MX2008008564A

MX2008008564A - Terapeutica combinada con anticuerpos anti-egfr y anti-her2.

Info

Publication number: MX2008008564A
Application number: MX2008008564A
Authority: MX
Inventors: Stephen D Gillies; David Azria; Christel Larbouret; Andre Pelegrin
Original assignee: Merck Patent Gmbh
Priority date: 2006-01-04
Filing date: 2006-12-15
Publication date: 2009-01-29
Also published as: EA015173B1; WO2007076923A1; AU2006332212B8; JP2009522316A; CN101365486B; US20150132308A1; ZA200806723B; US9522956B2; KR20080110987A; CN101365486A; US20090214541A1; AR059127A1; CA2636074A1; BRPI0620888A2; EP1968633A1; EP1968633B1; EA200870141A1; EP1968633B2; AU2006332212B2; AU2006332212A1

Abstract

La invención se refiere al uso combinado de anticuerpo anti-EGFR y anticuerpo anti-Her2 para el tratamiento de cáncer. La invención especialmente se refiere al tratamiento combinado mediante anticuerpo monoclonal "matuzumab" (hmAB 425, EMD 72000) dirigido contra receptores EGF y "matuzumab" (HERCEOTIN() dirigido contra los receptores HER2. el tratamiento combinado es adecuado para pacientes que sufren cáncer, especialmente en donde HER2 se expresa en baja cantidad, de preferencia cáncer de páncreas.

Description

TERAPEUTICA COMBINADA CON ANTICUERPOS ANTI-EGFR Y ANTI-HER2 CAMPO DE LA INVENCIÓN La invención se refiere al uso combinado de anticuerpo anti-EGFR y anticuerpo anti-Her2 para el tratamiento de cáncer. La invención se refiere especialmente al tratamiento combinado con anticuerpo monoclonal "matuzumab" (hmAb 425, EMD 72000) dirigido contra receptores EGF y " trastuzumab" (HERCEPTIN®) dirigido contra receptores HER2. El tratamiento combinado es adecuado para pacientes que padecen cáncer, especialmente en donde se expresa HER2 en bajas cantidades, de preferencia cáncer de páncreas. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Durante más de veinte años se ha sabido que las moléculas biológicas, por ejemplo los anticuerpos monoclonales (MAb) u otras proteínas/polipéptidos , además de los pequeños compuestos químicos dirigidos contra diversos receptores y otros antígenos sobre la superficie de las células tumorales son adecuadas para el tratamiento de tumores . Respecto del enfoque de los anticuerpos, la mayoría de estos MAb han sido quimerizados o humanizados para mejorar la tolerabilidad con el sistema inmune humano. Los MAb o las entidades químicas antes mencionadas se fijan específicamente a sus estructuras blanco sobre las células tumorales y en la mayoría de los casos también sobre tejidos normales, y pueden causar REF.: 193110 diferentes efectos que dependen de sus características de especificidad de epitopo y/o funcionales del antígeno particular. Es de esperar que los MAb contra receptores huérfanos y otras moléculas de superficie celular no funcionales, además de los MAb contra estructuras fuera del sitio de fijación del ligando de los receptores funcionalmente activos (por ejemplo receptores de factor de crecimiento con actividad de quinasa) induzcan funciones primarias de efector inmune contra célula blanco (citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo (ADCC) , citotoxicidad dependiente de complemento (CDC) ) . Además, según las propiedades del antígeno y el MAb, la fijación del anticuerpo puede dar por resultado la formación de enlaces cruzados entre los receptores . La consecuente internalización de los complejos receptor-anticuerpo puede dar por resultado una prolongada modulación de la densidad del receptor sobre la superficie celular. Los MAb o los pequeños compuestos químicos que se fijan a un epitopo dentro del sitio de fijación del ligando o en su directa vecindad compiten por la fijación de los ligandos naturales a su receptor y así reduce o inhibe por completo la fijación, y puede desplazar ligandos ya fijados de sus receptores. Este bloqueo de receptores inhibe la activación de receptor dependiente de ligando y las señales corriente abajo. Por ejemplo, el bloqueo de los receptores ErbB, tales como el receptor de factor de crecimiento epidérmico (EGFR) , por los anticuerpos monoclonales da por resultado diversos efectos celulares, incluso la inhibición de la síntesis de ADN y la proliferación, la inducción de la detención del ciclo celular y la apoptosis, además de efectos antimetastáticos y antiangiogénicos . Los receptores ErbB generalmente eran receptores de tirosina quinasas implicados en cáncer en la década de 1980. Las tirosina quinasas son una clase de enzimas que catalizar la transferencia del fosfato de adenosina terminal a los residuos de tirosina en los sustratos proteicos. Se cree que las tirosina quinasas, debido a la fosforilación del sustrato, juegan papeles esenciales en la transducción de señales para numerosas funciones celulares . Si bien los mecanismos exactos de transducción de señales aún no se conocen, se ha demostrado que las tirosina quinasas son importantes factores contribuyentes a la proliferación celular, la carcinogénesis y la diferenciación celular. Se han identificado diferentes subfamilias de tirosina quinasas de tipo receptor. Una subfamilia de tirosina quinasas de tipo de receptor, designada subfamilia HER o ErbB, está comprendida por EGFR (ErbBl), HER2 (ErbB2 o pl85neu) , HER3 (ErbB3), y HER4 (ErbB4) . Los ligandos de esta subfamilia de receptores incluyen factor de crecimiento epitelial (EGF) , TGF-a, anfirregulina, HB-EGF, betacelulina, heregulina y neuregulinas . EGFR, codificado por el gen erbBl, ha sido implicado casualmente en la malignidad humana. En particular, se ha observado aumento de la expresión EGFR en cáncer de mama, vejiga, pulmón, cabeza, cuello y estómago además de glioblastomas . El aumento de la expresión de receptor EGFR a menudo se asocia con aumento de la producción del ligando EGFR, el factor alfa crecimiento de transformación (TGF-a) , en donde las mismas células tumorales dan por resultado la activación del receptor por una vía estimuladora autocrina (Baselga y Mendlosohn, Pharmac. Ther. 64:127-154 (1994)). El receptor EGF es una glucoproteína transmembrana de peso molecular 170.000, y se encuentra sobre muchos tipos de células epiteliales. Es activado por al menos tres ligandos, EGF, TGF-a (factor alfa crecimiento de transformación) y anfirregulina. Tanto el factor de crecimiento epidérmico (EGF) y el factor alfa crecimiento de transformación (TGF-a) han demostrado fijarse al receptor EGF y conducir a la proliferación celular y el crecimiento tumoral. Estos factores de crecimiento no se fijan a HER2 (Ulrich y Schlesinger, 1990, Cell 61, 203). A diferencia de varias familias de factores de crecimiento, que inducen la dimerización de receptores en virtud de su naturaleza dimérica (por ejemplo PDGF) , los factores de crecimiento monoméricos, tales como EGF, contienen dos sitios de fijación para sus receptores y, en consecuencia, puede principalmente formar enlaces cruzados con dos receptores EGF (Lemmon et al., 1997 , EMBO J. 16 , 281 ) . Estudios recientes (J. Schlessinger, 2002 , Cell 110 , 669 ) demuestran que la dimerización de receptores es mediada por interacciones receptor-receptor en las cuales un asa que sobresale de receptores vecinos media la dimerización y la activación de receptores. La dimerización de receptores es esencial para estimular la actividad catalítica intrínseca para la autofosforilación de receptores de factor de crecimiento sobre residuos de tirosina. Estos últimos sirven como sitios de fijación para diversas proteínas o enzimas adaptadoras, las cuales simultáneamente inician muchas cascadas de señales. En eucariontes superiores, la simple vía lineal evolucionó hacia una red multicapa ricamente interactiva en la cual la expresión combinatoria y la activación de los componentes permiten respuestas biológicas específicas de contexto durante todo el desarrollo. La red ErbB podría integrar no solo sus propios resultados, sino también señales heterólogas, incluso hormonas, linfoquinas, neurotransmisores e inductores de estrés . Cabe destacar que las proteínas tirosina quinasas receptoras (PTK) pueden sufrir homo- y heterodimerizacion, en donde las combinaciones de receptor homodiméricas son menos mitogénicas y transformantes (con iniciación de señal nula o escasa) que las correspondientes combinaciones heterodiméricas . Los heterodímeros que contienen ErbB2 son los complejos más potentes (ver artículos de revisión de Yarden y Sliwkowski, 2001, Nature Reviews, Molecular cell Biology, volumen 2, 127 - 137; Tzahar y Yarden, 1998, BBA 1377, M25-M37). Se ha demostrado que los anticuerpos de receptor anti-EGF, a la vez que bloquean la fijación de EGF y TGF-a al receptor parecen inhibir la proliferación de células tumorales. En vista de estos hallazgos, se han desarrollado y estudiado numerosos anticuerpos monoclonales murinos y de rata contra EGF por su capacidad para inhibir el crecimiento de células tumorales in vitro e in vivo (Modjtahedi y Dean, 1994, «J. Oncology 4, 277) . El anticuerpo monoclonal 425 humanizado, también designado matuzumab (hMAb 425, US 5.558.864; EP 0531 472), y el anticuerpo monoclonal 225 quimérico (cMAb 225), ambos dirigidos al receptor EGF, demostraron su eficacia en estudios clínicos. El anticuerpo c225 (Cetuximab, ERBITUX) demostró inhibir el crecimiento de células tumorales mediadas por EGF in vitro y la inhibición de tumores col-orrectales humanos in vivo recibió marcada aprobación en 2003 . El anticuerpo, además de generalmente todos los anticuerpos anti-EGFR, parecen actuar, sobre todo, en sinergia con ciertos agentes quimioterapéuticos (es decir, doxorrubicina, adriamicina, taxol, y cisplatino) para erradicar tumores humanos in vivo en modelos murinos de xenoinj-ertos (ver, por ejemplo, EP 0667165) . Además, se puede demostrar que la combinación de anticuerpo c225 anti-EGFR con el segundo anticuerpo anti-EGFR matuzumab muestra un efecto sinérgico en modelos in vitro, lo cual indica que estos anticuerpos dirigidos al mismo receptor se fijan a diferentes epitopos de EGFR (documento WO 2004/032960) . El segundo miembro de la familia ErbB, HER2 (ErbB2 o plB5neu) , se identificó originalmente como el producto del gen de la transformación de neuroblastomas de las ratas tratadas químicamente. La forma activada del protooncogén neu es el resultado de una mutación puntual (valina a ácido glutámico) en la región transmembrana de la proteína codificada. A Amplificación del homólogo humano de neu se observa en cánceres de mama y de ovario, y se correlaciona con mal pronóstico (Slamon et al., Science, 235: 177-182 (1987); Slamon et al., Science, 244:707-7 12 (1989); US 4.968.603). ErbB2 (HER2) tiene un peso molecular de aproximadamente 185.000, con considerable homología con el receptor EGF (HERI) , si bien aun no se identificado con claridad un ligando específico para HER2. También se halló que el anticuerpo 4D5 dirigido al receptor HER2 sensibiliza líneas celulares de tumor de mama con sobreexpresión de ErbB2 a los efectos citotóxico de TNFOt (US 5.677.171). Una versión humanizada recombinante de los anticuerpo anti-ErbB2 4D5 murinos (huMAb4D5-8, rhuMAb HER2, trastuzumab, HERCEP IN®; documento US 5.821.337) es clínicamente activa en pacientes con cánceres de mama metastáticos que sobreexpresan ErbB2 que recibieron extensa terapéutica previa anticáncer (Baselga et al., J. Clin. Oncol . 14:737-744 (1996)). HERCEPTIN® recibió aprobación de mercado en 1998 para el tratamiento de pacientes con cánceres metastáticos de mama cuyos tumores sobreexpresan la proteína ErbB2. Los adenocarcinomas de páncreas siguen siendo una de las enfermedades malignas más difíciles de tratar. La incidencia ha aumentado constantemente en las últimas cuatro décadas, y si pronóstico aun es malo, a pesar de los notables esfuerzos tendientes al diagnóstico y tratamiento precoces. En el momento del diagnóstico, la mayoría de los pacientes (80 - 90%) tienen tumores locales o metastáticos. Incluso con una resección quirúrgica completa, la tasa de supervivencia a los cinco años es inferior al 20% (Wagner et al., Br J Surg 2004; 91: 586-94). La terapéutica convencional que asocia cirugía y radioterapéutica sola o en combinación con la quimioterapia muestra modesta eficacia en el control local y la paliación, y no hubo progreso real en la supervivencia de pacientes (Azria et al., Bull Cáncer 2002; 89: 369-79, Azria et al., Páncreas 2002;25: 360-5, Li et al. Lancet 2004; 363:1049-57.2-4). En consecuencia, se necesitan nuevos enfoques de terapéutica contra carcinoma pancreático humano.

Los avances recientes en el conocimiento de la biología de esta enfermedad han conducido a la identificación de numerosas anomalías bioquímicas y genéticas que abren el camino a nuevas estrategias terapéuticas. Algunos investigadores han demostrado que las proteína quinasas receptoras, tales como EGFR (Korc M. J Clin Invest 1993,-92: 1113-4), HER2 (Yamanaka et al . , Hum Pathol 1993;24: 1127-34), el factor de crecimiento símil insulina I (Bergmann et al., Cáncer Res 1995;55: 2007-11), y receptores de factor de crecimiento de fibroblastos (Wagner et al . , Gastroenterology 1998; 114: 798-807; Hynes et al., Nat Rev Cáncer 2005; 5: 341-54) son expresados en mayor nivel en tejidos de cáncer de páncreas o en líneas celulares de cáncer de páncreas, comparado con tejidos normales. La sobreexpresión de receptores EGFR y HER2 a menudo es causada por la amplificación de los genes codificadores. Estos receptores son pivotes en la regulación de la proliferación y la diferenciación celular. Evidencias crecientes sugieren que no solo la sobreexpresión del receptor, sino también la comunicación entre los receptores HER juega un papel crucial en el comportamiento de los tumores (Kumagai et al., Proc. Nati Acad Sci USA 2001; 98: 5526-31; Qian et al . , J Biol Chem 1999; 274: 574-83. Está bien documentado que los adenocarcinomas y displasias pancreáticos a menudo expresan en exceso los receptores de tirosina quinasa. En esta enfermedad, se ha descrito que EGFR está expresado en el 22 al 60% de los casos y HER2 en el 7 al 82% de los casos (Yamanaka et al., Hum Pathol 1993,-24: 1127-34, Lemoine et al., J Pathol 1992; 166: 7-12) . La variabilidad del porcentaje de expresión se puede explicar por diferencias en la metodología y/o las muestras. Además, los ligandos naturales de receptores tal como TGFa o EGF son secretados por células malignas y displásicas circundantes del conducto pancreático. Se estableció una correlación entre EGFR/HER2/TGF por coexpresión y grados histopatológicos , los estadios clínicos de adenocarcinomas de los conductos pancreáticos (Uegaki et al., Anticancer Res 1997; 17:3841-7). La sobreexpresión de EGFR en cáncer de páncreas se asocia con enfermedad avanzada en la presentación y reducido tiempo promedio de supervivencia. La significancia de la expresión de HER2 en el pronóstico de cáncer de páncreas no es clara. De hecho, no se ha informado correlación entre grado de diferenciación tumoral y el nivel de -expresión de HER2 en muestras de páncreas humano (Dugan et al., Páncreas 1997;14: 229-36). Esto podría explicarse al recordar que el nivel de HER2 no media la mitogénesis por sí mismo y que se debe activar la heterodimerización. Se han usado inhibidores de EGFR y HER2 en investigaciones preclínicas y clínicas para el tratamiento de cánceres de mama, ovario y colon (Baselga, Ann Oncol, 2002;13: 8-9.).

El concepto de bloqueo de EGFR y HER2 se conoce en principio y se ha aplicado en otros modelos que expresan altos niveles de EGFR y/o HER2. Se ha demostrado un efecto aditivo, pero no sinérgico sobre la proliferación celular in vitro mediante tratamiento combinado con anticuerpo anti-EGFR mAb c225 quimérico y anticuerpo humanizado anti-HER2 (4D5) en la línea celular de cáncer de ovario humano OVCAR 420 (Ye et al. 1999, Oncogene 18, 731) o con 4D5 y la variante murina de mAb 225 sobre líneas celulares de cáncer de colon dependientes de EGFR (Kuwada et al., Int J Cáncer 2004; 109: 291-301). Además, diferentes grupos dirigieron el ataque simultáneo de HERI y HER2 al asociar el inhibidor químico de EGFR quinasa ZD1839 (Iressa) con trastuzumab (Normanno et al., Ann Oncol 2002;13: 65-72) y se halló que en las líneas celulares SK-BR-3 y BT-474 la combinación de estos últimos compuestos induce un mejor efecto antiproliferativo que los dos compuestos usados por separado, particularmente en términos de inducción de apoptosis . Sin embargo, se dispone de escasa información referida a la actual función de los receptores EGFR y HER2 en tejido específico de cáncer dirigido por anticuerpos anti-ErbB específicos y hasta la fecha no se ha evaluado en estudios la eficacia de dirigir concurrentemente estos dos receptores en este tumor. Sobre la base de la falta de terapéutica efectiva y la implicación de EGFR y HER2 en la tumorigénesis de cánceres específicos, especialmente cáncer de páncreas, los inventores se vieron motivados por la estrategia de bloquear EGFR y HER2 simultáneamente en un modelo específico de cáncer, por ejemplo un modelo pancreático, que presenta alta expresión de EGFR y expresión no detectable por IHC o bajo nivel de HER2 mediante la técnica de análisis por citometría de flujo. Con este fin se usaron dos anticuerpos humanizados: trastuzumab (Herceptin) , de uso actual en clínica, y EMD72000, en desarrollo en estudios clínicos (Vanhoefer et al., J Clin Oncol 2004;22: 175-84). Los inventores demuestran que los anticuerpos trastuzumab y EMD72000, como agentes únicos, tienen escaso o nada de efecto sobre la viabilidad celular in vitro, y crecimiento tumoral modestamente retrasado de xenoinjertos tumorales pancreáticos humanos grandes o pequeños . Sobre la base del nivel bastante bajo de HER2 en las células tumorales BxPC-3 y en los resultados de biodistribución (Fig. 2), se podría esperar limitada actividad tumoral de trastuzumab obtenida in vitro e in vivo. De hecho, la sobreexpresión de HER2 es una herramienta de diagnóstico establecida para evaluar pacientes con cáncer de mama con tratamiento con trastuzumab (Slamon et al., Semin Oncol 2001;28: 13-9), y en consecuencia, solo los pacientes expresión tumoral inmunohistoquímica de 3+ HER2 se benefician con esta terapéutica dirigida. La infrecuente sobreexpresión de HER2 /neu puede explicar por qué no se usa actualmente trastuzumab en la clínica para el tratamiento de cáncer de páncreas. Büchler et al. (J Gastrointest Surg 2001; 5: 139-46) confirmaron la incapacidad de la monoterapéutica de trastuzumab para enlentecer el crecimiento de tumores que presentan baja expresión de HER2. Cabe destacar que las dosis de trastuzumab usadas por estos autores fueron de tres a doce veces superiores a las usadas en los experimentos de acuerdo con la invención. Observaron un retraso del crecimiento tumoral, aunque en el cáncer de páncreas las células expresaban alto nivel de proteína HER2. A pesar de la elevada expresión de EGFR en la línea celular de BxPC-3 pancreáticas, EMD72000 tiene efectividad limitada o nula sobre la inhibición del crecimiento tumoral usado solo en una dosis de 50 o 200 ? inyección, lo cual confirma la falta de correlación entre la expresión de EGFR y la eficacia curativa de anticuerpos anti-EGFR. Esto se puede ilustrar mediante un segundo modelo in vivo de cáncer de páncreas (MiaPaca) en el cual se trataron ratones con 50 g inyección de E D72000 dos veces por semana durante cuatro semanas. En estos experimentos, EMD7200O muestra significativa actividad anticrecimiento tumoral, aunque este tumor presenta baja expresión de EGFR. Estas observaciones fueron confirmadas en estudios con diferentes inhibidores de EGFR. Lynch et al. (N Engl J Med 2004; 350: 2129-39) concluyeron que la respuesta clínica no parece tener correlación con el nivel de expresión EGFR por las células cancerosas, pero de preferencia con la mutación del receptor, particularmente en NSCLC. En este contexto, la invención muestra intensa actividad antitumoral de la combinación trastuzumab / EMD72000. Esta actividad antitumoral de la combinación es muy superior a la despreciable actividad antitumoral de los anticuerpos usados como componentes únicos solos. Respecto de los estudios sobre reducir el volumen del tumor y viabilidad in vitro, El efecto de los anticuerpos combinados es claramente sinérgica en el modelo BxPC-3 y no un mero efecto aditivo calculado a partir de las eficacias de cada uno de los componentes. Este efecto es particularmente notable durante el período de tratamiento de cuatro semanas, donde no se puede observar progreso tumoral en el grupo de tratamiento combinado. Se puede observar similar eficacia de este tratamiento en tumores pancreáticos grandes y pequeños. El efecto sinérgico observado de acuerdo con la invención en el crecimiento tumoral con trastuzumab (Herceptin) y matuzumab (EMD72000) se puede explicar, sin pretender estar limitado por ninguna teoría o hipótesis, mediante diferentes acciones mecánicas de cada anticuerpo sobre la heterodimerización EGFR/HER2 : De acuerdo con la invención, se cree que trastuzumab se fija al dominio IV de manera tal que no inhibe la dimerizacion, pero en cambio parece mejorar la endocitosis del receptor HER2 y su desaparición de la membrana celular. En contraste, se cree que EMD72000 inhibe directamente la dimerizacion de EGFR. Natha et al. (Cáncer Res 2004; 64: 2343-6) hallaron que trastuzumab y otro anticuerpo anti-Her2 denominado pertuzumab actúan sinérgicamente. Dado que es conocido que pertuzumab inhibe la dimerizacion de HER2, el anticuerpo anti-EGFR matuzumab sorprendentemente podría jugar, de acuerdo con la presente invención, un papel análogo en la dimerizacion de EGFR. Estos resultados confirman la importancia de la comunicación entre los receptores de HER. Se ha demostrado que HER2 actúa como correceptor favorito en sociedad con los demás miembros de su familia HER, con un mejoramiento de la potencia de señal de su pareja de dimerizacion en múltiples niveles. En términos del proceso de tránsito, la sobreexpresión de HER2 reduce la tasa constante de internalización de EGFR y aumenta la fracción de heterodímeros reciclados de EGFR/HER2 en la superficie celular en lugar de la degradación lisosómica. La asociación HER2/EGFR conduce a un aumento de (i) la estabilidad de los heterodímeros en la membrana celular (Kumagai et al., Proc. Nati Acad Sci USA 2001; 98: 5526-31), (ii) la motilidad celular, y (iii) afinidad de ligando EGF por sus receptores . De hecho, de acuerdo con los resultados de la presente invención, la estrategia de dirección simultánea hacia EGFR y HER2 de los anticuerpos monoclonales adecuados podría conducir a un beneficio terapéutico que provea eficacia sinérgica aun con baja expresión de receptor HER2. En este modelo, el efecto de los adecuados anticuerpos monoclonales combinados EGFR/HER2 parece ser independiente de la respectiva expresión de receptor pero puede reflejar el potencial de heterodimerización de las células. Estos resultados son nuevos y no previsibles, incluso considerado en el contexto con el conocido concepto de bloquear EGFR y HER2 o EGFR y EGFR mediante diferentes epitopos (ver más arriba) . In vitro, se puede observar una reducción del nivel de los receptores después del tratamiento con trastuzumab/matuzumab de acuerdo con la presente invención, y esta reducción puede explicar el efecto del tratamiento combinado sobre la proliferación de BxPC-3. Además, tras la fijación y la dimerización del ligando, los receptores se autofosforilan en su dominio catalítico intracelular . Estas fosforilaciones inician la transducción de señal que incluye diversas proteínas tales como Ras, Raf, y proteína quinasa activada por mitógeno. De acuerdo con la presente invención, el tratamiento combinado con EMD720O0 y trastuzumab inhibió la fosforilación de EGFR y HER2. Se observó una mayor inhibición Je pHER2 cuando se trataron las células BxPC-3 (que expresan niveles elevados de EGFR y bajos de HER2) con ambos anticuerpos, comparado con trastuzumab solo. Tal como se mencionó antes, de acuerdo con la presente invención trastuzumab no inhibe la formación de heterodímeros entre EGFR y HER2, a diferencia de ambos anticuerpos juntos. Estos resultados que combinan trastuzumab con EMD72000 son alentadores en términos de mejoramiento de la actividad antitumoral , de preferencia en cáncer de páncreas con baja expresión de HER2. De hecho, el tratamiento con trastuzumab se ha limitado hasta el momento a pacientes con cáncer de mama con sobreexpresión de HER2. La invención demuestra por primera vez que los pacientes con bajo nivel de HER2 y moderada o alta expresión de EGFR pueden beneficiarse de trastuzumab en combinación con el anticuerpo monoclonal anti-EGFR matuzumab (EMD72000) . En contraste, los resultados de Ye et al. (l.c.) demuestran que el anticuerpo c225 anti-EGFR aparentemente causa un impacto diferente sobre la dimerizacion (EGFR/EGFR) y la heterodimerización (EGFR/HER2) en combinación con trastuzumab que matuzumab, dado que los efectos medidos por Ye et al. eran solo aditivos y no sinérgicos. En síntesis, la invención se refiere a • Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-EGFR y un anticuerpo anti-HER2 (ErbB2 ) o uno de sus fragmentos inmunológicamente efectivos en una cantidad opcional junto con un portador, diluyente o excipiente farmacéutico, en donde el anticuerpo anti-EGFR sea murino, quimérico o humanizado mAb 425 (matuzumab, EMD72000) y el anticuerpo anti-HER2 es murino, quimérico o humanizado mAb 4D5 ( trastuzumab, HERCEPTIN®) , de preferencia las variantes humanizadas de cada uno de los anticuerpos . Una correspondiente composición farmacéutica en donde el anticuerpo anti-EGFR se fija a células tumorales, en donde el receptor EGF está expresado tiene expresión moderada o alta, o está sobreexpresado . Una correspondiente definición farmacéutica de los anticuerpos anti-HER2 se fijan a células tumorales, en donde la expresión de receptor HER2 es baja, o más baja que la expresión de EGFR. Una correspondiente composición farmacéutica, en donde las células tumorales son células tumorales pancreáticas . Una correspondiente composición farmacéutica que comprende adicionalmente un agente citotóxico. Una correspondiente composición farmacéutica en donde el agente citotóxico es un agente quimioterapéutico, de preferencia seleccionado del grupo que consiste en cisplatino, doxorrubicina, gemcitabina, docetaxel, paclitaxel, bleomicina e irinotecano. Una correspondiente composición farmacéutica, en donde el agente citotóxico es un tercer ErbB inhibidor de receptor, un inhibidor de receptor VEGF, inhibi-dor de tirosina quinasa, un inhibidor de proteina quinasa A, un agente antiangiogénico, o una citoquina. Una correspondiente composición farmacéutica, en donde uno o cada uno de los anticuerpos se fusionan en su C terminal a un péptido, polipéptido o proteína biológicamente efectiva, opcionalmente a través de un péptido ligador, para formar un inmunoconjugado, de preferencia una inmunocitoquina . Un kit farmacéutico que comprende (i) un primer paquete que comprende un anticuerpo anti-EGFR o un inmunoconjugado de anticuerpo anti-EGFR tal como se especificó con anterioridad o una de sus porciones inmunológicamente efectivas, y (ii) un segundo paquete que comprende un anticuerpo anti-HER2 o un inmunoconjugado de anticuerpo anti-HER2 tal como se especificó con anterioridad o una de sus porciones inmunológicamente efectivas. Un correspondiente kit farmacéutico que comprende (iii) un tercer paquete que comprende un agente citotoxico tal como se especificó con anterioridad. El uso de una composición farmacéutica tal como se especificó con anterioridad para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de tumores que expresan receptores ErbB. El correspondiente uso de la composición farmacéutica, en donde el tumor no expresa en exceso HER2 o solo expresa Her2 en cantidades inferiores a EGFR. El correspondiente uso de la composición farmacéutica, en donde las células tumorales expresan en exceso EGFR, pero no HER2. El correspondiente uso de la composición farmacéutica para el tratamiento de cáncer de páncreas . Los usos de todas las composiciones farmacéuticas descritas para la fabricación de un medicamento dirigido contra cáncer en combinación con radioterapia y / o quimioterapia . Una composición farmacéutica que comprende cualquier anticuerpo anti-EGFR y cualquier anticuerpo anti-HER2 en un aspecto general y principio de la invención, en donde los anticuerpos solos no inhiben la heterodimerizacion de EGFR y HER2, pero sí lo hacen cuando se administran en combinación. Una correspondiente composición farmacéutica, en donde el anticuerpo anti-EGFR se fija a células tumorales a tratar que expresan en exceso EGFR, y el anticuerpo anti-Her2 se fina a células tumorales a tratar que no expresan en exceso HER2, o que expresan HER2 en una cantidad baja o moderada, comparado con la expresión en exceso de EGFR. Una correspondiente composición farmacéutica, en donde el anticuerpo anti-EGFR es seleccionado del grupo de mAb 425 murino, quimérico o humanizado (matuzumab) y el anticuerpo anti-HER2 anticuerpo es seleccionado del grupo de mAb 4D5 murino, quimérico o humanizado ( trastuzumab) .

• El uso de una correspondiente composición farmacéutica para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer que no expresa en exceso HER2 o que expresa HER2 en baja cantidad, comparado con la expresión de EGFR. • Un anticuerpo biespecífico que comprende un primer sitio de fijación del antígeno que se une a EGFR, de preferencia derivado de mAb 425 murino, quimérico o humanizado (matuzumab) , y un segundo sitio de fijación del antígeno que se fija a HER2 , de preferencia derivado de mAb 425 murino, quimérico o humanizado 4D5 (trastuzumab) . BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN El principio de tratamiento combinado con anticuerpos monoclonales , con diferentes especificidades por estructuras antigénicas en los mismos o distintos receptores se describe aquí como ejemplo de tratamiento de tumor pancreático positivo para EGFR y HER 2. Sin embargo, este principio no se limita a cáncer de páncreas y se puede adaptar para el uso con cualquier otro cáncer que muestre un perfil de expresión de receptor igual o similar. Si no se indica de otro modo, los términos y las frases usadas en la presente invención tienen los significados y definiciones dados más adelante. Además, las definiciones y los significados describen la invención con mayor detalle, con inclusión de las formas de realización de preferencia. Un "receptor" o "molécula receptora" es una proteína o glucoproteína soluble o ligada / asociada a membrana que comprende uno o más dominios a los cuales se fija un ligando para formar un complejo receptor-ligando. Al fijar el ligando, que puede ser un agonista o un antagonista se activa o inactiva el receptor y puede iniciar o bloquear la vía de señales . Un "receptor ErbB" es una proteína tirosina quinasa receptora que pertenece, como ya se especificó con anterioridad, a la familia de receptores ErbB e incluye los receptores EGFR / HERI (ErbBl) , HER2 (ErbB2) , ErbB3 y ErbB4 y otros miembros de esta familia que se identificarán en el futuro. El receptor ErbB generalmente comprende un dominio extracelular, que puede fijar un ligando ErbB; un dominio lipofílico transmembrana; un dominio tirosina quinasa conservado intracelular; y un dominio de señal carboxilo terminal que contiene varios residuos tirosina que se puede fosforilar. El receptor ErbB puede ser un receptor ErbB de "secuencia nativa" o una de sus "variantes de secuencia de aminoácidos". De preferencia, el receptor ErbB es un receptor ErbB de secuencia nativa humana. Las expresiones "ErbBl" y "HERI" y "EGFR" se usan intercambiablemente en la presente y se refieren a una proteína HERI humana. Las expresiones "ErbB2" y wHER2 " se usan intercambiablemente en la presente y se refieren a una proteína HER2 humana. Se prefieren los receptores ErbBl (EGFR) de acuerdo con la presente invención El "dominio fijador de receptor ErbB" es, en el contexto de la presente invención, la región local (secuencia / asa / bolsillo fijador) del receptor ErbB al cual se fija un ligando natural o un fármaco antagonista o agonista. Esta reglón puede comprender no solo un sitio de fijación específico o epitopo, sino dos o más epitopos y sitios de fijación, respectivamente. Un epitopo de fijación específico dentro del dominio se fija a un tipo de fármaco o ligando antagonista o agonista. Sin embargo, se considera que la fijación de los diferentes agentes a diferentes epitopos dentro o casi adyacentes al dominio de fijación del mismo tipo de receptor generalmente causa por inhibición o activación una vía de señales diferenciada y singular que es típica para el receptor. Además, se debe destacar que la frase "dentro del dominio de fijación" usada en las presentes descripción y reivindicaciones incluye también ubicaciones cercanas al dominio de fijación real del (os) respectivo (s ) ligando (s) natural (es) . Por "epitopo de fijación o sitio de fijación de ErbB" se entiende una conformación y / o configuración de aminoácidos dentro o cerca del dominio de fijación de un receptor ErbB al que se fijan los antagonistas / agonistas de ligandos o receptores . El término ™antagonista / inhibidor de receptor ErbB" se refiere a una molécula biológicamente efectiva que se fija y bloquea o inhibe el receptor ErbB. En consecuencia, al bloquear el receptor, el antagonista impide la fijación del ligando ErbB (agonista) y la activación del complejo receptor con el agonista/ligando . Los antagonistas de ErbB pueden estar dirigidos a HERI (ErbBl, EGFR) , HER2 (ErbB2) y ErbB3 y ErbB4.

Los anticuerpos de preferencia de la invención son anticuerpos anti-Herl y anti-Her2. Los anticuerpos anti-Herl de preferencia son Ab 425, de preferencia MAb 425 humanizados (hMAb 425, matuzumab, EMD 72000, US 5.558.864; EP 0531 472) y MAb 225 quiméricos (cetuximab, ERBITUX®) . El anticuerpo anti-HER2 de mayor preferencia es HERCEPTIN® comercializado por Genentech/Roche . Los antagonistas eficaces de receptor EGF de acuerdo con la invención también pueden ser compuestos químicos naturales o sintéticos. Algunos ejemplos de moléculas de preferencia de esta categoría incluyen compuestos orgánicos, compuestos organometálicos, sales de compuestos orgánicos y compuestos orgánicos. Los ejemplos de antagonistas químicos de receptor HER2 son: compuestos heteroarilo -estearilo sustituidos (documento US 5.656.655); y/o compuestos heteroarilo, carbocíclicos y heterocarbocíclicos arilo bis mono- y/o bic clicos (documento US 5.646.153); compuestos pirimidina tricíclicos (documento US 5.679.683); derivados quinazolina con actividad inhibidora de receptor de tirosina quinasa (documento US 5.616.582); compuestos heteroariletenodiilo o heteroaril-etenodiilarilo (documento US 5.196.446); un compuesto designado como 6- (2 , 6-diclorofenil ) -2- (4- (2-dietil-aminoetoxi ) fenilamino) -8-metil-8H-pirido (2 , 3 ) -5-pirimidin-7-ona (Panek, et al., 1997, J. Pharmacol . Exp. Therap. 283,1433) que inhibe las familias de receptores EGFR, PDGFR y FGFR. El término " inhibidor/antagonista de tirosina quinasa" se refiere de acuerdo con la presente invención a agentes naturales o sintético capaces de inhibir o bloquear tirosina quinasas, incluso receptores de tirosina quinasas . En consecuencia, el término incluye antagonistas / inhibidores de receptor ErbB como los antes definidos . Con excepción de los anticuerpos anti-receptor ErbB mencionados antes y más adelante, los agentes antagonistas de tirosina quinasa de mayor preferencia según esta definición son compuestos químicas que han demostrado su eficacia en terapéutica monofarmacológica para cáncer de mama y próstata. Se pueden obtener adecuados inhibidores de tirosina quinasa de tipo indolocarbazol mediante información obtenida en documentos tales como las patentes de los Estados Unidos N.2 5.516.771; 5.654.427; 5.461.146; 5.650.407. Las patentes de los Estados Unidos N.a 5.475.110; 5.591.855; 5.594.009 y WO 96/11933 describen inhibidores de tirosina quinasa de tipo pirrolocarbazol y cáncer de próstata. Uno de los agentes anticáncer más promisorios en este contexto es gefitinib (IRESSA®, Astra Zeneca) , que según se informa posee notable eficacia terapéutica y excelente tolerancia en pacientes con cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) además de cáncer avanzado de cabeza y cuello. De preferencia, la dosificación de los inhibidores químicos de tirosina quinasa tal como se definieron antes es de 1 pg/kg a 1 g/kg de peso corporal por día. Con mayor preferencia, la dosificación de inhibidores de tirosina quinasa es de 0,01 mg/kg a 100 mg/kg de peso corporal por día. Las moléculas biológicas de acuerdo con la presente invención son de preferencia anticuerpos o sus fragmento o cualquier variación de anticuerpos tales como i munoconjugados . En este contexto, el término "anticuerpo." o "inmunoglobulina" en la presente se usa en el sentido más amplio y cubre específicamente anticuerpos monoclonales intactos, anticuerpos policlonales , anticuerpos multiespecífieos (por ejemplo anticuerpos biespecífieos ) formados a partir de al menos dos anticuerpos intactos, y fragmentos de anticuerpos, siempre que exhiban la actividad biológica deseada. El término generalmente incluye heteroanticuerpos compuestos por dos o más anticuerpos o sus fragmentos con diferente especificidad de unión unidos entre si. Según la secuencia de aminoácidos de sus regiones constantes, los anticuerpos intactos se puede asignar a diferentes "clases de anticuerpo (inmunoglobulina) " . Hay cinco clases principales de anticuerpos intactos: IgA, IgD, IgE, IgG, e IgM, y varios de ellos se pueden subdividir en "subclases" (isotipos) , por ejemplo, IgGl, IgG2, IgG3 , IgG4, IgA, e IgA2. Los dominios constantes de cadena pesada que corresponden a las diferentes clases de anticuerpos se denominan a, d, e, ? y µ respectivamente. La principal clase de preferencia de anticuerpos de acuerdo con la invención es IgG, con mayor detalle IgGl e IgG2. El término "anticuerpo monoclonal" tal como se usa en la presente se refiere a un anticuerpo obtenido de una población de anticuerpos sustancialmente homogéneos, es decir, todos los anticuerpos que comprende la población son idénticos, excepto posibles mutaciones naturales que pueden estar presentes en cantidades menores. Los anticuerpos monoclonales son muy específicos, y están dirigidos contra un único sitio antigénico. Además, en contraste con preparaciones de anticuerpo policlonales que incluyen diferentes anticuerpos dirigidos contra diferentes determinantes (epitopos) , cada anticuerpo monoclonal está dirigido contra un único determinante sobre el antígeno. Además de su especificidad, los anticuerpos monoclonales son ventajosos en cuanto a que se pueden sintetizar sin contaminación de otros anticuerpos. Los métodos para preparar anticuerpos monoclonales incluyen el método de hibridoma descrito por Kohler y Milstein ( 1975 , Nature 256 , 495 ) y en "Monoclonal Antibody Technology, The Production and Characterization of Rodent and Human Hybridomas" ( 1985 , Burdon et al., Eds, Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, Volume 13 , Losevier Science Publishers, Ámsterdam) , o se pueden preparar por métodos bien conocidos de ADN recombinante (ver, por ejemplo, US 4 . 816 . 567 ) . Los anticuerpos monoclonales también se pueden aislar de bibliotecas de anticuerpos de fagos mediante la técnica descrita en Clackson et al., Nature, 352 : 624-628 ( 1991 ) y Marks et al., J. Mol. Biol . , 222:58, 1-597 ( 1991 ) , por ejemplo. El término "anticuerpo quimérico" significa anticuerpos en los cuales una porción de la cadena liviana y/o pesada es idéntica u homologa a las correspondientes secuencias de anticuerpos derivadas de una especie particular o perteneciente a un anticuerpo de clase subclase particular, mientas que el resto de la(s) cadena (s) es idéntico u homólogo con las correspondientes secuencias de anticuerpos derivados de otras especies o pertenece a otra clase o subclase de anticuerpo, además de los fragmentos de los anticuerpos, siempre que exhiban la actividad biológica deseada (por 23 ejemplo: US 4.816.567; Morrison et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)). Los métodos para preparar anticuerpos quiméricos y humanizados también son conocidos en el arte. Por ejemplo, los métodos para preparar anticuerpos quiméricos incluyen los descritos en las patentes de Boss (Celltech) y de Cabilly (Genentech) (US 4.816.397; US 4.816.567) . Los "anticuerpos humanizados" son formas de anticuerpos quiméricos no humanos (por ejemplo, de roedores) anticuerpos que contienen una secuencia mínima derivada de inmunoglobulina no humana. En su mayor parte, los anticuerpos humanizados son inmunoglobulinas humanas (anticuerpos del receptor) en los cuales residuos de una región hipervariable (CDR) del receptor son reemplazados por residuos de una región hipervariable de una especie no humana (anticuerpos del donante) tales como ratón, rata, conejo o primate no humano con la especificidad, afinidad y capacidad buscadas. En algunas instancias, los residuos de la región marco (FR) de la inmunoglobulina humana son reemplazados por los correspondientes residuos no humanos . Además, los anticuerpos humanizados pueden comprender residuos que no se encuentran en el anticuerpo del receptor o en el anticuerpo del donante. Estas modificaciones se hacen para refinar aun más el rendimiento del anticuerpo. En general, el anticuerpo humanizado comprende sustancialmente todos de al menos uno, y generalmente dos, dominios variables, en donde la totalidad o sustancialmente todas las asas hipervariables corresponden a las de una inmunoglobulina no humana y todos o sustancialmente todos los FR son los de una secuencia de inmunoglobulina humana. El anticuerpo humanizado opcionalmente también comprende al menos una porción de una región constante de inmunoglobulina (Fe) , generalmente de una inmunoglobulina humana. Los métodos para preparar anticuerpos humanizados se describen, por ejemplo, en Winter (documento US 5.225.539) y Boss (Celltech, documento US 4.816.397). Los "fragmentos de anticuerpo" comprenden una porción de un anticuerpo intacto, de preferencia comprenden la región fijadora de antígeno o su región variable. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpo incluyen los fragmentos Fab, Fab' , F(ab')2, Fv y Fe, diacuerpos, anticuerpos lineales, moléculas de anticuerpo de cadena única; y anticuerpos multiespecificos formados de fragmentos de anticuerpos. Un anticuerpo "intacto" es el que comprende una región variable fijadora de antígeno además de un dominio constante de cadena liviana (CL) y dominios constantes de cadena pesada, CHl, CH2 y CH3. De preferencia, el anticuerpo intacto tiene una o más funciones efectoras. La digestión por papaína de los anticuerpos produce dos fragmentos fijadores de antígeno idénticos, denominados fragmentos "Fab", donde cada uno comprende un único sitio fijador de antígeno y una región CL y CHl, y un fragmento residual "Fe", cuyo nombre refleja su capacidad para cristalizar con facilidad. La región MFe" de los anticuerpos comprende, como regla, un CH2, CH3 y la región bisagra de una clase principal de anticuerpo IgGl o IgG2. La región bisagra es un grupo de aproximadamente 15 residuos de aminoácido que combinan la región CHl con la región CH2-CH3. El tratamiento con pepsina genera un fragmento wF(ab')2" que tiene dos sitios fijadores de antígeno y aun es capaz de formar enlaces cruzados con el antígeno. "Fv" es el mínimo fragmento de anticuerpo que contiene un sitio completo de reconocimiento de antígeno y de fijación del antígeno. Esta región consiste en un dímero de un dominio variable de una cadena pesada y una cadena liviana en asociación estrecha, no covalente. En esta configuración, las tres regiones hipervariables (CÍDR) de cada dominio variable interactúan para definir un sitio fijador de antígeno en la superficie del dímero VH - VL. En conjunto, las seis regiones hipervariables confieren especificidad fijadora de antígeno al anticuerpo. Sin embargo, incluso un único dominio variable (o la mitad de un Fv que solo comprende tres regiones hipervariables específicos de un antígeno) tiene capacidad para reconocer y fijar el antígeno, si bien con menor afinidad que todo el sitio de unión. El fragmento "Fab" también contiene el dominio constante de la cadena liviana y el primer dominio constante (CHl) de la cadena pesada y tiene solo un sitio fijador de antígeno. Los fragmentos nFab'" difieren de los fragmentos Fab por la adición de pocos residuos al terminal carboxi del dominio de la cadena pesada CHl que incluye una o más cisternas de la región bisagra del anticuerpo. Los fragmentos F(ab')2 de anticuerpo eran producidos originalmente como pares de fragmentos Fab' que tienen cisteínas bisagra entre ellos. También se conocen otros acoplamientos químicos de fragmentos de anticuerpos (ver por ejemplo Hermanson, Bioconjugate Techniques, Academic Press, 1996; US 4.342.566). Los fragmentos de anticuerpos "Fv de cadena única" o "scFv" comprenden los dominios V, y V, del anticuerpo, en donde estos dominios están presentes en una única cadena polipeptídica . De preferencia, el polipéptido Fv también comprende un polipéptido ligador entre los dominios VH y VL, lo cual permite que scFv forme la estructura deseada para el fijador de antígeno. Los anticuerpos Fv de cadena única se conocen, por ejemplo, de Plückthun (The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Vol . 113, Rosenburg y Moore eds . , Springer-Verlag, Nueva York, pp. 269-315 (1994)), W093/16185; US .5.571.894; US 5.587.458; Huston et al. (1988, Proc. Nati. Acad. Sci . 85, 5879) o Skerra y Plueckthun (1988, Science 240, 1038) . Los * anticuerpos biespecífieos" (BAb) son anticuerpos únicos divalentes (o sus fragmentos con efectividad inmunoterapéutica) que tienen dos sitios fijadores de antígeno con especificidad diferente. De acuerdo con la presente invención, los BAb se caracterizan como BAb <MAb 1, MAb 2>, en donde < Ab 1> y < Ab 2> designa sitios fijadores de antígeno derivados de MAb 1 y MAb 2. Por ejemplo el primer sitio fijador de antígeno está dirigido a un receptor de angiogénesis (por ejemplo receptor de integrina o VEGF) , mientras que el segundo sitio fijador de antígeno está dirigido a un receptor ErbB (por ejemplo EGFR o HER2) . Los anticuerpos biespecíficos se pueden producir mediante técnicas químicas (ver por ejemplo, Kranz et al. (1981) Proc. Nati. Acad. Sci . USA 78, 5807), por técnicas de "polioma" (ver US 4.474.893) o por técnicas de ADN recombinante, todas conocidas por sí mismas. Otros métodos se describen en WO 91/00360, WO 92/05793 y WO 96/04305. Los anticuerpos biespecíficos también se pueden preparar a partir de anticuerpos de cadena única (ver por ejemplo, Huston et al. (1988) Proc. Nati. Acad. Sci. 85, 5879; Skerra y Plueckthun (1988) Science 240, 1038) . Estos son análogos de regiones de anticuerpo variable producidos como una cadena de polipéptido único. Para formar el agente fijador biespecífico, los anticuerpos de cadena única se pueden acoplar químicamente o por métodos de ingeniería genética conocidos en el arte. También es posible producir anticuerpos biespecíficos de acuerdo con la presente invención mediante secuencias de cierre de leucina. Las secuencias empleadas derivan de regiones de cierre de leucina de los factores de transcripción Fos y Jun (Landschulz et al., 1988, Science 240,1759; para una revisión, ver Maniatis y Abel, 1989 , Nature 341 , 24 ) . Los cierres de leucina son secuencias de aminoácidos especificas de aproximadamente 20-40 residuos de longitud que generalmente tienen leucina cada séptimo residuo. Las secuencias cierre formas hélices a antipáticas, en donde los residuos de leucina se alinean sobre la cara hidrofóbica de la formación dimérica. Los péptidos correspondientes a los cierres de leucina de las proteínas Fos y Jun forman de preferencia heterodímeros (O'Shea et al., 1989 , Science 245 , 646 ) . Los cierres que contienen anticuerpos biespecíficos y los métodos para prepararlos también se describen en WO 92 / 10209 y WO 93 / 11162 . El término "inmunoconjugado" se refiere a una proteína de fusión y significa un anticuerpo o inmunoglobulina, respectivamente, o uno de sus fragmentos inmunológicamente efectivo, que se fusiona por unión covalente a una molécula no inmunológicamente efectiva. De preferencia, esta pareja de fusión es un péptido o una proteína, que puede estar glucosilada. La molécula no anticuerpo puede ser ligada al C terminal de las cadenas pesadas constantes del anticuerpo o a los N terminales de las cadenas variables livianas y/o pesadas. Las parejas de fusión pueden estar ligadas a través de una molécula ligadora, que, como norma, es un péptido que contiene 3 - 15 residuos de aminoácido. Los inmunoconjugados de acuerdo con la presente invención son proteínas de fusión que consisten en una inmunoglobulina o uno de sus fragmentos inmunoterapéuticamente efectivos, dirigido contra un receptor ErbB, y de preferencia una citoquina, tales como TNFa, IFNy o IL-2, u otro agente tóxico. De preferencia, estas moléculas peptídicas o basadas en proteínas están ligadas con su N terminal al C terminal de la inmunoglobulina, que es su porción Fe. El término " citoquina" es un término genérico para las proteínas liberadas por una población celular, que actúan sobre otra célula como mediadores intercelulares. Los ejemplos de las citoquinas son linfoquinas, monoquinas y hormonas polipeptídicas tradicionales. Se incluyen entre las citoquinas las hormonas de crecimiento tales como hormona de crecimiento humana, N-metionil hormona de crecimiento humana, y hormona de crecimiento bovina; hormona paratiroidea; tiroxina; insulina; proinsulina; relaxina; prorrelaxina; hormonas glucoproteicas tales como hormona estimulante de folículos (FSH) , hormona estimulante de tirodies (TSH) , y hormona luteinizante (LH) ; factor de crecimiento hepático; factor de crecimiento de fibroblastos; prolactina; lactógeno placentario; péptido asociado a gonadotrofina de ratón; inhibina; activina; factor de crecimiento de endotelio vascular (VEGF) ; integrina; trombopoyetina (TPO) ; factores de crecimiento nervioso tales como NGFS; factor de crecimiento de plaquetas; factores de crecimiento de transformación (TGF) tales como TGFOt y TGFS; eritropoyetina (EPO) ; interferones tales como IFNoc, IFNE, y IFNy,- factores estimulantes de colonias tales como -CSF, GM-CSF y G-CSF; interleuquinas tales como IL-1, IL-Ia, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7 , IL-8, IL-9 , IL-10, IL-ll, IL-12; y TNF-a o TNF-ß. Las citoquinas de preferencia de acuerdo con la invención son interferones, TNFa y IL-2. El enfoque terapéutico de la presente invención incluye como forma de realización específica la administración de otros agentes terapéuticamente efectivos, que sostienen el efecto deseado, por ejemplo toxicidad tumoral o eficacia citostática, o disminuyen o previenen efectos secundarios indeseados. En consecuencia, la invención incluye la combinación de los agentes con la composición farmacéutica definida y reivindicada antes y más adelante, en donde los agentes pueden ser otros antagonistas de receptor ErbB, antagonistas de receptor VEGF, citoquinas, inmunoconjugados de citoquina, gentes antiangiogénicos , agentes antihormonales, o agentes citotóxicos en general. También es un objeto de la presente invención combinar las composiciones definidas en la presente con radioterapia de acuerdo con métodos conocidos . El término wagente citotóxico" tal como se usa en este contexto se define muy ampliamente y se refiere a una sustancia que inhibe o impide la función de las células y / o causa destrucción de las células (muerte celular) , y / o ej-erce efectos antineoplásicos / antiproliferativos , por ejemplo, impide directa o indirectamente el desarrollo, la maduración o la diseminación de células tumorales neoplásicas. El término incluye expresamente también los agentes que causan solo un efecto citostático y no un mero efecto citotóxico. El término "agente quimioterapéutíco" es un subtipo del término "agente citotóxico" y significa específicamente agentes químicos que ejercen efectos antineoplásicos , de preferencia directamente sobre las células tumorales, y menos indirectamente a través de mecanismos tales como modificación de la respuesta biológica. Los agentes quimioterapéuticos adecuados de acuerdo con la invención son de preferencia compuestos químicos naturales o sintéticos. Hay gran cantidad de agentes químicos antineoplásicos disponibles en el uso comercial, en la evaluación clínica y en el desarrollo preclínico, que se pueden incluir en la presente invención para el tratamiento de tumores / neoplasias por terapéutica combinada con los antagonistas de receptor reivindicados y descritos en la presente invención. El término incluye especialmente los agentes especificados más adelante, además de otros antagonistas de ErbB (tales como anticuerpos anti-ErbB) , agentes antiangiogénicos , inhibidores de tirosina quinasa, inhibidores de proteína quinasa A, miembros de la familia de citoquinas, isótopos radiactivos, y toxinas tales como toxinas enzimáticamente activas de origen bacteriano, fúngico, vegetal o animal. Los agentes quimioterápicos de preferencia son amifostina (etiool) , cisplatino, dacarbazina (DTIC) , dactinomicina, mecloretamina (mostaza nitrogenada) , estreptozocina, ciclofosfamida, carrnustina (BCNU) , lomustina (CC U) , doxorrubicina (adriamicina) , lipodoxorrubicina (doxil) , gemcitabina (gemzar) , daunorrubíciña, lipodaunorrubicina (daunoxoma) , procarbazina, mitomicina, citarabins, etopósido, metotrexato, 5-fluorouracilo ( 5-FU) , vinblastina, vincristina, bleomicina, paclitaxel (taxol), docetaxel (taxotere) , aldesleuquina, asparaginasa, busulfan, carboplatino, cladribina, camptotecina, CPT-11, 10-hidroxi-7-etil-camptotecina (SN38) , gefitinib (Iressa) , dacarbazina, floxuridina, fludarabina, hidroxiurea, ifosfamida, idarubicina, mesna, interferón alfa, interferón beta, irinotecano, mitoxantrona, topotecano, leuprolida, megestrol, melfalano, mercaptopurina, plicamicina, mitotano, pegaspargaso, pentostatina, pipobromano, plicamicina, estreptozocina, tamoxifeno, tenipósido, testolactona, tioguanins, tiotepa, mostaza de uracilo, vinorelbina, clorambucilo y sus combinaciones. Los agentes quimiotácticos de mayor preferencia de acuerdo con la invención son cisplatino, gemcitabina, doxorrubicina, paclitaxel (taxol) y bleomicina. Los términos n cáncer" y "tumor" se refieren o describen la condición fisiológica en mamíferos generalmente caracterizada por crecimiento celular no regulado. Mediante las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la presente invención se pueden tratar tumores tales como tumores de mama, corazón, pulmón, intestino delgado, colon, bazo, riñon, vejiga, cabeza y cuello, ovario, próstata, cerebro, páncreas, piel, hueso, médula ósea, sangre, timo, útero, testículos, cérvix, e hígado. Más específicamente, el tumor es seleccionado del grupo que consiste en adenoma, angiosarcoma, astrocitoma, carcinoma epitelial, germinoma, glioblastoma, glioma, hamartoma, hemangioendotelioma, hemangiosarcoma, hematoma, hepatoblastoma, leucemia, linfoma, meduloblastoma, melanoma, neuroblastoma, osteosarcoma, retinoblastoma, rabdomiosarcoma, sarcoma y teratoma. En detalle, el tumor es seleccionado del grupo que consiste en melanoma acral lentiginoso, queratosis actínica, adenocarcinoma, carcinoma cisticoadenoids , adenomas, adenosarcoma, carcinoma adenopavimentoso, tumores astrocíticos , carcinoma de glándula de Bartolino, carcinoma de células básales, carcinoma de glándulas bronquiales, capillares, carcinoides, carcinoma, carcinosarcoma, cavernoso, colangiocarcinoma, condosarcoma, papiloma/carcinoma de plexo coroideo, carcinoma de células claras, cistadenoma, tumor de seno endodérmico, hiperplasia endometrial, sarcoma de estroma endometrial, adenocarcinoma endometrioide, ependimal, epitelioide, sarcoma de Ewinn, hiperplasia fibrolaminal , focal nodular, gastrinoma, tumoresde células germinales, glioblastoma, glucagonoma, hemangiblastomas , hemangioendotelioma, hemangiornas , adenoma hepático, adenomatosis hepática, carcinoma hepatocelular , insulinoma, neoplasia intraepitelial , neoplasia interepitelial de células pavimentosas , carcinoma invasivo de células pavimentosas , carcinoma de células grandes, leiomiosarcoma, melanomas de léntigo maligno, melanoma maligno, tumores mesoteliales malignos, meduloblastoma, meduloepitelioma, melanoma, meníngeo, mesotelial, carcinoma metastático, carcinoma mucoepidermoide, neuroblastoma, melanoma neuroepitelial , adenocarcinoma nodular, carcinoma de células de avena, oligodendroglia, osteosarcoma, polipéptido pancreático, adenocarcinoma papilar seroso, células pineales, tumores hipofisarios , plasmacitoma, seudosarcoma, blastoma pulmonar, carcinoma de células renales, retinoblastoma, rabdomiosarcoma, sarcoma, carcinoma seroso, carcinoma de células pequeñas, carcinomas de tejidos blandos, tumor secretor de somatostatina, carcinoma pavimentoso, carcinoma de células pavimentosas, submesotelial , melanoma de diseminación superficial, carcinoma indiferenciado, melanoma uveal, carcinoma verrucoso, vipoma, carcinoma bien diferenciado y tumor de Wilm. Los tumores que de preferencia se pueden tratar con las moléculas de anticuerpo de acuerdo con la invención son tumores sólidos o metástasis de tumores que expresan receptor ErbB, especialmente receptores ErbBl, en gran cantidad, tales como cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de cabeza y cuello, SCLC, cáncer de páncreas, pero respecto de receptores ErbB2 (HER2) también en menor cantidad. El término nbiológicamente/funcionalmente efectivo" o " terapéuticamente efectivo (cantidad)" se refiere a un fármaco/molécula que causa una función biológica o el cambio de una función biológica in vivo o in vitro, y que es efectivo en una cantidad especifica para tratar una enfermedad o trastorno en un mamífero, de preferencia en un humano. En el caso de cáncer, la cantidad terapéuticamente efectiva del fármaco puede reducir la cantidad de células cancerosas ; reducir el tamaño del tumor; inhibir (es decir, enlentecer en cierto grado y de preferencia detener) la infiltración de células cancerosas en los órganos periféricos; inhibir, (es decir, enlentecer en cierto grado y de preferencia detener) la metástasis del tumor; inhibir, hasta cierto grado, el crecimiento del tumor; y/o aliviar hasta cierto grado uno o más de los síntomas asociados con el cáncer. Hasta el grado en el cual el fármaco puede prevenir el crecimiento y/o matar las células cancerosas existentes, puede ser citostático y/o citotóxico. Para la terapia de cáncer, se puede medir la eficacia, p.ej., al evaluar el tiempo de progresión de la enfermedad (TTP) y/o determinar la tasa de respuesta (RR) . El término " inmunoterapéuticamente efectivo" se refiere a moléculas biológicas que causan una respuesta inmune en un mamífero. Más específicamente, el término se refiere a moléculas que pueden reconocer y fijar un antígeno. Generalmente, los anticuerpos, los fragmentos de anticuerpo y las proteínas de fusión de anticuerpo que comprenden sus sitios fijadores de antígeno (regiones determinantes de complementariedad, CDR) son inmunoterapéuticamente efectivos . ""Radioterapia" : De acuerdo con la invención, los tumores también se pueden tratar con radiación o radiofarmacéuticos . La fuente de radiación puede ser externa o interna al paciente tratado. Cuando la fuente es externa al paciente, la terapia se denomina terapia de radiación con rayo externo (EBRT) . Cuando la fuente de radiación es interna al paciente, el tratamiento se denomina braquiterapia (BT) . Algunos de los típicos átomos radiactivos utilizados incluyen radio, cesio-137 , e iridio-192 , americio-241 y oro-198 , cobalto-57 ; cobre-67 ; tecnecio-99 ; yodo-123 ; yodo-131 ; e indio-111 . También es posible rotular los agentes de acuerdo con la invención con isótopos radiactivos. En la actualidad, la radioterapia es el tratamiento estándar para controlar tumores no resecables o inoperables y / o metástasis de tumores. Se han observado resultados mejorados cuando se combinó la radioterapia con quimioterapia. La radioterapia se basa en el principio de que alta dosis de radiación provista a una zona blanco produce la muerte de las células en reproducción de los tejidos tumorales y normales. El régimen de dosificación de radiación generalmente se define en términos de dosis de radiación absorbida (rad) , tiempo y fraccionamiento, y debe ser definido con cuidado por el oncólogo. La cantidad de radiación que un paciente recibe depende de diversas consideraciones, pero las dos más importantes son la ubicación del tumor en relación con otras estructuras u órganos críticos del organismo, y el grado de diseminación del tumor. Un curso de preferencia de tratamiento para un paciente sometido a radioterapia sería un esquema de tratamiento durante un período de 5 a 6 semanas, con una dosis total de 50 a 60 Gy administrados al paciente en una única fracción diaria de 1,8 a 2,0 Gy, 5 días por semana. Gy es la abreviatura de Gray y se refiere a una dosis de 100 rad. Si los tumores se tratan con los anticuerpos anti-ErbB tal como se describe en la presente invención en el contexto con un régimen de radiación, generalmente se observa un e£ecto positivo, e incluso sinérgico. En otras palabras, la inhibición del crecimiento tumoral mediante los compuestos se mejora cuando se combinan radiación y / o agentes quimioterapéuticos . La radioterapia se puede usar opcionalmente de acuerdo con la invención. Se recomienda y prefiere en casos en los cuales no se puede administrar cantidades suficientes de los agentes de acuerdo con la invención al paciente.

"Tratamiento farmacéutico" : El método de la invención comprende diversas modalidades para la práctica de la invención en términos de las etapas. Por ejemplo, los agentes de acuerdo con la invención se pueden administrar simultáneamente, secuencialmente, o por separado. Además, los agentes se pueden administrar por separado dentro de un intervalo de aproximadamente 3 semanas entre administraciones, es decir, desde sustancialmente inmediatamente después de administrar el primer agente activo hasta aproximadamente 3 semanas después de administrar el primer agente. El método se puede llevar a la práctica después de un procedimiento quirúrgico. Alternativamente, el procedimiento quirúrgico se puede practicar durante el intervalo entre la administración del primer agente activo y el segundo agente activo. Es ejemplo de este método la combinación del presente método con la extracción del tumor por cirugía. El tratamiento de acuerdo con el método generalmente comprende la administración de las composiciones terapéuticas en uno o más ciclos de administración. Por ejemplo, cuando se practica una administración simultánea, se administra una composición terapéutica que comprende ambos agentes durante un período de aproximadamente 2 días a aproximadamente 3 semanas en un único ciclo. Luego, se puede repetir el ciclo de tratamiento según necesidad de acuerdo con el criterio del médico a cargo. De modo similar, cuando se considera una aplicación en secuencia, el momento de administración de cada agente terapéutico individual se ajustará para cubrir generalmente el mismo período. El intervalo entre ciclos puede variar de aproximadamente cero a 2 meses. Los agentes de la presente invención se pueden administrar por vía parenteral por inyección o por infusión gradual durante un período. Si bien el tejido tratado generalmente se accede en el cuerpo mediante la administración sistémica y en consecuencia a menudo se tratan por administración intravenosa de las composiciones terapéuticas, se consideran otros tejidos y medios de provisión cuando hay probabilidad de que el tejido blanco contenga la molécula blanco. En consecuencia, los agentes de la presente invención se pueden administrar por vía intraocular, intravenosa, intraperitoneal , intramuscular, subcutánea, intracavidad, transdérmica, por inyección ortotópica e infusión, y también se puede suministrar por medios peristálticos. Las composiciones terapéuticas que contienen, por ejemplo, un antagonista de integrina de la presente invención se administran convencionalmente por vía intravenosa, o por inyección de una dosis unitaria, por ejemplo. Las composiciones terapéuticas de la presente invención contienen un portador fisiológicamente tolerable junto con el agente relevante tal como se describe en la presente, disuelto o disperso allí como ingrediente activo. Tal como se usa en la presente, el término " farmacéuticamente aceptable" se refiere a composiciones, portadores, diluyentes y reactivos que representan materiales capaces de la administración a un mamífero sin producción de efectos fisiológicos indeseables tales como náuseas, mareos, molestias gástricas y similares. La preparación de una composición farmacológica que contiene ingredientes activos disueltos o dispersos allí es bien conocida en el arte y no necesita estar limitada sobre la base de la formulación. Generalmente, las composiciones se preparan como inyectables, ya sea en soluciones o suspensiones líquidas, sin embargo, también se pueden preparar formas sólidas adecuadas para soluciones, o suspensiones en líquido antes de usarlos. La preparación también se puede emulsificar. El ingrediente activo se puede mezclar con excipientes farmacéuticamente aceptables y compatibles con el ingrediente activo y en cantidades adecuados para el uso en los métodos terapéuticos descritos en la presente. Los excipientes adecuados son, por ejemplo, agua, solución fisiológica, dextrosa, glicerol, etanol o similares y sus combinaciones. Además, si se desea, la composición puede contener cantidades menores de sustancias auxiliares tales como agentes humectantes o emulsificantes , agentes buffer de pH y similares que mejoran la efectividad del ingrediente activo. La composición terapéutica de la presente invención puede incluir sales farmacéuticamente aceptables de sus componentes . Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen las sales de adición de ácidos (formadas con los grupos amino libres del polipéptido) formados con ácidos inorgánicos tales como, por ejemplo, ácidos clorhídrico o fosfórico, o ácidos orgánicos tales como acético, tartárico, mandélico y similares. Las sales formadas con los grupos carboxilo libres también se pueden derivar de bases inorgánicas tales como, por ejemplo, hidróxidos de sodio, potasio, amonio, calcio o férrico, y bases orgánicas tales como isopropilamina, trimetilamina, 2-etilaminoetanol , histidina, procaína y similares. Particularmente, se prefiere la sal HCI cuando se usa en la preparación de antagonistas cíclicos de polipéptido av. Los portadores fisiológicamente tolerables son bien conocidos en el arte. Los ejemplos de portadores líquidos son soluciones acuosas estériles que no contienen materiales además de los ingredientes activos y agua, o contienen un buffer tal como fosfato de sodio en un valor de pH fisiológico, solución fisiológica o ambos, tales como solución fisiológica con buffer fosfato. Más aun, los portadores acuosos pueden contener más de una sal buffer, además de sales tales como cloruro de sodio y potasio, dextrosa, polietilenglicol y otros solutos. Las composiciones líquidas también pueden contener fases líquidas además y excluyendo agua. Son ejemplos de tales fases líquidas adicionales glicerina, aceites vegetales tales como aceite de semilla de algodón, y emulsiones de agua-aceite. Generalmente, una cantidad terapéuticamente efectiva de un agente inmunoterapéutico, por ejemplo, en la forma de un anticuerpo bloqueador de receptor ErbB (ErbBl, ErbB2) o un correspondiente conjugado de anticuerpo es una cantidad tal que cuando se administra en una composición fisiológicamente tolerable, es suficiente para lograr una concentración plasmática de aproximadamente 0,01 microgramos ^g) por mililitro (mi) a aproximadamente 100 µg ml, de preferencia de aproximadamente 1 g ml a aproximadamente 5 g/ml y generalmente de aproximadamente 5 µg ml . Establecido de otro modo, la dosis puede variar de aproximadamente 0,1 mg/kg a aproximadamente 300 mg/kg, de preferencia de aproximadamente 0,2 mg/kg a aproximadamente 200 mg/kg, con mayor preferencia de aproximadamente 0,5 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg, en una o más administraciones diarias de dosis durante uno o varios días. Cuando el agente inmunoterapéutico está en la forma de un fragmento de un anticuerpo monoclonal o un conjugado, la cantidad se puede ajustar fácilmente sobre la masa del fragmento / conjugado respecto de la masa de todo el anticuerpo. Una concentración plasmática de preferencia en molaridad es de aproximadamente 2 micromolar (µ?) a aproximadamente 5 milimolar (mM) y de preferencia, aproximadamente 100 µ? a 1 mM de antagonista de anticuerpo. Una cantidad terapéuticamente efectiva de un agente de acuerdo con la presente invención que no -es un péptido inmunoterapéutico o un polipéptido u otra molécula biológica de tamaño similar, generalmente es una cantidad de polipéptido tal que cuando se administra en una composición fisiológicamente tolerable es suficiente para lograr una concentración plasmática de aproximadamente 0 , 1 microgramo ^g) por mililitro (mi) a aproximadamente 200 µg/ml, de preferencia de aproximadamente 1 g/ml a aproximadamente 150 g/ml . Sobre la base de un polipéptido con una masa de aproximadamente 500 gramos por mol, la concentración plasma preferida en molaridad es de aproximadamente 2 micromolar (µ?) a aproximadamente 5 milimolar (mM) y de preferencia aproximadamente 100 µ? a 1 mM de antagonista de polipéptido. La dosis típica de u agente activo, que de preferencia es un agente químico citotóxico o quimioterapéutico de acuerdo con la invención (ni un agente inmunoterapéutico ni un péptido/proteína no inmunoterapéutico) es 10 mg a 1000 mg, de preferencia aproximadamente 20 a 200 mg, y más de preferencia 50 a 100 mg por kilogramo de peso corporal por día. Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden comprender la frase de abarcar el tratamiento de un sujeto con agentes que reducen o evitan efectos secundarios asociados con la terapéutica combinada de la presente invención ("terapéutica adjunta"), que incluye, sin limitaciones, los agentes, p.ej., que reducen el efecto tóxico de fármacos anticancerosos, p.ej., inhibidores de resorción ósea, agentes cardioprotectores . Los agentes adjuntos previenen o reducen la incidencia de náuseas y vómitos asociados con la quimioterapia, la radioterapia o la cirugía, o reducen la incidencia de infección asociada con la administración de fármacos anticáncer mielosupresores . Los agentes adjuntos son bien conocidos en el arte. Los agentes inmunoterapéuticos de acuerdo con la invención también se pueden administrar con adyuvantes tales como BCG y estimuladores del sistema inmune. Además, las composiciones pueden incluir agentes inmunoterapéuticos o agentes quimioterapéuticos que contienen isótopos con marca radiactiva efectivas como citotóxicos, u otros agentes citotóxicos, tales como péptidos citotóxicos (p.ej. citoquinas) o fármacos citotóxicos y similares. El término "kit farmacéutico" para tratar tumores o metástasis de tumores se refiere a un embalaje y, como norma, instrucciones para usar los reactivos en los métodos para tratar tumores y metástasis de tumores . Un reactivo en un kit de la presente invención generalmente se formula como composición terapéutica tal como se describe en la presente, y en consecuencia puede ser cualquiera de diversas formas adecuadas para la distribución en un kit. Las formas pueden incluir un líquido, polvo, comprimido, suspensión y formulaciones similares para proveer las moléculas farmacéuticas de la presente invención, de preferencia los anticuerpos anti-ErbB. Los reactivos se pueden proveer en recipientes separados adecuados para la administración por separado de acuerdo con los presentes métodos, o alternativamente se pueden proveer combinados en una composición en un único recipiente en el embalaje. El embalaje puede contener una cantidad suficiente para una o más dosis de reactivos de acuerdo con los métodos de tratamiento descritos en la presente. Un kit de la presente invención también contiene "instrucciones de uso" de los materiales contenidos en el embalaje. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Fig. 1. Análisis inmunohistoquímico y por citometría de flujo de la expresión de EGFR y HER2 en células BxPC3. Se usaron células A431 y SK-BR-3 como controles positivos de EGFR y HER2, respectivamente. Se usaron controles negativos (NC) para el análisis inmunohistoquímico de fondo. Para el análisis por citometría de flujo, El pico blanco representa células control incubadas solo con los anticuerpos con marca FITC. Los picos negros y gris describen la tinción de la superficie celular con los anticuerpos anti-EGFR y anti-HER2, respectivamente . Fig. 2. Biodistribución de anticuerpos con marca radiactiva EMD72000 y trastuzumab en ratones desnudos portadores de xenoinjerto de carcinoma pancreático humano (BxPC-3). Los ratones recibieron una coinfección i.v. de 1251 EMD72000 y 1311 trastuzumab. Los ratones fueron sacrificados cuarenta y ocho horas después de la inyección. Se pesaron la sangre, el tumor, y todos los órganos normales, y se midió la radiactividad diferencial en un contador centelleo de canal dual. Los resultados se expresan como porcentaje de la dosis inyectada de radiactividad presente por gramo de tejido (% ID/g) . Figs. 3A-3B. Efectos de trastuzumab y EMD72000 solos o en combinación sobre el crecimiento de xenoinjertos BxPC-3 (figura 3A) . Los volúmenes medios pretratamiento de los tumores fueron de 77 ± 49 mm3. Los ratones recibieron inyecciones i.p. de 50 Hg de anticuerpos dos veces por semana durante cuatro semanas . Había ocho ratones en cada grupo de tratamiento. Los resultados indican el volumen promedio de tumor ± SD durante el tratamiento (día 27 a día 54) . Figs. 4A-4B. Efectos de trastuzumab y EMD72000 solos o en combinación sobre el crecimiento de xenoinjertos BxPC-3 (Figura 4B) . Los volúmenes medios pretratamiento de los tumores fueron de 502 ± 205 mm3. Los ratones recibieron inyecciones i.p. de 50 Hg o 200 Hg de anticuerpos dos veces por semana durante cuatro semanas . Había ocho ratones en cada grupo de tratamiento. Los resultados se expresaron como evolución de tumor en función del tiempo tras el trasplante y el tratamiento con EMD7200 y/o trastuzumab (Fig. 4A) . Las curvas de supervivencia de Kaplan-Meier obtenidas como función del tiempo para todos los grupos se presentan en la Fig. 4B. Fig. 5 . Inhibición de crecimiento in vitro de células BxPC-3 tratadas con trastuzumab y EMD72000 solo o en combinación. Las células BxPC-3 se sembraron a 10. 000 células /cavidad en una placa de 96 cavidades y se dejaron adherir durante la noche. Al día siguiente se trataron las células con trastuzumab y EMD72000 solo o en combinación en una relación fija 1:1. Después de cinco días se realizó el ensayo de MTS tal como se describe en Materiales y Métodos. Cada valor representa el promedio ± SEM (n = 6 ) . Figs . 6A-6B. Expresión en la superficie celular de EGFR y HER2 tras el tratamiento con anticuerpo. Después de 24 h en un medio sin factores de crecimiento, las células BxPC-3 se trataron con 10 Hg/ml de trastuzumab, EMD72000 o ambos anticuerpos o 100 ng/ml de EGF durante 48 h. Se determinó la expresión de EGFR y HER2 por citometría de flujo tal como se describe en Materiales y Métodos. La señal de fluorescencia promedio (n = 3 ) asociada con células para HER2 y EGFR marcados se cuantificó mediante el parámetro de fluorescencia promedio geométrico (GM) provisto con el Cell Quest Software (Becton Dickinson) . Fig. 7. Efecto de trastuzumab y EMD72000 solo o en combinación sobre la fosforilación de EGFR y HER2. Las células se trataron con 10 Hg/ml de anticuerpos durante 48 h. Antes de la extracción de la proteína se incubaron las células 10 min con 100 ng/ml de EGF. Se realizó Western blot tal como se describe en Materiales y Métodos . GAPDH sirvió como control . DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Se obtuvieron líneas celulares de carcinoma pancreático humano (BxPC-3), mama (SK-BR-3), y vulvar epidermoide (A431) de American Type Culture Collection (Rockville, MD, EE.UU.)/ y se mantuvieron en las condiciones recomendadas . Las células se controlaron por la ausencia de mycoplasma mensualmente . EJEMPLOS Ejemplo 1: Expresiones elevada de EGFR y moderada de HER2 de receptores de superficie celular Los análisis inmunohistoquímicos en BxPC-3 demostraron alto nivel de EGFR (con 80% de las células teñidas) pero sin niveles detectables de receptor HER2 (Fig. 1) . Comparado con líneas celulares de referencia como +++ para HER2 (SK-BR-3) y +++ para EGFR (A431), BxPC-3 se clasificaron +++ para EGFR y negativo (-) para HER2. En contraste, mediante citometría de flujo se halló que la expresión de EGFR y HER2 sobre la membrana celular era elevada y moderada, respectivamente. Estos datos indican una diferencia en la detección del nivel de HER2 entre la citometría de flujo y la inmunohistoquímica . El análisis por citometría de flujo podría ser más sensible en la detección del estado de HER2 (22) .

Ejemplo 2: Localización específica de tumor in vivo mediante EMD72000 y trastuzumab con marca radiactiva Para determinar si los anticuerpos se fijan in vivo específicamente al tumor BxPC-3 , se realizaron estudios de biodistribución mediante inyecciones sistémicas de anticuerpos trastuzumab y EMD72000 con marca radiactiva en ratones desnudos. Cuarenta y ocho horas posinyección, la localización tumoral de EMD72000 y trastuzumab era de 21,5 y 11,5% de dosis inyectada (lD)/g de tumor, respectivamente (Fig. 2). No se observó acumulación específica en cualquier otro tejido (relación tumor/tejido >1). La localización específica de tumor de EMD72000 y trastuzumab se correlacionó con sus respectivos niveles de expresión de receptor determinado por análisis de Facs . Incluso con una tinción negativa de HER2 por análisis de IHC, HER2 era accesible para trastuzumab en la superficie celular de BxPC-3. Ejemplo 3: actividad antitumoral de EMD7200Q y/o trastuzumab sobre xenoinjertos de BxPC-3 La capacidad del tratamiento combinado, con anticuerpos EMD72000 y trastuzumab, para inhibir el crecimiento de xenoinjertos pequeños (experimento A) o grandes (experimento B) de tumor BxPC-3 humano establecido se muestra en las Figs . 3A-3B y 4A-4B. Los volúmenes promedio de tumor pretratamiento para los experimentos A (día 27) y B (día 22) eran de 77 (68-84) y 502 (317-618) mm3 , respectivamente. En cada experimento no se observaron diferencias estadísticas entre los grupos. Luego se midió regularmente el crecimiento del tumor hasta que los tumores eran de tamaño superior a 1500 mm3. Dado que no se observaron signos de toxicidad en ninguno de los animales durante el curso de los experimentos, todos los tratamientos se realizaron como se había programado en principio. Durante el período de tratamiento (Figs. 3A-3B y 4A) , inyecciones combinadas de EMD72000 y trastuzumab inhibieron significativamente el progreso del tumor, comparado con el grupo control (P = 0,0004 y P = 0,006 para los experimentos A y B, respectivamente) y con cada anticuerpo usado solo (P = 0,0002 y P = 0,002 para los experimentos A y B, respectivamente) . Durante el mismo período de observación, el tratamiento con cada anticuerpo solo enlenteció el crecimiento del tumor significativamente (P = 0,0016) en el experimento A pero no en el experimento B (P = 0,4), en el cual el volumen de tumor pretratamiento fue casi cinco veces mayor al comienzo del tratamiento. En el experimento A, en los grupos 1, 2 y 3, todos los ratones desarrollaron un tumor de crecimiento progresivo. En el grupo 4, se observaron dos respuestas completas (25%) en cada experimento. Después de cuatro meses de seguimiento, un ratón (12,5%) aun estaba libre de tumor y como tal se consideró curado. En el experimento B, el tiempo para alcanzar un tumor tres veces mayor fue significativamente más prolongado (P < 0,0001) para el grupo de tratamiento combinado (grupo 4) que para los otros tres grupos (control, trastuzumab, EMD72000,) con valores promedio de 32 , 36 , 38, y 73 días para los grupos 1, 2 , 3 , y 4, respectivamente (Fig. 4A) . Se obtuvieron datos similares para tumores más pequeños (experimento A). El día 55 , cuando se sacrificaron los ratones de todos los demás grupos (tumor > 1500 mm3 ) , el valor promedio de volumen de tumor era de 583 mm3 para el grupo de anticuerpos combinados . No se observó efecto estadístico de dosis ( 50 o 200 ug) en los diferentes experimentos, lo cual sugiere más que un efecto aditivo. Los resultados globales del experimento global B, expresados en términos de retraso promedio, se muestran en la Fig. 4B. En el grupo control y los grupos tratados con cada anticuerpo solo, el retraso promedio para que los ratones alcanzaran un volumen de tumor superior a 1500 mm3 era de 10, 14, y 10 días, respectivamente, sin diferencias estadística entre los grupos. En el grupo de tratamiento combinado (grupo 4) , el retraso promedio fue estadísticamente más prolongado (53 días, P = 0,001) que en los otros tres. Al final de todos los tratamientos, no se observaron diferencias significativas en el peso corporal de los ratones de los distintos. No se observó significativa retención de fluidos, distrés respiratorio, u otros signos de toxicidad en ninguno de los animales durante el curso del estudio.

Ejemplo 4: Efecto in vitro de EMD72000 y/o trastuzumab sobre la viabilidad de BXPC-3 Mediante el ensayo de MTS, se evaluó el efecto inhibidos del crecimiento de trastuzumab y EMD72000 solo o en combinación sobre la linea celular BxPC-3. Tal como se muestra en la Fig. 5, la viabilidad de las células BxPC-3 no fue afectada por trastuzumab o EMD72000 usados solos en cualquiera de las dosis estudiadas, mientras que la combinación de anticuerpos dio por resultado una significativa inhibición de la viabilidad (P = 0,004). En particular, se observó el 23% de inhibición cuando se trataron las células BxPC-3 con 10 Hg/ml de la combinación de EMD72000/trastuzumab. Tal como se observó previamente en experimentos in vivo, no se notó significativo efecto de dosis, lo cual sugiere un efecto sinérgico entre estos dos anticuerpos humanizados. Ejemplo 5: ' Impacto de los anticuerpos sobre la expresión de EGFR y HER2 en la superficie de la célula Por análisis de citometría de flujo se determinó el efecto de EMD72000 y trastuzumab sobre la expresión de EGFR y HER2 en la superficie celular. Tal como se esperaba, el tratamiento de células BxPC-3 con EGF indujo una notable reducción en la expresión de EGFR sobre la superficie celular, correlacionado con un 50% de disminución de la media geométrica de fluorescencia (GM) medida en comparación con las células control BxPC3 (Fig. 6A) . Cuando las células se expusieron a EMD72000 o trastuzumab (1? Hg/ml durante 48 h) , no se observó descenso del nivel de expresión de EGFR. El tratamiento con trastuzumab indujo un ligero descenso de la expresión de HER2 (32% de fluorescencia GM ) mientras que EMD72000 no tuvo efecto (Fig. 6B) . La combinación de EMD72000/trastuzumab produjo significativas reducciones de ambos receptores con 39% de reducción de la fluorescencia GM para EGFR y 44% de disminución para HER2 en comparación con células BxPC-3 no tratadas . Ejemplo 6 : Inhibición de autofosforilación de receptor La capacidad de EMD72000 o trastuzumab usados solos o en combinación para inhibir la actividad de EGFR y HER2 en células intactas se evaluó mediante análisis de western blot (Fig. 7). Se midieron los niveles de fosforilación de receptor y de proteína en células BxPC-3 tras la exposición a anticuerpos durante 48 h. Tal como se esperaba, el tratamiento con EGF exógeno (ligando EGFR) indujo mayor nivel de autofosforilación de tirosina de EGFR, lo cual se impidió con EMD72000 o la combinación de EMD72000/trastuzumab, pero no en células pretratadas con trastuzumab. EGF exógeno indujo la formación de mayores niveles de fosforilación de receptor HER2 de lo observado en células no tratadas. Estos resultados sugieren la formación de heterodímeros de EGFR- HER2 tras la fijación de EGF sobre su receptor. El tratamiento de células con trastuzumab o EMD72000 disminuyó la fosforilación de HER2 comparado con las células tratadas con EGF. Se obtuvo total inhibición de la fosforilación de HER2 con el tratamiento combinado con EMD72000/trastuzumab. Ejemplo 7: Estudio in vivo de inhibición de crecimiento de tumor Todos los experimentos in vivo se realizaron de acuerdo con las pautas francesas para estudios en animales de experimentación (acuerdo N.a B34-172-27) . Ratones atímicos desnudos hembras de 6-8 semanas de edad MRI (Janvier, Francia) se alojaron en condiciones casi estériles en jaulas de tapa de fieltro autocontenidas (cuatro ratones/jaula) en una instalación controlada para temperatura, humedad, y un ciclo de luz : oscuridad de 12:12 horas. Los animales recibieron alimento y agua autoclavados ad libitu . Las células BxPC-3 (3,5 x 106) se inyectaron s.c. en el flanco derecho de los ratones . Los ratones portadores de tumores se separaron aleatoriamente en los diferentes grupos de tratamiento cuando los tumores alcanzaron un volumen de aproximadamente 100 mm3 (experimento A) o 500 mm3 (experimento B) . Los ratones se trataron con inyecciones i.p. con 0,9% de NaCl (grupo 1) , trastuzumab (grupo 2), EMD72000 (grupo 3), o ambos anticuerpos (grupo 4) en una relación 1:1. Ambos experimentos (A y B) se realizaron con 50 Hg y 200 Hg de anticuerpos por inyección dos veces por semana durante cuatro semanas consecutivamente. Las dimensiones de los tumores se midieron dos veces por semana con un calibre y los volúmenes se calcularon mediante la fórmula: Di x D2 x D3 12 en donde Di es la longitud, D2 el ancho, y D3 la profundidad del tumor. Los ratones se pesaron dos veces por semana y rutinariamente se observaron para detectar signos de toxicidad durante el estudio. Los ratones fueron sacrificados por dislocación cervical cuando el volumen del tumor alcanzó 1500 mm3. Ej emplo 8 : Biodistribución de anticuerpos con marcas radiactivas Los anticuerpos fueron tratados con marcas radiactivas diez minutos sobre hielo con el método de 250 HCi de 1251 o 1311 con yodógeno (1, 3 , 4, 6-tetracloro-3 , 6-difenilglucolurilo) (Robert et al., Cáncer Res 1996 ; 56 : 4758-65 ) . Las células BxPC-3 se inyectaron en ratones tal como se describió con anterioridad. Dos días antes de agregar inyecciones de proteínas con marca de yodo, se agregó solución de yodo de al agua de la bebida. Cuando los tumores alcanzaron un volumen de aproximadamente 100 mm3 , los ratones fueron inyectados i.v. con una mezcla de EMD72000 marcado con 1251 (3 HCi, 3 Hg) y trastuzumab marcado con 1311 (3 HCi, 3 Hg) . La cantidad total de anticuerpos de cada inyección se ajustó por agregado de anticuerpos no marcados . Los grupos de cuatro ratones se sacrificaron 48 horas después de la inyección. Se pesaron la sangre, el tumor, y todos los órganos normales, y se medió la radioactividad diferencial en un contador de centelleo de canal dual. Los resultados se expresan como porcentaje de la dosis inyectada de radioactividad presente por gramo de tejido (% ID/g) . Ejemplo 9: Análisis por citometría de flujo de la expresión del receptor Se analizó la expresión de EGFR y HER2 de superficie en cultivos celulares con un anticuerpo monoclonal anti-EGFR murino (m225 ATCC HB8508) y un anticuerpo monoclonal anti-HER2 humano (trastuzumab) . Después del lavado, se agregaron anticuerpos monoclonales conjugados FITC antirratón o antihumano (Sigma Aldrich) para detectar los anticuerpos primarios . Se usó la incubación directa de las células con el anticuerpo secundario para las mediciones de base. Las muestras se analizaron en un FACScan II (Becton Dickinson, Mountain View, CA, EE. UU.) al observar un mínimo de 20.000 eventos. A fin de analizar el efecto de los anticuerpos sobre la expresión EGFR y HER2, las células BxPC-3 se plaquearon en placas de seis cavidades a 500.000 células/cavidad en 5 mi del medio. Después de 24 h, las células estuvieron en ayunas durante un día en medio sin factor de crecimiento. Las células luego se trataron con 10 Hg/ml de trastuzumab, EMD72000, ambos anticuerpos en una relación fija de 1:1, o 100 ng/ml de EGF. Después de 48 h, se evaluaron los niveles de expresión de EGFR y HER2 por citometría de flujo de acuerdo con el método antes mencionado excepto por el anticuerpo anti-HER2 primario que era FRP5 (provisto gentilmente por Nancy Hynes; FKI Bale) en lugar de trastuzumab. Ejemplo 10: Análisis inmunohistoquímico La expresión de receptores se analizó en células incluidas en parafina fijadas en AFA (alcohol formol ácido acético) . El análisis de la expresión de EGFR se realizó mediante el kit EGFR pharmDx (DakoCytomation, Carpintería, CA, EE.UU.) de acuerdo con las recomendaciones del fabricante y con los adecuados controles negativos . Se usó diaminobencidina (DAB, Dako) como cromógeno, y las secciones se tiñeron como contraste con hematoxilina . El anticuerpo primario usado para la detección de HER2 era un anticuerpo policlonal de conejo (Dako) . El anticuerpo se ubicó mediante el sistema de detección LSAB 2 ( inmunoperoxidasa marcada con estreptavidina-biotina, Dako) . Se usó DakoAutostainer S3400 System (DakoCytomation) para los experimentos por inmunohistoquímica . Ejemplo 11; Ensayo de viabilidad celular El efecto de trastuzumab y/o EMD72000 sobre la viabilidad celular se evaluó mediante un ensayo de sal de tetrazolio (MTS) y un reactivo de acople de electrones (P SF) . Brevemente, se plaquearon células BxPC-3 en placas de microtitulación de 96 cavidades a 10.000 células /cavidad en 100 Hl del medio. Después de 24 h, las células se trataron con anticuerpos en concentraciones que varían de 5 a 100 Hg/ml. Después de la incubación durante 96 h, las células se expusieron a reactivo MTS (3- (4, 5-dimetiltiazol-2- il)-5-(3-carboximetoxifenil) -2- (4-sulfofenil) -2H-tetrazolio) y se incubaron a 37°C durante 2 h. Se midió la absorbancia a 490 nm, y se calculó el porcentaje de inhibición de la viabilidad como porcentaje de células proliferantes comparadas con los cultivos no tratados. Todos los experimentos se realizaron por triplicado .. Ejemplo 12: Análisis por inmunoblotting Las células BxPC-3 se plaquearon con 106 células durante 24 horas en placas de Petri . Las células se dejaron en ayunas durante dos días en un medio sin factores de crecimiento (medio S ) y luego se trataron con 10 Hg/ml de trastuzumab, EMD72000 o ambos anticuerpos con una relación fija 1:1. Tras la incubación durante 48 h, se incubaron las células durante 10 min en el medio SM con 100 ng/ml ie EGF (excepto para las placas de Petri control) , se lavaron dos veces en PBS helado, y se lisaron con buffer (CliniSciences SA, Montrouge, Francia) que contiene 100 HM PMSF, 100 mM FNa, 1 mM de ortovanato de sodio, y un comprimido de mezcla de inhibidor de proteasa. La concentración de proteína de los sobrenadantes se determinó mediante el ensayo de Bradford (Bio-Rad, Hercules, CA EE. UU.). Tras la electroforesis en 8% SDS-PAGE en condiciones no reductoras, las proteínas se transfirieron a una membrana de difluoruro de polivinilideno (Millipore Co., Bedford, A) . Las membranas se saturaron durante 1 h a temperatura ambiente en PBS-0,1% Tween 20 que contiene 5% de leche en polvo descremada y luego se incubaron con los anticuerpos contra EGFR y sus formas fosforiladas pHERl y pHER2. Todos los anticuerpos primarios se obtuvieron por Cell Signaling Technology (Beverly, MA) y se usaron según las recomendaciones del fabricante. Para asegurar la carga equitativa, se sondaron los inmunoblots con anticuerpo anti-GAPDH (Chemicon International, Australia) . Los anticuerpos conjugados con HRP secundarios se eligieron de acuerdo con la especie del anticuerpo primario y las membranas se revelaron mediante el sistema ECL Western Blotting (Amersham Pharmacia Biotech, AB) . Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende un anticuerpo anti-EGFR y un anticuerpo anti-HER2 (ErbB2) o sus fragmentos inmunológicamente efectivos en una cantidad efectiva opcionalmente junto con un portador, diluyente o excipiente farmacéutico, en donde el anticuerpo anti-EGFR es mAb 425 murino, quimérico o humanizado (matuzumab) , y el anticuerpo anti-HER2 es mAb 4D5 murino, quimérico o humanizado ( trastuzumab) .
2. Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el anticuerpo anti-EGFR se fija a las células tumorales por tratar, en donde el receptor EGF tiene expresión moderada o alta o excesiva.
3. Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el anticuerpo anti-EGFR se fija a células tumorales, en donde el receptor HER2 no está sobreexpresado o la expresión es baja, o más baja que la expresión de EGFR.
4. Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el anticuerpo anti-EGFR se fija a las células tumorales por tratar, en donde el receptor EGF tiene expresión moderada o alta o excesiva, y el anticuerpo anti-HER2 se fija a células tumorales, en donde el receptor HER2 no está sobreexpresado o la expresión es baja, o más baja que la expresión de EGFR.
5. Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada porque las células tumorales son células tumorales pancreáticas.
6. Una composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 5, caracterizada porque comprenden, además, un agente citotóxico.
7.. Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 6, caracterizada porque el agente citotóxico es un agente quimioterapéutico, de preferencia seleccionado del grupo que consiste en cisplatino, doxorrubicina, gemcitabina, docetaxel, paclitaxel, bleomicina e irinotecano.
8. Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 6, caracterizada porque el agente citotóxico es un tercer inhibidor del receptor ErbB, un inhibidor de receptor VEGF, un inhibidor de tirosina quinasa, un inhibidor de prote na quinasa A, un agente antiangiogénico o una citoquina.
9. Una composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 8, caracterizada porque uno o cada uno de los anticuerpos se fusionan en su C terminal a un péptido, polipéptido o proteína biológicamente efectivo, opcionalmente a través de un péptido ligador, para así formar -6« un inmunoconjugado .
10. Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque el inmunoconjugado es una inmunocitoquina .
11. Un kit farmacéutico caracterizado porque comprende (i) un primer embalaje que comprende un anticuerpo anti-EGFR o un anticuerpo anti-EGFR inmunoco jugado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes o una de sus porciones inmunológicamente efectivas, y (ii) un segundo embalaje que comprende un anticuerpo anti-HER2 o un anticuerpo anti-HER2 inmunoconjugado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes o una de sus porciones inmunológicamente efectivas .
12. Un kit farmacéutico de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque comprende (iii) un tercer embalaje que comprende un agente citotóxico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes .
13. El uso de una composición farmacéutica o un kit farmacéutico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de tumores que expresan receptores ErbB .
14. El uso de conformidad con la reivindicación 13 , en donde el tumor no expresa en exceso HER2 o expresa Her2 sólo en menor cantidad que EGFR.
15 . El uso de conformidad con la reivindicación 13 , en donde las células tumorales sobreexpresan EGFR.
16 . El uso de conformidad con la reivindicación 13 , en donde las células tumorales sobreexpresan EGFR pero no HER2.
17 . El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 13 - 16 para el tratamiento de cáncer de páncreas .
18 . Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende un anticuerpo anti-EGFR y un anticuerpo anti- HER2 en una cantidad efectiva opcionalmente junto con un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable, en donde los anticuerpos solos no inhiben la heterodimerizacion de EGFR y HER2 sobre las células tumorales, pero en ese caso, dada determinada combinación.
19 . Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 18 , caracterizada porque el anticuerpo anti- ' EGFR se fija a las células tumorales por tratar que sobreexpresan EGFR, y el anticuerpo anti-Her2 se fija a células tumorales por ser tratadas que no sobreexpresan HER2, o expresan HER2 en una cantidad moderada o baja comparado con la sobreexpresión de EGFR.
20. Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 18 ó 19 , caracterizada porque el anticuerpo anti-EGFR está seleccionado del grupo de mAb 425 murino, quimérico o humanizado (matuzumab) y el anticuerpo anti-HER2 está seleccionado del grupo de mAb 4D5 murino, quimérico o humanizado ( trastuzumab) .
21. El uso de una composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 18 - 20 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer que no sobreexpresa HER2 o expresa HER2 en bajas cantidades, comparado con la expresión de EGFR.
22. Un anticuerpo monoclonal bispecífico o uno de sus fragmentos inmunológicamente efectivos caracterizado porque comprenden un primer sitio fijador de antígeno que se fija a EGFR y un segundo sitio fijador de antígeno que se fija a HER2.
23. Un anticuerpo biespecífico de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque el primer sitio fijador de antígeno deriva de mAb 425 murino, quimérico o humanizado (matuzumab) y el segundo sitio fijador de antígeno "deriva de mAb 4D5 murino, quimérico o humanizado (trastuzumab) .