-amino-prop¡omlamino)-2- fenil-etilo 29 A 2-(2-amino-etoxi)-2-fenil-et¡lo 30 A 2-(2-amino-etox¡)-2-fenil-et¡lo 31 B 2-(3-amino-propoxi)-2-fenil-etilo 32 c 2-(2-amino-etilamino)-2-fenil-etilo Tabla 4 Compuestos ejemplares de Formula I-D Compuesto Estructura EC50 X # 33 A 2-[2-(2-amino-etilamino)-fen¡l]-etilo 34 A 2-(2-aminomet¡l-fen¡l)-etilo 35 B 2-[(2-amino-acet¡l)-fen¡l"amino]-etilo Tabla 5 Compuestos ejemplares de Formula T-E Compuesto # Estructura EC50 X/Y 36 A 3-{2-am¡no-etil)-5-metoxi-1 ,3- dihidrobenzoimidazol-2-ona 3-(2-amino-etil)-5-(3-h¡droxi-propoxi)- 37 A 1 ,3-dihidro-benzo¡midazol-2-ona 38 3-(2-amino-etil)-5-etox¡-1,3-d¡hidro- A benzo¡midazol-2-ona 39 A 3-(2-am¡no-etil)-5-metansulfonil-1,3- dihidro-benzoimidazol-2-ona 5 40 A 3-(2-amino-et¡l)-5-(2-hidrox¡-etoxi- 1 ,3-dihidro-benzoimidazol-2-ona amida del ácido 3-(2-amino-etil)-2- oxo-2, 3-dihidro-m- benzoimldazol- 5- carboxílico 10 41 A 42 A 3-(2-amino-etil)-5-metilsulfanil-1 ,3- dihidro-benzo¡midazol-2-ona 15 3-(2-amino-etil)-5-metansulfiniM ,3- 43 A dihidro-benzoimidazol-2-ona 20 (2-dietilamino-et¡l)-amida del ácido 44 A 3-(2-amino-etil)-2-oxo-2,3-dihidro-1 H- benzoimidazol-5-carboxilico 25 3-(2-am¡no-propil)-2,3-dih¡dro- 45 A benzoimidazol-2-ona 5 [3-(2-amino-etil)-2-oxo-2,3-dih¡dro-1 H- 46 A benzoimidazol-5-¡loxi]-aceton¡trilo etilamida del ácido 3-(2-am¡no-etil)- 10 47 A 2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzoimida- zol-5-carboxilico piridin-3-ilamida del ácido 3-(2-ami- 48 A no-etil)-2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo- imidazol-5-carboxílico 15 (2-metoxi-etil)-amida del ácido 49 A 3-(2-amino-etil)-2-oxo-2,3-d¡hidro- 1 H-benzoimidazol-5-carboxilico 20 50 A 1 -(2-amino-etil)-1,3-dihidro- benzoimidazol-2-ona 25 2-amino-etil)-1 ,3-dihidro-nafto 51 A 1-( [2,3-d]¡midazol-2-ona 5 52 A (2-hidroxi-et¡l)-am¡da del ácido 3-(2-amino-etil)-2-oxo-2,3-dihidro- 1 H-benzoimidazol-5-carboxílico 10 3-(2-amino-etil)-5-propoxi-1 ,3- 53 A dihidro-benzoimidazol-2-ona 3-(2-amino-etil)-1 ,3-dih¡dro- 54 B imidazo[4,5-d]piridin-2-ona 15 (2-dietilamino-etil)-amida del ácido 55 B 3-(2-amino-etil)-2-oxo-2,3-dihidro- 1 H-benzoimidazol-4-carboxilico 20 piridin-4-ilamida del ácido 3-(2-amino-etil)-2-oxo-2,3-dihidro- 56 B 1 H-benzoimidazol-5-carboxílico 25 3-(2-amino-etil)-1,3-dihidro-imidazo - 57 ? [4,5-b]piridin-2-ona 5 58 ? 1 -(3-amino-propil)-1 ,3-dihidro- benzoimidazol-2-ona 10 fenilamida del ácido 3-(2-amino- 59 ? etil)-2-oxo-2,3-dihidro-1 H- benzoimidazol-5-carboxilico [2-(2-hidroxi-etoxi)-etil]-amida del ácido 3-(2-amino-etil)-2-oxo-2,3- dihidro-1 H-benzoimidazol-5- 60 ? carboxilico 15 61 ? 1 -(2-amino-etil)-5-trifluorometil-1,3- dihidro-benzoimidazol-2-ona 20 62 ? 1 -(2-amino-etil)-1,3-dihidro- imidazo[4,5-c]piridin-2-ona 25 bencilamida del ácido 3-(2-amino- etil)-2-oxo-2,3-dihidro-1 H- 63 B benzoimidazol-5-carboxílico 5 3-(2-amino-etil)-5-(morfolin-4- 64 6 carbonil)-1 ,3-dihidro- benzoimidazol-2-ona 3-(2-amino-etil)-5-(2-oxo-2-fenil- 65 B 10 etoxi)-1,3-dihidro-benzoimidazol-2-ona 66 B 3-(2-metilamino-etil)-1,3-dihidro- benzoimidazol-2-ona 15 67 C 3-(2-amino-etil)-5-butoxi-1,3-dihidro- benzoimidazol'2-ona metil-fenil-amida del ácido 3·(2· 20 am¡no-et¡l)-2-oxo-2,3-dihidro-1H- benzoimidazol-5-carboxílico 68 C 25 etil éster del ácido 4-[3-(2-am¡no- etil)-2-oxo-2,3-dihidro-1H- 69 c benzoimidazol-5-carbonil- piperazin-1-carboxílico 5 dietilamida del ácido 3-(2-amino-etil)- 70 c 2-oxo-2,3-dihidro-1H-benzoimidazol- 5-carboxilico 10 fenetil-amida del ácido 3-(2-amino- 71 c etil)-2-oxo-2,3-dihidro-1 H- benzoimidazol-5-carboxilico (2-hidroxi-1-hidroximetil-2-fenil-etil)- amida del ácido 3-(2-amino-etil)-2- 72 c oxo-2,3-dihidro-1 H-benzoimidazol- 15 5-carboxilico carbamoilmetil-amida del ácido 3-(2- amido-etil)-2-oxo-2,3-dihidro-1 H- 73 c benzoimidazol-5-carboxílico 20 (2-hidroxi-1-hidroximetil-etil)-amida 74 c del ácido 3-(2-amino-et¡l)-2-oxo-2,3- dihidro-1 H-benzoimidazol-5- carboxílico 25 3-(2-am¡no-et¡l)-5-benc¡lox¡-1 ,3- 75 c benzoimidazol-2-ona " 1-(4-amino-butil)-1,3-dihidro- 76 c benzoimi'dazol-2-ona Ejemplo 12 Selección y caracterización de compuestos agonistas de Trp-p8 al medir la afluencia de calcio en células de CH0/Trp-p8 a 37 °C Este ejemplo revela un análisis de afluencia de calcio a base de CH0/Trp-p8 usado para determinar adicionalmente la actividad de agonistas de Trp-p8 candidatos de la presente invención. La afluencia de calcio fue medida utilizando un lector de placas de fluorescencia de microplaca de Flexstation (Molecular Devices; Sunnyvale, CA) . Un análisis típico para el flujo de calcio fue efectuado como sigue. Células en un medio a base de DMEM/Ham F-12, comúnmente, a una densidad de 30,000 células/cavidad/100 µ?, fueron depositadas en una placa de clave de tejido de fondo claro de paredes negras de 96 cavidades (Greiner Bio-one) e incubadas durante 16-20 horas a 37°C. Las células en cada cavidad fueron incubadas por una hora Ejemplo 12 Selección y caracterización de compuestos agonistas de Trp-p8 al medir la afluencia de calcio en células de CH0/Trp-p8 a 37°C Este ejemplo revela un análisis de afluencia de calcio a base de CH0/Trp-p8 usado para determinar adicionalmente la actividad de agonistas de Trp-p8 candidatos de la presente invención. La afluencia de calcio fue medida utilizando un lector de placas de fluorescencia de microplaca de Flexstation (Molecular Devices; Sunnyvale, CA) . Un análisis típico para el flujo de calcio fue efectuado como sigue. Células en un medio a base de DMEM/Ham F-12, comúnmente, a una densidad de 30,000 células/cavidad/100 µ?, fueron depositadas en una placa de clave de tejido de fondo claro de paredes negras de 96 cavidades (Greiner Bio-one) e incubadas durante 16-20 horas a 37°C. Las células en cada cavidad fueron incubadas por una hora a 37 °C con una mezcla de tinte fluorescente Fura2-AM/Pluronic F-27 (Molecular Probes; Eugene, Oregon) y disueltas en el medio que contiene Probenecid. Las concentración finales típicas fueron: 5-8 µ? de Fura2-AM, Pluronic F-27 al 0.01% y Probenecid 2.5 mM (un inhibidor de intercambio de aniones que reduce el transporte del tinte hidrolizado del interior de la célula, minimizando mediante esto la pérdida de tinte durante el experimento) . Después de una hora, las células fueron lavadas en una solución de pH regulado (HEPES 20 mM y solución de sal equilibrada de Hanks con CaCl2 1.26 mM) , pH 7.4 que contiene Probenecid a una concentración final de 2.5 mM y pre-incubada durante por lo menos 30 minutos a la temperatura de análisis de 37°C. Comúnmente, la solución reguladora del pH de HEPES/HBSS descrita anteriormente no contiene ya sea calcio adicional o contiene calcio para incrementar la concentración a 2 mM y varias concentraciones de compuestos (a 5 veces las concentraciones finales) fueron agregados a cada cavidad utilizando el pipeteador de multicanal robótico. Los compuestos fueron pre-incubados a 37 °C por al menos 30 minutos antes de efectuar el análisis (a 37°C). Las señales fueron leídas con longitudes de onda de excitación doble de 340 y 380 nm y longitud de onda de emisión de 510 nm con un filtro de corte a 495 nm. La señal fue reportada como la proporción de emisión cuando es excitada a 340 nm a la emisión cuando es excitada a 380 nm [Unidades de Fluorescencia Relativa (RFU) ] . Ionomicina fue usada sistemáticamente como control positivo. En el caso del análisis de agonista, los compuestos a diferentes concentraciones fueron agregados a las células cargadas con tinte (como se describe anteriormente) . El incremento en RFU fue una medida de la potencia del compuesto como agonista. Resultados ejemplares son presentados en la Figura 2.
Ejemplo 13 Increase en apóptosis enseguida de la exposición de células de CHO/Trp-p8 con compuestos agonistas de Trp-p8 a 37° C Este ejemplo revela la efectividad de los compuestos agonistas de Trp-p8 para inducir apóptosis en células que expresan Trp-p8. Un análisis de citometria de flujo de anexina V/yoduro de propidio (PI) fue usado para proporcionar indicios adicionales en cuanto al mecanismo de la muerte celular inducida por los compuestos agonistas de Trp-p8. El teñido de anexina V detecta la translocación de fosfatidilserina a la capa externa de la membrana del plasma, un evento característico de apóptosis, en tanto que el teñido de PI indica células muertas con membranas comprometidas. Las células fueron tratados con compuestos en DMSO al 1% o con DMSO al 1% (control) durante 24-26 horas a 37°C. Las células fueron brevemente triptinizadas bajo condiciones controladas y teñida con el equipo de reactivo de anexina V/PI siguiendo la metodología proporcionada por el proveedor (por ejemplo, Southern Biotech; Birmingham, Alabama) . Resultados ejemplares son presentados en la figura 3.
Ejemplo 14 Selección in vitro utilizando una análisis de viabilidad celular por compuestos antagonistas de Trp-p8 en base a la protección de células que expresan Trp-p8 de compuestos agonistas tóxicos Este ejemplo revela un sistema de análisis para identificar y caracterizar compuestos antagonistas de Trp-p8 candidatos . Lo antagonistas de Trp-p8 fueron identificados al emplear una análisis de viabilidad celular con células de CH0/Trp-p8 a 37°C (véase Ejemplo 11) con la siguiente modificación. En el contexto de la presente invención, los compuestos que protegen a las células de CH0/Trp-p8 del efecto tóxico de un agonista de control mantiene mediante esto la viabilidad de la célula de CH0/Trp-p8 expuesta a un agonista de Trp-p8 es definido como antagonista. Como una selección primaria en cuanto a antagonistas, células CH0/Trp-p8 fueron expuestas a 10 µ? de compuestos de prueba en dimetilsulfóxido al 1% (DMSO) o DMSO a 1% más una concentración tóxica de un agonista de control. La viabilidad relativa a 10 µ?, determinada como se describe en el Ejemplo 11, fue una medida del potencial del compuesto como agonista de Trp-p8 — mientras más alta es la viabilidad, más potente es el antagonista. Resultados ejemplares son presentados en la Figura 4.
Ejemplo 15 Selección in vitro utilizando un análisis de flujo de calcio para compuestos antagonistas de Trp-p8 en base a sus habilidades para suprimir la afluencia de calcio inducida por agonistas de Trp-p8 en células CHO/Trp-p8 Este ejemplo revela un sistema de análisis in vitro empleado para seleccionar adicionalmente y caracterizar antagonistas de Trp-p8 candidatos. Los antagonistas de Trp-p8 fueron también seleccionados y caracterizados utilizando un análisis de flujo de calcio a 37 °C como se describe en el Ejemplo 12 con las siguientes dos distinciones: (1) el compuesto fue pre-mezclado con el agonista de control o solamente el agonista de control es agregado a las células y la supresión de la respuesta al agonista es una medida de la potencia del compuesto como antagonista y (2) el compuesto, a diferentes concentraciones, fue agregado a las células seguido por la adición del agonista de control después de 2-3 minutos y la supresión de respuesta inducida por agonista fue una medida de la potencia del compuesto como antagonista. Resultados ejemplares son presentados en la Figura 5.
Ejemplo 16 Sistema de modelo animal para analizar la eficacia in vivo de agonistas y antagonistas de Trp-p8 candidatos para el tratamiento de cáncer Este ejemplo proporciona un sistema de modelo de animal apropiado para determinar la eficacia in vivo de moduladores de Trp-p8 candidatos — incluyendo tanto agonistas como antagonistas. Xenoinjertos de cáncer de próstata humano que expresa Trp-p8 (LuCaP, from Dr. Robert Vessella' s lab in University de Washington — como se determina mediante hibridización in situ, reacción en cadena de polimerasa cuantitativa e inmunohistoquimica utilizando un anticuerpo policlonal de conejo especifico de proteína, T-904), también como líneas celulares diseñadas para expresar Trp-p8, en las que se incluyen líneas celulares de CHO (ovario de hámster chino) y EL-4 (timoma de ratón) , fueron usados para establecer modelos de tumor en ratones. La expresión de Trp-p8 en los transíectantes fue confirmada mediante western blot e inmunofluorescencia utilizando un anticuerpo Trp-p8 específico (GS 2.20) también como mediante respuesta a agonistas conocidos en un análisis funcional de afluencia de calcio. Además, las lineas celulares transfectadas fueron susceptibles a exterminio por agonistas de Trp-p8 como es evidente de la viabilidad de ATP y análisis de apóptosis (como se describe en la presente en los Ejemplos 11 y 13) . Un modelo de tumor en ratones fue establecido al inyectar subcutáneamente células CH0/Trp-p8 en ratones SCID. La expresión de Trp-p8 en tumores extirpados de estos ratones fue confirmada mediante RT-PCR, inmunohistoquimica y análisis de western blot. El desarrollo de modelo de tumor adicional se lleva a cabo utilizando los xenoinjertos de cáncer de próstata humano descritos anteriormente en ratones desnudos atímicos o SCID y utilizando un transfectante de EL4/Trp-p8 en normal ratones. Los xenoinjertos de próstata de otras fuentes y otras lineas celulares que pueden ser diseñadas para expresar Trp-p8 son también candidatos potenciales para construir más sistemas modelo . En base a los resultados de evaluaciones in vitro e in vivo, un conjunto de agonistas de Trp-p8 será escogido para determinar la eficacia en ratones. Las evaluaciones in vitro incluirían potencia en análisis de exterminio celular, solubilidad acuosa, estudio de enlace de plasma y estabilidad metabólica (potencial para que un compuesto sea metabolizado por el hígado como se determina al usar hepatocitos y/o microsomas de ratón) . Las evaluaciones in vivo incluirían estudios de farmacocinética y toxicidad. Los compuestos escogidos serán administrados a ratones que expresan Trp-p8 mediante diferentes rutas [oral, intravenosa, intraperitoneal, subcutánea, intramuscular] . La reducción de tumor y supervivencia de estos ratones serán evaluados a diferentes dosificaciones de estos compuestos. El compuesto más efectivo para combatir el tumor será escogido para investigaciones adicionales .
Ejemplo 17 Caracterización experimental de varios compuestos ejemplares Este ejemplo revela la caracterización experimental y resultados de varios moduladores de Trp-p8 de molécula pequeña ejemplares de Fórmula I, designado Compuesto I, II, III y IV. Sus fórmulas químicas y peso molecular son resumidos en la Tabla 6.
Tabla 6 Fórmulas químicas y pesos moleculares Compuesto I II III IV Fórmula C2iH3i 303 C20H29N3O2 C22H22N4O C2lH3 N202 química Peso 373 343 368 346 molecular Actividad in vitro Como se resume en la Tabla 8, los compuestos demostraron un alto grado de potencia y especificidad hacia el exterminio de células que expresan Trp-p8. Comúnmente, concentraciones >1000x más altas de compuesto fueron requeridas para exterminar células que carecen de Trp-p8, en comparación con células que expresan Trp-p8. Los compuestos II, III y IV mostraron actividad similar en este análisis, en tanto que el compuesto I fue aproximadamente 3 veces más potente. Tabla 8 Resultados de análisis de viabilidad de ATP para varios compuestos preferidos Actividad in vivo Como se ilustra en las Figuras 9A y 9B, los Compuestos I, II y III produjeron exposición prolongada después de una sola administración oral en ambos roedores (Figura 9A) y perros Beagle (Figura 9B) . En comparación con los ratones, las ratas requieren aproximadamente dos veces la dosis oral (en base al peso corporal) para obtener exposición comparable y los perros requieren menos de un tercio. Consistente con los niveles del plasma sostenidos (tl/2 ~9 h) , una sola dosis oral proporciona una respuesta durable prolongada en el modelo de xenoinjerto de CH0/Trp-p8. Como se ilustra en las figuras 10A y 10B, la dosificación oral de estos compuestos proporciona respuestas durables en el modelo de xenoinjerto de CH0/Trp-p8. Se observó una inhibición sustancial de crecimiento del tumor después de una sola dosis tan baja como de 10 mg/kg y ninguna toxicidad significativa fue evidente a 100 mg/kg; una ventana terapéutica de > lOx. Como se ilustra en la Figura 7, los compuestos de Fórmula I generaron exposición sustancialmente más breve vía una sola inyección intraperitoneal , en comparación con la administración oral. Como se ilustra en las figuras 8 A y 8B, la inyección intraperitoneal de estos compuestos en ratones da como resultado respuestas más breves en el modelo de xenoinjerto de CHO/Trp-p8 y parecen menos durables después del cese de la dosificación de IP. Para demostrar que la eficacia es moderada por Trp-p8, la Figura 11 ilustra la evaluación del Compuesto I en el modelo de CHO (Trp-p8) coincidente o correspondiente. Consistente con el mecanismo de acción propuesto, el Compuesto I no mostró eficacia significativa a 100 mg/kg en este modelo; una dosis 10 veces más alta que una dosis eficaz en el modelo CHO/Trp-p8 análogo. Como se ilustra en la Figura 12, el modelo de LuCaP pareció responder comparable o argumentadamente mejor que el método de CHO/Trp-p8. CHO/Trp-p8 es un tumor que crece rápido; el tratamiento con el Compuesto I atenuó el crecimiento, pero no provocó regresión. En contraste, LuCaP es un tumor que crece más lento; el tratamiento provocó una regresión estadísticamente significativa, también como inhibición de crecimiento. En esta instancia, el modelo de xenoinjerto de LuCAP exhibió niveles de Trp-p8 comparables al modelo de CHO/Trp-p8, tal como se mide mediante inmunohistoquímica de tejido de tumor extirpado de los ratones. La dosis más alta administrada oralmente a ratones, 100 mg/kg, no dio como resultado toxicidad significativa para cualquiera de los compuestos. Puesto que una sola dosis oral de 10 mg/kg del Compuesto I produjo eficacia significativa en el modelo de xenoinjerto de CHO/Trp-p8, una ventana terapéutica de > 10 es obtenible con los Compuestos de Fórmula I. Este se ha expandido mediante experimentos de toxicología en ratas, en donde los compuestos podrían ser administrados a niveles de dosis más alta. En estudios de toxicología efectuados en ratas, las dosis orales de 250 mg/kg no inducen ningún efecto tóxico observable. Las dosis individuales de 500 mg/kg y 1000 mg/kg dieron como resultado una toxicidad suave a moderada, pero no se alcanzó la MTD. Estos datos, que representan las ventanas terapéuticas mínimas obtenibles con Compuestos de Fórmula I, son resumidos en Tabla 7. Tabla 7 Aunque la presente invención ha sido descrita en algún detalle a manera de ilustración y ejemplo por propósitos de claridad de entendimiento, cambios modificaciones se pueden llevar a cabo sin desviarse del alcance de la invención que pretende ser limitado solamente por el alcance de las reivindicaciones adjuntas.

Claims (1)

  1. RE IVIN DI CAC I ONES compuesto de Fórmula caracterizado porque Ri es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo, arilalquilo y arilo, o Ri y R2 junto con el grupo nitrógeno pueden formar un grupo cíclico o heterocíclico de hasta 25 átomos; R2 es seleccionado de arilo y arilalquilo; R3 es seleccionado de alquilo, heteroalquilo y arilalquilo; R4 es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo y arilalquilo; y R3 y R4 junto con el grupo nitrógeno forman una amina alifática . 2. el compuesto de conformidad con la Fórmula I -A : caracterizado porque A, B, C y D son seleccionados independientemente de CR2 y N; en donde por lo menos uno de A, B, C y D es CR2; en donde R2 es un miembro seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo, arilo, halógeno y arilalquilo, R6<D- y R6S-, en donde R6 es alquilo; en donde cuando dos adyacentes de A, B, C y D son C R2, los dos R2 se pueden combinar para formar un solo grupo arilo, cicloalquilo o heterocicloalquilo; y Ri es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo, arilo y arilalquilo; R3 es seleccionado de alquilo, heteroalquilo, arilo, arilalquilo, -N R7C(0)-, -C(0)N R7-, -O-, -S-, -S(O)-, -S(0)2- y -N R -, en donde R7 es un miembro seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo, arilo y arilalquilo; R4 es seleccionado de -C(0)R8-, alquilo, arilalquilo y heteroalquilo, en donde Rs es seleccionado de alquilo y heteroalquilo; R5 es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo y arilalquilo; y y R5 junto con el grupo nitrógeno forman una amina alifática . 3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque Ri es H. 4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque R7 es H. 5. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque Re comprende 2, 3 ó 4 átomos de carbono . 6. El compuesto de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque R4 es seleccionado de propionilo, etilo, butirilo, hidroxipropionilo y 3-hidroxibutirilo. 7. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque R5 es seleccionado de H y metilo. 8. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque R6 comprende 1, 2, 3, 4, 5 ó 6 átomos de carbono. 9. El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque R2 es seleccionado de metoxi, metilsulfañilo, fenilo y H. 10. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el compuesto comprende un grupo seleccionado de 2- ( 2-amino-propionilamino) -4-metoxi-fenilo, N-(2-amino-etil ) -2-amino 5-metilsulfanilo-fenilo, l-(2-amino- etoxi) -naftalen-2-ilo, 2- (2-amino-etilamino) -4-metilsulfanil-fenilo, N- (2-amino-etil ) -5-metoxi-benzamida, 2-(2-amino-butirilamino) -4-metoxi-fenilo, 2- (2-amino-3-hidroxi-propionilamino) -4-metoxi-fenilo, 3- (2-amino-etilamino) -naftaleno-2-ilo, N- (2-amino-etil) -2-amino-benzamida, 2- (2-amino-3-hidroxi-propionilamino) -4-metoxi-fenilo, 2- (2-amino-acetilamino) -fenilo, 2- (2-amino-3-hidroxi-butirilamino) -4-metoxi-fenilamida y 2- ( 2-amino-acetilamino ) - -metoxi-fenilo . 11. El compuesto de conformidad con la Fórmula I-B: caracterizado porque Ri es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo, arilo y arilalquilo; R2 es seleccionado de arilo, alquilo, heteroalquilo y arilalquilo; R3 es seleccionado de alquilo, heteroalquilo y arilalquilo; R4 es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo y arilalquilo; y R3 y R4 junto con el grupo nitrógeno forman una amina alifática . 12. El compuesto de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque Ri es H. 13. El compuesto de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque R3 comprende 1, 2, 3, 4, 5 ó 6 átomos de carbono. 14. El compuesto de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque R3 es seleccionado de metileno, etileno, propileno y butileno. 15. El compuesto de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque R4 es seleccionado de H y metilo. 15. El compuesto de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque R2 es un grupo seleccionado de fenilo, furano, metilpirrol, metilbenzoato, aminofenilo, hidroxifenilo, cianofenilo y metoxifenilo . 17. El compuesto de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque el compuesto comprende un grupo seleccionado de 2- (2-amino-etil) -5-furano-2-il-2H-pirazol-3-ilo, 2- (2-amino-propil) -5-fenil-2H-pirazol-3-ilo, 2-(2-amino-etil) -5-fenil-2H-pirazol-3-ilo, 2- (2-amino-etil) -5- (1-metil-lH-pirrol-2-ilo) -2H-pirazol-3-ilo, 2- (2-amino-propil) -5-fenil-2H-pirazol-3-ilo, 2- (2-amino-etil) -5- ( 4-amino-fenil ) -2H-pirazol-3-ilo, 2- (2-amino-etil) -5- (4-hidroxi-fenil) -2H-pirazol-3-ilo, 2-(2-metilamino-etil ) -5-fenil-2H-pirazol-3-ilo, 2- (2-amino-propil) -5-fenil-2H-pirazol-3-ilo, 2- (2-amino-etil) -5- (3-ciano- fenil) -2H-pirazol-3-ilo, 2- (2-amino-etil) -5- ( 3-metoxi-fenil ) - 2H-pirazol-3-ilo, metil éster del ácido 4- { 1- ( 2-amino-etil ) -1H- pirazol-3-il } -benzoico, 2- (2-amino-etil) -5- ( 3-amino-fenil ) -2H- pirazol-3-ilo y 2- (2-amino-etil) -5- ( 3-hidroxi-fenil) -2H- pirazol-3-ilo . 18. un compuesto de Fórmula I-C: caracterizado porque Ri es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo, arilo y arilalquilo; R2 es seleccionado de arilo y arilalquilo; R3 es seleccionado de alquilo, heteroalquilo, arilalquilo, -NHC(0)R5-, -0R5- y -NHR5-, en donde R5 es alquilo o heteroalquilo; R es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo y arilalquilo; y R3 y R junto con el grupo nitrógeno forman una amina alifática . 19. El compuesto de conformidad con la reivindicación 18 caracterizado porque Ri es H. 20. El compuesto de conformidad con la reivindicación 18 caracterizado porque R2 es fenilo. 21. El compuesto de conformidad con la reivindicación 18 caracterizado porque R5 es seleccionado de metileno, etileno, propileno y butileno. 22. El compuesto de conformidad con la reivindicación 21 caracterizado porque R3 es seleccionado de propionilamino, etoxi, propoxi y etilamino. 23. El compuesto de conformidad con la reivindicación 18 caracterizado porque R4 es seleccionado de H y metilo. 24. El compuesto de conformidad con la reivindicación 18 caracterizado porque el compuesto comprende un grupo seleccionado de 2- (2-amino-propionilamino) -2-fenil-etilo, 2- (2-amino-etoxi ) -2-fenil-etilo, 2- (2-amino-etoxi) -2-fenil-etilo, 2-( 3-amino-propoxi ) -2-fenil-etilo, 2- ( 2-dimetilamino-etoxi ) -2-fenil-etilo y 2- (2-amino-etilamino) -2-fenil-etilo . 25. Un compuesto de Fórmula I-D: caracterizado porque Ri es seleccionado alquilo, heteroalquilo, arilo y arilalquilo; R2 es seleccionado de arilo y arilalquilo; R3 es seleccionado de alquilo, heteroalquilo y arilalquilo; R4 es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo y arilalquilo; y R3 y R4 junto con el grupo nitrógeno forman una amina alifática . 26. El compuesto de conformidad con la reivindicación 25 caracterizado porque Ri es H. 27. El compuesto de conformidad con la reivindicación 25 caracterizado porque R2 es seleccionado de fenilo y fenilamino . 28. El compuesto de conformidad con la reivindicación 25 caracterizado R3 es seleccionado de metileno, etileno, propileno, butileno, metilamino, etilamino, propilamino, butilamino y acetilo. 29. El compuesto de conformidad con la reivindicación 25 caracterizado porque R4 es seleccionado de H y metilo. 30. El compuesto de conformidad con la reivindicación 25 caracterizado porque el compuesto comprende un grupo seleccionado de 2- [2- (2-amino-etilamino) -fenil] -etilo, 2- (2-aminometil-fenil ) -etilo y 2- [ (2-amino-acetil ) -fenil-amino] -etilo . 31. Un compuesto de Fórmula I-E: caracterizado porque A, B, C y D son seleccionados independientemente de CRi y N; en donde por lo menos uno de A, B, C y D es CRi; en donde Ri es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo, arilo, arilalquilo, halógeno; y en donde cuando dos adyacente de A, B, C y D son CRi, los dos Ri se pueden combinar para formar un solo grupo arilo, cicloalquilo o heterocicloalquilo ; y R2 es seleccionado de alquilo, heteroalquilo y arilalquilo; R3 es seleccionado de H, alquilo, heteroalquilo y arilalquilo; y R2 y R3 junto con el grupo nitrógeno forman una amina alifática. 32. El compuesto de conformidad con la reivindicación 31 caracterizado porque Ri es H. 33. El compuesto de conformidad con la reivindicación 31 caracterizado porque Ri es -OR1 y en donde R1 es seleccionado de metilo, hidroximetilo, etilo, hidroxietilo, propilo, hidroxipropilo, butilo, hidroxibutilo, acetonitrilo, fenilo, fenilmetoxi, feniletoxi, fenilpropoxi , fenilbutoxi y bencilo. 34. El compuesto de conformidad con la reivindicación 31 caracterizado porque Ri es -SR11 y en donde R11 es seleccionado de metilo, hidroximetilo, etilo, hidroxietilo, propilo, hidroxipropilo, butilo, hidroxibutilo, acetonitrilo, fenilo, fenilmetoxi, feniletoxi, fenilpropoxi , fenilbutoxi y bencilo . 35. El compuesto de conformidad con la reivindicación 31 caracterizado porque Ri es -S (O) R111 y en donde R111 es seleccionado de metilo, hidroximetilo, etilo, hidroxietilo, propilo, hidroxipropilo, butilo, hidroxibutilo, acetonitrilo, fenilo, fenilmetoxi, feniletoxi, fenilpropoxi , fenilbutoxi y bencilo . 36. El compuesto de conformidad con la reivindicación 31 caracterizado porque Ri es -S(0)2R1V y en donde R1V es seleccionado de metilo, hidroximetilo, etilo, hidroxietilo, propilo, hidroxipropilo, butilo, hidroxibutilo, acetonitrilo, fenilo, fenilmetoxi, feniletoxi, fenilpropoxi , fenilbutoxi y bencilo. 37. El compuesto de conformidad con la reivindicación 31 caracterizado porque Ri es -C(0)NRVRV1, en donde Rv y RV1 son seleccionados independientemente de H, metilo, hidroximetilo, etilo, hidroxietilo, propilo, hidroxipropilo, butilo, hidroxibutilo, dietilaminoetilo, fenilo, piridinilo, metoxietilo, hidroxietoxietilo, bencilo, metilfenilo, feniletilo, hidroxihidroximetilfenil etilo, carbamoilmetilo e hidroximetil hidroxietilo . 38. El compuesto de conformidad con la reivindicación 31 caracterizado porque Rx es -C(0) NRvRvi , en donde Rv y Rvi conjuntamente forman morfolina, piperazina, piperazina etil éster . 39. El compuesto de conformidad con la reivindicación 31 caracterizado porque Ri es C F3 o halógeno. 40. El compuesto de conformidad con la reivindicación 31 caracterizado porque R2 es seleccionado de metileno, etileno, propileno y butileno. 41. El compuesto de conformidad con la reivindicación 40 caracterizado porque R2 es etileno y R3 es H. 42. El compuesto de conformidad con la reivindicación 31 caracterizado porque Ri es metoxi . 43. El compuesto de conformidad con la reivindicación 31 caracterizado porque R3 es H. 44. El compuesto de conformidad con la reivindicación 31 caracterizado porque el compuesto comprende un grupo seleccionado de 3- (2-amino-etil) -5-metoxi-l, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3- (2-amino-etil) -5- ( 3-hidroxi-propoxi ) - 1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3- (2-amino-etil) -5-etoxi-l, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona , 3- (2-amino-etil) -5-metansulfonil-1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3- (2-amino-etil) -5- (2-hidroxi- etoxi ) -1 , 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, amida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, 3- (2-amino-etil) -5-metilsulfanil-1 , 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3- (2-amino-etil) -5-metansulfinil-1 , 3-dihidro-benzoimida-zol-2-ona, ( 2-dietilamino-etil ) -amida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-OXO-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, 3- (2-amino-propil ) -2, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona , [3- (2-amino-etil) -2-???-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-iloxi ] -acetonitrilo, etilamida del ácido 3- ( 2-amino-etil ) -2-oxo-2 , 3-dihidro-l H-benzoimidazol-5-carboxilico, piridin-3—ilamida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, (2-metoxi-etil) -amida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, 1- (2-amino-etil) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 1- (2-amino-etil) -1, 3-dihidro-nafto [2 , 3-d] imidazol-2-ona, (2-hidroxi-etil ) -amida del ácido 3-(2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxi-lico, 3- (2-amino-etil) -5-propoxi-l , 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3- (2-amino-etil) -1, 3-dihidro-imidazo [4, 5-c] piridin-2-ona , (2-dietilamino-etil) -amida del ácido 3- ( 2-amino-etil ) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-4-carboxilico, piridin- -ilamida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, 3- (2-amino-etil ) -1 , 3-dihidro-imidazo [4,5-b]piridin-2-ona, 1- ( 3-amino-propil ) -1 , 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, fenilamida del ácido 3- ( 2-amino-etil ) -2-oxo-2 , 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, [2- (2-hidroxi-etoxi) -etil] - amida del ácido 3- ( 2-amino-etil ) -2-oxo-2 , 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxílico, 1- (2-amino-etil) -5-trifluorometil-1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 1- (2-amino-etil) -1, 3-dihidro-imidazo [4 , 5-c] piridin-2-ona, bencilamida del ácido 3-(2-amino-etil ) -2-???-2 , 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, 3- (2-amino-etil) -5- (morfolin-4 -carbonil ) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3- (2-amino-etil) -5- ( 2-oxo-2-fenil-etoxi ) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3- ( 2-metilamino-etil ) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3- ( 2-amino-etil ) -5-butoxi-l , 3- -dihidro-benzoimidazol-2-ona, metil-fenil-amida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-OXO-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, etil éster del ácido 4- [3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carbonil ] -piperazin-l-carboxilico, dietilamida del ácido 3- (2-amino-etil ) -2-oxo-2 , 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, fenetil-amida del ácido 3- ( 2-amino-etil ) -2-oxo-2, 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, ( 2-hidroxi-l-hidroximetil-2-fenil-etil-amida del ácido 3- (2-amino-etil ) -2-oxo-2 , 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, carbamoilmetil-amida del ácido 3- ( 2-amino-etil ) -2-oxo-2 , 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, (2-hidroxi-l-hidroximetil-etil ) -amida del ácido 3- ( 2-amino-etil ) -2-oxo-2 , 3-dihidro-lH-benzoimidazol-5-carboxilico, N- { 2- [2-oxo-2 , 3-dihidro-benzoimidazol-1-il ] -etil } -guanidina, 3- (2-amino-etil) -5-benciloxi-1 , 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona y 1- ( 4-amino-butil ) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona . 45. El compuesto de conformidad con la reivindicación 44 caracterizado porque el compuesto es 3- (2-amino-etil) -1- (2-isopropil-5-metil-ciclohexancarbonil) -5-metoxi-l, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona . 46. Un método para el tratamiento de cáncer, el método está caracterizado porque comprende la etapa de poner en contacto células cancerosas con una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto seleccionado del grupo que consiste de un compuesto de Fórmula I, un compuesto de Fórmula I-A, un compuesto de Fórmula I-B, un compuesto de Fórmula I-C, un compuesto de Fórmula I-D y un compuesto de Fórmula I-E, y combinaciones de los mismos o una sal aceptable farmacéuticamente de los mismos. 47. Un método para inducir apóptosis y/o necrosis en una célula que expresa Trp-p8, el método está caracterizado porque comprende la etapa de poner en contacto la célula con una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto seleccionado del grupo que consiste de un compuesto de Fórmula I, un compuesto de Fórmula I-A, un compuesto de Fórmula I-B, un compuesto de Fórmula I-C, un compuesto de Fórmula I-D y un compuesto de Fórmula I-E y combinaciones de los mismos o una sal aceptable farmacéuticamente de los mismos. 48. Un método para disminuir la viabilidad celular y/o inhibir el crecimiento celular, caracterizado porque comprende la etapa de poner en contacto las células cancerosas con una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto seleccionado del grupo que consiste de un compuesto de Fórmula I, un compuesto de Fórmula I-A, un compuesto de Fórmula I-B, un compuesto de Fórmula I-C, un compuesto de Fórmula I-D y un compuesto de Fórmula I-E y combinaciones de los mismos o una sal aceptable farmacéuticamente de los mismos. 49. Un método para el tratamiento de una enfermedad en un mamífero, el método está caracterizado porque comprende la etapa de administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto seleccionado del grupo que consiste de un compuesto de Fórmula I, un compuesto de Fórmula I-A, un compuesto de Fórmula I-B, un compuesto de Fórmula I-C, un compuesto de Fórmula I-D y un compuesto de Fórmula I-E y combinaciones de los mismos o una sal aceptable farmacéuticamente de los mismos . 50. El método de conformidad con la reivindicación 49, caracterizado porque el mamífero es un humano 51. El método de conformidad con la reivindicación 49, caracterizado porque la enfermedad es cáncer. 52. El método de conformidad con la reivindicación 49, caracterizado porque la enfermedad es cáncer de próstata, pulmón, pecho y colon. 53. Un método para el tratamiento de una enfermedad en un mamífero, el método está caracterizado porque comprende la administración de una combinación de un compuesto de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y/o Fórmula I-E y combinaciones de los mismos o una sal aceptable farmacéuticamente de los mismos, y uno o más agentes terapéuticos de cáncer. 54. El método de conformidad con la reivindicación 53, caracterizado porque la combinación es administrada simultáneamente . 55. El método de conformidad con la reivindicación 53, caracterizado porque el mamífero es un humano. 56. El método de conformidad con la reivindicación 53, caracterizado porque la enfermedad es cáncer. 57. El método de conformidad con la reivindicación 53, caracterizado porque la enfermedad es cáncer de próstata, pulmón, pecho y colon. 58. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende un compuesto de Fórmula I, Fórmula I-A, Fórmula I-B, Fórmula I-C, Fórmula I-D y/o Fórmula I-E, y combinaciones de los mismos o una sal aceptable farmacéuticamente de los mismos y un excipiente aceptable farmacéuticamente. 59. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 58, caracterizado porque la composición es formulada con un portador o agente aceptable farmacéuticamente. 60. Un método para el tratamiento de una enfermedad o condición en un mamífero, en donde un receptor de Trp-p8 es indicado y se desea la modulación de la función receptora, el método está caracterizado porque comprende administrar una cantidad moduladora efectiva de un compuesto seleccionado del grupo que consiste de un compuesto de Fórmula I, un compuesto de Fórmula I-A, un compuesto de Fórmula I-B, un compuesto de Fórmula I-C, un compuesto de Fórmula I-D y un compuesto de Fórmula I-E y combinaciones de los mismos o una sal aceptable farmacéuticamente de los mismos. 61. Un método para modular la función del receptor de Trp-p8, el método está caracterizado porque comprende administrar una cantidad moduladora efectiva de un compuesto seleccionado del grupo que consiste de un compuesto de Fórmula I, un compuesto de Fórmula I-A, un compuesto de Fórmula I-B, un compuesto de Fórmula I-C, un compuesto de Fórmula I-D y un compuesto de Fórmula I-E y combinaciones de los mismos o una sal aceptable farmacéuticamente de los mismos. 62. Un compuesto caracterizado porque es seleccionado del grupo que consiste de un compuesto de Fórmula I, un compuesto de Fórmula I-A, un compuesto de Fórmula I-B, un compuesto de Fórmula I-C, un compuesto de Fórmula I-D y un compuesto de Fórmula I-E y combinaciones de los mismos o una sal aceptable farmacéuticamente de los mismos, para uso en diagnosis médica o terapia. 63. El compuesto de conformidad con la reivindicación 62, caracterizado porque la diagnosis médica o terapia es el tratamiento o prevención de una enfermedad o condición relacionada con el receptor de Trp-p8. 64. El uso de un compuesto seleccionado del grupo que consiste de un compuesto de Fórmula I, un compuesto de Fórmula I-A, un compuesto de Fórmula I-B, un compuesto de Fórmula I-C, un compuesto de Fórmula I-D y un compuesto de Fórmula I-E y combinaciones de los mismos o una sal aceptable farmacéuticamente de los mismos, para preparar un medicamento útil para el tratamiento o prevención de una enfermedad o condición relacionada con el receptor de Trp-p8. 65. Un método para el tratamiento de una enfermedad asociada con la expresión de Trp-p8, el método está caracterizado porque comprende administrar a un mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto seleccionado del grupo que consiste de un compuesto de Fórmula I, un compuesto de Fórmula I-A, un compuesto de Fórmula I-B, un compuesto de Fórmula I-C, un compuesto de Fórmula I-D y un compuesto de Fórmula I-E y combinaciones de los mismos o una sal aceptable farmacéuticamente de los mismos. 66. Un método para identificar un agonista de Trp-p8, el método está caracterizado porque comprende la etapa de poner en contacto una célula que expresa Trp-p8 y una célula que no expresa Trp-p8 con un compuesto seleccionado del grupo que consiste de un compuesto de Fórmula I, un compuesto de Fórmula I-A, un compuesto de Fórmula I-B, un compuesto de Fórmula I-C, un compuesto de Fórmula I-D, un compuesto de Fórmula 1-D y un compuesto de Fórmula I-E, por un tiempo y en una cantidad suficiente para disminuir la viabilidad de la célula que expresa Trp-p8 pero no la célula que no expresa Trp-p8.
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